CN118161534B - 弗格森埃希菌及其产品在炎症疾病中的用途 - Google Patents

弗格森埃希菌及其产品在炎症疾病中的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN118161534B
CN118161534B CN202410593693.3A CN202410593693A CN118161534B CN 118161534 B CN118161534 B CN 118161534B CN 202410593693 A CN202410593693 A CN 202410593693A CN 118161534 B CN118161534 B CN 118161534B
Authority
CN
China
Prior art keywords
escherichia
ova
allergic rhinitis
cells
group
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202410593693.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN118161534A (zh
Inventor
李幼瑾
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Childrens Medical Center Affiliated to Shanghai Jiaotong University School of Medicine
Original Assignee
Shanghai Childrens Medical Center Affiliated to Shanghai Jiaotong University School of Medicine
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Childrens Medical Center Affiliated to Shanghai Jiaotong University School of Medicine filed Critical Shanghai Childrens Medical Center Affiliated to Shanghai Jiaotong University School of Medicine
Priority to CN202410593693.3A priority Critical patent/CN118161534B/zh
Publication of CN118161534A publication Critical patent/CN118161534A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN118161534B publication Critical patent/CN118161534B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G1/00—Cocoa; Cocoa products, e.g. chocolate; Substitutes therefor
    • A23G1/30—Cocoa products, e.g. chocolate; Substitutes therefor
    • A23G1/32—Cocoa products, e.g. chocolate; Substitutes therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
    • A23G1/42—Cocoa products, e.g. chocolate; Substitutes therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins
    • A23G1/423—Cocoa products, e.g. chocolate; Substitutes therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins containing microorganisms, enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G3/00—Sweetmeats; Confectionery; Marzipan; Coated or filled products
    • A23G3/34—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof
    • A23G3/36—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
    • A23G3/364—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins
    • A23G3/366—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins containing microorganisms, enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G4/00—Chewing gum
    • A23G4/06—Chewing gum characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
    • A23G4/12—Chewing gum characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins
    • A23G4/123—Chewing gum characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins containing microorganisms, enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G9/00—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor
    • A23G9/32—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
    • A23G9/36—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins
    • A23G9/363—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins containing microorganisms, enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L21/00—Marmalades, jams, jellies or the like; Products from apiculture; Preparation or treatment thereof
