CN118613504A - 含有tnfsf配体的细胞外结构域的抗原结合多肽复合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了具有某些结构特征的抗原结合多肽复合物(例如抗体及其抗原结合片段)。本发明还公开了编码此类多肽复合物的多核苷酸和载体；含有此类多肽复合物的细胞、药物组合物和试剂盒；以及使用此类多肽复合物的方法。
Description
相关申请的交互引用
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技术领域
本公开涉及含有肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)配体的细胞外结构域的抗原结合多肽复合物(例如抗体及其抗原结合片段)。本公开还涉及编码此类多肽复合物的多核苷酸和载体；含有此类多肽复合物的细胞、药物组合物和试剂盒；以及使用此类多肽复合物的方法。
背景技术
T细胞是在免疫系统和对抗癌症中起关键作用的白血球子类型。癌细胞抗原可以通过抗原呈递细胞(APC)呈递，其转而可以活化T细胞以识别并杀死癌细胞。T细胞活化需要两个信号传导事件：(i)经由APC上的肽负载的主要组织相容性复合物(MHC)和T细胞上的T细胞受体(TCR)复合物进行的主要信号传导，以及(ii)通过CD28家族或肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)成员进行的共刺激信号传导。共刺激信号传导通路彼此互补，因为CD28是原初T细胞上的主要共刺激通路，而TNFRSF在有抗原体验的或记忆T细胞中起更重要的作用。
T细胞用抗CD3抗体和抗CD28抗体处理提供了接合TCR的共刺激信号并且可以用于抗原诱导的T细胞活化。初级T细胞活化信号通常由抗CD3抗体提供，因为CD3是TCR复合物的保守成员。然后，第二信号通常由抗CD28抗体或CD28配体(B7.1、B7.2等)和抗TNF受体(TNFR)成员或其配体提供。已充分研究了TNFRSF成员(诸如OX40和4-1BB)用于使用拮抗或促效途径来进行癌症的免疫调节和免疫疗法的生物治疗开发。
除了CD27(其在原初T细胞上组成性表达)以外，其它TNFRSF仅在T细胞活化后表达。另外，记忆T细胞和调控T细胞(Treg)组成性表达某些家族成员。这些表达模式已表明，TNFRSF/TNFSF轴在控制效应和记忆反应方面可能很重要。共信号传导受体，并且特别是TNFRSF共刺激受体，在调控效应T细胞反应方面具有实质性作用。CD27、OX40和DR3介导的共刺激促进CD4+和CD8+效应T细胞两者的增殖和存活，而4-1BB和GITR介导的共刺激优先增强CD8+效应T细胞的扩增和存活。
OX40经由被其配体OX40L结合而活化，并且4-1BB通过接合配体4-1BBL而进行信号传导。OX40L和4-1BBL是可以与T细胞上的三聚OX40或4-1BB形成均三聚体复合物的三聚分子。
经由TNFSF的共刺激已显现为一种支持抗肿瘤免疫反应的有前景的策略。然而，仍然需要可以结合特定靶分子或靶分子组合并且在抗肿瘤免疫反应中更有效活化T细胞的双特异性和多特异性抗体。另外需要产生高功效并且同时提供较宽治疗窗和较好耐受性的双特异性和多特异性抗体。
发明内容
本文提供了一种抗原结合多肽复合物，所述抗原结合多肽复合物包含第一多肽、第二多肽和第三多肽；其中所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；其中(i)所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L2-CH1-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；VH1-L2-CL-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；VH1-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L2-CH1-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；VL1-L2-CL-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；VL1-L7-CH1-L8-Fc；或VL1-L7-CL-L8-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L9-VH2-L10-Fc-L11-TNF1-L12-TNF2-L13-TNF3；或VH2-L14-VL2-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3；或(ii)所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L19-CH1-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；VH1-L19-CL-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；VL1-L19-CH1-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；或VL1-L19-CL-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L24-VH2-L25-Fc；或VH2-L26-VL2-L27-Fc；其中VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；CH1是免疫球蛋白重链恒定区1；CL是免疫球蛋白轻链恒定区；TNF1是肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)配体的第一细胞外结构域；TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且L1-L27是氨基酸接头。
本文提供了一种抗原结合多肽复合物，所述抗原结合多肽复合物包含第一多肽、第二多肽和第三多肽；其中所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；其中(i)所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CH1-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；VH1-CL-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；VH1-CH1-L6-Fc；VH1-CL-L7-Fc；VL1-CH1-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；VL1-CL-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；VL1-CH1-L6-Fc；或VL1-CL-L7-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L8-VH2-L9-Fc-L10-TNF1-L11-TNF2-L12-TNF3；或VH2-L13-VL2-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；或(ii)所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CH1-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；VH1-CL-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；VL1-CH1-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；或VL1-CL-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L22-VH2-L23-Fc或VH2-L24-VL2-L25-Fc；其中VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；CH1是免疫球蛋白重链恒定区1；CL是免疫球蛋白轻链恒定区；TNF1是肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)配体的第一细胞外结构域；TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且L1-L25是氨基酸接头。
本文提供了一种抗原结合多肽复合物，所述抗原结合多肽复合物包含第一多肽和第二多肽；其中(i)所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L37-VH2-L38-Fc-L39-TNF1-L40-TNF2-L41-TNF3；VH2-L42-VL2-L43-Fc-L44-TNF1-L45-TNF2-L46-TNF3；VL2-L47-VH2-L48-CL-L49-CH1-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3；VL2-L54-CL-L55-VH2-L56-CH1-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3；VL2-L47-VH2-L48-CH1-L49-CL-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3；VL2-L54-CH1-L55-VH2-L56-CL-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3；VL2-VH2-L38-Fc-L39-TNF1-L40-TNF2-L41-TNF3；VH2-VL2-L43
-Fc-L44-TNF1-L45-TNF2-L46-TNF3；VL2-VH2-L48-CL-L49-CH1-L50
-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3；VL2-CL-L55-VH2-L56-CH1-L57
-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3；VL2-VH2-L48-CH1-L49-CL-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3；或VL2-CH1-L55-VH2-L56-CL-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3；或(ii)所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L61-VH1-L62-Fc-L63-TNF1-L64-TNF2-L65-TNF3；VH1-L66-VL1-L67-Fc-L68-TNF1-L69-TNF2-L70-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CL-L73-CH1-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CH1-L73-CL-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L78-CL-L79-VH1-L80-CH1-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；或VL1-L78-CH1-L79-VH1-L80-CL-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L85-VH2-L86-Fc；VH2-L87-VL2-L88-Fc；VL2-L89-VH2-L90-CL-L91-CH1-L92-Fc；VL2-L89-VH2-L90-CH1-L91-CL-L92-Fc；VL2-L93-CL-L94-VH2-L95-CH1-L96-Fc；或VL2-L93-CH1-L94-VH2-L95-CL-L96-Fc；其中VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；CH1是免疫球蛋白重链恒定区1；CL是免疫球蛋白轻链恒定区；TNF1是TNFSF配体的第一细胞外结构域；TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且L1-L96是氨基酸接头。
本文提供了一种抗原结合多肽复合物，所述抗原结合多肽复合物包含第一多肽和第二多肽；其中(i)所述第一多肽具有由以下表示的结构：Fc；VL1-L1-VL2-L2-VH2-L3-VH1-L4-Fc；VH1-L5-VH2-L6-VL2-L7-VL1-L8-Fc；Fc-L9-TNF1-L10-TNF2-L11-TNF3；VL1-L12-VL2-L13-VH2-L14-VH1-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3；或VH1-L19-VH2-L20-VL2-L21-VL1-L22-Fc-L23-TNF1-L24-TNF2-L25-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL3-L26-VL4-L27-VH4-L28-VH3-L29-Fc-L30-TNF1-L31-TNF2-L32-TNF3；或VH3-L33-VH4-L34-VL4-L35-VL3-L36-Fc-L37-TNF1-L38-TNF2-L39-TNF3；或(ii)所述第一多肽具有由以下表示的结构：Fc-L40-TNF1-L41-TNF2-L42-TNF3；VL1-L43-VL2-L44-VH2-L45-VH1-L46-Fc-L47-TNF1-L48-TNF2-L49-TNF3；或VH1-L50-VH2-L51-VL2-L52-VL1-L53-Fc-L54-TNF1-L55-TNF2-L56-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：Fc；VL3-L57-VL4-L58-VH4-L59-VH3-L60-Fc；或VH3-L61-VH4-L62-VL4-L63-VL3-L64-Fc；其中VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变区；VL4是第四免疫球蛋白轻链可变区；VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；VH3是第三免疫球蛋白重链可变区；VH4是第四免疫球蛋白重链可变区；Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；TNF1是TNFSF配体的第一细胞外结构域；TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且L1-L64是氨基酸接头。
本文提供了一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含本文所描述的抗原结合多肽复合物。
本文提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含本文所描述的抗原结合多肽复合物或抗体或抗原结合片段以及药学上可接受的载体。
本文提供了一种诱导或增强免疫反应的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用本文所描述的抗原结合多肽复合物或抗体或抗原结合片段或药物组合物。
本文提供了一种克服癌症介导的免疫抑制的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用本文所描述的抗原结合多肽复合物、抗体或抗原结合多肽复合物或药物组合物。
附图说明
图1A至图1F绘示了本发明的示例性抗原结合多肽复合物。Fv1和Fv2表示与免疫活化受体或肿瘤相关抗原(TAA)结合的区域。在一些方面，Fv1和Fv2与人类CD3或CD28结合。在一些方面，Fv1和Fv2呈单链可变片段(scFv)的形式。在一些方面，Fv1和Fv2呈Fab或单链Fab(scFab)的形式，任选地具有CH1和CL区域。TNFSF表示与Fc融合的TNF超家族成员细胞外结构域的三聚体。在一些方面，TNFSF呈融合均三聚体的形式。在一些方面，TNFSF是融合均三聚体的二聚体。
图2A显示了含有OX40L三聚体的三种示例性抗原结合多肽复合物(MX169、MX368和MX369)与人类CD3的ELISA结合结果。
图2B显示了含有OX40L三聚体的三种示例性抗原结合多肽复合物(MX169、MX368和MX369)与人类CD28的ELISA结合结果。
图2C显示了含有OX40L三聚体的三种示例性抗原结合多肽复合物(MX169、MX368和MX369)与人类OX40的ELISA结合结果。
图3A显示了在用不同浓度的含有OX40L三聚体的三种示例性抗原结合多肽复合物(MX169、MX368和MX369)刺激过夜之后，在NF-κB(NFkb)启动子的控制下表达荧光素酶的Jurkat细胞系中测试的T细胞活化的倍数变化。还显示了对照IgG1同型抗体的结果(IgG1同型)。
图3B显示了在用不同浓度的含有OX40L三聚体的三种示例性抗原结合多肽复合物(MX169、MX368和MX369)刺激过夜之后，在NFAT启动子的控制下表达荧光素酶的Jurkat细胞系中测试的T细胞活化的倍数变化。还显示了对照IgG1同型抗体的结果(IgG1同型)。
图4A至图4F显示了来自在用含有OX40L三聚体的三种示例性抗原结合多肽复合物(MX169、MX368和MX369)中的一者处理后，三个不同供体的原代人类CD4+T细胞(图4A至图4C)和CD8+T细胞(图4D至图4F)的增殖的倍数变化。还显示了对照IgG1同型抗体的结果(IgG1同型)。将人类外周血单核细胞(PBMC)与抗原结合多肽复合物一起孵育7天，并且进行染色用于流式细胞术。鉴别CD4+和CD8+T细胞，并且使用Precision Count BeadsTM测定其浓度。通过除以来自第7天和第0天的细胞浓度计算倍数变化。
图5A显示了含有4-1BBL三聚体的三种示例性抗原结合多肽复合物(MX306、MX424和MX425)与人类CD3的ELISA结合结果。
图5B显示了含有4-1BBL三聚体的三种示例性抗原结合多肽复合物(MX306、MX424和MX425)与人类CD28的ELISA结合结果。
图5C显示了含有4-1BBL三聚体的三种示例性抗原结合多肽复合物(MX306、MX424和MX425)与人类4-1BB的ELISA结合结果。
图6A至图6F显示了来自在用含有4-1BBL三聚体的三种示例性抗原结合多肽复合物(MX306、MX424和MX425)处理后，三个不同供体的原代人类CD4+T细胞(图6A至图6C)和CD8+T细胞(图6D至图6F)的增殖的倍数变化。还显示了对照IgG1同型抗体的结果(IgG1同型)。将人类PBMC与抗原结合多肽复合物一起孵育7天，并且进行染色用于流式细胞术。鉴别CD4+和CD8+T细胞，并且使用Precision Count BeadsTM测定其浓度。通过除以来自第7天和第0天的细胞浓度计算倍数变化。
图7A至图7B显示了由MX169和MX240引起的T细胞增殖，测量为来自两个供体(分别图7A和图7B)的外周血单核细胞(PBMC)中CD4 Tcm和Tem的倍数变化。还显示了对照抗体(hIgG1同型)的结果。
图8显示了来自三个供体的由MX169、MX368和MX369引起的T细胞增殖，测量为PBMC中的CD4 Tcm和Tem的倍数变化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
图9显示了来自两个供体的由MX169和MX240引起的T细胞增殖，测量为PBMC中的CD8 Tcm和Tem的倍数变化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
图10显示了来自三个供体的由MX169、MX368和MX369引起的T细胞增殖，测量为PBMC中的CD8 Tcm和Tem的倍数变化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
图11显示了来自两个供体的由MX306和MX321引起的T细胞增殖，测量为PBMC中的CD4 Tcm和Tem或CD8 Tcm和Tem的倍数变化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
图12显示了来自三个供体的由MX306、MX424和MX425引起的T细胞增殖，测量为PBMC中的CD4 Tcm和Tem的倍数变化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
图13显示了来自三个供体的由MX306、MX424和MX425引起的T细胞增殖，测量为PBMC中的CD8 Tcm和Tem的倍数变化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
图14A显示了由MX169、MX170、MX250、MX368和MX369引起的来自原代人类T细胞的IFNγ、IL-2、IL-6和TNFa释放。还显示了对照抗体(IgG同型)的结果。图14B显示了MX169、MX170、MX250、MX368和MX369的结构。
图15显示了由MX169、MX170、MX250、MX368和MX369引起的来自原代人类T细胞的IL-4、IL-5和IL-10释放。还显示了对照抗体(IgG同型)的结果。
图16显示了由MX169、MX170、MX250、MX368和MX369引起的来自原代人类T细胞的IFNγ、IL-2、IL-6和TNFa释放。还显示了对照抗体(IgG同型)的结果。
图17显示了由MX169、MX170、MX250、MX368和MX369引起的来自原代人类T细胞的IL-4、IL-5和IL-10释放。还显示了对照抗体(IgG同型)的结果。
图18A显示了由MX306、MX170、MX318、MX424和MX425引起的来自原代人类T细胞的IFNγ、IL-2、IL-6和TNFa释放。还显示了对照抗体(IgG同型)的结果。图18B显示了MX306、MX170、MX318、MX424和MX425的结构。
图19显示了由MX306、MX170、MX318、MX424和MX425引起的来自原代人类T细胞的IL-4、IL-5和IL-10释放。还显示了对照抗体(IgG同型)的结果。
图20显示了由MX306、MX170、MX318、MX424和MX425引起的来自原代人类T细胞的IFNγ、IL-2、IL-6和TNFa释放。还显示了对照抗体(IgG同型)的结果。
图21显示了由MX306、MX170、MX318、MX424和MX425引起的来自原代人类T细胞的IL-4、IL-5和IL10释放。还显示了对照抗体(IgG同型)的结果。
图22A显示了由MX424、MX485、MX487、MX620和MX622引起的非人类灵长类动物(NHP)CD4和CD8 T细胞的活化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。图22B显示了MX424、MX485、MX487、MX620和MX622的结构。
图23显示了由MX424、MX485、MX487、MX620和MX622引起的CD4和CD8细胞的倍数变化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
图24显示了由MX424、MX485、MX487、MX620和MX622引起的IFNγ、IL-6、IL-2和TNFa释放。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
图25A显示了由MX368和MX489引起的CD4和CD8 NHP T细胞的活化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。图25B显示了MX368和MX489的结构。
图26显示了由MX368和MX489引起的CD4和CD8 NHP T细胞的增殖。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
图27显示了由MX368和MX489引起的来自NHP T细胞的IFNγ、IL-6、IL-2和TNFa释放。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
图28显示了在两个供体中用MX487处理后，NHP中的T细胞计数和T细胞活化百分比。
图29显示了在用MX487处理后，来自两个不同NHP的CD4和CD8细胞的原初、Tcm、Teff和Tem群体的百分比。
图30显示了来自用MX620处理的两个NHP的T细胞数目以及CD4和CD8 T细胞活化百分比。箭头指示抗体给药。
图31显示了在用MX620处理后，来自两种供体的CD4和CD8 T细胞的原初、Tcm、Teff和Tem群体的百分比。
图32显示了在用MX620处理后，来自两个NHP的T细胞数目的倍数变化以及CD4和CD8 T细胞活化。箭头指示抗体给药。
图33显示了来自两个供体NHP的CD8 T细胞的原初、Tcm、Teff和Tem群体的倍数变化。箭头指示抗体给药。
图34显示了在用增加浓度的MX582和MX583处理后，Z138细胞的溶解百分比。还显示了用对照抗体(hIgG1LALAPA)的处理。
图35显示了在用增加浓度的MX751、MX777和MX778处理后，Z138细胞的溶解百分比。还显示了用对照抗体(hIgG1LALAPA)的处理。
具体实施方式
鉴于抗CD3抗体OX40和4-1BB在T细胞活化和抗肿瘤免疫反应中的作用，将抗CD3抗体与OX40或4-1BB共刺激信号组合可以拓展各种T细胞群体的活化并且为T细胞存活和长期扩增提供持续刺激。因此，开发了将以下整合的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)：一个或多个抗CD3区域(例如互补决定区(CDR)、重链可变区(VH)、轻链可变区(VL)、单链可变片段(scFv)、Fab、单链Fab(scFab)、重链或轻链)；和肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)配体(例如OX40L或4-1BBL)的细胞外结构域的一种或多种三聚体。在一些方面，将一个或多个抗肿瘤相关抗原(TAA)区域，诸如一个或多个抗HER2结合区(例如CDR、VH、VL、scFv、Fab、scFab、重链或轻链)，进一步整合至本公开的抗原结合多肽复合物中。在一些方面，将一个或多个抗免疫刺激受体区域，诸如一个或多个抗CD28结合区(例如CDR、VH、VL、scFv、Fab、scFab、重链或轻链)，进一步整合至本发明的抗原结合复合物中。
因此，本发明涉及具有改善的特征的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)。在一些方面，本发明能够经由以每个臂单一多肽形式表达的互补自组装重链和轻链的表达，以及任选地添加特定氨基酸接头，而产生多特异性和多功能抗原结合多肽复合物。由于这种多功能性，本发明的抗原结合多肽复合物可以与靶分子的特定组合结合以达成选择性或广谱/中和，聚集两种或更多种细胞类型，聚集靶标并递送活化信号，调节疾病微环境，并且增强结合亲合力以获得改善的效力。
整个说明书和权利要求书中使用与本公开的方面有关的各种术语。除非另有指示，否则此类术语将具有其在本领域中的普通含义。其它特定定义的术语以符合本文所提供的定义的方式解释。
I.定义
如本文所用，术语“抗原结合多肽复合物”是指一组两种、三种或四种相关多肽，其中至少一种多肽能够与一种或多种抗原特异性结合。抗原结合多肽复合物包括但不限于抗体或其抗原结合片段。
术语“抗体”包括但不限于与抗原特异性结合并且包含通过二硫键互连的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白免疫球蛋白。每条H链包含重链可变区(本文中缩写为VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个恒定结构域CH1、CH2和CH3。每条L链包含轻链可变区(本文中缩写为VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个恒定结构域CL。VH和VL区可以进一步细分成高变区，称为互补决定区(CDR)，穿插有称为构架区(FR)的更保守区。每个VH和VL包含三个CDR和四个FR，从氨基端至羧基端按以下次序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括与免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。重链可以具有或不具有C端赖氨酸。除非本文中另有规定，否则可变区中的氨基酸使用Kabat编号系统加以编号，而恒定区中的那些氨基酸使用EU系统加以编号。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指由单一B细胞无性系产生并且与相同表位结合的抗体。相比之下，术语“多克隆抗体”是指由不同B细胞产生并且与相同抗原的不同表位结合的抗体群体。术语“抗体”包括例如单克隆和多克隆抗体；嵌合和人源化抗体；人类或非人类抗体；完全合成抗体；以及单链抗体。非人类抗体可以通过重组方法进行人源化以降低其在人体中的免疫原性。
抗体可以是已改变(例如通过突变、缺失、取代、与非抗体部分缀合)的抗体。举例来说，抗体可以包括改变抗体特性(例如功能特性)的一个或多个变异氨基酸(相较于天然存在的抗体)。举例来说，在本领域中已知若干此类改变，所述改变影响抗体在患者中的例如半衰期、效应功能和/或免疫反应。术语抗体还包括人工多肽构建体，所述人工多肽构建体包含至少一个抗体来源的抗原结合位点。
“抗原结合片段”是指抗体中保留与完全抗体所结合的抗原特异性结合的能力的一个或多个片段或部分。已显示，抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段或部分执行。抗原结合片段可以含有完整抗体的抗原决定区(例如互补决定区(CDR))。抗体的抗原结合片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段、线性抗体和单链抗体。抗体的抗原结合片段可以来源于任何动物物种，诸如啮齿动物(例如小鼠、大鼠或仓鼠)和人类，或可以人工产生。
此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由独立的基因编码，但它们可以使用重组方法，通过使其能够制成其中VL和VH区配对形成单价分子的单一蛋白质链的合成接头接合(称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird等人(1988)Science 242:423-426；以及Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)。此类单链抗体也意图涵盖于术语抗体的“抗原结合片段”内。
抗原结合片段是使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并且以与完整抗体相同的方式来筛选供使用的片段。抗原结合片段可以通过重组DNA技术产生，或通过完整免疫球蛋白的酶促或化学裂解来产生。
如本文所用，术语“可变区”通常是指抗体的一部分，一般是轻链或重链的一部分，通常是成熟重链中的氨基端约110至120个氨基酸或110至125个氨基酸以及成熟轻链中的约90至115个氨基酸，其序列在抗体间有广泛差异，并且用于特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。序列中的可变性集中于称为互补决定区(CDR)的那些区中，而可变结构域中的更高度保守区称为构架区(FR)。在不希望受任何特定机制或理论束缚的情况下，据信轻链和重链的CDR主要负责抗体与抗原的相互作用和特异性。在一些方面，可变区是哺乳动物可变区，例如人类、小鼠或兔可变区。在一些方面，可变区包含啮齿动物或鼠类CDR和人类FR。在一些方面，可变区是灵长类动物(例如非人类灵长类动物)可变区。在一些方面，可变区包含啮齿动物或鼠类CDR和灵长类动物(例如非人类灵长类动物)FR。
如本文所用，术语“互补决定区”或“CDR”是指抗体可变结构域的每个区域，其序列变高和/或形成结构上限定的环(高变环)和/或含有抗原接触残基。抗体可以包含六个CDR，例如三个在VH中并且三个在VL中。
术语“VL”、“VL区”和“VL结构域”在本文中可互换地用于指抗原结合多肽复合物、抗体或其抗原结合片段的轻链可变区。在一些方面，VL区在本文中称为VL1以表示第一轻链可变区，VL2以表示第二轻链可变区，VL3以表示第三轻链可变区，等等。所列举的VL区(例如VL1)与所列举的另一VL区(例如VL2)可以具有相同或不同的抗原结合特性和/或相同或不同的序列。
术语“VH”、“VH区”和“VH结构域”在本文中可互换地用于指抗原结合多肽复合物、抗体或其抗原结合片段的重链可变区。在一些方面，VH区在本文中称为VH1以表示第一重链可变区，VH2以表示第二重链可变区，VH3以表示第三重链可变区，等等。所列举的VH区(例如VH1)与所列举的另一VH区(例如VH2)可以具有相同或不同的抗原结合特性和/或相同或不同的序列。
如本文所用，“Kabat编号”和类似术语在本领域中已被认知并且是指对抗体或其抗原结合片段的重链和轻链可变区中的氨基酸残基进行编号的系统。在一些方面，CDR可以根据Kabat编号系统来确定(参见例如Kabat EA和Wu TT(1971)Ann NY Acad Sci 190:382-391，以及Kabat EA等人,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版,美国卫生与公众服务部(U.S.Department of Health and Human Services),NIH公布号91-3242)。使用Kabat编号系统，抗体重链分子内的CDR通常存在于氨基酸位置31至35(CDR1)，其任选地在35(在Kabat编号方案中称为35A和35B)之后可以包括一个或两个额外氨基酸；氨基酸位置50至65(CDR2)；和氨基酸位置95至102(CDR3)。使用Kabat编号系统，抗体轻链分子内的CDR通常存在于氨基酸位置24至34(CDR1)、氨基酸位置50至56(CDR2)和氨基酸位置89至97(CDR3)。
如本文所用，术语“恒定区”或“恒定结构域”可互换地用于指抗原结合多肽复合物、抗体或其抗原结合片段的一部分，例如不直接参与抗体与抗原结合，但可以展现各种效应功能(诸如与Fc区相互作用)的轻链和/或重链的羧基端部分。相对于可变区，恒定区一般具有更保守的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物、抗体或其抗原结合片段包含足够达成抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和补体依赖性细胞毒性(CDC)的恒定区或其一部分。
如本文所用，术语“片段可结晶区域”、“Fc区”或“Fc结构域”在本文中可互换地用于指与细胞表面受体(称为Fc受体)和补体系统的一些蛋白质相互作用的抗体的尾部区域。Fc区通常包含CH2和CH3区域和任选的免疫球蛋白铰链。
如本文所用，术语“免疫球蛋白铰链”、“铰链”、“铰链结构域”或“铰链区”可互换地用于指抗原结合多肽复合物、抗体或其抗原结合片段的Fab与Fc部分之间的重链区段。铰链提供有助于抗体发挥正常功能(例如用于使两种抗原交联或用于结合同一抗原分子上的两个抗原决定簇)的结构、位置和柔性。免疫球蛋白铰链被分成上、中和下铰链区，所述铰链区可以基于结构和/或基因组件隔开。本发明的免疫球蛋白铰链可以含有这些区域中的一者、两者或所有三者。在结构上，上铰链区从CH1的C端延伸至第一个铰链二硫键。中铰链区从铰链中的第一个半胱氨酸延伸至最后一个半胱氨酸。下铰链区从CH2的最后一个半胱氨酸延伸至甘氨酸。存在于铰链中的半胱氨酸形成连接免疫球蛋白单体的链间二硫键。
如本文所用，术语“Fab”是指抗体中与抗原结合的区域。其通常由重链和轻链中的每一者的一个恒定结构域和一个可变结构域构成。
如本文所用，术语“重链”是指抗原结合多肽复合物、抗体或其抗原结合片段的一部分，其通常由重链可变区(VH)、重链恒定区1(CH1)、重链恒定区2(CH2)和重链恒定区3(CH3)构成。典型抗体由两条重链和两条轻链构成。当参考抗体使用时，重链可以指基于恒定区的氨基酸序列的任何不同类型，例如alpha(α)、delta(δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)和mu(μ)，其分别产生抗体的IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类别，包括IgG子类别，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。重链氨基酸序列在本领域中是已知的。在一些方面，重链是人类重链。
如本文所用，术语“轻链”是指抗原结合多肽复合物、抗体或其抗原结合片段的一部分，其通常由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)构成。典型抗体由两条轻链和两条重链构成。当参考抗体使用时，轻链可以指基于恒定区的氨基酸序列的任何不同类型，例如kappa(κ)或lambda(λ)。轻链氨基酸序列在本领域中是已知的。在一些方面，轻链是人类轻链。
术语“嵌合”抗体或其抗原结合片段是指其中氨基酸序列来源于两种或更多种物种的抗体或其抗原结合片段。通常，轻链和重链两者的可变区对应于来源于一个哺乳动物物种(例如小鼠、大鼠、兔等)的具有所需特异性、亲和力和能力的抗体或其抗原结合片段的可变区，而恒定区与来源于另一物种(通常人类)的抗体或其抗原结合片段的序列同源以避免在那个物种中引发免疫反应。
术语“人源化”抗体或其抗原结合片段是指非人类(例如鼠类)抗体或抗原结合片段形式，其为含有极少非人类(例如鼠类)序列的特定免疫球蛋白链、嵌合免疫球蛋白或其片段。通常，人源化抗体或其抗原结合片段是人类免疫球蛋白，其中来自互补决定区(CDR)的残基经来自非人类物种(例如小鼠、大鼠、兔、仓鼠)的具有所需特异性、亲和力和能力的CDR的残基置换(Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-327(1988)；Verhoeyen等人,Science239:1534-1536(1988))。在一些方面，人类免疫球蛋白的Fv构架区(FR)残基经来自非人类物种的具有所需特异性、亲和力和能力的抗体或片段中的对应残基置换。人源化抗体或其抗原结合片段可以通过取代Fv构架区中和/或被置换的非人类残基内的其它残基来进一步修饰，以改进并优化抗体或其抗原结合片段的特异性、亲和力和/或能力。一般来说，人源化抗体或其抗原结合片段将包含基本上所有可变结构域，至少一个并且通常两个或三个可变结构域，所述可变结构域含有与非人类免疫球蛋白对应的所有或基本上所有CDR区，而所有或基本上所有的FR区是人类免疫球蛋白共有序列的那些FR区。人源化抗体或其抗原结合片段还可以包含恒定区(通常是人类免疫球蛋白的恒定区)的至少一部分。用于产生人源化抗体的方法的实例是已知的并且描述于美国专利号5,225,539；Roguska等人,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,91(3):969-973(1994)；以及Roguska等人,Protein Eng.9(10):895-904(1996)中。
如本文所用，术语“人类”抗体或其抗原结合片段意指具有来源于人类免疫球蛋白基因座的氨基酸序列的抗体或其抗原结合片段，其中此种抗体或抗原结合片段是使用本领域中已知的重组技术来制备。人类抗体或其抗原结合片段的这种定义包括完整或全长抗体及其片段。
“分离”的多肽复合物、抗体、其抗原结合片段、多核苷酸、载体或细胞是呈未在自然界中发现的形式的多肽复合物、抗体、其抗原结合片段、多核苷酸、载体或细胞。分离的多肽复合物、抗体、其抗原结合片段、多核苷酸、载体或细胞包括已纯化至一定程度以使得其不再呈其在自然界中发现的形式的那些。在一些方面，分离的多肽复合物、抗体、其抗原结合片段、多核苷酸、载体或细胞是基本上纯的。如本文所用，“基本上纯的”是指材料为至少50％纯(即，不含污染物)、至少90％纯、至少95％纯、至少98％纯或至少99％纯。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换地用于指任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可以是线性或分支的，其可以包含经修饰的氨基酸，并且可以间插有非氨基酸。所述术语还涵盖经天然修饰或通过干预修饰的氨基酸聚合物；例如二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其它操纵或修饰，诸如与标记组分缀合。所述定义内还包括例如含有氨基酸的一种或多种类似物(包括例如非天然氨基酸等)以及本领域中已知的其它修饰的多肽。应了解，由于本发明的多肽基于抗体，因此在一些方面，多肽可以呈单链或缔合的链形式存在。
应了解，选择性连接词(例如“或”)的使用意指替代方案中的一者、两者或它们的任何组合。如本文所用，不定冠词“一个(a)”或“一种(an)”是指任何所叙述或所列举组分中的“一者或多者”。
如本文所用，术语“和/或”应视为两种规定特征或组分中的每一者具有或不具有另一者的特定公开内容。因此，如在诸如本文中“A和/或B”的短语中所用的术语“和/或”意图包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独)和“B”(单独)。同样，如在诸如“A、B和/或C”的短语中所用的术语“和/或”意图涵盖以下方面中的每一者：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；以及C(单独)。
应理解，每当本文中用语言“包含”、“具有”等描述方面时，则还提供了用术语“由……组成”和/或“基本上由……组成”所描述的类似方面。
如本文所用，术语“约”是指在由本领域普通技术人员所判定的特定值或组成的可接受的误差范围内的值或组成，所述误差范围将部分地取决于如何测量或测定所述值或组成，即，测量系统的局限性。举例来说，“约”可以意指依据本领域中的实践，在1个或超过1个标准偏差内。或者，“约”可以意指至多10％或20％的范围(即，±10％或±20％)。举例来说，约3mg可以包括2.7mg与3.3mg之间(10％)或2.4mg与3.6mg之间(20％)的任何数值。此外，尤其在生物系统或过程方面，所述术语可以意指值的至多一个数量级或至多5倍。当申请和权利要求书中提供特定值或组成时，除非另有陈述，否则“约”的含义应假定为在所述特定值或组成的可接受误差范围内。
如本文中所描述，除非另有指示，否则任何数值范围、浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应理解为包括所叙述范围内的任何整数值及(在适当时)其分数(诸如整数之十分之一和百分之一)。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本公开相关领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。举例来说，生物医学和分子生物学简明辞典(Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology),Juo,Pei-Show,第2版,2002,CRC Press；细胞和分子生物学辞典(The Dictionary of Cell and MolecularBiology),第5版,2013,Academic Press；以及生物化学和分子生物学牛津辞典(OxfordDictionary Of Biochemistry And Molecular Biology)2006,Oxford University Press向技术人员提供本公开中所用的许多术语的通用词典。
单位、前缀和符号以其国际单位制(Système International de Unites，SI)公认形式表示。数值范围包含界定所述范围的数值。本文所提供的标题并非本发明的各个方面的限制，而是为了在总体上参考说明书。因此，本文所定义的术语通过参考整个说明书更充分定义。
各个方面进一步详述于以下章节中。
II.抗原结合多肽复合物
在一些方面，本发明涉及具有本文中进一步描述的某些结构特征的抗原结合多肽复合物。在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)包含抗CD3区域(例如CDR、VH、VL、scFv、Fab、scFab、重链或轻链)以及肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)配体的细胞外结构域的一种或多种三聚体。在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物还包含一个或多个抗肿瘤相关抗原(TAA)区域，诸如一个或多个抗HER2结合区(例如CDR、VH、VL、scFv、Fab、scFab、重链或轻链)。在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物还包含一个或多个抗免疫刺激受体区域，诸如一个或多个抗CD28结合区(例如CDR、VH、VL、scFv、Fab、scFab、重链或轻链)。在一些方面，一个或多个恒定区(例如CH1和/或CL)也可以并入抗原结合多肽复合物的多肽中。
A.TNFSF配体的细胞外结构域以及接头
如本文所用，“肿瘤坏死因子超家族配体的细胞外结构域”或“TNFSF配体的细胞外结构域”是指包含形成三聚体的肿瘤坏死超家族的配体的一部分(也称为TNF同源结构域或胞外结构域)的肽。因此，TNFSF配体的细胞外结构域还可以包括全长TNFSF配体序列。在一些方面，本文所描述的抗原结合多肽复合物的结构可以指TNFSF配体的细胞外结构域，术语TNF1、TNF2和/或TNF3分别表示TNFSF配体的第一、第二和/或第三细胞外结构域。
TNFSF配体的细胞外结构域的实例包括但不限于OX40L(OX40配体，TNFSF4)、4-1BBL(4-1BB配体，TNFSF9)、TNF、TNF相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)、CD40L(TNFSF5)、CD27L(TNFSF7)、CD30L(TNFSF8)、FasL(TNFSF6)、EDAM、LTA(TNFSF1)、LTB(TNFSF3)、CD153(TNFSF8)、RANKL(TNFSF11)、TWEAK(TNFSF12)、APRIL(TNFSF13)、BAFF(TNFSF13B)、LIGHT(TNFSF14)、VEGI(TNFSF15)和GITRL(TNFSF18)。在一些方面，TNFSF配体的细胞外结构域是OX40L或4-1BBL。在一些方面，TNFSF配体的细胞外结构域是OX40L。在一些方面，OX40L包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。举例来说，OX40L可以包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些方面，TNFSF配体的细胞外结构域是4-1BBL。在一些方面，4-1BBL包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。举例来说，4-1BBL可以包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
在一些方面，本公开的抗原结合多肽复合物包含TNFSF配体的三种细胞外结构域的三聚体。在一些方面，三聚体包含TNFSF配体的细胞外结构域的相同类型(例如三个OX40L或三个4-1BBL(均三聚体))或由其组成，或三聚体可以包含TNFSF配体的两个或三个不同细胞外结构域的混合物或由其组成(例如一个OX40L和两个4-1BBL，或两个OX40L和一个4-1BBL，以任何次序)。在一些方面，抗原结合多肽复合物包含TNFSF配体的细胞外结构域的一个三聚体或由其组成(例如均三聚体)。举例来说，抗原结合多肽复合物可以包含三个OX40L结构域的三聚体，其中每个OX40L包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。举例来说，三聚体中的每个OX40L可以包含SEQ ID NO:1的序列或由其组成。举例来说，抗原结合多肽复合物可以包含三个4-1BBL结构域的三聚体，其中每个4-1BBL包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:2的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。举例来说，三聚体中的每个4-1BBL可以包含SEQ ID NO:2的序列或由其组成。在一些方面，本公开的抗原结合多肽复合物包含TNFSF配体的细胞外结构域的两个三聚体(例如三聚体的二聚体，诸如均三聚体的二聚体)。举例来说，抗原结合多肽复合物可以包含本文所描述的OX40L三聚体或4-1BBL三聚体的二聚体。
在一些方面，TNFSF配体的细胞外结构域包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:1或2的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:1或2具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。举例来说，TNFSF配体的细胞外结构域可以包含SEQ ID NO:1或2的序列或由其组成。TNFSF配体的细胞外结构域的其它序列是已知的并且包括例如登录号XP_016857719.1、XP_016857718.1、XP_016857717.1、XP_011508266.2、NP_001284491.1、NP_003317.1、NP_003802.1、P41273.1、6A3V_X、6A3V_W、6A3V_V、6A3V_U、6A3V_S、6A3V_R、6A3V_Q、6A3V_P、6A3V_O、6A3V_N、6A3V_M、6A3V_L和6A3V_K。
在一些方面，TNFSF配体的细胞外结构域的三聚体在TNFSF配体的细胞外结构域中的一者或多者之间含有氨基酸接头(例如具有由TNF1-L1-TNF2-L2-TNF3表示的结构，其中L1和L2是氨基酸接头)。在一些方面，氨基酸接头包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:3-10和148-175中的任一者的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:3-10和148-175中的任一者具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。举例来说，氨基酸接头可以包含SEQID NO:3-10和148-175中的任一者的氨基酸序列或由其组成。在一些方面，氨基酸接头包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:3-10中的任一者的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:3-10中的任一者具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。举例来说，氨基酸接头可以包含SEQ ID NO:3-10中的任一者的氨基酸序列或由其组成。在一些方面，氨基酸接头包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:3具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列。举例来说，氨基酸接头可以包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或由其组成。在一些方面，氨基酸接头包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:10具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列。举例来说，氨基酸接头可以包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列或由其组成。举例来说，氨基酸接头可以包含SEQ IDNO:4-10中的任一者的氨基酸序列或由其组成。在一些方面，TNFSF配体的细胞外结构域是OX40L(例如其包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列)，并且氨基酸接头包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:3的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:3具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。举例来说，三聚体中的TNFSF配体的细胞外结构域可以包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由其组成，并且氨基酸接头可以包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或由其组成。在一些方面，TNFSF配体的细胞外结构域是4-1BBL(例如其包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:2具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列)，并且氨基酸接头包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:4-10中的任一者，或与SEQ ID NO:4-10中的任一者具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。举例来说，三聚体中的TNFSF配体的细胞外结构域可以包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由其组成，并且氨基酸接头可以包含SEQ ID NO:4-10中的任一者的氨基酸序列或由其组成。在一些方面，TNFSF配体的细胞外结构域是4-1BBL(例如其包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:2具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列)，并且氨基酸接头包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:10，或与SEQ ID NO:10具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。举例来说，三聚体中的TNFSF配体的细胞外结构域可以包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由其组成，并且氨基酸接头可以包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列或由其组成。
在一些方面，TNFSF配体的细胞外结构域的三聚体包含以下或由以下组成：SEQ IDNO:11-18中的任一者的序列，或与SEQ ID NO:11-18中的任一者具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。举例来说，TNFSF配体的细胞外结构域的三聚体可以包含SEQ ID NO:11-18中的任一者的序列或由其组成。举例来说，TNFSF配体的细胞外结构域的三聚体可以包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:11的序列，或与SEQ ID NO:11具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。举例来说，TNFSF配体的细胞外结构域的三聚体可以包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:18的序列，或与SEQ ID NO:18具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。在一些方面，TNFSF配体的细胞外结构域的三聚体的二聚体包含以下或由以下组成：TNFSF配体的细胞外结构域的两个三聚体，各自包含SEQ ID NO:11-18中的任一者的序列，或与SEQ ID NO:11-18中的任一者具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。在一些方面，二聚体的两个三聚体相同。在一些方面，一个三聚体不同于二聚体的另一个三聚体。举例来说，TNFSF配体的细胞外结构域的三聚体的二聚体可以包含以下或由以下组成：TNFSF配体的细胞外结构域的两个三聚体，各自包含SEQ ID NO:11-18中的任一者的序列。举例来说，TNFSF配体的细胞外结构域的三聚体的二聚体可以包含以下或由以下组成：TNFSF配体的细胞外结构域的两个三聚体，各自包含SEQ ID NO:11的序列，或与SEQ ID NO:11具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。举例来说，TNFSF配体的细胞外结构域的三聚体的二聚体可以包含以下或由以下组成：TNFSF配体的细胞外结构域的两个三聚体，各自包含SEQ ID NO:18的序列，或与SEQ ID NO:18具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。
B.CD3
