CN1189478C - 新的环状化合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及新的由式(I)代表的气丝菌素(其中R¹、R²和R³如权利要求书所定义)，及其药学上可接受的盐。本发明还涉及含式(I)代表的气丝菌素和药学上可接受的载体的药物组合物。此外，本发明涉及用这类气丝菌素制备药物，以及制备由式(I)代表的气丝菌素的方法。

Description

新的环状化合物

本发明涉及具有抗真菌活性的新的环状化合物(以下简称气丝菌素)，气丝菌素在医药治疗中的用途，含有气丝菌素的药物组合物以及用于制备气丝菌素的方法。

吡咯类抗真菌剂目前被广泛地用来治疗全身性真菌病。然而，吡咯抗真菌药的长期预防药用途导致了由于它们的抑真菌作用而产生了抗吡咯的假丝酵母菌属种(Candida spp.)。因此，杀真菌剂对于治疗严重的全身性真菌病特别是预防肺麹菌病是特别重要的。此外，现用的抗真菌药对足放线病菌属种(Scedosporium spp.)无效，它们是在免疫受损患者中出现的一种致病菌。两性霉素B是目前临床上使用的一种高效杀真菌剂，但其治疗指数(有效剂量比中毒剂量)十分窄。已知某些环状化合物例如LY303366(EP736 541)，WF11243(EP584 360)显示通过抑制β-1，3-葡聚糖合成酶的杀菌活性。然而，它们就抗菌谱和/或安全性而言仍然具有一些缺点。因而，亟需研制具有较好地安全性和效果的预防严重的全身性致病菌包括烟曲霉(Aspegillus fumigatus)和足放线病菌属种的新的杀真菌剂。

本发明特别涉及通式(I)代表的新的气丝菌素和其药学可接受的盐，

其中

R¹是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-2，5-二氨基戊酰基]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨乙基)氨基]戊酰]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[-5-氨基-2-[N-(3-氨基丙基)氨基]戊酰]氨基，N-(2-氨乙基)-N-[-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨乙基)氨基]戊酰]氨基或鸟氨酰-鸟氨酰氨基；

R²是氢或甲基；

R³是氢或羟基。

本发明还涉及一种包括通式(I)的气丝菌素和药学可接受的载体的药物组合物。此外，本发明涉及这种气丝菌素在制备药物中的用途，以及制备通式(I)的气丝菌素的方法。另外，本发明涉及一种用于预防和/或治疗由致病微生物所引起的传染病的方法。

在一个优选实施方案中，本发明涉及通式(I)的气丝菌素，其中R¹是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-2，5-二氨基戊酰基]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨乙基)氨基]戊酰]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[(2R)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨乙基)氨基]戊酰]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N-(3-氨基丙基)氨基]戊酰]氨基，N-(2-氨乙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨乙基)氨基]戊酰]氨基或(L)鸟氨酰-(D)-鸟氨酰氨基；R²是氢或甲基，优选氢；R³是氢或羟基，优选氢；和其药学可接受的盐。

在另一优选实施方案中，本发明涉及通式(I)的化合物，其中R¹是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-2，5-二氨基戊酰基]氨基，R²和R³是氢原子；即通式(IIIa)

和其药学可接受的盐。

在另一优选实施方案中，本发明涉及通式(I)的化合物，其中R¹是(L)-鸟氨酰-(D)-鸟氨酰氨基，R²和R³是氢原子；即通式(IVa)

和其药学可接受的盐。

在另一优选实施方案中，本发明涉及通式(I)的化合物，其中R¹是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基，R²和R³是氢原子；即通式(Va)

和其药学可接受的盐。

在另一优选实施方案中，本发明涉及通式(I)的化合物，其中R¹是N-(3-氨基丙基)-N-[(2R)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基，R²和R³是氢原子；即通式(VIa)

和其药学可接受的盐。

在另一优选实施方案中，本发明涉及通式(I)的化合物，其中R¹是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N-(3-氨基丙基)氨基]戊酰]氨基，R²和R³是氢原子；即通式(VIIa)

和其药学可接受的盐。

在另一优选实施方案中，本发明涉及通式(I)的化合物，其中R¹是N-(2-氨基乙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基，R²和R³是氢原子；即通式(VIIIa)

和其药学可接受的盐。

根据本发明的气丝菌素是下表1中举例说明的气丝菌素。

                   表1

*(R)构型

**(S)构型

通式(I)代表的气丝菌素可以由气丝菌素1，2或3根据反应路线1和2列出的方法产生，其中氨基保护基P₁和P₂可以选自叔丁氧羰基(Boc)，苄氧羰基(Cbz)，芴基甲氧羰基(Fmoc)等等；R²和R³如以上所定义。

方法A

原料化合物，通式(II)的气丝菌素，可以通过在有氧条件下在含水的或固体培养基中培养能产生气丝菌素1，2和3[气丝菌素3(＝WF11243)，在参考实施例1中描述]的属于半知菌亚门(Deuteromycotina)的微生物，并从培养物中分离气丝菌素1，2和/或3来制备。

[其中R²是氢或甲基；R³是氢或羟基]

可以通过下面的方法B或C将通式II的化合物转变为通式I的化合物：

方法B

反应路线1

反应路线1(续)

方法C

反应路线2

可以如下更详细地说明方法A到C：

方法A

用于本发明的微生物可以是任何能产生气丝菌素1，2和3的属于半知菌亚门的菌株，包括突变株和变种。特别优选菌株NR 7379，它们由在日本鹿儿岛县收集的落叶分离，并确定为属于半知菌亚门的菌株。

菌株NR 7379的培养和形态特征如下：

1.培养特征

玉米粉琼脂(CMA)：无大量生长。由接种物(4.5毫米直径琼脂块)在25℃14天后，菌落达到直径为11毫米。它们是扁平的，有暗的奶油黄色。反面是暗奶油黄色。有无色和粘性的溢泌物。

Miura’s培养基(LCA)：无大量生长。由接种物在25℃14天后，菌落达到直径为11毫米。它们是扁平的有暗的奶油黄色。反面是暗的奶油黄色。没有溢泌物。

麦芽提取物琼脂(MEA)：无大量生长。由接种物在25℃14天后，获得直径18毫米的疱状的菌落。菌落的颜色是浅黄棕色。反面为相同的颜色。溢泌物是无色和粘性的。

马铃薯-葡糖琼脂培脂(PDA)：无大量生长。菌落是施状的，由接种物在25℃14天后，达到直径14毫米。菌落的颜色和质地类似于在MEA上的菌落。溢泌物是无色和粘性的。

在5℃和30℃之间在CMA，LCA，MEA和PDA上观察到萌芽。

2.形态特征

菌丝体是部分埋生的，部分在表面的，分枝的，有隔膜的，为暗褐色到奶油黄色的。分生孢子梗由埋生的菌丝体形成。它们是透明的，有隔膜的，分枝的，不规则的。产分生孢子细胞在分离的分生孢子梗或不规则的菌丝上。它们是成肠细胞的(enteroblastic)，瓶梗的，末端的或近末端的。末端的或近末端的瓶梗是长度和形状可变的。它们是圆柱的到瓶形的，它们的长度和宽度分别至多为5.5到10μm和2.5到5.5μm。常常形成直接在隔膜下的具有侧面产分生孢子细胞的不规则丝状的分生孢子梗。分生孢子是单细胞的，透明的，平滑的，球形的到近球形的，长度为2.0到5.5μm且宽度为2.0到5.0微米。

根据这些明显的培养和形态特征，本菌株属于半知菌亚门，指定为半知菌亚门NR 7379。

标为半知菌亚门NR 7379的菌株已经在日本国立生命科学和人体技术研究所(National Institute of Bioscience and Human-Technology，Agencyof Industrial Science and Technology，Japan)以Nippon Roche K.K.(地址为日本东京105，港区芝2丁目，6-1)的名义在1998年6月16日按照布达佩斯条约保藏如下：半知菌亚门NR 7379(FERM BP-6391)。

按照本发明提供的方法的培养可以在含有通常的可被培养的微生物利用的营养素的培养基中进行。可以提及的碳源是，例如，葡萄糖，蔗糖，淀粉，甘油，糖蜜，糊精及它们的混合物。氮源是，例如，大豆粉，棉籽粉，肉膏，蛋白胨，干酵母，酵母抽提物，玉米浆，硫酸铵，硝酸钠和它们的混合物。而且可以向培养基中加入其它用于促进微生物的生长和用于提高气丝菌素1生产的有机或无机物。这种物质的实例是无机盐，例如碳酸钙，氯化钠，磷酸盐等等。

在有氧条件下优选在液体培养基中通过深层发酵进行，或在固体培养基通过静止发酵进行培养。适合于培养的温度为20℃到30℃，最适温度为27℃。优选在pH值3到9下进行培养。培养时间取决于进行培养的条件。一般说来，培养20到360小时就足够了。

为了从培养物中收获目标气丝菌素1，2和3，可以适当地使用通常用于从微生物的培养物中分离由微生物产生的代谢物的分离方法。例如，气丝菌素1(为一种甲醇可提取的两性化合物)可通过下面的方法方便地回收。

即，用适宜的溶剂提取通过固态发酵获得的全部培养物固体以回收目标产品。可用于从全部的培养物固体中提取目标化合物的溶剂包括水溶性有机溶剂或水溶性有机溶剂的含水溶液，例如甲醇，乙醇和含水的醇。

为了从得到的萃取液中除去盐、水溶性物质等等，可有效地利用在水和与水不溶混的有机溶剂例如正丁醇、乙酸乙酯等等之间的溶剂分配作用。为了从得到的萃取液中除去颜色物质，脂溶性物质等等，可有效地利用通过甲醇，乙醇，乙腈-0.1％含水三氟乙酸的混合物等等的溶剂纯化作用。

为了完成气丝菌素的纯化，可有效利用柱色谱法。可用于柱色谱法中的载体为例如YMC-GEL ODS(Yamamura Chemical Laboratories，日本)或Preparative C18(Waters Millipore公司)。作为洗脱液，可使用一种由含水三氟乙酸和适宜的水溶性有机溶剂例如甲醇，乙醇，乙腈，等等的混合物构成的溶剂体系。可将含有各自组分的由此纯化的洗脱液级分浓缩或冷冻干燥，研磨，得到气丝菌素1，2和3。

气丝菌素1，2和3是以三氟乙酸盐的形式分离出的，但可以通过下面的方法制备游离的气丝菌素1，2和3。即，将气丝菌素1，2和3的三氟乙酸盐溶于水，向其中加入一当量的氢氧化钠，然后将混合物用交联葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱色谱纯化，用含水醇例如甲醇-水，等等洗脱，由此分别获得气丝菌素1，2和3(游离态)。

方法B

可以从通式(II)的气丝菌素[其中R¹是氨基；R²和R³如以上所定义]以4个步骤：(1)用丙烯腈进行N-烷基化，(2)用N-保护的鸟氨酸(ornitine)酰化，(3)除去氨基保护基(P₁和P₂)，和(4)氰基的还原，制备通式(III)的化合物。

可以从通式(II)的气丝菌素[其中R¹是氨基；R²和R³如以上所定义]以6个步骤：(1)用丙烯腈进行N-烷基化，(5)用N-保护的鸟氨酸(ornitine)酰化，(3)除去氨基保护基(P₁)，(4)用N-保护的氨基-乙醛进行还原N-烷基化，(5)除去氨基保护基(P₂)，和(6)氰基的还原，制备通式(V，VI)的化合物。

可以从通式(II)的气丝菌素[其中R¹是氨基；R²和R³如以上所定义]以6个步骤：(1)用N-保护的氨基-乙醛进行还原的N-烷基化，(2)用N-保护的鸟氨酸(ornitine)酰化，(3)除去氨基保护基(P₁)，(4)用N-保护的氨基-乙醛进行还原N-烷基化，(5)除去氨基保护基(P₁)，和(6)氰基的还原，制备通式(VIII)的化合物。

可以从通式(II)的气丝菌素[其中R¹是氨基；R²和R³如以上所定义]以6个步骤：(1)用丙烯腈进行N-烷基化，(2)用N-保护的鸟氨酸(ornitine)酰化，(3)除去氨基保护基(P₁)，(4)用丙烯腈进行N-烷基化，(5)除去氨基保护基(P₂)，和(6)氰基的还原，制备通式(VII)的化合物。

方法C

可以从通式(II)的气丝菌素[其中R¹是氨基；R²和R³如以上所定义]以4个步骤：(1)用N-保护的鸟氨酸(ornitine)酰化，(2)除去氨基保护基(P₁)，(3)用N-保护的鸟氨酸(ornitine)酰化，和(4)除去氨基保护基(P₂)，制备通式(IV)的化合物。

在上述方法B和C中：

(a)氨基的N-单烷基化可使用丙烯腈根据“Organic Synthesis col.”第III卷，第93页中的方法进行。

(b)伯或仲氨基的N-烷基化可使用还原剂例如氰基硼氢钠在存在或不存在弱酸例如乙酸的情况下通过N-保护的氨基乙醛的常规还原烷基化作用进行。反应可以在室温下，在一种溶剂例如甲醇，乙醇，乙酸等等中进行。

(c)氰基的还原可以通过催化氢化或用硼氢化钠/氯化钴，硼烷-二甲硫复合物等等还原实现的。[参照：J.Med.Chem.，37，222(1994)]

(d)使用缩合剂例如二环己基碳二亚胺，BOP，HBTU，TNTU，PyBroP^TM，PyBOP^TM，TBTU，TSTU，HOBt等等(或它们中两种的结合)，用N-保护的鸟氨酸(ornitine)进行氨基的N-酰化作用。反应可以在溶剂例如甲醇，乙醇，吡啶，N，N-二甲基甲酰胺，N-甲基吡咯烷酮等等中，在有或没有碱例如三乙胺，二异丙基乙基胺，吡啶等等的条件下，在温度在-20℃至+50℃之间，优选在0℃至+25℃的条件下进行。

(e)通过为本领域技术人员所知的方法进行氨基保护基的除去，例如对于Boc基用三氟乙酸处理，或对于Fmoc基用哌啶处理。

本发明还涉及气丝菌素的酸加成盐。酸加成盐可以在正常的分离过程后以三氟乙酸盐获得。可以将由此获得的盐溶于水中，通过带有所需阴离子的阴离子交换柱。可以将含有所需盐的洗脱液浓缩以回收固态产物的盐。

借助于叔氮原子的存在可以将通式(I)的气丝菌素转变相应的盐。

通式(I)气丝菌素的酸加成盐可以通过用至少一种化学计量的适宜的酸处理气丝菌素的游离碱获得。适宜的酸包括，例如无机物酸，例如，盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸，等等，和有机酸，例如，乙酸，丙酸，羟基乙酸，丙酮酸，草酸，苹果酸，丙二酸，琥珀酸，马来酸，富马酸，酒石酸，柠檬酸，苯甲酸，肉桂酸，扁桃酸，甲磺酸，乙磺酸，对甲苯磺酸，水杨酸，等等。典型地，将游离碱溶于惰性有机溶剂例如乙醇，甲醇，等等中，然后将酸加入类似的溶剂中。维持温度在约40℃。得到的盐自然地沉淀下来，或可以用一种较小极性的溶剂从溶液中带出。

可以将通式(I)的气丝菌素的酸加成盐通过用至少一种化学计量的适当的碱例如氢氧化钠或氢氧化钾，碳酸钾，碳酸氢钠，氨水等等处理转变为相应游离碱。

本发明提供的气丝菌素显示出对各种真菌的广谱杀菌活性，可以用作治疗和预防真菌感染的疾病的药剂。通式(I)代表的气丝菌素的活体外和体内抗真菌活性(见表2，3-1和3-2)以及对肝细胞(见表4)的毒性如以下所示：

1.体外抗真菌活性

本发明有代表性的气丝菌素的体外抗真菌活性通过测定80％抑制浓度(IC₈₀)加以评价，是通过分光光度法计算与没有药物的对照组比较抑制真菌生长至20％浊度的抗真菌药的最低浓度。

IC₈₀值是按照NCCLS批准的标准(有下面的较小的改动)通过肉汤微量稀释方法测定的(国家临床实验室标准委员会，(1997)对于酵母的肉汤稀释抗真菌敏感性试验的参考方法，批准标准，文件M27-A)。用补充以1％葡萄糖和0.25％K₂HPO₄的酵母氮碱(YNB；Difco Lab.)作为酵母的试验培养基。将用0.2％的低熔点琼脂糖(BR¹)固化的同样的培养基用于丝状真菌。接种物的大小是1-3×10³细胞/毫升，并在35℃培育1-2天。

表2：体外抗真菌活性，IC₈₀(μg/ml)

	白色念珠菌(Candida albicans)CY1002	烟曲霉CF1003	足放线病菌属(Scedosporium apiospermum)CF1077
				气丝菌素132	0.28	2.9	0.38
气丝菌素134	0.37	0.58	0.37
				气丝菌素135	0.41	0.37	0.35
气丝菌素136	0.33	0.38	0.34

2.体内抗真菌效果

2-1：鼠科动物全身性念珠菌病

本发明的气丝菌素的对于全身性念珠菌病的体内抗真菌效果见下面的表3-1。用常规具有免疫能力的小鼠品系的小鼠，Crj：CD-1(ICR)作为全身性念珠菌病的实验感染模型。将4星期大的Crj：CD-1(ICR)小鼠通过尾部静脉注射白色念珠菌5×10⁶分生孢子/小鼠用于全身性念珠菌病。在刚刚全身性念珠菌病感染以后静脉内(i.v.)给与试验化合物一次。由每种剂量在第7天上幸存者的数量计算50％有效剂量(ED₅₀)值。

表3-1：对于全身性念珠菌病的小鼠体内抗真菌活性

       第7天上的ED₅₀(mg/kg)

气丝菌素132    0.43

气丝菌素133    0.35

气丝菌素135    0.35

2-2：鼠科肺麹菌病

本发明的气丝菌素对于肺麹菌病的体内抗真菌效果见下面的表3-2。在可的松处理(250mg/kg，在感染3天之前和当天两次皮肤下治疗)的ICR雄性小鼠中引起鼠科肺麹菌病。用烟曲霉的分生孢子(2.5×10⁵分生孢子/小鼠)气管内感染这些小鼠，并每日进行一次治疗，进行4天。从幸存者数量测定每种药物的效果，由每种剂量在第14天上幸存者的数量计算50％有效剂量(ED₅₀)。

表3-2：对于肺麹菌病的小鼠体内抗真菌活性

第14天上的ED₅₀(mg/kg)

气丝菌素132    5.2

气丝菌素134    5.8

气丝菌素137    5.2

气丝菌素3      ＞15

3.体外肝脏毒性试验

通过胶原酶消化分离小鼠肝细胞并在微量培养板中培养。将肝细胞单层暴露于培养体系中的试验气丝菌素，暴露1天。培养期后，在显微镜下观察肝细胞并进行形态学评价。测试气丝菌素引起的肝细胞的形态学改变程度与WF 11243和LY303366相比较。

表4：对肝细胞的细胞毒性(μg/ml)

气丝菌素132    ＞100

气丝菌素134    ＞100

气丝菌素135    ＞100

WF11243        100

(＝气丝菌素3)

LY303366       10

以5mg/kg和30mg/kg气丝菌素132对小鼠给药(每日一次：i.v.)2星期显示没有急性毒性。

因此，通式(I)的新的气丝菌素以及它们的药学可接受的盐在很宽的剂量范围内显示出对小鼠的于各种真菌感染的有效的抗真菌活性，包括麹菌病，且可用作抗真菌药。而且，本发明提供的气丝菌素比已知的环肽衍生物(WF11243和LY303366)对肝细胞具有更少的细胞毒性。

本发明的气丝菌素还可以抑制或减轻卡氏肺孢子虫(Pneumocystiscarinii)对免疫受损病人的感染。

本发明进一步地涉及含有通式(I)的新的气丝菌素以及它们的药学可接受盐的药物组合物。

通式(I)的新的气丝菌素以及它们的药学可接受盐是高效的杀真菌剂。它们对于各种真菌物种包括假丝酵母属种，曲霉属种(Aspergillus spp.)，足放线病菌属种，毛霉属种(Mucor spp.)和犁头霉属种(Absidia spp.)是有杀真菌活性的。

由此，本发明的气丝菌素对动物和人类具有局部的和全身性治疗真菌病的用途。例如，它们可有效用于治疗由假丝酵母属种，毛癣菌属种(Trichophyton spp.)和小孢子霉属种(Microsporum spp.)所引起局部和粘膜的真菌感染。它们可以还用于治疗由例如，假丝酵母属种，曲霉属种，或足放线病菌属种所引起的全身性真菌感染。

对于临床使用，通式(I)的新的气丝菌素和它们的药学可接受的盐可以单独给药，但通常是视特定的使用和所需的目的而定，通过与赋形剂，粘合剂，润滑剂，崩解剂，包衣材料，乳化剂，悬浮剂，溶剂，稳定剂，吸收增强剂和/或软膏基质混合，以配制的药物混合物给药的。混合物可以口服，注射，鼻部，直肠或局部的给药使用。

对于口服的气丝菌素的药物制剂可以是粒剂，片剂，糖包衣片，胶囊，丸剂，悬液或乳剂。对于肠胃外的注射，例如，静脉内，肌肉的或皮下注射，通式(I)的气丝菌素可以以无菌水溶液的形式使用，并可以含有其它物质，例如，盐或葡萄糖以使溶液是等渗的。这些组合物还可以以安瓿中的单元剂型存在或存在于多剂量容器中，优选加入防腐剂。或者，活性组分可以为粉末形式用于在给药之前与合适的载体重新配制。气丝菌素也可以以栓剂或阴道栓剂的形式给药，或它们可以以洗剂，溶液，乳膏，软膏或细粉的形式局部地应用。

当通过口服或肠胃外的途径给药时，通式(1)的气丝菌素的每日剂量水平在0.1到50毫克/千克(以等分剂量)。因此，气丝菌素的片剂或胶囊应该含有5毫克到0.5克的活性化合物，视情况一次给药一粒或两粒或更多粒。在任何情况下实际的剂量可以由医师决定，且可能根据年龄，体重和特定病人的反应而不同。

当气丝菌素用于抗真菌时，可以使用任何方法给药。对于治疗真菌感染，通常使用口服或静脉内的给药。

当气丝菌素用于控制肺孢子虫属感染时，优选用其直接治疗肺和支气管。因此优选吸入方法。对于吸入或鼻给药，本发明的气丝菌素可以气雾剂的喷洒给予形式从加压的包装或喷雾器方便地递送。优选吸入或经鼻的递送体系为一种计量的剂量吸入气雾剂，它们可以是通式(I)的化合物在适当的气雾剂推进剂(例如氟烃或烃)中配制的粉末，悬液或溶液。

尽管本发明的气丝菌素可以作为片剂、胶囊、局部的组合物、吹入剂粉末、栓剂，等等使用，本发明的气丝菌素在水和水介质中的溶解性使它们能适用于注射制剂以及适合于气溶胶喷射的液相组分。

下面的实施例举例说明了制备本发明的气丝菌素的优选的方法，然而它们并不意欲限制本发明的范围。

在下面的实施例中，通过HPLC使用选自下列的反相柱进行产物的分析和纯化。混合溶剂由0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈按照适当的比例组成，如每个实施例所描述。

HPLC柱：

柱A：CAPCELL PAK C18，UG-120，4.6×250mm

柱B：CAPCELL PAK C18，UG-120，10×250mm

柱C：CAPCELL PAK C18，UG-80，20×250mm

柱D：CAPCELL PAK C18，SG-120，4.6×250mm

柱E：CAPCELL PAK C18，SG-120，10×250mm

柱F：TSK GEL ODS-80Ts，20×250mm

在下面的研究实施例中，除非另有陈述气丝菌素是以三氟乙酸盐的形式得到的。

参考实施例1：

气丝菌素1，2和3的制备

a)固体发酵

将0.1毫升份的半知菌亚门NR 7379(FERM BP6391)在10％(V/V)甘油溶液中的冷冻培养物解冻并接种在含有100毫升由2％葡萄糖，1％马铃薯淀粉，1.5％甘油，1％Toast大豆(Nissin Seiyu)，0.35％酵母抽提物(Nippon Seiyaku)，0.25％Polypepton(Nihon Seiyaku)，0.3％NaCl，0.5％CaCO₃，0.005％ZnSO₄·7H₂O，0.0005％CuSO₄·5H₂O，和0.0005％MnSO₄·4H₂O组成的培养基的500毫升锥形依氏烧瓶中。不调节培养基的pH值。将种子培养物在27℃下在220rpm的旋转摇瓶机上培育7天。将2毫升种子培养物转移到3升锥形依氏烧瓶中，其中含有由200克压榨过的大麦，0.12克酵母抽提物(Difco)，0.06克酒石酸钠，0.06克KH₂PO₄，和120毫升水组成的固体培养基。在27℃在静止条件下进行发酵。发酵在240小时产量达到最大值，然后自培养物中分离气丝菌素1，2和3。

向得到的培养物固体(10千克)中加入甲醇(40L)，然后搅拌混合物，随后过滤得到甲醇萃取液(39L)。浓缩由此得到的甲醇萃取液，减压干燥，并向残余物(64.8克)中加入乙酸乙酯(1L)和水(1L)。然后搅拌混合物，随后除去乙酸乙酯层。

