CN1245995C - 以螺旋藻为主要成分的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种以螺旋藻为主要成分的组合物，其特征在于包括的组分及重量百分比为：螺旋藻粉70～78%、硫酸亚铁2～4%、维生素C4～6%、麦芽糊精15～20%、叶酸0.009～0.012%。旋藻粉蛋白质含量丰富，且含多种人体所需营养成份，在补充人体必需蛋白质的同时，加强对铁的吸收。叶酸和维生素B12是红细胞增殖发育中不可缺少的物质，能促进红细胞的生成，维生素C可将三价铁还原为二价铁，促进非铁血红素的吸收。根据药理及功能试验证明，本发明对改善人体营养性贫血有辅助作用，每1g产品含蛋白质≥0.2g、含铁≥30mg。
Description
技术领域
本发明涉及一种组合物，特别是一种以螺旋藻为主要成分的组合物。
背景技术
由于我国不同地区人们的饮食习惯、烹饪方法，若长期纵酒、素食、偏食等，均可引起维生素B12、维生维C、叶酸、铁、蛋白质等营养物质的缺乏，从而易患营养性贫血。中国专利申请号95111284公开了一种螺旋藻补血片，由螺旋藻干粉、辅以铁质、微晶纤维素和硬脂酸镁配伍组成，含铁量占总重的1～1.2％，存在以下问题，一是富血铁添加太多，超出人体营养素摄入量，长期服用，可能产生毒副作用；二是工艺在一定温度下干燥，可能引起二价铁向三价铁转化。
发明内容
本发明的目的就是提供一种含铁量高，易被人体吸收，能补血的组合物。
本发明包括的组分及重量百分比为：螺旋藻粉70～78％、硫酸亚铁2～4％、维生素C4～6％、麦芽糊精15～20％、叶酸0.009～0.012％。其最佳重量百分比为：螺旋藻粉75％、硫酸亚铁3％、维生素C5％、麦芽糊精17％、叶酸0.01％。该组合物可制成片剂、胶囊。
螺旋藻粉蛋白质含量丰富，且含多种人体所需营养成份，在补充人体必需蛋白质的同时，加强对铁的吸收。叶酸和维生素B12是红细胞增殖发育中不可缺少的物质，能促进红细胞的生成，维生素C可将三价铁还原为二价铁，促进非铁血红素的吸收。根据药理及功能试验证明，本发明对改善人体营养性贫血有辅助作用，每1g产品含蛋白质≥0.2g、含铁≥30mg。
一、组合物小鼠经口急性毒性(LD50)试验、微核试验、精子畸变试验报告
1、材料
1.1、试验材料：样品为浅绿色片剂，推荐量为每天三次，每次三片，以60kg成人体重计，该样品的推荐量为0.045g/kg.b.w，用纯净水配制成各实验组所需浓度。
1.2实验动物：第一军医大学实验动物中心提供的NIH种健康SPF级小白鼠，合格证号2002A035，本中心SPF动物实验室合格证号：粤检证号2003C008号。
2、方法与结果
2.1、小鼠急性毒性试验
NIH种小白鼠40只，18-22g，雌雄各半，采用Horn’s法，随机分为4个剂量组，禁食16小时后，灌胃两次，间隔3小时，灌胃量0.20ml/10g.b.w，观察一周，结果见表1。
表1组合物急性毒性试验结果
| 剂量(g/kg.b.w) | 动物数(只) | 始体重(g) | 终体重(g) | 动物死亡数(只) | |
| 雌性 | 21.5010.004.642.15 | 5555 | 19.73±0.5420.63±0.4619.37±0.3320.12±0.47 | 26.46±0.8825.49±0.8126.01±0.8125.57±0.28 | 0000 |
| 雄性 | 21.5010.004.642.15 | 5555 | 20.01±0.5219.80±0.5020.15±0.5320.52±0.57 | 29.37±0.5928.66±0.5629.46±0.7128.97±0.62 | 0000 |
结果：
未观察到动物有任何不良反应，得雌雄小鼠LD50＞21.50g/kg.b.w，相当于受试物推荐量的478倍，受试物组合物属无毒级物质。
2.2、小鼠骨髓核试验：
NIH种小鼠60只，体重25-30g，分别将鼠分为6组，按“食品安全性毒理学评价程序”方法试验：分两次灌胃，灌胃量0.20ml/10g.b.w剂量见表2，于第二次灌胃6小时后，处死小鼠了取胸骨骨髓材料制片、染色、镜检，求出各组微核率，结果按泊松分布方法统计，见表2。
表2组合物小鼠骨髓微核试验
| 动物数(只)(g/kg.b.w) | 动物数(只) | 嗜多染红细胞(个) | 微核数(个) | 微核率(‰) |
| 雌雄 | 雌雄 | 雌雄 | 雌雄 |
| 10.005.002.501.250.00环磷酰胺(0.05) | 555555 | 555555 | 500050005000500050005000 | 500050005000500050005000 | 1197128156 | 1381099148 | 2.21.81.42.41.631.2** | 2.61.62.01.81.829.6** |
**与阴性对照组比较p＜0.01.
结果：
组合物各剂量组的微核率与阴性对照组比较，差异在统计学上均无显著性意义，试验结果为阴性，受试物对体细胞无诱变作用。
2.3、小鼠精子畸形试验：
NIH种雄小鼠25只，体重25-35g，随机分成5组，连续灌胃5天，灌胃量0.20ml/10g.b.w剂量见表3，经35天后处死动物取双侧副睾按常规制片、染色，油镜下每组检查完整精子5000条，求出精子畸形率，按Wilcoson秩和方法检验结果，见表3。
表3组合物小鼠精子畸形分析结果
| 剂量(g/kg.b.w)10.005.002.500.00环磷酰胺(0.04) | 动物数(只) | 受检精子数(条) | 精子畸形数(条) | 精子畸形率(‰) |
| 55555 | 50005000500050005000 | 65585263395 | 13.011.610.412.679.0** |
**与阴性对照组比较p＜0.01.
结果：
组合物各剂量的精子畸形率与阴性对照组比较，差异在统计学上无显著性意义，试验结果为阴性，受试物对生殖细胞无诱变作用。
二、组合物鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验(Ames试验)报告
1、材料与方法
1.1试验菌株：经过鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102试验菌株。
1.2、代谢活化系统：多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝匀浆S9液(当代谢活化时加入)。
1.3、受试物及剂量选择：实验前称取样品10.00g，加无菌蒸馏水90ml溶解，沸水浴30分钟后，取适量稀释成所需浓度供试验用。通过预试验，以受试物的最小毒性剂量作为最高剂量。
1.4试验方法(平板掺入法)：在顶层培养基中加入0.1ml试验菌株增菌液，0.1ml受试物溶液和0.5mlS9混合液(当代谢活时加入)，混匀后倒入底层培养基平板上，每一剂量组均为三个皿。根据受试物毒性测定结果，设5000、1000、200、40、8μg/皿五个剂量组，同时设自发回变、溶剂对照、阳性诱变剂对照，在37℃下培养48小时，记录各试验组回变菌落数。如受试物回变菌落数的增加超过溶剂对照2倍以上，亦无剂量-反应关系者，判定为致突变阳性。
表4组合物对鼠伤寒沙门氏菌的回变结果(第1次) (
x±s)
| 受试物 | 剂量(μg/皿) | TA97 | TA98 | TA100 | TA102 | ||||
| -S9 | S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | ||
| 样品组自发回变溶剂对照阳性对照NaN32-AF敌克松丝裂霉素C1，8-二羟蒽醌 | 1 50002 10003 2004 405 8- -- -(μg/皿)2.510.050.04.050.0 | 101±15114±7115±3113±5125±5116±7123±112265±105 | 154±18138±12129±5137±10134±4143±7155±61836±113 | 36±335±335±135±337±130±134±11561±141 | 47±243±436±236±340±235±437±42112±218 | 116±10158±15177±1174±11176±7146±10157±61532±104 | 128±4142±15128±12156±11149±14163±7168±91942±91 | 323±6303±21271±21284±9287±13270±14279±121866±114 | 317±6315±13274±8282±13288±8293±7297±20887±54 |
表5组合物对鼠伤寒沙门氏菌的回变结果(第2次) (
x±s)
| 受试物 | 剂量(μg/皿) | TA97 | TA98 | TA100 | TA102 | ||||
| -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | ||
| 样品组自发回变溶剂对照阳性对照NaN32-AF | 1 50002 10003 2004 405 8- -- -(μg/皿)2.510.0 | 118±12124±9125±6125±13124±5127±5130±6 | 147±10140±7145±13142±6141±11126±11136±61817±95 | 36±236±436±137±339±336±638±3 | 42±340±339±242±342±338±238±22259±86 | 124±10161±15164±10169±6175±7141±3146±61470±101 | 136±7157±8168±9185±4180±8154±1143±71909±111 | 313±17297±9297±21295±13294±19276±13276±13 | 314±13311±7315±27316±19291±9286±11287±18 |
| 敌克松丝裂霉素C1，8-二羟蒽醌 | 50.04.050.0 | 2229±120 | 1547±130 | 1645±68 | 857±41 |
2、结果
由表4、表5可见，组合物对鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株，在加及不加S9时，5000、1000、200、40、8μg/皿五个剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照菌落数2倍，亦无剂量-反应关系者，表面Ames试验结果阴性。
3、结论
受试物经上述四个试验菌株测定后，与溶剂对照组相比，在加及不加S9时，各剂量组均未引起试验菌株的回复突变菌落数明显增加，表明该受试物Ames试验阴性。
三、改善营养性贫血功效人体试食试验
检测依据：《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)
1、材料与方法
1.1样品
组合物由广东梅州市梅雁螺旋藻高科技研究所生产。该产品为浅绿色片剂，无异味。其组方为螺旋藻粉75％、叶酸0.01％、硫酸亚铁3％、维生素C 5％、麦芽糊精17％。
1.2受试对象
选择符合贫血诊断要求(女性Hb＜120g/L)的女性人群100人，征求受试者的意见后纳入观察对象。有下列情况之一者排除：①有严重或进展性疾病；②溶血性贫血、再生性障碍性贫血、β地中海贫血和慢性失血性贫血等；③医生判断不适合试验者。
1.3试食方法
将符合贫血诊断要求的志愿受试者按完全随机双盲法分为实验组和对照组。给实验对象连续食用组合物或外观口感与之相同的安慰剂，每天3次，每次3片，观察期为40天。试食期间对受试对象的生活和饮食不加干预，但避免应用其它含铁制剂。
1.4观察指标
在试验前和试验后，经臂静脉采血6ml(3ml不抗凝，3ml抗凝)，分别在指定医院检验科进行检测。
1.4.1主观感觉指标：试验前后对受试者询问其精神、睡眠、饮食、大小便、血压和食欲、头晕、心慌等主观临床表现，并按差、好叙述。
1.4.2体格检查指标：试验前对受试者进行胸透、心电图、B超。按常规的体格检查方法由主治医生进行，并收集尿、大便进行常规检查。
1.4.3血液学指标：包括血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)、白细胞计数(WBC)、血小板计数(PTC)，由法国产全自动血细胞计数仪进行。
1.4.4生化指标：包括尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、葡萄糖(GLU)、胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)。由法国产全自动生化分析仪测定。
1.4.5红细胞内游离原卟啉(FEP)测定
取肝素抗凝全血0.02ml加入0.15ml硅藻土混悬液、4.0ml乙酸-乙酸乙酯混合液中，震荡2-3分钟，以3000r/min离心，取上清液用0.5MHCI溶液萃取于日立MPF-4型荧光分光光度计上进行荧光测定(激发波长403nm，发射波长605nm)，根据荧光强度计算FEP值。
1.4.6血清铁蛋白(SF)测定：采用放射免疫竞争抑制法进行。
1.4.7膳食调查：采用询问法调查受试对象试验前和结束前三天主食及副食等情况。
2、结果
2.1血常规、生化指标检测
试验前后的总蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、血糖、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白含量、红细胞计数、白细胞计数以及血小板计数(见表6)，实验组和对照组各指标都在正常范围内。试验前胸透、腹部B超、心电图检查均正常。试验前后实验组的受试对象精神状况和睡眠情况有一定的改善。
表6试验前后血液安全性指标变化比较(
X±S)
| 项目 | 实验组(50例) | 对照组(50例) | ||
| 试验前 | 试验后 | 试验前 | 试验后 | |
