CN1244332C - 九节茶提取物和它的应用 - Google Patents
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Abstract
九节茶提取物和它的应用，属于医药领域。它是采用金粟兰科草珊瑚(Sarcandra glabra(Thunb)Nakai)植物的地上部分，经水提乙醇沉淀法得到的沉淀物干燥后为活性提取物，其100克的活性提取物中含有鞣质28～40克，含有异秦皮啶0.02～0.1克。本发明的用途是制备治疗呼吸系统感染疾病的药物，主要是制备治疗感冒、咽喉炎的药物，用于治疗呼吸系统感染疾病时，使用的口服剂量为每天3次每次2粒，每粒含0.32g干膏粉。
Description
所属技术领域
本发明属于医药领域，涉及来源于中药材九节茶的提取物和它的用途。
背景技术
九节茶为金粟兰科草珊瑚(Sarcandra glabra(Thunb)Nakai)植物又称肿节风的地上部分，文献报道九节茶具有清热凉血，驱风通络的功效，中国药品部颁标准中药成方制剂第九册中记载的清热消炎宁胶囊，已上市多年，疗效肯定，它是用九节茶单味药材的水提物制备而成的纯中药制剂，具有清热解毒，消炎止痛，舒筋活络的功效。用于流行性感冒，咽喉炎，肺炎，菌痢，急性胃肠炎，阑尾炎，烧伤，疮疡脓肿，蜂窝织炎。清热消炎宁胶囊是九节茶植物用水提取后浓缩的干燥粗品制成的胶囊，所以，口服剂量较大，治疗剂量需用每日3次，每次2～4粒，每粒含九节茶粗提物的干浸膏0.5g。为了降低服用剂量，提高药物的疗效，有必要进一步开发利用药用植物九节茶，提取其有效的药用部位，保证药物的疗效。
发明内容
本发明的目的是：开发利用药用植物九节茶，采用新的工艺提取其有效的药用活性提取物，去除对主治病症无效的部位，减少服药剂量，提高活性，保证药物的疗效；另一目的是将九节茶的新的活性提取物制备成治疗呼吸道感染疾病的药物。
本发明的技术方案是：九节茶的提取物是采用金粟兰科草珊瑚(Sarcandra glabra(Thunb)Nakai)植物的地上部分，经水提乙醇沉淀法得到的沉淀物干燥后为活性提取物，其100克的活性提取物中含有鞣质28～40克，含有异秦皮啶0.02～0.1克。
本发明的提取工艺是将干燥的九节茶整理后用常规的中药水提法，得到的水提滤液浓缩成浸膏，经二次醇沉得到的沉淀物，干燥后的干品为活性提取物，经粉碎过筛后可直接装胶囊制成胶囊剂，或压片制成片剂等。
活性提取物中异秦皮啶含量的测定方法是照中国药典2000版一部第180页所述的高效液相色谱法测定。
用本发明所提供的九节茶的活性提取物数十批测定异秦皮啶的含量在0.02～0.1％(重量百分比)之间。
活性提取物中鞣质含量的测定方法照中国药典2000年版一部附录第63页鞣质的测定。
用本发明所提供的九节茶的活性提取物数十批测定鞣质的含量在28～40％(重量百分比)之间。
本发明所提供的九节茶提取物的用途是制备治疗呼吸系统感染疾病的药物，主要是制备治疗感冒、咽喉炎的药物。
呼吸系统疾病以感染性为常见，原发性感染由于吸入病毒、细菌等微生物引起，病毒感染尤为常见，其次是特异性细菌感染。
下面用体外和体内试验来证实本发明所提供的产品对呼吸道感染疾病有显著的疗效，并与清热消炎宁胶囊比较证明新产品比原产品服用的剂量低，疗效更好。
一、体外抗菌试验
试验样品：1、清热消炎宁的干膏粉，(以下简称原产品)批号272004，含量10g生药/g干膏粉。
2、本发明的九节茶提取的活性提取物，(以下简称新产品)，批号1116，含量31.75g生药/g干膏粉。
3、醋酸泼泥松片：批号010304，5mg/片，广东江门市恒健药业有限公司生产。
4、阿司匹林肠溶片：批号010301，50mg/片，桂林制药厂生产。
菌种：金黄色葡萄球菌(26003-21)、大肠杆菌(44103-5)、绿脓杆菌(10104-1)、肺炎链球菌(31003-16)、乙型溶血性链球菌(32210-17)、流感杆菌(10105-32)，均购于中国药品生物制品检定所。
