CN1272368A - 一种用于降低血脂血糖的富硒红曲 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种用于降低血脂血糖的富硒红曲,其特点是利用红曲霉固体发酵方法来进行硒的生物转化,得到有机硒为主要硒形态的富硒红曲,本发明红曲同时还含有红曲霉的次生代谢产物洛伐他汀以及其它活性成分。由于硒和洛伐他汀的协同作用,本发明红曲具有更显著的降脂降糖抗氧化作用,其毒副作用极小;本发明红曲成本低,功效成分明确并可定量控制,疗效稳定可靠,疗程短,是理想的抗氧化降脂降糖红曲药物或保健品。
Description
本发明涉及一种用于降低血脂血糖的富硒红曲，更具体地说，是利用红曲霉菌固体发酵方法进行硒的生物转化，得到富硒的红曲。
硒是人体必需的微量元素。低硒与癌症、心血管病、糖尿病等许多疾病有关。大量研究显示，高血脂、高血糖等心血管疾病患者体内硒呈低水平状态，需要补硒(王夔主编，《生命科学中的微量元素》，中国计量出版社，1996，第二版，P652)。目前补硒剂有亚硒酸钠、硒酸钠、硒酵母等，有关专利申请(CN1113950A)还报道了富硒酵母的制备方法，但未见富硒红曲的研究和应用报道。
红曲是传统中药(《本草纲目》，人民卫生出版社，1978，第一版，P1547)。另外，更为重要的是红曲霉还能产生洛伐他汀等HMG-CoA还原酶抑制剂(J.Antibiotics，1979，32(8)：852)。HMG-CoA还原酶抑制剂是目前世界上最广泛使用的降脂药物，有洛伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、西伐它汀、阿伐它汀多种西药(《中国现代应用药学》，1999，第16卷，第六期)，目前全球每年销售额为60-90亿美元，其中天然存在的仅洛伐他汀一种。近年来，张茂良等报道了洛伐他汀为主要功效成分的降脂红曲的制备，相对西药洛伐他汀来说，有综合调节血脂、低副作用的特点(CN1207902A)，说明中药红曲的巨大优势。
但西药洛伐他汀或仅含洛伐他汀为主要功效成分的中药红曲还存在如下缺陷：①洛伐他汀本身没有抗氧化活性，相反，洛伐他汀会增强动脉硬化血管壁中超氧化物自由基产生(Circulation，1997；19；96(4)：1282)；②洛伐他汀治疗会影响其它抗氧化剂如辅酶Q的合成，高脂血症患者经洛伐他汀治疗后，辅酶Q水平降低(Br J.Pharmacol 1995，116(2)：1894)，洛伐他汀治疗还快速消耗抗氧化剂VE的含量(FEBS Lett 1997，410(2-3)：254)。总的结果是：洛伐他汀治疗会导致脂蛋白抗氧化活性的损耗，降低脂蛋白的抗氧化能力，不能有效防止脂质或胆固醇的氧化。
近来的研究表明，体内脂质过氧化或低密度脂蛋白的氧化修饰是动脉粥样硬化的始动因素，有人甚至认为，胆固醇氧化产物比胆固醇本身能更好的预测心脏病(Atherosclerosis 2000；149)，所以，近年来，对降脂类药物的治疗很注意其抗氧化活性，着重在抑制脂蛋白氧化方面，以便抑制动脉硬化过程。
硒是强力抗氧化剂，硒还能调节人体内维生素A、C、E等的吸收和消耗，参与辅酶Q10的合成(《哈尔滨医科大学学报》，1990，24(5)：346)。最近的研究表明，硒缺乏会增加HMG-CoA还原酶的活性(British Journal ofNutrition，1997，78：493)，导致血液胆固醇浓度升高，所以，补硒将有助于洛伐他汀治疗，降低胆固醇，同时防止脂质或胆固醇的氧化。硒化合物还具有类胰岛素功能，能改善糖尿病的耐受性。
本发明目的在于提供一种富含硒和洛代他汀成分的功能红曲，具有抗氧化、降脂、降糖、抗动脉硬化的作用，用于治疗或预防心脑血管疾病的发生。
