CN1193352A - 人几丁质酶,其重组生产,其分解几丁质的用途及其在治疗和预防感染性疾病中的应用 - Google Patents
人几丁质酶,其重组生产,其分解几丁质的用途及其在治疗和预防感染性疾病中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1193352A CN1193352A CN96195511A CN96195511A CN1193352A CN 1193352 A CN1193352 A CN 1193352A CN 96195511 A CN96195511 A CN 96195511A CN 96195511 A CN96195511 A CN 96195511A CN 1193352 A CN1193352 A CN 1193352A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- chitin
- chitinase
- human
- glycosides
- basically
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 title claims abstract description 294
- 102000012286 Chitinases Human genes 0.000 title claims abstract description 178
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 title claims abstract description 178
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 title claims abstract description 94
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims abstract description 21
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 title abstract description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title description 17
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 title description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 30
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 19
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 201
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 198
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 110
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 39
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 38
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 38
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 38
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 16
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims description 12
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 11
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 11
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 9
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 9
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 8
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 8
- 239000007943 implant Substances 0.000 claims description 8
- 101000763602 Manilkara zapota Thaumatin-like protein 1 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000763586 Manilkara zapota Thaumatin-like protein 1a Proteins 0.000 claims description 7
- 101000966653 Musa acuminata Glucan endo-1,3-beta-glucosidase Proteins 0.000 claims description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 7
- 238000013459 approach Methods 0.000 claims description 4
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 4
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 229940034610 toothpaste Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000606 toothpaste Substances 0.000 claims description 3
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000004088 simulation Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 60
- 244000052769 pathogen Species 0.000 abstract description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 abstract 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 abstract 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 196
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 182
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 182
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 50
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 49
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 34
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 34
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 32
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 31
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 31
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 31
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 28
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 18
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 18
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 17
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 14
- 208000015872 Gaucher disease Diseases 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 12
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 12
- 230000006870 function Effects 0.000 description 11
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 11
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 10
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 10
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 9
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 9
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 9
- CSYVXYQDIVCQNU-QWRGUYRKSA-N Phe-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O CSYVXYQDIVCQNU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 8
- 102220369446 c.1274G>A Human genes 0.000 description 8
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 8
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 8
- 108010064696 N,O-diacetylmuramidase Proteins 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 7
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- MRYDJCIIVRXVGG-QEJZJMRPSA-N Asp-Trp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MRYDJCIIVRXVGG-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 6
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 6
- 101000925662 Enterobacteria phage PRD1 Endolysin Proteins 0.000 description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 5
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 5
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 5
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 5
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 5
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 239000010408 film Substances 0.000 description 5
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 5
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 4
- 101710130006 Beta-glucanase Proteins 0.000 description 4
- 101100007328 Cocos nucifera COS-1 gene Proteins 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 208000006968 Helminthiasis Diseases 0.000 description 4
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 4
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 4
- LFTYTUAZOPRMMI-CFRASDGPSA-N UDP-N-acetyl-alpha-D-glucosamine Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C)[C@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 LFTYTUAZOPRMMI-CFRASDGPSA-N 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 4
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 4
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 4
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 4
- 208000014837 parasitic helminthiasis infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 4
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 description 3
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 3
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 3
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 201000002563 Histoplasmosis Diseases 0.000 description 3
- DLCOFDAHNMMQPP-SRVKXCTJSA-N Leu-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DLCOFDAHNMMQPP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- 208000000501 Lipidoses Diseases 0.000 description 3
- 206010024585 Lipidosis Diseases 0.000 description 3
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 description 3
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 3
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 3
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 3
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 229930182764 Polyoxin Natural products 0.000 description 3
- 241000607715 Serratia marcescens Species 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- LFTYTUAZOPRMMI-UHFFFAOYSA-N UNPD164450 Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(NC(=O)C)C1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 LFTYTUAZOPRMMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 3
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 3
- 210000004493 neutrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- YEBIHIICWDDQOL-YBHNRIQQSA-N polyoxin Polymers O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C(C=O)N)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C(O)=O)=C1 YEBIHIICWDDQOL-YBHNRIQQSA-N 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N Ala-Ala-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- QHASENCZLDHBGX-ONGXEEELSA-N Ala-Gly-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QHASENCZLDHBGX-ONGXEEELSA-N 0.000 description 2
- 206010001935 American trypanosomiasis Diseases 0.000 description 2
