CN1181874C - 一种治疗急性脑出血的药物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗急性脑出血的药物,它以大黄、蒲黄、栀子和冰片为原料,根据每味中药的不同特性,经过提取制成注射液。本发明药物对急性脑出血具有良好的治疗作用,能明显改善脑出血所致的偏瘫体征,缩小脑内血肿面积,减轻脑水肿和神经细胞的继发性损害;减少死亡率,提高存活质量,改善神经功能缺损,明显减少脑组织的含水量,提高脑内超氧化物歧化酶的活性,抑制脂质过氧化反应的发生,并有利尿作用;有效缩短血液的凝血时间和出血的止血时间;对神经元细胞有明显的保护作用,量效关系明显。
Description
所属技术领域
本发明涉及一种治疗急性脑出血的药物,具体涉及一种以中草药为原料制备的中成药,本发明还涉及该药物的制备方法。
背景技术
脑出血是急性脑血管病的主要病种之一,因其死亡和致残率极高,所以各国政府和卫生部门对其防治工作都极为重视。流行病学调查显示,脑血管病的患病率为500~700/10万人口,国内外统计数字基本一致,我国部分城市高达1000/10万人口,每年的发病率为165~245/10万人口。根据世界卫生组织(WHO)脑血管病协作组57个国家的统计资料,脑血管病列为前3种死亡原因的有40个国家,因脑血管病而病死的患者占57个国家总死亡率的11.3%,多数国家脑血管病死亡率接近100/10万人口·年。我国是世界范围内脑血管病的高发区之一,脑血管病近十年来一直是居民第二位的死亡原因,仅次于恶性肿瘤,而北方一些城市已上升为第一位。脑出血的病死率为40~60%,占脑血管病死亡数中的主要部分,国内外皆然;存活者中70~80%留有病残,且40%左右为重残,给患者造成巨大的生命威胁,同时生活质量受到严重影响,也给患者家庭乃至整个社会造成沉重的负担。
西医对本病的治疗目前仍以控制血压、脱水、降颅压,止血剂应用等对症治疗为主,对部分出血量大的病人或具有脑干压迫,脑疝,脑积水迹象者还需及时手术清除血肿。中医对脑出血急性期虽有安宫牛黄丸,至宝丹,苏合香丸,参附汤等治疗方法,但临床用药极不方便。近年来,有学者将原来用于冠心病和缺血性中风的复方丹参注射液用于急性脑出血的治疗,在促进患者意识恢复、血肿吸收和降低死亡率方面明显优于单用西药治疗组,说明活血化瘀法对急性脑出血具有确切的治疗作用。此外,在安宫牛黄丸基础上研制而成的清开灵注射液和醒脑静注射液,均采用了静脉给药方法。由于使用方便,适应了临床急救的需要,所以在临床上得到了广泛应用。但由于这些药物都仅仅针对脑出血复杂病机的某一环节进行治疗,故临床效果并不能尽如人意,所以临床迫切需要一种针对急性脑出血复杂病机,疗效确切,方便安全,质量稳定的急救用药。
发明内容
本发明的目的在于提供一种疗效确切、方便安全的治疗急性脑出血的药物。
本发明的另一目的在于提供该药物的制备方法。
本发明提供的一种治疗急性脑出血的药物,是由下述重量配比的原料制成的药剂:
大黄80~120 蒲黄130~180
栀子135~180 冰片0.8~1.5。
上述用于治疗急性脑出血的药物,可以制成药剂学上所说的多种剂型,如注射液、胶囊、片剂或散剂。
将上述重量配比的原料制成本发明药物的方法,包括以下步骤:
(1)大黄粉碎成粗粒,加5~12倍量70~80%乙醇,加热回流提取2~4次,每次1~4小时,合并醇提液,减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10~1.12,搅拌加入4%明胶溶液至无沉淀产生,再加乙醇使含醇量达75~85%,冷藏24~72小时,减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.30~1.35,真空干燥,得大黄干燥提取物;
(2)蒲黄、栀子压碎后,加6~10倍量80~90%乙醇回流提取2~4次,每次1~3小时,合并醇提液,减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10~1.12,冷藏24~72小时,滤过,滤液用等量乙酸乙酯萃取4~8次,减压回收乙酸乙酯至稠膏状,真空干燥,得蒲栀干燥提取物;