实现本发明的主要技术方案：利用红曲霉菌固体发酵方法进行硒的生物转化，以得到有机硒为主要硒形态的富硒红曲，同时还含有红曲霉菌的次生伐代谢产物洛代他汀(又名：lovastatin、Mevinolin、Monacolin K)
本发明的富硒降脂降糖红曲的制备方法包括以下步骤：
1.菌种的制备：将3-10°Be(波美度)的麦芽汁或土豆汁100毫升，1-5克糖和1-3克琼脂混匀，分装于5-10个培养皿中.在121℃下灭菌30分钟，制成平板。然后，划线接种红曲霉菌种，在20-35℃温度下培养4-10天，得红曲霉菌种，4℃以下保存备用；
2.菌种的扩大培养：培养液由2-5°Be的麦芽汁或土豆汁200毫升、2-6克葡萄糖、6-10克牛肉膏、0.2-0.6克NH4NO3，0.2-0.6MgSO4、1-4克蛋白胨、20-200微克硒组成，在121℃下灭菌30分钟，冷却至室温，转移接种1-2个步骤(1)制得的平板上红曲霉菌种，20-37℃温度下摇床培养2-5天；
3.制备固体发酵营养液：固体发酵营养液由1-10°Be的麦芽汗或土豆汁100毫升、葡萄糖4-10克，酵母粉2-10克，蛋白胨2-6克，牛肉膏2-6克，硒1-10毫克，KH2PO40.1-0.4克组成；
4.固体发酵：取100克富硒的或普通的谷物，加入10-30毫升步骤(3)配制的固体发酵营养液。在121℃下灭菌60分钟，接种15-30毫升步骤(1)培养的菌种，20-35℃下培养6天以上；
5.终止固体发酵：将步骤(4)发酵后的固体培养物，经121℃蒸汽灭菌，烘干，粉碎，混匀即得到本发明的红曲细粉；
6.制剂制备：由步骤(5)制备的红曲可以按常规方法制成胶囊、片剂、丸剂、散剂或其它剂型。
步骤(1)所述的红曲霉菌种是选用下述已知红曲霉中的任何一种或多种混合菌种(参见《菌种目录》，第三版，1997，中国普通微生物保藏管理中心，中国农业科技术出版社，128-131页)：
①红色红曲霉(Monascus ruber van Tieghem)：AS 3.549、AS 3.4450、AS 3.4649、AS 3.4636。
②紫红曲霉(Monascus purpureus Went)：AS 3.4453、AS 3.4634、AS3.4642、AS 3.4445、AS 3.570、AS 3.4440。
③烟色红曲霉(Monascus fuliginosus Sato)：AS 3.569、AS 3.1098、AS 3.2091、AS 3.2093、AS 3.2134。
④丛毛红曲霉(Monascus pilosus Sato)：AS 3.4444、AS 3.4633、AS3.4646、AS 3.4647。
步骤(2)和步骤(3)所述的硒来自于亚硒酸钠或硒酸钠。
步骤(4)所述的富硒的或普通的谷物包括粳米、灿米、黑米、大豆、小麦。
本发明步骤(2)至步骤(3)所述的红曲霉培养基碳源除已提到的葡萄糖、麦芽汁、土豆汁外，还包括其它糖类、灿米、粳米、黑米、豆类或小麦；氮源除已提到的蛋白胨、酵母粉、牛肉膏外，还包括豆类和含氮无机盐；磷源包括KH2PO4在内的含磷无机盐。
按本发明的方法制得的红曲中含硒量为5-50微克/克、洛伐他汀含量为0.5-30毫克/克。工业生产时，本发明方法中所述的原料量可以按所述的量的范围相应扩大。
本发明的主要优点：
本发明特点是：用红曲霉菌株，通过固体发酵而制备同时富含硒和洛伐它丁的红曲，硒与洛伐他汀在降脂降糖抗氧化功能上有互补性，洛伐他汀能降低HMG-CoA还原酶的活性，降脂效果强，但没有抗氧化性，不能有效防止胆固醇和脂蛋白氧化，而硒是强力抗氧化剂，能有效防止胆固醇和脂蛋白氧化。补硒虽然也能降低HMG-CoA还原酶的活性，降低血脂，但较弱，因此和洛伐他汀的协同作用将增强降脂作用，防止血脂氧化；另外，硒还具有类胰岛素的作用，洛伐他汀治疗对糖尿病也有好处；由于硒和洛伐他汀的协同作用，与单独用洛伐他汀、含洛伐他汀的红曲制剂、或补硒剂治疗相比，本产品具有更好的降脂、降糖、抗氧化，预防动脉硬化效果，而毒副作用更小；本发明制得红曲不仅可用作药品，而且可用作保健品或食品添加剂，所含的硒量符合补硒的需要，洛伐他汀含量为降脂有效剂量。