在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)含有至少一个与CD3特异性结合的区域(例如CDR、VH、VL、scFv、Fab、scFab、重链或轻链)。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD3特异性结合的VL和/或VH。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:SEQ ID NO:19、25、182、294和312中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26、183、295和313中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和314中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:20具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:29具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:30具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:25具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:185具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:186具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:187具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:182具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:183具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:184具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:298具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:299具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:300具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:294具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:295具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:296具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:306具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:307具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:308具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:302具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:303具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:304具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ IDNO:184的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:298的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:299的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:300的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:294的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:295的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:296的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:306的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:307的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:308的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:312的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:313的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ IDNO:314的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者VH包含与SEQ ID NO:43或44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ IDNO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列；并且/或者VH包含与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。举例来说，VL可以包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；并且/或者VH可以包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列；并且/或者VH包含与SEQ ID NO:44具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。举例来说，VL可以包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；并且/或者VH可以包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。
在一些方面，VH包含与SEQ ID NO:188具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:297或305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者VH包含与SEQ ID NO:188、293或301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:297具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者VH包含与SEQ ID NO:293具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者VH包含与SEQ IDNO:301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD3特异性结合的轻链。在一些方面，轻链包含与SEQ ID NO:54或176具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。举例来说，轻链可以包含与SEQ ID NO:54具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。举例来说，轻链可以包含与SEQ ID NO:176具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。举例来说，轻链可以包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列。举例来说，轻链可以包含SEQ ID NO:176的氨基酸序列。在一些方面，轻链包含由与SEQ ID NO:55或177具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的多核苷酸编码的氨基酸序列。举例来说，轻链可以包含由与SEQID NO:55具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的多核苷酸编码的氨基酸序列。举例来说，轻链可以包含由与SEQ ID NO:177具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的多核苷酸编码的氨基酸序列。举例来说，轻链可以包含由SEQ ID NO:55的多核苷酸序列编码的氨基酸序列。举例来说，轻链可以包含由SEQ ID NO:177的多核苷酸序列编码的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD3特异性结合的重链。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:178具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD3特异性结合的重链和与CD3特异性结合的轻链。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:178具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且轻链包含与SEQ ID NO:176具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列；并且轻链包含SEQ ID NO:176的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD3特异性结合的重链。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:98具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:104具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:120具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD3特异性结合的重链和与CD3特异性结合的轻链。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:98具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且轻链包含与SEQ ID NO:54具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:104具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且轻链包含与SEQ IDNO:54具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:120具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且轻链包含与SEQ ID NO:54具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列；并且轻链包含SEQID NO:54的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；并且轻链包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列；并且轻链包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD3特异性结合的轻链。在一些方面，轻链包含与SEQ ID NO:56具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列(ahCD3_h34L链)。举例来说，轻链可以包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列。在一些方面，轻链包含由与SEQ ID NO:57具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的多核苷酸编码的氨基酸序列(ahCD3_h34L链)。举例来说，轻链可以包含由SEQ ID NO:57的多核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些方面，轻链包含与SEQ ID NO:54具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。举例来说，轻链可以包含SEQ IDNO:54的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD3特异性结合的重链。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:98具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:104具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:120具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD3特异性结合的重链和与CD3特异性结合的轻链。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:98具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且轻链包含与SEQ ID NO:54具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:104具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且轻链包含与SEQ IDNO:54具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:120具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且轻链包含与SEQ ID NO:54具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列；并且轻链包含SEQID NO:54的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；并且轻链包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列；并且轻链包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD3特异性结合的重链。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:188具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。举例来说，重链可以包含SEQ ID NO:188的氨基酸序列。
与CD3特异性结合的序列的其它实例是众所周知的并且描述于例如以下专利中：美国专利号11,186,650；11,155,621；11,098,120；11,072,656；11,007,267；10,968,276；10,961,315；10,906,978；10,865,251；10,759,858；10,690,678；10,688,186；10,669,33；10,640,572；10,174,124；9,850,304；9,657,102；8,551,478；7,994,289；和7,993,641。
C.肿瘤相关抗原和免疫活化受体
在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)含有与免疫活化受体或肿瘤相关抗原(TAA)特异性结合的一个或多个区(例如CDR、VH、VL、scFv、Fab、scFab、重链或轻链)。
如本文所用，“肿瘤相关抗原”或TAA是相较于正常细胞在癌细胞上更普遍的蛋白质或分子。TAA的实例包括但不限于酪氨酸蛋白激酶Met(cMet)、滋养层细胞表面抗原2(Trop2)、CD20、CD19、受体酪氨酸蛋白激酶erbB-2(HER2)、受体酪氨酸蛋白激酶erbB-3(HER3)、腺苷A2A受体(A2AR)、增殖诱导性配体(APRIL)、表皮生长因子受体(EGFR)、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)、B细胞活化因子(BAFF)、BAFF受体(BAFFR)、B细胞成熟抗原(BCMA)、布鲁顿氏酪氨酸激酶(BTK)、B和T淋巴细胞弱化子(BTLA)、B7DC(程序性死亡配体2)、B7同源物1(B7H1)、B7同源物4(B7H4)、δ样配体3(DLL3)、外核苷三磷酸二磷酸水解酶1(ENTPD1)、IgE受体的Fc片段1a(FCER1A)、IgE受体的Fc片段1(FCER1)、花生四烯酸5-脂氧合酶-活化蛋白(FLAP)、叶酸羟化酶1(FOLH1)、粘蛋白1(MUC-1)、CD133、粘蛋白16(MUC-16)、溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)、CD38、程序性死亡配体1(PD-L1)、CEA细胞粘附分子5(CEACAM5)、前列腺六跨膜上皮抗原1(STEAP1)和上皮细胞粘附分子(EpCAM)。在一些方面，TAA是HER2。
如本文所用，“免疫刺激受体”是用于扩增或抵消提供至T细胞(例如在与抗原/主要组织相容性复合物(MHC)相互作用之后，来自T细胞受体(TCR))的初始活化信号，从而影响T细胞分化、活化和/或增殖的细胞表面分子的异质群体。免疫刺激受体的实例是众所周知的并且包括但不限于CD3和CD28。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与TAA或免疫刺激受体(例如CD28)特异性结合的VH和/或VL。举例来说，抗原结合多肽复合物可以包含与CD28特异性结合的VH和/或VL。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34或40具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35或41具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36或42具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31或37具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32或38具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33或39具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ IDNO:34具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:33具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:40具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:41具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:42具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:37具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:38具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些方面，VL包含SEQID NO:47或49的氨基酸序列或与SEQ ID NO:47或49具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％同一性的序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:49具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的序列。举例来说，VL可以包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。举例来说，VL可以包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列。在一些方面，VH包含SEQ ID NO:46或48的氨基酸序列或与SEQ ID NO:46或48具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％同一性的序列。在一些方面，VH包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的序列。在一些方面，VH包含与SEQ ID NO:48具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的序列。举例来说，VH可以包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。举例来说，VH可以包含SEQ IDNO:48的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物包含：VL，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:47具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％同一性的序列)；和VH，其包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:46具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％同一性的序列)。在一些方面，抗原结合多肽复合物包含：VL，其包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:49具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％同一性的序列)；和VH，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:48具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％同一性的序列)。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与TAA或免疫刺激受体特异性结合的轻链。在一些方面，轻链包含与SEQ ID NO:50或52具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，轻链包含与SEQ ID NO:50具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，轻链包含与SEQID NO:52具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。举例来说，轻链可以包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列。举例来说，轻链可以包含SEQ IDNO:52的氨基酸序列。在一些方面，轻链包含由与SEQ ID NO:51或53具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的多核苷酸编码的氨基酸序列。在一些方面，轻链包含由与SEQ ID NO:51具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的多核苷酸编码的氨基酸序列。在一些方面，轻链包含由与SEQ ID NO:53具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的多核苷酸编码的氨基酸序列。举例来说，轻链可以包含由SEQ ID NO:51的多核苷酸序列编码的氨基酸序列。举例来说，轻链可以包含由SEQ ID NO:53的多核苷酸序列编码的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD20特异性结合的VH和/或VL。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:314或322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:315或323具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:316或324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:310或318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:311或319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:312或320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:314具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:315具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:316具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:310具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:311具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:312具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:323具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:313或321具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含与SEQ ID NO:309或317具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:313具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含与SEQ ID NO:309具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:321具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含与SEQ ID NO:317具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与cMet特异性结合的VH和/或VL。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:274具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:275具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:276具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQID NO:270具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:271具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:272具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:273具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含与SEQ ID NO:269具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与Trop2特异性结合的VH和/或VL。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:282具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:283具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:284具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQID NO:278具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:279具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:280具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:281具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含与SEQ ID NO:277具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD19特异性结合的VH和/或VL。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:290具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:291具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:292具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQID NO:286具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:287具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:288具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:289具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含与SEQ ID NO:285具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。
与TAA特异性结合的序列的其它实例是众所周知的并且包括但不限于GenBank登录号AAA39272.1、AAA39159.1、ABN79462.1、AVW80143.1、AVW80142.1、AVW80141.1、AAB34430.1、AAB34429.1、CAD45042.1、4CMH_C和4CMH_B。此类序列还描述于例如Wernly等人,Cells,9(2):295,2020；Arakawa等人,Journal of Biochemistry,120(3):657-662,1996；Cole等人,Transplantation,68(4):563-571,1999；Li等人,InternationalImmunopharmacology,62:299-308,2018；Castella等人,Methods&Clinical Development,12:134-144,2019；Sun等人,Molecular Immunology,41(9):929-938,2004；Iwaszkiewicz-Grzes等人,Cytotherapy,22(11):629-641,2020；Rosinski等人,Transplant Direct,1(2):e7,2015；Ellis等人,JImmunology,155(2):925-937,1995；Stevenson等人,Blood,77(5):1071-1079,1991；Chillemi等人,Molecular Medicine,19:99-108,2013，以及国际公布号WO 2020/076853中。
D.抗原结合多肽复合物结构
在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物包含第一多肽、第二多肽和第三多肽；其中所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；其中(i)所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L2-CH1-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；VH1-L2-CL-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；VH1-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L2-CH1-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；VL1-L2-CL-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；VL1-L7-CH1-L8-Fc；或VL1-L7-CL-L8-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L9-VH2-L10-Fc-L11-TNF1-L12-TNF2-L13-TNF3；或VH2-L14-VL2-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3；或(ii)所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L19-CH1-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；VH1-L19-CL-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；VL1-L19-CH1-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；或VL1-L19-CL-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L24-VH2-L25-Fc；或VH2-L26-VL2-L27-Fc；其中VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；CH1是免疫球蛋白重链恒定区1；CL是免疫球蛋白轻链恒定区；TNF1是肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)配体的第一细胞外结构域；TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且L1-L27是氨基酸接头。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L2-CH1-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L9-VH2-L10-Fc-L11-TNF1-L12-TNF2-L13-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L2-CH1-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L14-VL2-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L2-CL-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L9-VH2-L10-Fc-L11-TNF1-L12-TNF2-L13-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L2-CL-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L14-VL2-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L7-CH1-L8-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L9-VH2-L10-Fc-L11-TNF1-L12-TNF2-L13-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L7-CH1-L8-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L14-VL2-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L7-CL-L8-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L9-VH2-L10-Fc-L11-TNF1-L12-TNF2-L13-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L7-CL-L8-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L14-VL2-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-L2-CH1-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L9-VH2-L10-Fc-L11-TNF1-L12-TNF2-L13-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-L2-CH1-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L14-VL2-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-L2-CL-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L9-VH2-L10-Fc-L11-TNF1-L12-TNF2-L13-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-L2-CL-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L14-VL2-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-L7-CH1-L8-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L9-VH2-L10-Fc-L11-TNF1-L12-TNF2-L13-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-L7-CH1-L8-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L14-VL2-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-L7-CL-L8-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L9-VH2-L10-Fc-L11-TNF1-L12-TNF2-L13-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-L7-CL-L8-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L14-VL2-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L19-CH1-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L24-VH2-L25-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L19-CH1-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L26-VL2-L27-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L19-CL-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L24-VH2-L25-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L19-CL-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L26-VL2-L27-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-L19-CH1-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L24-VH2-L25-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-L19-CH1-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L26-VL2-L27-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-L19-CL-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L24-VH2-L25-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-L19-CL-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L26-VL2-L27-Fc。在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物包含第一多肽、第二多肽和第三多肽；其中所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；其中(i)所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CH1-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；VH1-CL-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；VH1-CH1-L6-Fc；VH1-CL-L7-Fc；VL1-CH1-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；VL1-CL-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；VL1-CH1-L6-Fc；或VL1-CL-L7-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L8-VH2-L9-Fc-L10-TNF1-L11-TNF2-L12-TNF3；或VH2-L13-VL2-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；或(ii)所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CH1-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；VH1-CL-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；VL1-CH1-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；或VL1-CL-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L22-VH2-L23-Fc；或VH2-L24-VL2-L25-Fc；其中VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；CH1是免疫球蛋白重链恒定区1；CL是免疫球蛋白轻链恒定区；TNF1是肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)配体的第一细胞外结构域；TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且L1-L26是氨基酸接头。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CH1-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L8-VH2-L9-Fc-L10-TNF1-L11-TNF2-L12-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CH1-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L13-VL2-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CL-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L8-VH2-L9-Fc-L10-TNF1-L11-TNF2-L12-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CL-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L13-VL2-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CH1-L6-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L8-VH2-L9-Fc-L10-TNF1-L11-TNF2-L12-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CH1-L6-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L13-VL2-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CL-L7-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L8-VH2-L9-Fc-L10-TNF1-L11-TNF2-L12-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CL-L7-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L13-VL2-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-CH1-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L8-VH2-L9-Fc-L10-TNF1-L11-TNF2-L12-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-CH1-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L13-VL2-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-CL-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L8-VH2-L9-Fc-L10-TNF1-L11-TNF2-L12-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-CL-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L13-VL2-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-CH1-L6-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L8-VH2-L9-Fc-L10-TNF1-L11-TNF2-L12-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-CH1-L6-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L13-VL2-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-CL-L7-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L8-VH2-L9-Fc-L10-TNF1-L11-TNF2-L12-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-CL-L7-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L13-VL2-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CH1-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L22-VH2-L23-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CH1-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L24-VL2-L25-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CL-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L22-VH2-L23-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CL-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L24-VL2-L25-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-CH1-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L22-VH2-L23-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-CH1-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L24-VL2-L25-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-CL-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L22-VH2-L23-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL1-CL-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L24-VL2-L25-Fc。
在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L2-CH1-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L9-VH2-L10-Fc-L11-TNF1-L12-TNF2-L13-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CH1-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L8-VH2-L9-Fc-L10-TNF1-L11-TNF2-L12-TNF3。
在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L2-CH1-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L14-VL2-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L7-CH1-L8-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L9-VH2-L10-Fc-L11-TNF1-L12-TNF2-L13-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L7-CH1-L8-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L14-VL2-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L19-CH1-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L24-VH2-L25-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L19-CH1-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L26-VL2-L27-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CH1-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L13-VL2-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L6-CH1-L7-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L8-VH2-L9-Fc-L10-TNF1-L11-TNF2-L12-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L6-CH1-L7-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L13-VL2-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L18-CH1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L23-VH2-L24-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L18-CH1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VH2-L25-VL2-L26-Fc。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VH1与CD3特异性结合。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和302中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与20、26、183、295和303中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和304中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQID NO:24具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:20具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:29具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:30具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:25具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:185具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:186具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:187具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:182具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:183具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:184具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:298具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:299具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:300具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQID NO:294具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:295具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:296具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:306具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:307具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:308具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:302具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:303具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:304具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含SEQ IDNO:22的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ IDNO:24的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:298的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:299的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:300的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:294的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:295的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:296的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:306的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:307的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:308的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:302的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:303的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:304的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:43或44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:44具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:297或305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:188、293或301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:297具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:293具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VH2与肿瘤相关抗原(TAA)或免疫刺激受体特异性结合。在一些方面，免疫刺激受体是CD28。在一些方面，TAA是酪氨酸蛋白激酶Met(cMet)、滋养层细胞表面抗原2(Trop2)、CD20、CD19、受体酪氨酸蛋白激酶erbB-2(HER2)、受体酪氨酸蛋白激酶erbB-3(HER3)、腺苷A2A受体(A2AR)、增殖诱导性配体(APRIL)、表皮生长因子受体(EGFR)、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)、B细胞活化因子(BAFF)、BAFF受体(BAFFR)、B细胞成熟抗原(BCMA)、布鲁顿氏酪氨酸激酶(BTK)、B和T淋巴细胞弱化子(BTLA)、B7DC(程序性死亡配体2)、B7同源物1(B7H1)、B7同源物4(B7H4)、δ样配体3(DLL3)、外核苷三磷酸二磷酸水解酶1(ENTPD1)、IgE受体的Fc片段1a(FCER1A)、IgE受体的Fc片段1(FCER1)、花生四烯酸5-脂氧合酶-活化蛋白(FLAP)、叶酸羟化酶1(FOLH1)、粘蛋白1(MUC-1)、CD133、粘蛋白16(MUC-16)、溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)、CD38、程序性死亡配体1(PD-L1)、CEA细胞粘附分子5(CEACAM5)、前列腺六跨膜上皮抗原1(STEAP1)和上皮细胞粘附分子(EpCAM)。在一些方面，TAA是HER2。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34或40具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:35或41具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36或42具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31或37具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:32或38具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33或39具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:40具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:41具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:42具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:37具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:38具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:47或49具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:46或48具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:49具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:48具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VH2与CD3特异性结合。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和312中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26、183、295和313中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和314中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:29具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:30具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:25具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:185具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:186具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:187具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:182具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:183具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:184具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:298具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:299具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:300具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:294具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:295具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:296具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:306具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:307具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:308具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:312具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:313具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:314具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:43或44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:44具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:297具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:293具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VH1与TAA或免疫刺激受体特异性结合。在一些方面，免疫刺激受体是CD28。在一些方面，TAA是cMet、Trop2、CD20、CD19、HER2、HER3、A2AR、APRIL、EGFR、FGFR、BAFF、BAFFR、BCMA、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、DLL3、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、MUC-1、CD133、MUC-16、LAMP1、CD38、PD-L1、CEACAM5、STEAP1或EpCAM。在一些方面，TAA是HER2。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34或40具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:35或41具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36或42具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31或37具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:32或38具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33或39具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ IDNO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:40具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:41具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:42具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:37具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:38具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:47或49具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:46或48具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:49具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:48具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含SEQ IDNO:46的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD20特异性结合的VH和/或VL。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:314或322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:315或323具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:316或324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:310或318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:311或319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:312或320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:314具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:315具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:316具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:310具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:311具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:312具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:323具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:313或321具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含与SEQ ID NO:309或317具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:313具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含与SEQ ID NO:309具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:321具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含与SEQ ID NO:317具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与cMet特异性结合的VH和/或VL。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:274具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:275具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:276具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQID NO:270具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:271具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:272具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:273具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含与SEQ ID NO:269具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与Trop2特异性结合的VH和/或VL。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:282具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:283具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:284具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQID NO:278具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:279具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:280具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:281具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含与SEQ ID NO:277具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD19特异性结合的VH和/或VL。在一些方面，VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:290具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:291具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:292具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含：CDR1，其包含与SEQID NO:286具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:287具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:288具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL包含与SEQ ID NO:289具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH包含与SEQ ID NO:285具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。
在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物包含第一多肽和第二多肽；其中(i)所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L37-VH2-L38-Fc-L39-TNF1-L40-TNF2-L41-TNF3；VH2-L42-VL2-L43-Fc-L44-TNF1-L45-TNF2-L46-TNF3；VL2-L47-VH2-L48-CL-L49-CH1-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3；或VL2-L54-CL-L55-VH2-L56-CH1-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3；VL2-L47-VH2-L48-CH1-L49-CL-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3；VL2-L54-CH1-L55-VH2-L56-CL-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3；VL2-VH2-L38-Fc-L39-TNF1-L40-TNF2-L41-TNF3；VH2-VL2-L43-Fc-L44-TNF1-L45-TNF2-L46-TNF3；VL2-VH2-L48-CL-L49-CH1-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3；VL2-CL-L55-VH2-L56-CH1-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3；VL2-VH2-L48-CH1-L49-CL-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3；或VL2-CH1-L55-VH2-L56-CL-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3；或(ii)所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L61-VH1-L62-Fc-L63-TNF1-L64-TNF2-L65-TNF3；VH1-L66-VL1-L67-Fc-L68-TNF1-L69-TNF2-L70-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CL-L73-CH1-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CH1-L73-CL-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L78-CL-L79-VH1-L80-CH1-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；或VL1-L78-CH1-L79-VH1-L80-CL-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L85-VH2-L86-Fc；VH2-L87-VL2-L88-Fc；VL2-L89-VH2-L90-CL-L91-CH1-L92-Fc；VL2-L89-VH2-L90-CH1-L91-CL-L92-Fc；VL2-L93-CL-L94-VH2-L95-CH1-L96-Fc；或VL2-L93-CH1-L94-VH2-L95-CL-L96-Fc；其中VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；CH1是免疫球蛋白重链恒定区1；CL是免疫球蛋白轻链恒定区；TNF1是TNFSF配体的第一细胞外结构域；TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且L1-L96是氨基酸接头。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L37-VH2-L38-Fc-L39-TNF1-L40-TNF2-L41-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH2-L42-VL2-L43-Fc-L44-TNF1-L45-TNF2-L46-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L47-VH2-L48-CL-L49-CH1-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L54-CL-L55-VH2-L56-CH1-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L47-VH2-L48-CH1-L49-CL-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L54-CH1-L55-VH2-L56-CL-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-VH2-L38-Fc-L39-TNF1-L40-TNF2-L41-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH2-VL2-L43-Fc-L44-TNF1-L45-TNF2-L46-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-VH2-L48-CL-L49-CH1-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-CL-L55-VH2-L56-CH1-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23
-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-VH2-L48-CH1-L49-CL-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-CH1-L55-VH2-L56-CL-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3。举例来说，第一多肽可以具有由以下表示的结构：VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3，并且第二多肽可以具有由以下表示的结构：VL2-L37-VH2-L38-Fc-L39-TNF1-L40-TNF2-L41-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L61-VH1-L62-Fc-L63-TNF1-L64-TNF2-L65-TNF3；VH1-L66-VL1-L67-Fc-L68-TNF1-L69-TNF2-L70-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CL-L73-CH1-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CH1-L73-CL-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L78-CL-L79-VH1-L80-CH1-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；或VL1-L78-CH1-L79-VH1-L80-CL-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L85-VH2-L86-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L61-VH1-L62-Fc-L63-TNF1-L64-TNF2-L65-TNF3；VH1-L66-VL1-L67-Fc-L68-TNF1-L69-TNF2-L70-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CL-L73-CH1-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CH1-L73-CL-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L78-CL-L79-VH1-L80-CH1-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；或VL1-L78-CH1-L79-VH1-L80-CL-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH2-L87-VL2-L88-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L61-VH1-L62-Fc-L63-TNF1-L64-TNF2-L65-TNF3；VH1-L66-VL1-L67-Fc-L68-TNF1-L69-TNF2-L70-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CL-L73-CH1-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CH1-L73-CL-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L78-CL-L79-VH1-L80-CH1-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；或VL1-L78-CH1-L79-VH1-L80-CL-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L89-VH2-L90-CL-L91-CH1-L92-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L61-VH1-L62-Fc-L63-TNF1-L64-TNF2-L65-TNF3；VH1-L66-VL1-L67-Fc-L68-TNF1-L69-TNF2-L70-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CL-L73-CH1-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CH1-L73-CL-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L78-CL-L79-VH1-L80-CH1-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；或VL1-L78-CH1-L79-VH1-L80-CL-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L93-CL-L94-VH2-L95-CH1-L96-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L61-VH1-L62-Fc-L63-TNF1-L64-TNF2-L65-TNF3；VH1-L66-VL1-L67-Fc-L68-TNF1-L69-TNF2-L70-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CL-L73-CH1-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CH1-L73-CL-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；或VL1-L78-CL-L79-VH1-L80-CH1-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；或VL1-L78-CH1-L79-VH1-L80-CL-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L89-VH2-L90-CH1-L91-CL-L92-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L61-VH1-L62-Fc-L63-TNF1-L64-TNF2-L65-TNF3；VH1-L66-VL1-L67-Fc-L68-TNF1-L69-TNF2-L70-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CL-L73-CH1-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CH1-L73-CL-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；或VL1-L78-CL-L79-VH1-L80-CH1-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；或VL1-L78-CH1-L79-VH1-L80-CL-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L93-CH1-L94-VH2-L95-CL-L96-Fc。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VH1与CD3特异性结合。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和302中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26、183、295和303中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和304中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:29具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:30具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:25具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:185具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:186具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:187具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:182具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:183具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:184具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:298具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:299具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:300具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:294具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:295具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:296具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:306具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:307具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:308具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:302具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:303具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:304具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:43或44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:44具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:297具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:293具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VH2与TAA或免疫刺激受体特异性结合。在一些方面，免疫刺激受体是CD28。在一些方面，TAA是cMet、Trop2、CD20、CD19、HER2、HER3、A2AR、APRIL、EGFR、FGFR、BAFF、BAFFR、BCMA、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、DLL3、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、MUC-1、CD133、MUC-16、LAMP1、CD38、PD-L1、CEACAM5、STEAP1或EpCAM。在一些方面，TAA是HER2。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34或40具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:35或41具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36或42具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31或37具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:32或38具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33或39具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:40具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:41具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:42具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:37具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:38具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:47或49具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:46或48具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:49具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:48具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。
在一些方面，VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:314或322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:315或323具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:316或324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:310或318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:311或319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:312或320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:314具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:315具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:316具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:310具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:311具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:312具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:323具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL2包含与SEQ ID NO:313或321具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH2包含与SEQ ID NO:309或317具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL2包含与SEQ ID NO:313具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH2包含与SEQ ID NO:309具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL2包含与SEQ ID NO:321具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH2包含与SEQ ID NO:317具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。
在一些方面，VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:274具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:275具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:276具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:270具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:271具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:272具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL2包含与SEQ ID NO:273具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH2包含与SEQ ID NO:269具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。
在一些方面，VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:282具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:283具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:284具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:278具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:279具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:280具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL2包含与SEQ ID NO:281具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH2包含与SEQ ID NO:277具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。
在一些方面，VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:290具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:291具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:292具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:286具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:287具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:288具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，VL2包含与SEQ ID NO:289具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者VH2包含与SEQ ID NO:285具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VH2与CD3特异性结合。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和302中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26、183、295和303中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和304中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:29具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:30具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:25具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:185具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:186具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:187具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:182具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:183具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:184具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:298具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:299具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:300具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:294具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:295具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:296具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:306具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:307具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:308具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:302具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:303具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:304具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:43或44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:44具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:297具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:293具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VH1与TAA或免疫刺激受体特异性结合。在一些方面，免疫刺激受体是CD28。在一些方面，TAA是cMet、Trop2、CD20、CD19、HER2、HER3、A2AR、APRIL、EGFR、FGFR、BAFF、BAFFR、BCMA、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、DLL3、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、MUC-1、CD133、MUC-16、LAMP1、CD38、PD-L1、CEACAM5、STEAP1或EpCAM。在一些方面，TAA是HER2。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34或40具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:35或41具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36或42具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31或37具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:32或38具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33或39具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:40具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:41具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:42具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:37具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:38具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:274具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:275具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:276具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:270具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:271具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:272具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:282具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:283具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:284具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQID NO:278具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:279具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:280具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:290具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:291具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:292具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:286具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:287具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:288具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:314具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:315具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:316具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:310具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:311具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:312具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:323具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:47或49具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:46或48具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:49具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:48具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:273具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:269具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:281具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:277具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:289具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:285具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:313具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:309具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1包含与SEQ ID NO:321具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1包含与SEQ ID NO:317具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽的VL1和VH1与CD3特异性结合，并且VL2和VH2与TAA(例如HER2)或免疫刺激受体(例如CD28)特异性结合。在一些方面，抗原结合多肽的VL1和VH1与CD3特异性结合，并且VL2和VH2与HER2特异性结合。在一些方面，抗原结合多肽的VL1和VH1与CD3特异性结合，并且VL2和VH2与CD28特异性结合。在一些方面，抗原结合多肽的VL2和VH2与CD3特异性结合，并且VL1和VH1与TAA(例如HER2)或免疫刺激受体(例如CD28)特异性结合。在一些方面，抗原结合多肽的VL2和VH2与CD3特异性结合，并且VL1和VH1与HER2特异性结合。在一些方面，抗原结合多肽的VL2和VH2与CD3特异性结合，并且VL1和VH1与CD28特异性结合。
在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物包含第一多肽和第二多肽；其中(i)所述第一多肽具有由以下表示的结构：Fc；VL1-L1-VL2-L2-VH2-L3-VH1-L4-Fc；VH1-L5-VH2-L6-VL2-L7-VL1-L8-Fc；Fc-L9-TNF1-L10-TNF2-L11-TNF3；VL1-L12-VL2-L13-VH2-L14-VH1-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3；或VH1-L19-VH2-L20-VL2-L21-VL1-L22-Fc-L23-TNF1-L24-TNF2-L25-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL3-L26-VL4-L27-VH4-L28-VH3-L29-Fc-L30-TNF1-L31-TNF2-L32-TNF3；或VH3-L33-VH4-L34-VL4-L35-VL3-L36-Fc-L37-TNF1-L38-TNF2-L39-TNF3；或(ii)所述第一多肽具有由以下表示的结构：Fc-L40-TNF1-L41-TNF2-L42-TNF3；VL1-L43-VL2-L44-VH2-L45-VH1-L46-Fc-L47-TNF1-L48-TNF2-L49-TNF3；或VH1-L50-VH2-L51-VL2-L52-VL1-L53-Fc-L54-TNF1-L55-TNF2-L56-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：Fc；VL3-L57-VL4-L58-VH4-L59-VH3-L60-Fc；或VH3-L61-VH4-L62-VL4-L63-VL3-L64-Fc；其中VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变区；VL4是第四免疫球蛋白轻链可变区；VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；VH3是第三免疫球蛋白重链可变区；VH4是第四免疫球蛋白重链可变区；Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；TNF1是TNFSF配体的第一细胞外结构域；TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且L1-L64是氨基酸接头。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：Fc；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL3-L26-VL4-L27-VH4-L28-VH3-L29-Fc-L30-TNF1-L31-TNF2-L32-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：Fc；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH3-L33-VH4-L34-VL4-L35-VL3-L36-Fc-L37-TNF1-L38-TNF2-L39-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VL2-L2-VH2-L3-VH1-L4-Fc；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL3-L26-VL4-L27-VH4-L28-VH3-L29-Fc-L30-TNF1-L31-TNF2-L32-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VL2-L2-VH2-L3-VH1-L4-Fc；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH3-L33-VH4-L34-VL4-L35-VL3-L36-Fc-L37-TNF1-L38-TNF2-L39-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VH1-L5-VH2-L6-VL2-L7-VL1-L8-Fc；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL3-L26-VL4-L27-VH4-L28-VH3-L29-Fc-L30-TNF1-L31-TNF2-L32-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VH1-L5-VH2-L6-VL2-L7-VL1-L8-Fc；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH3-L33-VH4-L34-VL4-L35-VL3-L36-Fc-L37-TNF1-L38-TNF2-L39-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：Fc-L9-TNF1-L10-TNF2-L11-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL3-L26-VL4-L27-VH4-L28-VH3-L29-Fc-L30-TNF1-L31-TNF2-L32-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：Fc-L9-TNF1-L10-TNF2-L11-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH3-L33-VH4-L34-VL4-L35-VL3-L36-Fc-L37-TNF1-L38-TNF2-L39-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L12-VL2-L13-VH2-L14-VH1-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL3-L26-VL4-L27-VH4-L28-VH3-L29-Fc-L30-TNF1-L31-TNF2-L32-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L12-VL2-L13-VH2-L14-VH1-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH3-L33-VH4-L34-VL4-L35-VL3-L36-Fc-L37-TNF1-L38-TNF2-L39-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VH1-L19-VH2-L20-VL2-L21-VL1-L22-Fc-L23-TNF1-L24-TNF2-L25-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL3-L26-VL4-L27-VH4-L28-VH3-L29-Fc-L30-TNF1-L31-TNF2-L32-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VH1-L19-VH2-L20-VL2-L21-VL1-L22-Fc-L23-TNF1-L24-TNF2-L25-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH3-L33-VH4-L34-VL4-L35-VL3-L36-Fc-L37-TNF1-L38-TNF2-L39-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：Fc-L40-TNF1-L41-TNF2-L42-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：Fc-L40-TNF1-L41-TNF2-L42-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL3-L57-VL4-L58-VH4-L59-VH3-L60-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：Fc-L40-TNF1-L41-TNF2-L42-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH3-L61-VH4-L62-VL4-L63-VL3-L64-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L43-VL2-L44-VH2-L45-VH1-L46-Fc-L47-TNF1-L48-TNF2-L49-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L43-VL2-L44-VH2-L45-VH1-L46-Fc-L47-TNF1-L48-TNF2-L49-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL3-L57-VL4-L58-VH4-L59-VH3-L60-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L43-VL2-L44-VH2-L45-VH1-L46-Fc-L47-TNF1-L48-TNF2-L49-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH3-L61-VH4-L62-VL4-L63-VL3-L64-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VH1-L50-VH2-L51-VL2-L52-VL1-L53-Fc-L54-TNF1-L55-TNF2-L56-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VH1-L50-VH2-L51-VL2-L52-VL1-L53-Fc-L54-TNF1-L55-TNF2-L56-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL3-L57-VL4-L58-VH4-L59-VH3-L60-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VH1-L50-VH2-L51-VL2-L52-VL1-L53-Fc-L54-TNF1-L55-TNF2-L56-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH3-L61-VH4-L62-VL4-L63-VL3-L64-Fc。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1、VH1、VL3和VH3与CD3特异性结合。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和302中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26、183、295和303中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和394中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ IDNO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:29具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:30具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:25具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:185具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:186具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:187具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQID NO:182具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:183具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:184具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ IDNO:29的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQID NO:26的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:298具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:299具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:300具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:294具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:295具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:296具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:306具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:307具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:308具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:302具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:303具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:304具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:43或44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:44具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:297具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:293具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2、VH2、VL4和VH4与TAA或免疫刺激受体特异性结合。在一些方面，免疫刺激受体是CD28。在一些方面，TAA是cMet、Trop2、CD20、CD19、HER2、HER3、A2AR、APRIL、EGFR、FGFR、BAFF、BAFFR、BCMA、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、DLL3、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、MUC-1、CD133、MUC-16、LAMP1、CD38、PD-L1、CEACAM5、STEAP1或EpCAM。在一些方面，TAA是HER2。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34或40具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35或41具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36或42具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含与SEQID NO:31或37具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32或38具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33或39具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:40具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:41具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:42具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:37具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:38具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含SEQ IDNO:31的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含SEQID NO:40的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQID NO:42的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含SEQID NO:37的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQID NO:39的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:274具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:275具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:276具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:270具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:271具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:272具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:282具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:283具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:284具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:278具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:279具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:280具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:290具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:291具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:292具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:286具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:287具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:288具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:314具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:315具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:316具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:310具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:311具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:312具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:323具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含与SEQ ID NO:47或49具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含与SEQ ID NO:46或48具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含与SEQID NO:49具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含与SEQ ID NO:48具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含与SEQ ID NO:273具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含与SEQ ID NO:269具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含与SEQ ID NO:281具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含与SEQ ID NO:277具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含与SEQ ID NO:289具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含与SEQ ID NO:285具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含与SEQ ID NO:313具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含与SEQ IDNO:309具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含与SEQ ID NO:321具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含与SEQ ID NO:317具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1、VH1、VL4和VH4与CD3特异性结合。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和302中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26、183、295和303中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和304中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:29具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:30具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:25具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:185具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:186具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:187具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含与SEQID NO:182具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:183具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:184具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ IDNO:29的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQID NO:26的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:298具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:299具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:300具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:294具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:295具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:296具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:306具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:307具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:308具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:302具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:303具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:304具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含与SEQ ID NO:43或44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含与SEQID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含与SEQ ID NO:44具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含与SEQ ID NO:297具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含与SEQ ID NO:293具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含与SEQ ID NO:305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含与SEQ ID NO:301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2、VH2、VL3和VH3与TAA或免疫刺激受体特异性结合。在一些方面，免疫刺激受体是CD28。在一些方面，TAA是cMet、Trop2、CD20、CD19、HER2、HER3、A2AR、APRIL、EGFR、FGFR、BAFF、BAFFR、BCMA、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、DLL3、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、MUC-1、CD133、MUC-16、LAMP1、CD38、PD-L1、CEACAM5、STEAP1或EpCAM。在一些方面，TAA是HER2。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34或40具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35或41具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36或42具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含与SEQID NO:31或37具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32或38具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33或39具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:40具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:41具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:42具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:37具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:38具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含SEQ IDNO:31的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含SEQID NO:40的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQID NO:42的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含SEQID NO:37的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQID NO:39的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:274具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:275具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:276具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:270具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:271具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:272具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:282具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:283具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:284具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:278具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:279具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:280具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:314具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:315具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:316具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:310具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:311具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:312具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:323具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含与SEQ ID NO:47或49具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含与SEQ ID NO:46或48具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含与SEQID NO:49具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含与SEQ ID NO:48具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含与SEQ ID NO:273具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含与SEQ ID NO:269具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含与SEQ ID NO:281具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含与SEQ ID NO:277具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含与SEQ ID NO:289具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含与SEQ ID NO:285具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含与SEQ ID NO:313具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含与SEQ IDNO:309具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含与SEQ ID NO:321具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含与SEQ ID NO:317具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2、VH2、VL4和VH4与CD3特异性结合。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和302中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26、183、295和303中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和304中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:29具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:30具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:25具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:185具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:186具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:187具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含与SEQID NO:182具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:183具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:184具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ IDNO:29的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQID NO:26的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:298具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:299具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:300具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:294具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:295具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:296具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:306具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:307具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:308具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:302具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:303具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:304具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含与SEQ ID NO:43或44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含与SEQID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含与SEQ ID NO:44具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含与SEQ ID NO:297具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含与SEQ ID NO:293具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL4包含与SEQ ID NO:305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH4包含与SEQ ID NO:301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1、VH1、VL3和VH3与TAA或免疫刺激受体特异性结合。在一些方面，免疫刺激受体是CD28。在一些方面，TAA是cMet、Trop2、CD20、CD19、HER2、HER3、A2AR、APRIL、EGFR、FGFR、BAFF、BAFFR、BCMA、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、DLL3、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、MUC-1、CD133、MUC-16、LAMP1、CD38、PD-L1、CEACAM5、STEAP1或EpCAM。在一些方面，TAA是HER2。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34或40具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35或41具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36或42具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQID NO:31或37具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32或38具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33或39具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:40具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:41具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:42具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:37具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:38具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含SEQ IDNO:31的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含SEQID NO:40的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQID NO:42的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含SEQID NO:37的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQID NO:39的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:274具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:275具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:276具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:270具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:271具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:272具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:282具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:283具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:284具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:278具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:279具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:280具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:290具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:291具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:292具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:286具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:287具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:288具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:314具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:315具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:316具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:310具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:311具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:312具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:322具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:323具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:324具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:318具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:319具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:320具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:47或49具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:46或48具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQID NO:49具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:48具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:273具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:269具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:281具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:277具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:289具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:285具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:313具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQID NO:309具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:321具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:317具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2、VH2、VL3和VH3与CD3特异性结合。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和302中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26、183、295和303中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和304中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:29具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:30具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:25具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:185具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:186具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:187具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含与SEQID NO:182具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:183具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:184具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ IDNO:29的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQID NO:26的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:298具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:299具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:300具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:294具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:295具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:296具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:306具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:307具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:308具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:302具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:303具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:304具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含与SEQ ID NO:43或44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含与SEQID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含与SEQ ID NO:44具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含与SEQ ID NO:297具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含与SEQ ID NO:293具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VL3包含与SEQ ID NO:305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2和VH3包含与SEQ ID NO:301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1、VH1、VL4和VH4与TAA或免疫刺激受体特异性结合。在一些方面，免疫刺激受体是CD28。在一些方面，TAA是cMet、Trop2、CD20、CD19、HER2、HER3、A2AR、APRIL、EGFR、FGFR、BAFF、BAFFR、BCMA、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、DLL3、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、MUC-1、CD133、MUC-16、LAMP1、CD38、PD-L1、CEACAM5、STEAP1或EpCAM。在一些方面，TAA是HER2。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34或40具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35或41具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36或42具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含与SEQID NO:31或37具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32或38具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33或39具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:40具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:41具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:42具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:37具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:38具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含SEQ IDNO:31的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含SEQID NO:40的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQID NO:42的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含SEQID NO:37的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQID NO:39的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:274具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:275具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:276具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:270具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:271具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:272具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:282具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:283具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:284具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:278具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:279具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:280具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:290具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:291具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:292具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:286具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:287具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:288具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:314具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:315具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:316具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:310具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:311具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:312具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:323具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含与SEQ IDNO:47或49具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含与SEQ ID NO:46或48具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含与SEQID NO:49具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含与SEQ ID NO:48具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含与SEQ ID NO:273具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含与SEQ ID NO:269具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含与SEQ ID NO:281具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含与SEQ ID NO:277具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含与SEQ ID NO:289具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含与SEQ ID NO:285具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含与SEQ ID NO:313具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含与SEQ IDNO:309具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL4包含与SEQ ID NO:321具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH4包含与SEQ ID NO:317具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物包含第一多肽和第二多肽；其中(i)所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-Fc-L7-TNF1-L8-TNF2-L9-TNF3；或VH1-L10-VL1-L11-Fc-L12-TNF1-L13-TNF2-L14-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L15-VL3-L16-VH3-L17-VH2-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；或VH2-L22-VH3-L23-VL3-L24-VL2-L25-Fc-L26-TNF1-L27-TNF2-L28-TNF3；或(ii)所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L29-VH1-L30-Fc-L31-TNF1-L32-TNF2-L33-TNF3；或VH1-L34-VL1-L35-Fc-L36-TNF1-L37-TNF2-L38-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L39-VL3-L40-VH3-L41-VH2-L42-Fc；或VH2-L43-VH3-L44-VL3-L45-VL2-L46-Fc；其中VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变区；VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；VH3是第三免疫球蛋白重链可变区；Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；TNF1是TNFSF配体的第一细胞外结构域；TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且L1-L46是氨基酸接头。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L15-VL3-L16-VH3-L17-VH2-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH2-L22-VH3-L23-VL3-L24-VL2-L25-Fc-L26-TNF1-L27-TNF2-L28-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VH1-L3-VL1-L4-Fc；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L15-VL3-L16-VH3-L17-VH2-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VH1-L3-VL1-L4-Fc；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH2-L22-VH3-L23-VL3-L24-VL2-L25-Fc-L26-TNF1-L27-TNF2-L28-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L5-VH1-L6-Fc-L7-TNF1-L8-TNF2-L9-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L15-VL3-L16-VH3-L17-VH2-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L5-VH1-L6-Fc-L7-TNF1-L8-TNF2-L9-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH2-L22-VH3-L23-VL3-L24-VL2-L25-Fc-L26-TNF1-L27-TNF2-L28-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VH1-L10-VL1-L11-Fc-L12-TNF1-L13-TNF2-L14-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L15-VL3-L16-VH3-L17-VH2-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VH1-L10-VL1-L11-Fc-L12-TNF1-L13-TNF2-L14-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH2-L22-VH3-L23-VL3-L24-VL2-L25-Fc-L26-TNF1-L27-TNF2-L28-TNF3。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L29-VH1-L30-Fc-L31-TNF1-L32-TNF2-L33-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L39-VL3-L40-VH3-L41-VH2-L42-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L29-VH1-L30-Fc-L31-TNF1-L32-TNF2-L33-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH2-L43-VH3-L44-VL3-L45-VL2-L46-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VH1-L34-VL1-L35-Fc-L36-TNF1-L37-TNF2-L38-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L39-VL3-L40-VH3-L41-VH2-L42-Fc。在一些方面，所述第一多肽具有由以下表示的结构：VH1-L34-VL1-L35-Fc-L36-TNF1-L37-TNF2-L38-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH2-L43-VH3-L44-VL3-L45-VL2-L46-Fc。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1、VH1、VL2和VH2与CD3特异性结合。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和302中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26、183、295和303中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和304中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:29具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:30具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:25具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:185具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:186具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:187具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含：CDR1，其包含与SEQID NO:182具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:183具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:184具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ IDNO:29的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQID NO:26的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ IDNO:184的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:298具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:299具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:300具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:294具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:295具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:296具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:306具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:307具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:308具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:302具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:303具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:304具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含与SEQ ID NO:43或44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含与SEQID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含与SEQ ID NO:44具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含与SEQ ID NO:297具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含与SEQ ID NO:293具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL2包含与SEQ ID NO:305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH2包含与SEQ ID NO:301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3和VH3与TAA或免疫刺激受体特异性结合。在一些方面，免疫刺激受体是CD28。在一些方面，TAA是cMet、Trop2、CD20、CD19、HER2、HER3、A2AR、APRIL、EGFR、FGFR、BAFF、BAFFR、BCMA、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、DLL3、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、MUC-1、CD133、MUC-16、LAMP1、CD38、PD-L1、CEACAM5、STEAP1或EpCAM。在一些方面，TAA是HER2。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34或40具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:35或41具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36或42具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31或37具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:32或38具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33或39具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:40具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:41具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:42具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:37具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:38具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:274具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:275具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:276具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:270具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:271具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:272具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:282具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:283具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:284具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含：CDR1，其包含与SEQID NO:278具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:279具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:280具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:290具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:291具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:292具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:286具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:287具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:288具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:314具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:315具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:316具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:310具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:311具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:312具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:323具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含与SEQ ID NO:47或49具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含与SEQ ID NO:46或48具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含与SEQ ID NO:49具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含与SEQ ID NO:48具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含SEQ IDNO:46的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含与SEQ ID NO:273具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含与SEQ ID NO:269具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含与SEQ ID NO:281具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含与SEQ ID NO:277具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含与SEQ ID NO:289具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含与SEQ ID NO:285具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含与SEQ ID NO:313具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含与SEQ ID NO:309具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL3包含与SEQ ID NO:321具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH3包含与SEQ ID NO:317具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1、VH1、VL3和VH3与CD3特异性结合。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和302中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26、183、295和303中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和304中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:29具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:30具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:25具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:185具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:186具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:187具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQID NO:182具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:183具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:184具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ IDNO:29的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQID NO:26的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:298具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:299具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:300具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:294具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:295具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:296具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:306具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:307具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:308具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:302具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:303具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:304具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:43或44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ IDNO:44具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:297具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:293具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL1和VL3包含与SEQ ID NO:305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH1和VH3包含与SEQ ID NO:301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2和VH2与TAA或免疫刺激受体特异性结合。在一些方面，免疫刺激受体是CD28。在一些方面，TAA是cMet、Trop2、CD20、CD19、HER2、HER3、A2AR、APRIL、EGFR、FGFR、BAFF、BAFFR、BCMA、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、DLL3、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、MUC-1、CD133、MUC-16、LAMP1、CD38、PD-L1、CEACAM5、STEAP1或EpCAM。在一些方面，TAA是HER2。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34或40具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:35或41具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36或42具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31或37具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:32或38具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33或39具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:40具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:41具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:42具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:37具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:38具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:274具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:275具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:276具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:270具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:271具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:272具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:282具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:283具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:284具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQID NO:278具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:279具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:280具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:290具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:291具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:292具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:286具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:287具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:288具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:314具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:315具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:316具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:310具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:311具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ IDNO:312具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:323具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:47或49具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:46或48具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:49具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:48具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含SEQ IDNO:46的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:273具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:269具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:281具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:277具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:289具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:285具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:313具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:309具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，抗原结合多肽复合物的VL2包含与SEQ ID NO:321具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，并且/或者抗原结合多肽复合物的VH2包含与SEQ ID NO:317具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:23具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:29具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:30具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:185具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:186具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:187具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含SEQ IDNO:28的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ IDNO:30的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:298具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:299具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:300具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:306具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:307具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:308具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和302中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26、183、295和303中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和304中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:20具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:25具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:182具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:183具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:184具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含SEQ IDNO:25的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ IDNO:27的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:294具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:295具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:296具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:302具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:303具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:304具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，和/或与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含与SEQ ID NO:43或44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，和/或与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，和/或与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含与SEQ ID NO:44具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和/或与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和/或与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含与SEQ ID NO:297具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，和/或与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含与SEQ ID NO:293具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含与SEQ ID NO:305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，和/或与CD3特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含与SEQ ID NO:301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34或40具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35或41具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36或42具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:40具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:41具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:42具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQID NO:35的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:274具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:275具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:276具有至少90％同一性的氨基酸序列。具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:282具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:283具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:284具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:290具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:291具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:292具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:314具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:315具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:316具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:322具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:323具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:324具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31或37具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32或38具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33或39具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:37具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:38具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列。如本文所用，“至少90％同一性”包括与所叙述的参考序列具有至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％同一性。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ IDNO:32的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:270具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:271具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:272具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:278具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:279具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:280具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:286具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:287具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:288具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:310具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:312具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:313具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:318具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:319具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:320具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含与SEQ ID NO:47或49具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，和/或与TAA或免疫刺激受体特异性结合的VH包含与SEQ ID NO:46或48具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，和/或与TAA或免疫刺激受体特异性结合的VH包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含与SEQ ID NO:49具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列，和/或与TAA或免疫刺激受体特异性结合的VH包含与SEQ IDNO:48具有至少80％同一性(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含SEQ IDNO:47的氨基酸序列，和/或与TAA或免疫刺激受体特异性结合的VH包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，和/或与TAA或免疫刺激受体特异性结合的VH包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含与SEQ ID NO:273具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，和/或与TAA或免疫刺激受体特异性结合的VH包含与SEQ ID NO:269具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含与SEQ ID NO:281具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，和/或与TAA或免疫刺激受体特异性结合的VH包含与SEQ ID NO:277具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含与SEQID NO:289具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，和/或与TAA或免疫刺激受体特异性结合的VH包含与SEQ IDNO:285具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含与SEQ ID NO:313具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，和/或与TAA或免疫刺激受体特异性结合的VH包含与SEQ IDNO:309具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，与TAA或免疫刺激受体特异性结合的抗原结合多肽复合物的VL包含与SEQ ID NO:321具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，和/或与TAA或免疫刺激受体特异性结合的VH包含与SEQ ID NO:317具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
为避免疑问，本文所描述的所有抗原结合多肽复合物结构可以与本文所描述的任一个或多个靶标组合。本文中与本发明的抗原结合多肽复合物的靶标有关的任何和所有公开内容一般都适用，并且同等地、无条件地适用于本文所描述的每一种抗原结合多肽复合物。为避免疑问，本文所描述的每一种抗原结合多肽复合物中的VL1、VL2、VL3、VL4、VH1、VH2、VH3和/或VH4可以独立地与所述特别优选靶标中的任一者结合。
在一些方面，本文所描述的抗原结合多肽复合物结构的TNF1、TNF2和TNF3各自是TNFSF配体的细胞外结构域。在一些方面，TNF1、TNF2和TNF3选自由以下组成的组：OX40L(TNFSF4)、4-1BBL(TNFSF9)、TNF、TNF相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)、CD40L(TNFSF5)、CD27L(TNFSF7)、CD30L(TNFSF8)、FasL(TNFSF6)、EDAM、LTA(TNFSF1)、LTB(TNFSF3)、CD153(TNFSF8)、RANKL(TNFSF11)、TWEAK(TNFSF12)、APRIL(TNFSF13)、BAFF(TNFSF13B)、LIGHT(TNFSF14)、VEGI(TNFSF15)和GITRL(TNFSF18)。在一些方面，TNF1、TNF2和TNF3各自是OX40L或4-1BBL。在一些方面，TNF1、TNF2和TNF3各自是OX40L。在一些方面，TNF1、TNF2和TNF3各自是4-1BBL。在一些方面，TNF1、TNF2和TNF3分别是OX40L、OX40L和4-1BBL。在一些方面，TNF1、TNF2和TNF3分别是OX40L、4-1BBL和4-1BBL。在一些方面，TNF1、TNF2和TNF3分别是OX40L、4-1BBL和OX40L。在一些方面，TNF1、TNF2和TNF3分别是4-1BBL、OX40L和OX40L。在一些方面，TNF1、TNF2和TNF3分别是4-1BBL、OX40L和4-1BBL。在一些方面，TNF1、TNF2和TNF3分别是4-1BBL、4-1BBL和OX40L。可使用的示例性OX40L和4-1BBL序列是已知的并且在本文中进一步描述。
在一些方面，本文所描述的抗原结合多肽复合物包含含有与以下中的任一者具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO:58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、178、180和188-228。在一些方面，抗原结合复合物包含含有与SEQ ID NO:58具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有与SEQ ID NO:64具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有与SEQ IDNO:118具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有与SEQ ID NO:120具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有与SEQ ID NO:176具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有与SEQ ID NO:178具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有与SEQ ID NO:180具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有SEQ ID NO:118的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有SEQ ID NO:120的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有SEQ ID NO:176的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有SEQ ID NO:178的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有SEQ ID NO:180的氨基酸序列的多肽。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD3特异性结合的重链。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:178具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含与CD3特异性结合的重链和与CD3特异性结合的轻链。在一些方面，重链包含与SEQ ID NO:178具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；并且轻链包含与SEQ ID NO:176具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些方面，重链包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列；并且轻链包含SEQ ID NO:176的氨基酸序列。
在一些方面，抗原结合复合物包含：含有与SEQ ID NO:58具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列的多肽，以及含有与SEQ ID NO:64具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含：含有与SEQ ID NO:58具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列的多肽，以及含有与SEQ ID NO:178具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含：含有与SEQ ID NO:118具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列的多肽，以及含有与SEQ ID NO:120具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含：含有与SEQ ID NO:118具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列的多肽，以及含有与SEQ ID NO:180具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的氨基酸序列的多肽。
在一些方面，本文所描述的抗原结合多肽复合物包含含有由与以下中的任一者具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO:59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、179、181和229-268。在一些方面，抗原结合复合物包含含有由与SEQID NO:59具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有由与SEQ ID NO:65具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有由与SEQ ID NO:119具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有由与SEQ ID NO:121具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有由与SEQ ID NO:177具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有由与SEQ IDNO:179具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有由与SEQ ID NO:181具有至少80％(诸如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)同一性的多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有由SEQ ID NO:59的多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有由SEQ ID NO:65的多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有由SEQ ID NO:119的多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有由SEQ ID NO:121的多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有由SEQ ID NO:177的多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有由SEQ ID NO:179的多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗原结合复合物包含含有由SEQ ID NO:181的多核苷酸编码的氨基酸序列的多肽。
用于制备、筛选和工程改造含有此类序列的抗原结合复合物和抗体的分子生物学和重组DNA方法是众所周知的并且描述于例如Adair等人,Human Antibodies,5(1-2):41-47,1994；Kostelny等人,JImmunol,148(5):1547-1553(1992)；Shiraiwa等人,Methods,154:10-20,2019；以及Zola,“Monoclonal Antibodies:A Manual of Techniques”,1987,第1版,CRC Press；以及Steinitz,Human Antibodies,18(1-2):1-10,2009中。
在一些方面，本公开的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)包含免疫球蛋白铰链。在一些方面，免疫球蛋白铰链包含上铰链区、中铰链区、下铰链区或它们的组合。
如本文所用，“特异性结合”的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)或其区域或结构域是指其通过其抗原结合结构域与表位结合，并且结合需要抗原结合结构域与表位之间存在一些互补性。在经由抗原结合结构域与表位结合比与随机、不相关表位结合更容易的情况下，发生针对所述表位的特异性结合。
如本文所用，“表位”是指可以与抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)特异性结合的抗原的局部化区。表位可以是例如多肽的连续氨基酸(线性或连续表位)，或表位可以例如由一个或多个多肽的两个或更多个非连续区域聚集在一起得到(构形、非线性、不连续或非连续表位)。在一些方面，与抗体或其抗原结合片段结合的表位可以通过例如NMR光谱法、X射线衍射结晶学研究、ELISA分析、氢/氘交换耦联质谱法(例如液相色谱法-电喷雾质谱法)、基于阵列的寡肽扫描分析和/或诱变定位(例如定点诱变定位)来测定。参见例如GiegéR等人,(1994)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(第4部分):339-350；McPherson A(1990)Eur J Biochem 189:1-23；Chayen NE(1997)Structure 5:1269-1274；McPherson A(1976)J Biol Chem 251:6300-6303；Meth Enzymol(1985)第114和115卷,Wyckoff HW等人编,美国公布号2004/0014194),Bricogne G(1993)Acta CrystallogrDBiol Crystallogr 49(第1部分):37-60，Bricogne G(1997)Meth Enzymol276A:361-423,Carter CW和Roversi等人编,(2000)Acta Crystallogr DBiol Crystallogr 56(第10部分):1316-1323(X射线衍射结晶学研究)；以及Champe等人,(1995)J Biol Chem 270:1388-1394以及Cunningham BC和Wells JA(1989)Science 244:1081-1085(诱变定位)。
特异性结合可以由“结合亲和力”表示。结合亲和力是指反映结合对(例如抗原结合多肽复合物与抗原)成员之间的1:1相互作用的固有结合亲和力。结合亲和力可以按照本领域中已知的若干方式测量和/或表述，包括但不限于平衡解离常数(KD)。KD由koff/kon的商计算，其中kon是指例如抗原结合多肽复合物对于抗原的缔合速率常数，并且koff是指例如抗原结合多肽复合物自抗原的解离。kon和koff可以通过本领域普通技术人员已知的技术确定，诸如Octet BLI、或KinExA。
因此，在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物是抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，抗体或其抗原结合片段以约10μM至约1pM的平衡解离常数(KD)与抗原特异性结合。在一些方面，抗体是IgG、IgM、IgE、IgA或IgD。举例来说，抗体可以是IgG。举例来说，抗体可以是IgM。举例来说，抗体可以是IgE。举例来说，抗体可以是IgA。举例来说，抗体可以是IgD。在一些方面，IgG是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。举例来说，抗体可以是IgG1。举例来说，抗体可以是IgG2。举例来说，抗体可以是IgG3。举例来说，抗体可以是IgG4。在一些方面，抗原结合片段是Fab、scFab、Fab'、F(ab')2、Fv或scFv。举例来说，抗原结合片段可以是Fab。举例来说，抗原结合片段可以是scFab。举例来说，抗原结合片段可以是Fab'。举例来说，抗原结合片段可以是F(ab')2。举例来说，抗原结合片段可以是Fv。举例来说，抗原结合片段可以是scFv。在一些方面，抗体是人类抗体或人源化抗体。举例来说，抗体可以是人类抗体。举例来说，抗体可以是人源化抗体。
在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)是二价、三价、四价、五价或六价的。
III.氨基酸接头
在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)在抗原结合多肽复合物的一个或多个区之间包含一个或多个氨基酸接头。
如本文所用，“氨基酸接头”是指单个氨基酸或短氨基酸序列，其能够使本文所描述的本发明的两个多肽区域以维持或促进与多肽区域相关的功能的稳定方式接合。在一些方面，氨基酸接头在本文中的抗原结合多肽复合物的结构中由缩写“l”或“L”和数字表示(例如L1表示第一接头，L2表示第二接头，L3表示第三接头，L4表示第四接头，L5表示第五接头，L6表示第六接头，L7表示第七接头，L8表示第八接头，等等)。在一些方面，此类所列举的氨基酸接头(例如L1)的序列可以与所列举的任何其它氨基酸接头(例如L2等)相同或不同。此外，在一些方面，一个多肽中存在的所列举的氨基酸接头(例如本文所描述的抗原结合多肽复合物结构的第一多肽上的L1)的序列可与另一多肽中存在的相同列举的氨基酸接头(例如本文所描述的抗原结合多肽复合物结构的第二多肽、第三多肽等上的L1)相同或不同。
在一些方面，氨基酸接头的长度为0个氨基酸(即，氨基酸接头不存在)至约50个氨基酸(例如本文所描述的抗原结合多肽复合物结构的第一、第二、第三、第四等多肽的L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7、L8、L9、L10、L11、L12、L13、L14、L15、L16、L17、L18、L19、L20等至L96或更多中的一者或多者)。在一些方面，氨基酸接头的长度为0个氨基酸至约45个氨基酸、0个氨基酸至约40个氨基酸、0个氨基酸至约35个氨基酸、0个氨基酸至约30个氨基酸、0个氨基酸至约25个氨基酸、0个氨基酸至约20个氨基酸、0个氨基酸至约15个氨基酸、0个氨基酸至约10个氨基酸、0个氨基酸至约5个氨基酸、约1个氨基酸至约45个氨基酸、约1个氨基酸至约40个氨基酸、约1个氨基酸至约35个氨基酸、约1个氨基酸至约30个氨基酸、约1个氨基酸至约25个氨基酸、约1个氨基酸至约20个氨基酸、1个氨基酸至约15个氨基酸、约1个氨基酸至约10个氨基酸、约1个氨基酸至约5个氨基酸、约5个氨基酸至约50个氨基酸、约5个氨基酸至约45个氨基酸、约5个氨基酸至约40个氨基酸、约5个氨基酸至约35个氨基酸、约5个氨基酸至约30个氨基酸、约5个氨基酸至约25个氨基酸、约5个氨基酸至约20个氨基酸、约5个氨基酸至约15个氨基酸、约5个氨基酸至约10个氨基酸、约10个氨基酸至约50个氨基酸、约10个氨基酸至约45个氨基酸、约10个氨基酸至约40个氨基酸、约10个氨基酸至约35个氨基酸、约10个氨基酸至约30个氨基酸、约10个氨基酸至约25个氨基酸、约10个氨基酸至约20个氨基酸、约10个氨基酸至约15个氨基酸、约15个氨基酸至约50个氨基酸、约15个氨基酸至约45个氨基酸、约15个氨基酸至约40个氨基酸、约15个氨基酸至约35个氨基酸、约15个氨基酸至约30个氨基酸、约15个氨基酸至约25个氨基酸、约15个氨基酸至约20个氨基酸、约20个氨基酸至约50个氨基酸、约20个氨基酸至约45个氨基酸、约20个氨基酸至约40个氨基酸、约20个氨基酸至约35个氨基酸、约20个氨基酸至约30个氨基酸、约20个氨基酸至约25个氨基酸、约25个氨基酸至约50个氨基酸、约25个氨基酸至约45个氨基酸、约25个氨基酸至约40个氨基酸、约25个氨基酸至约35个氨基酸、约25个氨基酸至约30个氨基酸、约30个氨基酸至约50个氨基酸、约30个氨基酸至约45个氨基酸、约30个氨基酸至约40个氨基酸、约30个氨基酸至约35个氨基酸、约40个氨基酸至约50个氨基酸、约40个氨基酸至约45个氨基酸或约45个氨基酸至约50个氨基酸。
在一些方面，氨基酸接头具有0个氨基酸(即，氨基酸接头不存在)或约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11、约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约19、约20、约25、约30、约35、约40、约45或约50个氨基酸(例如本文所描述的抗原结合多肽复合物结构的第一、第二、第三、第四等多肽的L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7、L8、L9、L10、L11、L12、L13、L14、L15、L16、L17、L18、L19、L20等至L96或更多中的一者或多者)。
在一些方面，氨基酸接头由一个或多个氨基酸残基(例如本文所描述的抗原结合多肽复合物结构的第一、第二、第三、第四等多肽的L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7、L8、L9、L10、L11、L12、L13、L14、L15、L16、L17、L18、L19、L20等至L96或更多中的一者或多者)组成。在一些方面，氨基酸残基选自由以下组成的组：甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。
在一些方面，本发明的氨基酸接头无免疫原性。在一些方面，无免疫原性的接头由丝氨酸、甘氨酸和/或丙氨酸残基组成，或由丝氨酸和/或甘氨酸残基组成。在一些方面，本发明的氨基酸接头不含T细胞表位或共同的T细胞表位。
在一些方面，氨基酸接头由丙氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸中的一个或多个残基组成(例如本文所描述的抗原结合多肽复合物结构的第一、第二、第三、第四等多肽的L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7、L8、L9、L10、L11、L12、L13、L14、L15、L16、L17、L18、L19、L20等至L96或更多中的一者或多者)。
可与本发明的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)一起使用的氨基酸接头序列是众所周知的，并且可以使用常规分子生物学和重组DNA技术并入本发明的抗原结合多肽复合物中。参见例如Chen等人,Adv Drug Deliv Rev.,65(10):1357-1369,2013；以及Chichili等人,Protein Sci.,22(2):153-167,2013。
在一些方面，氨基酸接头(例如本文所描述的抗原结合多肽复合物结构的第一、第二、第三、第四等多肽的L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7、L8、L9、L10、L11、L12、L13、L14、L15、L16、L17、L18、L19、L20等至L96或更多中的一者或多者)具有SEQ ID NO:3-10和148-175中的任一者的序列，或与SEQ ID NO:3-10和148-175中的任一者具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。在一些方面，氨基酸接头包含SEQ IDNO:3-10和148-175中的任一者的序列或由其组成。在一些方面，氨基酸接头包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:10具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。在一些方面，氨基酸接头包含SEQ ID NO:10的序列或由其组成。在一些方面，氨基酸接头包含以下或由以下组成：与SEQID NO:3具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。在一些方面，氨基酸接头包含SEQ ID NO:3的序列或由其组成。
在一些方面，本文所描述的抗原结合多肽复合物的多肽结构中VH与VL之间的氨基酸接头是GGGGSGGSGSGGGGSASGSG(SEQ ID NO:168)或与SEQ ID NO:168具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。在一些方面，本文所描述的抗原结合多肽复合物的多肽结构中VH与VL之间的氨基酸接头包含SEQ ID NO:168的序列或由其组成。
在一些方面，本文所描述的抗原结合多肽复合物的多肽结构中Fc与TNFSF配体的第一细胞外结构域之间的氨基酸接头是GGSGSGGGSGG(SEQ ID NO:149)、GGSSGSGSGGSGSSG(SEQ IDNO:150)或GGSGSGGGSGLREGPELSPDDPAGLLDLRQG(SEQ ID NO:151)，或与SEQ ID NO:149-151中的任一者具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。在一些方面，氨基酸接头包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:149具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。在一些方面，氨基酸接头包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:150具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。在一些方面，氨基酸接头包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:151具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。在一些方面，氨基酸接头包含SEQ ID NO:149的序列或由其组成。在一些方面，氨基酸接头包含SEQ ID NO:150的序列或由其组成。在一些方面，氨基酸接头包含SEQID NO:151的序列或由其组成。
在一些方面，本文所描述的抗原结合多肽复合物的多肽结构中的VH与Fc之间或CH1与Fc之间的接头是ASGGSG(SEQ ID NO:161)或与SEQ ID NO:161具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。在一些方面，氨基酸接头包含SEQ ID NO:161的序列或由其组成。
IV.可检测标记和药物缀合物
在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)包含一个或多个可检测标记。含有可检测标记的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)可用于治疗、诊断、成像(例如放射成像)或基础研究应用。
在一些方面，可检测标记是放射性标记。放射性标记的实例包括但不限于同位素3H、14C、32P、35S、36Cl、51Cr、57Co、58Co、59Fe、90Y、121I、124I、125I、131I、111In、117Lu、211At、198Au、67Cu、225Ac、213Bi、99Tc、186Re和89Zr。
在一些方面，可检测标记是化学发光标记、荧光标记、酶、生物素或它们的组合。
在一些方面，可检测标记是肽标签。在一些方面，肽标签位于多肽或多肽复合物的N端。在一些方面，肽标签位于多肽或多肽复合物的C端。在一些方面，肽标签是亲和标签或融合标签。
在一些方面，可检测标记是聚组氨酸标签、聚精氨酸标签、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)、甲壳素结合蛋白(CBP)、链霉抗生物素蛋白标签、硫氧还原蛋白(TRX)、聚(NANP)、FLAG标签、ALFA标签、V5标签、Myc标签、血球凝集素(HA)标签、Spot标签、T7标签、NE标签或绿色荧光蛋白(GFP)，或它们的组合。在一些方面，聚组氨酸标签由约4个至约10个组氨酸残基组成。在一些方面，聚组氨酸标签由约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10个组氨酸残基组成。
可检测标记和用于将可检测标记引入多肽中的方法的额外实例是已知的并且包括常规的化学、分子生物学和重组DNA技术。参见例如Hnatowich等人,Science,220(4597):613-615,1983；Yao等人,Int.J.Mol.Sci.,17(2):194,2016；Kimple等人,Curr.Protoc.Protein Sci.,73:Unit 9.9,2013；Sambrook J,Fritsch EF.MolecularCloning:ALaboratory Manual.Cold Spring Harbor Laboratory Press；Cold SpringHarbor,N.Y.:1989；Molecular Cell Biology,第4版,第3.5节,Purifying,Detecting andCharacterizing Proteins；以及Mahmoodi等人,Cogent Biology,5(1):DOI:10/1080/23312025.2019.1665406。
在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)与药剂结合作为抗体-药物缀合物(ADC)。本发明的ADC可用于治疗、诊断、成像(例如放射成像)或基础研究应用。
在一些方面，本发明的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)与细胞毒性剂、免疫调节剂、成像剂或治疗蛋白缀合，通常经由接头缀合。接头可以包含可裂解单元或可以是不可裂解的。可裂解单元包括例如可经由二硫键交换裂解的含二硫键接头、可在酸性pH下裂解的酸不稳定接头以及可通过水解酶、酯酶、肽酶和葡萄糖醛酸苷酶裂解的接头(例如肽接头和葡萄糖醛酸苷接头)。据信不可裂解接头经由蛋白水解抗体降解机制释放药物。
ADC制备方法是已知的并且包括但不限于经由硫醇、酰胺、醛或叠氮化物缀合，以及其它常规化学、分子生物学和重组DNA技术。参见例如Yao等人,Int.J.Mol.Sci.,17(2):194,2016；Sambrook J,Fritsch EF.Molecular Cloning:A Laboratory Manual.ColdSpring Harbor Laboratory Press；Cold Spring Harbor,N.Y.:1989；Molecular CellBiology,第4版,第3.5节,Purifying,Detecting and Characterizing Proteins；以及Mahmoodi等人,Cogent Biology,5(1):DOI:10/1080/23312025.2019.1665406。
V.修饰
在一些方面，本发明涉及包含效应功能突变或半衰期延长突变的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)。
效应功能是体液免疫反应的重要部分并且形成先天性与后天性免疫之间的联系。大部分效应功能经由抗体的Fc区诱导，所述Fc区可以与补体蛋白和特定Fc受体相互作用。如本文所用，“效应功能突变”是指氨基酸序列(通常在Fc区中)中的变化，所述变化增加或降低效应功能，例如增加Fc对特定Fc受体的结合亲和力或增加抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性。
药学活性物质的“半衰期”是一定量的物质施用身体后减少一半所耗费的时间。本发明的抗原结合多肽复合物的“半衰期延长突变”是指氨基酸序列中(通常Fc区中)的变化，所述变化增加抗原结合多肽复合物的半衰期(例如通过增加Fc受体结合亲和力、减缓Fc与Fc受体的解离速率和/或增加的唾液酸化)。
增加功能的效应功能突变的实例包括但不限于Fc区中的以下取代(基于EU编号方案)：S298A/E333A/K334A、S239D/I332E、S239D/A330L/I332E和G236A/S239D/I332E。减少功能的效应功能突变的实例包括但不限于Fc区中的以下取代(基于EU编号方案)：N297A和L234A/L235A。效应功能突变、半衰期延伸部分突变以及用于将其并入氨基酸序列中的方法的额外实例是已知的并且描述于例如Saunders,“Conceptual Approaches to ModulatingAntibody Effector Functions and Circulation Half-Life”,Front.Immunol.2019年6月7日中。
在一些方面，本发明涉及包含一个或多个杵-臼修饰的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)。
如本文所用，术语“杵-臼修饰”是指导引两种多肽配对以促成异二聚化的基因修饰。在一些方面，修饰是在两种多肽相互作用的界面处将隆凸(杵)引入一种多肽中并且将空腔(臼)引入另一种多肽中。在一些方面，可以通过仅引入臼修饰来产生杵-臼修饰，例如通过置换侧链比原始氨基酸残基更小的氨基酸残基来产生(例如一个或多个丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸或丙氨酸残基的取代，或它们的组合)。在一些方面，可以通过仅引入杵修饰来产生杵-臼修饰，例如通过置换侧链比原始氨基酸残基更大的氨基酸残基来产生(例如一个或多个色氨酸或酪氨酸残基的取代，或它们的组合)。
在一些方面，臼包杵修饰存在于两个Fc区的结合界面、两个CH2区的结合界面、两个CH3区的结合界面、CL区与CH1区的结合界面，或VH区与VL区的结合界面中。参见例如美国公布号2007/0178552、国际公布号WO 96/027011、国际公布号WO 98/050431以及Zhu等人,Protein Science 6:781-788,1987。
在一些方面，抗原结合多肽复合物包含一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个杵-臼修饰。
杵-臼修饰是众所周知的，并且可以使用常规分子生物学和重组DNA技术并入本发明的抗原结合多肽复合物中。参见例如美国公布号2003/0078385；国际公布号WO 96/027011；Ridgway等人,Protein Eng.,9:617-621,1996；以及Merchant等人,Nat.Biotechnol.,16:677-681,1998。
在一些方面，杵-臼修饰是氨基酸取代。如本文所用，此类取代基于Kabat的EU编号方案所描述，所述EU编号方案对应于蛋白质数据库(PDB)中的编号。
在一些方面，杵-臼修饰是S354C和/或T366W的杵取代，基于EU编号方案。
在一些方面，杵-臼修饰是Y349C、T366S、L368A、Y407V、L234A、L235A、P329A、M428L、N433S、M252Y、S254T、T256E或它们的任何组合的臼取代，基于EU编号方案。
在一些方面，杵-臼修饰是Y349C、T366S、L368A和Y407V的臼取代，基于EU编号方案。在一些方面，杵-臼修饰是L234A、L235A和P329A的臼取代，基于EU编号方案。在一些方面，杵-臼修饰是L234A和L235A的臼取代，基于EU编号方案。在一些方面，杵-臼修饰是M428L和N433S的臼取代，基于EU编号方案。在一些方面，杵-臼修饰是M252Y、S254T和T256E的臼取代，基于EU编号方案。
在一些方面，抗原结合多肽复合物是IgG1或IgG4抗体，并且杵-臼修饰是S354C和T366W的杵取代以及Y349C、T366S、L368A和Y407V的臼取代。
在一些方面，抗原结合多肽复合物是IgG1或IgG4抗体，并且杵-臼修饰是L234A、L235A和P329A的臼取代。
在一些方面，抗原结合多肽复合物是IgG1或IgG4抗体，并且杵-臼修饰是L234A和L235A的臼取代。
在一些方面，抗原结合多肽复合物是IgG1或IgG4抗体，并且杵-臼修饰是M428L和N433S的臼取代。
在一些方面，抗原结合多肽复合物是IgG1或IgG4抗体，并且杵-臼修饰是M252Y、S254T和T256E的臼取代。
VI.多肽、多核苷酸、载体、细胞和蛋白质产生方法
在一些方面，本发明涉及包含本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)的一部分的多肽。
在一些方面，本发明涉及一种多肽，所述多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:1-228和269-324中的一者或多者的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:1-228和269-324中的一者或多者具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。在一些方面，多肽包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:58具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。在一些方面，多肽包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:64具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。在一些方面，多肽包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:118具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。在一些方面，多肽包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:120具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。在一些方面，多肽包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:176具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。在一些方面，多肽包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:178具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。在一些方面，多肽包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:180具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。在一些方面，多肽包含SEQ ID NO:1-228和269-324中的一者或多者的氨基酸序列或由其组成。在一些方面，多肽包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列或由其组成。在一些方面，多肽包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列或由其组成。在一些方面，多肽包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列或由其组成。在一些方面，多肽包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列或由其组成。在一些方面，多肽包含SEQID NO:176的氨基酸序列或由其组成。在一些方面，多肽包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列或由其组成。在一些方面，多肽包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列或由其组成。
在一些方面，本发明涉及一种多肽，所述多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:12-18、58-147、178、180、188-228和269-324中的一者或多者的氨基酸序列，或与SEQ IDNO:12-18、58-147、178和180中的一者或多者具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。在一些方面，多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:12-18、58-147、178、180、188-228和269-324中的一者或多者的氨基酸序列。
在一些方面，本发明涉及一种多肽，所述多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、178、180、188-228和269-324中的一者或多者的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、178、180、188-228和269-324中的一者或多者具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。在一些方面，多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、178、180、188-228和269-324中的一者或多者的氨基酸序列。
在一些方面，本发明涉及一种编码本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)的一部分的多核苷酸。如本文所用，“多核苷酸”包括DNA和RNA(例如mRNA)。
在一些方面，本发明涉及一种多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:1-175和229-268中的一者或多者的多核苷酸序列；或一种与SEQ ID NO:1-175和229-268中的一者或多者具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的多核苷酸。在一些方面，本发明涉及一种多核苷酸，所述多核苷酸包含SEQ ID NO:1-175和229-268中的一者或多者的多核苷酸序列。在一些方面，多核苷酸包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:59具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的多核苷酸序列。在一些方面，多核苷酸包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:65具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的多核苷酸序列。在一些方面，多核苷酸包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:119具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的多核苷酸序列。在一些方面，多核苷酸包含以下或由以下组成：与SEQ IDNO:121具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的多核苷酸序列。在一些方面，多核苷酸包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:177具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的多核苷酸序列。在一些方面，多核苷酸包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:179具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的多核苷酸序列。在一些方面，多核苷酸包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:181具有至少80％(诸如至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的多核苷酸序列。在一些方面，多核苷酸包含SEQ ID NO:59的多核苷酸序列或由其组成。在一些方面，多核苷酸包含SEQ IDNO:65的多核苷酸序列或由其组成。在一些方面，多核苷酸包含SEQ ID NO:119的多核苷酸序列或由其组成。在一些方面，多核苷酸包含SEQ ID NO:121的多核苷酸序列或由其组成。在一些方面，多核苷酸包含SEQ ID NO:177的多核苷酸序列或由其组成。在一些方面，多核苷酸包含SEQ ID NO:179的多核苷酸序列或由其组成。在一些方面，多核苷酸包含SEQ IDNO:181的多核苷酸序列或由其组成。
在一些方面，本发明涉及一种多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、179、181和229-268中的一者或多者的多核苷酸序列；或一种与SEQ IDNO:59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、179、181和229-268中的一者或多者具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的多核苷酸。在一些方面，本发明涉及一种多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、179、181和229-268中的一者或多者的多核苷酸序列。
在一些方面，本发明涉及一种载体，所述载体包含本文所描述的一种或多种多核苷酸。
在又一些方面，本发明涉及一种宿主细胞，所述宿主细胞包含本文所描述的一种或多种多核苷酸和/或载体。
如本文所用，术语“宿主细胞”可以是任何类型的细胞，例如原代细胞、培养中的细胞或来自细胞系的细胞。在一些方面，术语“宿主细胞”是指含有外源基因的细胞[例如经历基因递送或经编码基因的多核苷酸(例如DNA或mRNA)转染的细胞]和此种细胞的后代或潜在后代。例如归因于继代中可能存在突变或环境影响或核酸分子整合至宿主细胞基因体中，此种细胞的后代可能与用核酸分子转染的亲本细胞不一致。
本领域技术人员所熟知的方法可以用于构建编码抗原结合多肽复合物的载体(例如CDR、VH、VL、scFv、Fab、scFab、重链或轻链编码序列以及适当转录和翻译控制信号)。这些方法包括例如体外重组DNA技术、合成技术和体内基因重组。
可以通过常规技术将载体转移至宿主细胞中，并且所得细胞然后可以通过常规技术进行培养以产生包含例如六个CDR、VH、VL、scFv、Fab、scFab、重链或轻链或其结构域的抗原结合多肽复合物。因此，本文提供了含有编码抗原结合多肽复合物的多核苷酸的宿主细胞，所述抗原结合多肽复合物包含例如六个CDR、VH、VL、scFv、Fab、scFab、重链或轻链或其结构域，其与启动子可操作地连接以用于在宿主细胞中表达此类序列。在一些方面，分别编码重链和轻链两者或其结构域的载体可以在用于表达的宿主细胞中共表达。在一些方面，宿主细胞含有载体，所述载体包含编码重链和轻链两者或其结构域的多核苷酸。在一些方面，宿主细胞含有两种不同载体：包含编码重链或其结构域的多核苷酸的第一载体，以及包含编码轻链或其结构域的多核苷酸的第二载体。在一些方面，第一宿主细胞包含含有编码重链或其结构域的多核苷酸的第一载体，并且第二宿主细胞包含含有编码轻链或其结构域的多核苷酸的第二载体。在一些方面，本文提供了包含此种第一宿主细胞和此种第二宿主细胞的宿主细胞群体。
在一些方面，本文提供了载体群体，所述载体群体包含含有编码轻链或其结构域的多核苷酸的第一载体和含有编码重链或其结构域的多核苷酸的第二载体。或者，可以使用编码并且能够表达重链和轻链多肽两者或其结构域的单一载体。
多种宿主-载体系统可以用于表达本文所描述的多肽和多肽复合物。此类宿主-载体系统不仅代表可以借以产生所关注的编码序列并且随后使其纯化的运载体，并且还代表当经适当核苷酸编码序列转化或转染时，原位表达本文所描述的多肽或多肽复合物的细胞。这些包括但不限于微生物，诸如用含有抗体编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细菌(例如大肠杆菌(E.coli)和枯草杆菌(B.subtilis))；用含有抗体编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母(例如毕赤酵母(Saccharomyces pichia))；用含有抗体编码序列的重组病毒表达载体(例如杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用重组病毒表达载体(例如花椰菜嵌纹病毒(cauliflower mosaic virus，CaMV)；烟草嵌纹病毒(tobaccomosaic virus，TMV))感染或用含有抗体编码序列的重组质粒表达载体(例如Ti质粒)转化的植物细胞系统(例如绿藻，诸如莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii))；或哺乳动物细胞系统(例如COS(例如COS1或COS)、CHO、BHK、MDCK、HEK 293、NS0、PER.C6、VERO、CRL7O3O、HsS78Bst、HeLa和NIH 3T3、HEK-293T、HepG2、SP210、R1.1、B-W、L-M、BSC1、BSC40、YB/20和BMT10细胞)，其具有含有来源于哺乳动物细胞基因体(例如金属硫蛋白启动子)或哺乳动物病毒(例如腺病毒晚期启动子；痘疮病毒7.5K启动子)的启动子的重组表达构建体。在一些方面，用于表达本文所描述的多肽或多肽复合物的细胞是CHO细胞，例如来自CHO GSSystemTM(Lonza)的CHO细胞。在一些方面，用于表达本发明的多肽或多肽复合物的细胞是人类细胞，例如人类细胞系。在一些方面，哺乳动物表达载体是pOptiVECTM或pcDNA3.3。在一些方面，使用细菌细胞(诸如大肠杆菌)或真核细胞(例如哺乳动物细胞)表达重组多肽。举例来说，哺乳动物细胞(诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞)连同载体(诸如来自人类巨细胞病毒的主要中间早期基因启动子组件)为多肽的有效表达系统(Foecking MK和Hofstetter H(1986)Gene 45:101-105；以及Cockett MI等人,(1990)Biotechnology 8:662-667)。在一些方面，本文所描述的多肽或多肽复合物由HEK-293T细胞产生。
另外，可以选择调节插入序列的表达或以所需特定方式修饰和加工基因产物的宿主细胞品系。蛋白质产物的此类修饰(例如糖基化)和加工(例如裂解)可以有助于蛋白质的功能。为此目的，可以使用具有正确加工初级转录本、基因产物的糖基化和磷酸化的细胞机制的真核宿主细胞。此类哺乳动物宿主细胞包括但不限于：CHO、VERO、BHK、Hela、MDCK、HEK293、NIH 3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O和T47D、NS0(不内源性产生任何免疫球蛋白链的鼠类骨髓瘤细胞系)、CRL7O3O、COS(例如，COS1或COS)、PER.C6、VERO、HsS78Bst、HEK-293T、HepG2、SP210、R1.1、B-W、L-M、BSC1、BSC40、YB/20、BMT10和HsS78Bst细胞。
本文所描述的多肽或多肽复合物已通过重组表达产生后，其可以通过本领域中已知用于纯化蛋白质或免疫球蛋白分子的任何方法纯化，例如色谱法(例如离子交换色谱法、亲和色谱法，尤其蛋白A色谱法之后对特定抗原的亲和色谱法，以及尺寸排阻色谱法)、离心、溶解度差异或用于纯化蛋白质的任何其它标准技术。此外，可以将本文所描述的多肽或多肽复合物与本文所描述或本领域中另外已知的异源多肽序列(例如标签)融合以有助于纯化。
在一些方面，本文所描述的多肽或多肽复合物经分离或纯化。一般来说，分离的多肽或多肽复合物是基本上不含具有不同抗原特异性的其它多肽或多肽复合物的多肽或多肽复合物。举例来说，在一些方面，本文所描述的多肽或多肽复合物制剂基本上不含细胞材料和/或化学前体。
VII.药物组合物和试剂盒
在一些方面，本发明涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸、载体或细胞。
在一些方面，本发明涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含(1)本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)、多核苷酸、载体或细胞，以及(2)药学上可接受的载体。术语“药学上可接受的载体”包括在生物学上或在其它方面无不良作用的任何和所有溶剂、共溶剂、复合剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。此类介质和剂用于药学活性物质的用途在本领域中是已知的。除非任何常规介质或剂与活性成分不相容，否则考虑将其用于治疗制剂中。还可以将补充活性成分并入本发明的药物组合物中。另外，可以包括各种赋形剂，诸如本领域中常用的赋形剂。这些和其它此类化合物描述于文献中，例如Merck Index,Merck&Company,Rahway,NJ中。在药物组合物中包括各种组分的考虑因素描述于例如Gilman等人(编)(2010)；Goodman and Gilman's:The Pharmacological Basis of Therapeutics,第12版,The McGraw-Hill Companies中。在一些方面，药物组合物物用于肠道外、静脉内或皮下施用。
配制药物组合物后，可以将其以溶液、悬浮液、凝胶、乳液、固体、晶体或脱水或冻干粉末形式储存于无菌小瓶中。此类制剂可以呈即用形式或在施用前复原的形式(例如，冻干形式)储存。
在一些方面，本发明涉及一种试剂盒，所述试剂盒包含本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸、载体、细胞或药物组合物，或它们的组合，任选地具有使用说明书。在一些方面，本发明提供了用于产生单次剂量施用单元的试剂盒。在一些方面，本发明的试剂盒可以容纳含有干燥蛋白质的第一容器和具有水性制剂的第二容器两者。在一些方面，还提供了容纳单室和多室预填充注射器(例如液体注射器和冻干物注射器)的试剂盒。在一些方面，试剂盒含有供静脉内或皮下施用的组分。
VIII.使用方法
在一些方面，本发明涉及本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸、载体、细胞或药物组合物或它们的组合的某些使用方法。靶向本文所描述的靶标中的一者或多者的本文所描述的任一抗原结合多肽复合物结构可以用于本发明的任一方法及用途中。
在一些方面，本发明涉及一种治疗或预防疾病或疾患的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸、载体、细胞或药物组合物，或它们的组合。在一些方面，本发明涉及一种治疗或预防疾病或疾患的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸、载体、细胞或药物组合物，或它们的组合。本发明进一步提供一种本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸、载体、细胞或药物组合物，或它们的组合，其用于治疗或预防受试者的疾病或疾患。本发明进一步提供一种本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸、载体、细胞或药物组合物或它们的组合的用途，其用于制造用于治疗或预防受试者的疾病或疾患的药剂。所述治疗可以包括诱导或增强受试者的免疫反应或由其组成。因此，本发明提供一种本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸、载体、细胞或药物组合物或它们的组合，其用于诱导或增强受试者的免疫反应以治疗或预防所述受试者的疾病或疾患。本发明进一步提供一种本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸、载体、细胞或药物组合物或它们的组合的用途，其用于制造用于诱导或增强受试者的免疫反应以治疗或预防所述受试者的疾病或疾患的药剂。
在一些方面，本发明涉及一种诱导或增强免疫反应的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用本文所描述的抗原结合多肽复合物、抗体或其抗原结合片段、多肽、多核苷酸、载体、细胞或药物组合物。本发明进一步提供一种本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸、载体、细胞或药物组合物或它们的组合，其用于诱导或增强受试者的免疫反应。本发明进一步提供一种本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸、载体、细胞或药物组合物或它们的组合的用途，其用于制造用于诱导或增强受试者的免疫反应的药剂。
如本文所用，“诱导或增强免疫反应”包括但不限于增加免疫细胞(例如淋巴细胞(T细胞、B细胞和/或NK细胞)、嗜中性粒细胞和/或单核细胞/巨噬细胞)的活化、增殖、分化和/或成熟。因此，“诱导或增强免疫反应”可用于治疗或预防其中诱导或增强免疫反应诸如在治疗癌症或如本文所描述的其它疾病或病症中具有潜在临床益处的疾病。本公开的抗原结合多肽复合物可以用于调节对于肿瘤相关抗原(TAA)或癌症的免疫反应的幅度、持续时间和/或质量。免疫细胞的免疫细胞活化、增殖、分化和/或成熟增强可以通过常规分析，诸如本文所描述的T细胞增殖和结合分析来测定。
在一些方面，所述方法增强识别TAA或癌症的抗体的产生。抗体产生增强可以通过常规分析来测定，诸如检测相较于未接受抗原结合多肽复合物的受试者中的抗体含量，用本发明的抗原结合多肽复合物处理的受试者中的增加的抗体含量。
本发明的方法可以用于预防性和治疗性调节或增强免疫反应。
因此，在一些方面，本发明涉及一种克服癌症介导的免疫抑制的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用本文所描述的抗原结合多肽复合物、抗体或其抗原结合片段、多肽、多核苷酸、载体、细胞或药物组合物。
在一些方面，本发明涉及一种治疗或预防癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸、载体、细胞或药物组合物，或它们的组合。本发明进一步提供一种本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸、载体、细胞或药物组合物，或它们的组合，其用于治疗或预防受试者的癌症。本发明进一步提供一种本文所描述的抗原结合多肽复合物(例如抗体或其抗原结合片段)、多肽、多核苷酸、载体、细胞或药物组合物或它们的组合的用途，其用于制造用于治疗或预防受试者的癌症的药剂。所述治疗可以包含如本文所描述“诱导或增强”受试者的“免疫反应”或由其组成。如本文所用，术语“受试者”意指人类或非人类哺乳动物，例如狗、猫、小鼠、大鼠、牛、绵羊、猪、山羊、非人类灵长类动物或禽类(例如鸡)，以及任何其它脊椎动物或无脊椎动物。在一些方面，受试者是人类。在一些方面，受试者是兽医学动物。在一些方面，受试者是哺乳动物。
表1：抗体序列
| 抗体 | 肽SEQ ID NO(DNA SEQ ID NO) |
| MX169 | 54(55),58(59),104(105) |
| MX170 | 54(55),72(73),98(99) |
| MX306 | 54(55),118(119),120(121) |
| MX318 | 54(55),120(121) |
| MX368 | 132(133),134(135) |
| MX369 | 54(55),132(133) |
| MX424 | 140(141),142(143) |
| MX425 | 118(119),140(141) |
| MX485 | 193,189 |
| MX487 | 193 |
| MX620 | 193,208 |
| MX622 | 208,209 |
表2：质粒序列
关于本发明的方面的条项
1.一种抗原结合多肽复合物，所述抗原结合多肽复合物包含第一多肽、第二多肽和第三多肽；
其中所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；
其中：
(i)所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L2-CH1-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；VH1-L2-CL-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；VH1-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L2-CH1-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；VL1-L2-CL-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；VL1-L7-CH1-L8-Fc；或VL1-L7-CL-L8-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L9-VH2-L10-Fc-L11-TNF1-L12-TNF2-L13-TNF3；或VH2-L14-VL2-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3；或
(ii)所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L19-CH1-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；VH1-L19-CL-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；VL1-L19-CH1-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；或VL1-L19-CL-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L24-VH2-L25-Fc；或VH2-L26-VL2-L27-Fc；
其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；CH1是免疫球蛋白重链恒定区1；CL是免疫球蛋白轻链恒定区；TNF1是肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)配体的第一细胞外结构域；TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且L1-L27是氨基酸接头。
2.一种抗原结合多肽复合物，所述抗原结合多肽复合物包含第一多肽、第二多肽和第三多肽；
其中所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；VL1-L1-CH1；VH1-L1-CL；或VH1-L1-CH1；
其中：
(i)所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CH1-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；VH1-CL-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；VH1-CH1-L6-Fc；VH1-CL-L7-Fc；VL1-CH1-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；VL1-CL-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；VL1-CH1-L6-Fc；或VL1-CL-L7-Fc；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L8-VH2-L9-Fc-L10-TNF1-L11-TNF2-L12-TNF3；或VH2-L13-VL2-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；或
(ii)所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CH1-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；VH1-CL-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；VL1-CH1-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；或VL1-CL-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L22-VH2-L23-Fc；或VH2-L24-VL2-L25-Fc；
其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；CH1是免疫球蛋白重链恒定区1；CL是免疫球蛋白轻链恒定区；TNF1是肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)配体的第一细胞外结构域；TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且L1-L25是氨基酸接头。
3.如条项1所述的抗原结合多肽复合物，其中所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-L2-CH1-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L9-VH2-L10-Fc-L11-TNF1-L12-TNF2-L13-TNF3。
4.如条项2所述的抗原结合多肽复合物，其中所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-CL；所述第二多肽具有由以下表示的结构：VH1-CH1-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：VL2-L8-VH2-L9-Fc-L10-TNF1-L11-TNF2-L12-TNF3。
5.一种抗原结合多肽复合物，所述抗原结合多肽复合物包含第一多肽和第二多肽；其中：
(i)所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L1-VH1-L2-Fc；VH1-L3-VL1-L4-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L37-VH2-L38-Fc-L39-TNF1-L40-TNF2-L41-TNF3；VH2-L42-VL2-L43-Fc-L44-TNF1-L45-TNF2-L46-TNF3；VL2-L47-VH2-L48-CL-L49-CH1-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3；VL2-L54-CL-L55-VH2-L56-CH1-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3；VL2-L47-VH2-L48-CH1-L49-CL-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3；VL2-L54-CH1-L55-VH2-L56-CL-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3；VL2-VH2-L38-Fc-L39-TNF1-L40-TNF2-L41-TNF3；VH2-VL2-L43-Fc-L44-TNF1
-L45-TNF2-L46-TNF3；VL2-VH2-L48-CL-L49-CH1-L50-Fc-L51-TNF1
-L52-TNF2-L53-TNF3；VL2-CL-L55-VH2-L56-CH1-L57-Fc-L58-TNF1
-L59-TNF2-L60-TNF3；VL2-VH2-L48-CH1-L49-CL-L50-Fc-L51-TNF1
-L52-TNF2-L53-TNF3；或VL2-CH1-L55-VH2-L56-CL-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3；或
(ii)所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L61-VH1-L62-Fc-L63-TNF1-L64-TNF2-L65-TNF3；VH1-L66-VL1-L67-Fc-L68-TNF1-L69-TNF2-L70-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CL-L73-CH1-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L71-VH1-L72-CH1-L73-CL-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；VL1-L78-CL-L79-VH1-L80-CH1-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；或VL1-L78-CH1-L79-VH1-L80-CL-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L85-VH2-L86-Fc；VH2-L87-VL2-L88-Fc；VL2-L89-VH2-L90-CL-L91-CH1-L92-Fc；VL2-L89-VH2-L90-CH1-L91-CL-L92-Fc；VL2-L93-CL-L94-VH2-L95-CH1-L96-Fc；或VL2-L93-CH1-L94-VH2-L95-CL-L96-Fc；
其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；CH1是免疫球蛋白重链恒定区1；CL是免疫球蛋白轻链恒定区；TNF1是TNFSF配体的第一细胞外结构域；TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且L1-L96是氨基酸接头。
6.如条项5所述的抗原结合多肽复合物，其中所述第一多肽具有由以下表示的结构：VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL2-L37-VH2-L38-Fc-L39-TNF1-L40-TNF2-L41-TNF3。
7.一种抗原结合多肽复合物，所述抗原结合多肽复合物包含第一多肽和第二多肽；其中：
(i)所述第一多肽具有由以下表示的结构：Fc；VL1-L1-VL2-L2-VH2-L3-VH1-L4-Fc；VH1-L5-VH2-L6-VL2-L7-VL1-L8-Fc；Fc-L9-TNF1-L10-TNF2-L11-TNF3；VL1-L12-VL2-L13-VH2-L14-VH1-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3；或VH1-L19-VH2-L20-VL2-L21-VL1-L22-Fc-L23-TNF1-L24-TNF2-L25-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：VL3-L26-VL4-L27-VH4-L28-VH3-L29-Fc-L30-TNF1-L31-TNF2-L32-TNF3；或VH3-L33-VH4-L34-VL4-L35-VL3-L36-Fc-L37-TNF1-L38-TNF2-L39-TNF3；或
(ii)所述第一多肽具有由以下表示的结构：Fc-L40-TNF1-L41-TNF2-L42-TNF3；VL1-L43-VL2-L44-VH2-L45-VH1-L46-Fc-L47-TNF1-L48-TNF2-L49-TNF3；或VH1-L50-VH2-L51-VL2-L52-VL1-L53-Fc-L54-TNF1-L55-TNF2-L56-TNF3；并且所述第二多肽具有由以下表示的结构：Fc；VL3-L57-VL4-L58-VH4-L59-VH3-L60-Fc；或VH3-L61-VH4-L62-VL4-L63-VL3-L64-Fc；
其中：VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；VL3是第三免疫球蛋白轻链可变区；VL4是第四免疫球蛋白轻链可变区；VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；VH3是第三免疫球蛋白重链可变区；VH4是第四免疫球蛋白重链可变区；Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；TNF1是TNFSF配体的第一细胞外结构域；TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且L1-L64是氨基酸接头。
8.如条项1至7中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中接头L1-L96中的一者或多者的长度为约0个氨基酸至约50个氨基酸。
9.如条项1至8中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中接头L1-L96中的一者或多者无免疫原性。
10.如条项1至9中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中接头L1-L96中的一者或多者不含有共同的T细胞表位
11.如条项1至10中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中接头L1-L96中的一者或多者包含SEQ ID NO:3-10和148-175中的任一者的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:3-10和148-175中的任一者具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％同一性的序列。
12.如条项11所述的抗原结合多肽，其中：
(i)接头L1-L96中的一者或多者包含与SEQ ID NO:3具有至少80％同一性的氨基酸序列；
(ii)接头L1-L96中的一者或多者包含与SEQ ID NO:10具有至少80％同一性的氨基酸序列；
(iii)接头L1-L96中的一者或多者包含与SEQ ID NO:150具有至少80％同一性的氨基酸序列；
(iv)接头L1-L96中的一者或多者包含与SEQ ID NO:151具有至少80％同一性的氨基酸序列；
(v)接头L1-L96中的一者或多者包含与SEQ ID NO:161具有至少80％同一性的氨基酸序列；和/或
(vi)接头L1-L96中的一者或多者包含与SEQ ID NO:168具有至少80％同一性的氨基酸序列。
13.如条项1至6和8至12中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1和VH1与CD3特异性结合。
14.如条项13所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1包含：CDR1，其包含与SEQ IDNO:22、28和185中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29和186中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30和187中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；且其中VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25和182中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26和183中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27和184中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
15.如条项14所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1包含：CDR1，其包含与SEQ IDNO:22具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或其中VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQID NO:21具有至少90％同一性的氨基酸序列；任选地其中VL1包含：CDR1，其包含SEQ IDNO:22的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ IDNO:24的氨基酸序列；和/或其中VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
16.如条项14所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1包含：CDR1，其包含与SEQ IDNO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:29具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:30具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或其中VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:25具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQID NO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列；任选地其中VL1包含：CDR1，其包含SEQ IDNO:28的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ IDNO:30的氨基酸序列；和/或其中VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。
17.如条项14所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1包含：CDR1，其包含与SEQ IDNO:185具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:186具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:187具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或其中VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:182具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:183具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:184具有至少90％同一性的氨基酸序列；任选地其中VL1包含：CDR1，其包含SEQID NO:185的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列；并且/或者VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。
18.如条项14所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，以及VH1包含与SEQ IDNO:43或44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列；任选地其中VL1包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，以及VH1包含与SEQ ID NO:43具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列；或其中VL1包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，以及VH1包含与SEQ ID NO:44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列。
19.如条项1至6和8至18中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2和VH2与肿瘤相关抗原(TAA)或免疫刺激受体特异性结合。
20.如条项19所述的抗原结合多肽复合物，其中所述肿瘤相关抗原是酪氨酸蛋白激酶Met(cMet)、滋养层细胞表面抗原2(Trop2)、CD20、CD19、受体酪氨酸蛋白激酶erbB-2(HER2)、受体酪氨酸蛋白激酶erbB-3(HER3)、腺苷A2A受体(A2AR)、增殖诱导性配体(APRIL)、表皮生长因子受体(EGFR)、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)、B细胞活化因子(BAFF)、BAFF受体(BAFFR)、B细胞成熟抗原(BCMA)、布鲁顿氏酪氨酸激酶(BTK)、B和T淋巴细胞弱化子(BTLA)、B7DC(程序性死亡配体2)、B7同源物1(B7H1)、B7同源物4(B7H4)、δ样配体3(DLL3)、外核苷三磷酸二磷酸水解酶1(ENTPD1)、IgE受体的Fc片段1a(FCER1A)、IgE受体的Fc片段1(FCER1)、花生四烯酸5-脂氧合酶活化蛋白(FLAP)、叶酸羟化酶1(FOLH1)、粘蛋白1(MUC-1)、CD133、粘蛋白16(MUC-16)、溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)、CD38、程序性死亡配体1(PD-L1)、CEA细胞粘附分子5(CEACAM5)、前列腺六跨膜上皮抗原1(STEAP1)或上皮细胞粘附分子(EpCAM)；或其中所述免疫刺激受体是CD28。
21.如条项19或条项20所述的抗原结合多肽复合物，其中所述VL2和所述VH2与HER2特异性结合。
22.如条项19所述的抗原结合多肽复合物，其中所述VL2和所述VH2与所述免疫刺激受体CD28特异性结合。
23.如条项19至21中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34或40具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35或41具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:36或42具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；且其中VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31或37具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32或38具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:33或39具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
24.如条项23所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2包含：CDR1，其包含与SEQ IDNO:34具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36的氨基酸序列；和/或其中VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:32具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33的氨基酸序列；任选地其中VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ IDNO:35的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；和/或其中VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。
25.如条项23所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2包含：CDR1，其包含与SEQ IDNO:40具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:41具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:42的氨基酸序列；和/或其中VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:37具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:38具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:39的氨基酸序列；任选地其中VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ IDNO:41的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；和/或其中VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。
26.如条项23所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2包含与SEQ ID NO:47或49具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，并且VH2包含与SEQID NO:46或48具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列。
27.如条项26所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性的序列，并且/或者VH2包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性的序列；任选地其中VL2包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，并且/或者VH2包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。
28.如条项26所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2包含与SEQ ID NO:49具有至少80％同一性的序列，并且/或者VH2包含与SEQ ID NO:48具有至少80％同一性的序列；任选地其中VL2包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且/或者VH2包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。
29.如条项1至6和8至12中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2和VH2与CD3特异性结合。
30.如条项29所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2包含：CDR1，其包含与SEQ IDNO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；且其中VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和302中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:20、26、183、295和303中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和304中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
31.如条项30所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2包含：CDR1，其包含与SEQ IDNO:22具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列；和/或其中VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:20具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列；任选地其中VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ IDNO:23的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；和/或其中VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
32.如条项30所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2包含：CDR1，其包含与SEQ IDNO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:29具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列；和/或其中VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:25具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列；任选地其中VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ IDNO:29的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；和/或其中VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。
33.如条项30所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2包含：CDR1，其包含与SEQ IDNO:185具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:186具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:187的氨基酸序列；和/或其中VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:182具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQID NO:183具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:184的氨基酸序列；任选地其中VL2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQID NO:186的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列；并且/或者VH2包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。
34.如条项30所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2包含与SEQ ID NO:45、297和305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，并且VH2包含与SEQ ID NO:43、44、188、293和301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列；任选地其中VL2包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，并且VH2包含与SEQ ID NO:43具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列；其中VL2包含与SEQ IDNO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，并且VH2包含与SEQ ID NO:44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列；其中VL2包含与SEQ ID NO:297具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，并且VH2包含与SEQ ID NO:293具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列；或其中VL2包含与SEQ ID NO:305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，并且VH2包含与SEQ IDNO:301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列。
35.如条项1至6、8至12和29至34中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1和VH1与TAA或免疫刺激受体特异性结合。
36.如条项35所述的抗原结合多肽复合物，其中所述VL1和所述VH1与选自以下的TAA特异性结合：cMet、Trop2、CD20、CD19、HER2、HER3、A2AR、APRIL、EGFR、FGFR、BAFF、BAFFR、BCMA、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、DLL3、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、MUC-1、CD133、MUC-16、LAMP1、CD38、PD-L1、CEACAM5、STEAP1和EpCAM。
37.如条项35或条项36所述的抗原结合多肽复合物，其中所述TAA是HER2。
38.如条项35所述的抗原结合多肽复合物，其中所述VL1和所述VH1与所述免疫刺激受体CD28特异性结合。
39.如条项35至38中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34、40、274、282、290、314或322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35、41、275、283、291、315或323中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:36、42、275、284、292、316或324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；且其中VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31、37、270、278、286、310或318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32、38、271、279、287、311或319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:33、39、272、280、288、312或320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
40.如条项39所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1包含：CDR1，其包含与SEQ IDNO:34具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或其中VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQID NO:33具有至少90％同一性的氨基酸序列；任选地其中VL1包含：CDR1，其包含SEQ IDNO:34的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ IDNO:36的氨基酸序列；和/或其中VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。
41.如条项39所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1包含：CDR1，其包含与SEQ IDNO:40具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:41具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:42具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或其中VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:37具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:38具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQID NO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列；任选地其中VL1包含：CDR1，其包含SEQ IDNO:40的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ IDNO:42的氨基酸序列；和/或其中VH1包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。
42.如条项39所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1包含与SEQ ID NO:47或49具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，以及VH1包含与SEQID NO:46或48具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列。
43.如条项42所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性的序列，并且/或者VH1包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性的序列；任选地其中VL1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，并且/或者VH1包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。
44.如条项42所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1包含与SEQ ID NO:49具有至少80％同一性的序列，并且/或者VH1包含与SEQ ID NO:48具有至少80％同一性的序列；任选地其中VL1包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且/或者VH1包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。
45.如条项1至6和8至28中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中所述抗原结合多肽的所述VL1和所述VH1与CD3特异性结合，并且所述VL2和所述VH2与TAA或免疫刺激受体特异性结合。
46.如条项1至6、8至12和29至44中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中所述抗原结合多肽的所述VL2和所述VH2与CD3特异性结合，并且所述VL1和所述VH1与TAA或免疫刺激受体特异性结合。
47.如条项7至12中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1、VH1、VL3和VH3与CD3特异性结合。
48.如条项7至12和47中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2、VH2、VL4和VH4与TAA或免疫刺激受体特异性结合。
49.如条项48所述的抗原结合多肽复合物，其中所述TAA是HER2，或所述免疫刺激受体是CD28。
50.如条项7至12中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1、VH1、VL4和VH4与CD3特异性结合。
51.如条项7至12和50中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2、VH2、VL3和VH3与TAA或免疫刺激受体特异性结合。
52.如条项51所述的抗原结合多肽复合物，其中所述TAA是HER2，或所述免疫刺激受体是CD28。
53.如条项7至12中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2、VH2、VL4和VH4与CD3特异性结合。
54.如条项7至12和53中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1、VH1、VL3和VH3与TAA或免疫刺激受体特异性结合。
55.如条项54所述的抗原结合多肽复合物，其中所述TAA是HER2，或所述免疫刺激受体是CD28。
56.如条项7至12中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2、VH2、VL3和VH3与CD3特异性结合。
57.如条项7至12和56中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1、VH1、VL4和VH4与TAA或免疫刺激受体特异性结合。
58.如条项57所述的抗原结合多肽复合物，其中所述TAA是HER2，或所述免疫刺激受体是CD28。
59.如条项47至58中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中与CD3特异性结合的所述VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；且其中与CD3特异性结合的所述VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和302中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26、183、295和303中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和304中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
60.如条项59所述的抗原结合多肽复合物，其中与CD3特异性结合的所述VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:23具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:24具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或其中与CD3特异性结合的所述VH包含：CDR1，其包含与SEQID NO:19具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:21具有至少90％同一性的氨基酸序列；任选地其中所述VL包含：CDR1，其包含SEQ IDNO:22的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ IDNO:23的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；和/或其中所述VH包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
61.如条项59所述的抗原结合多肽复合物，其中与CD3特异性结合的所述VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:28具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:29具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:30具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或其中与CD3特异性结合的所述VH包含：CDR1，其包含与SEQID NO:25具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:26具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:27具有至少90％同一性的氨基酸序列；任选地其中所述VL包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ IDNO:29的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列；和/或其中所述VH包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。
62.如条项59所述的抗原结合多肽复合物，其中与CD3特异性结合的所述VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:185具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:186具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:187具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或其中特异性结合CD3的所述VH包含：CDR1，其包含SEQ IDNO:，其包含与SEQ ID NO:182具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:183具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:184具有至少90％同一性的氨基酸序列；任选地其中所述VL包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:185的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:186的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:187的氨基酸序列；和/或所述VH包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ IDNO:183的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列。
63.如条项59所述的抗原结合多肽复合物，其中与CD3特异性结合的所述VL包含与SEQ ID NO:45、297或305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，以及与CD3特异性结合的所述VH包含与SEQ ID NO:43、44、188、293或301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列。
64.如条项63所述的抗原结合多肽复合物，其中与CD3特异性结合的所述VL包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，以及与CD3特异性结合的所述VH包含与SEQ ID NO:43具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列；或其中与CD3特异性结合的所述VL包含与SEQ IDNO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，以及与CD3特异性结合的所述VH包含与SEQ ID NO:44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列。
65.如条项47至64中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中与TAA或免疫刺激受体特异性结合的所述VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34、40、274、282、289、314或322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:35、41、275、283、290、315或323具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:36、42、276、284、291、316或324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；且其中与TAA或免疫刺激受体特异性结合的所述VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31、37、270、278、286、310或318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32、38、271、279、287、311或319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:33、39、272、280、288、312或320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
66.如条项65所述的抗原结合多肽复合物，其中特异性结合免疫刺激受体的所述VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:36具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或其中特异性结合免疫刺激受体的所述VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:33具有至少90％同一性的氨基酸序列；任选地其中所述VL包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；和/或其中所述VH包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。
67.如条项65所述的抗原结合多肽复合物，其中与TAA特异性结合的所述VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:40具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ IDNO:41具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:42具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或其中与TAA特异性结合的所述VH包含：CDR1，其包含与SEQID NO:37具有至少90％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:38具有至少90％同一性的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含与SEQ ID NO:39具有至少90％同一性的氨基酸序列；任选地其中所述VL包含：CDR1，其包含SEQ IDNO:40的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ IDNO:41的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；和/或其中所述VH包含：CDR1，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；CDR2，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；和/或CDR3，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。
68.如条项65所述的抗原结合多肽复合物，其中与TAA或免疫刺激受体特异性结合的所述VL包含与SEQ ID NO:47或49具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，以及与TAA或免疫刺激受体特异性结合的所述VH包含与SEQ ID NO:46或48具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列。
69.如条项68所述的抗原结合多肽复合物，其中与免疫刺激受体特异性结合的所述VL包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性的序列，和/或与免疫刺激受体特异性结合的所述VH包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性的序列；任选地其中所述VL包含SEQ IDNO:47的氨基酸序列，和/或所述VH包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。
70.如条项68所述的抗原结合多肽复合物，其中与TAA特异性结合的所述VL包含与SEQ ID NO:49具有至少80％同一性的序列，和/或与TAA特异性结合的所述VH包含与SEQ IDNO:48具有至少80％同一性的序列；任选地其中所述VL包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，和/或所述VH包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。
71.如条项1至70中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中TNF1、TNF2和TNF3各自选自由以下组成的组：OX40L(TNFSF4)、4-1BBL(TNFSF9)、TNF、TNF相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)、CD40L(TNFSF5)、CD27L(TNFSF7)、CD30L(TNFSF8)、FasL(TNFSF6)、EDAM、LTA(TNFSF1)、LTB(TNFSF3)、CD153(TNFSF8)、RANKL(TNFSF11)、TWEAK(TNFSF12)、APRIL(TNFSF13)、BAFF(TNFSF13B)、LIGHT(TNFSF14)、VEGI(TNFSF15)和GITRL(TNFSF18)。
72.如条项1至71中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中TNF1、TNF2和TNF3各自是OX40L。
73.如条项1至72中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中TNF1、TNF2和TNF3各自是4-1BBL。
74.如条项1至73中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中所述抗原结合多肽复合物是抗体或其抗原结合片段。
75.如条项1至74中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中所述免疫球蛋白铰链包含上铰链区、中铰链区、下铰链区或它们的组合。
76.如条项1至75中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中所述Fc区包含至少一个杵-臼修饰。
77.如条项76所述的抗原结合多肽复合物，其中所述抗原结合多肽复合物是IgG1或IgG4抗体，并且所述杵-臼修饰包含：(i)S354C和T366W的杵取代以及Y349C、T366S、L368A和Y407V的臼取代；(ii)L234A、L235A和P329A的臼取代；(iii)L234A和L235A的臼取代；(iv)M428L和N433S的臼取代；(v)M252Y、S254T和T256E的臼取代；或(vi)它们的组合；基于EU编号方案。
78.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含条项1至77中任一项所述的抗原结合多肽复合物。
79.一种药物组合物，所述药物组合物包含条项1至77中任一项所述的抗原结合多肽复合物或条项78所述的抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体。
80.如条项1至77中任一项所述的抗原结合多肽复合物、条项78所述的抗体或其抗原结合片段或条项79所述的药物组合物，其用于治疗患者的疾病或疾患。
81.如条项1至77中任一项所述的抗原结合多肽复合物、条项78所述的抗体或抗原结合多肽复合物或条项79所述的药物组合物，其用于治疗患者的癌症。
实施例
提供以下实施例以进一步说明本发明的方面，并且不意图将本发明限制于任何特定的应用或操作理论。
实施例1
多特异性TNFSF融合抗体表达和纯化
以2.5-3.0×106/mL的密度，使用聚乙烯亚胺(PEI)(Polyscience)，通过将表达质粒暂时性转染至Expi293F细胞中产生本发明的多特异性肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)融合抗体。将质粒DNA和PEI分别稀释于OPTi-MEM(LifeTech)中并且稍后混合。混合之后10分钟，将质粒/PEI混合物以1:3(w:w)的比率添加至细胞培养物中。转染后16-20小时，添加丙戊酸和丙酸钠，分别达到0.5mM和5mM的最终浓度。转染后5天收集上清液，并且经由0.45μm过滤器过滤。
然后首先通过使用蛋白A树脂的亲和色谱法，根据制造商的标准程序，以分批模式纯化多特异性抗体。在使用3M氯化镁从蛋白A洗脱出抗体之后，在两次改变缓冲液的情况下，将其透析至10mM组氨酸(pH 6.0)+150mM NaCl中过夜。使用Hiload 16/600Superdex200PG或Superdex 200Increase 10/300GL(Cytiva Lifesciences)，通过尺寸排阻色谱法进一步纯化抗体。收集具有正确洗脱型态的洗脱份并浓缩，以用于进一步表征。
实施例2
多特异性OX40L融合抗体ELISA结合分析
如实施例1中所阐述制备并纯化与CD3和CD28结合并且含有OX40L三聚体的二聚体的三种多特异性抗体(MX169、MX368和MX369)。为了评定抗体与其靶蛋白的结合，进行酶联免疫吸附分析(ELISA)。
在4℃下，将多特异性抗体的每个结合位点的靶蛋白涂覆于96孔Immuno培养板(Thermo Fisher Scientific)的孔中过夜。在室温下，使用含5％脱脂乳+2％牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲盐水(PBS)+0.25％ Tween将所涂覆的培养板封闭一小时，然后用PBS+0.25％Tween 20洗涤三次。将连续稀释的抗体和对照分子添加至培养板中并且在室温下孵育1小时。将培养板用PBS+0.25％ Tween 20洗涤三次，与辣根过氧化酶(HRP)结合的检测抗体一起在室温下孵育一小时，再次洗涤，然后用过氧化酶底物(KPL,Gaithersburg,MD,USA)显色。通过添加100μl的KPL TMB BlueSTOP溶液终止反应之后，使用读板器在OD650读取培养板，并且在GraphPad Prism中分析数据。
图2A显示了MX169、MX368和MX369与人类CD3的ELISA结合结果。图2B显示了MX169、MX368和MX369与人类CD28的ELISA结合结果。图2C显示了MX169、MX368和MX369与人类OX40的ELISA结合结果。这些结果显示，所有三种多特异性抗体都是功能活性的并且与CD3、CD28和OX40靶蛋白结合。
实施例3
荧光素酶报告子分析-MX169、MX368和MX369
为了评定多特异性抗体MX169、MX368和MX369对于T细胞活化的影响，进行体外荧光素酶报告子分析。根据制造商的方案制备NF-kB荧光素酶报告子Jurkat稳定细胞系(Signosis,CA,USA)和Jurkat-LuciaTMNFAT细胞(InvivoGen,CA,USA)。简单来说，使细胞在37℃水浴中解冻2分钟并且轻缓地转移至含有10mL预温热的R10培养基的15mL锥形离心管中。将细胞在室温下以300g离心5分钟。移除上清液之后，将细胞再悬浮于20mL预温热培养基中并且转移至75cm2培养瓶中，随后在哺乳动物组织培养孵育箱中孵育直至细胞生长并稳定(约3-4天)。使细胞在培养基+选择性抗生素中维持并且在解冻后约7天使用。
对于抗体刺激，将多特异性抗体或对照抗体连续稀释于PBS中，并且通过在37℃组织培养孵育箱中孵育2-4小时涂覆至96孔平底培养板上。用100μL细胞添加至含有抗体的每个孔中，将NF-kB荧光素酶报告子Jurkat稳定细胞再悬浮至2×106个细胞/毫升，并且在哺乳动物孵育箱中孵育24小时。然后，取出分析培养板并且使其平衡至环境温度(10-15分钟)。在分析培养板的每个孔中添加50μl的Bio-GloTM试剂(Promega目录号G7941)(环境温度)。5分钟之后，使用Varioskan微定量板式读取器(Thermo Fisher)测量发光活性。使用GraphPad Prism软件绘制数据。
用200μL细胞添加至含有抗体的每个孔中，将Jurkat-LuciaTMNFAT细胞再悬浮至7.5×105个细胞/毫升，并且在哺乳动物孵育箱中孵育24小时。将20μL细胞培养上清液吸移至新的96孔白壁微量滴定板中。然后将50μL的Quanti-Luc溶液(InvivoGen)添加至每个孔中，之后使用Varioskan微定量板式读取器(Thermo Fisher)测量发光活性。使用GraphPadPrism软件绘制数据。
图3A显示了对于MX169、MX368和MX369来说，在NF-κB(NFkB)启动子控制下表达荧光素酶的Jurkat细胞系中测试的T细胞活化的倍数变化。图3B显示了对于MX169、MX368和MX369来说，在NFAT启动子控制下表达荧光素酶的Jurkat细胞系中测试的T细胞活化的倍数变化。还显示了对照IgG1同型抗体的结果(IgG1同型)。这些结果显示，所有三种多特异性抗体都是功能活性的并且使用任一启动子引起T细胞的剂量依赖性活化。
实施例4
T细胞增殖分析-MX169、MX368和MX369
为了评定多特异性抗体MX169、MX368和MX369对于T细胞的影响，进行体外T细胞增殖分析和流式细胞术。将经纯化的人类外周血单核细胞(PBMC)(Blood ResearchComponent,Brookline,MA,USA)再悬浮于培养基(具有10％胎牛血清(FBS)并补充有青霉素链霉素的RPMI1640)(Gibco)(2.5×105个细胞/毫升)中。通过在37℃组织培养孵育箱中孵育2-4小时，首先将连续稀释的多特异性抗体和对照抗体涂覆至96孔平底培养板上。然后将PBMC(200μL)添加至含有抗体的每个孔中，并且在37℃组织培养孵育箱中孵育7天。
在孵育期间4天后更换细胞培养基。将细胞离心，洗涤，并且用经荧光标记的抗体(针对T细胞标记(诸如CD2、CD4和CD8))以及存活染料和Precision Count BeadsTM(Biolegend)进行染色，之后在Attune流式细胞仪(Thermo Fisher Scientific,USA)上获取。使用FlowJo软件分析数据。通过除以来自第7天和第0天的细胞浓度，计算在处理的情况下CD4+和CD8+T细胞增殖的倍数变化。
图4A至图4F显示了在用MX169、MX368和MX369处理后，三个不同供体的原代人类CD4+T细胞(图4A至图4C)和CD8+T细胞(图4D至图4F)的增殖的倍数变化。还显示了对照IgG1同型抗体的结果(IgG1同型)。这些结果显示，所有三种多特异性抗体均诱导CD4+和CD8+T细胞增殖。
实施例5
多特异性4-1BBL融合抗体ELISA结合分析
如实施例1中所阐述制备并纯化与CD3和CD28结合并且含有4-1BBL三聚体的三种多特异性抗体(MX306、MX424和MX425)。为了评定抗体与其靶蛋白的结合，进行ELISA结合分析。
在4℃下，将多特异性抗体的每个结合位点的靶蛋白涂覆于96孔Immuno培养板(Thermo Fisher Scientific)的孔中过夜。在室温下，使用含5％脱脂乳+2％牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲盐水(PBS)+0.25％ Tween将所涂覆的培养板封闭一小时，然后用PBS+0.25％Tween 20洗涤三次。将连续稀释的抗体和对照分子添加至培养板中并且在室温下孵育1小时。将培养板用PBS+0.25％ Tween 20洗涤三次，与辣根过氧化酶(HRP)结合的检测抗体一起在室温下孵育一小时，再次洗涤，然后用过氧化酶底物(KPL,Gaithersburg,MD,USA)显色。通过添加100μl的KPL TMB BlueSTOP溶液终止反应之后，使用读板器在OD650读取培养板，并且在GraphPad Prism中分析数据。
图5A显示了MX306、MX424和MX425与人类CD3的ELISA结合结果。图5B显示了MX306、MX424和MX425与人类CD28的ELISA结合结果。图5C显示了MX306、MX424和MX425与人类4-1BBL的ELISA结合结果。这些结果显示，所有三种多特异性抗体都是功能活性的并且与CD3、CD28和4-1BBL靶蛋白结合。
实施例6
T细胞增殖分析-MX306、MX424和MX425
为了评定多特异性抗体MX306、MX424和MX425对于T细胞的影响，进行体外T细胞增殖分析和流式细胞术。将PBMC(Blood Research Component,Brookline,MA,USA)再悬浮于培养基(具有10％胎牛血清(FBS)并补充有青霉素链霉素的RPMI1640)(Gibco)(2.5×105个细胞/毫升)中。通过在37℃组织培养孵育箱中孵育2-4小时，首先将连续稀释的多特异性抗体和对照抗体涂覆至96孔平底培养板上。然后将PBMC(200μL)添加至含有抗体的每个孔中，并且在37℃组织培养孵育箱中孵育7天。
在孵育期间4天后更换细胞培养基。将细胞离心，洗涤，并且用经荧光标记的抗体(针对T细胞标记(诸如CD2、CD4和CD8))以及存活染料和Precision Count BeadsTM(Biolegend)进行染色，之后在Attune流式细胞仪(Thermo Fisher Scientific,USA)上获取。使用FlowJo软件分析数据。通过除以来自第7天和第0天的细胞浓度，计算在处理的情况下CD4+和CD8+T细胞增殖的倍数变化。
图6A至图6F显示了在用MX306、MX424和MX425处理后，三个不同供体的原代人类CD4+T细胞(图6A至图6C)和CD8+T细胞(图6D至图6F)的增殖的倍数变化。还显示了对照IgG1同型抗体的结果(IgG1同型)。这些结果显示，所有三种多特异性抗体均诱导CD4+和CD8+T细胞增殖。
实施例7
在OX40L融合抗体的情况下，人类CD4记忆T细胞的增殖
为了评定多特异性抗体对于T细胞的影响，进行体外T细胞增殖分析和流式细胞术。如实施例1中所阐述制备MX169。也如实施例1中所阐述制备含有OX40L三聚体的二聚体以及CD3和CD28的结合位点的MX240，如图7A至图7B中所示。
对于分析，将经纯化的人类PBMC(Blood Research Component,Brookline,MA,USA)再悬浮于培养基(具有10％ FBS并补充有青霉素链霉素的RPMI1640)(Gibco)(2.5×105个细胞/毫升)中。或者，将经纯化的石蟹猕猴PBMC(Humancells Biosciences)再悬浮于培养基(具有10％ FBS并补充有青霉素链霉素和rIL-2(50单位/mL)的RPMI1640)(Gibco)中。通过在37℃组织培养孵育箱中孵育2-4小时，首先将连续稀释的多特异性抗体和对照抗体(IgG1同型)涂覆至96孔平底培养板上。然后将PBMC(200μL)添加至含有抗体的每个孔中，并且在37℃组织培养孵育箱中孵育多个时间点(至多10天)。在孵育4天后更换细胞培养基。将细胞离心，洗涤，并且用经荧光标记的抗体(针对T细胞标记(诸如CD4和CD8))以及存活染料和Precision Count BeadsTM(Biolegend)进行染色，之后在Attune流式细胞仪(ThermoFisher Scientific,USA)上获取。鉴别CD4和CD8 T细胞，并且通过CD45RA和CCR7表达表征记忆T细胞子集。通过除以来自第7天和第0天的细胞浓度计算倍数变化。使用FlowJo软件分析数据。
图7A至图7B显示了由MX169和MX240引起的T细胞增殖，测量为来自两个供体(分别图7A和图7B)的PBMC中CD4的倍数变化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。这些结果显示，MX169和MX240两者均诱导CD4记忆T细胞增殖。
实施例8
在OX40L融合抗体时程的情况下，人类CD4记忆T细胞的增殖
为了评定多特异性抗体对于T细胞的影响，进行体外T细胞增殖分析和流式细胞术。如实施例1中所阐述制备MX169、MX368和MX369。如实施例7中所阐述进行分析。将PBMC与多特异性抗体一起孵育3、7和10天。
图8显示了来自三个供体的由MX169、MX368和MX369引起的T细胞增殖，测量为PBMC中CD4的倍数变化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。这些结果显示，MX169、MX368和MX369均诱导CD4记忆T细胞增殖。
实施例9
在OX40L融合抗体的情况下，人类CD8记忆T细胞的增殖
为了评定多特异性抗体对于T细胞的影响，进行体外T细胞增殖分析和流式细胞术。如实施例1中所阐述制备MX169。如实施例7中所阐述制备MX240。如实施例7中所阐述进行分析。
图9显示了来自两个供体的由MX169和MX240引起的T细胞增殖，测量为PBMC中CD8的倍数变化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。这些结果显示，MX169和MX240均诱导CD8记忆T细胞增殖。
实施例10
在OX40L融合抗体时程的情况下，人类CD8记忆T细胞的增殖
为了评定多特异性抗体对于T细胞的影响，进行体外T细胞增殖分析和流式细胞术。如实施例1中所阐述制备MX169、MX368和MX369。如实施例7中所阐述进行分析。将PBMC与多特异性抗体一起孵育3、7和10天。
图10显示了来自三个供体的由MX169、MX368和MX369引起的T细胞增殖，测量为PBMC中CD8的倍数变化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。这些结果显示，MX169、MX368和MX369均诱导CD8记忆T细胞增殖。
实施例11
在41BBL融合抗体的情况下，人类CD4和CD8记忆T细胞的增殖
为了评定多特异性抗体对于T细胞的影响，进行体外T细胞增殖分析和流式细胞术。如实施例5中所阐述制备MX306。也如实施例5中所阐述制备含有4-1BBL三聚体的二聚体以及CD3和CD28的结合位点的MX321，如图11中所示。如实施例7中所阐述进行分析。
图11显示了来自两个供体的由MX306和MX321引起的T细胞增殖，测量为PBMC中CD4或CD8的倍数变化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。这些结果显示，MX306和MX321均诱导CD4和CD8记忆T细胞增殖。
实施例12
在4-1BBL融合抗体时程的情况下，人类CD4记忆T细胞的增殖
为了评定多特异性抗体对于T细胞的影响，进行体外T细胞增殖分析和流式细胞术。如实施例5中所阐述制备MX306、MX424和MX425。如实施例7中所阐述进行分析。将PBMC与多特异性抗体一起孵育3、7和10天。
图12显示了来自三个供体的由MX306、MX424和MX425引起的T细胞增殖，测量为PBMC中CD4的倍数变化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。这些结果显示，MX306、MX424和MX425均诱导CD4记忆T细胞增殖。
实施例13
在4-1BBL融合抗体时程的情况下，人类CD8记忆T细胞的增殖
为了评定多特异性抗体对于T细胞的影响，进行体外T细胞增殖分析和流式细胞术。如实施例5中所阐述制备MX306、MX424和MX425。如实施例7中所阐述进行分析。将PBMC与多特异性抗体一起孵育3、7和10天。
图13显示了来自三个供体的由MX306、MX424和MX425引起的T细胞增殖，测量为PBMC中CD8的倍数变化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。这些结果显示，MX306、MX424和MX425均诱导CD4记忆T细胞增殖。
实施例14
在OX40L融合抗体的情况下，从原代人类T细胞供体的Th1细胞因子释放浓度
为了评定多特异性抗体对于细胞因子释放的影响，进行以下分析。如上文所描述制备MX169、MX368和MX369。也使用上述方法制备MX170和MX250，其中所得结构显示于图14B中。
对于分析，使用MAP多重分析(Millipore Sigma)，采用DropArray系统(Curiox Biosystems,Singapore)，来分析细胞培养上清液。使用ProcartaPlexTM免疫分析(Thermo Fisher)，采用Drop Array系统来分析血浆样本。简单来说，将磁性分析物珠粒混合物添加至DropArray分析培养板中的孔中。然后将标准品、质量对照和稀释样本添加至培养板中；测试所有标准品和质量对照，重复两次，其中样本测试重复多次。将培养板置于加湿箱中的磁性台架上并且在4℃下振荡过夜。将培养板用DropArray LT210洗涤台(Curiox Biosystems)洗涤。将检测抗体和链球菌亲生物素蛋白-PE底物添加至每个孔中并且在振荡下孵育。洗涤培养板，之后通过Luminex MAGPIX仪读取。使用EMD MilliporeMilliplex Analyst软件或Thermofisher ProcartaplexAnalysis Tool分析数据。
图14A显示了由MX169、MX170、MX250、MX369和MX369引起的来自原代人类T细胞的IFNγ、IL-2、IL-6和TNFa释放。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
实施例15
在OX40L融合抗体的情况下，从原代人类T细胞供体50的Th2细胞因子释放浓度
为了评定多特异性抗体对于细胞因子释放的影响，进行以下分析。如上文所描述制备MX169、MX170、MX250、MX368和MX369并且使用实施例14中描述的方法分析。将PBMC与1nM多特异性抗体一起孵育4天和7天。
图15显示了由MX169、MX170、MX250、MX368和MX369引起的来自原代人类T细胞的IL-4、IL-5和IL-10释放。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
实施例16
在OX40L融合抗体的情况下，从原代人类T细胞供体51的Th1细胞因子释放浓度
为了评定多特异性抗体对于细胞因子释放的影响，进行以下分析。如上文所描述制备MX169、MX170、MX250、MX368和MX369并且使用实施例14中描述的方法分析。将PBMC与1nM多特异性抗体一起孵育4天和7天。
图16显示了由MX169、MX170、MX250、MX368和MX369引起的来自原代人类T细胞的IFNγ、IL-2、IL-6和TNFa释放。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
实施例17
在OX40L融合抗体的情况下，从原代人类T细胞供体51的Th2细胞因子释放浓度
为了评定多特异性抗体对于细胞因子释放的影响，进行以下分析。如上文所描述制备MX169、MX170、MX250、MX368和MX369并且使用实施例14中描述的方法分析。将PBMC与1nM多特异性抗体一起孵育4天和7天。
图17显示了由MX169、MX170、MX250、MX368和MX369引起的来自原代人类T细胞的IL-4、IL-5和IL-10释放。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
实施例18
在41BBL融合抗体的情况下，从原代人类T细胞供体50的Th1细胞因子释放浓度
为了评定多特异性抗体对于细胞因子释放的影响，进行以下分析。如上文所描述制备MX306、MX170、MX424和MX425。也使用上述方法制备MX318，其中所得结构显示于图18B中。使用实施例14中描述的方法分析多特异性抗体。将PBMC与1nM多特异性抗体一起孵育4天和7天。
FIG.18A显示了由MX306、MX170、MX318、MX424和MX425引起的来自原代人类T细胞的IFNγ、IL-2、IL-6和TNFa释放。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
实施例19
在41BBL融合抗体的情况下，从原代人类T细胞供体50的Th2细胞因子释放浓度
为了评定多特异性抗体对于细胞因子释放的影响，进行以下分析。如上文所描述制备MX306、MX170、MX318、MX424和MX425并且使用实施例14中描述的方法分析。将PBMC与1nM多特异性抗体一起孵育4天和7天。
图19显示了由MX306、MX170、MX318、MX424和MX425引起的来自原代人类T细胞的IL-4、IL-5和IL-10释放。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
实施例20
在41BBL融合抗体的情况下，从原代人类T细胞供体51的Th1细胞因子释放浓度
为了评定多特异性抗体对于细胞因子释放的影响，进行以下分析。如上文所描述制备MX306、MX170、MX318、MX424和MX425并且使用实施例14中描述的方法分析。将PBMC与1nM多特异性抗体一起孵育4天和7天。
图20显示了由MX306、MX170、MX318、MX424和MX425引起的来自原代人类T细胞的IFNγ、IL-2、IL-6和TNFa释放。还显示了对照抗体(IgG同型)的结果。
实施例21
在41BBL融合抗体的情况下，从原代人类T细胞供体51的Th2细胞因子释放浓度
为了评定多特异性抗体对于细胞因子释放的影响，进行以下分析。如上文所描述制备MX306、MX170、MX318、MX424和MX425并且使用实施例14中描述的方法分析。将PBMC与1nM多特异性抗体一起孵育4天和7天。
图21显示了由MX306、MX170、MX318、MX424和MX425引起的来自原代人类T细胞的IL-4、IL-5和IL10释放。还显示了对照抗体(IgG同型)的结果。
实施例22
在41BBL融合抗体的情况下，猴T细胞的活化
为了评定多特异性抗体对于细胞因子释放的影响，进行以下分析。如上文所描述制备MX424。也如上文所描述制备MX485、MX487、MX620和MX622，其具有图22B中显示的结构。使用实施例14中描述的方法分析多特异性抗体，其中变化如下：将NHP PBMC与1nM多特异性抗体在补充有rIL-2的培养基中一起孵育3天。然后将细胞进行染色以用于流式细胞术。鉴别出CD4和CD8细胞，并且通过CD25表达百分比来测定其活化状态。仅具有NHP反应性抗-CD3的抗体展现T细胞活化。
图22A显示了由MX424、MX485、MX487、MX620和MX622引起的猴CD4和CD8 T细胞的活化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
实施例23
在41BBL融合抗体的情况下，猴T细胞的增殖
还测试在用MX424、MX485、MX487、MX620和MX622处理后猴T细胞的增殖。将石蟹猕猴非人类灵长类动物(NHP)PBMC与1nM多特异性抗体在补充有rIL-2的培养基中一起孵育8天。然后将细胞进行染色以用于流动式细胞测量术。鉴别出CD4和CD8细胞，并且使用Precision Count BeadsTM(Biolegend)测定其浓度。通过用来自每个时间点的细胞浓度除以第0天的细胞浓度计算倍数变化。仅具有NHP反应性抗-CD3的抗体展现T细胞增殖。对于探索性NHP研究，对石蟹猕猴使用根据经机构动物照护与使用委员会(Institutional AnimalCare and Use Committee)批准的方案进行的所有动物程序和实验。经由多个1小时IV(10-30-100μg/kg)输注施用来施用MX487和MX620，或经由多个1小时IV(100-300μg/kg)输注施用来施用MX620。在注射前和在施用后直至第14天的所设计的多个时间点收集全血样本。使用一组细胞表面标记进行基于循环细胞的免疫表型的流式细胞术，以鉴别细胞亚群(CD2、CD4、CD8、CD45RA和CCR7)。
图23显示了由MX424、MX485、MX487、MX620和MX622引起的CD4和CD8细胞的倍数变化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
实施例24
来自与41BBL融合抗体一起孵育的猴T细胞的细胞因子释放浓度
测试在用MX424、MX485、MX487、MX620和MX622处理后猴T细胞的细胞因子释放。将石蟹猕猴非人类灵长类动物(NHP)PBMC与1nM多特异性抗体在补充有rIL-2的培养基中一起孵育3天。收集上清液并且使用分析进行多重分析以测定细胞因子浓度。(这个分析中检测到rIL-2补充剂)。
图24显示了由MX424、MX485、MX487、MX620和MX622引起的IFNγ、IL-6、IL-2和TNFa释放。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
实施例25
在OX40L融合抗体的情况下，猴T细胞的活化
测试在用MX368和MX489处理后猴T细胞的活化。如上文所论述制备MX368。也如上文所论述制备MX489，其具有图25B中显示的结构。为了测试活化，将石蟹猕猴非人类灵长类动物(NHP)PBMC与1nM多特异性抗体在补充有rIL-2的培养基中一起孵育3天。然后将细胞进行染色以用于流式细胞术。鉴别出CD4和CD8细胞，并且通过CD25表达百分比来测定其活化状态。仅具有NHP反应性抗-CD3的抗体展现T细胞活化。
图25A显示了由MX368和MX489引起的CD4和CD8猴T细胞的活化。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
实施例26
在OX40L融合抗体的情况下，猴T细胞的增殖
如上文所阐述测试在用MX368和MX489处理后，猴T细胞的增殖。将石蟹猕猴非人类灵长类动物(NHP)PBMC与1nM多特异性抗体在补充有rIL-2的培养基中一起孵育8天。然后将细胞进行染色以用于流式细胞术。鉴别出CD4和CD8细胞，并且使用Precision CountBeadsTM(Biolegend)测定其浓度。通过用来自每个时间点的细胞浓度除以第0天的细胞浓度计算倍数变化。仅具有NHP反应性抗-CD3的抗体展现T细胞增殖。
图26显示了由MX368和MX489引起的CD4和CD8猴T细胞的增殖。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
实施例27
来自与OX40L融合抗体一起孵育的猴T细胞的细胞因子释放浓度
如上文所阐述测试在用MX368和MX489处理后，来自猴T细胞的细胞因子释放。将石蟹猕猴非人类灵长类动物(NHP)PBMC与1nM多特异性抗体在培养基中一起孵育3天。收集上清液并且使用分析进行多重分析以测定细胞因子浓度。
图27显示了由MX368和MX489引起的来自猴T细胞的IFNγ(IFNg)、IL-6、IL-2和TNFa释放。还显示了对照抗体(IgG1同型)的结果。
实施例28
NHP中的T细胞扩增，然后在41BBL融合抗体MX487给药后返回至基线
对两个石蟹猕猴非人类灵长类动物(NHP)给与3个动物内递增剂量的41BBL融合抗体MX487，其以0.01、0.03mg/kg开始，并且最终剂量为0.1mg/kg。在每个时间点收集血液并且通过流式细胞术进行免疫表型分型。结果显示于图28中。箭头指示抗体给药。这些结果显示，灵长类动物中的T细胞扩增，然后在MX487给药后返回至基线。
实施例29
在41BBL融合抗体MX487给药后，原初T细胞记忆子集在NHP中占主导
对石蟹猕猴NHP给与3个动物内递增剂量的41BBL融合抗体MX487，其中0.01、0.03和0.1mg/kg作为最终剂量。在第一次给药后1周收集血液并且通过流动式细胞测量术进行免疫表型分型。记忆T细胞子集的特征在于CD45RA和CCR7表达。
图29显示了来自两个不同动物的CD4和CD8 T细胞的原初、Tcm、Teff和Tem群体的百分比。这些结果显示，在用MX487处理后，原初CD4和CD8记忆T细胞是灵长类动物中的主要群体。
实施例30
在41BBL融合抗体MX620给药后，NHP中的T细胞极大地扩增
对石蟹猕猴NHP给与3个动物内递增剂量的41BBL融合抗体MX620，其中0.01、0.03和0.1mg/kg作为最终剂量。在每个时间点收集血液并且通过流式细胞术进行免疫表型分型。
图30显示了来自用MX620处理的两个NHP的T细胞数目以及CD4和CD8 T细胞活化。箭头指示Ab给药。这些结果显示，用MX620处理后，T细胞极大地扩增。
实施例31
在41BBL融合抗体MX620给药后，效应记忆T细胞子集在NHP中占主导
对石蟹猕猴NHP给与3个动物内递增剂量的41BBL融合抗体MX620，其中0.01、0.03和0.1mg/kg作为最终剂量。在第一次给药后1周收集血液并且通过流动式细胞测量术进行免疫表型分型。记忆T细胞子集的特征在于CD45RA和CCR7表达。
图31显示了来自两个不同动物的CD4和CD8 T细胞的原初、Tcm、Teff和Tem群体的百分比。
实施例32
在41BBL融合抗体MX620给药后，NHP中的T细胞扩增
对石蟹猕猴NHP给与两个动物内递增剂量的41BBL融合抗体MX620，0.1和0.3mg/kg。在每个时间点收集血液并且通过流式细胞术进行免疫表型分型。使用Precision CountBeadsTM(Biolegend)测定细胞浓度。通过用来自每个时间点的细胞浓度除以第-2天值来计算倍数变化。
图32显示了在用MX620处理后，来自2个NHP的T细胞数目的倍数变化以及CD4和CD8T细胞活化。箭头指示Ab给药。这些结果显示，在MX620给药后，来自NHP的T细胞扩增。
实施例33
在41BBL融合抗体MX620给药后，效应记忆CD8 T细胞子集在NHP
中占主导
对石蟹猕猴NHP给与两个动物内递增剂量的41BBL融合抗体MX620，0.1和0.3mg/kg。在每个时间点收集血液并且通过流式细胞术进行免疫表型分型。记忆T细胞子集的特征在于CD45RA和CCR7表达。使用Precision Count BeadsTM(Biolegend)测定细胞浓度。通过用来自每个时间点的细胞浓度除以第-2天值来计算倍数变化。
图33显示了来自二个不同NHP的CD8 T细胞的原初、Tcm、Teff和Tem群体的倍数变化。箭头指示Ab给药。
实施例34
Z138细胞的体外杀灭由CD19xCD20/CD3_4-1BBL融合抗体介导
如上文所描述制备具有图34中显示的结构的MX582和MX583融合抗体。使用以下分析测试在用MX582和MX583处理48小时(E:T比率为3:1)后的Z138细胞杀灭。Z138肿瘤靶细胞用PKH26染料标记，然后在培养基中洗涤。将靶细胞以2×104个细胞的最终浓度涂铺至96孔U形底培养板中。制备Pan-T细胞，并且以6×104个细胞/孔的最终浓度，以3:1的E:T比率添加。将抗体连续稀释于培养基中并添加，最终浓度在2.5nM降至0.8pM之间。在37℃下在5％CO2中孵育培养板48小时。在孵育后将细胞离心并且用紫色死细胞染料(Violet deadstain)1:1000染色20分钟。洗涤染料并且将细胞再悬浮于FACS固定缓冲液中。通过AttuneCytpix流式细胞仪分析细胞，随后使用FloJo软件分析。靶细胞闸控为PE阳性。鉴别出呈APC阳性的死靶细胞。体外杀灭活化效果计算为细胞溶解活性百分比。溶解％＝100-(实验活靶细胞/对照抗体组活靶细胞的平均值)×100。在GraphPad Prism中处理细胞毒性百分比。
图34显示了在用增加浓度的MX582和MX583处理后，Z138细胞的溶解百分比。还显示了用对照抗体(hIgG1LALAPA)的处理。这些结果显示，MX582和MX583介导针对Z138细胞的细胞杀灭。
实施例35
Z138细胞的体外杀灭由CD19xCD20/CD3_of_4-1BBL融合抗体介导
如上文所描述制备具有图35中显示的结构的MX751、MX777和MX778融合抗体。如上文所描述测试在用MX751、MX777和MX778处理48小时(E:T比率为3:1)后的Z138细胞杀灭。
图35显示了在用增加浓度的MX751、MX777和MX778处理后，Z138细胞的溶解百分比。还显示了用对照抗体(hIgG1LALAPA)的处理。这些结果显示，MX751、MX777和MX778介导针对Z138细胞的细胞杀灭。
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Claims (56)
1.一种抗原结合多肽复合物，所述抗原结合多肽复合物包含第一多肽、第二多肽和第三多肽；
(a)其中所述第一多肽具有由以下表示的结构：
VL1-L1-CL；
VL1-L1-CH1；
VH1-L1-CL；或
VH1-L1-CH1；
其中：
(i)所述第二多肽具有由以下表示的结构：
VH1-L2-CH1-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；
VH1-L2-CL-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；
VH1-L7-CH1-L8-Fc；
VH1-L7-CL-L8-Fc；
VL1-L2-CH1-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；
VL1-L2-CL-L3-Fc-L4-TNF1-L5-TNF2-L6-TNF3；
VL1-L7-CH1-L8-Fc；或
VL1-L7-CL-L8-Fc；并且
所述第三多肽具有由以下表示的结构：
VL2-L9-VH2-L10-Fc-L11-TNF1-L12-TNF2-L13-TNF3；或
VH2-L14-VL2-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3；
或
(ii)所述第二多肽具有由以下表示的结构：
VH1-L19-CH1-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；
VH1-L19-CL-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；
VL1-L19-CH1-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；或
VL1-L19-CL-L20-Fc-L21-TNF1-L22-TNF2-L23-TNF3；并且
所述第三多肽具有由以下表示的结构：
VL2-L24-VH2-L25-Fc；或
VH2-L26-VL2-L27-Fc；
其中：
VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；
VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；
VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；
VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；
Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；
CH1是免疫球蛋白重链恒定区1；
CL是免疫球蛋白轻链恒定区；
TNF1是肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)配体的第一细胞外结构域；TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；
TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且L1-L27是氨基酸接头；或
(b)其中所述第一多肽具有由以下表示的结构：
VL1-L1-CL；
VL1-L1-CH1；
VH1-L1-CL；或
VH1-L1-CH1；
其中：
(i)所述第二多肽具有由以下表示的结构：
VH1-CH1-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；
VH1-CL-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；
VH1-CH1-L6-Fc；
VH1-CL-L7-Fc；
VL1-CH1-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；
VL1-CL-L2-Fc-L3-TNF1-L4-TNF2-L5-TNF3；VL1-CH1-L6-Fc；或
VL1-CL-L7-Fc；并且
所述第三多肽具有由以下表示的结构：
VL2-L8-VH2-L9-Fc-L10-TNF1-L11-TNF2-L12-TNF3；或VH2-L13-VL2-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；或
(ii)所述第二多肽具有由以下表示的结构：
VH1-CH1-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；
VH1-CL-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；
VL1-CH1-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；或VL1-CL-L18-Fc-L19-TNF1-L20-TNF2-L21-TNF3；并且所述第三多肽具有由以下表示的结构：
VL2-L22-VH2-L23-Fc；或
VH2-L24-VL2-L25-Fc；
其中：
VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；
VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；
VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；
VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；
Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；
CH1是免疫球蛋白重链恒定区1；
CL是免疫球蛋白轻链恒定区；
TNF1是肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)配体的第一细胞外结构域；
TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；
TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且
L1-L25是氨基酸接头。
2.一种抗原结合多肽复合物，所述抗原结合多肽复合物包含第一多肽和第二多肽；
其中：
(i)所述第一多肽具有由以下表示的结构：
VL1-L1-VH1-L2-Fc；
VH1-L3-VL1-L4-Fc；
VL1-L5-VH1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；
VL1-L5-VH1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；
VH1-L5-VL1-L6-CL-L7-CH1-L8-Fc；
VH1-L5-VL1-L6-CH1-L7-CL-L8-Fc；
VL1-L9-CL-L10-VH1-L11-CH1-L12-Fc；
VL1-L9-CH1-L10-VH1-L11-CL-L12-Fc；
VH1-L9-CL-L10-VL1-L11-CH1-L12-Fc；
VH1-L9-CH1-L10-VL1-L11-CL-L12-Fc；
VL1-L13-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；
VH1-L18-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；
VL1-L23-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；
VL1-L23-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；
VH1-L23-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；
VH1-L23-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；
VL1-VH1-L14-Fc-L15-TNF1-L16-TNF2-L17-TNF3；
VH1-VL1-L19-Fc-L20-TNF1-L21-TNF2-L22-TNF3；
VL1-VH1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；
VL1-VH1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；
VH1-VL1-L24-CL-L25-CH1-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；
VH1-VL1-L24-CH1-L25-CL-L26-Fc-L27-TNF1-L28-TNF2-L29-TNF3；
VL1-L30-CL-L31-VH1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；
VL1-L30-CH1-L31-VH1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；
VH1-L30-CL-L31-VL1-L32-CH1-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；或
VH1-L30-CH1-L31-VL1-L32-CL-L33-Fc-L34-TNF1-L35-TNF2-L36-TNF3；并且
所述第二多肽具有由以下表示的结构：
VL2-L37-VH2-L38-Fc-L39-TNF1-L40-TNF2-L41-TNF3；
VH2-L42-VL2-L43-Fc-L44-TNF1-L45-TNF2-L46-TNF3；
VL2-L47-VH2-L48-CL-L49-CH1-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3；
VL2-L54-CL-L55-VH2-L56-CH1-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3；
VL2-L47-VH2-L48-CH1-L49-CL-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3；
VL2-L54-CH1-L55-VH2-L56-CL-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3；
VL2-VH2-L38-Fc-L39-TNF1-L40-TNF2-L41-TNF3；
VH2-VL2-L43-Fc-L44-TNF1-L45-TNF2-L46-TNF3；
VL2-VH2-L48-CL-L49-CH1-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3；
VL2-CL-L55-VH2-L56-CH1-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3；
VL2-VH2-L48-CH1-L49-CL-L50-Fc-L51-TNF1-L52-TNF2-L53-TNF3；或
VL2-CH1-L55-VH2-L56-CL-L57-Fc-L58-TNF1-L59-TNF2-L60-TNF3；
或
(ii)所述第一多肽具有由以下表示的结构：
VL1-L61-VH1-L62-Fc-L63-TNF1-L64-TNF2-L65-TNF3；
VH1-L66-VL1-L67-Fc-L68-TNF1-L69-TNF2-L70-TNF3；
VL1-L71-VH1-L72-CL-L73-CH1-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；
VL1-L71-VH1-L72-CH1-L73-CL-L74-Fc-L75-TNF1-L76-TNF2-L77-TNF3；
VL1-L78-CL-L79-VH1-L80-CH1-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；或
VL1-L78-CH1-L79-VH1-L80-CL-L81-Fc-L82-TNF1-L83-TNF2-L84-TNF3；并且
所述第二多肽具有由以下表示的结构：
VL2-L85-VH2-L86-Fc；
VH2-L87-VL2-L88-Fc；
VL2-L89-VH2-L90-CL-L91-CH1-L92-Fc；
VL2-L89-VH2-L90-CH1-L91-CL-L92-Fc；
VL2-L93-CL-L94-VH2-L95-CH1-L96-Fc；或
VL2-L93-CH1-L94-VH2-L95-CL-L96-Fc；
其中：
VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；
VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；
VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；
VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；
Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；
CH1是免疫球蛋白重链恒定区1；
CL是免疫球蛋白轻链恒定区；
TNF1是TNFSF配体的第一细胞外结构域；
TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；
TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且
L1-L96是氨基酸接头。
3.一种抗原结合多肽复合物，所述抗原结合多肽复合物包含第一多肽和第二多肽；
其中：
(i)所述第一多肽具有由以下表示的结构：
Fc；
VL1-L1-VL2-L2-VH2-L3-VH1-L4-Fc；
VH1-L5-VH2-L6-VL2-L7-VL1-L8-Fc；
Fc-L9-TNF1-L10-TNF2-L11-TNF3；
VL1-L12-VL2-L13-VH2-L14-VH1-L15-Fc-L16-TNF1-L17-TNF2-L18-TNF3；或
VH1-L19-VH2-L20-VL2-L21-VL1-L22-Fc-L23-TNF1-L24-TNF2-L25-TNF3；并且
所述第二多肽具有由以下表示的结构：
VL3-L26-VL4-L27-VH4-L28-VH3-L29-Fc-L30-TNF1-L31-TNF2-L32-TNF3；或
VH3-L33-VH4-L34-VL4-L35-VL3-L36-Fc-L37-TNF1-L38-TNF2-L39-TNF3；
或
(ii)所述第一多肽具有由以下表示的结构：
Fc-L40-TNF1-L41-TNF2-L42-TNF3；
VL1-L43-VL2-L44-VH2-L45-VH1-L46-Fc-L47-TNF1-L48-TNF2-L49-TNF3；或
VH1-L50-VH2-L51-VL2-L52-VL1-L53-Fc-L54-TNF1-L55-TNF2-L56-TNF3；并且
所述第二多肽具有由以下表示的结构：
Fc；
VL3-L57-VL4-L58-VH4-L59-VH3-L60-Fc；或
VH3-L61-VH4-L62-VL4-L63-VL3-L64-Fc；
其中：
VL1是第一免疫球蛋白轻链可变区；
VL2是第二免疫球蛋白轻链可变区；
VL3是第三免疫球蛋白轻链可变区；
VL4是第四免疫球蛋白轻链可变区；
VH1是第一免疫球蛋白重链可变区；
VH2是第二免疫球蛋白重链可变区；
VH3是第三免疫球蛋白重链可变区；
VH4是第四免疫球蛋白重链可变区；
Fc是包含免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)、免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)和任选的免疫球蛋白铰链的区域；
TNF1是TNFSF配体的第一细胞外结构域；
TNF2是TNFSF配体的第二细胞外结构域；
TNF3是TNFSF配体的第三细胞外结构域；并且
L1-L64是氨基酸接头。
4.如权利要求1至3中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中接头L1-L96中的一者或多者的长度为约0个氨基酸至约50个氨基酸。
5.如权利要求1至4中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中接头L1-L96中的一者或多者无免疫原性。
6.如权利要求1至5中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中接头L1-L96中的一者或多者不含有共同的T细胞表位。
7.如权利要求1至6中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中接头L1-L96中的一者或多者包含SEQ ID NO:3-10和148-175中的任一者的氨基酸序列或与SEQ ID NO:3-10和148-175中的任一者具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％同一性的序列。
8.如权利要求1所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1和VH1与CD3特异性结合。
9.如权利要求8所述的抗原结合多肽复合物，
其中VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且
其中VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和302中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26、183、295和303中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和304中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
10.如权利要求9所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1包含与SEQ ID NO:45具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，并且VH1包含与SEQ IDNO:43或44具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列。
11.如权利要求1和8至10中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2和VH2与肿瘤相关抗原(TAA)或免疫刺激受体特异性结合。
12.如权利要求11所述的抗原结合多肽复合物，其中所述肿瘤相关抗原是酪氨酸蛋白激酶Met(cMet)、滋养层细胞表面抗原2(Trop2)、CD20、CD19、受体酪氨酸蛋白激酶erbB-2(HER2)、受体酪氨酸蛋白激酶erbB-3(HER3)、腺苷A2A受体(A2AR)、增殖诱导性配体(APRIL)、表皮生长因子受体(EGFR)、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)、B细胞活化因子(BAFF)、BAFF受体(BAFFR)、B细胞成熟抗原(BCMA)、布鲁顿氏酪氨酸激酶(BTK)、B和T淋巴细胞弱化子(BTLA)、B7DC(程序性死亡配体2)、B7同源物1(B7H1)、B7同源物4(B7H4)、δ样配体3(DLL3)、外核苷三磷酸二磷酸水解酶1(ENTPD1)、IgE受体的Fc片段1a(FCER1A)、IgE受体的Fc片段1(FCER1)、花生四烯酸5-脂氧合酶活化蛋白(FLAP)、叶酸羟化酶1(FOLH1)、粘蛋白1(MUC-1)、CD133、粘蛋白16(MUC-16)、溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)、CD38、程序性死亡配体1(PD-L1)、CEA细胞粘附分子5(CEACAM5)、前列腺六跨膜上皮抗原1(STEAP1)或上皮细胞粘附分子(EpCAM)。
13.如权利要求11所述的抗原结合多肽复合物，其中所述TAA是HER2，或所述免疫刺激受体是CD28。
14.如权利要求1和8至13中任一项所述的抗原结合多肽复合物，
其中VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34、40、274、282、290、314或322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35、41、275、283、291、315或323具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:36、42、276、284、292、316或324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且
其中VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31、37、270、278、286、310或318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32、38、271、279、287、311或319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:33、39、272、280、288、312或320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
15.如权利要求14所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2包含与SEQ ID NO:47、49、273、281、289、313或321具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，并且VH2包含与SEQ ID NO:46、48、269、277、285、309或317具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列。
16.如权利要求1所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2和VH2与CD3特异性结合。
17.如权利要求16所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1和VH1与TAA或免疫刺激受体特异性结合。
18.如权利要求17所述的抗原结合多肽复合物，其中所述TAA是HER2，或所述免疫刺激受体是CD28。
19.如权利要求2所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1和VH1与CD3特异性结合。
20.如权利要求19所述的抗原结合多肽复合物，
其中VL1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且
其中VH1包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和302中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26、183、295和303中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和304中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
21.如权利要求20所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1包含与SEQ ID NO:45、297或305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，并且VH1包含与SEQ ID NO:43、44、188、293和301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列。
22.如权利要求2和19至21中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2和VH2与TAA或免疫刺激受体特异性结合。
23.如权利要求22所述的抗原结合多肽复合物，其中所述TAA是cMet、Trop2、CD20、CD19、HER2、HER3、A2AR、APRIL、EGFR、FGFR、BAFF、BAFFR、BCMA、BTK、BTLA、B7DC、B7H1、B7H4、DLL3、ENTPD1、FCER1A、FCER1、FLAP、FOLH1、MUC-1、CD133、MUC-16、LAMP1、CD38、PD-L1、CEACAM5、STEAP1或EpCAM。
24.如权利要求22所述的抗原结合多肽复合物，其中所述TAA是HER2，或所述免疫刺激受体是CD28。
25.如权利要求2和19至24中任一项所述的抗原结合多肽复合物，
(i)其中VL2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34、40、274、282、290、314和322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35、41、275、283、291、315和323中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:36、42、276、284、292、316和324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且
其中VH2包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31、37、270、278、286、310和318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32、38、271、279、287、311和319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:33、39、272、280、288、312和320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；或
(ii)其中VL2包含与SEQ ID NO:47、49、273、281、289、313或321具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，并且VH2包含与SEQ ID NO:46、48、269、277、285、309或317具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列。
26.如权利要求2所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2和VH2与CD3特异性结合。
27.如权利要求2或26所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1和VH1与TAA或免疫刺激受体特异性结合。
28.如权利要求27所述的抗原结合多肽复合物，其中所述TAA是HER2，或所述免疫刺激受体是CD28。
29.如权利要求2所述的抗原结合多肽复合物，其中所述抗原结合多肽的所述VL1和所述VH1与CD3特异性结合，并且所述VL2和所述VH2与TAA或免疫刺激受体特异性结合；或所述抗原结合多肽的所述VL2和所述VH2与CD3特异性结合，并且所述VL1和所述VH1与TAA或免疫刺激受体特异性结合。
30.如权利要求3所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1、VH1、VL3和VH3与CD3特异性结合。
31.如权利要求3或30所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2、VH2、VL4和VH4与TAA或免疫刺激受体特异性结合。
32.如权利要求31所述的抗原结合多肽复合物，其中所述TAA是HER2，或所述免疫刺激受体是CD28。
33.如权利要求3所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1、VH1、VL4和VH4与CD3特异性结合。
34.如权利要求3或30所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2、VH2、VL3和VH3与TAA或免疫刺激受体特异性结合。
35.如权利要求34所述的抗原结合多肽复合物，其中所述TAA是HER2，或所述免疫刺激受体是CD28。
36.如权利要求3所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2、VH2、VL4和VH4与CD3特异性结合。
37.如权利要求3或30所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1、VH1、VL3和VH3与TAA或免疫刺激受体特异性结合。
38.如权利要求37所述的抗原结合多肽复合物，其中所述TAA是HER2，或所述免疫刺激受体是CD28。
39.如权利要求3所述的抗原结合多肽复合物，其中VL2、VH2、VL3和VH3与CD3特异性结合。
40.如权利要求3或30所述的抗原结合多肽复合物，其中VL1、VH1、VL4和VH4与TAA或免疫刺激受体特异性结合。
41.如权利要求40所述的抗原结合多肽复合物，其中所述TAA是HER2，或所述免疫刺激受体是CD28。
42.如权利要求30至41中任一项所述的抗原结合多肽复合物，
其中与CD3特异性结合的所述VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:22、28、185、298和306中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:23、29、186、299和307中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:24、30、187、300和308中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且
其中与CD3特异性结合的所述VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:19、25、182、294和302中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:20、26、183、295和303中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:21、27、184、296和304中的任一者具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
43.如权利要求42所述的抗原结合多肽复合物，其中与CD3特异性结合的所述VL包含与SEQ ID NO:45、297或305具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，并且与CD3特异性结合的所述VH包含与SEQ ID NO:43、44、188、293或301具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列。
44.如权利要求30至43中任一项所述的抗原结合多肽复合物，
其中与TAA或免疫刺激受体特异性结合的所述VL包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:34、40、274、282、290、314或322具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:35、41、275、283、291、315或323具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:36、42、276、284、292、316或324具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；并且
其中与TAA或免疫刺激受体特异性结合的所述VH包含：CDR1，其包含与SEQ ID NO:31、37、270、278、286、310或318具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；CDR2，其包含与SEQ ID NO:32、38、271、279、287、311或319具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列；和CDR3，其包含与SEQ ID NO:33、39、272、280、288、312或320具有至少90％同一性、至少95％同一性或100％同一性的氨基酸序列。
45.如权利要求44所述的抗原结合多肽复合物，其中与TAA或免疫刺激受体特异性结合的所述VL包含与SEQ ID NO:47、49、273、281、289、313或321具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列，并且与TAA或免疫刺激受体特异性结合的所述VH包含与SEQ ID NO:46、48、269、277、285、309或317具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％同一性的氨基酸序列。
46.如权利要求1至45中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中TNF1、TNF2和TNF3各自选自由以下组成的组：OX40L(TNFSF4)、4-1BBL(TNFSF9)、TNF、TNF相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)、CD40L(TNFSF5)、CD27L(TNFSF7)、CD30L(TNFSF8)、FasL(TNFSF6)、EDAM、LTA(TNFSF1)、LTB(TNFSF3)、CD153(TNFSF8)、RANKL(TNFSF11)、TWEAK(TNFSF12)、APRIL(TNFSF13)、BAFF(TNFSF13B)、LIGHT(TNFSF14)、VEGI(TNFSF15)和GITRL(TNFSF18)。
47.如权利要求1至46中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中TNF1、TNF2和TNF3各自是OX40L。
48.如权利要求1至46中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中TNF1、TNF2和TNF3各自是4-1BBL。
49.如权利要求1至48中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中所述抗原结合多肽复合物是抗体或其抗原结合片段。
50.如权利要求1至49中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中所述免疫球蛋白铰链包含上铰链区、中铰链区、下铰链区或它们的组合。
51.如权利要求1至50中任一项所述的抗原结合多肽复合物，其中所述Fc区包含至少一个杵-臼修饰。
52.如权利要求51所述的抗原结合多肽复合物，其中所述抗原结合多肽复合物是IgG1或IgG4抗体，并且所述杵-臼修饰包含：
(i)S354C和T366W的杵取代以及Y349C、T366S、L368A和Y407V的臼取代；
(ii)L234A、L235A和P329A的臼取代；
(iii)L234A和L235A的臼取代；
(iv)M428L和N433S的臼取代；
(v)M252Y、S254T和T256E的臼取代；或
(vi)它们的组合；
所述修饰是基于EU编号方案。
53.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含权利要求1至52中任一项所述的抗原结合多肽复合物。
54.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至52中任一项所述的抗原结合多肽复合物或权利要求53所述的抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体。
55.一种诱导或增强免疫反应的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用权利要求1至52中任一项所述的抗原结合多肽复合物、权利要求53所述的抗体或其抗原结合片段、或权利要求54所述的药物组合物。
56.一种克服癌症介导的免疫抑制的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用权利要求1至52中任一项所述的抗原结合多肽复合物、权利要求53所述的抗体或抗原结合多肽复合物、或权利要求54所述的药物组合物。
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