- 102100039160 Amiloride-sensitive amine oxidase [copper-containing] Human genes 0.000 description 2
- 108010028700 Amine Oxidase (Copper-Containing) Proteins 0.000 description 2
- IPPFAOCLQSGHJV-WFBYXXMGSA-N Asn-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IPPFAOCLQSGHJV-WFBYXXMGSA-N 0.000 description 2
- 241001367049 Autographa Species 0.000 description 2
- 241000244038 Brugia malayi Species 0.000 description 2
- 241001493160 California encephalitis virus Species 0.000 description 2
- 208000024699 Chagas disease Diseases 0.000 description 2
- 241000223205 Coccidioides immitis Species 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N Diacetyl Chemical group CC(=O)C(C)=O QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 2
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 2
- TUIOUEWKFFVNLH-DCAQKATOSA-N Leu-Val-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O TUIOUEWKFFVNLH-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000255908 Manduca sexta Species 0.000 description 2
- QAVZUKIPOMBLMC-AVGNSLFASA-N Met-Val-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C QAVZUKIPOMBLMC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241001149951 Mucor mucedo Species 0.000 description 2
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 2
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 2
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 2
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 2
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 2
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 2
- 241000269980 Pleuronectidae Species 0.000 description 2
- 206010037075 Protozoal infections Diseases 0.000 description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- NXQAOORHSYJRGH-AAEUAGOBSA-N Trp-Gly-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 NXQAOORHSYJRGH-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 2
- VBFVQTPETKJCQW-RPTUDFQQSA-N Tyr-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VBFVQTPETKJCQW-RPTUDFQQSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VJOWWOGRNXRQMF-UVBJJODRSA-N Val-Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 VJOWWOGRNXRQMF-UVBJJODRSA-N 0.000 description 2
- VMRFIKXKOFNMHW-GUBZILKMSA-N Val-Arg-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N VMRFIKXKOFNMHW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 108010078114 alanyl-tryptophyl-alanine Proteins 0.000 description 2
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000001716 anti-fugal effect Effects 0.000 description 2
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 102220369447 c.1352G>A Human genes 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 108010069495 cysteinyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- RCKMWOKWVGPNJF-UHFFFAOYSA-N diethylcarbamazine Chemical compound CCN(CC)C(=O)N1CCN(C)CC1 RCKMWOKWVGPNJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003974 diethylcarbamazine Drugs 0.000 description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 2
- 239000003664 filaricide agent Substances 0.000 description 2
- XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N flucytosine Chemical compound NC1=NC(=O)NC=C1F XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 2
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 2
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 210000001724 microfibril Anatomy 0.000 description 2
- 230000002025 microglial effect Effects 0.000 description 2
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000000452 restraining effect Effects 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 2
- 102220023257 rs387907546 Human genes 0.000 description 2
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 210000002437 synoviocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XOSXWYQMOYSSKB-LDKJGXKFSA-L water blue Chemical compound CC1=CC(/C(\C(C=C2)=CC=C2NC(C=C2)=CC=C2S([O-])(=O)=O)=C(\C=C2)/C=C/C\2=N\C(C=C2)=CC=C2S([O-])(=O)=O)=CC(S(O)(=O)=O)=C1N.[Na+].[Na+] XOSXWYQMOYSSKB-LDKJGXKFSA-L 0.000 description 2
- NWXMGUDVXFXRIG-WESIUVDSSA-N (4s,4as,5as,6s,12ar)-4-(dimethylamino)-1,6,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4,4a,5,5a-tetrahydrotetracene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@]4(O)C(=O)C3=C(O)C2=C1O NWXMGUDVXFXRIG-WESIUVDSSA-N 0.000 description 1
- VYEWZWBILJHHCU-OMQUDAQFSA-N (e)-n-[(2s,3r,4r,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5s,6s)-3-acetamido-5-amino-4-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[2-[(2r,3s,4r,5r)-5-(2,4-dioxopyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]-2-hydroxyethyl]-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]-5-methylhex-2-enamide Chemical compound N1([C@@H]2O[C@@H]([C@H]([C@H]2O)O)C(O)C[C@@H]2[C@H](O)[C@H](O)[C@H]([C@@H](O2)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](N)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)NC(=O)/C=C/CC(C)C)C=CC(=O)NC1=O VYEWZWBILJHHCU-OMQUDAQFSA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical group O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100024643 ATP-binding cassette sub-family D member 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010000117 Abnormal behaviour Diseases 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 201000011452 Adrenoleukodystrophy Diseases 0.000 description 1
- YXXPVUOMPSZURS-ZLIFDBKOSA-N Ala-Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N)=CNC2=C1 YXXPVUOMPSZURS-ZLIFDBKOSA-N 0.000 description 1
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 1
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 1
- 241000726091 Aphanocladium album Species 0.000 description 1
- 239000000592 Artificial Cell Substances 0.000 description 1
- QCVXMEHGFUMKCO-YUMQZZPRSA-N Asp-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O QCVXMEHGFUMKCO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- PAYPSKIBMDHZPI-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PAYPSKIBMDHZPI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- LLRJPYJQNBMOOO-QEJZJMRPSA-N Asp-Trp-Gln Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N LLRJPYJQNBMOOO-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000244036 Brugia Species 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 244000132059 Carica parviflora Species 0.000 description 1
- 235000014653 Carica parviflora Nutrition 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 229920000298 Cellophane Polymers 0.000 description 1
- 101710151480 Chitinase 8 Proteins 0.000 description 1
- 101710116747 Chitinase A Proteins 0.000 description 1
- 102100037328 Chitotriosidase-1 Human genes 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 208000027219 Deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 208000007163 Dermatomycoses Diseases 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000258955 Echinodermata Species 0.000 description 1
- 101710202612 Endochitinase A Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 201000011240 Frontotemporal dementia Diseases 0.000 description 1
- 208000009796 Gangliosidoses Diseases 0.000 description 1
- 208000010055 Globoid Cell Leukodystrophy Diseases 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228404 Histoplasma capsulatum Species 0.000 description 1
- 208000014338 Histoplasma capsulatum infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 101000883515 Homo sapiens Chitinase-3-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- BGZIJZJBXRVBGJ-SXTJYALSSA-N Ile-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)N BGZIJZJBXRVBGJ-SXTJYALSSA-N 0.000 description 1
- LLZLRXBTOOFODM-QSFUFRPTSA-N Ile-Asp-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N LLZLRXBTOOFODM-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 241000289658 Insectivora Species 0.000 description 1
- 208000028226 Krabbe disease Diseases 0.000 description 1
- KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N L-leucyl-L-phenylalanine Natural products CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 208000004554 Leishmaniasis Diseases 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- JKGHDYGZRDWHGA-SRVKXCTJSA-N Leu-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JKGHDYGZRDWHGA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 102000009112 Mannose-Binding Lectin Human genes 0.000 description 1
- 108010087870 Mannose-Binding Lectin Proteins 0.000 description 1
- 108010049137 Member 1 Subfamily D ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 description 1
