CN117957011A - 稳定的环孢素眼用制剂及其制造方法 - Google Patents

Abstract

一种包含环孢素的稳定的纳米胶束眼用溶液和一种制备纳米胶束溶液的方法。本发明还涉及包含在2‑θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素形式或无定形环孢素的稳定的纳米胶束溶液。本发明还涉及这种稳定的纳米胶束眼用溶液在干眼中的用途。

Description

稳定的环孢素眼用制剂及其制造方法

技术领域

本发明涉及一种包含环孢素的稳定的纳米胶束眼用溶液和一种制备纳米胶束溶液的方法。本发明还涉及包含在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素形式或无定形环孢素的稳定的纳米胶束溶液。本发明还涉及这种稳定的纳米胶束眼用溶液在干眼中的用途。

背景技术

环孢素纳米胶束眼用溶液一般公开于美国专利号10,918,694中，其中所述眼用溶液包含0.087-0.093重量％的环孢素、聚氧乙烯脂质或脂肪酸和聚烷氧基化醇。优选地，其包含0.087-0.093重量％的环孢素、0.5-5％的选自HCO-40、HCO-60、HCO-80和HCO-100中的一种或多种；和约0.01-0.1％的辛基酚聚氧乙烯醚-40。此外，其公开了制备这样的环孢素溶液的方法。该方法包括于60℃将环孢素溶解在聚氧乙烯蓖麻油如氢化蓖麻油和聚烷氧基化醇如辛基酚聚氧乙烯醚中，然后加到水相中。具体而言，眼用溶液的制备方法包括以下步骤：将HCO-40在加热至约60℃的烧瓶中搅拌熔化。当液化时，添加所需量的环孢素并混合直至溶解并均匀。然后，将辛基酚聚氧乙烯醚-40加热至约60℃，并在液化时添加至环孢素HCO-40混合物。将约25℃的注射用水装入含有溶解的环孢素的烧瓶中并搅拌直至溶解。然后添加其他赋形剂，如氯化钠和磷酸盐缓冲液，然后加入PVP-K90，混合直至溶解，并用注射用水定容至最终体积。然而，目前的方法存在一个问题，当将环孢素溶解在聚氧乙烯蓖麻油如HCO-40中时，由于不同形式的环孢素的溶解度和稳定性的差异，故制造过程中不同的批次的稳定性可能存在差异。结果是一些批次不稳定，环孢素从溶液中沉淀出来。

此外，不同形式的环孢素显示出不同的溶解度和稳定性。在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素是最可溶的环孢素形式并可用于制备溶液制剂，然而这不是最稳定的形式，它可能转化为较不可溶的环孢素形式，从而影响溶液的稳定性。在于55-60℃将环孢素溶解在表面活性剂中的过程中，该形式可能转化为在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的更稳定但较不可溶的环孢素。类似地，其可能变为在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的另一较不可溶的环孢素形式。此外，也是更可溶的形式之一并可用于制备溶液制剂的无定形形式也可能重结晶为这两种较不可溶的形式。若干因素会促进这样的转化，这些因素不限于湿气、水、溶剂温度等。该转化还取决于应力如温度、在较高温度下长时间储存等。此方法需要根据所用环孢素的形式加以修改，如无定形形式和在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的形式需要润湿、然后在至高70℃的温度下完全溶解。然而，如果使用较不可溶的形式，则需要高达130℃的温度。此外，在制造步骤过程中，由于不稳定性和转化，溶液的制造应严格控制API规范、工艺温度和时间以避免形式的相互转化。在完成获得纳米胶束环孢素的制造过程之前，确定这种转化发生的程度是相当困难的。这导致在过程的初始阶段或在较高温度下储存期间在组合物内形成晶种，随后晶种从药物产品中结晶出来，使得产品无法使用。在非水相中作为中间体形成的环孢素的软介相或液晶形式可能是造成这种不稳定性的原因。

因此，需要一种稳定的制剂及其制备方法以防止在制造过程期间和储存期间转化为较不可溶的环孢素形式。本发明公开了一种稳定的纳米胶束眼用制剂和一种制备这样的稳定制剂的改进方法。所述制备制剂的方法产生稳定的制剂，无论制剂中使用了任何形式的环孢素。所述方法不会导致一种形式向另一种形式的转化。更具体地，不会导致环孢素的可溶形式转化为环孢素的较不可溶形式并进一步防止长期稳定性期间制剂中环孢素的沉淀。

发明内容

根据一些实施方案，本发明的目的之一在于制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：

环孢素、聚氧乙烯脂质或脂肪酸、和聚烷氧基化醇，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)在所述环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度，添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

c)将所得混合物与所述水性媒介物混合。

本发明人已惊奇地发现，在35℃-40℃下环孢素A的溶液稳定性高于在55℃-60℃下的溶液稳定性，并因此将温度降低至35℃-40℃将克服上述制剂稳定性问题并提供更稳定的制剂。

在另一个方面，本发明涉及一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含：

环孢素、氢化40聚氧乙烯蓖麻油、辛基酚聚氧乙烯醚-40和水性媒介物，

其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)在所述环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度，添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

c)将所得混合物与所述水性媒介物混合。

在一个方面，在35℃±2℃的温度下混合水性媒介物。在另一个方面，在55±2℃的温度下混合水性媒介物。

在一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素形式。

在另一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含环孢素的无定形形式。

在另一个方面，一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：环孢素、氢化40聚氧乙烯蓖麻油、辛基酚聚氧乙烯醚-40和水性媒介物，

其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)将混合物A保持在真空下以移除泡沫；

c)任选地，在所述环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度；

d)添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

e)将所得混合物与所述水性媒介物混合。

在另一个实施方案中，其提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含：

环孢素、氢化40聚氧乙烯蓖麻油、辛基酚聚氧乙烯醚-40和水性媒介物，

其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)将混合物A保持在真空下以移除泡沫；

c)任选地，在所述环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度；

d)添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

e)将所得混合物与所述水性媒介物混合。

令人惊奇地发现，通过将混合物保持在真空下，气泡将被向上拖动并积聚在表面上，从这里，气泡被逐渐移除并且底部部分变得澄清。因此，在真空下溶解或在溶解过程中间歇性地移除泡沫会导致更快的溶解并且可能不需要降低混合物的温度。因此，克服了上述制剂稳定性问题并提供了更稳定的制剂。

在一个方面，在35℃±2℃的温度下混合水性媒介物。在另一个方面，在55±2℃的温度下混合水性媒介物。

在一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素形式。

在另一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含环孢素的无定形形式。

在还另一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含：

环孢素、氢化40聚氧乙烯蓖麻油、辛基酚聚氧乙烯醚-40和水性媒介物，

其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在127-130℃的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合直至完全溶解以形成混合物A；

b)在127-130℃下向混合物A添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

c)在127-130℃的温度下将所得混合物与水性媒介物混合，

其中，环孢素以在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的形式存在。

在还另一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含：

环孢素、氢化40聚氧乙烯蓖麻油、辛基酚聚氧乙烯醚-40和水性媒介物，

其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在127-130℃的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合直至完全溶解以形成混合物A；

b)在127-130℃下向混合物A添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

c)在127-130℃的温度下将所得混合物与水性媒介物混合，

其中，环孢素以在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的形式存在。

在一个优选的方面，本发明提供了一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：

0.09重量％的环孢素，

约1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油，

约0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40，和

水性媒介物，

其中所述方法包括以下步骤：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)在所述环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度，添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

c)将所得混合物与所述水性媒介物混合。

在一个方面，在35℃±2℃的温度下混合水性媒介物。在另一个方面，在55±2℃的温度下混合水性媒介物。

在一个优选的方面，本发明还提供了一种通过如上所述的方法制备的稳定的纳米胶束眼用制剂。

在一个优选的方面，本发明提供了一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：

0.09重量％的环孢素，

约1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油，

约0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40，和

水性媒介物，

其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)将混合物A保持在真空下以移除泡沫；

c)任选地，在所述环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度；

d)添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

e)将所得混合物与所述水性媒介物混合。

在一个方面，在35℃±2℃的温度下混合水性媒介物。在另一个方面，在55±2℃的温度下混合水性媒介物。

在一个优选的方面，本发明还提供了一种通过如上所述的方法制备的稳定的纳米胶束眼用制剂。

在一个方面，稳定的纳米胶束眼用制剂还包含：

约0.20-0.550重量％的磷酸二氢钠，

约0.23-0.465重量％的磷酸氢二钠，

约0.05重量％的氯化钠，

约0.3重量％的聚维酮，

氢氧化钠/盐酸以调节pH，和

注射用水。

在一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其中所述制剂的pH为约5.0至8.0。更优选地，所述制剂的pH为约6.5至7.2。

此外，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其中所述制剂的渗透压在约150至约200mOsmol/kg之间。

在另一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素形式。

在还另一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含环孢素的无定形形式。

在另一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其中所述制剂基本上不含在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的环孢素形式。

在另一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其中所述制剂基本上不含在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的环孢素形式。

在另一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)在所述环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度，添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

c)然后在35℃±2℃下将所得混合物与水性媒介物混合，其中在不到65分钟后将所述混合物A降低至35℃±2℃的温度。优选地，在40-50分钟后将混合物A降低至35℃±2℃的温度。

