KR102550423B1 - 타우 응집체와 연관된 장애의 치료, 완화 또는 예방을 위한 테트라히드로벤조푸로[2,3-c]피리딘 및 베타-카르볼린 화합물 - Google Patents

타우 응집체와 연관된 장애의 치료, 완화 또는 예방을 위한 테트라히드로벤조푸로[2,3-c]피리딘 및 베타-카르볼린 화합물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 신경원섬유 엉킴 (NFT)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 타우 (튜불린 회합 단위) 단백질 응집체와 연관된 일군의 장애 및 이상, 예컨대 알츠하이머병 (AD)의 치료, 완화 또는 예방에 사용될 수 있는 화학식 (I)의 신규 화합물에 관한 것이다.
Figure 112020130910314-pct00182

Description

타우 응집체와 연관된 장애의 치료, 완화 또는 예방을 위한 테트라히드로벤조푸로[2,3-C]피리딘 및 베타-카르볼린 화합물
본 발명은 신경원섬유 엉킴 (NFT)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 타우 (튜불린 회합 단위) 단백질 응집체와 연관된 일군의 장애 및 이상, 예컨대 알츠하이머병 (AD)의 치료, 완화 또는 예방에 사용될 수 있는 신규 화합물에 관한 것이다.
많은 노화 질환은 질환의 발병 뿐만 아니라 진행에 기여하는 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질의 세포외 또는 세포내 침착물을 기초로 하거나 또는 그와 연관된다. 세포외 응집체를 형성하는 가장 잘 특징화된 아밀로이드 단백질은 아밀로이드 베타 (Aβ)이다. 세포외 응집체를 형성하는 아밀로이드 단백질의 다른 예는 프리온, ATTR (트랜스티레틴) 또는 ADan (ADanPP)이다. 주로 세포내 응집체를 형성하는 아밀로이드-유사 단백질은 타우, 알파-시뉴클레인, TAR DNA-결합 단백질 43 (TDP-43), 및 헌팅틴 (htt)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 타우 응집체를 수반하는 질환은 일반적으로 타우병증, 예컨대 AD로서 열거된다.
아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 침착물은 단백질의 미스폴딩에 이은 응집에 의해 다수의 펩티드 또는 단백질이 분자간 수소 결합에 의해 함께 결합된 β-시트 어셈블리를 생성하는 것에 의해 발생한다. 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질은 상이한 1차 아미노산 서열을 갖지만, 그의 침착물은 종종 많은 공유 분자 성분을 함유하고, 특히 β-시트 4차 구조가 존재한다. 아밀로이드 침착물과 질환 사이의 연관성은 대부분 불명확한 상태로 남아있다. 질환 병리상태와 연관된 것 및 연관되지 않은 것 둘 다를 포함하여 다양한 범위의 단백질 응집체가 독성인 것으로 밝혀졌고, 이는 아밀로이드의 공통적인 분자 특색이 질환 발병에 연루되거나 또는 이를 담당한다는 것을 시사한다 (Bucciantini et al., Nature, 2002, 416, 507-11). β-시트 응집된 펩티드 또는 단백질의 다양한 다량체는 또한 이량체로부터 가용성 저분자량 올리고머, 원시섬유 또는 불용성 원섬유 침착물의 범위의 상이한 펩티드 또는 단백질에 관한 독성과 연관된다.
알츠하이머병 (AD)은 주로 뇌 내 (아밀로이드-베타) Aβ 응집체의 비정상적 침착물의 세포외 축적인 아밀로이드 플라크에 의해 유발되는 것으로 생각되는 신경계 장애이다. AD에서의 다른 주요 신경병리학적 특징은 과인산화된 타우 단백질, 미스폴딩된 타우 또는 병리학적 타우 및 그의 이형태체의 응집에 의해 기원한 세포내 신경원섬유 엉킴 (NFT)이다. AD는 그의 병인병리상태를 많은 신경변성 타우병증, 특히 명시된 유형의 전두측두엽 치매 (FTD)와 공유한다. 타우 단백질은 자유 가용성 "자연적으로 비폴딩된" 단백질로, 이는 마이크로튜불린 (MT)에 밀착 결합하여 그의 어셈블리 및 안정성을 촉진한다. MT는 뉴런의 세포골격 완전성에 매우 중요하고 - 이에 따라 뉴런 회로의 적절한 형성 및 기능, 따라서 학습 및 기억에 매우 중요하다. MT에의 타우의 결합은, 주로 시험관내 및 비-뉴런 세포에서 입증된 바와 같이, 동적 인산화 및 탈인산화에 의해 제어된다. AD 뇌에서, 타우 병리상태 (타우병증)는 아밀로이드 병리상태보다 늦게 발생하지만, Aβ 단백질이 소위 아밀로이드 캐스케이드 가설의 본질을 구성하는 AD의 원인 작용제인지는 여전히 논란의 여지가 있다 (Hardy et al., Science 1992, 256, 184-185; Musiek et al., Nature Neurosciences 2015, 18(6), 800-806). 아밀로이드를 타우 병리상태에 연결시키는 정확한 메카니즘은 대부분 미지상태로 남아있지만, 주요 "타우-키나제"로서 GSK3 및 cdk5에 대해 또는 그에 의해 작용하는 뉴런 신호전달 경로의 활성화를 수반하는 것으로 제안된다 (Muyllaert et al., Rev. Neurol. (Paris), 2006, 162, 903-7; Muyllaert et al., Genes Brain and Behav. 2008, Suppl 1, 57-66). 타우병증이 아밀로이드보다 늦게 발생하더라도, 이는 무해한 부작용이 아니고 AD의 주요 병리학적 실행자이다. 실험 마우스 모델에서, 아밀로이드 병리상태에 의해 유발된 인지 결함은 타우 단백질의 부재에 의해 거의 완전히 완화되고 (Roberson et al., Science, 2007, 316(5825), 750-4), 인지 기능장애 및 치매의 중증도는 아밀로이드 병리상태가 아닌 타우병증과 상관된다.
타우 응집체를 수반하는 질환은 일반적으로 타우병증으로 열거되고, 이는 알츠하이머병 (AD), 가족성 AD, PART (원발성 연령-관련 타우병증), 크로이츠펠트-야콥병, 권투선수 치매, 다운 증후군, 게르스트만-스트라우슬러-샤잉커병 (GSS), 봉입체 근염, 프리온 단백질 뇌 아밀로이드 혈관병증, 외상성 뇌 손상 (TBI), 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 괌형 파킨슨-치매 복합증, 신경원섬유 엉킴을 동반한 비-괌 운동 뉴런 질환, 은친화성 입자 질환, 피질기저 변성 (CBD), 석회화를 동반한 미만성 신경원섬유 엉킴, 염색체 17과 연관된 파킨슨증을 동반한 전두측두엽 치매 (FTDP-17), 할러보르덴-스파츠병, 다계통 위축 (MSA), 니만-픽병 유형 C, 담창구-교뇌-흑질 변성, 픽병 (PiD), 진행성 피질하 신경교증, 진행성 핵상 마비 (PSP), 아급성 경화성 범뇌염, 엉킴 우세 치매, 뇌염후 파킨슨증, 근긴장성 이영양증, 아급성 경화증 범뇌병증, LRRK2에서의 돌연변이, 만성 외상성 뇌병증 (CTE), 가족성 영국 치매, 가족성 덴마크 치매, 다른 전두측두엽 변성, 과들루프 파킨슨증, 뇌 철 축적을 동반한 신경변성, SLC9A6-관련 정신 지체, 구상 신경교 봉입체를 동반한 백질 타우병증, 간질, 루이 소체 치매 (LBD), 경도 인지 장애 (MCI), 다발성 경화증, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 성인 발병 당뇨병, 노인성 심장 아밀로이드증, 녹내장, 허혈성 졸중, AD 정신병 및 헌팅턴병을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. (Williams et al., Intern. Med. J., 2006, 36, 652-60; Kovacs et al., J Neuropathol Exp Neurol. 2008; 67(10): 963-975; Higuchi et al., Neuropsychopharmacology - 5th Generation of Progress, 2002, Section 9, Chapter 94: 1339-1354; Hilton et al., Acta Neuropathol. 1995;90(1):101-6; Iqbal et al., Biochimica et Biophysica Acta 1739 (2005) 198- 210; McQuaid et al., Neuropathol Appl Neurobiol. 1994 Apr;20(2):103-10; Vossel et al., Lancet Neurol 2017; 16: 311-22; Stephan et al., Molecular Psychiatry (2012) 17, 1056-1076; Anderson et al., Brain (2008), 131, 1736-1748; Savica et al., JAMA Neurol. 2013;70(7):859-866; Brown et al. Molecular Neurodegeneration 2014, 9:40; El Khoury et al., Front. Cell. Neurosci., 2014, Volume 8, Article22: 1-18; Tanskanen et al., Ann. Med. 2008;40(3):232-9; Gupta et al., CAN J OPHTHALMOL―VOL. 43, NO. 1, 2008: 53-60; Dickson et al., Int J Clin Exp Pathol 2010;3(1):1-23; Fernandez-Nogales et al., Nature Medicine, 20, 881-885 (2014); Bi et al., Nature Communications volume 8, Article number: 473 (2017); Murray et al., Biol Psychiatry. 2014 April 1; 75(7): 542-552).
2017년 알츠하이머병의 치료를 위한 임상 시험 중인 모든 작용제 중에서, 타우를 표적화하는 것은 매우 드물었고, II상 임상 시험의 단지 8%인 것으로 나타났다 (Cummings et al., Alzheimer's & Dementia: Translational Research & Clinical Interventions 3 (2017) 367-384). 타우 단백질을 표적화하는 현행 치료 접근법은 주로 항체-기반 접근법을 포함하며, 이는 세포외 타우만을 표적화한다는 주요 제한을 갖는다. 소형 분자를 사용하는 접근법 중에서, 독성 및 특이성과 관련하여 매우 도전과제임에도 불구하고, 여러 타우 키나제 억제제가 개발되었다. 그럼에도 불구하고, 현재 단 1종의 키나제 억제제인 닐로티닙만이 임상 시험에서 시험된다. 마지막으로, 타우 응집 억제제 중에서 단 1종, LMTX만이 현재 임상 시험 중에 있다 (Cummings et al., 2017). 최근 몇 년간 타우-기반 치료에 점점 초점이 맞춰져 왔지만, 타우병증을 유발하는 것으로 알려져 있거나 추정되는 병리학적 타우 이형태체를 표적화하는 추가의 치료제에 대한 큰 필요는 여전히 존재한다.
WO2011/128455는 아밀로이드 단백질 또는 아밀로이드-유사 단백질과 연관된 장애를 치료하는데 적합한 특정 화합물을 언급한다.
도 1: 실시예 44를 사용한 분화된 신경모세포종 세포에서의 면역세포화학에 의한 세포내 타우 미스폴딩의 감소. 데이터는 평균 + SD로 제시된다.
본 발명의 목적은 NFT를 포함하나 이에 제한되지는 않는 타우 단백질 응집체와 연관된 일군의 장애 및 이상, 예컨대 알츠하이머병 (AD)의 치료, 완화 또는 예방에 사용될 수 있는 화합물을 제공하는 것이다. 추가로, (a) 응집된 타우를 인식하고 타우를 분해함으로써, 예를 들어 타우 응집체 분자 입체형태를 변화시킴으로써 타우 응집체/NFT를 감소시키고/거나, (b) 타우 응집체의 형성을 방지하고/거나, (c) 타우 응집체를 세포내 간섭하는 치료제로서 사용될 수 있는 화합물에 대한 관련 기술분야의 필요가 존재한다. 본 발명자들은 놀랍게도 이들 목적이 하기 기재된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물에 의해 달성될 수 있다는 것을 발견하였다.
화학식 (I)의 화합물은 응집된 타우를 인식하고 타우를 분해함으로써, 예를 들어 타우 응집체 분자 입체형태를 변화시킴으로써 타우 응집체를 감소시키는데 높은 능력을 나타낸다. 화학식 (I)의 일부 화합물은 타우 응집체의 형성을 방지하고/거나 타우 응집체를 세포내 간섭한다. 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 화학식 (I)의 화합물은 타우 응집을 억제하거나 또는 세포내 존재하는 경우를 포함하여 사전형성된 타우 응집체를 분해하는 것으로 가정된다. 그의 고유한 설계 특색으로 인해, 이들 화합물은 타우병증의 치료, 완화 또는 예방을 위한 성공적인 의약이기 위한, 적절한 친지성 및 분자량, 뇌 흡수 및 약동학, 세포 투과성, 용해도 및 대사 안정성과 같은 특성을 나타낸다.
초미세구조 분석은 타우 봉입체가 쌍형성된 나선형 필라멘트 (PHF) 또는 직선형 필라멘트 (SF)로 구성된다는 것을 보여주었다. 고해상도 구조 분석은 이들 필라멘트가 교차 베타 / 베타-나선 구조를 구성하는 타우의 아미노산 306-378을 포함하는 코어 영역으로 구성된다는 것을 보여주었다. 본 발명의 화합물은 응집된 타우를 인식할 수 있고, 예를 들어, 타우 응집체 분자 입체형태를 변화시킴으로써 타우를 분해할 수 있고, 따라서 타우 클리어런스를 용이하게 할 것으로 기대할 수 있다.
또한, 타우는 세포에서-세포로 전파할 수 있을 뿐만 아니라, 특정 형태의 타우 (종자로서 작용함)는 건강한 세포 내에서 천연 타우 단백질의 구조적 변화를 유도하여 미스폴딩 및 응집을 겪게 할 수 있다는 것이 밝혀졌다. 응집된 타우는 시딩을 야기하고, 따라서 타우 병리상태 확산을 야기하는 것으로 생각된다. 본 발명의 화합물은 응집된 타우를 세포내에서 간섭할 수 있고, 따라서 타우 병리상태 확산을 감소시키고 최종적으로 AD에서의 연관된 인지 결핍을 예방하거나 감소시킬 것으로 기대할 수 있다.
본 발명은 타우 응집체를 감소시키고, 응집된 타우를 인식하고, 예를 들어 타우 응집체 분자 입체형태를 변화시킴으로써 타우를 분해하는 능력을 갖는 화학식 (I)의 신규 화합물을 개시한다.
본 발명은 타우 응집체의 형성을 방지하고/거나 타우 응집체를 세포내 간섭하는 능력을 갖는 화학식 (I)의 일부 신규 화합물을 개시한다.
본 발명은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약 조성물을 사용하여, NFT를 포함하나 이에 제한되지는 않는 타우 단백질 응집체와 연관된 장애 및 이상을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 추가로, 화학식 (I)의 화합물 및 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 하기 항목으로 요약된다:
1. 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 입체이성질체, 라세미 혼합물, 호변이성질체, 제약상 허용되는 염, 전구약물, 수화물, 용매화물 및 다형체.
Figure 112020130910314-pct00001
여기서
A는
Figure 112020130910314-pct00002
로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서
Figure 112020130910314-pct00003
는 N 원자에 임의의 이용가능한 위치에서 부착될 수 있고, 여기서 E 및 V를 함유하는 5-원 고리는 불포화이고, 여기서
Figure 112020130910314-pct00004
는 1개 이상의 치환기 Rj에 의해 치환되고;
B는 O 및 NRa로 이루어진 군으로부터 선택되고;
E 및 V는 독립적으로 N, NR5, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고;
G는 벤젠 고리 및 피리딘 고리로 이루어진 군으로부터 선택되고;
J는 O, N-R1 및 CH2로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 J는 J가 R2에 부착된 경우에 CH 또는 C로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Y, Y1, Y2 및 Y3은 CZ이고;
Z는 독립적으로 H, 할로겐, O-알킬, 알킬 및 CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R은 독립적으로
Figure 112020130910314-pct00005
및 -NR3R4로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Ra는 H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Rd, Re, Rf, 및 Rg는 독립적으로 H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 Rd, Re, Rf, 및 Rg 중 임의의 2개는 연결되어 3 내지 8-원 고리를 형성할 수 있고;
Rj는 -할로겐, -O-알킬, -NR3R4, -CN,
Figure 112020130910314-pct00006
로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 C1-2 탄소 원자-함유 가교 또는 결합은 a 탄소 원자와 c 또는 d 탄소 원자 사이에 존재할 수 있거나, 또는 여기서 C1-2 탄소 원자-함유 가교 또는 결합은 b 탄소 원자와 c 또는 d 탄소 원자 사이에 존재할 수 있고;
R1은 H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R2는 독립적으로 알킬 또는 -O-알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 2개의 R2가 같은자리인 경우에, 이들은 연결되어 3 내지 6-원 고리를 형성할 수 있고;
R3 및 R4는 독립적으로 H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R5는 H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
r 및 s는 독립적으로 0, 1, 2 또는 3이고;
t 및 u는 독립적으로 1, 2 또는 3이다.
2. 항목 1에 있어서, 화학식 (Ia)의 화합물이며:
Figure 112020130910314-pct00007
여기서, A, Ra, Rd, Re, Rf, Rg, Y, Y1, Y2 및 Y3은 항목 1에 정의된 바와 같은 것인 화합물.
3. 항목 1 또는 2에 있어서, A가
Figure 112020130910314-pct00008
이고, 여기서
Figure 112020130910314-pct00009
는 N 원자에 임의의 이용가능한 위치에서 부착될 수 있고, 여기서 A는 1개 이상의 치환기 Rj에 의해 치환되고, 여기서 Rj는 항목 1에 정의된 바와 같은 것인 화합물.
4. 항목 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 화학식 (Ib)의 화합물이며:
Figure 112020130910314-pct00010
여기서, Ra, Rj 및 Z는 항목 1에 정의된 바와 같고, p는 1 또는 2인 화합물.
5. 항목 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물.
Figure 112020130910314-pct00011
Figure 112020130910314-pct00012
Figure 112020130910314-pct00013
Figure 112020130910314-pct00014
6. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물, 및 임의로 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
7. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 화합물.
8. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 타우 단백질 응집체와 연관된 장애 또는 이상의 치료, 완화 또는 예방에 사용하기 위한 화합물.
9. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 타우 응집을 감소시키는데 사용하기 위한 화합물.
10. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 타우 응집체의 형성을 방지하는데 사용하기 위한 및/또는 타우 응집을 억제하는데 사용하기 위한 화합물.
11. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 타우 응집체를 세포내 간섭하는데 사용하기 위한 화합물.
12. 타우 단백질 응집체와 연관된 장애의 치료, 예방 또는 완화를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 타우 단백질 응집체와 연관된 장애를 치료, 예방 또는 완화하는 방법.
13. 타우 응집의 감소를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 타우 응집을 감소시키는 방법.
14. 타우 응집체의 형성의 방지 및/또는 타우 응집의 억제를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 타우 응집체의 형성을 방지하고/거나 타우 응집을 억제하는 방법.
15. 타우 응집체의 세포내 간섭을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 타우 응집체를 세포내 간섭하는 방법.
16. 타우 단백질 응집체와 연관된 장애 또는 이상의 치료를 위한 의약의 제조에서의 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물의 용도.
17. 타우 응집을 감소시키기 위한 의약의 제조에서의 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물의 용도.
18. 타우 응집체의 형성을 방지하고/거나 타우 응집을 억제하는데 사용하기 위한 의약의 제조에서의 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물의 용도.
19. 타우 응집체를 세포내 간섭하기 위한 의약의 제조에서의 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물의 용도.
20. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물, 및 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물과 상이한 치료제로부터 선택된 적어도 1종의 추가의 생물학적 활성 화합물, 제약상 허용되는 담체, 희석제 및 부형제를 포함하는 혼합물.
21. 항목 20에 있어서, 추가의 생물학적 활성 화합물이 아밀로이드증의 치료에 사용되는 화합물인 혼합물.
22. 항목 20 또는 21에 있어서, 추가의 생물학적 활성 화합물이 산화성 스트레스에 대한 화합물, 항아폽토시스 화합물, 금속 킬레이트화제, DNA 복구 억제제, 예컨대 피렌제핀 및 대사물, 3-아미노-1-프로판술폰산 (3APS), 1,3-프로판디술포네이트 (1,3PDS), α-세크레타제 활성화제, β- 및 γ-세크레타제 억제제, 타우 단백질, 신경전달물질, β-시트 브레이커, 아밀로이드 베타 소거 / 고갈 세포 성분 유인제, 피로글루타메이트화 아밀로이드 베타 3-42를 포함한 N-말단 말단절단된 아밀로이드 베타의 억제제, 항염증 분자, 또는 콜린에스테라제 억제제 (ChEI) 예컨대 타크린, 리바스티그민, 도네페질, 및/또는 갈란타민, M1 효능제, 임의의 아밀로이드 또는 타우 변형 약물을 포함한 다른 약물 및 영양 보충제, 임의의 기능적 등가 항체 또는 그의 기능적 부분을 포함한 항체 또는 백신으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 혼합물.
23. 항목 22에 있어서, 추가의 생물학적 활성 화합물이 콜린에스테라제 억제제 (ChEI)인 혼합물.
24. 항목 22에 있어서, 추가의 생물학적 활성 화합물이 타크린, 리바스티그민, 도네페질, 갈란타민, 니아신 및 메만틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 혼합물.
25. 항목 22에 있어서, 추가의 생물학적 활성 화합물이, 임의의 기능적 등가 항체 또는 그의 기능적 부분을 포함한 항체, 특히 모노클로날 항체인 혼합물.
26. 항목 20 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 화합물 및/또는 추가의 생물학적 활성 화합물이 치료 유효량으로 존재하는 것인 혼합물.
27. 항목 8, 항목 12, 및 항목 16 중 어느 하나에 있어서, 장애가 알츠하이머병 (AD), 가족성 AD, 원발성 연령-관련 타우병증 (PART), 크로이츠펠트-야콥병, 권투선수 치매, 다운 증후군, 게르스트만-스트라우슬러-샤잉커병 (GSS), 봉입체 근염, 프리온 단백질 뇌 아밀로이드 혈관병증, 외상성 뇌 손상 (TBI), 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 괌형 파킨슨-치매 복합증, 신경원섬유 엉킴을 동반한 비-괌 운동 뉴런 질환, 은친화성 입자 질환, 피질기저 변성 (CBD), 석회화를 동반한 미만성 신경원섬유 엉킴, 염색체 17과 연관된 파킨슨증을 동반한 전두측두엽 치매 (FTDP-17), 할러보르덴-스파츠병, 다계통 위축 (MSA), 니만-픽병 유형 C, 담창구-교뇌-흑질 변성, 픽병 (PiD), 진행성 피질하 신경교증, 진행성 핵상 마비 (PSP), 아급성 경화성 범뇌염, 엉킴 우세 치매, 뇌염후 파킨슨증, 근긴장성 이영양증, 아급성 경화증 범뇌병증, LRRK2에서의 돌연변이, 만성 외상성 뇌병증 (CTE), 가족성 영국 치매, 가족성 덴마크 치매, 다른 전두측두엽 변성, 과들루프 파킨슨증, 뇌 철 축적을 동반한 신경변성, SLC9A6-관련 정신 지체, 구상 신경교 봉입체를 동반한 백질 타우병증, 간질, 루이 소체 치매 (LBD), 경도 인지 장애 (MCI), 다발성 경화증, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 성인 발병 당뇨병, 노인성 심장 아밀로이드증, 녹내장, 허혈성 졸중, AD 정신병 및 헌팅턴병, 바람직하게는 알츠하이머병 (AD), 피질기저 변성 (CBD), 픽병 (PiD), 및 진행성 핵상 마비 (PSP)로부터 선택된 것인 화합물, 방법, 또는 용도.
28. 분석 참조물 또는 시험관내 스크리닝 도구로서의 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화합물의 용도.
29. 하기 화학식의 화합물:
Figure 112020130910314-pct00015
또는 그의 제약상 허용되는 염.
정의
본 출원의 의미 내에서, 하기 정의가 적용된다:
"알킬"은 탄소 및 수소 원자로 이루어진 포화 직쇄형 또는 분지형 유기 모이어티를 지칭한다. 적합한 알킬 기의 예는 1 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖고, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸 및 이소부틸을 포함한다.
"Hal" 또는 "할로겐"은 F, Cl, Br, 및 I, 바람직하게는 F를 지칭한다.
"3- 내지 8-원 고리"는 3-, 4-, 5-, 6-, 7- 또는 8-원 고리를 지칭하며, 여기서 고리 내의 탄소 원자 중 0개, 1개 또는 그 초과는 1 또는 2개 (3-원 고리의 경우), 1, 2 또는 3개 (4-원 고리의 경우), 1, 2, 3, 또는 4개 (5-원 고리의 경우) 또는 1, 2, 3, 4, 또는 5개 (6-원 고리의 경우) 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 (7-원 고리의 경우), 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개 (8-원 고리의 경우)의 동일하거나 상이한 헤테로원자에 의해 대체되고, 여기서 헤테로원자는 O, N 및 S로부터 선택된다.
1종 이상의 광학 활성 탄소를 갖는 본 발명의 화합물은 라세미체 및 라세미 혼합물 (모든 비의 혼합물 포함), 입체이성질체 (부분입체이성질체 혼합물 및 개별 부분입체이성질체, 거울상이성질체 혼합물 및 단일 거울상이성질체, 이형태체의 혼합물 및 단일 이형태체), 호변이성질체, 회전장애이성질체, 및 회전이성질체로 존재할 수 있다. 모든 이성질체 형태는 본 발명에 포함된다. 올레핀계 이중 결합을 함유하는 본 발명에 기재된 화합물은 E 및 Z 기하 이성질체를 포함한다. 또한, 본 발명에는 모든 제약상 허용되는 염, 전구약물, 다형체, 수화물 및 용매화물이 포함된다.
용어 "다형체"는 본 발명의 화합물의 다양한 결정질 구조를 지칭한다. 이는 결정 형태학 (및 무정형 물질) 및 모든 결정 격자 형태를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 염은 결정질일 수 있고, 1종 초과의 다형체로서 존재할 수 있다.
염의 용매화물, 수화물 뿐만 아니라 무수 형태가 또한 본 발명에 포괄된다. 용매화물에 포함되는 용매는 특별히 제한되지 않고, 임의의 제약상 허용되는 용매일 수 있다. 예는 물 및 C1-4 알콜 (예컨대 메탄올 또는 에탄올)을 포함한다.
"제약상 허용되는 염"은 모 화합물이 그의 산 또는 염기 염을 제조함으로써 변형된, 개시된 화합물의 유도체로서 정의된다. 제약상 허용되는 염의 예는 염기성 잔기, 예컨대 아민의 무기 또는 유기 산 염; 산성 잔기, 예컨대 카르복실산의 알칼리 또는 유기 염 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 제약상 허용되는 염은, 예를 들어, 비-독성 무기 또는 유기 산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 비-독성 염 또는 4급 암모늄 염을 포함한다. 예를 들어, 이러한 통상적인 비-독성 염은 무기 산 예컨대, 비제한적으로, 염산, 브로민화수소산, 황산, 술팜산, 인산, 질산 등으로부터 유도된 것; 및 유기 산 예컨대, 비제한적으로, 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 스테아르산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 파모산, 말레산, 히드록시말레산, 페닐아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 술파닐산, 2-아세톡시벤조산, 푸마르산, 톨루엔술폰산, 메탄술폰산, 에탄 디술폰산, 옥살산, 이세티온산 등으로부터 제조된 염을 포함한다. 본 발명의 제약상 허용되는 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티를 함유하는 모 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 유리 산 또는 염기 형태의 이들 화합물을 화학량론적 양의 적절한 염기 또는 산과 물 중에서 또는 유기 용매 중에서, 또는 2종의 혼합물 중에서 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 유기 용매는 비수성 매질, 예컨대 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올, 또는 아세토니트릴을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 적합한 염의 목록은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1990, p. 1445]에서 찾아볼 수 있고, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
본 발명의 화합물은 또한 전구약물, 즉 생체내에서 활성 대사물로 대사되는 화합물의 형태로 제공될 수 있다. 본 발명의 설명 및 특허청구범위에서 이하에 사용된 바와 같이, 용어 "전구약물"은 생체내 생체변환으로 인해 활성 모 제약을 방출하는 임의의 공유 결합된 화합물을 의미한다. 전구약물을 일반적으로 기재하고 있는 참고문헌 [Goodman and Gilman (The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8 ed, McGraw-Hill, Int. Ed. 1992, "Biotransformation of Drugs", p 13-15)]은 본원에 참조로 포함된다.
"제약상 허용되는"은 타당한 의학적 판단의 범주 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 합리적인 이익/위험 비에 상응하는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 그러한 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 투여 형태로서 정의된다.
본 발명에서 환자 또는 대상체는 전형적으로 동물, 특히 포유동물, 보다 특히 인간이다.
본원에 사용된 "타우"는 대부분 뉴런에서 발견되는 고도로 가용성인 미세관 결합 단백질을 지칭하고, 주요 6가지의 이소형, 절단된 또는 말단절단된 형태, 및 인산화, 글리코실화, 당화, 프롤릴 이성질화, 니트로화, 아세틸화, 폴리아민화, 유비퀴틴화, SUMO화 및 산화로부터 발생한 것과 같은 다른 변형된 형태를 포함한다.
"응집된 타우"는 올리고머 또는 중합체 구조로 폴딩된 타우 펩티드 또는 단백질의 응집된 단량체를 지칭한다.
본원에 사용된 "신경원섬유 엉킴" (NFT)은 쌍형성된 나선형 필라멘트 (PHF) 및 직쇄형 필라멘트를 함유하는 과인산화 타우 단백질의 불용성 응집체를 지칭한다. 그의 존재는 AD 및 타우병증으로 공지된 다른 질환의 특징이다.
"정의"-섹션에 주어진 정의 및 바람직한 정의는 달리 언급되지 않는 한 하기 기재된 모든 실시양태에 적용된다.
발명의 상세한 설명
본 발명의 화합물은 하기에 기재될 것이다. 하기 정의의 모든 가능한 조합이 또한 고려된다는 것이 이해되어야 한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물:
Figure 112020130910314-pct00016
또는 그의 입체이성질체, 라세미 혼합물, 호변이성질체, 제약상 허용되는 염, 전구약물, 수화물, 용매화물 및 다형체에 관한 것이다.
화학식 (I)의 화합물의 바람직한 실시양태는
Figure 112020130910314-pct00017
이다.
화학식 (I)의 화합물의 추가의 바람직한 실시양태는
Figure 112020130910314-pct00018
이다.
보다 바람직하게는, 화학식 (I)의 화합물은
Figure 112020130910314-pct00019
이다.
A의 하기 정의는 화학식 (I)의 화합물 및 그의 바람직한 실시양태에 적용된다.
A는
Figure 112020130910314-pct00020
로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식
Figure 112020130910314-pct00021
에서, G는 벤젠 고리 및 피리딘 고리로부터 선택된다. 따라서
Figure 112020130910314-pct00022
는 하기 실시양태를 포괄한다
Figure 112020130910314-pct00023
. 바람직한 실시양태에서,
Figure 112020130910314-pct00024
는
Figure 112020130910314-pct00025
로부터 선택된다. 추가의 바람직한 실시양태에서,
Figure 112020130910314-pct00026
는
Figure 112020130910314-pct00027
이다. 하나의 바람직한 실시양태에서, A는
Figure 112020130910314-pct00028
이다. 보다 바람직한 실시양태에서, A는
Figure 112020130910314-pct00029
로부터 선택된다. 추가의 바람직한 실시양태에서, A는
Figure 112020130910314-pct00030
로부터 선택된다. 보다 더 바람직한 실시양태에서, A는
Figure 112020130910314-pct00031
이다.
A의 상기 정의 및 그의 바람직한 실시양태에서,
Figure 112020130910314-pct00032
는 N 원자에 임의의 이용가능한 위치에서 부착될 수 있다.
A의 상기 정의 및 그의 바람직한 실시양태에서, A는 1개 이상의 치환기 Rj에 의해 치환되며, 예를 들어 Rj는 1회 또는 2회 존재할 수 있다. A가 페닐 고리인 경우에, 1 또는 2개의 치환기가 바람직하게 존재할 수 있다. A가 피리딘 고리인 경우에, 1개의 치환기가 바람직하게 존재할 수 있다.
하기 정의는 적절한 경우에 화학식 (I) 및 그의 바람직한 실시양태에 적용된다.
B는 O 및 NRa로 이루어진 군으로부터 선택된다. 보다 바람직하게는 B는 NRa이다.
E 및 V는 독립적으로 N, NR5, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되어,
Figure 112020130910314-pct00033
는
Figure 112020130910314-pct00034
Figure 112020130910314-pct00035
로부터 선택된다.
바람직하게는
Figure 112020130910314-pct00036
는
Figure 112020130910314-pct00037
로부터 선택된다.
E, V 및 G의 동일한 조합이
Figure 112020130910314-pct00038
에 대해 고려될 수 있다.
J는 O, N-R1 및 CH2로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 J는 J가 R2에 부착된 경우에 CH 또는 C로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, J는 O이고, 또 다른 실시양태에서 J는 N-R1 (바람직하게는 N-Me)이고, 추가 실시양태에서 J는 CH2, CH 또는 C이다.
Y, Y1, Y2 및 Y3은 CZ이고, 보다 바람직하게는 Y, Y1, Y2 및 Y3은 CH이다.
Z는 독립적으로 H, 할로겐 (바람직하게는 F), O-알킬, 알킬 및 CN, 바람직하게는 H, 할로겐 (바람직하게는 F), 및 O-알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 바람직한 실시양태에서, 하나의 Z는 할로겐 (바람직하게는 F), 또는 O-알킬이고, 다른 Z는 H이다. 보다 바람직한 실시양태에서, 하나의 Z는 할로겐 (바람직하게는 F)이고, 다른 Z는 H이다.
R은 독립적으로
Figure 112020130910314-pct00039
및 -NR3R4로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 R은
Figure 112020130910314-pct00040
이다.
Ra는 H 및 알킬, 보다 바람직하게는 H 및 Me로 이루어진 군으로부터 선택된다.
Rd, Re, Rf, 및 Rg는 독립적으로 H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 Rd, Re, Rf, 및 Rg 중 임의의 2개는 연결되어 3 내지 8-원 고리를 형성할 수 있다. 바람직하게는 Rd, Re, Rf, Rg는 독립적으로 H이거나, 또는 Rd 및 Rf는 함께 연결되어 C1-2 탄소 원자-함유 가교를 형성할 수 있다. 보다 바람직하게는 Rd, Re, Rf, 및 Rg는 H이다.
Rj는 독립적으로 -할로겐, -O-알킬, -NR3R4, -CN,
Figure 112020130910314-pct00041
로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 C1-2 탄소 원자-함유 가교 또는 결합은 a 탄소 원자와 c 또는 d 탄소 원자 사이에 존재할 수 있거나, 또는 여기서 C1-2 탄소 원자-함유 가교 또는 결합은 b 탄소 원자와 c 또는 d 탄소 원자 사이에 존재할 수 있다. 보다 바람직하게는, Rj는 -할로겐 (바람직하게는 -F), -O-알킬 (바람직하게는 -O-Me), 및
Figure 112020130910314-pct00042
(바람직하게는
Figure 112020130910314-pct00043
)로 이루어진 군으로부터 선택되고, 보다 더 바람직하게는 Rj는
Figure 112020130910314-pct00044
이다.
R1은 H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 알킬, 보다 바람직하게는 CH3이다.
R2는 독립적으로 알킬 또는 -O-알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 2개의 R2가 같은자리인 경우에, 이들은 연결되어 3 내지 6-원 고리를 형성할 수 있다. 한 실시양태에서, R2는 알킬이고, 또 다른 실시양태에서 R2는 -O-알킬이고, 추가 실시양태에서 같은자리인 2개의 R2는 연결되어 3 내지 6-원 고리를 형성할 수 있다.
R3 및 R4는 독립적으로 H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, R3 또는 R4는 알킬이고, 다른 것은 H이다. 또 다른 실시양태에서 R3은 알킬이고, R4는 알킬이다. 추가 실시양태에서, R3 및 R4는 H이다.
R5는 H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서 R5는 H이다. 또 다른 실시양태에서 R5는 알킬이다.
n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고, 보다 바람직하게는 0, 1 또는 2이고, 보다 더 바람직하게는 n은 0이다.
p는 1 또는 2이고, 보다 바람직하게는 1이다.
r 및 s는 독립적으로 0, 1, 2 또는 3이다.
t 및 u는 독립적으로 1, 2 또는 3이다.
화학식 (I)의 바람직한 화합물은 하기이다:
Figure 112020130910314-pct00045
Figure 112020130910314-pct00046
Figure 112020130910314-pct00047
바람직한 화합물이 또한 실시예에 예시된다.
본원에 개시된 실시양태, 바람직한 실시양태 및 보다 바람직한 실시양태의 임의의 조합이 또한 본 발명에서 고려된다.
제약 조성물
본 발명의 화합물은 단독으로 투여하는 것이 가능하지만, 표준 제약 실시에 따라 제약 조성물로 제제화하는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명은 또한 임의로 제약상 허용되는 담체, 희석제, 아주반트 또는 부형제와 혼합된 치료 유효량의 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
제약상 허용되는 부형제는 제약 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publishing Co., New Jersey (1975)]에 기재되어 있다. 제약 부형제는 의도한 투여 경로 및 표준 제약 실시와 관련하여 선택할 수 있다. 부형제는 그의 수용자에게 유해하지 않다는 의미에서 허용가능해야 한다.
본 발명의 제약 조성물의 제제에 사용될 수 있는 제약상 유용한 부형제는 예를 들어 담체, 비히클, 희석제, 용매, 예컨대 1가 알콜, 예컨대 에탄올, 이소프로판올 및 다가 알콜, 예컨대 글리콜 및 식용 오일, 예컨대 대두 오일, 코코넛 오일, 올리브 오일, 홍화 오일, 목화씨 오일, 유성 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트, 결합제, 아주반트, 가용화제, 증점제, 안정화제, 붕해제, 활택제, 윤활제, 완충제, 유화제, 습윤제, 현탁화제, 감미제, 착색제, 향미제, 코팅제, 보존제, 항산화제, 가공제, 약물 전달 조절제 및 증진제, 예컨대 인산칼슘, 스테아르산마그네슘, 활석, 모노사카라이드, 디사카라이드, 전분, 젤라틴, 셀룰로스, 메틸셀룰로스, 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 덱스트로스, 히드록시프로필-β-시클로덱스트린, 폴리비닐피롤리돈, 저융점 왁스 및 이온 교환 수지를 포함할 수 있다.
본 발명의 화합물의 투여 (전달) 경로는 경구 (예를 들어, 정제, 캡슐, 또는 섭취가능한 용액으로서), 국소, 점막 (예를 들어, 비강 스프레이 또는 흡입용 에어로졸로서), 비강, 비경구 (예를 들어, 주사가능한 형태에 의함), 위장, 척수내, 복강내, 근육내, 정맥내, 자궁내, 안내, 피내, 두개내, 기관내, 질내, 뇌실내, 뇌내, 피하, 안과적 (유리체내 또는 전방내 포함), 경피, 직장, 협측, 경막외 및 설하 중 1가지 이상을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
예를 들어, 화합물은 즉시-, 지연-, 변형-, 지속-, 펄스- 또는 제어-방출 적용을 위해, 향미제 또는 착색제를 함유할 수 있는 정제, 캡슐, 오뷸, 엘릭시르, 용액 또는 현탁액의 형태로 경구로 투여될 수 있다.
정제는 부형제, 예컨대 미세결정질 셀룰로스, 락토스, 시트르산나트륨, 탄산칼슘, 이염기성 인산칼슘 및 글리신, 붕해제, 예컨대 전분 (바람직하게는 옥수수, 감자 또는 타피오카 전분), 소듐 스타치 글리콜레이트, 크로스카르멜로스 소듐 및 특정 복합 실리케이트, 및 과립화 결합제, 예컨대 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필메틸셀룰로스 (HPMC), 히드록시프로필셀룰로스 (HPC), 수크로스, 젤라틴 및 아카시아를 함유할 수 있다. 추가적으로, 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘, 스테아르산, 글리세릴 베헤네이트 및 활석이 포함될 수 있다. 유사한 유형의 고체 조성물이 또한 젤라틴 캡슐에서 충전제로서 사용될 수 있다. 이와 관련하여 바람직한 부형제는 락토스, 전분, 셀룰로스, 유당 또는 고분자량 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 수성 현탁액 및/또는 엘릭시르의 경우, 작용제는 다양한 감미제 또는 향미제, 색소 또는 염료, 유화제 및/또는 현탁화제, 및 희석제, 예컨대 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜 및 글리세린, 및 그의 조합과 조합될 수 있다.
본 발명의 화합물이 비경구로 투여되는 경우에, 이러한 투여의 예는 화합물을 정맥내로, 동맥내로, 복강내로, 척수강내로, 뇌실내로, 요도내로, 흉골내로, 두개내로, 근육내로 또는 피하로 투여하는 것; 및/또는 주입 기술을 사용하는 것 중 하나 이상을 포함한다. 비경구 투여의 경우에, 화합물은 멸균 수용액의 형태로 가장 잘 사용되며, 이는 다른 물질, 예를 들어 용액을 혈액과 등장성이게 하는 충분한 염 또는 글루코스를 함유할 수 있다. 필요하다면, 수용액은 적합하게 완충되어야 한다 (바람직하게는 pH 3 내지 9로). 멸균 조건 하에서의 적합한 비경구 제제의 제조는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 표준 제약 기술에 의해 용이하게 달성된다.
나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물은 비강내로 또는 흡입에 의해 투여될 수 있고, 적합한 추진제, 예를 들어 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 히드로플루오로알칸 예컨대 1,1,1,2-테트라플루오로에탄 (HFA134AT) 또는 1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로프로판 (HFA 227EA), 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체의 사용에 의해 가압 용기, 펌프, 스프레이 또는 네뷸라이저로부터 건조 분말 흡입물 또는 에어로졸 스프레이 제공물의 형태로 편리하게 전달된다. 가압 에어로졸의 경우에, 투여 단위는 계량된 양을 전달하도록 밸브를 제공함으로써 결정될 수 있다. 가압 용기, 펌프, 스프레이 또는 네뷸라이저는 예를 들어 에탄올 및 추진제의 혼합물을 용매로서 사용한 활성 화합물의 용액 또는 현탁액을 함유할 수 있으며, 이는 추가적으로 윤활제, 예를 들어 소르비탄 트리올레에이트를 함유할 수 있다. 흡입기 또는 취입기에 사용하기 위한 캡슐 및 카트리지 (예를 들어, 젤라틴으로 제조됨)는 화합물 및 적합한 분말 베이스, 예컨대 락토스 또는 전분의 분말 혼합물을 함유하도록 제제화될 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 화합물은 좌제 또는 페사리의 형태로 투여될 수 있거나, 또는 겔, 히드로겔, 로션, 용액, 크림, 연고 또는 산포제의 형태로 국소로 적용될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 예를 들어 피부 패치의 사용에 의해 피부로 또는 경피로 투여될 수 있다.
이는 또한 폐 또는 직장 경로에 의해 투여될 수 있다. 이는 또한 안구 경로에 의해 투여될 수 있다. 안과적 용도를 위해, 화합물은 임의로 보존제, 예컨대 벤질알코늄 클로라이드와 조합된, 등장성, pH 조정된 멸균 염수 중 마이크로화 현탁액으로서, 또는 바람직하게는 등장성, pH 조정된 멸균 염수 중 용액으로서 제제화될 수 있다. 대안적으로, 이는 연고, 예컨대 페트롤라툼으로 제제화될 수 있다.
피부에 국소로 적용하기 위해, 본 발명의 화합물은 예를 들어 하기: 미네랄 오일, 액체 페트롤라툼, 백색 페트롤라툼, 프로필렌 글리콜, 유화 왁스 및 물 중 1종 이상과의 혼합물 중에 현탁되거나 용해된 활성 화합물을 함유하는 적합한 연고로서 제제화될 수 있다. 대안적으로, 이는 예를 들어 하기: 미네랄 오일, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리에틸렌 글리콜, 액체 파라핀, 폴리소르베이트 60, 세틸 에스테르 왁스, 세테아릴 알콜, 2-옥틸도데칸올, 벤질 알콜 및 물 중 1종 이상의 혼합물 중에 현탁되거나 용해된 적합한 로션 또는 크림으로서 제제화될 수 있다.
전형적으로, 의사는 개별 대상체에게 가장 적합할 실제 투여량을 결정할 것이다. 임의의 특정한 개체에 대한 구체적인 용량 수준 및 투여 빈도는 달라질 수 있고, 사용된 구체적 화합물의 활성, 그러한 화합물의 대사 안정성 및 작용 기간, 연령, 체중, 전반적 건강, 성별, 식이, 투여 방식 및 시간, 배출 속도, 약물 조합물, 특정한 상태의 중증도, 및 개체가 받고 있는 요법을 비롯한 다양한 인자에 좌우될 것이다.
(대략 70 kg 체중의) 인간에게 투여하기 위한 본 발명에 따른 화합물의 제안되는 용량은 단위 용량 당 활성 성분 0.1 mg 내지 1 g, 바람직하게는 1 mg 내지 500 mg이다. 단위 용량은 예를 들어 1일 1 내지 4회 투여될 수 있다. 용량은 또한 투여 경로에 좌우될 것이다. 환자의 연령 및 체중 뿐만 아니라 치료할 상태의 중증도에 따라 투여량에 대해 상용 변경을 가할 필요가 있을 수 있다는 것이 인지될 것이다. 정확한 용량 및 투여 경로는 궁극적으로 담당 의사 또는 수의사의 판단에 의할 것이다.
본 발명의 화합물은 또한 다른 치료제와 조합되어 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물이 동일한 질환에 대해 활성인 제2 치료제와 조합되어 사용되는 경우, 각각의 화합물의 용량은 화합물이 단독으로 사용되는 경우와 상이할 수 있다.
상기 언급된 조합물은 제약 제제의 형태로의 사용을 위해 편리하게 제공될 수 있다. 이러한 조합물의 개별 성분은 임의의 편리한 경로에 의해 별개의 또는 조합된 제약 제제로 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다. 투여가 순차적인 경우, 본 발명의 화합물 또는 제2 치료제가 먼저 투여될 수 있다. 투여가 동시인 경우, 조합물은 동일하거나 상이한 제약 조성물로 투여될 수 있다. 동일한 제제 중에 조합되는 경우, 2종의 화합물은 안정해야 하고 서로 및 제제의 다른 성분과 상용성이어야 함이 인지될 것이다. 별개로 제제화되는 경우, 이는 편리하게는 이러한 화합물에 대해 관련 기술분야에 공지된 바와 같은 방식으로 임의의 편리한 제제로 제공될 수 있다.
본 발명의 제약 조성물은 예를 들어 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publishing Co., New Jersey (1975)]에 기재된 바와 같이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 그 자체로 공지된 방식으로 생성될 수 있다.
본 발명의 화합물로 치료, 완화 또는 예방될 수 있는 질환 또는 상태는 타우 단백질 응집체와 연관된 장애 또는 이상, 예컨대 신경변성 장애이다. 치료, 완화 또는 예방될 수 있는 질환 및 상태의 예는 신경원섬유 병변의 형성에 의해 유발되거나 또는 그와 연관된 것이다. 이는 타우병증에서 우세한 뇌 병리상태이다. 질환 및 상태는 타우 및 아밀로이드 병리상태의 공존을 나타내는 질환 또는 상태를 비롯한 신경변성 질환 또는 상태의 이종 군을 포함한다.
치료, 완화 또는 예방될 수 있는 질환 및 상태의 예는 알츠하이머병 (AD), 가족성 AD, PART (원발성 연령-관련 타우병증), 크로이츠펠트-야콥병, 권투선수 치매, 다운 증후군, 게르스트만-스트라우슬러-샤잉커병 (GSS), 봉입체 근염, 프리온 단백질 뇌 아밀로이드 혈관병증, 외상성 뇌 손상 (TBI), 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 괌형 파킨슨-치매 복합증, 신경원섬유 엉킴을 동반한 비-괌 운동 뉴런 질환, 은친화성 입자 질환, 피질기저 변성 (CBD), 석회화를 동반한 미만성 신경원섬유 엉킴, 염색체 17과 연관된 파킨슨증을 동반한 전두측두엽 치매 (FTDP-17), 할러보르덴-스파츠병, 다계통 위축 (MSA), 니만-픽병 유형 C, 담창구-교뇌-흑질 변성, 픽병 (PiD), 진행성 피질하 신경교증, 진행성 핵상 마비 (PSP), 아급성 경화성 범뇌염, 엉킴 우세 치매, 뇌염후 파킨슨증, 근긴장성 이영양증, 아급성 경화증 범뇌병증, LRRK2에서의 돌연변이, 만성 외상성 뇌병증 (CTE), 가족성 영국 치매, 가족성 덴마크 치매, 다른 전두측두엽 변성, 과들루프 파킨슨증, 뇌 철 축적을 동반한 신경변성, SLC9A6-관련 정신 지체, 구상 신경교 봉입체를 동반한 백질 타우병증, 간질, 루이 소체 치매 (LBD), 경도 인지 장애 (MCI), 다발성 경화증, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 성인 발병 당뇨병, 노인성 심장 아밀로이드증, 녹내장, 허혈성 졸중, AD 정신병 및 헌팅턴병을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 치료, 완화 또는 예방될 수 있는 질환 및 상태는 알츠하이머병 (AD), 뿐만 아니라 다른 신경변성 타우병증, 예컨대 크로이츠펠트-야콥병, 권투선수 치매, 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 은친화성 입자 질환, 피질기저 변성 (CBD), 염색체 17과 연관된 파킨슨증을 동반한 전두측두엽 치매 (FTDP-17), 픽병 (PiD), 진행성 핵상 마비 (PSP), 엉킴 우세 치매, 괌형 파킨슨 치매 복합증, 할러보르덴-스파츠병, 만성 외상성 뇌병증 (CTE), 외상성 뇌 손상 (TBI), 및 다른 전두측두엽 변성을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 보다 바람직하게는 알츠하이머병 (AD), 피질기저 변성 (CBD), 픽병 (PiD), 및 진행성 핵상 마비 (PSP).
본 발명의 화합물은 또한 단백질 응집, 특히 타우 응집을 감소시키는데 사용될 수 있다. 타우 응집을 감소시키는 화합물의 능력은 예를 들어 ThT 검정을 사용하여 결정할 수 있다 (Hudson et al., FEBS J., 2009, 5960-72).
본 발명의 화합물은 신경염증 과정이 타우 단백질의 미스폴딩 및/또는 병리학적 응집과 연관된 광범위한 장애의 치료에 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물은 타우 병리상태를 갖는 조직의 특징화 및 이러한 조직 상의 타우 병리상태를 표적화하는 화합물의 시험을 위한 분석 참조물 또는 시험관내 스크리닝 도구로서 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 화합물은 또한 적어도 1종의 추가의 생물학적 활성 화합물 및/또는 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제 및/또는 부형제와의 혼합물의 형태로 제공될 수 있다. 화합물 및/또는 추가의 생물학적 활성 화합물은 바람직하게는 치료 유효량으로 존재한다.
추가의 생물학적 활성 화합물의 성질은 혼합물의 의도되는 용도에 좌우될 것이다. 추가의 생물학적 활성 물질 또는 화합물은 본 발명에 따른 화합물과 동일하거나 유사한 메카니즘에 의해 또는 비관련 작용 메카니즘에 의해 또는 복수의 관련 및/또는 비관련 작용 메카니즘에 의해 그의 생물학적 효과를 발휘할 수 있다.
일반적으로, 추가의 생물학적 활성 화합물은 중성자-전달 증진제, 정신치료 약물, 아세틸콜린에스테라제 억제제, 칼슘-채널 차단제, 생원성 아민, 벤조디아제핀 진정제, 아세틸콜린 합성, 저장 또는 방출 증진제, 아세틸콜린 시냅스후 수용체 효능제, 모노아민 옥시다제-A 또는 -B 억제제, N-메틸-D-아스파르테이트 글루타메이트 수용체 길항제, 비스테로이드성 항염증 약물, 항산화제 및 세로토닌성 수용체 길항제를 포함할 수 있다. 특히, 추가의 생물학적 활성 화합물은 아밀로이드증의 치료에 사용되는 화합물, 산화성 스트레스에 대한 화합물, 항아폽토시스 화합물, 금속 킬레이트화제, DNA 복구 억제제, 예컨대 피렌제핀 및 대사물, 3-아미노-1-프로판술폰산 (3APS), 1,3-프로판디술포네이트 (1,3PDS), α-세크레타제 활성화제, β- 및 γ-세크레타제 억제제, 타우 단백질, 신경전달물질, β-시트 브레이커, 아밀로이드 베타 소거 / 고갈 세포 성분 유인제, 피로글루타메이트화 아밀로이드 베타 3-42를 포함한 N-말단 말단절단된 아밀로이드 베타의 억제제, 항염증 분자, 또는 콜린에스테라제 억제제 (ChEI) 예컨대 타크린, 리바스티그민, 도네페질, 및/또는 갈란타민, M1 효능제, 임의의 아밀로이드 또는 타우 변형 약물을 포함한 다른 약물 및 영양 보충제, 임의의 기능적 등가 항체 또는 그의 기능적 부분을 포함한 항체, 또는 백신으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
추가 실시양태에서, 본 발명에 따른 혼합물은 본 발명에 따른 화합물 및 임의로 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제 및/또는 부형제와 함께, 니아신 또는 메만틴을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 화합물 및, 임의로, 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제 및/또는 부형제와 함께, 추가의 생물학적 활성 화합물로서 환각, 망상, 사고 장애 (현저한 사고산란, 탈선, 사고이탈로 나타남), 및 괴기스럽거나 와해된 행동, 뿐만 아니라 무쾌감증, 둔마된 정동, 무감동, 및 사회적 위축을 포함한 양성 및 음성 정신병적 증상의 치료를 위한 "비정형 항정신병제" 예컨대, 예를 들어 클로자핀, 지프라시돈, 리스페리돈, 아리피프라졸 또는 올란자핀을 포함하는 혼합물이 제공된다.
본 발명에 따른 화합물과 조합되어 혼합물로 적합하게 사용될 수 있는 다른 화합물이, 예를 들어, WO 2004/058258 (특히 페이지 16 및 17 참조)에 기재되어 있고, 치료 약물 표적 (페이지 36 내지 39), 알칸술폰산 및 알칸올황산 (페이지 39 내지 51), 콜린에스테라제 억제제 (페이지 51 내지 56), NMDA 수용체 길항제 (페이지 56 내지 58), 에스트로겐 (페이지 58 내지 59), 비-스테로이드성 항염증 약물 (페이지 60 및 61), 항산화제 (페이지 61 및 62), 퍼옥시솜 증식자-활성화된 수용체 (PPAR) 효능제 (페이지 63 내지 67), 콜레스테롤-저하제 (페이지 68 내지 75), 아밀로이드 억제제 (페이지 75 내지 77), 아밀로이드 형성 억제제 (페이지 77 내지 78), 금속 킬레이트화제 (페이지 78 및 79), 항정신병제 및 항우울제 (페이지 80 내지 82), 영양 보충제 (페이지 83 내지 89) 및 뇌 내 생물학적 활성 물질의 이용률을 증가시키는 화합물 (페이지 89 내지 93 참조) 및 전구약물 (페이지 93 및 94)을 포함하며, 본 문헌은 본원에 참조로 포함된다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물의 모든 적합한 동위원소 변형을 포함한다. 본 발명의 화합물의 동위원소 변형은 적어도 1개의 원자가 동일한 원자 번호를 갖지만 자연에서 통상적으로 발견되는 원자 질량과 상이한 원자 질량을 갖는 원자에 의해 대체된 것으로 정의된다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 황, 플루오린 및 염소의 동위원소, 예컨대 각각 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 35S, 18F 및 36Cl을 포함한다. 본 발명의 특정 동위원소 변형, 예를 들어, 방사성 동위원소, 예컨대 3H 또는 14C가 혼입된 것은 약물 및/또는 기질 조직 분포 연구에 유용하다. 삼중수소, 즉 3H, 및 탄소-14, 즉 14C, 동위원소는 그의 제조의 용이성 및 검출감도로 인해 특히 바람직하다. 18F-표지된 화합물은 영상화 용도, 예컨대 PET에 특히 적합하다. 또한, 동위원소, 예컨대 중수소, 즉 2H로의 치환은 더 큰 대사 안정성으로부터 생성된 특정의 치료 이점, 예를 들어, 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건을 제공할 수 있고, 따라서 일부 상황에서 바람직할 수 있다. 본 발명의 화합물의 동위원소 변형은 일반적으로 적합한 시약의 적절한 동위원소 변형을 사용하여 통상적인 절차에 의해, 예컨대 예시된 방법에 의해 또는 하기 실시예 및 제조예에 기재된 제조법에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 화합물은 하기 반응식에 제시된 일반적 방법 중 하나에 의해 합성될 수 있다. 이들 방법은 단지 예시적 목적을 위해 제공되며, 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
본 발명의 빌딩 블록의 제조를 위한 일반적 합성 반응식:
반응식 1
Figure 112020130910314-pct00048
상업적으로 입수가능한 페닐히드라진 유도체 (Z = H, F 또는 OMe)를 상업적으로 입수가능한 tert-부틸 3-옥소피페리딘-1-카르복실레이트와 함께 적합한 용매 중에서 산성 조건 (피셔-인돌 합성) 하에 가열하여, 정제 후에 트리시클릭 유도체 (Z = F 또는 OMe의 경우 가능한 위치이성질체 형성)를 수득하였다. 위치이성질체가 형성된 경우에, 이를 초임계 유체 크로마토그래피 (SFC)에 의해 분리하여 목적하는 테트라히드로-1H-피리도[3,4-b]인돌 유도체를 수득하였다. 트리시클릭 빌딩 블록의 지방족, 2급 NH-모이어티를 적절한 용매 및 염기를 사용하여 Boc-보호기로 추가로 보호하여, 정제 후에 목적하는 Boc-보호된 빌딩 블록을 수득하였다.
반응식 2
Figure 112020130910314-pct00049
트리시클릭 빌딩 블록의 NH-모이어티를 적합한 염기를 사용하여 적절한 용매 중에서 메틸 아이오다이드 또는 토실 클로라이드로 처리하여, 정제 후에 N-메틸 또는 N-토실 유도체를 수득하였다. Boc-보호기를 적절한 용매 중에서 산 처리에 의해 절단하여, 정제 후에 목적하는 N-메틸 또는 N-토실 트리시클릭 빌딩 블록을 수득하였다. Boc-보호기의 절단 후에 염기 처리가 없는 경우에, 상응하는 염이 수득되었다.
반응식 3
Figure 112020130910314-pct00050
상업적으로 입수가능한 페닐히드라진 유도체 (Z = F)를 상업적으로 입수가능한 tert-부틸 2-옥소-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트와 함께 적합한 용매 중에서 산성 조건 (피셔 인돌 합성) 하에 가열하여, 트리시클릭 유도체를 수득하였다. 2- 또는 3-치환된 페닐히드라진 유도체의 경우에, 위치이성질체를 초임계 유체 크로마토그래피 (SFC)에 의해 분리하였다. 이어서, 지방족, 2급 아민 모이어티를 적절한 용매 및 염기를 사용하여 Boc-보호하여, 정제 후에 목적하는 빌딩 블록을 수득하였다. 이어서, 인돌 모이어티의 NH-모이어티를 적합한 염기를 사용하여 적절한 용매 중에서 토실 클로라이드로 처리하여, 정제 후에 N-토실 유도체를 수득하였다. Boc-보호기를 적절한 용매 중에서 산 처리에 의해 절단하여, 정제 후에 2급 아민을 함유하는 트리시클릭 빌딩 블록을 수득하였다. Boc-보호기의 절단 후에 염기 처리가 없는 경우에, 상응하는 염이 수득되었다.
반응식 4
Figure 112020130910314-pct00051
2개의 할로겐 (Br 또는 Cl) 원자를 함유하는 상업적으로 입수가능한 벤조[d]티아졸 (G = Ph) 또는 벤조[d]옥사졸 (G = Ph) 유도체를 적절한 용매 중의 1급 또는 2급 아민 및 추가의 염기로 처리하였다. 이탈기 X를 1급 또는 2급 아민에 의한 친핵성 치환을 통해 대체하여, 정제 후에 상응하는 아미노-치환된 벤조[d]티아졸 또는 벤조[d]옥사졸 유도체를 수득하였다. 덜 반응성인 아민의 경우에, 마이크로웨이브 조건 하에 친핵성 치환 반응을 수행함으로써 목적하는 벤조[d]티아졸 또는 벤조[d]옥사졸 유도체를 수득하였다. 2개의 할로겐 (Br 또는 Cl) 원자를 함유하는 상응하는 티아졸로[5,4-b]피리딘 (G = Py) 및 티아졸로[4,5-b]피리딘 (G = Py) 유도체를 적절한 용매 중의 모르폴린 및 추가의 염기로 처리하였고, 정제 후에 상응하는 친핵성 치환 생성물 (모르폴리노-티아졸로[5,4-b]피리딘 (G = Py) 및 모르폴리노-티아졸로[4,5-b]피리딘 (G = Py) 유도체)을 수득하였다.
본 발명의 화합물의 제조를 위한 일반적 합성 반응식:
반응식 5
Figure 112020130910314-pct00052
B = NCH3, O인 트리시클릭 빌딩 블록을 치환된 벤조[d]티아졸 또는 벤조[d]옥사졸 유도체, 또는 치환된 페닐 또는 피리딘 유도체와, 적합한 용매 예컨대 디옥산 중에서 적합한 팔라듐 공급원 예컨대 아세트산팔라듐 (II) (Pd(OAc)2), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (Pd2(dba)3), 적합한 리간드 예컨대 2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시비페닐 (RuPhos), 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐 (Xantphos), 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 (Xphos) 및 적합한 염기 예컨대 탄산세슘 (Cs2CO3) 및 소듐 tert-부톡시드 (NaOtBu)의 존재 하에 팔라듐 화학을 통해 커플링시켜, 정제 후에 목적하는 화학식 (I)의 화합물을 수득하였다.
반응식 6
Figure 112020130910314-pct00053
인돌 모이어티에서 N-토실 기를 함유하는 트리시클릭 빌딩 블록을 치환된 벤조[d]티아졸 또는 벤조[d]옥사졸 유도체, 또는 치환된 페닐 또는 피리딘 유도체와, 적합한 용매 예컨대 디옥산 중에서 적합한 팔라듐 공급원 예컨대 아세트산팔라듐 (II) (Pd(OAc)2), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (Pd2(dba)3), 적합한 리간드 예컨대 2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시비페닐 (RuPhos), 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐 (Xantphos), 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 (Xphos) 및 적합한 염기 예컨대 탄산세슘 (Cs2CO3) 및 소듐 tert-부톡시드 (NaOtBu)의 존재 하에 팔라듐 화학을 통해 커플링시켜, 정제 후에 목적하는 화학식 (I)의 화합물을 수득하였다. 토실-기가 팔라듐 커플링 동안 절단되지 않는 경우에, 토실 보호된 화합물을 일반적으로 적절한 용매 혼합물 예컨대 디옥산 및 메탄올 중에서 적합한 염기 예컨대 소듐 tert-부톡시드 (NaOtBu)로 처리하여, 정제 후에 목적하는 화학식 (I)의 화합물을 수득하였다.
반응식 7
Figure 112020130910314-pct00054
인돌 모이어티에서 N-토실- 또는 NCH3-기를 함유하는 트리시클릭 빌딩 블록을 할로겐-치환된 벤조[d]티아졸 또는 벤조[d]옥사졸 유도체와, 적합한 용매 예컨대 디옥산 중에서 적합한 팔라듐 공급원 예컨대 아세트산팔라듐 (II) (Pd(OAc)2), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (Pd2(dba)3), 적합한 리간드 예컨대 2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시비페닐 (RuPhos), 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐 (Xantphos), 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 (Xphos) 및 적합한 염기 예컨대 탄산세슘 (Cs2CO3) 및 소듐 tert-부톡시드 (NaOtBu)의 존재 하에 팔라듐 화학을 통해 커플링시켜, 목적하는 중간체를 수득하였다. 제1 단계에 기재된 것과 유사한 조건을 사용하여 모노-할로겐화된 중간체를 모르폴린과 후속 팔라듐 커플링시켜, 정제 후에 목적하는 화학식 (I)의 화합물을 수득하였다. 토실-기가 최종 팔라듐 커플링 동안 절단되지 않는 경우에, 토실 보호된 화합물을 일반적으로 적절한 용매 혼합물 예컨대 디옥산 및 메탄올 중에서 적합한 염기 예컨대 소듐 tert-부톡시드 (NaOtBu)로 처리하여, 정제 후에 목적하는 화학식 (I)의 화합물을 수득하였다.
실시예
모든 시약 및 용매는 상업적 공급원에서 구입하여 추가 정제 없이 사용하였다. 1H NMR 스펙트럼은 중수소화 용매 중 브루커(Bruker) AV 300 및 400 MHz 분광계 상에 기록되었다. 화학적 이동 (δ)은 백만분율로 보고되고, 커플링 상수 (J 값)는 헤르츠로 보고된다. 스핀 다중도는 하기 기호에 의해 표시된다: s (단일선), d (이중선), t (삼중선), q (사중선), m (다중선), bs (넓은 단일선). 질량 스펙트럼은 6130 켐스테이션이 구비된 애질런트(Agilent) 1290 인피니티 II 분광계 및 6130 켐스테이션이 구비된 애질런트 1200 인피니티 II 분광계 상에서 수득하였다. GC-MS 데이터는 애질런트 7890B 기체 크로마토그래프 및 5977B 질량 분광계를 사용하여 수집하였다. 적외선 스펙트럼은 퍼킨엘머 분광계 상에서 수득하였다. 크로마토그래피는 실리카 겔 (플루카(Fluka): 실리카 ge10l 60, 0.063-0.2 mm) 및 구체적 실시예에 표시된 바와 같은 적합한 용매를 사용하여 수행하였다. 플래쉬 정제는 HP-Sil 또는 KP-NH 스냅 카트리지가 구비된 바이오타지 이솔레라 (바이오타지(Biotage)) 및 구체적 실시예에 표시된 용매 구배를 사용하여 수행하였다. 박층 크로마토그래피 (TLC)는 실리카 겔 플레이트 상에서 UV 검출에 의해 수행하였다.
제조 실시예 1
Figure 112020130910314-pct00055
단계 A
1,4-디옥산 (10 mL) 중 (4-플루오로페닐)히드라진 HCl-염 (1 g, 6.1 mmol) 및 tert-부틸 3-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (1.2 g, 6.1 mmol)의 용액에 진한 H2SO4 (1 mL)를 0℃에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 침전물을 여과하였다. 고체를 물 중에 용해시키고, NaOH 용액으로 염기성화하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 상을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 고리화된 표제 화합물을 연황색 고체 (0.6 g, 54%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.73 (br-s, 1H), 7.21-7.22 (m, 1H), 7.06-7.07 (m, 1H), 6.78-6.79 (m, 1H), 3.83 (s, 2H), 2.94-2.95 (m, 2H), 2.49-2.50 (m, 2H).
MS: 191 (M+H)+.
단계 B
THF (10 mL) 중 단계 상기 A로부터의 표제 화합물 (0.6 g, 3.15 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (1.3 mL, 9.47 mmol) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (0.757 g, 3.46 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 12시간 동안 교반하였다. TLC에 의해 입증된 바와 같이 반응이 완결된 후, 용매를 감압 하에 제거하고, 조 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산/ 에틸 아세테이트 (80:20)를 사용하여 정제하여 표제 화합물을 연황색 고체 (0.55 g, 60%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.94 (br-s, 1H), 7.26-7.28 (m, 1H), 7.12-7.13 (m, 1H), 6.83-6.84 (m, 1H), 4.55 (s, 2H), 3.64-3.66 (m, 2H), 2.65 (s, 2H), 1.47 (s, 9H).
MS: 191 (M-Boc)+.
단계 C
THF (5 mL) 중 상기 단계 B로부터의 표제 화합물 (0.55 g, 1.89 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (0.136 g, 5.6 mmol)을 첨가하고, 이어서 메틸 아이오다이드 (0.13 mL, 2.07 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL) 중에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산/ 에틸 아세테이트 (70:30)를 사용하여 정제하여 메틸화된 표제 화합물 (0.42 g, 73%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.40-7.42 (m, 1H), 7.18-7.19 (m, 1H), 6.92-6.93 (m, 1H), 4.61 (s, 2H), 3.64-3.65 (m, 5H), 2.67 (br-s, 2H), 1.47 (s, 9H).
MS: 305.0 (M+H)+.
단계 D
디클로로메탄 (10 mL) 중 상기 단계 C로부터의 표제 화합물 (0.42 g, 1.38 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중 2N HCl (5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 증발시켜 용매를 제거하고, 디에틸 에테르로 세척하여 표제 화합물을 회백색 고체 (0.25 g, 80%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.83 (br-s, 1H), 7.47-7.50 (m, 1H), 7.30 (d, J = 9.60 Hz, 1H), 7.02 (bs, 1H), 4.42 (s, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.40 (br-s, 2H), 2.92 (br-s, 2H).
MS: 205.2 (M+H)+.
제조 실시예 2
Figure 112020130910314-pct00056
단계 A
THF (5 mL) 중 제조 실시예 1 단계 B로부터의 표제 화합물 (0.55 g, 1.89 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (0.136 g, 5.6 mmol)을 첨가하고, 이어서 p-톨루엔술포닐 클로라이드 (0.396 g, 2.07 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL) 중에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산/ 에틸 아세테이트 (70:30)를 사용하여 정제하여 표제 화합물 (0.4 g, 47%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.00 (s, 1H), 7.77 (s, 2H), 7.30-7.32 (m, 3H), 7.16-7.18 (m, 1H), 4.87 (s, 2H), 3.64 (s, 2H), 2.62 (br-s, 2H), 2.32 (s, 3H), 1.39 (s, 9H).
MS: 445.2 (M+H)+.
단계 B
디클로로메탄 (10 mL) 중 상기 단계 A로부터의 표제 화합물 (0.4 g, 0.9 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중 2N HCl (5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 증발시켜 용매를 제거하고, 디에틸 에테르로 세척하여 표제 화합물을 회백색 고체 (0.25 g, 80%)로서 수득하였다. 조 생성물을 그대로 다음 단계에 사용하였다.
MS: 345.0 (M+H)+.
제조 실시예 3
Figure 112020130910314-pct00057
단계 A
1,4-디옥산 (100 mL) 중 (4-메톡시페닐)히드라진 HCl-염 (10 g, 57.5 mmol) 및 tert-부틸 3-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (11.4 g, 57.5 mmol)의 용액에 진한 H2SO4 (10 mL)를 0℃에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 침전물을 여과하였다. 고체를 물 중에 용해시키고, NaOH 용액으로 염기성화하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 상을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 고리화된 표제 화합물을 갈색의 점착성 고체 (10 g, 조 물질)로서 수득하였다. 생성물을 그대로 다음 단계에 사용하였다.
MS: 203.2 (M+H)+.
단계 B
THF (10 mL) 중 상기 단계 A로부터의 표제 화합물 (10 g, 49.5 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (20 mL, 148.5 mmol) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (11.8 g, 54 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 12시간 동안 교반하였다. TLC에 의해 입증된 바와 같이 반응이 완결된 후, 용매를 감압 하에 제거하고, 조 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산/ 에틸 아세테이트 (80:20)를 사용하여 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (4 g, 26.7%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.67 (br-s, 1H), 7.19 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 2.00 Hz, 1H), 6.66-6.67 (m, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.65-3.66 (m, 2H), 2.64-2.66 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).
MS: 303.2 (M+H)+.
단계 C
THF (10 mL) 중 상기 단계 B로부터의 표제 화합물 (2 g, 6.6 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (0.317 g, 13.2 mmol)을 첨가하고, 이어서 메틸 아이오다이드 (0.4 mL, 7.26 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL) 중에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산/ 에틸 아세테이트 (80:20)를 사용하여 정제하여 메틸화된 표제 화합물 (0.65 g, 30%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.30 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.73-6.73 (m, 1H), 4.59 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.60-3.64 (m, 5H), 2.66-2.68 (m, 2H), 1.45 (s, 9H).
MS: 317.2 (M+H)+.
단계 D
디클로로메탄 (10 mL) 중 상기 단계 C로부터의 표제 화합물 (0.65 g, 2.05 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중 4N HCl (5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 증발시켜 용매를 제거하고, 디에틸 에테르로 세척하여 표제 화합물을 회백색 고체 (0.5 g, 98%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.80 (s, 2H), 7.35 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 2.00 Hz, 1H), 6.79-6.80 (m, 1H), 4.39 (s, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 3.38-3.40 (m, 2H), 2.90-2.92 (m, 2H).
MS: 217.3 (M+H)+.
제조 실시예 4
Figure 112020130910314-pct00058
단계 A
THF (10 mL) 중 제조 실시예 3 단계 B로부터의 표제 화합물 (2 g, 6.6 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (0.317 g, 13.2 mmol)을 첨가하고, 이어서 p-톨루엔술포닐 클로라이드 (1.5 g, 7.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL) 중에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물 (1.5 g, 50%)을 수득하였다. 조 생성물을 그대로 다음 단계에 사용하였다.
MS: 357.2 (M-Boc)+.
단계 B
디클로로메탄 (15 mL) 중 상기 단계 A로부터의 표제 화합물 (1.5 g, 3.28 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중 2N HCl (10 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 증발시켜 용매를 제거하고, 디에틸 에테르로 세척하여 표제 화합물을 회백색 고체 (1 g, 77%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.91 (br-s, 2H), 7.83 (d, J = 8.40 Hz, 3H), 7.35 (d, J = 8.40 Hz, 2H), 7.06 (d, J = 2.00 Hz, 1H), 6.93-6.94 (m, 1H), 4.61 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.57 (s, 4H), 3.44 (s, 4H), 2.89 (br-s, 2H), 2.32 (s, 3H).
MS: 357.2 (M+H)+.
제조 실시예 5
Figure 112020130910314-pct00059
단계 A
메탄올 (50 mL) 중 5-플루오로-2-히드라지닐피리딘 (5 g) 및 tert-부틸 3-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (5 g)의 용액을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. TLC에 의해 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 암갈색 조 생성물 (10 g)을 그대로 다음 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
MS: 309.1 (M+H)+.
단계 B
디에틸렌글리콜 (20 ml) 중 상기 단계 A로부터의 조 표제 화합물 (10 g)의 용액을 마이크로웨이브를 사용하여 180℃에서 90분 동안 가열하였다 (4개의 배치). LCMS에 의해 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물에 붓고, 이어서 디클로로메탄을 사용하여 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였고, 이를 디에틸 에테르로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 연갈색 고체 (1 g, 16%)로서 수득하였다.
MS: 192.2 (M+H)+.
단계 C
THF (10 ml) 중 상기 단계 B로부터의 표제 화합물 (1 g, 5.23 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (2.2 ml, 15.39 mmol)을 첨가하고, 이어서 디-tert-부틸 디카르보네이트 (1.36 g, 6.28 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. TLC에 의해 입증된 바와 같이 반응이 완결된 후, 용매를 제거하고, 조 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산/ 에틸 아세테이트 (60:40)를 사용하여 정제하여 표제 화합물을 황색 고체 (1.1 g, 72%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.54 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.65 (d, J = 12.40 Hz, 1H), 3.65-3.66 (m, 2H), 2.82 (t, J = 8.80 Hz, 2H), 1.95 (t, J = 6.40 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H).
MS: 292.2 (M+H)+.
단계 D
N,N'-디메틸포름아미드 (10 mL) 중 상기 단계 C로부터의 표제 화합물 (1.1 g, 3.78 mmol)의 용액에 0℃에서 수소화나트륨 (0.226 g, 5.67 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 이어서 메틸 아이오다이드 (0.25 mL, 4.15 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. TLC에 의해 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, 이어서 에틸 아세테이트 (20 mL)를 사용하여 추출하였다. 유기 층을 농축시켜 조 생성물을 황색 고체 (1 g)로서 수득하였으며, 이를 그대로 다음 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
MS: 306.1 (M+H)+.
단계 E
디클로로메탄 (10 ml) 중 상기 단계 D로부터의 표제 화합물 (1 g)의 용액에 1,4-디옥산 중 2N HCl (5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 증발시켜 용매를 제거하고, 디에틸 에테르로 세척하여 표제 화합물을 연황색 고체 (0.25, 37%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.32 (t, J = 6.92 Hz, 2H), 8.32 (s, 1H), 7.87 (d, J = 9.12 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.45 (s, 2H), 2.94 (t, J = 5.88 Hz, 2H), 2.17 (t, J = 4.80 Hz, 2H).
MS: 206.1 (M+H)+.
제조 실시예 6
Figure 112020130910314-pct00060
단계 A
N,N'-디메틸포름아미드 (10 mL) 중 제조 실시예 5 단계 C로부터의 표제 화합물 (1.1 g, 3.78 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (0.226 g, 5.67 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 이어서 p-톨루엔술포닐 클로라이드 (0.788 g, 4.15 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 빙수로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (20 mL)로 추출하였다. 유기 상을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 조 표제 화합물을 연갈색 고체 (1 g)로서 수득하였다. 조 생성물을 그대로 다음 단계에 사용하였다.
MS: 446.1 (M+H)+.
단계 B
디클로로메탄 (10 mL) 중 상기 단계 A로부터의 표제 화합물 (1 g)의 용액에 1,4-디옥산 중 2N HCl (5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 증발시켜 용매를 제거하고, 디에틸 에테르로 세척하여 표제 화합물을 연황색 고체 (0.75 g, 65%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.40 (d, J = 1.24 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 8.24 Hz, 2H), 7.88 (q, J = 2.64 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.24 Hz, 2H), 3.37 (q, J = 5.20 Hz, 2H), 3.22 (t, J = 6.12 Hz, 2H), 2.33 (d, J = 12.52 Hz, 3H), 2.09 (t, J = 5.00 Hz, 2H).
MS: 346.1 (M+H)+.
제조 실시예 7
Figure 112020130910314-pct00061
단계 A
1,4-디옥산 (250 mL) 중 (3-플루오로페닐)히드라진 HCl-염 (25 g, 153.7 mmol) 및 tert-부틸 3-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (30.59 g, 153.7 mmol)의 용액에 진한 H2SO4 (25 mL)를 0℃에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 침전물을 여과하였다. 고체를 물 중에 용해시키고, NaOH 용액으로 염기성화하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 상을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 고리화된 표제 화합물을 연갈색 고체 (23 g)로서 수득하였다. 위치이성질체의 조 혼합물을 그대로 다음 단계에 사용하였다.
MS: 191 (M+H)+.
단계 B
THF (250 mL) 중 상기 단계 A로부터의 표제 화합물 (23 g, 121.05 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (33.7 mL, 242.1 mmol ) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (32 g, 145.2 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 12시간 동안 교반하였다. TLC에 의해 입증된 바와 같이 반응이 완결된 후, 용매를 감압 하에 제거하고, 조 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산/ 에틸 아세테이트 (80:20)를 사용하여 정제하여 표제 화합물을 연황색 고체 (7 g, 20%)로서 수득하였다.
MS: 191.2 (M-Boc)+.
단계 C
상기 단계 B로부터의 위치이성질체의 혼합물 (7.0 g, 비율: 95/5)을 SFC 키랄 칼럼 (YMC 아밀로스-SA)으로 분리하여 목적하는 주요 위치이성질체를 연황색 고체로서 100% 위치이성질체 순도 (3 g, 43%)로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.95 (br-s, 1H), 7.35-7.37 (m, 1H), 7.09-7.12 (m, 1H), 6.80-6.85 (m, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.66 (t, J = 5.64 Hz, 2H), 2.67 (t, J = 5.48 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H).
MS: 191.2 (M-Boc)+.
부차 위치이성질체도 또한 단리되었다 (0.3 g, 4.3%).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.16 (s, 1H), 7.13 (d, J = 8.12 Hz, 1H), 6.96-7.01 (m, 1H), 6.68-6.70 (m, 1H), 4.56 (s, 2H), 3.67 (t, J = 5.64 Hz, 2H), 2.78 (t, J = 5.24 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H).
MS: 191.2 (M-Boc)+.
단계 D
N,N'-디메틸포름아미드 (15 mL) 중 상기 단계 C로부터의 주요 위치이성질체 (1.5 g, 5.16 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (0.3 g, 7.74 mmol)을 첨가하고, 이어서 p-톨루엔술포닐 클로라이드 (1.17 g, 6.19 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL) 중에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산/ 에틸 아세테이트 (80:20)를 사용하여 정제하여 표제 화합물 (2 g, 87%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.75-7.78 (m, 3H), 7.47-7.48 (m, 1H), 7.38-7.40 (m, 2H), 7.16-7.17 (m, 1H), 4.84 (s, 2H), 3.61-3.62 (m, 2H), 2.63-2.66 (m, 2H), 2.32 (s, 3H), 1.44 (s, 9H).
MS: 345.2 (M-Boc)+.
단계 E
디클로로메탄 (120 mL) 중 상기 단계 D로부터의 표제 화합물 (2 g, 4.5 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중 2N HCl (10 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 증발시켜 용매를 제거하고, 디에틸 에테르로 세척하여 표제 화합물을 회백색 고체 (1.6 g 94%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.65 (br-s, 2H), 7.93 (d, J = 7.92 Hz, 2H), 7.72-7.72 (m, 1H), 7.58-7.59 (m, 1H), 7.40 (d, J = 8.24 Hz, 2H), 7.19-7.24 (m, 1H), 4.65 (s, 2H), 3.36 (bs, 2H), 2.91 (br-s, 2H), 2.35 (s, 3H).
MS: 345.2 (M+H)+.
제조 실시예 8
Figure 112020130910314-pct00062
단계 A
THF (10 mL) 중 제조 실시예 7 단계 C로부터의 부차 위치이성질체 (0.3 g, 1.034 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (0.082 g, 2.06 mmol)을 첨가하고, 이어서 p-톨루엔술포닐 클로라이드 (0.294 g, 1.55 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL) 중에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 조 표제 화합물 (0.25 g, 55%)을 수득하였다. 조 생성물을 그대로 다음 단계에 사용하였다.
MS: 345.1 (M+H)+.
단계 B
디클로로메탄 (10 mL) 중 상기 단계 A로부터의 표제 화합물 (0.25 g, 0.56 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중 2N HCl (2 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 증발시켜 용매를 제거하고, 디에틸 에테르로 세척하여 조 표제 화합물을 회백색 고체 (0.2 g)로서 수득하였다.
MS: 345.1 (M+H)+.
제조 실시예 9
Figure 112020130910314-pct00063
단계 A
THF (15 mL) 중 제조 실시예 7 단계 C로부터의 주요 위치이성질체 (1.0 g, 3.44 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (0.275 g, 6.89 mmol)을 첨가하고, 이어서 메틸 아이오다이드 (10.3 mL, 4.14 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (40 ml) 중에 용해시키고, 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 조 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산/ 에틸 아세테이트 (70:30)를 사용하여 정제하여 표제 화합물 (1.0 g, 96%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.38-7.40 (m, 1H), 7.28-7.29 (m, 1H), 6.87 (d, J = 12.80 Hz, 1H), 4.59 (s, 2H), 3.61-3.63 (m, 5H), 2.68 (s, 2H), 1.45 (s, 9H).
MS: 305.1 (M+H)+.
단계 B
디클로로메탄 (10 mL) 중 상기 단계 A로부터의 표제 화합물 (1.0 g, 3.28 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중 2N HCl (5 mL)을 첨가하였다.
반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 증발시켜 용매를 제거하고, 디에틸 에테르로 세척하여 표제 화합물을 회백색 고체 (0.75 g 96%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.86 (br-s, 2H), 7.46-7.47 (m, 1H), 7.34-7.37 (m, 1H), 6.89-6.90 (m, 1H), 4.39 (s, 2H), 3.63 (s, 3H), 3.37 (d, J = 6.04 Hz, 2H), 2.91-2.93 (m, 2H).
MS: 205.1 (M+H)+.
제조 실시예 10
Figure 112020130910314-pct00064
단계 A
1,4-디옥산 (30 mL) 중 (4-플루오로페닐)히드라진 HCl-염 (2 g, 12.3 mmol) 및 tert-부틸 2-옥소-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄-8-카르복실레이트 (2.7 g ,12.3 mmol)의 용액에 진한 H2SO4 (2 mL)를 0℃에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 고진공에 의해 제거하여 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 30% 수산화나트륨 용액을 사용하여 염기성화한 후, 에틸 아세테이트 (50 mL)를 사용하여 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 물 (20 mL) 및 염수 용액 (10 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 표제 화합물을 연갈색 점착성 덩어리 (1.6 g, 83%)로서 수득하였다. 조 생성물을 그대로 다음 단계에 사용하였다.
MS: 217.2 (M+H)+.
단계 B
THF (20 mL) 중 상기 단계 A로부터의 표제 화합물 (2 g, 5.1 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (2.56 mL, 18 mmol) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (2.21 g, 10 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 12시간 동안 교반하였다. TLC에 의해 입증된 바와 같이 반응이 완결된 후, 용매를 감압 하에 제거하고, 조 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 40% 내지 50% 에틸 아세테이트를 사용하여 정제하여 표제 화합물을 연황색 고체 (0.9 g, 31%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.94 (br-s, 1H), 7.22-7.23 (m, 2H), 6.80-6.81 (m, 1H), 5.09 (d, J = 5.20 Hz, 2H), 4.46 (br-s, 1H), 3.22 (br-s, 1H), 2.50-2.51 (m, 1H), 2.22 (br-s, 1H), 2.06 (br-s, 1H), 1.79 (br-s, 1H), 1.58-1.60 (m, 1H), 1.42 (s, 9H).
MS: 261.2 (M-t-부틸)+.
단계 C
THF (15 mL) 중 상기 단계 B로부터의 표제 화합물 (1 g, 3.16 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (미네랄 오일 중 60%; 0.25 g, 6.32 mmol)을 0℃에서 조금씩 여러 부분으로 첨가하였다. 첨가가 완결된 후, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반되도록 한 다음, 반응 혼합물을 다시 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 반응 혼합물에 0℃에서 THF (5 mL) 중 p-톨루엔술포닐 클로라이드 (0.72 g, 3.79 mmol)의 용액을 적가하였다. 첨가가 완결된 후, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. TLC에 의해 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 빙수로 켄칭하고, 이어서 에틸 아세테이트 (50 mL)를 사용하여 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 물 (10 mL) 및 염수 용액 (10 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 칼럼에 의해 석유 에테르 중 15%에서 25% 에틸 아세테이트를 사용하여 정제하여 표제 화합물을 회백색 고체 (0.9 g, 61%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.01-8.02 (m, 1H), 7.58-7.60 (m, 2H), 7.50-7.51 (m, 1H), 7.50-7.51 (m, 2H), 7.15-7.16 (m, 1H), 5.06 (br-s, 1H), 4.46 (br-s, 1H), 3.35 (br-s, 1H), 2.91 (br-s, 1H), 2.44 (br-s, 3H), 1.77-1.79 (m, 3H), 1.56-1.58 (m, 1H), 1.27-1.33 (m, 9H).
MS: 371.1 (M-Boc)+.
단계 D
0℃에서 디클로로메탄 (5 mL) 중 상기 단계 C로부터의 표제 화합물 (0.9 g, 1.91 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중 4N HCl (10 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 12시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 증발시켜 용매를 제거하고, 디에틸 에테르 (10 mL)로 세척하여 조 표제 화합물을 회백색 고체 (0.65 g, 93%)로서 수득하였다.
MS: 371.1 (M+H)+.
제조 실시예 11
Figure 112020130910314-pct00065
단계 A
0℃에서 THF (1.5 L) 중 트립톨린 (2,3,4,9-테트라히드로-1H-피리도[4,3-b]인돌) (150 g, 0.871 mol)의 교반 용액에, 트리에틸아민 (243 mL, 1.74 mol) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (228 g, 1.04 mol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후 (TLC에 의해 모니터링함), 물을 반응 혼합물에 빙냉 하에 첨가하고, 에틸 아세테이트 (2 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (1 x 250 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 물질을 디에틸 에테르 (200 mL)와 함께 교반하고, 이에 따라 수득된 고체를 여과하고, 디에틸 에테르 (2 x 100 mL)로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물을 갈색 고체 (200 g, 84%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.94 (br-s, 1H), 7.51 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 7.33-7.34 (m, 1H), 7.11-7.13 (m, 2H), 4.67 (s, 2H), 3.79 (br-s, 2H), 2.83 (br-s, 2H), 1.53 (s, 9H).
MS: 273.2 (M+H)+.
단계 B
0℃에서 건조 THF (400 mL) 중 수소화나트륨 (15.86 g, 60% 미네랄 오일, 1.10 mol)의 교반 현탁액에, 건조 THF (1 L) 중 상기 단계 A로부터의 표제 화합물 (100 g, 0.367 mol)의 용액을 천천히 첨가하고, 동일한 온도에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 건조 THF (100 mL) 중 p-톨루엔 술포닐 클로라이드 (105 g, 0.55 mol)의 용액을 0℃에서 적가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후 (TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 빙수 (500 mL)로 켄칭하고, 이어서 에틸 아세테이트 (3 x 500 mL)를 사용하여 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (2 x 500 mL), 염수 (1 x 250 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 헥산 (250 mL)으로 연화처리하였다. 이에 따라 수득된 고체를 여과하고, 헥산 (2 x 100 mL)으로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물을 연갈색 고체 (130 g, 83%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.01 (d, J = 10.40 Hz, 1H), 7.77 (br-s, 2H), 7.45-7.48 (m, 1H), 7.13-7.24 (m, 4H), 4.88 (s, 2H), 3.63-3.65 (m, 2H), 2.65 (br-s, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.46 (s, 9H).
MS: 327.1 (M+-Boc).
단계 C
1,4-디옥산 (1.3 L) 중 상기 단계 B로부터의 표제 화합물 (130 g, 0.30 mol)의 용액에 0℃에서 1,4-디옥산 중 4M HCl (500 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 디에틸 에테르로 세척하여 표제 화합물을 연갈색 고체 (95 g, 94%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.64 (br-s, 2H), 7.86-7.89 (m, 3H), 7.55 (d, J = 10.40 Hz, 1H), 7.27-7.30 (m, 4H), 4.67 (s, 2H), 3.47 (br-s, 2H), 2.92 (br-s, 2H), 2.33 (s, 3H).
MS: 327.1 (M+H)+.
제조 실시예 12
Figure 112020130910314-pct00066
단계 A
0℃에서 건조 THF (400 mL) 중 수소화나트륨 (15.86 g, 60% 미네랄 오일, 1.10 mol)의 교반 현탁액에, 건조 THF (1 L) 중 제조 실시예 11 단계 A로부터의 표제 화합물 (100 g, 0.367 mol)의 용액을 천천히 첨가하고, 동일한 온도에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 건조 THF (100 mL) 중 메틸 아이오다이드 (10 mL, 0.55 mol)의 용액을 0℃에서 적가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후 (TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 빙수 (500 mL)로 켄칭하고, 이어서 에틸 아세테이트 (3 x 500 mL)를 사용하여 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 (2 x 300 mL), 염수 (1 x 250 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 헥산 (250 mL)으로 연화처리하였다. 이에 따라 수득된 고체를 여과하고, 헥산 (2 x100 mL)으로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물을 갈색 고체 (93 g, 88%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.39-7.41 (m, 2H), 7.09-7.11 (m, 1H), 6.98-7.00 (m, 1H), 4.58 (s, 2H), 3.64-3.66 (m, 5H), 2.69 (s, 2H), 1.45 (s, 9H).
MS: 287.2 (M+H)+.
단계 B
1,4-디옥산 (1.0 L) 중 상기 단계 A로부터의 표제 화합물 (93 g, 0.32 mol)의 용액에 0℃에서 1,4-디옥산 중 4M HCl (400 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 디에틸 에테르로 세척하여 표제 화합물을 연갈색 고체 (58 g, 80%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.81 (br-s, 1H), 7.44-7.47 (m, 2H), 7.15-7.18 (m, 1H), 7.03-7.06 (m, 1H), 4.42 (s, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.41-3.45 (m, 2H), 2.95 (br-s, 2H).
MS: 187.1 (M+H)+.
제조 실시예 13
Figure 112020130910314-pct00067
단계 A
에탄올 (6 mL) 중 6-브로모-2-클로로벤조[d]티아졸 (1 g, 4.0 mmol)의 용액에 4 M 메틸 아민 용액 (1.5 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 바이오타지 마이크로웨이브를 이용하여 150℃에서 45분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 용매를 감압 하에 제거하고, 조 생성물을 디클로로메탄 (150 mL) 중에 용해시키고, 1 M NaOH 용액, 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에 제거하여 조 반응 혼합물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산: 에틸 아세테이트 (50:50)를 사용하여 정제하여 표제 화합물을 고체 (0.35 g, 36%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.72 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.29 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.40 (s, 1H), 3.13 (s, 3H).
제조 실시예 14
Figure 112020130910314-pct00068
단계 A
에탄올 (12 ml) 중 5-브로모-2-클로로벤조[d]티아졸 (0.9 g, 3.62 mmol)의 용액에 4 M 메틸 아민 용액 (1mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 바이오타지 마이크로웨이브를 이용하여 150℃에서 45분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 용매를 감압 하에 제거하고, 조 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산: 에틸 아세테이트 (50:50)를 사용하여 정제하여 표제 화합물을 고체 (0.57 g, 65%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.68 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 7.22 (dd, J = 8.4, 1.9 Hz, 1H), 5.90 (s, 1H), 3.13 (s, 3H).
제조 실시예 15
Figure 112020130910314-pct00069
단계 A
건조 디클로로메탄 (50 mL) 중 2,5-디클로로벤조[d]티아졸 (5 g, 24.5 mmol)의 용액에 THF 중 디메틸아민의 2 M 용액 (18.37 mL, 36.65 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 이 차가운 반응 혼합물에 트리에틸아민 (6.8 mL, 49 mmol)을 적가하였다. 첨가가 완결된 후, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물 (2 x 20 mL)로 처리하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 백색 고체를 수득하였으며, 이를 디에틸 에테르로 연화처리하여 표제 화합물 (4.5 g, 88%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.77 (d, J = 11.20 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 2.40 Hz, 1H), 7.05-7.05 (m, 1H), 3.14 (s, 6H).
MS: 213.4 (M+H)+.
제조 실시예 16
Figure 112020130910314-pct00070
단계 A
에탄올 (12 mL) 중 6-브로모-2-클로로벤조[d]티아졸 (0.45 g, 1.81 mmol)의 용액에 THF (3 mL) 중 디메틸 아민 용액의 2 M 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 바이오타지 마이크로웨이브를 이용하여 150℃에서 45분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 용매를 감압 하에 제거하고, 조 반응 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산: 에틸 아세테이트 (50:50)를 사용하여 정제하여 표제 화합물을 고체로서 고체 (0.441 g 95%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.70 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.43-7.35 (m, 2H), 3.20 (s, 6H).
제조 실시예 17
Figure 112020130910314-pct00071
단계 A
건조 디클로로메탄 (50 mL) 중 2,6-디클로로벤조[d]옥사졸 (5 g, 26.8 mmol)의 용액에 모르폴린 (3.50 g, 40.3 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 이 차가운 반응 혼합물에 트리에틸아민 (4.0 g, 39.6 mmol)을 적가하였다. 첨가가 완결된 후, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물 (2 x 20 mL)로 처리하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 백색 고체를 수득하였으며, 이를 디에틸 에테르로 연화처리하여 표제 화합물 (5 g, 78%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.59 (d, J = 2.80 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 11.20 Hz, 1H), 7.21 (dd, J = 2.80, 11.20 Hz, 1H), 3.71-3.74 (m, 4H), 3.57-3.60 (m, 4H).
MS: 239.2 (M+H)+.
제조 실시예 18
Figure 112020130910314-pct00072
단계 A
건조 디클로로메탄 (50 mL) 중 2,5-디클로로벤조[d]옥사졸 (5 g, 26.8 mmol)의 용액에 모르폴린 (3.50 g, 40.3 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 이 차가운 반응 혼합물에 트리에틸아민 (4.0 g, 39.6 mmol)을 적가하였다. 첨가가 완결된 후, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물 (2 x 20 mL)로 처리하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 백색 고체를 수득하였으며, 이를 디에틸 에테르로 연화처리하여 표제 화합물 (5.2 g, 81%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.44 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 2.40 Hz, 1H), 7.06 (dd, J = 2.00, 8.40 Hz, 1H), 3.71-3.73 (m, 4H), 3.59-3.61 (m, 4H).
MS: 239.2 (M+H)+.
제조 실시예 19
Figure 112020130910314-pct00073
단계 A
디클로로메탄 (4 L) 중 상업적으로 입수가능한 2,6- 2,6-디클로로벤조[d]티아졸 (500 g, 2.45 mol)의 교반 용액에 0℃에서 트리에틸아민 (1031 mL, 7.35 mol) 및 모르폴린 (290 mL, 3.67 mol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 25℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후 (TLC에 의해 모니터링함), 물을 반응 혼합물에 첨가하고, 이어서 디클로로메탄 (2 x 2.5 L)을 사용하여 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 물질에 메틸 tert-부틸 에테르 (1 L)를 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 라인 진공 하에 6시간 동안 건조시켜 표제 화합물을 연갈색 고체 (530 g, 85%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.93-7.94 (m, 1H), 7.43-7.44 (m, 1H), 7.28-7.29 (m, 1H), 3.72-3.74 (m, 4H), 3.54-3.55 (m, 4H).
MS: 255.1 (M+H)+.
제조 실시예 20
Figure 112020130910314-pct00074
단계 A
건조 디클로로메탄 (50 mL) 중 2,5-디클로로벤조[d]티아졸 (5 g, 24.5 mmol)의 용액에 모르폴린 (3.19 g, 36.6 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 이 차가운 반응 혼합물에 트리에틸아민 (3.71 g, 36.7 mmol)을 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물 (2 x 20 mL)로 처리하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 백색 고체를 수득하였으며, 이를 디에틸 에테르로 연화처리하여 표제 화합물 (4.5 g, 86%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.82 (d, J = 8.00 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 2.00 Hz, 1H), 7.11-7.11 (m, 1H), 3.72-3.73 (m, 4H), 3.55-3.56 (m, 4H).
MS: 255.4 (M+H)+.
제조 실시예 21
Figure 112020130910314-pct00075
단계 A
아세토니트릴 (50 mL) 중 3,4-디플루오로 니트로벤젠 (5 g, 31.4 mmol)의 용액에 N-메틸 피페라진 (3.7 g, 37.7 mmol) 및 탄산칼륨 (12.8 g, 94.3 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 환류 하에 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 수득된 고체를 에테르로 세척하여 표제 화합물을 황색 고체 (5.2 g, 69%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ = 7.89-8.03 (m, 2H), 6.90-6.91 (m, 1H), 3.33-3.34 (m, 4H), 2.60-2.61 (m, 4H), 2.38 (s, 3H).
MS: 240.1 (M+H)+.
단계 B
에탄올 (100 mL) 중 상기 단계 A로부터의 표제 화합물 (5.2 g, 21.7 mmol)의 용액에 10% Pd/C (0.5 g)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 수소화시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물을 갈색 고체 (4.0 g, 88%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 6.75 (t, J = 9.20 Hz, 1H), 6.31 (t, J = 9.20 Hz, 2H), 4.97 (s, 2H), 2.82 (br-s, 4H), 2.43 (br-s, 4H), 2.21 (s, 3H).
MS: 210.2 (M+H)+.
단계 C
0℃에서 아세토니트릴 (30 mL) 중 상기 단계 B로부터의 표제 화합물 (3.0 g, 14.33 mmol)의 현탁액에 tert-부틸 니트라이트 (2.5 mL, 21.5 mmol)를 시린지를 사용하여 10분의 기간에 걸쳐 첨가하였다. 이어서, 브로민화구리 (II) (3.8 g, 17.2 mmol)를 0℃에서 조금씩 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 1시간 동안 가온되도록 하고, 60℃로 4시간 동안 가열하였다. 반응이 완결된 후 (TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하여 조 생성물을 수득하였다. 조 물질을 실리카-겔 (60-120) 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄/메탄올 (99:1)을 사용하여 정제하여 표제 화합물을 갈색 고체 (1 g, 25%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.40-7.41 (m, 1H), 7.28-7.31 (m, 1H), 6.96-6.98 (m, 1H), 2.98-2.99 (m, 4H), 2.46-2.47 (m, 4H), 2.22 (s, 3H).
MS: 275.1 (M+H)+.
제조 실시예 22
Figure 112020130910314-pct00076
단계 A
에틸 아세테이트 (10 mL) 중 3,4-디플루오로 니트로벤젠 (0.5 g, 3.14 mmol)의 용액에 트리메틸아민 81.3 mL, 9.42 mmol)을 첨가하고, 이어서 8-옥사-3-아자비시클로[3.2.1]옥탄 히드로클로라이드 (0.56 g, 3.77 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 수득된 고체를 에테르로 세척하여 표제 화합물을 황색 고체 (0.7 g, 88%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.99-8.02 (m, 2H), 7.10 (t, J = 8.88 Hz, 1H), 4.41 (br-s, 2H), 3.40 (d, J = 11.80 Hz, 2H), 3.13 (d, J = 10.64 Hz, 2H), 1.89 (br-s, 4H).
MS: 253.1 (M+H)+.
단계 B
에탄올 (20 mL) 중 상기 단계 A로부터의 표제 화합물 (0.7 g, 2.77 mmol)의 용액에 10% Pd/C (0.1 g)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 수소화시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물을 연갈색 점착성 고체 (0.6 g, 96%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 6.71 (t, J = 9.64 Hz, 1H), 6.27-6.28 (m, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.29 (br-s, 2H), 2.80 (br-s, 4H), 1.92-1.93 (m, 2H), 1.77-1.78 (m, 2H).
MS: 223.1 (M+H)+.
단계 C
0℃에서 아세토니트릴 (10 mL) 중 상기 단계 B로부터의 표제 화합물 (0.50 g, 2.24 mmol)의 현탁액에 tert-부틸 니트라이트 (0.4 mL, 3.35 mmol)를 시린지를 사용하여 10분의 기간에 걸쳐 첨가하였다. 이어서, 브로민화구리 (II) (0.6g, 2.68 mmol)를 0℃에서 조금씩 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 1시간 동안 가온되도록 하고, 60℃로 4시간 동안 가열하였다. 반응이 완결된 후 (TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하여 조 생성물을 수득하였다. 조 물질을 실리카-겔 (60-120) 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄/메탄올 (99:1)을 사용하여 정제하여 표제 화합물을 연갈색 고체 (0.27 g, 42%)로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ = 7.17-7.19 (m, 2H), 6.75 (t, J = 8.68 Hz, 1H), 4.43 (br-s, 2H), 3.03-3.06 (m, 4H), 2.09 (br-s, 2H), 1.98 (br-s, 2H).
MS: 288.0 (M+H)+.
제조 실시예 23
Figure 112020130910314-pct00077
단계 A
N,N'-디메틸포름아미드 (10 ml) 중 4-브로모-3-플루오로아닐린 (1 g, 5.26 mmol)의 용액에, 아이오딘화칼륨 (2.18 g, 13.1 mmol), 및 탄산나트륨 (1.95 g, 18.4 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 150℃로 가열하였다. 이어서, 1-브로모-2-(2-브로모에톡시)에탄 (1.34 g, 5.77 mmol)을 첨가하고, 가열을 16시간 동안 계속하였다. 반응이 완결된 후 (TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 물 (25 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산/ 에틸 아세테이트 (80:20)를 사용하여 정제하여 표제 화합물 (0.6 g, 43%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.43-7.44 (m, 1H), 6.93-6.94 (m, 1H), 6.73-6.74 (m, 1H), 3.70-3.72 (m, 4H), 3.13-3.14 (m, 4H).
MS: 261.9 (M+H)+.
제조 실시예 24
Figure 112020130910314-pct00078
단계 A
0℃에서 건조 디클로로메탄 (50 mL) 중 2,6-디클로로벤조[d]옥사졸 (5 g, 26.6 mmol)의 용액에, THF 중 디메틸아민의 2 M 용액 (26.6 mL, 53.2 mmol) 및 트리에틸아민(5.6 mL, 39.9 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 25℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후 (TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, 디클로로메탄 (2 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 물질을 디에틸 에테르로 연화처리하고, 여과하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물을 고체 (5 g, 96%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.56 (s, 1H), 7.23-7.24 (m, 1H), 7.16-7.16 (m, 1H), 3.13 (s, 6H).
MS: 197.2 (M+H)+.
제조 실시예 25
Figure 112020130910314-pct00079
단계 A
N,N'-디메틸포름아미드 (10 ml) 중 5-브로모-2-플루오로아닐린 (1 g, 5.26 mmol)의 용액에, 아이오딘화칼륨 (2.18 g, 13.1 mmol), 및 탄산나트륨 (1.95 g, 18.4 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 150℃로 가열하였다. 이어서, 1-브로모-2-(2-브로모에톡시)에탄 (1.34 g, 5.77 mmol)을 첨가하고, 가열을 16시간 동안 계속하였다. 반응이 완결된 후 (TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 물 (25 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산/ 에틸 아세테이트 (80:20)를 사용하여 정제하여 표제 화합물 (0.8 g, 58%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.03-7.04 (m, 2H), 6.90-6.92 (m, 1H), 3.87-3.88 (m, 4H), 3.08-3.10 (m, 4H).
제조 실시예 26
Figure 112020130910314-pct00080
단계 A
아세톤 (10 mL) 중 5-브로모-3-아이오도피리딘-2-아민 (5 g, 16.73 mmol) 및 벤조일 이소티오시아네이트 (3.29, 20.16 mmol)의 용액을 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후 (TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 감압 하에 증발시키고, 고체를 여과하고, 헥산 (200 mL)으로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물을 회백색 고체 (4 g, 52%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 12.35 (s, 1H), 11.86 (s, 1H), 8.64-8.65 (m, 2H), 7.99-7.99 (m, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.56 (d, J = 9.40 Hz, 2H).
MS: 461.5 (M+H)+.
단계 B
25℃에서 1,4-디옥산 (60 mL) 중 상기 단계 A로부터의 표제 화합물 (4 g, 8.67 mmol)의 용액에, 탄산칼륨 (2.5 g, 18.1 mmol), L-프롤린 (0.28 g, 2.43 mmol) 및 아이오딘화구리 (I) (0.462 g, 2.42 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후 (TLC에 의해 모니터링함) 반응 혼합물을 물 (100 mL) 및 수성 포화 NH4Cl (100 mL)에 붓고, 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이에 따라 수득된 고체를 여과하고, 수성 포화 NH4Cl (2 x 25 mL), 물 (2 x 25 mL)로 세척하고, 건조시켜 조 표제 화합물을 회백색 고체 (2.5 g)로서 수득하였다.
MS: 336.0 (M+H)+.
단계 C
H2SO4 (70%, 6 mL) 중 상기 단계 B로부터의 조 표제 화합물 (2 g, 5.98 mmol)의 현탁액을 120℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응이 완결된 후 (TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 냉수 100 mL에 천천히 부었다. 이어서, 반응 혼합물을 수성 NaOH (50%)를 사용하여 염기성화하고, 에틸 아세테이트 (6 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 농축시켜 표제 화합물을 담황색 고체 (0.3 g, 23%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.27-8.31 (m, 2H), 8.11 (s, 2H).
MS: 230.4 (M+H)+.
단계 D
0℃에서 아세토니트릴 (5 mL) 중 상기 단계 C로부터의 표제 화합물 (0.3 g, 1.3 mmol)의 현탁액에 tert-부틸 니트라이트 (0.2 g, 1.95 mmol)를 시린지를 사용하여 10분의 기간에 걸쳐 첨가하였다. 이어서, 염화구리 (II) (0.2 g, 1.48 mmol)를 0℃에서 조금씩 첨가하고, 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 1시간 동안 가온되도록 하고, 65℃로 4시간 동안 가열하였다. 반응이 완결된 후 (TLC에 의해 모니터링함), 용매를 감압 하에 증발시키고, 수득된 잔류물을 물 (20 mL)로 희석하고, 디클로로메탄/메탄올 (95:5) (3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 물질을 실리카-겔 (60-120) 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄/메탄올(99:1)을 사용하여 정제하여 표제 화합물을 회백색 고체 (0.15 g, 46%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.91 (d, J = 2.40 Hz, 1H), 8.82 (d, J = 1.60 Hz, 1H).
MS: 250.9 (M+H)+.
단계 E
0℃에서 건조 디클로로메탄 (5 mL) 중 상기 단계 D로부터의 표제 화합물 (0.18 g, 0.72 mmol)의 용액에, 트리에틸아민 (0.3 mL, 2.16 mmol) 및 모르폴린 (74 mg, 0.85 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 25℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후 (TLC에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카-겔 (60-120 메쉬) 칼럼 크로마토그래피에 의해 헥산/ 에틸 아세테이트 (70:30)를 사용하여 정제하여 표제 화합물을 탁한 황색 고체 (0.18 g, 83%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.49 (d, J = 2.00 Hz, 1H), 8.38 (d, J = 1.60 Hz, 1H), 3.72-3.74 (m, 4H), 3.61-3.62 (m, 4H).
MS: 302.0 (M+H)+.
제조 실시예 27
Figure 112020130910314-pct00081
단계 A
에탄올 (50 mL) 중 2-브로모-6-클로로피리딘-3-아민 (5 g, 24.1 mmol) 및 티오시안산칼륨 (7 g, 72.3 mmol)의 용액에 염산 (37%, 100 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 40-45시간 동안 교반하였다. 반응의 완결을 TLC에 의해 확인하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켜 갈색 고체를 수득하였으며, 이를 디클로로메탄 (150 mL)과 수성 1 N NaOH (50 mL)에 분배하였다. 고체를 여과하고, 건조시켜 조 표제 화합물을 담황색 고체 (3.5 g, 79%)로서 수득하였다. 생성물을 그대로 다음 단계에 사용하였다.
MS: 186.1 (M+H)+.
단계 B
0℃에서 아세토니트릴 (25 mL) 중 상기 단계 A로부터의 표제 화합물 (1.5 g, 8.08 mmol)의 현탁액에 tert-부틸 니트라이트 (1.4 ml, 12.12 mmol)를 시린지를 사용하여 10분의 기간에 걸쳐 첨가하였다. 이어서, 브로민화구리 (II) (2.16 g, 9.69 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 0℃에서 30분 후, 반응 혼합물을 2시간 동안 실온으로 가온되도록 하였다. 반응의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응이 완결된 후, 용매를 증발시키고, 물 (20 mL) 및 디클로로메탄/메탄올 (95:5) (3 x 20 mL)로 희석하였다. 합한 유기부를 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 화합물을 실리카-겔 (60-120) 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄/메탄올(99:1)로 용리시키면서 정제하여 표제 화합물을 연황색 고체 (0.65 g, 32%)로서 수득하였다. 생성물을 그대로 다음 단계에 사용하였다.
MS: 248.5 (M+H)+.
단계 C
건조 디클로로메탄 (5 mL) 중 상기 단계 B로부터의 조 표제 화합물 (0.65 g, 2.61 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (1.1 mL, 7.83 mmol) 및 모르폴린 (0.34 g, 3.91 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 조 화합물을 실리카-겔 (60-120) 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르/에틸 아세테이트 (50/50)로 용리시키면서 정제하여 표제 화합물을 탁한 황색 고체 (0.6 g, 90%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.83 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.44 Hz, 1H), 3.72-3.74 (m, 2H), 3.59-3.60 (m, 2H).
MS: 256.0 (M+H)+.
제조 실시예 28
Figure 112020130910314-pct00082
단계 A
마이크로웨이브 튜브에 상업적으로 입수가능한 6-브로모-2-클로로티아졸로[4,5-c]피리딘 (50 mg, 0.20 mmol) 및 모르폴린 (3.5 mL, 40.1 mmol)을 첨가하였다. 튜브를 밀봉하고, 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 마이크로웨이브 반응기 (바이오타지)에서 150℃에서 10분 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제 화합물 (0.60 g, 78%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.48 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 3.61 (dd, 4H), 3.17 - 3.03 (m, 4H).
제조 실시예 29
Figure 112020130910314-pct00083
단계 A
1,4-디옥산 (100.0 mL) 중 상업적으로 입수가능한 (2-플루오로페닐)히드라진;히드로클로라이드 (10.0 g, 0.0615 mol) 및 tert-부틸 3-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (12.3 g, 0.0615 mol)의 교반 용액에 진한 H2SO4 (10.0 mL)를 (0℃에서) 첨가한 다음, 질소 분위기 하에 12시간 동안 100℃로 가열하였다.
반응 혼합물을 농축시키고, 30% NaOH 수용액 (pH=9-10)을 사용하여 조 생성물을 염기성화한 다음, 디클로로메탄 추출하였다. 디클로로메탄 층을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (10.0 g, 조 물질)을 갈색 오일로서 수득하였다.
조 화합물을 다음 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
MS: 191.1 (M+H)+.
단계 B
테트라히드로푸란 (100.0 mL) 중 상기 단계 A로부터의 조 표제 화합물 (10.0 g, 조 물질)의 용액에 트리에틸아민 (2.83 mL, 0.0205 mol) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (1.88 mL, 0.00820 mol)를 0℃에서 첨가한 다음, 질소 하에 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 TLC 및 LCMS에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL) 및 물 (100 mL)로 희석하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 조 물질을 석유 에테르/에틸 아세테이트 구배 (100/0 -> 90/10)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.5 g, 10%)을 연황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.32 (bs, 1H), 7.22 (d, J = 7.64 Hz, 1H), 6.86-6.88 (m, 2H), 4.58 (s, 2H), 3.68 (t, J = 5.60 Hz, 2H), 2.69 (t, J = 5.00 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H).
MS: 235.1 (M +H) -t-부틸.
단계 C
THF (10.0 mL) 중 수소화나트륨 (0.575 g, 15.0 mmol)의 현탁액에 상기 단계 B로부터의 표제 화합물 (1.50 g, 5.00 mmol)의 THF 용액 (10.0 mL)을 0℃에서 적가하고, 혼합물을 실온에서 60분 동안 교반하였다. 토실 클로라이드 (1.20 g, 6.00 mol)를 0℃에서 적가하고, 이어서 질소 분위기 하에 실온에서 3시간 동안 교반하였다.
TLC에 의해 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, 이어서 에틸 아세테이트 (50.0 mL)를 사용하여 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 석유 에테르/에틸 아세테이트 구배 (100/0 -> 80/20)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.6 g, 71.8%)을 회백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.76 (d, J = 7.52 Hz, 2H), 7.42 (d, J = 8.08 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 7.20 Hz, 1H), 7.22-7.24 (m, 1H), 7.07-7.09 (m, 1H), 4.94 (s, 2H), 3.69 (bs, 2H), 2.69 (bs, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.46 (s, 9H).
MS: 345.1 (M+H)+-Boc.
단계 D
디클로로메탄 (10.0 mL) 중 상기 단계 C로부터의 표제 화합물 (1.6 g, 3.59 mmol)의 교반 용액에 1,4-디옥산 중 4M HCl (10.00 mL)을 0℃에서 첨가하고, 이어서 0℃에서 2시간 동안 교반하고, 실온으로 가온하였다.
TLC에 의해 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 농축시켜 표제 화합물 (1.3 g, 94.6%)을 회색 고체로서 수득하였다.
조 화합물을 다음 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
MS: 345.1 (M+H)+
제조 실시예 30
Figure 112020130910314-pct00084
단계 A
1,4-디옥산 (100.0 mL) 중 상업적으로 입수가능한 (2-플루오로페닐)히드라진;히드로클로라이드 (10.0 g, 0.0615 mol) 및 tert-부틸 3-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (12.3 g, 0.0615 mol)의 교반 용액에 0℃에서 진한 H2SO4 (10.0 mL)를 첨가하였다. 이어서, 반응물을 100℃에서 질소 분위기 하에 12시간 동안 가열하였다.
반응 혼합물을 농축시키고, 조 생성물을 30% NaOH 수용액 (pH=9-.10)을 사용하여 염기성화하고, 이어서 디클로로메탄 추출하였다. 디클로로메탄 층을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (10.0 g, 조 물질)을 갈색 오일로서 수득하였다.
조 화합물을 다음 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
MS: 191.1 (M+H)+.
단계 B
테트라히드로푸란 (100.0 mL) 중 단계 A로부터의 표제 화합물 (10.0 g, 조 물질)의 교반 용액에 0℃에서 트리에틸아민 (2.83 mL, 0.0205 mol) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (1.88 mL, 8.20 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 TLC 및 LCMS에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL) 및 물 (100 mL)로 희석하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 조 물질을 석유 에테르/에틸 아세테이트 구배 (100/0 -> 90/10)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.5 g, 10%)을 연황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.32 (bs, 1H), 7.22 (d, J = 7.64 Hz, 1H), 6.86-6.88 (m, 2H), 4.58 (s, 2H), 3.68 (t, J = 5.60 Hz, 2H), 2.69 (t, J = 5.00 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H).
MS: 235.1 (M +H) -t-부틸.
단계 C
THF (10.0 mL) 중 수소화나트륨 (0.421 g, 0.0110 mol)의 현탁액에 단계 B로부터의 표제 화합물 (1.1 g, 3.66 mol)의 THF 용액 (10mL)을 0℃에서 적가하였다. 이어서 혼합물을 실온에서 60분 동안 교반하였다. 아이오도메탄 (0.624 g, 4.39 mmol)을 0℃에서 첨가한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 3시간 동안 교반하였다.
TLC에 의해 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, 이어서 에틸 아세테이트 (50.0 mL)를 사용하여 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과한 다음, 농축시켜 표제 화합물 (1.10 g, 96.2%)을 연갈색 고체로서 수득하였다.
조 화합물을 다음 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
MS: 305.3 (M +H)+
단계 D
디클로로메탄 (5.0 mL) 중 단계 C로부터의 표제 화합물 (1.10 g, 3.52 mol)의 교반 용액에 0℃에서 디옥산 (10.00 mL) 중 4N HCl의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 0℃에서 교반하고, 실온으로 가온하였다.
반응 혼합물을 농축시키고, 조 생성물을 디에틸 에테르 (10.00 mL)로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (750 mg, 78.8%)을 회색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.94 (bs, 2H), 7.29 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 6.97-6.98 (m, 2H), 4.41 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.37-3.38 (m, 2H), 2.92-2.93 (m, 2H).
MS: 205.0 (M +H)+.
제조 실시예 31
Figure 112020130910314-pct00085
단계 A
디클로로메탄 (50.0mL) 중 상업적으로 입수가능한 2,5-디클로로-1,3-벤족사졸 (1.00g,5.32 mmol)의 용액에, 트리에틸아민 (1.61g,1.60 mol) 및 1-메틸피페라진 (0.693 g,6.38 mmol)을 0℃에서 천천히 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (50.0mL) 및 디클로로메탄 (50.0mL)으로 희석하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 디클로로메탄으로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 조 물질을 DCM/MeOH 구배 (100/0 -> 90/10)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.0 g,73.9%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.41 (d, J = 8.44 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.02-7.03 (m, 1H), 3.59-3.61 (m, 4H), 2.41-2.42 (m, 4H), 2.23 (s, 3H).
MS: 252.1 (M +H)+.
제조 실시예 32
Figure 112020130910314-pct00086
단계 A
상업적으로 입수가능한 2,5 디브로모 피리딘 (1.0 g, 4.22 mmol) 및 N-메틸 피페라진 (0.55 g, 5.49 mmol)을 톨루엔 중에 용해시키고, 탈기시키고, 질소 분위기로 충전하였다. 이어서, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.077 g, 0.084 mmol), xantphos (0.147 g, 0.253 mmol) 및 소듐 t-부톡시드 (0.609 g, 6.33 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 100℃로 5시간 동안 가열하였다.
반응 혼합물을 셀라이트로 여과하고, 디클로로메탄 및 메탄올로 세척하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 조 물질을 DCM/MeOH 구배 (100/0 -> 96/04)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.46 g, 37%)을 연황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.14-8.14 (m, 1H), 7.63-7.64 (m, 1H), 6.79 (d, J = 9.08 Hz, 1H), 3.54-3.56 (m, 4H), 2.55-2.56 (m, 4H), 2.36 (s, 3H).
MS: 258.1 (M +2H)+.
제조 실시예 33
Figure 112020130910314-pct00087
단계 A
상업적으로 입수가능한 2,5-디브로모피라진 (0.500g, 2.10 mmol) 및 1-메틸피페라진 (0.105g, 1.05 mmol), Xantphos(0.073 g,0.126 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.0385g,0.126 mmol) 및 소듐 tert-부톡시드 (0.404 g,4.20 mmol)를 첨가하고, 탈기된 건조 톨루엔 (15.0 ml)을 첨가하였다. 바이알을 아르곤 기체로 충전하고, 밀봉하고, 12시간 동안 100℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (0.165 g, 28%)을 연갈색 점착성 고체로서 수득하였다. 조 화합물을 다음 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
MS: 259.0 (M +2H)+.
제조 실시예 34
Figure 112020130910314-pct00088
단계 A
DMF 중 상업적으로 입수가능한 5-브로모-2-플루오로피리딘 (0.3 g, 1.70 mmol) 및 6-옥사-3-아자비시클로[3.1.1]헵탄 4-메틸벤젠술포네이트 (0.463 g, 1.7 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (0.707 g, 5.11 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 90℃로 12시간 동안 가열하였다.
반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL) 및 물 (30 mL)로 희석하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 조 물질을 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배 (30/70)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.14 g, 31%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.20 (d, J = 3.20 Hz, 1H), 7.71-7.73 (m, 1H), 6.63 (d, J = 11.60 Hz, 1H), 4.69-4.71 (m, 2H), 3.64-3.68 (m, 2H), 3.54-3.55 (m, 2H), 1.89-1.90 (m, 2H).
MS: 255.1 (M +H)+.
제조 실시예 35
Figure 112020130910314-pct00089
단계 A
DMF (5 mL) 중 상업적으로 입수가능한 5-브로모-2-클로로-피리딘 (0.25 g, 2.451 mmol) 및 헥사히드로-1H-푸로[3,4-c]피롤 (0.647 g, 3.676 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (0.677 g, 4.902 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL) 및 물 (30 mL)로 희석하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 조 물질을 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배 (30/70)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.25 g, 60%)을 수득하였다.
MS: 271.1 (M +2H)+.
제조 실시예 36
Figure 112020130910314-pct00090
단계 A
상업적으로 입수가능한 2,5-디브로모피리딘 (0.5 g, 2.2 mmol) 및 (R)-2-메틸모르폴린 (0.234 g, 2.9 mmol)을 반응 튜브에 첨가하고, 탈기된 톨루엔 (10.0 ml)을 첨가하였다. 이어서, Xantphos (0.073 g, 2.1 mol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.024 g, 0.4 mmol) 및 소듐 tert-부톡시드 (0.608 g, 6.3 mmol)를 첨가하고, 용액을 아르곤 기체로 충전된 밀봉된 튜브에서 100℃에서 5시간 동안 가열하였다.
반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 석유 에테르/에틸 아세테이트 구배 (100/0 -> 70/30)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.3 g, 55%)을 회백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.18 (d, J = 3.20 Hz, 1H), 7.69-7.70 (m, 1H), 6.84 (d, J = 12.00 Hz, 1H), 3.87-3.88 (m, 3H), 3.48-3.49 (m, 2H), 2.74-2.76 (m, 1H), 1.14 (d, J = 8.00 Hz, 3H).
MS: 257.1 (M +H)+.
제조 실시예 37
Figure 112020130910314-pct00091
단계 A
상업적으로 입수가능한 2,5-디브로모피리딘 (0.5 g, 2.2 mmol) 및 (S)-2-메틸모르폴린 (0.234 g, 2.9 mmol)을 반응 튜브에 첨가하고, 탈기된 톨루엔 (10.0 ml)을 첨가하였다. 이어서, Xantphos (0.073 g, 2.1 mol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.024 g, 0.4 mmol) 및 소듐 tert-부톡시드 (0.608 g, 6.3 mmol)를 첨가하고, 용액을 아르곤 기체로 충전된 밀봉된 튜브에서 100℃에서 5시간 동안 가열하였다.
반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 석유 에테르/에틸 아세테이트 구배 (100/0 -> 70/30)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.37 g, 68%)을 회백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.18 (d, J = 2.32 Hz, 1H), 7.70-7.71 (m, 1H), 6.84 (d, J = 9.04 Hz, 1H), 3.90-3.91 (m, 3H), 3.52-3.53 (m, 2H), 2.52-2.53 (m, 1H), 1.15 (d, J = 6.24 Hz, 3H).
MS: 257.1 (M +H)+.
제조 실시예 38
Figure 112020130910314-pct00092
단계 A
상업적으로 입수가능한 2,5-디브로모피리딘 (1 g, 4.22 mmol) 및 (R)-3-메틸 모르폴린 (0.234 g, 2.9 mmol)을 반응 튜브에 첨가하고, 탈기된 톨루엔 (10.0 ml)을 첨가하였다. 이어서, Xantphos (0.146 g, 0.253 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.048 g, 0.84 mmol) 및 소듐 tert-부톡시드 (1.21 g, 12.66 mmol)를 첨가하고, 용액을 아르곤 기체로 충전된 밀봉된 튜브에서 100℃에서 6시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 석유 에테르/에틸 아세테이트 구배 (100/0 -> 70/30)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.17 g, 15%)을 회백색 고체로서 수득하였다. 조 화합물을 다음 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
MS: 257.1 (M +H)+.
제조 실시예 39
Figure 112020130910314-pct00093
단계 A
DMF(5 mL) 중 상업적으로 입수가능한 5-브로모-2-플루오로-피리딘 (0.5 g, 2.84 mmol) 및 7-옥사-2-아자스피로[3.5]노난 (0.36 g, 2.84 mol)의 용액에 탄산칼륨 (1.17 g, 8.52 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 90℃로 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL) 및 물 (30 mL)로 희석하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물 (0.44 g, 55%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (d, J = 2.40 Hz, 1H), 7.64-7.65 (m, 1H), 6.36 (d, J = 11.60 Hz, 1H), 3.66-3.69 (m, 4H), 3.52-3.54 (m, 4H), 1.71-1.73 (m, 4H).
MS: 285.0 (M +H)+.
제조 실시예 40
Figure 112020130910314-pct00094
단계 A
DMF( 5 mL) 중 상업적으로 입수가능한 5-브로모-2-클로로-피리딘 (0.83 g, 4.34 mmol) 및 4-메톡시 피페리딘 (0.5 g, 4.34 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (1.79 g, 13.02 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 90℃로 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL) 및 물 (30 mL)로 희석하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 조 물질을 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배 (30/70)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.5 g, 42%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.14-8.15 (m, 1H), 7.63-7.64 (m, 1H), 6.85 (d, J = 9.12 Hz, 1H), 3.86-3.87 (m, 2H), 3.39-3.40 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 3.14-3.15 (m, 2H), 1.84-1.85 (m, 2H), 1.35-1.36 (m, 2H).
MS: 273.1 (M +2H)+.
제조 실시예 41
Figure 112020130910314-pct00095
단계 A
상업적으로 입수가능한 2,5-디브로모피리딘 (0.5 g, 2.11m mol) 및 ((1S,4S)-2-옥사-5-아자비시클로[2.2.1]헵탄 (0.25 g, 2.53 mmol)의 용액을 반응 튜브에 첨가하고, 탈기된 톨루엔 (10.0 ml)을 첨가하였다. 이어서, Xantphos (0.073 g, 0.127 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.024 g, 0.042m mol) 및 소듐 tert-부톡시드 (0.61 g, 6.3 mmol)를 첨가하고, 용액을 아르곤 기체로 충전된 밀봉된 튜브에서 100℃에서 6시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 석유 에테르/에틸 아세테이트 구배 (100/0 -> 70/30)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.3 g, 57%)을 회백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.13 (s, 1H), 7.64-7.65 (m, 1H), 6.54 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 4.80 (s, 1H), 4.65 (s, 1H), 3.76 (d, J = 7.20 Hz, 1H), 3.61 (d, J = 6.80 Hz, 1H), 3.42 (d, J = 10.00 Hz, 1H), 3.19 (d, J = 10.00 Hz, 1H), 1.86-1.89 (m, 2H).
MS: 255.1 (M +H)+.
제조 실시예 42
Figure 112020130910314-pct00096
단계 A
DMF (5 mL) 중 상업적으로 입수가능한 5-브로모-2-플루오로-피리딘 (0.23g, 1.30 mmol) 및 ((1R,4R)-2-옥사-5-아자비시클로[2.2.1]헵탄 (0.18 g, 1.30 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (0.54 g, 3.9 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 90℃로 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL) 및 물 (30 mL)로 희석하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물 (0.32 g, 96%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.13 (d, J = 2.80 Hz, 1H), 7.64-7.64 (m, 1H), 6.54 (d, J = 11.60 Hz, 1H), 4.81 (s, 1H), 4.65 (s, 1H), 3.76 (d, J = 10.00 Hz, 1H), 3.61 (d, J = 10.00 Hz, 1H), 3.43 (d, J = 13.20 Hz, 1H), 3.20 (d, J = 13.60 Hz, 1H), 1.83-1.86 (m, 2H).
MS: 257.0 (M +2H)+.
제조 실시예 43
Figure 112020130910314-pct00097
단계 A
DMF (5 mL) 중 상업적으로 입수가능한 5-브로모-2-클로로-피리딘 (1 g, 5.19 mmol) 및 ((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴린 (0.778 g, 6.75 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (1.57 g, 11.43 mmol )을 첨가하고, 혼합물을 90℃로 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL) 및 물 (30 mL)로 희석하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 조 물질을 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배 (30/70)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.17 g, 12%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.20 (d, J = 2.00 Hz, 1H), 7.54-7.54 (m, 1H), 6.54 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 3.97-3.97 (m, 2H), 3.69-3.70 (m, 2H), 2.49-2.51 (m, 2H), 1.27 (d, J = 6.40 Hz, 6H).
MS: 271.1(M +H)+.
제조 실시예 44
Figure 112020130910314-pct00098
단계 A
상업적으로 입수가능한 2,5-디브로모피리딘 (0.5 g, 2.11 mmol) 및 ((S)-3-메틸모르폴린 (0.213 g, 2.11 mmol)의 용액을 반응 튜브에 첨가하고, 탈기된 톨루엔 (10.0 ml)을 첨가하였다. 이어서, Xantphos 0.073 g ,0.12 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.038 g, 0.042 mmol) 및 소듐 tert-부톡시드 (0.608g,6.33mmol)를 첨가하고, 용액을 아르곤 기체로 충전된 밀봉된 튜브에서 100℃에서 6시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 석유 에테르/에틸 아세테이트 구배 (100/0 -> 70/30)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.23 g, 42%)을 연황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.22-8.23 (m, 1H), 7.55-7.56 (m, 1H), 6.50 (d, J = 9.04 Hz, 1H), 4.23-4.24 (m, 1H), 4.01-4.02 (m, 1H), 3.76-3.77 (m, 3H), 3.59-3.60 (m, 1H), 3.16-3.17 (m, 1H), 1.24 (d, J = 6.72 Hz, 3H).
MS: 259.1 (M +H)+.
제조 실시예 45
Figure 112020130910314-pct00099
단계 A
상업적으로 입수가능한 2,5-디브로모피리딘 (0.5 g, 2.11 mmol) 및 2-옥사-7-아자스피로[3.5]노난 (0.268 g, 2.11 mmol)의 용액을 반응 튜브에 첨가하고, 탈기된 톨루엔 (10.0 ml)을 첨가하였다. 이어서, Xantphos (0.073g,0.12mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.038 g, 0.042 mmol) 및 소듐 tert-부톡시드 (0.608g, 6.33mmol)를 첨가하고, 용액을 아르곤 기체로 충전된 밀봉된 튜브에서 100℃에서 6시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (0.37 g, 62%)을 회백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.19-8.19 (m, 1H), 7.52-7.53 (m, 1H), 6.59 (d, J = 9.04 Hz, 1H), 4.50 (s, 4H), 3.46-3.47 (m, 4H), 1.93-1.94 (m, 4H).
MS: 285.0 (M +2H)+.
제조 실시예 46
Figure 112020130910314-pct00100
단계 A
DMF(5 mL) 중 상업적으로 입수가능한 5-브로모-2-플루오로-피리딘 (0.5 g, 3.34mmol) 및 3-옥사-8-아자비시클로[3.2.1]옥탄 (0.882 g, 5.0133 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (0.923 g, 6.6844 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 90℃로 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL) 및 물 (30 mL)로 희석하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물 (0.5 g, 67%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.17 (d, J = 2.12 Hz, 1H), 7.67-7.68 (m, 1H), 6.80 (d, J = 8.92 Hz, 1H), 4.42 (s, 2H), 3.60-3.62 (m, 2H), 3.48-3.51 (m, 2H), 1.85-1.86 (m, 4H).
MS: 271.1 (M +2H)+
제조 실시예 47
Figure 112020130910314-pct00101
단계 A
15mL DMF (15 mL) 중 제조 실시예 12로부터의 표제 화합물 (0.370g,0.00199 mol) 및 상업적으로 입수가능한 2,5-디클로로-1,3-벤족사졸 (0.336g,0.00179mol)의 교반 현탁액에 탄산칼륨(0.823g,0.00595mol)을 첨가하고, 혼합물을 100℃에서 밤새 가열하였다. TLC에 의해 반응이 완결된 후, 물을 첨가하고, 고체를 수득하였다. 고체를 여과하고, 헥산으로 세척하여 표제 화합물 (0.4 g, 조 물질)을 수득하였다.
MS: 338.1 (M+H)+
제조 실시예 48
Figure 112020130910314-pct00102
단계 A
15mL DMF 탄산칼륨 (0.445g,0.000756mol) 중 제조 실시예 11로부터의 표제 화합물 (0.350 g,0.00107 mol) 및 상업적으로 입수가능한 것 (0.181g,0.000965mol)의 교반 현탁액을 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 밤새 가열하였다. TLC에 의해 반응이 완결된 후, 물을 첨가하고, 고체를 수득하였다. 고체를 여과하고, 헥산으로 세척하여 표제 화합물 (0.45 g, 조 물질)을 수득하였다.
MS: 478.1 (M+H)+
제조 실시예 49
Figure 112020130910314-pct00103
단계 A
에탄올 (15 mL) 중 상업적으로 입수가능한 3,6-디클로로피리다진 (0.500 g, 3.3783 mmol) 및 (2S,6R)-2,6-디메틸모르폴린 (0.505 g, 4.3918 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (0.516 g, 5.0675 mmol)을 첨가하고, 반응물을 80℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 석유 에테르/에틸 아세테이트 구배 (100/0 -> 70/30)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.500 g, 64.93%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.56 (d, J = 9.60 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 9.60 Hz, 1H), 4.18-4.18 (m, 2H), 3.61-3.62 (m, 2H), 2.49-2.50 (m, 2H), 1.16 (d, J = 6.40 Hz, 6H).
MS: 228.1(M +H)+
제조 실시예 51
Figure 112020130910314-pct00104
단계 A
에탄올 (15 mL) 중 상업적으로 입수가능한 3,6-디클로로피리다진 (0.500g, 3.36mmol) 및 (2S)-2-메틸모르폴린 (0.339g,3.36mmol)의 용액에 트리에틸아민 (0.509g, 5.03mmol)을 첨가하고, 반응물을 80℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 석유 에테르/에틸 아세테이트 구배 (100/0 -> 70/30)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.250 g, 34.5%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.57 (d, J = 9.60 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 9.60 Hz, 1H), 4.08-4.09 (m, 2H), 3.91-3.92 (m, 1H), 3.53-3.54 (m, 2H), 2.90-2.92 (m, 1H), 2.58-2.61 (m, 1H), 1.16 (d, J = 6.40 Hz, 3H).
MS: 214.1 (M +H)+.
제조 실시예 52
Figure 112020130910314-pct00105
단계 A
에탄올 (15 mL) 중 상업적으로 입수가능한 3,6-디클로로피리다진 (0.500g, 3.36mmol) 및 (2R)-2-메틸모르폴린 (0.339g,3.36mmol)의 용액에 트리에틸아민 (0.509g, 5.03mmol)을 첨가하고, 반응물을 80℃로 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 석유 에테르/에틸 아세테이트 구배 (100/0 -> 70/30)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.250 g, 34.5%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.57 (d, J = 9.60 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 9.60 Hz, 1H), 3.91-3.91 (m, 3H), 3.53-3.54 (m, 2H), 2.89-2.90 (m, 1H), 2.64-2.67 (m, 1H), 1.16 (d, J = 6.40 Hz, 3H).
MS: 214.2 (M +H)+.
제조 실시예 53
Figure 112020130910314-pct00106
단계 A
에탄올 (15 mL) 중 상업적으로 입수가능한 3,6-디클로로피리다진 (0.230g, 1.54mmol) 및 4-메톡시피페리딘 ( 0.265 g, 2.29mmol)의 용액에 트리에틸아민 (0.301 g, 2.29mmol)을 첨가하고, 반응물을 90℃로 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 물질을 석유 에테르/에틸 아세테이트 구배 (100/0 -> 70/30)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.335 g, 95.44%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.50 (d, J = 9.60 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 9.60 Hz, 1H), 3.92-3.93 (m, 2H), 3.43-3.44 (m, 1H), 3.27-3.27 (m, 5H), 1.88-1.89 (m, 2H), 1.43-1.44 (m, 2H).
MS: 228.1 (M +H)+.
제조 실시예 54
Figure 112020130910314-pct00107
단계 A
DMF (15mL) 중 제조 실시예 12로부터의 표제 화합물 (0.5 g,2.24 mmol) 및 상업적으로 입수가능한 2,6-디클로로-1,3-벤족사졸(0.43g, 2.24 mmol)의 교반 현탁액에 탄산칼륨 (0.93 g,6.72 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 100℃에서 밤새 가열하였다. TLC에 의해 반응이 완결된 후, 물을 첨가하고, 고체를 수득하였다. 고체를 여과하고, 헥산으로 세척하여 표제 화합물 (0.76 g, 조 물질)을 수득하였다.
MS: 338.1 (M+H)+
실시예 1-122
본 발명의 실시예를 상기 반응식 5, 6 및 7에 보고된 바와 같은 부흐발트 커플링에 대한 일반적 절차에 따라 제조하였다. 사용된 구체적인 절차는 하기와 같다:
절차 1:
건조 1,4-디옥산 (5 mL) 중 트리시클릭 아민 유도체 (0.15 g, 1 당량)의 교반 용액에 표 1에 제시된 바와 같은 상응하는 브로모 또는 클로로 유도체 (1 당량), 및 소듐 tert-부톡시드 (3 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 10분 동안 탈기시켰다. 이어서, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (Pd2(dba)3; 0.05 당량) 및 2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시비페닐 (Ru-Phos; 0.1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 반응의 완결까지 100℃로 가열하였다. 반응이 완결된 후 (LCMS에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 또는 정제용 HPLC에 의해 정제하여 토실 보호된 화합물을 수득하였다. 디옥산:MeOH (1:1, 10 vol) 중 토실 화합물 (1.0 당량)의 용액에 NaOtBu (3 당량)를 첨가하고, 70℃로 6시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 조 생성물을 칼럼 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 또는 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표 1에 제시된 바와 같은 최종 화합물을 수득하였다.
절차 2:
건조 1,4-디옥산 (5 mL) 중 트리시클릭 아민 유도체 (0.15 g, 1 당량)의 교반 용액에 표 1에 제시된 바와 같은 상응하는 브로모 또는 클로로 유도체 (1 당량), 및 소듐 tert-부톡시드 (3 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 10분 동안 탈기시켰다. 이어서, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (Pd2(dba)3; 0.05 당량) 및 2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시비페닐 (Ru-Phos; 0.1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 반응의 완결까지 100℃로 가열하였다. 반응이 완결된 후 (LCMS에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 또는 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표 1에 제시된 바와 같은 최종 화합물을 수득하였다.
절차 3:
Pd(OAc)2 (0.1 당량) 및 Xantphos (0.3 당량)를 반응 바이알에 첨가하고, 탈기된 디옥산 (4 ml)을 첨가하였다. 바이알을 아르곤 기체로 충전하고 밀봉하였다. 현탁액을 110℃에서 1분 동안 가열한 다음, 트리시클릭 아민 유도체 (70 mg, 1 당량), 브로모 또는 클로로 유도체 (1.1 당량) 및 Cs2CO3 (3.5 당량)을 첨가하고, 용액을 100℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL) 및 물 (30 mL)로 희석하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 조 물질을 DCM/MeOH 구배 (100/0 -> 95/05)를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 토실 보호된 화합물을 수득하였다.
토실 유도체 (50 mg, 1 당량), Cs2CO3 (3 당량)을 마이크로웨이브 튜브에 첨가하고, 이어서 MeOH (비율: 1.000, 부피: 4 ml) 및 탈기된 THF (비율: 2.000, 부피: 8 ml)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 반응기에서 110℃에서 30분 동안 가열하고, 실온에서 냉각시켰다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 HP-Sil 스냅 카트리지에 의해 DCM/MeOH 구배 (100/0 -> 90/10)를 사용하는 바이오타지 이솔레라 원 정제 시스템을 사용하여 정제하여, 표 1에 제시된 바와 같은 최종 화합물을 수득하였다.
절차 4:
건조 1,4-디옥산 (5 mL) 중 트리시클릭 아민 유도체 (0.15 g, 1 당량)의 교반 용액에 표 1에 제시된 바와 같은 상응하는 브로모 또는 클로로 유도체 (1 당량), 및 소듐 Cs2CO3 (3 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 10분 동안 탈기시켰다. 이어서, Pd(OAc)2; 0.1 당량) 및 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 (XPhos; 0.3 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 반응의 완결까지 100℃로 가열하였다. 반응이 완결된 후 (LCMS에 의해 모니터링함), 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 또는 정제용 HPLC에 의해 정제하여 토실 보호된 화합물을 수득하였다. 디옥산:MeOH (1:1, 10 vol) 중 토실 화합물 (1.0 당량)의 용액에 NaOtBu (3 당량)를 첨가하고, 70℃로 6시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 조 생성물을 칼럼 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 또는 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표 1에 제시된 바와 같은 최종 화합물을 수득하였다.
절차 5
건조 디옥산 (5 mL) 중 트리시클릭 아민 유도체 (150 mg, 1 당량)의 교반 용액에 표 1에 제시된 바와 같은 상응하는 브로모 또는 클로로 유도체 (1 당량)를 첨가하였다. 소듐 tert-부톡시드 (3 당량)를 첨가하고, 질소 분위기 하에 10분 동안 탈기시켰다. 이 반응 혼합물에 Ruphos G4 Pd (0.3 당량)를 첨가하고, 반응의 완결까지 100℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 층을 통해 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 여과물을 농축시키고, 조 물질을 칼럼 크로마토그래피 또는 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표 1에 제시된 바와 같은 실시예 화합물을 수득하였다.
표 1
Figure 112020130910314-pct00108
Figure 112020130910314-pct00109
Figure 112020130910314-pct00110
Figure 112020130910314-pct00111
Figure 112020130910314-pct00112
Figure 112020130910314-pct00113
Figure 112020130910314-pct00114
Figure 112020130910314-pct00115
Figure 112020130910314-pct00116
Figure 112020130910314-pct00117
Figure 112020130910314-pct00118
Figure 112020130910314-pct00119
Figure 112020130910314-pct00120
Figure 112020130910314-pct00121
Figure 112020130910314-pct00122
Figure 112020130910314-pct00123
Figure 112020130910314-pct00124
Figure 112020130910314-pct00125
Figure 112020130910314-pct00126
Figure 112020130910314-pct00127
Figure 112020130910314-pct00128
Figure 112020130910314-pct00129
Figure 112020130910314-pct00130
Figure 112020130910314-pct00131
Figure 112020130910314-pct00132
Figure 112020130910314-pct00133
Figure 112020130910314-pct00134
Figure 112020130910314-pct00135
Figure 112020130910314-pct00136
Figure 112020130910314-pct00137
Figure 112020130910314-pct00138
Figure 112020130910314-pct00139
Figure 112020130910314-pct00140
Figure 112020130910314-pct00141
Figure 112020130910314-pct00142
Figure 112020130910314-pct00143
Figure 112020130910314-pct00144
Figure 112020130910314-pct00145
Figure 112020130910314-pct00146
실시예 123
Figure 112020130910314-pct00147
단계 A
THF 중 실시예 44의 용액 (15.0mL)에, 수소화나트륨 (60%) (0.0412g,1.79mmol)을 0℃에서 천천히 첨가한 다음, 이것을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 15.0mL THF 중 에틸 아이오다이드 (0.305g,0.00179mol)를 0℃에서 천천히 첨가한 다음, 이것을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 LCMS에 의해 모니터링하고, 반응 혼합물을 물 (50.0mL)로 희석하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 더 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 조 물질을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (50/50) 구배를 사용하는 HP-Sil 칼럼 (바이오타지)에 의해 정제하여 표제 화합물을 회백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.05 (d, J = 2.88 Hz, 1H), 7.49-7.50 (m, 1H), 7.42 (d, J = 8.20 Hz, 2H), 7.08-7.08 (m, 1H), 6.97-6.97 (m, 1H), 6.81 (d, J = 9.08 Hz, 1H), 4.38 (s, 2H), 4.18 (q, J = 7.08 Hz, 2H), 3.69-3.70 (m, 4H), 3.50 (t, J = 5.60 Hz, 2H), 3.29-3.30 (m, 4H), 2.78 (t, J = 5.52 Hz, 2H), 1.26 (t, J = 7.12 Hz, 3H).
MS: 363.2 (M +H)+.
본 발명의 화합물의 HCl 염
일반적 절차
0℃로 냉각시킨 건조 DCM (10 mL) 중 실시예 화합물 (0.1 g)의 용액에 에테르 (5 당량) 중 1M HCl 또는 디옥산 (5 당량) 중 4M HCl을 첨가하고, 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 디에틸에테르로 연화처리하여, 표 2에 제시된 바와 같은 목적 생성물을 수득하였다.
실시예
상기 일반적 절차에 기재된 바와 같은 히드로클로라이드 염 절차에 따라 하기 화합물을 제조하였다.
표 2
Figure 112020130910314-pct00148
Figure 112020130910314-pct00149
Figure 112020130910314-pct00150
Figure 112020130910314-pct00151
Figure 112020130910314-pct00152
Figure 112020130910314-pct00153
생물학적 검정 설명
티오플라빈 T (ThT)에 의한 전장 타우 (fl타우) 분해 검정
인간 타우의 가장 긴 이소형 (2N4R; 441개 아미노산)을 박테리아에서 발현시키고 정제하였다. ThT에 의한 타우 분해 검정을 위해, PBS 중 35 μM의 재조합 전장 (fl)타우를 750 RPM에서 진탕시키면서 50 μM의 헤파린 (시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)) 및 10 mM의 DTT (시그마-알드리치)의 존재 하에 37℃에서 24시간 동안 응집시켰다. 화합물을 무수 디메틸 술폭시드 (DMSO, 시그마-알드리치) 중에 10 mM의 농도에 도달하도록 용해시켰다. fl타우 응집체 및 화합물의 연속 희석물을 PBS (부피 50 μL) 중에서 fl타우 응집체 2 μM 및 화합물 160 내지 0.04 μM의 최종 농도로 함께 혼합하였다. 혼합물을 실온 (RT)에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 이러한 혼합물 40 μL를 흑색 384-웰 플레이트 검정 (퍼킨-엘머)으로 옮기고, PBS 중에서 250 mM 글리신 중 100 μM ThT 10 μL (둘 다 시그마-알드리치)와 혼합하였다. 형광 (상대 형광 단위; RFU)을 테칸 판독기 (여기: 440 nm; 방출: 485 nm) 상에서 단일 또는 이중 측정하였다. 이어서, 1-결합 부위 피팅 모델을 가정하여 그래프패드 프리즘 버전 5 (그래프패드 소프트웨어)를 사용하여 fl타우 분해의 백분율을 계산하고, 반수 최대 유효 농도 (EC50)를 결정하였다.
ThT에 의한 타우 K18 분해 검정
인간 타우441의 가장 긴 이소형 (2N4R)의 아미노산 244 내지 372를 포괄하는 타우 K18 단편을 박테리아에서 발현시키고 정제하거나, 또는 시그널켐(SignalChem)으로부터 구입하였다. ThT에 의한 K18 분해 검정을 위해, PBS 중 35 μM의 재조합 K18을 750 RPM에서 진탕시키면서 50 μM의 헤파린 (시그마-알드리치) 및 10 mM의 DTT (시그마-알드리치)의 존재 하에 37℃에서 24시간 동안 응집시켰다. 화합물을 무수 디메틸 술폭시드 (DMSO, 시그마-알드리치) 중에 10 mM의 농도에 도달하도록 용해시켰다. K18 응집체 및 화합물의 연속 희석물을 PBS (부피 50 μL) 중에서 K18 응집체 2 μM 및 화합물 160 내지 0.04 μM의 최종 농도로 함께 혼합하였다. 혼합물을 실온 (RT)에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 이러한 혼합물 40 μL를 흑색 384-웰 플레이트 검정 (퍼킨-엘머)으로 옮기고, PBS 중에서 250 mM 글리신 중 100 μM ThT 10 μL (둘 다 시그마-알드리치)와 혼합하였다. 형광 (상대 형광 단위; RFU)을 테칸 판독기 (여기: 440 nm; 방출: 485 nm) 상에서 단일 또는 이중 측정하였다. 이어서, 1-결합 부위 피팅 모델을 가정하여 그래프패드 프리즘 버전 5 (그래프패드 소프트웨어)를 사용하여 K18 분해의 백분율을 계산하고, 반수 최대 유효 농도 (EC50)를 결정하였다.
하기 실시예 화합물을 측정하였다:
Figure 112020130910314-pct00154
Figure 112020130910314-pct00155
Figure 112020130910314-pct00156
Figure 112020130910314-pct00157
범례: +++ EC50 < 10 uM; ++ EC50 10<x<25 uM; + EC50 25<x<50 uM.
세포내 타우 응집의 감소
P301L 돌연변이를 보유하는 인간 타우의 전장 형태를 과다발현하는 인간 신경모세포종 세포주를 완전 배지 [2.5 μg/ml의 G418 (시그마-알드리치) 선택 항생제가 보충된, DMEM-F12 4.5 g/L 글루타맥스 (인비트로젠(Invitrogen)), 15% FBS (바이오크롬(Biochrom)), 1% Peni/Strep (인비트로젠)]에서 배양하였다. 실험 전날 5x105개 세포/웰로 6개의 웰 플레이트에 3 mL의 완전 배지 중에 플레이팅하였다. 다음날, 세포를 DMSO 또는 본 발명의 화합물 5 μM과 함께 37℃에서 추가로 24시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 세포를 트립신처리하고, 100 μl의 균질화 완충제 [25 mM 트리스-HCl pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA 함유 포스파타제 억제제 (30 mM NaF, 0.2 mM Na3VO4, 1 nM 오카다산, 1 mM PMSF, 5 mM Na4P2O7) 및 프로테아제 억제제 칵테일 (컴플리트(Complete)™, 로슈(Roche))] 중에 재현탁시킨 다음, 3회의 신속한 동결 및 해동 사이클에 의해 물리적으로 용해시켰다. 이어서 샘플을 알파리사(AlphaLISA) 검정에서 직접 시험하였다.
인산화되고, 응집된, 총 타우를 하기 항체 쌍을 사용하여 알파리사에 의해 정량화하였다:
Figure 112020130910314-pct00158
HT7-수용자 비드 + 비오틴 (BT)-타우13-공여자 비드: 총 타우
Figure 112020130910314-pct00159
HT7-수용자 비드 + 비오틴(BT)-HT7-공여자 비드: 응집된 인간 타우
타우13 (압캡(Abcam))을 EZ-링크(EZ-Link)® NHS-PEO 고체 상 비오티닐화 키트 (써모 사이언티픽(Thermo Scientific))를 사용하여 비오티닐화하였고, 한편 HT7-비오틴은 상업적 공급원 (써모 사이언티픽)으로부터의 것이었다.
각각의 항체 쌍에 대해, 수용자 비드 및 비오티닐화된 항체의 농도를 최적화하였다. 모든 샘플을 먼저 PBS 중의 일련의 희석물에서 시험하여 각각의 샘플 및 검정에 대한 선형 범위 및 최적 희석을 확인하였다. 최종 프로토콜을 위해, 하기 시약을 384-웰 백색 옵티플레이트 (퍼킨엘머)에 첨가하였다:
Figure 112020130910314-pct00160
시험 희석된 샘플 5 μL
Figure 112020130910314-pct00161
하기 최종 농도의 혼합물 비오틴-mAb 수용자 비드 20 μL:
Figure 112020130910314-pct00162
10 μg/ml의 HT7-Acc 비드와 조합된 HT7-BT 1.25 nM
Figure 112020130910314-pct00163
2.5 μg/ml의 HT7-Acc 비드와 조합된 타우13-BT 5 nM
이 혼합물을 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 25 μg/mL의 스트렙타비딘 공여자 비드 (퍼킨 엘머) 25 μL를 암실에서 첨가하였다. 엔스파이어 알파(EnSpire Alpha) 기기 및 엔스파이어 워크스테이션 버전 3.00을 사용하여 30분 인큐베이션 후에 플레이트를 분석하였다. 응집된 타우에 대한 데이터를 총 타우에 대해 정규화한 다음, DMSO-처리된 세포의 백분율로서 표현하였다.
하기 실시예 화합물을 측정하였다:
Figure 112020130910314-pct00164
범례: +++ %>50; ++ % 50<x<25; + % 25<x<10.
면역세포화학에 의한 세포내 타우 미스폴딩의 감소
P301L 돌연변이를 보유하는 인간 타우의 전장 형태를 과다발현하는 인간 신경모세포종 세포주를 완전 배지 [2.5 μg/ml의 G418 (시그마-알드리치) 선택 항생제가 보충된, DMEM-F12 4.5 g/L 글루타맥스 (인비트로젠), 15% FBS (바이오크롬), 1% Peni/Strep (인비트로젠)]에서 배양하였다.
세포내 미스폴딩된 타우의 축적을 유도하기 위해, 세포를 신경모세포종 세포로부터 뉴런-유사 세포로 시험관내 분화시켰다. 이를 위해, 세포를 96-웰 플레이트에 10 μM 레티노산 (RA; 시그마, R2625)이 보충된 100 μl 완전 배지 중에 2500개 세포/웰의 밀도로 1주 동안 플레이팅하였다. 2 내지 3일마다, 배지를 교체하고, 신선한 레티노산을 첨가하였다.
미스폴딩된 세포내 타우의 수준을 감소시키는 본 발명의 화합물의 능력을 평가하기 위해, 화합물을 0.1 내지 10 nM의 농도로 24시간 동안 세포 상에 분배하였다. 화합물과 함께 인큐베이션한 후, 세포를 4% PFA 중에 15분 동안 고정시키고, PBS 중에서 3회 세척하였다. 이어서, 세포를 PBS 중 10% 순수 염소 혈청 (NGS), 0.25% 트리톤 X-100 중에서 실온에서 2시간 동안 차단하였다. 이어서, 투과화된 고정된 세포를 미스폴딩된 타우 및 폴리클로날 항-토끼 총 타우 (압캠(Abcam); ab64193)를 검출하기 위해 1:4000으로 희석된, 및 총 타우를 검출하기 위해 1:400으로 희석된, 모노클로날 항-마우스 MC1 항체 (미국 뉴욕주 알버트 아인슈타인 의과 대학의 피터 데이비스(Peter Davies) 교수에 의해 제공됨)가 존재하는 PBS 중 5% NGS/0.25% 트리톤 X-100 중에서 밤새 인큐베이션하였다. 1차 항체와 함께 인큐베이션한 후, 세포를 PBS 중에서 3회 세척한 다음, 2차 항체 염소 항-마우스 FITC (압캠 ab6785) 및 염소 항-토끼 알렉사 플루오르 594 (압캠 150080)와 함께 30분 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 PBS 중에서 3회 세척하고, 인큐사이트(Incucyte)로 영상을 획득하였다. 미스폴딩된 타우에 대한 신호를 총 타우 신호에 대해 정규화하고, 타우 미스폴딩의 감소를 비히클 처리 세포와 비교한 백분율로서 표현하였다. 데이터는 적어도 3개의 사진/웰의 평균이다. 세포내 타우 미스폴딩을 감소시키는 그의 능력에 대해 평가했을 때, 실시예 44는 도 1에 제시된 바와 같이 낮은 nM 농도에서 효능을 보였다.
ThT에 의한 전장 타우 (flT) 응집 억제 검정
인간 타우의 이소형 (2N4R; 441개 아미노산)을 바이오테크네(Biotechne) (미국)로부터 구입하였다. 단백질을 박테리아 이. 콜라이(E. coli)에서 발현시키고, 정제하고, PBS 중에 50 μM의 최종 농도로 농축시켰다.
타우 응집을 유도하기 위해, 단량체 fl타우 4 uM을 1:200으로 희석된 외부 공급원 (티슈 솔루션즈(Tissue Solutions))으로부터 수득된 1명의 알츠하이머병 (AD) 환자의 사후 뇌로부터 풍부화된 타우 쌍형성된-나선형 필라멘트 (PHF)와 함께, 훌라 믹서(Hula Mixer) (라이프 테크놀로지스(Life Technologies))를 사용하여 오비탈 진탕 및 혼합 기능 둘 다로 이루어진 교반 사이클 하에 37℃에서 72시간 동안 인큐베이션하였다. 풍부화 절차는 문헌 [Jicha et al., 1997 (Journal of Neuroscience Research 48:128-132 (1997)) 및 Rostagno and Ghiso, 2009 (Current protocols in cell biology (2009), Chapter 3, Unit 3.33 3.33.1-33)]으로부터 변형시켰다. 간략하게, AD 인간 뇌 샘플 약 9 g을 얼음 상에서 해동시키고, 유리 다운스 균질화기에서 50 ml의 균질화 완충제 [프로테아제 억제제 (컴플리트; 로슈 11697498001)가 보충된 RAB 완충제 (100 mM 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산 (MES), 1 mM EGTA, 0.5 mM MgSO4, 2 mM DTT, pH 6.8) 중 0.75 M NaCl]로 균질화시켰다. 이어서, 균질물을 4℃에서 20분 동안 인큐베이션하여 임의의 잔류 미세관이 탈중합되게 한 후, 폴리카르보네이트 원심분리 병 (16 x 76 mm; 베크만(Beckman) 355603)으로 옮기고, 사전-냉각시킨 70.1 로터 (베크만, 342184)를 사용하여 4℃에서 20분 동안 초원심분리기 (베크만, XL100K)에서 11,000 g (12,700 RPM)로 원심분리하였다. 펠릿을 얼음 상에 유지시켰다. 상청액을 폴리카르보네이트 병 내로 풀링하고, 다시 70.1 Ti 로터에서 4℃에서 1시간 동안 100,000 g (38,000 RPM)로 원심분리하여 PHF-풍부 펠릿을 단리한 반면에, 가용성 타우는 상청액에 잔류하였다. 제1 및 제2 원심분리로부터의 펠릿을 120 mL의 추출 완충제 [10 mM 트리스-HCl pH 7.4, 10% 수크로스, 0.85 M NaCl, 1% 프로테아제 억제제 (칼바이오켐(Calbiochem) 539131), 1 mM EGTA, 1% 포스파타제 억제제 (시그마 P5726 및 P0044)] 중에 재현탁시켰다. 이어서, 용액을 폴리카르보네이트 원심분리 병 (16 x 76 mm; 베크만 355603)으로 옮기고, 70.1 Ti 로터를 사용하여 4℃에서 20분 동안 초원심분리기 (베크만, XL100K)에서 15,000 g (14,800 RPM)로 원심분리하였다. 10% 수크로스의 존재 하에 저속 원심분리에서, 대부분의 PHF는 상청액에 잔류한 반면에 무손상 또는 단편화된 NFT 및 보다 큰 PHF 응집체는 펠릿화되었다. 펠릿은 폐기하였다. 20% 사르코실 (시그마 L7414-10ML)을 상청액에 최종 농도 1%로 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 이 용액을 폴리카르보네이트 병에서, 70.1 Ti로터에서 4℃에서 1시간 동안 100,000 g (38,000 RPM)로 원심분리하고, PHF-풍부 물질을 함유하는 펠릿을 총 최종 부피 1.5 mL의 PBS에 재현탁시키고, 분취하고, -80℃에서 저장하였다.
타우 응집을 억제하는 본 발명의 화합물의 능력을 시험하기 위해, DMSO 중 화합물의 연속 희석물을 인큐베이션 전에 단량체 fl타우/PHF 믹스에 첨가하였다. 인큐베이션 후, 혼합물 40 μl를 흑색 384-웰 플레이트 검정 (퍼킨-엘머(Perkin-Elmer))으로 옮기고, PBS 중의 250 mM 글리신 중 100 μM ThT (둘 다 시그마-알드리치, 스위스 부흐스) 10 μl와 혼합하였다. 형광을 테칸 판독기 스파크(Spark) 상에서 필터 (여기 448 nm/ BW 7nm, 방출 485 nm/ BW 20 nm)를 사용하여 단일 측정하였다. 2회의 독립적인 실험에 대해 각각 기술상 이중으로 용량 반응 곡선 유형을 수득하고, 그래프패드 프리즘 7.03을 사용하여 IC50을 계산하였다.
실시예 44 및 실시예 46에 의한 fl타우 응집의 억제의 IC50 값을 하기 표에 나타내었다:
Figure 112020130910314-pct00165

Claims (25)

  1. 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure 112022138509048-pct00166

    여기서
    A는
    Figure 112022138509048-pct00185

    로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서
    Figure 112022138509048-pct00186

    는 N 원자에 임의의 이용가능한 위치에서 부착될 수 있고, 여기서
    Figure 112022138509048-pct00187
    는 1개 이상의 치환기 Rj에 의해 치환되고;
    B는 O 및 NRa로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    E 및 V는 독립적으로 N, NR5, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    G는 벤젠 고리 및 피리딘 고리로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    J는 O, N-R1 및 CH2로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 J는 R2가 J에 부착된 경우에 CH 또는 C로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Y, Y1, Y2 및 Y3은 CZ이고;
    Z는 독립적으로 H, 할로겐, O-알킬, 알킬 및 CN으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R은 독립적으로
    Figure 112022138509048-pct00170
    및 -NR3R4로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Ra는 H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Rd, Re, Rf, 및 Rg는 독립적으로 H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 Rd, Re, Rf, 및 Rg 중 임의의 2개는 연결되어 3 내지 8-원 고리를 형성할 수 있고;
    여기서 A가
    Figure 112022138509048-pct00188
    인 경우에, Rj는 -할로겐, -O-알킬, -NR3R4, -CN,
    Figure 112022138509048-pct00171
    로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 C1-2 탄소 원자-함유 가교 또는 결합은 a 탄소 원자와 c 또는 d 탄소 원자 사이에 존재할 수 있거나, 또는 여기서 C1-2 탄소 원자-함유 가교 또는 결합은 b 탄소 원자와 c 또는 d 탄소 원자 사이에 존재할 수 있고;
    여기서 A가
    Figure 112022138509048-pct00189
    인 경우에, Rj는 -F, -O-(C1-C6 알킬), -NR3R4, -CN,
    Figure 112022138509048-pct00190
    로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 C1-2 탄소 원자-함유 가교 또는 결합은 a 탄소 원자와 c 또는 d 탄소 원자 사이에 존재할 수 있거나, 또는 C1-2 탄소 원자-함유 가교 또는 결합은 b 탄소 원자와 c 또는 d 탄소 원자 사이에 존재할 수 있고;
    R1은 H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R2는 독립적으로 알킬 또는 -O-알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 2개의 R2가 같은자리인 경우에, 이들은 연결되어 3 내지 6-원 고리를 형성할 수 있고;
    R3 및 R4는 독립적으로 H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R5는 H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
    r 및 s는 독립적으로 0, 1, 2 또는 3이고;
    t 및 u는 독립적으로 1, 2 또는 3이다.
  2. 제1항에 있어서, 화학식 (Ia)의 화합물이며:
    Figure 112020130910314-pct00172

    여기서, A, Ra, Rd, Re, Rf, Rg, Y, Y1, Y2 및 Y3은 제1항에 정의된 바와 같은 것인 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, A가
    Figure 112020130910314-pct00173
    이고, 여기서
    Figure 112020130910314-pct00174
    는 N 원자에 임의의 이용가능한 위치에서 부착될 수 있고, 여기서
    Figure 112020130910314-pct00175
    는 1개 이상의 치환기 Rj에 의해 치환되고, 여기서 Rj는 제1항에 정의된 바와 같은 것인 화합물.
  4. 제1항에 있어서, 화학식 (Ib)의 화합물이며:
    Figure 112020131001338-pct00176

    여기서, Ra, Rj 및 Z는 제1항에 정의된 바와 같고, p는 1 또는 2인 화합물.
  5. 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물.
    Figure 112022138509048-pct00177

    Figure 112022138509048-pct00178

    Figure 112022138509048-pct00179

    Figure 112022138509048-pct00180
  6. 제1항, 제2항, 제4항 및 제5항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 화합물, 및 임의로 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는, 알츠하이머병 (AD), 가족성 AD, 원발성 연령-관련 타우병증 (PART), 크로이츠펠트-야콥병, 권투선수 치매, 다운 증후군, 게르스트만-스트라우슬러-샤잉커병 (GSS), 봉입체 근염, 프리온 단백질 뇌 아밀로이드 혈관병증, 외상성 뇌 손상 (TBI), 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 괌형 파킨슨-치매 복합증, 신경원섬유 엉킴을 동반한 비-괌 운동 뉴런 질환, 은친화성 입자 질환, 피질기저 변성 (CBD), 석회화를 동반한 미만성 신경원섬유 엉킴, 염색체 17과 연관된 파킨슨증을 동반한 전두측두엽 치매 (FTDP-17), 할러보르덴-스파츠병, 다계통 위축 (MSA), 니만-픽병 유형 C, 담창구-교뇌-흑질 변성, 픽병 (PiD), 진행성 피질하 신경교증, 진행성 핵상 마비 (PSP), 아급성 경화성 범뇌염, 엉킴 우세 치매, 뇌염후 파킨슨증, 근긴장성 이영양증, 아급성 경화증 범뇌병증, LRRK2에서의 돌연변이, 만성 외상성 뇌병증 (CTE), 가족성 영국 치매, 가족성 덴마크 치매, 다른 전두측두엽 변성, 과들루프 파킨슨증, 뇌 철 축적을 동반한 신경변성, SLC9A6-관련 정신 지체, 구상 신경교 봉입체를 동반한 백질 타우병증, 간질, 루이 소체 치매 (LBD), 경도 인지 장애 (MCI), 다발성 경화증, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 성인 발병 당뇨병, 노인성 심장 아밀로이드증, 녹내장, 허혈성 졸중, AD 정신병 및 헌팅턴병으로부터 선택된 장애를 치료하기 위한 제약 조성물.
  7. 제1항, 제2항, 제4항 및 제5항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 화합물을 포함하는, 알츠하이머병 (AD), 가족성 AD, 원발성 연령-관련 타우병증 (PART), 크로이츠펠트-야콥병, 권투선수 치매, 다운 증후군, 게르스트만-스트라우슬러-샤잉커병 (GSS), 봉입체 근염, 프리온 단백질 뇌 아밀로이드 혈관병증, 외상성 뇌 손상 (TBI), 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 괌형 파킨슨-치매 복합증, 신경원섬유 엉킴을 동반한 비-괌 운동 뉴런 질환, 은친화성 입자 질환, 피질기저 변성 (CBD), 석회화를 동반한 미만성 신경원섬유 엉킴, 염색체 17과 연관된 파킨슨증을 동반한 전두측두엽 치매 (FTDP-17), 할러보르덴-스파츠병, 다계통 위축 (MSA), 니만-픽병 유형 C, 담창구-교뇌-흑질 변성, 픽병 (PiD), 진행성 피질하 신경교증, 진행성 핵상 마비 (PSP), 아급성 경화성 범뇌염, 엉킴 우세 치매, 뇌염후 파킨슨증, 근긴장성 이영양증, 아급성 경화증 범뇌병증, LRRK2에서의 돌연변이, 만성 외상성 뇌병증 (CTE), 가족성 영국 치매, 가족성 덴마크 치매, 다른 전두측두엽 변성, 과들루프 파킨슨증, 뇌 철 축적을 동반한 신경변성, SLC9A6-관련 정신 지체, 구상 신경교 봉입체를 동반한 백질 타우병증, 간질, 루이 소체 치매 (LBD), 경도 인지 장애 (MCI), 다발성 경화증, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 성인 발병 당뇨병, 노인성 심장 아밀로이드증, 녹내장, 허혈성 졸중, AD 정신병 및 헌팅턴병으로부터 선택된 장애의 치료, 완화 또는 예방에 사용하기 위한 제약 조성물.
  8. 알츠하이머병의 치료, 예방 또는 완화를 위한 제약 조성물이며, 제1항에 정의된 바와 같은 화합물을 포함하는 제약 조성물.
  9. 진행성 핵상 마비 (PSP)의 치료, 예방 또는 완화를 위한 제약 조성물이며, 제1항에 정의된 바와 같은 화합물을 포함하는 제약 조성물.
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여되며, 여기서 대상체는 동물 또는 인간인 제약 조성물.
  11. 제1항, 제2항, 제4항 및 제5항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 화합물, 및 제1항, 제2항, 제4항 및 제5항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 화합물과 상이한 치료제로부터 선택된 적어도 1종의 추가의 생물학적 활성 화합물, 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는, 알츠하이머병 (AD), 가족성 AD, 원발성 연령-관련 타우병증 (PART), 크로이츠펠트-야콥병, 권투선수 치매, 다운 증후군, 게르스트만-스트라우슬러-샤잉커병 (GSS), 봉입체 근염, 프리온 단백질 뇌 아밀로이드 혈관병증, 외상성 뇌 손상 (TBI), 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 괌형 파킨슨-치매 복합증, 신경원섬유 엉킴을 동반한 비-괌 운동 뉴런 질환, 은친화성 입자 질환, 피질기저 변성 (CBD), 석회화를 동반한 미만성 신경원섬유 엉킴, 염색체 17과 연관된 파킨슨증을 동반한 전두측두엽 치매 (FTDP-17), 할러보르덴-스파츠병, 다계통 위축 (MSA), 니만-픽병 유형 C, 담창구-교뇌-흑질 변성, 픽병 (PiD), 진행성 피질하 신경교증, 진행성 핵상 마비 (PSP), 아급성 경화성 범뇌염, 엉킴 우세 치매, 뇌염후 파킨슨증, 근긴장성 이영양증, 아급성 경화증 범뇌병증, LRRK2에서의 돌연변이, 만성 외상성 뇌병증 (CTE), 가족성 영국 치매, 가족성 덴마크 치매, 다른 전두측두엽 변성, 과들루프 파킨슨증, 뇌 철 축적을 동반한 신경변성, SLC9A6-관련 정신 지체, 구상 신경교 봉입체를 동반한 백질 타우병증, 간질, 루이 소체 치매 (LBD), 경도 인지 장애 (MCI), 다발성 경화증, 파킨슨병, HIV-관련 치매, 성인 발병 당뇨병, 노인성 심장 아밀로이드증, 녹내장, 허혈성 졸중, AD 정신병 및 헌팅턴병로부터 선택된 장애를 치료하기 위한 혼합물.
  12. 제11항에 있어서, 추가의 생물학적 활성 화합물이 아밀로이드증의 치료에 사용되는 화합물인 혼합물.
  13. 제11항에 있어서, 추가의 생물학적 활성 화합물이 산화성 스트레스에 대한 화합물, 항아폽토시스 화합물, 금속 킬레이트화제, DNA 복구 억제제, 피렌제핀, 피렌제핀의 대사물, 3-아미노-1-프로판술폰산 (3APS), 1,3-프로판디술포네이트 (1,3PDS), α-세크레타제 활성화제, β-세크레타제 억제제, γ-세크레타제 억제제, 타우 단백질, 신경전달물질, β-시트 브레이커, 아밀로이드 베타 소거 세포 성분 유인제, 아밀로이드 베타 고갈 세포 성분 유인제, N-말단 말단절단된 아밀로이드 베타의 억제제, 피로글루타메이트화 아밀로이드 베타 3-42, 항염증 분자, 콜린에스테라제 억제제 (ChEI), 타크린, 리바스티그민, 도네페질, 갈란타민, 및 M1 효능제로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 혼합물.
  14. 제11항에 있어서, 화합물 및/또는 추가의 생물학적 활성 화합물이 치료 유효량으로 존재하는 것인 혼합물.
  15. 제1항, 제2항, 제4항 및 제5항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 화합물을 분석 참조물 또는 시험관내 스크리닝 도구로서 사용하는 방법.
  16. 하기 화학식의 화합물:
    Figure 112022138509048-pct00184

    또는 그의 제약상 허용되는 염.
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