CN110643541A - 一株可调节过敏性哮喘Th2/Th1平衡的干酪乳杆菌及其应用 - Google Patents

一株可调节过敏性哮喘Th2/Th1平衡的干酪乳杆菌及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株可调节过敏性哮喘Th2/Th1平衡的干酪乳杆菌及其应用，属于微生物技术领域以及医药技术领域。本发明的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)具有缓解过敏性哮喘的作用，具体体现在：(1)显著降低过敏性哮喘小鼠肺部炎症反应；(2)显著抑制过敏性哮喘小鼠血清中总免疫球蛋白IgE的产生；(3)显著抑制过敏性哮喘小鼠血清中尘螨特异性免疫球蛋白IgG1的产生；(4)不改变过敏性哮喘小鼠血清中尘螨特异性免疫球蛋白IgG2a的含量；(5)显著恢复Th2/Th1的平衡，因此，干酪乳杆菌在制备预防和/或治疗过敏性哮喘的产品中，具有巨大的应用前景。

Description

一株可调节过敏性哮喘Th2/Th1平衡的干酪乳杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及一株可调节过敏性哮喘Th2/Th1平衡的干酪乳杆菌及其应用，属于微生物技术领域以及医药技术领域。
背景技术
全世界范围内患病率呈上升趋势，近十余年来，全世界约有一亿过敏性哮喘患者；美国、英国、澳大利亚、新西兰等国家过敏性哮喘的患病率和死亡率有逐步上升趋势；全中国约有1千万以上哮喘患者，过敏性哮喘在人群中的平均患病率约为1％，其中，儿童可达3％。在易感者中，此种炎症可引起反复发作的喘息、气促、胸闷和/或咳嗽等症状，进而引发呼吸骤停和呼吸衰竭等并发症，危及患者生命。
过敏性哮喘是临床常见病、难治病，病程迁延难愈，是由IgE介导的慢性气道炎症疾病，属于Ⅰ型变态反应疾病。变应原通过上皮进入机体后，会被DC捕获加工提呈到CD4+T细胞表面被识别而过度分化为Th2细胞。Th2细胞主导体液免疫反应，过度反应时其分泌的细胞因子，促使B细胞增生及刺激免疫球蛋白IgE类抗体，结合肥大细胞和嗜碱性粒细胞，当机体再次接触过敏原时，导致发炎及过敏反应，Th2/Th1比例失衡。
随着分子生物学和遗传学、免疫学等学科的深入研究，许多研究证实变应性哮喘是多基因调控，受环境和遗传的共同影响，其发生与众多基因相关。Th1和Th2细胞通过彼此分泌的细胞因子进行交叉调节和相互抑制，变应性哮喘患者接触变应原之后在抗原提呈细胞MHC-Ⅱ和Th0的协助下被传递给刚从胸腺组织生成并释放的细胞与其表面的抗原特异性细胞结合，Th0细胞被激活，导致Th1和Th2失衡。Th1和Th2细胞分泌不同的细胞因子，Th1细胞分泌的细胞因子主要有白细胞介素2，干扰素γ等，辅助抗体IgG2a生成，参与细胞免疫，而Th2细胞分泌细胞因子主要有白细胞介素4，5，6和13等，主要功能为刺激B细胞增殖并产生免疫球蛋白G1和IgE抗体，与体液免疫有关。因此通常以IgG1/IgG2a代表Th2/Th1比例平衡。
“卫生假说”的提出为解释哮喘等过敏性疾病在近30年发病率增加提供了新的思路。“卫生假说”认为现代卫生保健和医疗措施创造了一个相对清洁的环境，减少了人们暴露于细菌、病毒和真菌等病原体的机会，从而导致免疫系统的失衡，最终导致过敏性疾病的增加。提示正常菌群失调后外籍菌的异常生长亦可能与宿主的免疫紊乱相关。有实验表明，补充干酪乳杆菌能抑制CD4+T淋巴细胞的增殖活性，并伴有Th2和Th1细胞因子的明显下降。干酪乳酸杆菌可以通过Toll样受体传递信息给肠黏膜中的树突状细胞，诱导其产生IL-10，促进调节性T淋巴细胞的分化，使Th2/Th1细胞趋于平衡。
目前，治疗过敏性哮喘的手段通常是通过药物控制，这些药物包括支气管舒张药物、抗炎药物以及益生菌制剂。其中，支气管舒张药物和抗炎药物由于多数需要以静脉注射或吸入的方式给药，因此，患者对这些药物的依从性较差，这就导致了患者的疾病会反复发作，久而久之还会引发患者肺气肿、肺心病等严重并发症。
而益生菌制剂虽然较为安全健康，但是，由于目前发现的具有缓解过敏性哮喘症状的益生菌或效果较差或作用效果不明确，因此，市面上多数的益生菌制剂也或具有见效慢的缺陷，或具有作用关系不明确的缺陷。
因此，急需找到一种对过敏性哮喘针对性强且缓解过敏性哮喘能力强的益生菌以解决现有针对过敏性哮喘的益生菌制剂作用关系不明确的问题。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一株干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073，所述干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073已于2019年8月8日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.60736，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
在一种实施方式中，所述干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073为革兰氏阳性菌，不产芽孢，无鞭毛，不运动，不液化明胶；最适生长温度为37℃，G+C含量为45.6％～47.2％；菌体长短不一，两端呈方形，常成链；所述干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073在MRS培养基上的菌落粗糙，灰白色，有时呈微黄色。
本发明提供了上述一株干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073在制备预防和/或治疗过敏性哮喘的产品中的应用。
本发明的一种实施方式中，所述产品中，干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073的活菌数为不低于1×106CFU/mL。
本发明的一种实施方式中，所述产品包含食品、药品或保健食品。
本发明的一种实施方式中，所述药品含有干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073、药物载体和/或药用辅料。
本发明的一种实施方式中，所述食品包含使用含有干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)CCFM1073的发酵剂生产得到的乳制品、豆制品或果蔬制品；或所述食品包含含有干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073的固体饮料。
本发明提供了一种用于预防和/或治疗过敏性哮喘的产品，所述产品含有上述干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073。
本发明的一种实施方式中，所述产品中，干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073的活菌数为不低于1×106CFU/mL。
本发明的一种实施方式中，所述产品包含食品、药品或保健食品。
本发明的一种实施方式中，所述药品含有干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073、药物载体和/或药用辅料。
本发明的一种实施方式中，所述药物载体包含微囊、微球、纳米粒以及脂质体。
本发明的一种实施方式中，所述药用辅料包含赋形剂以及附加剂。
本发明的一种实施方式中，所述药用辅料包含保湿剂、溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、pH值调节剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、整合剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、发泡剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、渗透促进剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂以及释放阻滞剂。
本发明的一种实施方式中，所述附加剂包含微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素以及精制卵磷脂。
本发明的一种实施方式中，所述药品的剂型包含颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
本发明的一种实施方式中，所述食品包含使用含有干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)CCFM1073的发酵剂生产得到的乳制品、豆制品或果蔬制品；或所述食品包含含有干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073的固体饮料。
在本发明的一种实施方式中，所述发酵剂的制备方法为将干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073按照占培养基总质量2～4％的接种量接种到培养基中，于37℃下培养18h，得到培养液；将培养液离心，得到菌体；将菌体用pH为7.2的磷酸盐缓冲液清洗3次后用冻干保护剂重悬(冻干保护剂和菌体的质量比为2:1)，得到重悬液；将重悬液采用真空冷冻法进行冻干，得到干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073的发酵剂。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基包含占培养基总质量87.7％的水、10％的酶水解脱脂乳、0.5％的葡萄糖、1.5％的胰蛋白胨以及0.3％的酵母浸膏溶解。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的pH为6.8。
在本发明的一种实施方式中，所述保护剂包含脱脂奶粉:麦芽糊精:L-谷氨酸钠＝10:10:1。
有益效果：
本发明筛选出了一株干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073，此干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073具有缓解过敏性哮喘的作用，具体体现在：
(1)显著降低过敏性哮喘小鼠肺部炎症反应，肺组织切片病理学评分可降低43％；
(2)显著抑制过敏性哮喘小鼠血清中总免疫球蛋白IgE的产生，血清中总IgE的含量降低34％；
(3)显著抑制过敏性哮喘小鼠血清中尘螨特异性免疫球蛋白IgG1的产生，小鼠血清中HDM特异性IgG1的含量可降低30％；
(4)不改变过敏性哮喘小鼠血清中尘螨特异性免疫球蛋白IgG2a的含量；
(5)显著恢复Th2/Th1的平衡，可使血清中HDM-IgG1和HDM-IgG2a的比值减少23％；
本发明的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073在制备预防和/或治疗过敏性哮喘的药物，及制备改善肺部炎症反应的食品或保健食品中，具有巨大的应用前景。
生物材料保藏
一株干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073，分类学命名为Lactobacilluscasei CCFM 1073，已于2019年8月8日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.60736，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
附图说明
图1：不同组别实验小鼠肺组织病理评分。
图2：不同组别实验小鼠血清中免疫球蛋白IgE含量。
图3：不同组别实验小鼠血清中HDM特异性免疫球蛋白IgG1含量。
图4：不同组别实验小鼠血清中HDM特异性免疫球蛋白IgG2a含量。
图5：不同组别实验小鼠血清中HDM特异性免疫球蛋白IgG1/IgG2a比值。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的阐述。
下述实施例中涉及的脱脂乳购自上海医药集团股份有限公司。
下述实施例中涉及的培养基如下：
MRS固体培养基(g/L)：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4 0.05g/L、吐温80 1mL/L、琼脂20g/L、半胱氨酸氨酸盐0.5g/L。
MRS液体培养基(g/L)：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4 0.05g/L、吐温80 1mL/L、半胱氨酸氨酸盐0.5g/L。
下述实施例中涉及的检测方法如下：
活菌数的检测方法：采用国标《GB 4789.35-2016食品安全国家标准食品微生物学检测乳酸菌检测》。
酸度检测方法：采用国标GB 431334-2010。
干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073与干酪乳杆菌1、干酪乳杆菌2均筛选自江苏无锡地区的婴儿粪便；鼠李糖乳杆菌GG(ATCC 53103)通过购买获得。
实施例1：干酪乳杆菌的筛选及鉴定
1、筛选:
以来源于江苏无锡地区的婴儿粪便为样本，将样本经预处理后，在20％左右甘油中保存于-80℃冰箱，取出解冻后，混匀样本吸取0.5mL样本加到4.5mL，以0.9％生理盐水进行梯度稀释，选择合适的梯度稀释液涂布在MRS固体培养基上，于37℃培养48h，挑取典型菌落至MRS固体培养基上划线纯化，挑取单菌落转接至MRS液体培养基增菌，30％甘油保藏，得到菌株CCFM1073。
2、鉴定:
将CCFM1073的16S rDNA进行扩增和测序，将该序列在NCBI中进行核酸序列比对，结果显示菌株为干酪乳杆菌，命名为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073。
实施例2：干酪乳杆菌的培养
将干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073接入MRS固体培养基中于37℃培养48h后，观察其菌落并在显微镜下对其菌体进行观察，发现其菌落粗糙，灰白色，有时呈微黄色，其菌体形状长短不一，两端呈方形，常成链。
将干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073接入MRS液体培养基中于37℃培养18h后，转入新鲜的MRS液体培养基中，同样条件培养18h，6000g离心菌体15min，0.9％生理盐水洗涤菌体后6000g再次离心10min，得到菌体，用30％蔗糖溶液重悬，冻存在-80℃待用。
实施例3：干酪乳杆菌对过敏性哮喘小鼠肺部炎症的影响
将6周大的SPF级BALB/c雌性小鼠分成6组，分别为正常组、模型组和实验组，其中，实验组包括灌胃干酪乳杆菌CCFM1073的CCFM1073预防组、灌胃鼠李糖乳杆菌GG(ATCC53103)的L.GG预防组,灌胃干酪乳杆菌1的L.casei1预防组和灌胃干酪乳杆菌2的L.casei2预防组，每组6只，饲养在江南大学实验动物中心，普通饲料喂养，恒定温度21-26℃，湿度40-70％，噪声小于等于60dB，动物照度15-20LX(所有动物实验程序皆由江南大学动物福利与伦理管理委员会进行审查并批准)。
实验共6周(每周5天)，第2-6周进行造模，每天对模型组和实验组小鼠均麻醉滴鼻25μg/10μL的HDM(屋尘螨提取物)，正常组仅滴10μL无菌生理盐水作为对照。
第1-6周，实验组每天灌胃0.25mL(活菌数为1×109CFU)的CCFM1073，L.rhamnosusGG，L.casei1和L.casei2菌悬液，正常组和模型组仅灌胃0.25mL无菌生理盐水作为对照，所有分组均为自由饮水和摄食。
实验结束后，麻醉处死小鼠，解剖胸腔，将琼脂糖溶液注入小鼠左肺后，取下左肺置于4％的多聚甲醛溶液中固定，进行石蜡包埋，HE染色，送病理科进行肺部炎症程度评估，炎症程度评估结果见图1。
如图1所示，小鼠在喂食本发明中的菌株CCFM1073后，炎症细胞浸润明显减少，肺组织切片病理学评分降低了43％，显著低于模型组(p＜0.05)，与L.rhamnosus GG组基本一致，说明干酪乳杆菌CCFM1073降低了哮喘小鼠肺部的炎症反应。
以上实验结果表明，干酪乳杆菌L.casei 1和L.casei 2不能改善哮喘小鼠肺部炎症，而干酪乳杆菌CCFM1073能够显著改善哮喘小鼠肺部炎症，缓解哮喘症状。
实施例4：干酪乳杆菌对过敏性哮喘小鼠血清中Total-IgE的影响
具体步骤如下：
将6周大的SPF级BALB/c雌性小鼠分成6组，分别为正常组、模型组和实验组，其中，实验组包括灌胃干酪乳杆菌CCFM1073的CCFM1073预防组、灌胃鼠李糖乳杆菌GG的L.rhamnosus GG预防组,灌胃干酪乳杆菌1的L.casei1预防组和灌胃干酪乳杆菌2的L.casei2预防组，每组6只，饲养在江南大学实验动物中心，普通饲料喂养，恒定温度21-26℃，湿度40-70％，噪声小于等于60dB，动物照度15-20LX(所有动物实验程序皆由江南大学动物福利与伦理管理委员会进行审查并批准)。
实验共6周(每周5天)，第2-6周进行造模，每天对模型组和实验组小鼠均麻醉滴鼻25μg/10μL的HDM(屋尘螨提取物)，正常组仅滴10μL无菌生理盐水作为对照。
第1-6周，实验组每天灌胃0.25mL(活菌数为1×109CFU)的CCFM1073，L.rhamnosusGG，L.casei1和L.casei2菌悬液，正常组和模型组仅灌胃0.25mL无菌生理盐水作为对照，所有分组均为自由饮水和摄食。
实验结束后，麻醉小鼠，眼球采血，静止2h后，于离心机3000rpm离心10分钟，收集血清于干净的离心管中，冻存于-20℃。
通过总IgE ELISA试剂盒检测血清中Total IgE的含量，检测结果见图2。
如图2所示，喂食本发明的菌株CCFM1073后，小鼠血清中总IgE的含量降低了34％，显著低于模型组(p＜0.05)，与空白组相当，而L.rhamnosus GG，L.casei1和L.casei2与模型组没有显著差异。
以上实验结果说明，干酪乳杆菌CCFM1073能够显著降低哮喘小鼠血清中总IgE，改善过敏反应，而鼠李糖乳杆菌GG，干酪乳杆菌L.casei1和L.casei2并未有这种效果
实施例5：干酪乳杆菌对过敏性哮喘小鼠血清中HDM-IgG1的影响
具体步骤如下：
将6周大的SPF级BALB/c雌性小鼠分成6组，分别为正常组、模型组和实验组，其中，实验组包括灌胃干酪乳杆菌CCFM1073的CCFM1073预防组、灌胃鼠李糖乳杆菌GG的L.rhamnosus GG预防组,灌胃干酪乳杆菌1的L.casei1预防组和灌胃干酪乳杆菌2的L.casei2预防组，每组6只，饲养在江南大学实验动物中心，普通饲料喂养，恒定温度21-26℃，湿度40-70％，噪声小于等于60dB，动物照度15-20LX(所有动物实验程序皆由江南大学动物福利与伦理管理委员会进行审查并批准)。
实验共6周(每周5天)，第2-6周进行造模，每天对模型组和实验组小鼠均麻醉滴鼻25μg/10μL的HDM(屋尘螨提取物)，正常组仅滴10μL无菌生理盐水作为对照。
第1-6周，实验组每天灌胃0.25mL(活菌数为1×109CFU)的CCFM1073，L.rhamnosusGG，L.casei1和L.casei2菌悬液，正常组和模型组仅灌胃0.25mL无菌生理盐水作为对照，所有分组均为自由饮水和摄食。
实验结束后，麻醉小鼠，眼球采血，静止2h后，于离心机3000rpm离心10分钟，收集血清于干净的离心管中，冻存于-20℃
通过HDM特异性IgG1 ELISA试剂盒检测血清中HDM特异性IgG1的含量，检测结果如图3所示，喂食本发明的菌株CCFM1073后，小鼠血清中HDM特异性IgG1的含量降低了30％，显著低于模型组(p＜0.05)，比L.rhamnosus GG组降低了20％改善效果更好，虽与正常组还存在显著差异，但已有明显改善。
以上实验结果说明，干酪乳杆菌CCFM1073能够显著降低哮喘小鼠血清中HDM特异性IgG1，下调Th2反应，，优于L.rhamnosus GG组，而干酪乳杆菌L.casei1和L.casei2并未有这种效果。
实施例6：干酪乳杆菌对过敏性哮喘小鼠血清中HDM-IgG2a的影响
具体步骤如下：
将6周大的SPF级BALB/c雌性小鼠分成6组，分别为正常组、模型组和实验组，其中，实验组包括灌胃干酪乳杆菌CCFM1073的CCFM1073预防组、灌胃鼠李糖乳杆菌GG的L.rhamnosus GG预防组,灌胃干酪乳杆菌1的L.casei1预防组和灌胃干酪乳杆菌2的L.casei2预防组，每组6只，饲养在江南大学实验动物中心，普通饲料喂养，恒定温度21-26℃，湿度40-70％，噪声小于等于60dB，动物照度15-20LX(所有动物实验程序皆由江南大学动物福利与伦理管理委员会进行审查并批准)。
实验共6周(每周5天)，第2-6周进行造模，每天对模型组和实验组小鼠均麻醉滴鼻25μg/10μL的HDM(屋尘螨提取物)，正常组仅滴10μL无菌生理盐水作为对照。
第1-6周，实验组每天灌胃0.25mL(活菌数为1×109CFU)的CCFM1073，L.rhamnosusGG，L.casei1和L.casei2菌悬液，正常组和模型组仅灌胃0.25mL无菌生理盐水作为对照，所有分组均为自由饮水和摄食。
实验结束后，麻醉小鼠，眼球采血，静止2h后，于离心机3000rpm离心10分钟，收集血清于干净的离心管中，冻存于-20℃
通过HDM特异性IgG2a ELISA试剂盒检测血清中HDM特异性IgG2a的含量，检测结果见图4。
如图4所示，小鼠在喂食本发明中的菌株CCFM1073后，血清中的HDM-IgG2a含量仅下降了0.7％未有显著改变(p＜0.05)，干酪乳杆菌L.casei1和L.casei2分别下降了34％和29％，而L.GG的含量较模型组显著降低(p＜0.05)，说明本发明中的菌株CCFM1073，没有改变HDM-IgG2a的含量；而L.GG，含量下降了49％，显著降低HDM-IgG2a的含量。
综合上述实验结果，干酪乳杆菌CCFM1073不改变哮喘小鼠血清中典型Th1相关免疫球蛋白的含量，而L.GG显著下调了Th1相关免疫球蛋白的含量。在维持Th1反应的方面，干酪乳杆菌CCFM1073显著优于L.GG。
实施例7：干酪乳杆菌对过敏性哮喘小鼠血清中HDM-IgG1/HDM-IgG2a平衡的影响
将6周大的SPF级BALB/c雌性小鼠分成6组，分别为正常组、模型组和实验组，其中，实验组包括灌胃干酪乳杆菌CCFM1073的CCFM1073预防组、灌胃鼠李糖乳杆菌GG的L.rhamnosus GG预防组,灌胃干酪乳杆菌1的L.casei1预防组和灌胃干酪乳杆菌2的L.casei2预防组，每组6只，饲养在江南大学实验动物中心，普通饲料喂养，恒定温度21-26℃，湿度40-70％，噪声小于等于60dB，动物照度15-20LX(所有动物实验程序皆由江南大学动物福利与伦理管理委员会进行审查并批准)。
实验共6周(每周5天)，第2-6周进行造模，每天对模型组和实验组小鼠均麻醉滴鼻25μg/10μL的HDM(屋尘螨提取物)，正常组仅滴10μL无菌生理盐水作为对照。
第1-6周，实验组每天灌胃0.25mL(活菌数为1×109CFU)的CCFM1073，L.rhamnosusGG，L.casei1和L.casei2菌悬液，正常组和模型组仅灌胃0.25mL无菌生理盐水作为对照，所有分组均为自由饮水和摄食。
实验结束后，麻醉小鼠，眼球采血，静止2h后，于离心机3000rpm离心10分钟，收集血清于干净的离心管中，冻存于-20℃
通过HDM特异性IgG1和IgG2a ELISA试剂盒检测血清中HDM特异性IgG1和IgG2a的含量，再将HDM-IgG1和HDM-IgG2a的含量做比值，以表明Th2/Th1的平衡，检测结果见图5。
如图5所示，小鼠在喂食本发明中的菌株后，血清中HDM-IgG1和HDM-IgG2a的比值减少了23％，较模型组显著降低(p＜0.05)，说明本发明中的菌株CCFM1073，能够显著下调HDM-IgG1和HDM-IgG2a的平衡；L.casei1与模型组并无显著差异，增加了14％；而L.rhamnosus GG组和L.casei2组反而增大HDM-IgG1和HDM-IgG2a的比值，分别增加了了57％和59％，高于模型组。
上述结果表明，干酪乳杆菌CCFM1073能显著下调小鼠Th2/Th1的平衡偏向于正常状态，干酪乳杆菌L.casei1和L.casei2并无这种作用，而鼠李糖乳杆菌GG反而上调了Th2/Th1的平衡，使其更加严重。
实施例8：含有干酪乳杆菌CCFM1073固体饮料的制备
将干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073按照占培养基总质量3％的接种量接种到MRS培养基中，于37℃下培养18h，得到培养液；将培养液离心，得到菌体；将菌体用pH为7.2的磷酸盐缓冲液清洗3次后用海藻糖浓度为100g/L的海藻糖冻干保护剂重悬(1010CFU菌体/冻干保护剂g)，得到重悬液；将重悬液采用真空冷冻法进行冻干，得到干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073菌粉。
将含有109CFU的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073菌粉同麦芽糊精进行混合，CCFM1073菌粉和麦芽糊精总质量为1克，得到富含干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)CCFM1073的固体饮料。
取10克上述含有干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073的固体饮料，用生理盐水复溶，定容到20毫升，每只小鼠每天灌胃200微升，连续两周，可有效缓解小鼠过敏性哮喘的症状，在改善过敏性哮喘有极好的效果。
实施例9：含有干酪乳杆菌CCFM1073的发酵果蔬饮料的制备
具体步骤如下：
将干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073按照占培养基总质量3％的接种量接种到培养基中，于37℃下培养18h，得到培养液；将培养液离心，得到菌体；将菌体用pH为7.2的磷酸盐缓冲液清洗3次后用海藻糖浓度为100g/L的海藻糖冻干保护剂重悬至菌浓度达到1×1010CFU/mL，得到菌悬液；将悬浮液于37℃下放置60min进行预培养后采用冻干法冻干，得到干酪乳杆菌CCFM1073发酵剂；其中，所述培养基包含占培养基总质量87.7％的水、10％的脱脂乳、0.5％的葡萄糖、1.5％的胰蛋白胨以及0.3％的酵母浸膏溶解；所述培养基的pH为6.8；
将新鲜蔬菜、水果洗净后榨汁，然后将榨得的果蔬汁在温度140℃下高温热杀菌2秒后立即降温到温度约37℃，再在灭菌后的果蔬汁中按照体积百分比5％的接种量接种干酪乳杆菌CCFM1073，最后将接种后的果蔬汁于在30℃下发酵18h，即得含有干酪乳杆菌CCFM1073活菌的发酵果蔬饮料。检测发酵果蔬饮料中的干酪乳杆菌CCFM1073活菌数，检测结果为：1×108CFU/mL。
取200μl含有干酪乳杆菌CCFM1073活菌的发酵果蔬饮料，按照107CFU/kg体重的剂量对小鼠进行灌胃连续4周，可有效缓解小鼠过敏性哮喘的症状，在治疗和/或预防过敏性哮喘有极好的效果。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一株干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073，已于2019年8月8日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.60736，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
2.一种食品或保健食品，其特征在于，含有活菌数不低于1×106CFU/mL或1×106CFU/g的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073。
3.根据权利要求2所述的食品或保健食品，其特征在于，所述食品包括使用含有干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073的发酵剂生产得到的乳制品、豆制品或果蔬制品；或含有干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073的固体饮料。
4.权利要求1所述的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073在制备预防和/或治疗过敏性哮喘的药物中的应用。
5.权利要求1所述的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073在制备改善过敏性哮喘症状的保健品中的应用。
6.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073的活菌数为不低于1×106CFU/mL。
7.一种药物组合物，其特征在于，所述药品含有干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)CCFM1073、药物载体和/或药用辅料。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述药物载体包含微囊、微球、纳米粒以及脂质体；所述药用辅料包含赋形剂以及附加剂。
9.根据权利要求7或8所述的药物组合物，其特征在于，剂型包含颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
10.干酪乳杆菌发酵剂，其特征在于，含有权利要求1所述的干酪乳杆菌CCFM1073及保护剂；所述保护剂包括脱脂奶粉、麦芽糊精、L-谷氨酸钠或其组合。
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