培养基：肉汤培养基、琼脂培养基、血清肉汤葡萄糖培养基、脱纤维血琼脂葡萄糖培养基。
试验方法：采用试管稀释法。
试验结果：
| 菌种 | 接种菌量(×105CFU/ml) | 新产品(毫克生药/毫升) | 原产品(毫克生药/毫升) | ||
| MIC | MBC | MIC | MBC | ||
| 金黄色葡萄球菌大肠杆菌绿脓杆菌流感杆菌肺炎链球菌溶血性链球菌 | 2.02.01.61.11.01.1 | 31.3416.7125.0125.0125.062.5 | 31.3500.0236.1250.0125.097.2 | 31.3250.0250.0333.3250.0125.0 | 36.4500.0250.0416.7250.0125.0 |
结果表明，新、原产品对呼吸道感染的常见菌均有抑菌和杀菌作用，新产品对绿脓杆菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、流感杆菌的抗菌活性比原产品强1～3倍；对金黄色葡萄球菌，新、原产品的抗菌活性相当。
二、体内消炎、止痛试验
1、对角菜胶致大鼠足跖肿胀的影响
试验结果：*
| 组别 | 剂量 | 动物数(只) | 致炎后不同时间足肿胀度 | |||
| (克生药/公斤) | (克浸膏/公斤) | 2h | 4h | 6h | ||
| 模型对照 | 蒸馏水 | 蒸馏水 | 10 | 0.48±0.10 | 0.52±0.10 | 0.45±0.09 |
| 原产品 | 12.06.0 | 1.200.60 | 109 | 0.33±0.07**0.40±0.07 | 0.44±0.080.47±0.09 | 0.33±0.09**0.40±0.11 |
| 新产品 | 12.06.03.0 | 0.380.190.09 | 101010 | 0.30±0.10**0.34±0.10**0.29±0.11** | 0.41±0.130.40±0.08*0.42±0.12 | .32±0.13*90.33±0.09*0.29±0.12** |
注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
结果表明，新产品3.0、6.0、12.0克生药/公斤剂量与原产品12.0克生药/公斤剂量对大鼠至炎后2h、6h的足跖肿胀有明显抑制作用(p＜0.05或0.01；其中新产品6.0克生药/公斤组能明显抑制大鼠至炎后4h的足跖肿胀，提示该剂量的消炎效果更好。
2、对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
| 组别 | 剂量 | 动物数(只) | 耳廓肿胀度(mg) | |
| (克生药/公斤) | (克浸膏/公斤) | |||
| 模型对照 | 蒸馏水 | 蒸馏水 | 12 | 20.0±3.5 |
| 原产品 | 16.88.4 | 1.680.84 | 139 | 15.7±2.6**20.3±4.9 |
| 新产品 | 16.88.44.2 | 0.530.260.13 | 131312 | 15.4±2.2**15.9±1.6**19.5±1.7** |
注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
结果表明，与模型对照组比较，新产品8.4、16.8克生药/公斤剂量与原产品16.8克生药/公斤剂量对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有明显抑制作用(p＜0.01)，抑制率分别为20.5、23.0、21.5％。新产品8.4克生药/公斤剂量和原产品8.4克生药/公斤剂量比较新产品明显优于原产品(p＜0.01)。
3、体内抗菌试验
试验样品：1、清热消炎宁的干膏粉，(以下简称原产品)批号272004，含量10g生药/g干膏粉。