    • A23L21/10—Marmalades; Jams; Jellies; Other similar fruit or vegetable compositions; Simulated fruit products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/10—Enterobacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/185—Escherichia
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)

Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及弗格森埃希菌及其产品在炎症疾病中的用途。所述的弗格森埃希菌的保藏编号为ATCC 35469，该菌能显著抑制由卵清蛋白或屋尘螨变应原导致的过敏性鼻炎，并且对正常细胞没有毒害作用。为过敏性鼻炎提供新的治疗方法，尤其是能用于免疫系统还没有发育完善的儿童，避免抗过敏鼻炎药物的副作用。本发明提供了弗格森埃希菌的新应用，为过敏性鼻炎的治疗提供技术支持。

Description

弗格森埃希菌及其产品在炎症疾病中的用途
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及弗格森埃希菌及其产品在炎症疾病中的用途。
背景技术
过敏性鼻炎（hypersensitive rhinitis），又称变应性鼻炎（allergic rhinitis,AR）是指易感个体接触致敏原后，主要由免疫球蛋白E介导，机体的免疫活性细胞和细胞因子等参与的，以发作性喷嚏、流涕和鼻堵为主要症状的鼻粘膜慢性炎症性疾病。AR是由暴露于空气中的过敏原引起的，而屋尘螨（HDM）的问题尤其严重，与花粉引起的变态反应不同，屋尘螨变态反应终年影响患者。这不仅因为HDM在室内环境中几乎无处不在，还因为HDM产生的过敏原范围很广。针对过敏性鼻炎的治疗一直停留在快速解除症状上，使用一些普通的鼻炎药物，只能暂时性地改变鼻腔通气状况，鼻炎症状也只是因为药物的原因暂时性消失，而对消除炎症没有太大作用，一旦停用，就会再次发作。过敏性鼻炎虽然可用药物治疗控制症状，但尚无法根治，并且抗过敏的鼻炎药通常含有激素，激素类药物在长期使用或过度使用时可能导致一系列副作用，如免疫系统抑制、骨质疏松等。过敏特异性免疫治疗（Allergy specific immunotherapy, AIT）在治疗AR方面可能是有效的，但不适合作为儿童AR的一线治疗方法[1]。
肠道菌群是消化道定植的一类微生物群落。它具有多种代谢、免疫和肠道保护功能。这些微生物群落的组成和丰度在胃肠道中各不相同，在结肠中表现出显著的多样性[2]。肠道微生物群在出生时甚至在子宫内就已形成，并在生命早期动态变化，多样性不断增加，最终在2-3岁时达到稳定状态[3]。肠道菌群可使食物发酵产生短链脂肪酸、胆汁酸、氨基酸等[4]。这些代谢物直接或间接影响宿主肠道和生理健康[5]。最近的研究表明，肠道菌群可能在环境因素与过敏性疾病的关系中起着关键作用。Sepp等人发现，过敏儿童的乳酸菌和双歧杆菌菌落少于非过敏儿童，而过敏儿童的肠道中需氧微生物较多[6]。Moed H等报道尼氏大肠杆菌可通过诱导过敏原特异性IgG反应来阻止特异性IgE的产生，从而防止过敏反应[7]。Kalliomaki M.等人发现了过敏婴儿肠道菌群的变化，发现过敏性疾病婴儿的肠道菌群会延缓双歧杆菌和乳酸菌的发育[8]。Duan, F.P. 等发现肠道菌群失衡导致AR小鼠模型鼻部炎症进一步恶化，石虎提取物可通过恢复肠道菌群平衡来缓解这种恶化[9]。这些结果提示肠道菌群的调节可能在预防和治疗AR中发挥重要作用。
利用微生物改善肠道菌群的结构和功能，从而治疗过敏性鼻炎，不仅能够避免过敏性药物的副作用，还能用于免疫系统还没有发育完善的儿童。因此，开发治疗过敏性鼻炎的微生物具有重大的临床应用意义。
[1] Ding, Z., et al., Therapeutic effect of Biyuan tongqiao granulescombined with mometasone furoate nasal spray on clinical symptoms of childrenwith allergic rhinitis. Am J Transl Res, 2022. 14(7): p. 5116-5123.
[2] Moriki, D., et al., The Role of the Gut Microbiome in Cow's MilkAllergy: A Clinical Approach. Nutrients, 2022. 14(21).
[3] Rey-Marino, A. and M.P. Francino, Nutrition, Gut Microbiota, andAllergy Development in Infants. Nutrients, 2022. 14(20).
[4] Wang, S., et al., Association Between Breastmilk Microbiota andFood Allergy in Infants. Front Cell Infect Microbiol, 2021. 11: p. 770913.
[5] Parrish, A., et al., Intestinal mucus barrier: a missing piece ofthe puzzle in food allergy. Trends Mol Med, 2022. 28(1): p. 36-50.
[6] Bjorksten, B., et al., The intestinal microflora in allergicEstonian and Swedish 2-year-old children. Clin Exp Allergy, 1999. 29(3): p.342-6.
[7] Moed, H., et al., Skin tests, T cell responses and self-reportedsymptoms in children with allergic rhinitis and asthma due to house dust miteallergy. Clin Exp Allergy, 2009. 39(2): p. 222-7.
[8] Kalliomaki, M. and E. Isolauri, Role of intestinal flora in thedevelopment of allergy. Curr Opin Allergy Clin Immunol, 2003. 3(1): p. 15-20.
[9] Duan, F.P., et al., Dendrobium nobile protects against ovalbumin-induced allergic rhinitis by regulating intestinal flora and suppressing lunginflammation. Chin J Nat Med, 2022. 20(6): p. 443-457.
