CN1219791C - 一种人参二醇型皂甙酸水解制备人参皂甙Rk1和Rg5的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及由人参二醇型皂甙直接酸水解制备人参皂甙Rk₁和Rg₅的方法。本发明利用人参皂甙20-羟基上葡萄糖基在酸性环境中的稳定性低于3-羟基上葡萄糖基，以及在酸性条件下，20-羟基脱水成双键的特性通过加入保护剂、惰性气体保护、控制反应温度和酸浓度等措施，解决了人参皂甙在酸解条件下定向水解的问题，由人参皂甙直接酸水解制备Rk₁和Rg₅。使用本方法简单、方便、低成本，可大批量地制备Rk₁和Rg₅，以满足制备抗肿瘤治疗药物或其药源的需求。

Description

一种人参二醇型皂甙酸水解制备人参皂甙Rk1和Rg5的方法

技术领域：

本发明涉及由人参二醇型皂甙制备人参皂甙Rk₁和Rg₅的方法，特别是涉及酸水解制备方法。

背景技术：

研究表明人参皂甙Rk₁和Rg₅有抗肿瘤、诱导肿瘤细胞凋亡、免疫调节、改善微循环、安神、抗衰老、抗紧张、提高生命质量等多种生物活性。但是人参皂甙Rk₁和Rg₅却非常稀少，因此，人们一直重视人参皂甙Rk₁和Rg₅的生产方法。Kim等〔United States Patent5，776，460.July7，1998〕利用热解的方法，在120℃--180℃下0.5-20小时后，再经甲醇等有机溶剂提取得到稀有人参皂甙Rk₁和Rg₅。

发明的技术内容：

本发明提供了一种可简单、方便、低成本、大批量地由人参二醇型皂甙酸水解制备稀有人参皂甙Rk₁和Rg₅的方法，包括酸水解和收集步骤，其特征在于：人参皂甙的水解在含有保护剂的有机溶剂酸性水溶液中、保护性气体下进行；其中

人参皂甙的用量为5～100g/L，人参二醇型皂甙的纯度必须≥90％；

保护剂为还原性化合物如抗坏血酸、没食子酸、亚硫酸氢钠等，用量为2～10g/L；

有机溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、二氧六环、二甲亚砜、吡啶、乙腈之一种或其混合物，浓度范围为10～60％V/V；

酸为盐酸、硫酸、磷酸、三氟乙酸、二氟乙酸、一氟乙酸、三氯乙酸、二氯乙酸、一氯乙酸、柠檬酸、苹果酸、草酸、冰醋酸之一种，浓度范围为0.1～10mol/L；

保护性气体是指惰性气体如氮气、二氧化碳、氦气、氩气、氖气之一种；

水解温度为10～50℃，水解时间2小时～5天。

本发明人参二醇型皂甙直接酸水解制备人参皂甙Rk₁和Rg₅的方法中，酸可选用范围较宽，但硝酸对皂甙破坏大，不宜使用；综合水解时间、收率、工艺处理的难易、成本和质量等因素，以盐酸和硫酸最好；酸浓度与酸的种类(酸性强弱)和水解温度有关，酸浓度若大于最佳点，皂甙的破坏程度随酸浓度的增高而增大，酸浓度若小于最佳点，将使水解时间延长；最适温度与酸的种类和浓度有关，温度若大于最佳点，皂甙的破坏程度随温度的增高而增大；温度若小于最佳点，将使水解时间延长。当使用盐酸或硫酸时，浓度为1.5～2.5mol/L，水解温度最佳为20～40℃。

本发明人参二醇型皂甙直接酸水解制备人参皂甙Rk₁和Rg₅的方法中，有机溶剂的作用是保证中间产物处于溶解状态，使水解反应进行彻底；但是有机溶剂的加入量不能太大，否则人参皂甙Rk₁和Rg₅会被酸继续水解生成人参皂甙Rk₂和Rh₃和人参二醇；有机溶剂的加入量以产物人参皂甙Rk₁和Rg₅能完全析出。综合考虑以甲醇和乙醇为佳。有机溶剂不同，浓度亦不同。如：正丁醇用水饱和溶液，丙酮用30％的水溶液，甲醇或乙醇用30～50％的水溶液。

本发明人参二醇型皂甙直接酸水解制备人参皂甙Rk₁和Rg₅的方法中，保护剂以抗坏血酸为最佳，用量为3～6g/L。

本发明人参二醇型皂甙直接酸水解制备人参皂甙Rk₁和Rg₅的方法中，最终的收集过程是：

水解后的反应液用碱中和，中和剂为碱金属的氧化物或其氢氧化物，使用浓度为1～2mol/L，必须确保局部温度≤20℃；

对低沸点有机溶剂用减压蒸出、正丁醇萃取的路线；对高沸点有机溶剂用水稀释、收集沉淀的路线。

本发明涉及人参二醇型皂甙直接酸水解制备人参皂甙Rk₁和Rg₅的方法，解决了人参皂甙在酸解条件下定向水解问题，工艺简单方便、成本低、回收率高、质量好。使用本方法制备的Rk₁和Rg₅含量≥90％。