2、本发明的九节茶提取的活性提取物，(以下简称新产品)，批号1116，含量31.75g生药/g干膏粉。
3、青霉素钠盐：华北制药股份有限公司生产，批号：Y006309
4、硫酸庆大霉素：广州市桥制药厂生产，批号：001202
试验方法：
取18-22gNIH小鼠540只，雌雄各半，随机分成27组，灌胃给药，每天一次，连续2天，对照组灌胃等量的水，阳性药用青霉素、庆大霉素一次肌注给药。末次给药后1小时，各组单位按1.0ml/只小鼠腹腔注射金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、大肠杆菌菌液，给菌液后1、6、12小时加强给药一次，观察5天内各组动物的死亡数。
试验结果：
1、对金黄色葡萄球菌体内感染的防治作用(n＝20)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 感染后小鼠死亡率(％) | ||||
| 24h | 48h | 72h | 96h | 120h | ||
| 蒸馏水 | - | 95(19) | 95(19) | 95(19) | 95(19) | 95(19) |
| 新产品 | 16.88.44.2 | 75(15)80(16)80(16) | 75(15)90(18)90(18) | 75(15)90(18)90(18) | 75(15)90(18)90(18) | 75(15)90(18)90(18) |
| 原产品 | 16.88.4 | 85(17)90(18) | 90(18)100(20) | 90(18)100(20) | 90(18)100(20) | 90(18)*100(20) |
注：括号内的数字为动物死亡数。
2、对肺炎球菌体内感染的防治作用(n＝20)
| 组别 | 剂量(g/Kg) | 感染后小鼠死亡率(％) | ||||
| 24h | 48h | 72h | 96h | 120h | ||
| 蒸馏水 | - | 95(19) | 100(20) | 100(20) | 100(20) | 100(20) |
| 新产品 | 16.8844.2 | 90(18)95(19)100(20) | 95(19)100(20)100(20) | 95(19)100(20)100(20) | 95(19)100(20)100(20) | 95(19)100(20)100(20) |
| 原产品 | 16.88.4 | 80(16)85(17) | 85(17)100(20) | 85(17)100(20) | 85(17)100(20) | 85(17)100(20) |
3、对大肠杆菌体内感染的防治作用(n＝20)
| 组别 | 剂量(g/Kg) | 感染后小鼠死亡率(％) | ||||
| 24h | 48h | 72h | 96h | 120h | ||
| 蒸馏水 | - | 95(19) | 95(19) | 95(19) | 95(19) | 95(19) |
| 新产品 | 16.88.44.2 | 85(17)85(17)85(17) | 90(18)90(18)95(19) | 90(18)90(18)95(19) | 90(18)90(18)95(19) | 90(18)90(18)95(19) |
| 原产品 | 16.88.4 | 85(17)95(19) | 90(18)100(20) | 90(18)100(20) | 90(18)100(20) | 90(18)100(20) |
结果表明：新产品对小鼠金黄色葡萄球菌体内感染抑制比原产品强，对大肠杆菌体内感染抑制稍强。
三、体外抑病毒试验
试验样品：1、原产品，批号272004，含量10g生药/g干膏粉。
2、新产品的干膏粉，批号1116，含量31.75g生药/g干膏粉。
3、对照药：众生丸
病毒：呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒、甲3型流感病毒、3型副流感病毒、I型单纯疱疹病毒。