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了弗格森埃希菌（保藏编号为ATCC 35469
）在过敏性鼻炎中的应用，所述的弗格森埃希菌能抑制过敏性鼻炎，安全有效，无毒副作用。
一方面，本发明提供了弗格森埃希菌在制备诊断、预防和/或治疗炎症疾病的产品中的用途。
具体地，所述的弗格森埃希菌的保藏编号为ATCC 35469。
具体地，所述的炎症疾病包括鼻炎。
进一步具体地，所述的鼻炎为过敏性鼻炎。
具体地，所述的产品为药物。
进一步具体地，所述的药物包括弗格森埃希菌的发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和死菌中的一种或多种。
更进一步具体地，所述的发酵液是指将菌种接种于培养基，培养一段时间的液体；
所述的发酵液上清是指发酵液经离心后的上层的澄清液体；内含细菌生长繁殖过程丰富的代谢产物及一部分菌体碎片，细菌分泌的酸性物质及细菌素对有害菌有拮抗、杀灭作用；细菌分解食物后的氨基酸，以及合成的维生素都在培养液内，还包括细菌分泌的对人体有用的酶；而部分的菌体成分对人体也有免疫促进作用；
所述的发酵液沉淀是指离心出来的液体沉淀，包括游离的蛋白，残留的菌体，破碎的细胞，培养基质的残渣，主要就是蛋白，细胞内的基质；
所述的活菌也称活性菌群，可在肠道内定植、繁衍，有利于增加有益菌的数；
所述的死菌已经失去生命活力的微生物，无法进行生长和繁殖，由生产过程导致益生菌失去活力，如高温处理或过度干燥。
优选地，所述的药物为弗格森埃希菌的活菌。
进一步优选地，所述的弗格森埃希菌的活菌数可以是5×105CFU/mL-5×108CFU/mL。
更进一步优选地，所述的弗格森埃希菌的活菌数为5×106CFU/mL-5×108CFU/mL。
具体地，所述的药物还包括药学上可接受的辅料。
进一步具体地，所述的药学上可接受的辅料选自缓冲剂、赋形剂、稀释剂、防腐剂、润湿剂、乳化剂、润滑剂、香料、增稠剂、稳定剂、增溶剂、甜味剂抑菌剂、悬浮剂、助悬剂、以及抗氧化剂中的一种或两种以上的组合。
优选地，所述药学上可接受的辅料选自藻酸盐、水、糖浆、甲基纤维素、明胶、硅酸钙、淀粉、阿拉伯胶、矿物油、纤维素、磷酸钙、羟基苯甲酸丙酯、细结晶纤维素、羟基苯甲酸甲酯、硬脂酸镁乳糖、甘露糖、聚乙烯吡咯烷酮和滑石中的至少一种。
具体地，所述的药物的剂型包括但不限于：片剂、液体剂、胶囊剂、散剂、栓剂和颗粒剂。
具体地，所述的药物还包括其他治疗过敏性鼻炎的药物。
又一方面，本发明提供了一种诊断、预防和/或治疗炎症疾病的药物。
具体地，所述的药物包括弗格森埃希菌；所述的弗格森埃希菌的保藏编号为ATCC35469。
进一步具体地，弗格森埃希菌为其发酵液、发酵液上清、发酵液沉淀、活菌和死菌中的一种或多种。
更进一步具体地，所述的发酵液是指将菌种接种于培养基，培养一段时间的液体；
所述的发酵液上清是指发酵液经离心后的上层的澄清液体；内含细菌生长繁殖过程丰富的代谢产物及一部分菌体碎片，细菌分泌的酸性物质及细菌素对有害菌有拮抗、杀灭作用；细菌分解食物后的氨基酸，以及合成的维生素都在培养液内，还包括细菌分泌的对人体有用的酶；而部分的菌体成分对人体也有免疫促进作用；
所述的发酵液沉淀是指离心出来的液体沉淀，包括游离的蛋白，残留的菌体，破碎的细胞，培养基质的残渣，主要就是蛋白，细胞内的基质；
所述的活菌也称活性菌群，可在肠道内定植、繁衍，有利于增加有益菌的数；
所述的死菌已经失去生命活力的微生物，无法进行生长和繁殖，由生产过程导致益生菌失去活力，如高温处理或过度干燥。
更进一步具体地，所述的弗格森埃希菌为活菌；所述的弗格森埃希菌的活菌数可以是5×105CFU/mL-5×108CFU/mL。
优选地，所述的弗格森埃希菌的活菌数为5×106CFU/mL-5×108CFU/mL。
具体地，所述的炎症疾病包括鼻炎。
进一步具体地，所述的鼻炎为过敏性鼻炎。
具体地，所述的药物还包括药学上可接受的辅料。
进一步具体地，所述的药学上可接受的辅料选自缓冲剂、赋形剂、稀释剂、防腐剂、润湿剂、乳化剂、润滑剂、香料、增稠剂、稳定剂、增溶剂、甜味剂抑菌剂、悬浮剂、助悬剂、以及抗氧化剂中的一种或两种以上的组合。
优选地，所述药学上可接受的辅料选自藻酸盐、水、糖浆、甲基纤维素、明胶、硅酸钙、淀粉、阿拉伯胶、矿物油、纤维素、磷酸钙、羟基苯甲酸丙酯、细结晶纤维素、羟基苯甲酸甲酯、硬脂酸镁乳糖、甘露糖、聚乙烯吡咯烷酮和滑石中的至少一种。
具体地，所述的药物的剂型包括但不限于：片剂、液体剂、胶囊剂、散剂、栓剂和颗粒剂。
具体地，所述的药物还包括其他治疗过敏性鼻炎的药物。
本发明所取得的技术效果：
（1）弗格森埃希菌能显著减少OVA和Derp诱导的过敏性鼻炎的摩擦鼻腔和打喷嚏的发生率。
（2）弗格森埃希菌能减少OVA和Derp诱导的小鼠气道炎症。
（3）弗格森埃希菌能有效促进Treg的发育，发挥调节作用，减轻气道炎症，改变Th1和Th2细胞之间的平衡。
（4）弗格森埃希菌能降低炎症因子表达水平和血清特异性IgE的产生。
附图说明
图1为HepG2细胞与不同稀释倍数的弗格森埃希菌共培养7天后检测的细胞相对活性。
图2为小鼠摩擦鼻腔的频率，其中**代表P<0.01。
图3为小鼠打喷嚏的频率，其中**代表P<0.01。
图4为嗜酸性粒细胞炎症和鼻粘膜肥大细胞浸润，其中A为通过苏木精和伊红（HE）染色方法检测嗜酸性粒细胞炎症情况；其中B为采用甲苯胺蓝O（TBO）染色检测肥大细胞浸润情况。
图5为鼻黏膜中嗜酸性粒细胞和肥大细胞的数量，其中，*P<0.05, **P<0.01。
图6为小鼠脾脏中Th1、Th2和Treg细胞的流式图。
图7为小鼠脾脏中Th1、Th2和Treg细胞的百分比数值，其中，*代表P<0.05；**代表P<0.01；***代表P<0.001；ns代表没有显著性意义。
图8为小鼠外周血细胞因子IL-4、IL-6、IL-17A、TNF-α和TNF-γ的含量，其中，*代表P<0.05；**代表P<0.01；***代表P<0.001；ns代表没有显著性意义。
图9为derp和ova诱导的变应性鼻炎小鼠特异性IgE的表达水平，其中*代表P<0.05；**代表P<0.01。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明的弗格森埃希菌（Escherichia fergusonii）的保藏编号为ATCC 35469，且为现有菌株，无需提供保藏证明。以下实施例简称为弗格森埃希菌或E.f菌。
实施例1 毒性实验
细胞毒性检测方法——CTG检测原理：细胞增殖是指细胞在周期调控因子的作用下，通过DNA复制、RNA转录和蛋白质合成等复杂反应而进行的分裂系列过程。HepG2细胞来源于人类肝胚细胞瘤，含人正常肝实质细胞同源性的生物转化代谢酶，且不会随着传代次数的增多而降低，常被用于体外肝细胞代谢或遗传毒性试验。
ATP是活细胞新陈代谢的关键指标，CellTiter-Glo® Luminescent CellViability Assay，简称CTG，是基于高灵敏度生物发光方法的检测技术，可通过对ATP进行定量间接测定活细胞数目，是一种快速均质的检测方法。该检测方法不受化合物自发荧光的影响，提高了检测的灵敏度，操作方便快捷。
检测方法：将1 mL HepG2细胞(1×106个细胞)分别与不同稀释倍数的弗格森埃希菌（20µL）在24孔板中培养7天，弗格森埃希菌液的初始浓度为1×109CFU/200µL，用RPMI-1640培养基（12633020，ThermoFisher Scientific）按10倍稀释比进行系列稀释到10、100、1000、10000和100000倍，采用CTG 发光法检测定量检测活细胞数目及细胞活力。将与不同浓度弗格森埃希菌液共培养的HepG2细胞取出，各取5,000个细胞量加入96孔板，室温平衡30min后，加入与每孔细胞培养基等量的 CellTiter-Glo®Reagent，使用定轨振荡器混合2分钟诱导细胞裂解，再将板置于室温条件下孵育10分钟使发光信号稳定。
建立ATP标准曲线，使用培养基制备1μM ATP（100μL 1μM ATP 溶液含10-10摩尔ATP），使用RPMI-1640培养基制备按10倍稀释比进行系列稀释的ATP，分别取100μL不同浓度的ATP加入多孔板，再加入与每孔ATP标准品等体积的CellTiter-Glo®Reagent，定轨振荡器混合内容物2分钟，再将板置于室温条件下孵育10分钟使发光信号稳定，记各浓度发光信号，绘制标准曲线。然后将所测样本的发光信号代入曲线，计算细胞相对活性。
检测结果如图1所示，在初始菌液浓度共培养情况下，与未添加菌液的对照组相比，细胞的活性明显降低；而在将菌液稀释100倍情况下，与菌液共培养的细胞活性达到最大，细胞活性明显增强。因此，该菌液在细胞培养中的最适浓度为1×107CFU/200µL。
实施例2 变应性鼻炎小鼠模型构建及干预结果
2.1变应性鼻炎小鼠模型构建方法
小鼠选择及喂养条件：本研究采用30只6周龄雌性BALB/c（上海吉辉实验动物护理有限公司）小鼠，提供均匀的灭菌水、不含卵清蛋白（OVA）和无户尘螨（Derp）的食物，以尽量减少饮食变化及其对肠道微生物群的潜在影响。所有实验动物都按照上海儿童医疗中心动物研究伦理委员会批准的方案进行护理。小鼠模型中进行鼻致敏和抗原刺激：在无病原体条件下，AR组小鼠腹腔注射。AR组分为OVA致敏组、Derp致敏组和对照组，在第0、7和14天OVA致敏组小鼠注射0.5mg/mL卵清蛋白，Derp致敏组小鼠注射100μg/mL屋尘螨变应原，对照组小鼠注射300uL无菌生理盐水。从第21-28天开始暴露刺激，小鼠用抗原滴鼻暴露。OVA致敏组每天使用20μL浓度为40 mg/mL的OVA溶液，实现了对OVA刺激。Derp致敏组每天滴鼻20 μL浓度为500 μg/mL的Derp溶液进行局部致敏。对照组小鼠在相同条件下给予无菌生理盐水。
所述的卵清蛋白的制备方法为：将卵清蛋白（OVA，A5503-1G，Sigma）和Al(OH)3混合悬浮在300uL无菌生理盐水中，使得卵清蛋白的浓度为0.5mg/mL，Al(OH)3的浓度为20mg/mL 。
所述的屋尘螨变应原的制备方法为：将屋尘螨变应原（Derp，XPB91D3A2.5，GREER）和Al(OH)3混合悬浮在300uL无菌生理盐水中，使得屋尘螨变应原的浓度为100μg/mL，Al(OH)3的浓度为20mg/mL 。
模型构建成功的鉴定标准：1.根据小鼠的行为学特征，观察其鼻部症状；2.根据鼻粘膜组织形态学观察其炎症细胞浸润情况；3.根据其外周血血清过敏原抗体水平进行评估。通过上述鉴定标准确定建模成功。
2.2动物实验分组及给药方式
将小鼠适应性喂养7天后，采用2.1的方法进行模型的构建。小鼠根据致敏和细菌干预进行分组（每组n=6）：OVA致敏组（OVA；阳性对照）、Derp致敏组（Derp；阳性对照）、OVA致敏+口服E.f菌组(OVA/E.f；治疗组）、Derp致敏+口服E.f菌组(Derp/E.f；治疗组）和无菌生理盐水致敏+口服无菌生理盐水的对照组（阴性对照）。
给药方式：通过口服灌胃方式对小鼠进行给药干预。小鼠口服弗格森埃希菌，是在Luria-Bertani肉汤中低温保存的，并经过传代培养的细菌，将收集的1×109菌落形成单位(colony forming units, CFUs)重悬在200μL无菌生理盐水中，用于后续的动物实验。喂养的无病原体雌性Balb/c小鼠饲养在有自由水和标准饲料的控制环境中。弗格森埃希菌给药干预为每日1次，灌胃剂量为0.1mL/10g（弗格森埃希菌的灌胃浓度为1×109CFU/200µL），其余的对照组同时给予等量的生理盐水。
2.3指标检测方法及结果分析
2.3.1检测方法
小鼠鼻部症状的观察：两名观察员立即分别记录了最后一次鼻内灌注生理盐水、OVA和Derp刺激后10分钟内打喷嚏和摩擦鼻事件的频率，这些事件被认为是鼻炎的炎症参数。
鼻黏膜的组织学分析：在最后一次给药后24小时内，取出小鼠鼻黏膜，在20℃下的10%福尔马林中保存48小时。然后制备3 μm组织切片，在石蜡浸泡后固定在玻片上。为了鉴定嗜酸性粒细胞和肥大细胞的浸润，切片进行脱蜡处理，用苏木精和伊红（H&E）和甲苯胺蓝染色。计算每只小鼠每高倍视野（n/hpf）的嗜酸性粒细胞和肥大细胞的平均数量，并用来解释结果。
流式细胞术分析脾脏组织中的Th1/Th2/Treg细胞：在最后一次给药24小时后收集脾脏组织，并处理成单细胞悬液。细胞调整到最大1×106个细胞/mL。为了检测Th1和Th2细胞，使用Cell Stimulation Cocktail（00-4975-93，eBioscincce，美国）在37°C培养箱中刺激4小时。为了分析Treg，部分细胞被准备到试管中用于随后的检测。 将Th1定义为CD4+IFN-γ+细胞，Th2定义为CD4+IL-4+，Treg定义为CD4+CD25+Foxp3+细胞。Th1和Th2细胞处理方式为：将细胞与APC/cy7偶联的抗小鼠CD4抗体（100413, Biolegend）一起孵育。Treg细胞处理方式为：将细胞与APC/cy7偶联的抗小鼠CD4和PerCP/Cy5.5偶联的抗小鼠CD25（101911, Biolegend）一起孵育，用于Treg分析。
将上述处理后的Th1、Th和Treg表面染色后，细胞用100μL固定/破膜缓冲液（554722, BD Pharmingen）在4°C下破膜30 min，然后分别用APC偶联的抗小鼠IFN-γ（505809, Biolegend）、PE偶联的抗小鼠IL-4抗体（504103, Biolegend）和PE偶联的抗小鼠Foxp3（126403, Biolegend）染色。荧光强度以百分比表示，结果使用FlowJo软件版本10.8.1进行分析。
血清中细胞因子、OVA特异性IgE和Derp特异性IgE的测定方法：最后一次OVA和Derp刺激24h后，通过眼球摘除取小鼠血样，3000 rpm离心10 min。上清液以−80 °C保存，进行细胞因子、OVA特异性IgE和Derp特异性IgE分析。使用小鼠Th1/Th2/Th17细胞因子试剂盒（BDCytometric Bead Array（CBA），560485,美国）按照制造商的说明书检测细胞因子水平。此外，使用ELISA试剂盒（mlbio，ml826321-J-96孔,中国）检测OVA特异性IgE和Derp特异性IgE的水平。
2.3.2结果分析
本发明中OVA组和Derp组小鼠的过敏性气道炎症导致了摩擦鼻腔（图2）和打喷嚏（图3）的次数增加。与Derp组相比，OVA组更容易出现过敏症状。 OVA/Ef组与OVA组相比，OVA/E.f组的摩擦鼻腔和打喷嚏的发生率减少。类似地，Derp/E.f组的过敏症状发生率也低于Derp组。然而，OVA/E.f与Derp/E.f组对过敏症状的严重程度无显著性差异。
图4-图5为组织学分析结果，以评估鼻黏膜肥大细胞和嗜酸性粒细胞浸润，旨在了解口服弗格森埃希菌对小鼠气道炎症的影响。与对照组相比，OVA组和Derp组鼻黏膜肥大细胞和嗜酸性粒细胞浸润较多。然而，在OVA/E.f组中，与OVA组相比，口服弗格森埃希菌可显著抑制肥大细胞和嗜酸性粒细胞浸润。类似地，在Derp/E.f组中，与Derp组相比，口服E.f菌也显著减少了肥大细胞和嗜酸性粒细胞浸润。OVA/E.f组和Derp/ E. f组间无显著性差异。以上表明，口服E.f菌能减少OVA和Derp诱导的小鼠气道炎症，这可以通过减少鼻黏膜中肥大细胞和嗜酸性粒细胞的浸润得到证明。
本发明研究口服弗格森埃希菌对脾脏Th1、Th2和Treg细胞的调控作用，并进一步检测了CD4+ T细胞中IFN-γ和IL-4以及CD25和Foxp3的表达频率。结果如图6-图7所示，与对照组相比，OVA模型组和Derp模型组脾脏淋巴细胞中CD4+IFN-γ+（Th1）细胞比例显著增加，CD4+IL-4+（Th2）细胞比例显著减少。具体来说，在OVA/E.f和Derp/E.f组中，与各自的模型组相比，Th1细胞显著上调，Th2细胞显著下调。此外，与对照组相比，OVA模型组和Derp模型组脾脏淋巴细胞中CD4+CD25+Foxp3+（Treg）细胞的比例明显降低。然而，与OVA和Derp模型组相比，E.f菌导致脾淋巴细胞中Treg细胞的比例增加。以上结果表明，弗格森埃希菌能有效促进Treg的发育，发挥调节作用，减轻气道炎症，改变Th1和Th2细胞之间的平衡。
