CN106581022A

CN106581022A - 人参皂苷Rk1在制备抗肿瘤药物中的应用

Info

Publication number: CN106581022A
Application number: CN201611098942.3A
Authority: CN
Inventors: 朱晨辉; 范代娣; 惠俊峰; 马沛; 米钰; 马晓轩; 段志广; 李伟娜
Original assignee: Northwest University
Current assignee: Northwest University
Priority date: 2016-12-04
Filing date: 2016-12-04
Publication date: 2017-04-26

Abstract

本发明公开了人参皂苷Rk1在制备抗肿瘤药物和提高人体免疫力药物中的应用。体外细胞学和动物学试验证明，人参皂苷Rk1具有显著的抗肿瘤作用，体外低剂量下仍能够抑制多种肿瘤细胞的增殖并促进其快速凋亡，且对正常细胞无明显影响，安全性良好。本发明可以以人参皂苷Rk1作为主要成分开发出不同剂型的抗肿瘤新药，以满足不同的应用人群。

Description

人参皂苷Rk1在制备抗肿瘤药物中的应用

技术领域

本发明涉及人参皂苷Rk1在制备抗肿瘤药物中的应用，属于医药领域。

背景技术

肿瘤是全球致死率最高的恶性疾病之一，严重危害人类的生命与健康。临床上的治疗措施包括手术治疗，放射线治疗，化学治疗等。然而，这些方法都有一定的局限性，并且对病人的身体均有一定的副作用。手术治疗法由于其治疗手段的局限性和手术方式的破坏性，对癌症患者的生理与心理都造成极大的创伤，术后恢复效果也不尽理想。而且对于一些恶性转移型中晚期的肿瘤患者，单纯的手术切除并不能达到预期的治疗效果。放射疗法是利用一些放射线的辐射效应来达到杀伤肿瘤细胞的效果，具有减少手术损伤，提高术后预防等优点，并可以在一定程度上减低肿瘤分期，使一部分恶性原发瘤的病灶范围缩小到可以实施手术水平。然而，放射性治疗的剂量及周期不好把握，接受放射性治疗的患者，放射线的辐射对患者的身体其他部位容易造成不可逆的损伤。化学疗法是利用一些特定的化学药物如环磷酰胺、甲氨蝶呤、顺铂等，适用于早期癌患者以提高手术治疗效果的一种辅助治疗手段。但是化疗所使用的药物对人体正常细胞的损害极大，一些恶性的肿瘤患者在长期接受化疗治疗之后，身体免疫机能出现退化，且肿瘤对化疗药物也出现一定程度的耐药性，反而对于治疗产生极大的负面影响。

由于现有的临床疗法对癌症患者治疗的局限性以及对患者本身的伤害程度较大，近年来，一些对肿瘤细胞有明显杀伤效果的天然中药提取物越来越受到人们重视。中药疗法对延长患者的生存期和改善其生活质量都起到良好的效果。研究可知，中药作用于癌细胞后，可对癌细胞产生明显的抑制增值、诱导凋亡、抑制肿瘤转移和新生血管生成作用，并改善肿瘤的耐药、抗药性等作用。中草药及其衍生物对肿瘤细胞的凋亡诱导作用是一个涉及多个途径，多个环节，多个靶点的复杂过程。而肿瘤的发生也是一个多种基因，多种信号途径共同作用的结果，因此，对中药作用于肿瘤细胞而引发的凋亡信号途径与靶点基因的研究对临床治疗癌症具有深远的意义。

人参皂苷可通过五加科植物人参、西洋参、三七、假人参、姜状三七、竹节参等植物提取获得。人参皂苷分为三类：分别为齐墩果酸型，原人参二醇型，原人参三醇型皂苷。一些学者对原人参三醇型皂苷Rg3，Rh2以及PPT在心血管、神经方面的作用做了大量研究，结果显示其有良好的调节作用，在抗肿瘤，降血糖和抗疲劳等方面效果更加显著。人们对原人参三醇型皂苷Rg1和Rh1等的活性也做了大量实验，其对提高记忆能力，抗肿瘤均有很好的效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人参皂苷Rk1在制备抗肿瘤药物或提高人体免疫力药物中的应用。

本发明的实现过程如下：

人参皂苷Rk1在制备治疗抗肿瘤药物或提高人体免疫力药物（或保健品）中的应用，所述人参皂苷Rk1的纯度≥95%，含量≥0.5%。人参皂苷Rk1在天然药物中含量极少，人工转化或合成都十分很难，分离纯化技术也不成熟，所以目前尚无厂家大规模生产。

发明人发现，去掉一定数量糖基的稀有皂苷Rk1具有很好的抗肿瘤效果。通过体外其对多种肿瘤细胞生长抑制试验，发现人参皂苷Rk1具有广谱的抗肿瘤效果，有望成为新的抗肿瘤药物。

为制成口服剂、注射剂或外用剂型，增强药物的使用效果，上述的人参皂苷Rk1中添加有辅料或载体，所述的辅料为海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖或胶原蛋白，使用海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖、胶原蛋白（含发酵法生产的胶原蛋白）等多种生物材料制备的缓释体系对人参皂苷Rk1进行再处理。所述口服剂为硬胶囊、软胶囊、缓控释放胶囊，压片、糖衣片、粉剂、颗粒剂、滴丸、水蜜丸、糖浆或口服液；所述的注射剂为溶液型、混悬液型、乳浊液型或冻干粉；所述的外用剂型为膏剂、凝胶剂、喷剂或贴膏。

附图说明

图1为人参皂苷Rk1胶囊对四种癌细胞生长48h的抑制作用；人乳腺癌细胞：MCF-7，人胃癌细胞: SGC-7910，人肺癌细胞:NCI-H460及人肝癌细胞: SMMC-7721；

图2为人参皂苷Rk1处理NCI-H460细胞48h形态的改变；a: 0 ug/ml; b: 50 ug/ml; c:100 ug/ml; d: 150 ug/ml; e: 200 ug/ml; f: 250 ug/ml；

图3为人参皂苷Rk1诱导NCI-H460细胞48h凋亡形态的改变；g: 0 ug/ml; h:50 ug/ml;e: 100 ug/ml; j: 150 ug/ml; k: 200 ug/ml; l: 250 ug/ml. 黄色箭头代表的是凋亡小体；

图4为给药21天后空白组和治疗组的裸鼠体重和肿瘤体积的变化；

图5为小鼠经Rk1染毒后对(a)饮水量， (b)摄食量和(c)体重的影响；

图6为小鼠经Rk1染毒后，Rk1对小鼠肝功能和肾功能的影响。

具体实施方式

下面给出的实施例，是为了便于理解本发明而不用于限定本发明的权利要求和核心内容。

实施例1：

人参皂苷Rk1胶囊

按照如下配比制成胶囊（1000粒，人参皂苷Rk1含量：100mg/粒）

名称	质量（g）	备注
			人参皂苷Rk1	100	纯度≥95%，符合药典要求
马铃薯淀粉	250	药用级
			白芨多糖	20	药用级
羧甲基纤维素钠	10	药用级
			硬脂酸镁	10	药用级

实施例2：

人参皂苷Rk1片剂

按照如下配比制成片剂（1000片，人参皂苷Rk1含量：100mg/片）

名称	质量（g）	备注
			人参皂苷Rk1	100	纯度≥95%，符合药典要求
羟丙基淀粉	360	药用级
			硬脂酸镁	80	药用级
交联PVP	12	药用级
			羧甲基纤维素钠	15	药用级
果糖	5	药用级

实施例3：

人参皂苷Rk1糖浆

按照如下配比制成糖浆（1000支，10mL/支，人参皂苷Rk1含量100mg/支）

名称	质量（g）	备注
			人参皂苷Rk1	100	纯度≥95%，符合药典要求
水	7800	去离子水
			甘露醇	100	药用级
黄原胶	10	药用级
			蛋白糖	1800	药用级
香精	1	药用级

实施例4：

人参皂苷Rk1冲剂

按照如下配比制成冲剂(1000袋，5g/袋，人参皂苷Rk1含量100mg/袋)

名称	质量（g）	备注
			人参皂苷Rk1	50	纯度≥95%，符合药典要求
可溶性淀粉	4500	药用级
			山梨醇	50	药用级
海藻糖	50	药用级
			蔗糖	350	药用级
香精	0.5	药用级

实施例5：

人参皂苷Rk1凝胶

按照如下配比制成软膏（1000管，10g/管，人参皂苷Rk1含量100mg/管）

名称	质量（g）	备注
			人参皂苷Rk1	100	纯度≥95%，符合药典要求
水	9400	注射用水
			卡波姆	30	药用级
甘油	60	药用级
			海藻糖	100	药用级
尼泊金甲酯	10	药用级
			三乙醇胺	300	药用级

实施例6：人参皂苷Rk1胶囊的生物学功效实验

（1）人参皂苷Rk1胶囊的分子式

人参皂苷Rk1属于其他类型皂苷，其结构类似于原人参二醇型皂苷，只是C₂₀由饱和碳变成了不饱和碳。它是由皂苷元和糖基通过糖苷键连接构成的四环三萜类化合物，其分子式为C₄₂H₇₀O₁₂，相对分子质量766.99，外观为白色无定形粉末，易溶于二甲基亚砜，乙醇和甲醇等有机溶剂。

人参皂苷Rk1的结构式：

（2）人参皂苷Rk1胶囊对不同肿瘤细胞抑制作用实验

胶囊去壳，将内容物溶解于甲醇中（1:10）浸提，旋蒸仪蒸发，获得人参皂苷Rk1。再将Rk1用DMSO溶解，用培养液配置成不同浓度，采用MTT法检测人参皂苷Rk1对人乳腺癌细胞（MCF-7），人胃癌细胞（SGC-7910），人肺癌细胞（NCI-H460）及人肝癌细胞（SMMC-7721）的抑制作用。

从图1可以看出：在50到250ug/ml浓度范围内，随Rk1浓度增加，人参皂苷Rk1对乳腺癌细胞、人胃癌细胞、人肝癌细胞及人肺癌细胞均具有很强的抑制作用，尤其对人肝癌细胞NCI-H460细胞的抑制作用最强。

（3）人参皂苷Rk1诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡实验

将肺癌细胞接种于无菌96孔板中，加入不同浓度人参皂苷Rk1(0，50µg/ml，100 µg/ml，150 µg/ml，200 µg/ml，250 µg/ml)处理48h之后，吸去培养液，用无血清RPMI 1640细胞培养液洗涤细胞1-2次，之后向每孔中加入100µl Hoechst 33342染色液，于细胞培养箱中孵育15min。15min后，吸去染色液，用无血清RPMI 1640细胞培养液洗涤1-2次。将孔板放在倒置显微镜，紫外灯为激发光，观察NCI-H460细胞凋亡形态。

图2为人参皂苷Rk1处理NCI-H460细胞48h的倒置显微镜图片。从图中可以看出：在0到250ug/ml浓度范围内，随着Rk1浓度的升高，人肺癌细胞NCI-H460数目越来越少，细胞变小变圆，并出现了较多的细胞碎片。说明在此浓度范围内，Rk1有效地促进了癌细胞凋亡。

图3为经Hoechst 33342染色的细胞图片。从图中可以看出：在0到250ug/ml浓度范围内，空白组细胞数目较多，染色均匀，基本上都是呈现低蓝色，并且细胞核完整，呈圆形或者椭圆形。随着Rk1浓度逐渐增加，细胞的数目减少，出现了荧光较亮的细胞核，部分细胞核出现核固缩，染色质聚集。当Rk1浓度为200µg/ml和250µg/ml时，不论荧光较暗还是较亮的细胞均减少，因为此浓度的Rk1对NCI-H460细胞的抑制率已经高达95%以上，细胞已经基本被杀死。

（4）人参皂苷Rk1体内抗肿瘤活性实验

将雄性BALB/c裸鼠饲养于室温、相对湿度为50-70%的SPF。饲养7天适应环境后，挑选出体重相差不大的裸鼠，接种NCI-H460细胞，每只裸鼠注射3-4×10⁶个细胞。裸鼠经癌细胞NCI-H460注射后，定期观察其体重及肿瘤体积变化。

接种20天后，当裸鼠左腋窝皮下肿瘤块尺寸约超过100mm³时，将裸鼠分空白组和治疗组，空白组按体重灌胃50%聚乙二醇-水溶液；治疗组按体重灌胃含Rk1浓度为20mg/kg/d的50%聚乙二醇-水溶液。一天一次，连续21天。

从图4可以看出：给药21天，空白组裸鼠体重增加的不明显，并有下降趋势；与空白组比较，给Rk1组裸鼠体重整体呈现逐渐增加的趋势；吉非替尼组裸鼠体重整体呈现下降趋势。由此说明肿瘤组织在Rk1的影响下，对裸鼠的生长影响较小，而吉非替尼组对裸鼠体重的影响较大。与空白组比较，给药剂量为20mg/kg/d时，人参皂苷Rk1和吉非替尼均能抑制肿瘤生长，且其抑瘤率分别为62.99%和52.31%。在同等剂量下，随着给药天数增加，人参皂苷Rk1能较好的抑制肿瘤的生长。由此可见，人参皂苷Rk1在体内也具有较强的抗肿瘤作用。

（5）人参皂苷Rk1安全性评价

将雌性健康ICR小鼠饲养于室温，相对湿度为50-60%，12小时白天，12小时黑夜，通风的环境内。饲养4天适应环境后，禁食12h，12h后，将小鼠随机分为两组，每组5只：空白对照组以溶剂50%聚乙二醇-水溶液灌胃，治疗组以Rk1悬浮溶液灌胃（2g/kg）。观察其饮水、饮食、体重及肝肾功能的变化。

从图5可以看出：经Rk1染毒后的小鼠在饮水量，摄食量和体重的变化与空白组小鼠相比，并没有明显的差别。

从图6可以看出：经Rk1染毒后的小鼠在肝功能和肾功能上与空白组小鼠相比，并没有明显的差别。

Claims

1.人参皂苷Rk1在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。

2.人参皂苷Rk1在制备提高人体免疫力药物或保健品中的应用。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述人参皂苷Rk1的纯度≥95%，含量≥0.5%。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的人参皂苷Rk1中添加辅料或载体。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的辅料为海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖或胶原蛋白。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的人参皂苷Rk1是口服剂、注射剂或外用剂型。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的口服剂为硬胶囊、软胶囊、缓控释放胶囊，压片、糖衣片、粉剂、颗粒剂、滴丸、水蜜丸、糖浆或口服液；所述的注射剂为溶液型、混悬液型、乳浊液型或冻干粉；所述的外用剂型为膏剂、凝胶剂、喷剂或贴膏。