(3)取上述两干燥提取物,加注射用水溶解,加活性炭,充分搅拌,加热煮沸,放冷,滤过;
(4)冰片与泊洛沙姆研匀,搅拌加入上述滤液中使溶解,加入氯化钠,调pH值至7.0~8.0,滤过,滤液补加注射用水,再调pH值至7.0~8.0,然后用微孔滤膜滤过,滤液灌装于处理好的输液瓶中,热压灭菌,制得注射液。
本发明组方合理,严谨科学,方中大黄,苦、寒,归脾、胃、大肠、肝、心经。功能清热泻火,不仅寒能清热,而且能泻下泄热,对腑气不通,大便秘结,高热不退,甚则神昏谵语者起到釜低抽薪之功。邪热得祛,血热得凉,则血热妄行之出血可止。同时,大黄具有较好的活血祛瘀作用,在清热止血之同时,使脑窍之瘀血得散,故有止血而不留瘀的优点,用为君药。蒲黄,甘、平,归心、肝、心包经。生用既可行血祛瘀,又能收敛止血,与大黄一样具有止血而不留瘀的特点,适用于各种出血证。栀子苦、寒,主归心、肝、肺、胃,三焦经,可清心泻火除烦,又能清热利湿,其性寒凉,入血分,能清热凉血止血,故可用治血热迫血妄行之证,与蒲黄合用共助君药大黄以加强清热,凉血,止血之功,共为臣药。冰片,辛、苦,微寒,归心、脾、肺经。功似麝香而性凉,具开窍醒神之功,可治疗身热神昏等症,助臣药栀子以加强醒神开窍之功,用为佐药。诸药合用,共奏清热化瘀,醒脑开窍之功,使邪热得清,瘀血得祛,出血得止,脑窍得开,故中风神昏之证可愈。
临床试验结果表明,本发明药物对急性脑出血具有良好的治疗作用,能明显改善脑出血所致的偏瘫体征,缩小脑内血肿面积,减轻脑水肿和神经细胞的继发性损害;减少死亡率,提高存活质量,改善神经功能缺损,明显减少脑组织的含水量,提高脑内超氧化物歧化酶的活性,抑制脂质过氧化反应的发生,并有利尿作用;有效缩短血液的凝血时间和出血的止血时间;对神经元细胞有明显的保护作用,量效关系明显。
下面结合实施例及主要药效学试验对本发明作进一步的说明。
实施例1
称取大黄90g、蒲黄170g、栀子140g、冰片1g作为原料。以上四味,大黄粉碎成粗粒,加8倍量70%乙醇,加热回流提取三次,每次1小时,合并醇提液,减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10~1.12(50℃),搅拌加入4%明胶溶液至无沉淀产生,再加乙醇使含醇量达80%,冷藏24小时,减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.30~1.35(60℃),在80℃,6.86Kpa下真空干燥,得大黄干燥提取物。蒲黄、栀子压碎后加10倍量80%乙醇回流提取三次,每次2小时,合并醇提液,减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10~1.12(50℃),冷藏72小时,滤过,滤液用等量乙酸乙酯萃取5次,减压回收乙酸乙酯至稠膏状,在80℃,6.86Kpa下真空干燥,得蒲栀干燥提取物。取上述两干燥提取物,加800ml注射用水溶解,加1g活性炭,充分搅拌,加热煮沸15分钟,放冷,滤过。冰片与泊洛沙姆5g研匀,搅拌加入上述滤液中使溶解,加入2.24g氯化钠,用40%氢氧化钠溶液调pH值7.0~8.0,滤过,滤液补加注射用水至1000ml,再用40%氢氧化钠溶液调pH值7.0~8.0,然后用0.2μm微孔滤膜滤过,滤液灌装于处理好的100ml输液瓶中,塞入丁基橡胶塞,轧铝塑组合瓶盖,热压灭菌,制得本发明中药注射液。
实施例2
称取大黄110g、蒲黄140g、栀子150g、冰片1.2g作为原料。以上四味,大黄粉碎成粗粒,加6倍量80%乙醇,加热回流提取2次,每次2小时,合并醇提液,减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10~1.12(50℃),搅拌加入4%明胶溶液至无沉淀产生,再加乙醇使含醇量达80%,冷藏48小时,减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.30~1.35(60℃),在80℃,6.86Kpa下真空干燥,得大黄干燥提取物。蒲黄、栀子压碎后加8倍量85%乙醇回流提取三次,每次2小时,合并醇提液,减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10~1.12(50℃),冷藏60小时,滤过,滤液用等量乙酸乙酯萃取6次,减压回收乙酸乙酯至稠膏状,在80℃,6.86Kpa下真空干燥,得蒲栀干燥提取物。取上述两干燥提取物,加850ml注射用水溶解,加1.3g活性炭,充分搅拌,加热煮沸15分钟,放冷,滤过。冰片与泊洛沙姆6g研匀,搅拌加入上述滤液中使溶解,加入2.56g氯化钠,用40%氢氧化钠溶液调pH值7.0~8.0,滤过,滤液补加注射用水至1000ml,再用40%氢氧化钠溶液调pH值7.0~8.0,然后用0.2μm微孔滤膜滤过,滤液灌装于处理好的100ml输液瓶中,塞入丁基橡胶塞,轧铝塑组合瓶盖,热压灭菌,制得本发明中药注射液。
主要药效学试验
试验目的
根据本发明注射液的功效主治,研究其主要药效,为该药的临床应用提供药效学依据。
受试药物 本发明注射液,58.1%生药/100ml/瓶。
剂量设定
本发明注射液成人临床拟用法用量:静脉滴注,100ml/次,1次/日。若以每日注射ml,成人以70kg计算,则依“实验动物与人体表面积比等效量换算比率”可算出各动物的等效剂量。
小鼠的等效量为7.553(58.1×0.026×50)g/kg,实验用量的小剂量、中剂量、大剂量分别设定为3.7765g/kg、7.553g/kg、15.106g/kg。
大鼠的等效量为5.229(58.1×0.018×5)g/kg,实验用量的小剂量、中剂量、大剂量分别设定为2.6145g/kg、5.229g/kg、10.458g/kg。
兔的等效量为2.771(58.1×0.07÷1.5)g/kg,实验用量的小剂量、中剂量、大剂量分别设定为1.355g/kg、2.711g/kg、5.422g/kg。
给药途径包括iv与ip,与拟推荐的临床用药途径一致。
试验对照 空白对照组,给等体积的生理盐水。
数据处理 所有实验数据以x±s表示。计量数据由SPSS10.0统计软件进行方差分析及组间检验。
实验动物
清洁级ICR小鼠,体重18-20g,雌雄各半,动物证编号:SCXK11-00-0008,北京维通利华实验动物技术有限公司提供;日本大耳白兔,体重2.0-2.5kg,雌雄不限,动物许可证编号:京动许字第004号,中国农业科学院中国兽药监查所实验动物中心提供;SPF级Sprague-Dawley(SD)大鼠,体重250-300g,雄性,动物许可证编号:SCXK11-00-0008,北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
饲养条件:动物进入清洁级动物实验室后,大鼠每笼放养5只,饲养3天后使用;小鼠每笼10只,饲养3天后使用;兔每笼1只,由专人饲养管理。动物室光照充足,通风和空调设备良好,室温控制在23-25℃,相对湿度为50-70%。实验室按常规定期消毒。
阳性对照药:尼莫地平注射液(ND)。选药依据,此药系脑出血急性期临床常用药。规格:100mg/50ml,批号:0009039,山东新华制药股份有公司生产。用法与用量,静脉注射或滴注,2mg/次,大鼠按临床用量换算为30μg/kg。
材料与方法
一、试剂
超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化(LPO)试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。
二、实验方法及使用仪器
1、家兔急性脑出血模型的建立
实验动物均在术前1天耳静脉采血1ml,4℃存放,造模家兔在2%利多卡因局麻下于手术当日称取150mg自体血凝块装入20号穿刺针内,仿照Levine’s方法,行右侧脑内血块埋藏术。手术部分为:冠状缝前0.1cm,矢状逢右侧旁开0.6cm,深1.4cm。
2、实验分组
60只家兔随机分为六组
(1)假手术对照组10只,不造模。
(2)模型组10只,造模7日。
(3)阳性药尼莫地平注射液(ND)组,造模7日。
(4)本发明注射液大剂量组10只,造模7日。
(5)本发明注射液中剂量组10只,造模7日。
(6)本发明注射液小剂量组10只,造模7日。
手术后立即开始给药,阳性药ND 15ug/kg,iv;本发明注射液三组按相应剂量给予不同浓度的药液,iv;正常组及模型组则按相应容量的生理盐水,iv。连续给药六天。如不能正常进食,则每日灌一次浓奶粉20毫升。
3、标本处理
所有家兔均于照模后7日杀检,迅速取脑。造模各组兔脑沿纵裂均匀切为左右两半球,再经血肿正中冠状切开,分为左右前后4个部分,假手术组家兔脑也切成相应4部分,作组织检查,与含水量及SOD、LOP含量测定。
三、观察指标及检测指标
1、动物一般情况、体重、及死亡数
2、动物神经功能缺损分级变化动物神经功能缺损分级方案参照Bederson及爱丁堡与斯堪的那维亚研究组方案修订:
0级:正常
I级:一侧肢体轻度无力,略有跛行,可以直线行或有偏行(行进打偏半径超过1米);
II级:一侧肢体明显无力,头部轻度向另侧歪斜,跛行,不能向正前方直行,偏行半径在0.5-0.75米左右。
III级:一侧偏瘫,站立比较困难,不能行走,但可以卧位,有显著的歪头、口角歪斜;
IV组:一侧偏瘫,不能正卧,呈侧卧甚至仰卧,歪头及身体扭曲明显;或不能自主进食;神智迷朦,或抽搐频繁(10分钟内2次以上);
V级:昏迷或死亡。
3、脑指数与脑组织含水量测定
脑组织含水量测定按Gotoh等方法。
脑组织含水量=(脑湿重-脑干重)/脑湿重×100%
脑指数=脑湿重/体重×100%
称量采用电子天平(TA-1003,上海天平仪器厂)。脑组织经DF205型电热鼓风干燥箱(北京西城医用设备二厂)60℃7天烘至恒重(连续称重3次无变化),然后称取脑干重。
4、超氧化歧化酶、过氧化脂质水平的测定超氧化歧化酶SOD采用放射免疫法测定;过氧化脂质LPO以TBA法(测MDA含量)测定,722光栅分光光度计测定。
实验结果
1、动物一般情况及死亡数
家兔于造模术后均有不同程度的精神萎靡,左侧肢体肌张力增高,肌力减弱,以前肢为显著;蹦跳反射差,跛行,并向右侧(腱侧)偏转;模型组家兔饮食及剂量组家兔大便比较通畅,排便量基本同正常组,小便色泽较清。
表1本发明注射液对家兔急性脑出血后死亡数影响(x±s)
死亡数
组别 死亡率
3日 7日
假手术组(n=10) 0 0 0
模型组(n=14) 3 1 28.57
尼莫地平组(n=10) 0 0 0
小剂量组(n=13) 2 0 15.38
本发明 中剂量组(n=10) 0 0 0
大剂量组(n=10) 0 0 0
2、神经功能缺损分级变化
造模后第1天,模型组及治疗组家兔神经功能缺损分级相似(组间比较p>0.05),与正常组比较均有极显著的差异(P<0.01)。第6天观察,模型组家兔的神经功能缺损分组与第1天的分级差异无统计学意义(P>0.05),提示模型组的自然改善程度不显著;阳性组及本发明注射液第6天家兔神经功能缺损分级均有改善,但阳性组与正常组之间尚有差异(P<0.05),本发明注射液治疗组与第1天自身比较,均有显著性差异(p<0.01),与正常组比较无显著性差异(p>0.05),尢以本发明注射液大、中剂量治疗组明显,说明本发明注射液对家兔神经功能缺损分级的改善程度较大。
表3本发明注射液对家兔神经功能缺损分析的影响
神经功能缺损分级
组别 时间
0 I II III IV V
正常对照组 实验1日 0 0 0 0 0 0
实验6日 0 0 0 0 0 0
模型组 实验1日 0 3 3 2 2 0
实验6日 0 2 4 2 2 0
尼莫地平组 实验1日 0 3 4 2 1 0
实验6日 0 4 4 2 0 0
小剂量组 实验1日 0 3 5 1 1 0
实验6日 0 4 4 1 1 0
本发明 中剂量组 实验1日 0 3 5 1 1 0
实验6日 0 4 3 2 1 0
大剂量组 实验1日 0 5 3 1 1 0
实验6日 0 6 2 2 0 0
3、指数与脑组织含水量的变化
造模后第7天,模型组脑指数与右脑组织含水量均显著高于正常对照组,左脑含水量接近正常,提示模型组造模侧脑水肿仍明显。尼莫地平组及本发明注射液治疗组脑指数仍高,但低于模型组,较模型组均显著降低。尼莫地平组及本发明注射液大、中剂量治疗组右脑组织含水量均较模型组显著降低。提示阳性与本发明注射液均有减轻脑水肿的作用(见表4)。
表4本发明注射液对急性脑出血家兔脑指数与脑组织含水量的影响(x±s,n=10)
脑含水量(%)
组别 脑指数
左脑 右脑
对照组 0.273±0.020* 77.17±0.73 77.27±0.90**
模型组 0.386±0.038 78.02±1.04 79.30±1.06
尼莫地平组 0.305±0.044* 77.46±0.79 77.07±0.94**
小剂量组 0.333±0.048* 77.54±0.92 78.68±±0.84
本发明 中剂量组 0.301±0.043* 77.40±0.61 78.02±1.00**
大剂量组 0.293±0.047* 77.45±1.21 77.62±1.15**
与模型组比较*P<0.05,**P<0.01。
4、脑组织病理学检查
肉眼观察发现,模型组脑内血肿明显,而各组治疗脑内血肿缩小。
光学显微镜下观察(见附图):模型对照组:血肿明显,可见陈旧性的血凝块,血肿中有少量胶质细胞、单核细胞浸润;血肿周围脑组织水肿,组织疏松:本发明注射液小剂量组:血肿部分被吸收,血肿缩小,血肿部分有较多的胶质细胞、单核细胞浸润,并取代血肿。本发明注射液中剂量组:血肿大部分被吸收,血肿明显缩小,可见小的瘢痕;脑组织水肿明显减轻。本发明注射液大剂量组和尼莫地平组:病变类似,血肿大部分被吸收,有早期的胶质细胞瘢痕形成。
5、组织超氧化物岐化酶、过氧化脂质水平的变化
造模后7天观察,模型组家兔脑组织LPO含量均较正常组显著增高,SOD含量显著降低。阳性药组及本发明注射液大、中剂量组与模型组比较,LPO含量均降低;阳性药组及本发明注射液组SOD含量均增高。提示本发明注射液能升高组织SOD含量,降低LPO水平,从而减轻脑组织脂质过氧化反应。见表5。
表5本发明注射液对急性脑出血家兔脑组织中SOD、LPO含量的影响(x±s)
组别 LPO(nmol/100mg.Pro) SOD(U/mg.Pro)
对照组 354.67±106.59 17.36±3.50*
模型组 378.86±205.80 13.12±4.45
尼莫地平组 316.81±94.49 20.61±2.83**
小剂量组 360.06±189.36 19.39±4.71**
本发明 中剂量组 153.09±48.39** 20.31±3.65**
大剂量组 181.77±44.39** 24.19±6.65**
与模型组比较*P<0.05,**P<0.01
Claims (3)
1、一种治疗急性脑出血的药物,其特征在于它是由下述重量配比的原料制成的药剂:
大黄80~120 蒲黄130~180
栀子135~180 冰片0.8~1.5。
2、根据权利要求1所述的治疗急性脑出血的药物,其特征在于所述的药剂是注射液。
3、权利要求2所述的治疗急性脑出血的药物的制备方法,包括以下步骤:
(1)大黄粉碎成粗粒,加5~12倍量70~80%乙醇,加热回流提取2~4次,每次1~4小时,合并醇提液,减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10~1.12,搅拌加入4%明胶溶液至无沉淀产生,再加乙醇使含醇量达75~85%,冷藏24~72小时,减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.30~1.35,真空干燥,得大黄干燥提取物;
(2)蒲黄、栀子压碎后,加6~10倍量80~90%乙醇回流提取2~4次,每次1~3小时,合并醇提液,减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10~1.12,冷藏24~72小时,滤过,滤液用等量乙酸乙酯萃取4~8次,减压回收乙酸乙酯至稠膏状,真空干燥,得蒲栀干燥提取物;
(3)取上述两干燥提取物,加注射用水溶解,加活性炭,充分搅拌,加热煮沸,放冷,滤过;
(4)冰片与泊洛沙姆研匀,搅拌加入上述滤液中使溶解,加入氯化钠,调pH值至7.0~8.0,滤过,滤液补加注射用水,再调pH值至7.0~8.0,然后用微孔滤膜滤过,滤液灌装于处理好的输液瓶中,热压灭菌,制得注射液。
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