采用CBA检测小鼠外周血中Th1、Th2和th17相关的细胞因子，包括IL-4、IL-6、IL-17A、TNF-α和IFN-γ。结果如图8所示，与对照组相比，OVA组和Derp组外周血血清中Th2细胞因子（IL-4）水平明显升高。然而，OVA/E.f组和Derp/E.f组的Th2细胞因子水平分别较OVA组和Derp组相对较低。此外，与OVA组和Derp组相比，OVA/E.f和Derp/E.f组的IL-6和IL-17A细胞因子水平相对较低，与Th2细胞因子的研究结果相似。然而，Th1细胞因子IFN-γ的水平在OVA、Derp、OVA/E.f和Derp/E.f组中均没有显著变化。采用Elisa检测小鼠外周血血清中特异性抗体水平，结果如图9所示，发现口服弗格森埃希菌可降低OVA和derp诱导的血清特异性IgE的产生。

Claims (4)

1.弗格森埃希菌在制备预防和/或治疗过敏性鼻炎的药物中的用途，其特征在于，所述的弗格森埃希菌的保藏编号为ATCC 35469。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物包括弗格森埃希菌的发酵液和活菌中的一种或多种。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的药物包括弗格森埃希菌的活菌；所述的弗格森埃希菌的活菌数为5×105 CFU/mL-5×108 CFU/mL。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的药物还包括药学上可接受的辅料。
CN202410593693.3A 2024-05-14 2024-05-14 弗格森埃希菌及其产品在炎症疾病中的用途 Active CN118161534B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202410593693.3A CN118161534B (zh) 2024-05-14 2024-05-14 弗格森埃希菌及其产品在炎症疾病中的用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202410593693.3A CN118161534B (zh) 2024-05-14 2024-05-14 弗格森埃希菌及其产品在炎症疾病中的用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN118161534A CN118161534A (zh) 2024-06-11
CN118161534B true CN118161534B (zh) 2024-08-20

Family

ID=91358996

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202410593693.3A Active CN118161534B (zh) 2024-05-14 2024-05-14 弗格森埃希菌及其产品在炎症疾病中的用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN118161534B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116410897A (zh) * 2023-04-11 2023-07-11 广东方道基因生物科技有限公司 一种弗格森埃希菌及其抑菌应用
CN116479110A (zh) * 2023-03-31 2023-07-25 华中科技大学同济医学院附属同济医院 一种早发性卵巢功能不全的肠道菌群生物标志物及其应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3082431A4 (en) * 2013-12-16 2017-11-15 Seres Therapeutics, Inc. Bacterial compositions and methods of use thereof for treatment of immune system disorders
KR102233530B1 (ko) * 2018-11-22 2021-03-31 (주)프로스테믹스 엑소좀 및 이의 다양한 용도

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116479110A (zh) * 2023-03-31 2023-07-25 华中科技大学同济医学院附属同济医院 一种早发性卵巢功能不全的肠道菌群生物标志物及其应用
CN116410897A (zh) * 2023-04-11 2023-07-11 广东方道基因生物科技有限公司 一种弗格森埃希菌及其抑菌应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN118161534A (zh) 2024-06-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7097838B2 (ja) 制御性ｔ細胞の増殖または集積を誘導するヒト由来細菌
CN114032193B (zh) 一种副干酪乳杆菌207-27及其应用
JP5117171B2 (ja) 抗アレルギーの乳酸菌
CN113293113B (zh) 一株长双歧杆菌mi-186及其应用
CN108367031A (zh) 嗜黏蛋白阿克曼氏菌用于治疗炎症病况的用途
CN113234640B (zh) 一株长双歧杆菌mf-269及其应用
KR20190133639A (ko) 락토바실러스 크리스파투스 kbl693 균주 및 그 용도
CN113881597B (zh) 一株能够提高吲哚丙烯酸以调节特异性IgE的罗伊氏乳杆菌
TW201536302A (zh) 適用於嬰兒過度哭鬧的益生菌
Li et al. Suppressive effects of oral administration of heat-killed Lactobacillus acidophilus on T helper-17 immune responses in a bovine β-lactoglobulin-sensitized mice model
CN112442457A (zh) 凝结芽孢杆菌或其代谢产物及其胃部保健的用途
CN103436461B (zh) 新颖乳酸菌株及其调节免疫反应的用途
CN110643541A (zh) 一株可调节过敏性哮喘Th2/Th1平衡的干酪乳杆菌及其应用
CN113337440B (zh) 一株唾液乳杆菌mg-587及其应用
KR102186420B1 (ko) 스타필로코커스 석시너스 14bme20 균주를 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
CN118161534B (zh) 弗格森埃希菌及其产品在炎症疾病中的用途
CN110087656A (zh) 肌苷在治疗T-reg缺乏中的应用
CN113913330B (zh) 一株调节OVA特异性IgE的植物乳杆菌及其应用
JP7342192B1 (ja) 化学療法による腸管損傷の関連病変又は細菌叢の不均衡の予防或いは補助療法におけるバチルスコアグランスｂｃ１９８又はその代謝産物の用途
CN113005066B (zh) 抗过敏、增加免疫力、降血糖、降脂减肥的复合双歧杆菌制剂及其制备方法
TWI716249B (zh) 戈氏副擬桿菌的脂多醣用於抑制發炎反應之用途
CN115109718B (zh) 一株屎肠球菌菌株及其用途
WO2024141107A1 (zh) 柯林斯菌新菌种及其药物组合物
CN116716202A (zh) 一株副干酪乳酪杆菌及其在防治咽炎中的应用
CN117338821A (zh) Eh菌在制备用于预防、改善或治疗代谢性疾病的药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant