CN117965653A - 一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及有机合成技术领域，提出了一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，所述制备方法包括以下步骤：以甘氨酸酯和2，2，2‑三氟乙基胺为起始原料，在固定化α‑氨基酸酯水解酶的作用下于溶剂中进行胺酯交换反应，得到2‑氨基‑N‑(2，2，2‑三氟乙基)乙酰胺；所述固定化α‑氨基酸酯水解酶包括石英砂载体及负载在载体上的α‑氨基酸酯水解酶。通过上述技术方案，解决了现有技术中合成2‑氨基‑N‑(2，2，2‑三氟乙基)乙酰胺时，步骤长、低收率和低纯度，有机溶剂用量大、环境负担大的问题。
Description
技术领域
本发明涉及有机合成技术领域，具体的，涉及一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法。
背景技术
氟雷拉纳，作为新型的高效GABA控氯离子通道干扰剂，与苯基吡唑类，环戊二烯类和大环内酯类杀虫剂比较而言，氟雷拉纳在分子构造、作用的位点、选择性及交互抗性等方面均有明显的差别，因此备受关注。在合成氟雷拉纳时，若直接采购其关键中间体，成本均较为昂贵，影响药物生产的利润空间。因此，业内众多厂家在研究合成氟雷拉纳的同时，也会研究如何制备其所需关键中间体，以达到节省成本的目的。
目前，在合成氟雷拉纳的两条经典路线中，均需要用到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺（或盐酸盐）作为关键中间体，而合成2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺（或盐酸盐）一般要使用氨基被保护的甘氨酸与2，2，2-三氟乙基胺进行酰胺缩合，然后进一步脱保护基得到目标中间体。这类工艺基本都在丙酮、THF、DMF等有机溶剂中进行反应，后处理也需要二氯甲烷等溶剂经过萃取、结晶的操作，步骤长、工时耗费高、有机溶剂耗费量很大，环保成本很高。
针对以上问题，已有专利CN101845432B一种α-氨基酸酯水解酶制备非均相生物催化剂的方法公开了通过α-氨基酸酯水解酶的固定化作用，在无需对α-位含有氨基的氨基酸酯进行氨基保护状态下，氨基酸酯可直接与有机胺进行胺酯交换反应，换言之，用酶法进行该氟雷拉纳关键中间体合成，会使反应路线更加精简、更加绿色、环保。但是在这种方法中，由于酶处于游离状态，不稳定、催化效率低，存在以甘氨酸酯和2，2，2-三氟乙基胺为反应物合成2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺时收率和纯度低的风险。
发明内容
本发明提出一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，解决了相关技术中合成2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺时步骤长、工时长、环保负担高、低收率和低纯度的问题。
本发明的技术方案如下：
本发明提出一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，包括以下步骤：以甘氨酸酯和2，2，2-三氟乙基胺为起始原料，在固定化α-氨基酸酯水解酶的作用下于溶剂中进行胺酯交换反应，得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺；
所述固定化α-氨基酸酯水解酶包括石英砂载体及负载在载体上的α-氨基酸酯水解酶。
作为进一步的技术方案，所述胺酯交换反应的温度为20~35℃。
作为进一步的技术方案，所述固定化α-氨基酸酯水解酶的制备方法为，将石英砂加入到溶剂中，再加入α-氨基酸酯水解酶酶液，进行固定后，得到固定化α-氨基酸酯水解酶；所述α-氨基酸酯水解酶酶液与石英砂载体的体积质量比为的比例为15mL：1~3g。
作为进一步的技术方案，所述α-氨基酸酯水解酶酶液的浓度为30U/mL。
作为进一步的技术方案，所述α-氨基酸酯水解酶通过3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-丙酸负载在石英砂载体上。
作为进一步的技术方案，所述固定化α-氨基酸酯水解酶的制备方法，包括以下步骤：将所述石英砂载体加入到乙酸溶液中，加入3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-丙酸进行修饰后，再加入α-氨基酸酯水解酶，进行固定，得到固定化α-氨基酸酯水解酶。
作为进一步的技术方案，所述3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-丙酸的质量为石英砂载体质量的4%~6%，优选为5%。
作为进一步的技术方案，所述修饰的温度为20~30℃，修饰的时间为4~6h。
作为进一步的技术方案，所述活化的温度为20~30℃，活化的时间为1.5~2.5h，固定的温度为3~6℃，固定的时间为4~6h。
作为进一步的技术方案，所述乙酸溶液的pH为5~6。
作为进一步的技术方案，所述乙酸溶液为乙酸水溶液。
作为进一步的技术方案，所述石英砂载体为石英砂经羧甲基壳聚糖改性得到。
作为进一步的技术方案，所述羧甲基壳聚糖的质量为石英砂质量的4%~8%。
作为进一步的技术方案，所述石英砂载体的制备方法，包括以下步骤：
S1、将羧甲基壳聚糖加入到甲酸溶液中，再加入石英砂，静置涂覆，得到预处理物；
S2、向所述预处理物中加入2,3-二羟基丁二醛进行交联，得到石英砂载体。
作为进一步的技术方案，所述2,3-二羟基丁二醛的质量为石英砂质量的1%~3%，优选为2%。
作为进一步的技术方案，所述静置涂覆的时间为3.5~4.5h。
作为进一步的技术方案，所述交联的温度为20~30℃，交联的时间为40~80min。
作为进一步的技术方案，所述甲酸溶液的质量浓度为1~2%。
作为进一步的技术方案，所述以甘氨酸酯和2，2，2-三氟乙基胺为起始原料，在固定化α-氨基酸酯水解酶的作用下于溶剂中进行胺酯交换反应后，进入后处理工序，得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺。
作为进一步的技术方案，所述后处理工序为依次进行固液分离、洗涤和干燥。
作为进一步的技术方案，所述固液分离的方式包括抽滤、离心中的一种或两种，优选为离心。
作为进一步的技术方案，所述洗涤是指对得到的固定酶相进行洗涤，洗涤方式包括淋洗、浆洗中的一种或两种，优选为浆洗。
作为进一步的技术方案，所述干燥是指对固液分离得到的反应清液和洗涤得到的滤液合并后的混合液进行干燥。
作为进一步的技术方案，所述干燥包括冻干、喷干中的一种或两种，优选为冻干。
作为进一步的技术方案，所述反应液中固定化α氨基酸酯水解酶的浓度范围为2~50U/mL，优选为2~5U/mL。
作为进一步的技术方案，所述胺酯交换反应的酰基供体为甘氨酸酯，具体的酯类型包括甘氨酸与甲醇、乙醇、异丙醇等常见低级醇所生成的相应甘氨酸酯，即甘氨酸甲酯、甘氨酸乙酯、甘氨酸异丙酯等。
作为进一步的技术方案，所述胺酯交换反应中，反应溶剂包括纯水相、水与少量醇类溶剂的一种（甲醇、乙醇、乙二醇、异丙醇、甘油，醇与水混合后体积比例＜30%）、水与其它水溶性有机溶剂（DMF、DMAC、丙酮，有机溶剂与水混合后的体积比例＜10%）的混合液一种，上述有机溶剂任意几种混合后与水配制而成的混合液（有机溶剂总体积占混合液体积比例＜5%），优选为体积浓度为5%的DMAC水溶液。
作为进一步的技术方案，所述反应溶液的浓度（以2，2，2-三氟乙基胺计）为0.01~10g/mL。
作为进一步的技术方案，所述甘氨酸酯与2，2，2-三氟乙基胺的反应摩尔比为0.95~1.5:1。
作为进一步的技术方案，所述胺酯交换反应的温度为10~50℃，优选为20~35℃。
作为进一步的技术方案，所述胺酯交换反应中pH为4.0~8.0，优选为7.0~8.0。
作为进一步的技术方案，所述洗涤过程中冲洗固定酶相所用水的pH为4.0~8.0，优选为7.0~8.0。
本发明的工作原理及有益效果为：
1、本发明中，采用固定化α-氨基酸酯水解酶作为甘氨酸酯和2，2，2-三氟乙基胺进行胺酯交换反应的催化剂，除了省去在合成2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺过程中对氨基的保护与脱保护步骤外，还提高了2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺的收率与纯度，解决了现有技术中合成2-氨基-N-(2，2，2，-三氟乙基)乙酰胺时，步骤长、工时长、环保负担高，以及收率和纯度低的问题。
2、本发明中，α-氨基酸酯水解酶与石英砂载体间通过3-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基]丙酸以共价键的方式结合，进一步提高了反应收率和纯度。
3、本发明中，采用经羧甲基壳聚糖改性得到的石英砂载体作为负载酶的载体，兼具了石英砂比表面积大、体积小和羧甲基壳聚糖吸附性强的特点，更进一步提高了反应收率和纯度。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都涉及本发明保护的范围。
下述实施例及对比例中，
石英砂的型号为1000目，厂家为武汉曙尔生物科技有限公司；
α-氨基酸酯水解酶，厂家为广州仁恒医药科技有限公司；
5%DMAC的水溶液为体积浓度为5%的DMAC水溶液；
1%甲酸溶液为质量浓度为1%的甲酸水溶液。
实施例1
一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，包括以下步骤：
将84.64g甘氨酸甲酯加入到100mL 5%DMAC的水溶液中，20℃下加入下述制备得到的固定化α-氨基酸酯水解酶，充分搅拌后缓慢加入99.06g 2，2，2-三氟乙基胺，控制反应pH6.0，液相监测反应结束后，反应液离心后得到反应清液和α-氨基酸酯水解酶相，向α-氨基酸酯水解酶相加入纯化水150mL，20℃浆洗1h，然后抽滤，淋洗纯化水20mL，得到滤液，将滤液与反应清液合并，得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺的混合液，进行喷干，得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺的产品136.29g，收率91.9%，HPLC纯度98.7%。
石英砂载体的制备方法，包括以下步骤：
S1、将1.6g羧甲基壳聚糖加入到50mL 1%甲酸溶液中，再加入20g石英砂，混合均匀，静置涂覆3.5h后，反复抽滤水洗，于干燥箱中干燥，得到预处理物；
S2、向所述预处理物中加入0.4g 2，3-二羟基丁二醛于20℃下交联80min后，反复水洗抽滤，得到石英砂载体。
固定化α-氨基酸酯水解酶的制备方法，包括以下步骤：
将1g上述石英砂载体加入到50mL pH为6的乙酸水溶液中，加入0.05g 3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-丙酸于20℃下修饰6h后，再加入15mLα-氨基酸酯水解酶酶液（30U/mL），于3℃下固定6h，真空抽滤，得到固定化α-氨基酸酯水解酶。
实施例2
一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，包括以下步骤：
将103.12g甘氨酸乙酯加入到100mL 5%DMAC的水溶液中，30℃下加入下述制备得到的固定化α-氨基酸酯水解酶，充分搅拌后缓慢加入99.06g 2，2，2-三氟乙基胺，控制反应pH6.0，液相监测反应结束后，反应液离心后得到反应清液和α-氨基酸酯水解酶相，向α-氨基酸酯水解酶相加入纯化水150mL，20℃浆洗1h，然后抽滤，淋洗纯化水20mL，得到滤液，将滤液与反应清液合并，得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺的混合液，进行喷干，得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺的产品147.37g，收率94.4%，HPLC纯度99.5%。
石英砂载体的制备方法，包括以下步骤：
S1、将1.6g羧甲基壳聚糖加入到50mL 1%甲酸溶液中，再加入20g石英砂，混合均匀，静置涂覆4.5h后，反复抽滤水洗，于干燥箱中干燥，得到预处理物；
S2、向所述预处理物中加入0.4g 2，3-二羟基丁二醛于30℃下交联40min后，反复水洗抽滤，得到石英砂载体。
固定化α-氨基酸酯水解酶的制备方法，包括以下步骤：
将1g上述石英砂载体加入到50mL pH为6的乙酸水溶液中，加入0.05g 3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-丙酸于30℃下修饰4h后，再加入15mL α-氨基酸酯水解酶酶液（30U/mL），于6℃下固定4h，真空抽滤，得到固定化α-氨基酸酯水解酶。
实施例3
一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，包括以下步骤：
将154.68g甘氨酸乙酯加入到100mL 5%DMAC的水溶液中，35℃下加入下述制备得到的固定化α-氨基酸酯水解酶，充分搅拌后缓慢加入99.06g 2，2，2-三氟乙基胺，控制反应pH6.0，液相监测反应结束后，反应液离心后得到反应清液和α-氨基酸酯水解酶相，向α-氨基酸酯水解酶相加入纯化水150mL，20℃浆洗1h，然后抽滤，淋洗纯化水20mL，得到滤液，将滤液与反应清液合并，得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺的混合液，进行喷干，得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺的产品145.81g，收率93.4%，HPLC纯度99.1%。
石英砂载体的制备方法，包括以下步骤：
S1、将1.6g羧甲基壳聚糖加入到50mL 1%甲酸溶液中，再加入20g石英砂，混合均匀，静置涂覆4h后，反复抽滤水洗，于干燥箱中干燥，得到预处理物；
S2、向所述预处理物中加入0.4g 2，3-二羟基丁二醛于25℃下交联60min后，反复水洗抽滤，得到石英砂载体。
固定化α-氨基酸酯水解酶的制备方法，包括以下步骤：
将1g上述石英砂载体加入到50mL PH为6的乙酸水溶液中，加入0.05g 3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-丙酸于25℃下修饰5h后，再加入15mL α-氨基酸酯水解酶酶液（30U/mL），于5℃下固定5h，真空抽滤，得到固定化α-氨基酸酯水解酶。
实施例4
本实施例与实施例1对比，区别仅在于加入3g石英砂载体，得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺的产品136.58g，收率92.1%，HPLC纯度98.9%。
实施例5
本实施例与实施例1对比，区别仅在于加入2g石英砂载体，得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺的产品139.7g，收率94.2%，HPLC纯度99.4%。
实施例6
本实施例与实施例1对比，区别仅在于加入0.8g羧甲基壳聚糖，结果得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺的产品136.44g，收率92%，HPLC纯度98.6%。
实施例7
本实施例与实施例1对比，区别仅在于加入1.2g羧甲基壳聚糖、，结果得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺的产品139.11g，收率93.8%，HPLC纯度99.3%。
实施例8
本实施例与实施例1对比，区别仅在于不添加3-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基]丙酸，得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺的产品135.99g，收率91.7%，HPLC纯度98.5%。
对比例1
本对比例与实施例1对比，区别仅在于将固定化α-氨基酸酯水解酶替换成等量的α-氨基酸酯水解酶，得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺的产品131.39g，收率88.6%，HPLC纯度98.1%。
对比例2
一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，包括以下步骤：
将86.64g甘氨酸乙酯加入到100mL 5%DMAC的水溶液中，20℃下加入下述制备得到的固定化α-氨基酸酯水解酶，充分搅拌后缓慢加入99.06g 2，2，2-三氟乙基胺，控制反应pH6.0，液相监测反应结束后，反应液离心后得到反应清液和α-氨基酸酯水解酶相，向α-氨基酸酯水解酶相加入纯化水150mL，20℃浆洗1h，然后抽滤，淋洗纯化水20mL，得到滤液，将滤液与反应清液合并，得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺的混合液，进行喷干，得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺的产品133.91g，收率90.3%，HPLC纯度98.3%。
其中，固定化α-氨基酸酯水解酶的制备方法，包括以下步骤：
将1g石英砂加入到50mL pH为6的乙酸水溶液中，加入0.5g 3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-丙酸于20℃下修饰6h后，再加入15mL α-氨基酸酯水解酶酶液（30U/mL），于3℃下固定6h，真空抽滤，得到固定化α-氨基酸酯水解酶。
对比例3
一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，包括以下步骤：
1)N-叔丁氧羰基甘氨酸的合成
将15.0g甘氨酸溶加入到60mL含25.2g无水碳酸钠的水溶液中，再加入60mL四氢呋喃，搅拌，用冰浴冷却至0℃。用恒压滴液漏斗将40mL四氢呋喃滴加到48.0g (Boc)2O中，控制温度为0℃，3h滴完。滴毕，撤去冰浴，室温搅拌反应12h后停止，得到大量白色固体，过滤，将得到的白色固体加水溶解，用1mol/L的醋酸水溶液调反应液pH至5，然后用乙酸乙酯萃取，（每次萃取使用75mL乙酸乙酯，共萃取3次），合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤（每次洗涤使用45mL饱和氯化钠溶液，共洗涤2次），分出有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤，将滤液旋干，得到白色固体物质N-叔丁氧羰基甘氨酸33.6g，收率96.6%；
2)(2，2，2-三氟-乙基氨基甲酰基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯的合成
控制温度为0℃，向含有10g N-叔丁氧羰基甘氨酸和1g DMAP的500mL二氯甲烷中加入15g DCC，于0℃下反应30min后，向其中加入9.2g 2，2，2-三氟乙基胺盐酸盐，在室温下反应8h，有大量白色沉淀产生，过滤，将滤液旋干后得到白色固体，用二氯甲烷溶解，然后用硅胶柱分离纯化(乙酸乙酯和石油醚的体积比为1：10)，得到白色固体物质化合物(2，2，2-三氟-乙基氨基甲酰基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯11.0g，收率74.8%；
3)2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)胺盐酸盐的合成
将10g (2，2，2-三氟-乙基氨基甲酰基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯加入到200mL甲醇中，搅拌，于冰浴0℃下滴加20mL浓盐酸，约30min滴完。撤去冰浴，室温搅拌8h，减压蒸除甲醇，向残余物中加入10%氢氧化钠溶液调pH至8。用二氯甲烷萃取（每次使用150mL二氯甲烷进行萃取，共萃取3次），合并有机层，用饱和氯化钠溶液洗涤（每次洗涤使用100mL饱和氯化钠溶液，共洗涤2次），分出有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤，向二氯甲烷溶液中通入HCl气体，结晶，过滤，得到浅黄色固体化合物2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)胺盐酸盐7.0g，收率93.1%，HPLC纯度96.8%。
在本发明中，与实施例1相比，对比例1将固定化α-氨基酸酯水解酶替换成等量的α-氨基酸酯水解酶、对比例2采用的是购买得到的石英砂作为载体，结果对比例1~2的收率和纯度均降低，说明用固定化α-氨基酸酯水解酶作催化剂，并且将酶负载在石英砂载体上可以有效提高2-氨基-N-(2，2，2，-三氟乙基)乙酰胺的收率和纯度。
与实施例1相比，对比例3先对甘氨酸的氨基进行保护，然后与2，2，2-三氟乙基胺盐酸盐进行酰胺缩合反应，最后进一步脱保护基得到2-氨基-N-(2，2，2-三氟乙基)胺盐酸盐，结果对比例3不但反应步骤长、后处理过程繁琐、有机溶剂耗费量大，而且总收率和纯度均比实施例1低，说明本发明中2-氨基-N-(2，2，2，-三氟乙基)乙酰胺的酶合成法不仅可以提高收率和纯度，还可以简化反应与后处理步骤、降低成本、降低环保负担，达到绿色工艺的目的。
与实施例1相比，实施例4~5改变了石英砂载体的添加量，结果实施例5的收率和纯度均比实施例1和实施例4的高，说明α-氨基酸酯水解酶酶液与石英砂载体的体积质量比为的比例为15mL：2g时，效果最佳。
与实施例1相比，实施例6~7改变了羧甲基壳聚糖的添加量，结果实施例7的收率和纯度均比实施例1和实施例7的高，说明羧甲基壳聚糖的质量为石英砂质量的6%时，效果较佳。
与实施例1相比，实施例8不添加3-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基]丙酸，结果实施例8的收率和纯度均降低，说明通过3-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基]丙酸将酶连接在石英砂载体上可以进一步提高收率和纯度。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，包括以下步骤：以甘氨酸酯和2，2，2-三氟乙基胺为起始原料，在固定化α-氨基酸酯水解酶的作用下于溶剂中进行胺酯交换反应，得到2-氨基-N-(2，2，2，-三氟乙基)乙酰胺；
所述固定化α-氨基酸酯水解酶包括石英砂载体及负载在载体上的α-氨基酸酯水解酶。
2.根据权利要求1所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述固定化α-氨基酸酯水解酶的制备方法为，将石英砂加入到溶剂中，再加入α-氨基酸酯水解酶酶液，进行固定后，得到固定化α-氨基酸酯水解酶；所述α-氨基酸酯水解酶酶液与石英砂载体的体积质量比为15mL：1~3g。
3.根据权利要求1所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述α-氨基酸酯水解酶通过3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-丙酸负载在石英砂载体上。
4.根据权利要求3所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述固定化α-氨基酸酯水解酶的制备方法，包括以下步骤：将所述石英砂载体加入到乙酸溶液中，加入3-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]-丙酸进行修饰后，再加入α-氨基酸酯水解酶，进行固定，得到固定化α-氨基酸酯水解酶。
5.根据权利要求4所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述固定的温度为20~30℃，固定的时间为1.5~2.5h。
6.根据权利要求1所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述石英砂载体为石英砂经羧甲基壳聚糖改性得到。
7.根据权利要求6所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述羧甲基壳聚糖的质量为石英砂质量的4%~8%。
8.根据权利要求6所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述石英砂载体的制备方法，包括以下步骤：
S1、将羧甲基壳聚糖加入到甲酸溶液中，再加入石英砂，静置涂覆，得到预处理物；
S2、向所述预处理物中加入2，3-二羟基丁二醛进行交联，得到石英砂载体。
9.根据权利要求8所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述静置涂覆的时间为3.5~4.5h。
10.根据权利要求8所述的一种氟雷拉纳关键中间体的酶合成方法，其特征在于，所述交联的温度为20~30℃，交联的时间为40~80min。
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