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- 101100084404 Mus musculus Prodh gene Proteins 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- RIYZXJVARWJLKS-KKUMJFAQSA-N Phe-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 RIYZXJVARWJLKS-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- SFKOEHXABNPLRT-KBPBESRZSA-N Phe-His-Gly Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)NCC(O)=O SFKOEHXABNPLRT-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- AXIOGMQCDYVTNY-ACRUOGEOSA-N Phe-Phe-Leu Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 AXIOGMQCDYVTNY-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- 208000000609 Pick Disease of the Brain Diseases 0.000 description 1
- 208000024571 Pick disease Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241000243142 Porifera Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 1
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 1
- 241000217239 Schizotrypanum Species 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 241000520664 Spongia Species 0.000 description 1
- 241001149962 Sporothrix Species 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 241000187179 Streptomyces tendae Species 0.000 description 1
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 1
- 241000223997 Toxoplasma gondii Species 0.000 description 1
- 241000223260 Trichoderma harzianum Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- HXNVJPQADLRHGR-JBACZVJFSA-N Trp-Glu-Tyr Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)N HXNVJPQADLRHGR-JBACZVJFSA-N 0.000 description 1
- 241000223109 Trypanosoma cruzi Species 0.000 description 1
- YJQCOFNZVFGCAF-UHFFFAOYSA-N Tunicamycin II Natural products O1C(CC(O)C2C(C(O)C(O2)N2C(NC(=O)C=C2)=O)O)C(O)C(O)C(NC(=O)C=CCCCCCCCCC(C)C)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1NC(C)=O YJQCOFNZVFGCAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLDYBRXERHITNH-QSFUFRPTSA-N Val-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C XLDYBRXERHITNH-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- TZVUSFMQWPWHON-NHCYSSNCSA-N Val-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N TZVUSFMQWPWHON-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 241000244005 Wuchereria bancrofti Species 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 244000062766 autotrophic organism Species 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005815 base catalysis Methods 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- JQXXHWHPUNPDRT-BQVAUQFYSA-N chembl1523493 Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O\C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)/C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C(O)=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2C=NN1CCN(C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-BQVAUQFYSA-N 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 108010057052 chitotriosidase Proteins 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000599 controlled substance Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229920006037 cross link polymer Polymers 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 201000003929 dermatomycosis Diseases 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000005546 dideoxynucleotide Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 206010014665 endocarditis Diseases 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 208000024386 fungal infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 1
- 201000006440 gangliosidosis Diseases 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N glucosamine group Chemical group OC1[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- 150000002305 glucosylceramides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 229920000550 glycopolymer Polymers 0.000 description 1
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000037313 granulation tissue formation Effects 0.000 description 1
- 230000002650 habitual effect Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 206010019847 hepatosplenomegaly Diseases 0.000 description 1
- WGBBUURBHXLGFM-UHFFFAOYSA-N hexan-2-amine Chemical compound CCCCC(C)N WGBBUURBHXLGFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000054350 human CHI3L1 Human genes 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 235000021539 instant coffee Nutrition 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 1
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 1
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 1
- 235000012204 lemonade/lime carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 108010044056 leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 210000000088 lip Anatomy 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 229940124735 malaria vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000013586 microbial product Substances 0.000 description 1
- 239000003595 mist Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000002864 mononuclear phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002969 morbid Effects 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 239000002362 mulch Substances 0.000 description 1
- 230000002371 mycocidal effect Effects 0.000 description 1
- 229940031815 mycocide Drugs 0.000 description 1
- 210000000272 myelencephalon Anatomy 0.000 description 1
- XYFMGGWVGACNEC-UHFFFAOYSA-N n-carbamoyl-n-phenylbenzamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1N(C(=O)N)C(=O)C1=CC=CC=C1 XYFMGGWVGACNEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010055145 narbonin Proteins 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 229960000988 nystatin Drugs 0.000 description 1
- VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N nystatin A1 Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/CC/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N 0.000 description 1
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 229940049547 paraxin Drugs 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 210000000680 phagosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 1
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 1
- 102220023256 rs387907547 Human genes 0.000 description 1
- 102220023258 rs387907548 Human genes 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002453 shampoo Substances 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 230000007847 structural defect Effects 0.000 description 1
- 201000009867 subcutaneous mycosis Diseases 0.000 description 1
- -1 superoxide ion Chemical class 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012622 synthetic inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 208000037816 tissue injury Diseases 0.000 description 1
- 238000000954 titration curve Methods 0.000 description 1
- 239000003860 topical agent Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- MEYZYGMYMLNUHJ-UHFFFAOYSA-N tunicamycin Natural products CC(C)CCCCCCCCCC=CC(=O)NC1C(O)C(O)C(CC(O)C2OC(C(O)C2O)N3C=CC(=O)NC3=O)OC1OC4OC(CO)C(O)C(O)C4NC(=O)C MEYZYGMYMLNUHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2442—Chitinase (3.2.1.14)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01014—Chitinase (3.2.1.14)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
本发明公开了一种具有图1或图2中所示的氨基酸序列的新的人几丁质酶,及其具有相似的几丁质水解活性的修饰形式,以及呈现其一个抗原决定簇的抗原性肽。还公开了通过工程宿主或宿主细胞生产重组人几丁质酶的方法,以及编码该酶的重组核酸,和人几丁质酶特异性寡核苷酸。本发明也描述了用于对人体含几丁质病原体感染的治疗或预防的方法,或是用于分解如几丁质基制品中的几丁质的方法,与人几丁质酶结合的抗体,包括人几丁质酶、其抗原性肽、人几丁质酶抗体、重组核酸或寡核苷酸的诊断试剂盒。
Description
发明领域
本发明属于抗含几丁质的生物体感染的人类个体的治疗和预防领域，以及生产用于上述疗法的物质的重组DNA技术。本发明还与另几方面有关：如诊断、基因治疗，从含几丁质的药物载体或植入物的受控药物释放；化妆品，牙用品，甚至食品。
发明背景
感染性疾病与天然防御
人类经常处于被各种病原感染的危险中，所述的病原例如：病毒、细菌、真菌、原生虫和多细胞寄生虫。一些相关的感染性疾病是严重致残甚至致命的。在哺乳动物中存在着被称作免疫反应的针对这些病原体的许多防御机制。关于这个问题可见参考文献1中的1，2，15和16章。
在天然的(或非适应性的)免疫反应与适应性的免疫反应之间是有区别的。后一类的反应是对某一特定病原体具有高度特异性的，并且与感染原的每一次后继接触都会使这一反应增强。适应性免疫反应由各种各样的淋巴细胞介导，天然的免疫反应基本上由巨噬细胞产生。这些更为原始的反应不是基于高度特异性识别作用，只是作为抵抗感染的第一道防线。一类重要的巨噬细胞是长寿细胞(单核细胞/巨噬细胞)，属于单核吞噬细胞。单核细胞形成于骨髓干细胞并进入血液。当分化成各种类型的组织巨噬细胞后，这些细胞就可以迁移到组织之中。这方面的例子有大脑中的微神经胶质细胞，肺中的肺泡巨噬细胞，肝中的枯否式细胞，肾中的肾小球膜吞噬细胞，脾脏巨噬细胞，淋巴结驻留及重循环巨噬细胞和滑膜细胞。第二类吞噬细胞由多形核嗜中性粒细胞形成，它们寿命短暂，而且构成了血液淋巴细胞的主体。
吞噬细胞在防御中的作用
已被很好地证明的是吞噬细胞在对细菌感染的免疫中所起的关键作用。吞噬细胞被细菌感染趋化性地吸引，与细菌的吸附可以通过多种相互作用，例如补体介导的、抗体介导的、或甘露糖结合蛋白介导的、或是通过外源凝集素寡糖的相互作用。随后，微生物就暴露在吞噬体和溶酶体中的一系列杀伤机制之下，最重要的是氧依赖性杀伤机制，它产生超氧离子并随之产生其它的有毒性的活性氧中间体。最近发现了在嗜中性粒细胞中通过氧化氮途径的杀伤作用的重要性。氧依赖性杀伤作用的介导是通过防卫因子，小的阳离子多肽，溶酶体酶，溶菌酶，和乳肝褐质。吞噬细胞在针对真菌和寄生虫的免疫作用方面的确切的作用还未十分了解，但认为与对细菌感染的抵抗作用类似。
除了直接杀死微生物之外，巨噬细胞在对外来微生物的免疫方面还起着其它一些重要作用。首先，这些细胞在呈递抗原给T淋巴细胞并随之引起免疫系统的更进一步反应上是十分有效的。其次，巨噬细胞与微生物产物的接触能够伴随着细胞因子的释放，影响免疫系统的其它成分。第三，巨噬细胞应答T淋巴细胞释放的细胞因子。例如，在一些寄生虫感染中，通过把寄生虫阻挡在发炎细胞的囊膜外，可以减轻机体受到的损伤。这种T淋巴细胞依赖性过程导致巨噬细胞的局部性富集，这些巨噬细胞释放能刺激肉芽组织形成的纤维化因子的释放并最终导致纤维变性。
对感染性疾病的干预
对病原体的天然防御机制对防止临床并发症的发生并非总是有效的，因此，要求对其(预防性)干预。
一种预防方法是免疫接种，例如，通过在宿主体内预先接种病原体(或其成分)来刺激防御机制。为了达到效果，疫苗必须诱导来自产生强烈细胞介导免疫反应的相应种类的T淋巴细胞的长期反应。虽然接种已被证明对于某些病原体是有效的，但这种方法也伴随着一些固有的问题。最重要的是，必须避免接种的抗原产生错误的免疫反应，如抑制或甚至自身免疫。对于某些感染来说，免疫接种需要在特异性的体内部位获得免疫性并由局部免疫或口服免疫进行。由于免疫系统的复杂性，病原体的不均一性，以及部分病原体逃避特异免疫应答的能力，对病原体的有效接种免疫的统一性方法是不可能有的。对于特殊的感染性疾病的种种对策仍然在不断摸索研究。