| TP(g/L)ALB(g/L)ALT(U/L)AST(U/L)尿素氮(mmol/L)肌酐(μmol/L)血糖(mmol/L)总胆固醇(mmol/L)甘油三脂(mmol/L)HDL-C(mmol/L)RBC(×1012/L)WBC(×109/L)血小板(×109/L) | 78.44±7.7845.84±4.7036.98±20.6645.20±26.864.33±1.5665.44±25.064.19±2.744.02±0.930.89±0.411.17±0.474.39±0.835.17±1.32159.68±67.83 | 82.36±10.0447.42±4.1036.94±43.9939.42±12.334.34±2.3484.75±24.644.37±2.564.43±0.771.04±0.731.09±0.594.62±0.665.22±1.17161.28±62.11 | 77.83±8.1742.81±3.7228.70±11.9636.16±12.374.25±1.3965.71±19.053.82±0.714.46±0.981.12±0.541.39±0.514.45±0.535.29±1.02168.44±43.12 | 82.48±10.3644.91±5.4230.96±12.7637.64±8.793.99±1.8286.17±21.493.84±0.774.26±1.121.20±0.711.15±0.304.28±0.464.95±1.12181.44±48.65 |
2.2功效性指标的变化
试验前后实验组血红蛋白(Hb)上升了12.12g/L，前后自身比较差异有显著性(t＝-8.942，p＜0.01，试验后与对照组进行成组t检验，差异有显著性(t＝-6.219，p＜0.01)(见表7)。
试验前后实验组红细胞内游离原卟啉(FEP)下降了148.70μg/L，前后自身比较差异有显著性(t＝-5.635，p＜0.01)。试验后与对照组进行成组t检验，差异无显著性(t＝1.646，p＜0.05)(见表8)。
实验受试对象的血清铁蛋白(SF)试验期间上升了18.16μg/L，前后自身比较差异有显著性(t＝-22.287，p＜0.01)。试验后与对照组进行成组t检验，差异有显著性(t＝14.290，p＜0.01)(见表9)。
表7试验前后实验组与对照组血红蛋白(Hb)的情况变化(μg/L)
| 组别 | 试验前 | 试验后 | 差值(试验前-试验后) |
| 实验组对照组 | 96.70±11.2994.76±12.03 | 108.82±11.77##94.16±11.08 | -12.12±9.58**0.60±5.38 |
表8实验前后实验组与对照组红细胞内游离原卟啉(FEP)的情况变化(μg/L)
| 组别 | 试验前 | 试验后 | 差值(试验前-试验后) |
| 实验组对照组 | 498.48±188.76400.62±195.58 | 349.78±102.89394.22±160.88 | 148.70±186.60**6.40±233.08 |
表9试验前后实验组与对照组血清铁蛋白(SF)的情况变化(μg/L)
| 组别 | 试验前 | 试验后 | 差值(试验前-试验后) |
| 实验组对照组 | 14.58±4.4513.26±3.12 | 32.74±8.36##14.76±3.05 | -18.16±5.76**-1.50±3.92** |
**试验前后自身配对t检验，P＜0.01；##试验后实验组与对照组成组t检验，P＜0.01
2.3改善营养性贫血功能的判定，见表10。按规定食用组合物40天的50例实验组受试对象中，54％的人血红蛋白值明显上升，20％的受试对象有一定的改善，总有效率为74％。①显效：临床症状，体征消失或明显好转，血红蛋白值上升10g/L以上，其余所观察的指标有改善；②有效：临床症状，体征有改善，血红蛋白升高超过5g/L，其它所观察指标无不良改变。③无效：未达到上列“有效”标准者。
表10功效判定
| 组别 | 人数 | 显效 | 有效 | 无效 | 总有效率 | ||||
| 例数 | 率(％) | 例数 | 率(％) | 例数 | 率(％) | 例数 | 率(％) | ||
| 试验组对照组 | 5050 | 270 | 540 | 105 | 2010 | 1345 | 2690 | 375 | 7410 |
2.4膳食调查及营养评价
通过实验开始前、结束前三天的膳食调查，结果表明实验组和对照组的受试对象在实验前、后的膳食结构基本未改变，其总热量、蛋白质、铁和维生素C的摄入量基本接近，说明饮食因素对实验结果未造成影响。
3、结论
3.1实验结果表明，实验组50名患有营养性贫血的受试者，在连续食用组合物40天后，各项有关血液指标有明显改善。血红蛋白的含量平均升高12.12±9.58g/L，实验前后经配对t检验差异有显著性(p＜0.01)，实验后与对照组进行成组t检验，差异有显著性(p＜0.01)；红细胞内游离原卟啉明显下隆，实验前后经配对t检验差异有显著性(p＜0.01)，实验后与对照组进行成组t检验，差异无显著性(p＜0.05)；实验后血清铁蛋白的含量明显升高，实验前后经配对t检验差异有显著性(p＜0.01)；实验后与对照组进行成组t检验，差异有显著性(p＜0.01)。实验组改善营养性贫血的总有效率达74％。结果表明，组合物具有改善营养性贫血的保健功能。
3.2试食组合物前后，血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、白蛋白、尿素氮、肌酐、葡萄糖、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白含量、红细胞计数、白细胞计数等指标均在正常范围内，说明本品对受试者健康无不良影响。
3.3试食过程中未观察到过敏及其它不良反应。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步的描述。
实施例一
取检验合格的硫酸亚铁30克、维生素C 50克、麦芽糊精170克、叶酸0.1克，用V型混合机混合旋转搅拌15分钟，取螺旋藻粉750克加入V型混合机旋转搅拌30分钟；在10万级空气净化压片车间内，用压片机将混合物压制成片，得到1000克片剂，用装瓶机将组合物装瓶并密封。
实施例二
取检验合格的硫酸亚铁30克、维生素C 40克、麦芽糊精150克、叶酸0.1克，用V型混合机混合旋转搅拌20分钟，取螺旋藻粉780克加入V型混合机旋转搅拌35分钟；在10万级空气净化压片车间内，用压片机将混合物压制成片，得到1000克片剂，用装瓶机将组合物装瓶并密封。
根据需要，本发明可制成胶囊、饮料。
Claims (1)
1、一种以螺旋藻为主要成分的组合物，其特征在于组分及重量百分比为：螺旋藻粉70～78％、硫酸亚铁2～4％、维生素C4～6％、麦芽糊精15～20％、叶酸0.009～0.012％。
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2003
- 2003-11-16 CN CN 200310112197 patent/CN1245995C/zh not_active Expired - Fee Related
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| CN1544079A (zh) | 2004-11-10 |
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| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: MEIYAN, MEI COUNTY, GUAN DONG CYANOBACTERIA CO., Free format text: FORMER OWNER: MEIYAN INST OF HI-TECH SPIRULINA, MEIZHOU CITY, GUANGDONG Effective date: 20051125 |
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Effective date of registration: 20051125 Address after: 514759, Meixian, Guangdong province goose Yang Town Applicant after: Meiyan Blue-Green Algal Co., Ltd., Mei County, Guangdong Prov. Address before: 514759, Meixian, Guangdong province goose Yang Town Applicant before: Meiyan Inst of Hi-Tech Spirulina, Meizhou City, Guangdong |
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Granted publication date: 20060322 Termination date: 20171116 |
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