此外，同样地用乙酸乙酯(1L)洗涤水层两次。将残余的水层用正丁醇(1L)提取三次。合并由此得到的提取液并浓缩，减压干燥，然后将残余物(28.5克)溶解在乙腈-0.1％含水的三氟乙酸(1∶1)的混合物(250毫升)中。通过离心除去不溶物以后，将由此得到的溶液减压蒸干，并向残余物中加入甲醇(300毫升)，然后搅拌混合物，随后过滤，得到甲醇溶液(280毫升)。将由此得到的可溶于甲醇的物质(9.3克)在反相硅胶C18(1L)柱上柱色谱分离。使用甲醇-0.1％含水的三氟乙酸(2∶8，4∶6，5∶5，6∶4，7∶3，并8∶2)的混合物进行柱的分步洗脱。将以这个顺序用甲醇-0.1％含水的三氟乙酸(7∶3)洗脱的气丝菌素1，2和3浓缩并真空干燥，分别得到气丝菌素3的三氟乙酸盐(731毫克)和气丝菌素1的三氟乙酸盐(747毫克)白色粉末。将含有气丝菌素2的级分减压浓缩，并进一步地用HPLC在下面的条件下纯化：柱：Capcell PakC18(30×250mm，ShiseidoCo.，LTD.)；流动相：乙腈-0.1％含水的三氟乙酸(45∶55)；流速：40ml/min.；检测：UV 220nm。将在上述条件下得到的适当的洗脱液在真空中浓缩至干燥，得到白色粉末的气丝菌素2三氟乙酸盐(42毫克)。

b)烧瓶发酵

将2毫升份冷冻的发酵的半知菌亚门NR7379(FERM BP-6391)的10％(V/V)甘油溶液解冻并接种在500-毫升锥形依氏烧瓶中，烧瓶中含有100毫升由1％葡萄糖，1％燕麦粉，4％番茄酱，0.5％玉米浆(Andokasei)，0.001％FeSO₄·7H₂O，0.001％MnSO₄·4H₂O，0.0001％CaCl₂，0.0002％ZnSO₄·7H₂O，0.00002％(NH₄)₆MoO₂·4H₂O，和0.00006％H₃BO₃组成的培养基。灭菌之前调节培养基的pH值为6.8。将种子培养物在27℃下在220rpm的旋转摇瓶机上培育3天。将2毫升第一批种子培养物转移到500-毫升锥形依氏烧瓶中，该烧瓶中含有100毫升同样的培养基，并在旋转摇瓶机上在同样的条件下培育3天。将2毫升第二批种子培养物在500毫升锥形依氏烧瓶中培植，烧瓶中含有100毫升由8.5％甘油，1％柑桔果胶，0.4％花生粉，0.4％无维生素的牛乳酪蛋白，0.4％番茄酱，0.4％玉米浆(Andokasei)，0.2％甘氨酸，和0.2％KH₂PO₄组成的培养基。灭菌之前调节介质的pH值为7.0。在27℃在220rpm的搅动下进行发酵。培养10天后，产量达到最大值，然后将全部培养物分离气丝菌素1，2和3。

c)罐发酵

将2毫升份冷冻的发酵的半知菌亚门NR7379(FERM BP-6391)的10％(V/V)甘油溶液解冻并接种在500-毫升含有100毫升如上所述同样的种子培养基的锥形依氏烧瓶中。将烧瓶在27℃下在220rpm下摇动3天。将2毫升第一批种子培养物转移到500毫升锥形依氏烧瓶中，该烧瓶中含有100毫升同样的种子培养基，并在旋转摇瓶机上在同样的条件下培育3天。将六百毫升第二批种子培养物在50升小型发酵罐中培植，发酵罐中含有30升如上所述同样的生产培养基和0.4％消泡剂(NissanDisfoam CA-123)。在27℃下以30升/分钟的通气量和400rpm的搅动下进行发酵。发酵在168小时产量达到最大值，然后将全部培养物分离气丝菌素1，2和3。

气丝菌素1

1)外观：

白色固体

2)分子量(FAB-MS法)：

m/z 1547(M+H)+

3)分子式：C₇₂H₁₁₈N₁₄O₂₃

4)高分辨率质谱(M+H)+：

测定：1547.8568

C₇₂H₁₁₉N₁₄O₂₃计算值：1547.8572

5)紫外线吸收光谱(图1)：在甲醇中：

λ(ε)max(MeOH)：225±5(10600sh)，270±5(2000)，278±5(2100)

λ(ε)max(N/10 NaOH-MeOH)：240±5(7700)，268±5(1800)，

      298±5(1800)

6)红外吸收光谱(KBr)(图2)：

主要吸收波数(cm^-1)如下：

3379，2927，2855，1740，1660，1535，1453，1203，1139，837

7)¹H-NMR谱(图3)：

400MHz，CD₃OD

8)¹³C-NMR谱(图4)：

100MHz，CD₃OD

9)溶解性：

可溶于：水，甲醇，二甲亚砜

10)显色反应：

阳性的：茚三酮，茴香醛-硫酸，碘蒸气，香草醛-硫酸，Rydon-Smith试剂，磷钼酸

阴性的：Sakaguchi试剂，溴甲酚绿，2，4-二硝基苯肼-硫酸

11)薄层色谱法(TLC)：

载体                    溶剂                           Rf

硅胶F254^*1   n-BuOH∶丙酮∶AcOH∶H₂O(4∶5∶1∶1)   0.74

            MeOH∶H₂O(95∶5)                0.12

*1  E.Merck AG.，Germany

12)高效液相色谱法：

载体：Capcell Pak C18 gel S120A，4.6×250mm(由Shiseido，Co.，LTD.制造)

流动相：乙腈∶0.05％含水的三氟乙酸＝1∶1

流速：1ml/min.

Rt＝12.1±0.5

13)氨基酸分析：

将气丝菌素1在120℃下在6N HCl中加热24小时，随后进行氨基酸分析，检测苏氨酸，3单位的异苏氨酸，甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，酪氨酸，鸟氨酸，3-羟脯氨酸，4-羟脯氨酸，3-羟基谷氨酰胺。

气丝菌素2

1)外观：

白色固体

2)分子量(FAB-MS法)：

m/z 1549(M+H)+

3)分子式：

C₇₁H₁₁₆N₁₄O₂₄

4)高分辨率质谱(M+H)+：

实测：1549.8384

计算值C₇₁H₁₁₇N₁₄O₂₄：1549.8365

5)UV光谱(图5)：在甲醇中：

λ(ε)max(MeOH)：225±5(10200sh)，270±5(1900)，278±5(2000)

λ(ε)max(N/10 NaOH-MeOH)：240±5(7700)，293±5(2000)

6)IR光谱(KBr)(图6)：

主要吸收峰波数(cm^-1)如下：

3323，2928，2856，1740，1670，1531，1450，1203，1137，837

7)¹H-NMR谱(图7)：

400MHz，在CD₃OD中

8)¹³C-NMR谱(图8)：

100MHz，在CD₃OD中

9)溶解性：

可溶于：水，甲醇，二甲亚砜

10)显色反应：

阳性的：茚三酮，茴香醛-硫酸，碘蒸气，香草醛-硫酸，Rydon-Smith试剂，磷钼酸

阴性的：Sakaguchi试剂，溴甲酚绿，2，4-二硝基苯肼-硫酸

11)薄层色谱法(TLC)：

载体                   溶剂                            Rf

硅胶F254^*1    n-BuOH∶丙酮∶AcOH∶H₂O(4∶5∶1∶1)   0.29

               MeOH∶H₂O(95∶5)                      0.15

^*1 E.Merck AG.，Germany

 12)高效液相色谱：

载体：Capcell Pak C18 gel S120A，4.6×250mm(由Shiseido，Co.，LTD.制造)

流动相：乙腈∶0.05％含水的三氟乙酸＝1∶1

流速：1ml/min.

Rt＝9.9±0.5

13)氨基酸分析：

将气丝菌素2在120℃下在6N HCl中加热24小时，随后进行氨基酸分析，检测苏氨酸，3单位的异苏氨酸，甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，3-羟基酪氨酸(DOPA)，鸟氨酸，3-羟脯氨酸，4-羟脯氨酸，3-羟基谷氨酰胺。

气丝菌素3

1)外观：

白色固体

2)分子量(FAB-MS法)：

m/z 1533(M+H)+

3)分子式：

C₇₁H₁₁₆N₁₄O₂₃

4)紫外线吸收光谱：在甲醇中

λ(ε)max(MeOH)：225±5(11000sh)，270±5(2000)，280±5(19000)

λ(ε)max(N/10 NaOH-MeOH)：243±5(7800)，295±5(1800)

5)IR谱(KBr)：

主要吸收波数(cm^-1)如下：

3334，2928，2852，1742，1662，1520，1449，1202，1136，836

6)溶解性：

可溶于：水，甲醇，二甲亚砜

7)显色反应：

阳性的：茚三酮，茴香醛-硫酸，碘蒸气，香草醛-硫酸，Rydon-Smith试剂，磷钼酸

阴性的：Sakaguchi试剂，溴甲酚绿，2，4-二硝基苯肼-硫酸

8)薄层色谱法(TLC)：

载体                   溶剂                            Rf

硅胶F254^*1    n-BuOH∶丙酮∶AcOH∶H₂O(4∶5∶1∶1)   0.26

               MeOH∶H₂O(95∶5)                      0.09

^*1 E. Merck AG.，Germany

9)高效液相色谱法：

载体：Capcell Pak C18 gel S120A，4.6×250mm(由Shiseido，Co.，LTD.制造)

流动相：乙腈∶0.05％含水的三氟乙酸＝1∶1

流速：1ml/min.

Rt＝9.1±0.5

10)氨基酸分析：

将气丝菌素3在120℃下在6N HCl中加热24小时，随后进行氨基酸分析以检测苏氨酸，3单位的异苏氨酸，甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，酪氨酸，鸟氨酸，3-羟脯氨酸，4-羟脯氨酸，3-羟基谷氨酰胺。

实施例1

气丝菌素132的制备

(a)在室温下向气丝菌素3(500毫克，0.326mmol)和三乙胺(682μl，4.89mmol)在甲醇(10毫升)中的混合物中加入丙烯腈(214μl，3.27mmol)。将混合物在室温下搅拌20小时。在真空中蒸发溶剂后，将残余物溶于正丁醇并用稀盐酸和水依次洗涤。将有机层在真空中浓缩。将粗残余物通过反向HPLC纯化，其中详细条件如下所示。将适当的级分合并，冷冻并冷冻干燥得到207毫克气丝菌素120(通式(I)化合物，其中R²和R³是氢且R¹是(2-氰乙基)-氨基)无色无定形固体。

HPLC(Rt)27.5分钟(柱F，流速：10毫升/分钟，洗脱液：0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝53∶47)；FAB-MS(M/Z)：1586[M+H]⁺。

(b)向搅拌的Boc-L-Orn(Boc)-OH(46毫克，0.138mmol)的DMF(2毫升)溶液中加入BOP试剂(62毫克，0.14mmol)，HOBT水合物(22毫克，0.144mmol)和N-乙基二异丙基胺(24μl，0.138mmol)。在室温下搅拌2小时以后，向反应混合物中加入气丝菌素120(100毫克，0.063mmol)和N-乙基二异丙基胺(24μl，0.138mmol)的DMF(2毫升)溶液。在室温下搅拌20小时以后，将溶剂真空蒸发。

在0℃下将以上得到的粗残余物在TFA(3毫升)中搅拌30分钟。打开反应容器，将TFA在干燥的氮气气流下蒸发。将残余物通过反相HPLC纯化，其中详细条件如下所示。将纯净级分合并，冷冻并冷冻干燥得到60.5毫克化合物-1，为白色无定形固体。

HPLC(Rt)20.7分钟(柱F，流速：10毫升/分钟，洗脱液：0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝57∶43)；FAB-MS(M/Z)：1700[M+H]⁺。

(c)向化合物-1(60.5毫克，0.0356mmol)在二氧六环(2毫升)和水(2毫升)的混合物中加入10％钯/炭(10毫克)，然后将反应容器充满氢气。在室温下搅拌14小时后，将混合物通过膜式过滤器(孔径大小：0.2毫米)过滤，然后将溶剂在真空中蒸发。将粗残余物通过反向HPLC纯化，其中详细条件如下所示。将适当的级分合并，冷冻并冷冻干燥得到27.8毫克气丝菌素132，为无色无定形固体。

HPLC(Rt)18.9分钟(柱F，流速：10毫升/分钟，洗脱液：0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝60∶40)；FAB-MS(M/Z)：1704[M+H]⁺。

实施例2

气丝菌素134的制备

(a)向搅拌的Fmoc-L-Orn(Boc)-OH(379毫克，0.834mmol)的DMF(6毫升)溶液中加入BOP试剂(368毫克，0.832mmol)，HOBT水合物(128毫克，0.836mmol)和N-乙基二异丙基胺(145μl，0.832mmol)。在室温下搅拌2小时以后，向反应混合物中加入气丝菌素120(600毫克，0.378mmol)和N-乙基二异丙基胺(145μl，0.832mmol)的DMF(3毫升)溶液。在室温下搅拌18小时以后，向混合物中加入哌啶(3毫升)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。将溶剂在真空中浓缩。将残余物用二氯甲烷和二乙醚洗涤以除去试剂。将粗产品不进一步地纯化用于下一步。

(b)向以上得到的粗产品(320毫克)的甲醇(10毫升)溶液中加入(2-氧代-乙基)氨基甲酸叔丁酯(粗品，530毫克)，AcOH(2毫升)和NaBH₃CN(210毫克，3.342mmol)的甲醇(4毫升)溶液。将混合物在室温下搅拌20小时后，将反应混合物在真空中浓缩。将残余物溶于正丁醇并用稀盐酸和水依次洗涤。将有机层在真空中浓缩。

在0℃下将以上得到的粗残余物在TFA(6毫升)中搅拌30分钟。打开反应容器，将TFA在干燥的氮气气流下蒸发。将残余物通过反向HPLC纯化，其中详细条件如下所示。将适当的级分合并，冷冻并冷冻干燥得到88.2毫克化合物-2，为白色无定形固体。

HPLC(Rt)22.4分钟(柱F，流速：10毫升/分钟，洗脱液：0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝60∶40)。

(c)向化合物-2(88.2毫克，0.0494mmol)在二氧六环(1.5毫升)和水(1.5毫升)的混合物中加入10％钯/炭(20毫克)，然后将反应容器充满氢气。在室温下搅拌16小时后，将混合物通过膜式过滤器(孔径大小：0.2毫米)过滤，然后将溶剂在真空中蒸发。将粗残余物通过反向HPLC纯化，其中详细条件如下所示。将适当的级分合并，冷冻并冷冻干燥得到22.0毫克气丝菌素134，为无色无定形固体。

HPLC(Rt)25.7分钟(柱F，流速：10毫升/分钟，洗脱液：0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝63∶37)；FAB-MS(M/Z)：1790[M+H]⁺。

实施例3

气丝菌素135的制备

按照类似于实施例2中描述的方法制备气丝菌素135。

HPLC(Rt)25.5分钟(柱F，流速：10毫升/分钟，洗脱液：0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝63∶37)；FAB-MS(M/Z)：1790[M+H]⁺。

实施例4

气丝菌素136的制备

(a)向搅拌的Fmoc-L-Orn(Boc)-OH(379毫克，0.834mmol)的DMF(6毫升)溶液中加入BOP试剂(368毫克，0.832mmol)，HOBT水合物(128毫克，0.836mmol)和N-乙基二异丙基胺(145μl，0.832mmol)。在室温下搅拌2小时以后，向反应混合物中加入气丝菌素120(600毫克，0.378mmol)和N-乙基二异丙基胺(145μl，0.832mmol)的DMF(3毫升)溶液。在室温下搅拌18小时以后，向混合物中加入哌啶(3毫升)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟。将溶剂在真空中浓缩。将残余物用二氯甲烷和二乙醚洗涤以除去试剂。将粗产品不进一步地纯化用于下一步。(b)向以上得到的粗产品(300毫克)的乙醇(EtOH)(10毫升)溶液中加入丙烯腈(110μl，1.68mmol)和N-乙基二异丙基胺(44μl，0.253mmol)。将混合物在室温下搅拌14小时后，加入丙烯腈(440μl，6.72mmol)和N-乙基二异丙基胺(44μl，0.253mmol)。将混合物在室温下搅拌22小时后，加入丙烯腈(220μl，3.36mmol)和N-乙基二异丙基胺(44μl，0.253mmol)。将混合物在室温下搅拌6小时后，将反应混合物在真空中浓缩。将残余物用二氯甲烷和二乙醚洗涤以除去试剂。

在0℃下将以上得到的粗残余物在TFA(3毫升)中搅拌30分钟。打开反应容器，将TFA在干燥的氮气气流下蒸发。将残余物通过反向HPLC纯化，其中详细条件如下所示。将适当的级分合并，冷冻并冷冻干燥得到104.6毫克化合物-3，为白色无定形固体。

HPLC(Rt)27.8分钟(柱F，流速：10毫升/分钟，洗脱液：0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝57∶43)。

(c)向化合物-3(104.6毫克，0.0596mmol)在二氧六环(3毫升)和水(3毫升)的混合物中加入10％钯/炭(25毫克)，然后将反应容器充满氢气。在室温下搅拌16小时后，将混合物通过膜式过滤器(孔径大小：0.2毫米)过滤，然后将溶剂在真空中蒸发。将粗残余物通过反向HPLC纯化，其中详细条件如下所示。将适当的级分合并，冷冻并冷冻干燥得到40.3毫克气丝菌素136，为无色无定形固体。

HPLC(Rt)25.8分钟(柱F，流速：10毫升/分钟，洗脱液：0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝63∶37)；FAB-MS(M/Z)：1761[M+H]⁺。

实施例5

气丝菌素133的制备

(a)向气丝菌素3单TFA盐(2.5g)的DMF(10毫升)溶液中加入Fmoc-D-Orn(Boc)OH(850毫克)，BOP(180毫克)，HOBT(279毫克)和N-乙基二异丙基胺(0.795毫升)。将混合物在室温下搅拌3小时后，加入哌啶(4.0毫升)。在室温下继续搅拌30分钟，而后将溶剂真空中蒸发。将残余物溶于二氯甲烷，然后滴加乙醚，得到粗产品白色无定形粉末。将粗产品用乙醚洗涤，并不经纯化用于下一步。

(b)将以上得到的粗产品溶于DMF(20毫升)。向此溶液中加入Boc-L-Orn(Boc)OH(656毫克)，BOP(872毫克)，HOBT(302毫克)和N-乙基二异丙基胺(0.793毫升)。将混合物在室温下搅拌3小时后，将溶剂在真空中蒸发。

(c)在0℃下向以上得到的残余物中加入TFA(15毫升)。将混合物在0℃搅拌30分钟以后，滴加乙醚，得到白色沉淀。将其用乙醚洗涤，并用反相HPLC纯化。将纯净级分合并，冷冻并冷冻干燥得到515毫克气丝菌素133，为无色无定形固体。

HPLC(Rt)19.7分钟(柱F，流速：10毫升/分钟，洗脱液：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝60∶40)；FAB-MS(M/Z)：1761[MH⁺]。

实施例6

气丝菌素137的制备

(a)向气丝菌素3单TFA盐(622毫克)的二氯甲烷(16毫升)和MeOH(4毫升)溶液中加入N-Boc-氨基乙醛(120毫克)和N-乙基二异丙基胺(0.072毫升)。在室温下搅拌1小时以后，向反应混合物中加入氰基硼氢钠(48毫克)和硫酸(0.04毫升)。将反应混合物在室温下搅拌72小时后，将溶剂在真空中蒸发，而后加入0.1N HCl。用nBuOH提取并浓缩。

(b)将残余物溶于DMF(6毫升)，向其中加入2-(S)-[二(2-叔丁氧羰基-氨基乙基)氨基]-5-叔丁氧羰基-氨基戊酸(294毫克)，HOAt(77毫克)，HBTU(215毫克)和N-乙基二异丙基胺(0.148毫升)。在室温下搅拌48小时后，将溶剂在真空中蒸发，而后将残余物溶于二氯甲烷。向此溶液中加入乙醚，得到白色沉淀。将粗产品用乙醚洗涤，并不经用于下一步。

(c)然后在0℃下向以上得到的化合物中加入TFA(3毫升)。将混合物在0℃搅拌30分钟以后，向反应混合物中加入乙醚，得到白色沉淀。将其用乙醚洗涤，并用反相HPLC纯化。将纯净级分合并，冷冻并冷冻干燥得到95毫克气丝菌素137无色无定形固体。

HPLC(Rt)14.6分钟(柱F，流速：10毫升/分钟，洗脱液：0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝61∶39)；FAB-MS(m/z)：1776[M+H]⁺。

实施例A

以本身常规的方式制造各自含有以下成分的可注射溶液。

气丝菌素132               20毫克

无水磷酸氢二钠            7.6毫克

二磷酸氢钠二水合物        2.0毫克

乙醇                      150毫克

蒸馏水，去离子，无菌的    850毫克

总计                      1029.6毫克

Claims (19)

1.通式(I)代表的气丝菌素和其药学可接受的盐：

其中

R¹是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-2，5-二氨基戊酰基]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨乙基)氨基]戊酰]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[-5-氨基-2-[N-(3-氨基丙基)氨基]戊酰]氨基，N-(2-氨乙基)-N-[-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨乙基)氨基]戊酰]氨基或鸟氨酰-鸟氨酰氨基；

R²是氢或甲基；

R³是氢或羟基；

但当R²和R³是氢时，R¹不为(R)-鸟氨酰-(R)-鸟氨酰氨基。

2.根据权利要求1的气丝菌素，其中R¹是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-2，5-二氨基戊酰基]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[(2R)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N-(3-氨基丙基)氨基]戊酰]氨基，N-(2-氨基乙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基或(L)-鸟氨酰-(D)-鸟氨酰氨基。

3.根据权利要求1的气丝菌素，其中R²和R³为氢。

4.根据权利要求2的气丝菌素，其中R²和R³为氢。

5.根据权利要求1到4任一项的气丝菌素，其中R¹是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-2，5-二氨基戊酰基]氨基。

6.根据权利要求1到4任一项的气丝菌素，其中R¹是(L)-鸟氨酰-(D)-鸟氨酰氨基。

7.根据权利要求1到4任一项的气丝菌素，其中R¹是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基。

8.根据权利要求1到4任一项的气丝菌素，其中R¹是N-(3-氨基丙基)-N-[(2R)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基。

9.根据权利要求1到4任一项的气丝菌素，其中R¹是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N-(3-氨基丙基)氨基]戊酰]氨基。

10.根据权利要求1到4任一项的气丝菌素，其中R¹是N-(2-氨基乙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-双(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基。

11.根据权利要求1的气丝菌素，其中R¹是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-2，5-二氨基戊酰基]氨基而R²和R³是氢。

12.一种制备权利要求5的化合物的方法，该方法包括：(a)用丙烯腈使其中R²和R³如权利要求1所定义的通式(II)的化合物

N-烷基化，(b)用N-保护的鸟氨酸使得到的化合物酰化，(c)除去氨基保护基，以及(d)还原氰基。

13.一种制备权利要求7或8的化合物的方法，该方法包括：(a)用丙烯腈使其中R²和R³如权利要求1所定义的通式(II)的化合物

N-烷基化，(b)用N-保护的鸟氨酸使得到的化合物酰化，(c)除去邻近于酮基的氨基保护基，(d)用N-保护的氨基-乙醛进行还原N-烷基化，(e)除去剩余的氨基保护基，以及(f)还原氰基。

14.一种制备权利要求10的化合物的方法，该方法包括：(a)用N-保护的氨基-乙醛使其中R²和R³如权利要求1所定义的通式(II)的化合物

还原N-烷基化，(b)用N-保护的鸟氨酸使得到的化合物酰化，(c)除去邻近于酮基的氨基保护基，(d)用N-保护的氨基-乙醛进行还原N-烷基化，(e)除去剩余的氨基保护基，以及(f)还原氰基。

15.一种制备权利要求9的化合物的方法，该方法包括：(a)用丙烯腈使其中R²和R³如权利要求1所定义的通式(II)的化合物

N-烷基化，(b)用N-保护的鸟氨酸使得到的化合物酰化，(c)除去邻近于酮基的氨基保护基，(d)用丙烯腈N-烷基化，(e)除去剩余的氨基保护基，以及(f)还原氰基。

16.一种制备权利要求6的化合物的方法，该方法包括：(a)用N-保护的鸟氨酸的酰化其中R²和R³如权利要求1所定义的通式(II)的化合物

，(b)除去邻近于酮基的氨基保护基，(c)用N-保护的鸟氨酸酰化，以及(d)除去剩余的氨基保护基。

17.一种包含权利要求1到4的任一项的化合物与药学可接受的载体的药物组合物。

18.权利要求1到4中任一项化合物在制备治疗或预防真菌病的药物中的用途。

19.权利要求1到4中任一项化合物在制备预防和/或治疗由致病微生物所引起的传染病的药物中的用途。

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