CN117999075A - 包含淀粉样肽与糖胺聚糖相互作用的抑制剂的化合物和药物组合物、治疗方法及其用途 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了喹啉和喹唑啉衍生化合物及其药物组合物。这些化合物抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)和硫酸乙酰肝素糖胺聚糖(HS‑GAG)之间的相互作用，因此可用作治疗和预防与淀粉样变性相关的神经退行性疾病(例如阿尔兹海默病)和其他淀粉样病症的治疗剂。本公开进一步提供了治疗和预防神经退行性疾病和淀粉样疾病的方法，以及鉴定能够抑制糖胺聚糖(GAG)与GAG结合性淀粉样肽(GBAP)相互作用的有机小分子化合物的方法。

Description

包含淀粉样肽与糖胺聚糖相互作用的抑制剂的化合物和药物 组合物、治疗方法及其用途
本专利申请要求2021年9月7日提交的美国临时序列号63/241,148的权益，其全部内容通过引用的方式并入本文。
技术领域
本公开总体上涉及发现用于治疗淀粉样病症的化合物的领域，所述淀粉样病症包括淀粉样神经退行性疾病如阿尔茨海默病。提供了抑制淀粉样肽与糖胺聚糖(GAG)相互作用的化合物及其药物组合物和用途。
背景技术
在本公开的整个描述中，参考了某些出版物，包括科学文章和专利或专利申请。其目的是当在说明书中提及时，这些出版物中的每一个均整体通过引用的方式并入本文。
淀粉样病症。淀粉样病症(amyloid disorder)与淀粉样变性(amyloidosis)有关，淀粉样变性是淀粉样肽或蛋白质(amyloid peptide or protein)错误折叠和聚集，在器官和/或组织中异常沉积的过程(Chiti,F.和Dobson,C.M.(2017)Annual Review ofBiochemistry,86,27-68)。如果蛋白质或肽由于其二级结构的改变而呈现特定的不溶性聚集形式(淀粉样原纤维)，则将该蛋白质或肽描述为淀粉样蛋白(amyloid)。大约有30种不同类型的淀粉样变性，每一种都是由特定的蛋白质错误折叠引起的。根据淀粉样沉积物的部位不同，症状差异很大。淀粉样变性可能是遗传的或获得的。淀粉样病症包括例如阿尔茨海默病；帕金森病；肌萎缩侧索硬化、朊病毒病(也称为变异型Creutzfeld-Jacob病；牛海绵状脑脊髓炎；疯牛病)；淀粉样轻链(AL)淀粉样变性和继发性淀粉样变性。
淀粉样神经退行性疾病。特定蛋白质的错误折叠和聚集发生在多种神经退行性病症中。在阿尔茨海默病中，两种主要的聚集蛋白是β-淀粉样蛋白和tau。这些蛋白质的构象变体形成的异常组装体从小寡聚体到特征性病灶大小不等，如老年斑和神经原纤维缠结。与朊病毒病的病理学相似性表明，这些蛋白质病灶的形成和传播可能涉及一个共同的分子机制-腐败蛋白模板(corruptive protein templating)。(Jucker,M.和Walker,L.C.(2011)Ann Neurol 70(4):532-40)。
淀粉样肽和蛋白质。淀粉样疾病部分是由淀粉样肽或蛋白质的自缔合引起的，在细胞内和细胞周围形成不溶性纤维复合物，从而阻碍正常细胞功能。一些已知的淀粉样肽/蛋白质是β-淀粉样蛋白(Abeta；β-amyloid)类型的肽，包括β-淀粉样蛋白(1-42)和β-淀粉样蛋白(1-40)、朊病毒蛋白、Tau、α-突触核蛋白、TDP-43、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、甲状腺素运载蛋白、β2微球蛋白、血清淀粉样蛋白A(SAA)和免疫球蛋白轻链AL。
β-淀粉样蛋白(Abeta；β-amyloid；淀粉样蛋白-β)。根据“淀粉样蛋白”假说，大脑中β-淀粉样肽的沉积是阿尔茨海默病的核心事件。阿尔茨海默病的大脑含有由淀粉样肽β-淀粉样蛋白的细胞外沉积物组成的神经炎性斑块。淀粉样斑块还包含其他成分，其中包含大量的糖胺聚糖(GAG)。β-淀粉样蛋白倾向于发生构象变化，形成反平行β-折叠样结构并聚集(β-淀粉样蛋白的聚集也可在体外诱导)。这一过程被称为原纤维形成，它导致淀粉样原纤维的形成。β-淀粉样蛋白对体外培养的哺乳动物细胞具有毒性，尤其是以Abeta寡聚体的形式存在时(Levine,H.,第三版(2007)Amyloid 14(3):185-97)。
α-突触核蛋白(α-Synuclein)是一种与帕金森病有遗传和神经病理学联系的神经元蛋白。一般认为α-突触核蛋白异常的可溶性寡聚体构象(称为原纤维)是一种毒性物质，通过对各种细胞内靶标(包括突触功能)的作用介导细胞稳态的破坏和神经元死亡(Stefanis,L.(2012),Cold Spring Harb Perspect Med.2(2))。此外，分泌的α-突触核蛋白可能对邻近细胞产生有害影响，包括引发聚集，从而可能导致疾病传播。靶向这种蛋白赋予的毒性功能可能为帕金森病和共核蛋白病带来新的治疗策略。
tau。tau蛋白(τ蛋白)是一组由基因MAPT(微管相关蛋白τ)通过选择性剪接产生的可溶性蛋白。它们主要在维持轴突中微管的稳定性方面发挥作用，并在中枢神经系统的神经元中大量存在。神经系统的病理和痴呆(如阿尔茨海默病和帕金森病)与tau蛋白有关，tau蛋白已成为过度磷酸化的不溶性聚集体，称为神经原纤维缠结。术语“朊病毒样”通常用于描述各种tau病(tauopathy)(如阿尔茨海默病和额颞叶痴呆)中tau病理的几个方面。朊病毒是由其诱导天然蛋白错误折叠以维持病理的能力定义的。病理性tau聚集体已被证明具有诱导天然tau蛋白错误折叠的能力(Congdon,E.E.和Sigurdsson,E.M.Nat RevNeurol.2018Jul；14(7):399–415)。
TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)。TDP-43蛋白病变(Jucker和Walker，同上)由几种神经退行性疾病组成，包括额颞叶痴呆(FTLD)和肌萎缩侧索硬化(ALS)，其特征在于由多泛素化和过度磷酸化的全长和截短的TDP-43形成的包涵体。TDP-43可形成结构稳定的球形寡聚体，在体外和体内均具有神经毒性。这种寡聚体存在于转基因TDP-43小鼠和FTLD-TDP患者的前脑中。
血清淀粉样蛋白A(SAA)。SAA是在急性期反应期间可能在血清中升高多达1000倍的肽。SAA的片段可以形成高度组织化的不溶性原纤维，该不溶性原纤维在“继发性”淀粉样疾病中积累(Sack,G.H.(2018)Serum amyloid A–a review.Mol Med 24,46)。
糖胺聚糖(在本文和本领域中也称为“GAG”)是天然存在的基于碳水化合物的分子，其涉及许多细胞过程的调节，最有可能通过与效应分子的相互作用实现(Lindahl,U.和Kjellen,L.(2013)J Intern Med 273(6):555-71)。GAG是由重复的两个糖(二糖)单元组成的线性非支链链，其长度可达150个单元。在体内，GAG通常与特定的蛋白相连，从而形成蛋白聚糖。所有的GAG(除了透明质酸)都含有不同程度酯化至糖的环羟基上的硫酸基团。据信，这些带负电荷的基团在归于GAG的生物特性中占有显著地位。有四种主要类型的硫酸化GAG：(1)硫酸乙酰肝素(HS-GAG)；(2)硫酸软骨素(CS-GAG)；(3)硫酸角质素(KS-GAG)；和(4)硫酸皮肤素(DS-GAG)。HS-GAG在结构上与肝素非常相似。其复杂的生物合成导致可变的硫酸化二糖重复。HS-GAG含有许多生物活性肽和蛋白质的结合位点；这种相互作用由肝素结合结构域介导。由于高度多样化的硫酸化模式，据估计HS-GAG可能包含多达百万个不同的可能结合位点。在组织内，GAG与膜蛋白相连，形成蛋白聚糖。硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)是普遍存在的大分子，与脊椎动物和无脊椎动物组织的广泛细胞的细胞表面和细胞外基质相关。基本HSPG结构由一个蛋白质核心组成，几个线性硫酸乙酰肝素链共价连接到该核心上(Lindahl和Kjellen,2013，同上)。蛋白聚糖核心蛋白的三个主要家族已被表征：跨膜多配体聚糖(syndecan)、糖基磷脂酰肌醇连接的磷脂酰肌醇聚糖(glypican)和基底膜PG基底膜蛋白多糖(perlecan)和聚集蛋白(agrin)。
肝素是一种广泛使用的抗凝剂，是研究最彻底的GAG之一。它是主要在肥大细胞中发现的硫酸乙酰肝素的高度硫酸化形式。作为一种商业产品，肝素是一种由约20-60个单体单元组成的杂寡聚二糖组合物。它没有与之结合的蛋白质。由于肝素和HS-GAG的相似性，它通常代替HS-GAG用于生化和结合检测(Lindahl,U.和Kjellen,L.(2013)同上)。
肝素结合结构域。许多生物活性肽和蛋白质具有与GAG结合的肝素结合结构域(Lindahl和Kjellen,2013，同上)。这些包括趋化因子、细胞因子、生长因子、病毒包膜蛋白、淀粉样肽、纤连蛋白等。通常，不同肝素结合结构域之间没有氨基酸序列同源性，因此为选择性提供了分子基础。尽管蛋白与GAG(如肝素和硫酸乙酰肝素)的相互作用具有重要的生物学意义，但蛋白-GAG结合的结构要求尚未得到充分表征。离子相互作用对促进蛋白-GAG结合很重要。尽管它们的电荷相同，但是精氨酸残基比赖氨酸残基与GAG的结合更紧密。大多数淀粉样肽和蛋白质，包括β-淀粉样蛋白、α-突触核蛋白、TDP-43、SAA和Tau，都具有肝素结合结构域。
糖胺聚糖(GAG)和淀粉样病症。诸如HS-GAG的GAG与淀粉样疾病的病因学有关((Maiza A.等人(2018)FEBS Lett 592(23):3806-3818)。HS-GAG可能通过与淀粉样前体结合并诱导其组装成原纤维所需的构象变化来促进原纤维形成。HS-GAG还与新生原纤维保持关联，有助于它们的稳定性。β-淀粉样蛋白的肝素结合区被定义为带正电荷的结构域HisGlnLysLys，对应于β-淀粉样蛋白序列中的位置#13-16。已经表明，β-淀粉样蛋白通过直接结合在体外以高亲和力与HS-GAG相互作用。HS-GAG以及其他硫酸化GAG和肝素可加速β-淀粉样β-折叠构象，并伴有原纤维形成。硫酸化GAG和HS-GAG与其他淀粉样疾病有关，这些淀粉样疾病与淀粉样蛋白如Tau或α-突触核蛋白相关(Maiza,A.，同上)。
HS-GAG与在神经系统中传播朊病毒样蛋白病变种子(proteopathic seed)有关。最近的实验证据表明，纤维蛋白聚集体的跨细胞传播以类似朊病毒的方式驱动神经退行性疾病的进展(Holmes,B.B.等人(2013)Proc Natl Acad Sci U S A,110(33):E3138–E3147)。这种现象现在在细胞和动物模型中得到了很好的描述，并涉及蛋白质聚集体向细胞外空间的释放。游离的聚集体随后进入邻近的细胞，发展进一步的纤维化。蛋白病变种子的朊病毒样传播可能是包括tau病和突触核蛋白病(synucleinopathy)在内的神经退行性疾病进展的基础。聚集体进入细胞是跨细胞传播的关键步骤。硫酸乙酰肝素蛋白聚糖已被证明是tau聚集体结合和摄取以及随后正常细胞内tau播种的关键介质。该途径介导培养细胞、原代神经元和大脑中的聚集体摄取。α-突触核蛋白原纤维使用相同的进入机制来发展细胞内聚集。这为聚集体传播的关键步骤建立了分子基础。
淀粉样疾病治疗剂的发现和开发。淀粉样病症与淀粉样多肽有关。因此，能够选择性阻断淀粉样蛋白质聚集、错误折叠、传播或沉积的药物有望在多种淀粉样变性病(例如阿尔茨海默病、炎性淀粉样变性病和朊病毒病)中提供预防和/或治疗益处。尽管进行了大量的工作，但开发淀粉样疾病(如阿尔茨海默病)的有效治疗剂的努力仅取得了非常有限的成功，因此需要开发新的治疗剂。
GAG模拟物。先前公开的一种治疗AD的方法涉及GAG模拟物。例如，某些小分子硫酸化化合物抑制淀粉样肽与GAG的结合，并在AD动物模型中显示出体内活性(Kisilevsky,R.,1996,Drugs Aging 8,75-83)；然而，这种硫酸化化合物不结合GAG，而是直接与淀粉样肽相互作用。
本公开的一个目的是发现能够抑制GAG和淀粉样肽之间相互作用的小分子化合物。如本文所述，预计此类化合物可用于预防和治疗淀粉样病症。
另一个目的是鉴定与淀粉样肽相关的淀粉样病症的新药物靶点。
另一个目的是开发用于筛选化合物库的简单可重复的GAG淀粉样肽结合检测，例如通过HTS，使用96孔板或其他多孔板和标准检测方法如光谱学。
以下专利申请描述了作为抗疟疾剂的喹啉-4-基肼衍生物(Quinolin-4-Ylhydrazine Derivatives As Antimalarial Agents.)，Campiani,G.等人WO 2007/104695。
本文引用的每篇参考文献都通过引用的方式整体并入本文。本文讨论的出版物仅出于公开的目的提供。本文中的任何内容都不应被解释为承认由于先前的发明，本公开无权先于此类出版物。实际公开日期可能需要独立确认。
发明内容
本公开提供了抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与硫酸乙酰肝素糖胺聚糖(HS-GAG)结合的小分子化合物，因此可用作治疗剂，例如用于阿尔茨海默病以及其他淀粉样疾病和神经退行性疾病。还描述了药物组合物、其用途和筛选方法。
根据一个实施方案，本公开提供了通式I的化合物：
式I
和药学上可接受的稀释剂或载体
其中
X1、X2和X3是独立的并且任选地是-CR9-或N；R9是烷基、卤素、-O-烷基。如果X1是CR9，那么R9和R6可以连接形成5-7元碳环、杂芳环或杂环；
R3和R4是独立的并且任选地是H、卤素、-O-烷基。R3和R4可以连接形成稠合的苯基；
R5是H、C1-6烷基；
R2是任选被C1-6烷基、-OH、-O-烷基、卤素、杂环、杂芳环取代的苯基；任选被C1-6烷基、-OH、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环或杂芳环；任选被烷基、-O-烷基、卤素、杂环、杂芳环取代的5或6元杂环；-N+(CH3)3，任选取代的4、5和6元杂环，所述4、5和6元杂环包括可以含有季铵化氮以形成带电物质的杂环和杂芳环；
L1是键、-CH3、-CH2-、-[CR7R8]n-，其中R7和R8独立地是：F、C1-6烷基，连接形成C3-6碳环或杂环或杂芳环；
n＝0、1、2、3；
L2可以是键或–N＝C(R5)-；
R1是不存在，任选被烷基、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环，-N+(CH3)3，任选取代的4、5和6元杂环，所述4、5和6元杂环包括可以含有季铵化氮以形成带电物质的杂环和杂芳环；
R6是烷基；
及其药学上可接受的盐。还包括碳氮双键的所有几何异构体和可能的互变异构体。
实施例1-42中描述了这类化合物的化学合成。化学结构如表1所示。在实施例中描述了化合物的分析化学数据，如质谱和NMR数据分析。
如实施例44-48和50-54所示，式I化合物抑制GBAP和HS-GAG之间的相互作用，因此可用作与淀粉样变性相关的神经退行性疾病和其他淀粉样疾病的治疗剂。
根据一个实施方案，抑制GBAP与HS-GAG结合的式I化合物选自由以下组成的组：
(E)-4-((E)-(4-(1H-咪唑-1-基)-2-甲基亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物1)
(E)-7-氯-4-((E)-(4-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-1,4-二氢喹啉(化合物2)
(E)-4-((E)-(4-(1H-吡唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物3)
(Z)-1-(4-((2-(6-氯喹啉-4-基)肼亚基)甲基)苯基)-N,N,N-三甲基甲铵碘化物(化合物4)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氟喹啉(化合物5)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)吗啉(化合物6)
(E)-7-氯-4-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)亚苄基)肼基)喹诺酮(化合物7)
(E)-1-(4-((2-(1,2-二氢苊-5-基)肼亚基)甲基)苯基)-1H-咪唑(化合物8)
碘化(Z)-1-甲基-4-((2-(喹啉-4-基)亚肼基)甲基)吡啶-1-鎓(化合物9)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)硫代吗啉1,1-二氧化物(化合物10)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉盐酸盐(化合物11)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-7-甲氧基喹啉(化合物12)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉磷酸盐(化合物13)
(E)-4-(2-((6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)-7-氯喹啉盐酸盐(化合物14)
7-氯-4-(2-((6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物15)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物16)
碘化(E)-1-(5-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物17)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物18)
(E)-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物19)
7-氯-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物20)
(E)-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氟喹唑啉(化合物21)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹啉(化合物22)
碘化1-(5-(1-(2-(7-氯喹啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(化合物23)
(E)-6-氯-1-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)酞嗪(化合物24)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)喹唑啉-4-胺(化合物25)
(E)-1-(5-(1-(2-(7-氟喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物26)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物27)
7-氯-4-(2-(1-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物28)
1-(3-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(化合物29)
7-氯-4-(2-(1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物30)
6-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)酞嗪-1-胺磷酸盐(化合物31)
(E)-4-(2-(1-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氯喹唑啉(化合物32)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物33)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺磷酸盐(化合物34)
(E)-7-氯-4-(2-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)喹啉盐酸盐(化合物35)
7-氯-N-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物37)5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)-2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-醇磷酸盐(化合物40)
N-(6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺(化合物41)
7-氯-N-(3-((二乙氨基)甲基)苯基)喹啉-4-胺(化合物42)
碘化1-(5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物43)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹啉-4-胺(化合物44)和
7-氯-N-(2-((二甲氨基)甲基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物45)。
这些化合物具有实施例中所述的生物活性，因此可用作神经退行性疾病和其他淀粉样疾病的治疗剂。
根据一个实施方案，本公开提供了一种包含通式I的化合物的药物组合物：
式I
和药学上可接受的稀释剂或载体
其中
X1、X2和X3是独立的并且任选地是-CR9-或N；R9是烷基、卤素、-O-烷基。如果X1是CR9，那么R9和R6可以连接形成5-7元碳环、杂芳环或杂环；
R3和R4是独立的并且任选地是H、卤素、-O-烷基。R3和R4可以连接形成稠合的苯基；
R5是H、C1-6烷基；
R2是任选被C1-6烷基、-OH、-O-烷基、卤素、杂环、杂芳环取代的苯基；任选被C1-6烷基、-OH、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环或杂芳环；任选被烷基、-O-烷基、卤素、杂环、杂芳环取代的5或6元杂环；-N+(CH3)3，任选取代的4、5和6元杂环，所述4、5和6元杂环包括可以含有季铵化氮以形成带电物质的杂环和杂芳环；
L1是键、-CH3、-CH2-、-[CR7R8]n-，其中R7和R8独立地是：F、C1-6烷基，连接形成C3-6碳环或杂环或杂芳环；
n＝0、1、2、3；
L2可以是键或–N＝C(R5)-；
R1是不存在，任选被烷基、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环，-N+(CH3)3，任选取代的4、5和6元杂环，所述4、5和6元杂环包括可以含有季铵化氮以形成带电物质的杂环和杂芳环；
R6是烷基；
及其药学上可接受的盐，该药物组合物的特征在于其能够抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与HS-GAG的结合。
如实施例中所述，这种药物组合物包含抑制GBAP和HS-GAG之间相互作用的化合物，因此，这种药物组合物可用于预防或治疗淀粉样疾病和神经退行性疾病。
根据另一个实施方案，提供了一种治疗淀粉样疾病或病症的方法，所述方法包括以下步骤：选择需要治疗和/或预防淀粉样疾病或病症的受试者，向有此需要的受试者施用治疗有效量的根据式I的化合物，该化合物抑制GBAP与HS-GAG的结合，从而治疗和/或预防淀粉样疾病或病症。根据一个实施方案，GBAP是β-淀粉样蛋白，淀粉样病症是阿尔茨海默病或脑淀粉样血管病。根据另一个实施方案，GBAP是α-突触核蛋白，淀粉样病症是帕金森病或多系统萎缩(MSA)或突触核蛋白病。根据另一个实施方案，GBAP是Tau，淀粉样病症是阿尔茨海默病、额颞叶痴呆或tau病。根据另一个实施方案，GBAP是TDP-43，淀粉样病症是ALS或与TDP-43淀粉样变性相关的痴呆。根据另一个实施方案，GBAP是SAA，淀粉样疾病或病症与淀粉样蛋白A(AA)淀粉样变性有关。
根据一个实施方案，包含通式I的化合物的药物组合物选自由以下组成的组：
(E)-4-((E)-(4-(1H-咪唑-1-基)-2-甲基亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物1)
(E)-7-氯-4-((E)-(4-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-1,4-二氢喹啉(化合物2)
(E)-4-((E)-(4-(1H-吡唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物3)
(Z)-1-(4-((2-(6-氯喹啉-4-基)肼亚基)甲基)苯基)-N,N,N-三甲基甲铵碘化物(化合物4)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氟喹啉(化合物5)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)吗啉(化合物6)
(E)-7-氯-4-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)亚苄基)肼基)喹诺酮(化合物7)
(E)-1-(4-((2-(1,2-二氢苊-5-基)肼亚基)甲基)苯基)-1H-咪唑(化合物8)
碘化(Z)-1-甲基-4-((2-(喹啉-4-基)亚肼基)甲基)吡啶-1-鎓(化合物9)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)硫代吗啉1,1-二氧化物(化合物10)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉盐酸盐(化合物11)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-7-甲氧基喹啉(化合物12)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉磷酸盐(化合物13)
(E)-4-(2-((6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)-7-氯喹啉盐酸盐(化合物14)
7-氯-4-(2-((6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物15)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物16)
碘化(E)-1-(5-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物17)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物18)
(E)-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物19)
7-氯-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物20)
(E)-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氟喹唑啉(化合物21)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹啉(化合物22)
碘化1-(5-(1-(2-(7-氯喹啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(化合物23)
(E)-6-氯-1-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)酞嗪(化合物24)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)喹唑啉-4-胺(化合物25)
(E)-1-(5-(1-(2-(7-氟喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物26)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物27)
7-氯-4-(2-(1-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物28)
1-(3-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(化合物29)
7-氯-4-(2-(1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物30)
6-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)酞嗪-1-胺磷酸盐(化合物31)
(E)-4-(2-(1-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氯喹唑啉(化合物32)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物33)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺磷酸盐(化合物34)
(E)-7-氯-4-(2-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)喹啉盐酸盐(化合物35)
4-(2-(1-(4-(1H-咪唑-1-基)苯基)亚乙基)肼基)-7-氯喹啉磷酸酯(化合物36)
7-氯-N-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物37)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氯喹啉二盐酸盐(化合物38)
N-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)苯并[g]喹啉-4-胺(化合物39)
5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)-2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-醇磷酸盐(化合物40)
N-(6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺(化合物41)
7-氯-N-(3-((二乙氨基)甲基)苯基)喹啉-4-胺(化合物42)
碘化1-(5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物43)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹啉-4-胺(化合物44)
7-氯-N-(2-((二甲氨基)甲基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物45)。
如实施例中所述，这种药物组合物包含至少一种抑制GBAP和HS-GAG之间相互作用的化合物，因此，这种药物组合物可用于治疗淀粉样疾病和神经退行性疾病。
根据另一个实施方案，本公开提供了一种治疗和/或预防淀粉样疾病、病症或病况的方法，包括：选择需要治疗和/或预防淀粉样疾病、病症或病况的受试者，向有此需要的受试者施用治疗量的药物组合物，所述药物组合物包含至少一种抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与HS-GAG结合的式I化合物，其中所述治疗量可有效抑制GBAP与HS-GAG的结合，其中淀粉样疾病、病症或病况得到治疗或预防。
根据一个实施方案，本公开提供了一种治疗和/或预防神经退行性病症或淀粉样病症的方法，包括：选择需要治疗和/或预防神经退行性病症或淀粉样病症的受试者，向有此需要的受试者施用治疗量的直接结合GAG或HS-GAG的化合物，从而治疗和/或预防神经退行性病症或淀粉样病症。
本公开提供了能够鉴定小分子化合物的检测，所述小分子化合物直接且稳定地与GAG结合，并且能够抑制GBAP与实施例中描述的GAG结合。
还提供了筛选化合物以鉴定GBAP与GAG(如HS-GAG)相互作用的抑制剂化合物的方法。
根据一个实施方案，本公开提供了一种筛选直接结合GAG并抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与GAG结合的有机小分子的方法，该方法包括以下步骤：
(a)将GAG固定在多孔板的表面上
(b)在至少一种候选化合物的存在下，使固定的GAG与已知量的GBAP接触；和
(c)测量与GAG结合的GBAP的量，其中与不存在候选化合物时的GAG-GBAP结合相比，GAG-GBAP结合的显著降低将所述化合物鉴定为GAG-GBAP相互作用的抑制剂。
根据一个实施方案，GBAP选自由β-淀粉样蛋白、tau、α-突触核蛋白、TDP-43、IAPP和SAA组成的组。实施例中给出了这种检测的实例。
本公开提供了通式I的化合物：
式I
及药学上可接受的稀释剂或载体，其中X1、X2和X3是独立的并且任选地是-CR9-或N；R9是烷基、卤素、-O-烷基。如果X1是CR9，那么R9和R6可以连接形成5-7元碳环或杂环；R3和R4是独立的并且任选地是H、卤素、-O-烷基。R3和R4可以连接形成稠合的苯基；R5是H、C1-6烷基；R2是任选被C1-6烷基、-OH、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环或杂芳环；L1是键、-CH3、-CH2-、-[CR7R8]n-，其中R7和R8独立地是：F、C1-6烷基，连接形成C3-6碳环或杂环；n＝0、1、2、3；L2可以是键或–N＝C(R5)-；R1是不存在，任选被烷基、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环，-N+(CH3)3，任选取代的4、5和6元杂环，所述4、5和6元杂环包括可以含有季铵化氮以形成带电物质的杂环和杂芳环；R6是烷基；及其药学上可接受的盐。
本公开提供了包含治疗量的式I化合物的药物组合物：
式I
和药学上可接受的稀释剂或载体，
其中X1、X2和X3是独立的并且任选地是-CR9-或N；R9是烷基、卤素、-O-烷基。如果X1是CR9，那么R9和R6可以连接形成5-7元碳环或杂环；R3和R4是独立的并且任选地是H、卤素、-O-烷基。R3和R4可以连接形成稠合的苯基；R5是H、C1-6烷基；R2是任选被C1-6烷基、-OH、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环或杂芳环；L1是键、-CH3、-CH2-、-[CR7R8]n-，其中R7和R8独立地是：F、C1-6烷基，连接形成C3-6碳环或杂环；n＝0、1、2、3；L2可以是键或–N＝C(R5)-；R1是不存在，任选被烷基、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环，-N+(CH3)3，任选取代的4、5和6元杂环，所述4、5和6元杂环包括可以含有季铵化氮以形成带电物质的杂环和杂芳环；R6是烷基；其中所述治疗量可有效抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与糖胺聚糖(GAG)的结合。本公开提供了一种药物组合物，其中式I化合物选自本文公开的化合物。本公开提供了一种用于治疗或预防神经退行性疾病、病症或病况的药物组合物。本公开提供了一种药物组合物，其中神经退行性疾病、病症或病况是帕金森病、多系统萎缩或α-突触核蛋白病。本公开提供了一种药物组合物，其中神经退行性疾病、病症或病况是肌萎缩侧索硬化。本公开提供了一种药物组合物，其中神经退行性疾病、病症或病况是阿尔茨海默病或痴呆症。本公开提供了一种用于治疗或预防淀粉样疾病、病症或病况的药物组合物。本公开提供了一种药物组合物，其中淀粉样疾病是AA淀粉样变性。本公开提供了一种药物组合物，其中GBAP是β-淀粉样蛋白，并且淀粉样疾病、病症或病况是阿尔茨海默病或脑淀粉样血管病。本公开提供了一种药物组合物，其中GBAP是tau和淀粉样疾病、病症或病况，其中淀粉样神经退行性病症是帕金森病、多系统萎缩、α-突触核蛋白病、阿尔茨海默病、脑淀粉样血管病、tau病、额颞叶痴呆、ALS或AA淀粉样变性。本公开提供了一种药物组合物，其中GBAP是SAA，并且淀粉样疾病、病症或病况是AA淀粉样变性。
本公开提供了一种治疗或预防与GBAP结合HS-GAG相关的淀粉样疾病、病症或病况的方法，包括：选择需要治疗或预防与GBAP结合HS-GAG相关的淀粉样疾病、病症或病况的受试者；向有此需要的受试者施用治疗量的药物组合物，所述药物组合物包含至少一种抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与糖胺聚糖(GAG)结合的式I化合物，其中所述化合物如本文所公开，其中受试者的与GBAP结合HS-GAG相关的淀粉样疾病、病症或病况得到治疗或预防。
本公开提供了一种方法，其中淀粉样疾病、病症或病况，其中淀粉样神经退行性病症是帕金森病、多系统萎缩、α-突触核蛋白病、阿尔茨海默病、脑淀粉样血管病、tau病、额颞叶痴呆、ALS或AA淀粉样变性。本公开提供了一种方法，其中化合物如本文所公开。
本公开提供了一种治疗或预防与淀粉样肽结合HS-GAG相关的淀粉样疾病、病症或病况的方法，包括：选择需要治疗或预防与淀粉样肽结合HS-GAG相关的淀粉样疾病、病症或病况的患者；向有此需要的受试者施用治疗量的药物组合物，所述药物组合物包含至少一种抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与糖胺聚糖(GAG)结合的小分子化合物，其中所述治疗量可有效抑制GBAP与GAG的结合，进一步其中患者的与淀粉样肽结合HS-GAG相关的淀粉样疾病、病症或病况得到治疗或预防。本公开提供了一种方法，其中抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与糖胺聚糖(GAG)结合的化合物不是肽或蛋白质。本公开提供了一种方法，其中淀粉样疾病、病症或病况是帕金森病、多系统萎缩、α-突触核蛋白病、阿尔茨海默病、脑淀粉样血管病、tau病、额颞叶痴呆、ALS或AA淀粉样变性。本公开提供了一种方法，其中化合物如本文所公开。
本公开提供了一种检测直接结合糖胺聚糖(GAG)的小分子化合物的方法，包括：(a)将GAG固定在多孔板的表面上；(b)在至少一种候选化合物的存在下，使固定的GAG与已知量的GBAP接触；和(c)测量与固定的GAG结合的GBAP的量，其中有机小分子化合物有效抑制GBAP与GAG的结合。
本公开提供了一种检测直接结合糖胺聚糖(GAG)的有机小分子的方法，包括：(a)将GAG固定在多孔板的表面上；(b)将GAG与至少一种候选有机小化合物接触；(c)去除未结合的有机小化合物；(d)添加GBAP；和(e)测量与固定的GAG结合的GBAP的量，其中小分子化合物有效抑制GBAP与GAG的结合。
本公开提供了一种方法，其中GBAP选自由淀粉样蛋白-β、α-突触核蛋白、TDP-43、tau、SAA、IAPP及其衍生物和片段组成的组。
本公开提供了一种治疗或预防淀粉样神经退行性病症的方法，包括：选择需要治疗或预防淀粉样神经退行性病症的受试者；向所述受试者施用治疗量的化合物，所述化合物是GBAP与GAG结合的双重抑制剂，其中两种GBAP选自由Abeta、tau、TDP-43和α-突触核蛋白组成的组，其中受试者的淀粉样神经退行性病症得到治疗或预防。本公开提供了一种方法，其中两种GBAP是Abeta和tau，其中淀粉样神经退行性病症是阿尔茨海默病。本公开提供了一种方法，其中GBAP是tau和TDP-43，淀粉样病症是FTD。本公开提供了一种方法，其中淀粉样神经退行性病症是帕金森病、多系统萎缩、α-突触核蛋白病、阿尔茨海默病、脑淀粉样血管病、tau病、额颞叶痴呆、ALS或AA淀粉样变性。本公开提供了一种方法，其中化合物如本文所公开。
本公开提供了一种治疗淀粉样病症的方法，包括：选择需要治疗淀粉样病症的受试者；向有此需要的受试者施用治疗量的与糖胺聚糖(GAG)结合的化合物，其中所述治疗量可有效抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与GAG的结合，其中受试者的淀粉样病症得到治疗。本公开提供了一种方法，其中GAG是硫酸乙酰肝素GAG(HS-GAG)。本公开提供了一种方法，其中淀粉样神经退行性病症是帕金森病、多系统萎缩、α-突触核蛋白病、阿尔茨海默病、脑淀粉样血管病、tau病、额颞叶痴呆、ALS或AA淀粉样变性。本公开提供了一种方法，其中化合物如本文所公开。
本公开提供了本公开的组合物用于产生用于预防和/或治疗本文所述适应症的药物的用途。
根据另一个实施方案，本公开提供了上述药物组合物的用途，以有效用于药物中的量使用，并且最优选以有效用作治疗受试者的疾病或病症(例如如本文所述)的药物的量使用。
根据另一个实施方案，本公开提供了本文所述药物组合物和至少一种额外的治疗剂的用途，以有效用于药物中的量使用，并且最优选以有效用作治疗受试者中与疾病相关的疾病或病症(例如如本文所述)的药物的量使用。
本公开提供了一种用于治疗和/或预防患者中如本文所述的疾病或病况的方法，其中所述方法包括：选择需要治疗和/或预防如本文所述的疾病或病况的患者；向患者施用治疗有效量的本发明组合物，从而治疗和/或预防所述患者的所述疾病。
附图说明
图1显示了抑制剂化合物7和34对α-突触核蛋白与固定化肝素结合的抑制曲线。
图2显示了抑制剂化合物22和24对β-淀粉样蛋白(1-42)与纯化的人脑膜结合的抑制曲线。
图3显示了抑制剂化合物3和6对Tau与固定化肝素结合的抑制曲线。
具体实施方式
本公开描述了用于治疗神经退行性疾病和淀粉样疾病的化合物和药物组合物，还描述了基于抑制糖胺聚糖(GAG)与淀粉样肽的相互作用来治疗神经退行性病症和淀粉样病症的方法。
定义
根据本发明，如本文所用，除非另有明确说明，否则以下术语被定义为具有以下含义。
如本说明书和所附权利要求书中所使用的，除非上下文另有明确规定，否则单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数形式。
术语“化合物”、“小分子化合物”、“有机小化合物”、“有机小分子”和“小分子”在本文中可互换使用，是指分子量小于1200道尔顿、优选200道尔顿至800道尔顿的有机小分子。这种小分子化合物不含氨基酸、肽键和碳水化合物。这种小分子化合物通常通过有机化学合成来制备。
术语“糖胺聚糖”或“GAG”是指硫酸化的糖胺聚糖，包括硫酸乙酰肝素(在本领域中也称为HS-GAG)、肝素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素和硫酸角质素。该术语包括GAG的片段，如那些可通过化学、酶促或在纯化过程中产生的GAG片段。GAG可以是游离的或连接到接头、支持物、细胞膜、细胞或蛋白质上，或者是化学或酶修饰的。GAG可以是粗制的或从器官、组织或细胞中纯化的。该术语不包括非硫酸化GAG，如透明质酸。
术语“蛋白聚糖”是指硫酸乙酰肝素蛋白聚糖、硫酸软骨素蛋白聚糖、硫酸皮肤素蛋白聚糖和硫酸角质素蛋白聚糖。蛋白聚糖通常具有共价连接的GAG。实例是聚集蛋白、基底膜蛋白多糖或多功能蛋白聚糖(versican)。
术语“硫酸乙酰肝素”或“硫酸乙酰肝素糖胺聚糖”或“HS-GAG”是指硫酸乙酰肝素糖胺聚糖。它包括硫酸乙酰肝素的片段，如那些可通过化学、酶促或在纯化过程中产生的硫酸乙酰肝素片段。HS-GAG可以是游离的或连接到接头、支持物、细胞或蛋白质上，或者是化学或酶修饰的。HS-GAG可以是粗制的或从器官、组织或细胞中纯化的。
“肝素”是高度硫酸化的HS-GAG亚型。它是一种多硫酸化多糖，不含与之结合的蛋白质。如本文所用，肝素是指从不同器官或物种制备的肝素，如猪肠粘膜肝素。它包括低分子量肝素，如市售的Fraxiparin和通过化学或酶促反应制备或修饰的其他肝素衍生物。
术语“糖胺聚糖结合性淀粉样肽”或“GAG结合性淀粉样肽”或“GBAP”是指通常具有肝素结合结构域的淀粉样肽和淀粉样蛋白质。GBAP与GAG的结合在生理条件下通常是稳定的，并导致聚集和原纤维生成的加速。GBAP列表包括但不限于：阿尔茨海默病的淀粉样前体蛋白(APP)、包括β-淀粉样蛋白(1-42)和β-淀粉样蛋白(1-40)在内的β-淀粉样肽(衍生自APP)、朊病毒蛋白、Tau、α-突触核蛋白、TDP-43、超氧化物歧化酶1型(SOD)、IAPP、pro-IAPP、转甲状腺素蛋白、β2微球蛋白、免疫球蛋白轻链AL、载脂蛋白A1、血清淀粉样蛋白A(SAA)、α-微球蛋白、凝溶胶蛋白(gelsolin)、溶菌酶、心房利钠因子、降钙素、medin和朊病毒蛋白。该定义还包括肽片段、类似物、融合蛋白、衍生物和突变体。
术语“抑制剂化合物”是指抑制下列两个分子之间相互作用的小分子化合物：(1)GAG，例如但不限于肝素或HS-GAG，和(2)蛋白质或肽，例如GBAP。抑制剂化合物是分子量小于1200道尔顿、优选200道尔顿至800道尔顿的有机小分子。这种小分子化合物通常不含氨基酸、肽键和碳水化合物。这种小分子化合物通常通过有机化学合成来制备。
术语“合成化学化合物集合”或“化合物集合”是指随机和半随机合成的小分子化合物的集合，其中这种集合或库的每个成员都是通过化学合成产生的。
术语“β-淀粉样蛋白”或“淀粉样蛋白-β”或“Abeta”或“β-amyloid”是指作为淀粉样斑块的主要成分参与阿尔茨海默病的肽。这些肽由淀粉样前体蛋白(APP)的蛋白水解裂解产生。包括在内的是36-43个氨基酸的β-淀粉样肽、β-淀粉样蛋白(1-40)(也缩写为Abeta40)和β-淀粉样蛋白(1-42)(也缩写为Abeta42)以及其他合适的肽片段、突变体、衍生物或融合体。β-淀粉样肽具有肝素结合结构域。
术语“Tau”或“tau”是指Tau及其肽片段。Tau是一种微管结合蛋白，可促进微管组装和稳定性。发现Tau是阿尔茨海默病(AD)患者大脑中成对螺旋丝(PHF)的主要成分。Tau在PHF中过度磷酸化。Tau及其生物活性片段可通过重组DNA技术纯化或产生，并且是市售的。包括在内的是具有肝素结合结构域的Tau蛋白和Tau合成肽；许多Tau蛋白和肽可从商业供应商处获得。
术语“α-突触核蛋白”或“α-Synuclein”是指14kD(140个氨基酸)的酸性突触前蛋白和肽片段。α-突触核蛋白是帕金森病聚集体的主要成分，并与帕金森病和相关神经退行性病症的发病机制有关。α-突触核蛋白作为路易体的主要成分在散发性帕金森病患者的大脑中积累，路易体是帕金森病特征性的神经元内细胞质内含物。该定义包括具有肝素结合结构域的α-突触核蛋白和α-突触核蛋白的肽片段，其中许多是市售的。
术语“TDP-43”是指TAR DNA结合蛋白43及其肽片段。TDP-43的一种超磷酸化、泛素化和裂解形式，称为病理性TDP43，是泛素阳性、tau和α-突触核蛋白阴性型额颞叶痴呆(FTD)和肌萎缩侧索硬化(ALS)的主要疾病蛋白。中枢神经系统中TDP-43聚集体的积累是许多神经退行性疾病的共同特征，如ALS、FTD、阿尔茨海默病(AD)和边缘主导年龄相关TDP-43脑病(LATE)。
术语“SAA”是指血清淀粉样蛋白A及其肽片段。血清淀粉样蛋白A是与血浆中高密度脂蛋白(HDL)相关的载脂蛋白家族。SAA有不同的同种型。SAA与多种慢性疾病有关，如淀粉样变性、动脉粥样硬化和类风湿性关节炎。SAA是一种急性期血浆蛋白，作为不溶性淀粉样原纤维沉积在细胞外，损害组织结构和功能。
术语“治疗”旨在包括施用本发明的化合物，其目的可以包括预防、改善、防范或治愈病症。这种治疗不一定完全改善病况。
“药学上可接受的赋形剂”是指通常用于制备药物组合物的赋形剂，该赋形剂通常是安全、无毒和理想的，并且包括兽医用途和人类医药用途方面可接受的赋形剂。此类赋形剂可以是固体、液体、半固体，或者在气雾剂组合物的情况下是气体。
“药学上可接受的盐”是指药学上可接受并具有所需药理学性质的盐。此类盐包括当化合物中存在的酸性质子能够与无机或有机碱反应时形成的盐。合适的无机盐包括与碱金属(例如钠和钾、镁、钙和铝)形成的无机盐。合适的有机盐包括与有机碱如胺碱(例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等)形成的盐。此类盐还包括与无机酸(例如盐酸和氢溴酸)和有机酸(例如乙酸、柠檬酸、马来酸和烷烃磺酸和芳烃磺酸如甲磺酸和苯磺酸)形成的酸加成盐。当存在两个酸性基团时，药学上可接受的盐可以是单酸单盐或二盐(di-salt)；类似地，当存在两个以上的酸性基团时，这些基团中的一些或全部可以成盐。
“治疗有效量”通常是指足以影响疾病所需治疗程度的量。“治疗有效量”或“治疗有效剂量”优选减少淀粉样变性的体征或治疗与这些病况相关的疾病，如淀粉样疾病或突触核蛋白病，相对于未治疗的受试者减少至少20％，更优选减少至少40％，甚至更优选减少至少60％，还更优选减少至少80％。广泛范围的公开的组合物剂量被认为是安全和有效的。
疾病的“治疗”包括预防可能易患该疾病但尚未经历或表现出该疾病症状的哺乳动物发生该疾病(预防性治疗)，抑制该疾病(减缓或阻止其发展)，缓解该疾病的症状或副作用(包括姑息治疗)，以及缓解该疾病(使该疾病消退)，如通过破坏预先形成的淀粉样蛋白或突触核蛋白原纤维。一种这样的预防性治疗可以是使用所公开的化合物治疗轻度认知障碍(MCI)。
“破坏原纤维或原纤维形成”是指破坏预先形成的淀粉样蛋白或突触核蛋白原纤维，它们通常存在于预先占主导的β-褶状折叠二级结构中。本发明化合物产生的这种破坏可能涉及淀粉样蛋白或突触核蛋白原纤维的显著减少或分解，如通过各种方法如圆二色光谱、硫黄素T荧光测定法、刚果红结合、SDS-PAGE/蛋白质印迹进行评估，如本申请中给出的实施例所示。
如本文所用，术语“活性药物成分”(“API”)或“药物活性剂”是可如本文所述使用的药物或药剂，旨在用于人体或动物体中以治愈、缓解、预防或诊断疾病、不适、身体损伤或病理症状；允许识别身体或心理的状态、状况或功能；替换人体或动物体或体液产生的活性物质；防御、消除病原体、寄生虫或外源物质或使其无害，或影响身体或心理的状态、状况或功能。目前使用的药物可以在参考著作中找到，例如，Rote Liste或Merck Index。
“药物制剂”或“药剂”或“药物组合物”是指用于治疗的化合物或化合物的组合，优选为纯的或接近纯的形式。在说明书中，药物制剂或药剂包括本发明的化合物。理想的是将化合物纯化至80％的均一性，优选90％的均一性。据信纯化至99.9％均一性的化合物和组合物是有利的。作为测试或证实，HPLC上合适的均一化合物将产生本领域技术人员识别为单一尖峰带的产物。
如本文所用，术语“受试者”和“患者”可互换使用。如本文所用，术语“患者”是指动物，优选哺乳动物，如非灵长类动物(例如牛、猪、马、猫、狗、大鼠等)和灵长类动物(例如猴子和人类)，最优选人类。在一些实施方案中，受试者是非人类动物，如农场动物(例如马、猪或牛)或宠物(例如狗或猫)。在一个具体实施方案中，受试者是老年人。在另一个实施方案中，受试者是成人。在另一个实施方案中，受试者是人类儿童。在另一个实施方案中，受试者是人类幼儿。
“淀粉样疾病”是指以蛋白质聚集体的积累或形成为症状或其病理的一部分的多种病症中的任何一种。“病症和/或疾病”、“病症”和“疾病”在本文中可互换使用，包括以异常蛋白质折叠或聚集或异常淀粉样蛋白形成、沉积、积累或持续存在或淀粉样蛋白脂质相互作用为特征的病况。在一些方面，该术语包括以异常蛋白质折叠或聚集或淀粉样蛋白形成、沉积、积累或持续存在为特征的病况。根据一些实施方案，该疾病是中枢或外周神经系统或全身器官的病况。根据一些实施方案，这些术语包括与蛋白质错误折叠、淀粉样蛋白或淀粉样原纤维的形成、沉积、积累或持续存在有关的病况，包含淀粉样蛋白，该淀粉样蛋白包含或选自由以下组成的组：β-淀粉样蛋白、tau、α-突触核蛋白、TDP-43、SAA、SOD、AA淀粉样蛋白、AL淀粉样蛋白、IAPP、PrP淀粉样蛋白、α2-微球蛋白淀粉样蛋白、甲状腺素运载蛋白、前白蛋白和降钙素原。病症和/或疾病可以是这样一种病况，其中需要解离异常聚集的蛋白质和/或溶解或破坏预先形成或预先沉积的淀粉样蛋白或淀粉样原纤维和/或防止细胞聚集和/或在错误折叠或聚集的蛋白病变种子的组织中扩散。
“淀粉样细胞”或“细胞淀粉样变性”被定义为显示淀粉样变性表型迹象的细胞。举例来说，这些迹象可包括淀粉样肽或蛋白质聚集、细胞内淀粉样聚集体积累的迹象等。通常，这种迹象可以通过生物化学或组织学方法检测到，并且还可能涉及细胞毒性迹象，如影响溶酶体外观。
“淀粉样变性”是指淀粉样蛋白质聚集和淀粉样原纤维形成的迹象，通常与毒性有关。其他相关术语是蛋白质构象病症、蛋白质错误折叠疾病、蛋白构象病(proteopathy)和蛋白病(proteinopathy)。淀粉样变性是指一组不同的获得性或遗传性起源的疾病，其特征是具有相似特性的几种不同类型的蛋白质原纤维之一的积累，称为淀粉样蛋白。淀粉样蛋白可以积累在单个器官中，也可以分散在全身。这种疾病会在受影响的区域引起严重问题，这些区域可能包括心脏、大脑、肾脏和消化道。淀粉样沉积物的纤维组成是各种淀粉样疾病的识别特征。主要由β-淀粉样肽原纤维组成的脑内和脑血管沉积物是阿尔茨海默病(家族性和散发性类型两者)的特征；胰岛淀粉样蛋白肽(IAPP；淀粉纤维素(amylin))是与II型糖尿病相关的胰岛细胞淀粉样沉积物中原纤维的特征；并且，β-2-微球蛋白是长期血液透析治疗后形成的淀粉样沉积物的主要成分。朊病毒相关疾病，如Creutzfeld-Jacob病、羊瘙痒症、牛海绵状脑炎等的特征在于朊病毒蛋白的蛋白酶抗性形式的积累。
在本发明的其他方面，可以使用本发明的化合物、组合物和方法治疗和/或预防的病症和/或疾病包括中枢或外周神经系统或全身器官的病况，该病况导致β-褶状折叠、原纤维和/或聚集体或寡聚体形式的蛋白质、蛋白质片段和肽的沉积。根据一些实施方案，该疾病是早老性和老年性形式的阿尔茨海默病；淀粉样血管病；轻度认知障碍；阿尔茨海默病相关痴呆(例如血管性或阿尔茨海默病性痴呆)。
本文使用的术语“治疗”通常指获得期望的药理和/或生理效果。就完全或部分预防疾病或其症状而言，该效果可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病和/或该疾病引起的副作用而言，该效果可以是治疗性的。本文所用的“治疗”涵盖对哺乳动物(例如人)疾病的任何治疗，包括：
(a)防止可能易患疾病或症状但尚未被诊断为患有疾病或症状的受试者发生该疾病或症状；
(b)抑制疾病症状，即阻止其发展；或者
(c)缓解疾病症状，即导致疾病或症状消退。
“有效剂量”或“有效量”是指施用足以提供所需生理和/或心理变化的化合物。这将因患者、疾病和治疗而异。该剂量可以是治疗剂量，在这种情况下，它应足以改变受试者中淀粉样斑块的水平以减轻或改善病症或病况的症状，或者是预防剂量，它应足以防止淀粉样斑块积累至不期望的水平。
术语“诊断”在本文中用于涵盖用于确定或表现状态的任何类型的分析，包括根据疾病的症状识别疾病，以及确定表示疾病状态(例如阿尔茨海默病的开始)的区域(例如脑组织)中分子(例如apoE)的存在。
本文使用的术语“单位剂型”是指适于作为人和动物受试者的单位剂量的物理离散单位，每个单位含有预定量的本发明化合物，其量经计算足以产生所需效果，并与药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂结合。本发明所述单位剂型的规格取决于所用的化合物和要达到的效果，以及每种化合物在宿主体内的药效动力学。
本文使用的术语“阿尔茨海默病”(本文缩写为“AD”)是指一种不可逆的、进行性的大脑病症，它会缓慢破坏记忆和思维技能。阿尔茨海默病是一种痴呆类型，被认为是由脑细胞内及其周围的蛋白质异常堆积引起的。其中涉及的一种蛋白质被称为β-淀粉样蛋白，其沉积物在脑细胞周围形成斑块。另一种蛋白质被称为tau，其沉积物在脑细胞内形成缠结。AD与海马体和大脑皮层中神经炎性斑块的形成以及学习和记忆障碍有关，该斑块主要包含淀粉样β蛋白。本文所用的“AD”意指包括AD和AD型病状。本文使用的术语“AD型病状”是指CNS改变的组合，包括但不限于在海马体和大脑皮层中形成含有淀粉样β蛋白的神经炎性斑块。
本文使用的术语“脑淀粉样血管病”(本文缩写为CAA)是指与脑血管内β-淀粉样蛋白沉积形成有关的病况，其可因脑实质出血而引起并发症。CAA也可能与出血发作前的痴呆有关。与CAA相关的血管淀粉样沉积物可以在没有AD的情况下存在，但更经常与AD相关。
术语“突触核蛋白病”或“α-突触核蛋白病”是指以神经元、神经纤维或神经胶质细胞中α-突触核蛋白聚集体异常积累为特征的神经退行性疾病。有三种主要类型的突触核蛋白病：帕金森病(PD)、路易体痴呆(DLB)和多系统萎缩(MSA)。其他罕见病症，如各种神经轴突营养不良，也有α-突触核蛋白病状。
术语“tau病”或“Tau病”是指一类神经退行性疾病，涉及tau蛋白在人脑中聚集成神经原纤维或胶质原纤维缠结(NFT)。缠结是由称为tau的微管蛋白过度磷酸化形成的，导致该蛋白从微管上分离并形成不溶性聚集体。这些聚集也被称为成对螺旋丝。tau病的实例有阿尔茨海默病、进行性核上性麻痹(PSP)、额颞叶痴呆和与17号染色体相关的帕金森症(FTDP-17)。
本文使用的术语“β-淀粉样蛋白沉积物”是指脑中由β-淀粉样蛋白以及其他物质组成的沉积物。术语“朊病毒”是指已知在人类和动物中引起疾病(海绵状脑病)的传染性颗粒。术语“朊病毒介导的病症”是指由朊病毒颗粒感染引起的任何病症。已知的朊病毒包括感染动物导致羊瘙痒症(绵羊和山羊神经系统的一种传染性退行性疾病)以及牛海绵状脑病(BSE)或疯牛病和猫海绵状脑病的朊病毒。
本文定义的术语“烷基”，单独或组合使用时，通常指直链或支链烷基，优选具有1-6个碳原子，即(C1-C6)烷基，包括例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、2,2-二甲基丙基和正己基。
术语“芳基”，单独或组合使用时，是指芳族碳环基团，优选具有6至20个、更优选6至10个碳原子，即分别为(C6-C20)或(C6-C10)芳基，如苯基和萘基。
术语“杂环基”或“杂环”或“杂环的”，单独或组合使用时，是指衍生自含有1-3个选自由N、O和S组成的组的杂原子的单环或多环的基团，具有或不具有不饱和性或芳族特征。术语“杂芳基”是指这种具有芳族特征的单环或多环。任何烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基基团可以被一个或多个基团取代，包括但不限于，卤素、羟基、(C1-C10)烷基、(C2-C10)烯基、(C2-C10)炔基、(C7-C12)芳烷基、(C6-C10)芳基、(C7-C12)烷芳基、(C1-C10)烷氧基、(C6-C10)芳氧基、(C1-C10)烷硫基、(C6-C10)芳硫基、(C6-C10)芳氨基、(C3-C10)环烷基、(C3-C10)环烯基、氨基、(C1-C10)烷基氨基、二(C1-C10)烷基氨基、(C2-C12)烷氧基烷基、(C2-C12)烷硫基-烷基、(C1-C10)烷基亚磺酰基、(C1-C10)烷基磺酰基、(C6-C10)芳基磺酰基、羟基-(C1-C10)烷基、(C6-C10)芳氧基(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基羰基、(C6-C10)芳基-氧基羰基、(C2-C11)烷酰基、(C7-C11)芳酰基、氟代(C1-C10)烷基、氧代、硝基、硝基-(C1-C10)烷基、氰基、氰基(C1-C10)烷基、氨基羰基、(C1-C10)烷基-氨基羰基、二(C1-C10)-烷基氨基羰基、氨基羰基(C1-C10)烷基、氨基羰基(C6-C10)芳基、氨基磺酰基、(C1-C10)烷基氨基磺酰基、二(C1-C10)烷基氨基磺酰基、脒基、羧基、磺酸基、杂环基和-(CH2)m-Z-(C1-C10烷基)，其中m是1至8，Z是氧或硫。
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
应当理解，本文使用的术语“取代的”是指指定原子上的任何一个或多个氢被选自指定基团的基团所取代，前提是不超过指定原子的正常化合价，并且该取代产生稳定的化合物。只有当取代基的组合产生稳定的化合物时，这种组合才是允许的。“稳定的化合物”或“稳定的结构”在本文中是指这样一种化合物，其足够稳定，能够从反应混合物中分离出有用纯度的化合物，并配制成有效的治疗剂。
如本文所考虑的，本发明还包括本发明定义的化合物的异构体，包括2H(氘)、18F和11C、药学上可接受的盐和水合物以及溶剂化物。
此外，本发明还包括本文所述化合物的水合物。术语“水合物”包括但不限于半水合物、一水合物、二水合物、三水合物等。
在提供数值范围的情况下，应当理解，除非上下文另有明确说明，否则该范围的上限和下限之间的每个中间值(至下限单位的十分之一)以及该范围内的任何其他规定值或中间值都包含在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括在较小范围内，也包括在本发明内，受所述范围内任何具体排除的限制的影响。当所述范围包括一个或两个极限时，排除这些所包括的极限中的一个或两个的范围也包括在本发明中。
缩写：APP：淀粉样前体蛋白；AD：阿尔兹海默病；CS-GAG：硫酸软骨素糖胺聚糖；BSA：牛血清白蛋白；GAG：糖胺聚糖；GBAP：GAG结合性淀粉样肽；HS-GAG：硫酸乙酰肝素糖胺聚糖；HSPG：硫酸乙酰肝素蛋白聚糖；DMSO：二甲基亚砜；ELISA-酶联免疫分析；Tris：三(羟甲基)氨基甲烷；DS-GAG：硫酸皮肤素；KS-GAG：硫酸角质素；SAR：构效关系；NCE-新化学实体；SAA：血清淀粉样蛋白A；TDP-43：TAR DNA结合蛋白43；SOD：超氧化物歧化酶1；PD：帕金森病。
本公开提供了抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与硫酸乙酰肝素糖胺聚糖(HS-GAG)结合的小分子化合物，因此可用作治疗剂，例如用于阿尔茨海默病以及其他淀粉样疾病和神经退行性疾病。
活性剂
根据一个实施方案，本公开提供了活性剂，如通式I的化合物：
式I
和药学上可接受的稀释剂或载体
其中
X1、X2和X3是独立的并且任选地是-CR9-或N；R9是烷基、卤素、-O-烷基。如果X1是CR9，那么R9和R6可以连接形成5-7元碳环、杂芳环或杂环；
R3和R4是独立的并且任选地是H、卤素、-O-烷基。R3和R4可以连接形成稠合的苯基，C1-7碳环或杂环或杂芳环；
R5是H、C1-6烷基；
R2是任选被C1-6烷基、-OH、-O-烷基、卤素、杂环、杂芳环取代的苯基；任选被C1-6烷基、-OH、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环或杂芳环；任选被烷基、-O-烷基、卤素、杂环、杂芳环取代的5或6元杂环；-N+(CH3)3，任选取代的4、5和6元杂环，所述4、5和6元杂环包括可以含有季铵化氮以形成带电物质的杂环和杂芳环；
L1是键、-CH3、-CH2-、-[CR7R8]n-，其中R7和R8独立地是：F、C1-6烷基，连接形成C3-6碳环或杂环或杂芳环；
n＝0、1、2、3；
L2可以是键或–N＝C(R5)-；
R1是不存在，任选被烷基、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环，-N+(CH3)3，任选取代的4、5和6元杂环，所述4、5和6元杂环包括可以含有季铵化氮以形成带电物质的杂环和杂芳环；
R6是烷基；
及其药学上可接受的盐。还包括氮碳双键的所有几何异构体和互变异构体。
实施例中描述了这类化合物的化学合成。化学结构如表1所示。在实施例中描述了化合物的分析化学数据，如质谱和NMR数据分析。
如实施例所示，式I化合物抑制GBAP和HS-GAG之间的相互作用，因此可用作与淀粉样变性相关的神经退行性疾病和其他淀粉样疾病的治疗剂。
根据一个实施方案，抑制GBAP与HS-GAG结合的式I化合物选自由以下组成的组：
(E)-4-((E)-(4-(1H-咪唑-1-基)-2-甲基亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物1)
(E)-7-氯-4-((E)-(4-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-1,4-二氢喹啉(化合物2)
(E)-4-((E)-(4-(1H-吡唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物3)
(Z)-1-(4-((2-(6-氯喹啉-4-基)肼亚基)甲基)苯基)-N,N,N-三甲基甲铵碘化物(化合物4)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氟喹啉(化合物5)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)吗啉(化合物6)
(E)-7-氯-4-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)亚苄基)肼基)喹诺酮(化合物7)
(E)-1-(4-((2-(1,2-二氢苊-5-基)肼亚基)甲基)苯基)-1H-咪唑(化合物8)
碘化(Z)-1-甲基-4-((2-(喹啉-4-基)亚肼基)甲基)吡啶-1-鎓(化合物9)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)硫代吗啉1,1-二氧化物(化合物10)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉盐酸盐(化合物11)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-7-甲氧基喹啉(化合物12)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉磷酸盐(化合物13)
(E)-4-(2-((6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)-7-氯喹啉盐酸盐(化合物14)
7-氯-4-(2-((6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物15)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物16)
碘化(E)-1-(5-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物17)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物18)
(E)-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物19)
7-氯-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物20)
(E)-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氟喹唑啉(化合物21)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹啉(化合物22)
碘化1-(5-(1-(2-(7-氯喹啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(化合物23)
(E)-6-氯-1-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)酞嗪(化合物24)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)喹唑啉-4-胺(化合物25)
(E)-1-(5-(1-(2-(7-氟喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物26)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物27)
7-氯-4-(2-(1-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物28)
1-(3-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(化合物29)
7-氯-4-(2-(1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物30)
6-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)酞嗪-1-胺磷酸盐(化合物31)
(E)-4-(2-(1-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氯喹唑啉(化合物32)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物33)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺磷酸盐(化合物34)
(E)-7-氯-4-(2-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)喹啉盐酸盐(化合物35)
7-氯-N-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物37)
5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)-2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-醇磷酸盐(化合物40)
N-(6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺(化合物41)
7-氯-N-(3-((二乙氨基)甲基)苯基)喹啉-4-胺(化合物42)
碘化1-(5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物43)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹啉-4-胺(化合物44)
7-氯-N-(2-((二甲氨基)甲基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物45)。
这些化合物具有实施例中所述的生物活性，因此可用作神经退行性疾病和其他淀粉样疾病的治疗剂。
根据一个实施方案，本公开提供了包含通式I化合物的药物组合物：
式I
和药学上可接受的稀释剂或载体
其中
X1、X2和X3是独立的并且任选地是-CR9-或N；R9是烷基、卤素、-O-烷基。如果X1是CR9，那么R9和R6可以连接形成5-7元碳环、杂芳环或杂环；
R3和R4是独立的并且任选地是H、卤素、-O-烷基。R3和R4可以连接形成稠合的苯基，C1-7碳环或杂环或杂芳环；
R5是H、C1-6烷基；
R2是任选被C1-6烷基、-OH、-O-烷基、卤素、杂环、杂芳环取代的苯基；任选被C1-6烷基、-OH、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环或杂芳环；任选被烷基、-O-烷基、卤素、杂环、杂芳环取代的5或6元杂环；-N+(CH3)3，任选取代的4、5和6元杂环，所述4、5和6元杂环包括可以含有季铵化氮以形成带电物质的杂环和杂芳环；
L1是键、-CH3、-CH2-、-[CR7R8]n-，其中R7和R8独立地是：F、C1-6烷基，连接形成C3-6碳环或杂环或杂芳环；
n＝0、1、2、3；
L2可以是键或–N＝C(R5)-；
R1是不存在，任选被烷基、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环，-N+(CH3)3，任选取代的4、5和6元杂环，所述4、5和6元杂环包括可以含有季铵化氮以形成带电物质的杂环和杂芳环；
R6是烷基；
及其药学上可接受的盐，该药物组合物的特征在于其能够抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与HS-GAG的结合。
如实施例中所述，这种药物组合物包含抑制GBAP和HS-GAG之间相互作用的化合物，因此，这种药物组合物可用于预防或治疗淀粉样疾病和神经退行性疾病。
根据另一个实施方案，提供了一种治疗淀粉样疾病或病症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的根据式I的化合物的步骤，该化合物抑制GBAP与HS-GAG的结合。根据一个实施方案，GBAP是β-淀粉样蛋白，淀粉样病症是阿尔茨海默病或脑淀粉样血管病。根据另一个实施方案，GBAP是α-突触核蛋白，淀粉样病症是帕金森病或突触核蛋白病。根据另一个实施方案，GBAP是Tau，淀粉样病症是阿尔茨海默病、额颞叶痴呆或tau病。根据另一个实施方案，GBAP是TDP-43，淀粉样病症是ALS或与TDP-43淀粉样变性相关的另一疾病。根据另一个实施方案，GBAP是SAA，并且淀粉样疾病或病症与SAA淀粉样变性有关。
根据一个实施方案，药物组合物包含通式I的活性剂化合物，其抑制GBAP与GAG的结合，并且选自由以下组成的组：
(E)-4-((E)-(4-(1H-咪唑-1-基)-2-甲基亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物1)
(E)-7-氯-4-((E)-(4-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-1,4-二氢喹啉(化合物2)
(E)-4-((E)-(4-(1H-吡唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物3)
(Z)-1-(4-((2-(6-氯喹啉-4-基)肼亚基)甲基)苯基)-N,N,N-三甲基甲铵碘化物(化合物4)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氟喹啉(化合物5)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)吗啉(化合物6)
(E)-7-氯-4-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)亚苄基)肼基)喹诺酮(化合物7)
(E)-1-(4-((2-(1,2-二氢苊-5-基)肼亚基)甲基)苯基)-1H-咪唑(化合物8)
碘化(Z)-1-甲基-4-((2-(喹啉-4-基)亚肼基)甲基)吡啶-1-鎓(化合物9)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)硫代吗啉1,1-二氧化物(化合物10)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉盐酸盐(化合物11)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-7-甲氧基喹啉(化合物12)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉磷酸盐(化合物13)
(E)-4-(2-((6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)-7-氯喹啉盐酸盐(化合物14)
7-氯-4-(2-((6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物15)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物16)
碘化(E)-1-(5-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物17)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物18)
(E)-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物19)
7-氯-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物20)
(E)-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氟喹唑啉(化合物21)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹啉(化合物22)
碘化1-(5-(1-(2-(7-氯喹啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(化合物23)
(E)-6-氯-1-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)酞嗪(化合物24)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)喹唑啉-4-胺(化合物25)
(E)-1-(5-(1-(2-(7-氟喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物26)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物27)
7-氯-4-(2-(1-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物28)
1-(3-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(化合物29)
7-氯-4-(2-(1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物30)
6-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)酞嗪-1-胺磷酸盐(化合物31)
(E)-4-(2-(1-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氯喹唑啉(化合物32)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物33)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺磷酸盐(化合物34)
(E)-7-氯-4-(2-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)喹啉盐酸盐(化合物35)
4-(2-(1-(4-(1H-咪唑-1-基)苯基)亚乙基)肼基)-7-氯喹啉磷酸酯(化合物36)
7-氯-N-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物37)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氯喹啉二盐酸盐(化合物38)
N-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)苯并[g]喹啉-4-胺(化合物39)
5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)-2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-醇磷酸盐(化合物40)
N-(6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺(化合物41)
7-氯-N-(3-((二乙氨基)甲基)苯基)喹啉-4-胺(化合物42)
碘化1-(5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物43)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹啉-4-胺(化合物44)
7-氯-N-(2-((二甲氨基)甲基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物45)。
如实施例中所述，这种药物组合物包含至少一种抑制GBAP和HS-GAG之间相互作用的化合物，因此，这种药物组合物可用于治疗淀粉样疾病和神经退行性疾病。具体而言，如实施例44和表2所示，式I化合物抑制Abeta(1-40)和Abeta(1-42)与肝素(一种HS-GAG物质)的结合。式I化合物还抑制Abeta(1-42)与从人脑中纯化的人脑膜的结合(实施例50)。如实施例51-54、表2-6所示，式I化合物抑制Abeta与肝素的结合、α-突触核蛋白与肝素的结合、tau与肝素的结合、TDP-43与肝素的结合以及SAA与肝素的结合。式I化合物还抑制Abeta(1-42)与从人脑中纯化的人脑膜的结合。式I化合物还抑制α-突触核蛋白、tau和TDP-43与从人脑中纯化的人脑膜的结合(实施例51-53)。
抑制与细胞膜的结合可能表明抑制剂化合物能够阻止GBAP进入哺乳动物细胞，如神经元细胞。因此，这种抑制剂化合物可用于防止淀粉样肽在细胞间的传播和淀粉样变性的扩散。
根据另一个实施方案，本公开提供了一种治疗淀粉样疾病、病症或病况的方法，包括向有此需要的受试者施用治疗量的药物组合物，所述药物组合物包含至少一种抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与HS-GAG结合的化合物，其中所述治疗量可有效抑制GBAP与HS-GAG的结合。
根据一个实施方案，本公开提供了一种治疗神经退行性病症或淀粉样病症的方法，包括向有此需要的受试者施用治疗量的直接结合GAG或HS-GAG的化合物。
实施例中描述了能够鉴定小分子化合物的检测，所述小分子化合物直接且稳定地与GAG结合，并且能够抑制淀粉样蛋白-β与GAG的结合。
还提供了筛选化合物以鉴定GBAP与GAG(如HS-GAG)相互作用的抑制剂化合物的方法。
根据一个实施方案，本发明提供了一种筛选直接结合GAG并抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与GAG结合的有机小分子的方法，该方法包括以下步骤：
(a)将GAG固定在多孔板的表面上；
(b)在至少一种候选化合物的存在下，使固定的GAG与已知量的GBAP接触；和
(c)测量与GAG结合的GBAP的量，其中与不存在候选化合物时的GAG-GBAP结合相比，GAG-GBAP结合的显著降低将所述化合物鉴定为GAG-GBAP相互作用的抑制剂。
根据一个实施方案，GBAP选自由β-淀粉样蛋白、tau、α-突触核蛋白、TDP-43、IAPP和SAA组成的组。实施例中给出了这种检测的实例。
在示例性实施方案中，本文公开的药物组合物和/或制剂可以包含浓度为约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％、约26％、约27％、约28％、约29％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约61％、约62％、约63％、约64％、约65％、约66％、约67％、约68％、约69％、约70％、约75％、约75％和约80％的活性剂。在示例性实施方案中，本文公开的药物组合物和/或制剂可包含浓度为约1％至约20％、约5％至约25％、约10％至约20％、或约15％至约18％、约30％至约70％、约35％至约65％、约63.13％和约40％至约64％w/w的活性剂。
在某些实施方案中，活性剂的剂量等于或大于例如约0.001、0.0025、0.005、0.0075、0.01、0.025、0.05、0.075、0.1、0.25、0.75、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40或45mg/kg/天。在示例性实施方案中，本公开的药物组合物和/或制剂可以包含浓度为约0.001、0.0025、0.005、0.0075、0.01、0.025、0.05、0.075、0.1、0.25、0.75、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、200、225、250或275mg的活性剂。
在其他实施方案中，本文公开的药物组合物还包含一种或多种额外材料，例如药学上相容的载体、粘合剂、粘度调节剂、填充剂、悬浮剂、调味剂、甜味剂、崩解剂、表面活性剂、防腐剂、润滑剂、着色剂、稀释剂、增溶剂、湿润剂、稳定剂、润湿剂、抗粘附剂、侧壁细胞活化剂、消泡剂、抗氧化剂、螯合剂、抗真菌剂、抗细菌剂或其一种或多种组合。
筛选检测
本公开提供了筛选小分子化合物的检测，以鉴定用于预防和/或治疗和/或控制阿尔茨海默病和其他淀粉样病症的候选治疗剂。该检测提供了一种鉴定直接与GAG结合的化合物并防止淀粉样肽与GAG结合的方法。据我们所知，以前没有描述过直接稳定结合GAG并抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与GAG结合的化合物。
根据一个实施方案，本公开提供了一种筛选直接结合GAG并抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与GAG结合的有机小分子的方法，该方法包括以下步骤：
(a)将GAG固定在多孔板的表面上；
(b)在至少一种候选化合物的存在下，使固定的GAG与已知量的GBAP接触；和
(c)测量与GAG结合的GBAP的量，其中与不存在候选化合物时的GAG-GBAP结合相比，GAG-GBAP结合的显著降低将所述化合物鉴定为GAG-GBAP相互作用的抑制剂。
根据另一个实施方案，本公开提供了一种筛选直接抑制糖胺聚糖(GAG)与GAG结合性淀粉样肽(GBAP)相互作用的有机小化合物的方法，该方法包括以下步骤：
(a)将GAG固定在多孔板的表面上；
(b)将固定的GAG与至少一种候选有机小化合物接触；
(c)去除未结合的有机化合物；
(d)加入GBAP；和
(e)测量与GAG结合的GBAP的量，其中与不存在候选化合物时的GAG-GBAP结合相比，GAG-GBAP结合的显著降低将所述化合物鉴定为GAG-GBAP相互作用的抑制剂。
根据本公开，可以鉴定出直接稳定结合GAG并能够抑制GBAP与GAG结合的小分子化合物。根据一个实施方案，描述了一种检测，其中候选抑制剂化合物首先在没有GBAP的情况下暴露于GAG，随后洗涤平板。通过这种方式，只有直接与GAG结合的化合物才能被鉴定，其作用机制得以确定。
用于测定的GAG可选自由硫酸乙酰肝素(HS-GAG)、肝素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素及其衍生物和片段组成的组。例如，硫酸软骨素可以从人脑中纯化，通过其游离醛基与BSA缀合，并通过在96孔板中孵育固定所得CS-GAG-BSA缀合物。一些GAG可以从商业供应商处购买。GAG或其片段可以从生物体、组织或细胞中纯化。或者，可以使用蛋白聚糖作为GAG的来源，并且可以通过成熟的方法从生物体、组织、肿瘤或细胞中纯化蛋白聚糖。蛋白聚糖然后用于溶液中或固定在多孔板中用于化合物筛选。
根据一个实施方案，GAG是商业购买的猪肝素，并且肝素通过其末端醛与BSA缀合，如实施例43中所述。除了肝素，可以使用另一种GAG。可以用另一种载体蛋白(如明胶)代替BSA。肝素-BSA缀合物与多孔板一起孵育(如实施例43中所述)，这导致BSA-肝素固定在多孔板的固体表面上。肝素通常用于代替HS-GAG；由于它们的化学结构相似，肝素的数据通常被认为也适用于HS-GAG。肝素-BSA的结果可以通过使用HS-GAG-BSA来确认。
GBAP是一种淀粉样肽或蛋白质，它可以是融合蛋白、蛋白片段或突变蛋白的一部分。例如，GBAP可以与标签融合，用于随后用抗体检测标签。GAG或GBAP可能被标记或标示。这种标示可以包括但不限于染料、荧光染料、化学发光剂或放射性试剂。
根据一个实施方案，使用GBAP抗体通过免疫测定法检测GBAP。如实验1中所述，通过将肝素-BSA固定在平板上开发了β-淀粉样蛋白的检测。在与β-淀粉样蛋白(1-42)一起孵育后，洗涤平板并与抗体一起孵育，使抗体结合至β-淀粉样蛋白的N末端。
根据一个实施方案，通过选自但不限于以下的方法检测GBAP与GAG的结合：(a)分光光度检测方法；(b)放射性检测方法；(c)荧光检测方法。例如，GBAP的抗体或第二抗体是与酶(如辣根过氧化物酶(HRP))缀合的抗体。根据一些这样的实施方案，如实施例43中所述，用分光光度法通过比色法检测酶。
根据一个实施方案，如实施例中所述，GBAP是β-淀粉样蛋白。这些检测也适用于其他GBAP。GBAP可以是单体或寡聚体形式。单体和寡聚体形式的β-淀粉样蛋白都与肝素结合。
在这样的测定中，通常一种测定是测量与固定的GAG结合的GBAP的量，其中与不存在候选化合物时的GAG-GBAP结合相比，GAG-GBAP结合的显著降低将所述化合物鉴定为GAG-GBAP相互作用的抑制剂。
根据一个实施方案，用抗GBAP单克隆抗体(mAb)检测结合的GBAP。
可以通过多种技术鉴定与硫酸乙酰肝素/肝素相互作用的小分子化合物。例如，可以测量对与HS-GAG结合的已知蛋白质的抑制。如果一种化合物抑制HS-GAG与蛋白质X结合，它要么通过与蛋白质X结合，要么通过与HS-GAG结合来实现。(这可以通过例如将化合物与HS-GAG孵育、洗涤步骤以及随后与蛋白质X孵育来区分。)有许多间接方法用于鉴定/筛选与HS-GAG相互作用的化合物。蛋白质X可以用放射性、荧光或标签(具有酶促或其他活性)标记。如果蛋白质X与HS-GAG的相互作用被化合物抑制，那么它是通过与蛋白质X或HS-GAG结合来实现的。本发明提供了与HS-GAG结合并因此阻止蛋白质X结合的化合物
根据一个实施方案，本发明公开了GAG，特别是HS-GAG作为这种筛选的分子靶标。本文所述的直接靶向GAG对于有效的药物筛选和化学优化是重要的。
用于鉴定抑制剂化合物的化合物筛选方法可用于各种改进中，这是本领域技术人员熟知的。检测可分为直接结合检测或抑制检测。GAG分子可以是固定的，或者GBAP可以是固定的，或者GAG和GBAP都可以存在于溶液中。检测可以集中在GAG或GBAP上，例如通过使用抗体、生物素-链霉亲和素、放射性标记、荧光标记等。检测方法也可能不同，如分光光度法、化学发光法、荧光法、放射性检测等。固定的GAG可用于包被在平板上或偶联到珠子上。使用不同的化学方法，GAG可以与载体(如蛋白质)连接。或者，GBAP可以被固定，例如通过包被在平板上或偶联到珠子上。GBAP可以用作包含GAG结合结构域的融合蛋白或结构域。另一种有用的方法可以是使用全细胞(如神经元细胞)作为GAG的来源。根据一个实施方案，该方法用于鉴定阻止进入这些神经细胞的抑制剂化合物。
根据一个实施方案，用于筛选的化合物可以通过合成化学产生，或者可以是通过算法、压缩库等预先选择的单独或混合物形式的天然化合物。根据一个实施方案，筛选方法是高通量筛选(HTS)，其中在机器人的帮助下筛选数千种化合物。
根据一个实施方案，根据本发明方法的化合物筛选被用作通过合成化学结合化学优化的迭代筛选。
根据一个实施方案，通过本发明的方法筛选的有机小分子与选自由硫酸乙酰肝素(HS-GAG)、肝素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素及其衍生物和片段组成的组的GAG相互作用。
根据一个实施方案，糖胺聚糖是HS-GAG或肝素或其衍生物和寡糖片段。GAG可以是粗制的或从器官、组织或细胞中纯化的。这种HS-GAG可以是市售的，或者从目的来源如人肝脏、人脑、内皮细胞等中纯化。HS-GAG也可以被化学或酶促修饰，或合成产生。
根据一个实施方案，通过本发明方法筛选的小化合物与含有GAG的蛋白聚糖相互作用，例如硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HS-PG)。可以从器官、组织、细胞或肿瘤中纯化具有HS-GAG链的蛋白聚糖。这种HS-PG的实例是多配体蛋白聚糖或聚集蛋白。也可以使用具有其他GAG链的蛋白聚糖，如多功能蛋白聚糖。
GAG(如肝素)的固定可以通过多种方法实现。在一个实施方案中，肝素通过其醛基与BSA结合。另一种选择是使用来自Iduron(www.iduron.co.uk)的肝素/GAG结合平板，在这种情况下肝素直接固定在具有修饰表面的96孔板上。在各种检测方法中，一种选择是使用标记的淀粉样肽或标记的抗淀粉样肽抗体。一种这样的标签可以由生物素组成，而下一步可以使用与碱性磷酸酶(或辣根过氧化物酶)缀合的链霉亲和素(或抗生物素蛋白)。在碱性磷酸酶的情况下，通过与磷酸对硝基苯反应，随后通过在ELISA多孔板酶标仪中进行的光谱法来进行检测。
当使用这种检测进行化合物筛选时，可以使用例如来自靶组织的GAG或PG，如内皮细胞HS-GAG、肾脏纯化的HS-GAG或HS-PG等。
根据本发明的一个实施方案，通过本发明方法鉴定的抑制剂化合物直接与GAG相互作用并抑制它们与GBAP的相互作用。原则上，抑制剂化合物可以通过以下方式抑制β-淀粉样蛋白-肝素相互作用：(i)直接与肝素结合，从而防止其与β-淀粉样蛋白相互作用；或(ii)直接与β-淀粉样蛋白结合，随后防止其与肝素相互作用。
发现适合进一步开发和化学优化的化合物可以进一步进行第二次筛选，鉴定直接与肝素结合的化合物。在不存在β-淀粉样蛋白的情况下，将单个化合物与固定化肝素一起孵育。在洗涤平板以去除所有未结合的化合物后，加入β-淀粉样蛋白，并遵循标准检测方案。如下文举例说明的，在共孵育检测中发现抑制肝素-β-淀粉样蛋白结合的化合物在预孵育条件下具有相同的结合能力。分析选定化合物的IC50，比较预孵育和共孵育的值，证实了这一观察结果。这些结果表明化合物通过直接结合肝素而不是通过结合β-淀粉样蛋白来抑制β-淀粉样蛋白-肝素相互作用。此外，化合物与肝素的相互作用耐洗涤，因此相对稳定。
本发明首次举例说明了结构多样的化合物能够抑制GAG与GBAP的相互作用。
根据本发明的一个方面，提供了用于药物筛选的新分子靶标，即称为GAG的非蛋白、非肽靶标。
本发明的另一方面提供了淀粉样变性领域的药物作用机制，其中该机制包含有机小分子与GAG的直接相互作用。
用于鉴定治疗化合物的检测
在其最常见的形式中，用于鉴定作为GAG抑制剂的化合物的检测包括将适当的淀粉样肽与假定的配体接触并测量其结合特性。有几种GAG检测可用于测量化合物结合GAG的能力，这些检测在本领域是众所周知的。例如，GAG和假定的配体都可以在溶液中保持足够长的时间以形成选定物和配体的复合物，然后从未复合的淀粉样肽和配体中分离复合物，并测量形成的复合物的量。或者，可以测量未复合的淀粉样肽或化合物的量。
治疗方法
根据一个实施方案，提供了一种治疗淀粉样病症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的与GAG结合并抑制GBAP与GAG结合的化合物的步骤。GAG可选自由硫酸乙酰肝素(HS-GAG)、肝素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素和含有GAG的蛋白聚糖组成的组。
根据一个实施方案，GBAP是β-淀粉样蛋白，淀粉样病症是阿尔茨海默病。
根据一个实施方案，本发明提供了一种小分子化合物，其：
(i)直接与GAG结合
和
(ii)抑制GBAP与GAG的结合
而GAG选自由硫酸乙酰肝素(HS-GAG)、肝素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素及衍生物组成的组。
如背景技术中所述，GAG似乎在淀粉样病症(例如阿尔茨海默病)中具有重要的生物学作用。因此，调节GAG和β-淀粉样肽之间的相互作用可能具有重要的治疗价值。
然而，除了GAG模拟物之外，现有技术没有提供由抑制GBAP与GAG(例如HS-GAG)结合组成的治疗方法。本发明提供了一种治疗淀粉样病症的方法，该方法包括向有此需要的受试者施用治疗量的小分子化合物，该化合物的特征在于其能够直接结合GAG，其中所述治疗量可有效抑制GBAP与GAG的结合。根据一个实施方案，GBAP是β-淀粉样蛋白，淀粉样病症是阿尔茨海默病。根据另一个实施方案，GAG是HS-GAG。根据一个实施方案，GBAP选自α-突触核蛋白、tau、TDP-43、SAA和IAPP的组。
这些药物组合物可用于例如治疗或预防淀粉样疾病、病症或病况。根据一个实施方案，淀粉样疾病是阿尔茨海默病或脑淀粉样血管病。
根据一个实施方案，本公开提供了一种治疗与淀粉样蛋白β与HS-GAG结合的抑制有关的淀粉样疾病、病症或病况的方法，包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含至少一种抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与糖胺聚糖(GAG)结合的式I化合物。
根据一个实施方案，本公开提供了一种治疗或预防与淀粉样蛋白β与HS-GAG结合的抑制有关的淀粉样疾病、病症或病况的方法，包括向有此需要的受试者施用治疗量的药物组合物，所述药物组合物包含至少一种抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与糖胺聚糖(GAG)结合的化合物，所述化合物选自由式I化合物组成的组，其中所述治疗量可有效抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与糖胺聚糖(GAG)的结合。
根据一个实施方案，本公开提供了一种治疗淀粉样病症的方法，包括向有此需要的受试者施用治疗量的结合糖胺聚糖(GAG)的化合物，其中所述治疗量可有效抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与GAG的结合。
根据一些实施方案，本公开提供了一类用于治疗阿尔茨海默病(AD)的化合物，其可以防止淀粉样蛋白-β与GAG结合。AD的一个突出病理特征是神经元溶酶体途径的强烈激活、与溶酶体细胞毒性相关的内吞作用和自噬作用，并代表散发性AD的最早临床表现之一(Nixon,R.A.,2008,Autophagy 4(5):590-9)。由于与淀粉样肽复合，已知溶酶体HS-GAG的积累、储存和消化不良导致AD中的溶酶体功能障碍和细胞死亡。此外，HS-GAG引起淀粉样蛋白病变种子在中枢神经系统(CNS)内化和扩散(Holmes等人(2013)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.110(33):E3138-47)。不受理论的束缚，本公开的化合物与GAG结合并防止淀粉样蛋白-β肽与GAG结合，从而防止GAG-淀粉样蛋白-β复合物内吞到细胞中、在溶酶体中积累、溶酶体功能障碍、细胞死亡和淀粉样疾病通过CNS扩散到未受影响的神经元中。
本公开提供了喹啉和喹唑啉衍生化合物及其药物组合物。这些化合物抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)和硫酸乙酰肝素糖胺聚糖(HS-GAG)之间的相互作用，因此可用作治疗与淀粉样变性相关的神经退行性疾病和其他淀粉样病症的治疗剂。本公开进一步提供了治疗神经退行性疾病和淀粉样疾病的方法。
表1.化合物与结构的列表
化合物与名称的列表(E)-4-((E)-(4-(1H-咪唑-1-基)-2-甲基亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物1)
(E)-7-氯-4-((E)-(4-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-1,4-二氢喹啉(化合物2)
(E)-4-((E)-(4-(1H-吡唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物3)(Z)-1-(4-((2-(6-氯喹啉-4-基)肼亚基)甲基)苯基)-N,N,N-三甲基甲铵碘化物(化合物4)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氟喹啉(化合物5)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)吗啉(化合物6)
(E)-7-氯-4-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)亚苄基)肼基)喹诺酮(化合物7)
(E)-1-(4-((2-(1,2-二氢苊-5-基)肼亚基)甲基)苯基)-1H-咪唑(化合物8)
碘化(Z)-1-甲基-4-((2-(喹啉-4-基)亚肼基)甲基)吡啶-1-鎓(化合物9)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)硫代吗啉1,1-二氧化物(化合物10)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉盐酸盐(化合物11)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-7-甲氧基喹啉(化合物12)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉磷酸盐(化合物13)
(E)-4-(2-((6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)-7-氯喹啉盐酸盐(化合物14)
7-氯-4-(2-((6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物15)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物16)
碘化(E)-1-(5-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物17)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物18)
(E)-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物19)
7-氯-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物20)
(E)-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氟喹唑啉(化合物21)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹啉(化合物22)
碘化1-(5-(1-(2-(7-氯喹啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(化合物23)
(E)-6-氯-1-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)酞嗪(化合物24)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)喹唑啉-4-胺(化合物25)
(E)-1-(5-(1-(2-(7-氟喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物26)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物27)
7-氯-4-(2-(1-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物28)
1-(3-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(化合物29)
7-氯-4-(2-(1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物30)
6-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)酞嗪-1-胺磷酸盐(化合物31)
(E)-4-(2-(1-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氯喹唑啉(化合物32)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物33)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺磷酸盐(化合物34)
(E)-7-氯-4-(2-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)喹啉盐酸盐(化合物35)
4-(2-(1-(4-(1H-咪唑-1-基)苯基)亚乙基)肼基)-7-氯喹啉磷酸酯(化合物36)
7-氯-N-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物37)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氯喹啉二盐酸盐(化合物38)
N-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)苯并[g]喹啉-4-胺(化合物39)
5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)-2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-醇磷酸盐(化合物40)
N-(6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺(化合物41)
7-氯-N-(3-((二乙氨基)甲基)苯基)喹啉-4-胺(化合物42)
碘化1-(5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物43)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹啉-4-胺(化合物44)
7-氯-N-(2-((二甲氨基)甲基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物45)。
剂型
本文公开的药物组合物可以以微型胶囊、胶囊、片剂、植入剂、锭剂、喉糖(微型片剂)、临时或永久混悬液、胚珠(ovule)、栓剂、圆片(wafer)、咀嚼片剂、迅速或快速溶解片剂、泡腾片剂、颗粒剂、膜剂(film)、喷雾剂(sprinkle)、小丸、珠子、丸剂、粉剂、研碎剂(triturate)、薄片剂(platelet)、条剂(strip)或袋装剂(sachet)的形式提供。组合物也可以在与例如酸奶或果汁混合并吞咽后施用或施用后饮用饮品或饮料。这些形式在本领域中是众所周知的，并且被适当包装。该组合物可以被配制用于口服或直肠递送。
根据本发明制备的用于口服施用并通过直接压缩制造的片剂通常含有其他非活性添加剂，如粘合剂、润滑剂、崩解剂、填充剂、稳定剂、表面活性剂、着色剂等。粘合剂用于赋予片剂粘合性，从而确保片剂在压缩后保持完整。合适的粘合剂材料包括但不限于，淀粉(包括玉米淀粉和预胶化淀粉)、明胶、糖(包括蔗糖、葡萄糖、右旋糖和乳糖)、聚乙二醇、蜡以及天然和合成树胶，例如阿拉伯胶、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素聚合物(包括羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素等)和硅酸铝镁盐(Veegum)。润滑剂用于促进片剂生产，促进粉末流动，并在压力释放时防止颗粒封盖(即颗粒破碎)。有用的润滑剂是硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸和氢化植物油(优选由约1wt.％至5wt.％的硬脂酸和棕榈酸的氢化和精制甘油三酯组成，最优选小于约2wt.％)。润滑剂可以以例如约0.25wt.％至约3wt.％、约0.5wt.％至约2.0wt.％、约0.75wt.％至约1.5wt.％的浓度存在。
崩解剂用于促进片剂的崩解，从而提高相对于溶解速率的侵蚀速率，通常是淀粉、粘土、纤维素、藻酸盐(algin)、树胶或交联聚合物(例如交联聚乙烯吡咯烷酮)。填充剂包括例如诸如二氧化硅、二氧化钛、氧化铝、滑石粉、高岭土、粉状纤维素和微晶纤维素的材料，以及诸如甘露醇、尿素、蔗糖、乳糖、乳糖一水合物、右旋糖、氯化钠和山梨醇的可溶性材料。本发明制剂中还可以有利地包含溶解度增强剂，包括增溶剂本身、乳化剂和络合剂(例如环糊精)。本领域众所周知的稳定剂用于抑制或延迟药物分解反应，包括例如氧化反应。崩解剂可以以例如约0.25wt.％至约3wt.％、约0.5wt.％至约2.0wt.％的浓度、约0.75wt.％至约1.5wt.％的浓度存在。
虫胶(shellac)，也称为纯化紫胶(purified lac)，是从昆虫的树脂分泌物中获得的精制产物。这种涂层在pH>7的介质中溶解。
除了增塑剂之外，还可以将着色剂、防粘剂、表面活性剂、消泡剂、润滑剂、稳定剂如羟丙基纤维素、酸/碱加入到涂层中，以溶解或分散涂层材料，并改善涂层性能和包被的产物。
在实施本文公开的方法时，可以将本发明的组合施用于哺乳动物物种，如狗、猫、人等，并且因此可以掺入常规全身剂型中，如片剂、胶囊或酏剂。上述剂型还包括必要的载体材料、赋形剂、粘度调节剂、润滑剂、缓冲剂、抗细菌剂、填充剂(如甘露醇)、抗氧化剂(抗坏血酸或硫酸氢钠)等。
可以根据患者或受试者的年龄、体重和病况，以及施用途径、剂型和方案以及所需结果仔细调整施用剂量。
本发明的组合物可以以每日一至四次的单次或分次剂量的剂型施用，或者可以每日多次施用。建议患者从低剂量组合开始，逐渐增加到高剂量组合。
可以制备各种大小的片剂，例如总重量约2至2000mg的片剂，其含有一种或两种活性成分，其余部分是根据通用做法的其他物质的生理上可接受的载体。可以类似地配制明胶胶囊。
液体制剂也可以通过将一种或组合的活性物质溶解或悬浮在可接受施用的常规液体载体中来制备，以提供所需的剂量，例如1-4茶匙。
剂型可以以例如每天一、二、三、四、五、六或其他多剂量的方案向患者施用。
为了更精细地调整剂量方案，活性物质可以在同一时间或精心协调的时间以单个剂量单位分别施用。各种物质可以以类似于上述的方式单独配制成单独的单位剂型。
在配制组合物时，上述量的活性物质可以在特定类型的单位剂型中根据通用做法与生理上可接受的载体、赋形剂、粘合剂、粘度调节剂、防腐剂、稳定剂、调味剂等混合。
将参考以下实施例更详细地说明本发明，但应该理解的是，本发明不应被视为限于此。
实施例
合成化学实验步骤
一般方法
HPLC纯化，方法A：
使用HPLC(H2O–MeOH；配有DAD和质谱检测器的Agilent 1260 Infinity系统，Waters Sunfire C18 OBD制备型柱，5μm，19mm X 100mm与SunFire C18制备型保护筒，10μm，19mm x 10mm)进行纯化。将物质溶解在0.7mL DMSO中。流速：30mL/min。通过分析LCMS检查所得级分的纯度。记录每个级分的光谱，因为它是在色谱后直接以溶液形式获得的。在80℃的N2流中蒸发溶剂。在0.5mL MeOH中溶解后合并合适的级分，随后在80℃的N2流下除去溶剂。
NMR
Bruker AVANCE DRX 500或Varian UNITYplus 400
分析LC/MS，方法1
具有DAD\ELSD的Agilent 1100系列LC/MSD系统和Agilent LC\MSD VL(G1956A)，SL(G1956B)质谱仪。
具有DAD\ELSD的Agilent 1200系列LC/MSD系统和Agilent LC\MSD SL(G6130A)，SL(G6140A)质谱仪。
所有LC/MS数据都是使用正/负模式切换获得的。
柱Zorbax SB-C18 1.8μm 4.6x15mm快速解析筒(PN 821975-932)
流动相A-乙腈，0.1％甲酸
B-水(0.1％甲酸)
流速3ml/min
梯度0min–100％ B
0.01min–100％ B
1.5min-0％ B
1.8min-0％ B
1.81min-100％ B
注射体积1μl
电离模式大气压化学电离(APCI)
扫描范围m/z 80-1000。
缩写列表
THF 四氢呋喃
DMF N,N-二甲基甲酰胺
MeOH 甲醇
iPrOH 异丙醇
DCM 二氯甲烷
MeCN或CAN 乙腈
PE 石油醚
EtOAc 乙酸乙酯
Et3N或TEA 三乙胺
DMSO 二甲基亚砜
LC 液相色谱
HPLC 高效液相色谱
MS 质谱
LCMS 液相色谱-质谱
NMR 核磁共振
HOAc 乙酸
实施例1：制备(E)-4-((E)-(4-(1H-咪唑-1-基)-2-甲基亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(1)
使用7-氯-4-肼基喹啉和4-(1H-咪唑-1-基)-2-甲基苯甲醛，条件与化合物10相同。产率41％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.46(s,NH),8.68–7.13(m,Ar,12H),2.58(s,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.88min，C20H16ClN5[M+H]+的MS ES-API计算值362.8，实测值361.1。
实施例2：制备(E)-7-氯-4-((E)-(4-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-1,4-二氢喹啉(2)
使用7-氯-4-肼基喹啉和4-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)苯甲醛，条件与化合物10相同。产率37％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.34(s,H),8.46–7.26(m,10H,Ar),2.12(s,6H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.88min，C21H18ClN5[M+H]+的MS ES-API计算值376.9，实测值375.2。
实施例3：制备(E)-4-((E)-(4-(1H-吡唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(3)
使用7-氯-4-肼基喹啉和4-(1H-吡唑-1-基)苯甲醛，条件与化合物10相同，产率：35％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.38(s,NH),8.45-6.52(m,13H,Ar)。
使用方法1 LCMS Rt＝1.1min，C19H14ClN5[M+H]+的MS ES计算值348.1，实测值347.1。
实施例4：(Z)-1-(4-((2-(6-氯喹啉-4-基)肼亚基)甲基)苯基)-N,N,N-三甲基甲铵碘化物(4)
向7-氯-4-肼基喹啉(0.01mol)在无水乙醇(20mL)和1-(4-甲酰基苯基)-N,N,N-三甲基甲铵碘化物(0.01mol)中的悬浮液中加入NEt3(0.97g，0.01mol)。将反应混合物回流8h。减压蒸发溶液，通过HPLC方法A纯化粗混合物。产率：36％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.12(s,NH),8.73–7.16(m,10H),4.60(s,2H),3.07(s,6H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.85min，C20H22ClN4[M+H]+的MS ES计算值354.9，实测值353.2。
实施例5：制备(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氟喹啉(5)
使用7-氟-4-肼基喹啉(1mmol)和4-(1H-咪唑-1-基)苯甲醛，条件与化合物10相同。产率：39％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.33(s,1H),8.44(s,2H),8.36(s,2H),7.93(d,J＝8.3Hz,2H),7.84(s,1H),7.76(d,J＝8.1Hz,2H),7.65–7.23(m,3H),7.15(s,1H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.78min，C19H14FN5[M+H]+的MS ES-API计算值332.4，实测值331.1。
实施例6：制备(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)吗啉(6)
使用7-氟-4-肼基喹啉(1mmol)和4-(吗啉甲基)苯甲醛，条件与化合物10相同。固体产率：49％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.96(s,1H),8.86(dd,J＝9.4,5.8Hz,1H),8.78(s,1H),8.58(d,J＝6.4Hz,1H),7.84(d,J＝7.8Hz,2H),7.73(dd,J＝9.9,2.6Hz,1H),7.59(dd,J＝19.8,8.3Hz,3H),7.50(d,J＝6.4Hz,1H),3.86(s,2H),3.70(s,4H),2.69(s,4H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.76min，C21H21FN4O[M+H]+的MS ES-API计算值365.4，实测值364.2。
实施例7：制备(E)-7-氯-4-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)亚苄基)肼基)喹诺酮(7)
使用7-氯-4-肼基喹啉(1mmol)和4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醛，条件与化合物10相同，以提供固体产物。产率：52％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.27(s,1H),8.56(s,3H),8.39(d,J＝11.2Hz,3H),7.63(ddd,J＝145.2,64.6,11.9Hz,4H),3.38(s,2H),2.45(s,8H),2.25(s,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.85min，C22H24ClN5[M+H]+的MS ES-API计算值394.9，实测值393.2。
实施例8：制备(E)-1-(4-((2-(1,2-二氢苊-5-基)肼亚基)甲基)苯基)-1H-咪唑(8)
将(1,2-二氢苊-5-基)肼(1mmol)和4-(1H-咪唑-1-基)苯甲醛(1mmol)溶解在0.5ml DMSO中，加入10mg CH3COOH，在100℃下加热30min。然后冷却混合物，加入3ml MeOH和0.2g C-18色谱相，搅拌2h，过滤并蒸发溶剂。通过HPLC方法A纯化残余物。产率：36％。
使用方法1 LCMS Rt＝1.3min，C22H18N4[M+H]+的MS ES-API计算值338.1，实测值339.2。
实施例9：制备碘化(Z)-1-甲基-4-((2-(喹啉-4-基)亚肼基)甲基)吡啶-1-鎓(9)
向4-肼基喹啉(0.1mmol)在无水乙醇(20mL)和碘化4-甲酰基-1-甲基吡啶-1-鎓(0.1mmol)中的悬浮液中加入NEt3(0.97g，0.1mmol)。将反应混合物回流8h。减压蒸发溶液，通过HPLC纯化粗混合物。产率：41％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.13(s,1H),8.84(d,J＝6.4Hz,2H),8.49(s,1H),8.44(d,J＝8.4Hz,2H),8.34(d,J＝6.4Hz,2H),7.83–7.65(m,2H),7.52(d,J＝10.2Hz,2H),4.27(s,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.67min，C16H15N4[M+H]+的MS ES-API计算值263.1，实测值263.2。
实施例10：制备(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)硫代吗啉1,1-二氧化物(10)
将7-氟-4-肼基喹啉(1mmol)和4-((1,1-二氧化硫代吗啉代)甲基)苯甲醛(1mmol)溶解在0.5ml DMSO中，然后加入10mg CH3COOH，在100℃下加热30min。然后冷却反应混合物，加入3mL MeOH和0.2g C-18色谱相并搅拌混合物2h，过滤并蒸发溶剂。使用HPLC方法A纯化残余物。产率：43％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75-7.33(m,6H),3.72(m,2H),3.11-2.99(m,8H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.99min，C21H21FN4O2S[M+H]+的MS ES-API计算值413.5，实测值412.2。
实施例11：制备4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉盐酸盐(11)
步骤A：制备4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基苯甲醛
将4-氟-3-甲基苯甲醛(1mmol)和咪唑(1.3mmol)溶解在5mL无水DMSO中，加入K2CO3(3mmol)，在90℃下加热48h。然后冷却反应混合物，加入50mL水，搅拌1h，过滤并用水(3×25mL)洗涤。通过HPLC纯化粗目标化合物。产率：36％。
步骤B：制备4-肼基-6,7-二甲氧基喹啉
向4-氯-6,7-二甲氧基喹啉(1mmol)在无水二恶烷(10mL)中的悬浮液中加入水合肼(2.2mmol)。将反应混合物回流24h。蒸发溶剂，残余物用20mL iPrOH处理，得到黄色固体。通过HPLC纯化粗目标化合物。黄色固体。产率：44％。
步骤C：4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉HCl盐
将4-肼基-6,7-二甲氧基喹啉(1mmol)、4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基苯甲醛(1mmol)溶解在1mL DMSO中，然后加入10mg CH3COOH，在100℃下加热30min。然后冷却反应混合物，加入3mL MeOH、0.2g C-18色谱相和浓HCl(3mmol–二恶烷溶液)，搅拌2h，过滤并蒸发溶剂。使用HPLC方法A纯化残余物。产率：82％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.63(s,1H),13.48(s,1H),9.49(s,1H),9.23(s,1H),8.49(d,J＝6.6Hz,2H),8.09(s,1H),7.92(d,J＝12.3Hz,2H),7.84(d,J＝7.6Hz,1H),7.61(dd,J＝14.3,7.5Hz,2H),7.51(s,1H),4.06(s,3H),3.95(s,3H),2.29(s,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.766min，C22H21N5O2[M+H]+的MS ES-API计算值388.2，实测值387.19。
实施例12：制备4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-7-甲氧基喹啉(12)
步骤A：制备4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基苯甲醛：将4-氟-3-甲基苯甲醛(1mmol)和咪唑(1.3mmol)溶解在5mL无水DMSO中，加入K2CO3(3mmol)，在90℃下加热48h。然后冷却反应混合物，加入50mL水，搅拌1h，过滤并用水(3×25mL)洗涤。通过LC纯化粗目标化合物。黄色固体。产率：18％。
步骤B：制备4-肼基-7-甲氧基喹啉：向4-氯-7-甲氧基喹啉(1mmol)在无水二恶烷(10mL)中的悬浮液中加入水合肼(2.2mmol)。将反应混合物回流24h。蒸发溶剂，残余物用20mL iPrOH处理，得到黄色固体。通过HPLC纯化粗目标化合物。产率：54％。
步骤C：制备4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-7-甲氧基喹啉：将4-肼基-7-甲氧基喹啉(1mmol)和4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基苯甲醛(1mmol)溶解在1mL DMSO中，然后加入10mg CH3COOH，在100℃下加热30min。然后冷却反应混合物，加入3mL MeOH、0.2g C-18色谱相和浓HCl(3mmol–二恶烷溶液)，搅拌2h，过滤，蒸发。使用HPLC方法A纯化残余物。产率：87％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.62(s,1H),13.28(s,1H),9.47(s,1H),9.05(s,1H),8.97(d,J＝9.4Hz,1H),8.60(d,J＝7.0Hz,1H),8.08(s,1H),7.98(s,1H),7.93(d,J＝1.9Hz,1H),7.91(s,1H),7.66(d,J＝8.2Hz,1H),7.63(d,J＝6.9Hz,1H),7.50(d,J＝2.6Hz,1H),7.43(dd,J＝9.4,2.5Hz,1H),3.97(s,3H),2.30(s,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.75min，C21H19N5O[M+H]+的MS ES-API计算值358.4，实测值357.2。
实施例13：制备(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉磷酸盐(13)
步骤A：制备4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基苯甲醛
将4-氟-3-甲氧基苯甲醛(1mmol)和咪唑(1.3mmol)溶解在5mL无水DMSO中，加入K2CO3(3mmol)，在90℃下加热48h。然后冷却混合物，加入50ml水，搅拌混合物1h，过滤沉淀物并用水(3×25ml)洗涤。通过HPLC纯化粗目标4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基苯甲醛。产率：61％。
步骤B.制备4-肼基-6,7-二甲氧基喹啉
向4-氯-6,7-二甲氧基喹啉(1mmol)在无水二恶烷(10mL)中的悬浮液中加入水合肼(2.2mmol)。将反应混合物回流24h。蒸发溶剂，残余物用20mL iPrOH处理，得到黄色固体。通过LC纯化粗化合物。产率：59％。
步骤C：制备(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉磷酸盐
将4-肼基-6,7-二甲氧基喹啉(1mmol)和4-(1H-咪唑-1-基)甲氧基苯甲醛(1mmol)溶解在1ml DMSO中，加入10mg CH3COOH，在100℃下加热30min。然后冷却混合物，加入3mlMeOH、0.2g C-18色谱相和H3PO4(3mmol)，搅拌2h，过滤，蒸发。使用HPLC方法A纯化残余物。产率：72％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.11(s,1H),8.41(s,1H),8.41-7.07(m,10H),3.94(s,6H),3.9(s,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.89min，C22H21N5O3[M+H]+的MS ES-API计算值404.4，实测值403.2。
实施例14：制备(E)-4-(2-((6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)-7-氯喹啉HCl盐(14)
步骤A：将7-氯-4-肼基喹啉(1mmol)、6-(1H-咪唑-1-基)烟醛(1mmol)溶解在1mLDMSO中，加入10mg CH3COOH，在100℃下加热30min。然后冷却反应混合物，加入3mL MeOH、0.2g C-18色谱相和HCl(3mmol–二恶烷溶液)，搅拌2h，过滤，蒸发。使用HPLC方法A纯化残余物，得到固体产物。产率：72％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.69(s,1H),9.95(s,1H),9.11(d,J＝10.5Hz,2H),8.98(s,1H),8.68(dd,J＝29.1,7.8Hz,2H),8.49(s,1H),8.18(d,J＝10.5Hz,2H),7.88(s,1H),7.80(dd,J＝25.1,8.1Hz,2H),3.56(s,1H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.80min，C18H13ClN6[M+H]+的MS ES-API计算值349.8，实测值348.1。
实施例15：制备7-氯-4-(2-((6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)喹唑啉盐酸盐(15)
步骤A：制备6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)烟醛
将6-氟烟醛(1mmol)和4,5-二甲基-1H-咪唑(1.3mmol)溶解在5mL无水DMSO中，然后加入K2CO3(3mmol)，将混合物在90℃下加热48h。然后冷却反应混合物，加入50mL水，搅拌1h，过滤并用水(3×25mL)洗涤。通过从DMF/iPrOH(1/5)混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。黄色固体。产率：41％。
步骤B：制备7-氯-4-肼基喹唑啉
向4,7-二氯喹唑啉(1mmol)在无水THF(10mL)中的悬浮液中加入水合肼(1.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18h。在室温下部分蒸发溶剂，过滤形成的沉淀物并用冷THF洗涤，得到黄色固体。通过LC纯化粗目标化合物。黄色固体。产率：49％。
步骤C：制备(E)-7-氯-4-(2-((6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)喹唑啉
将6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)烟醛(1mmol)、7-氯-4-肼基喹唑啉(1mmol)溶解在1mL DMSO中，加入10mg CH3COOH，将混合物在100℃下加热30min。然后冷却混合物，加入3mL MeOH、0.2g C-18色谱相和浓HCl(3mmol–二恶烷溶液)，搅拌2h，过滤，蒸发。使用HPLC方法A纯化残余物，得到固体产物。产率：40％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.95(s,1H),9.10-7.23(m,9H),2.33(s,3H),2.12(s,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝1.05min，C19H16ClN7[M+H]+的MS ES-API计算值378.8，实测值377.1。
实施例16：制备7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(16)
步骤A：制备1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮
将1-(6-氯吡啶-3-基)乙-1-酮(1mmol)和4,5-二甲基-1H-咪唑(1.1mmol)在无水吡啶(10mL)中的溶液在90℃下加热12-15h。完成后，冷却反应混合物，加入50mL水，将混合物在室温下搅拌1h。过滤沉淀物，用水(3×25mL)洗涤并干燥。通过从DMF/iPrOH(1/1)混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。产率：54％。
步骤B：制备7-氯-4-肼基喹唑啉
向4,7-二氯喹唑啉(1mmol)在无水THF(10mL)中的悬浮液中加入水合肼(1.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18h。在室温下部分蒸发溶剂，过滤形成的沉淀物并用冷THF洗涤，得到黄色固体。通过HPLC纯化粗目标化合物。产率：49％。
步骤C：制备(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐
将1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮(1mmol)、7-氯-4-肼基喹唑啉(1mmol)溶解在1mL DMSO中，加入10mg CH3COOH，将混合物在100℃下加热30min。然后冷却混合物，加入3ml MeOH、0.2g C-18色谱相和H3PO4(2mmol)，搅拌2h，过滤并蒸发。使用HPLC方法A纯化残余物，得到固体。产率：40％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.73(s,1H),9.28 -7.38(m,8H),2.55(s,3H),2.33(s,3H),2.13(s,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝1.2min，C20H18ClN7[M+H]+的MS ES-API计算值392.9，实测值391.2。
实施例17：制备碘化(E)-1-(5-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓氢磷酸盐(17)
步骤A：制备碘化1-(5-乙酰吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓
将1-(6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮(1mmol)和MeI(20mmol)溶解在10mL无水甲苯中，混合物在搅拌下用回流冷凝器加热64h。然后冷却反应混合物，过滤并用甲苯(20ml)处理沉淀物，并在室温下搅拌2h。过滤沉淀物，用甲苯(3×20mL)洗涤并干燥。产率：58％。
步骤B：制备碘化(E)-1-(5-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐
将碘化1-(5-乙酰吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(1mmol)和7-氯-4-肼基喹唑啉(1mmol)溶解在1ml DMSO中，加入10mg CH3COOH，在100℃下加热30min。然后将混合物冷却并加入3ml MeOH，然后将混合物搅拌2h，过滤，蒸发。将残余物溶解在DMF/iPrOH(1/1)的混合物中，加入H3PO4(2mmol)，在50℃下搅拌2h，冷却，过滤，用iPrOH洗涤并干燥。产率：38％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.80(s,1H),10.09(s,1H),9.30(s,1H),8.83(d,J＝8.7Hz,1H),8.56(s,1H),8.27(d,J＝8.6Hz,1H),8.15–7.85(m,3H),7.61–7.35(m,2H),4.01(s,3H),2.69–2.52(m,4H)。
使用方法1 LCMS Rt＝1.0min，C19H18ClN7[M+H]+的MS ES-API计算值379，实测值379。
实施例18：制备(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(18)
步骤A：制备1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮
将1-(6-氯吡啶-3-基)乙-1-酮(1mmol)和2,4-二甲基-1H-咪唑(1.1mmol)溶解在5mL无水DMSO中，并加入K2CO3(3mmol)。将混合物在90℃下加热7天。然后冷却混合物，加入50mL水，将混合物在室温下搅拌2h。过滤形成的沉淀物，用水(3×25mL)洗涤并干燥。通过从DMF/iPrOH(1/5)混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。黄色固体。产率：42％。
步骤B：制备(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐
将1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮(1mmol)和7-氯-4-肼基喹唑啉(1mmol)溶解在1ml DMSO中。向该混合物中加入10mg CH3COOH，然后将混合物在100℃下加热1h。然后冷却混合物，加入3ml MeOH、0.2g C-18色谱相和H3PO4(2mmol)，在室温下搅拌2h。过滤沉淀物，蒸发剩余的溶液。使用HPLC方法A纯化残余物。产率：39％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.11(3H,s,CH3),2.59(6H,s,2CH3),(9.25-7.4,m,Ar),11.75(NH,s)。
使用方法1 LCMS Rt＝1.07min，C20H21ClN7O4P[M+H]+的MS ES-API计算值489.9，实测值391.2。
实施例19：制备(E)-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(19)
步骤A：制备4-肼基喹唑啉
向4-氯喹唑啉(2mmol)在无水THF(10mL)中的悬浮液中加入水合肼(2.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18h。在室温下蒸发，使溶剂体积减少一半。过滤形成的沉淀物并用冷THF洗涤，得到黄色固体。通过HPLC纯化粗目标化合物。产率：56％。
步骤B：制备1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮
将1-(6-氯吡啶-3-基)乙-1-酮(1mmol)和2,4-二甲基-1H-咪唑(1.1mmol)在无水吡啶(10mL)中的溶液在90℃下搅拌加热12-15h。冷却反应混合物，然后加入50mL水，将混合物在室温下搅拌1h。过滤沉淀物，用水(3×25mL)洗涤并干燥。通过从DMF/iPrOH(1/1)混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。产率：72％。
步骤C：制备(E)-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉
将1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮(1mmol)和4-肼基喹唑啉(1mmol)溶解在1mL DMSO中，加入10mg CH3COOH，将混合物在100℃下加热30min。然后将混合物冷却并加入3ml MeOH，搅拌2h，过滤，蒸发。使用HPLC方法A纯化残余物，得到固体产物。产率：46％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.40–10.19(m,3H),8.93(s,4H),8.36(d,J＝7.6Hz,4H),8.22(s,3H),7.85(s,4H),7.70–7.50(m,7H),7.42(s,5H),7.26(d,J＝13.6Hz,14H),7.03(s,3H),2.59(d,J＝25.1Hz,19H),2.27(d,J＝24.0Hz,10H),1.58(s,16H),1.23(s,8H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.97min，C20H19N7[M+H]+的MS ES-API计算值358.2，实测值358.2。
实施例20：制备7-氯-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(20)
步骤A：制备2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-4-胺
将2-溴吡啶-4-胺(1mmol)和N-甲基哌嗪(10mmol)在140℃下加热24h。然后蒸发反应混合物，用iPrOH(20mL)处理，并在室温下搅拌30min。过滤形成的沉淀物，用冷iPrOH(3×20mL)洗涤并干燥。通过HPLC纯化粗目标化合物。黄色固体。产率：22％。
步骤B：7-氯-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺
将2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-4-胺(1mmol)和4,7-二氯喹啉(1mmol)溶解在10mL无水乙酸中，并将混合物在90℃下加热48h。然后冷却反应混合物，过滤并蒸发溶剂。用iPrOH(20mL)处理残余物，并在室温下搅拌30min。过滤沉淀物，用冷iPrOH(3×20mL)洗涤并干燥。通过HPLC方法A纯化粗目标化合物，得到固体。产率：38％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.23(s,1H),8.62(d,J＝5.2Hz,1H),8.35(d,J＝9.0Hz,1H),8.01(d,J＝6.0Hz,1H),7.96(d,J＝2.3Hz,1H),7.62(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),7.31(d,J＝5.3Hz,1H),6.65(s,1H),3.44(t,J＝5.1Hz,4H),2.54(s,1H),2.39(t,J＝5.0Hz,4H),2.21(s,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.56min，C19H20N5Cl[M+H]+的MS ES-API计算值354.2，实测值354.2。
实施例21：制备(E)-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氟喹唑啉(21)
步骤A：制备7-氟-4-肼基喹唑啉
向化合物4-氯-7-氟喹唑啉(2mmol)在无水THF(10mL)中的悬浮液中加入水合肼(2.2mmol)，将反应混合物在室温下搅拌18h。在室温下部分蒸发溶剂，过滤形成的沉淀物并用冷THF洗涤，得到黄色固体。通过HPLC纯化粗目标化合物。产率：65％。
步骤B：制备1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮
将化合物1(2mmol)和2(2.2mmol)在无水吡啶(20mL)中的溶液在90℃下搅拌加热12-15h。冷却反应混合物，加入200mL水，将混合物在室温下搅拌1h。过滤沉淀物，用水(3×75mL)洗涤并干燥。通过从DMF/iPrOH(1/1)混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。产率：47％。
步骤C：制备(E)-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氟喹唑啉
将7-氟-4-肼基喹唑啉(1mmol)、1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮(1mmol)溶解在1mL DMSO中，加入10mg CH3COOH，在100℃下加热30min。然后将混合物冷却并加入3ml MeOH，搅拌2h，过滤沉淀物，蒸发溶剂。使用HPLC方法A纯化残余物。产率：41％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.78(s,1H),9.35(s,1H),8.75(d,J＝39.2Hz,2H),8.35(s,1H),7.86(d,J＝54.1Hz,2H),7.31(s,2H),2.57(d,J＝18.6Hz,3H),2.29(d,J＝44.0Hz,7H)。
使用方法1 LCMS Rt＝1.0min，C20H18FN7[M+H]+的MS ES-API计算值376.2，实测值376.2。
实施例22：制备7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹啉(22)
步骤A：制备1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮
将1-(6-氯吡啶-3-基)乙-1-酮(4mmol)和4,5-二甲基-1H-咪唑(4.4mmol)在无水吡啶(40mL)中的溶液在90℃下搅拌加热12-15h。冷却反应混合物，加入200mL水，将混合物在室温下搅拌1h。过滤沉淀物，用水(3×75mL)洗涤并干燥。通过从DMF/iPrOH(1/1)混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。产率：47％。
步骤B：制备7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹啉
将1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮(2mmol)和7-氯-4-肼基喹啉(2mmol)溶解在1mL DMSO中，加入20mg CH3COOH，在100℃下加热30min。然后将混合物冷却并加入7ml MeOH，将混合物搅拌2h，过滤，蒸发溶剂。使用HPLC纯化残余物。产率：39％。
步骤C：制备7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹啉磷酸盐
将7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹啉(1mmol)溶解在3ml/1ml MeOH/H3PO4中。将混合物搅拌2h，蒸发，并将残余物溶解在DMF/iPrOH(1/1)的混合物中，在50℃下搅拌2h，冷却，过滤，用iPrOH洗涤并干燥。产率：86％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.03(s,1H),8.44(t,J＝9.1Hz,2H),8.03(s,1H),7.64(d,J＝8.5Hz,2H),7.40(s,1H),7.07(s,1H),2.54(s,3H),2.31(s,3H),2.13(s,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.80min，C21H19ClN6[M+H]+的MS ES-API计算值391.1，实测值391.0。
实施例23：制备碘化1-(5-(1-(2-(7-氯喹啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(23)
步骤A：制备碘化1-(5-乙酰吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓
将1-(6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮(2mmol)和MeI(40mmol)溶解在10mL无水甲苯中，混合物在搅拌下用回流冷凝器加热64h。然后冷却反应混合物，过滤并用甲苯(20ml)处理沉淀物，并在室温下搅拌2h。过滤形成的沉淀物，用甲苯(3×20mL)洗涤并干燥。产率：41％。
步骤B：制备碘化1-(5-(1-(2-(7-氯喹啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓
将碘化1-(5-乙酰吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(1mmol)和7-氯-4-肼基喹啉(1mmol)溶解在1ml DMSO中，加入10mg CH3COOH，将混合物在100℃下加热30min。然后将混合物冷却并加入3ml MeOH，搅拌2h，过滤，蒸发溶剂。将残余物溶解在DMF/iPrOH(1/1)的混合物中，在50℃下搅拌2h，冷却，过滤，用iPrOH洗涤并干燥。产率：32％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.56–10.75(m,4H),10.07(s,3H),9.10(s,3H),8.57(dd,J＝61.4,21.8Hz,8H),8.16–7.91(m,6H),7.43(s,6H),3.99(s,9H),2.55(d,J＝13.5Hz,10H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.77min，C20H18ClN6[M+H]+的MS ES-API计算值377.2，实测值377.0。
实施例24：制备(E)-6-氯-1-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)酞嗪(24)
步骤A：制备6-氯酞嗪-1(2H)-酮
向化合物4-氯-2-甲酰基苯甲酸甲酯(4mmol)在MeOH(40mL)中的溶液中加入水合肼(2.2mmol)，并将反应混合物回流2h。蒸发溶剂，残余物通过HPLC纯化。产率：83％。
步骤B：制备1,6-二氯酞嗪
将6-氯酞嗪-1(2H)-酮(4mmol)与三氯氧磷(12mmol)在0℃下搅拌混合并加入NEt3(1mmol)。将混合物在室温下搅拌1h，然后在50℃下搅拌12h，冷却，然后加入50g冰。过滤形成的沉淀物，用水洗涤并干燥。产率：43％。
步骤C：制备6-氯-1-肼基酞嗪
向化合物1,6-二氯酞嗪(1mmol)在无水二恶烷(10ml)中的悬浮液中加入水合肼(1.1mmol)。将反应混合物回流24h。蒸发溶剂，残余物用20ml iPrOH处理，得到黄色固体。通过HPLC纯化粗目标化合物。产率：42％。
步骤D：制备1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮
将化合物1-(6-氯吡啶-3-基)乙-1-酮(1mmol)和2,4-二甲基-1H-咪唑(1mmol)在无水吡啶(10mL)中的溶液在90℃下搅拌加热12-15h。冷却反应混合物，加入50mL水，将混合物在室温下搅拌1h。过滤沉淀物，用水(3×25mL)洗涤并干燥。通过从DMF/iPrOH(1/1)混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。产率：48％。
步骤E：制备(E)-6-氯-1-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)酞嗪
将6-氯-1-肼基酞嗪(1mmol)、1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮(1mmol)溶解在1mL DMSO中，加入10mg CH3COOH，将混合物在100℃下加热30min。然后将混合物冷却并加入3ml MeOH，搅拌2h，过滤，蒸发。使用HPLC方法A纯化残余物，得到固体产物。产率：82％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.21(s,1H),9.22(s,1H),8.74(d,J＝6.6Hz,1H),8.37(d,J＝8.6Hz,1H),8.08(s,1H),7.88(s,1H),7.84–7.74(m,1H),7.57(d,J＝8.6Hz,1H),7.34(s,1H),2.53(d,J＝10.3Hz,4H),2.11(s,2H)。
使用方法1 LCMS Rt＝1.2min，C20H18ClN7[M+H]+的MS ES-API计算值392，实测值392。
实施例25：制备7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)喹唑啉-4-胺(25)
步骤A：制备2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-硝基吡啶
向2-氯-5-硝基吡啶(1mmol)和4,5-二甲基-1H-咪唑(1.3mmol)在无水DMSO(5mL)中的溶液中加入K2CO3(3mmol)并在90℃下加热5-7天。完成后，冷却反应混合物，加入50mL水，然后将混合物搅拌1h。过滤形成的沉淀物并用水(3×25mL)洗涤。通过从DMF:iPrOH(1:5)混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。产率：47％。
步骤B：制备6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-胺
向化合物2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-硝基吡啶(1mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中加入5％钯碳(10mg)，将混合物在氢气气氛下于室温搅拌10h。通过硅藻土过滤反应混合物。滤液在减压下浓缩并通过HPLC纯化。产率：69％。
步骤C：制备7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)喹唑啉-4-胺
将化合物6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-胺(1mmol)和化合物4,7-二氯喹唑啉(1mmol)溶解在10mL无水乙酸中，并将混合物在90℃下加热48h。完成后，冷却反应混合物，过滤并蒸发溶剂。用iPrOH(20mL)处理残余物，并在室温下搅拌30min。过滤沉淀物，用iPrOH(3×20mL)洗涤并干燥。通过HPLC方法A纯化粗目标化合物，得到固体。产率：27％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(s,1H),8.44(d,J＝8.8Hz,1H),8.32–8.22(m,2H),7.78(s,1H),7.55(s,1H),7.40(d,J＝9.2Hz,2H),3.13(s,1H),2.20(s,3H),2.07(s,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝1.0min，C18H15ClN6[M+H]+的MS ES-API计算值351.0，实测值351.0。
实施例26：制备(E)-1-(5-(1-(2-(7-氟喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(26)
步骤A：制备7-氟-4-肼基喹唑啉
向化合物4-氯-7-氟喹唑啉(2mmol)在无水THF(10mL)中的悬浮液中加入水合肼(2.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18h。在室温下蒸发溶剂，直至形成沉淀物。过滤沉淀物并用冷THF洗涤，得到黄色固体。通过LC纯化粗目标化合物。产率：65％。
步骤B：制备(E)-1-(5-(1-(2-(7-氟喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐
将7-氟-4-肼基喹唑啉(1mmol)和如实施例17中所述制备的碘化1-(5-乙酰吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(1mmol)溶解在1ml DMSO中，然后加入10mg CH3COOH，将混合物在100℃下加热30min。然后将混合物冷却并加入3ml/1ml MeOH/H3PO4，搅拌2h，过滤沉淀物，蒸发溶剂。用iPrOH(20mL)处理残余物，并在室温下搅拌30min。过滤沉淀物，用iPrOH(3×20mL)洗涤并干燥。产率：39％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.79(s,1H),10.07(s,1H),9.31(s,1H),8.83(d,J＝8.5Hz,1H),8.56(s,1H),8.43–8.24(m,1H),8.02(dd,J＝38.3,13.6Hz,3H),7.32(dd,J＝13.8,9.3Hz,2H),4.00(s,3H),2.71–2.55(m,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.97min，C19H18FN7[M+H]+的MS ES-API计算值363.2，实测值363.1。
实施例27：制备(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉HCl盐(27)
步骤A：制备1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮
将化合物1(1mmol)和2(1.1mmol)在无水吡啶(10mL)中的溶液在90℃下搅拌加热12-15h。冷却反应混合物，加入50mL水，将混合物在室温下搅拌1h。过滤形成的沉淀物，用水(3×25mL)洗涤并干燥。通过从DMF/iPrOH(1/1)混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。产率：48％。
步骤B：制备(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉HCl盐
将1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮(1mmol)、7-氯-4-肼基喹唑啉(如实施例15中制备，1mmol)溶解在1mL DMSO中，加入10mg CH3COOH，在100℃下加热30min。然后将混合物冷却并加入3ml/1ml MeOH/HCl，搅拌2h，过滤，蒸发。通过从DMF:iPrOH(1:5)混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。产率：48％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.81(s,1H),9.25(s,1H),8.74(d,J＝6.6Hz,1H),8.62(d,J＝8.6Hz,1H),8.08(s,1H),7.88(s,1H),7.84–7.74(m,1H),7.57(d,J＝8.6Hz,1H),7.34(s,1H),2.53(d,J＝10.3Hz,4H),2.11(s,2H)。
实施例28：制备7-氯-4-(2-(1-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(28)
步骤A：制备1-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)乙-1-酮
将1-(2-氟吡啶-4-基)乙-1-酮(1mmol)和4,5-二甲基-1H-咪唑(1.1mmol)在无水吡啶(10mL)中的溶液在90℃下搅拌加热12-15h。冷却反应混合物，加入50mL水，将混合物在室温下搅拌1h。过滤形成的沉淀物，用水(3×25mL)洗涤并干燥。通过从DMF/iPrOH(1/1)混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。产率：54％。
步骤B：制备7-氯-4-肼基喹唑啉
向4,7-二氯喹唑啉(2mmol)在无水THF(10mL)中的悬浮液中加入水合肼(2.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18h。在室温下蒸发溶剂，直至形成沉淀物。过滤沉淀物并用冷THF洗涤，得到黄色固体。通过HPLC纯化粗目标化合物。产率：67％。
步骤C：制备7-氯-4-(2-(1-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)亚乙基)肼基)喹唑啉
向7-氯-4-肼基喹唑啉(1mmol)和1-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)乙-1-酮(1mmol)在1ml DMSO中的溶液中加入10mg CH3COOH，并将反应混合物在100℃下加热30min。然后将混合物冷却并加入3ml MeOH，将混合物搅拌2h。过滤混合物并蒸发溶剂。使用HPLC方法A纯化残余物，得到固体产物。产率：46％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.79(s,1H),8.63(d,J＝5.1Hz,1H),8.31(d,J＝8.5Hz,1H),8.19(s,1H),8.08-7.91(m,3H),7.63-7.44(m,2H),2.57(s,3H),2.28(d,J＝12.4Hz,3H),2.12(d,J＝14.6Hz,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝3.0min，C20H18ClN7[M+H]+的MS ES-API计算值392.2，实测值392.2。
实施例29：制备1-(3-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(29)
步骤A：制备7-氯-4-肼基喹唑啉
向4,7-二氯喹唑啉(2mmol)在无水THF(10mL)中的悬浮液中加入水合肼(2.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18h。在室温下部分蒸发溶剂，直至形成沉淀物。过滤沉淀物并用冷THF洗涤，得到黄色固体。通过HPLC纯化粗目标化合物。产率：67％。
步骤B：制备1-(3-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)苯基)-N,N-二甲基甲胺
将7-氯-4-肼基喹唑啉(1mmol)和1-(3-((二甲氨基)甲基)苯基)乙-1-酮(1mmol)溶解在1ml DMSO中，然后加入10mg CH3COOH，将混合物在100℃下加热30min。然后将混合物冷却并加入3ml MeOH，搅拌2h，过滤，蒸发。使用HPLC方法A纯化残余物，得到固体产物。产率：42％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.46(s,1H),8.24(d,J＝8.5Hz,1H),8.01(d,J＝7.2Hz,1H),7.87(d,J＝9.8Hz,2H),7.41(ddd,J＝18.0,16.5,10.6Hz,4H),3.45(s,2H),2.17(s,6H)。
使用方法1 LCMS Rt＝2.7min，C19H20ClN5[M+H]+的MS ES-API计算值354.2，实测值354.4。
实施例30：制备7-氯-4-(2-(1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)亚乙基)肼基)喹唑啉(30)
步骤A：制备1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)乙-1-酮
将1-甲基哌嗪(1mmol)、DIPEA(1.3当量)和1-(3-溴苯基)乙-1-酮(1mmol)置于小瓶中，并溶解在无水DMSO(0.35mL)中。将反应混合物在室温下静置1h。然后在100℃下搅拌加热反应混合物12h。冷却至环境温度后，蒸发溶剂。将残余物溶解在DMSO中并过滤。对溶液进行HPLC纯化。产率：74％。
步骤B：制备7-氯-4-肼基喹唑啉
向4,7-二氯喹唑啉(2mmol)在无水THF(10mL)中的悬浮液中加入水合肼(2.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18h。在室温下部分蒸发溶剂，直至形成沉淀物。过滤沉淀物并用冷THF洗涤，得到黄色固体。通过HPLC纯化粗目标化合物。产率：51％。
步骤C：制备7-氯-4-(2-(1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)亚乙基)肼基)喹唑啉
将7-氯-4-肼基喹唑啉(1mmol)和1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)乙-1-酮(1mmol)溶解在1ml DMSO中，加入10mg CH3COOH，然后将混合物在100℃下加热30min。然后将混合物冷却并加入3ml MeOH，搅拌2h，过滤，蒸发。使用HPLC方法A纯化残余物，得到固体产物。产率：38％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.44(s,1H),8.23(d,J＝8.5Hz,1H),7.84(s,1H),7.62–7.38(m,4H),7.27(t,J＝7.9Hz,1H),7.00(d,J＝8.0Hz,1H),3.33(s,3H),2.23(s,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝1.11min，C21H23ClN6[M+H]+的MS ES-API计算值395.2，实测值395.2。
实施例31：制备6-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)酞嗪-1-胺磷酸盐(31)
步骤A：制备2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基-5-硝基吡啶
将2-氯-3-甲氧基-5-硝基吡啶(5mmol)和4,5-二甲基-1H-咪唑(6mmol)溶解在20mL无水DMSO中。向溶液中加入K2CO3(12mmol)，并将混合物在90℃下加热10天。然后冷却混合物，加入50mL水，然后将混合物搅拌1h。过滤形成的固体并用水(3×50mL)洗涤。通过从DMF/iPrOH(1/5)混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。产率：45％。
步骤B：制备6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-胺
向2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基-5-硝基吡啶(2mmol)在甲醇(12mL)中的溶液中加入5％钯碳(20mg)，将混合物在氢气气氛下于室温搅拌18h。通过硅藻土过滤反应混合物。滤液在减压下浓缩并随后通过HPLC纯化。产率：58％。
步骤C：制备6-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)酞嗪-1-胺磷酸盐
将6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-胺(1mmol)和1,6-二氯酞嗪(1mmol)溶解在12mL无水HOAc中，并将混合物在90℃下搅拌加热56h。然后冷却反应混合物，过滤并蒸发溶剂。用iPrOH(20mL)处理残余物，并在室温下搅拌30min。过滤形成的沉淀物，用iPrOH(3×20mL)洗涤并干燥。通过HPLC纯化粗目标化合物。然后将混合物冷却并加入3ml/1ml MeOH/H3PO4，将混合物搅拌2h。通过过滤分离沉淀物。产率：37％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.81–9.56(m,6H),9.21(s,5H),8.64(s,9H),8.48–8.02(m,16H),7.66(s,6H),3.85(s,18H),2.11(s,13H),2.01(s,14H)。
实施例32：制备(E)-4-(2-(1-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氯喹唑啉(32)
步骤A：7-氯-4-肼基喹唑啉
向4,7-二氯喹唑啉(1mmol)在无水THF(10mL)中的悬浮液中加入水合肼(1.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18h。在室温下部分蒸发溶剂，直至形成沉淀物。过滤沉淀物并用冷THF洗涤，得到黄色固体。通过HPLC纯化粗目标化合物。产率：57％。
步骤B：制备(E)-4-(2-(1-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氯喹唑啉
将1-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)乙-1-酮(1mmol)和7-氯-4-肼基喹唑啉(1mmol)溶解在1mL DMSO中，加入10mg CH3COOH，然后将反应混合物在100℃下加热50min。然后冷却混合物，加入3ml MeOH、0.2g C-18色谱相和浓HCl(3mmol–二恶烷溶液)，搅拌2h，过滤，蒸发。使用HPLC方法A纯化残余物，得到固体产物。产率：34％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),8.29(dd,J＝36.0,22.9Hz,4H),7.82(t,J＝10.9Hz,2H),7.66(d,J＝8.2Hz,1H),7.02(s,1H),6.89(d,J＝6.5Hz,1H),2.23(s,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝1.07min，C18H14ClN7[M+H]+的MS ES-API计算值365.1，实测值365.2。
实施例33：7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(33)
步骤A：制备2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基-5-硝基吡啶
将2-氯-3-甲氧基-5-硝基吡啶(4mmol)和4,5-二甲基-1H-咪唑(5mmol)溶解在15mL无水DMSO中，加入K2CO3(12mmol)，在90℃下加热7天。然后冷却混合物，加入50mL水。将混合物搅拌1h，过滤形成的沉淀并用水(3×50mL)洗涤。通过从DMF/iPrOH(1/5)混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。产率：61％。
步骤B：制备6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-胺
向2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基-5-硝基吡啶(2mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中加入5％钯碳(10mg)，将混合物在氢气气氛下于室温搅拌15h。通过硅藻土过滤反应混合物。滤液在减压下浓缩并随后通过HPLC纯化。产率：42％。
步骤C：制备7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐
将6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-胺(1mmol)和4-溴-7-氯异喹啉(1mmol)溶解在10mL无水HOAc中，并将混合物在90℃下搅拌加热48h。然后冷却反应混合物，过滤并蒸发溶剂。用iPrOH(20mL)处理残余物，并在室温下搅拌30min。过滤沉淀物，用iPrOH(3×20mL)洗涤并干燥。通过HPLC纯化粗目标化合物。然后冷却混合物，加入3ml/1mlMeOH/H3PO4，搅拌2h后，过滤形成的沉淀物，得到固体产物。产率：25％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.02(s,1H),8.85(s,1H),8.55(s,1H),8.29(s,1H),8.17(d,J＝9.1Hz,1H),7.84(d,J＝5.7Hz,2H),7.69(s,1H),7.26(s,1H),3.72(s,3H),2.08(s,3H),1.96(s,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.85min，C20H18ClN5O[M+H]+的MS ES-API计算值380.1，实测值380.0。
实施例34：制备N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺磷酸盐(34)
步骤A：制备N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺
将N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺(5mmol)和4,7-二氯喹唑啉(5mmol)溶解在15mL无水HOAc中，并将混合物在90℃下搅拌加热48h。然后冷却反应混合物，过滤并蒸发溶剂。用iPrOH(20mL)处理残余物，并在室温下搅拌30min。过滤沉淀物，用iPrOH(3×20mL)洗涤并干燥。产率：81％。
步骤B：N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺磷酸盐
将N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺(1mmol)溶解在3ml/1ml MeOH/H3PO4中，然后将混合物冷却并搅拌2h，过滤。产率：87％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6+CCl4)δ10.11(s,1H),9.14(s,1H),8.99(s,1H),8.60(t,J＝10.9Hz,3H),8.06(s,1H),7.95–7.43(m,4H)。
使用方法1 LCMS Rt＝2.3min，C15H10ClN7[M+H]+的MS ES-API计算值324.1，实测值324.2。
实施例35：制备(E)-7-氯-4-(2-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)喹啉HCl盐
步骤A：制备(E)-7-氯-4-(2-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)喹啉
将3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)苯甲醛(4mmol)、7-氯-4-肼基喹啉(如实施例15中所述制备，4mmol)溶解在2mL DMSO中，加入10mg CH3COOH，在100℃下加热50min。然后冷却混合物，加入3ml MeOH、0.2g C-18色谱相和浓HCl(3mmol–二恶烷溶液)，搅拌2h，过滤，蒸发。通过HPLC方法A纯化粗目标化合物。产率：36％。
步骤B：制备(E)-7-氯-4-(2-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)喹啉HCl盐
将(E)-7-氯-4-(2-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)喹啉(1mmol)溶解在3ml/1ml MeOH/HCL中。将混合物搅拌2h，蒸发，使用HPLC纯化残余物。产率：89％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.45(s,1H),8.44(dd,J＝51.7,42.5Hz,3H),8.11(s,1H),7.68(ddd,J＝226.9,102.2,69.4Hz,7H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.84min，C19H13ClFN5[M+H]+的MS ES-API计算值366.1，实测值366.0。
实施例36：制备7-氯-N-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(37)
步骤A：制备2-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-硝基吡啶
将2-氯-5-硝基吡啶(1mmol)和2,4-二甲基-1H-咪唑(1.3mmol)溶解在5mL无水DMSO中，并加入K2CO3(3mmol)。然后将混合物在90℃下加热7天。冷却混合物，然后加入25mL水，将混合物搅拌1h。过滤形成的沉淀物并用水(3×25mL)洗涤。通过从DMF/iPrOH(1/5)混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。产率：64％。
步骤B：制备6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-胺
向2-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-硝基吡啶(1mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中加入5％钯碳(10mg)，将混合物在氢气气氛下于室温搅拌10h。通过硅藻土过滤反应混合物。滤液在减压下浓缩并通过LC纯化。产率：69％。
步骤C：7-氯-N-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐
将6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-胺(1mmol)、K2CO3(2mmol)和4-溴-7-氯异喹啉(1mmol)溶解在10mL无水二恶烷中，加入Pddppf(5mol％)，并将混合物在90℃下搅拌加热48h。然后冷却反应混合物，过滤并蒸发溶剂。用iPrOH(20mL)处理残余物，并在室温下搅拌30min。过滤沉淀物，用iPrOH(3×20mL)洗涤并干燥。然后冷却混合物，加入3ml MeOH、0.2g C-18色谱相和H3PO4(2mmol)，搅拌2h，过滤，蒸发。使用HPLC方法A纯化残余物。产率：27％。
使用方法1 LCMS Rt＝2.6min，C19H15N5Cl[M+H]+的MS ES-API计算值350.1，实测值350.2。
实施例37：5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)-2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-醇磷酸盐(40)
步骤A：制备2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基-5-硝基吡啶
将4,5-二甲基-1H-咪唑(5mmol)和2-氯-3-甲氧基-5-硝基吡啶(6mmol)溶解在20mL无水DMSO中，加入K2CO3(12mmol)，然后将混合物在90℃下加热10天。然后冷却混合物，加入50mL水，将混合物搅拌1h。过滤残余物并用水(3×50mL)洗涤。通过从DMF/iPrOH(1/5)混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。产率：45％。
步骤B：制备2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-硝基吡啶-3-醇
将2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基-5-硝基吡啶(5mmol)溶解在20mlCH2Cl2中，加入BBr3(20mmol)，将混合物在40℃下加热48h。然后冷却混合物，蒸发溶剂，通过使用HPLC纯化残余物。产率：55％。
步骤C：制备5-氨基-2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-醇
向2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-硝基吡啶-3-醇(2mmol)在甲醇(12mL)中的溶液中加入5％钯碳(20mg)，将混合物在氢气气氛下于室温搅拌18h。通过硅藻土过滤反应混合物。滤液在减压下浓缩，并随后通过HPLC纯化所得沉淀物。产率：58％。
步骤D：5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)-2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-醇磷酸盐
将5-氨基-2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-醇(1mmol)和4,7-二氯喹唑啉(1mmol)溶解在12mL无水HOAc中，并将混合物在90℃下搅拌加热56h。然后冷却反应混合物，过滤并蒸发溶剂。用iPrOH(20mL)处理残余物，并在室温下搅拌30min。过滤沉淀物，用iPrOH(3×20mL)洗涤并干燥。通过HPLC方法A纯化粗目标化合物。然后将混合物冷却并加入3ml/1ml MeOH/H3PO4，搅拌2h。过滤所得沉淀物。产率：37％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H),8.75–8.54(m,2H),8.48(s,1H),8.19(s,1H),7.89(d,J＝1.9Hz,1H),7.77(d,J＝8.9Hz,1H),7.60(s,1H),2.07(d,J＝22.4Hz,6H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.92min，C18H15ClN6O[M+H]+的MS ES-API计算值367.1，实测值367.2。
实施例38：制备N-(6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺(41)
将4,7-二氯喹唑啉(1mmol)和6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-胺(1.1mmol)在无水吡啶(10mL)中的溶液在90℃下加热15h。完成后，冷却反应混合物，加入50mL水，将混合物在室温下搅拌1h。过滤沉淀物，用水(3×25mL)洗涤并干燥。通过从DMF:iPrOH的1:1混合物中重结晶来纯化粗目标化合物。产率：33％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.30(s,1H),10.01(s,1H),9.20(d,J＝9.0Hz,1H),9.10(d,J＝2.5Hz,1H),8.98(s,1H),8.62(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),8.50(s,1H),8.20(d,J＝8.8Hz,1H),8.10(d,J＝2.2Hz,1H),7.95(s,1H),7.93(d,J＝2.2Hz,1H),1.91(s,1H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.81min，C16H11N6Cl[M+H]+的MS ES-API计算值323.1，实测值323.0。
实施例39：制备7-氯-N-(3-((二乙氨基)甲基)苯基)喹啉-4-胺(42)
将3-((二乙氨基)甲基)苯胺(1mmol)和4,7-二氯喹啉(1mmol)溶解在10mL无水HOAc中，并将混合物在90℃下加热48h。冷却反应混合物，过滤并蒸发溶剂。用iPrOH(20mL)处理残余物，并在室温下搅拌30min。过滤沉淀物，用冷iPrOH(3×20mL)洗涤并干燥。通过HPLC方法A纯化粗目标化合物，得到固体。产率：31％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.02(s,1H),8.85(s,1H),8.55(s,1H),8.29(s,1H),8.17(d,J＝9.1Hz,1H),7.84(d,J＝5.7Hz,2H),7.69(s,1H),7.26(s,1H),3.72(s,3H),2.08(s,3H),1.96(s,3H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.7min，C20H21N3Cl[M+H]+的MS ES-API计算值340.0，实测值340.0。
实施例40：制备碘化1-(5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(43)
步骤A：制备碘化3-甲基-1-(5-硝基吡啶-2-基)-1H-咪唑-3-鎓
将2-(1H-咪唑-1-基)-5-硝基吡啶(1mmol)和MeI(20mmol)溶解在10mL无水甲苯中，混合物用回流冷凝器加热64h。冷却反应混合物，过滤并用甲苯(20mL)处理所得沉淀物，并在室温下搅拌2h。过滤沉淀物，用甲苯(3×20mL)洗涤并干燥。黄色固体。产率：61％。
步骤B：制备碘化1-(5-氨基吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓
向碘化3-甲基-1-(5-硝基吡啶-2-基)-1H-咪唑-3-鎓(1mmol)在甲醇(10mL)中的溶液中加入5％钯碳(10mg)，将混合物在氢气气氛下于室温搅拌10h。通过硅藻土过滤反应混合物。滤液在减压下浓缩，不经纯化用于下一步。产率：76％。
步骤C：制备碘化1-(5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐
将碘化1-(5-氨基吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(1mmol)和4,7-二氯喹唑啉(1mmol)溶解在10mL无水NMP中，并将混合物在120℃下加热24h。完成后，冷却反应混合物，过滤并加入20mL iPrOH。用iPrOH(20mL)和H3PO4(1mmol)处理残余物，并在室温下搅拌30min。过滤沉淀物，用iPrOH(3×20mL)洗涤并干燥。通过HPLC方法A纯化粗目标化合物，得到固体。产率：37％。
1H NMR(400MHz,D2O)δ9.45(s,1H),8.71(d,J＝2.5Hz,1H),8.64(s,1H),8.33(d,J＝9.0Hz,1H),8.27(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),8.05(d,J＝2.1Hz,1H),7.83(d,J＝2.0Hz,1H),7.81–7.71(m,3H),7.53(s,1H),3.90(s,3H)。
使用方法A LCMS Rt＝0.825min，C17H14N6Cl[M+H]+的MS ES-API计算值338.1，实测值338.0。
实施例41：制备N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹啉-4-胺(44)
将4,7-二氯喹啉(1mmol)和6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-胺(1mmol)溶解在10mL无水HOAc中，并将混合物在90℃下加热48h。完成后，冷却反应混合物，过滤并蒸发溶剂。用iPrOH(20mL)处理残余物，并在室温下搅拌30min。过滤沉淀物，用冷iPrOH(3×20mL)洗涤并干燥。通过HPLC方法A纯化粗目标化合物，得到固体产物。产率：39％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(s,1H),9.35(s,1H),8.56(dd,J＝8.8,4.1Hz,2H),8.44(d,J＝9.0Hz,1H),8.31(s,1H),8.08(dd,J＝8.8,2.7Hz,1H),8.01–7.87(m,2H),7.66(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),7.04(d,J＝5.5Hz,1H)。
使用方法1 LCMS Rt＝0.88min，C16H11N6Cl[M+H]+的MS ES-API计算值323.1，实测值323.2。
实施例42：制备7-氯-N-(2-((二甲氨基)甲基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(45)
将4,7-二氯喹啉(1mmol)和2-((二甲氨基)甲基)吡啶-4-胺(1mmol)溶解在10mL无水HOAc中，并将混合物在90℃下加热48h。完成后，冷却反应混合物，过滤并蒸发溶剂。用iPrOH(20mL)处理残余物，并在室温下搅拌30min。过滤沉淀物，用冷iPrOH(3×20mL)洗涤并干燥。通过HPLC方法A纯化粗目标化合物，得到固体。产率：22％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.43(s,1H),8.68(d,J＝5.1Hz,1H),8.34(dd,J＝18.2,7.2Hz,2H),7.99(d,J＝2.3Hz,1H),7.64(dd,J＝9.1,2.3Hz,1H),7.45–7.28(m,2H),7.18(d,J＝5.2Hz,1H),3.48(s,2H),2.21(s,6H)。
使用方法1 LCMS Rt＝1.4min，C17H17N4Cl[M+H]+的MS ES-API计算值313.1，实测值313.2。
生物学实施例
提出以下实施例是为了向本领域普通技术人员提供如何进行和使用本公开的完整公开和描述，这些实施例并不旨在限制发明人视为其发明的范围，也不旨在表示以下实验是所进行的全部或唯一实验。已尽力确保所用数字的准确性，但应考虑一些实验误差和偏差。除非另有说明，份是重量份，分子量是重均分子量，温度是摄氏度，压力是大气压或接近大气压。
实施例43：GBAP与肝素(一种HS-GAG)结合的通用检测
如所述制备与牛血清白蛋白缀合的猪肠粘膜肝素(肝素-BSA)(Najjam,S.等人1997,Cytokine 12,1013-1022)。肝素是一种硫酸化的HS-GAG，通常在生化和结合检测中用作HS-GAG(Lindahl,U.和Kjellen,L.(2013)，同上)。将0.01mg/ml肝素-BSA的磷酸盐缓冲盐水溶液(PBS；pH 7.4)加入到96孔聚苯乙烯ELISA平板(NUNC Cat.No.449824；每孔100μl)中并在4℃下孵育过夜(ON)。对于阴性对照，使用相同的步骤用BSA而不是肝素-BSA包被ELISA平板。孵育后，用去离子水和PBS(pH 7.4)通过浸泡连续洗涤平板。然后在室温(RT)下用脱脂乳(2％，每孔200μl)封闭ELISA平板2小时，并轻轻震荡。封闭后，先用去离子水然后用PBS(pH 7.4)洗涤平板。将GBAP以所需浓度溶解并稀释在PBS(pH 6.5，补充有0.1％ BSA)中，加入到含有固定化肝素-BSA的ELISA平板中(每孔100μl)，并在室温下轻轻震荡孵育2h。孵育后，用去离子水洗涤平板，并用PBS(pH 6.5)和吐温洗涤三次。通过针对GBAP具有特异性的单克隆抗体检测结合的GBAP，随后与缀合辣根过氧化物酶(HRP)的第二抗体一起孵育。抗体在PBS(pH 6.5，补充有1％ BSA)中稀释。每次与抗体孵育后，用去离子水洗涤平板，并用含0.1％吐温的PBS(pH 6.5)洗涤缓冲液洗涤三次。将过氧化物酶底物色原体、TMB(DakoCat.No.S1599)添加到ELISA平板中(每孔100μl)并在室温下孵育。5分钟后，加入ELISA终止溶液(1N盐酸、3N硫酸)(每孔100μl)以终止过氧化物酶催化的比色反应。使用ELISA酶标仪(BioTek Synergy H1)在450nm处测量样品的光密度。显色后，测定与对照(BSA包被的平板)相比的抑制百分比。使用GraphPad Prism软件计算IC-50。
实施例44：评估作为Abeta40和Abeta42与肝素(HS-GAG)结合的抑制剂的化合物。
如实施例43所述进行检测，但有以下修改。在用肝素-BSA包被平板后，如所述洗涤平板。将化合物以10mM的终浓度溶解在DMSO中，并在检测前进一步稀释。筛选孔中的DMSO浓度高达2％。将单个化合物与β-淀粉样肽在含有固定化肝素的平板上共孵育。β-淀粉样蛋白(1-42)购自rPeptide(Cat.No.A1163)并用于根据Stine等人，2003(J Biol Chem.278(13):11612-22)如下所述制备寡聚体。将经1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇(HFIP；SigmaCat.No.105228)处理的β淀粉样蛋白(1-42)溶解在无水DMSO(Sigma Cat.No.D2650)中至5mM浓度。然后将溶解的β淀粉样蛋白(1-42)在冰冷的细胞培养基(不含酚红的Ham’s F-12；Caisson Labs，Cat.No.HFL05)中稀释至100μM，随后立即涡旋30秒，并在4℃下孵育24h。将所得β淀粉样蛋白(1-42)寡聚体在4℃下以12,000rpm离心10min以去除聚集体。然后将寡聚体快速冷冻并以等分试样保存在-80℃下。将来自rPeptide(Cat No.A1153)的β-淀粉样蛋白(1-40)溶解在DMSO中，快速冷冻并以等分试样在-80℃下保存。将在PBS(pH 6.5，补充有BSA，0.1％)中稀释的β-淀粉样蛋白(1-42)寡聚体或β-淀粉样蛋白(1-40)加入ELISA平板(每孔100μl)中，并在室温下轻轻震荡孵育2h。孵育后，用去离子水洗涤平板，并用PBS(pH6.5)和吐温洗涤三次。通过抗β-淀粉样蛋白单克隆抗体4G8(生物素化，BioLegendCat.No.800705)，随后通过链霉亲和素-HRP(辣根过氧化物酶，R&D System，Cat No.DY998)检测结合的β-淀粉样蛋白(1-42)。通过抗β-淀粉样蛋白单克隆抗体6E10(BiolegendCat.No.803001)，随后通过与HRP缀合的第二抗IgG抗体(R&D System,Cat.No.HAF007)检测结合的Abeta40。如实施例43所述，用TMB显色后，用ELISA酶标仪在450nm处测量样品的光密度。显色后，测定每种化合物与对照(无化合物，DMSO对照)相比的抑制百分比。
结果：化合物抑制Abeta(1-40)和Abeta(1-42)寡聚体与肝素(HS-GAG)的结合。如实施例43中所述，肝素-BSA缀合物形式的肝素被用作HS-GAG的来源。抑制剂化合物列表如表2所示。对于每种化合物，β-淀粉样蛋白-肝素-BSA结合检测中的IC-50值以μM(微摩尔)表示。在某些情况下，未测量IC-50，而是显示了30μM浓度下化合物的抑制百分比。为了简单起见，没有示出标准偏差；对于所示的任何IC-50值，变异系数不超过30％。所有检测都在96孔板中一式两份进行，并且实验至少重复两次。在表2中，使用了以下缩写：A：在30μM浓度下抑制>30％的化合物；B：在30μM浓度下抑制<30％的化合物；NT：未获得抑制曲线的化合物。
表2.化合物对淀粉样蛋白-β(1-42)寡聚体和淀粉样蛋白-β(1-40)与肝素(HS-GAG)和纯化的人脑膜的结合的抑制。
A：在30μM浓度下抑制>30％的化合物。
B：在30μM浓度下抑制<30％的化合物。
NT：未检测
实施例45：评估作为α-突触核蛋白与肝素(HS-GAG)结合的抑制剂的化合物。
如实施例43所述进行检测，但有以下修改。在用肝素-BSA包被平板后，如所述洗涤平板。将化合物以10mM的终浓度溶解在DMSO中，并在检测前进一步稀释。筛选孔中的DMSO浓度高达2％。将单个化合物与α-突触核蛋白在含有固定化肝素的平板上共孵育。购自rPeptide(Cat.No.S1001)的α-突触核蛋白用于制备原纤维，如Ihse等人,2017所述。将α-突触核蛋白溶解在PBS(pH 7.4)中至浓度为140μM(约2mg/ml)，并在37℃下旋转搅拌(400rpm)孵育7天。所得原纤维蛋白在超声波水浴中超声处理10min，快速冷冻并以等分试样在-80℃下保存。将在PBS(pH 6.5，补充有BSA，0.1％)中稀释的原纤维α-突触核蛋白加入ELISA平板(每孔100μl)中，并在室温下轻轻震荡孵育2h。孵育后，用去离子水洗涤平板，并用PBS(pH6.5)和吐温洗涤三次。通过抗α-突触核蛋白单克隆抗体211(Santa Cruz Cat.No.sc-12767)，随后通过与HRP缀合的第二抗IgG抗体(R&D System,Cat.No.HAF007)检测结合的α-突触核蛋白。如实施例43所述，用TMB显色后，用ELISA酶标仪在450nm处测量样品的光密度。显色后，测定每种化合物与对照(无化合物，DMSO对照)相比的抑制百分比。
结果：化合物抑制α-突触核蛋白原纤维与HS-GAG的结合。图1显示了抑制剂化合物22和24的抑制曲线实例。如实施例43中所述，肝素-BSA缀合物形式的肝素被用作HS-GAG的来源。抑制剂化合物列表如表3所示。对于每种化合物，α-突触核蛋白原纤维-肝素-BSA结合检测中的IC-50值以μM(微摩尔)表示。在某些情况下，未测量IC-50，而是显示了30μM浓度下化合物的抑制百分比。为了简单起见，没有示出标准偏差；对于所示的任何IC-50值，变异系数不超过30％。所有检测都在96孔板中一式两份进行，并且实验至少重复两次。在表3中，使用了以下缩写：A：在30μM浓度下抑制>30％的化合物；B：在30μM浓度下抑制<30％的化合物；NT：未获得抑制曲线的化合物。
实施例46.评估作为Tau与肝素(HS-GAG)结合的抑制剂的化合物。
如实施例43所述进行检测，但有以下修改。在用肝素-BSA包被平板后，如所述洗涤平板。将化合物以10mM的终浓度溶解在DMSO中，并在检测前进一步稀释。筛选孔中的DMSO浓度高达2％。将单个化合物与Tau在含有固定化肝素的平板上共孵育。将购自rPeptide(CatNo.T1001)的Tau溶解在DMSO(Sigma Cat.No.D2650)中，快速冷冻并以等分试样在-80℃下保存。将溶解在PBS(pH 6.5，补充有BSA，0.1％)中的Tau加入ELISA平板(每孔100μl)中，并在室温下轻轻震荡孵育2h。孵育后，用去离子水洗涤平板，并用PBS(pH 6.5)和吐温洗涤三次。通过抗Tau单克隆抗体D-8(Santa Cruz Cat.No.sc-166060)，随后通过与HRP缀合的第二抗IgG抗体(R&D System,Cat.No.HAF007)检测结合的Tau。如实施例43所述，用TMB显色后，用ELISA酶标仪在450nm处测量样品的光密度。显色后，测定每种化合物与对照(无化合物，DMSO对照)相比的抑制百分比。
表3.化合物对α-突触核蛋白原纤维与肝素(HS-GAG)和纯化的人脑膜的结合的抑制。
A：在30μM浓度下抑制>30％的化合物。
B：在30μM浓度下抑制<30％的化合物。
NT：未检测
结果：化合物抑制Tau与HS-GAG的结合。图3显示了抑制剂化合物3和6的抑制曲线实例。如实施例43中所述，肝素-BSA缀合物形式的肝素被用作HS-GAG的来源。抑制剂化合物列表如表4所示。对于每种化合物，Tau-肝素-BSA结合检测中的IC-50值以μM(微摩尔)表示。在某些情况下，未测量IC-50，而是显示了30μM浓度下化合物的抑制百分比。为了简单起见，没有示出标准偏差；对于所示的任何IC-50值，变异系数不超过30％。所有检测都在96孔板中一式两份进行，并且实验至少重复两次。在表4中，使用了以下缩写：A：在30μM浓度下抑制>30％的化合物；B：在30μM浓度下抑制<30％的化合物；NT：未获得抑制曲线的化合物。
表4.化合物对Tau与肝素(HS-GAG)和纯化的人脑膜的结合的抑制。
A：在30μM浓度下抑制>30％的化合物。
B：在30μM浓度下抑制<30％的化合物。
NT：未检测
实施例47.评估作为TDP-43与肝素(HS-GAG)结合的抑制剂的化合物。
如实施例43所述进行检测，但有以下修改。在用肝素-BSA包被平板后，如所述洗涤平板。将化合物以10mM的终浓度溶解在DMSO中，并在检测前进一步稀释。筛选孔中的DMSO浓度高达2％。将单个化合物与TDP-43在含有固定化肝素的平板上共孵育。将来自R&D System的TDP43(Cat.No.AP-190)快速冷冻并以等分试样保存在-80℃下。将溶解在PBS(pH 6.5，补充有BSA，0.1％)中的TDP-43加入到ELISA平板(每孔100μl)中，并在室温下轻轻震荡孵育2h。孵育后，用去离子水洗涤平板，并用PBS(pH 6.5)和吐温洗涤三次。通过抗TDP-43单克隆抗体(R&D System Cat.No.MAB7778)，随后通过与HRP缀合的第二抗IgG抗体(R&D System,Cat.No.HAF007)检测结合的TDP-43。如实施例43所述，用TMB显色后，用ELISA酶标仪在450nm处测量样品的光密度。显色后，测定每种化合物与对照(无化合物，DMSO对照)相比的抑制百分比。
结果：化合物抑制TDP-43与HS-GAG的结合。如实施例43中所述，肝素-BSA缀合物形式的肝素被用作HS-GAG的来源。抑制剂化合物列表如上表5所示。对于每种化合物，TDP-43-肝素-BSA结合检测中的IC-50值以μM(微摩尔)表示。在某些情况下，未测量IC-50，而是显示了30μM浓度下化合物的抑制百分比。为了简单起见，没有示出标准偏差；对于所示的任何IC-50值，变异系数不超过30％。所有检测都在96孔板中一式两份进行，并且实验至少重复两次。在表中，使用了以下缩写：A：在30μM浓度下抑制>30％的化合物；B：在30μM浓度下抑制<30％的化合物；NT：未获得抑制曲线的化合物。
表5.化合物对TDP-43与肝素(HS-GAG)和纯化的人脑膜的结合的抑制。
A：在30μM浓度下抑制>30％的化合物。
B：在30μM浓度下抑制<30％的化合物。
NT：未检测
实施例48：评估作为SAA与肝素(HS-GAG)结合的抑制剂的化合物。
如实施例43所述进行检测，但有以下修改。在用肝素-BSA包被平板后，如所述洗涤平板。将化合物以10mM的终浓度溶解在DMSO中，并在检测前进一步稀释。筛选孔中的DMSO浓度高达2％。将单个化合物与SAA在含有固定化肝素的平板上共孵育。将来自PeProtech(NJ，美国，Cat.No.300-53)的血清淀粉样蛋白A(SAA)溶解在DMSO中，快速冷冻并以等分试样在-80℃下保存。将溶解在Tris缓冲液(pH 6.5，补充有BSA，0.1％)中的SAA加入ELISA平板(每孔100μl)中，并在室温下轻轻震荡孵育2h。孵育后，用去离子水洗涤平板，并用Tris缓冲盐水(TBS，pH 6.5)和吐温洗涤三次。通过抗SAA单克隆抗体(R&D System Cat.No.MAB30192)，随后通过与HRP缀合的第二抗IgG抗体(R&D System,Cat.No.HAF007)检测结合的SAA。抗体在TBS抗体缓冲液(pH 6.5，补充有1％ BSA)中稀释。每次与抗体孵育后，用去离子水洗涤平板，并用含0.1％吐温的TBS(pH 6.5)洗涤缓冲液洗涤三次。如实施例43所述，用TMB显色后，用ELISA酶标仪在450nm处测量样品的光密度。显色后，测定每种化合物与对照(无化合物，DMSO对照)相比的抑制百分比。
结果：化合物抑制SAA与HS-GAG的结合。如实施例43中所述，肝素-BSA缀合物形式的肝素被用作HS-GAG的来源。抑制剂化合物列表如表6所示。对于每种化合物，SAA-肝素-BSA结合检测中的IC-50值以μM(微摩尔)表示。在某些情况下，未测量IC-50，而是显示了30μM浓度下化合物的抑制百分比。为了简单起见，没有示出标准偏差；对于所示的任何IC-50值，变异系数不超过30％。所有检测都在96孔板中一式三份进行，并且实验至少重复两次。在表中，使用了以下缩写：A：在30μM浓度下抑制>30％的化合物；B：在30μM浓度下抑制<30％的化合物；NT：未获得抑制曲线的化合物。
表6.化合物对SAA与肝素(HS-GAG)和纯化的人脑膜的结合的抑制。
A：在30μM浓度下抑制>30％的化合物。
B：在30μM浓度下抑制<30％的化合物。
NT：未检测
实施例49.GBAP与人脑细胞膜结合的通用检测
如下通过差速离心制备纯化的人脑细胞膜。将5g冷冻的人脑死后组织(获自Kentucky大学阿尔茨海默病中心组织库)在50ml HEPES缓冲蔗糖(0.32M蔗糖，4mM HEPESpH7.4，蛋白酶抑制剂)中用电机驱动的玻璃-聚四氟乙烯匀浆器匀浆。通过在4℃下以1,000×g离心匀浆10min除去核和细胞碎片后，将核后上清液以100,000×g离心30min以产生粗膜沉淀。将粗膜沉淀重悬于0.32M蔗糖中，然后再次以100,000×g离心30min以产生洗涤的膜沉淀。将膜沉淀重悬于无菌PBS(ph 7.4)中，快速冷冻，并以等分试样在-80℃下保存。这种制剂含有人脑细胞膜。用BCA蛋白检测试剂盒(Pierce Cat.No.23227)测定蛋白浓度。将纯化的脑膜在PBS(pH 7.4)中稀释至0.01mg/ml，然后加入96孔聚苯乙烯ELISA平板(NUNCCat.No.449824；每孔100μl)中。平板在4℃下孵育过夜(ON)。孵育后，用去离子水和PBS(pH7.4)通过浸泡连续洗涤平板。然后在室温(RT)下用脱脂乳(2％，每孔200μl)封闭ELISA平板2h。封闭后，先用去离子水然后用PBS(pH 7.4)洗涤平板。将GBAP以所需浓度溶解并稀释在PBS(pH 6.5，补充有0.1％ BSA)中，加入到用脑膜包被的ELISA平板中(每孔100μl)，并在室温下轻轻震荡孵育2h。孵育后，用去离子水洗涤平板，并用PBS(pH 6.5)和吐温洗涤三次。通过针对GBAP具有特异性的单克隆抗体，随后通过与缀合辣根过氧化物酶(HRP)的第二抗体一起孵育来检测结合的GBAP。抗体在PBS(pH 6.5，补充有1％ BSA)中稀释。每次与抗体孵育后，用去离子水洗涤平板，并用含0.1％吐温的PBS(pH 6.5)洗涤缓冲液洗涤三次。将过氧化物酶底物色原体、TMB(Dako Cat.No.S1599)添加到ELISA平板中(每孔100μl)并在室温下孵育。5分钟后，加入ELISA终止溶液(1N盐酸、3N硫酸)(每孔100μl)以终止过氧化物酶催化的比色反应。使用ELISA酶标仪(BioTek Synergy H1)在450nm处测量样品的光密度。显色后，测定与对照相比的抑制百分比。使用GraphPad Prism软件计算IC-50。
实施例50：评估作为Abeta40和Abeta42与人脑细胞膜结合的抑制剂的化合物。
如实施例49所述进行检测，但有以下修改。在用纯化的人脑细胞膜包被平板后，如所述洗涤平板。将化合物以10mM的终浓度溶解在DMSO中，并在检测前进一步稀释。筛选孔中的DMSO浓度高达2％。将单个化合物与β-淀粉样肽在用纯化的人脑细胞膜包被的平板上共孵育。如实施例2所述制备β-淀粉样蛋白(1-42)寡聚体。将来自rPeptide(Cat No.A1153)的β-淀粉样蛋白(1-40)溶解在DMSO中，快速冷冻并以等分试样在-80℃下保存。将在PBS(pH6.5，补充有BSA，0.1％)中溶解的β-淀粉样蛋白(1-42)寡聚体或β-淀粉样蛋白(1-40)加入ELISA平板(每孔100μl)中，并在室温下轻轻震荡孵育2h。孵育后，用去离子水洗涤平板，并用PBS(pH 6.5)和吐温洗涤三次。通过针对β-淀粉样蛋白(1-42)的抗β-淀粉样蛋白单克隆抗体4G8(生物素化，BioLegend Cat.No.800705)、针对β-淀粉样蛋白(1-40)的抗β-淀粉样蛋白单克隆抗体6E10(Biolegend Cat.No.803001)检测结合的β-淀粉样蛋白，随后通过针对生物素化4G8抗体的链霉亲和素-HRP(辣根过氧化物酶，R&D System，Cat No.DY998)和针对6E10抗体的与HRP缀合的第二抗IgG抗体(R&D System,Cat.No.HAF007)检测结合的β-淀粉样蛋白。如实施例49所述，用TMB显色后，用ELISA酶标仪在450nm处测量样品的光密度。显色后，测定每种化合物与对照(无化合物，DMSO对照)相比的抑制百分比。
结果：化合物抑制Abeta(1-40)和Abeta(1-42)寡聚体与纯化的人脑细胞膜的结合。图2显示了抑制剂化合物7和34的抑制曲线实例。抑制剂化合物列表如表2所示。对于每种化合物，IC-50值以μM(微摩尔)表示。在某些情况下，未测量IC-50，而是显示了30μM浓度下化合物的抑制百分比。为了简单起见，没有示出标准偏差；对于所示的任何IC-50值，变异系数不超过30％。所有检测都在96孔板中一式两份进行，并且实验至少重复两次。在表中，使用了以下缩写：A：在30μM浓度下抑制>30％的化合物；B：在30μM浓度下抑制<30％的化合物；NT：未获得抑制曲线的化合物。
实施例51：评估作为原纤维α-突触核蛋白与纯化的人脑细胞膜结合的抑制剂的化合物。
如实施例49所述进行检测，但有以下修改。在用人脑膜包被平板后，如所述洗涤平板。将化合物以10mM的终浓度溶解在DMSO中，并在检测前进一步稀释。筛选孔中的DMSO浓度高达2％。将单个化合物与α-突触核蛋白在包被有脑膜的平板上共孵育。如实施例45中所述制备原纤维α-突触核蛋白。将在PBS(pH 6.5，补充有BSA，0.1％)中稀释的原纤维α-突触核蛋白加入ELISA平板(每孔100μl)中，并在室温下轻轻震荡孵育2h。孵育后，用去离子水洗涤平板，并用PBS(pH 6.5)和吐温洗涤三次。通过抗α-突触核蛋白单克隆抗体211(Santa CruzCat.No.sc-12767)，随后通过与HRP缀合的第二抗IgG抗体(R&DSystem,Cat.No.HAF007)检测结合的α-突触核蛋白。如实施例49所述，用TMB显色后，用ELISA酶标仪在450nm处测量样品的光密度。显色后，测定每种化合物与对照(无化合物，DMSO对照)相比的抑制百分比。
结果：化合物抑制原纤维α-突触核蛋白与纯化的人脑细胞膜的结合。抑制剂化合物列表如表3所示。对于每种化合物，IC-50值以μM(微摩尔)表示。在某些情况下，未测量IC-50，而是显示了30μM浓度下化合物的抑制百分比。为了简单起见，没有示出标准偏差；对于所示的任何IC-50值，变异系数不超过30％。所有检测都在96孔板中一式两份进行，并且实验至少重复两次。在表中，使用了以下缩写：A：在30μM浓度下抑制>30％的化合物；B：在30μM浓度下抑制<30％的化合物；NT：未获得抑制曲线的化合物。
实施例52：评估作为Tau与人脑细胞膜结合的抑制剂的化合物。
如实施例49所述进行检测，但有以下修改。在用纯化的人脑细胞膜包被平板后，如所述洗涤平板。将化合物以10mM的终浓度溶解在DMSO中，并在检测前进一步稀释。筛选孔中的DMSO浓度高达2％。将单个化合物与Tau在用纯化的人脑膜包被的平板上共孵育。将购自rPeptide(Cat No.T1001)的Tau溶解在DMSO(Sigma Cat.No.D2650)中，快速冷冻并以等分试样在-80℃下保存。将溶解在PBS(pH 6.5，补充有BSA，0.1％)中的Tau加入ELISA平板(每孔100μl)中，并在室温下轻轻震荡孵育2h。孵育后，用去离子水洗涤平板，并用PBS(pH 6.5)和吐温洗涤三次。通过抗Tau单克隆抗体D-8(Santa Cruz Cat.No.sc-166060)，随后通过与HRP缀合的第二抗IgG抗体(R&D System,Cat.No.HAF007)检测结合的Tau。如实施例49所述，用TMB显色后，用ELISA酶标仪在450nm处测量样品的光密度。显色后，测定每种化合物与对照(无化合物，DMSO对照)相比的抑制百分比。
结果：化合物抑制Tau与纯化的人脑细胞膜的结合。抑制剂化合物列表如表4所示。对于每种化合物，IC-50值以μM(微摩尔)表示。在某些情况下，未测量IC-50，而是显示了30μM浓度下化合物的抑制百分比。为了简单起见，没有示出标准偏差；对于所示的任何IC-50值，变异系数不超过30％。所有检测都在96孔板中一式两份进行，并且实验至少重复两次。在表中，使用了以下缩写：A：在30μM浓度下抑制>30％的化合物；B：在30μM浓度下抑制<30％的化合物；NT：未获得抑制曲线的化合物。
实施例53：评估作为TDP-43与纯化的人脑细胞膜结合的抑制剂的化合物。
如实施例49所述进行检测，但有以下修改。在用纯化的人脑细胞膜包被平板后，如所述洗涤平板。将化合物以10mM的终浓度溶解在DMSO中，并在检测前进一步稀释。筛选孔中的DMSO浓度高达2％。将单个化合物与TDP-43在包被有脑膜的平板上共孵育。将来自R&DSystem(Cat.No.AP-190)的TDP43快速冷冻并以等分试样在-80℃下保存。将溶解在PBS(pH6.5，补充有BSA，0.1％)中的TDP-43加入ELISA平板(每孔100μl)中，并在室温下轻轻震荡孵育2h。孵育后，用去离子水洗涤平板，并用PBS(pH 6.5)和吐温洗涤三次。通过抗TDP-43单克隆抗体(R&D System Cat.No.MAB7778)，随后通过与HRP缀合的第二抗IgG抗体(R&DSystem,Cat.No.HAF007)检测结合的TDP-43。如实施例49所述，用TMB显色后，用ELISA酶标仪在450nm处测量样品的光密度。显色后，测定每种化合物与对照(无化合物，DMSO对照)相比的抑制百分比。
结果：化合物抑制TDP-43与纯化的人脑细胞膜的结合。抑制剂化合物列表如表5所示。对于每种化合物，IC-50值以μM(微摩尔)表示。在某些情况下，未测量IC-50，而是显示了30μM浓度下化合物的抑制百分比。为了简单起见，没有示出标准偏差；对于所示的任何IC-50值，变异系数不超过25％。所有检测都在96孔板中一式三份进行，并且实验至少重复两次。在表中，使用了以下缩写：A：在30μM浓度下抑制>30％的化合物；B：在30μM浓度下抑制<30％的化合物；NT：未获得抑制曲线的化合物。
实施例54：评估作为SAA与纯化的THP-1细胞膜结合的抑制剂的化合物。
THP-1(人急性单核细胞白血病细胞系；ATCC cat.no.TIB-202)细胞膜如下通过差速离心制备。THP-1细胞在37℃5％ CO2气氛下在RPMI 1640培养基(GIBCOCat.No.21875034，补充有10％ FBS)中生长，收获细胞并在-80℃下储存。冷冻的THP-1细胞在HEPES缓冲蔗糖(0.32M蔗糖，4mM HEPES pH7.4，蛋白酶抑制剂)中用电机驱动的玻璃-聚四氟乙烯均质器匀浆。通过在4℃下以1,000×g离心匀浆10min除去核和细胞碎片后，将核后上清液以10,000×g离心15min以除去线粒体级分。将所得上清液以100,000×g离心30min以产生粗膜沉淀。将粗膜沉淀重悬于0.32M蔗糖中，然后再次以100,000×g离心30min以产生洗涤的膜沉淀。将膜沉淀重悬于无菌PBS(pH 7.4)中，快速冷冻，并以等分试样在-80℃下保存。这种制剂主要含有细胞膜。用BCA蛋白检测试剂盒(Pierce Cat.No.23227)测定蛋白浓度。如实施例48所述进行结合检测，但有以下修改。在用0.01mg/ml浓度的纯化的人THP-1细胞膜包被平板后，如所述洗涤平板并用2％乳液封闭平板。将化合物以10mM的终浓度溶解在DMSO中，并在检测前进一步稀释。筛选孔中的DMSO浓度高达2％。将单个化合物与SAA在包被有细胞膜的平板上共孵育。将来自PreProtech(NJ，美国，Cat.No.300-53)的SAA溶解在DMSO中，快速冷冻并以等分试样在-80℃下保存。将溶解在Tris缓冲液(pH 6.5，补充有BSA，0.1％)中的SAA加入ELISA平板(每孔100μl)中，并在室温下轻轻震荡孵育2h。孵育后，用去离子水洗涤平板，并用TBS(pH6.5)和吐温洗涤三次。通过抗SAA单克隆抗体(R&DSystem Cat.No.MAB30192)，随后通过与HRP缀合的第二抗IgG抗体(R&D System,Cat.No.HAF007)检测结合的SAA。抗体在TBS抗体缓冲液(pH 6.5，补充有1％ BSA)中稀释。每次与抗体孵育后，用去离子水洗涤平板，并用含0.1％吐温的TBS(pH6.5)洗涤缓冲液洗涤三次。如实施例49所述，用TMB显色后，用ELISA酶标仪在450nm处测量样品的光密度。显色后，测定每种化合物与对照(无化合物，DMSO对照)相比的抑制百分比。
结果：化合物抑制SAA与纯化的THP-1细胞膜的结合。抑制剂化合物列表如表6所示。对于每种化合物，IC-50值以μM(微摩尔)表示。在某些情况下，未测量IC-50，而是显示了30μM浓度下化合物的抑制百分比。为了简单起见，没有示出标准偏差；对于所示的任何IC-50值，变异系数不超过30％。所有检测都在96孔板中一式两份进行，并且实验至少重复两次。在表中，使用了以下缩写：A：在30μM浓度下抑制>30％的化合物；B：在30μM浓度下抑制<30％的化合物；NT：未获得抑制曲线的化合物。
实施例55：证明抑制剂化合物与肝素和其他GAG直接相互作用的检测。
为了证明抑制剂化合物直接与肝素和其他GAG结合，在不存在β-淀粉样蛋白(1-42)的情况下，将单个化合物与固定化肝素一起孵育。如实施例43和44所述，用肝素-BSA包被96孔ELISA平板，然后用BSA封闭平板。如果要检测其他GAG，它们可以直接或间接(例如，通过GAG-BSA缀合物)固定在平板上，如实施例43中所述。终浓度为0.1-200μM的β-淀粉样蛋白抑制剂化合物在ELISA平板中孵育90min，然后用孵育缓冲液洗涤(预孵育)。洗涤后，将β-淀粉样蛋白(1-42)加入到用化合物预孵育的孔中。同时，在单独的对照孔中，β-淀粉样蛋白(1-42)与β-淀粉样蛋白(1-42)抑制剂化合物共孵育90min(共同孵育)。孵育后，通过抗β-淀粉样蛋白抗体，随后通过与辣根过氧化物酶缀合的抗体，以及如实施例44中所述的OD测量，对结合到平板上的β-淀粉样蛋白(1-42)进行定量。
结果：在预孵育与共孵育实验中，几种β-淀粉样蛋白-肝素抑制剂化合物对β-淀粉样蛋白(1-42)结合的抑制程度相似。不受理论的束缚，基于肝素与其他GAG(尤其是HS-GAG)的结构相似性，这些化合物可能与肝素以外的GAG相互作用。
实施例56：适用于筛选化合物集合的pro-IAPP与固定化肝素结合的检测。
开发了适用于药物筛选的pro-IAPP与肝素相互作用的96孔板检测。我们使用pro-IAPP(1-48)，因为据报道它有肝素结合结构域，而成熟的IAPP可能没有(Park K,VerchereCB.J Biol Chem.2001,276(20):16611-6)。该检测测量pro-IAPP(1-48)(定制合成的)与固定化肝素-BSA的结合。在类似于实施例43所述的检测中，通过使用多克隆抗IAPP抗体进行的ELISA检测，随后通过第二抗体缀合的辣根过氧化物酶的定量显色来测定结合的pro-IAPP的量。然后使用pro-IAPP-肝素检测在96孔板中筛选约2,500种化合物的集合。为此，将终浓度为30μM的化合物与pro-IAPP在含有固定化肝素的平板上共孵育。显色后，测定每种化合物的抑制百分比。每个平板上都包括阳性和阴性对照。抑制至少30％信号的化合物被评为命中化合物(hit)。
结果：筛选鉴定了约12个抑制至少30％信号的命中化合物，并可在重复检测中得到验证。这些化合物具有不同的化学结构，被认为适于先导优化。
通过审查可以发现，目前未被排除在药物组合物和化合物权利要求之外的其他种和属对本申请中的发明人来说不具有可专利性。在这种情况下，随后在申请人的权利要求中排除的种和属将被视为专利审查的产物，并不反映发明人的概念或对其发明的描述。在组成方面，本发明是除了公共拥有的那些化合物之外的所有式I化合物。
应当理解，本发明不限于上述本发明的特定实施方案，因为可以对特定实施方案进行变化，并且这些变化仍然落入所附权利要求的范围内。

Claims (32)

1.一种通式I的化合物：
式I
和药学上可接受的稀释剂或载体，
其中
X1、X2和X3是独立的并且任选地是-CR9-或N；R9是烷基、卤素、-O-烷基；如果X1是CR9，那么R9和R6可以连接形成5-7元碳环、杂芳环或杂环；
R3和R4是独立的并且任选地是H、卤素、-O-烷基；R3和R4可以连接形成稠合的苯基；
R5是H、C1-6烷基；
R2是任选被C1-6烷基、-OH、-O-烷基、卤素、杂环、杂芳环取代的苯基；任选被C1-6烷基、-OH、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环或杂芳环；任选被烷基、-O-烷基、卤素、杂环、杂芳环取代的5或6元杂环；-N+(CH3)3，任选取代的4、5和6元杂环，所述4、5和6元杂环包括可以含有季铵化氮以形成带电物质的杂环和杂芳环；
L1是键、-CH3、-CH2-、-[CR7R8]n-，其中R7和R8独立地是：F、C1-6烷基，连接形成C3-6碳环或杂环或杂芳环；
n＝0、1、2、3；
L2可以是键或–N＝C(R5)-；
R1是不存在，任选被烷基、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环，-N+(CH3)3，任选取代的4、5和6元杂环，所述4、5和6元杂环包括可以含有季铵化氮以形成带电物质的杂环和杂芳环；
R6是烷基；
及其药学上可接受的盐，还包括碳氮双键的所有几何异构体和可能的互变异构体。
2.根据权利要求1所述的化合物，其选自由以下组成的组：
(E)-4-((E)-(4-(1H-咪唑-1-基)-2-甲基亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物1)
(E)-7-氯-4-((E)-(4-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-1,4-二氢喹啉(化合物2)
(E)-4-((E)-(4-(1H-吡唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物3)(Z)-1-(4-((2-(6-氯喹啉-4-基)肼亚基)甲基)苯基)-N,N,N-三甲基甲铵碘化物(化合物4)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氟喹啉(化合物5)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)吗啉(化合物6)
(E)-7-氯-4-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)亚苄基)肼基)喹诺酮(化合物7)
(E)-1-(4-((2-(1,2-二氢苊-5-基)肼亚基)甲基)苯基)-1H-咪唑(化合物8)
碘化(Z)-1-甲基-4-((2-(喹啉-4-基)亚肼基)甲基)吡啶-1-鎓(化合物9)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)硫代吗啉1,1-二氧化物(化合物10)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉盐酸盐(化合物11)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-7-甲氧基喹啉(化合物12)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉磷酸盐(化合物13)
(E)-4-(2-((6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)-7-氯喹啉盐酸盐(化合物14)
7-氯-4-(2-((6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物15)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物16)
碘化(E)-1-(5-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物17)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物18)
(E)-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物19)
7-氯-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物20)
(E)-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氟喹唑啉(化合物21)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹啉(化合物22)
碘化1-(5-(1-(2-(7-氯喹啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(化合物23)
(E)-6-氯-1-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)酞嗪(化合物24)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)喹唑啉-4-胺(化合物25)
(E)-1-(5-(1-(2-(7-氟喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物26)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物27)
7-氯-4-(2-(1-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物28)
1-(3-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(化合物29)
7-氯-4-(2-(1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物30)
6-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)酞嗪-1-胺磷酸盐(化合物31)
(E)-4-(2-(1-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氯喹唑啉(化合物32)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物33)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺磷酸盐(化合物34)
(E)-7-氯-4-(2-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)喹啉盐酸盐(化合物35)
7-氯-N-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物37)
5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)-2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-醇磷酸盐(化合物40)
N-(6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺(化合物41)
7-氯-N-(3-((二乙氨基)甲基)苯基)喹啉-4-胺(化合物42)
碘化1-(5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物43)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹啉-4-胺(化合物44)和
7-氯-N-(2-((二甲氨基)甲基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物45)。
3.一种药物组合物，其包含治疗量的式I化合物：
式I
和药学上可接受的稀释剂或载体，
其中
X1、X2和X3是独立的并且任选地是-CR9-或N；R9是烷基、卤素、-O-烷基；如果X1是CR9，那么R9和R6可以连接形成5-7元碳环、杂芳环或杂环；
R3和R4是独立的并且任选地是H、卤素、-O-烷基；R3和R4可以连接形成稠合的苯基；
R5是H、C1-6烷基；
R2是任选被C1-6烷基、-OH、-O-烷基、卤素、杂环、杂芳环取代的苯基；任选被C1-6烷基、-OH、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环或杂芳环；任选被烷基、-O-烷基、卤素、杂环、杂芳环取代的5或6元杂环；-N+(CH3)3，任选取代的4、5和6元杂环，所述4、5和6元杂环包括可以含有季铵化氮以形成带电物质的杂环和杂芳环；
L1是键、-CH3、-CH2-、-[CR7R8]n-，其中R7和R8独立地是：F、C1-6烷基，连接形成C3-6碳环或杂环或杂芳环；
n＝0、1、2、3；
L2可以是键或–N＝C(R5)-；
R1是不存在，任选被烷基、-O-烷基、卤素取代的5或6元杂环，-N+(CH3)3，任选取代的4、5和6元杂环，所述4、5和6元杂环包括可以含有季铵化氮以形成带电物质的杂环和杂芳环；
R6是烷基；
其中所述治疗量有效抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与糖胺聚糖(GAG)的结合。
4.根据权利要求3所述的药物组合物，其中所述式I化合物选自由以下组成的组：
(E)-4-((E)-(4-(1H-咪唑-1-基)-2-甲基亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物1)
(E)-7-氯-4-((E)-(4-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-1,4-二氢喹啉(化合物2)
(E)-4-((E)-(4-(1H-吡唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物3)(Z)-1-(4-((2-(6-氯喹啉-4-基)肼亚基)甲基)苯基)-N,N,N-三甲基甲铵碘化物(化合物4)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氟喹啉(化合物5)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)吗啉(化合物6)
(E)-7-氯-4-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)亚苄基)肼基)喹诺酮(化合物7)
(E)-1-(4-((2-(1,2-二氢苊-5-基)肼亚基)甲基)苯基)-1H-咪唑(化合物8)
碘化(Z)-1-甲基-4-((2-(喹啉-4-基)亚肼基)甲基)吡啶-1-鎓(化合物9)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)硫代吗啉1,1-二氧化物(化合物10)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉盐酸盐(化合物11)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-7-甲氧基喹啉(化合物12)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉磷酸盐(化合物13)
(E)-4-(2-((6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)-7-氯喹啉盐酸盐(化合物14)
7-氯-4-(2-((6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物15)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物16)
碘化(E)-1-(5-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物17)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物18)
(E)-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物19)
7-氯-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物20)
(E)-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氟喹唑啉(化合物21)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹啉(化合物22)
碘化1-(5-(1-(2-(7-氯喹啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(化合物23)
(E)-6-氯-1-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)酞嗪(化合物24)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)喹唑啉-4-胺(化合物25)
(E)-1-(5-(1-(2-(7-氟喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物26)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物27)
7-氯-4-(2-(1-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物28)
1-(3-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(化合物29)
7-氯-4-(2-(1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物30)
6-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)酞嗪-1-胺磷酸盐(化合物31)
(E)-4-(2-(1-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氯喹唑啉(化合物32)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物33)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺磷酸盐(化合物34)
(E)-7-氯-4-(2-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)喹啉盐酸盐(化合物35)4-(2-(1-(4-(1H-咪唑-1-基)苯基)亚乙基)肼基)-7-氯喹啉磷酸酯(化合物36)
7-氯-N-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物37)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氯喹啉二盐酸盐(化合物38)
N-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)苯并[g]喹啉-4-胺(化合物39)
5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)-2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-醇磷酸盐(化合物40)
N-(6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺(化合物41)
7-氯-N-(3-((二乙氨基)甲基)苯基)喹啉-4-胺(化合物42)
碘化1-(5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物43)和
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹啉-4-胺(化合物44)和
7-氯-N-(2-((二甲氨基)甲基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物45)。
5.根据权利要求3或4中任一项所述的药物组合物，其用于治疗或预防神经退行性疾病、病症或病况。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述神经退行性疾病、病症或病况是帕金森病、多系统萎缩或α-突触核蛋白病。
7.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述神经退行性疾病、病症或病况是肌萎缩侧索硬化。
8.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述神经退行性疾病、病症或病况是阿尔茨海默病或痴呆症。
9.根据权利要求3或4中任一项所述的药物组合物，其用于治疗或预防淀粉样疾病、病症或病况。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述淀粉样疾病是AA淀粉样变性。
11.根据权利要求3或4所述的药物组合物，其中所述GBAP是β-淀粉样蛋白，并且所述淀粉样疾病、病症或病况是阿尔茨海默病或脑淀粉样血管病。
12.根据权利要求3或4所述的药物组合物，其中所述GBAP是tau，所述淀粉样疾病、病症或病况是阿尔茨海默病、FTD或tau病；其中所述GBAP是α-突触核蛋白，所述淀粉样神经退行性病症是帕金森病、多系统萎缩或α-突触核蛋白病；并且其中所述GBAP是TDP-43，所述淀粉样神经退行性病症是阿尔茨海默病、额颞叶痴呆或ALS。
13.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述GBAP是SAA，并且所述淀粉样疾病、病症或病况是AA淀粉样变性。
14.一种治疗或预防与GBAP结合HS-GAG相关的淀粉样疾病、病症或病况的方法，其包括：
-选择需要治疗或预防与GBAP结合HS-GAG相关的淀粉样疾病、病症或病况的受试者；
-向有此需要的受试者施用治疗量的药物组合物，所述药物组合物包含至少一种根据权利要求3、4或9的抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与HS-GAG结合的式I化合物，
其中所述受试者中与GBAP结合HS-GAG相关的淀粉样疾病、病症或病况得到治疗或预防。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述淀粉样疾病、病症或病况是帕金森病、多系统萎缩、α-突触核蛋白病、阿尔茨海默病、脑淀粉样血管病、tau病、额颞叶痴呆、ALS或AA淀粉样变性。
16.根据权利要求14至15中任一项所述的方法，其中所述化合物选自由以下组成的组：
(E)-4-((E)-(4-(1H-咪唑-1-基)-2-甲基亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物1)
(E)-7-氯-4-((E)-(4-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-1,4-二氢喹啉(化合物2)
(E)-4-((E)-(4-(1H-吡唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物3)(Z)-1-(4-((2-(6-氯喹啉-4-基)肼亚基)甲基)苯基)-N,N,N-三甲基甲铵碘化物(化合物4)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氟喹啉(化合物5)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)吗啉(化合物6)
(E)-7-氯-4-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)亚苄基)肼基)喹诺酮(化合物7)
(E)-1-(4-((2-(1,2-二氢苊-5-基)肼亚基)甲基)苯基)-1H-咪唑(化合物8)
碘化(Z)-1-甲基-4-((2-(喹啉-4-基)亚肼基)甲基)吡啶-1-鎓(化合物9)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)硫代吗啉1,1-二氧化物(化合物10)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉盐酸盐(化合物11)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-7-甲氧基喹啉(化合物12)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉磷酸盐(化合物13)
(E)-4-(2-((6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)-7-氯喹啉盐酸盐(化合物14)
7-氯-4-(2-((6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物15)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物16)
碘化(E)-1-(5-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物17)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物18)
(E)-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物19)
7-氯-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物20)
(E)-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氟喹唑啉(化合物21)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹啉(化合物22)
碘化1-(5-(1-(2-(7-氯喹啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(化合物23)
(E)-6-氯-1-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)酞嗪(化合物24)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)喹唑啉-4-胺(化合物25)
(E)-1-(5-(1-(2-(7-氟喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物26)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物27)
7-氯-4-(2-(1-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物28)
1-(3-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(化合物29)
7-氯-4-(2-(1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物30)
6-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)酞嗪-1-胺磷酸盐(化合物31)
(E)-4-(2-(1-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氯喹唑啉(化合物32)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物33)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺磷酸盐(化合物34)
(E)-7-氯-4-(2-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)喹啉盐酸盐(化合物35)4-(2-(1-(4-(1H-咪唑-1-基)苯基)亚乙基)肼基)-7-氯喹啉磷酸酯(化合物36)
7-氯-N-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物37)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氯喹啉二盐酸盐(化合物38)
N-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)苯并[g]喹啉-4-胺(化合物39)
5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)-2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-醇磷酸盐(化合物40)
N-(6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺(化合物41)
7-氯-N-(3-((二乙氨基)甲基)苯基)喹啉-4-胺(化合物42)
碘化1-(5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物43)和
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹啉-4-胺(化合物44)和
7-氯-N-(2-((二甲氨基)甲基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物45)。
17.一种治疗或预防与淀粉样肽结合HS-GAG相关的淀粉样疾病、病症或病况的方法，其包括：
-选择需要治疗或预防与淀粉样肽结合HS-GAG相关的淀粉样疾病、病症或病况的患者；
-向有此需要的受试者施用治疗量的药物组合物，所述药物组合物包含至少一种抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与HS-GAG结合的小分子化合物，
其中所述治疗量有效抑制GBAP与HS-GAG的结合，进一步其中所述患者中与淀粉样肽结合HS-GAG相关的淀粉样疾病、病症或病况得到治疗或预防。
18.根据权利要求17或24所述的方法，其中抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与HS-GAG结合的所述化合物不是肽或蛋白质。
19.根据权利要求17至18中任一项所述的方法，其中所述淀粉样疾病、病症或病况是帕金森病、多系统萎缩、α-突触核蛋白病、阿尔茨海默病、脑淀粉样血管病、tau病、额颞叶痴呆、ALS或AA淀粉样变性。
20.根据权利要求17至19中任一项所述的方法，其中所述化合物选自由以下组成的组：
(E)-4-((E)-(4-(1H-咪唑-1-基)-2-甲基亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物1)
(E)-7-氯-4-((E)-(4-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-1,4-二氢喹啉(化合物2)
(E)-4-((E)-(4-(1H-吡唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物3)
(Z)-1-(4-((2-(6-氯喹啉-4-基)肼亚基)甲基)苯基)-N,N,N-三甲基甲铵碘化物(化合物4)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氟喹啉(化合物5)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)吗啉(化合物6)
(E)-7-氯-4-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)亚苄基)肼基)喹诺酮(化合物7)
(E)-1-(4-((2-(1,2-二氢苊-5-基)肼亚基)甲基)苯基)-1H-咪唑(化合物8)
碘化(Z)-1-甲基-4-((2-(喹啉-4-基)亚肼基)甲基)吡啶-1-鎓(化合物9)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)硫代吗啉1,1-二氧化物(化合物10)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉盐酸盐(化合物11)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-7-甲氧基喹啉(化合物12)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉磷酸盐(化合物13)
(E)-4-(2-((6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)-7-氯喹啉盐酸盐(化合物14)
7-氯-4-(2-((6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物15)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物16)
碘化(E)-1-(5-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物17)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物18)
(E)-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物19)
7-氯-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物20)
(E)-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氟喹唑啉(化合物21)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹啉(化合物22)
碘化1-(5-(1-(2-(7-氯喹啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(化合物23)
(E)-6-氯-1-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)酞嗪(化合物24)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)喹唑啉-4-胺(化合物25)
(E)-1-(5-(1-(2-(7-氟喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物26)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物27)
7-氯-4-(2-(1-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物28)
1-(3-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(化合物29)
7-氯-4-(2-(1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物30)
6-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)酞嗪-1-胺磷酸盐(化合物31)
(E)-4-(2-(1-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氯喹唑啉(化合物32)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物33)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺磷酸盐(化合物34)
(E)-7-氯-4-(2-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)喹啉盐酸盐(化合物35)4-(2-(1-(4-(1H-咪唑-1-基)苯基)亚乙基)肼基)-7-氯喹啉磷酸酯(化合物36)
7-氯-N-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物37)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氯喹啉二盐酸盐(化合物38)
N-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)苯并[g]喹啉-4-胺(化合物39)
5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)-2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-醇磷酸盐(化合物40)
N-(6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺(化合物41)
7-氯-N-(3-((二乙氨基)甲基)苯基)喹啉-4-胺(化合物42)
碘化1-(5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物43)和
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹啉-4-胺(化合物44)和
7-氯-N-(2-((二甲氨基)甲基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物45)。
21.一种检测直接结合糖胺聚糖(GAG)的小分子化合物的方法，其包括：
(a)将GAG固定在多孔板的表面上；
(b)在至少一种候选化合物的存在下，使固定的GAG与已知量的GBAP接触；和
(c)测量与固定的GAG结合的GBAP的量，
其中所述有机小分子化合物有效抑制GBAP与GAG的结合。
22.一种检测直接结合糖胺聚糖(GAG)的有机小分子的方法，其包括：
(a)将GAG固定在多孔板的表面上；
(b)使GAG与至少一种候选有机小化合物接触；
(c)去除未结合的有机小化合物；
(d)加入GBAP；和
(e)测量与固定的GAG结合的GBAP的量，
其中所述小分子化合物有效抑制GBAP与GAG的结合。
23.根据权利要求21至22中任一项所述的方法，其中所述GBAP选自由淀粉样蛋白-β、α-突触核蛋白、TDP-43、tau、SAA、IAPP及其衍生物和片段组成的组。
24.一种治疗或预防淀粉样神经退行性病症的方法，其包括：
-选择需要治疗或预防淀粉样神经退行性病症的受试者；
-向受试者施用治疗量的化合物，所述化合物是GBAP与HS-GAG结合的双重抑制剂，其中两种GBAP选自由Abeta、tau、TDP-43和α-突触核蛋白组成的组，
其中受试者中淀粉样神经退行性病症得到治疗或预防。
25.根据权利要求24所述的治疗方法，其中所述两种GBAP是Abeta和tau，其中所述淀粉样神经退行性病症是阿尔茨海默病。
26.根据权利要求24至25中任一项所述的方法，其中所述GBAP是tau和TDP-43，并且所述淀粉样病症是FTD。
27.根据权利要求24至26中任一项所述的方法，其中所述淀粉样神经退行性病症是帕金森病、多系统萎缩、α-突触核蛋白病、阿尔茨海默病、脑淀粉样血管病、tau病、额颞叶痴呆、ALS或AA淀粉样变性。
28.根据权利要求24至27中任一项所述的方法，其中所述化合物选自由以下组成的组：
(E)-4-((E)-(4-(1H-咪唑-1-基)-2-甲基亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物1)
(E)-7-氯-4-((E)-(4-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-1,4-二氢喹啉(化合物2)
(E)-4-((E)-(4-(1H-吡唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物3)
(Z)-1-(4-((2-(6-氯喹啉-4-基)肼亚基)甲基)苯基)-N,N,N-三甲基甲铵碘化物(化合物4)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氟喹啉(化合物5)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)吗啉(化合物6)
(E)-7-氯-4-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)亚苄基)肼基)喹诺酮(化合物7)
(E)-1-(4-((2-(1,2-二氢苊-5-基)肼亚基)甲基)苯基)-1H-咪唑(化合物8)
碘化(Z)-1-甲基-4-((2-(喹啉-4-基)亚肼基)甲基)吡啶-1-鎓(化合物9)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)硫代吗啉1,1-二氧化物(化合物10)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉盐酸盐(化合物11)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-7-甲氧基喹啉(化合物12)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉磷酸盐(化合物13)
(E)-4-(2-((6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)-7-氯喹啉盐酸盐(化合物14)
7-氯-4-(2-((6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物15)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物16)
碘化(E)-1-(5-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物17)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物18)
(E)-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物19)
7-氯-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物20)
(E)-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氟喹唑啉(化合物21)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹啉(化合物22)
碘化1-(5-(1-(2-(7-氯喹啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(化合物23)
(E)-6-氯-1-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)酞嗪(化合物24)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)喹唑啉-4-胺(化合物25)
(E)-1-(5-(1-(2-(7-氟喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物26)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物27)
7-氯-4-(2-(1-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物28)
1-(3-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(化合物29)
7-氯-4-(2-(1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物30)
6-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)酞嗪-1-胺磷酸盐(化合物31)
(E)-4-(2-(1-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氯喹唑啉(化合物32)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物33)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺磷酸盐(化合物34)
(E)-7-氯-4-(2-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)喹啉盐酸盐(化合物35)
4-(2-(1-(4-(1H-咪唑-1-基)苯基)亚乙基)肼基)-7-氯喹啉磷酸酯(化合物36)
7-氯-N-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物37)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氯喹啉二盐酸盐(化合物38)
N-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)苯并[g]喹啉-4-胺(化合物39)
5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)-2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-醇磷酸盐(化合物40)
N-(6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺(化合物41)
7-氯-N-(3-((二乙氨基)甲基)苯基)喹啉-4-胺(化合物42)
碘化1-(5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物43)和
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹啉-4-胺(化合物44)和
7-氯-N-(2-((二甲氨基)甲基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物45)。
29.一种治疗淀粉样病症的方法，其包括：
-选择需要治疗淀粉样病症的受试者；
-向有此需要的受试者施用治疗量的结合糖胺聚糖(GAG)的化合物，其中所述治疗量有效抑制GAG结合性淀粉样肽(GBAP)与GAG的结合，
其中受试者中淀粉样病症得到治疗。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述GAG是硫酸乙酰肝素GAG(HS-GAG)。
31.根据权利要求29至30中任一项所述的方法，其中所述淀粉样神经退行性病症是帕金森病、多系统萎缩、α-突触核蛋白病、阿尔茨海默病、脑淀粉样血管病、tau病、额颞叶痴呆、ALS或AA淀粉样变性。
32.根据权利要求29至31中任一项所述的方法，其中所述化合物选自由以下组成的组：
(E)-4-((E)-(4-(1H-咪唑-1-基)-2-甲基亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物1)
(E)-7-氯-4-((E)-(4-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-1,4-二氢喹啉(化合物2)
(E)-4-((E)-(4-(1H-吡唑-1-基)亚苄基)亚肼基)-7-氯-1,4-二氢喹啉(化合物3)
(Z)-1-(4-((2-(6-氯喹啉-4-基)肼亚基)甲基)苯基)-N,N,N-三甲基甲铵碘化物(化合物4)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氟喹啉(化合物5)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)吗啉(化合物6)
(E)-7-氯-4-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)亚苄基)肼基)喹诺酮(化合物7)
(E)-1-(4-((2-(1,2-二氢苊-5-基)肼亚基)甲基)苯基)-1H-咪唑(化合物8)
碘化(Z)-1-甲基-4-((2-(喹啉-4-基)亚肼基)甲基)吡啶-1-鎓(化合物9)
(E)-4-(4-((2-(7-氟喹啉-4-基)亚肼基)甲基)苄基)硫代吗啉1,1-二氧化物(化合物10)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉盐酸盐(化合物11)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲基亚苄基)肼基)-7-甲氧基喹啉(化合物12)
(E)-4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)-3-甲氧基亚苄基)肼基)-6,7-二甲氧基喹啉磷酸盐(化合物13)
(E)-4-(2-((6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)-7-氯喹啉盐酸盐(化合物14)
7-氯-4-(2-((6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚甲基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物15)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物16)
碘化(E)-1-(5-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物17)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉磷酸盐(化合物18)
(E)-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物19)
7-氯-N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物20)
(E)-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氟喹唑啉(化合物21)
7-氯-4-(2-(1-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹啉(化合物22)
碘化1-(5-(1-(2-(7-氯喹啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓(化合物23)
(E)-6-氯-1-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)酞嗪(化合物24)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)喹唑啉-4-胺(化合物25)
(E)-1-(5-(1-(2-(7-氟喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物26)
(E)-7-氯-4-(2-(1-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)喹唑啉盐酸盐(化合物27)
7-氯-4-(2-(1-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-4-基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物28)
1-(3-(1-(2-(7-氯喹唑啉-4-基)肼亚基)乙基)苯基)-N,N-二甲基甲胺(化合物29)
7-氯-4-(2-(1-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)亚乙基)肼基)喹唑啉(化合物30)
6-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)酞嗪-1-胺磷酸盐(化合物31)
(E)-4-(2-(1-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)亚乙基)肼基)-7-氯喹唑啉(化合物32)
7-氯-N-(6-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-5-甲氧基吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物33)
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺磷酸盐(化合物34)
(E)-7-氯-4-(2-(3-氟-4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)喹啉盐酸盐(化合物35)4-(2-(1-(4-(1H-咪唑-1-基)苯基)亚乙基)肼基)-7-氯喹啉磷酸酯(化合物36)
7-氯-N-(6-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)异喹啉-4-胺磷酸盐(化合物37)
4-(2-(4-(1H-咪唑-1-基)亚苄基)肼基)-7-氯喹啉二盐酸盐(化合物38)
N-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)苯并[g]喹啉-4-胺(化合物39)
5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)-2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)吡啶-3-醇磷酸盐(化合物40)
N-(6-(1H-咪唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹唑啉-4-胺(化合物41)
7-氯-N-(3-((二乙氨基)甲基)苯基)喹啉-4-胺(化合物42)
碘化1-(5-((7-氯喹唑啉-4-基)氨基)吡啶-2-基)-3-甲基-1H-咪唑-3-鎓磷酸盐(化合物43)和
N-(6-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-3-基)-7-氯喹啉-4-胺(化合物44)和
7-氯-N-(2-((二甲氨基)甲基)吡啶-4-基)喹啉-4-胺(化合物45)。
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