TWI743484B

TWI743484B - 用於治療、改善或預防與tau聚集物相關之病症的新穎化合物

Info

Publication number: TWI743484B
Application number: TW108118763A
Authority: TW
Inventors: 艾瑪紐葛畢利瑞; 傑洛米莫里特; 史林尼伐沙雀利南帕利
Original assignee: 瑞士商Ａｃ免疫公司
Priority date: 2018-06-04
Filing date: 2019-05-30
Publication date: 2021-10-21
Also published as: BR112020022245A2; CA3102343A1; KR20210005724A; TW202017924A; KR102550423B1; IL279106A; US20210267989A1; JP2021525272A; US20230255976A1; US11684625B2; AR115464A1; CA3102343C; MX2020013115A; CN112351984B; EA202092557A1; WO2019233883A1; AU2019280590A1; AU2019280590B2; EP3802533A1; JP7357371B2

Abstract

本發明係關於可用於治療、改善或預防與Tau (微管蛋白相關單元)蛋白聚集物(包含(但不限於)神經纖維纏結(NFT))相關之一群病症及異常(例如阿茲海默氏病(Alzheimer’s disease) (AD))之新穎化合物。

Description

用於治療、改善或預防與TAU聚集物相關之病症的新穎化合物

本發明係關於可用於治療、改善或預防與Tau (微管蛋白相關單元)蛋白聚集物(包含(但不限於)神經纖維纏結(NFT))相關之病症及異常之群組的新穎化合物，該等病症及異常係例如阿茲海默氏病(Alzheimer’s disease) (AD)。

許多衰老疾病係基於類澱粉或類澱粉樣蛋白之細胞外或細胞內沈積或與其相關，該等細胞外或細胞內沈積有助於發病以及疾病進展。形成細胞外聚集物之最典型類澱粉蛋白係類澱粉β (Aβ)。形成細胞外聚集物之類澱粉蛋白之其他實例係普里昂蛋白(prion)、ATTR (轉甲狀腺素蛋白)或ADan (ADanPP)。主要形成細胞內聚集物之類澱粉樣蛋白包含(但不限於) Tau、α-突觸核蛋白(synuclein)、TAR DNA結合蛋白43 (TDP-43)及杭丁頓蛋白(huntingtin) (htt)。涉及Tau聚集物之疾病通常列示為tau蛋白病變，例如AD。

類澱粉或類澱粉樣沈積源自蛋白質之錯誤摺疊，隨後聚集產生β-褶板組合體，其中多個肽或蛋白質藉由分子間氫鍵結合在一起。儘管類澱粉或類澱粉樣蛋白具有不同一級胺基酸序列，但其沈積物通常含有許多共有分子組分，尤其係存在β-褶板四級結構。類澱粉沈積與疾病之間之關聯仍在很大程度上不清楚。已發現，眾多蛋白質聚集物(包含與疾病病理學相關及不相關者)具有毒性，從而表明類澱粉之公共分子特徵與疾病發作相關或造成了疾病發作(Bucciantini等人，Nature, 2002, 416, 507-11)。β-褶板聚集肽或蛋白質之各種多聚體亦與自二聚體至可溶性低分子量寡聚物、基原纖維或不溶性原纖維沈積物之不同肽或蛋白質之毒性相關。

阿茲海默氏病(AD)係認為主要由類澱粉斑塊引起之神經學病症，類澱粉斑塊係(類澱粉-β) Aβ聚集物在腦中之異常沈積物之細胞外累積。AD中之其他主要神經病理學標誌係藉由聚集過磷酸化Tau蛋白、錯誤摺疊之Tau或病理Tau及其構形異構體所產生之細胞內神經纖維纏結(NFT)。AD與許多神經退化性tau蛋白病變、尤其特定類型之額顳葉失智症(FTD)具有相同疾病發生論。Tau蛋白係一種易溶性「天然未摺疊」蛋白，其緊密結合至微管(MT)以促進其組裝及穩定性。MT對於神經元之細胞骨架完整性極為重要，且因此對於神經元迴路之適當形成及功能以及由此之學習及記憶亦極為重要。Tau與MT之結合由動態磷酸化及去磷酸化控制，如主要在活體外及非神經元細胞中所證實。在AD大腦中，Tau病況(tau蛋白病變)之發展晚於類澱粉病況，但對於Aβ蛋白是否係AD中之致病因子(其構成所謂的類澱粉級聯假說之本質)仍存在爭議(Hardy等人，Science 1992, 256, 184-185；Musiek等人，Nature Neurosciences 2015, 18(6), 800-806)。使類澱粉與Tau病況建立關聯之確切機制仍所知甚少，但已提出，其涉及作用於GSK3及cdk5 (作為主要「Tau激酶」)或由其作用之神經元信號傳導路徑之激活(Muyllaert等人，Rev. Neurol. (Paris), 2006, 162, 903-7；Muyllaert等人，Genes Brain and Behav. 2008，增刊1，57-66)。儘管tau蛋白病變之發生晚於類澱粉，但其不僅係無害副效應，且亦係AD中之主要病理執行者。在實驗小鼠模型中，由類澱粉病況引起之認知缺陷因不存在Tau蛋白而幾乎完全改善(Roberson等人，Science, 2007, 316(5825), 750-4)且認知功能障礙及失智症之嚴重程度與tau蛋白病變而非類澱粉病況相關。

涉及Tau聚集物之疾病通常列示為tau蛋白病變且其包含(但不限於)阿茲海默氏病(AD)、家族性AD、PART (原發性年齡相關性tau蛋白病變)、庫賈氏病(Creutzfeldt-Jacob disease)、拳擊手型失智症、唐氏症候群(Down’s Syndrome)、吉斯曼-史特斯勒-先克病(Gerstmann-Sträussler-Scheinker disease) (GSS)、包涵體肌炎、普里昂蛋白腦類澱粉血管病變、創傷性腦損傷(TBI)、肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、關島帕金森症-失智症複合症(Parkinsonism-dementia complex of Guam)、具有神經纖維纏結之非關島運動神經元疾病(non-Guamanian motor neuron disease with neurofibrillary tangles)、嗜銀顆粒病、皮質基底退化(CBD)、具有鈣化之瀰漫性神經纖維纏結、17號染色體相關之額顳葉失智症合併帕金森症(FTDP-17)、哈勒沃登-施帕茨病(Hallervorden-Spatz disease)、多系統萎縮(MSA)、C型尼曼-皮克病(Niemann-Pick disease type C)、蒼白球-腦橋-黑質退化、皮克氏病(Pick’s disease) (PiD)、進行性皮質下神經膠瘤病、進行性核上性麻痺(PSP)、亞急性硬化性泛腦炎、纏結顯著失智症、腦炎後帕金森症、肌強直性營養不良、亞急性硬化性泛腦病、LRRK2突變、慢性創傷性腦病(CTE)、家族性英國型失智症(familial British dementia)、家族性丹麥型失智症(familial Danish dementia)、其他額顳葉退化、瓜德羅普帕金森症(Guadeloupean Parkinsonism)、神經退化伴腦內鐵累積、SLC9A6相關性智力遲鈍、白質tau蛋白病變伴球狀膠質細胞包涵體、癲癇、路易氏體失智症(Lewy body dementia) (LBD)、輕度認知損傷(MCI)、多發性硬化、帕金森氏病(Parkinson's disease)、HIV相關性失智症、成人型糖尿病、老年性心臟類澱粉變性、青光眼、缺血性中風、AD中之精神病及亨廷頓氏病(Huntington's disease)。(Williams等人，Intern. Med. J., 2006, 36, 652-60；Kovacs等人，J Neuropathol Exp Neurol. 2008；67(10): 963-975；Higuchi等人，Neuropsychopharmacology - 5th Generation of Progress, 2002，第9部分，第94章: 1339-1354；Hilton等人，Acta Neuropathol. 1995;90(1):101-6；Iqbal等人，Biochimica et Biophysica Acta 1739 (2005) 198- 210；McQuaid等人，Neuropathol Appl Neurobiol. 1994 Apr;20(2):103-10；Vossel等人，Lancet Neurol 2017; 16: 311-22；Stephan等人，Molecular Psychiatry (2012) 17, 1056-1076；Anderson等人，Brain (2008), 131, 1736-1748；Savica等人，JAMA Neurol. 2013;70(7):859-866；Brown等人，Molecular Neurodegeneration 2014, 9:40；El Khoury等人，Front. Cell. Neurosci., 2014，第8卷，第22項: 1-18；Tanskanen等人，Ann. Med. 2008;40(3):232-9；Gupta等人，CAN J OPHTHALMOL-VOL. 43, NO. 1, 2008: 53-60；Dickson等人，Int J Clin Exp Pathol 2010;3(1):1-23；Fernández-Nogales等人，Nature Medicine, 20, 881-885 (2014)；Bi等人，Nature Communications，第8卷，文章號：473 (2017)；Murray等人，Biol Psychiatry. 2014年4月1日；75(7): 542-552)。

2017年，在臨床試驗中用於治療阿茲海默氏病之所有藥劑中，靶向Tau者極為稀少且僅佔II期臨床試驗之8% (Cummings等人，Alzheimer’s & Dementia: Translational Research & Clinical Interventions 3 (2017) 367-384)。靶向Tau蛋白之當前治療方式主要包括基於抗體之方式且主要侷限性在於僅靶向細胞外Tau。在使用小分子之方式中，已研發若干Tau激酶抑制劑，但在毒性及特異性方面極具挑戰性。然而，當前在臨床試驗中僅測試一種激酶抑制劑尼羅替尼(Nilotinib)。最後，在Tau聚集抑制劑中，僅一種(LMTX)當前用於臨床試驗中(Cummings等人，2017)。儘管今年來基於Tau之治療已成為愈受關注之焦點，仍極需靶向已知或假設引起tau蛋白病變之病理學Tau構形異構體之其他治療劑。

WO2011/128455涉及適於治療與類澱粉蛋白或類澱粉樣蛋白相關之病症之特定化合物。

本發明目標係提供可用於治療、改善或預防與Tau蛋白聚集物相關之病症及異常(包含(但不限於) NFT，例如阿茲海默氏病(AD))之群之化合物。另外，業內需要可用作用於以下之治療劑之化合物：(a)藉由識別聚集Tau且(例如)藉由改變Tau聚集物分子構形以解聚Tau來降低Tau聚集物/NFT，及/或(b)防止形成Tau聚集物，及/或(c)干擾細胞內Tau聚集物。本發明者令人吃驚地發現，該等目標可藉由如下文所闡述之式(I)化合物來達成。

式(I)化合物顯示藉由識別聚集Tau且(例如)藉由改變Tau聚集物分子構形以解聚Tau來降低Tau聚集物之較高能力。一些式(I)化合物防止形成Tau聚集物，且/或干擾細胞內Tau聚集物。儘管不期望受限於理論，但假設式(I)化合物抑制Tau聚集或解聚預形成Tau聚集物(包含在存在於細胞內時)。因獨特設計特徵，該等化合物顯示諸如適當親脂性及分子量、腦攝取及藥物動力學、細胞滲透性、溶解性及代謝穩定性等性質以成為用於治療、改善或預防tau蛋白病變之成功藥劑。

超結構分析已展示，Tau包涵體係由配對螺旋絲(PHF)或直絲(SF)構成。高解析度結構分析已展示，該等絲係由包括Tau之胺基酸306-378且採用交叉β/β-螺旋結構之核心區域構成。本發明化合物可識別聚集Tau且(例如)藉由改變Tau聚集物分子構形來解聚Tau，且由此預計可促進Tau清除。

另外，已展示，Tau能夠在細胞間傳播且某些形式之Tau (用作種子)能夠誘導健康細胞內之天然Tau蛋白之結構變化以發生錯誤摺疊及聚集。據信，聚集Tau負責播種且由此導致Tau病況擴散。本發明化合物可干擾細胞內聚集Tau且由此預計可減小Tau病況擴散，並最終預防或減少AD中之相關認知缺陷。

本發明揭示能夠降低Tau聚集物、識別聚集Tau及(例如)藉由改變Tau聚集物分子構形來解聚Tau之新穎式(I)化合物。

本發明揭示一些能夠防止形成Tau聚集物及/或干擾細胞內Tau聚集物之新穎式(I)化合物。

本發明提供使用式(I)化合物或其醫藥組合物治療與Tau蛋白聚集物(包含但不限於NFT)相關之病症及異常之方法。本發明另外提供一種醫藥組合物，其包括式(I)化合物及醫藥上可接受之載劑或賦形劑。

本發明匯總於下列項目中： 1. 一種式(I)化合物，

或其立體異構體、外消旋混合物、互變異構體、醫藥上可接受之鹽、前藥、水合物、溶劑合物及多晶型；其中A 係選自由以下組成之群：

及

，其中

及

可在任一可用位置連接至N原子，其中含有E 及V 之5員環係不飽和的，且其中

及

經一或多個取代基R^j 取代；B 係選自由以下組成之群：O及NR^a ；E 及V 獨立地選自由以下組成之群：N、NR⁵ 、O及S；G 係選自由以下組成之群：苯環及吡啶環；J 係選自由O、N-R¹ 及CH₂ 組成之群，或若J 連接至R² ，則J 係選自由CH或C組成之群；Y 、Y¹ 、Y² 及Y³ 係CZ；Z 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、O-烷基、烷基及CN；R 獨立地選自由以下組成之群：

及-NR³ R⁴ ；R^a 係選自由以下組成之群：H及烷基；R^d 、R^e 、R^f 及R^g 獨立地選自由H及烷基組成之群，或R^d 、R^e 、R^f 及R^g 中之任兩者可接合以形成3員至8員環；R^j 獨立地選自由以下組成之群：-鹵素、-O-烷基、-NR³ R⁴ 、-CN、

及

，其中含有C_1-2 碳原子之橋或鍵可存在於a碳原子與c或d碳原子之間或其中含有C_1-2 碳原子之橋或鍵可存在於b碳原子與c或d碳原子之間；R¹ 係選自由以下組成之群：H及烷基；R² 獨立地選自由烷基或-O-烷基組成之群且其中若兩個R² 係孿位，則其可接合以形成3員至6員環；R³ 及R⁴ 獨立地選自由以下組成之群：H及烷基；R⁵ 係選自由以下組成之群：H及烷基；n 為0、1、2、3或4；r 及s 獨立地係0、1、2或3；且t 及u 獨立地係1、2或3。 2. 如項目1之化合物，其係式(Ia)化合物：

其中A 、R^a 、R^d 、R^e 、R^f 、R^g 、Y 、Y¹ 、Y² 及Y³ 係如項目1中所定義。 3. 如項目1及2中任一項之化合物，其中A 係

，其中

可在任一可用位置連接至N原子，其中A 經一或多個取代基R^j 取代，且其中R^j 係如項目1中所定義。 4. 如項目1至3中任一項之化合物，其係式(Ib)化合物：

其中R^a 、R^j 及Z 係如項目1中所定義且p 為1或2。 5. 如項目1至4中任一項之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：

。 6. 一種醫藥組合物，其包括如項目1至5中任一項之化合物及視情況醫藥上可接受之載劑或賦形劑。 7. 如項目1至5中任一項之化合物，其用作藥劑。 8. 如項目1至5中任一項之化合物，其用於治療、改善或預防與Tau蛋白聚集物相關之病症或異常。 9. 如項目1至5中任一項之化合物，其用於降低tau聚集。 10. 如項目1至5中任一項之化合物，其用於防止形成Tau聚集物及/或用於使用抑制Tau聚集。 11. 如項目1至5中任一項之化合物，其用於干擾細胞內Tau聚集物。 12. 一種治療、預防或改善與Tau蛋白聚集物相關之病症之方法，該方法包括向有需要之個體投與有效量之如項目1至5中任一項之化合物。 13. 一種降低tau聚集之方法，該方法包括向有需要之個體投與有效量之如項目1至5中任一項之化合物。 14. 一種防止形成Tau聚集物及/或抑制Tau聚集之方法，該方法包括向有需要之個體投與有效量之如項目1至5中任一項之化合物。 15. 一種干擾細胞內Tau聚集物之方法，該方法包括向有需要之個體投與有效量之如項目1至5中任一項之化合物。 16. 一種如項目1至5中任一項之化合物之用途，其用以製造用於治療與Tau蛋白聚集物相關之病症或異常之藥劑。 17. 一種如項目1至5中任一項之化合物之用途，其用以製造用於降低tau聚集之藥劑。 18. 一種如項目1至5中任一項之化合物之用途，其用以製造用於防止形成Tau聚集物及/或用於抑制Tau聚集之藥劑。 19. 一種如項目1至5中任一項之化合物之用途，其用以製造用於干擾細胞內Tau聚集物之藥劑。 20. 一種混合物，其包括如項目1至5中任一項之化合物及至少一種選自不同於如項目1至5中任一項之化合物之治療劑之其他生物活性化合物、醫藥上可接受之載劑、稀釋劑及賦形劑。 21. 如項目20之混合物，其中該其他生物活性化合物係用於治療類澱粉變性之化合物。 22. 如項目20或21之混合物，其中該其他生物活性化合物係選自由以下組成之群：抵抗氧化壓力之化合物、抗細胞凋亡化合物、金屬螯合劑、DNA修復抑制劑(例如哌侖西平(pirenzepine)及代謝物)、3-胺基-1-丙烷磺酸(3APS)、1,3-丙烷二磺酸鹽(1,3PDS)、α-分泌酶活化劑、β-分泌酶抑制劑及γ-分泌酶抑制劑、Tau蛋白、神經傳遞質、β-褶板破碎劑、類澱粉β清除/消耗細胞組分之引誘劑、N-末端截短類澱粉β (包含焦麩胺酸化類澱粉β 3-42)之抑制劑、抗發炎性分子或膽鹼酯酶抑制劑(ChEI) (例如塔克寧(tacrine)、利凡斯的明(rivastigmine)、多奈派齊(donepezil)及/或加蘭他敏(galantamine))、M1激動劑、其他藥物(包含任一類澱粉或Tau修飾藥物及營養補充劑)、抗體(包含任一功能等效抗體或其功能部分)或疫苗。 23. 如項目22之混合物，其中該生物活性化合物係膽鹼酯酶抑制劑(ChEI)。 24. 如項目22之混合物，其中該其他生物活性化合物係選自由以下組成之群：塔克寧、利凡斯的明、多奈派齊、加蘭他敏、尼亞新(niacin)及美金剛(memantine)。 25. 如項目22之混合物，其中該其他生物活性化合物係抗體、尤其單株抗體，包含任一功能等效抗體或其功能部分。 26. 如項目20至25中任一項之混合物，其中該化合物及/或該其他生物活性化合物係以治療有效量存在。 27. 如項目8之化合物、如項目12之方法或如項目16之用途，其中該病症係選自阿茲海默氏病(AD)、家族性AD、原發性年齡相關性tau蛋白病變(PART)、庫賈氏病、拳擊手型失智症、唐氏症候群、吉斯曼-史特斯勒-先克病(GSS)、包涵體肌炎、普里昂蛋白腦類澱粉血管病變、創傷性腦損傷(TBI)、肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、關島帕金森症-失智症複合症、具有神經纖維纏結之非關島運動神經元疾病、嗜銀顆粒病、皮質基底退化(CBD)、具有鈣化之瀰漫性神經纖維纏結、17號染色體相關之額顳葉失智症合併帕金森症(FTDP-17)、哈勒沃登-施帕茨病、多系統萎縮(MSA)、C型尼曼-皮克病、蒼白球-腦橋-黑質退化、皮克氏病(PiD)、進行性皮質下神經膠瘤病、進行性核上性麻痺(PSP)、亞急性硬化性泛腦炎、纏結顯著失智症、腦炎後帕金森症、肌強直性營養不良、亞急性硬化性泛腦病、LRRK2突變、慢性創傷性腦病(CTE)、家族性英國型失智症、家族性丹麥型失智症、其他額顳葉退化、瓜德羅普帕金森症、神經退化伴腦內鐵累積、SLC9A6相關性智力遲鈍、白質tau蛋白病變伴球狀膠質細胞包涵體、癲癇、路易氏體失智症(LBD)、輕度認知損傷(MCI)、多發性硬化、帕金森氏病、HIV相關性失智症、成人型糖尿病、老年性心臟類澱粉變性、青光眼、缺血性中風、AD中之精神病及亨廷頓氏病、較佳地阿茲海默氏病(AD)、皮質基底退化(CBD)、皮克氏病(PiD)及進行性核上性麻痺(PSP)。 28. 一種如項目1至5中任一項之化合物之用途，其用作分析參考或活體外篩選工具。 29. 一種下式之化合物，

或

或其醫藥上可接受之鹽。

定義在本申請案之含義內，使用下列定義：「烷基」係指由碳及氫原子組成之飽和直鏈或具支鏈有機部分。適宜烷基之實例具有1至6個碳原子、較佳地1至4個碳原子，且包含甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、第三丁基及異丁基。

「Hal」或「鹵素」係指F、Cl、Br及I、較佳地F。

「3員至8員環」係指3-、4-、5-、6-、7-或8員環，其中環中之零個、一個或多個碳原子已由1或2個(對於三員環)、1、2或3個(對於4員環)、1、2、3或4個(對於5員環)或1、2、3、4或5個(對於6員環)、1、2、3、4、5或6個(對於7員環)或1、2、3、4、5、6或7個(對於8員環)相同或不同之雜原子代替，其中雜原子係選自O、N及S。

具有一或多個光學活性碳之本發明化合物可以以下形式存在：外消旋物及外消旋混合物(包含呈所有比率之混合物)、立體異構體(包含非對映異構體混合物及個別非對映異構體、對映異構體混合物及單一對映異構體、構形異構體混合物及單一構形異構體)、互變異構體、阻轉異構體及旋轉異構體。所有異構體形式皆包含於本發明中。本發明中所闡述含有烯系雙鍵之化合物包含E及Z幾何異構體。本發明亦包含所有醫藥上可接受之鹽、前藥、多晶型、水合物及溶劑合物。

術語「多晶型」係指本發明化合物之各種結晶結構。此可包含(但不限於)晶體形態(及非晶形材料)及所有晶格形式。本發明之鹽可為結晶鹽且可以一種以上多晶型存在。

本發明亦涵蓋鹽之溶劑合物、水合物以及無水形式。溶劑合物中所包含之溶劑並無特定限制且可為任一醫藥上可接受之溶劑。實例包含水及C_1-4 醇(例如甲醇或乙醇)。

「醫藥上可接受之鹽」定義為所揭示化合物之衍生物，其中母體化合物係藉由製備其酸式或鹼式鹽來加以改質。醫藥上可接受之鹽之實例包含(但不限於)鹼性殘基(例如胺)之無機酸鹽或有機酸鹽、酸性殘基(例如羧酸)之鹼性鹽或有機鹽及諸如此類。醫藥上可接受之鹽包含自(例如)無毒無機酸或有機酸形成之母體化合物之習用無毒鹽或四級銨鹽。舉例而言，該等習用無毒鹽包含源自無機酸者，該等無機酸係(例如但不限於)鹽酸、氫溴酸、硫酸、胺基磺酸、磷酸、硝酸及諸如此類；及自有機酸製得之鹽，該等有機酸係(例如但不限於)乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、巴莫酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、麩胺酸、苯甲酸、水楊酸、磺胺酸、2-乙醯氧基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羥乙磺酸及諸如此類。本發明之醫藥上可接受之鹽可藉由習用化學方法自含有鹼性或酸性部分之母體化合物來合成。通常，可藉由使該等化合物之游離酸或鹼形式與化學計量量之適當鹼或酸在水或有機溶劑或兩種溶劑之混合物中進行反應來製備該等鹽。有機溶劑包含(但不限於)非水性介質，如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。適宜鹽之列表可參見Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing Company, Easton, PA, 1990, p. 1445，該文獻之揭示內容以引用方式併入本文中。

本發明化合物亦可以前藥形式提供，亦即在活體內代謝成活性代謝物之化合物。如下文在本發明說明及申請專利範圍中所使用，術語「前藥」意指任一因活體內生物轉變而釋放活性親代醫藥之共價鍵結之化合物。Goodman及Gilman概述前藥之參考文獻(The Pharmacological Basis of Therapeutics，第8版，McGraw-Hill, Int. Ed. 1992, 「Biotransformation of Drugs」, p 13-15)以引用方式併入本文中。

「醫藥上可接受」定義為彼等在合理醫學判斷範圍內適於與人類及動物之組織接觸使用而無過度毒性、刺激性、過敏反應或其他問題或併發症且與合理益處/風險比相稱之化合物、材料、組合物及/或劑型。

本發明中之患者或個體通常係動物、尤其哺乳動物、更尤其人類。

本文所用之「Tau」係指主要發現於神經元中之高度可溶性微管結合蛋白且包含主要6種同種型、裂解或截短形式及其他經修飾形式(例如源自磷酸化、醣基化、醣化、脯胺醯基異構化、硝化、乙醯化、聚胺化、泛素化、蘇素化及氧化)。

「聚集Tau」係指摺疊成寡聚或聚合結構之Tau肽或蛋白之聚集單體。

本文所用之「神經纖維纏結」 (NFT)係指含有配對螺旋絲及直絲之過度磷酸化Tau蛋白之不溶性聚集物。其存在係AD及稱為tau蛋白病變之其他疾病之標誌。

除非另外陳述，否則「定義」部分中所給出之定義及較佳定義適用於下述所有實施例。

本發明化合物闡述於下文中。應理解，亦構想下列定義之所有可能組合。

在一實施例中，本發明係關於式(I)化合物：

或其立體異構體、外消旋混合物、互變異構體、醫藥上可接受之鹽、前藥、水合物、溶劑合物及多晶型。式(I)化合物之較佳實施例係

式(I)化合物之另一較佳實施例係

更佳地，式(I)化合物係

A 之下列定義適用於式(I)化合物及其較佳實施例。A 係選自由以下組成之群：

及

。在式

及

中，G 係選自苯環及吡啶環。因此，

及

涵蓋下列實施例：

及

。在一較佳實施例中，

係選自

及

。在另一較佳實施例中，

係

。在一較佳實施例中，A 係

及

。在一更佳實施例中，A 係選自

及

。在另一較佳實施例中，A 係選自

及

。在一甚至更佳實施例中，A 係

。在A 之上述定義及其較佳實施例中，

及

可在任一可用位置連接至N原子。在A 之上述定義及其較佳實施例中，A 經一或多個取代基R^j 取代，舉例而言，R^j 可存在一或兩次。若A 係苯基環，則可較佳地存在1或2個取代基。若A 係吡啶環，則可較佳地存在1個取代基。下列定義在適當時適用於式(I)及其較佳實施例。B 係選自由以下組成之群：O及NR^a 。更佳地，B 係NR^a 。E 及V 獨立地選自由以下組成之群：N、NR⁵ 、O及S，從而

係選自

較佳地，

係選自

。對於

而言，可考慮E 、V 及G 之相同組合。J 係選自由O、N-R¹ 及CH₂ 組成之群，或若J 連接至R² ，則J 係選自由CH或C組成之群。在一實施例中，J 係O，在另一實施例中，J 係N-R¹ (較佳地N-Me)且在另一實施例中，J 係CH₂ 、CH或C。Y 、Y¹ 、Y² 及Y³ 係CZ，更佳地，Y 、Y¹ 、Y² 及Y³ 係CH。Z 獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素(較佳地F)、O-烷基、烷基及CN、較佳地H、鹵素(較佳地F)及O-烷基。在一較佳實施例中，一個Z 係鹵素(較佳地F)或O-烷基且其他Z 係H。在一更佳實施例中，一個Z 係鹵素(較佳地F)且其他Z 係H。R 獨立地選自由以下組成之群：

及-NR³ R⁴ ，較佳地，R 係

。R^a 係選自由以下組成之群：H及烷基、更佳地H及Me。R^d 、R^e 、R^f 及R^g 獨立地選自由H及烷基組成之群，或R^d 、R^e 、R^f 及R^g 中之任兩者可接合以形成3員至8員環。較佳地，R^d 、R^e 、R^f 、R^g 獨立地係H或R^d 及R^f 可接合在一起以形成含有C_1-2 碳原子之橋。更佳地，R^d 、R^e 、R^f 及R^g 係H。R^j 獨立地係選自由以下組成之群：-鹵素、-O-烷基、-NR³ R⁴ 、-CN、

及

，其中含有C_1-2 碳原子之橋或鍵可存在於a碳原子與c或d碳原子之間或其中含有C_1-2 碳原子之橋或鍵可存在於b碳原子與c或d碳原子之間。更佳地，R^j 係選自由以下組成之群：-鹵素(較佳地-F)、-O-烷基(較佳地-O-Me)及

(較佳地

或

)，甚至更佳地，R^j 係

。R¹ 係選自由以下組成之群：H及烷基、較佳地烷基、更佳地CH₃ 。R² 獨立地選自由烷基或-O-烷基組成之群且其中若兩個R² 係孿位，則其可接合以形成3員至6員環。在一實施例中，R² 係烷基，在另一實施例中，R² 係-O-烷基，在另一實施例中，兩個孿位R² 可接合以形成3員至6員環。R³ 及R⁴ 獨立地選自由以下組成之群：H及烷基。在一實施例中，R³ 或R⁴ 係烷基且另一者係H。在另一實施例中，R³ 係烷基且R⁴ 係烷基。在另一實施例中，R³ 及R⁴ 係H。R⁵ 係選自由以下組成之群：H及烷基。在一實施例中，R⁵ 係H。在另一實施例中，R⁵ 係烷基。n 為0、1、2、3或4、更佳地0、1或2，甚至更佳地，n 為0。p 為1或2、更佳地1。r 及s 獨立地係0、1、2或3。t 及u 獨立地係1、2或3。較佳式(I)化合物係

較佳化合物亦闡釋於實例中。本文所揭示之實施例、較佳實施例及更佳實施例之任一組合亦構想於本發明中。

醫藥組合物 儘管本發明化合物可單獨投與，但較佳地根據標準醫藥實踐將其調配成醫藥組合物。因此，本發明亦提供一種醫藥組合物，其包括治療有效量之式(I)化合物視情況與醫藥上可接受之載劑、稀釋劑、佐劑或賦形劑之混合物。

醫藥上可接受之賦形劑在醫藥技術中眾所周知，且闡述於(例如) Remington's Pharmaceutical Sciences，第15版，Mack Publishing Co., New Jersey (1975)中。可根據預期投與途徑及標準醫藥實踐來選擇醫藥賦形劑。賦形劑在對其接受者無害之意義上必須可接受。

可用於調配本發明之醫藥組合物之醫藥有用賦形劑可包括(例如)載劑、媒劑、稀釋劑、溶劑(例如一元醇，例如乙醇、異丙醇；及多元醇，例如二醇；及可食用油，例如大豆油、椰子油、橄欖油、紅花油、棉籽油；油性酯，例如油酸乙基酯、肉豆蔻酸異丙基酯)、黏合劑、佐劑、增溶劑、增稠劑、穩定劑、崩解劑、助流劑、潤滑劑、緩衝劑、乳化劑、潤濕劑、懸浮劑、甜味劑、著色劑、矯味劑、塗覆劑、防腐劑、抗氧化劑、處理劑、藥物遞送改良劑及增強劑(例如磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石粉、單醣、二醣、澱粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、右旋糖、羥丙基-ß-環糊精、聚乙烯基吡咯啶酮、低熔點蠟及離子交換樹脂)。

本發明化合物之投與(遞送)途徑包含(但不限於)以下中之一或多者：口服(例如以錠劑、膠囊形式或以可攝取溶液形式)、局部、經黏膜(例如以用於吸入之鼻噴霧或氣溶膠形式)、經鼻、非經腸(例如藉由可注射形式)、經胃腸道、脊柱內、腹膜腔內、肌內、靜脈內、子宮內、眼內、真皮內、顱內、氣管內、陰道內、大腦心室內、大腦內、皮下、經眼部(包含玻璃體內或經前房內)、經皮、直腸、經頰、硬膜外及舌下。

舉例而言，可以錠劑、膠囊、陰道、酏劑、溶液或懸浮液之形式經口投與化合物，該等形式可含有矯味劑或著色劑且用於立即-、延遲-、改良-、持續-、脈衝-或受控釋放應用。

錠劑可含有賦形劑(例如微晶纖維素、乳糖、檸檬酸鈉、碳酸鈣、磷酸氫鈣及甘胺酸)、崩解劑(例如澱粉(較佳地玉米、馬鈴薯或木薯澱粉)、羥基乙酸澱粉鈉、交聯羧甲基纖維素鈉及某些複雜矽酸鹽)及粒化黏合劑(例如聚乙烯基吡咯啶酮、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥丙基纖維素(HPC)、蔗糖、明膠及阿拉伯膠)。另外，可包含潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸、山萮酸甘油基酯及滑石粉。類似類型之固體組合物亦可用作明膠膠囊中之填充劑。此方面之較佳賦形劑包含乳糖、澱粉、纖維素、乳糖或高分子量聚乙二醇。對於水性懸浮液及/或酏劑而言，可組合試劑與以下物質：各種甜味劑或矯味劑、著色物質或染料、乳化劑及/或懸浮劑及稀釋劑(例如水、乙醇、丙二醇及甘油)及其組合。

若非經腸投與本發明化合物，則該投與之實例包含以下中之一或多者：經靜脈內、經動脈內、經腹膜腔內、經鞘內、經心室內、經尿道內、經胸骨內、經顱內、經肌內或經皮下投與化合物；及/或藉由使用輸注技術。對於非經腸投與而言，最佳使用呈可含有其他物質(例如使得溶液與血液等滲之足夠鹽或葡萄糖)之無菌水溶液形式之化合物。應視需要適宜地緩衝水溶液(較佳地直至pH為3至9)。藉由熟習此項技術者熟知之標準醫藥技術可易於在無菌條件下製備適宜非經腸調配物。

如所指示，本發明化合物可經鼻內或藉由吸入投與且便利地以自加壓容器、幫浦、噴霧器或霧化器呈遞之乾粉吸入劑或氣溶膠噴霧形式來遞送，其中使用適宜推進劑，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氫氟烷(例如1,1,1,2-四氟乙烷(HFA134AT)或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷(HFA 227EA))、二氧化碳或其他適宜氣體。在增壓氣溶膠之情形下，劑量單元可藉由提供閥以遞送計量量來確定。加壓容器、幫浦、霧化器或噴霧器可含有活性化合物之溶液或懸浮液(例如使用乙醇及推進劑之混合物作為溶劑，其可另外含有潤滑劑(例如山梨醇酐三油酸酯))。用於吸入器或吹入器中之膠囊及藥筒(例如自明膠製得)可經調配以含有化合物與適宜粉劑基質(例如乳糖或澱粉)之粉劑混合物。

或者，本發明化合物可以栓劑或陰道栓之形式來投與，或其可以凝膠、水凝膠、洗劑、溶液、乳霜、軟膏或可撒施粉劑之形式經局部施加。本發明化合物亦可經真皮或經皮投與，例如藉由使用皮膚貼劑。

其亦可藉由肺或直腸途徑投與。其亦可藉由經眼途徑投與。對於眼部應用而言，可將化合物調配成於等滲、pH調節無菌鹽水中之微粉化懸浮液，或較佳地調配成於等滲、pH調節無菌鹽水中之溶液，視情況與防腐劑(例如苯紮氯銨(benzylalkonium chloride))組合。或者，其可調配於軟膏(例如礦脂)中。

為經局部施加至皮膚，本發明化合物可調配為適宜軟膏，該軟膏含有懸浮或溶解於(例如)下列物質中之一或多者之混合物中之活性化合物：礦物油、液體礦脂、白色礦脂、丙二醇、乳化蠟及水。或者，其可調配為適宜洗劑或乳霜且懸浮或溶解於中(例如)下列物質中之一或多者之混合物中；礦物油、山梨醇酐單硬脂酸酯、聚乙二醇、液體石蠟、聚山梨醇酯60、鯨蠟基酯蠟、鯨蠟硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄基醇及水。

通常，醫師將確定最適用於個別個體之實際劑量。對於任一具體個體，特定劑量值及劑量頻率可能有所變化且將取決於各種因素，包含所用特定化合物之活性、該化合物之代謝穩定性及作用時間長度、年齡、體重、整體健康狀況、性別、飲食、投與模式及時間、排泄速率、藥物組合、特定病狀之嚴重程度及接受療法之個體。

用於投與人類(大約70 kg體重)之本發明化合物之提出劑量為0.1 mg至1 g、較佳地1 mg至500 mg活性成分/單位劑量。可(例如)每天投與單位劑量1至4次。劑量取決於投與途徑。應瞭解，端視患者之年齡及體重以及擬治療病狀之嚴重程度，可能需要對劑量作出常規變化。精確劑量及投與途徑最終由主治醫師或獸醫來判斷。

本發明化合物亦可與其他治療劑組合使用。在本發明化合物與有效針對相同疾病之第二治療劑組合使用時，每一化合物之劑量可不同於單獨使用該化合物時。

上文所提及之組合可便利地以醫藥調配物之形式呈現使用。該等組合之個別組分可依序或同時以分開或組合之醫藥調配物藉由任一便利途徑來投與。在依序投與時，可首先投與本發明化合物或第二治療劑。在同時投與時，該組合可以相同或不同醫藥組合物投與。在組合於相同調配物中時，應瞭解，兩種化合物必須穩定且彼此以及與調配物之其他組分相容。在分開調配時，其可以任一便利調配物便利地以業內已知用於該等化合物之方式來提供。

本發明之醫藥組合物可以熟習此項技術者本身已知之方式來產生，如(例如) Remington's Pharmaceutical Sciences，第15版，Mack Publishing Co., New Jersey (1975)中所闡述。

可使用本發明化合物治療、改善或預防之疾病或病狀係與Tau蛋白聚集物相關之病症或異常(例如神經退化性病症)。可治療、改善或預防之疾病及病狀之實例係由神經原纖維病灶之形成引起或與其相關。此係tau蛋白病變中之主要腦病理學。該等疾病及病狀包括異質群體之神經退化性疾病或病狀，包含展示共存在Tau及類澱粉病況之疾病或病狀。

可治療、改善或預防之疾病及病狀之實例包含(但不限於)阿茲海默氏病(AD)、家族性AD、PART (原發性年齡相關性tau蛋白病變)、庫賈氏病、拳擊手型失智症、唐氏症候群、吉斯曼-史特斯勒-先克病(GSS)、包涵體肌炎、普里昂蛋白腦類澱粉血管病變、創傷性腦損傷(TBI)、肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、關島帕金森症-失智症複合症、具有神經纖維纏結之非關島運動神經元疾病、嗜銀顆粒病、皮質基底退化(CBD)、具有鈣化之瀰漫性神經纖維纏結、17號染色體相關之額顳葉失智症合併帕金森症(FTDP-17)、哈勒沃登-施帕茨病、多系統萎縮(MSA)、C型尼曼-皮克病、蒼白球-腦橋-黑質退化、皮克氏病(PiD)、進行性皮質下神經膠瘤病、進行性核上性麻痺(PSP)、亞急性硬化性泛腦炎、纏結顯著失智症、腦炎後帕金森症、肌強直性營養不良、亞急性硬化性泛腦病、LRRK2突變、慢性創傷性腦病(CTE)、家族性英國型失智症、家族性丹麥型失智症、其他額顳葉退化、瓜德羅普帕金森症、神經退化伴腦內鐵累積、SLC9A6相關性智力遲鈍、白質tau蛋白病變伴球狀膠質細胞包涵體、癲癇、路易氏體失智症(LBD)、輕度認知損傷(MCI)、多發性硬化、帕金森氏病、HIV相關性失智症、成人型糖尿病、老年性心臟類澱粉變性、青光眼、缺血性中風、AD中之精神病及亨廷頓氏病。較佳地，可治療、改善或預防之疾病及病狀包含阿茲海默氏病(AD)以及其他神經退化性tau蛋白病變(例如庫賈氏病、拳擊手型失智症、肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、嗜銀顆粒病、皮質基底退化(CBD)、17號染色體相關之額顳葉失智症合併帕金森症(FTDP-17)、皮克氏病(PiD)、進行性核上性麻痺(PSP)、纏結顯著失智症、關島帕金森症-失智症複合症、哈勒沃登-施帕茨病、慢性創傷性腦病(CTE)、創傷性腦損傷(TBI)及額顳葉退化)。更佳係阿茲海默氏病(AD)、皮質基底退化(CBD)、皮克氏病(PiD)及進行性核上性麻痺(PSP)。

本發明化合物亦可用於降低蛋白聚集、尤其Tau聚集。可(例如)使用ThT分析來測定化合物降低Tau聚集之能力(Hudson等人，FEBS J., 2009, 5960-72)。

本發明化合物可用於治療寬範圍其中神經發炎過程與Tau蛋白之錯誤摺疊及/或病理學聚集相關之病症。

本發明化合物可用作分析參考或活體外篩選工具來表徵具有Tau病況之組織且用於測試靶向該組織上之Tau病況之化合物。

本發明化合物亦可以與至少一種其他生物活性化合物及/或醫藥上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑之混合物形式來提供。該化合物及/或其他生物活性化合物較佳地係以治療有效量存在。

其他生物活性化合物之性質將取決於混合物之預期應用。其他生物活性物質或化合物可相對於本發明化合物藉由相同或類似機制或藉由非相關作用機制或藉由多種相關及/或非相關作用機制來施加其生物效應。

通常，其他生物活性化合物可包含神經元傳遞增強劑、精神治療藥、乙醯基膽鹼酯酶抑制劑、鈣通道阻斷劑、生物胺、苯并二氮呯鎮靜劑、乙醯基膽鹼合成、儲存或釋放增強劑、乙醯基膽鹼突觸後受體激動劑、單胺氧化酶-A或-B抑制劑、N-甲基-D-天門冬胺酸麩胺酸鹽受體拮抗劑、非類固醇抗發炎性藥物、抗氧化劑及血清素能受體拮抗劑。特定而言，其他生物活性化合物可選自由以下組成之群：用於治療類澱粉變性之化合物、抵抗氧化壓力之化合物、抗細胞凋亡化合物、金屬螯合劑、DNA修復抑制劑(例如哌侖西平及代謝物)、3-胺基-1-丙烷磺酸(3APS)、1,3-丙烷二磺酸鹽(1,3PDS)、α-分泌酶活化劑、β-分泌酶抑制劑及γ-分泌酶抑制劑、Tau蛋白、神經傳遞質、β-褶板破碎劑、類澱粉β清除/消耗細胞組分之引誘劑、N-末端截短類澱粉β (包含焦麩胺酸化類澱粉β 3-42)之抑制劑、抗發炎性分子或膽鹼酯酶抑制劑(ChEI) (例如塔克寧、利凡斯的明、多奈派齊及/或加蘭他敏)、M1激動劑、其他藥物(包含任一類澱粉或Tau修飾藥物及營養補充劑)、抗體(包含任一功能等效抗體或其功能部分)或疫苗。

在另一實施例中，本發明混合物可包括尼亞新或美金剛以及本發明化合物及視情況醫藥上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑。

在本發明之再一實施例中，提供包括「非典型抗精神病藥」 (作為其他生物活性化合物)以及本發明化合物及視情況醫藥上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑之混合物，該抗精神病藥係(例如)氯氮平(clozapine)、齊拉西酮(ziprasidone)、利培酮(risperidone)、阿立哌唑(aripiprazole)或奧氮平(olanzapine)且用於治療陽性及陰性精神病症狀(包含幻覺、妄想、思維病症(表現為顯著之語無倫次、思維出軌、言不及義)及奇特或錯亂行為以及興趣缺失、情緒淡然、情感淡漠及社交退縮)。

可適宜地與本發明化合物組合用於混合物中之其他化合物(例如)闡述於WO 2004/058258 (尤其參見第16及17頁)中，包含治療性藥物靶(第36至39頁)、烷烴磺酸及烷醇硫酸(第39至51頁)、膽鹼酯酶抑制劑(第51至56頁)、NMDA受體拮抗劑(第56至58頁)、雌激素(第58至59頁)、非類固醇抗發炎性藥物(第60及61頁)、抗氧化劑(第61及62頁)、過氧化物酶體增殖子活化受體(PPAR)激動劑(第63至67頁)、降膽固醇劑(第68至75頁)、類澱粉抑制劑(第75至77頁)、類澱粉形成抑制劑(第77至78頁)、金屬螯合劑(第78及79頁)、抗精神病藥及抗抑鬱劑(第80至82頁)、營養補充劑(第83至89頁)及增加生物活性物質在腦中之可用性之化合物(參見第89至93頁)及前藥(第93及94頁)，該文件以引用方式併入本文中。

本發明亦包含本發明化合物之所有適宜同位素變化形式。本發明化合物之同位素變化形式定義為至少一個原子經具有相同原子序數但原子質量不同於通常在自然界中發現之原子質量的原子代替者。可納入本發明化合物中之同位素的實例包含氫、碳、氮、氧、硫、氟及氯之同位素，例如分別為² H、³ H、¹³ C、¹⁴ C、¹⁵ N、¹⁷ O、¹⁸ O、³⁵ S、¹⁸ F及³⁶ Cl。本發明之某些同位素變化形式(例如納入放射性同位素(例如³ H或¹⁴ C)者)可用於藥物及/或基質組織分佈研究中。氚化(亦即³ H)及碳-14 (亦即¹⁴ C)同位素因其易於製備及可檢測性而尤佳。¹⁸ F-標記化合物尤其適用於成像應用(例如PET)。另外，使用諸如氘(亦即² H)等同位素進行取代因具有更強之代謝穩定性從而可提供某些治療優點，例如活體內半衰期延長或劑量需要減少，且因此可在一些情況下較佳。本發明化合物之同位素變化形式通常可藉由習用程序、例如藉由闡釋性方法或藉由下文實例及製備中所闡述之製備使用適宜試劑之適當同位素變化形式來製得。

本發明化合物可藉由下列反應圖中所展示之一般方法中之一者來合成。該等方法僅用於闡釋性目的且不應解釋為限制性。

用於製備本發明之結構單元之一般合成反應圖： 反應圖1

在酸性條件下於適宜溶劑中加熱市售苯基肼衍生物(Z = H、F或OMe)與市售3-側氧基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(費希爾吲哚合成(Fischer-Indole synthesis))以在純化之後提供三環衍生物(在Z = F或OMe時，可能形成區域異構體)。倘若形成區域異構體，則藉由超臨界流體層析(SFC)將其分離以獲得期望四氫-1H -吡啶并[3,4-b ]吲哚衍生物。利用Boc保護基團使用適當之溶劑及鹼進一步保護三環結構單元之脂肪族二級NH-部分以在純化之後提供期望之經Boc保護之結構單元。反應圖 2

使用碘甲烷或甲苯磺醯氯在適當溶劑中使用適宜鹼來處理三環結構單元之NH-部分以在純化之後提供N-甲基或N-甲苯磺醯基衍生物。藉由酸處理在適當溶劑中裂解Boc保護基團以在純化之後提供期望N-甲基或N-甲苯磺醯基三環結構單元。倘若在裂解Boc保護基團之後並無鹼處理，則獲得相應鹽。反應圖 3

在酸性條件下於適宜溶劑中加熱市售苯基肼衍生物(Z = F)與市售2-側氧基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(費希爾吲哚合成)以提供三環衍生物。在2-或3取代苯基肼衍生物之情形下，藉由超臨界流體層析(SFC)分離區域異構體。然後使用適當溶劑及鹼對脂肪族二級胺部分實施Boc保護以在純化之後提供期望結構單元。然後使用甲苯磺醯氯於適當溶劑中使用適宜鹼處理吲哚部分之NH-部分以在純化之後提供N-甲苯磺醯基衍生物。藉由酸處理在適當溶劑中裂解Boc保護基團以在純化之後提供含有二級胺之三環結構單元。倘若在裂解Boc保護基團之後並無鹼處理，則獲得相應鹽。反應圖4

使用一級或二級胺在適當溶劑中且使用其他鹼處理含有兩個鹵素(Br或Cl)原子之市售苯并[d ]噻唑(G = Ph)或苯并[d ]噁唑(G = Ph)衍生物。經由親核性取代藉由一級或二級胺代替離去基團X以在純化之後提供相應經胺基取代之苯并[d ]噻唑或苯并[d ]噁唑衍生物。在較小反應性胺之情形下，藉由在微波條件下實施親核性取代反應來獲得期望苯并[d ]噻唑或苯并[d ]噁唑衍生物。使用嗎啉在適當溶劑中且使用其他鹼處理含有兩個鹵素(Br或Cl)原子之相應噻唑并[5,4-b ]吡啶(G = Py)及噻唑并[4,5-b ]吡啶(G = Py)衍生物，且在純化之後獲得相應親核性置換產物(嗎啉基-噻唑并[5,4-b ]吡啶(G = Py)及嗎啉基-噻唑并[4,5-b ]吡啶(G = Py)衍生物)。

用於製備本發明化合物之一般合成反應圖： 反應圖5

經由鈀化學使用適宜鈀源(如乙酸鈀(II) (Pd(OAc)₂ )、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (Pd₂ (dba)₃ ))、適宜配體(如2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(RuPhos)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫噸(Xantphos)、2-二環己基膦基-2′,4′,6′-三異丙基聯苯(Xphos))及適宜鹼(如碳酸銫(Cs₂ CO₃ )及第三丁醇鈉(NaOtBu))在適宜溶劑(如二噁烷)中使B = NCH₃ 、O之三環結構單元與經取代苯并[d ]噻唑或苯并[d ]噁唑衍生物或經取代苯基或吡啶衍生物進行偶合以在純化之後提供期望式(I)化合物。反應圖 6

經由鈀化學使用適宜鈀源(如乙酸鈀(II) (Pd(OAc)₂ )、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (Pd₂ (dba)₃ ))、適宜配體(如2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(RuPhos)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫噸(Xantphos)、2-二環己基膦基-2′,4′,6′-三異丙基聯苯(Xphos))及適宜鹼(如碳酸銫(Cs₂ CO₃ )及第三丁醇鈉(NaOtBu))在適宜溶劑(如二噁烷)中使在吲哚部分處含有N-甲苯磺醯基之三環結構單元與經取代苯并[d ]噻唑或苯并[d ]噁唑衍生物或經取代苯基或吡啶衍生物進行偶合以在純化之後提供期望式(I)化合物。倘若甲苯磺醯基在鈀偶合期間未裂解，則通常使用適宜鹼(如第三丁醇鈉(NaOtBu))在適當溶劑混合物(如二噁烷及甲醇)中處理經甲苯磺醯基保護之化合物以在純化之後提供期望式(I)化合物。反應圖7

經由鈀化學使用適宜鈀源(如乙酸鈀(II) (Pd(OAc)₂ )、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (Pd₂ (dba)₃ ))、適宜配體(如2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(RuPhos)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫噸(Xantphos)、2-二環己基膦基-2′,4′,6′-三異丙基聯苯(Xphos))及適宜鹼(如碳酸銫(Cs₂ CO₃ )及第三丁醇鈉(NaOtBu))在適宜溶劑(如二噁烷)中使在吲哚部分處含有N-甲苯磺醯基或NCH₃ -基團之三環結構單元與經鹵素取代之苯并[d ]噻唑或苯并[d ]噁唑衍生物進行偶合提供期望中間體。隨後使用針對第一步驟所闡述之類似條件使單鹵化中間體與嗎啉進行鈀偶合以在純化之後提供期望式(I)化合物。倘若甲苯磺醯基在最終鈀偶合期間未裂解，則通常使用適宜鹼(如第三丁醇鈉(NaOtBu))在適當溶劑混合物(如二噁烷及甲醇)中處理經甲苯磺醯基保護之化合物以在純化之後提供期望式(I)化合物。

實例所有試劑及溶劑皆係自商業來源獲得且未經進一步純化即使用。在Bruker AV 300及400 MHz光譜儀上於氘化溶劑中記錄1H NMR光譜。以百萬分率形式報告化學位移(δ)且以赫茲形式報告偶合常數(J值)。藉由下列符號來指示自旋多重性：s (單峰)、d (雙重峰)、t (三重峰)、q (四重峰)、m (多重峰)、bs (寬單峰)。在使用6130 Chemstation之Agilent 1290 Infinity II光譜儀及使用6130 Chemstation之Agilent 1200 Infinity II光譜儀上獲得質譜。使用Agilent 7890B氣相層析及5977B質譜儀收集GC−MS數據。在PerkinElmer光譜儀上獲得紅外光譜。使用矽膠(Fluka: Silica ge10l 60, 0.063-0.2 mm)及如具體實例中所指示之適宜溶劑來實施層析。使用具有HP-Sil或KP-NH SNAP柱之Biotage Isolera (Biotage)及具體實例中所指示之溶劑梯度來實施急速純化。在具有UV檢測之矽膠板上實施薄層層析(TLC)。

製備實例 1

步驟 A 在0℃下，向(4-氟苯基)肼HCl-鹽(1 g, 6.1 mmol)及3-側氧基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(1.2 g, 6.1 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之溶液中添加濃H₂ SO₄ (1 mL)。然後將反應混合物在110℃下加熱3 h。將反應混合物冷卻至25℃且過濾掉沈澱物。將固體溶於水中，使用NaOH溶液鹼化並使用二氯甲烷萃取。分離有機相，藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓下去除溶劑以提供淺黃色固體形式之環化標題化合物(0.6 g, 54%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 10.73 (br-s, 1H), 7.21-7.22 (m, 1H), 7.06-7.07 (m, 1H), 6.78-6.79 (m, 1H), 3.83 (s, 2H), 2.94-2.95 (m, 2H), 2.49-2.50 (m, 2H)。 MS: 191 (M+H)⁺ 。步驟 B 向來自上述步驟A之標題化合物(0.6 g, 3.15 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.3 mL, 9.47 mmol)及二碳酸二-第三丁基酯(0.757 g, 3.46 mmol)且將反應混合物攪拌12 h。在如藉由TLC所證實完成反應之後，在減壓下去除溶劑且藉由急速管柱層析使用己烷/乙酸乙酯(80:20)純化粗製反應混合物以提供淺黃色固體形式之標題化合物(0.55 g, 60%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 10.94 (br-s, 1H), 7.26-7.28 (m, 1H), 7.12-7.13 (m, 1H), 6.83-6.84 (m, 1H), 4.55 (s, 2H), 3.64-3.66 (m, 2H), 2.65 (s, 2H), 1.47 (s, 9H)。 MS: 191 (M-Boc)⁺ 。步驟 C 向來自上述步驟B之標題化合物(0.55 g, 1.89 mmol)於THF (5 mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.136 g, 5.6 mmol)，且隨後添加碘甲烷(0.13 mL, 2.07 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌2 h。將混合物溶於乙酸乙酯(20 mL)中並使用水及鹽水洗滌。分離有機相，藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並在減壓下去除溶劑。藉由急速管柱層析使用己烷/乙酸乙酯(70:30)純化粗製反應混合物以提供甲基化標題化合物(0.42 g, 73%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.40-7.42 (m, 1H), 7.18-7.19 (m, 1H), 6.92-6.93 (m, 1H), 4.61 (s, 2H), 3.64-3.65 (m, 5H), 2.67 (br-s, 2H), 1.47 (s, 9H)。 MS: 305.0 (M+H)⁺ 。步驟 D 向來自上述步驟C之標題化合物(0.42 g, 1.38 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加於1,4-二噁烷中之2N HCl (5 mL)。將反應混合物攪拌過夜。在完成反應之後，蒸發反應混合物以去除溶劑並使用二乙醚洗滌以提供灰白色固體形式之標題化合物(0.25 g, 80%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 9.83 (br-s, 1H), 7.47-7.50 (m, 1H), 7.30 (d, J = 9.60 Hz, 1H), 7.02 (bs, 1H), 4.42 (s, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.40 (br-s, 2H), 2.92 (br-s, 2H)。 MS: 205.2 (M+H)⁺ 。

製備實例 2

步驟 A 向來自製備實例1之步驟B之標題化合物(0.55 g, 1.89 mmol)於THF (5 mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.136 g, 5.6 mmol)，且隨後添加對甲苯磺醯氯(0.396 g, 2.07 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。將混合物溶於乙酸乙酯(20 mL)中並使用水及鹽水洗滌。分離有機相，藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並在減壓下去除溶劑。藉由急速管柱層析使用己烷/乙酸乙酯(70:30)純化粗製反應混合物以提供標題化合物(0.4 g, 47%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 8.00 (s, 1H), 7.77 (s, 2H), 7.30-7.32 (m, 3H), 7.16-7.18 (m, 1H), 4.87 (s, 2H), 3.64 (s, 2H), 2.62 (br-s, 2H), 2.32 (s, 3H), 1.39 (s, 9H)。 MS: 445.2 (M+H)⁺ 。步驟 B 向來自上述步驟A之標題化合物(0.4 g, 0.9 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加於1,4-二噁烷中之2N HCl (5 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌12 h。在完成反應之後，蒸發反應混合物以去除溶劑並使用二乙醚洗滌以提供灰白色固體形式之標題化合物(0.25 g, 80%)。粗產物原樣用於下一步驟中。 MS: 345.0 (M+H)⁺ 。

製備實例 3

步驟 A 在0℃下，向(4-甲氧基苯基)肼HCl-鹽(10 g, 57.5 mmol)及3-側氧基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(11.4 g, 57.5 mmol)於1,4-二噁烷(100 mL)中之溶液中添加濃H₂ SO₄ (10 mL)。然後將反應混合物在110℃下加熱3 h。將反應混合物冷卻至25℃且過濾掉沈澱物。將固體溶於水中，使用NaOH溶液鹼化並使用二氯甲烷萃取。分離有機相，藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓下去除溶劑以提供褐色膠狀固體形式之環化標題化合物(10 g，粗製物)。產物原樣用於下一步驟中。 MS: 203.2 (M+H)⁺ 。步驟 B 向來自上述步驟A之標題化合物(10 g, 49.5 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加三乙胺(20 mL, 148.5 mmol)及二碳酸二-第三丁基酯(11.8 g, 54 mmol)且將反應混合物攪拌12 h。在如藉由TLC所證實完成反應之後，在減壓下去除溶劑且藉由急速管柱層析使用己烷/乙酸乙酯(80:20)純化粗製反應混合物以提供白色固體形式之標題化合物(4 g, 26.7%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 10.67 (br-s, 1H), 7.19 (d,J = 8.40 Hz, 1H), 6.89 (d,J = 2.00 Hz, 1H), 6.66-6.67 (m, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.65-3.66 (m, 2H), 2.64-2.66 (m, 2H), 1.44 (s, 9H)。 MS: 303.2 (M+H)⁺ 。步驟 C 向來自上述步驟B之標題化合物(2 g, 6.6 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.317 g, 13.2 mmol)，且隨後添加碘甲烷(0.4 mL, 7.26 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌2 h。將混合物溶於乙酸乙酯(200 mL)中並使用水及鹽水洗滌。分離有機相，藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並在減壓下去除溶劑。藉由急速管柱層析使用己烷/乙酸乙酯(80:20)純化粗製反應混合物以提供甲基化標題化合物(0.65 g, 30%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.30 (d,J = 8.80 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.73-6.73 (m, 1H), 4.59 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.60-3.64 (m, 5H), 2.66-2.68 (m, 2H), 1.45 (s, 9H)。 MS: 317.2 (M+H)⁺ 。步驟 D 向來自上述步驟C之標題化合物(0.65 g, 2.05 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加於1,4-二噁烷中之4N HCl (5 mL)。將反應混合物攪拌過夜。在完成反應之後，蒸發反應混合物以去除溶劑並使用二乙醚洗滌以提供灰白色固體形式之標題化合物(0.5 g, 98%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 9.80 (s, 2H), 7.35 (d,J = 8.80 Hz, 1H), 6.99 (d,J = 2.00 Hz, 1H), 6.79-6.80 (m, 1H), 4.39 (s, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 3.38-3.40 (m, 2H), 2.90-2.92 (m, 2H)。 MS: 217.3 (M+H)⁺ 。

製備實例 4

步驟 A 向來自製備實例3之步驟B之標題化合物(2 g, 6.6 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.317 g, 13.2 mmol)，且隨後添加對甲苯磺醯氯(1.5 g, 7.9 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌2 h。將混合物溶於乙酸乙酯(200 mL)中並使用水及鹽水洗滌。分離有機相，藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並在減壓下去除溶劑以提供標題化合物(1.5 g, 50%)。粗產物原樣用於下一步驟中。 MS: 357.2 (M-Boc)⁺ 。步驟 B 向來自上述步驟A之標題化合物(1.5 g, 3.28 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之溶液中添加於1,4-二噁烷中之2N HCl (10 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌12 h。在完成反應之後，蒸發反應混合物以去除溶劑並使用二乙醚洗滌以提供灰白色固體形式之標題化合物(1 g, 77%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 9.91 (br-s, 2H), 7.83 (d,J = 8.40 Hz, 3H), 7.35 (d,J = 8.40 Hz, 2H), 7.06 (d,J = 2.00 Hz, 1H), 6.93-6.94 (m, 1H), 4.61 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.57 (s, 4H), 3.44 (s, 4H), 2.89 (br-s, 2H), 2.32 (s, 3H)。 MS: 357.2 (M+H)⁺ 。

製備實例 5

步驟 A 將5-氟-2-肼基吡啶(5 g)及3-側氧基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(5 g)於甲醇(50 mL)中之溶液在25℃下攪拌12 h。在藉由TLC證實完成反應之後，濃縮反應混合物且深褐色粗產物(10 g)未經進一步純化即直接用於下一步驟中。 MS: 309.1 (M+H)⁺ 。步驟 B 使用微波將來自上述步驟A之粗製標題化合物(10 g)於二乙二醇(20 ml)中之溶液在180℃下加熱90 min (4批)。在藉由LCMS證實完成反應之後，將反應混合物傾倒至水中，隨後使用二氯甲烷萃取。分離有機層，濃縮以得到粗產物，使用二乙醚洗滌並在真空下乾燥以提供淺褐色固體形式之標題化合物(1 g, 16%)。 MS: 192.2 (M+H)⁺ 。步驟 C 向來自上述步驟B之標題化合物(1 g, 5.23 mmol)於THF (10 ml)中之溶液中添加三乙胺(2.2 ml, 15.39 mmol)，隨後添加二碳酸二-第三丁基酯(1.36 g, 6.28 mmol)。然後將反應混合物在室溫下攪拌12 h。在如藉由TLC所證實完成反應之後，去除溶劑且藉由急速管柱層析使用己烷/乙酸乙酯(60:40)純化粗製反應混合物以提供黃色固體形式之標題化合物(1.1 g, 72%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 11.54 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.65 (d,J = 12.40 Hz, 1H), 3.65-3.66 (m, 2H), 2.82 (t,J = 8.80 Hz, 2H), 1.95 (t,J = 6.40 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H)。 MS: 292.2 (M+H)⁺ 。步驟 D 在0℃下，向來自上述步驟C之標題化合物(1.1 g, 3.78 mmol)於N ,N ’-二甲基甲醯胺(10 mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.226 g, 5.67 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌30 min，隨後在0℃下添加碘甲烷(0.25 mL, 4.15 mmol)。然後將反應混合物在0℃下攪拌30 min。在藉由TLC完成反應之後，使用冰水將反應混合物驟冷，隨後使用乙酸乙酯(20 mL)萃取。濃縮有機層以得到黃色固體形式之粗產物(1 g)，其未經進一步純化即直接用於下一步驟中。 MS: 306.1 (M+H)⁺ 。步驟 E 向來自上述步驟D之標題化合物(1 g)於二氯甲烷(10 ml)中之溶液中添加於1,4-二噁烷中之2N HCl (5 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌3 h。在完成反應之後，蒸發反應混合物以去除溶劑並使用二乙醚洗滌以提供淺黃色固體形式之標題化合物(0.25, 37%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 11.32 (t,J = 6.92 Hz, 2H), 8.32 (s, 1H), 7.87 (d,J = 9.12 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.45 (s, 2H), 2.94 (t,J = 5.88 Hz, 2H), 2.17 (t,J = 4.80 Hz, 2H)。 MS: 206.1 (M+H)⁺ 。

製備實例 6

步驟 A 在0℃下，向來自製備實例5之步驟C之標題化合物(1.1 g, 3.78 mmol)於N ,N ’-二甲基甲醯胺(10 mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.226 g, 5.67 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌30 min，隨後添加對甲苯磺醯氯(0.788 g, 4.15 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌30 min。使用冰水將混合物驟冷並使用乙酸乙酯(20 mL)萃取。分離有機相，藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並在減壓下去除溶劑以提供淺褐色固體形式之粗製標題化合物(1 g)。粗產物原樣用於下一步驟中。 MS: 446.1 (M+H)⁺ 。步驟 B 向來自上述步驟A之標題化合物(1 g)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加於1,4-二噁烷中之2N HCl (5 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌3 h。在完成反應之後，蒸發反應混合物以去除溶劑並使用二乙醚洗滌以提供淺黃色固體形式之標題化合物(0.75 g, 65%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 8.40 (d,J = 1.24 Hz, 1H), 7.97 (d,J = 8.24 Hz, 2H), 7.88 (q,J = 2.64 Hz, 1H), 7.40 (d,J = 8.24 Hz, 2H), 3.37 (q,J = 5.20 Hz, 2H), 3.22 (t,J = 6.12 Hz, 2H), 2.33 (d,J = 12.52 Hz, 3H), 2.09 (t,J = 5.00 Hz, 2H)。 MS: 346.1 (M+H)⁺ 。

製備實例 7

步驟 A 在0℃下，向(3-氟苯基)肼鹽酸鹽(25 g, 153.7 mmol)及3-側氧基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(30.59 g, 153.7 mmol)於1,4-二噁烷(250 mL)中之溶液中添加濃H₂ SO₄ (25 mL)。然後將反應混合物在110℃下加熱3 h。將反應混合物冷卻至25℃且過濾掉沈澱物。將固體溶於水中，使用NaOH溶液鹼化並使用二氯甲烷萃取。分離有機相，藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓下去除溶劑以提供淺褐色固體形式之環化標題化合物(23 g)。粗製區域異構體混合物原樣用於下一步驟中。 MS: 191 (M+H)⁺ 。步驟 B 向來自上述步驟A之標題化合物(23 g, 121.05 mmol)於THF (250 mL)中之溶液中添加三乙胺(33.7 mL, 242.1 mmol)及二碳酸二-第三丁基酯(32 g, 145.2 mmol)且將反應混合物攪拌12 h。在如藉由TLC所證實完成反應之後，在減壓下去除溶劑且藉由急速管柱層析使用己烷/乙酸乙酯(80:20)純化粗製反應混合物以提供淺黃色固體形式之標題化合物(7 g, 20%)。 MS: 191.2 (M-Boc)⁺ 。步驟 C 藉由SFC對掌性管柱(YMC直鏈澱粉-SA)分離來自上述步驟B之區域異構體混合物(7.0 g，比率：95/5)以提供具有100%區域異構體純度之淺黃色固體之期望主要區域異構體(3 g, 43%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 10.95 (br-s, 1H), 7.35-7.37 (m, 1H), 7.09-7.12 (m, 1H), 6.80-6.85 (m, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.66 (t,J = 5.64 Hz, 2H), 2.67 (t,J = 5.48 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H)。 MS: 191.2 (M-Boc)⁺ 。亦分離次要區域異構體(0.3 g, 4.3%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 11.16 (s, 1H), 7.13 (d,J = 8.12 Hz, 1H), 6.96-7.01 (m, 1H), 6.68-6.70 (m, 1H), 4.56 (s, 2H), 3.67 (t,J = 5.64 Hz, 2H), 2.78 (t,J = 5.24 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H)。 MS: 191.2 (M-Boc)⁺ 。步驟 D 向來自上述步驟C之主要區域異構體(1.5 g, 5.16 mmol)於N ,N ’-二甲基甲醯胺(15 mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.3 g, 7.74 mmol)，隨後添加對甲苯磺醯氯(1.17 g, 6.19 mmol)。將反應混合物在室溫攪拌30 min。將混合物溶於乙酸乙酯(50 mL)中並使用水及鹽水洗。分離有機相，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並在減壓下去除溶劑。藉由急速管柱層析使用己烷/乙酸乙酯(80:20)純化粗製物質以提供標題化合物(2 g, 87%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.75-7.78 (m, 3H), 7.47-7.48 (m, 1H), 7.38-7.40 (m, 2H), 7.16-7.17 (m, 1H), 4.84 (s, 2H), 3.61-3.62 (m, 2H), 2.63-2.66 (m, 2H), 2.32 (s, 3H), 1.44 (s, 9H)。 MS: 345.2 (M-Boc)⁺ 。步驟 E 向來自上述步驟D之標題化合物(2 g, 4.5 mmol)於二氯甲烷(120 mL)中之溶液中添加於1,4-二噁烷中之2N HCl (10 mL)。將反應混合物在室溫攪拌12 h。在完成反應之後，蒸發反應混合物以去除溶劑並使用二乙醚洗以提供灰白色固體之標題化合物(1.6 g 94%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 9.65 (br-s, 2H), 7.93 (d,J = 7.92 Hz, 2H), 7.72-7.72 (m, 1H), 7.58-7.59 (m, 1H), 7.40 (d,J = 8.24 Hz, 2H), 7.19-7.24 (m, 1H), 4.65 (s, 2H), 3.36 (bs, 2H), 2.91 (br-s, 2H), 2.35 (s, 3H)。 MS: 345.2 (M+H)⁺ 。

製備實例 8

步驟 A 向來自製備實例7之步驟C之次要區域異構體(0.3 g, 1.034 mmol)於THF (10 mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.082 g, 2.06 mmol)，且隨後添加對甲苯磺醯氯(0.294 g, 1.55 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌30 min。將混合物溶於乙酸乙酯(30 mL)中並使用水及鹽水洗滌。分離有機相，藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並在減壓下去除溶劑以提供粗製標題化合物(0.25 g, 55%)。粗產物原樣用於下一步驟中。 MS: 345.1 (M+H)⁺ 。步驟 B 向來自上述步驟A之標題化合物(0.25 g, 0.56 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加於1,4-二噁烷中之2N HCl (2 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌12 h。在完成反應之後，蒸發反應混合物以去除溶劑並使用二乙醚洗滌以提供灰白色固體形式之粗製標題化合物(0.2 g)。 MS: 345.1 (M+H)⁺ 。

製備實例 9

步驟 A 向來自製備實例7之步驟C之主要區域異構體(1.0 g, 3.44 mmol)於THF (15 mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.275 g, 6.89 mmol)，且隨後添加碘甲烷(10.3 mL, 4.14 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌30 min。將混合物溶於乙酸乙酯(40 ml)中並使用水、鹽水洗滌並藉由Na₂ SO₄ 乾燥。藉由急速管柱層析使用己烷/乙酸乙酯(70:30)純化粗製反應混合物以提供標題化合物(1.0 g, 96%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.38-7.40 (m, 1H), 7.28-7.29 (m, 1H), 6.87 (d,J = 12.80 Hz, 1H), 4.59 (s, 2H), 3.61-3.63 (m, 5H), 2.68 (s, 2H), 1.45 (s, 9H)。 MS: 305.1 (M+H)⁺ 。步驟 B 向來自上述步驟A之標題化合物(1.0 g, 3.28 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加於1,4-二噁烷中之2N HCl (5 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌12 h。在完成反應之後，蒸發反應混合物以去除溶劑並使用二乙醚洗滌以提供灰白色固體形式之標題化合物(0.75 g 96%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 9.86 (br-s, 2H), 7.46-7.47 (m, 1H), 7.34-7.37 (m, 1H), 6.89-6.90 (m, 1H), 4.39 (s, 2H), 3.63 (s, 3H), 3.37 (d,J = 6.04 Hz, 2H), 2.91-2.93 (m, 2H)。 MS: 205.1 (M+H)⁺ 。

製備實例 10

步驟 A 在0℃下，向(4-氟苯基)肼鹽酸鹽(2 g, 12.3 mmol)及2-側氧基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(2.7 g ,12.3 mmol)於1,4-二噁烷(30 mL)中之溶液中添加濃H₂ SO₄ (2 mL)。然後將反應混合物在100℃下加熱12 h。在完成反應之後，將反應混合物冷卻至室溫且藉由高真空去除溶劑以得到粗製物質。藉由使用30%氫氧化鈉溶液來鹼化粗製物質，隨後使用乙酸乙酯(50 mL)萃取。使用水(20 mL)及鹽水溶液(10 mL)洗滌乙酸乙酯層。藉由Na₂ SO₄ 乾燥有機層，過濾並蒸發以提供淺褐色膠狀物質形式之粗製標題化合物(1.6 g, 83%)。粗產物原樣用於下一步驟中。 MS: 217.2 (M+H)⁺ 。步驟 B 向來自上述步驟A之標題化合物(2 g, 5.1 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中添加三乙胺(2.56 mL, 18 mmol )及二碳酸二-第三丁基酯(2.21 g, 10 mmol)且將反應混合物攪拌12 h。在如藉由TLC所證實完成反應之後，在減壓下去除溶劑且藉由急速管柱層析使用於石油醚中之40%至50%乙酸乙酯純化粗製反應混合物以提供淺黃色固體形式之標題化合物(0.9 g, 31%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 10.94 (br-s, 1H), 7.22-7.23 (m, 2H), 6.80-6.81 (m, 1H), 5.09 (d,J = 5.20 Hz, 2H), 4.46 (br-s, 1H), 3.22 (br-s, 1H), 2.50-2.51 (m, 1H), 2.22 (br-s, 1H), 2.06 (br-s, 1H), 1.79 (br-s, 1H), 1.58-1.60 (m, 1H), 1.42 (s, 9H)。 MS: 261.2 (M-第三丁基)⁺ 。步驟 C 在0℃下，向來自上述步驟B之標題化合物(1 g, 3.16 mmol)於THF (15 mL)中之溶液中以小份添加氫化鈉(60%，於礦物油中；0.25 g, 6.32 mmol)。在完成添加之後，將反應混合物在室溫下攪拌30 min，且然後將反應混合物再次冷卻至0℃。然後在0℃下向反應混合物中逐滴添加對甲苯磺醯氯(0.72 g, 3.79 mmol)於THF (5 mL)中之溶液。在完成添加之後，將反應混合物在室溫下攪拌2 h。在藉由TLC證實完成反應之後，將反應混合物冷卻至0℃並使用冰水驟冷，隨後使用乙酸乙酯(50 mL)萃取。使用水(10 mL)及鹽水溶液(10 mL)洗滌乙酸乙酯層。藉由Na₂ SO₄ 乾燥有機層，過濾並蒸發以提供粗產物，藉由矽膠管柱使用於石油醚中之15%至25%乙酸乙酯純化以提供灰白色固體形式之標題化合物(0.9 g, 61%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 8.01-8.02 (m, 1H), 7.58-7.60 (m, 2H), 7.50-7.51 (m, 1H), 7.50-7.51 (m, 2H), 7.15-7.16 (m, 1H), 5.06 (br-s, 1H), 4.46 (br-s, 1H), 3.35 (br-s, 1H), 2.91 (br-s, 1H), 2.44 (br-s, 3H), 1.77-1.79 (m, 3H), 1.56-1.58 (m, 1H), 1.27-1.33 (m, 9H)。 MS: 371.1 (M-Boc)⁺ 。步驟 D 在0℃下，向來自上述步驟C之標題化合物(0.9 g , 1.91 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中添加於1,4-二噁烷中之4N HCl (10 mL)。將反應混合物在環境溫度下攪拌12 h。在完成反應之後，蒸發反應混合物以去除溶劑並使用二乙醚(10 mL)洗滌以提供粗製灰白色固體形式之標題化合物(0.65 g, 93%)。 MS: 371.1 (M+H)⁺ 。

製備實例 11

步驟 A 在0℃下，向三環胰蛋白酶(tryptoline) (2,3,4,9-四氫-1H -吡啶并[4,3-b ]吲哚) (150 g, 0.871 mol)於THF (1.5 L)中之經攪拌溶液中添加三乙胺(243 mL, 1.74 mol)及二碳酸二-第三丁基酯(228 g, 1.04 mol)且將反應混合物在25℃下攪拌12 h。在完成反應(藉由TLC監測)之後，在冰冷卻下向反應混合物中添加水並使用乙酸乙酯(2 × 500 mL)萃取。使用鹽水(1 × 250 mL)洗滌合併之有機萃取物，藉由無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並在減壓下蒸發以得到粗產物。使用二乙醚(200 mL)攪拌粗製物質且過濾由此獲得之固體，使用二乙醚(2 × 100 mL)洗滌並乾燥以提供褐色固體形式之標題化合物(200 g, 84%)。¹ H-NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ = 7.94 (br-s, 1H), 7.51 (d,J = 7.60 Hz, 1H), 7.33-7.34 (m, 1H), 7.11-7.13 (m, 2H), 4.67 (s, 2H), 3.79 (br-s, 2H), 2.83 (br-s, 2H), 1.53 (s, 9H)。 MS: 273.2 (M+H)⁺ 。步驟 B 在0℃下，向氫化鈉(15.86 g, 60%礦物油，1.10 mol)於無水THF (400 mL)中之經攪拌懸浮液中緩慢添加來自上述步驟A之標題化合物(100 g, 0.367 mol)於無水THF (1 L)中之溶液並在相同溫度下攪拌30 min。然後在0℃下逐滴添加對甲苯磺醯氯(105 g, 0.55 mol)於無水THF (100 mL)中之溶液，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。在完成反應(藉由TLC監測)之後，將反應混合物冷卻至0℃並使用冰水(500 mL)驟冷，隨後使用乙酸乙酯(3 × 500 mL)萃取。使用水(2 × 500 mL)、鹽水(1 × 250 mL)洗滌合併之有機萃取物並藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並在減壓下蒸發以提供粗產物，使用己烷(250 mL)研磨該粗產物。過濾由此獲得之固體，使用己烷(2 × 100 mL)洗滌並乾燥以提供淺褐色固體形式之標題化合物(130 g, 83%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 8.01 (d,J = 10.40 Hz, 1H), 7.77 (br-s, 2H), 7.45-7.48 (m, 1H), 7.13-7.24 (m, 4H), 4.88 (s, 2H), 3.63-3.65 (m, 2H), 2.65 (br-s, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.46 (s, 9H)。 MS: 327.1 (M⁺ -Boc)。步驟 C 在0℃下，向來自上述步驟B之標題化合物(130 g, 0.30 mol)於1,4-二噁烷(1.3 L)中之溶液中添加於1,4-二噁烷中之4M HCl (500 mL)。將反應混合物在25℃下攪拌12 h。在完成反應之後，在減壓下蒸發反應混合物且使用二乙醚洗滌殘餘物以提供淺褐色固體形式之標題化合物(95 g, 94%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 9.64 (br-s, 2H), 7.86-7.89 (m, 3H), 7.55 (d,J = 10.40 Hz, 1H), 7.27-7.30 (m, 4H), 4.67 (s, 2H), 3.47 (br-s, 2H), 2.92 (br-s, 2H), 2.33 (s, 3H)。 MS: 327.1 (M+H)⁺ 。

製備實例 12

步驟 A 在0℃下，向氫化鈉(15.86 g, 60%礦物油，1.10 mol)於無水THF (400 mL)中之經攪拌懸浮液中緩慢添加來自製備實例11之步驟A之標題化合物(100 g, 0.367 mol)於無水THF (1 L)中之溶液並在相同溫度下攪拌30 min。然後在0℃下逐滴添加碘甲烷(10 mL, 0.55 mol)於無水THF (100 mL)中之溶液，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。在完成反應(藉由TLC監測)之後，將反應混合物冷卻至0℃並使用冰水(500 mL)驟冷，隨後使用乙酸乙酯(3 × 500 mL)萃取。使用水(2 × 300 mL)、鹽水(1 × 250 mL)洗滌合併之有機萃取物並藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並在減壓下蒸發以提供粗產物，使用己烷(250 mL)研磨該粗產物。過濾由此獲得之固體，使用己烷(2 ×100 mL)洗滌並乾燥以提供褐色固體形式之標題化合物(93 g, 88%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.39-7.41 (m, 2H), 7.09-7.11 (m, 1H), 6.98-7.00 (m, 1H), 4.58 (s, 2H), 3.64-3.66 (m, 5H), 2.69 (s, 2H), 1.45 (s, 9H)。 MS: 287.2 (M+H)⁺ 。步驟 B 在0℃下，向來自上述步驟A之標題化合物(93 g, 0.32 mol)於1,4-二噁烷(1.0 L)中之溶液中添加於1,4-二噁烷中之4M HCl (400 mL)。將反應混合物在25℃下攪拌12 h。在完成反應之後，在減壓下蒸發反應混合物且使用二乙醚洗滌殘餘物以提供淺褐色固體形式之標題化合物(58 g, 80%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 9.81 (br-s, 1H), 7.44-7.47 (m, 2H), 7.15-7.18 (m, 1H), 7.03-7.06 (m, 1H), 4.42 (s, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.41-3.45 (m, 2H), 2.95 (br-s, 2H)。 MS: 187.1 (M+H)⁺ 。

製備實例 13

步驟 A 向6-溴-2-氯苯并[d ]噻唑(1 g, 4.0 mmol)於乙醇(6 mL)中之溶液中添加4 M甲基胺溶液(1.5 mL)且使用Biotage微波將反應混合物在150℃下加熱45 min。將反應混合物冷卻至室溫。在減壓下去除溶劑，將粗產物溶於二氯甲烷(150 mL)中並使用1 M NaOH溶液、水、鹽水洗滌並藉由Na₂ SO₄ 乾燥。在減壓下去除溶劑以得到粗製反應混合物，藉由急速管柱層析使用己烷:乙酸乙酯(50:50)純化以提供固體形式之標題化合物(0.35 g, 36%)。¹ H-NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ = 7.72 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.29 (d,J = 3.3 Hz, 1H), 5.40 (s, 1H), 3.13 (s, 3H)。

製備實例 14

步驟 A 向5-溴-2-氯苯并[d ]噻唑(0.9 g, 3.62 mmol)於乙醇(12 ml)中之溶液中添加4 M甲基胺溶液(1mL)且使用Biotage微波將反應混合物在150℃下加熱45 min。將反應混合物冷卻至室溫。在減壓下去除溶劑，且藉由急速管柱層析使用己烷:乙酸乙酯(50:50)純化粗製反應混合物以提供固體形式之標題化合物(0.57 g, 65%)。¹ H-NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ = 7.68 (t,J = 2.0 Hz, 1H), 7.46 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 7.29 (d,J = 0.7 Hz, 1H), 7.22 (dd,J = 8.4, 1.9 Hz, 1H), 5.90 (s, 1H), 3.13 (s, 3H)。

製備實例 15

步驟 A 向2,5-二氯苯并[d ]噻唑(5 g, 24.5 mmol)於無水二氯甲烷(50 mL)中之溶液中添加二甲胺於THF中之2 M溶液(18.37 mL, 36.65 mmol)，且將反應混合物冷卻至0℃。向此冷反應混合物中逐滴添加三乙胺(6.8 mL, 49 mmol)。在完成添加之後，將反應混合物在室溫下攪拌4 h。在完成反應之後，使用水(2 × 20 mL)處理反應混合物並使用二氯甲烷萃取。分離有機層，藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並蒸發以提供白色固體，使用二乙醚研磨以提供標題化合物(4.5 g, 88%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.77 (d,J = 11.20 Hz, 1H), 7.46 (d,J = 2.40 Hz, 1H), 7.05-7.05 (m, 1H), 3.14 (s, 6H)。 MS: 213.4 (M+H)⁺ 。

製備實例 16

步驟 A 向6-溴-2-氯苯并[d ]噻唑(0.45 g, 1.81 mmol)於乙醇(12 mL)中之溶液中添加二甲胺於THF中之2 M溶液(3 mL)且使用Biotage微波將反應混合物在150℃下加熱45min。將反應混合物冷卻至室溫。在減壓下去除溶劑，且藉由急速管柱層析使用己烷:乙酸乙酯(50:50)純化粗製反應混合物以提供固體形式之標題化合物(0.441 g, 95%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.70 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 7.43-7.35 (m, 2H), 3.20 (s, 6H)。

製備實例 17

步驟 A 向2,6-二氯苯并[d ]噁唑(5 g, 26.8 mmol)於無水二氯甲烷(50 mL)中之溶液中添加嗎啉(3.50 g, 40.3 mmol)，且將反應混合物冷卻至0℃。向此冷反應混合物中逐滴添加三乙胺(4.0 g, 39.6 mmol)。在完成添加之後，將反應混合物在室溫下攪拌4 h。在完成反應之後，使用水(2 × 20 mL)處理反應混合物並使用二氯甲烷萃取。分離有機層，藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並蒸發以提供白色固體，使用二乙醚研磨以提供標題化合物(5 g, 78%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.59 (d,J = 2.80 Hz, 1H), 7.30 (d,J = 11.20 Hz, 1H), 7.21 (dd,J = 2.80, 11.20 Hz, 1H), 3.71-3.74 (m, 4H), 3.57-3.60 (m, 4H)。 MS: 239.2 (M+H)⁺ 。

製備實例 18

步驟 A 向2,5-二氯苯并[d ]噁唑(5 g, 26.8 mmol)於無水二氯甲烷(50 mL)中之溶液中添加嗎啉(3.50 g, 40.3 mmol)，且將反應混合物冷卻至0℃。向此冷反應混合物中逐滴添加三乙胺(4.0 g, 39.6 mmol)。在完成添加之後，將反應混合物在室溫下攪拌4 h。在完成反應之後，使用水(2 × 20 mL)處理反應混合物並使用二氯甲烷萃取。分離有機層，藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並蒸發以提供白色固體，使用二乙醚研磨以提供標題化合物(5.2 g, 81%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.44 (d,J = 8.40 Hz, 1H), 7.36 (d,J = 2.40 Hz, 1H), 7.06 (dd,J = 2.00, 8.40 Hz, 1H), 3.71-3.73 (m, 4H), 3.59-3.61 (m, 4H)。 MS: 239.2 (M+H)⁺ 。

製備實例 19

步驟 A 在0℃下，向市售2,6- 2,6-二氯苯并[d ]噻唑(500 g, 2.45 mol)於二氯甲烷(4 L)中之經攪拌溶液中添加三乙胺(1031 mL, 7.35 mol)及嗎啉(290 mL, 3.67 mol)。然後將反應混合物在25℃下攪拌48 h。在完成反應(藉由TLC監測)之後，向反應混合物中添加水，隨後使用二氯甲烷(2 × 2.5 L)萃取。藉由Na₂ SO₄ 乾燥有機層，過濾並在減壓下蒸發以提供粗產物。向粗製物質中添加甲基第三丁基醚(1 L)，且將混合物攪拌2 h。藉由過濾收集固體，並在線真空下乾燥6 h以提供淺褐色固體形式之標題化合物(530 g, 85%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.93-7.94 (m, 1H), 7.43-7.44 (m, 1H), 7.28-7.29 (m, 1H), 3.72-3.74 (m, 4H), 3.54-3.55 (m, 4H)。 MS: 255.1 (M+H)⁺ 。

製備實例 20

步驟 A 向2,5-二氯苯并[d ]噻唑(5 g, 24.5 mmol)於無水二氯甲烷(50 mL)中之溶液中添加嗎啉(3.19 g, 36.6 mmol)，且將反應混合物冷卻至0℃。向此冷反應混合物中逐滴添加三乙胺(3.71 g, 36.7 mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌4 h。在完成反應之後，使用水(2 × 20 mL)處理反應混合物並使用二氯甲烷萃取。分離有機層，藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並在減壓下蒸發以提供白色固體，使用二乙醚研磨以提供標題化合物(4.5 g, 86%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.82 (d,J = 8.00 Hz, 1H), 7.50 (d,J = 2.00 Hz, 1H), 7.11-7.11 (m, 1H), 3.72-3.73 (m, 4H), 3.55-3.56 (m, 4H)。 MS: 255.4 (M+H)⁺ 。

製備實例 21

步驟 A 向3,4-二氟硝基苯(5 g, 31.4 mmol)於乙腈(50 mL)中之溶液中添加N-甲基六氫吡嗪(3.7 g, 37.7 mmol)及碳酸鉀(12.8 g, 94.3 mmol)。然後將反應混合物加熱至回流並保持3小時。過濾反應混合物，在真空下濃縮，且使用乙醚洗滌所獲得固體以提供黃色固體形式之標題化合物(5.2 g, 69%)。¹ H-NMR (300 MHz, CDCl₃ ) δ = 7.89-8.03 (m, 2H), 6.90-6.91 (m, 1H), 3.33-3.34 (m, 4H), 2.60-2.61 (m, 4H), 2.38 (s, 3H)。 MS: 240.1 (M+H)⁺ 。步驟 B 向來自上述步驟A之標題化合物(5.2 g, 21.7 mmol)於乙醇(100 mL)中之溶液中添加10% Pd/C (0.5 g)且將反應混合物氫化16小時。經由矽藻土墊過濾反應混合物並在真空下濃縮以提供褐色固體形式之標題化合物(4.0 g, 88%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 6.75 (t,J = 9.20 Hz, 1H), 6.31 (t,J = 9.20 Hz, 2H), 4.97 (s, 2H), 2.82 (br-s, 4H), 2.43 (br-s, 4H), 2.21 (s, 3H)。 MS: 210.2 (M+H)⁺ 。步驟 C 在0℃下，經10 min時段使用注射器向來自上述步驟B之標題化合物(3.0 g, 14.33 mmol)於乙腈(30 mL)中之懸浮液中添加亞硝酸第三丁基酯(2.5 mL, 21.5 mmol)。然後，在0℃下逐份添加溴化銅(II) (3.8 g, 17.2 mmol)並攪拌30 min。將反應混合物升溫至25℃並保持1 h，且加熱至60℃並保持4 h。在完成反應(藉由TLC監測)之後，經由矽藻土墊過濾反應混合物，並使用乙酸乙酯洗滌以產生粗產物。藉由矽膠(60-120)管柱層析使用二氯甲烷/甲醇(99:1)純化粗製物質以提供褐色固體形式之標題化合物(1 g, 25%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.40-7.41 (m, 1H), 7.28-7.31 (m, 1H), 6.96-6.98 (m, 1H), 2.98-2.99 (m, 4H), 2.46-2.47 (m, 4H), 2.22 (s, 3H)。 MS: 275.1 (M+H)⁺ 。

製備實例 22

步驟 A 向3,4-二氟硝基苯(0.5 g, 3.14 mmol)於乙酸乙酯(10 mL)中之溶液中添加三甲胺(81.3 mL, 9.42 mmol)，隨後添加8-氧雜-3-氮雜雙環[3.2.1]辛烷鹽酸鹽(0.56 g, 3.77 mmol)。然後將反應混合物在室溫下攪拌16 h。過濾反應混合物，在真空下濃縮，且使用乙醚洗滌所獲得固體以提供黃色固體形式之標題化合物(0.7 g, 88%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.99-8.02 (m, 2H), 7.10 (t,J = 8.88 Hz, 1H), 4.41 (br-s, 2H), 3.40 (d,J = 11.80 Hz, 2H), 3.13 (d,J = 10.64 Hz, 2H), 1.89 (br-s, 4H)。 MS: 253.1 (M+H)⁺ 。步驟 B 向來自上述步驟A之標題化合物(0.7 g, 2.77 mmol)於乙醇(20 mL)中之溶液中添加10% Pd/C (0.1 g)且將反應混合物氫化16小時。經由矽藻土墊過濾反應混合物並在真空下濃縮以提供淺褐色膠狀固體形式之標題化合物(0.6 g, 96%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 6.71 (t,J = 9.64 Hz, 1H), 6.27-6.28 (m, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.29 (br-s, 2H), 2.80 (br-s, 4H), 1.92-1.93 (m, 2H), 1.77-1.78 (m, 2H)。 MS: 223.1 (M+H)⁺ 。步驟 C 在0℃下，經10 min時段使用注射器向來自上述步驟B之標題化合物(0.50 g, 2.24 mmol)於乙腈(10 mL)中之懸浮液中添加亞硝酸第三丁基酯(0.4 mL, 3.35 mmol)。然後，在0℃下逐份添加溴化銅(II) (0.6g, 2.68 mmol)並攪拌30 min。將反應混合物升溫至25℃並保持1 h，且加熱至60℃並保持4 h。在完成反應(藉由TLC監測)之後，經由矽藻土墊過濾反應混合物，並使用乙酸乙酯洗滌以產生粗產物。藉由矽膠(60-120)管柱層析使用二氯甲烷/甲醇(99:1)純化粗製物質以提供淺褐色固體形式之標題化合物(0.27 g, 42%)。¹ H-NMR (300 MHz, CDCl₃ ) δ = 7.17-7.19 (m, 2H), 6.75 (t,J = 8.68 Hz, 1H), 4.43 (br-s, 2H), 3.03-3.06 (m, 4H), 2.09 (br-s, 2H), 1.98 (br-s, 2H)。 MS: 288.0 (M+H)⁺ 。

製備實例 23

步驟 A 向4-溴-3-氟苯胺(1 g, 5.26 mmol)於N ,N ’-二甲基甲醯胺(10 ml)中之溶液中添加碘化鉀(2.18 g, 13.1 mmol)及碳酸鈉(1.95 g, 18.4 mmol)且將反應混合物加熱至150℃。然後添加1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(1.34 g, 5.77 mmol)且繼續加熱16 h。在完成反應(藉由TLC監測)之後，使用水(25 mL)稀釋反應混合物並使用乙酸乙酯(2 × 15 mL)萃取。藉由Na₂ SO₄ 乾燥合併之有機萃取物，過濾並在減壓下濃縮以產生粗產物。藉由急速管柱層析使用己烷/乙酸乙酯(80:20)純化粗製物質以提供標題化合物(0.6 g, 43%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.43-7.44 (m, 1H), 6.93-6.94 (m, 1H), 6.73-6.74 (m, 1H), 3.70-3.72 (m, 4H), 3.13-3.14 (m, 4H)。 MS: 261.9 (M+H)⁺ 。

製備實例 24

步驟 A 在0℃下，向2,6-二氯苯并[d ]噁唑(5 g, 26.6 mmol)於無水二氯甲烷(50 mL)中之溶液中添加二甲胺於THF中之2 M溶液(26.6 mL, 53.2 mmol)及三乙胺(5.6 mL, 39.9 mmol)。然後將反應混合物在25℃下攪拌4 h。在完成反應(藉由TLC監測)之後，使用水(20 mL)稀釋反應混合物並使用二氯甲烷(2 × 20 mL)萃取。藉由Na₂ SO₄ 乾燥合併之有機萃取物，過濾並在減壓下蒸發以提供粗產物。使用二乙醚研磨粗製物質，過濾，使用二乙醚洗滌並乾燥以提供固體形式之標題化合物(5 g, 96%)¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.56 (s, 1H), 7.23-7.24 (m, 1H), 7.16-7.16 (m, 1H), 3.13 (s, 6H)。 MS: 197.2 (M+H)⁺ 。

製備實例 25

步驟 A 向5-溴-2-氟苯胺(1 g, 5.26 mmol)於N ,N ’-二甲基甲醯胺(10 ml)中之溶液中添加碘化鉀(2.18 g, 13.1 mmol)及碳酸鈉(1.95 g, 18.4 mmol)且將反應混合物加熱至150℃。然後添加1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(1.34 g, 5.77 mmol)且繼續加熱16 h。在完成反應(藉由TLC監測)之後，使用水(25 mL)稀釋反應混合物並使用乙酸乙酯(2 × 15 mL)萃取。藉由Na₂ SO₄ 乾燥合併之有機萃取物，過濾並在減壓下濃縮以產生粗產物。藉由急速管柱層析使用己烷/乙酸乙酯(80:20)純化粗製物質以提供標題化合物(0.8 g, 58%)。¹ H-NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ = 7.03-7.04 (m, 2H), 6.90-6.92 (m, 1H), 3.87-3.88 (m, 4H), 3.08-3.10 (m, 4H)。

製備實例 26

步驟 A 將5-溴-3-碘吡啶-2-胺(5 g, 16.73 mmol)及苯甲醯基異硫氰酸酯(3.29, 20.16 mmol)於丙酮(10 mL)中之溶液在60℃下攪拌12 h。在完成反應(藉由TLC監測)之後，在減壓下蒸發反應混合物且過濾固體，使用己烷(200 mL)洗滌並乾燥以提供灰白色固體形式之標題化合物(4 g, 52%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 12.35 (s, 1H), 11.86 (s, 1H), 8.64-8.65 (m, 2H), 7.99-7.99 (m, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.56 (d,J = 9.40 Hz, 2H)。 MS: 461.5 (M+H)⁺ 。步驟 B 在25℃下，向來自上述步驟A之標題化合物(4 g, 8.67 mmol)於1,4-二噁烷(60 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(2.5 g, 18.1 mmol)、L-脯胺酸(0.28 g, 2.43 mmol)及碘化銅(I) (0.462 g, 2.42 mmol)且將反應混合物在80℃下攪拌16 h，在完成反應(藉由TLC監測)之後，將反應混合物傾倒至水(100 mL)及飽和NH₄ Cl水溶液(100 mL)中並在25℃下攪拌1 h。過濾由此獲得之固體，使用飽和NH₄ Cl水溶液(2 × 25 mL)、水(2 × 25 mL)洗滌並乾燥以提供灰白色固體形式之粗製標題化合物(2.5 g)。 MS: 336.0 (M+H)⁺ 。步驟 C 將來自上述步驟B之粗製標題化合物(2 g, 5.98 mmol)於H₂ SO₄ (70%, 6 mL)中之懸浮液在120℃下加熱2 h。在完成反應(藉由TLC監測)之後，將反應混合物冷卻至25℃並緩慢傾倒至100 mL冷水中。然後，使用NaOH水溶液(50%)鹼化反應混合物並使用乙酸乙酯(6 × 25 mL)萃取。使用Na₂ SO₄ 乾燥合併之有機層，過濾且在減壓下濃縮溶劑以提供淺黃色固體形式之標題化合物(0.3 g, 23%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 8.27-8.31 (m, 2H), 8.11 (s, 2H)。 MS: 230.4 (M+H)⁺ 。步驟 D 在0℃下，經10 min時段使用注射器向來自上述步驟C之標題化合物(0.3 g, 1.3 mmol)於乙腈(5 mL)中之懸浮液中添加亞硝酸第三丁基酯(0.2 g, 1.95 mmol)。然後，在0℃下逐份添加氯化銅(II) (0.2 g, 1.48 mmol)且將反應混合物攪拌30 min。將反應混合物升溫至25℃並保持1 h，且加熱至65℃並保持4 h。在完成反應(藉由TLC監測)之後，在減壓下蒸發溶劑且使用水(20 mL)稀釋所獲得殘餘物並使用二氯甲烷/甲醇(95:5) (3 × 20 mL)萃取。使用鹽水(10 mL)洗滌合併之有機物，藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並在減壓下濃縮以產生粗產物。藉由矽膠(60-120)管柱層析使用二氯甲烷/甲醇(99:1)純化粗製物質以提供灰白色固體形式之標題化合物(0.15 g, 46%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 8.91 (d,J = 2.40 Hz, 1H), 8.82 (d,J = 1.60 Hz, 1H)。 MS: 250.9 (M+H)⁺ 。步驟 E 在0℃下，向來自上述步驟D之標題化合物(0.18 g, 0.72 mmol)於無水二氯甲烷(5 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.3 mL, 2.16 mmol)及嗎啉(74 mg, 0.85 mmol)且將反應混合物在25℃下攪拌6 h。在完成反應(藉由TLC監測)之後，在減壓下濃縮反應混合物以產生粗產物，藉由矽膠(60-120網目)管柱層析使用己烷/乙酸乙酯(70:30)純化以提供淺黃色固體形式之標題化合物(0.18 g, 83%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 8.49 (d,J = 2.00 Hz, 1H), 8.38 (d,J = 1.60 Hz, 1H), 3.72-3.74 (m, 4H), 3.61-3.62 (m, 4H)。 MS: 302.0 (M+H)⁺ 。

製備實例 27

步驟 A 向2-溴-6-氯吡啶-3-胺(5 g, 24.1 mmol)及硫氰酸鉀(7 g, 72.3 mmol)於乙醇(50 mL)中之溶液中添加鹽酸(37%, 100 mL)且將反應混合物在100℃下攪拌40-45 h。藉由TLC證實反應已完成。將反應混合物冷卻至室溫並濃縮以提供褐色固體，分配於二氯甲烷(150 mL)及1 N NaOH水溶液(50 mL)中。過濾固體並乾燥以提供淺黃色固體形式之粗製標題化合物(3.5 g, 79%)。產物原樣用於下一步驟中。 MS: 186.1 (M+H)⁺ 。步驟 B 在0℃下，經10 min時段使用注射器向來自上述步驟A之標題化合物(1.5 g, 8.08 mmol)於乙腈(25 mL)中之懸浮液中添加亞硝酸第三丁基酯(1.4 ml, 12.12 mmol)。然後，逐份添加溴化銅(II) (2.16 g, 9.69 mmol)。在0℃下30分鐘之後，將反應混合物升溫至室溫並保持2 h。藉由TLC監測反應進展。在完成反應之後，蒸發溶劑並使用水(20 mL)及二氯甲烷/甲醇(95:5) (3 × 20 mL)稀釋。使用鹽水(10 mL)洗滌合併之有機物，藉由Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠(60-120)管柱層析純化粗製化合物，使用二氯甲烷/甲醇(99:1)洗脫以提供淺黃色固體形式之標題化合物(0.65 g, 32%)。產物原樣用於下一步驟中。 MS: 248.5 (M+H)⁺ 。步驟 C 向來自上述步驟B之粗製標題化合物(0.65 g, 2.61 mmol)於無水二氯甲烷(5 mL)中之溶液中添加三乙胺(1.1 mL, 7.83 mmol)及嗎啉(0.34 g, 3.91 mmol)。然後將反應混合物在室溫下攪拌6 h。在真空下濃縮反應混合物。藉由使用石油醚/乙酸乙酯(50/50)洗脫之矽膠(60-120)管柱層析純化粗製化合物以提供淺黃色固體形式之標題化合物 (0.6 g, 90%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 7.83 (d,J = 8.40 Hz, 1H), 7.41 (d,J = 8.44 Hz, 1H), 3.72-3.74 (m, 2H), 3.59-3.60 (m, 2H)。 MS: 256.0 (M+H)⁺ 。

製備實例 28

步驟 A 在微波管中，添加市售6-溴-2-氯噻唑并[4,5-c]吡啶(50 mg, 0.20 mmol)及嗎啉(3.5 mL, 40.1 mmol)。密封管並在室溫下攪拌10分鐘且然後在150℃下於微波反應器(Biotage)中攪拌10分鐘。在減壓下去除溶劑以提供標題化合物(0.60 g, 78%)。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ = 8.48 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 3.61 (dd, 4H), 3.17 – 3.03 (m, 4H)。

製備實例 29

步驟 A 向市售(2-氟苯基)肼鹽酸鹽(10.0 g, 0.0615 mol)及3-側氧基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(12.3 g, 0.0615 mol)於1,4-二噁烷(100.0 mL)中之經攪拌溶液中添加(在0℃下)濃H₂ SO₄ (10.0 mL)，然後在氮氣氛下加熱至100℃並保持12 h。濃縮反應混合物且藉由使用30% NaOH水溶液(pH=9-10)鹼化粗產物，隨後使用二氯甲烷萃取。在減壓下濃縮二氯甲烷層以提供褐色油狀物形式之標題化合物(10.0 g，粗製物)。粗產物未經進一步純化即用於下一步驟中。 MS: 191.1 (M+H)⁺ 。步驟 B 在0℃下，向來自上述步驟A之粗製標題化合物(10.0 g，粗製物)於四氫呋喃(100.0 mL)中之溶液中添加三乙胺(2.83 mL, 0.0205 mol)及二碳酸二-第三丁基酯(1.88 mL, 0.00820 mol)，然後在室溫及氮下攪拌12 h。藉由TLC及LCMS監測反應。使用乙酸乙酯(50 mL)及水(100 mL)稀釋反應混合物。分離有機相且使用乙酸乙酯將水相再萃取兩次。藉由Na₂ SO₄ 乾燥合併之有機相，過濾並在減壓下蒸發溶劑。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0 -＞ 90/10)來純化粗製物以提供淺黃色固體形式之標題化合物(1.5 g, 10%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 11.32 (bs, 1H), 7.22 (d,J = 7.64 Hz, 1H), 6.86-6.88 (m, 2H), 4.58 (s, 2H), 3.68 (t,J = 5.60 Hz, 2H), 2.69 (t,J = 5.00 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H)。 MS: 235.1 (M +H) -第三丁基。步驟 C 在0℃下，向氫化鈉(0.575 g, 15.0 mmol)於THF (10.0 mL)中之懸浮液中逐滴添加來自上述步驟B之標題化合物(1.50 g, 5.00 mmol)之THF溶液(10.0 mL)且將混合物在室溫下攪拌60 min。在0℃下逐滴添加甲苯磺醯氯(1.20 g, 6.00 mol)且然後在室溫及氮氣氛下攪拌3 h。在藉由TLC證實完成反應之後，使用冰水將反應混合物驟冷，隨後使用乙酸乙酯(50.0 mL)萃取。分離有機層，藉由硫酸鈉乾燥，過濾且然後在減壓下濃縮。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0 -＞ 80/20)來純化粗製物以提供灰白色固體形式之標題化合物(1.6 g, 71.8%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 7.76 (d,J = 7.52 Hz, 2H), 7.42 (d,J = 8.08 Hz, 2H), 7.31 (d,J = 7.20 Hz, 1H), 7.22-7.24 (m, 1H), 7.07-7.09 (m, 1H), 4.94 (s, 2H), 3.69 (bs, 2H), 2.69 (bs, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.46 (s, 9H)。 MS: 345.1 (M+H)⁺ -Boc。步驟 D 在0℃下，向來自上述步驟C之標題化合物(1.6 g, 3.59 mmol)於二氯甲烷(10.0 mL)中之經攪拌溶液中添加於1,4-二噁烷中之4M HCl (10.00 mL)，然後在0℃下攪拌2 h並升溫至室溫。在藉由TLC證實完成反應之後，濃縮反應混合物以提供灰色固體形式之標題化合物(1.3 g, 94.6%)。粗產物未經進一步純化即用於下一步驟中。 MS: 345.1 (M+H)⁺

製備實例 30

步驟 A 在0℃下，向市售(2-氟苯基)肼鹽酸鹽(10.0 g, 0.0615 mol)及3-側氧基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(12.3 g, 0.0615 mol)於1,4-二噁烷(100.0 mL)中之經攪拌溶液中添加濃H₂ SO₄ (10.0 mL)。然後將反應液在100℃及氮氣氛下加熱12 h。濃縮反應混合物且藉由使用30% NaOH水溶液(pH=9-10)鹼化粗產物，隨後使用二氯甲烷萃取。在減壓下濃縮二氯甲烷層以提供褐色油狀物形式之標題化合物(10.0 g，粗製物)。粗產物未經進一步純化即用於下一步驟中。 MS: 191.1 (M+H)⁺ 。步驟 B 在0℃下，向來自步驟A之標題化合物(10.0 g，粗製物)於四氫呋喃(100.0 mL)中之經攪拌溶液中添加三乙胺(2.83 mL, 0.0205 mol)及二碳酸二-第三丁基酯(1.88 mL, 8.20 mmol)。將混合物在室溫及氮氣氛下攪拌12 h。藉由TLC及LCMS監測反應。使用乙酸乙酯(50 mL)及水(100 mL)稀釋反應混合物。分離有機相且使用乙酸乙酯將水相再萃取兩次。藉由Na₂ SO₄ 乾燥合併之有機相，過濾並在減壓下蒸發溶劑。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0 -＞ 90/10)來純化粗製物以提供淺黃色固體形式之標題化合物(1.5 g, 10%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 11.32 (bs, 1H), 7.22 (d,J = 7.64 Hz, 1H), 6.86-6.88 (m, 2H), 4.58 (s, 2H), 3.68 (t,J = 5.60 Hz, 2H), 2.69 (t,J = 5.00 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H)。 MS: 235.1 (M +H) -第三丁基。步驟 C 在0℃下，向氫化鈉(0.421 g, 0.0110 mol)於THF (10.0 mL)中之懸浮液中逐滴添加來自步驟B之標題化合物(1.1 g, 3.66 mol)之THF溶液(10mL)。然後將混合物在室溫下攪拌60 min。在0℃下添加碘甲烷(0.624 g, 4.39 mmol)且然後將混合物在室溫及氮氣氛下攪拌3 h。在藉由TLC證實完成反應之後，使用冰水將反應混合物驟冷，隨後使用乙酸乙酯(50.0 mL)萃取。分離有機層，藉由硫酸鈉乾燥，過濾且然後濃縮以提供淺褐色固體形式之標題化合物(1.10 g, 96.2%)。粗產物未經進一步純化即用於下一步驟中。 MS: 305.3 (M +H)⁺ 步驟 D 在0℃下，向來自步驟C之標題化合物(1.10 g, 3.52 mol)於二氯甲烷(5.0 mL)中之經攪拌溶液中添加4N HCl於二噁烷中之溶液(10.00 mL)。將混合物在0℃下攪拌2 h並升溫至室溫。濃縮反應混合物且使用二乙醚(10.00 mL)洗滌粗產物，在真空下乾燥以提供灰色固體形式之標題化合物(750 mg, 78.8%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 9.94 (bs, 2H), 7.29 (d,J = 7.60 Hz, 1H), 6.97-6.98 (m, 2H), 4.41 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.37-3.38 (m, 2H), 2.92-2.93 (m, 2H)。 MS: 205.0 (M +H)⁺ 。

製備實例 31

步驟 A 在0℃下，向市售2,5-二氯-1,3-苯并噁唑(1.00g, 5.32 mmol)於二氯甲烷(50.0mL)中之溶液中緩慢添加三乙胺(1.61g, 1.60 mol)及1-甲基六氫吡嗪(0.693 g, 6.38 mmol)。然後將混合物在25℃下攪拌12hr。使用水(50.0mL)及二氯甲烷(50.0mL)稀釋反應混合物。分離有機相且使用二氯甲烷將水相再萃取兩次。藉由Na₂ SO₄ 乾燥合併之有機相，過濾並在減壓下蒸發溶劑。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用DCM/MeOH梯度(100/0 -＞ 90/10)來純化粗製物以提供白色固體形式之標題化合物(1.0 g, 73.9%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 7.41 (d,J = 8.44 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.02-7.03 (m, 1H), 3.59-3.61 (m, 4H), 2.41-2.42 (m, 4H), 2.23 (s, 3H)。 MS: 252.1 (M +H)⁺ 。

製備實例 32

步驟 A 將市售2,5二溴吡啶(1.0 g, 4.22 mmol)及N-甲基六氫吡嗪(0.55 g, 5.49 mmol)溶於甲苯中，脫氣並使用氮氣氛填充。然後添加參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (0.077 g, 0.084 mmol)、xantphos (0.147 g, 0.253 mmol)及第三丁醇鈉(0.609 g, 6.33 mmol)且將混合物加熱至100℃並保持5 h。使用矽藻土過濾反應混合物，使用二氯甲烷及甲醇洗滌且在減壓下蒸發溶劑。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用DCM/MeOH梯度(100/0 -＞ 96/04)來純化粗製物以提供淺黃色固體形式之標題化合物(0.46 g, 37%)。¹ H-NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.14-8.14 (m, 1H), 7.63-7.64 (m, 1H), 6.79 (d,J = 9.08 Hz, 1H), 3.54-3.56 (m, 4H), 2.55-2.56 (m, 4H), 2.36 (s, 3H)。 MS: 258.1 (M +2H)⁺ 。

製備實例 33

步驟 A 將市售2,5-二溴吡嗪(0.500g, 2.10 mmol)及1-甲基六氫吡嗪(0.105g, 1.05 mmol)、Xantphos(0.073 g, 0.126 mmol)、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (0.0385g, 0.126 mmol)及第三丁醇鈉(0.404 g, 4.20 mmol)添加至脫氣且無水之甲苯(15.0 ml)中。使用氬氣填充小瓶，密封，並在100℃下加熱12小時。經由矽藻土過濾反應混合物且在減壓下濃縮濾液以提供淺褐色膠狀固體形式之標題化合物(0.165 g, 28%)。粗產物未經進一步純化即用於下一步驟中。 MS: 259.0 (M +2H)⁺ 。

製備實例 34

步驟 A 向市售5-溴-2-氟吡啶(0.3 g, 1.70 mmol)及6-氧雜-3-氮雜雙環[3.1.1]庚烷4-甲基苯磺酸鹽(0.463 g, 1.7 mmol)於DMF中之溶液中添加碳酸鉀(0.707 g, 5.11 mmol)。將反應液加熱至90℃並保持12 h。使用乙酸乙酯(30 mL)及水(30 mL)稀釋反應混合物。分離有機相且使用乙酸乙酯將水相再萃取兩次。藉由Na₂ SO₄ 乾燥合併之有機相，過濾並在減壓下蒸發溶劑。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用乙酸乙酯/石油醚梯度(30/70)來純化粗製物以提供白色固體形式之標題化合物(0.14 g, 31%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 8.20 (d,J = 3.20 Hz, 1H), 7.71-7.73 (m, 1H), 6.63 (d,J = 11.60 Hz, 1H), 4.69-4.71 (m, 2H), 3.64-3.68 (m, 2H), 3.54-3.55 (m, 2H), 1.89-1.90 (m, 2H)。 MS: 255.1 (M +H)⁺ 。

製備實例 35

步驟 A 向市售5-溴-2-氯-吡啶(0.25 g, 2.451 mmol)及六氫-1H-呋喃并[3,4-c]吡咯(0.647 g, 3.676 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(0.677 g, 4.902 mmol)且將混合物在90℃下加熱12 h。使用乙酸乙酯(30 mL)及水(30 mL)稀釋反應混合物。分離有機相且使用乙酸乙酯將水相再萃取兩次。藉由Na₂ SO₄ 乾燥合併之有機相，過濾並在減壓下蒸發溶劑。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用乙酸乙酯/石油醚梯度(30/70)來純化粗製物以提供標題化合物(0.25 g, 60%)。 MS: 271.1 (M +2H)⁺ 。

製備實例 36

步驟 A 將市售2,5-二溴吡啶(0.5 g, 2.2 mmol)及(R)-2-甲基嗎啉(0.234 g, 2.9 mmol)添加至反應管中且添加脫氣甲苯(10.0 ml)。然後添加Xantphos (0.073 g, 2.1 mol)、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (0.024 g, 0.4 mmol)及第三丁醇鈉(0.608 g, 6.3 mmol)且將溶液在100℃下於填充有氬氣之密封管中加熱5小時。經由矽藻土過濾反應混合物且在減壓下濃縮濾液。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0 -＞ 70/30)來純化粗製物以提供灰白色固體形式之標題化合物(0.3 g, 55%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 8.18 (d,J = 3.20 Hz, 1H), 7.69-7.70 (m, 1H), 6.84 (d,J = 12.00 Hz, 1H), 3.87-3.88 (m, 3H), 3.48-3.49 (m, 2H), 2.74-2.76 (m, 1H), 1.14 (d,J = 8.00 Hz, 3H)。 MS: 257.1 (M +H)⁺ 。

製備實例 37

步驟 A 將市售2,5-二溴吡啶(0.5 g, 2.2 mmol)及(S)-2-甲基嗎啉(0.234 g, 2.9 mmol)添加至反應管中且添加脫氣甲苯(10.0 ml)。然後添加Xantphos (0.073 g, 2.1 mol)、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (0.024 g, 0.4 mmol)及第三丁醇鈉(0.608 g, 6.3 mmol)且將溶液在100℃下於填充有氬氣之密封管中加熱5小時。經由矽藻土過濾反應混合物且在減壓下濃縮濾液。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0 -＞ 70/30)來純化粗製物以提供灰白色固體形式之標題化合物(0.37 g, 68%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 8.18 (d,J = 2.32 Hz, 1H), 7.70-7.71 (m, 1H), 6.84 (d,J = 9.04 Hz, 1H), 3.90-3.91 (m, 3H), 3.52-3.53 (m, 2H), 2.52-2.53 (m, 1H), 1.15 (d,J = 6.24 Hz, 3H)。 MS: 257.1 (M +H)⁺ 。

製備實例 38

步驟 A 將市售2,5-二溴吡啶(1 g, 4.22 mmol)及(R)-3-甲基嗎啉(0.234 g, 2.9 mmol)添加至反應管且添加脫氣甲苯(10.0 ml)。然後添加Xantphos (0.146 g, 0.253 mmol)、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (0.048 g, 0.84 mmol)及第三丁醇鈉(1.21 g, 12.66 mmol)且將溶液在100℃下於填充有氬氣之密封管中加熱6小時。經由矽藻土過濾反應混合物且在減壓下濃縮濾液。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0 -＞ 70/30)來純化粗製物以提供灰白色固體形式之標題化合物(0.17 g, 15%)。粗產物未經進一步純化即用於下一步驟中。 MS: 257.1 (M +H)⁺ 。

製備實例 39

步驟 A 向市售5-溴-2-氟-吡啶(0.5 g, 2.84 mmol)及7-氧雜-2-氮雜螺[3.5]壬烷(0.36 g, 2.84 mol)於DMF(5 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(1.17 g, 8.52 mmol)且將混合物加熱至90℃並保持12 h。使用乙酸乙酯(30 mL)及水(30 mL)稀釋反應混合物。分離有機相且使用乙酸乙酯將水相再萃取兩次。藉由Na₂ SO₄ 乾燥合併之有機相，過濾且在減壓下蒸發溶劑以提供標題化合物(0.44 g, 55%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 8.12 (d,J = 2.40 Hz, 1H), 7.64-7.65 (m, 1H), 6.36 (d,J = 11.60 Hz, 1H), 3.66-3.69 (m, 4H), 3.52-3.54 (m, 4H), 1.71-1.73 (m, 4H)。 MS: 285.0 (M +H)⁺ 。

製備實例 40

步驟 A 向市售5-溴-2-氯-吡啶(0.83 g, 4.34 mmol)及4-甲氧基六氫吡啶(0.5 g, 4.34 mmol)於DMF( 5 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(1.79 g, 13.02 mmol)且將混合物加熱至90℃並保持12 h。使用乙酸乙酯(50 mL)及水(30 mL)稀釋反應混合物。分離有機相且使用乙酸乙酯將水相再萃取兩次。藉由Na₂ SO₄ 乾燥合併之有機相，過濾並在減壓下蒸發溶劑。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用乙酸乙酯/石油醚梯度(30/70)來純化粗製物以提供標題化合物(0.5 g, 42%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 8.14-8.15 (m, 1H), 7.63-7.64 (m, 1H), 6.85 (d,J = 9.12 Hz, 1H), 3.86-3.87 (m, 2H), 3.39-3.40 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 3.14-3.15 (m, 2H), 1.84-1.85 (m, 2H), 1.35-1.36 (m, 2H)。 MS: 273.1 (M +2H)⁺ 。

製備實例 41

步驟 A 將市售2,5-二溴吡啶(0.5 g, 2.11m mol)及((1S,4S)-2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷(0.25 g, 2.53 mmol)之溶液添加至反應管中且添加脫氣甲苯(10.0 ml)。然後添加Xantphos (0.073 g, 0.127 mmol)、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (0.024 g, 0.042mmol)及第三丁醇鈉(0.61 g, 6.3 mmol)且將溶液在100℃下於填充有氬氣之密封管中加熱6小時。經由矽藻土過濾反應混合物且在減壓下濃縮濾液。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0 -＞ 70/30)來純化粗製物以提供灰白色固體形式之標題化合物(0.3 g, 57%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 8.13 (s, 1H), 7.64-7.65 (m, 1H), 6.54 (d,J = 8.80 Hz, 1H), 4.80 (s, 1H), 4.65 (s, 1H), 3.76 (d,J = 7.20 Hz, 1H), 3.61 (d,J = 6.80 Hz, 1H), 3.42 (d,J = 10.00 Hz, 1H), 3.19 (d,J = 10.00 Hz, 1H), 1.86-1.89 (m, 2H)。 MS: 255.1 (M +H)⁺ 。

製備實例 42

步驟 A 向市售5-溴-2-氟-吡啶(0.23g, 1.30 mmol)及((1R,4R)-2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷(0.18 g, 1.30 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(0.54 g, 3.9 mmol)且將混合物加熱至90℃並保持 12 h。使用乙酸乙酯(30 mL)及水(30 mL)稀釋反應混合物。分離有機相且使用乙酸乙酯將水相再萃取兩次。藉由Na₂ SO₄ 乾燥合併之有機相，過濾且在減壓下蒸發溶劑以提供標題化合物(0.32 g, 96%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 8.13 (d,J = 2.80 Hz, 1H), 7.64-7.64 (m, 1H), 6.54 (d,J = 11.60 Hz, 1H), 4.81 (s, 1H), 4.65 (s, 1H), 3.76 (d,J = 10.00 Hz, 1H), 3.61 (d,J = 10.00 Hz, 1H), 3.43 (d,J = 13.20 Hz, 1H), 3.20 (d,J = 13.60 Hz, 1H), 1.83-1.86 (m, 2H)。 MS: 257.0 (M +2H)⁺ 。

製備實例 43

步驟 A 向市售5-溴-2-氯-吡啶(1 g, 5.19 mmol)及((2S,6R)-2,6-二甲基嗎啉(0.778 g, 6.75 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(1.57 g, 11.43 mmol)且將混合物加熱至90℃並保持12 h。使用乙酸乙酯(50 mL)及水(30 mL)稀釋反應混合物。分離有機相且使用乙酸乙酯將水相再萃取兩次。藉由Na₂ SO₄ 乾燥合併之有機相，過濾並在減壓下蒸發溶劑。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用乙酸乙酯/石油醚梯度(30/70)來純化粗製物以提供標題化合物(0.17 g, 12%)。¹ H-NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.20 (d,J = 2.00 Hz, 1H), 7.54-7.54 (m, 1H), 6.54 (d,J = 8.80 Hz, 1H), 3.97-3.97 (m, 2H), 3.69-3.70 (m, 2H), 2.49-2.51 (m, 2H), 1.27 (d,J = 6.40 Hz, 6H)。 MS: 271.1 (M +H)⁺ 。

製備實例 44

步驟 A 將市售2,5-二溴吡啶(0.5 g, 2.11 mmol)及((S)-3-甲基嗎啉(0.213 g, 2.11 mmol)添加至反應管中且添加脫氣甲苯(10.0 ml)。然後添加Xantphos (0.073 g, 0.12 mmol)、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (0.038 g, 0.042 mmol)及第三丁醇鈉(0.608g, 6.33mmol)且將溶液在100℃下於填充有氬氣之密封管中加熱6小時。經由矽藻土過濾反應混合物且在減壓下濃縮濾液。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0 -＞ 70/30)來純化粗製物以提供淺黃色固體形式之標題化合物(0.23 g, 42%)。¹ H-NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.22-8.23 (m, 1H), 7.55-7.56 (m, 1H), 6.50 (d,J = 9.04 Hz, 1H), 4.23-4.24 (m, 1H), 4.01-4.02 (m, 1H), 3.76-3.77 (m, 3H), 3.59-3.60 (m, 1H), 3.16-3.17 (m, 1H), 1.24 (d,J = 6.72 Hz, 3H)。 MS: 259.1 (M +H)⁺ 。

製備實例 45

步驟 A 將市售2,5-二溴吡啶(0.5 g, 2.11 mmol)及2-氧雜-7-氮雜螺[3.5]壬烷(0.268 g, 2.11 mmol)之溶液添加至反應管中且添加脫氣甲苯(10.0 ml)。然後添加Xantphos (0.073g, 0.12mmol)、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (0.038 g, 0.042 mmol)及第三丁醇鈉(0.608g, 6.33mmol)且將溶液在100℃下於填充有氬氣之密封管中加熱6小時。經由矽藻土過濾反應混合物且在減壓下濃縮濾液以提供灰白色固體形式之標題化合物(0.37 g, 62%)。¹ H-NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.19-8.19 (m, 1H), 7.52-7.53 (m, 1H), 6.59 (d,J = 9.04 Hz, 1H), 4.50 (s, 4H), 3.46-3.47 (m, 4H), 1.93-1.94 (m, 4H)。 MS: 285.0 (M +2H)⁺ 。

製備實例 46

步驟 A 向市售5-溴-2-氟-吡啶(0.5 g, 3.34mmol)及3-氧雜-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷(0.882 g, 5.0133 mmol)於DMF(5 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(0.923 g, 6.6844 mmol)且將混合物加熱至90℃並保持12 h。使用乙酸乙酯(30 mL)及水(30 mL)稀釋反應混合物。分離有機相且使用乙酸乙酯將水相再萃取兩次。藉由Na₂ SO₄ 乾燥合併之有機相，過濾且在減壓下蒸發溶劑以提供標題化合物(0.5 g, 67%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 8.17 (d,J = 2.12 Hz, 1H), 7.67-7.68 (m, 1H), 6.80 (d,J = 8.92 Hz, 1H), 4.42 (s, 2H), 3.60-3.62 (m, 2H), 3.48-3.51 (m, 2H), 1.85-1.86 (m, 4H)。 MS: 271.1 (M +2H)⁺

製備實例 47

步驟 A 向來自製備實例12之標題化合物(0.370g, 0.00199 mol)及市售2,5-二氯-1,3-苯并噁唑(0.336g, 0.00179mol)於15mL DMF (15 mL)中之經攪拌懸浮液中添加碳酸鉀(0.823g, 0.00595mol)且將混合物在100℃下加熱過夜。在藉由TLC證實完成反應之後，添加水且獲得固體。過濾固體並使用己烷洗滌以提供標題化合物(0.4 g，粗製物)。 MS: 338.1 (M+H)⁺

製備實例 48

步驟 A 向來自製備實例11之標題化合物(0.350 g, 0.00107 mol)及市售(0.181g, 0.000965mol)於15mL DMF中之經攪拌懸浮液中添加碳酸鉀(0.445g, 0.000756mol)且將反應混合物在100℃下加熱過夜。在藉由TLC證實完成反應之後，添加水且獲得固體。過濾固體並使用己烷洗滌以提供標題化合物(0.45 g，粗製物)。 MS: 478.1 (M+H)⁺

製備實例 49

步驟 A 向市售3,6-二氯噠嗪(0.500 g, 3.3783 mmol)及(2S,6R)-2,6-二甲基嗎啉(0.505 g, 4.3918 mmol)於乙醇(15 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.516 g, 5.0675 mmol)且將反應液在80℃下加熱12 h。在減壓下濃縮反應混合物。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0 -＞ 70/30)來純化粗製物以提供標題化合物(0.500 g, 64.93%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 7.56 (d,J = 9.60 Hz, 1H), 7.40 (d,J = 9.60 Hz, 1H), 4.18-4.18 (m, 2H), 3.61-3.62 (m, 2H), 2.49-2.50 (m, 2H), 1.16 (d,J = 6.40 Hz, 6H)。 MS: 228.1 (M +H)⁺

製備實例 51

步驟 A 向市售3,6-二氯噠嗪(0.500g, 3.36mmol)及(2S)-2-甲基嗎啉(0.339g, 3.36mmol)於乙醇(15 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.509g, 5.03mmol)且將反應液在80℃下加熱12 h。在減壓下濃縮反應混合物。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0 -＞ 70/30)來純化粗製物以提供標題化合物(0.250 g, 34.5%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 7.57 (d,J = 9.60 Hz, 1H), 7.40 (d,J = 9.60 Hz, 1H), 4.08-4.09 (m, 2H), 3.91-3.92 (m, 1H), 3.53-3.54 (m, 2H), 2.90-2.92 (m, 1H), 2.58-2.61 (m, 1H), 1.16 (d,J = 6.40 Hz, 3H)。 MS: 214.1 (M +H)⁺ 。

製備實例 52

步驟 A 向市售3,6-二氯噠嗪(0.500g, 3.36mmol)及(2R)-2-甲基嗎啉(0.339g, 3.36mmol)於乙醇(15 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.509g, 5.03mmol)且將反應液加熱至80℃並保持12 h。在減壓下濃縮反應混合物。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0 -＞ 70/30)來純化粗製物以提供標題化合物(0.250 g, 34.5%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 7.57 (d,J = 9.60 Hz, 1H), 7.40 (d,J = 9.60 Hz, 1H), 3.91-3.91 (m, 3H), 3.53-3.54 (m, 2H), 2.89-2.90 (m, 1H), 2.64-2.67 (m, 1H), 1.16 (d,J = 6.40 Hz, 3H)。 MS: 214.2 (M +H)⁺ 。

製備實例 53

步驟 A 向市售3,6-二氯噠嗪(0.230g, 1.54mmol)及4-甲氧基六氫吡啶( 0.265 g, 2.29mmol)於乙醇(15 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.301 g, 2.29mmol)且將反應液加熱至90℃並保持12 h。在減壓下濃縮反應混合物。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0 -＞ 70/30)來純化粗製物以提供標題化合物(0.335 g, 95.44%)。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ 7.50 (d,J = 9.60 Hz, 1H), 7.41 (d,J = 9.60 Hz, 1H), 3.92-3.93 (m, 2H), 3.43-3.44 (m, 1H), 3.27-3.27 (m, 5H), 1.88-1.89 (m, 2H), 1.43-1.44 (m, 2H)。 MS: 228.1 (M +H)⁺ 。

製備實例 54

步驟 A 向來自製備實例12之標題化合物(0.5 g, 2.24 mmol)及市售2,6-二氯-1,3-苯并噁唑(0.43g, 2.24 mmol)於DMF (15mL)中之經攪拌懸浮液中添加碳酸鉀(0.93 g, 6.72 mmol)且將混合物在100℃下加熱過夜。在藉由TLC證實完成反應之後，添加水且獲得固體。過濾固體，使用己烷洗滌以提供標題化合物(0.76 g，粗製物)。 MS: 338.1 (M+H)⁺

實例 1-122 遵循如上述反應圖5、6及7中所報告布赫瓦爾德偶合(Buchwald coupling)之一般程序來製備本發明實例。所用具體程序如下：程序 1 ：向三環胺衍生物(0.15 g, 1當量)於無水1,4-二噁烷(5 mL)中之經攪拌溶液中添加如表1中所指示之相應溴或氯衍生物(1當量)及第三丁醇鈉(3當量)。將反應混合物在N₂ 氣氛下脫氣10 min。然後添加參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (Pd₂ (dba)₃ ；0.05當量)及2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(Ru-Phos；0.1當量)且將反應混合物加熱至100℃直至完成反應為止。在完成反應(藉由LCMS監測)之後，經由矽藻土過濾反應混合物並使用乙酸乙酯洗滌。在減壓下濃縮濾液以產生粗產物。藉由急速管柱層析或製備型HPLC純化粗製物質以提供經甲苯磺醯基保護之化合物。向甲苯磺醯基化合物(1.0當量)於二噁烷:MeOH (1:1, 10 vol)中之溶液中添加NaOtBu (3當量)且加熱至70℃並保持6小時。在真空下濃縮反應混合物且管柱純化粗產物以提供期望產物。藉由急速管柱層析或製備型HPLC純化粗製物質以提供如表1中所指示之最終化合物。程序 2 ：向三環胺衍生物(0.15 g, 1當量)於無水1,4-二噁烷(5 mL)中之經攪拌溶液中添加如表1中所指示之相應溴或氯衍生物(1當量)及第三丁醇鈉(3當量)。將反應混合物在N₂ 氣氛下脫氣10 min。然後添加參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (Pd₂ (dba)₃ ；0.05當量)及2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(Ru-Phos；0.1當量)且將反應混合物加熱至100℃直至完成反應為止。在完成反應(藉由LCMS監測)之後，經由矽藻土過濾反應混合物並使用乙酸乙酯洗滌。在減壓下濃縮濾液以產生粗產物。藉由急速管柱層析或製備型HPLC純化粗製物質以提供如表1中所指示之最終化合物。程序 3 ：將Pd(OAc)₂ (0.1當量)及Xantphos (0.3當量)添加至反應小瓶中且添加脫氣二噁烷(4 ml)。用氬氣填充小瓶並密封。將懸浮液在110℃加熱1分鐘，然後添加三環胺衍生物(70 mg, 1當量)、溴或氯衍生物(1.1當量)及Cs₂ CO₃ (3.5當量)且將溶液在100℃加熱18小時。使用乙酸乙酯(30 mL)及水(30 mL)稀釋反應混合物。分離有機相，且使用乙酸乙酯將水相萃取兩次。合併之有機相經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾並在減壓下蒸發溶劑。在HP-Sil管柱(Biotage)上藉由採用DCM/MeOH梯度(100/0 -＞ 95/05)純化粗製物以提供經甲苯磺醯基保護之化合物。將甲苯磺醯基衍生物(50 mg, 1當量)、Cs₂ CO₃ (3當量)添加至微波管中，隨後添加MeOH (比率：1.000，體積：4 ml)及脫氣THF (比率：2.000，體積：8 ml)。將反應混合物在110℃於微波反應器中加熱30分鐘並在室溫冷卻。在減壓下去除溶劑，且在HP-Sil SNAP柱上使用Biotage Isolera One純化系統藉由採用DCM/MeOH梯度(100/0 -＞ 90/10)純化殘餘物以提供如表1中所示之最終化合物。程序 4 ：向三環胺衍生物(0.15 g, 1當量)於無水1,4-二噁烷(5 mL)中之經攪拌溶液中添加如表1中所示之相應溴或氯衍生物(1當量)及鈉Cs₂ CO₃ (3當量)。將反應混合物在N₂ 氣氛下脫氣10 min。然後添加Pd(OAc)₂ 0.1當量)及2-二環己基膦基-2′,4′,6′-三異丙基聯苯‎(XPhos；0.3當量)且將反應混合物加熱至100℃直至完成反應為止。在完成反應(藉由LCMS監測)之後，經由矽藻土過濾反應混合物並使用乙酸乙酯洗。在減壓下濃縮濾液以產生粗產物。藉由急速管柱層析或製備型HPLC純化粗製物質以提供經甲苯磺醯基保護之化合物。向甲苯磺醯基化合物(1.0當量)於二噁烷:MeOH (1:1, 10 vol)中之溶液中添加NaOtBu (3當量)且加熱至70℃歷6小時。在真空下濃縮反應混合物且經管柱純化粗產物以提供期望產物。藉由急速管柱層析或製備型HPLC純化粗製物質以提供如表1中所示之最終化合物。程序 5 向三環胺衍生物(150 mg, 1當量)於無水二噁烷(5 mL)中之經攪拌溶液中添加如表1中所指示之相應溴或氯衍生物(1當量)。添加第三丁醇鈉(3當量)並在氮氣氛下脫氣10 min。向此反應混合物中添加Ruphos G4 Pd (0.3當量)並加熱至100℃直至完成反應為止。經由矽藻土床過濾反應混合物，使用EtOAc洗滌。濃縮濾液且藉由管柱層析或製備型HPLC純化粗製物以提供如表1中所指示之實例化合物。表 1

實例 123

步驟 A 在0℃下，向實例 44 於THF (15.0mL)中之溶液中緩慢添加氫化鈉(60%) (0.0412g, 1.79mmol)，然後在25℃下攪拌1hr。在0℃下緩慢添加於15.0mL THF中之碘乙烷(0.305g, 0.00179mol)，然後在25℃下攪拌2hr。藉由LCMS監測反應混合物，使用水(50.0mL)稀釋反應混合物。分離有機相且使用乙酸乙酯將水相再萃取兩次。藉由Na₂ SO₄ 乾燥合併之有機相，過濾並在減壓下蒸發溶劑。在HP-Sil管柱(biotage)上藉由採用乙酸乙酯/石油醚(50/50)梯度純化粗製物以提供灰白色固體形式之標題化合物。¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 8.05 (d,J = 2.88 Hz, 1H), 7.49-7.50 (m, 1H), 7.42 (d,J = 8.20 Hz, 2H), 7.08-7.08 (m, 1H), 6.97-6.97 (m, 1H), 6.81 (d, J = 9.08 Hz, 1H), 4.38 (s, 2H), 4.18 (q,J = 7.08 Hz, 2H), 3.69-3.70 (m, 4H), 3.50 (t,J = 5.60 Hz, 2H), 3.29-3.30 (m, 4H), 2.78 (t,J = 5.52 Hz, 2H), 1.26 (t,J = 7.12 Hz, 3H)。 MS: 363.2 (M +H)⁺ 。

本發明化合物之鹽酸鹽 一般程序 向實例化合物(0.1 g)於無水DCM (10 mL)中之冷卻至0℃之溶液中添加於乙醚中之1M HCl (5當量)或於二噁烷中之4M HCl (5當量)並攪拌15分鐘。在真空下濃縮反應混合物並使用二乙醚研磨以提供如表2中所指示之期望產物。

實例遵循如上述一般程序中所闡述之鹽酸鹽程序，製備下列化合物。表 2

生物分析闡述 藉由硫磺素 (Thioflavin) T (ThT) 進行之全長 Tau (flTau) 解聚分析 在細菌中表現最長同種型之人類Tau (2N4R；441個胺基酸)並純化。對於藉由ThT進行之Tau解聚分析而言，使於PBS中之35 µM重組全長(fl)Tau在37℃、振盪、750 RPM下在50 µM肝素(Sigma-Aldrich)及10 mM DTT (Sigma-Aldrich)存在下聚集24小時。將化合物溶於無水二甲基亞碸(DMSO, Sigma-Aldrich)中以達到10 mM之濃度。將flTau聚集物及化合物連續稀釋液在PBS (50 µL體積)中一起混合至最終濃度為2 μM flTau聚集物及160 µM至0.04 µM化合物。將混合物在室溫(RT)下培育30分鐘，然後將40 µL此混合物轉移至黑色384孔分析板(Perkin-Elmer)中並與10 µL於250 mM甘胺酸中之100 µM ThT (皆來自Sigma-Aldrich)混合於PBS中。一式一份或一式兩份在Tecan讀數儀(激發：440 nm；發射：485 nm)上量測螢光(相對螢光單位；RFU)。然後計算flTau解聚百分比且使用GraphPad Prism第5版(GraphPad軟體)並假定單結合位點擬合模型來測定半最大有效濃度(EC₅₀ )。

藉由 ThT 進行之 Tau K18 解聚分析 在細菌中表現涵蓋人類Tau441之最長同種型(2N4R)之胺基酸244至372之Tau K18片段並純化或自SignalChem獲得。對於藉由ThT進行之K18解聚分析而言，使於PBS中之35 µM重組K18在37℃、振盪、750 RPM下在50 µM肝素(Sigma-Aldrich)及10 mM DTT (Sigma-Aldrich)存在下聚集24小時。將化合物溶於無水二甲基亞碸(DMSO, Sigma-Aldrich)中以達到10 mM之濃度。將K18聚集物及化合物連續稀釋液在PBS (50 µL體積)中一起混合至最終濃度為2 μM K18聚集物及160 µM至0.04 µM化合物。將混合物在室溫(RT)下培育30分鐘，然後將40 µL此混合物轉移至黑色384孔分析板(Perkin-Elmer)中並與10 µL於250 mM甘胺酸中之100 µM ThT (皆來自Sigma-Aldrich)混合於PBS中。一式一份或一式兩份在Tecan讀數儀(激發：440 nm；發射：485 nm)上量測螢光(相對螢光單位；RFU)。然後計算K18解聚百分比且使用GraphPad Prism第5版(GraphPad軟體)並假定單結合位點擬合模型來測定半最大有效濃度(EC₅₀ )。量測下列實例化合物：

注釋：+++ EC₅₀ ＜ 10 uM；++ EC₅₀ 10＜x＜25 uM；+ EC₅₀ 25＜x＜50 uM。

細胞內 Tau 聚集之減少 在完整培養基[DMEM-F12，4.5 g/L Glutamax (Invitrogen)、15% FBS (Biochrom)、1% Peni/Strep (Invitrogen)，補充有2.5 µg/ml G418 (Sigma-Aldrich)選擇抗生素]中培養過度表現全長形式之攜載P301L突變之人類Tau之人類神經母細胞瘤細胞系。在實驗前一天，將5×10⁵ 個細胞/孔平鋪於6孔板中之3 mL完整培養基中。第二天，將細胞與5 µM DMSO或本發明化合物一起在37℃下再培育24 h。在培育之後，將細胞胰蛋白酶化，再懸浮於100 µl均質化緩衝液[25 mM Tris-HCl (pH 7.4)、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM EGTA，含有磷酸酶抑制劑(30 mM NaF、0.2 mM Na₃ VO₄ 、1 nM岡田酸(okadaic acid)、1 mM PMSF、5 mM Na₄ P₂ O₇ )及蛋白酶抑制劑混合劑(Complete^TM , Roche)]中，且然後使用三個快速循環之冷凍及解凍以物理方式裂解。然後在αLISA分析中直接測試試樣。藉由AlphaLisa使用下列抗體對來量化磷酸化聚集Tau及總Tau： • HT7-受體珠粒+生物素(BT)-Tau13-供體珠粒：總Tau • HT7-受體珠粒+生物素(BT)-HT7-供體珠粒：聚集人類Tau 使用EZ-Link® NHS-PEO固相生物素化套組(Thermo Scientific)將Tau13 (Abcam)生物素化，而HT7-生物素係來自商業來源(Thermo Scientific)。對於每一抗體對而言，將受體珠粒及生物素化抗體之濃度最佳化。首先在PBS中以稀釋系列測試所有試樣以鑑別每一試樣及分析之線性範圍及最佳稀釋度。對於最終方案而言，將下列試劑添加至384孔白色OptiPlate (PerkinElmer)中： • 5 µL測試稀釋試樣 • 20 µL下列最終濃度之生物素-mAb受體珠粒混合物： • 1.25 nM HT7-BT與10 µg/ml HT7-Acc珠粒之組合 • 5 nM Tau13-BT與2.5 µg/ml HT7-Acc珠粒之組合在將此混合物在室溫下培育1 h之後，於暗處添加25 µL 25 µg/mL鏈黴抗生物素蛋白(Streptavidin)供體珠粒(Perkin Elmer)。在30 min培育之後使用EnSpire α儀器及EnSpire工作站第3.00版來分析板。將聚集Tau之數據正規化至總Tau且然後表示為經DMSO處理之細胞之百分比。量測下列實例化合物：

注釋：+++%＞50；++% 50＜x＜25；+% 25＜x＜10。

藉由免疫細胞化學測定細胞內 Tau 錯誤摺疊之減少 在完整培養基[DMEM-F12，4.5 g/L Glutamax (Invitrogen)、15% FBS (Biochrom)、1% Peni/Strep (Invitrogen)，補充有2.5 µg/ml G418 (Sigma-Aldrich)選擇抗生素]中培養過度表現全長形式之攜載P301L突變之人類Tau之人類神經母細胞瘤細胞系。為誘導細胞內錯誤摺疊之Tau之累積，使細胞在活體外自神經母細胞瘤細胞分化成神經元樣細胞。為此，將細胞以2500個細胞/孔之密度平鋪於96孔板中之100 µl補充有10 µM視黃酸之完整培養基(RA；Sigma, R2625)中並保持1週。每2至3天更換培養基且添加新鮮視黃酸。為評價本發明化合物減小錯誤摺疊細胞內Tau之含量之能力，將化合物以介於0.1 nM與10 nM之間之濃度分配於細胞上並保持24小時。在與化合物一起培育之後，將細胞固定於4% PFA中15 min並在PBS中洗滌3次。然後在室溫下於10%純淨山羊血清(NGS)、0.25% Triton X-100 (於PBS中)中阻斷細胞2h。然後將經滲透固定細胞在於PBS中之5% NGS/0.25% Triton X-100中與單株抗小鼠MC1抗體(由Prof. Peter Davies, Albert Einstein College of Medicine, New York, USA提供)一起培育過夜，該抗體係以1:4000稀釋以檢測錯誤摺疊之Tau及多株抗兔總Tau (Abcam；ab64193)且以1:400稀釋以檢測總Tau。在與一級抗體一起培育後，將細胞在PBS中洗滌3次且然後與二級抗體山羊抗小鼠FITC (Abcam ab6785)及山羊抗兔Alexa Fluor 594 (Abcam 150080)一起培育30 min。然後將細胞在PBS中洗滌3次且使用Incucyte獲取影像。將錯誤摺疊之Tau信號正規化至總Tau信號且將Tau錯誤摺疊減少表示為相對於經媒劑處理之細胞之百分比。數據係每孔至少3個圖片之平均值。在評估減少細胞內Tau錯誤摺疊之能力時，實例 44 在低nM濃度下即展示功效，如圖 1 中所展示。

藉由 ThT 測定之聚集分析之全長 Tau (flT) 抑制自Biotechne (USA)購買人類Tau (2N4R；441個胺基酸)之同種型。在細菌大腸桿菌(E coli )中表現蛋白質，純化並在PBS中濃縮至最終濃度為50 μM。為誘導Tau聚集，使用Hula混合器(Life Technologies)將4 uM單體flTau在37℃及攪動循環(由軌道振盪及混合功能組成)下Tau配對螺旋絲(PHF) (自獲得自外部來源(Tissue Solutions)之一名阿茲海默氏病(AD)患者之死後腦所富集，以1:200稀釋)一起培育72小時。富集程序係改良自Jicha等人，1997 (Journal of Neuroscience Research 48:128-132 (1997))及Rostagno及Ghiso, 2009 (Current protocols in cell biology (2009)，第3章，第3.33 3.33.1-33單元)。簡言之，將約9 g AD人類腦試樣在冰上解凍且使用50 ml均質化緩衝液[於RAB緩衝液(100 mM 2-(N-嗎啉基)乙烷磺酸(MES)、1 mM EGTA、0.5 mM MgSO4、2 mM DTT (pH 6.8))中之0.75 M NaCl，補充有蛋白酶抑制劑(Complete；Roche 11697498001)]在玻璃杜恩斯均質器(Dounce homogenizer)中均質化。然後將均質物在4℃下培育20 min以解聚合任何殘餘微管，然後轉移至聚碳酸酯離心瓶(16 × 76 mm；Beckman 355603)中並在4℃下使用預冷卻70.1轉子(Beckman, 342184)在11,000 g (12,700 RPM)下於超離心機(Beckman, XL100K)中離心20 min。將糰粒保持於冰上。將上清液彙集至聚碳酸酯瓶中並在4℃下於70.1 Ti轉子中在100,000 g (38,000 RPM)下再次離心1小時以分離富PHF糰粒，而可溶性Tau則保留於上清液中。將來自第一離心及第二離心之糰粒再懸浮於120 mL萃取緩衝液[10 mM Tris-HCl (pH 7.4)、10%蔗糖、0.85 M NaCl、1%蛋白酶抑制劑(Calbiochem 539131)、1 mM EGTA、1%磷酸酶抑制劑(Sigma P5726及P0044)]中。然後將溶液轉移至聚碳酸酯離心瓶(16 × 76 mm；Beckman 355603)中並在4℃下使用70.1 Ti轉子在15,000 g (14,800 RPM)下於超離心機(Beckman, XL100K)中離心20 min。在存在10%蔗糖及低速度離心下，大部分PHF保留於上清液中，而完整或片段化NFT及較大PHF聚集物則發生粒化。棄除糰粒。將20% Sarkosyl (Sigma L7414-10ML)添加至上清液中直至最終濃度為1%並在室溫下攪拌1 h。然後將此溶液於聚碳酸酯瓶中在4℃下於70.1 Ti轉子中在100,000 g (38,000 RPM)下離心1 h，且將含有富PHF材料之糰粒再懸浮於總最終體積為1.5 mL之PBS中，等分並儲存於-80℃下。為測試本發明化合物抑制Tau聚集之能力，在培育之前將化合物於DMSO中之連續稀釋液添加至單體flTau/PHF混合物中。在培育之後，將40 µl混合物轉移至黑色384孔分析板(Perkin-Elmer)中並與10 µl於250 mM甘胺酸中之100 µM ThT (皆來自Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland)混合於PBS中。在Tecan讀數儀Spark上使用濾波器(在448 nm/BW 7nm下激發，在485 nm/BW 20 nm下發射)一式一份來量測螢光。自兩個獨立實驗(各自使用技術上一式兩份)獲得劑量反應型曲線且使用GraphPad Prism 7.03計算IC50。使用實例 44 及實例 46 抑制flTau聚集之IC50值指示於下表中：

圖 1 ：使用實例 44 來減少經分化神經母細胞瘤細胞中之細胞內Tau錯誤摺疊(藉由免疫細胞化學測得)。數據展示為平均值+ SD。

Claims

一種式(I)化合物，
或其立體異構體、外消旋混合物、互變異構體、醫藥上可接受之鹽；其中A係選自由以下組成之群：
，及
，其中
及
可在任一可用位置連接至N原子，且其中
經一或多個取代基R ^j取代；B係選自由以下組成之群：O及NR^a；E及V獨立地選自由以下組成之群：N、NR⁵、O及S；G係選自由以下組成之群：苯環及吡啶環；J係選自由O、N-R¹及CH₂組成之群，或若J連接至R ²，則J係選自由CH或C組成之群；Y、Y ¹、Y ²及Y ³係CZ； Z獨立地選自由以下組成之群：H、鹵素、O-烷基、烷基及CN； R獨立地選自由以下組成之群：
及-NR³R⁴；R ^a係選自由以下組成之群：H及烷基；R ^d、R ^e、R ^f及R ^g獨立地選自由H及烷基組成之群，或R ^d、R ^e、R ^f及R ^g中之任兩者可接合以形成3員至8員環；R ^j獨立地係選自由以下組成之群：-鹵素、-O-烷基、-NR³R⁴、-CN、
、
，及
，其中含有C_1-2碳原子之橋或鍵可存在於a碳原子與c或d碳原子之間，或其中含有C_1-2碳原子之橋或鍵可存在於b碳原子與該c或d碳原子之間；R ¹係選自由以下組成之群：H及烷基；R ²獨立地選自由烷基或-O-烷基組成之群，且其中若兩個R ²係孿位(geminal)，則其可接合形成3員至6員環；R ³及R ⁴獨立地選自由以下組成之群：H及烷基；R ⁵係選自由以下組成之群：H及烷基；n為0、1、2、3或4；r及s獨立地係0、1、2或3；及t及u獨立地係1、2或3。
如請求項1之化合物，其係式(Ia)化合物：
其中A、R ^a、R ^d、R ^e、R ^f、R ^g、Y、Y ¹、Y ²及Y ³係如請求項1中所定義。
如請求項1及2中任一項之化合物，其中A係
，其中
可在任一可用位置連接至N原子，其中
經一或多個取代基R ^j取代，且其中R ^j係如請求項1中所定義。
如請求項1及2中任一項之化合物，其係式(Ib)化合物：
其中R ^a、R ^j及Z係如請求項1中所定義，且p為1或2。
如請求項1及2中任一項之化合物，其中該化合物係選自由以下組成之群：
一種醫藥組合物，其包括如請求項1至5中任一項之化合物及視情況醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
如請求項1及2中任一項之化合物，其用作藥劑。
如請求項1及2中任一項之化合物，其用於治療、改善或預防與Tau蛋白聚集物相關之病症或異常。
一種如請求項1至5中任一項之化合物之用途，其用以製造用於治療有需要之個體與Tau蛋白聚集物相關之病症或異常之藥劑。
如請求項9之用途，其中該病症係選自阿茲海默氏病(Alzheimer’s disease)(AD)、原發性年齡相關性tau蛋白病變(PART)、庫賈氏病(Creutzfeldt-Jacob disease)、拳擊手型失智症、唐氏症候群(Down’s Syndrome)、吉斯曼-史特斯勒-先克病(Gerstmann-Sträussler-Scheinker disease)(GSS)、包涵體肌炎、普里昂蛋白(prion protein)腦類澱粉血管病變、創傷性腦損傷(TBI)、肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、關島帕金森症-失智症複合症(Parkinsonism-dementia complex of Guam)、具有神經纖維纏結之非關島運動神經元疾病(non-Guamanian motor neuron disease with neurofibrillary tangles)、嗜銀顆粒病、皮質基底退化(CBD)、具有鈣化之瀰漫性神經纖維纏結、17號染色體相關之額顳葉失智症合併帕金森症(FTDP-17)、哈勒沃登-施帕茨病(Hallervorden-Spatz disease)、多系統萎縮(MSA)、C型尼曼-皮克病(Niemann-Pick disease type C)、蒼白球-腦橋-黑質退化、皮克氏病(Pick’s disease)(PiD)、進行性皮質下神經膠瘤病、進行性核上性麻痺(PSP)、亞急性硬化性泛腦炎、纏結顯著失智症(tangle predominant dementia)、肌強直性營養不良、亞急性硬化性泛腦病、LRRK2突變、慢性創傷性腦病(CTE)、家族性英國型失智症(familial British dementia)、家族性丹麥型失智症(familial Danish dementia)、其他額顳葉退化、神經退化伴腦內鐵累積、SLC9A6相關性智力遲鈍、白質tau蛋白病變伴球狀膠質細胞包涵體、癲癇、路易氏體失智症(Lewy body dementia)(LBD)、輕度認知損傷(MCI)、多發性硬化、帕金森氏病(Parkinson's disease)、HIV相關性失智症、成人型糖尿病、老年性心臟類澱粉變性、青光眼、缺血性中風、AD之精神病，及亨廷頓氏病(Huntington's disease)。
如請求項10之用途，其中該阿茲海默氏病(Alzheimer’s disease)(AD)為家族性AD；且其中該帕金森氏病為腦炎後帕金森症或瓜德羅普帕金森症(Guadeloupean Parkinsonism)。
一種如請求項1至5中任一項之化合物之用途，其用以製造用於治療有需要個體之阿茲海默氏病之藥劑。
一種如請求項1至5中任一項之化合物之用途，其用以製造用於治療有需要個體之PSP之藥劑。
一種如請求項1至5中任一項之化合物之用途，其用以製造用於降低有需要個體中Tau聚集之藥劑。
一種如請求項1至5中任一項之化合物之用途，其用以製造用於防止有需要個體中Tau聚集物形成及/或抑制Tau聚集的藥劑。
一種如請求項1至5中任一項之化合物之用途，其用以製造用於干擾有需要個體中細胞內Tau聚集物之藥劑。
如請求項9至16中任一項之用途，其中該個體係動物或人類。
一種混合物，其包括如請求項1至5中任一項之化合物及至少一種選自不同於如請求項1至5中任一項之化合物之治療劑之其他生物活性化合物、醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
如請求項18之混合物，其中該其他生物活性化合物係用於治療類澱粉變性之化合物。
如請求項18或19之混合物，其中該其他生物活性化合物係選自由以下組成之群：抵抗氧化壓力之化合物、抗細胞凋亡化合物、金屬螯合劑、DNA修復抑制劑(例如哌侖西平(pirenzepine)及代謝物)、3-胺基-1-丙烷磺酸(3APS)、1,3-丙烷二磺酸鹽(1,3PDS)、α-分泌酶活化劑、β-及γ-分泌酶抑制劑、Tau蛋白、神經傳遞質、β-褶板破碎劑(β-sheet breakers)、類澱粉β清除/消耗細胞組分之引誘劑、N端截短類澱粉β(包含焦麩胺酸化類澱粉β 3-42)之抑制劑、抗發炎性分子，或膽鹼酯酶抑制劑(ChEI)(例如塔克寧(tacrine)、利凡斯的明(rivastigmine)、多奈派齊(donepezil)及/或加蘭他敏(galantamine))，M1激動劑、其他藥物(包含任一類澱粉或Tau修飾藥物及營養補充劑)、抗體(包含任一功能等效抗體或其功能部分)或疫苗。
如請求項18或19之混合物，其中該化合物及/或該其他生物活性化合物係以治療有效量存在。
如請求項8之化合物，其中該病症係選自阿茲海默氏病(AD)、原發性年齡相關性tau蛋白病變(PART)、庫賈氏病、拳擊手型失智症、唐氏症候群、吉斯曼-史特斯勒-先克病(GSS)、包涵體肌炎、普里昂蛋白腦類澱粉血管病變、創傷性腦損傷(TBI)、肌肉萎縮性側索硬化(ALS)、關島帕金森症-失智症複合症、具有神經纖維纏結之非關島運動神經元疾病、嗜銀顆粒病、皮質基底退化(CBD)、具有鈣化之瀰漫性神經纖維纏結、17號染色體相關之額顳葉失智症合併帕金森症(FTDP-17)、哈勒沃登-施帕茨病、多系統萎縮(MSA)、C型尼曼-皮克病、蒼白球-腦橋-黑質退化、皮克氏病(PiD)、進行性皮質下神經膠瘤病、進行性核上性麻痺(PSP)、亞急性硬化性泛腦炎、纏結顯著失智症、肌強直性營養不良、亞急性硬化性泛腦病、LRRK2突變、慢性創傷性腦病(CTE)、家族性英國型失智症、家族性丹麥型失智症、其他額顳葉退化、神經退化伴腦內鐵累積、SLC9A6相關性智力遲鈍、白質tau蛋白病變伴球狀膠質細胞包涵體、癲癇、路易氏體失智症(LBD)、輕度認知損傷(MCI)、多發性硬化、帕金森氏病、HIV相關性失智症、成人型糖尿病、老年性心臟類澱粉變性、青光眼、缺血性中風、AD之精神病及亨廷頓氏病。
如請求項22之化合物，其中該阿茲海默氏病(AD)為家族性AD；且其中該帕金森氏病為腦炎後帕金森症或瓜德羅普帕金森症。
一種如請求項1至5中任一項之化合物之用途，其用作分析參考或活體外篩選工具。
一種下式之化合物，
或其醫藥上可接受之鹽。