CN1222149A - 异香豆素衍生物及其在医药上的应用 - Google Patents

Abstract

提供用右式(Ⅰ)表示的化合物及其医药制剂,式中,R表示氢原子或C_1－6烷基,n为整数0或1。这些医药制剂可用于预防或治疗免疫调节作用失调或血管新生引起疾病。

Description

异香豆素衍生物及其在医药上的应用

技术领域

本发明涉及异香豆素衍生物及其在医药上的应用，更详细地说，涉及用于预防和治疗免疫调节作用失调和血管新生引起的疾病的异香豆素衍生物。

背景技术

异香豆素衍生物，特别是用上式表示的3-羟甲基-6-甲氧基-8-羟基-1H-2-苯并吡喃-1-酮，是作为优洛杀菌素链轮丝菌(Streptoverticillium eurocidium)产生的化合物被首先发现的，作为对各种动物细胞及人体癌细胞显示增殖抑制活性的抗生素MI 43-37F 11引起人们的注意(特开平3-2177号)。其后，对上述抗生素MI 43-37F11(以下简称MI 43)的化学合成方法加以研究，在异香豆素骨架的3位具有以苄氧基甲基或卤甲基等含有脱离基的甲基，以该异香豆素衍生物等作中间体(特开平4-112884号)，另外，还提供(特开平5-97841号)在上述3位有

基的异香豆素衍生物(式中R₃及R₄分别独立地为取代或未取代的烷基、烷氧基、链烷醇氧基、一或二取代氨基、苯硫基或N₃等基，其显示与MI 43同样的药理活性。

另外，口服MI 43，可有效地抑制大白鼠的佐剂关节炎及小鼠的胶原诱发关节炎，故有人提议用作免疫调节剂(特开平6-183966号)。然而，MI 43作为免疫调节剂显示出相当的有效性，并且，用作有效化合物或医药供给的需要依然存在。

原来用作自身免疫疾病治疗使用的甾类激素制剂、金制剂、D-青霉胺、左旋咪唑、柳氮磺胺吡啶等药剂，有时能引起肾上腺功能不全、感染症、肾功能障碍、造血功能障碍或胃肠功能障碍等严重的副作用，对其使用产生很大的制约。

在这样的背景下，本发明的目的是提供副作用小、对以人类为首的哺乳动物有效的，特别是生物利用度优良的医药制剂。

发明的公开

本发明人为达到上述目的，对各种异香豆素衍生物的药理作用及生物利用度进行研究。结果是，发现用MI 43的3位直接结合的羧基，或者用通过亚甲基或次甲基结合的羧基代替MI 43的3位上的羟甲基的异香豆素衍生物，例如，显示出比MI 43优良或不低于其的免疫调节作用，同时还发现其低毒、并显示极优良的生物利用度。并且，令人吃惊的是，有这种特性的化合物，哺乳动物口服时，发现其在生物体内显示很高的稳定性。另外，还发现上述化合物能有效地抑制哺乳动物的血管新生。还有，在上述3位通过亚甲基或次甲基结合羧基的异香豆素衍生物是原有技术文献中未记载的化合物。

因而，本发明提供含有制药学上允许的佐剂和用下式(Ⅰ)表示的化合物或其制药学上允许的盐的药理学上有效量构成的医药制剂：

(式中，R为氢原子或C_1-6烷基，n为0或1)。特别是提供预防或治疗免疫调节作用失调或血管新生引起的疾病的医药制剂。

换句话说，提供采用上述式(Ⅰ)表示的化合物或其制药学上允许的盐，配制预防或治疗免疫调节作用失调或血管新生引起的疾病的医药制剂。

再换句话说，提供免疫调节作用失调或血管新生引起的疾病的预防或治疗的方法，该法包括用上式(Ⅰ)表示的化合物或其制药学上允许的盐的药理学有效量，给以人类为首的哺乳动物给药的工序。

另外，提供上式(Ⅰ)化合物中的一种新型化合物，即以下式(Ⅰ-a)表示的化合物或其盐。

(上式中，R为氢原子或C_1-6烷基)。

另外，本发明还提供可有效使用下式(Ⅱ)表示的化合物作为制造上式(Ⅰ-a)化合物的合成中间体。

(上式中，R为氢原子或C_1-6烷基，而且A是氢原子或保护基)。

附图的简单说明

图1为本发明的化合物3在小鼠口服时，血浆中该化合物及代谢物浓度随时间的变化曲线。

图2为MI 43(比较化合物)小鼠口服时，在血浆中该化合物及代谢物的浓度随时间的变化曲线。

发明的详述

本发明的式(Ⅰ)化合物，其特征是，特别地在异香豆素骨架3位上直接地结合了羧基，或者通过仅有1个碳原子的亚甲基(R为氢原子)或次甲基(R为C_1-6烷基)间接地结合了羧基。这里，R为C_1-6烷基时，作为烷基的具体例子可以举出，例如，甲基、乙基、正或异丙基、正-、异-、仲-或叔丁基，正戊基，异戊基及正己基等。式(Ⅰ)化合物中，R为上述烷基时，尤其是生物利用度，例如，在生物体内稳定性高，在口服时也有有效性增高的趋势。