在一个方面，将步骤(a)的混合物A混合20-30分钟。优选地，20-25分钟，更优选地，将步骤(a)的混合物A混合20±2分钟。

在一个方面，将温度降低至35℃±2℃并搅拌60-70分钟。优选地，在35℃±2℃的温度下将混合物搅拌60±5分钟。

在还另一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含：

0.09重量％的环孢素，

约1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油，

约0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40，和

水性媒介物，

其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在127-130℃的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合直至完全溶解以形成混合物A；

b)在127-130℃下向混合物A添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

c)在127-130℃的温度下将所得混合物与水性媒介物混合，

其中，环孢素以在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的形式存在。

在还另一个方面，涉及一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含：

0.09重量％的环孢素，

约1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油，

约0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40，和

水性媒介物，

其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在127-130℃的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合直至完全溶解以形成混合物A；

b)在127-130℃下向混合物A添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

c)在127-130℃的温度下将所得混合物与水性媒介物混合，

其中，环孢素以在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的形式存在。

在还另一个方面，本发明提供了一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：

0.09重量％的环孢素，

约1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油，

约0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40，

约0.20-0.550重量％的磷酸二氢钠，

约0.23-0.465重量％的磷酸氢二钠，

约0.05重量％的氯化钠，

约0.3重量％的聚维酮，

氢氧化钠/盐酸以调节pH，和

注射用水，

其中所述方法包括以下步骤：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)在所述环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度，添加辛基酚聚氧乙烯醚-40以形成API混合物；

c)将API混合物添加至注射用水(WFI)；

d)按磷酸二氢钠、然后磷酸氢二钠、然后氯化钠、并且然后聚乙烯吡咯烷酮的顺序，向步骤(c)添加剩余的赋形剂；

e)调节pH到6.5至7.2并用WFI达到最终体积。

在一个方面，将步骤(a)的混合物A混合20-30分钟。优选地，20-25分钟，更优选地，将步骤(a)的混合物A混合20±2分钟。

在一个方面，在不到65分钟后将混合物A的温度降低至35℃±2℃。优选地，在40-50分钟后将混合物A的温度降低至35℃±2℃。

在另一个方面，将步骤(b)的混合物搅拌60-70分钟。优选地，在35℃±2℃的温度下将混合物搅拌60±5分钟。

在一个方面，在35℃±2℃的温度下将API混合物混合到WFI中。在另一个方面，在55±2℃的温度下将API混合物混合到WFI中。

在还另一个方面，本发明提供了一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：

0.09重量％的环孢素，

约1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油，

约0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40，

约0.20-0.550重量％的磷酸二氢钠，

约0.23-0.465重量％的磷酸氢二钠，

约0.05重量％的氯化钠，

约0.3重量％的聚维酮，

氢氧化钠/盐酸以调节pH，和

注射用水，

其中所述方法包括以下步骤：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)将混合物A保持在真空下以移除泡沫；

c)任选地，在所述环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度；

d)添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；

e)将API混合物添加至注射用水(WFI)；

f)按磷酸二氢钠、然后磷酸氢二钠、然后氯化钠、并且然后聚乙烯吡咯烷酮的顺序，向步骤(c)添加剩余的赋形剂；和

g)调节pH到6.5至7.2并用WFI达到最终体积。

在一个方面，将步骤(a)的混合物A混合20-30分钟。优选地，20-25分钟，更优选地，将步骤(a)的混合物A混合20±2分钟。

在一个方面，在不到65分钟后将混合物A的温度降低至35℃±2℃。优选地，在40-50分钟后将混合物A的温度降低至35℃±2℃。

在一个方面，在35℃±2℃的温度下将API混合物混合到WFI中。在另一个方面，在55±2℃的温度下将API混合物混合到WFI中。

在一个更优选的方面，本发明提供了一种通过如上所述的任何方法制备的稳定的纳米胶束眼用制剂。

附图说明

图1(a)和图1(b)分别绘示了通过实施例1(a)和实施例1(b)中描述的方法制备的环孢素纳米胶束眼用制剂。图1(a)公开未观察到颗粒，而图1(b)公开在稳定性上观察到颗粒。

图2绘示了在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素形式(A)、在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的环孢素形式(B)、在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的环孢素形式(C)和环孢素无定形形式的环孢素的特征X-射线粉末衍射(XRPD)图案。

图3(a)至3(d)绘示了不同的环孢素形式在55℃下的溶解度行为。图3(a)绘示了在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的CsA形式的溶解度行为。图3(b)绘示了在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的CsA形式的溶解度行为。图3(c)绘示了在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的CsA形式的溶解度行为，图3(d)绘示了无定形CsA的溶解度行为。

图4绘示了当在较高暴露和温度下将环孢素溶解在Kolliphore RH 40中时从制备的溶液沉淀的环孢素的X-射线粉末衍射(XRPD)图案。

图5绘示了当将环孢素溶解在Kolliphore RH 40中并将其保持较长时间直至出现沉淀时沉淀的环孢素的X-射线粉末衍射(XRPD)图案。

具体实施方式

本公开的一个实施方案为一种稳定的纳米胶束眼用制剂。所述眼用制剂包含环孢素、聚氧乙烯脂质或脂肪酸、和聚烷氧基化醇。

本公开的另一个实施方案为一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：

环孢素、聚氧乙烯脂质或脂肪酸、和聚烷氧基化醇，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃或以上的温度下将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合以形成混合物A；和

b)在环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至不高于40℃的温度。

优选地，将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合在55℃-60℃的温度下进行以形成混合物A。优选地，在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至35℃-40℃的温度。更优选地，将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合在55℃±2℃的温度下进行以形成混合物A；并且在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至不高于35℃±2℃的温度。此外，所述方法包括添加聚烷氧基化醇并然后在35℃±2℃下将所得混合物与水性媒介物混合。在另一个方面，所得混合物与水性媒介物在55±2℃的温度下。

本公开的另一个实施方案为一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：

环孢素、聚氧乙烯脂质或脂肪酸、聚烷氧基化醇和水性媒介物，

其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合以形成混合物A；

b)将混合物A保持在真空下以移除泡沫；

c)任选地，在环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度，添加聚烷氧基化醇；和

d)将所得混合物与所述水性媒介物混合。

在一个方面，在35℃±2℃的温度下混合水性媒介物。在另一个方面，在55±2℃的温度下混合水性媒介物。

发现在疏水性分子如环孢素A(CsA)在聚氧乙烯脂质如聚氧乙烯氢化蓖麻油中溶解期间，发现空气以气泡形式被夹带在本体中并产生泡沫。无论药物溶解过程期间的温度如何，无论是55℃还是甚至当温度降至35℃时，这种情况都会发生。这可能延迟环孢素的润湿和溶解，因为这种夹带的空气可能在环孢素颗粒与水之间形成边界。令人惊奇地发现，通过将混合物保持在真空下，气泡将被向上拖动并积聚在表面上，从这里，气泡被逐渐移除并且底部部分变得澄清。因此，在真空下溶解或在溶解过程中间歇性地移除泡沫会导致更快的溶解并且可能不需要降低混合物的温度。

在一个方面，制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法包括在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素形式。

在另一个方面，制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法包括环孢素的无定形形式。

本公开的另一个实施方案为一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含环孢素、聚氧乙烯脂质或脂肪酸、聚烷氧基化醇和水性媒介物，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在127-130℃的温度下将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合直至完全溶解以形成混合物A；

b)在127-130℃下向混合物A添加聚烷氧基化醇；和

c)在127-130℃的温度下将所得混合物与水性媒介物混合，

其中环孢素以在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的形式存在。

在还另一个方面，环孢素以在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的形式存在。

本公开的另一个实施方案为一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含环孢素、聚氧乙烯脂质或脂肪酸、和聚烷氧基化醇，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃或以上的温度下将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合以形成混合物A；和

b)在环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至不高于40℃的温度。

优选地，将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合在55℃-60℃的温度下进行以形成混合物A。优选地，在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至35℃-40℃的温度。更优选地，将环孢素与聚氧乙烯脂质混合在55℃±2℃的温度下进行以形成混合物A；并且在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至不高于35℃±2℃的温度。此外，所述方法包括添加聚烷氧基化醇并然后在35℃±2℃下将所得混合物与水性媒介物混合。在另一个方面，所得混合物与水性媒介物在55±2℃的温度下混合。

在一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素形式。

在另一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含环孢素的无定形形式。

在另一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含：环孢素、聚氧乙烯脂质或脂肪酸、聚烷氧基化醇和水性媒介物，

其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合以形成混合物A；

b)将混合物A保持在真空下以移除泡沫；

c)任选地，在环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度，添加聚烷氧基化醇；和

d)将所得混合物与所述水性媒介物混合。

在一个方面，在35℃±2℃的温度下混合水性媒介物。在另一个方面，在55±2℃的温度下混合水性媒介物。

在一个方面，稳定的纳米胶束眼用制剂包含在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素形式。

在另一个方面，稳定的纳米胶束眼用制剂包含环孢素的无定形形式。

在还另一个方面，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含：

环孢素、聚氧乙烯脂质或脂肪酸、聚烷氧基化醇和水性媒介物，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在127-130℃的温度下将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合直至完全溶解以形成混合物A；

b)在127-130℃下向混合物A添加聚烷氧基化醇；和

c)在127-130℃的温度下将所得混合物与水性媒介物混合，

其中环孢素以在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的形式存在。

在还另一个方面，环孢素以在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的形式存在。

本公开的另一个实施方案为一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含环孢素、聚氧乙烯脂质或脂肪酸、和聚烷氧基化醇，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：在55℃或以上的温度下将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合以形成混合物A；和通过在环孢素完全溶解之前改变混合物A的温度以防止形成在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的环孢素形式(图2中的B)。

优选地，将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合在55℃-60℃的温度下进行以形成混合物A。优选地，在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至35℃-40℃的温度。更优选地，将环孢素与聚氧乙烯脂质混合在55℃±2℃的温度下进行以形成混合物A；并且在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至不高于35℃±2℃的温度。在一个方面，制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法包括在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素(图2中的A)。在另一个方面，制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法包括环孢素的无定形形式。此外，所述方法包括添加聚烷氧基化醇并然后在35℃±2℃下将所得混合物与水性媒介物混合。在另一个方面，所得混合物与水性媒介物在55±2℃的温度下混合。

本公开的另一个实施方案为一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含环孢素、聚氧乙烯脂质或脂肪酸、和聚烷氧基化醇，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：在55℃或以上的温度下将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合以形成混合物A；和向混合物施加真空以防止形成在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的环孢素形式(图2中的B)。

优选地，将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合在55℃-60℃的温度下进行以形成混合物A。任选地，在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至35℃-40℃的温度。更优选地，将环孢素与聚氧乙烯脂质混合在55℃±2℃的温度下进行以形成混合物A；任选地，在环孢素完全溶解之前降低至不高于35℃±2℃的温度。此外，所述方法包括添加聚烷氧基化醇并然后在35℃±2℃下将所得混合物与水性媒介物混合。在另一个方面，所得混合物与水性媒介物在55±2℃的温度下混合。

本公开的另一个实施方案为一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含环孢素、聚氧乙烯脂质或脂肪酸、和聚烷氧基化醇，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：在55℃或以上的温度下将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合以形成混合物A；和通过在环孢素完全溶解之前改变混合物A的温度以防止形成在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的环孢素形式(图2中的C)。

优选地，将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合在55℃-60℃的温度下进行以形成混合物A。此外，在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至35℃-40℃的温度。更优选地，将环孢素与聚氧乙烯脂质混合在55℃±2℃的温度下进行以形成混合物A；并然后在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至不高于35℃±2℃的温度。在一个方面，制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法包括在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素(图2中的A)。在另一个方面，制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法包括环孢素的无定形形式。此外，所述方法包括添加聚烷氧基化醇并然后在35℃±2℃下将所得混合物与水性媒介物混合。在另一个方面，所得混合物与水性媒介物在55±2℃的温度下混合。

本公开的另一个实施方案为一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含环孢素、聚氧乙烯脂质或脂肪酸、和聚烷氧基化醇，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：在55℃或以上的温度下将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合以形成混合物A；和向混合物施加真空以防止形成在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的环孢素形式(图2中的C)。

优选地，将环孢素与聚氧乙烯脂质或脂肪酸混合在55℃-60℃的温度下进行以形成混合物A。任选地，在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至35℃-40℃的温度。更优选地，将环孢素与聚氧乙烯脂质混合在55℃±2℃的温度下进行以形成混合物A；任选地，在环孢素完全溶解之前降低至不高于35℃±2℃的温度。此外，所述方法包括添加聚烷氧基化醇并然后在35℃±2℃下将所得混合物与水性媒介物混合。在另一个方面，所得混合物与水性媒介物在55±2℃的温度下混合。

本公开的另一个实施方案为一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含环孢素、聚氧乙烯脂质或脂肪酸、和聚烷氧基化醇，其中所述制剂为溶液；并且所述制剂在室温(20-25℃)下表现出6至至少24个月的稳定性。通常，当在室温下保持至少6个月、至少8个月、至少10个月、至少12个月、至少14个月、至少16个月、至少18个月、至少20个月和至少24个月时，所述眼用制剂是稳定的。

在另一个实施方案中，本公开提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其在2℃至8℃下表现出6至至少24个月的稳定性。通常，当在2℃至8℃下保持至少6个月、至少8个月、至少10个月、至少12个月、至少14个月、至少16个月、至少18个月、至少20个月和至少24个月时，所述眼用制剂是稳定的。

本公开的另一个实施方案为一种治疗或预防眼部疾病或病患的方法，所述方法包括在制造制剂6至至少24个月后向有此需要的患者施用前述实施方案中任一项的制剂。

在另一个实施方案中，本公开为前述实施方案中任一项的稳定的纳米胶束眼用制剂，其用于治疗眼部疾病或病患。优选地，眼部疾病或病患为干眼综合征。

可用于本公开的制剂中的材料包括但不限于美国专利号10,918,694中公开的那些。

当在本文中使用时，术语“环孢菌素”、“环孢素”、“环孢素A”或“CsA”可互换使用并包括其药学上可接受的盐。

如本文中结合数值所用，术语“大约”和“约”指的是指示值的+/-10％，包括指示值。

如本文所用，术语“基本上不含”是指为10％或更少的量的指示物质如另一形式，优选8％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或更少的另一形式。

如本文所用，术语“聚氧乙烯脂质或脂肪酸”是指脂质或脂肪酸与聚氧乙烯二醇的单酯和二酯。聚氧乙烯脂质或脂肪酸可以根据氧乙烯单元的平均聚合物长度(例如，40、60、80、100)来编号(“n”)，如本领域熟知的那样。术语“n≥40聚氧乙烯脂质”指的是聚氧乙烯脂质或脂肪酸具有等于或大于40个单元的平均氧乙烯聚合物长度。硬脂酸酯氢化蓖麻油和蓖麻油是可商购获得作为聚氧乙烯脂质或脂肪酸的常见脂质/脂肪酸，然而，应理解，任何脂质或脂肪酸都可聚氧乙烯化成为如本文所涵盖的聚氧乙烯脂质或脂肪酸。聚氧乙烯脂质或脂肪酸的实例包括但不限于氢化聚氧乙烯蓖麻油如HCO-40、HCO-60、HCO-80、HCO-100或聚氧乙烯40硬脂酸酯、聚氧乙烯35蓖麻油。

如本文所用，术语“胶束”或“纳米胶束”是指表面活性剂分子的聚集体(或团簇)。当表面活性剂的浓度大于临界胶束浓度(CMC)时，才形成胶束。表面活性剂为两亲性的化学品，这意味着它们既含有疏水性基团又含有亲水性基团。胶束可以不同的形状存在，包括球形、圆柱形和盘形。包含至少两个不同的分子种类的胶束为混合胶束。在一些实施方案中，本公开的眼用组合物包括水性、澄清、混合胶束溶液。

在一些实施方案中，制剂包括但不限于如美国专利号10,918,694中公开的纳米胶束。例如，眼用组合物可作为生物相容性、水性、澄清混合胶束溶液局部施用于眼睛。所述组合物具有掺入和/或包封在胶束中的药物，所述胶束分散在水性介质中。

在实施方案的一些方面，聚氧乙烯脂质或脂肪酸为聚氧乙烯蓖麻油。在一些实施方案中，聚氧乙烯脂质或脂肪酸为选自氢化聚氧乙烯蓖麻油如HCO-40、HCO-60、HCO-80或HCO-100中的一种或多种。在一些实施方案中，聚氧乙烯脂质或脂肪酸(如聚氧乙烯蓖麻油如HCO-60、HCO-80或HCO-100)以制剂的重量的0.5至2％、或0.7至2％、或1至6％、或2至6％、或2至6％、或3至6％、或4至6％、或2至5％、或3至5％、或3至5％、或2至6％之间、或约4％、或大于0.7％、或大于1％、或大于1.5％、或大于2％、或大于3％、或大于4％存在。在一些实施方案中，聚氧乙烯脂质为HCO-40。在实施方案的一些方面，聚氧乙烯脂质为HCO-60。在一些实施方案中，聚氧乙烯脂质为HCO-80。在一些实施方案中，聚氧乙烯脂质为HCO-100。

在实施方案的一些方面，制剂包含聚烷氧基化醇。在一些实施方案中，聚烷氧基化醇为辛基酚聚氧乙烯醚-40。在实施方案的一些方面，制剂包含以制剂的重量的0.002至4％之间、或0.005至3％之间、或0.005至2％之间、或0.005至1％之间、或0.005至0.5％之间、或0.005至0.1％之间、或0.005至0.05％之间、或0.008至0.02％之间、或0.01至0.1％之间、或0.02至0.08％之间、或0.005至0.08％之间、或约0.05％、或约0.01％存在的聚烷氧基化醇(如辛基酚聚氧乙烯醚-40)。

本公开的一个实施方案为一种稳定的纳米胶束眼用制剂。所述眼用制剂包含环孢素、氢化聚氧乙烯蓖麻油和辛基酚聚氧乙烯醚-40。优选地，氢化聚氧乙烯蓖麻油为氢化40聚氧乙烯蓖麻油(HCO-40)。优选地，眼用制剂包含0.09重量％的环孢素、1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油和0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40。

本公开的另一个实施方案为一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含环孢素、氢化聚氧乙烯蓖麻油和辛基酚聚氧乙烯醚-40，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃或以上的温度下将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；和

b)在环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至不高于40℃的温度。

优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃-60℃的温度下进行以形成混合物A。优选地，在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至35℃-40℃的温度。更优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃±2℃的温度下进行以形成混合物A；并然后在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至不高于35℃±2℃的温度。此外，所述方法包括添加辛基酚聚氧乙烯醚-40并然后在35℃±2℃下将所得混合物与水性媒介物混合。在另一个方面，水性媒介物在55±2℃的温度下混合。

优选地，氢化聚氧乙烯蓖麻油为氢化40聚氧乙烯蓖麻油(HCO-40)。更优选地，眼用制剂包含0.09重量％的环孢素、1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油和0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40。

本公开的另一个实施方案为一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含环孢素、氢化聚氧乙烯蓖麻油和辛基酚聚氧乙烯醚-40，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃或以上的温度下将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；和

b)将混合物A保持在真空下以移除泡沫；

c)任选地，在环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度，添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；和

d)将所得混合物与所述水性媒介物混合。

优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃-60℃的温度下进行以形成混合物A。任选地，在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至35℃-40℃的温度。更优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃±2℃的温度下进行以形成混合物A；并任选地在环孢素完全溶解之前降低温度至不高于35℃±2℃。此外，所述方法包括添加辛基酚聚氧乙烯醚-40并然后在35℃±2℃下将所得混合物与水性媒介物混合。在另一个方面，水性媒介物在55±2℃的温度下混合。

优选地，氢化聚氧乙烯蓖麻油为氢化40聚氧乙烯蓖麻油(HCO-40)。更优选地，眼用制剂包含0.09重量％的环孢素、1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油和0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40。

本公开的另一个实施方案为一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含环孢素、氢化聚氧乙烯蓖麻油和辛基酚聚氧乙烯醚-40，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃或以上的温度下将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；和

b)在环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至不高于40℃的温度。

优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃-60℃的温度下进行以形成混合物A。优选地，在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至35℃-40℃的温度。更优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃±2℃的温度下进行以形成混合物A；并然后在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至不高于35℃±2℃的温度。此外，所述方法包括添加辛基酚聚氧乙烯醚-40并然后在35℃±2℃下将所得混合物与水性媒介物混合。在另一个方面，水性媒介物在55±2℃的温度下混合。

优选地，氢化聚氧乙烯蓖麻油为氢化40聚氧乙烯蓖麻油(HCO-40)。更优选地，眼用制剂包含0.09重量％的环孢素、1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油和0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40。

本公开的另一个实施方案涉及一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：

环孢素、聚氧乙烯脂质或脂肪酸、和聚烷氧基化醇，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)在环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度；

c)添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

d)将所得混合物与所述水性媒介物混合。

本公开的另一个实施方案为一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含环孢素、氢化聚氧乙烯蓖麻油和辛基酚聚氧乙烯醚-40，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃或以上的温度下将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；和

b)将混合物A保持在真空下以移除泡沫；

c)任选地，在所述环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度；

d)添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

e)将所得混合物与所述水性媒介物混合。

优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃-60℃的温度下进行以形成混合物A。任选地，在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至35℃-40℃的温度。更优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃±2℃的温度下进行以形成混合物A；并任选地在环孢素完全溶解之前降低温度至不高于35℃±2℃。此外，所述方法包括添加辛基酚聚氧乙烯醚-40并然后在35℃±2℃下将所得混合物与水性媒介物混合。在另一个方面，水性媒介物在55±2℃的温度下混合。

优选地，氢化聚氧乙烯蓖麻油为氢化40聚氧乙烯蓖麻油(HCO-40)。更优选地，眼用制剂包含0.09重量％的环孢素、1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油和0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40。

本公开的另一个实施方案为一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含：环孢素、氢化40聚氧乙烯蓖麻油、辛基酚聚氧乙烯醚-40和水性媒介物，

其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)在环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度；

c)添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

d)将所得混合物与所述水性媒介物混合。

在一个方面，混合水性媒介物至35℃±2℃的温度。在另一个方面，混合水性媒介物至55±2℃的温度。

在一个实施方案中，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素形式。

在另一个实施方案中，本发明提供了一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含环孢素的无定形形式。

本公开的另一个实施方案为一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含环孢素、氢化聚氧乙烯蓖麻油和辛基酚聚氧乙烯醚-40，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：在55℃或以上的温度下将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；和通过在环孢素完全溶解之前改变混合物A的温度以防止形成在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的环孢素形式(图2中的B)。

优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃-60℃的温度下进行以形成混合物A。此外，在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至35℃-40℃的温度。更优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃±2℃的温度下进行以形成混合物A；并然后在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至不高于35℃±2℃的温度。在一个方面，稳定的纳米胶束眼用制剂包含在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素(图2中的A)。在另一个方面，稳定的纳米胶束眼用制剂包含环孢素的无定形形式。此外，所述方法包括添加辛基酚聚氧乙烯醚-40并然后在35℃±2℃下将所得混合物与水性媒介物混合。在另一个方面，所得混合物与水性媒介物在55±2℃的温度下混合。优选地，氢化聚氧乙烯蓖麻油为氢化40聚氧乙烯蓖麻油(HCO-40)。更优选地，眼用制剂包含0.09重量％的环孢素、1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油和0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40。

本公开的另一个实施方案为一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含环孢素、氢化聚氧乙烯蓖麻油和辛基酚聚氧乙烯醚-40，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：在55℃或以上的温度下将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；和通过在环孢素完全溶解之前改变混合物A的温度以防止形成在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的环孢素形式(图2中的C)。

优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃-60℃的温度下进行以形成混合物A。此外，然后在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至35℃-40℃的温度。更优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃±2℃的温度下进行以形成混合物A；然后在环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至不高于35℃±2℃的温度。在一个方面，制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法包括在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素(图2中的A)。在另一个方面，制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法包括环孢素的无定形形式。此外，所述方法包括添加辛基酚聚氧乙烯醚-40并然后在35℃±2℃下将所得混合物与水性媒介物混合。在另一个方面，水性媒介物在55±2℃的温度下混合。优选地，氢化聚氧乙烯蓖麻油为氢化40聚氧乙烯蓖麻油(HCO-40)。更优选地，眼用制剂包含0.09重量％的环孢素、1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油和0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40。

本公开的另一个实施方案为一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含环孢素、氢化聚氧乙烯蓖麻油和辛基酚聚氧乙烯醚-40，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：在55℃或以上的温度下将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；和向混合物施加真空以防止形成在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的环孢素形式(图2中的B)。

优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃-60℃的温度下进行以形成混合物A。任选地，在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至35℃-40℃的温度。更优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃±2℃的温度下进行以形成混合物A；任选地在环孢素完全溶解之前降低至不高于35℃±2℃的温度。此外，所述方法包括添加辛基酚聚氧乙烯醚-40并然后于35℃±2℃将所得混合物与水性媒介物混合。在另一个方面，在55±2℃的温度下将所得混合物与水性媒介物混合。优选地，环孢素以在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素形式(图2中的A)存在。在另一个实施方案中，优选地，环孢素以无定形形式存在。优选地，氢化聚氧乙烯蓖麻油为氢化40聚氧乙烯蓖麻油(HCO-40)。更优选地，眼用制剂包含0.09重量％的环孢素、1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油和0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40。

本公开的另一个实施方案为一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含环孢素、氢化聚氧乙烯蓖麻油和辛基酚聚氧乙烯醚-40，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：在55℃或以上的温度下将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；和向混合物施加真空以防止形成在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的环孢素形式(图2中的C)。

优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃-60℃的温度下进行以形成混合物A。任选地，在环孢素完全溶解之前将混合物A降低至35℃-40℃的温度。更优选地，将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合在55℃±2℃的温度下进行以形成混合物A；任选地在环孢素完全溶解之前降低至不高于35℃±2℃的温度。此外，所述方法包括添加辛基酚聚氧乙烯醚-40并然后于35℃±2℃将所得混合物与水性媒介物混合。在另一个方面，在55±2℃的温度下将所得混合物与水性媒介物混合。优选地，环孢素以在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素形式(图2中的A)存在。在另一个实施方案中，优选地，环孢素以无定形形式存在。优选地，氢化聚氧乙烯蓖麻油为氢化40聚氧乙烯蓖麻油(HCO-40)。更优选地，眼用制剂包含0.09重量％的环孢素、1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油和0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40。

本公开的另一个实施方案为一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：

环孢素、氢化聚氧乙烯蓖麻油、辛基酚聚氧乙烯醚-40和水性媒介物，其中所述方法包括以下步骤：

a)在127-130℃的温度下将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合直至完全溶解以形成混合物A；

b)在127-130℃下向混合物A添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

c)在127-130℃的温度下将所得混合物与水性媒介物混合；

其中，环孢素以在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的形式(图2中的B)存在。

优选地，氢化聚氧乙烯蓖麻油为氢化40聚氧乙烯蓖麻油(HCO-40)。更优选地，眼用制剂包含0.09重量％的环孢素、1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油和0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40。

本公开的另一个实施方案为一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：

环孢素、氢化聚氧乙烯蓖麻油、辛基酚聚氧乙烯醚-40和水性媒介物，其中所述方法包括以下步骤：

a)在127-130℃的温度下将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合直至完全溶解以形成混合物A；

b)在127-130℃下向混合物A添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

c)在127-130℃的温度下将所得混合物与水性媒介物混合，

其中，环孢素以在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的形式(图2中的C)存在。优选地，氢化聚氧乙烯蓖麻油为氢化40聚氧乙烯蓖麻油(HCO-40)。更优选地，眼用制剂包含0.09重量％的环孢素、1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油和0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40。

在还另一个实施方案中，本公开为一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含：

环孢素、氢化聚氧乙烯蓖麻油、辛基酚聚氧乙烯醚-40和水性媒介物，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在127-130℃的温度下将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合直至完全溶解以形成混合物A；

b)在127-130℃下向混合物A添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

c)在127-130℃的温度下将所得混合物与水性媒介物混合；

其中，环孢素以在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的形式(图2中的B)存在。

优选地，氢化聚氧乙烯蓖麻油为氢化40聚氧乙烯蓖麻油(HCO-40)。更优选地，眼用制剂包含0.09重量％的环孢素、1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油和0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40。

在还另一个实施方案中，本公开为一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含：

环孢素、氢化聚氧乙烯蓖麻油、辛基酚聚氧乙烯醚-40和水性媒介物，其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在127-130℃的温度下将环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油混合直至完全溶解以形成混合物A；

b)在127-130℃下向混合物A添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

c)在127-130℃的温度下将所得混合物与水性媒介物混合，

其中，环孢素以在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的形式(图2中的C)存在。优选地，氢化聚氧乙烯蓖麻油为氢化40聚氧乙烯蓖麻油(HCO-40)。更优选地，眼用制剂包含0.09重量％的环孢素、1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油和0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40。

本公开的另一个实施方案为一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含环孢素、氢化40聚氧乙烯蓖麻油(HCO-40)和辛基酚聚氧乙烯醚-40，其中所述制剂为溶液；并且所述制剂在室温(20-25℃)下表现出6至至少24个月的稳定性。通常，当在室温下保持至少6个月、至少8个月、至少10个月、至少12个月、至少14个月、至少16个月、至少18个月、至少20个月和至少24个月时，所述眼用制剂是稳定的。更优选地，所述稳定的纳米胶束眼用制剂为溶液并包含0.09重量％的环孢素、1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油和0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40。

本公开的另一个实施方案为一种治疗或预防眼部疾病或病患的方法，所述方法包括在制造制剂6至至少24个月后向有此需要的患者施用包含0.09重量％的环孢素、1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油和0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40的稳定的纳米胶束眼用制剂。

根据本公开的实施方案的某些制剂中存在的环孢素当在溶液中时优选是无定形的。或者，在溶液中环孢素可以作为在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素形式存在。在某些实施方案中，在根据本公开的溶液中不存在结晶的环孢素。在某些实施方案中，根据本公开的实施方案的制剂基本上不含在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的环孢素形式。在替代的实施方案中，根据本公开的制剂基本上不含在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的环孢素形式。

另外的制剂成分

本公开的组合物还可以含有其他组分，如但不限于添加剂、佐剂、缓冲剂、张度剂、生物粘附性聚合物和防腐剂。在本公开的任何局部用于眼睛的组合物中，混合物优选在约pH 5至约pH 8下配制。该pH范围可以通过向如实例中所述的组合物添加缓冲剂来实现。在一个实施方案中，制剂中组合物中的pH范围为约pH 6.5至约pH 7.2。应理解，本公开的组合物可以由任何常见的缓冲体系如磷酸盐、硼酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、碳酸盐和硼酸盐-多元醇复合物缓冲，其中根据熟知的技术调节pH和渗透压至适当的生理值。本公开的混合胶束组合物在缓冲水溶液中是稳定的。也就是说，在缓冲剂与任何其他组分之间没有会导致组合物不稳定的不利相互作用。

张度剂包括例如甘露糖醇、氯化钠、硝酸钠、硫酸钠、右旋糖、木糖醇或其组合。这些张度剂可以用于调节组合物的渗透压。在一个方面，将制剂的渗透压调节至约150至约200mOsmol/kg的范围内。在一个优选的方面，将制剂的渗透压调节至约160至约190mOsmol/kg之间。

本公开的组合物中可包含添加剂如糖、甘油和其他糖醇。可添加药物添加剂以增加组合物中其他成分的功效或效力。例如，可向本公开的组合物添加药物添加剂以改善钙调神经磷酸酶抑制剂的稳定性，调节组合物的渗透压，调节组合物的粘度，或出于另外的原因如实现药物递送。本公开的药物添加剂的非限制性实例包括糖，如海藻糖、甘露糖、D-半乳糖和乳糖。在一个实施方案中，糖可在使薄膜水合之前(即，内部地)掺入到组合物中。在另一个实施方案中，糖可在水合步骤期间(即，外部地)掺入到组合物中。在一个实施方案中，本公开的水性、澄清、混合胶束溶液包含添加剂如糖。

在一个实施方案中，本公开的组合物还包含一种或多种生物粘附性聚合物。生物粘附是指某些合成和生物大分子和水胶体粘附到生物组织的能力。生物粘附是一种复杂的现象，部分取决于聚合物、生物组织和周围环境的性质。已发现若干因素有助于聚合物的生物粘附能力：能够形成氢桥的官能团(-OH、COOH)的存在、阴离子电荷的存在和强度、聚合物链渗透粘膜层的足够弹性、和高分子量。生物粘附系统已被用于牙科、骨科、眼科和外科应用中。然而，最近人们对在其他领域如基于软组织的人工替代品和用于局部释放生物活性剂的受控释放系统中使用生物粘附性材料产生了浓厚的兴趣。这样的应用包括用于在口颊或鼻腔中释放药物以及用于肠道或直肠施用的系统。

在一个实施方案中，本公开的组合物包含至少一种生物粘附性聚合物。生物粘附性聚合物可增强组合物的粘度并因此增加在眼中的停留时间。本公开的生物粘附性聚合物包括例如羧基聚合物如(卡波姆)、/>(聚卡波非)；纤维素衍生物，包括烷基和羟烷基纤维素如甲基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素；树胶如刺槐豆胶、黄原胶、琼脂糖、刺梧桐树胶、瓜尔胶；和其他聚合物，包括但不限于聚乙烯醇、聚维酮、聚乙二醇、/>(泊洛沙姆)、黄芪胶和透明质酸；用于向眼睛提供包封的药剂的持续和受控递送的相变聚合物(例如，海藻酸、角叉菜胶(例如，麒麟菜)、黄原胶和刺槐豆胶混合物、果胶、醋酸邻苯二甲酸纤维素、烷基羟烷基纤维素及其衍生物、羟烷基化聚丙烯酸及其衍生物、泊洛沙姆及其衍生物等。这些聚合物的物理特性可由环境因素如离子强度、pH或温度的变化单独地或与其他因素组合地介导。在一个实施方案中，任选的一种或多种生物粘附性聚合物以约0.01重量％至约10重量％/体积、优选约0.1至约5重量％/体积存在于组合物中。在一个实施方案中，本公开的组合物还包含至少一种选自例如PVP-K-30、PVP-K-90、HPMC、HEC和聚卡波非的亲水性聚合物赋形剂。在一个实施方案中，聚合物赋形剂选自PVP-K-90、PVP-K-30或HPMC。在一个实施方案中，聚合物赋形剂选自PVP-K-90或PVP-K-30。

在一个实施方案中，如果需要防腐剂，则组合物可以任选地用许多熟知的防腐剂中的任一种防腐，这些防腐剂包括具有/不具有EDTA的苯甲醇、苯扎氯铵、氯己定、CQ或/>200。在某些实施方案中，可能期望如本文所述的制剂不包含任何防腐剂。在这点上，在一些实施方案中，防腐剂在容纳在单次使用容器中的制剂中可能是不必要的或不期望的。在其他实施方案中，包含防腐剂可能是有利的，如在其中制剂被容纳在多次使用容器中的某些实施方案中。

在一个优选的实施方案中，本公开涉及一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：

0.09重量％的环孢素，

约1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油，

约0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40，和

水性媒介物，

其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)在所述环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度，添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

c)将所得混合物与所述水性媒介物混合。

在另一个优选的实施方案中，本公开涉及一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：

0.09重量％的环孢素，

约1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油，

约0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40，和

水性媒介物，

其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)将混合物A保持在真空下以移除泡沫；

c)任选地，在所述环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度；

d)添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

e)将所得混合物与所述水性媒介物混合。

在一个方面，在35℃±2℃的温度下混合水性媒介物。在另一个方面，在55±2℃的温度下混合水性媒介物。

前述实施方案的稳定的纳米胶束眼用制剂还包含：

约0.20-0.550重量％的磷酸二氢钠，

约0.23-0.465重量％的磷酸氢二钠，

约0.05重量％的氯化钠，

约0.3重量％的聚维酮，

氢氧化钠/盐酸以调节pH，和

注射用水。

在另一个优选的实施方案中，本公开为一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其中所述制剂的pH为约5.0至8.0。更优选地，所述制剂的pH为约6.5至7.2。

此外，本发明公开为一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其中所述制剂的渗透压在约150至约200mOsmol/kg之间。

此外，本发明公开为一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其中用Zetasizer(MalvernInstruments,N.J.)测定混合纳米胶束尺寸和多分散性指数。简言之，向比色皿中转移大约1ml的每种制剂并置于仪器中。使用激光束来确定混合纳米胶束尺寸。本公开涵盖的纳米胶束通常具有在约1-100nm的范围内的粒度；在一些实施方案中，粒度落在约5-50nm的范围内；在一些实施方案中，粒度落在约10-40nm的范围内；在一些实施方案中，粒度为约13-16nm。

在另一个实施方案中，本公开涉及在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素形式。

在还另一个实施方案中，本公开涉及一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含环孢素的无定形形式。

在还另一个实施方案中，本公开涉及一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其中所述制剂基本上不含在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的环孢素形式。

在还另一个实施方案中，本公开为一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其中所述制剂基本上不含在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的环孢素形式。这些环孢素形式的XRD数据在图2中呈现。

环孢素的完全溶解时间取决于基于批量大小待溶解的环孢素A的量。通常，发现比率为9:10(环孢素:KOLLIPHOR RH 40)的环孢素在氢化40聚氧乙烯蓖麻油(KOLLIPHOR RH40)中的溶解时间不少于130分钟。环孢素A在搅拌下经过一段时间后缓慢溶解，并且在此完全溶解过程期间，溶液变得澄清。如果环孢素A在溶解过程期间重新沉淀，则可能在批次的制造过程中将轻微混浊的溶液转移到水相中。这可能会在储存期间在最终制剂中引发晶体生长的晶种效应，从而可能导致批次失败。基于这些观察，在55℃和35℃下研究了环孢素在氢化40聚氧乙烯蓖麻油(Kolliphor RH 40)中的溶解度行为。发现在35℃下的溶液稳定性相对高于在55℃下的溶液稳定性(参见表4中的实施例2)。基于以上观察，认为如果在55℃下环孢素没有完全溶解在Kolliphor RH 40中，则可将温度降低至35℃。这是因为在35℃下环孢素的溶液稳定性高于55℃下。

在另一个方面，当环孢素以在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的形式(图2中的B)存在时，环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油的混合在127-130℃的温度下进行直至完全溶解并于127-130℃向该混合物添加辛基酚聚氧乙烯醚-40。

在另一个方面，当环孢素以在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的形式(图2中的C)存在时，环孢素与氢化聚氧乙烯蓖麻油的混合在127-130℃的温度下进行直至完全溶解并于127-130℃向该混合物添加辛基酚聚氧乙烯醚-40。

在本发明的某些方面，在降低混合物A的温度的步骤中，将混合物A降低至35℃±2℃的温度。降低混合物A的温度的步骤可以在不到65分钟后发生。优选地，在约60分钟时进行。在某些方面，可以在降低混合物A的温度的步骤之后添加水。

在另一个方面，本公开涉及一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其通过包括以下步骤的方法制备：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)在环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度；

c)添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

d)然后在35℃±2℃下将所得混合物与水性媒介物混合，其中在不到65分钟后将所述混合物A降低至35℃±2℃的温度。优选地，在60分钟后将混合物A降低至35℃±2℃的温度。

在一个方面，将步骤(a)的混合物A混合20-30分钟。优选地，20-25分钟，更优选地，将步骤(a)的混合物A混合20±2分钟。

在一个方面，将温度降低至35℃±2℃并搅拌60-70分钟。优选地，在35℃±2℃的温度下将混合物搅拌60±5分钟。

在还另一个方面，本发明涉及一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：

0.09重量％的环孢素，

约1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油，

约0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40，

约0.20-0.550重量％的磷酸二氢钠，

约0.23-0.465重量％的磷酸氢二钠，

约0.05重量％的氯化钠，

约0.3重量％的聚维酮，

氢氧化钠/盐酸以调节pH，和

注射用水，

其中所述方法包括以下步骤：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)在所述环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度，添加辛基酚聚氧乙烯醚-40以形成API混合物；

c)将API混合物添加至注射用水(WFI)；

d)按磷酸二氢钠、然后磷酸氢二钠、然后氯化钠、并且然后聚乙烯吡咯烷酮的顺序，向步骤(c)添加剩余的赋形剂；

e)调节pH到6.5至7.2并用WFI达到最终体积。

在一个方面，在步骤(a)中，以200-300RPM混合环孢素。

在一个方面，将步骤(a)的混合物A混合20-30分钟。优选地，20-25分钟，更优选地，将步骤(a)的混合物A混合20±2分钟。

在一个方面，在不到65分钟后将混合物A的温度降低至35℃±2℃。优选地，在40-50分钟后将混合物A的温度降低至35℃±2℃。

在另一个方面，将步骤(b)的混合物搅拌60-70分钟。优选地，在35℃±2℃的温度下将混合物搅拌60±5分钟。

在一个方面，在35℃±2℃的温度下将API混合物混合到WFI中。在另一个方面，在55±2℃的温度下将API混合物混合到WFI中。

在还另一个方面，本发明涉及一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：

0.09重量％的环孢素，

约1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油，

约0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40，

约0.20-0.550重量％的磷酸二氢钠，

约0.23-0.465重量％的磷酸氢二钠，

约0.05重量％的氯化钠，

约0.3重量％的聚维酮，

氢氧化钠/盐酸以调节pH，和

注射用水，

其中所述方法包括以下步骤：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)将混合物A保持在真空下以移除泡沫；

c)任选地，在所述环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度；

d)添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；

e)将API混合物添加至注射用水(WFI)；

f)按磷酸二氢钠、然后磷酸氢二钠、然后氯化钠、并且然后聚乙烯吡咯烷酮的顺序，向步骤(c)添加剩余的赋形剂；和

g)调节pH到6.5至7.2并用WFI达到最终体积。

在一个方面，将步骤(a)的混合物A混合20-30分钟。优选地，20-25分钟，更优选地，将步骤(a)的混合物A混合20±2分钟。

在一个方面，在不到65分钟后将混合物A的温度降低至35℃±2℃。优选地，在40-50分钟后将混合物A的温度降低至35℃±2℃。

在一个方面，在35℃±2℃的温度下将API混合物混合到WFI中。在另一个方面，在55±2℃的温度下将API混合物混合到WFI中。

在一个更优选的方面，本发明提供了一种通过如上所述的任何方法制备的稳定的纳米胶束眼用制剂。

在还另一个方面，本公开涉及一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含：

0.09重量％的环孢素，

约1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油，

约0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40，和

水性媒介物，

其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在127-130℃的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合直至完全溶解以形成混合物A；

b)在127-130℃下向混合物A添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

c)在127-130℃的温度下将所得混合物与水性媒介物混合，

其中，环孢素以在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的形式存在。

在还另一个方面，本公开涉及一种稳定的纳米胶束眼用制剂，其包含：

0.09重量％的环孢素，

约1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油，

约0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40，和

水性媒介物，

其中所述眼用制剂通过包括以下步骤的方法制备：

a)在127-130℃的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合直至完全溶解以形成混合物A；

b)在127-130℃下向混合物A添加辛基酚聚氧乙烯醚-40；以及

c)在127-130℃的温度下将所得混合物与水性媒介物混合，

其中，环孢素以在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的形式存在。

在一个实施方案中，混合速度、时间和能量输入在环孢素在氢化聚氧乙烯蓖麻油中的完全溶解中起着作用。当使用低速时，增加溶解的时间，在实施方案的一个方面，通常通过以大约200-300RPM搅拌75分钟、70分钟、65分钟、60分钟、55分钟、50分钟、45分钟、40分钟、35分钟、30分钟、25分钟、20分钟、15分钟、10分钟来将环孢素溶解在氢化聚氧乙烯蓖麻油中。在另一个方面，通常通过以大约300-400RPM搅拌65分钟、60分钟、55分钟、50分钟、45分钟、40分钟、35分钟、30分钟、25分钟、20分钟、15分钟、10分钟来将环孢素溶解在氢化聚氧乙烯蓖麻油中。在另一个方面，通常通过以大约350-400RPM搅拌60分钟、55分钟、50分钟、45分钟、40分钟、35分钟、30分钟、25分钟、20分钟、15分钟、10分钟来将环孢素溶解在氢化聚氧乙烯蓖麻油中。在另一个方面，通常通过以大约400-450RPM搅拌50分钟、45分钟、40分钟、35分钟、30分钟、25分钟、20分钟、15分钟、10分钟来将环孢素溶解在氢化聚氧乙烯蓖麻油中。在另一个方面，通常通过以大约>450RPM搅拌40分钟、35分钟、30分钟、25分钟、20分钟、15分钟、10分钟、5分钟来将环孢素溶解在氢化聚氧乙烯蓖麻油中。在还另一个方面，通过以大约200-300RPM搅拌直至完全溶解来将环孢素溶解在氢化聚氧乙烯蓖麻油中。

输入到混合物中的能量在公式1中定义为：

E/V＝n³D⁵t/V (1)

其中E为理论能量输入，n为剪切板rpm，D为剪切板直径，t为时间，V为溶液体积。每体积的能量输入与规模无关。(Diaz,M.等人,“Mixing Power,External Convection,andEffectiveness in Bioreactors,”Biotechnology and Bioengineering,第51卷,1996,第131-140页)。这是一种简单、快速且可靠的放大纳米胶束制剂的制备的方法。

可以使用替代的混合方法如使用超声仪或使用溶剂、水或压力来影响各个方法步骤的温度或时间。例如，如果使用溶剂，则可能可以在方法步骤中采用较低的温度。

本公开还涉及治疗或预防眼部疾病或病症，例如通过局部施用如本文所述的制剂。

术语“治疗”是指：预防疾病、病症或病患在可能易于患上该疾病、病症和/或病患但尚未诊断为患有其的细胞、组织、系统、动物或人中发生；稳定疾病、病症或病患，即阻止其发展；和/或缓解疾病、病症或病患的一种或多种症状，即引起疾病、病症和/或病患的消退。

如本文所用，“预防”病症或病患的组合物是指在统计样本中相对于未经治疗的对照样本减少经治疗的样本中病症或病患的发生或者相对于未经治疗的对照样本延迟病症或病患的一种或多种症状的发作或减轻其严重程度的化合物。

如本文所用，术语“眼部疾病”是指可威胁视力、导致眼睛不适并可能预示全身健康问题的眼睛疾病/病患。

待通过本公开的任何组合物或方法治疗的患者或受试者可指人或非人动物。在一个实施方案中，本公开提供了用于治疗有此需要的人患者的眼部疾病的方法。在一个实施方案中，本公开提供了用于治疗有此需要的人患者的炎性眼部疾病的方法。在另一个实施方案中，本公开提供了用于治疗有此需要的兽类患者的眼部疾病的方法，所述兽类患者包括但不限于犬、马、猫、兔、沙鼠、仓鼠、啮齿类动物、鸟类、水生哺乳动物、牛、猪、骆驼和其他动物学动物。

在本文公开的组合物和方法的一些实施方案中，环孢素还包含一种或多种另外的活性成分，例如选自溶解素(resolvin)或溶解素样化合物、类固醇(如皮质类固醇)等的活性剂。在一些实施方案中，另外的活性剂包括溶解素。在一些实施方案中，另外的活性剂包括皮质类固醇。在一些实施方案中，另外的活性剂包括溶解素和皮质类固醇。在一些实施方案中，另外的活性剂包括抗生素，例如选自阿奇霉素、环丙沙星、氧氟沙星、加替沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、贝西沙星和左氧氟沙星的一种或多种抗生素。在一些实施方案中，另外的活性剂包括抗生素，例如选自阿奇霉素、环丙沙星、氧氟沙星、加替沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、贝西沙星和左氧氟沙星的一种或多种抗生素；并且第二种这样的试剂为如本文所述的溶解素(包括但不限于化合物1001)。在一些实施方案中，活性剂包括两种或更多种活性剂，并且所述活性剂之一为抗病毒剂，例如选自更昔洛韦、曲氟尿苷、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、喷昔洛韦和西多福韦的一种或多种抗病毒剂。在一些实施方案中，活性剂包括两种或更多种活性剂，并且活性剂之一为抗生素，例如选自更昔洛韦、曲氟尿苷、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、喷昔洛韦和西多福韦的一种或多种抗病毒剂；第二种活性剂为如本文所述的溶解素(包括但不限于化合物1001)。

因此，在另一个方面，提供了一种治疗或预防眼部疾病或病患的方法，其包括局部施用如本文所公开的任何方面或实施方案的制剂。在一些实施方案中，眼部疾病为前段疾病。在一些实施方案中，眼部疾病为后段疾病。在一些实施方案中，眼部疾病为选自以下的一种或多种：干眼综合征、干燥综合征、葡萄膜炎、前葡萄膜炎(虹膜炎)、脉络膜视网膜炎、后葡萄膜炎、结膜炎、过敏性结膜炎、角膜炎、角膜结膜炎、春季角膜结膜炎(VKC)、特应性角膜结膜炎、全身性免疫介导的疾病如瘢痕性结膜炎和眼部表面的其他自身免疫病症、睑缘炎、巩膜炎、年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病性视网膜病变(DR)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、眼部新血管形成、年龄相关性黄斑变性(ARMD)、增生性玻璃体视网膜病变(PVR)、巨细胞病毒(CMV)视网膜炎、视神经炎、球后神经炎和黄斑皱褶。在一个实施方案中，眼部疾病为干眼。在一个实施方案中，眼部疾病为过敏性结膜炎。在一个实施方案中，眼部疾病为年龄相关性黄斑变性(AMD)。在一个实施方案中，眼部疾病为糖尿病性视网膜病变。

有效减轻干眼症状和/或改善泪膜的眼用制剂每日剂量可分为一个或几个单位剂量施用。受试者将根据需要使用产品，但通常每天不超过两次，并且在许多情况下，产品每天仅使用一次。本发明的纳米胶束眼用制剂的一个优选方案为每只眼睛一滴0.09％(w/w)的溶液，每天二次(间隔大约12小时)。

实施例

为了说明本公开的非限制性实施方案，制备了以下实施例。

实施例1

表1：环孢素纳米胶束眼用制剂

如下制备环孢素纳米胶束眼用溶液。在实施例1(a)中，于55-60℃在约200rpm搅拌下熔化聚氧乙烯40氢化蓖麻油(KOLLIPHOR RH 40)。于55-60℃向熔化的Kolliphor RH 40添加环孢素A并将反应混合物在该相同温度范围下混合直到完全溶解。在环孢素A的溶解之后，在搅拌下添加表面活性剂(辛基酚聚氧乙烯醚-40)，并在搅拌10分钟后于55-60℃将此非水性溶液递送至90％的注射用水中。注射用水的温度保持在<22℃下。在搅拌下向本体溶液依次加入磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠和聚维酮直至完全溶解。一旦所有成分完全溶解在本体溶液中，用注射用水将体积补足至100％到1L。在实施例1(b)中，遵循实施例1(a)的程序，不同的是环孢素A在KOLLIPHOR RH 40中的55-60℃溶液在刚开始出现混浊后就添加至水。

在无菌区域中将实施例1(a)和1(b)的批次填充到3件5mL低密度聚乙烯(“LDPE”)小瓶中。将小瓶在腔室中暴露于40℃和30℃的加速温度(以加速微粒形成)。每天目视观察样品以查看任何混浊和/或可见颗粒形成的迹象。分析两个批次的关键质量参数，如环孢素的含量测定、pH、渗透压和胶束大小，发现其全都符合规范。结果在下表2中给出。图1示出了稳定批次(实施例1a)和不稳定批次(实施例1b)的照片。

表2

表2中的数据表明，当使用澄清的CsA非水相(环孢素在KOLLIPHOR RH 40和辛基酚聚氧乙烯醚-40中)并然后将混合物添加至水相来制造批次时，批次在更长时间内保持稳定。然而，当使用混浊的环孢素非水相并然后将混合物添加至水相来制造批次时，批次显示出较低的稳定性。这证实，胶束内环孢素的不均匀分布可以促成成品在储存时的成核和颗粒形成。

实施例2

55-60℃下环孢素A批次在聚氧乙烯40氢化蓖麻油(KOLLIPHOR RH 40)中的溶液稳定性是稳定制剂的重要工艺参数。还令人惊奇地发现，溶解度行为随储存时间而变化，如表3中所示。

表3：55℃下环孢素在KOLLIPHOR RH 40中的溶液稳定性

*三个研究结果的平均值。#一些未溶解的颗粒保留了很长时间，并且在完全溶解后很快溶液就开始变得轻微浑浊。

实施例3

类似地，在35℃下测试了环孢素A在聚氧乙烯40氢化蓖麻油(KOLLIPHOR RH 40)中的溶解度行为研究。表4示出了在35℃下环孢素A在KOLLIPHOR RH 40中的溶解度行为研究的结果。如从表4可见，发现在35℃下的溶液稳定性相对高于在55℃下的溶液稳定性。

表4：在35℃和55℃下，呈无定形形式的环孢素A在KOLLIPHOR RH 40中的相对溶液稳定性

如从表4可见，如果环孢素A未在55℃完全溶解于KOLLIPHOR RH 40中，则可将温度降至35℃。基于该数据，认为环孢素A在35℃下的溶液稳定性高于55℃的溶液稳定性。将环孢素A在KOLLIPHOR RH 40中的完全溶解阶段修改如下：

(i)将API在55℃±2℃下分散20分钟并再搅拌15分钟；

(ii)然后在不到55分钟(约40分钟)内将温度从55℃±2℃降低至35℃±2℃，并于35℃±2℃搅拌溶液直至取得API的完全溶解；和

(iii)在搅拌下添加辛基酚聚氧乙烯醚-40并于35℃±2℃将非水相递送至注射用水中。

该溶解过程的变化可适应55℃下API在Kolliphor RH-40中的溶液稳定性的批次间变异性以及储存期间的变异性。

实施例4

于55℃在聚氧乙烯40氢化蓖麻油(KOLLIPHOR RH 40)中研究了如图2中所公开的三种环孢素形式的溶解度行为。结果在表5中示出。

表5：55℃下环孢素在KOLLIPHOR RH40中的溶解度

图3(a)至3(d)为表5中报告的研究的结果的照片。

如从上表5以及从相关附图可以看到，与在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的CsA形式相比，在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的CsA形式和在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的CsA形式具有远更低的溶解度。在环孢素在KOLLIPHOR RH 40中于55℃溶解期间，在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的CsA形式可以改变为较不可溶的形式，或者无定形环孢素可以重结晶为相对较不可溶的形式。这种转化可能取决于对系统的应力，包括温度、在较高温度下长时间储存等。为此，将环孢素眼用制剂暴露于较高的温度和时间并从沉淀部分获取PXRD数据；发现沉淀物与在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的CsA形式接近，如图4中所示。因为这种CsA形式在水中的溶解度较低，故其使用可能在初始阶段或在较高温度下储存期间导致晶种效应，从而导致批次失败。

在另一项尝试中，测定了在不存在水的情况下在单独的Kolliphore RH 40中CsA的行为。于55℃将CsA溶解在Kolliphore RH 40中并将其保持较长时间直至出现沉淀。分离出沉淀部分并进行PXRD。发现环孢素在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰，如图5中所示。因此，如本公开中所公开的方法，其中减少了55℃下环孢素暴露于例如KOLLIPHORRH 40的时间，可最小化这种沉淀现象，沉淀现象可能是由于环孢素可能转化为较不可溶的CsA形式。因此，除其他以外，本公开还提供了改善的储存稳定性。

实施例5

表1的纳米胶束溶液的制备方法

将聚氧乙烯40氢化蓖麻油(Kolliphor RH40)加热至约50-60℃，直至其液化，然后引入到10L玻璃容器中。加入环孢素(CsA)，同时将容器温度保持在55±2℃下并通过以大约200-300RPM搅拌75分钟来溶解，并目视检查以确保其为无可见颗粒的澄清溶液。将温度逐渐降低至35℃。一旦其完全溶解，就将温度升高至55±2℃。然后添加辛基酚聚氧乙烯醚-40。如果辛基酚聚氧乙烯醚-40已固化，则在其添加之前于约50-60℃下加热直至其液化。

将一部分(大约90％)的注射用水(WFI)装入到不锈钢混合罐中并在整个过程中将温度保持在20-30℃。在搅拌的同时，于55±2℃将API混合物添加至混合罐并搅拌大约15分钟，同时按磷酸二氢钠、然后磷酸氢二钠、然后氯化钠、并且然后聚乙烯吡咯烷酮的顺序添加剩余的赋形剂。

混合15分钟后，检查pH并在必要时使用盐酸(1N)或氢氧化钠(1N)将其调节至6.8±0.2。用WFI将溶液调节至最终体积并通过0.2μm过滤器过滤。

实施例6

表1的纳米胶束溶液的制备方法

将聚氧乙烯40氢化蓖麻油(Kolliphor RH40)加热至约50-60℃，直至其液化，然后引入到10L玻璃容器中。加入环孢素(CsA)，同时将容器温度保持在55±2℃下达20±2分钟，然后以大约200-300RPM搅拌15分钟。在搅拌下将温度逐渐降低至35℃，并在达到35℃的温度后将其搅拌60±5分钟。然后添加辛基酚聚氧乙烯醚-40。如果辛基酚聚氧乙烯醚-40已固化，则在其添加之前于约50-60℃下加热直至其液化。

将一部分(大约90％)的注射用水(WFI)装入到不锈钢混合罐中并在整个过程中将温度保持在20-30℃。在搅拌的同时，于35±2℃将CsA混合物添加至混合罐并搅拌大约15分钟，同时按磷酸二氢钠、然后磷酸氢二钠、然后氯化钠、并且然后聚乙烯吡咯烷酮的顺序添加剩余的赋形剂。

混合15分钟后，检查pH并在必要时使用盐酸(1N)或氢氧化钠(1N)将其调节至6.8±0.2。用WFI将溶液调节至最终体积并通过0.2μm过滤器过滤。

实施例7

表1的纳米胶束溶液的制备方法-高速下的过程

将聚氧乙烯40氢化蓖麻油(Kolliphor RH40)加热至约50-60℃，直至其液化，然后引入到10L玻璃容器中。加入环孢素(CsA)，同时将容器温度保持在55±2℃下达20±2分钟，并以大约>450RPM搅拌15分钟。在搅拌下将温度逐渐降低至35℃并搅拌60±5分钟。然后添加辛基酚聚氧乙烯醚-40。如果辛基酚聚氧乙烯醚-40已固化，则在其添加之前于约50-60℃下加热直至其液化。

将一部分(大约90％)的注射用水(WFI)装入到不锈钢混合罐中并在整个过程中将温度保持在20-30℃。在搅拌的同时，于35±2℃将CsA混合物添加至混合罐并搅拌大约15分钟，同时按磷酸二氢钠、然后磷酸氢二钠、然后氯化钠、并且然后聚乙烯吡咯烷酮的顺序添加剩余的赋形剂。

混合15分钟后，检查pH并在必要时使用盐酸(1N)或氢氧化钠(1N)将其调节至6.8±0.2。用WFI将溶液调节至最终体积并通过0.2μm过滤器过滤。

实施例8

表1的纳米胶束溶液的制备方法-较高温度下的过程

将聚氧乙烯40氢化蓖麻油(Kolliphor RH40)加热至约50-60℃，直至其液化，然后引入到10L玻璃容器中。将温度升高至127-130℃。添加环孢素(CsA)，同时将容器温度保持在127-130℃下并在大约200-300RPM下搅拌以完全溶解。然后添加辛基酚聚氧乙烯醚-40。如果辛基酚聚氧乙烯醚-40已固化，则在其添加之前于约50-60℃下加热直至其液化。

将一部分(大约90％)的注射用水(WFI)装入到不锈钢混合罐中并在整个过程中将温度保持在20-30℃。在搅拌的同时，于127-130℃将CsA混合物添加至混合罐并搅拌大约15分钟，同时按磷酸二氢钠、然后磷酸氢二钠、然后氯化钠、并且然后聚乙烯吡咯烷酮的顺序添加剩余的赋形剂。

混合15分钟后，检查pH并在必要时使用盐酸(1N)或氢氧化钠(1N)将其调节至6.8±0.2。用WFI将溶液调节至最终体积并通过0.2μm过滤器过滤。

实施例9

稳定性研究

在于25℃/40％RH下储存6个月后测试实施例6的纳米胶束眼用制剂。

对制剂的外观变化、pH、渗透压、粘度、通过HPLC方法II的环孢素含量测定、通过激光光散射法的胶束大小测定和微粒物质的存在进行测试。

/>

如从上面的数据观察到的，发现该制剂既是化学稳定的也是物理稳定的。

除非另有说明，否则本文提及的文件通过引用整体并入。

尽管在本申请中对某些具体实施方案进行了充分描述，但应理解，关于这些具体实施方案公开的相同构思也适用于其他实施方案。此外，仅为了方便起见，参考特定实施方案来描述本文公开的制剂和方法的各个要素。应理解，本文公开的制剂和方法的各个要素适用于除描述它们的具体实施方案之外的实施方案。

另外，应理解，本公开的范围不限于上述实施方案，并且本领域技术人员应理解，可以在不脱离本公开的范围的情况下作各种修改和改动。例如，本领域普通技术人员可以改变批量大小而仍保持在本公开内。

Claims (10)

1.一种制备稳定的纳米胶束眼用制剂的方法，所述眼用制剂包含：

0.09重量％的环孢素，

约1.0重量％的氢化40聚氧乙烯蓖麻油，

约0.05重量％的辛基酚聚氧乙烯醚-40，

约0.20-0.550重量％的磷酸二氢钠，

约0.23-0.465重量％的磷酸氢二钠，

约0.05重量％的氯化钠，

约0.3重量％的聚维酮，

氢氧化钠/盐酸以调节pH，和

注射用水，

其中所述方法包括以下步骤：

a)在55℃±2℃或以上的温度下将所述环孢素与所述氢化40聚氧乙烯蓖麻油混合以形成混合物A；

b)在所述环孢素完全溶解之前将混合物A的温度降低至35℃±2℃的温度，添加辛基酚聚氧乙烯醚-40以形成API混合物；

c)将API混合物添加至注射用水(WFI)；

d)按磷酸二氢钠、然后磷酸氢二钠、然后氯化钠、并且然后聚乙烯吡咯烷酮的顺序，向步骤(c)添加剩余的赋形剂；以及，

e)调节pH到6.5至7.2并用WFI达到最终体积。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(a)中混合环孢素在200-300RPM下进行。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，在40-50分钟后将所述混合物的温度降低至35℃±2℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其中在35℃±2℃的温度下将所述混合物搅拌60±5分钟。

5.一种稳定的纳米胶束眼用制剂，所述眼用制剂通过根据前述权利要求中任一项所述的方法制备。

6.根据权利要求5所述的稳定的纳米胶束眼用制剂，其中所述制剂的渗透压在约150至约200mOsmol/kg之间。

7.根据权利要求5所述的稳定的纳米胶束眼用制剂，其中所述制剂包含在2-θ(°)6.9、7.8、9.4和15.9处具有特征XRD峰的环孢素形式。

8.根据权利要求5所述的稳定的纳米胶束眼用制剂，其中所述制剂包含环孢素的无定形形式。

9.根据权利要求5所述的稳定的纳米胶束眼用制剂，其中所述制剂基本上不含在2-θ(°)7.4、8.7、14.4和17.5处具有特征XRD峰的环孢素形式。

10.根据权利要求5所述的稳定的纳米胶束眼用制剂，其中所述制剂基本上不含在2-θ(°)8.5、9.3、11.6和20.3处具有特征XRD峰的环孢素形式。