具体实施方式：

实施例1

10g人参二醇型皂甙，溶于1000ml盐酸浓度为2mol/L、含抗坏血酸5g、浓度为50％的甲醇水溶液中，在温度25℃、氮气保护条件下，搅拌水解1天；抽滤得到固体沉淀，用饱和碳酸钠溶液洗至中性；经C-18反相制备色谱，乙醇/水为流动相分离得到样品，蒸干后经远红外干燥得Rk₁1.51g，Rg₅为1.47g。经检验Rk₁和Rg₅含量≥95％。

实施例2

10g人参皂甙，溶于1000ml硫酸浓度为2mol/L、含抗坏血酸5g、浓度为45％的甲醇水溶液中，在温度25℃、氮气保护条件下，搅拌水解2天；抽滤得到固体沉淀，用饱和碳酸钠溶液洗至中性；经C-18反相制备色谱，乙醇/水为流动相分离得到样品，蒸干后经远红外干燥得Rk₁1.62g，Rg₅为1.48g。经检验Rk₁和Rg₅含量≥95％。

实施例3

10g人参皂甙，溶于1000ml冰醋酸浓度为9mol/L、含抗坏血酸5g、浓度为30％的乙醇水溶液中，在温度24℃、氮气保护条件下，搅拌水解5天；抽滤得到固体沉淀，用饱和碳酸钠溶液洗至中性；经C-18反相制备色谱，乙醇/水为流动相分离得到样品，蒸干后经远红外干燥得Rk₁1.10g，Rg₅为1.33g。经检验Rk₁和Rg₅含量≥95％。

实施例4

10g人参皂甙，溶于1000ml盐酸浓度为2mol/L、含没食子酸10g、浓度为45％的甲醇水溶液中，在温度20℃、二氧化碳气保护条件下，搅拌水解7天；抽滤得到固体沉淀，用饱和碳酸钠溶液洗至中性；经C-18反相制备色谱，乙醇/水为流动相分离得到样品，蒸干后经远红外干燥得Rk₁1.22g，Rg₅为1.17g。经检验Rk₁和Rg₅含量≥95％。

实施例5

10g人参皂甙，溶于1000ml盐酸浓度为2mol/L、含抗坏血酸5g、浓度为50％乙醇水溶液中，在温度20℃、氮气保护条件下，搅拌水解1天；抽滤得到固体沉淀，用饱和碳酸钠溶液洗至中性；经C-18反相制备色谱，乙醇/水为流动相分离得到样品，蒸干后经远红外干燥得Rk₁1.43g，Rg₅为1.54g。经检验Rk₁和Rg₅含量≥95％。

实施例6

10g人参皂甙，溶于1000ml盐酸浓度为2mol/L、含抗坏血酸5g、50％二甲亚砜中，在温度37℃、氮气保护条件下，搅拌水解7天；抽滤得到固体沉淀，用饱和碳酸钠溶液洗至中性；经C-18反相制备色谱，乙醇/水为流动相分离得到样品，蒸干后经远红外干燥得Rk₁1.01g，Rg₅为1.07g。经检验Rk₁和Rg₅含量≥95％。

Claims (7)

1、一种人参二醇型皂甙酸水解制备人参皂甙Rk₁和Rg₅的方法，包括酸水解和收集步骤，其特征在于：人参皂甙的水解在含有保护剂的有机溶剂酸性水溶液中、保护性气体下进行；其中

人参皂甙的用量为5～100g/L，人参二醇型皂甙的纯度必须≥90％；

保护剂为抗坏血酸、亚硫酸氢钠、没食子酸之一种，用量为1～10g/L；

有机溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、二氧六环、二甲亚砜、吡啶、乙腈之一种或其混合物，浓度范围为10～60％V/V；

酸为盐酸、硫酸、磷酸、三氟乙酸、二氟乙酸、一氟乙酸、三氯乙酸、二氯乙酸、一氯乙酸、柠檬酸、苹果酸、草酸、冰醋酸之一种，浓度范围为0.1～10mol/L；

保护性气体是指氮气、二氧化碳、氦气、氩气、氖气之一种；

水解温度为10～50℃，水解时间2小时～5天。

2、按照权利要求1所述人参二醇型皂甙酸水解制备人参皂甙Rk₁和Rg₅的方法，其特征在于：当使用盐酸或硫酸时，浓度为1.5～2.5mol/L，水解温度为20～40℃。

3、按照权利要求1所述人参二醇型皂甙酸水解制备人参皂甙Rk₁和Rg₅的方法，其特征在于：有机溶剂使用正丁醇时用水饱和溶液。

4、按照权利要求1所述人参二醇型皂甙酸水解制备人参皂甙Rk₁和Rg₅的方法，其特征在于：有机溶剂使用丙酮时，用30％的水溶液。

5、按照权利要求1所述人参二醇型皂甙酸水解制备人参皂甙Rk₁和Rg₅的方法，其特征在于：有机溶剂使用甲醇或乙醇时，用30～50％的水溶液。

6、按照权利要求1所述人参二醇型皂甙酸水解制备人参皂甙Rk₁和Rg₅的方法，其特征在于：保护剂为抗坏血酸时，用量为3～6g/L。

7、按照权利要求1～6之一所述人参二醇型皂甙酸水解制备人参皂甙Rk₁和Rg₅的方法，其特征在于收集过程是：

水解后的反应液用碱中和，中和剂为碱金属的氧化物或其氢氧化物，使用浓度为1～2mol/L，必须确保局部温度≤20℃；

对低沸点有机溶剂用减压蒸出、正丁醇萃取的路线；对高沸点有机溶剂用水稀释、收集沉淀的路线。