实例1
(1)菌种制备：将5°Be的麦芽汁100毫升，3克糖和2克琼脂混匀，分装于5个培养皿中，在121℃下灭菌30分钟，制成平板，划线接种紫红曲霉(Monascus purpureus Went)AS 3.4634，在28℃温度下培养6天，得红曲菌种；
(2)菌种扩大培养：菌种扩大培养液由3°Be的麦芽汁200毫升、4克葡萄糖、8克牛肉膏、0.4克NH4NO3，0.2克MgSO4、2克蛋白胨、50微克硒(亚硒酸钠)组成。在121℃下灭菌30分钟，冷却至室温。转移接种1个步骤(1)制得的平板上的红曲霉菌种。32℃温度下摇床培养3天；
(3)制备固体发酵营养液：营养液由2°Be的麦芽汁100毫升、6克葡萄糖，6克酵母粉，4克蛋白胨，5克牛肉膏、3毫克硒(亚硒酸钠)、0.2克KH2PO4组成；
(4)固体发酵：取100克富硒粳米，加入20毫升步骤(3)制得的上述固体发酵营养液。在121℃下灭菌60分钟。接种20毫升步骤(2)制得的扩大培养的菌种，28℃下培养25天；
(5)终止固体发酵：将发酵后的固体培养物，经121℃蒸汽灭菌，烘干。将红曲粉碎至100目，混匀，得到红曲细粉；
(6)制剂制备：所得红曲细粉进一步制成胶囊，作为保健品或药物。
产品含硒8微克/克，含洛伐他汀12毫克/克。
实例2
(1)菌种制备：将4°Be的麦芽汁100毫升，4克糖和1克琼脂混匀，分装于5个培养皿中，在121℃下灭菌30分钟，制成平板，划线接种红色红曲霉(Monascus ruber van Tieghem)AS 3.549，在30℃温度下培养5天，得红曲菌种；
(2)菌种扩大培养：菌种扩大培养液由4°Be的麦芽汁200毫升、3克葡萄糖、6克牛肉膏、0.2克NH4NO3，0.3克MgSO4、2克蛋白胨、30微克硒(亚硒酸钠)组成。在121℃下灭菌30分钟，冷却至室温。转移接种2个步骤①制得的平板上的红曲霉菌种。30℃温度下摇床培养4天；
(3)制备固体发酵营养液：营养液由5°Be的麦芽汁100毫升、4克葡萄糖、2克酵母粉、3克蛋白胨、4克牛肉膏、3毫克硒(亚硒酸钠)、0.3克KH2PO4组成；
(4)固体发酵：取100克富硒粳米，加入25毫升步骤③制得的上述固体发酵营养液，在121℃下灭菌60分钟，接种30毫升步骤②制得的扩大培养的菌种，25℃下培养20天；
(5)终止固体发酵：将发酵后的固体培养物，经121℃蒸汽灭菌，烘干，将红曲粉碎至200目，混匀，得到红曲细粉；
(6)制剂制备：所得红曲细粉进一步制成胶囊，作为保健品或药物。
产品含硒8微克/克，含洛伐他汀8毫克/克。
实例3
(1)菌种制备：将5°Be的麦芽汁100毫升，4克糖和2克琼脂混匀，分装于10个培养皿中，在121℃下灭菌30分钟，制成平板，划线接种烟色红曲霉(Monascus fuliginosus Sato)AS 3.2093，在32℃温度下培养4天，得红曲菌种；
(2)菌种扩大培养：菌种扩大培养液由5°Be的麦芽汁200毫升、2克葡萄糖、6克牛肉膏、0.2克NH4NO3，0.2克MgSO4、2克蛋白胨、100微克硒(亚硒酸钠)组成。在121℃下灭菌30分钟，冷却至室温，转移接种2个步骤①制得的平板上的红曲霉菌种。25℃温度下摇床培养5天；
(3)制备固体发酵营养液：营养液由6°Be的麦芽汁100毫升、5克葡萄糖，3克酵母粉，3克蛋白胨，3克牛肉膏、3毫克硒(硒酸钠)、0.1克KH2PO4组成；
(4)固体发酵：取100克富硒粳米，加入30毫升步骤③制得的上述固体发酵营养液。在121℃下灭菌60分钟。接种30毫升步骤②制得的扩大培养的菌种，25℃下培养12天；
(5)终止固体发酵：将发酵后的固体培养物，经121℃蒸汽灭菌，烘干。将红曲粉碎至100目，混匀，得到红曲细粉；