本发明可使用的具体化合物如下表所示。下面谈及本发明化合物时，用这些化合物的序号。

                  表：化合物的具体实例

化台物No.	n	R
			1234567891011	01111111111	-HCH3CH2CH3(CH2)2CH3(CH2)3CH3CH2CH(CH3)2(CH2)4CH3(CH2)2CH(CH3)2(CH2)5CH3(CH2)3CH(CH3)2

上述式(Ⅰ)化合物，可以使用其羧基和碱性化合物的盐形态，只要这些盐对本发明的目的没有恶劣影响，任何盐均可用。然而，优选的是，一般含有羧基的药物的制药学上允许的盐，优选与碱性化合物生成的盐。未作限定，但具体的盐可以举出，锂、钠、及钾等碱金属、钙及镁等碱土金属，以及甲胺、乙胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、吡啶、哌嗪及哌啶等有机碱的盐。

本发明的化合物中，化合物1系从赭色曲霉(Aspergillus ochraceus)的代谢物分离出来的已知化合物(Yamazaki,et al.,Chem.Pharm.Bull.20(10)2276～2278(1972))，但是，也可按下列反应流程Ⅰ来制备。

                        反应流程Ⅰ

另外，用式(Ⅱ)表示的新化合物，例如，可按下述反应流程Ⅱ来制备。

                      反应流程Ⅱ

更具体地说，上述反应流程Ⅰ的操作，例如，按照J.Org.Chem.,Vol.54,4218～4220、1989记载的方法制造起始化合物1，然后，上述流程Ⅰ中所表示的各种反应工序可按人们已知的方法来实施。这些操作在特开平5-163263号公报中已详细记载，如果需要，请参照该公报。引用该公报的内容作为本说明书的内容。

其次，反应流程Ⅱ是，例如，把式4或5的3位卤代甲基异香豆素衍生物置于二甲亚砜、二甲基甲酰胺、四氢呋喃等极性溶剂中，与氰化碱金属(例如，KCN或NaCN)反应，生成相应于8的腈化合物。然后，在有机碱(例如，咪唑、二甲基吡啶等存在下，把这里得到的腈化合物与置于，例如二甲基甲酰胺、二氯甲烷、甲苯等有机溶剂中的甲硅烷化剂(例如，叔丁基二甲基氯硅烷、叔丁基二甲基甲硅烷基トリフレ一ト等)反应，把8位的羟基保护后，在二氯甲烷-水体系等反应溶剂中，在相间移动催化剂及碱金属氢氧化物(例如氢氧化钠、氢氧化钾等)存在下，与卤代烃反应，生成式9的腈化物。如有必要，异香豆素骨架的8位羟基保护也可以脱离。上述反应，一般是从0℃～所用溶剂的回流温度下进行。

这样得到的式8及9，以及其脱除羟基保护基的化合物均是原有技术文献中未报导的化合物，例如，可用作本发明式(Ⅱ)化合物的合成中间体。因此，可以用三甲基甲硅烷基、乙酰基、丙酰基、苯甲酰基、甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基及苄氧基甲基等代替上述甲硅烷基作为羟基保护基，因此，本发明也提供有这些保护基的式8及9的化合物。

从式8或9化合物来合成式(Ⅱ)化合物是，式8或9化合物在对甲苯磺酸、甲磺酸等有机酸，盐酸、硫酸、磷酸等无机酸中，于50～150℃搅拌1～20小时来进行的。该反应在上述化合物中的羟基保护基脱离的同时，氰基水解，转变成羧基。

这样得到的羧酸衍生物的盐，按照人们已知的成盐反应，用相应的碱性化合物来生成的。

上述本发明的化合物或其制药学上允许的盐，如同后面详述那样，例如，显示对胶原诱发关节炎有抑制作用，故人们推测其可用于预防或治疗慢性风湿关节病、全身性红斑狼疮、全身性硬化症、结节性动脉周围炎、溃疡性大肠炎以及少年性糖尿病等自身免疫疾病或恶性肿瘤、重度感染症等主要的自身免疫调节作用失调的疾病。

