KR20220148251A - 상처 치유 향상을 위한 표적으로서 피드게틴-유사 2 - Google Patents

상처 치유 향상을 위한 표적으로서 피드게틴-유사 2 Download PDF

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더글러스 쥐. 브룩스
브라이언 오로크
아담 크레이머
데이비드 제임스 샤프
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마이크로큐어즈, 인코포레이티드
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Abstract

피드게틴-유사 2를 표적으로 하는 핵산 분자 및 이의 조성물, 및 인간 대상체에서 상처 또는 흉터를 치료하는데 이를 사용하는 방법이 기재된다.

Description

상처 치유 향상을 위한 표적으로서 피드게틴-유사 2
상호 참조
본 출원은 2020 년 2 월 28 일에 출원된 미국 특허 가출원 62/983,193에 대한 우선권을 주장하며, 이는 본원에 이의 전문이 참조로 통합된다.
급성 및 만성 상처를 치료하기 위한 안전하고 효과적인 요법의 개발은 현재 임상 과학자 및 산업계 모두에게 큰 관심의 문제이다. 상처 치유는 새로운 세포를 상처 부위에 전달하는 데 크게 의존하는 복잡한 다단계 공정이다. 상처 치유 반응의 두 가지 핵심 요소는 각각 섬유아세포 및 상피세포가 상처 내로 들어가 외부 환경으로부터 보호 장벽을 형성할 때의 섬유증식 및 상피화이다. 이는 세포 증식 및 상처 가장자리로부터의 이동에 의해 자극된다. 세포가 상처를 침범하고 폐쇄하는 속도를 증가시키는 제제의 식별은 상처 치유 치료제의 주요한 진보를 나타낼 것이다. 이상적으로, 이는 섬유아세포 및 상처 가장자리 상피 세포의 증식 및 이동을 자극하는 국소적으로 또는 국부적으로 적용된 제제일 것이다.
본 출원에서 언급되는 모든 간행물, 특허, 특허 출원 공보 및 도서의 개시내용은 본 개시내용이 속하는 기술을 보다 완전하게 설명하기 위해 대상 출원에 이의 전문이 참조로 통합된다.
요약
일 양태에서,
5'-fUfUmA fCmAfC AGU AUU AAA GCG ATT (서열번호:17);
(Phos) 5'-U CGC UUU AAU ACU G UG UAA TT (서열번호:18);
5'-UUACACAGUAUUAAAGCGATT-3' (서열번호:34);
(Phos) 5' - mUmCGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:35);
(Phos) 5' - mU(s)mC(s)GCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:36);
(Phos) 5' - fUfCGCUUUAAUACUGUGUAATT -3' (서열번호:37);
(Phos) 5' -fU(s)fC(s)GCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:38);
(Phos) 5' - mU(s)mC(s)GCUUUAAUAmCfUmGfUmGfUmAmATT-3' (서열번호:39);
(Phos) 5' - U(s)CGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:40);
(Phos) 5' - mUfCmGfCmUfUmUAAfUmAfCmUGmUmGfUmAmATT (서열번호:41);
5'-mUmUmAmCmAmCmAmGmUmAmUmUmAmAmAmGmCmGmAmUmU-3' (서열번호:42);
(Phos) 5' - mUmCmGmCmUmUmUmAmAmUmAmCmUmGmUmGmUmAmAmUmU-3' (서열번호:43);
5' mUmUmAmCmAmCmAmGmUmAmUmUmAmAmAmGdCdGdATT-3' (서열번호:44);
5' mUmUmAmCmAmCmAmGmUmAmUmUmAmAmAmGdCmGmATT-3' (서열번호:45);
5' UUACACAGUAUUAAAGCGA-3' (서열번호:46);
(Phos) 5' - U(s)CGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:47);
(Phos) 5' - UCGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:48);
(Phos) 5' - U(s)C(s)GCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:49);
5'-mUmUACACAGUAUUAAAGCGA-3' (서열번호:50);
(Phos) 5' - U(s)CGCUUUAAUACUGUGUmAmATT-3' (서열번호:51);
(Phos) 5' - UCGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:52);
(Phos) 5' - U(s)C(s)GCUUUAAUACUGUGUAA T(s)T-3' (서열번호:53);
5' lUlUlAlClACAGUAUUAAAGCGATT-3' (서열번호:54);
(Phos) 5' - UCGCUUUAAUACUGlUlGlUlAlA TT -3' 서열번호:55);
5' fUfUlAfClACAGUAUUAAAGCGA-3' (서열번호:56); 또는
(Phos) 5' - mU(s)mCmGCUUUAAUACUGUGUAATT -3' (서열번호:57)
로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열로 이루어진 핵산 분자가 제공되고,
여기서 d(뉴클레오티드) = 데옥시-(뉴클레오티드), m(뉴클레오티드) = 2'-O-메틸 뉴클레오티드, T = 티미딘, f(뉴클레오티드) = 2'-플루오로데옥시 뉴클레오티드, (Phos) = 포스포디에스테르 캡; 대문자 뉴클레오티드 = RNA 뉴클레오티드, l(뉴클레오티드) = 잠긴(locked) 뉴클레오티드, 및 (s) = 포스포로티오에이트이다. 예를 들어, 서열번호:17에서, fC는 2'-플루오로데옥시 시티딘 리보핵산을 나타내고, fU는 2'-플루오로데옥시 우라실 리보핵산을 나타내고, mA는 2'-O-메틸 아데노신 리보핵산을 나타낸다.
일부 구현예에서, 포스포디에스테르 캡으로 나타낸 임의의 전술한 서열은 본원에 기재된 서열번호:58-72와 같이 포스포디에스테르 캡 없이 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, siRNA는 임의의 전술한 서열로 이루어진다. 일부 구현예에서, siRNA는 임의의 전술한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호: 17-18 및 34-72 중에서 선택되는 2개의 핵산 분자로 이루어진 이중 가닥 핵산이 제공된다. 일부 구현예에서, 서열번호: 17-18 및 34-72 중에서 선택되는 적어도 하나의 핵산 분자를 포함하는 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, siRNA는 3' 오버행(overhang), 5' 오버행, 5' 인산화, 2' 당 변형, 핵산 염기 변형, 포스페이트 골격 변형, 및 임의의 전술한 것의 임의의 조합으로부터 선택되는 적어도 하나의 변형을 갖는다. 임의의 siRNA 서열은 포스포디에스테르 캡을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 포스포디에스테르 캡으로 나타낸 임의의 전술한 서열은 본원에 기재된 서열번호:58-72와 같은 포스포디에스테르 캡 없이 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, 안티센스 핵산 분자 및 센스 핵산 분자로 이루어진 이중 가닥 핵산이 제공되며, 이들 각각은 서열번호: 17-18 및 34-72 중에서 선택된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 17-18 및 34-72 중에서 선택되는 안티센스 핵산 분자 및 서열번호: 17-18 및 34-72 중에서 선택되는 센스 핵산 분자를 포함하는 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 17-18 및 34-72 중에서 선택되는 2개의 핵산 분자를 포함하는 이중 가닥 핵산이 제공된다. 일부 구현예에서, 이중 가닥 핵산은 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함한다.
일부 구현예에서, 이중 가닥 핵산의 각각의 가닥은 52개 이하의 뉴클레오티드를 갖는다.
일부 구현예에서, 서열번호:17 및 서열번호:18; 서열번호:34 및 서열번호:35; 서열번호:34 및 서열번호:36; 서열번호:34 및 서열번호:37; 서열번호:34 및 서열번호:38; 서열번호:34 및 서열번호:39; 서열번호:17 및 서열번호:40; 서열번호:34 및 서열번호:41; 서열번호:42 및 서열번호:43; 서열번호:44 및 서열번호:43; 서열번호:45 및 서열번호:43; 서열번호:46 및 서열번호:47; 서열번호:46 및 서열번호:48; 서열번호:46 및 서열번호:49; 서열번호:50 및 서열번호:51; 서열번호:46 및 서열번호:52; 서열번호:46 및 서열번호:53; 서열번호:54 및 서열번호:55; 또는 서열번호:56 및 서열번호:57로 이루어진 이중-가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 전술한 핵산 중 어느 하나는 변형되거나 추가로 변형된 적어도 하나의 뉴클레오티드를 갖는다. 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오티드는 2'-O-메틸-아데노신, 2'-O-메틸-우리딘, 2'-O-메틸-시토신, 2'-O-메틸-구아노신, 2'-O-메틸-티미딘, 2'-플루오로-아데노신, 2'-플루오로-시티딘, 2'-플루오로-구아노신, 2'-플루오로-우라실, 2'-플루오로-티미딘, 데옥시토신, 데옥시구아노신, 데옥시아데노신, 데옥시티미딘, 데옥시우리딘, 잠긴 아데노신, 잠긴 우리딘, 잠긴 구아노신, 잠긴 시티딘, 포스포로티오에이트 및 포스포디에스테르 캡으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 추가의 뉴클레오티드 또는 변형된 뉴클레오티드가 핵산의 말단에 추가된다.
일 양태에서, 임의의 전술한 핵산 분자 또는 이중-가닥 핵산, 및 약학적으로 허용되는 담체, 비히클, 부형제 또는 희석제를 포함하는 조성물이 제공된다.
일부 구현예에서, 담체는 식염수, 당, 폴리펩티드, 중합체, 지질, 크림, 겔, 미셀 물질, 웨이퍼 및 나노입자 중 적어도 하나를 포함한다. 일부 구현예에서, 담체는 글루코스 용액, 폴리양이온성 결합제, 양이온성 지질, 양이온성 미셀, 양이온성 폴리펩티드, 친수성 중합체 그라프트된(grafted) 중합체, 비-천연 양이온성 중합체, 양이온성 폴리아세탈, 친수성 중합체 그라프트된 폴리아세탈, 리간드 작용기화된 양이온성 중합체, 핵산 전달 비히클, 리간드 작용기화된-친수성 중합체 그라프트된 중합체, 및 리간드 작용기화된 리포솜 중 적어도 하나를 포함한다. 일부 구현예에서, 담체는 양이온성 중합체-핵산 복합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 친수성 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이다.
일부 구현예에서, 담체(carries)는 콜라겐을 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 콜라겐 마이크로입자이다. 일부 구현예에서, 핵산 분자는 콜라겐에 흡착된다.
일부 구현예에서, 나노입자는 리포솜 나노입자이다. 일부 구현예에서, 리포솜은 적어도 하나의 2' 당 변형으로 추가로 작용기화된다.
일 양태에서, 치료적 유효량의 임의의 전술한 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 상처를 치료하거나 흉터를 억제, 감소 또는 방지하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상처 또는 흉터는 피부, 눈, 중추 신경계, 말초 신경계, 심장 조직, 혈관, 힘줄, 인대, 근육, 구강, 입술, 입천장, 내부 장기, 외과적 상처, 복강, 골반강 또는 흉강의 것이다. 일부 구현예에서, 눈의 상처 또는 흉터는 각막 또는 수정체 피막(lens capsule)의 것이다. 일부 구현예에서, 상처 또는 흉터는 눈 수술, 라식 수술, 라섹 수술, PRK 수술, 녹내장 여과 수술, 백내장 수술, 및 각막 반흔화(corneal cicatrisation)로부터 기인한다.
일부 구현예에서, 흉터의 억제는 유착 형성의 발생 횟수 및/또는 형성된 유착의 크기를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 흉터의 방지, 감소 또는 억제가 신경 재연결 및/또는 신경 기능을 향상시킨다. 일부 구현예에서, 심장 조직 상처는 심근 경색으로부터 유래한다. 일부 구현예에서, 상처는 신경 상처이다. 일부 구현예에서, 상처는 피막 수축을 초래한다. 일부 구현예에서, 상처는 외과적 상처이다. 일부 구현예에서, 상처는 미용 시술 또는 흉터 교정으로부터 유래한다. 일부 구현예에서, 피부 이식편(graft) 치유는 본 개시내용의 조성물을 사용하여 향상된다.
도 1은 서열번호: 17/18 API의 센스 및 안티센스 가닥의 고상 합성에 관여하는 단계의 사이클을 나타낸다.
도 2는 서열번호:17/18 API 제조 방식을 도시한다.
도 3a는 서열번호:17의 센스 가닥 구조를 도시한다.
도 3b는 서열번호:18의 안티센스 가닥 구조를 도시한다.
도 4는 FL2의 siRNA-매개 결실이 세포 이동을 향상시킨다는 것을 나타낸다.
도 5는 U2OS 세포를 사용한 이동에 대한 siRNA의 초기 스크래치 테스트 스크린의 결과를 나타낸다.
도 6은 U2OS 세포를 사용한 이동에 대한 siRNA의 제2 스크래치 테스트 스크린을 나타낸다.
도 7은 도 6의 연구로부터의 세포를 사용한 FL2에 대한 웨스턴 블롯을 나타낸다.
도 8은 서열번호: 17/18을 사용한 시간-경과(time-lapse) 스크래치 테스트 결과를 도시한다.
본 대상체는 본 개시내용의 일부를 형성하는 하기 상세한 설명을 참조함으로써 보다 쉽게 이해될 수 있다. 본 개시내용은 본원에 기재되고/되거나 나타낸 특정 생성물, 방법, 조건 또는 파라미터에 제한되지 않으며, 본원에서 사용되는 용어는 단지 예로서 특정 구현예를 기재하기 위한 목적이며, 청구된 개시내용을 제한하도록 의도되지 않는다는 것이 이해되어야 한다.
본원에서 달리 정의되지 않는 한, 본 출원과 관련하여 사용되는 과학 및 기술 용어는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 또한, 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함하고 복수 용어는 단수를 포함할 것이다.
상기 및 본 개시내용 전반에 이용된 바와 같이, 하기 용어 및 약어는, 달리 명시되지 않는 한, 하기 의미를 갖는 것으로 이해될 것이다.
본 개시내용에서, 단수 형태 ("a", "an" 및 "the")는 복수의 참조를 포함하고, 특정 수치 값에 대한 언급은 문맥상 명백하게 다르게 나타내지 않는 한, 적어도 그 특정 값을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "화합물"에 대한 언급은 당업자에게 공지된 이러한 화합물 및 이의 등가물 중 하나 이상에 대한 언급이다. 본원에서 사용되는 "복수"는 하나 초과를 의미한다. 값의 범위가 표현될 때, 다른 구현예는 하나의 특정한 값으로부터 및/또는 다른 특정한 값까지를 포함한다.
유사하게, 값은 선행사 "약"의 사용에 의해 근사치로 표현되는 경우, 특정 값은 다른 구현예를 형성하는 것으로 이해된다. 모든 범위는 포함되고 결합 가능하다. 본 개시내용의 문맥에서, 특정 양에 의해, "약"은 그 양이 언급된 양의 ±20% 이내, 또는 바람직하게는 언급된 양의 ±10% 이내, 또는 더 바람직하게는 언급된 양의 ±5% 이내임을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "치료하다", "치료", 또는 "요법" (뿐만 아니라 이의 상이한 형태)은 예방적 또는 방지적 조치를 포함하는 치료적 치료(therapeutic treatment)를 지칭하고, 목적은 질환 또는 병태와 관련된 원하지 않는 생리적 변화를 방지하거나 늦추는 (감소시키는) 것이다. 유익하거나 원하는 임상 결과는 증상의 경감, 질환 또는 병태의 범위의 감소, 질환 또는 병태의 안정화(즉, 질환 또는 병태가 악화되지 않는 경우), 질환 또는 병태의 진행의 지연 또는 둔화, 질환 또는 병태의 개선 또는 완화, 및 검출 가능 여부에 관계 없이, 질환 또는 병태의 관해(부분적 또는 전체)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 치료가 필요한 이들은 이미 질환 또는 병태가 있는 이들 뿐만 아니라 질환 또는 병태를 가지기 쉬운 이들 또는 질환 또는 병태가 방지될 필요가 있는 이들을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "성분", "조성물", "제형", "화합물의 조성물", "화합물", "약물", "약리학적 활성제," "활성제," "치료제", "요법", "치료", 또는 "약제"는, 대상체(인간 또는 동물)에게 투여될 때 국소 및/또는 전신 작용에 의해 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 유도하는 화합물 또는 화합물들 또는 물질의 조성물을 지칭하기 위해, 문맥이 지시하는 바에 따라 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 개인화된 조성물 또는 방법은 대상체에서 식별되거나 고려된 특정 필요를 충족시키도록 맞춤화되거나 개인화된 레지멘(regimen)에서 생성물 또는 생성물의 사용을 지칭한다.
용어 "대상체", "개체" 및 "환자"는 본원에서 상호교환적으로 사용되고, 본 개시내용에 따른 조성물 또는 제형으로 치료가 제공되는 동물, 예를 들어 인간을 지칭한다. 본원에서 사용되는 용어 "대상체"는 인간 및 비-인간 동물을 지칭한다. 용어 "비-인간 동물" 및 "비-인간 포유동물"은 본원에서 상호교환적으로 사용되고, 모든 척추동물, 예를 들어, 비-인간 영장류 (특히 고등 영장류), 양, 개, 설치류, (예를 들어, 마우스 또는 래트), 기니피그, 염소, 돼지, 고양이, 토끼, 소, 말 및 비-포유동물, 예를 들어 파충류, 양서류, 닭 및 칠면조를 포함한다. 본원에 기재된 조성물은 원숭이 및 인간, 말, 소, 고양이, 개, 토끼, 및 설치류, 예를 들어 래트 및 마우스와 같은 영장류를 포함하는 임의의 적합한 포유동물을 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료될 포유동물은 인간이다. 인간은 임의의 연령의 임의의 인간일 수 있다. 일 구현예에서, 인간은 성인이다. 다른 구현예에서, 인간은 어린이다. 인간은 남성, 여성, 임산부, 중년, 청소년 또는 노인일 수 있다. 본 개시내용의 방법 중 임의의 것에 따라, 그리고 일부 구현예에서, 대상체는 인간이다. 다른 구현예에서, 대상체는 비-인간 영장류이다. 다른 구현예에서, 대상체는 뮤린이고, 이는 일부 구현예에서 마우스이고, 다른 구현예에서, 래트이다. 다른 구현예에서, 대상체는 개과(canine), 고양이과(feline), 소과(bovine), 말과(equine), 라프린(laprine) 또는 돼지과(porcine)이다. 다른 구현예에서, 대상체는 포유동물이다. 본원에서 주목될 바와 같이, 본 개시내용의 교시내용을 사용하는 비-인간 동물 (예를 들어, 비-인간 영장류, 비-인간 포유동물)의 치료는 특정 종에서 피드게틴-유사 2의 오르소로그 (orthologue)에 대해 지시된 siRNA의 사용을 요구할 수 있다.
특정 약물, 화합물, 조성물, 제형(또는 이들의 조합)이 본원에서 "명시"되는 것으로 언급되는 대상체에서의 병태 및 장애는 해당 약물 또는 화합물 또는 조성물 또는 제형이 규제기관에 의해 명시적으로 승인된 병태 및 장애로 제한되지 않지만, 또한 의사이거나 다른 건강 또는 영양 전문가에 의해 해당 약물 또는 화합물 또는 조성물 또는 제형 또는 이들의 조합으로 치료하기 적합하다고 공지되거나 합리적으로 믿어지는 다른 병태 및 장애를 포함한다.
본 개시내용은 인간 피드게틴-유사 2 활성을 억제하는 핵산 서열, 이의 약학적 조성물, 및 다양한 부상, 상처 및 질환을 방지 또는 치료하기 위한 이들의 사용 방법에 관한 것이다.
핵산 서열
일부 구현예에서, 본 개시내용은 하기 서열:
센스 가닥 5'- fUfUmAfCmAfCAGUAUUAAAGCGATT (서열번호:17);
안티센스 가닥: (Phos) 5'-U CGC UUU AAU ACU G UG UAA TT (서열번호:18);
센스 가닥: 5'- UUACACAGUAUUAAAGCGATT-3' (서열번호:34);
안티센스 가닥: (Phos) 5' - mUmCGCUUUAAUACUGUGUAATT - 3' (서열번호:35);
안티센스 가닥: (Phos) 5' - mU(s)mC(s)GCUUUAAUACUGUGUAATT -3' (서열번호:36);
안티센스 가닥: (Phos) 5' - fUfCGCUUUAAUACUGUGUAATT - 3' (서열번호:37);
안티센스 가닥: (Phos) 5' -fU(s)fC(s)GCUUUAAUACUGUGUAATT- 3' (서열번호:38);
안티센스 가닥:(Phos) 5'- mU(s)mC(s)GCUUUAAUAmCfUmGfUmGfUmAmATT- 3' (서열번호:39);
안티센스 가닥: (Phos) 5'- U(s)CGCUUUAAUACUGUGUAATT- 3' (서열번호:40);
안티센스 가닥:(Phos) 5'- mUfCmGfCmUfUmUAAfUmAfCmUGmUmGfUmAmATT- 3' (서열번호:41);
센스 가닥: 5'- mUmUmAmCmAmCmAmGmUmAmUmUmAmAmAmGmCmGmAmUmU-3' (서열번호:42);
안티센스 가닥:(Phos) 5' - mUmCmGmCmUmUmUmAmAmUmAmCmUmGmUmGmUmAmAmUmU- 3' (서열번호:43);
센스 가닥: 5'- mUmUmAmCmAmCmAmGmUmAmUmUmAmAmAmGdCdGdATT-3' (서열번호:44);
센스 가닥: 5'- mUmUmAmCmAmCmAmGmUmAmUmUmAmAmAmGdCmGmATT-3' (서열번호:45);
센스 가닥: 5'- UUACACAGUAUUAAAGCGA-3' (서열번호:46);
안티센스 가닥: (Phos) 5' - U(s)CGCUUUAAUACUGUGUAATT- 3' (서열번호:47);
안티센스 가닥: (Phos) 5' - UCGCUUUAAUACUGUGUAATT- 3' (서열번호:48);
안티센스 가닥: (Phos) 5' - U(s)C(s)GCUUUAAUACUGUGUAATT- 3' (서열번호:49);
센스 가닥: 5'- mUmUACACAGUAUUAAAGCGA-3' (서열번호:50);
안티센스 가닥: (Phos) 5' - U(s)CGCUUUAAUACUGUGUmAmATT- 3' (서열번호:51);
안티센스 가닥: (Phos) 5' - UCGCUUUAAUACUGUGUAATT - 3' (서열번호:52);
안티센스 가닥: (Phos) 5' - U(s)C(s)GCUUUAAUACUGUGUAA T(s)T - 3' (서열번호:53);
센스 가닥: 5'- lUlUlAlClACAGUAUUAAAGCGATT-3' (서열번호:54);
안티센스 가닥: (Phos) 5' - UCGCUUUAAUACUGlUlGlUlAlA TT - 3' (서열번호:55);
센스 가닥: 5'- fUfUlAfClACAGUAUUAAAGCGA-3' (서열번호:56)
안티센스 가닥: (Phos) 5' - mU(s)mCmGCUUUAAUACUGUGUAATT - 3' (서열번호:57);
안티센스 가닥: 5' - fUfCGCUUUAAUACUGUGUAATT -3' (서열번호:58);
안티센스 가닥: 5' -fU(s)fC(s)GCUUUAAUACUGUGUAATT-3'(서열번호:59);
안티센스 가닥: 5' - mU(s)mC(s)GCUUUAAUAmCfUmGfUmGfUmAmATT-3' (서열번호:60);
안티센스 가닥: 5' - U(s)CGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:61);
안티센스 가닥: 5' - mUfCmGfCmUfUmUAAfUmAfCmUGmUmGfUmAmATT (서열번호:62);
안티센스 가닥: 5'- mUmCmGmCmUmUmUmAmAmUmAmCmUmGmUmGmUmAmAmUmU-3' (서열번호:63);
안티센스 가닥: 5' - U(s)CGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:64);
안티센스 가닥: 5' - UCGCUUUAAUACUGUGUAATT-3'(서열번호:65);
안티센스 가닥: 5' - U(s)C(s)GCUUUAAUACUGUGUAATT-3'(서열번호:66);
안티센스 가닥: 5' - U(s)CGCUUUAAUACUGUGUmAmATT-3'(서열번호:67);
안티센스 가닥: 5' - UCGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:68);
안티센스 가닥: 5' - U(s)C(s)GCUUUAAUACUGUGUAA T(s)T-3' (서열번호:69);
안티센스 가닥: 5' - UCGCUUUAAUACUGlUlGlUlAlA TT -3' (서열번호:70);
안티센스 가닥: 5' - mU(s)mCmGCUUUAAUACUGUGUAATT -3' (서열번호:71); 또는
안티센스 가닥: 5' -U CGC UUU AAU ACU G UG UAA TT (서열번호:72);
및 보체;
중 하나로 이루어진 핵산 분자에 관한 것이고,
여기서 d(뉴클레오티드) = 데옥시-(뉴클레오티드), m(뉴클레오티드) = 2'-O-메틸 뉴클레오티드, T = 티미딘, f(뉴클레오티드) = 2'-플루오로데옥시 뉴클레오티드, (Phos) = 포스포디에스테르 캡; 대문자 뉴클레오티드 = RNA 뉴클레오티드, l(뉴클레오티드) = 잠긴 뉴클레오티드, (s) = 포스포로티오에이트이다. 따라서, 예를 들어, dT는 데옥시티미딘을 나타내고, dC는 데옥시시티딘을 나타내고, fC는 2'-플루오로데옥시시티딘 리보핵산을 나타내고, fU는 2'-플루오로데옥시 우라실 리보핵산을 나타내고, mA는 2'-O-메틸 아데노신 리보핵산을 나타내고, mU는 2'-O-메틸 우라실 리보핵산을 나타내고, mC는 2'-O-메틸 시토신 리보핵산을 나타내고, mG는 2'-O-메틸 구아노신 리보핵산을 나타낸다.
일부 구현예에서, 보체는 이중-가닥 핵산을 포함하는 상보적 핵산 가닥을 지칭한다. 일부 구현예에서, 센스 가닥이 선택되는 경우, 이의 보체는 안티센스 가닥이다. 일부 구현예에서, 안티센스 가닥이 선택되는 경우, 이의 보체는 센스 가닥이다.
일부 구현예에서, 보체는 서열번호: 17-18 및 34-72 중 임의의 것으로부터 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, siRNA 분자가 서열번호: 17-18 및 34-72 중에서 센스 가닥인 경우, 보체는 서열번호: 17-18 및 34-72 중에서 안티센스 가닥으로부터 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, siRNA 분자가 서열번호: 17-18 및 34-72 중에서 안티센스 가닥인 경우, 보체는 서열번호: 17-18 및 34-72 중에서 센스 가닥으로부터 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 보체는 서열번호:1-10으로부터 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, siRNA 분자가 서열번호: 17-18 및 34-72 중에서 센스 가닥인 경우, 보체는 서열번호: 1-10 중에서 안티센스 가닥으로부터 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, siRNA 분자가 서열번호: 17-18 및 34-72 중에서 안티센스 가닥인 경우, 보체는 서열번호: 1-10 중에서 센스 가닥으로부터 선택될 수 있다. 서열번호:1-10은: 센스 가닥: UUACACAGUAUUAAAGCGAUU (서열번호:1); 안티센스 가닥: 5' UCGCUUUAAUACUGUGUAAUU (서열번호:2); 센스 가닥: CAUCUGAAACCUAGGGUCUUU(서열번호:3); 안티센스 가닥: 5' AGACCCUAGGUUUCAGAUGUU(서열번호:4); 센스 가닥: GUGACUUAUGCUAGGAGGAUU (서열번호:5); 안티센스 가닥: 5'UCCUCCUAGCAUAAGUCACUU (서열번호:6); 센스 가닥: GGUCAGAAGCAGAAUGUAUUU(서열번호:7); 안티센스 가닥: 5' AUACAUUCUGCUUCUGACCUU (서열번호:8); 센스: 5' CGCCGGCCCACAAGUUGGAdTdT (서열번호:9); 및 안티센스: 5' UCCAACUUGUGGGCCGGCGdTdT (서열번호:10) 이다.
일부 구현예에서, 본원에 개시된 임의의 핵산 서열은 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 뉴클레오티드 변형으로 변형되거나 추가로 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 서열 내의 임의의 변형되지 않은 뉴클레오티드는 본원에 기재된 것과 같지만 이에 제한되지 않는 변형된 뉴클레오티드 중 하나로 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 서열 내의 변형된 뉴클레오티드는 본원에 기재된 변형된 뉴클레오티드 중 하나와 같지만 이에 제한되지 않는 상이한 변형된 뉴클레오티드로 변경될 수 있다. 변형된 뉴클레오티드 또는 변형된 핵산은 본원에 기재된 바와 같이 변형된 뉴클레오티드, 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드의 임의의 성분 사이의 결합, 및 서열의 하나 또는 양 말단에 하나 이상의 변형되거나 변형되지 않은 뉴클레오티드의 첨가, 또는 캡의 첨가를 포괄한다.
일부 구현예에서, 서열번호:17-18 및 34-72 중에서 선택되는 2개의 핵산 분자로 이루어진 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 17-18 및 34-72 중에서 선택되는 상보적 핵산 분자로 이루어진 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 17, 34, 42, 44, 45, 46, 50 및 54로부터 선택되는 센스 가닥; 및 서열번호: 2, 18, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 43, 47, 48, 49, 51, 52, 53, 55 및 57로부터 선택되는 안티센스 가닥으로 이루어진 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 17, 34, 42, 44, 45, 46, 50, 54 및 56으로부터 선택되는 센스 가닥; 및 서열번호: 2, 4, 6, 8 및 10으로부터 선택되는 안티센스 가닥으로 이루어진 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 1, 3, 5, 7 및 9로부터 선택되는 센스 가닥; 및 서열번호: 18, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 43, 47, 48, 49, 51, 52, 53, 55 및 57로부터 선택되는 안티센스 가닥으로 이루어진 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 17, 34, 42, 44, 45, 46, 50 및 54로부터 선택되는 센스 가닥; 및 서열번호: 2, 4, 6, 8, 10, 18, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 43, 47, 48, 49, 51, 52, 53, 55 및 57로부터 선택되는 안티센스 가닥으로 이루어진 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 1, 3, 5, 7, 9, 17, 34, 42, 44, 45, 46, 50 및 54로부터 선택되는 센스 가닥; 및 서열번호: 18, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 43, 47, 48, 49, 51, 52, 53, 55 및 57로부터 선택되는 안티센스 가닥을 포함하는 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호:17 및 서열번호:18; 서열번호:34 및 서열번호:35; 서열번호:34 및 서열번호:36; 서열번호:34 및 서열번호:37; 서열번호:34 및 서열번호:38; 서열번호:34 및 서열번호:39; 서열번호:17 및 서열번호:40; 서열번호:34 및 서열번호:41; 서열번호:42 및 서열번호:43; 서열번호:44 및 서열번호:43; 서열번호:45 및 서열번호:43; 서열번호:46 및 서열번호:47; 서열번호:46 및 서열번호:48; 서열번호:46 및 서열번호:49; 서열번호:50 및 서열번호:51; 서열번호:46 및 서열번호:52; 서열번호:46 및 서열번호:53; 서열번호:54 및 서열번호:55; 또는 서열번호:56 및 서열번호:57로 이루어진 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 17-18 또는 34-57 중에서 선택되는 적어도 하나의 핵산 분자를 포함하는 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 17-18 또는 34-57 중에서 선택되는 2개의 핵산 분자를 포함하는 이중 가닥 핵산이 제공된다. 일부 구현예에서, 이중 가닥 핵산은 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함한다.
일부 구현예에서, 이중 가닥 핵산의 각각의 가닥은 52개 이하의 뉴클레오티드를 갖는다.
일부 구현예에서, 서열번호: 1, 17, 34, 42, 44, 45, 46, 50, 54 및 56으로부터 선택되는 핵산 분자를 포함하는 센스 가닥; 및 서열번호: 18, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 43, 47, 48, 49, 51, 52, 53, 55 및 57로부터 선택되는 핵산 분자를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하는 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 17, 34, 42, 44, 45, 46, 50, 54 및 56으로부터 선택되는 핵산 분자를 포함하는 센스 가닥; 및 서열번호: 4, 6, 8 및 10으로부터 선택되는 핵산 분자를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하는 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 1, 3, 5, 7 및 9로부터 선택되는 핵산 분자를 포함하는 센스 가닥; 및 서열번호: 18, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 43, 47, 48, 49, 51, 52, 53, 55 및 57로부터 선택되는 핵산 분자를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하는 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 이중-가닥 핵산은 서열번호:17 및 서열번호:18; 서열번호:34 및 서열번호:35; 서열번호:34 및 서열번호:36; 서열번호:34 및 서열번호:37; 서열번호:34 및 서열번호:38; 서열번호:34 및 서열번호:39; 서열번호:17 및 서열번호:40; 서열번호:34 및 서열번호:41; 서열번호:42 및 서열번호:43; 서열번호:44 및 서열번호:43; 서열번호:45 및 서열번호:43; 서열번호:46 및 서열번호:47; 서열번호:46 및 서열번호:48; 서열번호:46 및 서열번호:49; 서열번호:50 및 서열번호:51; 서열번호:46 및 서열번호:52; 서열번호:46 및 서열번호:53; 서열번호:54 및 서열번호:55; 또는 서열번호:56 및 서열번호:57을 포함하는 핵산 분자를 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호: 1, 17, 34, 42, 44, 45, 46, 50 및 54로부터 선택되는 센스 가닥; 및 서열번호: 58-72 중 어느 하나로부터 선택되는 안티센스 가닥으로 이루어진 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 1, 3, 5 및 7로부터 선택되는 센스 가닥; 및 서열번호: 58-72 중 어느 하나로부터 선택되는 안티센스 가닥으로 이루어진 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 1, 3, 5, 7, 9, 17, 34, 42, 44, 45, 46, 50 및 54로부터 선택되는 센스 가닥; 및 서열번호: 58-72 중 어느 하나로부터 선택되는 안티센스 가닥으로 이루어진 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 1, 3, 5, 7, 9, 17, 34, 42, 44, 45, 46, 50 및 54로부터 선택되는 센스 가닥; 및 서열번호: 58-72 중 어느 하나로부터 선택되는 안티센스 가닥을 포함하는 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호:34 및 서열번호:58; 서열번호:34 및 서열번호:59; 서열번호:34 및 서열번호:60; 서열번호:17 및 서열번호:61; 서열번호:34 및 서열번호:62; 서열번호:42 및 서열번호:63; 서열번호:44 및 서열번호:63; 서열번호:45 및 서열번호:63; 서열번호:46 및 서열번호:64; 서열번호:46 및 서열번호:65; 서열번호:46 및 서열번호:66; 서열번호:50 및 서열번호:67; 서열번호:46 및 서열번호:69; 서열번호:54 및 서열번호:70; 서열번호:17 및 서열번호:72, 또는 서열번호:56 및 서열번호:71로 이루어진 이중-가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 17 및 서열번호:2, 서열번호:18, 서열번호:35, 서열번호:36, 서열번호:37, 서열번호:38, 서열번호:39, 서열번호:40, 서열번호:41, 서열번호:42, 서열번호:43, 서열번호:44, 서열번호:47, 서열번호:48, 서열번호:49, 서열번호:51, 서열번호:52, 서열번호:53, 서열번호:55, 서열번호:57, 서열번호: 58, 서열번호: 59, 서열번호:60, 서열번호:61, 서열번호:62, 서열번호:63, 서열번호:64, 서열번호:65, 서열번호:66, 서열번호:67, 서열번호:68, 서열번호:69, 서열번호:70, 서열번호:71 또는 서열번호:72 중 어느 하나로 이루어진 이중-가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 17 및 서열번호:2; 서열번호:17 및 서열번호:18; 서열번호:17 및 서열번호:35; 서열번호:17 및 서열번호:36; 서열번호:17 및 서열번호:37; 서열번호:17 및 서열번호:38; 서열번호:17 및 서열번호:39; 서열번호:17 및 서열번호:40; 서열번호:17 및 서열번호:41; 서열번호:17 및 서열번호:42; 서열번호:17 및 서열번호:43; 서열번호:17 및 서열번호:44; 서열번호:17 및 서열번호:47; 서열번호:17 및 서열번호:48; 서열번호:17 및 서열번호:49; 서열번호:17 및 서열번호:51; 서열번호:17 및 서열번호:52; 서열번호:17 및 서열번호:53; 서열번호:17 및 서열번호:55; 서열번호:17 및 서열번호:57; 서열번호:17 및 서열번호: 58; 서열번호:17 및 서열번호: 59; 서열번호:17 및 서열번호:60; 서열번호:17 및 서열번호:61; 서열번호:17 및 서열번호:62; 서열번호:17 및 서열번호:63; 서열번호:17 및 서열번호:64; 서열번호:17 및 서열번호:65; 서열번호:17 및 서열번호:66; 서열번호:17 및 서열번호:67; 서열번호:17 및 서열번호:68; 서열번호:17 및 서열번호:69; 서열번호:17 및 서열번호:70; 서열번호:17 및 서열번호:71 또는 서열번호:17 및 서열번호:72로 이루어진 이중-가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호:18 및 서열번호:1, 서열번호:17, 서열번호:34, 서열번호:44, 서열번호:45, 서열번호:46, 서열번호:50, 서열번호:54 또는 서열번호:56 중 어느 하나로 이루어진 이중-가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호:18 및 서열번호:1, 서열번호:18 및 서열번호:17; 서열번호:18 및 서열번호:34; 서열번호:18 및 서열번호:44; 서열번호:18 및 서열번호:45; 서열번호:18 및 서열번호:46; 서열번호:18 및 서열번호:50; 서열번호:18 및 서열번호:54; 또는 서열번호:18 및 서열번호:56로 이루어진 이중-가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 58-72 중에서 선택되는 적어도 하나의 핵산 분자를 포함하는 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 17-18 또는 34-72 중에서 선택되는 2개의 핵산 분자를 포함하는 이중 가닥 핵산이 제공된다. 일부 구현예에서, 이중 가닥 핵산은 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함한다.
일부 구현예에서, 이중 가닥 핵산의 각각의 가닥은 52개 이하의 뉴클레오티드를 갖는다.
일부 구현예에서, 서열번호: 1, 17, 34, 42, 44, 45, 46, 50, 54 및 56으로부터 선택되는 핵산 분자를 포함하는 센스 가닥; 및 서열번호: 58-72 중 어느 하나로부터 선택되는 핵산 분자를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하는 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 1, 3, 5, 7 및 9로부터 선택되는 핵산 분자를 포함하는 센스 가닥; 및 서열번호: 58-72 중 어느 하나로부터 선택되는 핵산 분자를 포함하는 안티센스 가닥을 포함하는 이중 가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 이중-가닥 핵산은 서열번호:34 및 서열번호:58; 서열번호:34 및 서열번호:59; 서열번호:34 및 서열번호:60; 서열번호:17 및 서열번호:61; 서열번호:34 및 서열번호:62; 서열번호:42 및 서열번호:63; 서열번호:44 및 서열번호:63; 서열번호:45 및 서열번호:63; 서열번호:46 및 서열번호:64; 서열번호:46 및 서열번호:65; 서열번호:46 및 서열번호:66; 서열번호:50 및 서열번호:67; 서열번호:46 및 서열번호:69; 서열번호:54 및 서열번호:70; 서열번호:17 및 서열번호:72, 또는 서열번호:56 및 서열번호:71을 포함하는 핵산 분자를 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호: 17을 포함하고 서열번호:2, 서열번호:18, 서열번호:35, 서열번호:36, 서열번호:37, 서열번호:38, 서열번호:39, 서열번호:40, 서열번호:41, 서열번호:42, 서열번호:43, 서열번호:44, 서열번호:47, 서열번호:48, 서열번호:49, 서열번호:51, 서열번호:52, 서열번호:53, 서열번호:55, 서열번호:57, 서열번호: 58, 서열번호: 59, 서열번호:60, 서열번호:61, 서열번호:62, 서열번호:63, 서열번호:64, 서열번호:65, 서열번호:66, 서열번호:67, 서열번호:68, 서열번호:69, 서열번호:70, 서열번호:71 또는 서열번호:72 중 어느 하나를 포함하는 이중-가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호:17 및 서열번호:2; 서열번호:17 및 서열번호:18; 서열번호:17 및 서열번호:35; 서열번호:17 및 서열번호:36; 서열번호:17 및 서열번호:37; 서열번호:17 및 서열번호:38; 서열번호:17 및 서열번호:39; 서열번호:17 및 서열번호:40; 서열번호:17 및 서열번호:41; 서열번호:17 및 서열번호:42; 서열번호:17 및 서열번호:43; 서열번호:17 및 서열번호:44; 서열번호:17 및 서열번호:47; 서열번호:17 및 서열번호:48; 서열번호:17 및 서열번호:49; 서열번호:17 및 서열번호:51; 서열번호:17 및 서열번호:52; 서열번호:17 및 서열번호:53; 서열번호:17 및 서열번호:55; 서열번호:17 및 서열번호:57; 서열번호:17 및 서열번호: 58; 서열번호:17 및 서열번호: 59; 서열번호:17 및 서열번호:60; 서열번호:17 및 서열번호:61; 서열번호:17 및 서열번호:62; 서열번호:17 및 서열번호:63; 서열번호:17 및 서열번호:64; 서열번호:17 및 서열번호:65; 서열번호:17 및 서열번호:66; 서열번호:17 및 서열번호:67; 서열번호:17 및 서열번호:68; 서열번호:17 및 서열번호:69; 서열번호:17 및 서열번호:70; 서열번호:17 및 서열번호:71 또는 서열번호:17 및 서열번호:72를 포함하는 이중-가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호: 18을 포함하고 서열번호:1, 서열번호:17, 서열번호:34, 서열번호:44, 서열번호:45, 서열번호:46, 서열번호:50, 서열번호:54 또는 서열번호:56 중 어느 하나를 포함하는 이중-가닥 핵산이 제공된다.
일부 구현예에서, 서열번호:18 및 서열번호:1, 서열번호:18 및 서열번호:17; 서열번호:18 및 서열번호:34; 서열번호:18 및 서열번호:44; 서열번호:18 및 서열번호:45; 서열번호:18 및 서열번호:46; 서열번호:18 및 서열번호:50; 서열번호:18 및 서열번호:54; 또는 서열번호:18 및 서열번호:56을 포함하는 이중-가닥 핵산이 제공된다.
본원의 다른 곳에 기재된 바와 같은 FL2에 대해 지시된 siRNA의 임의의 조성물 및 용도는 전술한 서열번호: 58-72의 단일 가닥 핵산 서열, 또는 서열번호: 58-72 중 임의의 것을 포함하거나 이들로 이루어진 이중 가닥 핵산을 활용할 수 있다.
일 구현예에서, siRNA 가닥의 5' 말단 잔기는 인산화된다. 일 구현예에서, siRNA의 안티센스 가닥의 5' 말단 잔기는 인산화된다. 일 구현예에서, siRNA 가닥의 5' 말단 잔기는 인산화되지 않는다. 일 구현예에서, siRNA의 안티센스 가닥의 5' 말단 잔기는 인산화되지 않는다.
일 구현예에서, siRNA는 이중-가닥 부분 (듀플렉스(duplex))을 포함한다. 일 구현예에서, siRNA는 20-25 뉴클레오티드 길이이다. 일 구현예에서, siRNA는 독립적으로, 하나 또는 둘 모두의 가닥 상에 하나 또는 두 개의 뉴클레오티드 3' 오버행을 갖는 19-21 코어 RNA 듀플렉스를 포함한다. siRNA는 5' 인산화되거나, 인산화되지 않을 수 있고, 뉴클레아제 분해에 대한 효능 및/또는 저항성을 개선하기 위해 당업계에 공지된 임의의 변형으로 변형되거나 추가로 변형될 수 있다. 일 구현예에서, siRNA는 이것이 하나 이상의 세포 내로 형질감염되도록 투여될 수 있다. 일 구현예에서, siRNA는 5' 인산화된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 임의의 핵산 서열은 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 뉴클레오티드 변형으로 변형되거나 추가로 변형될 수 있다.
본원에 정의된 바와 같이, 약어 "d(뉴클레오티드)"는 데옥시-뉴클레오티드를 지칭한다. 약어 "m(뉴클레오티드)"은 2'-O-메틸 뉴클레오티드를 지칭한다. 약어 "T"는 티미딘을 지칭한다. 약어 f(뉴클레오티드)는 2'-플루오로데옥시 뉴클레오티드를 지칭한다. 약어 "(Phos)"는 포스포디에스테르 캡을 지칭한다. 대문자 잔기는 RNA 잔기를 지칭한다. 약어 "l(뉴클레오티드)"는 잠긴 뉴클레오티드를 지칭한다. 잠긴 뉴클레오티드는 2' 산소와 4' 탄소를 연결하는 여분의 다리를 가지고 있다. 약어 "(s)"는 포스포로티오에이트, 즉 인접한 뉴클레오티드 또는 변형된 뉴클레오티드 사이의 포스포로티오에이트 결합을 지칭한다. 그렇지 않으면, 뉴클레오티드 및 리보뉴클레오티드에 대한 약어는 당업계에 공지된 의미를 갖는다.
본원에 기재된 뉴클레오티드의 변형의 약어는 다음과 같다. mU는 2'-O-메틸-우리딘을 지칭한다. mA는 2'-O-메틸-아데노신을 지칭한다. mC는 2'-O-메틸-시티딘을 지칭한다. mG는 2'-플루오로-구아노신을 지칭한다. fA는 2'-플루오로-아데노신을 지칭한다. fC는 2'-플루오로-시티딘을 지칭한다. fG는 2'-플루오로-구아노신을 지칭한다. fU는 2'-플루오로-우리딘을 지칭한다. dC는 데옥시시티딘을 지칭한다. dG는 데옥시구아노신을 지칭한다. dA는 데옥시아데노신을 지칭한다. A는 아데닌을 지칭한다. 변형되지 않은 뉴클레오티드의 염기에 대한 약어는 A는 아데닌을 지칭하고; U는 우라실을 지칭하고; G는 구아닌을 지칭하고; C는 시토신을 지칭하고; T는 티민을 지칭하는 것을 포함한다. lA(소문자 L A)는 잠긴 아데노신을 지칭한다. lU는 잠긴 우리딘을 지칭한다. lG는 잠긴 구아노신을 지칭한다. lC는 잠긴 시티딘을 지칭한다.
일부 구현예에서, 본원에 개시된 임의의 핵산 서열은 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 변형 또는 추가 변형으로 변형되거나 추가로 변형될 수 있다. 본원에 열거된 서열에 존재하고, 변형되지 않은 다른 위치에서 임의의 핵산에 추가로 포함될 수 있거나 이미 변형된 것에 대한 대체물에 추가로 포함될 수 있는 상기 기재된 변형에 더하여, 다른 핵산 변형은 본원에 완전히 포괄된다. 이러한 다른 변형은 2'-O-메틸 티미딘, 2'-플루오로 티미딘, 및 데옥시우리딘을 포함한다.
본원에서 변형되지 않은 및 변형된 핵산 약어의 약어는 핵산 염기, 뉴클레오시드(즉, 염기 및 당), 또는 뉴클레오티드(뉴클레오시드 및 포스페이트기)를 지칭할 수 있음에 주목해야 한다. 당업자는 이로부터 변형되지 않거나 변형된 핵산 성분을 인식할 것이다.
종종 접근 불가능한 RNA로 지칭되는 잠긴 핵산(LNA)은 리보오스 모이어티가 2' 산소와 4' 탄소를 연결하는 여분의 다리로 변형된, 변형된 RNA 뉴클레오티드이다. 일부 구현예에서, 핵산은 잠긴 아데노신을 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산은 잠긴 시토신을 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산은 잠긴 구아노신을 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산은 잠긴 우리딘을 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산은 잠긴 티미딘을 포함한다.
일 구현예에서, siRNA 가닥의 5' 말단 잔기는 인산화된다. 일 구현예에서, siRNA의 안티센스 가닥의 5' 말단 잔기는 인산화된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 siRNA의 단일 가닥 성분은 길이가 14 내지 50개의 뉴클레오티드이다. 다른 구현예에서, 본 개시내용의 siRNA의 단일 가닥 성분은 길이가 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28개의 뉴클레오티드 길이이다. 또 다른 구현예에서, 본 개시내용의 siRNA의 단일 가닥 성분은 길이가 21개의 뉴클레오티드이다. 또 다른 구현예에서, 본 개시내용의 siRNA의 단일 가닥 성분은 길이가 22개의 뉴클레오티드이다. 또 다른 구현예에서, 본 개시내용의 siRNA의 단일 가닥 성분은 길이가 23개의 뉴클레오티드이다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 siRNA는 길이가 28 내지 56개의 뉴클레오티드이다. 다른 구현예에서, 본 개시내용의 siRNA는 길이가 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 또는 52개의 뉴클레오티드이다.
다른 구현예에서, 본 개시내용의 siRNA는 적어도 하나의 2'-당 변형을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 개시내용의 siRNA는 적어도 하나의 핵산 염기 변형을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 개시내용의 siRNA는 적어도 하나의 포스페이트 골격 변형을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "적어도 하나"는 하나 이상을 의미한다.
인간 피드게틴-유사 2를 암호화하는 핵산에 대한 NCBI 참조 서열: NM 001013690.4 (서열번호:19)는:
1 agtgagctat ggggacacta ctgcactgta gcctgggcaa cagagcaaga ccttgtctca
61 aaaatgtata tatattttgg gctttttttc ctaaaacggg aactacaaca gcatatttgc
121 gagctgatga gagtgaccca gcagagaggg aaatggatca gctctgttga agatgcactg
181 gacaccagaa cacgcccagc ccctcaacca gtggccagag cagcacctgg acgtctcctc
241 caccaccccg tcgccggccc acaagttgga gttgccccct gggggtcgcc aacgctgcca
301 ctacgcttgg gcacacgacg acatctcagc cctcactgcc tccaacctcc taaagcgcta
361 tgcagagaag tactctgggg tcttggattc tccctacgag cgtccggccc tgggcgggta
421 cagcgacgcc tccttcctca acggcgccaa aggggatccc gagccctggc cagggccgga
481 gccaccctac cccttggcct cactccacga aggcctccca ggaaccaaat cgggcggtgg
541 cggcggttcc ggggccctgg ggggctcccc agttttagcc gggaacctcc ctgaacccct
601 ctacgccggc aatgcgtgcg ggggcccatc ggcggcgccc gagtacgcgg ccggctacgg
661 cggggggtac ctggcgccgg gttactgcgc gcagacgggc gccgcgctgc ccccgccgcc
721 cccggccgcg ctcctgcagc ccccaccgcc tccggggtac gggccctcag cgccgctgta
781 caactatccc gcagggggct acgcagcgca gcccggctat ggcgcgctcc cgccgccccc
841 aggcccaccc ccggccccct acctgacccc gggcctgccc gcgcccacgc ccctgcccgc
901 gccggcaccg cccaccgcct atggcttccc cacggccgcg ccgggtgccg aatccgggct
961 gtcgctgaag cgcaaggccg ccgacgaggg gcccgagggc cgctaccgca agtacgcgta
1021 cgagcccgcc aaggcccccg tggctgacgg agcctcctac cccgccgcgg acaacggcga
1081 atgtcggggc aacgggttcc gggccaagcc gccaggagcc gcggaggagg cgtcgggcaa
1141 gtacggtggc ggcgtccccc tcaaggtcct gggctccccc gtctacggcc cgcaactgga
1201 gccctttgaa aagttcccgg agcgggcccc ggctcctcgt ggggggttcg ccgtgccgtc
1261 gggggagact cccaaaggcg tggaccctgg ggccctggag ctggtgacga gcaagatggt
1321 ggactgcggg cccccggtgc agtgggcgga tgtggcgggc cagggcgcgc tcaaggcggc
1381 gctggaggag gagctggtgt ggcccctgct caggccgccc gcctacccgg gcagcctgcg
1441 cccgccgcgg accgtcctgc tctttgggcc gcggggcgcg ggcaaagcgc tgctgggccg
1501 ctgcctcgcc acgcagctgg gcgccacgct gttgcgcctg cgcggcgcga ccctggctgc
1561 gcccggcgcc gccgagggcg cgcgcctcct ccaggccgcc ttcgcggccg cgcgctgccg
1621 cccaccctcc gtactcctca tcagcgagct agaggcgctg ctccccgccc gggacgacgg
1681 cgcggcggca gggggcgcgc tgcaggtgcc gctcctggcc tgcctggacg ggggctgcgg
1741 cgcgggggct gacggcgtgc tggttgtggg caccacctcg cggcccgcgg ctctggacga
1801 ggcgacccgc cggcgcttct ctctccgctt ctacgtggcg ctgcccgaca gcccggcccg
1861 cgggcagatc ctgcagcggg cgctggccca gcagggctgc gcgctcagtg agcgggaact
1921 ggcggcgctg gtgcagggca cgcagggctt ctctgggggc gagctggggc agctgtgcca
1981 gcaggcggcg gccggggcgg gcctcccggg gctgcagcgc cccctctcct acaaggacct
2041 ggaggcggcg ctggccaagg tgggccctag ggcctctgcc aaggaactgg actcgttcgt
2101 ggagtgggac aaaatgtacg gctccggaca ctgacggcgc gcgggggagg ccgcgggagc
2161 cgcagtccct ccgtccccgc cgcctccgcg tgggagggat gtcactgact aaacccggct
2221 ggcaggggct ggagtggtga atgtgggatc ggggacagga ggggtctgcc ggtggatatt
2281 ttttttttcg tgggaaggaa aatgcttctg ccaggcagat gccatatgcg ccgtgtactc
2341 aggtttttcc tatttattgt ggactggaag ctcgccatct ccgcccggca gaccgggcag
2401 atccggcatg ggctggcacc cggggcctta agaactcctg ctctcttgcc acaacgcttt
2461 tgtctcctcg ctatctgaat ggcaccctcc ttctccctca ctctctccat cccattctct
2521 gcattctctt ggttttctct cccttttgct ttgtcgctga cacccctgcc caccccatgc
2581 tggccctgtt tctctcctgc ccctccctcc ccagctctcc atccctcacc ctctgtgctt
2641 ctgtctccat ccctggctct ccagcgtccc tggccttttg gtccctgagc tttaatgcct
2701 ttccctgcct tctgttctta tttggactgc agtggccctt tgcaggagct ctggaggccc
2761 aggggctgag gaggagggtt acccctctac ccatctgaaa cctagggtct agggggatca
2821 aggaaaaaaa gtccccaaag aaggggaatt ttttgtttgt ttttgagggg agatcccaga
2881 aatgtagctt gtttcatatt ttagtcttct tatttttgta aaatgtgtag aatttgctgt
2941 ttttcttttt cttttgacaa ctcaggaaga aactgacctc agaaagaatg ttagactttg
3001 gctgctctcc tgtgtgcccc tcacacctgc cccctccccc ccactccatc caggggacca
3061 aattctccca gacactcaaa aaatgagact tacggggaag gggagaggaa gacccagagg
3121 cctcagtgaa accccagcta ttcctggtca gaagcagaat gtattcctaa gggcttcctc
3181 cccagggccg aggcctaggc atgaatgtgg ggagtgggct gtggggtttg agagaaggga
3241 ggccttattc ctctcctgct gctccccacc ccctgcccca cccaacccct ccgctgagtg
3301 ttttctgtga agggctatcc agagttagga tgcccttgcc caattccttc ctgagaccca
3361 gaaggtaggg tgggagggcc caaatgggaa ggtgacctaa gcagaaagtc tccagaaagg
3421 tcatgtcccc tggccctgcc ttggcagagg tccccagtga cttatgctag gaggattcca
3481 tctgggtaga cagtctggcc acaaaatcag ctactggacc tcagccatct ctgctggagg
3541 ctctgaggag gagtgagcat ccctcacttg tgggggctct gtgaggaaat gtgccttccc
3601 cattcccccg gagtcctagg tctggagctc cagggctggg agagggtgag ggagatgggc
3661 aggggtgttt tctctgacct tgggggctta gtctcagtcc tgcctgaact ttccactagg
3721 cttggaaccc ttccaagaac catatttctc tccttcccac caattttccc ttgatgaggc
3781 tttagcagtt tgctcccacc acccccagcc catttcacaa ctctgatctt agtccaaagc
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3901 ccttgcctgc ccgtgcattt cctagagtct actgcctccc ccctggctgg gagggtgtct
3961 gggggggatc tttcaggggc cctggcaccc agggcctgtg ctggcctagg agtgctgacc
4021 agaaggctgc tctgttcccc cccacccccg ttgctttctg gccccctctt tggagccagc
4081 cacccacagg gctttggtgc ctcagaagca gtgggctgcc gggtcacagc cgcaggctgc
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4201 gggtgggggt gggtggaggg tgtcagggaa gttggggtgg gatcccagcc ttcccttcaa
4261 gaggcaggga gctctgggag gtggagtccc caccgctttc tctactaggc tcctcctgtt
4321 ccccaggctt ggggagcttt gcacaaggag actgccccca gcctagtggc acctacctca
4381 tgggctctgg ggcaggtagg ggaagggcca gtccagctct ggtaatgctg gggggaggca
4441 taccaaagaa tccaggggca gggagtgggg agggtgactt ccgagctggc ctctcccctt
4501 cctctaccca gactggggct gggatcctct cctcccgctg taaccatttc tacctcattt
4561 tgctgcgtgt tgtacatgga cgtatttatc tcctgtctga cgatgctctg cagttgtggt
4621 ctgtctacct cagaagagac tgtattttaa aagaaagtat tacacagtat taaagcgatg
4681 acatgtggtt tgcaaaaaaa aaaaaaaaaa a (서열번호:19)
이고, 이는 하기를 암호화한다:
MHWTPEHAQPLNQWPEQHLDVSSTTPSPAHKLELPPGGRQRCHYAWAHDDISALTASNLLKRYAEKYSGVLDSPYERPALGGYSDASFLNGAKGDPEPWPGPEPPYPLASLHEGLPGTKSGGGGGSGALGGSPVLAGNLPEPLYAGNACGGPSAAPEYAAGYGGGYLAPGYCAQTGAALPPPPPAALLQPPPPPGYGPSAPLYNYPAGGYAAQPGYGALPPPPGPPPAPYLTPGLPAPTPLPAPAPPTAYGFPTAAPGAESGLSLKRKAADEGPEGRYRKYAYEPAKAPVADGASYPAADNGECRGNGFRAKPPGAAEEASGKYGGGVPLKVLGSPVYGPQLEPFEKFPERAPAPRGGFAVPSGETPKGVDPGALELVTSKMVDCGPPVQWADVAGQGALKAALEEELVWPLLRPPAYPGSLRPPRTVLLFGPRGAGKALLGRCLATQLGATLLRLRGATLAAPGAAEGARLLQAAFAAARCRPPSVLLISELEALLPARDDGAAAGGALQVPLLACLDGGCGAGADGVLVVGTTSRPAALDEATRRRFSLRFYVALPDSPARGQILQRALAQQGCALSERELAALVQGTQGFSGGELGQLCQQAAAGAGLPGLQRPLSYKDLEAALAKVGPRASAKELDSFVEWDKMYGSGH (서열번호:2) (인간 피드게틴-유사 20).
핵산 서열은 본원에 개시된다.
Figure pct00001
Figure pct00002
여기서 d(뉴클레오티드) = 데옥시-(뉴클레오티드), m(뉴클레오티드) = 2'-O-메틸 뉴클레오티드, T = 티미딘, f(뉴클레오티드) = 2'-플루오로데옥시 뉴클레오티드, (Phos) = 포스포디에스테르 캡; 대문자 뉴클레오티드 = RNA 뉴클레오티드, l(뉴클레오티드) = 잠긴 뉴클레오티드, 및 (s) = 포스포로티오에이트이다. 따라서, 예를 들어, dT는 데옥시티미딘을 나타내고, dC는 데옥시시티딘을 나타내고, fC는 2'-플루오로데옥시 시티딘 리보핵산을 나타내고, fU는 2'-플루오로데옥시 우라실 리보핵산을 나타내고, mA는 2'-O-메틸 아데노신 리보핵산을 나타내고, mU는 2'-O-메틸 우라실 리보핵산을 나타내고, mC는 2'-O-메틸 시토신 리보핵산을 나타내고, mG는 2'-O-메틸 구아노신 리보핵산을 나타낸다.
본 개시내용은 비-인간 동물 (예를 들어, 비-인간 영장류, 비-인간 포유동물)의 치료에 유용한 본원에 개시된 핵산 서열의 변형을 포함한다. 본원에 개시된 핵산의 이러한 변형은 특정 종에서 피드게틴-유사 2의 오르소로그에 대해 지시된 siRNA를 포함한다.
약학적 조성물
일부 구현예에서, 본원에 기재된 임의의 핵산의 제형, 약학적 조성물 또는 전달 시스템이 제공된다. 일부 구현예에서, 제형, 약학적 조성물 또는 전달 시스템은 본원에 기재된 임의의 핵산, 예를 들어 단일 가닥 및 이중 가닥 또는 듀플렉스로 이루어지거나 이를 포함하는 핵산을 포함한다. 일부 구현예에서, 제형은 서열번호: 17-18 및 34-72 중에서 선택되는 하나 이상의 핵산, 또는 서열번호: 17-18 및 34-72 중에서 선택되는 2개의 핵산 분자로 이루어진 핵산을 포함하는 듀플렉스 또는 이중-가닥 핵산을 포함한다. 일부 구현예에서, 제형, 약학적 조성물 또는 전달 시스템은 서열번호: 17-18 또는 34-72로부터 선택되는 서열을 포함하는 핵산, 또는 서열번호: 17-18 또는 34-72를 포함하는 듀플렉스 또는 이중-가닥 핵산을 포함한다. 제형, 약학적 조성물 또는 전달 시스템의 임의의 하기 설명에서, 전술한 핵산 또는 본원의 다른 곳에 기재된 임의의 핵산이 구현되고, 이는 피드게틴-유사 2의 억제제로 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 피드게틴-유사 2 (핵산 서열 서열번호1; 단백질 서열 서열번호:20의 활성을 억제한다.
본 개시내용의 일 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 예를 들어, 수술 후에 상처 또는 상처가 형성될 것으로 예상되는 부위에 억제제의 박동성 전달을 위해 피하 이식(implant) 또는 데포(depot) 약제 시스템에 의해 제공되어 상처 치유를 증진시킨다. 억제제는, 예를 들어, 상처 가장자리의 각각의 센티미터 또는 상처가 형성될 것으로 예상되는 부위의 각각의 센티미터에 치료적 유효량으로 제공될 수 있다.
본 개시내용의 이러한 양태에 따른 약제는 임의의 적절한 담체, 비히클, 희석제, 부형제 또는 다른 전달 시스템에서 제형화될 수 있다. 적합한 담체는 약학적으로 허용되는 담체, 바람직하게는 국소 투여 또는 주사에 의한 투여와 일치하는 것이다.
피드게틴-유사 2의 억제제는 각각의 치료 발생률에서 동일한 경로에 의해 및 동일한 형태로 투여될 수 있는 반면, 상이한 치료 발생률은 상이한 약제 및/또는 상이한 투여 경로에 의해 피드게틴-유사 2의 억제제를 제공할 수 있다는 것이 인식될 것이다. 본 개시내용의 구현예에서, 치료의 초기 발생은 피내 주사와 같은 주사로 피드게틴-유사 2의 억제제를 제공할 수 있는 반면, 치료의 제2 (및 임의의 후속) 발생은 국소 제형과 같은 대안적인 경로에 의한 피드게틴-유사 2의 억제제의 제공에 관여할 수 있거나, 그 반대일 수 있다. 일 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제의 다중 투여는 동일한 수단 또는 경로에 의해 영향을 받을 수 있다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 식염수를 포함하는 약학적 조성물에 제공된다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 정상 식염수 또는 포스페이트-완충 식염수이다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 당을 포함하는 약학적 조성물에 제공된다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 글루코스 용액이다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 폴리펩티드를 포함하는 약학적 조성물에 제공된다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드는 양이온성 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, 양이온성 폴리펩티드는 히스티딘-리신 공폴리펩티드(copolypeptide)이다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 중합체를 포함하는 약학적 조성물에 제공된다. 일부 구현예에서, 친수성 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이다. 일부 구현예에서, 중합체는 친수성 중합체 그라프트된 중합체, 비-천연 양이온성 중합체, 양이온성 폴리아세탈, 친수성 중합체 그라프트된 폴리아세탈, 리간드 작용기화된 양이온성 중합체, 또는 리간드 작용기화된-친수성 중합체 그라프트된 중합체이다. 일부 구현예에서, 친수성 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이다.
일부 구현예에서, 약학적 조성물은 폴리양이온성 결합제를 포함한다.
일부 구현예에서, 약학적 조성물은 핵산 전달 비히클을 포함한다.
일부 구현예에서, 약학적 조성물은 양이온성 중합체-핵산 복합체를 포함한다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 지질을 포함하는 약학적 조성물에 제공된다. 일부 구현예에서, 지질은 양이온성 지질이다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 크림을 포함하는 약학적 조성물에 제공된다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 점안액을 포함하는 약학적 조성물에 제공된다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 겔을 포함하는 약학적 조성물에 제공된다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 미셀 물질을 포함하는 약학적 조성물에 제공된다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 웨이퍼를 포함하는 약학적 조성물에 제공된다. 일부 구현예에서, 웨이퍼는 콜라겐, 콘드로이틴 설페이트, 폴리비닐피롤리돈 및 폴리에틸렌 글리콜 400을 포함한다. 웨이퍼의 하나의 비제한적인 예가 본원의 실시예에 기재된다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 콜라겐 입자에 제공되거나 이와 관련된다. 일부 구현예에서, 콜라겐 입자는 마이크로입자이다. 일부 구현예에서, 콜라겐 입자는 PluroGel®과 같지만 이에 제한되지 않는 계면활성제 중합체 드레싱 내에 있다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 나노입자의 마이크로에멀젼을 포함하는 약학적 조성물에 제공된다. 마이크로에멀젼의 하나의 비제한적인 예가 본원의 실시예에 기재된다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 리포솜을 포함하는 약학적 조성물에 제공된다. 일부 구현예에서, 리포솜은 리간드 작용기화된 리포솜이다. 일부 구현예에서, 리포솜은 적어도 하나의 2' 당 변형으로 추가로 작용기화된다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 나노입자를 포함하는 약학적 조성물에 제공된다. 일 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 나노입자에 캡슐화된다. 일 구현예에서, 나노입자는 리포솜 나노입자이다.
나노입자의 하나의 비제한적인 예에서, 하기와 같이 제조된다. 500 μl의 테트라메틸 오르소실리케이트(TMOS)를 1 mM HCl 100 μl의 존재 하에 약 15분 동안 얼음 상에서 초음파처리(sonication)에 의해 단일상이 형성될 때까지 가수분해시켰다. 가수분해된 TMOS (100 μl)를 pH 7.4에서, 10 mM 포스페이트를 함유하는 900 μl의 20 μM의 siRNA 용액에 첨가하였다. 10분 이내에 겔이 형성되었다. 겔을 -80℃에서 15분 동안 냉동시키고 동결 건조시켰다.
일부 예시적이지만 비제한적인 구현예에서, 나노입자는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 생산된 폴리(락트-코-글리콜산)(PLGA, PLG), 공중합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 나노입자는 1 내지 100 nm의 크기를 갖는다. 일부 구현예에서, 나노입자는 생체적합성 및/또는 생분해성이다. 이러한 첨가는 특정 구현예에서 당업계에 잘 공지된 방법을 사용한 마이크로입자 또는 나노입자의 정제를 향상시킬 수 있다.
비제한적인 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 피드게틴-유사 2의 억제제를 함유하는 폴리락트산 및 글리콜산(PLGA) 공중합체-기반 미소구체 또는 마이크로캡슐 시스템과 같은 벌크-침식 시스템에 제공된다. 일 구현예에서, PLGA:에틸셀룰로오스 시스템의 블렌드(blend)가 적절한 담체로서 사용될 수 있다. 본 개시내용의 이러한 양태에 따른 추가의 약제는 표면-침식 시스템에서 제형화될 수 있으며, 피드게틴-유사 2의 억제제는 중합체의 가수분해가 빠른 폴리(오르소) 에스테르 및 폴리무수물 매트릭스와 같은 침식성 매트릭스에 내장된다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 또한 상기에 기재된 바와 같은 박동성 전달 시스템 및 상기에 기재된 동결건조 주사용 조성물과 같은 즉시 방출 시스템을 조합함으로써 제형화될 수 있다.
피드게틴-유사 2의 억제제는 첨가제를 포함하는 조성물에 사용할 수 있다. 적합한 첨가제의 예는 적합한 염기를 제조하기 위한 젤라틴화제로서의 알긴산소듐, 또는 구아 또는 잔탄 검과 같은 셀룰로오스 유도체, 수산화알루미늄 또는 벤토나이트(요변성 겔-형성기라고 칭함)와 같은 무기 젤라틴화제, Carbopol®과 같은 폴리아크릴산 유도체, 폴리비닐피롤리돈, 미세결정성 셀룰로오스 및 카르복시메틸셀룰로오스이다. 양친매성 저분자량 및 고분자량 화합물, 및 또한 인지질이 적합하다. 겔은 예를 들어, 저분자량 및 고분자량 파라핀 탄화수소 및 바셀린의 혼합물을 기반으로, 수성 하이드로겔 또는 소수성 유기겔로서 존재할 수 있다. 친수성 유기겔은 예를 들어, 고분자량의 폴리에틸렌 글리콜을 기반으로 제조될 수 있다. 이러한 젤라틴 형태는 씻을 수 있다. 소수성 유기겔 또한 적합하다. 소수성 첨가제, 예를 들어, 석유 젤리, 왁스, 올레일 알코올, 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트 및/또는 프로필렌 글리콜 모노팔미토스테아레이트, 특히 이소프로필 미리스테이트가 포함될 수 있다. 일 구현예에서, 억제제는 색상에 관한 매칭(matching)을 목적으로 하나 이상의 염료, 예를 들어 황색 및/또는 적색 산화철 및/또는 이산화티타늄을 포함하는 조성물에 있다.
조성물은 겔, 로션, 밤, 페이스트, 스프레이, 분말, 붕대, 상처 드레싱, 에멀젼, 크림 및 혼합-상 또는 양친성 에멀젼 시스템(오일/물-물/오일 혼합 상)의 연고, 리포솜 및 트랜스퍼좀 또는 플라스터/반창고-유형 피복재를 포함하는 임의의 적합한 형태일 수 있다. 피드게틴-유사 2의 억제제를 포함하는 조성물에 이용될 수 있는 유화제는 음이온성, 양이온성 또는 중성 계면활성제, 예를 들어 알칼리 금속 비누, 금속 비누, 아민 비누, 술폰화(sulphurated) 및 술폰화(sulphonated) 화합물, 역성 비누, 고급 지방 알코올, 소르비탄 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄의 부분 지방산 에스테르, 예를 들어 라넷(lanette) 유형, 울 왁스, 라놀린 또는 오일/물 및/또는 물/오일 에멀젼을 제조하기 위한 다른 합성 생성물을 포함한다.
피드게틴-유사 2의 억제제를 포함하는 조성물은 또한 바셀린, 천연 또는 합성 왁스, 지방산, 지방 알코올, 지방산 에스테르, 예를 들어 모노글리세라이드, 디글리세라이드 또는 트리글리세라이드, 파라핀 오일 또는 식물성 오일, 수소화된 피마자 오일 또는 코코넛 오일, 호그 지방, 합성 지방 (예를 들어 카프릴산, 카프르산, 라우르산 또는 스테아르산, 예를 들어 Softisan®을 기반으로 함), 또는 트리글리세라이드 혼합물, 예를 들어 Miglyol®을 포함할 수 있고, 본원에 기재된 방법에 사용되는 피드게틴-유사 2의 억제제를 포함하는 조성물의 연고, 크림 또는 에멀젼을 제조하기 위한 지방 및/또는 유질(oleaginous) 및/또는 왁스 성분의 형태로 지질로서 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 약학적 조성물은 삼투압적 활성 산 또는 알칼리 용액, 예를 들어 염산, 시트르산, 수산화소듐 용액, 수산화칼륨 용액, 탄산수소소듐 또한 조성물의 성분일 수 있고, 또한, pH를 조정하기 위한 완충액 시스템, 예를 들어 시트레이트, 포스페이트, 트리스 완충액 또는 트리에탄올아민을 포함할 수 있다. 또한, 안정성을 높이기 위해, 메틸 벤조에이트 또는 프로필 벤조에이트(파라벤) 또는 소르빈산 등의 보존제를 첨가하는 것이 가능하다.
페이스트, 분말 및 용액은 국소적으로 적용될 수 있는 피드게틴-유사 2의 억제제를 포함하는 조성물의 추가적인 형태이다. 일관성-부여 베이스로서, 페이스트는 소수성 및 친수성 보조 물질을 빈번하게 함유하지만, 바람직하게는, 매우 높은 비율의 고체를 함유하는 소수성 보조 물질을 함유한다. 분산성, 및 또한 유동성 및 미끄럼성(slipperiness)을 증가시키기 위해, 그리고 또한 응집물을 방지하기 위해, 분말 또는 국소적으로 적용가능한 분말은 예를 들어 밀 또는 쌀 전분, 화염-분산된(flame-dispersed) 이산화규소 또는 규조토와 같은 전분 종을 함유할 수 있고, 이는 또한 희석제로서 작용한다.
일 구현예에서, 조성물은 상처 보호 또는 치유 보조에 적합한 추가의 활성 성분, 예를 들어 하나 이상의 항생제, 방부제, 비타민, 마취제, 항히스타민제, 항염증제, 보습제, 침투-향상제 및/또는 항자극제를 포함한다.
바람직하게는, 피드게틴-유사 2의 억제제는 생체막-투과성이거나, 또는 억제제를 생체막-투과성으로 만드는 모이어티에 접합되거나 그렇지 않으면 부착된다.
일부 구현예에서, 담체는 표적화 리간드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 표적화 리간드는 단백질이다. 일부 구현예에서, 표적화 리간드는 상피 세포, 혈관 내피 세포, 혈관 평활근 세포, 심근 (심장) 세포 또는 상처 치유 시에 피부 조직에 상주하는 일과성(passenger) 백혈구 세포에 결합한다.
일부 구현예에서, 담체는 (a) 히스티딘-리신 공중합체; (b) PEG를 포함하는 친수성 중합체; 및, 임의로, (c) 표적화 리간드를 포함한다.
일 구현예에서, 조성물은 RNA 간섭을 유도하고 관심 유전자의 발현을 감소시키는 하나 이상의 추가 핵산 분자를 추가로 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 하나 이상의 추가 핵산 분자는 피드게틴 및 피드게틴-유사 2로 이루어진 군으로부터 선택되는 유전자의 발현을 감소시킨다.
사용 방법
일부 구현예에서, 본원에 기재된 핵산 및 이의 약학적 조성물 중 임의의 것의 사용 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 사용 방법은 서열번호: 17-18 또는 34-72로 이루어진 핵산, 또는 서열번호: 17-18 또는 34-72로 이루어진 핵산을 포함하는 듀플렉스 또는 이중-가닥 핵산을 사용하여 제공된다. 일부 구현예에서, 사용 방법은 서열번호: 17-18 또는 34-72로부터 선택되는 서열을 포함하는 핵산, 또는 서열번호: 17-18 또는 34-72 중에서 2개의 서열을 포함하는 듀플렉스 또는 이중-가닥 핵산을 사용하여 제공된다. 일부 구현예에서, 사용 방법은 서열번호: 17-18 또는 34-72 중 어느 하나로 이루어진 핵산, 및 본원에 개시된 임의의 상보성 핵산을 사용하여 제공된다. 일부 구현예에서, 사용 방법은 서열번호: 17-18 또는 34-72 중 임의의 것을 포함하는 핵산 및 본원에 개시된 임의의 상보성 핵산을 포함하는 듀플렉스 또는 이중-가닥 핵산을 사용하여 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 것과 같지만 이에 제한되지 않는 핵산에 대한 변형 또는 추가의 변형이 본원에 포함된다. 사용 방법의 임의의 하기 설명에서, 전술한 핵산 또는 본원의 다른 곳에 기재된 것 중 임의의 것이 구현된다. 용어 "피드게틴-유사 2의 억제제"는 본원에 기재된 핵산 서열 및 이의 변형 중 임의의 것을 포괄하는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 이중-가닥 핵산 내의 각각의 개별 가닥은 52개 이하의 뉴클레오티드이다. 본 개시내용은 본원에 개시된 핵산 서열의 변형을 포함하는 비-인간 동물 (예를 들어, 비-인간 영장류, 비-인간 포유동물)의 치료를 위한 사용 방법을 포함한다. 본원에 개시된 핵산의 이러한 변형은 특정 종에서 피드게틴-유사 2의 오르소로그에 대해 지시된 siRNA를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 핵산 및 siRNA는 교차-반응성이고, 따라서 적어도 하나의 다른 종에서 유용하다.
하기 설명은 본 개시내용의 화합물 및 조성물이 유익할 수 있는 다양한 상처, 부상 및 질환, 특히 다른 병태에 관한 비제한적인 지침을 제공한다. 하기 설명은, 이러한 범주화는 단지 편의를 위한 것이며, 특정 양태가 범주들 사이에 공유되고, 이러한 범주화는 임의의 특정 신체 시스템 또는 부위의 특정 병태, 질환, 상처 또는 부상에 제한되도록 의도되지 않는다는 인식과 함께, 신체 시스템 또는 부위별로 범주화된다.
피부의 치료
상처를 치료하는데 효과적인 양의 피드게틴-유사 2 억제제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 상처를 치료하는 방법이 제공된다.
일 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제의 양은 상처 치유를 촉진하는데 효과적이다.
일 구현예에서, 상처는 표피 상처이다. 일 구현예에서, 상처는 피부 상처이다. 본 개시내용의 약제 및 방법을 사용하여 치유가 증진될 수 있는 특정 상처의 비제한적인 예는 일광 손상(sun damage)의 결과, 예를 들어 주름, 주름 제거 수술(facelift) 후 비반응성 피부, 찰과상(lasabrasion), 노화 또는 일광-손상 피부, 피부 기미(liver spots), 모반(birthmark), 사마귀, 유선 비대, 검붉은 모반(port wine stains), 혈관종, 모세혈관확장증, 또는 피부 안색의 외관 변화를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 방법의 구현예에서, 모반은 선형 표피 모반(nevus)이다. 일부 구현예에서, 방법은 피부에 레이저 적용을 포함하는 피부 시술로부터 피부 건강 회복을 향상시키는 것에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 방법은 피부에 레이저 적용을 포함하는 피부 시술로부터 피부를 재활(rejuvenating)시키는 것에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 화상, 흉터 교정, 성형 수술, 또는 피부 이식편의 배치를 수반하는 다른 시술과 같은 피부 이식(grafting) 부위의 치유를 개선 또는 촉진시키는데 유용하다. 다른 곳에서 기재된 바와 같이, 이식편이 취해지는 피부 부위의 치유는 또한 본원에 기재된 화합물의 이점이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 피부 이식편 또는 피부 이식 부위의 치유를 향상시키는데 유용하다. 일부 구현예에서, 피부 이식은 화상을 치료하기 위해 제공된다. 일부 구현예에서, 화상은 부분-두께 화상이다. 일부 구현예에서, 화상은 전층-두께 화상이다. 일부 구현예에서, 피부 이식은 예를 들어 큰 개방 상처로부터의 부상을 치료하기 위해 제공된다. 일부 구현예에서, 피부 이식은 욕창과 같지만 이에 제한되지 않는 궤양을 치료하기 위해 제공된다. 일부 구현예에서, 피부 이식은 피부 감염을 치료하기 위해 제공된다. 일부 구현예에서, 피부 이식은 피부암 수술 부위를 치료하기 위해 제공된다. 일부 구현예에서, 피부 이식은 공여자 피부의 공급으로부터 입수가능한 것보다 더 큰 표면적을 덮도록 제공된다.
일부 구현예에서, 피부에서 모낭 성장을 향상시키는 방법은 피부에서 모낭 성장을 향상시키는데 효과적인 양의 피드게틴-유사 2의 억제제를 피부에 직접 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 피부에서 모발 성장을 증가시킨다.
심장의 치료
일 구현예에서, 상처는 심장 조직 상처이다. 일 구현예에서, 상처는 예를 들어 심근 경색으로부터 기인하는 심혈관 상처이다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 심장 혈관신생을 증진시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 심근 경색 후 심장 기능을 개선한다. .
신경계의 치료
일 구현예에서, 상처는 신경 상처이다.
일 구현예에서, 상처는 중추 신경계의 상처이다. 일부 구현예에서, 상처는 척수 부상이다. 일부 구현예에서, 흉터의 방지, 감소 또는 억제는 신경 재연결 및/또는 신경 기능을 향상시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 신경 성장을 증진시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 신경 염증을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 신경 절제로부터의 회복을 증진시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 부상 후 신경 재생을 증진시킨다. 일부 구현예에서, 상처는 말초 신경계의 상처이다. 일부 구현예에서, 상처는 해면 신경 부상이다. 일부 구현예에서, 흉터의 방지, 감소 또는 억제는 신경 재연결 및/또는 신경 기능을 향상시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 말초 신경 성장을 증진시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 신경 염증을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 신경 절제로부터의 회복을 증진시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 부상 후 신경 재생을 증진시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 신경 및 다른 조직에서 항염증 활성을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 생리적 신경차단(neuropraxia)을 치료하거나 방지한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 신경 보존 수술의 유해한 후유증을 치료하거나 방지한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 일측성 또는 양측성 해면 신경 절제 후 발기 반응의 회복을 증진시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 해면 신경 부상의 2주 이내에 발기 반응을 회복시킨다. 일부 구현예에서, 해면 신경 부상은 전립선 절제술과 같은 외과적 시술의 결과이다. 일부 구현예에서, 전립선절제술은 근치적 전립선절제술이다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 siRNA를 포함하는 웨이퍼는 수술 부위에 이식된다. 일부 구현예에서, 100 mg 웨이퍼 당 약 6.6, 약 13.3 또는 약 26.6 마이크로그램 농도의 siRNA가 이식된다. 일부 구현예에서, 웨이퍼는 약 2.5%의 콜라겐, 약 7.5%의 콘드로이틴 설페이트, 약 82.5%의 폴리비닐피롤리돈 및 약 7.5%의 폴리에틸렌 글리콜 400을 포함한다.
눈의 치료
일 구현예에서, 상처는 눈의 상처(라식 수술, 라섹 수술, PRK 수술, 녹내장 여과 수술, 백내장 수술, 또는 수정체 피막이 흉터를 받을 수 있는 수술과 같은 눈 수술로부터 기인하는 흉터의 억제를 포함함), 예를 들어 각막 반흔화를 일으키는 것; 피막 수축을 받는 상처(이는 유방 이식물 주변에서 흔함)이다.
맥관 구조의 치료
일 구현예에서, 상처는 순환계의 상처, 예를 들어 혈관, 정맥 또는 동맥 판막, 심장 판막과 같지만 이에 제한되지 않고, 또는 비제한적인 예시로써, 이식 장기의 교체 심장 판막, 우회 이식편, 맥관 구조의 통합을 향상시키는 것이다.
근골격계의 치료
일 구현예에서, 상처는 힘줄, 인대 또는 근육의 상처이다.
구강의 치료
일 구현예에서, 상처는 입술 및 입천장을 포함하는 구강 상처이다. 일부 구현예에서, 본 방법은 구순열 또는 구개열의 치료로부터 기인하는 흉터를 억제한다.
장기 및 강(cavity)의 치료
일 구현예에서, 상처는 내부 장기, 예를 들어 그러나 이에 제한되지 않는 간, 심장, 뇌, 소화 조직 및 생식 조직의 상처이다.
일 구현예에서, 상처는 복강, 골반강 및 흉강과 같지만 이에 제한되지 않는 체강의 상처이다. 일부 구현예에서, 흉터의 억제는 유착 형성의 발생 횟수 및/또는 형성된 유착의 크기를 감소시킬 수 있다.
외과적 상처의 치료
일 구현예에서, 상처는 외과적 상처, 예를 들어 흉터 교정과 같은 미용 시술과 연관된 특정 상처이나 이에 제한되지 않는다. 본 개시내용의 약제 및 방법이 피부의 상처의 치유를 증진시키기 위해 사용되는 것이 특히 바람직하다. 다른 비제한적인 예는 눈 및 신체의 다른 부분에 대한 외과적 시술을 포함한다. 본원에 주목된 바와 같이, 본 개시내용의 화합물 또는 조성물은 부상 또는 상처가 발생하기 전의 부위, 예를 들어 외과적 절개에 적용될 수 있다.
본 개시내용의 다른 양태들
본원에 기재된 방법 및 조성물의 구현예에서, 대상체는 포유동물이다. 일 구현예에서, 대상체는 인간이다.
본원에서 사용되는, 상처 치유의 "증진", 또는 문법적 등가물은 치료되지 않은 상처에서 상응하는 파라미터에 비해, 상처 회복, 상처 크기 감소, 상처 가장자리 사이의 거리 감소, 딱지 형성, 섬유증식 및 재상피화의 시각적 외형 중 임의의 하나 이상의 촉진을 의미한다.
본원에서 사용되는, "상처"는 외부 제제에 의해 유발되는 상피, 결합 조직 및 근육 조직을 포함하는 장기 또는 조직(피부 포함)의 구조에서의 파열 또는 불연속성이다. 상처의 예는 피부 상처, 궤양, 욕창, 찰과상(grazes), 열상(tears), 자상(cuts), 천공, 고막 천공, 화상(bums), 및 성형 수술 절차의 결과인 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
투여 방법
본 개시내용으로부터 유도될 수 있는 이점들은 신체 전반의 임의의 부위에서 상처에 적용가능할 수 있다. 일부 구현예에서, 치유가 증진되는 상처는 피부 상처이다. 예시적인 목적을 위해, 본 개시내용의 구현예는 일반적으로 피부 상처를 참조하여 설명될 것이지만, 이들은 다른 조직 및 장기에 적용가능하다. 단지 예로서, 또 다른 바람직한 구현예에서, 상처는 순환계, 특히 혈관의 상처일 수 있다. 본 개시내용에 따라 상처 치유가 증진될 수 있는 다른 상처는 수술의 결과로서 또는 화상의 결과로서 포함된다. 본 개시내용에 따라 상처 치유가 증진될 수 있는 다른 상처에는 압박에 의한 피부 궤양, 정맥 정체, 또는 당뇨병이 포함된다. 일부 구현예에서, 상처의 결과는 흉터이며, 이는 신체 내 또는 신체 상의 임의의 부위에서 본원에 기재된 바와 같이 치료되어 상처의 흉터를 방지하거나 감소시킬 수 있다.
일 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 상처에 국부적으로 투여된다. 일 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 정맥 또는 동맥을 통해 투여된다. 일 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 주사, 카테터 삽입 또는 삽관에 의해 투여된다. 일 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 억제제를 용출시키는 이식, 예를 들어 용출 스텐트 또는 용출 피부 패치로부터 투여된다.
치료시 투여되는 억제제의 투여량은 특정 억제제의 약역학적 특성 및 이의 투여 방식 및 경로; 수용자의 연령, 성별, 대사율, 흡수 효율, 건강 및 체중; 증상의 성질 및 정도; 투여되는 동시 치료의 종류; 억제제와의 치료 빈도 및 원하는 치료 효과 등의 요인에 따라 달라질 것이다.
억제제의 투여 단위는 단일 화합물, 또는 화합물과 하나 이상의 항-감염 화합물(들) 또는 상처 치유-증진 화합물(들)의 혼합물을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 1회 상처에 적용된다. 일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 1회 초과로 상처에 적용된다. 일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 스텐트, 웨이퍼, 이식, 붕대 또는 임의의 다른 서방형 장치와 같지만 이에 제한되지 않는 제어된 전달 장치의 형태로 상처에 적용된다. 일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 드레싱이 변경될 때마다 상처에 적용된다.
일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 치유가 발생할 때까지 상처에 적용된다. 일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14일 동안 부위에 적용되거나 유지된다. 일부 구현예에서, 피드게틴-유사 2의 억제제는 수술 시에 수술 부위에 이식되거나 배치된다. 일부 구현예에서, 이러한 배치는 피드게틴-유사 2의 억제제가 일정 기간 동안 부위에서 작용할 수 있도록 제어된 방출 조성물의 형태이다.
본원에 기재된 다양한 요소들의 모든 조합들은 본원에 달리 명시되지 않거나 또는 달리 명백히 문맥에 의해 모순되지 않는 한, 본 개시내용의 범위 내에 있다.
하기 숫자가 매겨진 구현예는, 비제한적이면서, 본 개시내용의 특정 양태의 예시이다:
1. 핵산 분자로서,
5'-fUfUmA fCmAfC AGU AUU AAA GCG ATT (서열번호:17);
(Phos) 5'-U CGC UUU AAU ACU G UG UAA TT (서열번호:18);
5'-UUACACAGUAUUAAAGCGATT-3' (서열번호:34);
(Phos) 5' - mUmCGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:35);
(Phos) 5' - mU(s)mC(s)GCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:36);
(Phos) 5' - fUfCGCUUUAAUACUGUGUAATT -3' (서열번호:37);
(Phos) 5' -fU(s)fC(s)GCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:38);
(Phos) 5' - mU(s)mC(s)GCUUUAAUAmCfUmGfUmGfUmAmATT-3' (서열번호:39);
(Phos) 5' - U(s)CGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:40);
(Phos) 5' - mUfCmGfCmUfUmUAAfUmAfCmUGmUmGfUmAmATT (서열번호:41);
5'-mUmUmAmCmAmCmAmGmUmAmUmUmAmAmAmGmCmGmAmUmU-3' (서열번호:42);
(Phos) 5' - mUmCmGmCmUmUmUmAmAmUmAmCmUmGmUmGmUmAmAmUmU-3' (서열번호:43);
5' mUmUmAmCmAmCmAmGmUmAmUmUmAmAmAmGdCdGdATT-3' (서열번호:44);
5' mUmUmAmCmAmCmAmGmUmAmUmUmAmAmAmGdCmGmATT-3' (서열번호:45);
5' UUACACAGUAUUAAAGCGA-3' (서열번호:46);
(Phos) 5' - U(s)CGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:47);
(Phos) 5' - UCGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:48);
(Phos) 5' - U(s)C(s)GCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:49);
5'-mUmUACACAGUAUUAAAGCGA-3' (서열번호:50);
(Phos) 5' - U(s)CGCUUUAAUACUGUGUmAmATT-3' (서열번호:51);
(Phos) 5' - UCGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:52);
(Phos) 5' - U(s)C(s)GCUUUAAUACUGUGUAA T(s)T-3' (서열번호:53);
5' lUlUlAlClACAGUAUUAAAGCGATT-3' (서열번호:54);
(Phos) 5' - UCGCUUUAAUACUGlUlGlUlAlA TT -3' 서열번호:55);
5' fUfUlAfClACAGUAUUAAAGCGA-3' (서열번호:56); 또는
(Phos) 5' - mU(s)mCmGCUUUAAUACUGUGUAATT -3' (서열번호:57)
로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열로 이루어지고,
여기서 d(뉴클레오티드) = 데옥시-(뉴클레오티드), m(뉴클레오티드) = 2'-O-메틸 뉴클레오티드, T = 티미딘, f(뉴클레오티드) = 2'-플루오로데옥시 뉴클레오티드, (Phos) = 포스포디에스테르 캡; 대문자 뉴클레오티드 = RNA 뉴클레오티드, , l(뉴클레오티드) = 잠긴 뉴클레오티드, 및 (s) = 포스포로티오에이트인, 핵산 분자.
2. 구현예 1의 2개의 핵산 분자로 이루어진 이중 가닥 핵산.
3. 구현예 2에 있어서, 서열번호 17, 34, 42, 44, 45, 46, 50 및 54로부터 선택되는 센스 가닥; 및 서열번호 2, 18, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 43, 47, 48, 49, 51, 52, 53, 55 및 57로부터 선택되는 안티센스 가닥으로 이루어진, 이중 가닥 핵산.
4. 구현예 2에 있어서, 서열번호:17 및 서열번호:18; 서열번호:34 및 서열번호:35; 서열번호:34 및 서열번호:36; 서열번호:34 및 서열번호:37; 서열번호:34 및 서열번호:38; 서열번호:34 및 서열번호:39; 서열번호:17 및 서열번호:40; 서열번호:34 및 서열번호:41; 서열번호:42 및 서열번호:43; 서열번호:44 및 서열번호:43; 서열번호:45 및 서열번호:43; 서열번호:46 및 서열번호:47; 서열번호:46 및 서열번호:48; 서열번호:46 및 서열번호:49; 서열번호:50 및 서열번호:51; 서열번호:46 및 서열번호:52; 서열번호:46 및 서열번호:53; 서열번호:54 및 서열번호:55; 또는 서열번호:56 및 서열번호:57로 이루어진, 이중 가닥 핵산.
5. 구현예 1의 핵산 분자를 포함하는 이중 가닥 핵산.
6. 구현예 5에 있어서, 각각의 가닥이 52개 이하의 뉴클레오티드를 갖는, 이중 가닥 핵산.
7. 구현예 5에 있어서, 서열번호 17, 34, 42, 44, 45, 46, 50 및 54 중에서 선택되는 핵산 분자를 포함하는 센스 가닥; 및 서열번호 2, 18, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 43, 47, 48, 49, 51, 52, 53, 55 및 57 중에서 선택되는 핵산 분자를 포함하는 안티센스 가닥으로 이루어진, 이중 가닥 핵산.
8. 구현예 5에 있어서, 서열번호:17 및 서열번호:18; 서열번호:34 및 서열번호:35; 서열번호:34 및 서열번호:36; 서열번호:34 및 서열번호:37; 서열번호:34 및 서열번호:38; 서열번호:34 및 서열번호:39; 서열번호:17 및 서열번호:40; 서열번호:34 및 서열번호:41; 서열번호:42 및 서열번호:43; 서열번호:44 및 서열번호:43; 서열번호:45 및 서열번호:43; 서열번호:46 및 서열번호:47; 서열번호:46 및 서열번호:48; 서열번호:46 및 서열번호:49; 서열번호:50 및 서열번호:51; 서열번호:46 및 서열번호:52; 서열번호:46 및 서열번호:53; 서열번호:54 및 서열번호:55; 또는 서열번호:56 및 서열번호:57을 포함하는, 이중-가닥 핵산.
9. 구현예 5에 있어서, 각각의 가닥이 52개 이하의 뉴클레오티드를 갖는, 이중 가닥 핵산.
10. 구현예 1 내지 9 중 어느 한 구현예에 있어서, 적어도 하나의 뉴클레오티드가 변형되거나 추가로 변형된, 핵산 분자.
11. 구현예 10에 있어서, 상기 변형되거나 추가로 변형된 뉴클레오티드가 2'-O-메틸-아데노신, 2'-O-메틸-우리딘, 2'-O-메틸-시토신, 2'-O-메틸-구아노신, 2'-O-메틸-티미딘, 2'-플루오로-아데노신, 2'-플루오로-시티딘, 2'-플루오로-구아노신, 2'-플루오로-우라실, 2'-플루오로-티미딘,데옥시시토신, 데옥시구아노신, 데옥시아데노신, 데옥시티미딘, 데옥시우리딘, 잠긴 아데노신, 잠긴 우리딘, 잠긴 구아노신, 잠긴 시티딘, 포스포로티오에이트 및 포스포디에스테르 캡으로부터 선택되는, 핵산 분자.
12. 구현예 1 내지 11 중 어느 한 구현예의 핵산 분자 및 약학적으로 허용되는 담체, 비히클, 부형제 또는 희석제를 포함하는 조성물.
13. 구현예 12에 있어서, 상기 담체가 식염수, 당, 폴리펩티드, 중합체, 지질, 크림, 겔, 미셀 물질, 웨이퍼 및 나노입자 중 적어도 하나를 포함하는, 조성물.
14. 구현예 12에 있어서, 상기 담체는 글루코스 용액, 폴리양이온성 결합제, 양이온성 지질, 양이온성 미셀, 양이온성 폴리펩티드, 친수성 중합체 그라프트된 중합체, 비-천연 양이온성 중합체, 양이온성 폴리아세탈, 친수성 중합체 그라프트된 폴리아세탈, 리간드 작용기화된 양이온성 중합체, 핵산 전달 비히클, 리간드 작용기화된-친수성 중합체 그라프트된 중합체, 및 리간드 작용기화된 리포솜 중 적어도 하나를 포함하는, 조성물.
15. 구현예 14에 있어서, 상기 담체가 양이온성 중합체-핵산 복합체를 포함하는, 조성물.
16. 구현예 14에 있어서, 상기 친수성 중합체가 폴리에틸렌글리콜(PEG)인, 조성물.
17. 구현예 13에 있어서, 상기 나노입자가 리포솜 나노입자인, 조성물.
18. 구현예 17에 있어서, 상기 리포솜이 적어도 하나의 2' 당 변형으로 추가로 작용기화되는, 조성물.
19. 치료적 유효량의 구현예 12의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 상처를 치료하거나 흉터를 억제, 감소 또는 방지하는 방법.
20. 구현예 19에 있어서, 상기 상처 또는 흉터가 피부, 눈, 중추 신경계, 말초 신경계, 심장 조직, 혈관, 힘줄, 인대, 근육, 구강, 입술, 입천장, 내부 장기, 외과적 상처, 복강, 골반강 또는 흉강의 것인, 방법.
21. 구현예 20에 있어서, 상기 눈의 상처 또는 흉터가 각막 또는 수정체 피막의 것인, 방법.
22. 구현예 20에 있어서, 상기 상처 또는 흉터가 눈 수술, 라식 수술, 라섹 수술, PRK 수술, 녹내장 여과 수술, 백내장 수술, 및 각막 반흔화로부터 기인하는, 방법.
23. 구현예 19에 있어서, 흉터의 억제는 유착 형성의 발생 횟수 및/또는 형성된 유착의 크기를 감소시키는, 방법.
24. 구현예 19에 있어서, 상기 흉터의 방지, 감소 또는 억제가 신경 재연결 및/또는 신경 기능을 향상시키는, 방법.
25. 구현예 20에 있어서, 상기 심장 조직 상처가 심근 경색으로부터 유래하는, 방법.
26. 구현예 20에 있어서, 상기 상처는 신경 상처인, 방법.
27. 구현예 20에 있어서, 상기 상처가 피막 수축을 초래하는, 방법.
28. 구현예 20에 있어서, 상기 상처가 외과적 상처인, 방법.
29. 구현예 20에 있어서, 상처는 미용 시술 또는 흉터 교정으로부터 유래하는, 방법.
30. 피부 이식편 또는 피부 이식 부위의 치유를 촉진하는 유효량의 구현예 12의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 피부 이식편 또는 피부 이식 부위의 치유를 촉진 또는 개선하는 방법.
본 개시내용은 하기 실험 세부사항으로부터 더 잘 이해될 것이다. 그러나, 당업자는 논의된 특정 방법 및 결과가 이후 이어지는 청구항에서 더 충분히 기재되는 바와 같이 단지 개시내용을 예시하는 것임을 쉽게 인식할 것이다.
실시예
실시예 1. siRNA 합성
포스포라미다이트 화학을 사용하여 종래의 고상 올리고뉴클레오티드 합성에 의해 2개의 단일 가닥의 올리고뉴클레오티드(센스 및 안티센스)를 합성함으로써 서열번호: 17-18 및 34-57의 올리고뉴클레오티드 서열을 제조하였다. 제어된 정공 유리(CPG) 또는 폴리스티렌과 같은 고체 지지체 상의 포스포라미다이트 방법에 의한 올리고뉴클레오티드 사슬의 조립은 도 1에 나타나 있다.
각각의 사이클은 5' 탈보호, 커플링, 산화, 및 캡핑으로 이루어진다. 각각의 커플링 단계는 적절한 활성화된 아미다이트와 지지체-고정된 보호된 뉴클레오시드 또는 올리고뉴클레오티드의 유리 5' 히드록실기의 반응에 의해 수행된다. 이후 올리고뉴클레오티드는 탈보호되고 지지체로부터 절단된다. 이후 2'TBDMS 보호기를 분해하여 조(crude) 센스 또는 안티센스 가닥을 얻는다. 이후 센스 및 안티센스 가닥이 개별적으로 정제된다. 정제된 단일 가닥을 분석하여 siRNA 듀플렉스(도 2에서 SiFi2로 지칭됨)로 어닐링하기 전에 정확한 분자량 및 불순물 프로파일을 확인한다. 어닐링된 듀플렉스를 냉동-건조하여 활성 약학적 성분(API)을 얻는다. API는 -20℃에 보관한다.
도 3은 한 쌍의 올리고뉴클레오티드, 서열번호:17 (도 3a)의 센스 핵산 분자 및 서열번호:18 (도 3b)의 안티센스 핵산 분자의 화학 구조를 도시한다. 서열번호:17/18의 계산된 질량, 검출된 질량 (질량 분석법을 통해), 및 화학식을 표 1에서 찾을 수 있다. 명칭 17/18은 서열번호:17 및 서열번호:18의 듀플렉스를 지칭한다.
표 1:
Figure pct00003
본원에 기재된 다른 핵산 분자도 동일한 방식으로 제조하였다.
실시예 2. U2OS 세포의 siRNA 형질감염
하기 방법은 본원에 기재된 핵산 및 siRNA의 효능을 테스트하기 위한 제조에서 U2OS 세포를 형질감염시키기 위해 사용된다.
siRNA 형질감염 프로토콜 (6 웰 플레이트). 웰 당 100,000개의 U2OS 세포 (6 웰 디쉬)를 씨딩(seed)하고 2일 동안 배양한다 (약 80% 컨플루언시). 세포는 형질감염 12시간 전에 혈청 미함유 배지여야 한다. 리포펙타민 RNAiMAX: 3.5 μL의 siRNA (20 μM 스톡)/형질감염 (70 pmol)을 250 μL OptiMEM으로 희석한다. 이후 3.5 μL의 리포펙타민 3000을 250 μL의 OptimMEM으로 희석한다. 리포펙타민/OptiMEM 용액에 siRNA/OptiMEM을 혼합한다. 실온에서 5분 동안 인큐베이팅한다. 혼합물을 웰에 적가한다. 500 μL의 혈청 미함유 배지를 첨가한다.
siRNA 형질감염 프로토콜 (24 웰 플레이트). 웰 당 20,000개의 U2OS 세포 (6 웰 디쉬)를 씨딩하고 2일 동안 배양한다 (약 80% 컨플루언시). 리포펙타민 3000 프로토콜을 따른다. 125 μL OptiMEM에 .7 μL의 siRNA(20 μM 스톡)/형질감염(70 pmol)을 희석한다. .7 μL의 리포펙타민 3000을 125 μL의 OptimMEM으로 희석한다. 리포펙타민/OptiMEM 용액에 siRNA/OptiMEM을 혼합한다. 실온에서 15분 동안 인큐베이팅한다. 혼합물을 웰에 적가한다. 250 μl의 혈청 미함유 배지를 첨가한다.
실시예 3. HUVEC의 siRNA 핵감염
HUVECs에 대해 하기 핵감염 프로토콜을 따랐다.
용액 1: 125 mM Na2HPO4 (100 ml H2O 중 1.4998 g), 12.5 mM KCl (100 mL H2O 중 0.09318 g). 용액 2: 55 mM MgCl2(100 mL H2O 중 0.9524 g). 작동 용액: 80% 용액 1, 20% 용액 2. 핵감염 당 100 μL를 사용한다.
프로토콜. 인큐베이터에 준비된 플레이트에 온열 M200 배지를 준비한다. 시작하기 전에 Nucleofector에서 HUVEC 핵감염 프로토콜(U2OS의 경우 CM-104)을 선택한다. 세포들이 핵감염 48시간 전에 분리된 경우에 가장 좋다. 세포들이 핵감염 용액에서 소비하는 시간을 최소화하면서 최대한 빠르게 작업한다.
절차: HUVEC의 1 T75 트립신화 및 카운트. 보통 약 130만 세포/플라스크. 1200 rpm에서 5분 동안 세포를 펠릿화한다. 핵감염 용액에 펠릿을 재현탁시키고 핵감염 큐벳 수를 고르게 분리한다. 100μL/핵감염. 큐벳 당 1x104 내지 1x106 세포로 핵감염시킨다. 큐벳에 직접 핵감염될 핵산을 첨가한다 (30 pmol siRNA = 1.5 μL의 20 μM 스톡 siRNA/1 내지 2 ug 플라스미드 DNA). 옆면을 가볍게 쳐서(flick) 거품을 제거한다. 큐벳을 Nuclefector에 넣고 실행한다. 500 μL 온열 배지를 큐벳에 직접 첨가한다. 대기중인 온열 배지로 찬 웰 플레이트에 세포를 플레이팅한다. 플레이트를 돌려 세포를 고르게 분산시킨다. 24 내지 48시간 후에 녹다운/유전자 발현을 분석한다.
실시예 4. 효능 테스트 - 이동 검정
U2OS 세포를 6-웰 디쉬에서 웰(웰 당 100,000개의 세포)에 씨딩하고 약 80% 컨플루언시에 도달할 때까지 2일 동안 배양하였다. 상기 기재된 바와 같이, 3.75 μL 리포펙타민 3000을 사용하여 3.5 μL의 20 μM siRNA (70 pmol)로 세포를 제조사의 프로토콜에 따라 형질감염시켰다. 24시간 후, 세포를 세척하고, 24, 48, 또는 72시간에 수확될 때까지 성장시켰다.
상기 기재된 바와 같은 siRNA를 포함하는 U2OS 세포 및 HUVEC의 이동은 대조군 비-표적화 siRNA(siN) 또는 FL2 siRNA로 치료한 후 U2OS 세포로 수행된 스크래치 검정으로부터의 대표적인 결과를 나타내는 시간-경과 위상-차 이미지를 사용하여 모니터링하였다. 도 4a는 검정 동안 촬영한 이미지의 예를 나타내고; 스케일 바는 100 ㎛이다. (4b) 대조군 및 FL2-결실 세포의 평균 이동 속도를 비교한 그래프. 데이터는 3개의 독립적인 스크래치 검정 실험으로부터 축적되었다. (4c) 이동 제어 대 FL2-결실 셀의 방향성 지속성을 비교한 그래프. 방향성은 시작점과 끝점 사이의 거리(D)를 각 궤적의 총 경로 길이(L)로 나눈 값으로 결정하였다. 오차 막대는 평균의 표준 오차(SEM)를 나타낸다. ***P<0.05.
동일한 검정을 사용하여, 서열번호: 17-57 중에서 하기 이중-가닥 siRNA를 테스트하여 이들 siRNA가 세포 표현형에 영향을 미쳤음을 입증하였다. 테스트된 siRNA는 서열번호:17 및 서열번호:18; 서열번호:34 및 서열번호:35; 서열번호:34 및 서열번호:36; 서열번호:34 및 서열번호:37; 서열번호:34 및 서열번호:38; 서열번호:34 및 서열번호:39; 서열번호:17 및 서열번호:40; 서열번호:34 및 서열번호:41; 서열번호:42 및 서열번호:43; 서열번호:44 및 서열번호:43; 서열번호:45 및 서열번호:43; 서열번호:46 및 서열번호:47; 서열번호:46 및 서열번호:48; 서열번호:46 및 서열번호:49; 서열번호:50 및 서열번호:51; 서열번호:46 및 서열번호:52; 서열번호:46 및 서열번호:53; 서열번호:54 및 서열번호:55; 서열번호:56 및 서열번호:57이고; U2OS를 상기 기재된 바와 같이 각각의 siRNA로 형질감염시키고, 컨플루언시까지 성장시켰다. 이후 웰을 스크래칭하고 치유 과정에서 이미지를 얻었다. 데이터를 U2OS 셀의 초기 스크린의 도 5에 나타내었다.
초기 스크린에서 식별된 특정 후보를 도 6에 나타낸 바와 같이 n=4의 더 큰 샘플 크기로 테스트했다.
HUVEC 세포를 상기 기재된 바와 같이 대조군 siRNA 또는 siRNA를 표적화하는 FL2로 핵감염시키고, 플레이팅하고 시간-경과 스크래치 검정을 수행하기 전에 컨플루언스에 도달하도록 하였다. 개별 세포를 FIJI를 사용하여 추적하였고 세포 이동 속도는 Diper Excel 매크로를 사용하여 분석하였다. 유의한 차이를 알아보기 위해 스튜던트 t 테스트(Student's t test)를 수행하였다. n≥9 세포. 세포를 웨스턴 블롯에 대해 수확하고 탐침하여 siRNA 매개된 FL2 녹다운을 확인하였다. GAPDH를 로딩 대조군으로 사용하였다.
세포 추적은 이러한 변형이 녹다운을 효과적으로 생산하면서 세포 이동 속도를 개선했다는 것을 명시하였다. 서열번호: 17/18을 포함하는 siRNA에 대한 녹다운 결과는 도 7에 나타내었고, 이동 데이터는 도 8에 나타내었다.
시험관 내에서, 인간 조직 배양 세포로부터 서열번호:17/18 siRNA에 의한 FL2의 결실은 부분적으로 방향성 운동성의 증가로 인한 세포 이동 속도의 증가를 초래한다. 서열번호: 17-57 중에서 핵산 분자를 포함하는 다른 siRNA 서열 또한 이동 속도의 증가를 나타낸다.
실시예 5. siRNA 조성물
본 개시내용의 siRNA를 포함하는 나노입자(np)를 500 μl의 테트라메틸 오르소실리케이트(TMOS)를 사용하여 제형화하고, 100 μl의 1 mM HCl 존재 하에 얼음 상에서 약 15분 동안 초음파처리에 의해 단일상이 형성될 때까지 가수분해하였다. 가수분해된 TMOS (100 μl)를 pH 7.4 10 mM 포스페이트를 함유하는 20 μl의 siRNA (마우스 FL2 (시그마-알드리치, SASI_Mm02_00354635) 또는 음성 대조군) 용액 900 μl에 첨가하였다. 10분 이내에 겔이 형성되었다. 겔을 -80℃에서 15분 동안 냉동시키고 동결 건조시켰다.
본 개시내용의 siRNA를 포함하는 웨이퍼는 2.5% 콜라겐, 7.5% 콘드로이틴 설페이트, 82.5% 폴리비닐피롤리돈, 및 7.5% 폴리에틸렌 글리콜 400으로부터 제조된다. 이러한 웨이퍼는 100 mg 웨이퍼 당 6.6, 13.3 또는 26.6 마이크로그램 siRNA를 함유하도록 제조된다. 웨이퍼는 신경-보존 수술 중이나 근치적 전립선절제술과 같은 신경 기능 장애의 위험이 높은 시술 중과 같은 수술 부위에 이식된다.
실시예 6. 나노입자 마이크로에멀젼 제형화
방법론에 필요한 구성성분: 조닐 FSO-100 (FSO), 폴록사머 188, 퍼플루오로데칼린 (PFD), DNAse/RNAse 미함유 물, 본원에 기재된 바와 같은 siRNA, 또는 대조군.
제형화를 시작하기 전에 절차 전 주의사항. 프로토콜은 DNAse/RNAse 미함유 물을 사용하여 실온에서 무균 환경에서 수행한다. 제형을 처리하는 데 필요한 용기를 무균 층류(laminar) 후드에서 RNAse zap으로 사전 세척하고, 오토클레이빙하고, DNAse/RNAse 미함유 물로 헹군다.
유기상의 제조. PFD의 20% 용액은 조직 배양 층류 후드 내의 FSO에서 제조된다. 100mL의 배치 제형의 경우, 20g의 FSO를 칭량하고 PFD를 첨가하여 부피를 80mL로 한다. 혼합물을 와류시키고, 초음파 물 배치에서 대안적으로 10분마다 1시간 동안 초음파처리한 후 4시간 동안 교반하였다. FSO가 PFD에 조금 용해성이기 때문에 주기적으로 혼합물의 일관성을 확인해야 한다. FSO의 큰 덩어리 및 공기의 포집을 피하기 위해, 수분 또는 물에 혼합물이 노출되지 않도록 혼합물을 초음파 물 배치로 초음파처리되어야 한다. 용해도는 실온에서 하룻밤 교반과 24시간 사이 정도로 걸릴 수 있다. 용해되지 않은 FSO의 큰 덩어리가 존재하는 경우, 실온에서 5분 동안 느린 원심분리 @300 g에 의해 혼합물로부터 분리되어야 한다. 용해된 상은 무균 팔콘 튜브(falcon tube)로 조심스럽게 경사분리(decant)되어야 한다. 상층액을 한쪽에 두고, 10 mL의 PFD를 FSO의 큰 덩어리에 첨가하고, 혼합물을 캡을 단단히 닫고 와류시킨 후 초음파 수조에서 초음파 처리하였다. PFD의 더 큰 덩어리들이 PFD에 완전히 용해될 때까지 절차를 반복해야 한다. PFD 혼합물 모두를 90mL로 풀링한다. 이는 균질한 현탁액을 초래할 것이다.
대안적인 스케일-업(scale-up) 공정은 유기 상을 더 적은 양으로 제조한 후 모든 분획을 마지막에 풀링하여 균질한 현탁액을 수득함으로써 수행될 수 있다.
유기상의 입자 크기의 특성규명. PFD의 혼합물은 특정 입자 크기가 바람직하게는 5 마이크론 미만이어야 한다. PFD에서 FSO를 하룻밤 동안 교반한 후, 혼합물의 분취액(10 μL)을 희석하여 동적 광산란(DLS)시켜 최대 안정성을 갖도록 최적화된 입자 크기를 모니터링한다. 더 높은 입자 크기에서, 제형의 안정성은 덜 실행 가능하고 최대 효율을 갖기 위해, 약 또는 5 마이크로미터 미만의 입자 크기를 갖는 것이 더 바람직하다. 입자 크기가 DLS 측정에 의해 5 미크론보다 큰 경우, 탐침을 사용하는 초음파 처리의 추가 단계가 20 초 간격으로 느린 펄스로 수행된다. 10분 이상 초음파 처리 절차를 초과하지 않도록 주의해야 한다. DLS 측정에 의해 5 미크론보다 더 큰 입자가 여전히 존재하는 경우, 혼합물은 균일한 입자 크기의 혼합물을 갖도록 멸균 조건 하에서 밤새 교반되어야 한다.
DLS 결과: 3.433 ± 0.215 미크론. 기기: Brookhaven Instruments Corporation, 입자 크기 분석기
수성상의 제조. 별도의 50 mL 팔콘 튜브에서, DNAse/RNAse 미함유 물 중의 폴록사머 용액 4%를 제조한다. 9mL의 DNAse/RNAse 미함유 물에 400mg의 폴록사머를 칭량하고 30분마다 일관성을 확인하면서 2시간 동안 뉴테이터(nutator)에서 혼합한다. 폴록사머를 DNAse/RNAse 미함유 물에 완전히 용해시켜야 한다. 폴록사머 용액을 사용할 때까지 얼음 수조에서 냉각하거나 냉장 보관해야 한다. 폴록사머 용액은 깨끗한 층류 후드에서 만들어져야 하고 후드 바깥을 단단히 캡핑한 후 뉴테이터를 사용하여 혼합할 수 있다. (참고: 폴록사머 용액을 9 mL의 물로 제조하고, DNAse/RNAse 미함유 물에 혼합된 1 mL의 siRNA를 첨가하여 폴록사머의 수성상을 제조한다.)
수성상 중 siRNA/대조군의 첨가. siRNA 분말 또는 액체를 사전-냉각된 DNAse/RNAse 미함유 물에서 혼합하고, 1mL로 만든다. siRNA를 제형을 만들기 직전에 얼음 양동이에서 DNAse/RNAse 미함유 물로 빠르게 해동하고 희석한다. 제형에 대한 모든 것이 준비될 때까지 siRNA를 해동하지 않는다. 부드럽게 1mL의 siRNA 용액을 층류 후드에서 사전-냉각된 폴록사머 용액 9mL에 첨가하고, 잘 혼합하여 균질한 용액을 수득한다. 이 절차는 인증된 생물안전 후드에서 수행되어야 한다.
에멀젼 제형의 제조. 빙조 상의 층류 후드 내부의 자기 교반 막대를 사용하여 1200rpm의 일정한 속도로 PFD 혼합물을 교반한다. 마이크로 에멀젼 형성의 일관성 및 안정성은 광학 현미경에 의해 주기적으로 확인된다. 천천히 마이크로피펫을 사용하여 폴록사머 및 siRNA 혼합물의 수성상을 부드럽게 첨가한다. 수성상의 느린 첨가는 중요하고 더 빠른 첨가는 유기상과 수성상의 분리를 초래할 수 있다. 총 10 mL의 수성상을 0.5 mL/분 이하의 속도로 20분 이상의 기간에 걸쳐 첨가하여 안정한 에멀젼을 수득한다. 용액이 4℃에서 1시간 동안 유지되는 동안 상분리를 모니터링하여 에멀젼의 안정성을 테스트해야 한다.
에멀젼 제형 현미경 이미지의 특성규명. DLS 결과: 4.358 ± 0.657 미크론. 기기: Brookhaven Instruments Corporation, 입자 크기 분석기
제타 전위 결과: -16.97 ± 2.09 mV. 기기: Brookhaven Instruments Corporation, PALS 제타 전위 분석기
유화 안정성 (1시간) = 100%;
(Vb - Va)/Vb × 100%를 사용하고; 여기서 Vb는 에멀젼화 전의 수성상의 부피이고; Va는 에멀젼화 후의 수성상의 부피이다
pH: 6.0
전하: 중성
저장 및 사용. 사용할 때까지 에멀젼 또는 스프레이 제형을 4□C에 보관한다(냉동하지 않음). 에멀젼을 사용하기 전에 잘 흔들어 주어야 한다.
실시예 7. siRNA 콜라겐 - 계면활성제 중합체 드레싱
콜라겐 마이크로입자 및 표면 중합체 드레싱(SPD)을 사용하여 상처, 화상 및 기타 부상을 치료하기 위한 드레싱을 다음과 같이 제조하였다: 소듐 비스(2-에틸헥실) 설포숙시네이트 (AOT) (시그마-알드리치) 10 g을 n-헥산 34 ml에 용해시키고, 아세트산에 용해된 5% 콜라겐-I 2 ml를 첨가하였다. 생성된 마이크로에멀젼을 그것이 투명해질 때까지 45분 동안 교반하였다. 이후 이 용액을 증발시켜 헥산을 제거한다. 잔류물을 세척한 후 뉴클레아제 미함유 물에 현탁시키고 동결건조시킨다. 이후 100 mg의 동결건조된 분말을 1000 μl의 25 μM siRNA 용액으로 처리하고 재동결건조시켰다. 이후 이 물질을 1.25 mL의 SPD에 2시간 동안 4도에서 현탁시킨 후, 동결건조시켰다. 이후 동결건조된 분말을 1.25mL의 뉴클레아제 미함유 물 및 1.25mL의 SPD와 함께 첨가하였다.
실시예 8. siRNA는 근치적 전립선절제술의 결과를 개선한다
전립선암 환자에게 근치적 전립선절제술을 수행한다. 이러한 수술은 최대 50%의 발기부전 위험이 있을 수 있다. 발기 기능 및 수술 후 다른 신경학적 합병증의 가능성을 감소시키기 위해, 10 마이크로그램의 서열번호:17/18의 siRNA를 포함하는 본원에 기재된 바와 같이 제조된 100 mg 웨이퍼를 해면 신경에 근접한 수술 부위에 이식한다. 환자는 수술 후 발기 기능을 회복한다.
실시예 9. siRNA는 절제 상처 치유를 개선한다
정상 건강한 지원자에서 이중 맹검, 위약 대조, 무작위화된 절제 상처 임상 시험을 실시하여 부분 층 피부 이식(STSG) 공여자 부위에서 상처 치유 속도를 평가한다. 정상 지원자에서, 1인치 x 1인치의 치수의 0.08 인치 두께 STSG는 각 엉덩이의 상부 외부 면으로부터 교정된 미세 피부 절편기(microdermatome)를 사용하여 취해질 것이다. 대상체는 표준 기술(압력, 트롬빈 스프레이, 에피네프린)을 사용하여 초기 지혈 관리를 받게 된다. 상처 사진은 카메라 프레임의 80%를 사진 필드 내의 교정 눈금자로 채우기 위해 촬영된다. 사이드 바이 사이드(side by side) 무작위화 지정을 사용하여, 고정 용량의 서열번호: 17/18로 포화된 Telfa® 패드가 한쪽의 STSG 공여자 부위에 적용될 것이다. 또한, 비히클로 포화된 Telfa® 패드가 반대쪽으로 투여될 것이다. 무균, 비 접착 필름을 Tegaderm™ 위에 놓은 후 그 위에 테이핑할 거즈 볼스터를 놓는다. 반복 투약 동안, 드레싱은 아래로 내려가 Telfa 패드가 아니라 필름을 포함할 것이다. 반복 투약은 첫 번째 투약과 마찬가지로 텔파 패드를 포화시키는데 사용될 것이다. 이후 드레싱은 상기와 같이 복원된다. 최종 투여량이 투여된 하루 후에, 볼스터는 제거될 것이고, Telfa® 패드 둘 모두는 식염수 세척을 사용하여 공여자 부위로부터 부드럽게 적셔질 것이다. 두 번째, 비슷한 사진이 찍힐 것이다. 이후 상처는 건조되고 투명하고 통기성이 있는 필름형 드레싱으로 덮여져, 이후 상처 치유의 시각화를 가능하게 한다. 사진은 2주 동안 또는 완전한 상피화가 발생할 때까지 매일 촬영한다. 100% 상처 상피화가 발생하였다고 임상의가 판단하거나 달리 임상적으로 명시된 경우, 필름형 드레싱은 제거될 것이다. 사진 평면 측정은 맹검 관찰자에 의해 수행되고 상피화를 완료하기 위한 모든 시점 및 시간에서 상처 치유 속도를 측정하고 보고한다.
대상체는 1개월, 3개월, 6개월에 사진을 위해 돌아와서, 해밀턴 흉터 평가 척도의 범주 1을 사용하여 치유의 지속성 및 흉터의 질을 확인할 것이다.
투약 빈도(qd, bid, 및 tid)를 3개의 코호트에서 조사할 것이다.
1차 목적: SiFi2를 사용한 STSG 공여자 부위 치료가 비히클 단독으로 치료한 STSG 공여자 부위 영역보다 더 빠른 상처 치유를 지원함을 입증한다.
2차 목적: SiFi2로 STSG 공여자 부위를 치료한 후 비히클로 치료한 STSG 공여자 부위 영역에 비해 상처 치유가 지속되고, 해밀턴 흉터 평가 척도에 의해 결정된 바와 같이 비후성 흉터와 관련이 없음을 입증한다.
1차 평가 변수: 5-19일차에 표준화된 사진의 해석에 의해 결정된 STSG 공여자 부위 상처 치유 속도 및 완료.
2차 평가 변수: (1) 1개월, 3개월 및 6개월에서 치유된 상처의 유지; (2) 3명의 독립적인 전문가 상처 치료 의사 검토자에 의해 해석된 1개월, 3개월 및 6개월에서 STSG 공여자 부위의 사진 상의 해밀턴 흉터 평가 척도6 점수의 범주 1에 의해 평가된 바와 같은 각각의 치료 아암(arm)에서의 비후성 흉터의 정도; (3) 치료되고 치료되지 않은 쪽에서 통증 및 소양증의 정도.
포함 기준: (1) 모든 인종의 남녀 건강한 대상체; (2) 연령 범위: 21 내지 65 포함; (3) 18세에서 30세 사이의 기초 대사 지수; (4) 정보에 입각한 동의를 제공하고 수술 후 흉터 평가에 참여할 의지 및 능력; (5) 후속 평가 일정을 준수할 의지가 있음. 배제 기준: (1) 동의서를 제공할 수 없음; (2) 수술 후 흉터 평가에 참여할 의사가 없음; (3) 피부 질환 (경화증 또는 다른 콜라겐 혈관 질환, 이전의 켈로이드, 이전의 피부 열상으로 중증 피부 얇아짐); (4) 최근 6개월 동안의 전신 스테로이드 또는 피부과 스테로이드의 사용; (5) 임신 또는 임신을 시도함; (6) 항응고제 사용; (7) 면역 결핍 상태; (8) 당뇨병; (9) 영양실조; (10) 이전 2주 동안의 혈소판 또는 NSAID 사용; (11) 봉합재 또는 붕대 물질에 대한 공지된 과민성; (12) 에피네프린 또는 트롬빈에 대한 공지된 과민성; (13) 이전 2주 이내에 감염; (14) 조사자의 견해에 따라 대상체가 임상 시험을 성공적으로 완료할 수 없도록 하는 임의의 조건.
안전: 모든 유해 사례, 기준선에서 임상적으로 유의한 실험실 검사결과 비정상, 비정상 출혈, 감염 및 비후성 흉터 형성을 모니터링한다.
대상체 수: 3개의 코호트에 걸쳐 대략 15명의 완료된 대상체 (코호트당 5명의 대상체). 제1 코호트는 1일 1회(qd), 제2 코호트는 1일 2회(bid), 제3 코호트는 1일 3회(tid)로 치료를 받게 된다.
연구 참여: 6개월
각 대상체는 1일차, 2일차, 3일차, 및 4일차에 STSG 공여자 부위 qd(코호트 1), bid(코호트 2), 또는 tid(코호트 3)에서 타이 오버 볼스터(tie over bolster) 아래에 Telfa® 흡수 패드 상에 적용된 4일간의 약물을 투여받을 것이다. 어떤 경우든 총 수술 시간은 2시간 미만으로 추정된다.
등록 완료 예상 시간: 3개월.
결과는 서열번호: 17/18을 사용한 STSG 공여자 부위 치료가 비히클 단독으로 치료된 STSG 공여자 부위 부위보다 더 빠른 상처 치유를 지원하고, SiFi2 로 STSG 공여자 부위를 치료한 후 상처 치유가 비히클로 치료된 STSG 공여자 부위 영역에 비해, 해밀턴 흉터 평가 척도에 의해 결정된 바와 같이 비후성 흉터와 관련이 없음을 나타낼 것이다.
본 개시내용의 특정 특징들이 예시되고 기재되었지만, 이제 많은 변형, 대체, 변경, 및 등가물이 당업자에게 발생할 것이다. 따라서, 첨부된 청구항들은 본 개시내용의 진정한 사상 내에 속하는 모든 변형 및 변경을 포함하도록 의도된다는 것이 이해되어야 한다.
<110> MICROCURES, INC. <120> FIDGETlN-LIKE 2 AS A TARGET TO ENHANCE WOUND HEALING <130> P-592953-PC <150> 62/983,193 <151> 2020-02-28 <160> 72 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand <400> 1 uuacacagua uuaaagcgau u 21 <210> 2 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand <400> 2 ucgcuuuaau acuguguaau u 21 <210> 3 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand <400> 3 caucugaaac cuagggucuu u 21 <210> 4 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand <400> 4 agacccuagg uuucagaugu u 21 <210> 5 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand <400> 5 gugacuuaug cuaggaggau u 21 <210> 6 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand <400> 6 uccuccuagc auaagucacu u 21 <210> 7 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand <400> 7 ggucagaagc agaauguauu u 21 <210> 8 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand <400> 8 auacauucug cuucugaccu u 21 <210> 9 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand <220> <221> misc_feature <222> (20) <223> n is deoxythymidine <220> <221> misc_feature <222> (21) <223> n is deoxythymidine <400> 9 cgccggccca caaguuggan n 21 <210> 10 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand <220> <221> misc_feature <222> (20) <223> n is deoxythymidine <220> <221> misc_feature <222> (21) <223> n is deoxythymidine <400> 10 uccaacuugu gggccggcgn n 21 <210> 11 <400> 11 000 <210> 12 <400> 12 000 <210> 13 <400> 13 000 <210> 14 <400> 14 000 <210> 15 <400> 15 000 <210> 16 <400> 16 000 <210> 17 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 2'-fluoruridine <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-fluorouridine <220> <221> misc_feature <222> (3) <223> n is 2'-O-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (4) <223> n is 2'fluorocytidine <220> <221> misc_feature <222> (5) <223> n is 2'O-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (6) <223> n is 2'fluorocytidine <220> <221> misc_feature <222> (6) <223> n is 2'fluorodeoxycytidine <400> 17 nnnnnnagua uuaaagcgat t 21 <210> 18 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand 3' end has a phosphodiester cap <400> 18 ttaauguguc auaauuucgc u 21 <210> 19 <211> 4711 <212> DNA <213> Human <400> 19 agtgagctat ggggacacta ctgcactgta gcctgggcaa cagagcaaga ccttgtctca 60 aaaatgtata tatattttgg gctttttttc ctaaaacggg aactacaaca gcatatttgc 120 gagctgatga gagtgaccca gcagagaggg aaatggatca gctctgttga agatgcactg 180 gacaccagaa cacgcccagc ccctcaacca gtggccagag cagcacctgg acgtctcctc 240 caccaccccg tcgccggccc acaagttgga gttgccccct gggggtcgcc aacgctgcca 300 ctacgcttgg gcacacgacg acatctcagc cctcactgcc tccaacctcc taaagcgcta 360 tgcagagaag tactctgggg tcttggattc tccctacgag cgtccggccc tgggcgggta 420 cagcgacgcc tccttcctca acggcgccaa aggggatccc gagccctggc cagggccgga 480 gccaccctac cccttggcct cactccacga aggcctccca ggaaccaaat cgggcggtgg 540 cggcggttcc ggggccctgg ggggctcccc agttttagcc gggaacctcc ctgaacccct 600 ctacgccggc aatgcgtgcg ggggcccatc ggcggcgccc gagtacgcgg ccggctacgg 660 cggggggtac ctggcgccgg gttactgcgc gcagacgggc gccgcgctgc ccccgccgcc 720 cccggccgcg ctcctgcagc ccccaccgcc tccggggtac gggccctcag cgccgctgta 780 caactatccc gcagggggct acgcagcgca gcccggctat ggcgcgctcc cgccgccccc 840 aggcccaccc ccggccccct acctgacccc gggcctgccc gcgcccacgc ccctgcccgc 900 gccggcaccg cccaccgcct atggcttccc cacggccgcg ccgggtgccg aatccgggct 960 gtcgctgaag cgcaaggccg ccgacgaggg gcccgagggc cgctaccgca agtacgcgta 1020 cgagcccgcc aaggcccccg tggctgacgg agcctcctac cccgccgcgg acaacggcga 1080 atgtcggggc aacgggttcc gggccaagcc gccaggagcc gcggaggagg cgtcgggcaa 1140 gtacggtggc ggcgtccccc tcaaggtcct gggctccccc gtctacggcc cgcaactgga 1200 gccctttgaa aagttcccgg agcgggcccc ggctcctcgt ggggggttcg ccgtgccgtc 1260 gggggagact cccaaaggcg tggaccctgg ggccctggag ctggtgacga gcaagatggt 1320 ggactgcggg cccccggtgc agtgggcgga tgtggcgggc cagggcgcgc tcaaggcggc 1380 gctggaggag gagctggtgt ggcccctgct caggccgccc gcctacccgg gcagcctgcg 1440 cccgccgcgg accgtcctgc tctttgggcc gcggggcgcg ggcaaagcgc tgctgggccg 1500 ctgcctcgcc acgcagctgg gcgccacgct gttgcgcctg cgcggcgcga ccctggctgc 1560 gcccggcgcc gccgagggcg cgcgcctcct ccaggccgcc ttcgcggccg cgcgctgccg 1620 cccaccctcc gtactcctca tcagcgagct agaggcgctg ctccccgccc gggacgacgg 1680 cgcggcggca gggggcgcgc tgcaggtgcc gctcctggcc tgcctggacg ggggctgcgg 1740 cgcgggggct gacggcgtgc tggttgtggg caccacctcg cggcccgcgg ctctggacga 1800 ggcgacccgc cggcgcttct ctctccgctt ctacgtggcg ctgcccgaca gcccggcccg 1860 cgggcagatc ctgcagcggg cgctggccca gcagggctgc gcgctcagtg agcgggaact 1920 ggcggcgctg gtgcagggca cgcagggctt ctctgggggc gagctggggc agctgtgcca 1980 gcaggcggcg gccggggcgg gcctcccggg gctgcagcgc cccctctcct acaaggacct 2040 ggaggcggcg ctggccaagg tgggccctag ggcctctgcc aaggaactgg actcgttcgt 2100 ggagtgggac aaaatgtacg gctccggaca ctgacggcgc gcgggggagg ccgcgggagc 2160 cgcagtccct ccgtccccgc cgcctccgcg tgggagggat gtcactgact aaacccggct 2220 ggcaggggct ggagtggtga atgtgggatc ggggacagga ggggtctgcc ggtggatatt 2280 ttttttttcg tgggaaggaa aatgcttctg ccaggcagat gccatatgcg ccgtgtactc 2340 aggtttttcc tatttattgt ggactggaag ctcgccatct ccgcccggca gaccgggcag 2400 atccggcatg ggctggcacc cggggcctta agaactcctg ctctcttgcc acaacgcttt 2460 tgtctcctcg ctatctgaat ggcaccctcc ttctccctca ctctctccat cccattctct 2520 gcattctctt ggttttctct cccttttgct ttgtcgctga cacccctgcc caccccatgc 2580 tggccctgtt tctctcctgc ccctccctcc ccagctctcc atccctcacc ctctgtgctt 2640 ctgtctccat ccctggctct ccagcgtccc tggccttttg gtccctgagc tttaatgcct 2700 ttccctgcct tctgttctta tttggactgc agtggccctt tgcaggagct ctggaggccc 2760 aggggctgag gaggagggtt acccctctac ccatctgaaa cctagggtct agggggatca 2820 aggaaaaaaa gtccccaaag aaggggaatt ttttgtttgt ttttgagggg agatcccaga 2880 aatgtagctt gtttcatatt ttagtcttct tatttttgta aaatgtgtag aatttgctgt 2940 ttttcttttt cttttgacaa ctcaggaaga aactgacctc agaaagaatg ttagactttg 3000 gctgctctcc tgtgtgcccc tcacacctgc cccctccccc ccactccatc caggggacca 3060 aattctccca gacactcaaa aaatgagact tacggggaag gggagaggaa gacccagagg 3120 cctcagtgaa accccagcta ttcctggtca gaagcagaat gtattcctaa gggcttcctc 3180 cccagggccg aggcctaggc atgaatgtgg ggagtgggct gtggggtttg agagaaggga 3240 ggccttattc ctctcctgct gctccccacc ccctgcccca cccaacccct ccgctgagtg 3300 ttttctgtga agggctatcc agagttagga tgcccttgcc caattccttc ctgagaccca 3360 gaaggtaggg tgggagggcc caaatgggaa ggtgacctaa gcagaaagtc tccagaaagg 3420 tcatgtcccc tggccctgcc ttggcagagg tccccagtga cttatgctag gaggattcca 3480 tctgggtaga cagtctggcc acaaaatcag ctactggacc tcagccatct ctgctggagg 3540 ctctgaggag gagtgagcat ccctcacttg tgggggctct gtgaggaaat gtgccttccc 3600 cattcccccg gagtcctagg tctggagctc cagggctggg agagggtgag ggagatgggc 3660 aggggtgttt tctctgacct tgggggctta gtctcagtcc tgcctgaact ttccactagg 3720 cttggaaccc ttccaagaac catatttctc tccttcccac caattttccc ttgatgaggc 3780 tttagcagtt tgctcccacc acccccagcc catttcacaa ctctgatctt agtccaaagc 3840 aggggacacg cccccccacc accacttttt ctctctccca tctcagcctc ctgtgcagtt 3900 ccttgcctgc ccgtgcattt cctagagtct actgcctccc ccctggctgg gagggtgtct 3960 gggggggatc tttcaggggc cctggcaccc agggcctgtg ctggcctagg agtgctgacc 4020 agaaggctgc tctgttcccc cccacccccg ttgctttctg gccccctctt tggagccagc 4080 cacccacagg gctttggtgc ctcagaagca gtgggctgcc gggtcacagc cgcaggctgc 4140 aaaagaccct cggagggagc atggagtgag gggttctctc tcaggtgtgt atgtattggg 4200 gggtgggggt gggtggaggg tgtcagggaa gttggggtgg gatcccagcc ttcccttcaa 4260 gaggcaggga gctctgggag gtggagtccc caccgctttc tctactaggc tcctcctgtt 4320 ccccaggctt ggggagcttt gcacaaggag actgccccca gcctagtggc acctacctca 4380 tgggctctgg ggcaggtagg ggaagggcca gtccagctct ggtaatgctg gggggaggca 4440 taccaaagaa tccaggggca gggagtgggg agggtgactt ccgagctggc ctctcccctt 4500 cctctaccca gactggggct gggatcctct cctcccgctg taaccatttc tacctcattt 4560 tgctgcgtgt tgtacatgga cgtatttatc tcctgtctga cgatgctctg cagttgtggt 4620 ctgtctacct cagaagagac tgtattttaa aagaaagtat tacacagtat taaagcgatg 4680 acatgtggtt tgcaaaaaaa aaaaaaaaaa a 4711 <210> 20 <211> 653 <212> PRT <213> Human <400> 20 Met His Trp Thr Pro Glu His Ala Gln Pro Leu Asn Gln Trp Pro Glu 1 5 10 15 Gln His Leu Asp Val Ser Ser Thr Thr Pro Ser Pro Ala His Lys Leu 20 25 30 Glu Leu Pro Pro Gly Gly Arg Gln Arg Cys His Tyr Ala Trp Ala His 35 40 45 Asp Asp Ile Ser Ala Leu Thr Ala Ser Asn Leu Leu Lys Arg Tyr Ala 50 55 60 Glu Lys Tyr Ser Gly Val Leu Asp Ser Pro Tyr Glu Arg Pro Ala Leu 65 70 75 80 Gly Gly Tyr Ser Asp Ala Ser Phe Leu Asn Gly Ala Lys Gly Asp Pro 85 90 95 Glu Pro Trp Pro Gly Pro Glu Pro Pro Tyr Pro Leu Ala 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2, sense strand <400> 34 uuacacagua uuaaagcgat t 21 <210> 35 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'O'methylcytidine <400> 35 nngcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 36 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand 5' phosphodiester cap Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 and between nucleotides 2 and 3 <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 2'-O'methyuridine <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> phosphorotioate linkage <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> 5 phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (2)..(3) <223> phosphorotioate linkage <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-O-methylcytidine <400> 36 nngcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 37 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> 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strand 5' phosphodiester cap Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 and between nucleotides 2 and 3 <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> 1 n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> phosphorothioate bond <220> <221> misc_feature <222> (2)..(3) <223> phosphorothioate bond <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (12) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (13) <223> n is 2'-fluorodeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (14) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (15) <223> n is 2'-fluorodeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (16) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (17) <223> n is 2'-fluorodeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (18) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (19) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <400> 39 nngcuuuaau annnnnnnnt t 21 <210> 40 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand 5' phosphodiester cap Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> phosphorotioate bond <400> 40 ucgcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 41 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-fluorodeoxycytidine <220> <221> misc_feature <222> (3) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (4) <223> n is 2'-fluorodeoxycytidine <220> <221> misc_feature <222> (5) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (6) <223> n is 2'-fluorodeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (7) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (10) <223> n is 2'-fluorodeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (11) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (12) <223> n is 2'-fluorodeoxycytidine <220> <221> misc_feature <222> (13) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (15) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (16) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (17) <223> n is 2'-fluorodeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (18) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (19) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <400> 41 nnnnnnnaan nnngnnnnnt t 21 <210> 42 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (3) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (4) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (5) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (6) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (7) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (8) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (9) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (10) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (11) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (12) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (13) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (14) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (15) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (16) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (17) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (18) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (19) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (20) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (21) <223> n is 2'-O-methyluridine <400> 42 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn n 21 <210> 43 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (3) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (4) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (5) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (6) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (7) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (8) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (9) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (10) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (11) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (12) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (13) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (14) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (15) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (16) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (17) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (18) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (19) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (20) <223> n is 2'-O-methyluridine <400> 43 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 20 <210> 44 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 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<223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (17) <223> n is deoxycytidine <220> <221> misc_feature <222> (18) <223> n is deoxyguanosine <220> <221> misc_feature <222> (19) <223> n is deoxyadenosine <400> 44 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnt t 21 <210> 45 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (3) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (4) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (5) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (6) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (7) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (8) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (9) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (10) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (11) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (12) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (13) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (14) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (15) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (16) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (17) <223> n is deoxycytidine <220> <221> misc_feature <222> (18) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (19) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <400> 45 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnt t 21 <210> 46 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand <400> 46 uuacacagua uuaaagcga 19 <210> 47 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand 5' phosphodiester cap Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> phosphorothioate bond <400> 47 ucgcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 48 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> 5' phosphodiester cap <400> 48 ucgcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 49 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand 5' phosphodiester cap Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 and between nucleotides 2 and 3 <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> phosphorothioate bond <220> <221> misc_feature <222> (2)..(3) <223> phosphorothioate bond <400> 49 ucgcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 50 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-O-methyluridine <400> 50 nnacacagua uuaaagcga 19 <210> 51 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand 5' phosphodiester cap Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> phosphorothioate bond <220> <221> misc_feature <222> (18) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (19) <223> n is 2'-O'-methyladenosine <400> 51 ucgcuuuaau acugugunnt t 21 <210> 52 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> 5' phosphodiester cap <400> 52 ucgcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 53 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand 5' phosphodiester cap Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 and between nucleotides 2 and 3 and between nucleotides 19 and 20 <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> phosphorothioate bond <220> <221> misc_feature <222> (2)..(3) <223> phosphorothioate bond <220> <221> misc_feature <222> (19)..(20) <223> phosphorothioate bond <400> 53 ucgcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 54 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is locked uridine <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is locked uridine <220> <221> misc_feature <222> (3) <223> n is locked adenosine <220> <221> misc_feature <222> (4) <223> n is locked cytidine <220> <221> misc_feature <222> (5) <223> n is locked adenosine <400> 54 nnnnncagua uuaaagcgat t 21 <210> 55 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (15) <223> n is locked uridine <220> <221> misc_feature <222> (16) <223> n is locked guanosine <220> <221> misc_feature <222> (17) <223> n is locked uridine <220> <221> misc_feature <222> (18) <223> n is locked adenosine <220> <221> misc_feature <222> (19) <223> n is locked adenosine <400> 55 ucgcuuuaau acugnnnnnt t 21 <210> 56 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, sense strand <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 2'-fluorodeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-fluorodeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (3) <223> n is locked adenosine <220> <221> misc_feature <222> (4) <223> n is 2'-fluorodeoxycytidine <220> <221> misc_feature <222> (5) <223> n is locked adenosine <400> 56 nnnnncagua uuaaagcga 19 <210> 57 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand 5' phosphodiester cap Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> 5' phosphodiester cap <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> phosphorothioate bond <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (3) <223> n is 2'-O-methylguanosine <400> 57 nnncuuuaau acuguguaat t 21 <210> 58 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 2'-fluorodeoxydeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-fluorodeoxydeoxycytidine <400> 58 nngcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 59 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> iRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 and between nucleotides 2 and 3 <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 2'-fluorodeoxydeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-fluorodeoxydeoxycytidine <400> 59 nngcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 60 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 and between nucleotides 2 and 3 <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> 1 n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (12) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (13) <223> n is 2'-fluorodeoxydeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (14) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (15) <223> n is 2'-fluorodeoxydeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (16) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (17) <223> n is 2'-fluorodeoxydeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (18) <223> n is 2'-O-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (19) <223> n is 2'-O-methyladenosine <400> 60 nngcuuuaau annnnnnnnt t 21 <210> 61 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 <400> 61 ucgcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 62 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-fluorodeoxydeoxycytidine <220> <221> misc_feature <222> (3) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (4) <223> n is 2'-fluorodeoxydeoxycytidine <220> <221> misc_feature <222> (5) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (6) <223> n is 2'-fluorodeoxydeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (7) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (10) <223> n is 2'-fluorodeoxydeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (11) <223> n is 2'-O-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (12) <223> n is 2'-fluorodeoxydeoxycytidine <220> <221> misc_feature <222> (13) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (15) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (16) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (17) <223> n is 2'-fluorodeoxydeoxyuridine <220> <221> misc_feature <222> (18) <223> n is 2'-O-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (19) <223> n is 2'-O-methyladenosine <400> 62 nnnnnnnaan nnngnnnnnt t 21 <210> 63 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (3) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (4) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (5) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (6) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (7) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (8) <223> n is 2'-O-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (9) <223> n is 2'-O-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (10) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (11) <223> n is 2'-O-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (12) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (13) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (14)..(15) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (16) <223> n is 2'-O-methylguanosine <220> <221> misc_feature <222> (17) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (18) <223> n is 2'-O-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (19) <223> n is 2'-O-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (20) <223> n is 2'-O-methyluridine <400> 63 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 20 <210> 64 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 <400> 64 ucgcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 65 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand <400> 65 ucgcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 66 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 and between nucleotides 2 and 3 <400> 66 ucgcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 67 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 <220> <221> misc_feature <222> (18) <223> n is 2'-O-methyladenosine <220> <221> misc_feature <222> (19) <223> n is 2'-O-methyladenosine <400> 67 ucgcuuuaau acugugunnt t 21 <210> 68 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand <400> 68 ucgcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 69 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 and between nucleotides 2 and 3 and between nucleotides 19 and 20 <400> 69 ucgcuuuaau acuguguaat t 21 <210> 70 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand <220> <221> misc_feature <222> (15) <223> n is locked uridine <220> <221> misc_feature <222> (16) <223> n is locked guanosine <220> <221> misc_feature <222> (17) <223> n is locked uridine <220> <221> misc_feature <222> (18) <223> n is locked adenosine <220> <221> misc_feature <222> (19) <223> n is locked adenosine <400> 70 ucgcuuuaau acugnnnnnt t 21 <210> 71 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand Phosphorothioate bond between nucleotides 1 and 2 <220> <221> misc_feature <222> (1) <223> n is 2'-O-methyluridine <220> <221> misc_feature <222> (2) <223> n is 2'-O-methylcytidine <220> <221> misc_feature <222> (3) <223> n is 2'-O-methylguanosine <400> 71 nnncuuuaau acuguguaat t 21 <210> 72 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA to human fidgetin-like 2, antisense strand <400> 72 ucgcuuuaau acuguguaat t 21

Claims (30)

  1. 핵산 분자로서,
    5'-fUfUmA fCmAfC AGU AUU AAA GCG ATT (서열번호:17);
    (Phos) 5'-U CGC UUU AAU ACU G UG UAA TT (서열번호:18);
    5'-UUACACAGUAUUAAAGCGATT-3' (서열번호:34);
    (Phos) 5' - mUmCGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:35);
    (Phos) 5' - mU(s)mC(s)GCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:36);
    (Phos) 5' - fUfCGCUUUAAUACUGUGUAATT -3' (서열번호:37);
    (Phos) 5' -fU(s)fC(s)GCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:38);
    (Phos) 5' - mU(s)mC(s)GCUUUAAUAmCfUmGfUmGfUmAmATT-3' (서열번호:39);
    (Phos) 5' - U(s)CGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:40);
    (Phos) 5' - mUfCmGfCmUfUmUAAfUmAfCmUGmUmGfUmAmATT (서열번호:41);
    5'-mUmUmAmCmAmCmAmGmUmAmUmUmAmAmAmGmCmGmAmUmU-3' (서열번호:42);
    (Phos) 5' - mUmCmGmCmUmUmUmAmAmUmAmCmUmGmUmGmUmAmAmUmU-3' (서열번호:43);
    5' mUmUmAmCmAmCmAmGmUmAmUmUmAmAmAmGdCdGdATT-3' (서열번호:44);
    5' mUmUmAmCmAmCmAmGmUmAmUmUmAmAmAmGdCmGmATT-3' (서열번호:45);
    5' UUACACAGUAUUAAAGCGA-3' (서열번호:46);
    (Phos) 5' - U(s)CGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:47);
    (Phos) 5' - UCGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:48);
    (Phos) 5' - U(s)C(s)GCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:49);
    5'-mUmUACACAGUAUUAAAGCGA-3' (서열번호:50);
    (Phos) 5' - U(s)CGCUUUAAUACUGUGUmAmATT-3' (서열번호:51);
    (Phos) 5' - UCGCUUUAAUACUGUGUAATT-3' (서열번호:52);
    (Phos) 5' - U(s)C(s)GCUUUAAUACUGUGUAA T(s)T-3' (서열번호:53);
    5' lUlUlAlClACAGUAUUAAAGCGATT-3' (서열번호:54);
    (Phos) 5' - UCGCUUUAAUACUGlUlGlUlAlA TT -3' 서열번호:55);
    5' fUfUlAfClACAGUAUUAAAGCGA-3' (서열번호:56); 또는
    (Phos) 5' - mU(s)mCmGCUUUAAUACUGUGUAATT -3' (서열번호:57)
    로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열로 이루어지고,
    여기서 d(뉴클레오티드) = 데옥시-(뉴클레오티드), m(뉴클레오티드) = 2'-O-메틸 뉴클레오티드, T = 티미딘, f(뉴클레오티드) = 2'-플루오로데옥시 뉴클레오티드, (Phos) = 포스포디에스테르 캡; 대문자 뉴클레오티드 = RNA 뉴클레오티드, , l(뉴클레오티드) = 잠긴(locked) 뉴클레오티드, 및 (s) = 포스포로티오에이트인,
    핵산 분자.
  2. 제1항의 2개의 핵산 분자로 이루어진 이중 가닥 핵산.
  3. 제2항에 있어서, 서열번호: 17, 34, 42, 44, 45, 46, 50 및 54로부터 선택되는 센스 가닥; 및 서열번호: 2, 18, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 43, 47, 48, 49, 51, 52, 53, 55 및 57로부터 선택되는 안티센스 가닥으로 이루어진, 이중 가닥 핵산.
  4. 제2항에 있어서, 서열번호:17 및 서열번호:18; 서열번호:34 및 서열번호:35; 서열번호:34 및 서열번호:36; 서열번호:34 및 서열번호:37; 서열번호:34 및 서열번호:38; 서열번호:34 및 서열번호:39; 서열번호:17 및 서열번호:40; 서열번호:34 및 서열번호:41; 서열번호:42 및 서열번호:43; 서열번호:44 및 서열번호:43; 서열번호:45 및 서열번호:43; 서열번호:46 및 서열번호:47; 서열번호:46 및 서열번호:48; 서열번호:46 및 서열번호:49; 서열번호:50 및 서열번호:51; 서열번호:46 및 서열번호:52; 서열번호:46 및 서열번호:53; 서열번호:54 및 서열번호:55; 또는 서열번호:56 및 서열번호:57로 이루어진, 이중 가닥 핵산.
  5. 제1항의 핵산 분자를 포함하는 이중 가닥 핵산.
  6. 제5항에 있어서, 각각의 가닥이 52개 이하의 뉴클레오티드를 갖는, 이중 가닥 핵산.
  7. 제5항에 있어서, 서열번호: 17, 34, 42, 44, 45, 46, 50 및 54 중에서 선택되는 핵산 분자를 포함하는 센스 가닥; 및 서열번호: 2, 18, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 43, 47, 48, 49, 51, 52, 53, 55 및 57 중에서 선택되는 핵산 분자를 포함하는 안티센스 가닥으로 이루어진, 이중 가닥 핵산.
  8. 제5항에 있어서, 서열번호:17 및 서열번호:18; 서열번호:34 및 서열번호:35; 서열번호:34 및 서열번호:36; 서열번호:34 및 서열번호:37; 서열번호:34 및 서열번호:38; 서열번호:34 및 서열번호:39; 서열번호:17 및 서열번호:40; 서열번호:34 및 서열번호:41; 서열번호:42 및 서열번호:43; 서열번호:44 및 서열번호:43; 서열번호:45 및 서열번호:43; 서열번호:46 및 서열번호:47; 서열번호:46 및 서열번호:48; 서열번호:46 및 서열번호:49; 서열번호:50 및 서열번호:51; 서열번호:46 및 서열번호:52; 서열번호:46 및 서열번호:53; 서열번호:54 및 서열번호:55; 또는 서열번호:56 및 서열번호:57을 포함하는, 이중-가닥 핵산.
  9. 제5항에 있어서, 각각의 가닥이 52개 이하의 뉴클레오티드를 갖는, 이중 가닥 핵산.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 뉴클레오티드가 변형되거나 추가로 변형된, 핵산 분자.
  11. 제10항에 있어서, 상기 변형되거나 추가로 변형된 뉴클레오티드가 2'-O-메틸-아데노신, 2'-O-메틸-우리딘, 2'-O-메틸-시토신, 2'-O-메틸-구아노신, 2'-메틸-티미딘, 2'-플루오로-아데노신, 2'-플루오로-시티딘, 2'-플루오로-구아노신, 2'-플루오로-우라실, 2'-플루오로-티미딘, 데옥시시토신, 데옥시구아노신, 데옥시아데노신, 데옥시티미딘, 데옥시우리딘, 잠긴 아데노신, 잠긴 우리딘, 잠긴 구아노신, 잠긴 시티딘, 포스포로티오에이트 및 포스포디에스테르 캡으로부터 선택되는, 핵산.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 핵산 분자 및 약학적으로 허용되는 담체, 비히클, 부형제 또는 희석제를 포함하는 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 상기 담체가 식염수, 당, 폴리펩티드, 중합체, 지질, 크림, 겔, 미셀 물질, 웨이퍼 및 나노입자 중 적어도 하나를 포함하는, 조성물.
  14. 제12항에 있어서, 상기 담체가 글루코스 용액, 폴리양이온성 결합제, 양이온성 지질, 양이온성 미셀, 양이온성 폴리펩티드, 친수성 중합체 그라프트된(grafted) 중합체, 비-천연 양이온성 중합체, 양이온성 폴리아세탈, 친수성 중합체 그라프트된 폴리아세탈, 리간드 작용기화된 양이온성 중합체, 핵산 전달 비히클, 리간드 작용기화된-친수성 중합체 그라프트된 중합체, 및 리간드 작용기화된 리포솜 중 적어도 하나를 포함하는, 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 담체가 양이온성 중합체-핵산 복합체를 포함하는, 조성물.
  16. 제14항에 있어서, 상기 친수성 중합체가 폴리에틸렌 글리콜(PEG)인, 조성물.
  17. 제13항에 있어서, 상기 나노입자가 리포솜 나노입자인, 조성물.
  18. 제17항에 있어서, 상기 리포솜이 적어도 하나의 2' 당 변형으로 추가로 작용기화되는, 조성물.
  19. 치료적 유효량의 제12항의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 상처를 치료하거나 흉터를 억제, 감소 또는 방지하는 방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 상처 또는 흉터가 피부, 눈, 중추 신경계, 말초 신경계, 심장 조직, 혈관, 힘줄, 인대, 근육, 구강, 입술, 입천장, 내부 장기, 외과적 상처, 복강, 골반강 또는 흉강의 것인, 방법.
  21. 제20항에 있어서, 상기 눈의 상처 또는 흉터가 각막 또는 수정체 피막(lens capsule)의 것인, 방법.
  22. 제20항에 있어서, 상기 상처 또는 흉터는 눈 수술, 라식 수술, 라섹 수술, PRK 수술, 녹내장 여과 수술, 백내장 수술, 및 각막 반흔화(corneal cicatrisation)로부터 기인하는, 방법.
  23. 제19항에 있어서, 상기 흉터의 억제는 유착 형성의 발생 횟수 및/또는 형성된 유착의 크기를 감소시키는, 방법.
  24. 제19항에 있어서, 상기 흉터의 방지, 감소 또는 억제가 신경 재연결 및/또는 신경 기능을 향상시키는, 방법.
  25. 제20항에 있어서, 상기 심장 조직 상처가 심근 경색으로부터 유래하는, 방법.
  26. 제20항에 있어서, 상기 상처는 신경 상처인, 방법.
  27. 제20항에 있어서, 상기 상처는 피막 수축을 초래하는, 방법.
  28. 제20항에 있어서, 상기 상처는 외과적 상처인, 방법.
  29. 제20항에 있어서, 상기 상처는 미용 시술 또는 흉터 교정으로부터 유래하는, 방법.
  30. 피부 이식편(graft) 또는 피부 이식(grafting) 부위의 치유를 촉진하는 유효량의 제12항의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 피부 이식편 또는 피부 이식 부위의 치유를 촉진 또는 개선하는 방법.
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