(6)制剂制备：所得红曲细粉进一步制成胶囊，作为保健品或药物。
产品含硒11微克/克，含洛伐他汀1毫克/克。
实例4
(1)菌种制备：将3°Be的麦芽汁100毫升，2克糖和2克琼脂混匀，分装于5个培养皿中，在121℃下灭菌30分钟，制成平板，然后，划线接种丛毛红曲霉(Monascus pilosus Sato)AS 3.4444，在32℃温度下培养4天，得红曲菌种；
(2)菌种扩大培养：菌种扩大培养液由2°Be的麦芽汁200毫升、6克葡萄糖、10克牛肉膏、0.4克NH4NO3，0.4克MgSO4、3克蛋白胨、60微克硒(亚硒酸钠)组成。在121℃下灭菌30分钟，冷却至室温。转移接种1个步骤①制得的平板上的红曲霉菌种。30℃温度下摇床培养4天；
(3)制备固体发酵营养液：营养液由10°Be的麦芽汁100毫升、4克葡萄糖，10克酵母粉，6克蛋白胨，6克牛肉膏、4毫克硒(亚硒酸钠)、0.4克KH2PO4组成；
(4)固体发酵：取100克富硒粳米，加入20毫升步骤③制得的上述固体发酵营养液。在121℃下灭菌60分钟。接种15毫升步骤②制得的扩大培养的菌种，28℃下培养15天；
(5)终止固体发酵：将发酵后的固体培养物，经121℃蒸汽灭菌，烘干，将红曲粉碎至100目，混匀，得到红曲细粉；
(6)制剂制备：所得红曲细粉进一步制成胶囊，作为保健品或药物。
产品含硒9微克/克，含洛伐他汀2毫克/克。
Claims (5)
1.一种用于降低血脂血糖的富硒红曲，其特征在于红曲中的硒含量为5-50微克/克、洛伐他汀含量为0.5-30毫克/克，其制备过程如下：
(1)菌种制备：将3-10°Be(波美度)的麦芽汗或土豆汁100毫升，1-5克糖和1-3克琼脂混匀，分装于5-10个培养皿中。在121℃下灭菌30钟，制成平板，然后划线接种红曲霉菌种，在20-35℃温度下培养4-10天，得红曲霉菌种，4℃以下保存备用，
(2)菌种护大培养：菌种扩大培养液由2-5°Be的麦芽汁或土豆汁200毫升、2-6克葡萄糖、6-10克牛肉膏、0.2-0.6克NH4NO3、0.2-0.6克MgSO4、1-4克蛋白胨、20-200微克硒组成，将其搅匀后在121℃下灭菌30分钟，冷却至室温，转移接种1-2个步骤(1)制得的平板上的红曲霉菌种，20-37℃温度下摇床培养2-5天，
(3)制备固体发酵营养液：营养液由1-10°Be的麦芽汁或土豆汁100毫升、4-10克葡萄糖，2-10克酵母粉，2-6克蛋白胨，2-6克牛肉膏、1-10毫克硒、0.1-0.4克KH2PO4组成，
(4)固体发酵：取100克富硒的或普通的谷物，加入10-30毫升步骤(3)制得的上述固体发酵营养液，在121℃下灭菌60分钟，接种15-30毫升步骤(2)制得的扩大培养的菌种，20-35℃下培养6天以上，
(5)终止固体发酵：将发酵后的固体培养物，经121℃蒸汽灭菌，烘干，粉碎，混匀，即得到红曲细粉，
(6)制剂制备：由步骤(5)制得的红曲细粉进一步制成胶囊、片剂或其它剂型。
2.按照权利要求1所述的红曲，其特征在于步骤(1)所述的红曲霉菌种选自红色红曲霉、紫红曲霉、烟色红曲霉、丛毛红曲霉中的一种、两种或两种以上混合菌。
3.按照权利要求1所述的红曲，其特征在于步骤(2)和步骤(3)所述的硒的硒源为亚硒酸钠或硒酸钠。
4.按照权利要求1所述的红曲，其特征在于步骤(4)所述的富硒的或普通的谷物包括粳米、灿米、黑米、大豆、小麦。
5.权利要求1所述的红曲可用作药品、保健品或食品添加剂。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C03 | Withdrawal of patent application (patent law 1993) | ||
| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |