CN117990802A - 一种舒更葡糖钠中致突变杂质的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种舒更葡糖钠中致突变杂质的检测方法。本发明提供了一种舒更葡糖钠中致突变杂质的检测方法，利用GC法测定舒更葡糖钠原料药或注射液中致突变杂质，专属性、检测限及定量限、线性范围、准确度、精密度、稳定性均符合《中国药典》要求。本发明是根据舒更葡糖钠化合物的特点进行方法开发，通过在对照品溶液配制过程中引入γ‑环糊精或通过稀释降低供试品溶液中舒更葡糖钠的浓度，消除舒更葡糖钠作为γ‑环糊精衍生物，遇水溶胀后导致的基底效应，能够有效改善舒更葡糖钠遇水溶胀后对其可能含有的致突变杂质检测的影响，有效提高检测方法的灵敏度和准确性。
Description
技术领域
本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种舒更葡糖钠中致突变杂质的检测方法。
背景技术
舒更葡糖钠(Sugammadex sodium)是一种选择性肌松药拮抗剂，在原料药生产过程中，使用γ-环糊精经全氯代反应得到全氯代伽马环糊精，全氯代伽马环糊精通过与巯基丙酸盐反应生成舒更葡糖钠。该路线会产生一定品类的致突变杂质，舒更葡糖钠原料药可能潜在的具有遗传毒性警示结构的杂质包括氯乙烷、乙醛和丙烯酸乙酯等。
舒更葡糖钠注射液，在生产过程中需经过121℃灭菌工艺，在灭菌工艺过程中会产生降解杂质丙烯酸，丙烯酸通过与舒更葡糖钠原料药中残留乙醇反应产生丙烯酸乙酯。考虑到舒更葡糖钠为拮抗罗库溴铵或维库溴铵诱导的神经肌肉阻滞的急救用药，其最大人体推荐剂量MRHD为16mg/kg，根据EMA《遗传毒性杂质限度指导原则》中短期用药毒理学关注阈值(即TTC＝120μg/d)丙烯酸乙酯需按照125μg/g进行控制。
致突变杂质，在较低水平时也有可能直接引起DNA损伤，导致DNA突变，从而引发癌症的DNA反应性物质，已经成为医药研发和上市过程中关注的重点。因此，亟需开发一种舒更葡糖钠原料药和舒更葡糖钠注射液中致突变杂质的检测方法。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种舒更葡糖钠中致突变杂质的检测方法。本发明的检测方法，适用于舒更葡糖钠原料药和注射液中致突变杂质的检测，专属性、检测限及定量限、线性范围、准确度、精密度和稳定性，均符合《中国药典》要求。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种舒更葡糖钠中致突变杂质的检测方法，包括以下步骤：
将舒更葡糖钠样品和水混合，得到供试品溶液；所述舒更葡糖钠样品包括舒更葡糖钠原料药或舒更葡糖钠注射液；
提供致突变杂质的对照品溶液，所述致突变杂质包括氯乙烷、乙醛和丙烯酸乙酯中的一种或多种；
将所述供试品溶液和对照品溶液分别进行气相色谱检测，根据得到的峰面积，得到所述致突变杂质的含量；
所述气相色谱检测的条件包括：色谱柱为极性毛细管柱；程序升温，起始温度40～50℃；进样口温度：190～210℃；载气：氮气或氦气，流速：1～2mL/min；检测器：FID，检测器温度：210～230℃；顶空进样，顶空平衡温度：70～90℃，平衡时间：20～30min，进样量：1mL。
优选的，所述供试品溶液中舒更葡糖钠的浓度为10～30mg/mL。
优选的，所述对照品溶液中还包括γ-环糊精。
优选的，所述γ-环糊精的质量为所述供试品溶液中舒更葡糖钠质量的80～120％。
优选的，所述供试品溶液中舒更葡糖钠的浓度为60～100mg/mL。
优选的，所述程序升温包括：起始柱温为40℃，以10℃/min的升温速率升温至100℃，保持2min后，以30℃/min的升温速率升温至150℃。
优选的，所述色谱柱包括聚乙二醇色谱柱。
优选的，所述对照品溶液中氯乙烷的浓度为0.0494～19.76μg/mL。
优选的，所述对照品溶液中乙醛的浓度为0.02414～24.08μg/mL。
优选的，所述对照品溶液中丙烯酸乙酯的浓度为0.06783～20.07μg/mL。
本发明提供了一种舒更葡糖钠中致突变杂质的检测方法，包括以下步骤：
将舒更葡糖钠样品和水混合，得到供试品溶液；所述舒更葡糖钠样品包括舒更葡糖钠原料药或舒更葡糖钠注射液；
提供致突变杂质的对照品溶液，所述致突变杂质包括氯乙烷、乙醛和丙烯酸乙酯中的一种或多种；
将所述供试品溶液和对照品溶液分别进行气相色谱检测，根据得到的峰面积，得到所述致突变杂质的含量；
所述气相色谱检测的条件包括：色谱柱为极性毛细管柱；程序升温，起始温度40～50℃；进样口温度：190～210℃；载气：氮气或氦气，流速：1～2mL/min；检测器：FID，检测器温度：210～230℃；顶空进样，顶空平衡温度：70～90℃，平衡时间：20～30min，进样量：1mL。
本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：
本发明提供了一种舒更葡糖钠中致突变杂质的检测方法，利用GC法测定舒更葡糖钠待测样品中致突变杂质，舒更葡糖钠样品被水稀释后，舒更葡糖钠的含量降低，可以消除舒更葡糖钠作为γ-环糊精衍生物遇水溶胀后导致的基底效应，检测方法操作便捷，方法专属性、检测限及定量限、线性范围、准确度、精密度、稳定性均符合《中国药典》要求，适用于舒更葡糖钠原料药和注射液中致突变杂质的检测。
进一步地，本发明根据舒更葡糖钠化合物为γ-环糊精衍生物(舒更葡糖钠生产以γ-环糊精为原料，经全氯代反应得到全氯代伽马环糊精，再通过与巯基丙酸盐反应生成舒更葡糖钠)的特点进行方法开发，通过在对照品溶液配制过程中引入γ-环糊精，消除舒更葡糖钠作为γ-环糊精衍生物遇水溶胀后导致的基底效应，能够有效改善舒更葡糖钠遇水溶胀后对可能含有的致突变杂质检测的影响，有效提高检测方法的灵敏度和准确性。针对舒更葡糖钠原料药及注射液的关键致突变杂质丙烯酸乙酯的回收率范围为86.21～101.4％，其他致突变杂质氯乙烷和乙醛的回收率范围为102.4～109.6％；本发明的检测方法灵敏度高，氯乙烷的检测限为0.25μg/g，乙醛的检测限为0.1μg/g，丙烯酸乙酯的检测限为0.3μg/g。
进一步地，舒更葡糖钠注射液被水稀释后，供试品溶液中舒更葡糖钠的浓度为10～30mg/mL，可以进一步消除舒更葡糖钠作为γ-环糊精衍生物遇水溶胀后导致的基底效应，进一步提高检测结果的准确性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例1中的专属性-γ-环糊精色谱图；
图2为实施例1中的专属性-对照品溶液色谱图；
图3为实施例1中的专属性-供试品溶液色谱图；
图4为实施例1中的专属性-加标供试品溶液色谱图；
图5为实施例1中的氯乙烷线性图；
图6为实施例1中的乙醛线性图；
图7为实施例1中的丙烯酸乙酯线性图；
图8为实施例2中的专属性-空白辅料溶液色谱图；
图9为实施例2中的专属性-对照品溶液色谱图；
图10为实施例2中的专属性-供试品溶液色谱图；
图11为实施例2中的专属性-加标供试品溶液色谱图；
图12为实施例2中的丙烯酸乙酯线性图。
具体实施方式
本发明提供了一种舒更葡糖钠中致突变杂质的检测方法，包括以下步骤：
将舒更葡糖钠样品和水混合，得到供试品溶液；所述舒更葡糖钠样品包括舒更葡糖钠原料药或舒更葡糖钠注射液；
提供致突变杂质的对照品溶液，所述致突变杂质包括氯乙烷、乙醛和丙烯酸乙酯中的一种或多种；
将所述供试品溶液和对照品溶液分别进行气相色谱检测，根据得到的峰面积，得到所述舒更葡糖钠样品中致突变杂质的含量；
所述气相色谱检测的条件包括：色谱柱为极性毛细管柱；程序升温，起始温度40～50℃；进样口温度：190～210℃；载气：氮气或氦气，流速：1～2mL/min；检测器：FID，检测器温度：210～230℃；顶空进样，顶空平衡温度：70～90℃，平衡时间：20～30min，进样量：1mL。
在本发明中，若无特殊说明，使用的试剂、耗材、仪器和设备均为本领域市售商品。
本发明将舒更葡糖钠样品和水混合，得到供试品溶液；所述舒更葡糖钠样品包括舒更葡糖钠原料药或舒更葡糖钠注射液。
在本发明中，所述供试品溶液中舒更葡糖钠的浓度优选为10～30mg/mL，更优选为20mg/mL。当所述供试品溶液中舒更葡糖钠的浓度为上述范围时，在满足检测方法灵敏度的基础上，能够降低舒更葡糖钠作为γ-环糊精衍生物，遇水溶胀后导致的基底效应。
在本发明中，当所述舒更葡糖钠样品为舒更葡糖钠原料药时，所述供试品溶液的体积优选为5mL进行所述气相色谱检测；当所述舒更葡糖钠样品为舒更葡糖钠注射液时，所述供试品溶液的体积优选为2mL进行所述气相色谱检测。进行所述气相色谱检测时，所述供试品溶液的体积不同，是为了满足检测方法灵敏度的要求，同时减轻对仪器的污染。
本发明提供致突变杂质的对照品溶液，所述致突变杂质包括氯乙烷、乙醛和丙烯酸乙酯中的一种或多种。
在本发明中，当所述舒更葡糖钠样品为舒更葡糖钠原料药时，所述致突变杂质优选为氯乙烷、乙醛和丙烯酸乙酯。
在本发明中，当所述舒更葡糖钠样品为舒更葡糖钠注射液时，所述致突变杂质优选为丙烯酸乙酯，所述舒更葡糖钠注射液中各突变杂质的含量比所述舒更葡糖钠原料药中低，因此所述舒更葡糖钠注射液中的致突变杂质仅需检测丙烯酸乙酯。
在本发明中，所述对照品溶液中氯乙烷的浓度优选为0.0494～19.76μg/mL。
在本发明中，所述对照品溶液中乙醛的浓度优选为0.02414～24.08μg/mL
在本发明中，所述对照品溶液中丙烯酸乙酯的浓度优选为0.06783～20.07μg/mL。
在本发明中，所述对照品溶液中优选还包括γ-环糊精，所述γ-环糊精的加入能够进一步消除舒更葡糖钠作为γ-环糊精衍生物，遇水溶胀后导致的基底效应。
在本发明中，当所述对照品溶液中优选还包括γ-环糊精时，所述供试品溶液中舒更葡糖钠的浓度优选为60～100mg/mL，更优选为80mg/mL。对照品溶液中加入γ-环糊精后，所述供试品溶液中舒更葡糖钠的浓度提高，可以提高检测方法的灵敏度，而基底效应可以通过加入γ-环糊精来消除。
在本发明中，所述γ-环糊精的质量优选为所述供试品溶液中舒更葡糖钠质量的80～120％，更优选为100％。
在本发明中，所述对照品溶液优选为2～5mL进行所述气相色谱检测，所述对照品溶液进行所述气相色谱检测的体积优选与所述供试品溶液进行所述气相色谱检测的体积一致。
得到供试品溶液和对照品溶液后，本发明将所述供试品溶液和对照品溶液分别进行气相色谱检测，根据得到的峰面积，得到所述舒更葡糖钠样品中致突变杂质的含量；
所述气相色谱检测的条件包括：色谱柱为极性毛细管柱；程序升温，起始温度40～50℃；进样口温度：190～210℃；载气：氮气或氦气，流速：1～2mL/min；检测器：FID，检测器温度：210～230℃；顶空进样，顶空平衡温度：70～90℃，平衡时间：20～30min，进样量：1mL。
在本发明中，所述色谱柱优选包括聚乙二醇色谱柱，所述聚乙二醇色谱柱优选包括Agilent DB-WAX，30m×0.53mm×1μm。
在本发明中，所述程序升温优选包括：起始柱温为40℃，以10℃/min的升温速率升温至100℃，保持2min后，以30℃/min的升温速率升温至150℃。
在本发明中，所述进样口温度优选为200℃。
在本发明中，所述载气优选为氮气。
在本发明中，所述流速优选为1.5mL/min。
在本发明中，所述检测器温度优选为220℃
在本发明中，所述顶空平衡温度优选为80℃，平衡时间优选为20min。
在本发明中，所述顶空的顶空瓶体积优选为20mL。
在本发明中，所述根据得到的峰面积，得到所述舒更葡糖钠样品中致突变杂质的含量的方法优选为外标法。
在本发明中，依据ICH M7控制原则计算，所述致突变杂质的限度优选如表1所示，本发明检测方法的灵敏度完全满足舒更葡糖钠原料药或注射液中致突变杂质的检测。
表1致突变杂质控制限度和本发明检测方法的灵敏度
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的检测方法进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
舒更葡糖钠原料药的检测
1)丙烯酸乙酯对照品贮备液(浓度为1000μg/mL)：取丙烯酸乙酯对照品100mg，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
2)乙醛对照品贮备液(浓度为1200μg/mL)：取乙醛对照品120mg，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
3)对照品标准溶液：精密量取丙烯酸乙酯对照品贮备液、乙醛对照品贮备液和氯乙烷标准溶液(阿拉丁公司氯乙烷标准溶液，浓度为“988μg/mL,in Methanol)各1mL，置同一100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得到对照品标准溶液。
4)γ-环糊精：精密称定γ-环糊精400mg，置20mL顶空瓶中，精密加水5mL使溶解，密封。
5)对照品溶液：精密称定γ-环糊精400mg，置20mL顶空瓶中，精密加对照品标准溶液5mL，密封。
6)供试品溶液：精密称定舒更葡糖钠原料药400mg，置20mL顶空瓶中，精密加水5mL使溶解，密封。
7)加标供试品溶液：精密称定舒更葡糖钠原料药400mg，置20mL顶空瓶中，精密加对照品标准溶液5mL使溶解，密封。
气相色谱检测条件：
色谱柱：Agilent DB-WAX(30m×0.53mm×1μm)；
程序升温：起始柱温40℃，以10℃/min的升温速率升温至100℃，保持2分钟后，以30℃/min的升温速率升温至150℃；
进样口温度：200℃，体积流量：1.5mL/min，分流比5:1；顶空温度：80℃，平衡时间：20min，进样量：1mL；检测器：FID，检测器温度：220℃。
1.专属性
将γ-环糊精、对照品溶液、供试品溶液、加标供试品溶液分别进行气相色谱检测，记录色谱图，如图1～4所示，图2中保留时间为9.999min的峰为甲醇峰。
由图1～4可知，γ-环糊精不干扰各致突变杂质(氯乙烷、乙醛和丙烯酸乙酯)的测定，加标供试品溶液中各致突变杂质保留时间与对照品溶液中各致突变杂质保留时间一致，且各致突变杂质与周围杂质分离度良好，说明本发明的检测方法具有良好的专属性。
2.线性
将丙烯酸乙酯对照品贮备液、乙醛对照品贮备液和阿拉丁公司氯乙烷标准溶液配制成系列浓度的混合线性溶液，氯乙烷浓度依次为0.04940、2.470、4.940、7.410、9.880、14.82和19.76μg/mL，乙醛浓度依次为0.02414、3.009、6.019、9.028、12.04、18.06和24.08μg/mL，丙烯酸乙酯浓度依次为0.06783、2.509、5.018、7.526、10.04、15.05和20.07μg/mL。
分别精密称定γ-环糊精400mg，置20mL顶空瓶中，然后分别精密加入上述系列浓度的混合线性溶液5mL，密封，分别进行气相色谱检测。采用外标法，得到氯乙烷、乙醛和丙烯酸乙酯的线性图(含定量限)如图5～7所示。
由图5～7可知，氯乙烷、乙醛和丙烯酸乙酯的峰面积与浓度均呈线性，线性相关系数分别为0.9917、0.9995、0.9971，均满足中国药典大于0.99的要求。
3.检测限及定量限
将对照品溶液稀释成不同浓度后，分别进行气相色谱检测，记录色谱图并查看信噪比，结果如表2所示，氯乙烷、乙醛和丙烯酸乙酯的检测限分别为0.25μg/g、0.1μg/g和0.3μg/g。
表2检测限及定量限
4.重复性(准确度和精密度)
将6份加标供试品溶液分别进行气相色谱检测，记录色谱图并计算回收率，回收率结果如表3所示。
由表3可知，氯乙烷、乙醛和丙烯酸乙酯的回收率范围分别为102.4～108.3％、103.3～109.6％、86.21～101.4％，RSD％分别为2.0％、2.0％、6.8％。
表3重复性的回收率结果
5.稳定性
分别取对照品溶液和加标供试品溶液于不同时间点进行气相色谱检测，记录色谱图和回收率，对照品溶液的回收率结果如表4所示，加标供试品溶液的回收率结果如表5所示。
表4对照品溶液的稳定性回收率结果
表5加标供试品溶液的稳定性回收率结果
由表4和表5可知，对照品溶液中各致突变杂质(氯乙烷、乙醛和丙烯酸乙酯)峰面积在19小时内相对于0时峰面积的回收率在90.41～109.1％之间；加标供试品溶液中各致突变杂质峰面积在5小时内相对于0时峰面积的回收率在91.58～103.7％之间。说明对照品溶液至少在19小时内稳定，供试品溶液至少在5小时内稳定。
实施例2
舒更葡糖钠注射液的检测
1)空白辅料溶液：精密量取稀盐酸(含HCl体积分数为10％)3.7mL，置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得到盐酸溶液A；精密量取盐酸溶液A 1mL，置50mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得到盐酸溶液B；精密量取盐酸溶液B 1mL，置25mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得到盐酸溶液C。精密量取盐酸溶液C 2mL，置20mL顶空瓶中，密封。
2)对照品标准溶液：取丙烯酸乙酯对照品约50mg，精密称定为51.36mg，置100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀后，得到丙烯酸乙酯标准溶液(浓度为513.6μg/mL)；精密量取丙烯酸乙酯标准溶液2.5mL，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀后，得到对照品标准溶液(丙烯酸乙酯的浓度为12.84μg/mL)。
3)对照品溶液：精密量取对照品标准溶液2mL，置10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀后，精密量取2mL，置20mL顶空瓶中，密封。
4)供试品溶液(含舒更葡糖钠40mg)：精密量取舒更葡糖钠注射液(舒更葡糖钠的浓度为100mg/mL)2mL，置10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀后，精密量取2mL，置20mL顶空瓶中，密封。
5)加标供试品溶液：精密量取舒更葡糖钠注射液2mL，置10mL量瓶中，精密加对照品标准溶液2mL，加水稀释至刻度，摇匀后，精密量取2mL，置20mL顶空瓶中，密封。
气相色谱检测条件与实施例1相同，气相色谱仪是与实施例1型号相同的不同台仪器。
1.专属性
将空白辅料溶液、对照品溶液、供试品溶液、加标供试品溶液分别进行气相色谱检测，记录色谱图，如图8～11所示，图9中丙烯酸乙酯的保留时间是11.315。
由图8～11可知，空白辅料不干扰丙烯酸乙酯的测定，加标供试品溶液中丙烯酸乙酯保留时间与对照品溶液中丙烯酸乙酯保留时间一致且与周围杂质分离度良好，说明本发明的检测方法具有良好的专属性。
2.线性
将丙烯酸乙酯标准溶液配制成系列浓度的丙烯酸乙酯线性溶液：0.03700、0.6421、1.284、1.926、2.568、3.852、5.136μg/mL，分别进行气相色谱检测。采用外标法，得到丙烯酸乙酯的线性图如图12所示。
由图12可知，丙烯酸乙酯的峰面积与浓度呈线性，线性相关系数为0.9999。
3.检测限及定量限
将对照品溶液稀释成不同浓度后，分别进行气相色谱检测，记录色谱图并查看信噪比，结果如表6所示，丙烯酸乙酯的检测限为0.6μg/g。
表6检测限及定量限
4.重复性
将6份加标供试品溶液分别进行气相色谱检测，记录色谱图并计算回收率，回收率结果如表7所示，丙烯酸乙酯的回收率范围为92.62％～97.79％，RSD％为1.9％。
表7重复性的回收率结果
5.稳定性
分别取对照品溶液和加标供试品溶液于不同时间点进行气相色谱检测，记录色谱图和回收率，对照品溶液的回收率结果如表8所示，加标供试品溶液的回收率结果如表9所示。
表8对照品溶液的稳定性回收率结果
| 时间(h) | 丙烯酸乙酯峰面积 | 回收率(％) |
| 0 | 117.33 | 100.0 |
| 5 | 120.20 | 102.4 |
| 10 | 123.79 | 105.5 |
| 14 | 120.61 | 102.8 |
| 21 | 119.95 | 102.2 |
| 29 | 116.90 | 99.63 |
表9加标供试品溶液的稳定性回收率结果
由表8和表9可知，对照品溶液中丙烯酸乙酯峰面积在29小时内相对于0时峰面积的回收率在99.63～105.5％之间；加标供试品溶液中丙烯酸乙酯峰面积在24小时内相对于0时峰面积的回收率在96.52～100.4％之间。说明对照品溶液至少在29小时内稳定，供试品溶液至少在24小时内稳定。
实施例3
舒更葡糖钠原料药样品检测，对照品溶液中γ-环糊精的添加考察
气相色谱检测条件与实施例1相同
溶液的配制：
1)准确移取5mL浓度为0.1mg/mL的丙烯酸乙酯标准溶液，置顶空瓶中，密封，得到对照品标准溶液。
2)准确移取5mL浓度为0.1mg/mL的丙烯酸乙酯标准溶液，置于预先称入400mgγ-环糊精的顶空瓶中，密封，得到对照品溶液。
3)称取400mg舒更葡糖钠原料药(未检出丙烯酸乙酯)置顶空瓶中，准确加入浓度为0.1mg/mL的丙烯酸乙酯标准溶液5mL，密封，得到加标供试品溶液。
将对照品标准溶液、对照品溶液、加标供试品溶液分别进行气相色谱检测，按外标法以峰面积计算加标供试品溶液中丙烯酸乙酯的回收率，以对照品溶液添加γ-环糊精与不添加γ-环糊精分别定量加标供试品溶液中丙烯酸乙酯的回收率对比结果如表10所示。
表10对照品溶液添加γ-环糊精与不添加γ-环糊精回收率对比结果
| / | 添加环糊精 | 不添加环糊精 |
| 回收率 | 94.46％ | 126.7％ |
添加γ-环糊精后，加标供试品溶液中丙烯酸乙酯的回收率由126.7％优化至94.46％，可见，添加γ-环糊精后，方法的准确度明显提高。
实施例4
舒更葡糖钠注射液样品稀释考察
气相色谱检测条件与实施例1相同
1)准确移取2mL浓度为0.0025mg/mL的丙烯酸乙酯标准溶液，置顶空瓶中，密封，得到对照品标准溶液。
2)准确移取2mL浓度为0.0025mg/mL的丙烯酸乙酯标准溶液，置于预先称入40mgγ-环糊精的顶空瓶中，密封，得到对照品溶液。
3)移取舒更葡糖钠注射液(舒更葡糖钠浓度为100mg/mL，未检出丙烯酸乙酯)2mL，置10mL量瓶中，加入100％水平丙烯酸乙酯，水稀释定容至刻度，摇匀(丙烯酸乙酯浓度为0.0025mg/mL)，准确移取2mL，置顶空瓶中，密封，得到加标供试品溶液。
将对照品标准溶液、对照品溶液、加标供试品溶液分别进行气相色谱检测，按外标法以峰面积计算加标供试品溶液中丙烯酸乙酯的回收率，注射液稀释后，对照品溶液中添加γ-环糊精与不添加γ-环糊精定量加标供试品溶液中丙烯酸乙酯的回收率对比结果如表11所示。
表11舒更葡糖钠注射液稀释后对回收率影响
| / | 添加γ-环糊精 | 不添加γ-环糊精 |
| 回收率 | 94.31％ | 103.4％ |
由表11可知，舒更葡糖钠注射液稀释后，对照品溶液中是否添加γ-环糊精对供试品溶液中丙烯酸乙酯的回收率没有影响，通过调整供试品溶液中舒更葡糖钠的浓度，可以提高丙烯酸乙酯检测的准确度。
由实施例数据可知，本发明的检测方法通过稀释的方式，降低供试品溶液中舒更葡糖钠的浓度，能够提高致突变杂质检测的准确度；同时，本发明的检测方法，加入γ-环糊精后不受产品制备方式的影响，舒更葡糖钠原料药和注射液中致突变杂质的检测，均消除了舒更葡糖钠作为γ-环糊精衍生物遇水溶胀后导致的基底效应。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本发明实施例在不经创造性劳动前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (10)
1.一种舒更葡糖钠中致突变杂质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
将舒更葡糖钠样品和水混合，得到供试品溶液；所述舒更葡糖钠样品包括舒更葡糖钠原料药或舒更葡糖钠注射液；
提供致突变杂质的对照品溶液，所述致突变杂质包括氯乙烷、乙醛和丙烯酸乙酯中的一种或多种；
将所述供试品溶液和对照品溶液分别进行气相色谱检测，根据得到的峰面积，得到所述舒更葡糖钠样品中致突变杂质的含量；
所述气相色谱检测的条件包括：色谱柱为极性毛细管柱；程序升温，起始温度40～50℃；进样口温度：190～210℃；载气：氮气或氦气，流速：1～2mL/min；检测器：FID，检测器温度：210～230℃；顶空进样，顶空平衡温度：70～90℃，平衡时间：20～30min，进样量：1mL。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液中舒更葡糖钠的浓度为10～30mg/mL。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对照品溶液中还包括γ-环糊精。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述γ-环糊精的质量为供试品溶液中舒更葡糖钠质量的80～120％。
5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液中舒更葡糖钠的浓度为60～100mg/mL。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述程序升温包括：起始柱温为40℃，以10℃/min的升温速率升温至100℃，保持2min后，以30℃/min的升温速率升温至150℃。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱包括聚乙二醇色谱柱。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对照品溶液中氯乙烷的浓度为0.0494～19.76μg/mL。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对照品溶液中乙醛的浓度为0.02414～24.08μg/mL。
10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对照品溶液中丙烯酸乙酯的浓度为0.037～20.07μg/mL。
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| PB01 | Publication | ||
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