另外，例如，在小鼠背部皮下法中，显示出对肿瘤诱发的血管新生的抑制作用。人们推测其主要也适用于预防和治疗血管新生引起的疾病，例如恶性固体肿瘤的增殖与转移、糖尿病性视网膜症、干癣、角膜移植引起的血管新生，特别是动脉硬化。

另外，本发明的化合物，与已知的MI 43相比，其显示出所具有的免疫调节作用在生物体内具高稳定性。特别是口服时，显示以生物体内有效的高稳定性为主的优良的生物利用度。而且，几乎未发现有毒性，可以有效、安全使用。

本发明的化合物可以单独作为预防或治疗，例如免疫调节作用失调或血管新生引起的疾病的医药制剂，然而，与制药学上允许的佐剂组合使用是优选的。作为这样的佐剂，可以举出，目前该技术领域常用的填充剂，增量剂、粘合剂，保湿剂、崩解剂、崩解抑制剂、表面活性剂、润滑剂等稀释剂或赋形剂。这些医药制剂可根据其治疗目的选择各种剂形。其代表剂形可举出片剂、丸剂、散剂、溶液剂、混悬糖浆剂、乳剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂、注射剂(溶液剂、混悬剂等)等。另外，发挥本发明化合物作用的特别好的给药方式，认为是口服，所以，在上述剂形中，提供口服剂形是优选的。

在片剂成型时，可以广泛使用已知的载体，例如，乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸钙、陶土、结晶纤维素、硅酸等赋形剂，水、乙醇、丙醇、单糖浆、葡萄糖液、淀粉液、明胶溶液、羧甲基纤维素、虫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯基吡咯烷酮等结合剂，干燥淀粉、褐藻酸钠、琼脂粉、昆布多糖粉、碳酸氢钠、碳酸钙、聚氧乙烷山梨糖醇酐脂肪酸酯类，月桂基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、淀粉、乳糖等崩解剂，白糖、可可奶油、加氢油等崩解抑制剂，季铵盐、月桂基硫酸钠等吸收促进剂，甘油、淀粉等保湿剂，淀粉、乳糖、陶土、膨润土、胶体状硅酸等吸附剂，精制滑石、硬脂酸盐、硼酸粉、聚乙二醇等润滑剂等。

并且，根据需要，对片剂通常要包衣，例如，可以制成糖衣片、明胶包衣片、膜包覆片、双层片和多层片。在成形为丸剂形态时，可广泛应用该领域原来已知的载体，例如，葡萄糖、乳糖、淀粉、可可奶油、硬化的植物油、陶土、滑石等赋形剂，阿拉伯橡胶粉、西黄蓍胶粉、明胶、乙醇等结合剂，昆布多糖、琼脂等崩解剂等等。

在成型为栓剂形态时，可广泛使用该领域原先已知的载体，例如聚乙二醇，可可奶油、高级醇的酯类、明胶、半合成的甘油酯等。

在配制注射剂的场合，把溶液剂及混悬剂灭菌，且与血液等渗的是优选的，在配制这些溶液剂、混悬剂时，可广泛使用该领域常用的稀释剂，例如可以用水、乙醇、丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、聚氧化异硬脂醇、聚氧乙烷山梨糖醇酐脂肪酸酯类。还有，在配制该等渗液时，制剂中也可含有足量的氯化钠、葡萄糖或甘油，另外，也可以使用一般的增溶剂，缓冲剂、镇痛剂等。在用作口服时，根据需要，该制剂中也可含有着色剂、保存剂、香料、风味剂、甜味剂等或其他药物。

本发明的医药制剂中所含本发明的上述化合物的量未作特别限定，可在很大范围内选择，但是，一般的片剂，颗粒剂和胶囊剂等固体制剂时，该制剂组合物中的化合物含量为1～70％(重量)，优选的为5～50％(重量)，溶液剂、注射剂和混悬剂等液体制剂中化合物含量为0.1～10％(重量)。

本发明化合物的给药方法未作特别限制，应根据各种制剂的形态、患者的年龄、姓别、其他条件及疾病的轻重等来确定给药方法。例如，片剂、丸剂、溶液剂、混悬糖浆剂、乳剂、颗粒剂及胶囊剂，可以口服。如上所述，口服给药是优选的，然而，当为注射液时，可单独使用，或与葡萄糖、氨基酸等一般营养液混合后静脉注射，并且，可根据需要，也可肌肉、皮内、皮下或腹腔给药。当为栓剂时，可直肠给药。