另外一种干预感染性疾病的方法是使用药物，阻止病原体的进一步繁殖与存活。就此而论最好是使用在病原体的水平特异性作用而不影响宿主的化合物。这种特异性的基础在于哺乳动物细胞与其致病性入侵者之间在组成与需求方面的区别。青霉素与头孢菌素是细菌细胞壁合成的特异性的抑制剂。氨基糖苷，氯霉素，四环素，大环内酯是细菌蛋白质合成的抑制因子。利福平，4-喹酮是细菌DNA复制的特异性抑制剂。两性霉素B和制霉菌素通过结合真菌细胞膜上的特异性固醇，引起细胞成分的流失，而具有杀死真菌的作用。
针对宿主细胞中不存在的特异靶来干预病原体的药物学方法在自然界也是存在的。一个很好的例子就是水解酶溶菌酶，和在无脊椎动物中一样，它也存在于脊椎动物体内。很多细菌的细胞壁中含有胞壁酸和N-乙酰葡糖胺的交联聚合物。水解酶溶菌酶能够裂解胞壁酸和N-乙酰葡糖胺残基之间的糖苷键，随之使细胞壁解体。而溶菌酶的存在不会伤害宿主，因为在非细菌细胞内不存在类似的结构。
几丁质
几丁质是一种多糖，哺乳动物细胞中并不存在，但存在于多种引起人类感染疾病的微生物中。因而，几丁质就成为选择性攻击这类病原体的一个有吸引力的靶。
几丁质是β(1-4)键连接的N-乙酰-D-葡糖胺单位的聚合物。它还可能以不同的比例含有葡萄糖胺单位。主要去乙酰几丁质称作几丁糖。关于此问题可参考文献2-5。
几丁质及其衍生物是地球上含量最丰富的大分子生物产物之一。估计每年的产量约有一百亿至一千亿吨。几丁质是真菌细胞壁的结构组分，也是几乎所有无脊椎动物(除了海绵动物，大多数珊瑚虫，和棘皮动物)的外骨骼的组分，但不存在于脊椎动物和自养生物中。几丁质有很多功能：保护细胞和生物体免受环境的机械或化学损伤，而且还能保持和确定它们的形态。N-乙酰葡萄糖胺链的长度可能从100至800单位。聚合物横向排列形成微纤丝，依靠一条链上的糖的氨基与相邻链上的糖的羧基间的强烈的氢键作用而稳定。可以识别出几丁质的三种晶状形态。在α-几丁质中(是真菌和节肢动物中最丰富的形式)，相邻的链之间是反平行方向排列的。在β-几丁质中是平行方向排列的，而在γ-几丁质中，两条链是平行的，第三条链是反平行的。在甲壳纲和真菌中微纤丝的直径常常为20-25nm。在大多数结构中，几丁质是与其它物质结合在一起，在真菌细胞壁中结合的化合物是β-葡聚糖。在动物的外骨骼中，几丁质与蛋白质的结合最占优势。在甲壳纲中基质是由于碳酸钙和磷酸钙的淤积而变得坚硬，在昆虫中基质是通过与酚类衍生物的革化而变得坚硬的。在原生动物中的几丁质结构中还存在着糖蛋白与粘多糖。
几丁质及有关化合物有很多应用，脱乙酰几丁质用作绳索、纤维、胶片和凝胶的成分。在农用工业中，庄稼可以用含几丁质衍生物的薄膜保护，免受真菌的伤害。在食品工业中，脱乙酰几丁质用来制备果汁和可溶性咖啡。日常工业品生产的香波，胶质，冰激淋甚至海绵中都用了脱乙酰几丁质。在制药工业和医学上，脱乙酰几丁质可用于制造隐形眼镜片，药物赋形剂和烧伤敷料。
几丁质合成与几丁质酶对其的降解
真菌中的几丁质合成了解得最清楚，基本的前体是从葡萄糖合成的UDP-N-乙酰葡萄糖胺。几丁质合成酶作为转膜蛋白被运输透过细胞膜后将从供体UDP-N-乙酰葡萄糖胺上得到的N-乙酰葡萄糖胺加到形成中的多糖链上。真菌的合成酶可以被UDP-N-乙酰葡萄糖胺的类似物，多氧菌素(由可可链霉菌产生)和烟霉素(由唐德链霉菌产生)竞争性地抑制。
其它物种中的几丁质合成还未十分明白。有人说在昆虫和甲壳纲中，几丁质的合成起始于内质网蛋白质的糖基化，几丁质长链在高尔基体内加到该蛋白质上，该几丁质蛋白质随后被运出到细胞表面。在节肢动物中的几丁质合成似乎是涉及脂质连接的中间体的两步骤过程。节肢动物中的合成可被苯甲酰基苯基脲类杀虫剂特异性地抑制，但其机理尚不清楚。另外，在这些生物体内，蛋白质合成及N-糖基化作用的抑制剂(膜霉素)抑制几丁质的合成。更多的证据表明，原生动物中的几丁质合成发生于细胞表面，极似真菌中的过程。
所有含几丁质的生物都有使其能降解几丁质聚合物而形态发生，即其形状的基本修饰的酶系统。另外，许多高等植物，鱼类，食虫动物(包括脊椎动物)都能产生降解几丁质的酶类。一些酶解系统具有这些方面的特征：i)β-己胺酶能从多糖的非还原末端去除末端N-乙酰葡萄糖胺部分；ii)一些具有广谱特异性的溶菌酶(如蛋清溶菌酶)也能从几丁质糖聚合物内部切开；iii)外切几丁质酶能从多糖的非还原末端裂解二乙酰几丁质二糖；iv)专一性内切几丁质酶沿着几丁质链随机地切开糖苷键，最终的主产物为二乙酰几丁质二糖，还有一些三乙酰几丁质三糖。外切和内切几丁质酶通常统称为几丁质酶。在此也使用此名称。
在自然界中，几丁质酶分布广泛，在一些病毒、细菌、真菌、植物、无脊椎动物和脊椎动物中都有发现。几丁质酶构成糖基化水解酶的18、19家族。Henrissat提出的这种分类基于氨基酸序列的相似性(6)。19家族仅含植物几丁质酶；例如来自大麦的几丁质酶，其三维结构已被解释。仅仅所谓的III类植物几丁质酶才属于18家族。在糖基化水解酶的第18家族中的几丁质酶的推断活性位点区域存在着一定的同源性。催化结构域的假想结构是8股a/β桶式结构(“TIM桶”)(7，8)，其作用机理类似于溶菌酶和其它的糖基化水解酶，如普通的酸碱催化(8)。
由含几丁质病原体引起的人类感染性疾病
由含几丁质生物体引起的人类感染性疾病有许多种。最显著的几种列于表1。一种基于病原体类型的分类是：i)真菌感染；ii)原生动物感染；以及iii)蠕虫感染。关于此问题可见参考文献9。
表1
几种由含几丁质病原体引起的感染性疾病：
I真菌感染：
-皮真菌病
-皮下真菌病
-肺部真菌病
-念珠菌病
II.原生动物感染：
-弓浆虫病
-疟疾(疟原虫)
-利什曼病(利什曼虫)
-Chagas病，嗜睡症(锥虫)
III.蠕虫感染
-血吸虫病
-毛线虫病
-丝虫病
-Ochocerciasis
真菌感染
现有的有限数量的抗真菌药物通常并不十分有效。真菌感染通常发病于免疫缺陷人群，现在最常见的是艾滋病患者中。大多数皮肤真菌感染用局部药剂治疗，内脏感染和表皮感染需长期全身性治疗。最常见的真菌感染是由白色念珠菌引起的。该生物体是一种口腔粘膜和阴道粘膜内共生菌，但在严重患病的患者中，以及在那些特异性免疫缺陷的患者中，和那些接受了广谱抗生素治疗的患者中对损伤的皮肤有致病性。念珠菌感染的最严重后果是肺炎，心内膜炎，败血症甚至死亡。唯一有效的治疗方法是静脉注射两性霉素B。注射这种药物可能引起低血压和虚脱等副反应。因此第一次注射时需要注射少量进行耐受实验。5-氟胞嘧啶是一种合成的氟化嘧啶，它能够进入真菌细胞通过干扰DNA和RNA合成抑制代谢。该化合物在治疗系统性真菌感染时和两性霉素B同时使用。当单独注射时，对5-氟胞嘧啶的抗性迅速产生。
在人类中能引起严重的感染疾病的其他种属的真菌，如曲霉，隐球菌，球孢子菌，副球孢子菌，芽生菌，孢子丝菌，和荚膜组织胞浆菌。
组织胞浆菌病的临床症状可能有很大区别。荚膜组织胞浆菌感染巨噬细胞，其致病原因类似于结核病。在正常宿主中肺部感染通常伴随着咳嗽和胸痛，肌痛和体重减轻。在某些肺部结构性缺陷的个体中，可能会发生肺部慢性破坏性疾病，类似于结核病。在免疫损害的宿主中可能发展成传播性组织胞浆菌病，伴随着发烧，肝脾大，贫血，白血病，血小板症和败血症。两性霉素B是治疗的通常选择。由于它的毒性，研究了对各种真菌感染治疗的其它药物。
原生动物和蠕虫感染
原生动物是单细胞生物，在人体内能引起大量的严重的感染性疾病。(见表1)。幸运的是对于大多数的这类病原体，有效地药物治疗是可行的。对于克氏锥虫引起的Chagas病的治疗，目前尚未让人满意。心脏与肠道是被这种疾病以慢性形式严重影响的器官。对鼠弓形体的组织损伤的有效治疗还是不可能的。细胞介导的免疫能力减弱后，可引起疾病的复发。蠕虫感染一般地可用特效药物非常有效地治愈。在这方面的难题是由班氏线虫和Brugia引起的淋巴丝虫病。在此病的高级阶段，在用药物乙胺嗪(DEC)杀死微丝蚴的同时，会由于大量蠕虫死亡引起并发症。
通过在几丁质水平的相互作用得到对含几丁质病原体的改善的抗性
几丁质在生物体中的不同分布使人产生这样一个想法：对于含几丁质病原体的感染的控制，几丁质代谢是一个很有吸引力的靶。在此有两种独特的实验方法应该提到：
1.几丁质合成的抑制(综述见参考文献2)
真菌细胞壁合成抑制剂作为杀真菌剂的价值在植物中已得到大量证明。多氧菌素已被广泛地用作出色的农用杀真菌剂。由于结构上与UDP-N-乙酰葡萄糖胺的相似性，多氧菌素成为几丁质合成的一组竞争性抑制剂。最近，作为机理相近的潜在抑制剂，烟霉素也已得到检验。
苯甲酰芳香基脲是商业杀昆虫剂，它们是昆虫中几丁质合成的强力抑制剂，但在真菌中则不然。
以上化合物在人体中的医用价值尚未能得到说明。
2.几丁质酶作为疫苗
几丁质酶在原生动物生命周期中的重要性，提示研究者考虑将原生生物几丁质酶作为免疫接种的有吸引力的抗原(10-13)。还有一个原因是(错误地)认为在人体内不存在类似的蛋白质(见参考文献13)
在抗含几丁质微生物的过程中，以上所阐述的实验方法的优点可能比设想的要少。
第一，合成的化合物对几丁质合成的抑制作用的特异性和有效性可能比所希望的要小。还不能有结论说抑制剂干扰哺乳动物细胞的内源性反应过程因而产生副作用。当原始化合物向一种有毒产物的生物转化作用发生时，毒性也有可能上升。另外，由于这些药物会通过尿液排出体外，因而也要求长期注射大量这类药物。另外，在微生物体内可能存在或发展出几丁质的替代合成途径，使其完全抑制变得复杂。
第二，使用源于病原微生物的几丁质酶作为疫苗可能产生一些未知的有害副作用。不能排除因这些几丁质酶的片段与内源蛋白质同源而引发的不希望的免疫反应。这一点可能是个事实而非仅仅是一种理论上的难题，因为人几丁质酶与其它物种的几丁质酶具有很高的同源性(见下)。
几丁质酶在植物和鱼类中抵抗含几丁质病原体中的作用
许多植物几丁质酶被认为是与致病性(PR)有关的蛋白质，这些酶可被病原体的存在或其它的应力所诱导。有些植物几丁质酶己被证明有抗真菌作用。见参考文献14。最令人吃惊的是有报道说，用一种来自粘质沙雷氏菌的在大肠杆菌中表达的细菌几丁质酶(ChiA)处理植物可产生对真菌的抗性(15)。然而很清楚，对大多数真菌的更有效的抑制作用要求几丁质酶和β-1，3-葡聚糖酶同时存在。在植物中，后一种酶也因应答应力被诱导。
据报道，鱼类的白细胞富含几丁质酶活性并在防御系统中起着作用(16)。这种作用的证据最近已得到，确认从大比目鱼中纯化的几丁质酶对含几丁质的真菌大毛霉有抑制作用。
现在普遍的认识是人类吞噬细胞中不存在类似的几丁质酶。但是，如下面将要讨论到的，最近我们发现在人工培养的人类巨噬细胞中存在着类似的一种酶。
本发明的简述
鉴于现有的抗含几丁质的病原体的方法的局限性，在此提出一种新的方法，解决困扰人类健康的这一难题。该方法基于新近发现的一种人几丁质酶的运用，该酶能通过重组DNA技术(生物工程)生产，并作为一种安全而有效的抗含几丁质病原体的药剂，干预由含几丁质病原体引起的感染性疾病。该方法的简介及其发展述于其后。
本发明提供了一种基本上是分离的或纯化的几丁质酶，所说的几丁质酶是人类的几丁质酶，它具有基本上与图1或图2的氨基酸顺序相应的氨基酸序列，或是所说的人几丁质酶的修饰形式，它具有基本上相似的几丁质水解活性。优选的是，这种新的人几丁质酶通过一种基因工程化的宿主细胞生产，从所说的宿主细胞中或是培养所说的宿主细胞的培养基中纯化，并且这种酶的氨基酸序列由基本上与图1或图2中的核酸序列相应的核酸序列所编码。本发明特别地包括这样的几丁质酶，它具有基本上与图1中的氨基酸序列相应的氨基酸序列，并且它的分子量大约50kDa，本发明还包括一种氨基酸序列基本上与图2中所示的氨基酸序列相应的，分子量约为39kDa的几丁质酶。
术语“基本上分离的或纯化的”表明这种几丁质酶从其天然存在的环境中分离，或是从应用重组DNA技术或用化学合成法生产或分泌几丁质酶的环境中分离，本发明意在包括“基本上分离形式”的几丁质酶，在此形式中，它基本上是与所说的环境中的其它成分分开的，而且优选的是几丁质酶是“基本上纯化的”，即意味着它已纯净到足以将其应用于医药用途，即是药学可接受的。
虽然本发明已包括了从天然来源，如经适当活化的人类巨噬细胞中分离几丁质酶的可能性，但通过重组DNA技术或通过化学合成来生产是优选方案，特别是通过一种基因工程化宿主或宿主细胞生产，并从所说的宿主或宿主细胞或是从培养所说的宿主或宿主细胞的培养基中分离的方法。
术语“基本上与……相应”意味着允许微小的序列变异，例如不会显著影响酶的活性的天然产生的变异。人几丁质酶的氨基酸序列中的某些氨基酸可能会被其它的氨基酸所取代，或是缺失，而不会因此而显著影响酶的功能，活性和耐受能力，有时甚而会因此使酶的性质得到改进。一般地，这类序列上的变异是十分有限的，大约少于全部氨基酸的30％，常常是少于20％，甚至是少于10％。即是说，与图1或图2中的序列比较，变体通常有高于大约70％，通常是高于80％或甚至是高于90％的同源性。共同的是它们都有几丁质酶活性的功能特征，该活性可用典型的几丁质酶底物，如4-甲基伞形酰-几丁质三苷来测定。
术语“具有基本上相似的几丁质水解活性的修饰形式的人几丁质酶”意味着包括了其氨基酸序列与图1或图2中所示的序列有显著差异但却仍然具有相似的几丁质酶活性的变体。具有相似的甚至是有所改进的性质的这种修饰形式可在人几丁质酶的结构域结构的基础上进行设计，例如缺失一个与功能无关甚至有害的结构域，以及构建含有两个或更多拷贝的希望存在的结构域的变体。
术语“具有基本上相似的几丁质水解活性”意味着最低的要求是具有与图1或图2中所示的几丁质酶相比至少是相等的几丁质酶活性。“相等”指的是在底物范围上等值，即等质性，以及在活性上等值，即等量性。
本发明还提供一种药物组合物，它包括本文描述的新的人几丁质酶，以及一种药学可接受的载体或稀释剂，更具体的是一种用于抗含几丁质病原体引起的感染的治疗的药物组合物，它包括一种治疗或预防有效量的新的人几丁质酶和一种药学可接受载体或稀释剂。优选的药物组合物还包括治疗或预防有效量的人β-1，3-葡聚糖酶。
本发明还提供了包括新的人几丁质酶和一种载体或稀释剂的非药物组合物。例如，这种组合物可以是来自培养细胞尤其是人类细胞的培养基，或者是化妆品(如体肤露)，牙用品(牙膏，漱口水)或食物(如奶，奶酪，及其它乳制品)。
另外，本发明提供了包括几丁质水解量的新的人几丁质酶的几丁质基制品。例如，几丁质基制品可以是含药物的药物载体或是控制药物释放的植入物，或是瞬时功能植入物。
本发明还提供了一种人类个体抗含几丁质病原体引起的感染的治疗或预防方法，包括给予所述的人类个体含有有效治疗或预防量的新的人几丁质酶的组合物。本发明还提供了一种制备人几丁质酶的方法，该酶有着基本上与图1或图2中所示氨基酸序列相应的氨基酸序列，或是有基本上相似的几丁质水解活性的所说的人几丁质酶的修饰形式，该方法包括培养能够产生所说的人几丁质酶或其修饰形式的基因工程化宿主或宿主细胞，以及从所说的宿主或宿主细胞或培养所说宿主细胞的培养基中分离所产生的几丁质酶。在此方法中，优选的是所说的几丁质酶的氨基酸序列是由基本上与图1或图2中所示的核苷酸序列相应的核苷酸序列所编码的。
本发明还提供了一种能够生产人几丁质酶的基因工程化宿主细胞，该几丁质酶具有基本上与图1与图2中所示氨基酸序列相应的氨基酸序列，或是有基本上相似的几丁质水解活性的所说的人几丁质酶的修饰形式。
本发明还提供一种重组的核酸，它包括编码基本上与图1或图2中所示氨基酸序列相应的氨基酸序列的核苷酸序列，或是其互补序列。优选的，所说的核苷酸序列基本上与图1或图2中所示的核苷酸序列相应，或基本上与其互补。
术语“基本上互补于”意味着包括了所有与图1或图2中所示核苷酸序列杂交的变体，尤其是在严格杂交条件下。术语“基本上相应”意味着包括了编码同一或相当的(指几丁质酶活性)氨基酸序列并被宿主或宿主细胞表达的所有变体。
本发明还包括至少有大约8个核苷酸的寡核苷酸，它有与图1或图2中所示的核苷酸序列相应或互补的核苷酸序列，能够在严格(即要求完全互补)条件下与编码新的人几丁质酶的核酸杂交结合。这类寡核苷酸可用于多种目的，例如，作为用于核酸扩增方法如PCR，NASBA等的引物，或是作为杂交分析的探针。其长度通常取决于所希望的用途，当作为引物时，正常的长度在12个核苷酸左右，优选是15，以及25，最佳选择是20个核苷酸。当用作探针时，通常要更长一些，例如，从大约15或20至大约40或50个核苷酸，或甚至到完整的编码序列。
类似的，本发明还包括至少大约8个氨基酸残基的肽，它含有衍生于图1或图2中所示的氨基酸序列的氨基酸序列，并代表或模拟新的人几丁质酶的抗原决定簇，特别是那些具有与图1或图2中所示氨基酸序列相应的氨基酸序列并具有抗原性的肽类。通常，这些肽类的长度至少为大约10个氨基酸残基，甚至至少大约15个，多至40个氨基酸残基，而优选的是长度为约30个氨基酸残基。所说的肽类可用于诊断目的，或用于免疫接种方案中以产生人几丁质酶特异性抗体。
本发明还包括能够结合到新的人几丁质酶上的抗体，尤其是单克隆抗体。这类抗体有多种用途，例如可用来分离和/或纯化(亲和层析)人几丁质酶，或是用于诊断目的。
本发明还提供一种诊断试剂盒，它包括一种上述人几丁质酶结合抗体，或是人几丁质酶肽，或是本文所述的新的人几丁质酶本身，还包括一套用于检测抗原或抗体的诊断试剂盒的常规组分；以及另一种诊断试剂盒，它包括本文所述的人几丁质酶特异性的寡核苷酸或编码重组人几丁质酶的核酸序列，随之的还有一套常规的检测核酸的诊断试剂盒所应有的组分。
另外，本发明还提供一种降解几丁质的方法，包括在几丁质水解条件下，应用新的人几丁质酶接触所说的几丁质。
附图简要说明
图1.chi.50 cDNA克隆的核苷酸序列以及相应蛋白质的推测氨基酸序列
图2.chi.39 cDNA克隆的核苷酸序列以及相应蛋白质的推测氨基酸序列
图3.巨噬细胞产生的几种不同的几丁质三苷酶
图4.几种几丁质酶蛋白质家族成员中推定的活性中心区域的序列对比
图5.从脾脏中纯化的39kDa和50kDa几丁质三苷酶和转染COS细胞生产的39和50kDa几丁质三苷酶的免疫滴定。
本发明的详细描述
人类不断地暴露于几丁质(或含几丁质微生物)面前这一事实强烈地提示着人类应该也具有降解这类材料的能力。否则，在生命进程中就会不可避免地逐渐引起几丁质的溶酶体积累，例如在不断与含几丁质微生物接触的肺泡巨噬细胞中。但是，这种几丁质的积累从未见到过。这一现象促使我们去研究人类巨噬细胞中几丁质酶活性的存在。事实上，如下所述，我们能够确定，与以前的见解相反，巨噬细胞能产生一种与其它非哺乳动物生物中见到的几丁质酶活性相似的几丁质酶(17，18)，该酶具有很高的水解几丁质的活性，而且显示出几丁质酶的其它一些共有的特征。基于最初鉴定这种新酶所用的底物，如4-甲基伞形酰-几丁质三苷，人几丁质酶被命名为几丁质三苷酶(chitotriosidase)(17)。
最近在我们实验室讨论了大量的有关几丁质三苷酶的新发现，这些信息增加了这种新发现的酶在将来的前景。
中等水平的几丁质三苷酶可在溶酶体或特殊的嗜中性粒细胞颗粒中检测到，在红细胞，血小板，淋巴细胞和单核细胞中未能发现几丁质三苷酶活性。我们观察到，中性粒细胞暴露于脂多糖(LPS)导致几丁质三苷酶的释放。健康的志愿者注射GM-CSF也会导致血浆中几丁质三苷酶活性的暂时上升，已被假定是由于中性粒细胞分泌酶所引起的。几丁质三苷酶的释放是模仿乳褐质在分离的血液中性粒细胞中没能检测到几丁质三苷酶mRNA。它提示这种酶在骨髓中这些细胞的前体中生产的。
几丁质三苷酶可以在巨噬细胞中大批地产生和分泌。在培养的单核细胞向巨噬细胞的分化过程中，几丁质三苷酶的产生是一个晚期事件：在细胞培养一周之后，第一条mRNA及相应的酶活性才被检测出来，而其它的巨噬细胞标记例如酒石酸抗性酸性磷酸酶在分化过程中的极早期就已被诱导出来。在外周血液来源的细胞的长期培养过程中，自发发生的巨噬细胞的一种特定的活化，已被发现是几丁质三苷酶的诱导所必需的。分离的大鼠外周巨噬细胞即使经过长期的培养，也不产生几丁质三苷酶。因此假设某些类型的已分化的组织巨噬细胞已不再能合成几丁质三苷酶。另外，并非每个引起巨噬细胞激活的因子都同时会诱导几丁质三苷酶的表达。我们注意到带有脂多糖(LPS)的单核细胞来源的巨噬细胞的活化事实上会降低几丁质三苷酶的分泌。