试验方法：
取新、原产品稀释成40、30、20、10、4mg/ml、然后与等量的200TCID50的病毒株混合于37℃作用2小时，然后将呼吸道合胞病毒接种在Hep-2细胞，I型单纯疱疹病毒接种在BHK细胞，甲3型流感病毒接种在MDCK细胞，3型副流感病毒接种在Vero细胞、鼻病毒接种在二倍体细胞。甲3型流感病毒33℃培养48h作血凝试验，其余病毒37℃培养，3型副流感病毒72h后作血球吸附试验。
试验结果：
1、药物对呼吸道合胞病毒的体外抑制生长试验结果
| 药物名称 | 药物浓度(mg/ml) | 对照 | |||||
| 20 | 15 | 10 | 5 | 2 | 病毒 | 细胞 | |
| 新产品原产品对照药(众生丸) | -- | -- | --± | ±±++ | +++++++ | +++++++++ | --- |
2、药物对甲3型流感病毒的体外抑制生长试验结果
| 药物名称 | 药物浓度(mg/ml) | 对照 | |||||
| 20 | 15 | 10 | 5 | 2 | 病毒 | 细胞 | |
| 新产品原产品对照药(众生丸) | -- | -- | --- | ±±+ | ++++++ | +++++++++ | --- |
1、药物对I型单纯疱疹病毒的体外抑制生长试验结果
| 药物名称 | 药物浓度(mg/ml) | 对照 | |||||
| 20 | 15 | 10 | 5 | 2 | 病毒 | 细胞 | |
| 新产品原产品对照药(众生丸) | -- | -- | --- | ±±± | +++++++ | +++++++++ | --- |
4、药物对3型副流感病毒的体外抑制生长试验结果
| 药物名称 | 药物浓度(mg/ml) | 对照 | |||||
| 20 | 15 | 10 | 5 | 2 | 病毒 | 细胞 | |
| 新产品原产品对照药(众生丸) | -- | ±± | ++++++ | +++++++++ | +++++++++ | +++++++++ | --- |
5、药物对鼻病毒的体外抑制生长试验结果
| 药物名称 | 药物浓度(mg/ml) | 对照 | |||||
| 20 | 15 | 10 | 5 | 2 | 病毒 | 细胞 | |
| 新产品原产品对照药(众生丸) | ++++++ | ++++++ | ++++++ | +++++++++ | +++++++++ | +++++++++ | --- |
结论：新产品体外最低无细胞毒性浓度为20mg/ml，原产品最低无细胞毒性浓度为10mg/ml，两者间存在明显差异，提示新产品对细胞的毒性低于原产品。新、原产品5mg/ml的浓度在体外能抑制呼吸道合胞病毒、甲3型流感病毒和I型单纯疱疹病毒，新产品15mg/ml的浓度体外能抑制3型副流感病毒生长，而原产品未能显示抑制作用，新、原产品20mg/ml的浓度在体外均不能抑制鼻病毒生长。
五、体内抗病毒试验
1、对流感病毒感染小鼠的保护作用
药物：原产品干膏粉，批号272004，含量10g生药/g干膏粉。
新产品的干膏粉，批号021001，含量31.75g生药/g干膏粉。
阳性对照药：利巴韦林，广东华南药厂生产，批号030101。
流感病毒组：为FM1小鼠适应株。
实验结果：抗感清咽胶囊对流感病毒感染小鼠的死亡保护作用(
x±s)
| 组别 | 动物数(n) | 剂量g/kg | 感染量LD50 | 死亡数只 | 死亡率(％) | 死亡保护率(％) | 平均存活天数 | 延长生命率％ |
| 空白对照阴性对照病毒对照清热消炎宁利巴韦林低剂量中剂量高剂量 | 1010151515151515 | -1.00-1.000.0130.160.320.64 | --444444 | 0012811099 | --80.053.36.1**66.760.060.0 | ---26.773.913.320.020.0 | ＞14＞149.73±2.6810.93±3.1313.73±1.03*10.67±2.7410.33±3.2410.80±2.78 | ---12.341.19.76.211.0 |
注：与病毒对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
结果表明，新产品的低剂量(0.16g/Kg)与原产品的1.0g/Kg剂量组相当。
六、本发明提供的产品对437例感冒、咽喉炎临床观察
药物：本发明提供的新产品(抗感清咽胶囊，0.32g/粒)
原产品(清热消炎宁胶囊，0.5g/粒)
用药方法：新产品，口服，每天3次，每次2粒。
原产品，口服，每天3次，每次4粒。
1、对157例风热感冒的临床观察
两组治疗前可比性检测表明，两组年龄、性别、病程、主要临床症状、体征及舌象、脉象等比较，差异均无显著性意义。提示影响两组预后的主要因素具有均衡性。
西医诊断均为感冒，中医辩证属于风热征。
疗效比较
(1)总疗效比较
治疗组痊愈率为61.2％，显效率28.9％，有效率为5.88％。对照组痊愈率为44.4％，显效率25.0％，有效率为13.9％。两组比较，差异有显著性意义。
(2)治疗后临床症状消失率比较
| 组别 | 鼻塞 | 喷嚏 | 流黄涕 | 恶寒 | 头疼 | 咽痛 | 汗出不畅 | 口渴 | 胸闷 | |
| 治疗组对照组 | 原有例数消失例数消失率％原有例数消失例数消失率％ | 1919781.51362261.11 | 10710194.39292275.86 | 1099486.24322062.5 | 7070100181688.89 | 988586.73282485.71 | 855868.24251352 | 393897.441010100 | 1079992.52262076.92 | 131310033100 |
| 组别 | 全身不适 | 四肢酸痛 | 咳嗽 | 咯痰不爽 | 痰粘 | 痰黄 | 痰量 | 发热 | 咽部炎症 | |
| 治疗组对照组 | 原有例数消失例数消失率％原有例数消失例数消失率％ | 918189.01241562.5 | 645484.3816956.25 | 784456.4123939.13 | 433274.4211654.55 | 372978.3810880 | 463576.0910660 | 624166.1317952.94 | 675480.6241688.67 | 885157.95261350 |
2、对280例急性咽炎患者的临床观察
(1)治疗前经可比性检测表明，两组年龄、性别、咽部疼痛、吞咽痛、咽部干燥、咽部灼热感、音哑及咽部炎症等主要临床症状、体征比较，差异均无显著性意义，提示影响两组预后的主要因素具均衡性。两组西医诊断为急性咽炎，中医辩证为风热征。
(2)疗效比较
治疗组痊愈率为46.0％，显效率31.8％，有效率为19.6％。对照组痊愈率为29.3％，显效率34.1％，有效率为31.7％。两组比较，差异有显著性意义。
(2)治疗后临床症状消失率比较
| 组别 | 咽部疼痛 | 吞咽痛 | 咽部干燥 | 咽部灼热感 | 音哑 | |
| 治疗组对照组 | 原有例数消失例数消失率％原有例数消失例数消失率％ | 19812764.14813948.15 | 18914275.13764761.84 | 18612969.35744054.05 | 17413879.31695072.46 | 686189.61373491.89 |
| 组别 | 恶寒 | 口渴 | 食欲不振 | 四肢酸痛 | 发热 | 咽部炎症 | 扁桃体肿大 | |
| 治疗组对照组 | 原有例数消失例数消失率％原有例数消失例数消失率％ | 716692.96343088.24 | 16412475.61614065.57 | 988485.71402972.50 | 918290.11403382.50 | 736791.78282382.14 | 19710553.30813239.51 | 1096357.89501734.0 |
临床结果表明本发明提供的产品对感冒、咽喉炎疗效肯定。优于清热清热消炎宁，剂量低于清热消炎宁。
用本发明提供的九节茶提取物制备的药物，用于治疗呼吸系统感染疾病时，使用的口服剂量，每天3次，每次2粒，每粒含0.32g干膏粉，比原产品，清热消炎宁胶囊的口服剂量，每天3次，每次4粒，每粒含0.5g干膏粉显著降低。
下面通过实施例说明本发明的技术方案。
具体实施方式
实施例1、取广西产的用金粟兰科草珊瑚(Sarcandra glabra(Thunb)Nakai)植物的地上部分，即九节茶400Kg干燥整理后水3600Kg，煮2小时，滤取滤液，再加3200Kg水煮2小时，过滤，合并两次滤液，浓缩成110.5Kg浸膏，搅拌下加乙醇，静置，离心得上清液，再加乙醇，静置后得到的沉淀物，真空干燥后得活性提取物12.66Kg，活性提取物经测定含鞣质32.81％(g/g)，异秦皮啶0.051％(g/g)。
实施例2、取广西产的九节茶400Kg干燥整理后水3600Kg，煮2小时，滤取滤液，再加3200Kg水煮2小时，过滤，合并两次滤液，浓缩成113.0Kg浸膏，搅拌下加乙醇，静置，离心得上清液，再加乙醇，静置后得到的沉淀物，真空干燥后得活性提取物12.90Kg，活性提取物经测定含鞣质35.20％(g/g)，异秦皮啶0.034％(g/g)。
实施例3、取广西产的九节茶400Kg干燥整理后水3600Kg，煮2小时，滤取滤液，再加3200Kg水煮2小时，过滤，合并两次滤液，浓缩成107.0Kg浸膏，搅拌下加乙醇，静置，离心得上清液，再加乙醇，静置后得到的沉淀物，真空干燥后得活性提取物12.24Kg，活性提取物经测定含鞣质39.84％(g/g)，异秦皮啶0.088％(g/g)。
实施例4、取江西产的九节茶400Kg干燥整理后水3600Kg，煮2小时，滤取滤液，再加3200Kg水煮2小时，过滤，合并两次滤液，浓缩成91.0Kg浸膏，搅拌下加乙醇，静置，离心得上清液，再加乙醇，静置后得到的沉淀物，真空干燥后得活性提取物14.80Kg，活性提取物经测定含鞣质29.59％(g/g)，异秦皮啶0.039％(g/g)。
实施例5、取江西产的九节茶400Kg干燥整理后水3600Kg，煮2小时，滤取滤液，再加3200Kg水煮2小时，过滤，合并两次滤液，浓缩成108.0Kg浸膏，搅拌下加乙醇，静置，离心得上清液，再加乙醇，静置后得到的沉淀物，真空干燥后得活性提取物12.60Kg，活性提取物经测定含鞣质28.37％(g/g)，异秦皮啶0.030％(g/g)。
实施例6、取江西产的九节茶400Kg干燥整理后水4000Kg，煮2小时，滤取滤液，再加4000Kg，水煮2小时，过滤，合并两次滤液，浓缩成91.5Kg浸膏，搅拌下加乙醇，静置，离心得上清液，再加乙醇，静置后得到的沉淀物，真空干燥后得活性提取物16.0Kg，活性提取物经测定含鞣质30.21％(g/g)，异秦皮啶0.024％(g/g)。
Claims (3)
1、一种九节茶提取物，其特征是采用金粟兰科草珊瑚植物的地上部分，经水提乙醇沉淀法得到的沉淀物干燥后为活性提取物，其100克的活性提取物中含有鞣质28～40克，含有异嗪皮啶0.02～0.1克。
2、一种九节茶提取物在制备治疗呼吸道感染疾病的药物中的应用，所说的九节茶提取物是指用金粟兰科草珊瑚植物的地上部分，经水提乙醇沉淀法得到的沉淀物干燥后为活性提取物，其100克的活性提取物中含有鞣质28～40克，含有异嗪皮啶0.02～0.1克。
3、一种九节茶提取物在制备治疗感冒、咽喉炎的药物中的应用，所说的九节茶提取物是指用金粟兰科草珊瑚植物的地上部分，经水提乙醇沉淀法得到的沉淀物干燥后为活性提取物，其100克的活性提取物中含有鞣质28～40克，含有异嗪皮啶0.02～0.1克。
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