本发明化合物的给药量，可根据用法、患者年龄、姓别、其他条件、疾病轻重等适当增减，然而，为使在被给药动物体内达到药理学上有效的浓度，例如，口服时，每天0.3～300mg/kg体重，非口服时，0.03～30mg/kg体重是适当的。

本发明的化合物中，化合物1、化合物2及化合物3、分别以100mg/kg体重给8只DBA/1J小鼠口服或腹腔给药，确认无死亡个体，也未发现中毒的个体。由此可见，本发明使用的化合物，完全未显示急性毒性或显示极低的毒性。另外，把化合物1按100mg/kg体重或把化合物3按30mg/kg体重，分别给上述8只小鼠口服40天，无死亡个体，也完全未有显示急性症状的个体。因此，本发明的化合物几乎不显示亚急性毒性。另外，因其他的本发明化合物可以推定会显示同样的情况，故用式(Ⅰ)表示的本发明化合物可以极安全地使用。

并且，具体的如下所述，本发明的化合物在用于慢性风湿关节病的模型动物及血管新生的模型动物试验中，显示显著疗效，另外，引发其他炎症的物质所产生的酶，例如，环氧氧化酶(或者前列腺素内过氧化物酶)及脂氧化酶，以及对急性炎症模型动物的角叉莱胶浮肿完全不显示拮抗作用(或抑制作用)。因此，本发明的医药制剂其特征是显示高选择性的作用效果。另外，具体的如下所述，本发明的化合物在小鼠口服时，经过8小时显示了高血药浓度，特别具有口服给药的优良特性。

下面举出一些具体例子更详细地说明本发明，但本发明并不受此限制。关于作用效果对胶原诱发关节炎的抑制作用(其1)

用一组5～8个DBA/1J小鼠来调查胶原诱发关节炎的发病预防效果。即，把Ⅱ型胶原与等体积的弗罗因德氏佐剂一起乳化，配成1mg/ml的给药液，在小鼠尾部的皮内给药0.1ml，使其发生作用。21天后，用同样的操作方法，把乳化的Ⅱ型胶原0.1ml给药至小鼠的腹腔内，进行追加免疫，诱发关节炎。

化合物1按10和30mg/kg体重，从Ⅱ型胶原的第1次作用日，每天1次，口服给药43天。另外，化合物2及3按1和10mg/kg体重，分别同样每天1次，腹腔给药43天。胶原诱发关节炎的抑制效果，通过用数字卡尺定期测定后肢的足底板厚度来加以评价。结果示于表1。表1对胶原诱发关节炎的抑制作用

被测化合物	给药量(mg/kg/日)	足底厚度(左右合计、mm)37日后
			对照(未处理)	-	8.02+0.82
化合物1	1030	6.44+0.40**6.12±0.22**
			化合物2	110	6.81±1.07*7.19±0.40*
化合物3	110	7.08±0.16*6.78±0.98*

胶原诱发关节炎的抑制作用(其2)

用一组7～8个动物，与上述同样来诱发关节炎，化合物3按1、3及10mg/kg体重；另外一组，MI 43(比较)按30mg/kg体重，从分别追加免疫后，每天口服1次，共服21天。按下述标准，根据实验动物的前肢及后肢的发红、肿胀、强直程度，用0～4级(最高16级)来评价对胶原诱发关节炎的抑制效果。等级(スコア)

0：完全未发现症状；

1：四肢的指部等小关节只有1根发红、肿胀；

2：小关节有2个以上，或手腕、足腕等比较大的关节发红、肿胀；

3：1个手或足整个发红、肿胀；

4：1个手或足整个肿胀达到最大程度，并且伴有关节僵直。

结果汇总于下表2中。

表2对胶原诱发美节炎的抑制作用(其2)

被测化合物	给药量(mg/kg/日)	34日后级数
			对照(未处理)化合物3MI 43(比较)	-131030	9.25±1.356.50±1.495.00±1.613.50±0.63**5.29±1.77

平均值±标准误差

与对照组之间的明显误差^**：P＜0.01

上表中的本发明化合物可显著抑制胶原诱发关节炎，同时，在口服时，比较化合物(MI43)尽管按30mg/kg体重给药不能有效抑制关节炎的级数，但是，按10mg/kg体重给药能有效抑制关节炎的级数。小鼠背部皮下法抑制血管新生作用