一种使巨噬细胞产生几丁质三苷酶的有力促进因子明显的是由于溶酶体(糖)脂类的积累。已注意到在各种溶酶体脂沉积中几丁质三苷酶的活性升高，例如，Nieman-Pick症，Krabbe症，GMI神经节苷脂沉积症，以及Wolmann症，虽然比Gaucher症中要少。有趣的是，以特异性寡糖或粘多糖的积累为特征的溶酶体储存失调不与几丁质三苷酶升高相伴。已经很清楚的是在Gaucher症患者的细胞中葡脑糖苷脂酶的缺乏不会引起几丁质三苷酶的过量产生。Gaucher症前期症状或非Gaucher症没有显示出异常的几丁质三苷酶水平。异常的酶水平实际与Gaucher症的临床症状；即在组织和骨髓中脂负载巨噬细胞的发生有关。
最近发现血浆中几丁质三苷酶显著上升是对处于某种活化状态的巨噬细胞的存在的一种反映。上升的酶水平在遗传性溶酶体脂沉积患者，内腔利什曼症患者和肉样瘤病患者中都能观察到。令人感兴趣的是注意到利什曼寄生虫也存在于巨噬细胞的溶酶体中，并且可能流出类糖脂结构。肉样瘤病的病因学仍未了解，一种可能是由于霉菌类感染因子引起的疾病，涉及具有巨噬细胞特征的含有多核性巨大细胞的免疫性肉芽肿的形成。
几丁质三苷酶可能是其它有病理性巨噬细胞参与的疾病状态的一种有用的标记。一个有吸引力的候选者是由动脉粥样硬化形成的，其特征是存在胆固醇负载巨噬细胞。而且，我们还注意到X连锁的肾上腺脑白质营养不良和多硬化症患者的脑脊髓中几丁质三苷酶的水平升高。据信在这两种病中被激活的脑巨噬细胞(微神经胶质细胞)是疾病发生的基本特征。
很清楚，几丁质三苷酶可用作Gaucher症和其它的溶酶体脂沉积的诊断标记。另外，检测血浆中酶的水平的升高可以用来诊断肉样瘤病症，脑脊液中酶水平的上升可诊断一些神经系统的异常。而在治疗过程中酶的水平的测定则是检测治疗效果的一个重要工具。
要使用人几丁质酶(几丁质三苷酶)作为体内抗含几丁质微生物的药剂，还必须具备一些条件。
很重要的一点是机体对几丁质三苷酶的耐受能力，如上所述，据信人体内不含内源性几丁质。与溶菌酶相似，几丁质酶活性可能对人体无害。由于几丁质三苷酶是循环系统中产生的内源性蛋白质，似乎对人体给予这种酶不会引起免疫反应。Gaucher症患者的循环系统中可能有高浓度的几丁质三苷酶，该症为获得性遗传的溶酶体储存失调，其以各种组织中大量产生葡糖神经酰胺负载巨噬细胞为特征(17)。Gaucher症患者血浆中超量的酶没有其它任何可见的有害并发症。这一点提示人体可以很好地耐受循环系统中超常量的几丁质三苷酶，满足了将其用于抗含几丁质病原体的一个重要前提。
为了能用作抗含几丁质病原体的药物，几丁质三苷酶还必须是能以均一形式大量可得的。对于人几丁质酶没有一种遍在的天然来源。在尿液和胎盘中该酶的含量很低。这使得我们尝试去分离编码几丁质三苷酶的cDNA。由于巨噬细胞中几丁质三苷酶基因的专一性表达，所有其它被试的细胞类型的cDNA文库都是几丁质三苷酶cDNA阴性的。然而，从能大量分泌几丁质三苷酶的长期培养的巨噬细胞mRNA中构建的cDNA文库，已被证明富含编码几丁质三苷酶的cDNA(占总cDNAs的0.1％)。以这种方式已有两种cDNAs被鉴定和克隆。
这两种不同的cDNA的产生是由于RNA的可变拼接方式所致，产生了两种不同但都有功能的mRNA。在COS细胞中表达这两种cDNA，合成并分泌了两种不同的几丁质三苷酶蛋白质，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得的表观分子量分别为39kDa和50kDa。这两种重组产生的几丁质三苷酶同工酶，分别命名为几丁质酶50和几丁质酶39，都具有酶活性。对它们进一步的性质分析表明它们的比，即单位量抗原的酶活性，与从组织中分离出来的或是存在于血浆中的几丁质三苷酶的比活性是相同的。
如同在“试验数据”一部分中所详述的，两种几丁质三苷酶蛋白质大部分相同，仅仅在C-端部分有区别。同工酶含有属于糖基水解酶18家族的几丁质酶的高度保守的催化中心区域(19)。克隆的cDNA的核苷酸序列预示这两种几丁质三苷酶蛋白质都缺失了N-键合的聚糖。事实上，39kDa形式的酶中未能发现任何聚糖的存在。而50kDa形式中不能排除O-糖基化的存在。
这些发现表明使用传统技术大规模生产这两种重组人几丁质三苷酶是可行的。而且，不仅在真核细胞中生产是可行的，而且在原核细胞中也可生产，因为这些微生物也能自发生产与之高度同源的蛋白，例如粘质沙雷氏菌。一套纯化几丁质三苷酶的方法已开发成功(18及下述)。因此，获得适于人用的纯的、单一态的大量的这两种重组人几丁质三苷酶是可能的。
39kDa几丁质酶不是糖基化蛋白质，所以它在真核细胞中的生产肯定是可行的。在提供一种正确的前导序列后，能够产生和分泌高度同源性几丁质酶的细菌原则上应能分泌正确折叠的人类几丁质三苷酶到胞外空间。另外，还可以考虑使用酵母细胞生产重组几丁质三苷酶，至少是39kDa的几丁质酶。虽然如此，却不能排除这种可能，即50kDa几丁质酶不仅能在高等真核细胞中产生，而且也能在低等真核细胞甚至在原核细胞中生产。
用传统技术在昆虫细胞，植物细胞或脊椎动物细胞中生产几丁质酶应该是可能的。最后，转基因动物可望成为在其乳汁中大量生产几丁质酶的生产者。已观察到在37℃时，加到牛奶中的几丁质酶在几个小时内是完全稳定的。
一种酶作为治疗药物使用时的另一种限制是由于它在体内的生存和功能发挥所形成的。因而把注意力集中到了几丁质三苷酶的性质上了。
两种形式的重组几丁质三苷酶(几丁质酶39和50)都被证明是对各种蛋白酶稳定的。只是在变性之后才成功地对其完成了蛋白水解，如在SDS存在时加热的条件下。37℃时血清或组织液的延时培养并未导致酶活性的可检测的损失，暗示该酶是对血清蛋白酶不敏感的。类似的，37℃时，在含有大量各种其它分泌的裂解酶的巨噬细胞调节的培养基中，几丁质三苷酶也是稳定的。
还有分析揭示在pH范围3-8内几丁质三苷酶是相当稳定和具有酶解活性的。而且在50℃时，该酶完全稳定，将酶液点在滤纸上室温放置数天后，酶活性仍可恢复。在-20℃或-70℃储存并经过重复的冻融过程后酶活性无损失。
所有这些观察结果说明几丁质三苷酶异构是真正稳定的酶，本质上对变性作用有高度抗性，而且显示出在各种环境下都能强有力地发挥功能。
几丁质三苷酶的静脉应用的前提是它的清除。在血液中，占优势的同工酶是50kDa蛋白质。而在组织中39kDa同工酶占优势。这一现象的形成可能是由于50kDa蛋白被吸收随之被水解成在溶酶体环境中显著稳定的39kDa形式。大鼠中的实验表明在血液循环中50kDa形式的半寿期比39Kda的要长。根据静脉注射过的大鼠血液中人几丁质三苷酶活性消失的测定结果，其消除速度并不快，半寿期大约为1个小时。每日仅有极少量的几丁质三苷酶被近管排到尿液中。据猜测可能有些酶被近管上皮细胞重新有效地吸收了，因为在肾脏中发现能够富集许多“溶酶体加工的”39kDa酶。这些观察提示静脉注射可以在血液循环系统中较长时间内维持高水平的人几丁质酶活性，从而，允许酶到达不同的组织之中。
纯化的几丁质三苷酶能很好地水解几丁质和人工合成的类几丁质底物如PNP-几丁质三苷，PNP-几丁质二苷，4-甲基伞形酰-几丁质三苷和4-甲基伞形酰-几丁质二苷。而且，注意到在真菌(毛霉)中加入几丁质三苷酶能抑制其生长。由于几丁质三苷酶与其它物种的几丁质酶之间的高同源性，这些发现是预料之中的事。
总之，两种几丁质三苷酶都有作为药物使用的优势。两种酶都较易通过传统的重组技术生产。在各种条件下酶都极其稳定而且有酶解活性。重组几丁质酶39和几丁质酶50，以及组织几丁质三苷酶都不会立即从血液循环中消除(至少在大鼠模型中如此)，而且原则上能到达各种组织部位。
以上有关几丁质三苷酶的发现促使我们在此宣称：天然的及重组的几丁质三苷酶(几丁质酶)是一种有吸引力的能用作抗含几丁质或能被这些酶水解的相关结构的微生物感染的疾病的药物。
两种几丁质三苷酶，几丁质酶50和几丁质酶39，它们的酶活性质总是一致的，即比活性，适用pH值范围和稳定性。两种几丁质酶都可以用作抗含几丁质病原体(见表1)的药物。含几丁质病原体的感染可能发生在身体的各个部位。由于它们的独特性质，几丁质酶被认为是适用于各个身体部位的。
局部应用被认为是治疗发生于皮肤表面的真菌感染。通过局部给药，还可以治疗眼部、生殖道及肠道的含几丁质微生物的感染。呼吸系统的相关感染可以通过含酶的雾剂治疗。口服给药可以用来抗口腔或胃肠道的含几丁质微生物的感染。最后如前文所述，静脉给药可以抗血液或组织中的病原体，无论是细胞内还是细胞外的。另外应有研究揭示通过使用特异性的几丁质酶异构体是否可能有更专一性的定位。
本发明还包括一些变体和修饰，特别是如下的可能性：
A.重组人几丁质酶和β-1，3-葡聚糖酶的混合使用：
在植物和鱼类中几丁质酶在抗真菌感染方面的重要作用已有详尽报道。在植物中，由于真菌细胞壁是由几丁质和β-葡聚糖原纤(15)混合物组成的，所以几丁质酶和β-1，3-葡聚糖酶是协同作用的。据信人类既不生产几丁质酶也不产生β-葡聚糖酶，已注意到长期培养的巨噬细胞不仅能够分泌几丁质裂解酶，而且能具有裂解染料标记的β-葡聚糖的酶活性。因此我们猜想，与植物中的情形类似，将人几丁质酶和β-葡聚糖酶混合使用应该比单独使用其中的一种酶更加有效。分离长期培养的巨噬细胞产生的β-葡聚糖酶，随后克隆其相应的cDNA，应该使重组人β-葡聚糖酶的生产成为可能。
B.修饰的重组人几丁质酶的使用：
对几丁质三苷酶的三维结构及其各结构域功能的深入了解可以为了一些特殊的用途而对酶进行工程化的修饰。例如，缺失了对酶的活性和专一性无关的结构域的重组酶的生产，可以使得核心蛋白更小但活性仍在，因而能更容易地渗透到身体的某些特殊部位。有关18家族和19家族的糖基化水解酶现有的和迅速扩展的知识，提示着工程化的修饰形式的几丁质酶是确切可行的。
除了治疗用途之外，本发明还包括预防方面的用途。
我们观察到血浆中几丁质三苷酶的活性随着年龄增长而上升，60岁以上的人体内血浆中的水平比小孩的要平均高几倍。另外，我们发现大约每十五个人中有一人不能产生有活性的几丁质三苷酶(见文献17)。这些个体的血浆和尿液中，以及淋巴细胞、长期培养的源于外周血液单核细胞的巨噬细胞中，都缺乏酶活性。在Gaucher症患者和正常个体中几丁质三苷酶缺乏的发生频率是相似的。酶活性缺乏的患者和那些血浆酶活性升高了几千倍的患者的临床表现是一致的。它表明几丁质三苷酶的升高是Gaucher症的临床表现的一种信号而不是前提条件。
我们注意到几丁质三苷酶缺乏具有遗传性。从几丁质三苷酶缺乏的个体的外周血液单核细胞中得到的巨噬细胞的长期培养过程中，可见同蛋白质一样，几丁质三苷酶mRNA的水平也是大大降低了的。残存的几丁质三苷酶蛋白质表现出正常的大小，但却丧失了酶的活性，这一事实表明至少在这些情形下实质的缺陷是在几丁质三苷酶基因上的一些突变。代谢标记和Northern杂交分析表明这些突变导致了催化能力受损的几丁质三苷酶蛋白的合成的减少。
不能排除由于几丁质三苷酶的缺乏会伴随一些不利。例如，对含几丁质病原体的抗性会降低，巨噬细胞中溶酶体对几丁质的降解作用会减弱，从而导致细胞的异常行为。仍需继续研究以弄清几丁质三苷酶的缺乏是否会真的带来什么危险。如果这一点被证实，可以考虑给几丁质三苷酶缺乏症患者进行预防性注射。
其它可能导致几丁质三苷酶的活性的功能性缺乏的情形是免疫缺陷状态。我们注意到在由于艾滋病毒(HIV)感染而引起免疫缺陷的患者中，平均说来其血浆中几丁质三苷酶的水平都下降了。另外，还注意到对肉样瘤病患者的皮质类固醇治疗会引起几丁质三苷酶活性的迅速下降。很明显，活化的巨噬细胞的存在是保持循环中正常几丁质三苷酶水平的一个重要因素。可以考虑对免疫功能不全因而被含几丁质病原体感染的危险大增的个体提供重组几丁质三苷酶。
重组几丁质三苷酶的局部应用，还可以考虑用在外伤上，以降低真菌感染的危险。
人几丁质酶还可以被开发成用于医学目的的降解注入的或植入的几丁质基结构的工具。
例如，药物可以掺在几丁质基胶囊中(“几丁质体”)。同时在胶囊中存在的一定量的人几丁质酶能够确保药物的可控制的释放。当药物储存在几丁质基质中时可望得到缓慢地逐渐地释放。在此系统中使用人类的酶可以实现几丁质基胶囊的分解而又不至于引起免疫反应。用于这一系统中的药物可以从小分子化合物到用于酶学和基因治疗目的的蛋白质和核酸片段。几丁质(或其类似物)已被用作药物的载体(20)。
另一种相关的用途是将几丁质三苷酶用于含有几丁质作为结构单元的植入物的迅速降解。在植入物只是临时不得不完成其功能时这一点是很有用的，给予重组几丁质三苷酶可使之很方便地被“溶解”掉。
重组几丁质三苷酶还可以在来自体内条件下用作杀真菌的化合物。例如，当某种人类细胞需要在无抗生素时培养并且将被重注入人体内时，其培养基中就可以加入重组几丁质三苷酶(或是与β-1，3-葡聚糖酶混合使用)。这方面的例子可以是用于基因治疗目的的细胞的来自体内培养或是用作伤口愈合目的的角质细胞的来自体内的培养。
最后，重组人类几丁质三苷酶(或是与β-1，3-葡聚糖酶的混合物)还可以用作牙膏和体肤露的添加剂，以防止真菌感染。
下面将通过一些实施例对本发明作详细说明，这些实施例仅仅是为了解释而不是要限制本发明的范围。
实施例1
编码人几丁质三苷酶的cDNA的克隆与组成
用下列策略克隆编码人几丁质三苷酶的cDNA。从1型Gaucher症患者脾脏中纯化几丁质三苷酶，因为该器官中极富几丁质三苷酶活性(18)。测定几丁质三苷酶的N端氨基酸序列，并将该信息应用于几丁质三苷酶cDNA的克隆。首先，应用已知的几丁质三苷酶的N-端氨基酸序列设计一条简并的有义寡核苷酸：5’-TGYTAYTTYACNAAYTGGGC-3’。其次，根据几丁质三苷酶中推测为催化活性中心的高度保守的结构域设计一条简并的反义核苷酸：5’-CCARTCIARRTYIACICCRTCRAA-3’。
通过RT-PCR技术，这些寡核苷酸被用来扩增一个DNA片段。为此目的，从大量分泌几丁质三苷酶的长期培养的巨噬细胞中提取了总RNA。使用Super ScriptTM RNAseH反转录酶和寡dT，开始合成cDNA的第一条链。碱水解后，用乙醇沉淀cDNA，备用做模板。PCR按标准条件进行。通过RT-PCR得到的DNA片段大小是所预期的(根据同几丁质家族的其它成员同源性推测)。片段纯化后，用T4DNA聚合酶处理，克隆进载体pUC19中的HindII位点。通过双脱氧核苷酸终止法测得的序列和纯化的人几丁质三苷酶的N-端氨基酸序列完全吻合，使之可以用作鉴定完整长度的几丁质三苷酶cDNA的探针。
用来自培养的巨噬细胞中的总RNA制备了cDNA文库。用GIBCO-BRL公司的Super Script Choice System cDNA合成试剂盒从RNA出发制备了双链巨噬细胞cDNA。双链的cDNA与过量的非回文结构的Bst XI连接子连接，并用低熔点胶分离。将超过500bp的cDNA纯化后连到载体pcDNA1(InVitrogen)中的BstXI位点。连接混合物电穿孔转化进大肠杆菌菌株MC106/P3，得到巨噬细胞cDNA文库。
通过随机引物方法，用放射性标记的部分几丁质三苷酶cDNA探针进行克隆杂交，筛选cDNA文库。与探针的杂交在1mM EDTA，0.5M磷酸氢二钠缓冲液(pH7.2)中，并在7％(w/v)的SDS存在下于65℃进行4小时。随后，用含0.1％SDS的150mM氯化钠，15mM柠檬酸钠(pH7.0)洗涤膜两次。然后放射自显影。大约有0.1％的克隆对部分几丁质三苷酶cDNA克隆的杂交显阳性。按上述方法对约20个克隆测序。用这种方式鉴别出了两个不同的全序列的几丁质三苷酶cDNA。这两个克隆分别被称作chi.50和chi.39。
chi.50的cDNA序列显示的开放读框起始密码子ATG位于第13位而终止密码子TGA位于第1410位(见图1)。该开放读框编码的蛋白质具有一个特征性的N-端ER信号肽，紧接着已确定的几丁质三苷酶的N-端序列。cDNA序列并未指明有可能的N-糖基化位点的存在，这一点与分离的几丁质三苷酶中不存在N-键合葡聚糖一致。所预测的蛋白质，在去掉信号肽后长度为445个氨基酸残基，计算分子量为49kDa。用培养的巨噬细胞的代谢标记试验揭示，这些细胞优先合成和分泌的几丁质三苷酶蛋白质在SDS存在的还原条件下经聚丙烯酰胺凝胶电泳测得表观分子量为50kDa。预测的50kDa的人几丁质三苷酶的C-端部分富含丝氨酸残基，理论上能形成O-糖基化。在50kDa的人几丁质三苷酶中这种类型的聚糖尚未被排除或确认。
chi.39的cDNA的核苷酸序列显示了一个编码387个氨基酸残基的几乎相同的几丁质三苷酶蛋白的开放读框(见图2)。在去掉疏水性的前导肽后，chi.39 cDNA预期的蛋白质有366个氨基酸残基，分子量为39kDa。信号肽和起始384个氨基酸和chi.50 cDNA编码的几丁质三苷酶蛋白质中的相应部分是相同的。39kDa的和50kDa的几丁质三苷酶之间的区别仅仅在于C端的3个氨基酸残基。
比较两种cDNA的核苷酸序列表明在chi.39 cDNA中插入了一段额外的核苷酸序列。
另外，chi.39 cDNA编码的几丁质三苷酶中没有预测到N-糖基化作用。
不同形式的几丁质三苷酶之间的关系示于图3。
两种克隆的几丁质三苷酶cDNA的组成强烈地暗示可变拼接方式产生了两种不同的mRNA。与chi.50 cDNA相比，chi.39 cDNA含有一个附加的几丁质三苷酶基因外显子，这点已被试验证实。基因组几丁质三苷酶cDNA已被克隆且被部分测序，序列表明确实有内含子-外显子转换，与这两种不同的cDNA克隆(代表不同的mRNA)是几丁质三苷酶RNA的可变拼接而形成的这一假设相对应。
培养的巨噬细胞的代谢标记试验表明，起始合成的是大量的50kDa几丁质三苷酶和极少量的39kDa蛋白质。根据这些发现，RNA酶保护试验揭示了在巨噬细胞中chi.50 RNA和少量的chi.39RNA的共同存在。还注意到分泌的50kDa的几丁质三苷酶在被巨噬细胞吸收后能够被水解成38-39kDa的蛋白质。有可能一些刚合成的几丁质三苷酶尚未被分泌，而是直接到达溶酶体中，在那里发生水解。
从Gaucher症患者的脾脏中至少可分离到两种几丁质三苷酶的异构体。在SDS存在下的PAGE电泳测得的表观分子量是50和39kDa。使用电喷射质谱精确测定了从组织中分离的39kDa几丁质三苷酶的分子量，这种分析指示39kDa组织酶(其有正常的N-端)经受过C-端的蛋白水解过程。应该注意到同50kDa前体(除去C-端83个氨基酸)一样，39kDa(除去C-端4个氨基酸)也可能产生组织酶。
对EMBL和Gene Bank数据库的检索揭示了在两种人类几丁质三苷酶和一组从不同物种中得到的几丁质酶以及有关蛋白质之间有显著同源性。所有这些同源蛋白质都属于“几丁质酶蛋白质家族”(18，19)。
注意到同源性最强的区域是推测为几丁质酶催化活性中心的基本单元的区域(见图4)。还鉴别了几丁质家族的另外的同源区域。在图1中，用黑体字标出了39kDa几丁质三苷酶与几丁质酶蛋白质家族9个成员中的至少6个相同的氨基酸。
50kDa人几丁质三苷酶的预测的C-端部分显示仅仅与分别从Manduca sexta和Brugia malayi中得到的两种几丁质酶同源。在后者中报道过O-糖基化作用(12)。
实施例2
人几丁质三苷酶的重组生产
通过DEAE-Dextran方法(见21)用两种几丁质三苷酶cDNA转染COS-1细胞。通过测量分泌的酶的活性来计量几丁质三苷酶的生产。培养基中的几丁质三苷酶的活性测定使用前述的产生荧光的底物4--甲基伞形酰-几丁质三苷。
COS-1细胞培养基中，无论是用chi.50还是用chi.39转染过的，都在转染7天后含有大量的几丁质三苷酶活性(5-20IU/ml)。而在无转染的COS-1细胞或是转染了以无义的方向插入的相同cDNA的COS-1细胞中都未检测到活性。
使用抗人几丁质三苷酶的兔抗血清的免疫滴定，分析了COS细胞的几丁质三苷酶的产生。这种抗血清能够抑制人类几丁质三苷酶的活性。图5显示，与分离的脾几丁质三苷酶一样，抗血清可以使几丁质三苷酶失活。这个发现表明在每单位抗原的酶活性方面，这两种重组几丁质三苷酶与脾中的酶是相似的。
这两种重组几丁质三苷酶(50和39几丁质酶)与脾脏几丁质三苷酶相比较，其pH适应范围，稳定性，对于4-甲基伞形酰-几丁质三苷和4-甲基伞形酰-几丁质二苷的Km值没有显著的差别。
代谢标记实验表明，分别用chi.50 cDNA和chi.39 cDNA转染的COS细胞产生的是预期分子量分别为50kDa和39kDa的几丁质三苷酶蛋白质。
实施例3
在此之前我们曾开发了一套从Gaucher症患者的脾脏中得到的几丁质三苷酶的纯化方法。该方法可以得到纯化的39kDa几丁质三苷酶和部分纯化的50kDa的酶。
简而言之，是将不含去污剂的提取物加到多缓冲液交换柱(PBE94，Pharmacia Biotech Inc.)，交换柱用25mM的Tris-缓冲液(pH8.5)平衡和洗脱。收集活性最高的洗脱峰并用超滤法浓缩。然后上Sephadex C-1000柱并用25mM的Tris缓冲液(pH8.0)洗脱。收集活性峰值部分，浓缩后进行制备型等电聚焦电泳，电泳使用Pharmacia公司的含0.5％(v/v)Triton X-100和0.1％(w/v)的两性电解质(pH4-9范围，Serva公司产)的Ultrodex(Pharmacia)进行。电泳在10℃，400V进行一夜后，分离胶条并用水提取。等电点8.0的部分含有在SDS-PAGE电泳中表观分子量为39kDa的纯的几丁质三苷酶。等电点在7.2左右的部分含有混杂了其它蛋白的50kDa的几丁质三苷酶。
不纯的50kDa的几丁质三苷酶的完全纯化可以这样进行，将酶制剂与几丁质颗粒在4℃时于pH5.2的柠檬酸/磷酸缓冲液中保温，稍后用含4M氯化钠的同种缓冲液在室温下洗脱。污染物将不会结合，或用含0.1M的氯化钠和0.5％(v/v)的Triton X-100的冰预冷的磷酸缓冲液洗涤几丁质颗粒将其完全除去。
同样的分离方法可以用来从几丁质三苷酶cDNA转染的培养细胞的培养基中分离重组几丁质三苷酶(几丁质酶)。
纯化的39kDa和50kDa的重组几丁质三苷酶的比活性和纯化的组织中的酶是一样的，即，在前述条件下，使用人工合成的4-甲基伞形酰-几丁质三苷作为底物，其活性为6-6.5mmol底物水解/mg蛋白×小时。
实施例4
几丁质的降解
纯化的50kDa和39kDa的组织几丁质三苷酶，以及纯化的重组技术生产的39kDa和50kDa的几丁质三苷酶，都能水解4-甲基伞形酰-几丁质三苷和4-甲基伞形酰-几丁质二苷。对几丁质二苷的活性和对几丁质三苷的活性的比为大约0.7。而且，对硝基苯-几丁质三苷和对硝基苯-几丁质二苷也能够被有效水解。
几丁质苯胺蓝(Sigma)溶于pH5.2，终浓度为10mg/ml的柠檬酸/磷酸缓冲液。用它来检测几丁质酶的活性。测550nm波长下的吸光确定可溶性苯胺蓝的释放来检测几丁质的降解(18)。用Sigma公司的源于粘质沙雷氏菌的几丁质作为对照。人几丁质三苷酶的对于4-甲基伞形酰-几丁质三苷的水解活性与细菌几丁质酶的活性作了比较，见文献18。
人几丁质三苷酶对溶壁微球菌的细胞壁悬液未测到明显活性，说明此酶缺少溶菌酶活性。
实施例5
为了试验人几丁质三苷酶能否发挥抗真菌作用，在覆有一层Cellophane膜的平板(含麦芽提取物，蛋白胨，葡萄糖和琼脂)上培养含几丁质真菌(大毛霉)，覆盖膜是为了防止菌丝破坏平板琼脂表面(见参考文献16)。切下个别的扇区，在显微镜下计数。纯化的几丁质酶50和几丁质酶39对0.5M氯化钠透析。将含酶溶液的样品和0.15M氯化钠加到菌丝尖部。显微镜分析表明，酶的使用立即中止了菌丝的生长，形态也发生了变形。用氯化钠则没有这种效果。即使是用的酶的浓度只有0.005mg/ml这么少，也检测到了它对菌丝生长的负效应。
附图说明：
图1.chi.50 cDNA克隆的核苷酸序列及相应蛋白质的推测氨基酸序列。
下划线的是疏水性信号肽(氨基酸1-21)。与几丁质酶家族9个成员中的至少6个相同的几丁质三苷酶的氨基酸用黑体字印出。除了从苜蓿银纹夜蛾病毒和Nicotiana tabacum中得到的几丁质酶之外，所用的几丁质酶家族的9个成员列于图4的说明中。
图2.chi.39 cDNA克隆的核苷酸序列及相应蛋白质的推测氨基酸序列。
下划线的是疏水性信号肽(氨基酸1-21)。
图3.在巨噬细胞中产生的不同几丁质酶异构体的图示。
由于拼接方式的不同，产生了两种不同的mRNA，翻译成表观分子量为39kDa和50kDa的几丁质三苷酶蛋白质。然而，有些酶可能直接进入到溶酶体或是通过内吞到达那里。在溶酶体中，在C端可能发生另外的裂解过程。产生大约38-39kDa的形式。这两种前体(39-50kDa)能用这种方式成为同一种溶酶体内的形式。不能排除50kDa几丁质三苷酶中的C-端含有O-连接的聚糖。39kDa的前体和溶酶体中的几丁质三苷酶则不含聚糖。
图4.在某些几丁质酶蛋白家族成员中推测的活性中心区域的序列对比
这些蛋白质包括：人几丁质三苷酶；来源于苜蓿银纹夜蛾病毒的几丁质酶(GenBank L22858)；来源于烟草角虫Manduca sexta的几丁质酶(GenBank U02270)；来源于线虫Brugia malayi的内源几丁质酶(GenBank M73689)；一种人输卵管糖蛋白(GenBankU09550)；HCgp-39，一种由人软骨细胞和滑液细胞产生的糖蛋白(GenBank M80927)；YM-1，一种被激活的小鼠巨噬细胞中的分泌性蛋白(Pir S27879)；一种源于真菌Aphanocladium album的几丁质酶(SwissPort P32470)；一种源于丝状真菌Trichoderma harzianum的几丁质酶(GenBank L14614)；源于原核环状芽孢杆菌的几丁质酶Al(SwissPort P20533)；以及从植物Nicotiana tabacum中得到的V类几丁质酶(GenBank X77110)。与几丁质三苷酶相同的残基用阴文字体给出。蛋白HCgp-39和YM-1预计为是不能裂解几丁质的。
图5.从脾脏中纯化的39和50kDa几丁质酶以及转染的COS细胞生产的39和50kDa的酶的免疫滴定。
含有纯化的39kDa脾脏几丁质三苷酶，或是由chi.50 cDNA转染的COS细胞生产的50kDa几丁质酶，或由chi.39 cDNA转染的COS细胞生产的39kDa的几丁质酶的制剂，与不同量的兔(抗人脾脏几丁质三苷酶)抗血清在室温、磷酸盐缓冲液中保温1小时。
抗体与几丁质三苷酶的结合引起酶活性的丧失。将酶制剂与抗血清保温后的残留酶活力可以通过测定其对底物4-甲基伞形酰-几丁质三苷的活性来确定(18)。不同几丁质三苷酶的免疫滴定曲线的相似性表明在单位抗原酶活方面这些酶是相同的。
参考文献
1、免疫学(第3版；编辑：Roitt，I.，Brostoff，J.，Male，D.)(1993)，Mosby，伦敦
2、Cohen，E.(1993)，昆虫生物化学生理杂志.22，245-261，几丁质合成以及作为杀虫剂靶的降解。
3、Mulisch，M.(1993)，Eur.J.Protistol.29，1-18，原生生物中的几丁质，合成，分布及沉积。
4、Bulawa，C.E.(1993)，微生物年度综述47，505-534，真菌中几丁质合成的遗传与分子生物学。
5、Flach，J.，Pilet，P.-E.，Jolles，P.(1992)，Experienta48，701-716.几丁质酶研究新进展。
6、Henrissat，B.(1991)，生物化学杂志280，309-3 16，根据氨基酸序列相似性的糖基水解酶的分类。
7、Coulson，A.F.W.(1994)，FEBS通讯354，41-44，几丁质酶8家族的假想结构，narbonin的一种可能功能
8、Perrakis，A.，Tews，I.，Dauter，Z.，Oppennem，A.B.，Chet，I.，Wilson，K.S.，Vorgias，C.E.(1994)，结构2，1169-1189.一种细菌几丁质酶的2.3A的晶体结构
9、Wansborough-Jones，M.N.，Wright，S.G.，McManus，T.J.，感染性、热带性和寄生虫病(第12章)，《药物学》(Souhami，R.l.，Moxham，J.编辑)(1990)，Churchill Livingstone，伦敦
10、Shahabuddin，M.，Kaslow，D.C.(1994)，寄生虫学实验79，85-88.疟原虫：寄生虫几丁质酶以及它在疾病传播中的作用。
11、Nussenzweig，R.S.，Long，C.A.(1994)，Science265，1381-1383，疟疾疫苗：多重靶
12、Fuhrman，J.A.，Lane，W.S.，Smith，R.F.，Piessens，W.F.，Perler，F.B.(1992)，美国科学院院刊89，1548-1552.
13、Raghavan，N.，Freedman，D.O.，FItzgerald，P.C.，Unnasch，T.R.，Ottesen，E.A.，Nutman，T.B.(1994)，感染和免疫62，1901-1908，源于Wucheria bancrofti的可能的保护性类几丁质酶重组抗原的克隆和鉴定。
14、Sahai，A.S.，Manochoa，M.S.(1993)，FEMS微生物学综述11，317-338.真菌和植物中的几丁质酶：它们在形态发生和宿主-寄生虫相互作用中的参与。
15、Shapira，R.，Ordentlich，A.，Chet，I.，Oppenheim，A.B.(1989)，植物病理学79，1246-1249，用大肠杆菌中克隆的DNA表达的几丁质酶控制植物疾病。
16、Manson，F.D.C.，Fletcher，T.C.，Gooday，G..W.(1992)，鱼类生物学杂志40，919-927.大比目鱼血液中几丁质裂解酶的定位，及其在防御中的可能作用。
17、Hollak，C.E.M.，van Weely，S.，van Oers，M.H.J.，Aerts，J.M.F.G.(1994)，临床研究杂志93，1288-1292，血浆几丁质三苷酶活性的显著上升，Gamcher症的一种新标记。
18、Renkema，G.H.，Boot，R.G.，Muijsers，A.O.，Donker-Koopman，W.E.，Aerts，J.M.F.G(1995)，生物化学杂志270，2198-2202.人类几丁质三苷酶，一种几丁质酶家族新成员的纯化与鉴定。
19、Hakala，B.E.，White，C.，Reclies，A.D.(1993)，生物化学杂志268，25083-25810，人软骨gp-39，关节软骨细胞和滑膜细胞的主要分泌产物，其是几丁质酶蛋白家族的哺乳动物成员。
20、Miyazaki，S.，Ishii，K.，Nadai，T(1981)，化学药物学通报29，3067-3069，几丁质和脱乙酰几丁质作为药物载体的应用。
21、Lopata，M.A.，Cleveland，D.W.，Sollner-Webb，B.(1984)，核酸研究12，5701-5707。
序列表(1)一般信息：(i)申请人：
(A)名称：阿姆斯特丹大学
(B)街道：Spui21
(C)城市：阿姆斯特丹
(D)州：Noord-Holland
(E)国家：荷兰
(F)邮政编码：1012WX
(A)姓名：约翰内斯·马丽亚·弗朗西斯库斯·赫拉尔杜斯·阿尔特斯
(B)街道：Sandbergstraat3
(C)城市：Abcoude
(D)州：Utrecht
(E)国家：荷兰
(F)邮政编码：1391EJ(ii)发明名称：人几丁质酶，其重组生产，其分解几丁质的用途及其在治疗和预防感染性疾病中的应用(iii)序列数目：16(iv)计算机可读形式
(A)媒介类型：软盘
(B)计算机：IBM PC兼容机
(C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS
(D)软件：PatentIn Release#1.0，#1.30版(EPO)(v)本申请数据
申请号：US08/486,839(2)SEQ ID NO：1的信息(i)序列特征：
(A)长度：20个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：其它核酸(iii)假设：无(xi)序列描述：SEQ ID NO：1TGYTAYTTYA CNAAYTGGGC 20(2)SEQ ID NO：2的信息(i)序列特征：
(A)长度：24个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：其它核酸(iii)假设：无(ix)特征
(A)名称/关键：misc-特征
(B)位置：6..15
(D)其它信息：/产物＝“N代表肌苷”(xi)序列描述：SEQ ID NO：2CCARTCNARR TYNACNCCRT CRAA 24(2)SEQ ID NO：3的信息(i)序列特征：
(A)长度：1643个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：cDNA(iii)假设：无
(xi)序列描述：SEQ ID NO：3CTGAGCTGCA TCATGGTGCG GTCTGTGGCC TGGGCAGGTT TCATGGTCCT GCTGATGATC 60CCATGGGGCT CTGCTCCAAA ACTGGTCTGC TACTTCACCA ACTGGGCCCA GTACAGACAG 120GGGGAGGCTC GCTTCCTGCC CAAGGACTTG GACCCCAGCC TTTGCACCCA CCTCATCTAC 180GCCTTCGCTG GCATGACCAA CCACCAGCTG AGCACCACTG AGTGGAATGA CGAGACTCTC 240TACCAGGAGT TCAATGGCCT GAAGAAGATG AATCCCAAGC TGAAGACCCT GTTAGCCATC 300GGAGGCTGGA ATTTCGGCAC TCAGAAGTTC ACAGATATGG TAGCCACGGC CAACAACCGT 360CAGACCTTTG TCAACTCGGC CATCAGGTTT CTGCGCAAAT ACAGCTTTGA CGGCCTTGAC 420CTTGACTGGG AGTACCCAGG AAGCCAGGGG AGCCCTGCCG TAGACAAGGA GCGCTTCACA 480ACCCTGGTAC AGGACTTGGC CAATGCCTTC CAGCAGGAAG CCCAGACCTC AGGGAAGGAA 540CGCCTTCTTC TGAGTGCAGC GGTTCCAGCT GGGCAGACCT ATGTGGATGC TGGATACGAG 600GTGGACAAAA TCGCCCAGAA CCTGGATTTT GTCAACCTTA TGGCCTACGA CTTCCATGGC 660TCTTGGGAGA AGGTCACGGG ACATAACAGC CCCCTCTACA AGAGGCAAGA AGAGAGTGGT 720GCAGCAGCCA GCCTCAACGT GGATGCTGCT GTGCAACAGT GGCTGCAGAA GGGGACCCCT 780GCCAGCAAGC TGATCCTTGG CATGCCTACC TACGGACGCT CCTTCACACT GGCCTCCTCA 840TCAGACACCA GAGTGGGGGC CCCAGCCACA GGGTCTGGCA CTCCAGGCCC CTTCACCAAG 900GAAGGAGGGA TGCTGGCCTA CTATGAAGTC TGCTCCTGGA AGGGGGCCAC CAAACAGAGA 960ATCCAGGATC AGAAGGTGCC CTACATCTTC CGGGACAACC AGTGGGTGGG CTTTGATGAT 1020GTGGAGAGCT TCAAAACCAA GGTCAGCTAT CTGAAGCAGA AGGGACTGGG CGGGGCCATG 1080GTCTGGGCAC TGGACTTAGA TGACTTTGCC GGCTTCTCCT GCAACCAGGG CCGATACCCC 1140CTCATCCAGA CGCTACGGCA GGAACTGAGT CTTCCATACT TGCCTTCAGG CACCCCAGAG 1200CTTGAAGTTC CAAAACCAGG TCAGCCCTCT GAACCTGAGC ATGGCCCCAG CCCTGGACAA 1260GACACGTTCT GCCAGGGCAA AGCTGATGGG CTCTATCCCA ATCCTCGGGA ACGGTCCAGC l320TTCTACAGCT GTGCAGCGGG GCGGCTGTTC CAGCAAAGCT GCCCGACAGG CCTGGTGTTC 1380AGCAACTCCT GCAAATGCTG CACCTGGAAT TGAGTCGTAA AGCCCCTCCA GTCCAGCTTT 1440GAGGCTGGGC CTAGGATCAC TCTACAGCCT GCCTCCTGGG TTTTCCTGGG GGCCGCAATC 1500TGGCTCCTGC AGGCCTTTCT GTGGTCTTCC TTTATCCAGG CTTTCTGCTC TCAGCCTTGC 1560CTTCCTTTTT TCTGGGTCTC CTGGGCTGCC CCTTTCACTT GCAAAATAAA TCTTTGGTTT 1620GTGCCCCTCT TCAAAAAAAA AAA 1643(2)SEQ ID NO：4的信息(i)序列特征：
(A)长度：466个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：蛋白质(iii)假设：无(xi)序列描述：SEQ ID NO：4Met Val Arg Ser Val Ala Trp Ala Gly Phe Met Val Leu Leu Met Ile1 5 10 15Pro Trp Gly Ser Ala Ala Lys Leu Val Cys Tyr Phe Thr Asn Trp Ala
20 25 30Gln Tyr Arg Gln Gly Glu Ala Arg Phe Leu Pro Lys Asp Leu Asp Pro
35 40 45Ser Leu Cys Thr His Leu Ile Tyr Ala Phe Ala Gly Met Thr Asn His
50 55 60Gln Leu Ser Thr Thr Glu Trp Asn Asp Glu Thr Leu Tyr Gln Glu Phe65 70 75 80Asn Gly Leu Lys Lys Met Asn Pro Lys Leu Lys Thr Leu Leu Ala Ile
85 90 95Gly Gly Trp Asn Phe Gly Thr Gln Lys Phe Thr Asp Met Val Ala Thr
100 105 110Ala Asn Asn Arg Gln Thr Phe Val Asn Ser Ala Ile Arg Phe Leu Arg
115 120 125Lys Tyr Ser Phe Asp Gly Leu Asp Leu Asp Trp Glu Tyr Pro Gly Ser
130 135 140Gln Gly Ser Pro Ala Val Asp Lys Glu Arg Phe Thr Thr Leu Val Gln145 150 155 160Asp Leu Ala Asn Ala Phe Gln Gln Glu Ala Gln Thr Ser Gly Lys Glu
165 170 175Arg Leu Leu Leu Ser Ala Ala Val Pro Ala Gly Gln Thr Tyr Val Asp
180 185 190Ala Gly Tyr Glu Val Asp Lys Ile Ala Gln Asn Leu Asp Phe Val Asn
195 200 205Leu Met Ala Tyr Asp Phe His Gly Ser Trp Glu Lys Val Thr Gly His
210 215 220Asn Ser Pro Leu Tyr Lys Arg Gln Glu Glu Ser Gly Ala Ala Ala Ser225 230 235 240Leu Asn Val Asp Ala Ala Val Gln Gln Trp Leu Gln Lys Gly Thr Pro
245 250 255
Ala Ser Lys Leu Ile Leu Gly Met Pro Thr Tyr Gly Arg Ser Phe Thr
260 265 270
Leu Ala Ser Ser Ser Asp Thr Arg Val Gly Ala Pro Ala Thr Gly Ser
275 280 285
Gly Thr Pro Gly Pro Phe Thr Lys Glu Gly Gly Met Lau Ala Tyr Tyr
290 295 300
Glu Val Cys Ser Trp Lys Gly Ala Thr Lys Gln Arg Ile Gln Asp Gln
205 310 315 320
Lys Val Pro Tyr Ile Phe Arg Asp Asn Gln Trp Val Gly Phe Asp Asp
225 330 335
Val Glu Ser Phe Lys Thr Lys Val Ser Tyr Leu Lys Gln Lys Gly Leu
340 345 350
Gly Gly Ala Met Val Trp Ala Leu Asp Leu Asp Asp Phe Ala Gly Phe
355 360 365
Ser Cys Asn Gln Gly Arg Tyr Pro Leu Ile Gln Thr Leu Arg Gln Glu
370 375 380
Leu Ser Leu Pro Tyr Leu Pro Ser Gly Thr Pro Glu Leu Glu Val Pro
385 390 395 400
Lys Pro Gly Gln Pro Ser Glu Pro Glu His Gly Pro Ser Pro Gly Gln
405 410 415
Asp Thr Phe Cys G1n Gly Lys Ala Asp Gly Leu Tyr Pro Asn Pro Arg
420 425 430
Glu Arg Ser Ser Phe Tyr Ser Cys Ala Ala Gly Arg Leu Phe Gln Gln
435 440 445
Ser Cys Pro Thr Gly Leu Val Phe Ser Asn Ser Cys Lys Cys Cys Thr
450 455 460
Trp Asn
465(2)SEQ ID NO：5的信息(i)序列特征：
(A)长度：1713个碱基对
(B)类型：核酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：cDNA(iii)假设：无(xi)序列描述：SEQ ID NO：5CTGAGCTGCA TCATGGTGCG GTCTGTGGCC TGGGCAGGTT TCATGGTCCT GCTGATGATC 60CCATGGGGCT CTGCTCCAAA ACTGGTCTGC TACTTCACCA ACTGGGCCCA GTACAGACAG 120GGGGAGGCTC GCTTCCTGCC CAAGGACTTG GACCCCAGCC TTTGCACCCA CCTCATCTAC 180GCCTTCGCTG GCATGACCAA CCACCAGCTG AGCACCACTG AGTGGAATGA CGAGACTCTC 240TACCAGGAGT TCAATGGCCT GAAGAAGATG AATCCCAAGC TGAAGACCCT GTTAGCCATC 300GGAGGCTGGA ATTTCGGCAC TCAGAAGTTC ACAGATATGG TAGCCACGGC CAACAACCGT 360CAGACCTTTG TCAACTCGGC CATCAGGTTT CTGCGCAAAT ACAGCTTTGA CGGCCTTGAC 420CTTGACTGGG AGTACCCAGG AAGCCAGGGG AGCCCTGCCG TAGACAAGGA GCGCTTCACA 480ACCCTGGTAC AGGACTTGGC CAATGCCTTC CAGCAGGAAG CCCAGACCTC AGGGAAGGAA 540CGCCTTCTTC TGAGTGCAGC GGTTCCAGCT GGGCAGACCT ATGTGGATGC TGGATACGAG 600GTGGACAAAA TCGCCCAGAA CCTGGATTTT GTCAAACTTA TGGCCTACGA CTTCCATGGC 660TCTTGGGAGA AGGTCACGGG ACATAACAGC CCCCTCTACA AGAGGCAAGA AGAGAGTGGT 720GCAGCAGCCA GCCTCAACGT GGATGCTGCT GTGCAACAGT GGCTGCAGAA GGGGACCCCT 780GCCAGCAAGC TGATCTTGG CATGCCTACC TACGGACGCT CCTTCACACT GGCCTCCTCA a40TCAGACACCA GAGTGGGGGC CCCAGCCACA GGGTCTGGCA CTCCAGGCCC CTTCACCAAG 900GAAGGAGGGA TGCTGGCCTA CTATGAAGTC TGCTCCTGGA AGGGGGCCAC CAAACAGAGA 960ATCCAGGATC AGAAGGTGCC CTACATCTTC CGGGACAACC AGTGGGTGGG CTTTGATGAT 1020GTGGAGAGCT TCAAAACCAA GGTCAGCTAT CTGAAGCAGA AGGGACTGGG CGGGGCCATG 1080GTCTGGGCAC TGGACTTAGA TGACTTTGCC GGCTTCTCCT GCAACCAGGG CCGATACCCC 1140CTCATCCAGA CGCTACGGCA GGAACTGAAT GGGTAAAGCC TTAACTGCCT GTCACATGTG 1200AGGCCAGGTG TTGCCTGTGG CACTGTGCTT CAGCTGTAGG TCTTCCATAC TTGCCTTCAG 1260GCACCCCAGA GCTTGAAGTT CCAAAACCAG GTCAGCCCTC TGAACCTGAG CATGGCCCAA 1320GCCCTGGACA AGACACGTTC TGCCAGGGCA AAGCTGATGG GCTCCATCCC AATCCTCGGG 1380AACGGTCCAG CTTCTACAGC TGTGCAGCGG GGCGGCTGTT CCAGCAAAGC TGCCCGACAG 1440GCCTGGTGTT CAGCAACTCC TGCAAATGCT GCACCTGGAA TTGAGTCGTA AAGCCCCTCC 1500AGTCCAGCTT TGAGGCTGGG CCCAGGATCA CTCTACAGCC TGCCTCCTGG GTTTTCCTGG 1560GGGCCCCAAT CTGGCTCCTG CAGGCCTTTC TGTGGTCTTC CTTTATCCAG GCTTTCTGCT 1620CTCAGCCTTG CCTTCCTTTT TTCTGGGTCT CCTGGGCTGC CCCTTTCACT TGCAAAATAA 1680ATCTTTGGTT TGTGCCCCTC AAAAAAAAAA AAA 1713(2)SEQ ID NO：6的信息(i)序列特征：
(A)长度：387个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：蛋白质(iii)假设：无(xi)序列描述：SEQ ID NO：6Met Val Arg Ser Val Ala Trp Ala Gly Phe Met Val Leu Leu Met Ile1 5 10 15Pro Trp Gly Ser Ala Ala Lys Leu Val Cys Tyr Phe Thr Asn Trp Ala
20 25 30Gln Tyr Arg Gln Gly Glu Ala Arg Phe Leu Pro Lys Asp Leu Asp Pro
35 40 45Ser Leu Cys Thr His Leu Ile Tyr Ala Phe Ala Gly Met Thr Asn His
50 55 60Gln Leu Ser Thr Thr Glu Trp Asn Asp Glu Thr Leu Tyr Gln Glu Phe65 70 75 80Asn Gly Leu Lys Lys Met Asn Pro Lys Leu Lys Thr Leu Leu Ala Ile
85 90 95Gly Gly Trp Asn Phe Gly Thr Gln Lys Phe Thr Asp Met Val Ala Thr
100 105 110Ala Asn Asn Arg Gln Thr Phe Val Asn Ser Ala Ile Arg Phe Leu Arg
115 120 125Lys Tyr Ser Phe Asp Gly Leu Asp Leu Asp Trp Glu Tyr Pro Gly Ser
130 135 140Gln Gly Ser Pro Ala Val Asp Lys Glu Arg Phe Thr Thr Leu Val Gln145 150 155 160Asp Leu Ala Asn Ala Phe Gln Gln Glu Ala Gln Thr Ser Gly Lys Glu
165 170 175Arg Leu Leu Leu Ser Ala Ala Val Pro Ala Gly Gln Thr Tyr Val Asp
180 185 190Ala Gly Tyr Glu Val Asp Lys Ile Ala Gln Asn Leu Asp Phe Val Asn
195 200 205Leu Met Ala Tyr Asp Phe His Gly Ser Trp Glu Lys Val Thr Gly His
210 215 220Asn Ser Pro Leu Tyr Lys Arg Gln Glu Glu Ser Gly Ala Ala Ala Ser225 230 235 240Leu Asn Val Asp Ala Ala Val Gln Gln Trp Leu Gln Lys Gly Thr Pro
245 250 255Ala Ser Lys Leu Ile Leu Gly Met Pro Thr Tyr Gly Arg Ser Phe Thr
260 265 270Leu Ala Ser Ser Ser Asp Thr Arg Val Gly Ala Pro Ala Thr Gly Ser
275 280 285Gly Thr Pro Gly Pro Phe Thr Lys Glu Gly Gly Met Leu Ala Tyr Tyr
290 295 300Glu Val Cys Ser Trp Lys Gly Ala Thr Lys Gln Arg Ile Gln Asp Gln305 310 315 320Lys Val Pro Tyr Ile Phe Arg Asp Asn Gln Trp Val Gly Phe Asp Asp
325 330 335Val Glu Ser Phe Lys Thr Lys Val Ser Tyr Leu Lys Gln Lys Gly Leu
340 345 350Gly Gly Ala Met Val Trp Ala Leu Asp Leu Asp Asp Phe Ala Gly Phe
355 360 365Ser Cys Asn Gln Gly Arg Tyr Pro Leu Ile Gln Thr Leu Arg Gln Glu
370 375 380Leu Asn Gly385(2)SEQ ID NO：7的信息(i)序列特征：
(A)长度：11个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：蛋白质(iii)假设：无(xi)序列描述：SEQ ID NO：7Phe Asp Gly Leu Asp Leu Asp Trp Glu Tyr Pro1 5 10(2)SEQ ID NO：8的信息(i)序列特征：
(A)长度：11个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：蛋白质(iii)假设：无(xi)序列描述：SEQ ID NO：8 Phe Asp Gly Val Asp Ile Asp Trp Glu Phe Pro1 5 10(2)SEQ ID NO：9的信息(i)序列特征：
(A)长度：11个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：蛋白质(iii)假设：无(xi)序列描述：SEQ ID NO：9Phe Asp Gly Phe Asp Leu Asp Trp Glu Tyr Pro1 5 10(2)SEQ ID NO：10的信息(i)序列特征：
(A)长度：11个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：蛋白质(iii)假设：无(xi)序列描述：SEQ ID NO：10Phe Asp Gly Leu Asp Leu Phe Phe Leu Tyr Pro1 5 10(2)SEQ ID NO：11的信息(i)序列特征：
(A)长度：11个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：蛋白质(iii)假设：无(xi)序列描述：SEQ ID NO：11Phe Asp Gly Leu Asp Leu Ala Trp Leu Tyr Pro1 5 10(2)SEQ ID NO：12的信息(i)序列特征：
(A)长度：11个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：蛋白质(iii)假设：无(xi)序列描述：SEQ ID NO：12Phe Asp Gly Leu Asn Leu Asp Trp Gln Tyr Pro1 5 10(2)SEQ ID NO：13的信息(i)序列特征：
(A)长度：11个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：蛋白质(iii)假设：无(xi)序列描述：SEQ ID NO：13Phe Asp Gly Ile Asp Ile Asp Trp Glu Tyr Pro1 5 10(2)SEQ ID NO：14的信息(i)序列特征：
(A)长度：11个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：蛋白质(iii)假设：无(xi)序列描述：SEQ ID NO：14Phe Asp Gly Ile Asp Val Asp Trp Glu Tyr Pro1 5 10(2)SEQ ID NO：15的信息(i)序列特征：
(A)长度：11个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：蛋白质(iii)假设：无(xi)序列描述：SEQ ID NO：15Phe Asp Gly Val Asp Leu Asp Trp Glu Tyr Pro1 5 10(2)SEQ ID NO：16的信息(i)序列特征：
(A)长度：11个氨基酸
(B)类型：氨基酸
(C)链性：未知
(D)拓扑结构：未知(ii)分子类型：蛋白质(iii)假设：无(xi)序列描述：SEQ ID NO：16Phe His Gly Leu Asp Leu Asp Trp Glu Tyr Pro1 5 10
Claims (31)
1.一种基本上分离或纯化的几丁质酶，所说的几丁质酶是人几丁质酶，具有与图1中所示的氨基酸序列或图2中所示的氨基酸序列基本上相应的氨基酸序列，或者是具有基本上相似的几丁质水解活性的所说人几丁质酶的修饰形式。
2.权利要求1的几丁质酶，其用基因工程化宿主细胞生产并从所说的宿主细胞或培养所说宿主细胞的培养基中分离出来，其中该酶的氨基酸序列是由与图1中的核苷酸序列或与图2中的核苷酸序列基本上相应的核苷酸序列所编码的。
3.权利要求1的几丁质酶，具有基本上与图1中所示的氨基酸序列相应的氨基酸序列并且分子量大约为50kDa。
4.权利要求1的几丁质酶，具有基本上与图2中所示的氨基酸序列相应的氨基酸序列并且分子量大约为39kDa。
5.一种药物组合物，包括权利要求1-4中任一项所述的几丁质酶以及一种药学上可接受的载体或稀释剂。
6.一种用于人类个体中抗含几丁质病原体感染的治疗或预防用的药物组合物，包括治疗或预防有效量的权利要求1-4中任一项所述的几丁质酶以及一种药学上可接受的载体或稀释剂。
7.权利要求6的药物组合物，进一步包括治疗或预防有效量的人类β-1，3-葡聚糖酶。
8.一种非药物组合物，包括权利要求1-4中任一项所述的几丁质酶以及一种载体或稀释剂。
9.权利要求8的组合物，它是一种培养细胞的培养基。
10.权利要求8的组合物，它是一种培养人类细胞的培养基。
11.权利要求8的组合物，它是一种化妆品如体肤露，牙用品如牙膏，漱口水，或食品如牛奶，奶酪或其它乳制品。
12.一种几丁质基制品，它包括几丁质水解量的权利要求1-4中任一项所述的几丁质酶。
13.权利要求12的几丁质基制品，它是一种控制药物释放的含有药物的药物载体或植入物。
14.权利要求12的几丁质基制品，它是一种起暂时功能的植入物。
15.一种用于人类个体中抗含几丁质病原体感染的治疗或预防方法，包括给予所说的人类个体权利要求5-7中任一项所述的药物组合物。
16.一种制备人几丁质酶的方法，所述的酶具有与图1中所示的氨基酸序列或图2中所示的氨基酸序列基本上相应的氨基酸序列，或者是具有基本上相似的几丁质水解活性的所说人几丁质酶的修饰形式，所述方法包括培养能够生产所说的人几丁质酶或其修饰形式的基团工程化宿主或宿主细胞，以及从所说的宿主或宿主细胞中或从培养所说宿主或宿主细胞的培养基中分离所生产的几丁质酶。
17.权利要求16的方法，其中所说的几丁质酶的氨基酸序列是由与图1的核苷酸序列或与图2的核苷酸序列基本上相应的核苷酸序列所编码的。
18.一种能够生产人几丁质酶的基因工程化宿主细胞，所说的几丁质酶具有与图1中所示的氨基酸序列或图2中所示的氨基酸序列基本上相应的氨基酸序列，或者是具有基本上相似的几丁质水解活性的所说人几丁质酶的修饰形式。
19.一种重组核酸，包括一种编码与图1中所示的氨基酸序列或图2中所示的氨基酸序列基本上相应的氨基酸序列的核苷酸序列，或是互补于该核苷酸序列的核苷酸序列。
20.权利要求19的重组核酸，其中所说的核苷酸序列基本上相应于，或基本上互补于，图1中所示的核苷酸序列或图2中所示的核苷酸序列。
21.一种至少有8个核苷酸的寡核苷酸，具有基本上相应于或基本上互补于图1中所示的核苷酸序列或图2中所示的核苷酸序列的核苷酸序列，并且能够在严格杂交条件下与编码权利要求1-4中任一项所述的人几丁质酶的核酸通过杂交结合。
22.一种至少含有8个氨基酸残基的肽，含有源于图1中所示的氨基酸序列或图2中所示的氨基酸序列的氨基酸序列并且代表或模拟权利要求1-4中任一项所述的人几丁质酶的一个抗原决定簇。
23.权利要求22的肽，具有与图1中所示的氨基酸序列或图2中所示的氨基酸序列相应的氨基酸序列且具有抗原性。
24.一种能够与权利要求1-4中任一项所述的人几丁质酶结合的抗体。
25.权利要求24的抗体，其是一种单克隆抗体。
26.一种诊断试剂盒，包括权利要求24或25的抗体，以及检测抗原或抗体的诊断试剂盒的常规组分。
27.一种诊断试剂盒，包括权利要求22或23的肽，以及检测抗原或抗体的诊断试剂盒的常规组分。
28.一种诊断试剂盒，包括权利要求21的寡核苷酸，以及检测核酸的诊断试剂盒的常规组分。
29.一种诊断试剂盒，包括权利要求19或20的重组核酸，以及检测核酸的试剂盒的常规组分。
30.一种诊断试剂盒，包括权利要求1-4中任一项所述的人几丁质酶，以及检测抗原或抗体的试剂盒的常规组分。
31.一种分解几丁质的方法，包括使所说的几丁质与权利要求1-4中任一项所述的人几丁质酶在使几丁质水解的条件下接触。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/486,839 US5928928A (en) | 1995-06-07 | 1995-06-07 | Human chitinase, its recombinant production, its use for decomposing chitin, its use in therapy or prophylaxis against infection diseases |
| US08/486,839 | 1995-06-07 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1193352A true CN1193352A (zh) | 1998-09-16 |
Family
ID=23933430
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN96195511A Pending CN1193352A (zh) | 1995-06-07 | 1996-06-06 | 人几丁质酶,其重组生产,其分解几丁质的用途及其在治疗和预防感染性疾病中的应用 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US5928928A (zh) |
| EP (1) | EP0832249A2 (zh) |
| JP (1) | JPH11508129A (zh) |
| CN (1) | CN1193352A (zh) |
| AU (1) | AU722434B2 (zh) |
| BR (1) | BR9609233A (zh) |
| CA (1) | CA2220714A1 (zh) |
| WO (1) | WO1996040940A2 (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101775405B (zh) * | 2009-08-14 | 2012-04-25 | 杨霞 | 一种制备重组几丁质酶的方法 |
| CN113164562A (zh) * | 2018-10-19 | 2021-07-23 | 安特卫普大学 | 双功能肽聚糖/几丁质水解酶的抗致病活性 |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5928928A (en) * | 1995-06-07 | 1999-07-27 | Universiteit Van Amsterdam | Human chitinase, its recombinant production, its use for decomposing chitin, its use in therapy or prophylaxis against infection diseases |
| EP0805206A3 (en) * | 1996-05-03 | 1999-09-15 | Smithkline Beecham Corporation | Human cartilage glycoprotein |
| US20030017570A1 (en) * | 1996-06-14 | 2003-01-23 | Patrick W. Gray | Chitinase materials and methods |
| US6200951B1 (en) * | 1998-03-12 | 2001-03-13 | Icos Corporation | Chitinase chitin-binding fragments |
| US6770468B1 (en) * | 1999-09-14 | 2004-08-03 | Genzyme Glycobiology Research Institute, Inc. | Phosphodiester-α-GlcNAcase of the lysosomal targeting pathway |
| US6642038B1 (en) * | 1999-09-14 | 2003-11-04 | Genzyme Glycobiology Research Institute, Inc. | GlcNAc phosphotransferase of the lysosomal targeting pathway |
| AU7741000A (en) * | 1999-09-30 | 2001-04-30 | Icos Corporation | Chitinase immunoglobulin fusion products |
| US6673351B1 (en) | 2001-03-16 | 2004-01-06 | Astralis, Llc | Compositions and methods for the treatment and clinical remission of psoriasis |
| US20040241168A1 (en) * | 2001-03-16 | 2004-12-02 | O'daly Jose A. | Compositions and methods for the treatment and clinical remission of psoriasis |
| US6800472B2 (en) * | 2001-12-21 | 2004-10-05 | Genzyme Glycobiology Research Institute, Inc. | Expression of lysosomal hydrolase in cells expressing pro-N-acetylglucosamine-1-phosphodiester α-N-acetyl glucosimanidase |
| US6905856B2 (en) * | 2001-12-21 | 2005-06-14 | Genzyme Glycobiology Research Institute, Inc. | Soluble GlcNAc phosphotransferase |
| US7632654B2 (en) * | 2002-04-29 | 2009-12-15 | Academisch Ziekenhuis Bij De Universiteit Van Amsterdam | Means and methods for detecting endoglycosidase activity |
| US7220695B2 (en) * | 2004-01-07 | 2007-05-22 | Exxonmobil Chemical Patents Inc. | Supported activator |
| US7741417B2 (en) * | 2004-01-07 | 2010-06-22 | Exxonmobil Chemical Patents Inc. | Preparation of polymerization catalyst activators utilizing indole-modified silica supports |
| FR2908654B1 (fr) | 2006-11-20 | 2014-04-04 | Oreal | Utilisation cosmetique de proteines de type chitinase |
| EP2826462A1 (en) * | 2007-04-10 | 2015-01-21 | Saint Simeon Lda. | Novel compositions containing lysozyme and C-1/C-4 polysaccharides and use thereof in oral care, cosmetology and dermatology, contraception, urology and gynecology |
| US8022005B2 (en) | 2007-11-08 | 2011-09-20 | Exxonmobil Chemical Patents Inc. | Halogen substituted heterocyclic heteroatom containing ligands-alumoxane activation of metallocenes |
| US20110070601A1 (en) * | 2008-01-23 | 2011-03-24 | Rigshospitalet | Classification of individuals suffering from cardiovascular diseases according to survival prognoses as found by measuring the levels of biomarker ykl-40 |
| US20190300945A1 (en) | 2010-04-05 | 2019-10-03 | Prognosys Biosciences, Inc. | Spatially Encoded Biological Assays |
| DK2556171T3 (en) | 2010-04-05 | 2015-12-14 | Prognosys Biosciences Inc | Spatially CODED BIOLOGICAL ASSAYS |
| US10787701B2 (en) | 2010-04-05 | 2020-09-29 | Prognosys Biosciences, Inc. | Spatially encoded biological assays |
| WO2011135578A1 (en) | 2010-04-28 | 2011-11-03 | Chetan Balar | Composition comprising chitin and tinosporin for use in the treatment of viral diseases |
| GB201106254D0 (en) | 2011-04-13 | 2011-05-25 | Frisen Jonas | Method and product |
| WO2014140165A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-18 | Dsm Ip Assets B.V. | Cell wall deconstruction enzymes of paecilomyces byssochlamydoides and uses thereof |
| CN111662960B (zh) | 2013-06-25 | 2024-04-12 | 普罗格诺西斯生物科学公司 | 采用微流控装置的空间编码生物分析 |
| DK3901281T3 (da) | 2015-04-10 | 2023-01-23 | Spatial Transcriptomics Ab | Rumligt adskilt, multipleks nukleinsyreanalyse af biologiske prøver |
| CN112899257B (zh) * | 2020-12-07 | 2022-07-12 | 中国农业科学院生物技术研究所 | 嗜热几丁质酶Chi304突变体及其在降解几丁质中的应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5928928A (en) * | 1995-06-07 | 1999-07-27 | Universiteit Van Amsterdam | Human chitinase, its recombinant production, its use for decomposing chitin, its use in therapy or prophylaxis against infection diseases |
| US5843449A (en) * | 1996-03-25 | 1998-12-01 | Akzo Nobel N.V. | Proteins and novel peptides derived from autoantigen for use in immunotherapy of autoimmune diseases |
| US5811535A (en) * | 1996-08-09 | 1998-09-22 | Smithkline Beecham Corporation | Human cartilege gp39-like gene |
-
1995
- 1995-06-07 US US08/486,839 patent/US5928928A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-06-06 BR BR9609233-5A patent/BR9609233A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-06-06 JP JP9500324A patent/JPH11508129A/ja not_active Ceased
- 1996-06-06 WO PCT/NL1996/000225 patent/WO1996040940A2/en not_active Application Discontinuation
- 1996-06-06 CA CA002220714A patent/CA2220714A1/en not_active Abandoned
- 1996-06-06 CN CN96195511A patent/CN1193352A/zh active Pending
- 1996-06-06 AU AU59132/96A patent/AU722434B2/en not_active Ceased
- 1996-06-06 EP EP96916374A patent/EP0832249A2/en not_active Withdrawn
-
1998
- 1998-09-10 US US09/151,011 patent/US6057142A/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-18 US US09/156,856 patent/US6221591B1/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-06-30 US US09/343,623 patent/US6303118B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-10-15 US US09/977,827 patent/US6896884B2/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101775405B (zh) * | 2009-08-14 | 2012-04-25 | 杨霞 | 一种制备重组几丁质酶的方法 |
| CN113164562A (zh) * | 2018-10-19 | 2021-07-23 | 安特卫普大学 | 双功能肽聚糖/几丁质水解酶的抗致病活性 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US6057142A (en) | 2000-05-02 |
| AU5913296A (en) | 1996-12-30 |
| US5928928A (en) | 1999-07-27 |
| JPH11508129A (ja) | 1999-07-21 |
| US6896884B2 (en) | 2005-05-24 |
| WO1996040940A3 (en) | 1997-01-23 |
| AU722434B2 (en) | 2000-08-03 |
| US20020086008A1 (en) | 2002-07-04 |
| EP0832249A2 (en) | 1998-04-01 |
| WO1996040940A2 (en) | 1996-12-19 |
| US6221591B1 (en) | 2001-04-24 |
| US6303118B1 (en) | 2001-10-16 |
| BR9609233A (pt) | 1999-12-21 |
| CA2220714A1 (en) | 1996-12-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1193352A (zh) | 人几丁质酶,其重组生产,其分解几丁质的用途及其在治疗和预防感染性疾病中的应用 | |
| CN1298862C (zh) | 糖蛋白及其制备方法 | |
| KR101983572B1 (ko) | 만노스-1-포스포-6-만노스 결합의 캡핑제거 및 인산화 n-글리칸의 탈만노실이 가능한 만노시다제 및 당단백질의 활용을 통한 포유류 세포의 촉진방법 | |
| Bussink et al. | The biology of the Gaucher cell: the cradle of human chitinases | |
| CN1173745C (zh) | 化学修饰的蛋氨酸酶及其在抗蛋氨酸和抗高半胱氨酸的化学治疗中的应用 | |
| CN1150003C (zh) | 细胞凋亡诱导物 | |
| CN1392797A (zh) | 高甘露糖蛋白质和产生高甘露糖蛋白质的方法 | |
| CN1272886A (zh) | 编码具类肝素酶活性的多肽的多核苷酸及其在转导细胞中的表达 | |
| CN1944639A (zh) | 酶混合物 | |
| CN1875111A (zh) | 用植物培养生产高甘露糖蛋白 | |
| CN1817901A (zh) | 治疗性肽和方法 | |
| KR101979220B1 (ko) | 인산화된 n-글리칸들의 탈-만노실화 | |
| CN1357046A (zh) | 几丁质酶几丁质－结合片段 | |
| CN1379811A (zh) | 新型酵母变异体以及制备含哺乳动物型糖链的糖蛋白的方法 | |
| CN1236393A (zh) | 几丁质酶材料和方法 | |
| CN1237208A (zh) | 用于产朊假丝酵母转化的方法和材料 | |
| CN1093904A (zh) | 调节细胞分裂素活性的组合物 | |
| CN1088217A (zh) | 疫苗 | |
| CN1821409A (zh) | 一个源于梨孢菌的真菌致病力新基因MgKIN17及其用途 | |
| CN1665530A (zh) | 免疫原性组合物 | |
| CN1924001A (zh) | 用甲基营养酵母生产人热休克蛋白70的方法 | |
| CN1373801A (zh) | 新型隐球菌的葡糖醛木甘聚糖－o－乙酰水解酶及其用途 | |
| CN1526017A (zh) | 与利什曼原虫属寄生虫毒性相关的基因 | |
| CN1621411A (zh) | 一种用于治疗获得性免疫缺陷综合征的重组靶向融合蛋白 | |
| CN1904041A (zh) | 人重组磷脂酶d2及其制备方法和在药物制备中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |