CN118028409A - 一种沙棘活性肽及其制备方法与应用 - Google Patents

一种沙棘活性肽及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于沙棘深加工技术领域,具体涉及一种沙棘活性肽,尤其是一种以沙棘粕为原料,利用生物转化法制备小分子植物肽的制备方法。本发明所述沙棘活性肽的制备方法,采用生物转化提取方法,采用沙棘粕为原料,经过配水、蒸煮、复合酶靶向降解、发酵代谢及生物合成得到所需沙棘活性肽。本发明所述沙棘活性肽产品安全性高、无毒副作用,产品纯度高、生物活性高、产品分子量可控,其产品口感好、无异味,可广泛应用于食品、保健品、药品等领域。

Description

一种沙棘活性肽及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于沙棘深加工技术领域,具体涉及一种沙棘活性肽,尤其是一种以沙棘粕为原料,利用生物转化法制备小分子植物肽的制备方法。
背景技术
沙棘是一种落叶性灌木,其特性是耐旱、抗风沙,可以在盐碱化土地上生存,被广泛种植用于水土保持,尤其是中国西北部地区大量种植沙棘,用于沙漠绿化。沙棘为药食同源植物,其根、茎、叶、花、果,特别是沙棘果实含有丰富的营养物质和生物活性物质,可以广泛应用于食品、医药、轻工、航天、农牧渔业等国民经济的许多领域。
据研究,沙棘归脾经、胃经,具有健脾消食的功效,能够增强脾胃功能,促进食物消化,缓解脾虚食少、食积腹痛的症状;同时沙棘归肺经,还可以起到止咳祛痰的作用,适合咳嗽痰多的患者食用。另外,沙棘能够活血化瘀,对于跌扑瘀肿、瘀血经闭、胸痹心痛等病症有一定的调理效果。现代药理研究表明,沙棘中的沙棘黄酮,能够改善心肌微循环,降低心肌耗氧量,起到血管硬化、抗炎等作用。沙棘果实入药具有止咳化痰、健胃消食、活血散瘀之功效。现代医学研究,沙棘可降低胆固醇,缓解心绞痛发作,还有防治冠状动脉粥样硬化性心脏病的作用。
沙棘籽粕是沙棘籽经过亚临界低温萃取油脂后的固体物。检验结果表明,其成分含量达到:蛋白质20%、糖分11.35%、脂肪10.9%、总植物碱2.92mg/kg、总黄体酮502mg/kg、钙1945.33mg/kg、铝203mg/kg、锶3.92mg/kg、镧1.71mg/kg、镍2.005mg/kg、钛1.195mg/kg、锌34.74mg/kg、铁218.28mg/kg、硅82.45mg/kg、锡4.563mg/kg、锰11.94mg/kg、磷1510.62mg/kg、镁1199.2mg/kg。近年来,提取沙棘籽粕的研究分析表明,无论是沙棘果渣还是油渣,均含有脂肪酸、类胡萝卜素、脂溶性维生素A、D、E、F、水溶性维生素C和17种氨基酸。尤其是在17种氨基酸中,必须的氨基酸总量比优质小麦高4.86%,特别是赖氨酸含量高出3倍。
目前,沙棘粕主要作为饲料使用,大幅降低了其使用价值,造成了大量的营养浪费。因此,本领域期待开发更具营养价值的沙棘活性肽,对于沙棘的开发及推广具有积极的意义。
发明内容
为此,本发明所要解决的技术问题在于提供一种沙棘活性肽,所述沙棘活性肽的营养成分更为合理,更适合人体吸收利用;
本发明所要解决的第二个技术问题在于提供上述沙棘活性肽的制备方法,所述方法采用生物转化法--即酶催化工艺,不仅保障了所述沙棘活性肽的营养成分,更加提高了产品的收率;
本发明所要解决的第三个技术问题在于提供上述沙棘活性肽的应用。
为解决上述技术问题,本发明所述的一种沙棘活性肽的制备方法,包括如下步骤:
(1)取沙棘粕原料加水混合,并加入复合酶进行酶解处理;
(2)收集酶解产物并加入发酵菌剂进行发酵处理;
(3)收集发酵产物并输送空气进行生物合成,即得。
具体的,所述沙棘活性肽的制备方法,所述步骤(1)中,所述复合酶包括淀粉酶、中性蛋白酶和端肽酶的混合物;其中,
所述淀粉酶的加入量占所述沙棘粕原料重量的1.0-1.5wt%;和/或,
所述中性蛋白酶的加入量占所述沙棘粕原料重量的1-1.5wt%;和/或,
所述端肽酶的加入量占所述沙棘粕原料重量的0.8-1.0wt%。
具体的,所述沙棘活性肽的制备方法,所述步骤(1)中,所述酶解步骤的温度为58-60℃,酶解时间3.5-4.0h;
优选的,所述步骤(1)中,还包括将所得酶解产物升温至90-95℃进行灭酶的步骤,和/或,将所得酶解产物进行过滤处理的步骤。
具体的,所述沙棘活性肽的制备方法,所述步骤(1)中,还包括在酶解步骤前将所述沙棘粕加水混合并进行蒸煮处理的步骤;
优选的,所述蒸煮处理步骤的温度为90-95℃,蒸煮时间6-7.5h;
优选的,所述沙棘粕与水的质量比为1:10-12。
具体的,所述沙棘活性肽的制备方法,所述步骤(2)中,所述发酵菌剂包括地衣芽孢杆菌;
优选的,所述发酵菌剂的添加量占所述沙棘粕原料重量的0.2-0.3wt%;
优选的,所述发酵处理步骤的温度为35-37℃,搅拌转速35-45r/min,发酵时间5-5.5h;
优选的,还包括将所得发酵产物升温至90-95℃进行灭活处理10-15min的步骤。
具体的,所述沙棘活性肽的制备方法,所述步骤(3)中,所述生物合成步骤为搅拌器输送空气进行合成,控制所述搅拌器转速为22-24r/min;
优选的,所述生物合成步骤的时间为1.5-2.0h;
优选的,还包括将所得生物合成产物升温至90-95℃进行灭菌处理10-15min的步骤。
具体的,所述沙棘活性肽的制备方法,所述步骤(3)中,还包括在所述生物合成步骤前调节所述发酵产物的pH值至3-3.5的步骤;
优选的,所述调节pH值步骤采用柠檬酸进行调节;
优选的,还包括在所述生物合成步骤前将所述发酵产物降温至38-39℃的步骤。
具体的,所述沙棘活性肽的制备方法,所述步骤(3)中,还包括收集所述生物合成步骤的合成液进行纯化的步骤,以及,收集纯化液进行浓缩及喷雾干燥的步骤;
优选的,所述纯化步骤为离心纯化,优选离心转速为16000-18000r/min。
本发明还公开了由所述方法制备得到的沙棘活性肽。
本发明还公开了所述沙棘活性肽用于制备食品、药品和/或保健品的用途;
优选的,所述沙棘活性肽用于制备食品、药品和/或保健品的用途。
本发明所述沙棘活性肽的制备方法,采用生物转化提取方法,采用沙棘粕为原料,经过配水、蒸煮、复合酶靶向降解、发酵代谢及生物合成得到所需沙棘活性肽。本发明所述沙棘活性肽的制备方法,利用复合酶解及发酵菌协同降解酶切蛋白质,并利用活性肽的螯合作用进行生物合成螯合活性成分,不仅能够彻底降解酶切沙棘粕中的蛋白质、纤维及活性物质,提高了产品收率;而且,有效控制了沙棘粕中小分子肽,减少了沙棘中的生物碱和总黄酮的流失;尤其是经生物合成和发酵重塑了活性肽,更适合人体吸收利用,提高了产品功效。
本发明所述沙棘活性肽的制备方法,利用菌酶协同生物转化方式,有效降解酶切蛋白质,然后利用小肽的螯合作用实行生物合成,并采用精滤、离心过滤等纯化方式,喷雾干燥得到沙棘活性肽产品,适用于药品及保健食品的不同要求。本发明所述沙棘活性肽的制备方法,生产周期短、成本低、不产生任何有毒有害物质,对环境无污染,而且所得产品安全性高、无毒副作用,产品纯度高、生物活性高、产品分子量可控,其产品口感好、无异味,可广泛应用于食品、保健品、药品等领域。
本发明所述沙棘活性肽的制备方法,所述复合酶解处理中,采用淀粉酶、中性蛋白酶、端肽酶的复合酶进行靶向降解、定向酶切工艺,可有效降解酶切蛋白质;其中,淀粉酶可降解纤维和多糖,为提高收率以及产品创造条件;而添加的中性蛋白酶,可控制产品分子量;添加的端肽酶则可以修饰肽键。相对于传统的复合酶降解,其优势是即能提高产品收率,又防止不同酶之间的在最高酶活阶段的相互降解,避免降低其活性。
本发明所述沙棘活性肽的制备方法,所述发酵菌剂发酵协同降解处理过程中,采用地衣芽孢杆菌发酵,其优势是它是多种酶的发酵菌种即菌生酶,在发酵时能保持一定的酶活,达到生物合成作用,能进一步代谢沙棘中的过敏源及拮抗物质,使产品更质量安全,肌体更容易利用,充分满足食品、保健品和药品原料的要求。
本发明所述沙棘活性肽的制备方法,进一步结合生物合成技术,仿照肠胃最适温度和PH,以活性肽最佳螯合环境进行生物合成,利用小肽的螯合作用实行生物合成,使沙棘植物碱和黄酮不易流失,不仅提高沙棘肽的活性并提高了产品质量,使得所述沙棘活性肽食用后能快速进入细胞,更快的参与生命运动,增强了人体最佳吸收利用效果。相比于传统仅进行酶解和/或发酵的制备工艺,本发明采用生物合成技术,使活性肽和其他生物活性物质螯合,提高产品活性和利用率。
本发明所述沙棘活性肽的制备方法,通过对提取肽进行生物合成,在体外就使肽与沙棘黄酮形成化合物,而肽作为载体到达体内可以使本发明所述沙棘活性肽化合物直接吸收,节省了肽在体内在合成其他活性物的时间;而且,本发明利用生物合成和肽链修饰技术,使活性肽具有抗高温降解效果,能使肽产品在高温加工过程中不损失活性。本发明所述活性肽产品能使活性肽在体内具有防胃酸降解和体内酶降解作用,可保持产品活性而具有几乎被肌体100%吸收的效果。
本发明所述沙棘活性肽,不但能把分子量95%以上控制在1000道尔顿以下,而且能把人体最必须的2-5肽含量控制在50以上,人体无需消化,可以直接吸收利用,且端肽键的修饰能防止胃酸和胃中消化酶的降解。本发明所述沙棘活性肽产品能完全溶于水,能更方面的添加在食品、固体饮料、液态饮品,更适合作为药品使用,可广泛应用于食品、保健品、特医食品、药品等领域。
具体实施方式
实施例1
本实施例所述沙棘活性肽的制备方法,包括如下步骤:
(1)称取洗净的沙棘粕1000g,加入10L纯化水搅拌均匀,在90℃条件下,进行蒸煮6.0h;然后降温至58℃,加入10g的淀粉酶、10g的中性蛋白酶和8g的端肽酶混合;经搅拌酶解处理3.5h,然后升温至90℃,保持10min灭酶;收集酶解产物经灭菌后用板框压滤机过滤,收集滤液部分,备用;
(2)将所述酶解产物滤液的温度控制在35℃,并添加2g地衣芽孢杆菌进行发酵,控制搅拌器转速保持35r/min,发酵温度保持35℃,进行发酵5.0h;发酵结束后,升温至90℃进行灭活10min,得到发酵产物;
(3)将所得发酵产物的温度降低至38℃,用柠檬酸调节pH值至3.0,并控制搅拌器转速为22r/min,均匀输送净化空气,进行生物合成1.5h;反应结束后,收集反应产物升温至90℃,保持10min进行灭菌;收集所得合成液用三相离心机离心纯化,转速保持16000r/min;收集纯化液用双效浓缩器进一步浓缩;收集浓缩液经喷雾干燥,即得所需沙棘活性肽。
实施例2
本实施例所述沙棘活性肽的制备方法,包括如下步骤:
(1)称取洗净的沙棘粕100kg,加入1100L纯化水搅拌均匀,在92℃条件下,进行蒸煮6.5h;然后降温至59℃,加入1.2kg的淀粉酶、1.2kg的中性蛋白酶和0.9kg的端肽酶混合;经搅拌酶解处理3.8h,然后升温至92℃,保持12min灭酶;收集酶解产物经灭菌后用板框压滤机过滤,收集滤液部分,备用;
(2)将所述酶解产物滤液的温度控制在36℃,并添加220g地衣芽孢杆菌进行发酵,控制搅拌器转速保持36r/min,发酵温度保持36℃,进行发酵5.2h;发酵结束后,升温至92℃灭活12min,得到发酵产物;
(3)将所得发酵产物的温度降低至39℃,用柠檬酸调节pH值至3.2,并控制搅拌器转速为23r/min,均匀输送净化空气,进行生物合成1.8h;反应结束后,收集反应产物升温至92℃,保持12min进行灭菌;收集所得合成液用三相离心机离心纯化,转速保持17000r/min;收集纯化液用双效浓缩器进一步浓缩;收集浓缩液经喷雾干燥,即得所需沙棘活性肽。
实施例3
本实施例所述沙棘活性肽的制备方法,包括如下步骤:
(1)称取洗净的沙棘粕1000kg,加入12000L纯化水搅拌均匀,在95℃条件下,进行蒸煮7.5h;然后降温至60℃,加入15kg淀粉酶、15kg的中性蛋白酶和10kg的端肽酶混合;经搅拌酶解处理4.0h,然后升温95℃,保持15min灭酶;收集酶解产物经灭菌后用板框压滤机过滤,收集滤液部分,备用;
(2)将所述酶解产物滤液的温度控制在37℃,并添加3kg地衣芽孢杆菌进行发酵,控制搅拌器转速保持45r/min,发酵温度保持37℃,进行发酵5.5h;发酵结束后,升温至95℃灭活15min,得到发酵产物;
(3)将所得发酵产物的温度降低至39℃,用柠檬酸调节pH值至3.5,并控制搅拌器转速为24r/min,均匀输送净化空气,进行生物合成2.0h;反应结束后,收集反应产物升温至95℃,保持15min进行灭菌;收集所得合成液用三相离心机离心纯化,转速保持18000r/min;收集纯化液用双效浓缩器进一步浓缩;收集浓缩液经喷雾干燥,即得所需沙棘活性肽。
对比例1
本对比例所述沙棘活性肽的制备方法同实施例2,其区别仅在于,所述酶解步骤中,不添加所述端肽酶。
本对比例方案中,由于不加入端肽酶进行定向酶解处理,一是无法去除经酶解出现在肽键端的苦味基因,二是无法使肽链提高抗高温功能,耐高温性能不理想。
对比例2
本对比例所述沙棘活性肽的制备方法同实施例2,其区别仅在于,所述发酵菌株为酵母菌。
本对比例方案中,由于加入酵母菌进行生物发酵,其发酵产物影响生物合成的功能,降低了活性肽的吸收性能。
对比例3
本对比例所述沙棘活性肽的制备方法同实施例2,其区别仅在于,所述方法不进行所述生物合成步骤。
本对比例方案中,由于不进行整个生物合成的步骤,降低了酶解产物中小肽与沙棘活性肽其他活性物质的合成,降低了活性物质的吸收性能。
实验例
1、沙棘活性肽的结构检测
分别取上述实施例1-3及对比例1-3中形成的活性肽产物的成分分布情况进行检测。
实施例1-3中方案制备得到的沙棘活性肽,其不仅活性较高,且产物中,分子量在180-500道尔顿的2-5肽含量占比45%以上,1000道尔顿以下的肽占比则达到95%以上,氨基酸占比10%以下,更利于吸收。
而对比例1中方案制备的产物,则由于不加入端肽酶进行定向酶解处理,无法去除经酶解出现在肽键端的苦味基因,影响产品的口感,产物分子量分布也不好控制。
而对比例2中方案,由于加入酵母菌进行生物发酵,发酵产物影响其无法实现生物合成的功能,进而影响产物中活性成分的组成分布,影响产品的吸收性能和产品收率。
而对比例3中方案中,由于不进行整个生物合成的步骤,降低了酶解产物中小肽与沙棘活性肽其他活性物质的合成,影响了产品的活性,降低了产品的收率。
2、沙棘活性肽的抗高温降解性能
分别取上述实施例1-3及对比例1-3中形成的活性肽产物的耐高温降解性能进行检测,结果如下表1所示。
表1耐高温降解性能
编号 120℃蒸煮是否失活
实施例1
实施例2
实施例3
对比例1 失活
对比例2 失活
对比例3 失活
可见,本发明方法制备得到的沙棘活性肽产品,经120℃蒸煮不失活性,具有较好的耐高温降解性能,适合作为食品或保健品在加工工程中的高温加工优势。
而对比例1-3中产品,则由于产物组成及分布的影响,其耐高温降解性能较差。
3、沙棘活性肽的吸收性能
分别取上述实施例1-3及对比例1-3中形成的活性肽产物,采用单周吸收率测定方法,对其吸收性能进行测试,包括吸收率和吸收时间,结果如下表2所示。
表2吸收性能测试结果
可见,本发明方法制备的沙棘活性肽产品的吸收率几乎达100%,且实际吸收时间缩短50%以上,而对比例1-3中方案,则由于产物中活性成分组成及分布的影响,其吸收性能并不理想,限制了在食品中的应用。
可见,本发明所述沙棘活性肽的制备方法,通过对提取肽进行生物合成,在体外就使肽与沙棘黄酮形成化合物,而肽作为载体到达体内可以使本发明所述沙棘活性肽化合物直接吸收,节省了肽在体内在合成其他活性物的时间;而且,本发明利用生物合成和肽链修饰技术,使活性肽具有抗高温降解效果,能使肽产品在高温加工过程中不损失活性。本发明所述活性肽产品能使活性肽在体内具有防胃酸降解和体内酶降解作用,可保持产品活性而具有几乎被肌体100%吸收的效果。
显然,上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例,而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种沙棘活性肽的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)取沙棘粕原料加水混合,并加入复合酶进行酶解处理;
(2)收集酶解产物并加入发酵菌剂进行发酵处理;
(3)收集发酵产物并输送空气进行生物合成,即得。
2.根据权利要求1所述沙棘活性肽的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,所述复合酶包括淀粉酶、中性蛋白酶和端肽酶的混合物;其中,
所述淀粉酶的加入量占所述沙棘粕原料重量的1.0-1.5wt%;和/或,
所述中性蛋白酶的加入量占所述沙棘粕原料重量的1-1.5wt%;和/或,
所述端肽酶的加入量占所述沙棘粕原料重量的0.8-1.0wt%。
3.根据权利要求1或2所述沙棘活性肽的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,所述酶解步骤的温度为58-60℃,酶解时间3.5-4.0h;
优选的,所述步骤(1)中,还包括将所得酶解产物升温至90-95℃进行灭酶的步骤,和/或,将所得酶解产物进行过滤处理的步骤。
4.根据权利要求1-3任一项所述沙棘活性肽的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,还包括在酶解步骤前将所述沙棘粕加水混合并进行蒸煮处理的步骤;
优选的,所述蒸煮处理步骤的温度为90-95℃,蒸煮时间6-7.5h;
优选的,所述沙棘粕与水的质量比为1:10-12。
5.根据权利要求1-4任一项所述沙棘活性肽的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述发酵菌剂包括地衣芽孢杆菌;
优选的,所述发酵菌剂的添加量占所述沙棘粕原料重量的0.2-0.3wt%;
优选的,所述发酵处理步骤的温度为35-37℃,搅拌转速35-45r/min,发酵时间5-5.5h;
优选的,还包括将所得发酵产物升温至90-95℃进行灭活处理10-15min的步骤。
6.根据权利要求1-5任一项所述沙棘活性肽的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述生物合成步骤为搅拌器输送空气进行合成,控制所述搅拌器转速为22-24r/min;
优选的,所述生物合成步骤的时间为1.5-2.0h;
优选的,还包括将所得生物合成产物升温至90-95℃进行灭菌处理10-15min的步骤。
7.根据权利要求1-6任一项所述沙棘活性肽的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中,还包括在所述生物合成步骤前调节所述发酵产物的pH值至3-3.5的步骤;
优选的,所述调节pH值步骤采用柠檬酸进行调节;
优选的,还包括在所述生物合成步骤前将所述发酵产物降温至38-39℃的步骤。
8.根据权利要求1-7任一项所述沙棘活性肽的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中,还包括收集所述生物合成步骤的合成液进行纯化的步骤,以及,收集纯化液进行浓缩及喷雾干燥的步骤;
优选的,所述纯化步骤为离心纯化,优选离心转速为16000-18000r/min。
9.一种由权利要求1-8任一项所述方法制备得到的沙棘活性肽。
10.权利要求9所述沙棘活性肽用于制备食品、药品和/或保健品的用途;
优选的,所述沙棘活性肽用于制备食品、药品和/或保健品的用途。
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