用小鼠背部皮下法，分别探讨本发明化合物1及3对小鼠移植肿瘤S180诱发肿瘤血管新生的抑制效果。即，在微孔环的两面贴上孔径0.45μm的微孔过滤器，往该制成的室内注入1×10⁷个S 180细胞。塞住注入口后，把该室移至ICR系雌性小鼠(9～10周龄)的背部皮下形成的空气囊内。把被检化合物及对照溶剂的0.5％羧甲基纤维素溶液，从移值当日开始口服5天。在移植的第5天，剥离皮肤，在接触该室的皮肤一侧放置与环同样形状、内径10mm的O形环，在实体显微镜下观察，并进行照相摄影。

根据肿瘤血管特有的、弯曲达3mm以上的血管数，把所得照片的血管新生强度分成0、1、2、3四个阶段，根据下述标准判断等级。

等级

0：肿瘤血管数0；

1：肿瘤血管1根；

2：肿瘤血管2根；

3：肿瘤血管3根以上。

使用化合物1时的结果如下表3所示

表3在小鼠背部皮下法中的血管新生抑制作用(化合物1)

A：注入磷酸缓冲液组(正常组)；

B：注入S 180肿瘤细胞+注入溶剂组(对照组)

C：注入S 180肿瘤细胞+化合物1，按100mg/kg体重给药组。

使用化合物3时的结果示于下表4。

表4在小鼠背部皮下法中对血管新生的抑制作用(化合物3)

A：注入磷酸缓冲液组(正常组)

B：注入S 180肿瘤细胞+注入溶剂组(对照组)

C：注入S 180肿瘤细胞+化合物3，给药0.3mg/kg组

D：注入S 180肿瘤细胞+化合物3,1.0mg/kg组；

E：注入S 180肿瘤细胞+化合物3,3mg/kg组；

F：注入S 180肿瘤细胞+化合物3,10mg/kg组；

G：注入S 180肿瘤细胞+M 143,100mg/kg组(比较)

^*：P＜0.05,^**:P＜0.01(“学生”t检验)

从上表3及4可见，化合物1按100mg/kg体重口服，化合物3按1～10mg/kg体重口服，在小鼠背部皮下法中，肿瘤细胞S180诱发血管新生得到有效抑制。经口给药时被检化合物在血浆中的浓度

化合物3及MI 43按25mg/kg分别对绝食的雄性ICR系小鼠(体重18～21g)口服给药。给药后于5、30分，4、8及24小时时从小鼠采血，得到各血液的离心分离血浆(化合物3,3只/时间点；MI 43,5只/时间点)。所得到的各个血浆按下述方法进行前处理，用高速液体色谱法(HPLC)进行分析。血浆每0.2ml，添加饱和硫酸铵水溶液1.8ml及甲醇1.0ml，混合后，加乙酸乙酯3.5ml后，振荡。其后，离心分离，取出乙酸乙酯层，再往水层添加乙酸乙酯3.5ml，振荡，离心分离，与先取出的乙酸乙酯层合并，减压使其干固。用50％乙腈水溶液0.2ml使其再溶解，作为HPLC的试样。

HPLC〔东ソ-(株)CCTP系统〕的分析条件是，用YMC A-312柱(ODS 6×150mm(株)ヮィェムシ一)，化合物3时，作为移动相的为乙腈：1％TFA水溶液=60∶40,MI 43时，作为移动相的为乙腈：0.1％TFA水溶液=40∶60，分别使用流速1.0ml/min，在UV244nm进行测定。

化合物3及MI 43在血浆中的浓度如表5及表6所示，其随时间的变化示于图1与图2。化合物3的未变化体在给药后30分钟显示最高值后，呈现降低，而在8小时也观察到高的血药浓度。然而，在24小时是非常低的值。另外，MI 43的未变化体，5分钟后显示最高值后呈现出急速下降。已确认出其他的MI 43代谢物5种。

表5化合物3在血浆中的浓度

(未变化体浓度)             (μg/ml)
	时间      5(分)    30(分)    4(小时)    8(小时)   24(小时)
平均值    122.54   131.34    63.01      38.41     0.19标准偏差  16.11    14.01     8.44       6.87      0.12
	(未确定代谢物)
平均值    2.61     12.78     26.28      30.29     0.80标准偏差  2.29     3.78      5.12       4.19      0.36

表6 MI 43(比较)在血浆中的浓度

(未变化体浓度)             (μg/ml)
	时间       5(分)    30(分)   4(小时)   8(小时)
平均值     0.811    0.155    0.048     -标准偏差   0.225    0.059    0.016     -
	代谢物A
平均值     6.23     1.71     0.184     0.102标准偏差   2.68     0.622    0.123     0.076
	代谢物B
平均值     2.15     0.466    -         -标准偏差   0.637    0.106    -         -
	代谢物C
平均值     6.14     1.91     0.329     0.345标准偏差   1.795    1.045    0.055
	代谢物D
平均值     0.177    0.063    -         -标准偏差   0.074    0.021    -         -
	来确定代谢物
平均值     0.292    0.142    -         -标准偏差   0.093    0.028    -         -

代谢物A:3位的-COOH变换体

代谢物B:8位羟基的硫酸化合物

代谢物C:8位羟基的葡糖醛酸的化合物

代谢物D:6位-OH变换体

-：在检出限以下对角叉莱胶浮肿的作用

用一组6～7个ICR系小鼠研究对角叉莱胶浮肿的效果。即，用化合物3按照3及30mg/kg体重或用阳性对照药阿氯芬酸按照20mg/kg令其口服，30分钟后，把1％角叉莱胶液25μl注入右后肢足底板皮下。在角叉莱胶给药2小时后，用数字卡尺测定足底板厚度，与给药前的厚度相比，算出浮肿率(％)。结果示于表7。

表7对角叉莱胶浮肿的作用

被检化合物	给药量(mg/kg)	浮肿率(％)
			对照(5％羧甲基纤维素溶液)化合物3阿氯芬酸	-33020	47.4±2.841.7±3.146.1±4.218.5±3.5**

平均值±标准误差

与对照组之间的明显误差^**p＜0.01

由表可见，化合物3按3及30mg/kg给药，对角叉莱胶浮肿完全没有抑制作用。另外，消炎药的阿氯芬酸20mg/kg显示有效的抑制效果。对环氧氧化酶及脂氧化酶的作用

按Evans的方法(Biochemical Pharmacology 36:2035～2037,1987)研究了化合物3对环氧氧化酶(或前列腺素内过氧化酶)活性的抑制作用。即，从绵羊精腺得到的酶样品，在500μM的花生四烯酸及300μM化合物3的存在下，于27℃孵化1.5分钟。加三氯乙酸于该反应液中，使反应停止，测定532nm的吸光度。

另外，用Egan等的方法(Journal of Biolgical Chemistry,260:11554～11559 1985)研究对5-脂氧化酶的抑制作用。使用由大白鼠的嗜碱性白血病细胞(RBL-1)得到的酶。酶样品和30μM化合物3于室温孵化5分钟后，添加亚麻酸。然后。于室温孵化8分钟后，加氢氧化钠溶液使反应停止，测定234nm的吸光度。

结果示于下表8。

表8对环氧氧化酶及脂氧化酶活性的作用

被测化合物	抑制率(％)
			环氧氧化酶	5-脂氧化酶
	化合物3	-4.0			21.0

n=2

由表可见，化合物3的30μM及300μM，任何一种也不显示对环氧氧化酶及脂氧化酶有抑制作用。制备例

例1:8-羟基-6-甲氧基-1-氧代-1H-2-苯并吡喃-3-羧酸(化合物1)的制备

把3.60g MI43(16.20mmol)溶于丙酮100ml中，在冰冷却下，添加琼斯(Jones)试剂14ml，于0℃搅拌10分钟。加水500ml于反应液，用乙酸乙酯1000ml、500ml萃取。用20％食盐水200ml洗涤有机层3次。再用乙酸乙酯200ml萃取水层，用20％食盐水100ml洗涤2次。把萃取液与二次萃取液合并后，用5％碳酸氢钠水溶液300ml逆萃取4次。加水使总体积达1400ml后，加浓盐酸，调节pH至3.0。滤取所生成的白色沉淀，真空干燥后，溶于热丙酮，过滤、去除不溶物质，浓缩滤液。使所得到的固体悬浮在10％甲醇水溶液40ml中，加热回流10分钟后，用冰冷却。过滤所生成的白色沉淀，减压干燥，得到2.36g(收率62％)化合物1。

¹H-NMR光谱(400MHz,DMSO-d₆)：主要的吸收如下。δTMS(ppm):3.88(3H,s)、6.70(1H,d,J=2.0Hz)、6.95(1H,d,J=2.0Hz)、7.5 9(1H,s)、10.98(1H,s)

例2:3-氯甲基-8-羟基-6-甲氧基-1-氧代-1H-2-苯并吡喃的制备

把5.00g(22.50mmol)的MI 43和三苯基膦10.0g(38.25mmol)溶于四氢呋喃50ml，添加四氯化碳30ml(244mmol)，加热回流30分钟。减压浓缩反应液，加乙醇47ml于所得到的残渣18.46g中，进行重结晶，得到标题化合物4.72g(收率：87％)。

¹H-NMR光谱(400MHz,CDCl₃)：主要吸收如下：δTMS(ppm):3.88(3H,s)、4.33(2H,s)、6.40(1H,d,J=2.4Hz)、6.51(1H,s)、6.53(1H,d,J=2.4Hz)、11.00(1H,s)例3:3-氰甲基-8-羟基-6-甲氧基-1-氧代-1H-2-苯并吡喃的制备

把例2得到的3-氯甲基-8-羟基-6-甲氧基-1-氧代-1H-2-苯并吡喃5.00g(20.78mmol)溶于二甲基甲酰胺70ml，加氰化钠4.29g(83.11mmol)，在氮气氛中；于15℃搅拌30分钟。加水300ml于反应液，用乙酸乙酯600ml,250ml萃取3次。用20％食盐水300ml洗涤有机层3次后，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩至约300ml。加3g活性炭于该溶液，加热回流10分钟。用硅藻土过滤，除去活性炭，把滤液和洗液浓缩至约100ml。加热回流，溶解析出的结晶后，用冰冷却，过滤再析出来的结晶，得到标题化合物4.08g(收率84％)。

¹H-NMR光谱(400MHz,DMSO-d₆)：主要吸收如下：δTMS(ppm):3.65(2H,d,J=1.1Hz)、3.89(3H,s)、6.42(1H,d,J=2.4Hz)、6.54(1H,d,J=2.4Hz)、6.58(1H,s)、10.82(1H,s)例4:(8-羟基-6-甲氧基-1-氧代-1H-2-苯并吡喃-3-基)乙酸(化合物2)的制备

把例3得到的3-氰基-8-羟基-6-甲氧基-1-氧代-1H-2-苯并吡喃1.50g(6.49mmol)悬浮于乙酸8ml及浓盐酸8ml中，于70℃搅拌5.5小时，浓缩反应液，用乙酸乙酯150ml萃取。用20％食盐水50ml洗有机层3次后，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，然后，真空干燥，得到黑色粉末。加乙醇20ml、活性炭0.3g于该黑色粉末，加热回流30分钟。除去活性炭，冷却，过滤生成的白色结晶，减压干燥，得到标题化合物(化合物2)1.30g(收率80％)。

IR吸收光谱(KBr)：特征吸收如下(单位：cm^-1)。νmax:1238、1574、1626、1651、1690、1723

¹H-NMR光谱(400MHz,DMSO-d₆)：主要吸收如下：δTMS(ppm):3.62(2H,s)、3.86(3H,s)、6.56(1H,d,J=2.4Hz)、6.63(1H,d,J=2.4Hz)、6.66(1H,s)、10.90(1H,s)

例5:8-叔丁基二甲基甲硅烷基氧-3-氰甲基-6-甲氧基-1-氧代-1H-2-苯并吡喃的制备

              (A：叔丁基二甲基甲硅烷)

把例3得到的3-氰甲基-8-羟基-6-甲氧基-1-氧代-1H-2-苯并吡喃2.70g(11.68mmol)溶于二甲基亚砚25ml，在冰冷却下，依次添加咪唑1.59g(23.4mmol)、氯化叔丁基二甲基甲硅烷2.82g(18.7mmol)，搅拌2小时。反应结束后，加甲苯于反应液，用10％食盐水50ml洗1次，用20％食盐水50ml洗2次。甲苯层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，然后，真空干燥，把得到的残渣4.08g用乙醇20ml重结晶，得到标题化合物3.77g(收率93％)。

¹H-NMR光谱(400MHz,CDCl₃)：主要的吸收如下：δTMS(ppm):0.28(6H,s)、1.05(9H,s)、3.59(2H,d,J=1.6Hz)、3.87(3H,s)、6.45(3H,m)

例6:8-叔丁基二甲基甲硅烷基氧-3-(1-氰乙基)-6-甲氧基-1-氧代-1H-2-苯并吡喃的制备

把例5得到的8-叔丁基二甲基甲硅烷基氧-3-氰甲基-6-甲氧基-1-氧代-1H-2-苯并吡喃2.50g(7.24mmol)溶于二氯甲烷80ml，添加1M氢氧化钠水溶液100ml，冷却至0℃。一边激烈搅拌，一边添加氟化四丁铵584mg(1.81mmol)，然后添加含碘甲烷0.92ml(14.47mmol)的二氯甲烷10ml，搅拌30分钟。反应结束后，分离二氯甲烷层，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得的残渣用硅胶柱色谱法(ヮコ一凝胶C-200,130g，展开剂：己烷/乙酸乙酯=5/1)提纯，得到标题化合物1.01g(收率39％)。

¹H-NMR光谱(400MHz,CDCl₃)：主要的吸收如下：δTMS(ppm):0.28(6H,s)、1.05(9H,s)、1.68(3H,d,J=7.2Hz)、3.73(1H,q,J=7.2Hz)、3.87(3H,s)、6.45(1H,d,J=2.0Hz)、6,46(1H,d,J=2.0Hz)、6.48(1H.s)

例7:2-(8-羟基-6-甲氧基-1-氧代-1H-2-苯并吡喃-3-基)丙酸(化合物3)的制备

把例6得到的8-叔丁基二甲基甲硅烷基氧-3-(1-氰乙基)-6-甲氧基-l-氧代-1H-2-苯并吡喃1.63g(4.72mmol)溶于乙酸5ml及浓盐酸5ml于70℃搅拌12小时。冷却反应液，加水10ml，使析出结晶。滤出结晶，水洗，减压干燥，得到标题化合物粗结晶1.21g。加乙醇8ml于粗结晶，加热回流后，冷却，滤出所生成的淡黄色结晶，减压干燥，得到标题化合物(化合物3)1.04g(收率80％)。

¹H-NMR光谱(400MHz,DMSO-d₆)：主要的吸收如下：δTMS(ppm):1.40(3H,d,J=7.2Hz)、3.70(1H,q,J=7.2Hz)、3.86(3H,s)、6.56(1H,d,J=1.6Hz)、6.67(1H,d,J=1.6Hz)、6.68(1H,s)、10.90(1H,s)

例8胶囊剂的制造

把以例1记载的方法制得的化合物1为20mg、与乳糖180mg、硬脂酸镁1mg(均为每1个胶囊)均匀混合，每个胶囊填充为含得到的混合物约200mg的3号硬明胶胶囊。

例9片剂的制备

把例4记载的方法配制的化合物2为10mg、与乳糖120mg、玉米淀粉57mg(每个片剂量)很好混合。将该混合物与10％淀粉糊混合成颗粒，往里添加玉米淀粉60mg和硬脂酸镁3mg(每片含量)，使很好混合。制成直径8mm、重量约250mg的片剂。

例10糖浆混悬剂的制备

把用例7记载的方法配制的化合物3为100mg、与羧甲基纤维素钠100mg、对羟基苯甲酸甲酯14mg、对羟基苯甲酸乙酯6mg、单糖浆40ml、蒸馏水10ml(均为每瓶含量)很好混合，使混悬化，装入药瓶。

工业上利用的可能性

本发明提供免疫调节作用及血管新生抑制作用优良的化合物或医药制剂。因此，本发明可在制药工业使用。

Claims (16)

1．一种医药制剂，其中含有制药学上允许的佐剂，以及用下式(Ⅰ)表示的化合物或其制药学上允许的盐的药理学上的有效量，

上式中，R表示氢原子或C_1-6烷基，n为0或1。

2．权利要求1中记载的医药制剂，其为预防或治疗免疫调节作用失调或血管新生引起的疾病的制剂。

3．权利要求1或2中记载的医药制剂，其中n为整数1。

4．权利要求2或3中记载的医药制剂，其治疗的疾病为自身免疫疾病。

5．权利要求1～4中任何一项记载的医药制剂，其制剂为口服剂型。

6．下式(Ⅰ)化合物或其制药上允许的盐在制备预防或治疗免疫调节作用失调或血管新生引起的疾病的医药制剂中的应用，上式中，R为氢原子或C_1-6烷基，n为0或1。

7．权利要求6中记载的应用，其中n为整数1。

8．权利要求6或7中记载的应用，其中疾病为自身免疫疾病。

9．权利要求6～8中的任一项记载的应用，其中制剂为口服剂型。

10．预防或治疗免疫调节作用失调或血管新生引起的疾病的方法，该法包括用下式(Ⅰ)表示的化合物或其制药学上允许的盐的药理学有效量对哺乳动物给药的工序，

上式中，R为氢原子或C_1-6烷基，n为0或1。

11．权利要求10记载的方法，其中n为整数1。

12．权利要求10记载的方法，其中给药方式为口服。

13．权利要求10记载的方法，其中疾病为自身免疫疾病。

14．权利要求10记载的方法，其中n为整数1，给药方式为口服，且疾病为自身免疫疾病。

15．用下式(Ⅰ-a)表示的化合物或其盐，

上式中，R为氢原子或C_1-6烷基。

16．用下式(Ⅱ)表示的化合物，

上式中，R为氢原子或C_1-6烷基，A为氢原子或保护基。

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