CN117881661A - 稠合杂环衍生物 - Google Patents
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- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
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Abstract
本申请描述了稠合杂环衍生化合物、包含这些化合物的药物组合物、用于制备这些化合物的化学方法以及它们在治疗与HBV感染相关的疾病中的用途。
Description
本申请要求2021年6月2日提交的国际申请PCT/CN2021/097848和2022年4月29日提交的国际申请PCT/CN2022/090237的优先权。每份公开的全文以引用方式并入本文。
技术领域
本申请涉及稠合杂环衍生化合物、包含这些化合物的药物组合物、用于制备这些化合物的化学方法以及它们在治疗与HBV感染相关的疾病中的用途。
背景技术
慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是重大的全球健康问题,影响着世界人口的超过5%(全世界超过3亿5千万的人口和美国125万的个体)。
尽管可获得预防性HBV疫苗,但是慢性HBV感染的负担因发展中国家大部分地区的次优治疗选择和持续的新感染率而仍旧为一个重大且未能应对的世界性医学问题。目前的治疗无法提供治愈并且仅受限于两类试剂(干扰素α和病毒聚合酶的核苷类似物/抑制剂);药物耐受性、低功效和耐药性问题限制了它们的影响。HBV的低治愈率至少部分归因于这样的事实:病毒产生的完全抑制难以用单一的抗病毒剂来实现。然而,HBV DNA的持久性抑制减缓了肝脏疾病的发展并且有助于预防肝细胞癌。对于HBV感染患者的当前治疗目标旨在将血清HBV DNA降至很低或不可检出的水平,并最终减少或预防硬化症和肝细胞癌的发展。
HBV衣壳蛋白在病毒生命周期期间发挥着重要功能。HBV衣壳/核心蛋白形成了在细胞间通过的过程中保护病毒基因组的亚稳态病毒颗粒或蛋白质壳,并且还在复制过程中发挥核心作用,包括基因组衣壳化、基因组复制、以及病毒体形态形成和释放。衣壳结构还对环境信号作出响应,以允许在病毒进入之后脱壳。相一致地,已发现衣壳组装和解组装的适当时序、适当的衣壳稳定性和核心蛋白的功能对病毒感染至关重要。
HBV衣壳蛋白的关键功能对病毒衣壳蛋白序列施加严格的进化限制,导致观察到的低序列变异性和高保守性。相一致地,HBV衣壳中破坏其组装的突变是致命的,并且干扰衣壳稳定性的突变严重地削弱病毒复制。对多功能HBV核心/衣壳蛋白的高功能限制与高序列保守性一致,因为许多突变对功能有害。事实上,核心/衣壳蛋白序列在HBV基因型之间>90%相同,并且仅显示少量的多态残基。因此,对HBV核心/衣壳蛋白结合化合物的抗性选择可能难以在对病毒复制适应性没有大的影响的情况下进行选择。
描述结合病毒衣壳并抑制HIV、鼻病毒和HBV复制的化合物的报道提供了病毒衣壳蛋白作为抗病毒药物靶标的概念的有力药理学证据。
本领域需要可提高对病毒产生的抑制并且可治疗、改善和/或预防HBV感染的治疗剂。对HBV感染患者施用此类治疗剂,无论是单一治疗药物施用,还是与其他HBV治疗或辅助治疗联合施用,都将导致病毒载量显著降低、预后改善、疾病发展减慢并且转化率增强。
鉴于HBV的临床重要性,鉴定可增加对病毒产生的抑制并且可治疗、改善和/或预防HBV感染的化合物代表了在开发新治疗剂中的有吸引力的途径。本文提供了此类化合物。
发明内容
本公开涉及一般和优选的实施方案,这些实施方案分别由本文所附的独立和从属权利要求限定,这些权利要求以引用的方式并入本文中。本公开涉及能够调节衣壳组装的化合物。本公开的化合物可提供相对于现有技术化合物的有益的特性平衡,例如,它们可显示不同的特征,显示改善的溶解性等。
因此,具体地,本公开涉及式(I)的化合物:
或其立体异构体或互变异构体形式,其中
R1选自由以下项组成的组:苯基、5元杂芳基和6元杂芳基,其各自被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基和CN,C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自由卤基、羟基和CN组成的组的取代基取代;
R2选自由以下项组成的组:H、CHF2、CF3、C1-6烷基、C1-6烷基OC1-6烷基和C3-6环烷基;
Q表示选自由以下项组成的组的环:苯基、5元杂芳基和6元杂芳基;
n表示0、1、2或3;
每个R3独立地表示选自由以下项组成的组的取代基:CN、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、5元杂芳基、6元杂芳基、4-8元杂环基、卤基、N(RS)2、S(O)RS和S(O)2RS,C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、5元杂芳基、6元杂芳基、4-8元杂环基、N(RS)2、S(O)Rs和S(O)2RS各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、羟基、C1-6烷基和氧代基;RS各自独立地选自由以下项组成的组:H、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基;
Rx和Ry各自独立地选自由以下项组成的组:氢、C1-6烷基和C3-6环烷基;
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
另外的实施方案包括式(I)的化合物的药学上可接受的盐和溶剂化物,以及式(I)的化合物的立体异构体和互变异构体形式,以及其药学上可接受的盐。
在多个实施方案中,式(I)的化合物为选自下文具体实施方式中所描述或例举的那些种类的化合物。
本公开还涉及包含一种或多种式(I)的化合物以及式(I)的化合物的药学上可接受的盐和溶剂化物的药物组合物。药物组合物还可包含一种或多种药学上可接受的赋形剂或一种或多种其他药剂或治疗剂。
本公开还涉及使用式(I)的化合物的方法或式(I)的化合物的用途。在多个实施方案中,式(I)的化合物用于治疗或改善乙型肝炎病毒(HBV)感染,增加对HBV产生的抑制、干扰HBV衣壳组装或其他HBV病毒复制步骤或其产生。所述方法包括向需要这种方法的受试者施用有效量的至少一种式(I)的化合物以及式(I)的化合物的药学上可接受的盐和溶剂化物。具体实施方式中示出了治疗方法的另外的实施方案。
具体实施方式
由本公开的以下实施方式并通过其实践,本公开主题的另外的实施方案、特征和优点将显而易见。为简明起见,将本说明书中所引用的出版物(包括专利)以引用的方式并入本文中。
在一个实施方案中,本文提供了式(I)的化合物,
或其立体异构体或互变异构体形式,其中
R1选自由以下项组成的组:苯基、5元杂芳基和6元杂芳基,其各自被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基和CN,C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自由卤基、羟基和CN组成的组的取代基取代;
R2选自由以下项组成的组:H、CHF2、CF3、C1-6烷基、C1-6烷基OC1-6烷基和C3-6环烷基;
Q表示选自由以下项组成的组的环:苯基、5元杂芳基和6元杂芳基;
n表示0、1、2或3;
每个R3独立地表示选自由以下项组成的组的取代基:CN、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、5元杂芳基、6元杂芳基、4-8元杂环基、卤基、N(RS)2、S(O)RS和S(O)2RS,C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、5元杂芳基、6元杂芳基、4-8元杂环基、N(RS)2、S(O)RS和S(O)2RS各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、羟基、C1-6烷基和氧代基;RS各自独立地选自由以下项组成的组:H、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基;
Rx和Ry各自独立地选自由以下项组成的组:氢、C1-6烷基和C3-6环烷基;
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在一个实施方案中,从本文的式(I)的化合物中排除了以下化合物:
还排除了以下化合物:
在一个实施方案中,R1选自由以下项组成的组:苯基、5元杂芳基和6元杂芳基,其各自被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基和CN;C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个(例如,1个、2个或3个)独立地选自由卤基(例如,F)组成的组的取代基取代。
在一个优选的实施方案中,R1选自由以下项组成的组:苯基、5元杂芳基和6元杂芳基,其各自被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、C3-6环烷基、CN、CF3、CHF2、OCHF2和OCF3。
在另一个实施方案中,R1选自由以下项组成的组:苯基、5元杂芳基和6元杂芳基,其各自被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、C3-6环烷基、CF3、CHF2、OCHF2、CN和OCF3。在另一个实施方案中,R1选自由以下项组成的组:苯基、5元杂芳基和6元杂芳基,其各自被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、CN和CF3。
在一个实施方案中,R1是选自由以下项组成的组的环:苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基,其各自被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、C3-6环烷基、CN、CF3、CHF2、OCHF2、CN和OCF3。在一个优选的实施方案中,R1是选自由以下项组成的组的环:苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基,其各自被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、C3-6环烷基、CF3、CHF2、OCHF2、CN和OCF3;更优选地所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、CF3、CN和CHF2;最优选地选自由以下项组成的组:卤基、CN和CF3。
在另一个优选的实施方案中,R1是苯基环。在另一个实施方案中,R1是苯基环,其被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、CN和CF3。
在一个实施方案中,R1上的取代基数目为1或2,优选地2。
在一个实施方案中,本公开的式(I)中的结构单元满足式(Ia)
其中R1a、R1b和R1c各自独立地选自由以下项组成的组:氢、卤基、C1-6烷基、C3-6环烷基、CN、CF3、CHF2、OCHF2、CN和OCF3,其中R1a、R1b和R1c中的至少一者不为氢。
优选地,其中R1a、R1b和R1c各自独立地选自由以下项组成的组:氢、卤基、C1-6烷基、C3-6环烷基、CF3、CHF2、OCHF2、CN和OCF3,其中R1a、R1b和R1c中的至少一者不为氢。
在一个具体的实施方案中,R1a和R1b独立地选自由以下项组成的组:卤基、CN、CHF2、CF3、OCHF2和OCF3,并且R1c为氢。在另一个具体的实施方案中,R1a和R1b独立地选自由以下项组成的组:卤基、CN、CHF2和CF3,并且其中R1c为氢。
在一个优选的实施方案中,R1a为卤基,R1b选自由以下项组成的组:卤基、CN、CHF2和CF3,并且R1c为氢。在另一个实施方案中,R1a为卤基,R1b为卤基,并且R1c为氢。
优选地,卤基是Cl。
在一个实施方案中,R2选自由以下项组成的组:CHF2、CF3、C1-6烷基、C1-6烷基OC1-6烷基和C3-6环烷基;并且式(I)的结构具有式(I-1)或式(I-2)
在另一个实施方案中,R2为C1-6烷基,优选地甲基或乙基。
在另一个实施方案中,R2为H。
在一个实施方案中,Q表示选自由苯基和6元杂芳基组成的组的环。在另一个实施方案中,Q是6元杂芳基环,所述杂芳基选自由以下项组成的组:吡啶基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基。
在另一个实施方案中,Q表示选自由5元杂芳基组成的组的环。在一个具体的实施方案中,Q是选自由吡唑基、咪唑基和噻唑基组成的组的环。
在一个实施方案中,本公开的式(I)中的结构单元满足式(Ib)
其中
X1、X2、X3、X4和X5均为CH。
在其中X1、X2、X3、X4和X5均为CH的实施方案中,环是苯基环。在这样的实施方案中,R3各自独立地连接到X1-X5中的n者。优选地,n为1或2,并且R3连接到X1-X5中的一者或两者。在其中n为1的具体实施方案中,R3连接到X3。在其中n为2的另选实施方案中,R3连接到X1-X5中的两者。在其中n为2的示例性实施方案中,一个R3连接到X3,并且另一个连接到X1或X2。应当指出的是,当存在多于一个R3时,它们是独立选择的并且因此可以是相同的或不同的。
在一个实施方案中,本公开的式(I)中的结构单元满足式(Ib)
其中
X1、X2、X3、X4和X5中的一者或两者为N,并且其余为CH。
在其中X1、X2、X3、X4和X5中的一者或两者为N并且其余为CH的实施方案中,环是6元杂芳基。在这样的实施方案中,R3各自独立地连接到X1-X5中的n者,后者为CH。优选地,n为1或2,并且R3连接到X1-X5中的一者或两者,后者为CH。在其中n为1的具体实施方案中,R3连接到X3,后者为CH。在其中n为2的另选实施方案中,R3连接到X1-X5中的两者。在其中n为2的示例性实施方案中,一个R3连接到X3(其为CH),并且另一个连接到X1(其为CH)、X2(其为CH)、X4(其为CH)或X5(其为CH)。应当指出的是,当存在多于一个R3时,它们是独立选择的并且因此可以是相同的或不同的。
在一个具体的实施方案中,X1-X5中的一者为N,并且其余为CH。在另一个具体的实施方案中,X1-X5中的两者为N,并且其余为CH。
在一个特定的实施方案中,
X1为N,并且X2、X3、X4、X5为CH;或者
X2为N,并且X1、X3、X4、X5为CH;或者
X3为N,并且X1、X2、X4、X5为CH;或者
X1和X2为N,并且X3、X4、X5为CH;或者
X1和X3为N,并且X2、X4、X5为CH;或者
X1和X4为N,并且X2、X3、X5为CH;或者
X1和X5为N,并且X2、X3、X4为CH;或者
X2和X3为N,并且X1、X4、X5为CH;或者
X2和X4为N,并且X1、X3、X5为CH。
在另一个特定的实施方案中,
X1和X2均为N,并且X4和X5为CH;或者
X2和X4均为N,并且X1和X5为CH;或者
X1和X4均为N,并且X2和X5为CH;或者
X1和X5均为N,并且X2和X4为CH。
在一个具体实施方案中,R3连接到X1-X5中的一者或两者,后者为CH。
在一个实施方案中,本公开的式(I)中的结构单元满足式(Ic)
其中
X1、X2、X4和X5均为CH。
在一个具体的实施方案中,X1、X2、X4、X5中的一者或两者任选地被另一个R3取代。应当指出的是,当存在多于一个R3时,它们是独立选择的并且因此可以是相同的或不同的。
在一个实施方案中,本公开的式(I)中的结构单元满足式(Ic)
其中
X2和X4中的一者为N,并且另一者为CH;
在上式(Ic)的具体实施方案中,
i)X1和X5中的一者为N,并且其余为CH;或者
ii)X1和X5均为CH。
在一个具体的实施方案中,X1、X2、X4、X5中的一者或两者(其为CH)任选地被另一个R3取代。应当指出的是,当存在多于一个R3时,它们是独立选择的并且因此可以是相同的或不同的。
在一个实施方案中,本公开的式(I)中的结构单元满足式(Ic)
其中
X2和X4均为N。
在上式(Ic)的具体实施方案中,
X1和X5均为CH。
在一个具体的实施方案中,X1、X5中的一者或两者(其为CH)任选地被另一个R3取代。应当指出的是,当存在多于一个R3时,它们是独立选择的并且因此可以是相同的或不同的。
在一个实施方案中,本公开的式(I)中的结构单元满足式(Ic)
其中
X1和X5中的一者为N,并且另一者为CH。
在上式(Ic)的具体实施方案中,
i)X2和X4中的一者为N,并且其余为CH;或者
ii)X2和X4均为CH。
在一个具体的实施方案中,X1、X2、X4、X5中的一者或两者(其为CH)任选地被另一个R3取代。应当指出的是,当存在多于一个R3时,它们是独立选择的并且因此可以是相同的或不同的。
在一个实施方案中,本公开的式(I)中的结构单元满足式(Ic)
其中
X1和X5均为N。
在上式(Ic)的具体实施方案中,
X2和X4均为CH。
在一个具体的实施方案中,X2、X4中的一者或两者(其为CH)任选地被另一个R3取代。应当指出的是,当存在多于一个R3时,它们是独立选择的并且因此可以是相同的或不同的。
在一个实施方案中,式(I)中的结构单元在满足式(Ic)
其中
X1、X2、X4和X5均为CH;或者
X2为N,并且X1、X4和X5为CH;或者
X1为N,并且X2、X4和X5为CH。
在一个具体的实施方案中,式(I)中的结构单元满足式(Ic)
X1和X2均为N,并且X4和X5为CH;或者
X2和X4均为N,并且X1和X5为CH;或者
X1和X4均为N,并且X2和X5为CH;或者
X1和X5均为N,并且X2和X4为CH。
在一个实施方案中,本公开的式(I)中的结构单元满足式(Ib′)
其中Y1、Y2、Y3和Y4中的一者或两者为N(或NH)或S,并且其余为CH。
在一个具体的实施方案中,Y1、Y2、Y3和Y4中的两者为N(或NH)或S,并且其余为CH。在一个优选的实施方案中,Y1和Y2为N(或NH)。在另一个优选的实施方案中,Y1为N(或NH),并且Y4为S;或者Y1为S,并且Y4为N(或NH)。
在其中Y1、Y2、Y3和Y4中的一者或两者为N(或NH)或S并且其余为CH的实施方案中,环是5元杂芳基。在这样的实施方案中,R3各自独立地连接到Y1-Y4中的一者或两者。优选地,n为1或2,并且R3连接到Y1-Y4中的一者或两者。
在其中n为1的实施方案中,R3连接到Y2。在其中n为1的实施方案中,R3连接到Y1。在另一个实施方案中,Y1和Y2为N(或NH);或者Y1或Y2为N(或NH);或者Y1为N,并且Y4为S;或者Y4为N,并且Y1为S。
在一个具体的实施方案中,Q为 的环(其中由于分子的其他部分的取代或与分子的其他部分的连接,H可能不存在),其被n个R3取代。
在一个具体的实施方案中,所述的CH或NH部分可任选地例如被R3取代。
应当指出的是,当存在CH或NH部分时,例如在如苯基或杂芳基的环内,由于分子的其他部分的取代或与分子的其他部分的连接,″H″可能不存在。类似地,当提及C或N部分时,例如在如苯或杂芳基的环内,可存在H,使得满足稳定的化合物结构,并且对应的原子或基团可以仅描述为C或N。例如,在如(I)、(I-1)、(I-2)、(Ib)、(Ib′)、(Ic)等的式中,当X(例如,X1、X2、X3、X4、X5)被描述为CH或NH时,其意指该基团是未取代的或任选地取代的或连接到该分子的其他部分,前提条件是获得稳定的化合物。同样,当描述C或N时,可以添加″H″或任选的取代/连接,使得满足稳定的化合物。
在一个实施方案中,n为1、2或3,例如1或2。应当指出的是,当存在多于一个R3时,它们是独立选择的并且因此可以是相同的或不同的。当n为0时,其意指Q未被取代,或者所有R3基团均为H。
在一个实施方案中,卤基是F、Cl或Br,优选地Cl。
在一个实施方案中,R3独立地表示选自由以下项组成的组的取代基:CN、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、5元杂芳基、4-8元杂环基、卤基、N(RS)2、S(O)RS和S(O)2RS,C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、5元杂芳基、4-8元杂环基、N(RS)2、S(O)RS和S(O)2RS各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、羟基和C1-6烷基。RS各自独立地选自由以下项组成的组:H、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基。
优选地,C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、5元杂芳基、6元杂芳基、4-8元杂环基、N(RS)2、S(O)RS和S(O)2Rs中的任一者上的取代基数目为1、2或3。
在一个具体的实施方案中,R3独立地选自由以下项组成的组:卤基、CH3、C(CH3)2OH、CH2CF3、CF3、OCHF2、SO2CH3、/>OCH3、CN、/>环丙基、NHCH2CF3、/>CHF2和/>
在一个实施方案中,Rx和Ry中的一者为氢,并且另一者为C1-6烷基或C3-6环烷基,优选地甲基或C3环烷基。在另一个实施方案中,Rx和Ry为氢。在另一个实施方案中,Rx和Ry各自独立地选自由C1-6烷基组成的组,优选地为甲基。在另一个实施方案中,Rx和Ry各自独立地选自由C1-6烷基(优选地甲基)和C3-6环烷基(优选地C3环烷基)组成的组。
在一个实施方案中,杂芳基(诸如5元杂芳基或6元杂芳基)可含有至少一个(例如,1、2或3个,优选地1或2个)独立地选自由N、O和S组成的组的杂原子,优选地N和S。
在一个实施方案中,杂环基(诸如4-8元杂环基)可含有至少一个(例如,1、2或3个,优选地1或2个)独立地选自由N、O和S组成的组的杂原子,优选地N和S。
本公开的另一个实施方案是选自由以下项组成的组的化合物:下表1和表2中所述的化合物、其立体异构体或互变异构体或其药学上可接受的盐。
表1
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表2
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药物组合物
本文还公开了药物组合物,该药物组合物包含
(A)至少一种在上文所定义的任一实施方案中的式(I)中任一者的化合物或其药学上可接受的盐,以及
(B)至少一种药学上可接受的赋形剂。
在多个实施方案中,药物组合物包含至少一种另外的活性剂或治疗剂。另外的活性治疗剂可包括例如抗HBV剂诸如HBV聚合酶抑制剂、干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、衣壳组装调节剂、逆转录酶抑制剂、免疫调节剂诸如TLR-激动剂、或影响HBV生命周期和/或HBV感染后果的任何其他药剂。将本公开的活性剂单独使用或者与一种或多种另外的活性成分联合使用以配制本公开的药物组合物。
如本文所用,术语″组合物″或″药物组合物″是指本公开内可用的至少一种化合物与药学上可接受的载体的混合物。药物组合物有助于将化合物施用于患者或受试者。本领域存在的多种施用化合物的技术包括但不限于静脉内、口服、气雾剂、肠胃外、眼部、肺部以及局部施用。
如本文所用,术语″药学上可接受的载体″是指参与在患者体内运载或转运本公开内可用的化合物或者将其运载或转运给患者的药学上可接受的材料、组合物或载体,例如液体或固体填料、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或包封材料。通常,此类构建体从身体的一个器官或部分运载或转运到身体的另一个器官或部分。各载体必须是″可接受的″,其意指与制剂的其他成分(包括本公开内可用的化合物)相容并且对患者无害。可用作药学上可接受的载体的材料的一些示例包括:糖,诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖;淀粉,诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉;纤维素及其衍生物,诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素;粉末化黄蓍胶;麦芽;明胶;滑石;赋形剂,诸如可可油和栓剂蜡;油,诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油;二醇,诸如丙二醇;多元醇,诸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇;酯,诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯;琼脂;缓冲剂,诸如氢氧化镁和氢氧化铝;表面活性剂;藻酸;不含热原的水;等渗盐水;林格氏液;乙醇;磷酸盐缓冲溶液;以及用于药物制剂中的其他非毒性相容物质。
如本文所用,″药学上可接受的载体″还包括与本公开内可用的化合物的活性相容的任何和所有包衣、抗菌剂和抗真菌剂、以及吸收延迟剂等等,并且对于患者是生理上可接受的。还可将辅助活性化合物掺入组合物中。用于实施本公开的药物组合物中可包括的其他附加成分在本领域中是已知的并且描述于例如Remington′s Pharmaceutical Sciences(Genaro编,Mack Publishing Co.,1985,Easton,PA),其以引用方式并入本文。
″药学上可接受的赋形剂″是指无毒的、生物学上可耐受的或换句话讲在生物学上适于施用于受试者的物质,诸如惰性物质,其被加到药理学组合物或换句话讲用作媒介物、载体或稀释剂以促进药剂的施用并且其与该药剂相容。赋形剂的示例包括碳酸钙、磷酸钙、多种糖和多类淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。
含有一个或多个剂量单位的活性剂的药物组合物的递送形式,可用本领域技术人员已知的或者可利用的合适药物赋形剂和配混技术进行制备。这些组合物在本发明方法中可通过合适的递送途径施用,例如通过口服途径、肠胃外途径、直肠途径、局部途径或眼部途径施用,或者通过吸入施用。
制剂可为片剂、胶囊、囊剂、糖衣丸剂、散剂、颗粒剂、锭剂、重构用散剂、液体制剂或栓剂的形式。优选地,所述组合物配制成供静脉输注、局部施用或口服施用。
对于口服施用,本公开的化合物可以片剂或胶囊剂的形式提供,或者作为溶液、乳液或悬浮液提供。为制备口服组合物,可将化合物配制成能产生例如约0.05mg/kg/天至约100mg/kg/天或者约0.05mg/kg/天至约35mg/kg/天或者约0.1mg/kg/天至约10mg/kg/天的剂量。例如,每天约5mg至5g的每日总剂量可由每天服药一次、两次、三次或四次来完成。
口服片剂可包括与药学上可接受的赋形剂诸如惰性稀释剂、崩解剂、粘结剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂混合的根据本公开的化合物。合适的惰性填充剂包括碳酸钠和碳酸钙、磷酸钠和磷酸钙、乳糖、淀粉、糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露糖醇、山梨醇等。示例性液态口服赋形剂包括乙醇、甘油、水等。淀粉、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羟基乙酸淀粉钠、微晶纤维素和海藻酸是合适的崩解剂。粘结剂可包括淀粉和明胶。润滑剂(当存在时)可为硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。如果需要,片剂可用材料诸如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯进行包衣,以延迟在胃肠道中的吸收,或者可用肠溶衣进行包衣。
用于口服施用的胶囊剂包括硬明胶胶囊和软明胶胶囊。为制备硬明胶胶囊,可将本公开的化合物与固体、半固体或液体稀释剂混合。软明胶胶囊可通过将本公开的化合物与水、油(诸如花生油或橄榄油)、液体石蜡、短链脂肪酸的单甘油酯和二甘油酯的混合物、聚乙二醇400或丙二醇混合来制备。
口服施用的液体可为悬浮液、溶液、乳液或糖浆的形式,或者可冻干或作为干燥品呈现,供临用前用水或其他合适的媒介物进行重构。此类液体组合物可任选地包含:药学上可接受的赋形剂,诸如悬浮剂(例如,山梨醇、甲基纤维素、海藻酸钠、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶等);非水性媒介物,例如油类(例如杏仁油或分级椰子油)、丙二醇、乙醇或水;防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸);润湿剂,诸如卵磷脂;以及(如果需要)矫味剂或染色剂。
本公开的活性剂还可以通过非口服途径施用。例如,组合物可配制成栓剂供直肠施用。对于肠胃外使用,包括静脉内途径、肌肉内途径、腹膜内途径或皮下途径,本公开的化合物可以无菌水溶液剂或混悬剂的形式提供,这些形式被缓冲至适当的pH和等渗性或者在胃肠外可接受的油中。合适的含水媒介物包括林格氏溶液和等渗氯化钠。此类形式将以单位剂量形式呈现,诸如安瓿或一次性注射装置,以多剂量形式呈现,诸如可从其中抽取适当剂量的小瓶,或者以可用来制备可注射制剂的固体形式或预浓缩物形式呈现。示例性的输注剂量可为约1μg/kg/分钟至1000μg/kg/分钟的化合物的范围,与药物载体混合在数分钟至数天的时间里输注。
对于局部施用,化合物可以与药物载体混合在一起,药物与媒介物的浓度比为约0.1%至约10%。另一种施用本公开化合物的方式可采用贴剂来实现透皮递送。
另选地,本公开的化合物可以在本公开的方法中通过经鼻或经口途径吸入施用,例如以还含有合适载体的喷雾制剂的形式。
使用方法
所公开的化合物可用于预防或治疗对其有需要的哺乳动物、更特别是对其有需要的人的HBV感染或HBV引起的疾病。
在一个非限制性方面,这些化合物可以(i)调节或破坏HBV组装以及HBV复制或产生感染性颗粒所必需的其他HBV核心蛋白功能,(ii)抑制感染性病毒颗粒的产生或感染,或(iii)作为衣壳组装调节剂与HBV衣壳相互作用以产生具有降低的感染性或复制能力的有缺陷的病毒颗粒。特别地并且不受任何特定作用机制的束缚,据信所公开的化合物通过破坏、加速、减少、延迟和/或抑制不成熟或成熟颗粒的正常病毒衣壳组装和/或解组装,从而诱导异常衣壳形态,导致抗病毒作用诸如破坏病毒体组装和/或解组装、病毒体成熟、病毒排出和/或靶细胞感染而可用于HBV治疗。所公开的化合物可充当与成熟或未成熟病毒衣壳相互作用的衣壳组装破坏者,以扰乱衣壳的稳定性,从而影响其组装和/或解组装。所公开的化合物可扰乱病毒衣壳的稳定性、功能和/或正常形态所必需的蛋白质折叠和/或盐桥,从而破坏和/或加速衣壳组装和/或解组装。所公开的化合物可结合衣壳并且改变细胞多蛋白和前体的代谢,导致蛋白质单体和/或寡聚物和/或异常颗粒的异常累积,这导致细胞毒性和感染细胞的死亡。所公开的化合物可导致无法形成具有最佳稳定性的衣壳,影响病毒的有效脱壳和/或解组装(例如,在感染期间)。当衣壳蛋白不成熟时,所公开的化合物可破坏和/或加速衣壳组装和/或解组装。当衣壳蛋白成熟时,所公开的化合物可破坏和/或加速衣壳组装和/或解组装。所公开的化合物可在病毒感染期间破坏和/或加速衣壳组装和/或解组装,这可进一步减弱HBV病毒感染性和/或减少病毒载量。通过所公开的化合物破坏、加速、抑制、延迟和/或减少衣壳组装和/或解组装可从宿主生物体中根除病毒。通过所公开的化合物从受试者中根除HBV有利地避免了对慢性长期治疗的需要和/或减少长期治疗的持续时间。
本公开的另一个实施方案是治疗患有HBV感染的受试者的方法,该方法包括向需要这种治疗的受试者施用有效量的至少一种式(I)的化合物。
在另一个方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中减少与HBV感染相关的病毒载量的方法,该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中减少HBV感染的复发的方法,该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
此外,HBV充当丁型肝炎病毒(HDV)的辅助病毒,并且据估计全世界超过1500万人可能是HBV/HDV共感染者,其与单独患有HBV的患者相比快速进展成肝硬化的风险增加且具有增加的肝代偿失调(Hughes,S.A.等人Lancet 2011,378,73-85)。HDV因此感染患有HBV感染的受试者。在一个特定的实施方案中,本公开的化合物可用于治疗和/或预防HBV/HDV共感染或与HBV/HDV共感染相关的疾病。因此,在特定的实施方案中,HBV感染尤其是HBV/HDV共感染,并且哺乳动物(特别是人)可以是HBV/HDV共感染的或处于HBV/HDV共感染的风险中。
在另一方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中抑制或减少含HBV DNA的颗粒或含HBV RNA的颗粒的形成或存在的方法,该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中减少HBV感染的不利生理影响的方法,该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中诱导由HBV感染所致的肝损伤的缓解的方法,该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中减少针对HBV感染的长期抗病毒疗法的生理影响的方法,该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中预防性地治疗HBV感染的方法,其中该个体患有潜伏性HBV感染,该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在多个实施方案中,所公开的化合物适于单一治疗。在多个实施方案中,所公开的化合物可有效对抗自然或天然的HBV毒株。在多个实施方案中,所公开的化合物可有效对抗对目前已知药物有抗性的HBV毒株。
在另一个实施方案中,本文提供的化合物可用于调节(例如,抑制或破坏)HBVcccDNA的活性、稳定性、功能和病毒复制特性的方法中。
在又另一个实施方案中,本公开的化合物可用于减少或预防HBV cccDNA形成的方法中。
在另一个实施方案中,本文提供的化合物可用于调节(例如,抑制或破坏)HBVcccDNA活性的方法中。
在又另一个实施方案中,本公开的化合物可用于减少HBV cccDNA形成的方法中。
在另一个实施方案中,所公开的化合物可用于调节、抑制或破坏HBV RNA颗粒在感染细胞内的产生或从感染细胞释放的方法中。
在另一个实施方案中,调节HBV RNA颗粒的总负荷(或浓度)。在优选的实施方案中,减少HBV RNA的总负荷。
在另一个实施方案中,本文所提供的方法使个体中的病毒载量相比于施用选自由以下项组成的组的化合物而言更大程度地降低或以更快速率降低:HBV聚合酶抑制剂、干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、不同衣壳组装调节剂、不同或未知机制的抗病毒化合物、及其任何组合。
在另一个实施方案中,本文所提供的方法导致病毒突变的发生率和/或病毒抗性比施用选自由以下项组成的组的化合物更低:HBV聚合酶抑制剂、干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、不同衣壳组装调节剂、不同或未知机制的抗病毒化合物、以及它们的组合。
在另一个实施方案中,本文所提供的方法还包括向该个体施用至少一种HBV疫苗、核苷HBV抑制剂、干扰素或其任何组合。
在一个方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中治疗HBV感染的方法,该方法包括通过如下方式降低HBV病毒载量:向该个体单独施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或与逆转录酶抑制剂联合施用;并且还向个体施用治疗有效量的HBV疫苗。
本公开的另一个实施方案是治疗患有HBV感染的受试者的方法,该方法包括向需要这种治疗的受试者施用有效量的至少一种式(I)的化合物。
在另一个方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中减少与HBV感染相关的病毒载量的方法,该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中减少HBV感染的复发的方法,该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中抑制或减少含HBV DNA的颗粒或含HBV RNA的颗粒的形成或存在的方法,该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中减少HBV感染的不利生理影响的方法,该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中诱导由HBV感染所致的肝损伤的缓解的方法,该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中减少针对HBV感染的长期抗病毒疗法的生理影响的方法,该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中预防性地治疗HBV感染的方法,其中该个体患有潜伏性HBV感染,该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中,本文所提供的方法还包括监测受试者的HBV病毒载量,其中该方法进行一个时间段使得HBV病毒不可检出。
组合
本文提供了一种或多种所公开的化合物与至少一种另外的治疗剂的组合。在多个实施方案中,本文所提供的方法还可包括向个体施用至少一种另外的治疗剂。在多个实施方案中,所公开的化合物适于联合治疗。本公开的化合物可用于与一种或多种另外的用于治疗HBV感染的化合物组合。这些另外的化合物可包括本公开的化合物或已知治疗、预防或减轻HBV感染的症状或效应的化合物。
在示例性的实施方案中,另外的活性成分是那些已知或被发现可有效治疗与HBV感染中所涉及的病症或障碍的活性成分,诸如另一种HBV衣壳组装调节剂或者对与HBV感染中所涉及的该特定病症或障碍或HBV感染它本身有关的另一个靶标有活性的化合物。该组合可用于提高功效(例如通过在组合中包含可增强根据本公开所述的活性剂的效力或有效性的化合物),降低一种或多种副作用,或者降低根据本公开所述的活性剂的所需剂量。在另一个实施方案中,在对其有需要的个体中预防性地治疗HBV感染的情况下,相比于需要实现类似结果而单独施用至少一种另外的治疗剂,本文所提供的方法允许以更低的剂量或频率施用该至少一种另外的治疗剂。
此类化合物包括但不限于HBV组合药物、HBV疫苗、HBV DNA聚合酶抑制剂、免疫调节剂、toll样受体(TLR)调节剂、干扰素α受体配体、透明质酸酶抑制剂、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制剂、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)抑制剂、亲环蛋白抑制剂、HBV病毒进入抑制剂、靶向病毒mRNA的反义寡核苷酸、短干扰RNA(siRNA)和ddRNAi核酸内切酶调节剂、核糖核苷酸还原酶抑制剂、HBV E抗原抑制剂、共价闭合环状DNA(cccDNA)抑制剂、法尼醇(famesoid)X受体激动剂、HBV抗体、CCR2趋化因子拮抗剂、胸腺素激动剂、细胞因子、核蛋白调节剂、视黄酸诱导型基因1刺激剂、NOD2刺激剂、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂、吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)途径抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、重组胸腺素α1、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、KDM抑制剂、HBV复制抑制剂、精氨酸酶抑制剂、以及影响HBV生命周期和/或影响HBV感染后果的任何其他药剂或它们的组合。
在多个实施方案中,本公开的化合物可与HBV聚合酶抑制剂、免疫调节剂、干扰素(诸如聚乙二醇化干扰素)、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、衣壳组装调节剂、逆转录酶抑制剂、亲环蛋白/TNF抑制剂、免疫调节剂(诸如TLR激动剂)、HBV疫苗、以及影响HBV生命周期和/或影响HBV感染后果的任何其他药剂或它们的组合联合使用。特别地,本公开的化合物可与一种或多种选自由以下项组成的组的药剂(或其盐)联合使用:
HBV逆转录酶抑制剂,以及DNA和RNA聚合酶抑制剂,包括但不限于:拉米夫定(3TC、Zeffix、Heptovir、Epivir和Epivir-HBV)、恩替卡韦(Baraclude、Entavir)、阿德福韦酯(Hepsara、Preveon、双-POM PMEA)、富马酸替诺福韦酯(Viread、TDF或PMPA);
干扰素,包括但不限于干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)、干扰素λ(IFN-λ)、以及干扰素γ(IFN-γ);
病毒进入抑制剂;
病毒成熟抑制剂;
文献描述的衣壳组装调节剂,诸如但不限于BAY 41-4109;
逆转录酶抑制剂;
免疫调节剂,诸如TLR-激动剂;以及
不同或未知机制的试剂,诸如但不限于AT-61((E)-N-(1-氯-3-氧代基-1-苯基-3-(哌啶-1-基)丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺)、AT-130((E)-N-(1-溴-1-(2-甲氧基苯基)-3-氧代基-3-(哌啶-1-基)丙-1-烯-2-基)-4-硝基苯甲酰胺)、以及类似的类似物。
在多个实施方案中,该另外的治疗剂是干扰素。术语″干扰素″或″IFN″是指抑制病毒复制和细胞增殖并且调节免疫应答的高度同源种特异性的蛋白质家族的任何成员。人干扰素被分组成三类:I类,其包括干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)、干扰素ω(IFN-ω),II类,其包括干扰素γ(IFN-γ),以及III类,其包括干扰素λ(IFN-λ)。如本文所用,术语″干扰素″涵盖已开发并可商购获得的重组形式的干扰素。如本文所用,术语″干扰素″还涵盖亚型干扰素,诸如化学改性或突变的干扰素。化学改性的干扰素包括聚乙二醇化干扰素和糖基化干扰素。干扰素的示例还包括但不限于干扰素-α-2a、干扰素-α-2b、干扰素-α-n1、干扰素-B-1a、干扰素-B-1b、干扰素-λ-1、干扰素-λ-2、以及干扰素-λ-3。聚乙二醇化干扰素的示例包括聚乙二醇化干扰素-α-2a和乙二醇化干扰素α-2b。
因此,在一个实施方案中,式I的化合物可与选自由以下项组成的组的干扰素联合施用:干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)、干扰素λ(IFN-λ)和干扰素γ(IFN-γ)。在一个具体的实施方案中,干扰素为干扰素-α-2a、干扰素-α-2b、或干扰素-α-n1。在另一个具体的实施方案中,干扰素-α-2a或干扰素-α-2b是聚乙二醇化的。在一个优选的实施方案中,干扰素-α-2a是聚乙二醇化干扰素-α-2a(PEGASYS)。
在另一个实施方案中,附加治疗剂选自免疫调节剂或免疫刺激剂治疗剂,其包括属于干扰素类的生物制剂。
此外,附加治疗剂可为破坏其他原发性病毒蛋白或HBV复制或持久生存所需的宿主蛋白的功能的试剂。
在另一个实施方案中,附加治疗剂为阻断病毒进入或成熟或者靶定HBV聚合酶诸如核苷或核苷酸或非核苷类聚合酶抑制剂的抗病毒剂。在联合治疗的另一个实施方案中,逆转录酶抑制剂和/或DNA和/或RNA聚合酶抑制剂是齐多夫定、地达诺新、扎西他滨、ddA、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、恩曲他滨、恩替卡韦、阿立他滨、阿替韦拉平(Atevirapine)、三氮唑核苷、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、缬更昔洛韦、替诺福韦、阿德福韦、PMPA、西多福韦、依非韦伦、奈韦拉平、地拉夫定或依曲韦林。
在一个实施方案中,附加治疗剂为诱导天然限制性免疫应答的免疫调节剂,从而导致针对无关病毒诱导免疫应答。换句话讲,免疫调节剂可影响抗原递呈细胞的成熟、T细胞的增殖和细胞因子释放(例如,IL-12、IL-18、IFN-α、IFN-β和IFN-γ以及TNF-α等等)。
在另一个实施方案中,附加治疗剂为TLR调节剂或TLR激动剂,诸如TLR-7激动剂或TLR-9激动剂。在联合治疗的另一个实施方案中,TLR-7激动剂选自SM360320(9-苄基-8-羟基-2-(2-甲氧基-乙氧基)腺嘌呤)和AZD 8848([3-({[3-(6-氨基-2-丁氧基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)丙基][3-(4-吗啉基)丙基]氨基}甲基)苯基]乙酸甲酯)。
在本文提供的方法中的任一种中,该方法还可包括向个体施用至少一种HBV疫苗、核苷HBV抑制剂、干扰素或其任何组合。在一个实施方案中,HBV疫苗选自RECOMBIVAX HB、ENGERIX-B、ELOVAC B、GENEVAC-B、或SHANVAC B中的至少一种。
在另一个方面,本文提供了一种在对其有需要的个体中治疗HBV感染的方法,该方法包括通过如下方式降低HBV病毒载量:向该个体单独施用治疗有效量的本公开化合物或与逆转录酶抑制剂联合施用;并且还向个体施用治疗有效量的HBV疫苗。该逆转录酶抑制剂可为以下中的一种:齐多夫定、地达诺新、扎西他滨、ddA、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、恩曲他滨、恩替卡韦、阿立他滨、阿替韦拉平(Atevirapine)、三氮唑核苷、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、缬更昔洛韦、替诺福韦、阿德福韦、PMPA、西多福韦、依非韦伦、奈韦拉平、地拉夫定或依曲韦林。
对于本文所述的任何联合治疗,可例如使用诸如以下合适的方法计算协同效应:Sigmoid-Emax公式(Holford&Scheiner,19981,Clin.Pharmacokinet.6:429-453)、Loewe相加模型公式(Loewe&Muischnek,1926,Arch.Exp.Pathol Pharmacol.114:313-326)和中值效应公式(Chou&Talalay,1984,Adv.Enzyme Regul.22:27-55)。可将以上提及的各个公式用于实验数据来生成对应的图,以助于评估药物的组合效应。与以上提及公式相关联的对应曲线图分别是浓度-效应曲线、等效应曲线图以及联合指数曲线。
有益效果
本发明化合物具有改善的人肝脏微粒体稳定性以及适当的抗HBV活性。与比较化合物相比,本发明化合物的半衰期(t1/2)显著增加,显示出人代谢稳定性的极大改善以及在药物应用中的优点。
方法
本公开涉及一种用于制备如本文所述的式(I)的化合物的方法。
在一个示例性实施方案中,该方法包括以下步骤:
1)使式(a)的化合物与式(b)/>化合物反应(其中PG是保护基团),得到式(c)/>的化合物;
2)使式(c)的化合物与式(d)的化合物反应,得到式(e)的化合物;
3)使式(e)的化合物与式(f)的化合物反应,得到式(I)的化合物。
其中R1、R2、R3、Q、卤基、n、Rx和Ry如本文所定义。
在一个实施方案中,式(I)的化合物可进行手性分离以得到单独的对映体纯化合物。
在一个实施方案中,在步骤2)中,将式(c)的化合物与式(d)的化合物的反应产物进行脱保护和氧化,得到式(e)的化合物。
PG是常规使用的保护基团,并且优选地是TBDPS。
示例性方案如下。
本公开还涉及一种用于制备如本文所述的具有特定手性如(I′)的式(I)的化合物的方法。
在一个示例性实施方案中,该方法包括以下步骤:
1)使式(g)的化合物与/>的化合物反应,得到式(h)的化合物;
2)使式(h)的化合物与的化合物反应,得到式(i)/>的化合物;
3)使式(i)的化合物与式(f)的化合物反应,得到式(j)/>的化合物。
4)使式(j)的化合物与(其中PG1是保护基团,LG是离去基团)的化合物反应,得到式(k)/>的化合物。/>
5)使式(k)的化合物与式(b)的化合物反应,得到式(I′)的化合物。
其中R1、R2、R3、Q、n、Rx和Ry如本文所定义。
在一个实施方案中,在步骤1)中,将式(g)的化合物与的化合物的反应产物用HCl处理,得到式(h)。
在一个实施方案中,在步骤3)中,式(j)的反应产物可进一步进行与保护基团反应以得到式(j′)的化合物的步骤,该步骤用于代替式(j)步骤4)。
在一个实施方案中,在步骤4)中,使式(j)的化合物与的化合物反应的反应产物进行闭环反应和脱保护,得到式(k)的化合物。
在一个实施方案中,在步骤4)中,的化合物还可含有保护基团作为的化合物,其用于代替/>
在一个实施方案中,在步骤4)至步骤5)中,式(b)的化合物可与进行脱保护的/>的化合物的产物反应,然后与式(j)的化合物反应,并且将产物进行闭环反应,得到式(I′)的化合物。
PG1和PG2各自是常规使用的保护基团,并且可以优选地是Boc或LG是常规使用的离去基团,并且优选地是/>或羟基。
其他起始化合物如可用于代替/>以制备对应的化合物,对中间体进行适当修饰。
示例性方案如下。
在一个示例性实施方案中,该方法包括下面的步骤2′-6′,而不是步骤2-5:
2′)使式(h)的化合物与的化合物反应,得到式(i)/>的化合物;
3′)使式(i′)的化合物与的化合物反应,最终得到式(l)的化合物。
4′)将式(l)的化合物进行闭环反应和脱保护,得到式(m)的化合物。/>
5′)使式(m)的化合物与式(b)的化合物,最终得到式(n)的化合物。
6′)使式(n)的化合物与式(f)的化合物反应,得到式(I′)的化合物。其中R1、R2、R3、Q、n、Rx和Ry如本文所定义。
在一个实施方案中,在步骤3′)中,使式(i′)的化合物与的化合物反应的反应产物进行脱缩酮化并与保护基团反应,得到式(l)的化合物。
在一个实施方案中,在步骤5′)中,使式(m)的化合物与式(b)的化合物反应的反应产物进行脱保护和氧化,得到式(n)的化合物。
类似地,PG1和PG2各自是常规使用的保护基团,并且可以优选地是Boc、TBDPS。LG是常规使用的离去基团,并且优选地是或羟基。
示例性方案如下。
应当指出的是,可以调节起始化合物的手性以获得对应的最终产物,例如式(I″)的化合物。
对于本文所述的制备方法,本领域技术人员可根据实际需要修改起始化合物、试剂、中间体、顺序和条件并且/或者组合任何步骤或子步骤以得到对应的最终产物,并且此类衍生方法也涵盖在保护范围内。
定义
以下列出了用于描述本公开的各种术语的定义。除非在特定情况下另作限定,当术语在整篇说明书和权利要求中单独地或作为较大基团的一部分使用时,这些定义均适用于该术语。
除非另有定义,否则本文所用的所有技术和科学术语通常具有与适用领域中普通技术人员通常所理解的相同的含义。一般来讲,本文所用的命名以及细胞培养、分子遗传、有机化学和肽化学中的实验程序在本领域中是众所周知且普遍应用的。
如本文所用,冠词″一个″和″一种″是指一个或多于一个(即至少一个)冠词的语法对象。以举例的方式,″元件″是指一个元件或多于一个元件。此外,使用的术语″包括″以及其他形式,如″包括″、″包含″和″含有″不是限制性的。
如说明书和权利要求中所用,术语″包含″可包括实施方案″由......组成″和″基本上由......组成″。如本文所用,术语″包含″、″包括″、″具有″、″可以″、″含有″及其变体旨在是开放式过渡性短语、术语或词语,其需要存在所命名的成分/步骤并且允许存在其他成分/步骤。然而,此类描述应被解释为也将组合物或方法描述为″由所列举的化合物组成″和″基本上由所列举的化合物组成″,其允许仅存在指定的化合物以及任何药学上可接受的载体,并且排除其他化合物。本文公开的所有范围包括所述的端点并且可独立地组合(例如,″50mg至300mg″的范围包括端点50mg和300mg,以及所有中间值)。本文公开的范围的端点和任何值不限于精确的范围或值;它们是足够不精确的,以包括接近这些范围和/或值的值。
如本文所用,可以应用近似语言来修改可以变化而不导致与其相关的基本函数改变的任何定量表示。因此,在一些情况下,由一个或多个术语诸如″基本上″修饰的值不能被限制为所指定的精确值。在至少一些情况下,近似语言可以对应于用于测量该值的仪器的精度。
如本文所用,术语″至少一个″或″一个或多个″是指一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或更多个。
作为基团或作为另一个基团的一部分的术语″烷基″是指在链中具有碳和氢原子的直链或支链烷基基团。烷基基团的示例包括甲基(Me,其也可在结构上以符号″/″表示)、乙基(Et)、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基(tBu)、戊基、异戊基、叔戊基、己基、异己基以及根据本领域的普通技能和本文提供的教导会被认为与前述示例中的任何一者等同的基团。本文所用的术语C1-4烷基是指链中具有1个至4个碳原子的直链或支链烷基基团。本文所用的术语C1-6烷基是指链中具有1个至6个碳原子的直链或支链烷基基团。
作为基团或作为另一基团的一部分的术语″烷氧基″是指经由氧连接到分子的其余部分的烷基基团,其中烷基如本文所定义。本文所用的术语C1-4烷氧基是指链中具有1个至4个碳原子的直链或支链烷氧基基团。本文所用的术语C1-6烷氧基是指链中具有1个至6个碳原子的直链或支链烷氧基基团。烷氧基基团的示例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基,以及根据本领域普通技术人员和本文提供的教导内容被认为等同于前述示例中的任一个示例的基团。
术语″C3-6环烷基″是指具有3个至6个环原子的饱和单环碳环。环烷基基团的说明性示例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
术语″苯基″代表以下部分:
本文的表述″-NRxRy″单独地或在通式中是指
本文所用的术语″杂芳基″是指具有5个至10个环成员并含有碳原子和1个至4个杂原子的单环芳族环系或二环芳族环系,所述杂原子独立地选自由N、O和S组成的组。具有5个或6个成员的芳族环(其中所述环由碳原子组成并且具有至少一个(例如,1个、2个或3个,优选地1个或2个)杂原子成员)包括在术语杂芳基内。合适的杂原子包括氮(N)、氧(S)和硫(S),优选地氮(N)。在5元环的情况下,杂芳基环优选地含有氮、氧或硫中的一个成员,此外还含有至多3个附加的氮。在6元环的情况下,杂芳环优选地含有1个至4个(例如四唑基)、更具体地1个至3个氮原子。对于其中6元环具有3个氮原子的情况,最多2个氮原子是相邻的。杂芳基基团的示例包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基(氮苯基)、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、喹啉基、异喹啉基和喹唑啉基。除非另外指明,否则杂芳基在导致稳定结构的任何杂原子或碳原子上与其侧基连接。
本领域技术人员将认识到,上文列出或举例说明的杂芳基基团并非穷举性的,并且还可选择在这些限定术语范围内的其他物质。
除非另有说明,否则术语″杂环基″表示具有例如4个至8个环成员、更通常5个至6个环成员的非芳族单环或双环系统。单环基团的示例是含有4个至8个环成员的基团,更通常为5个或6个环成员。含有至少一个选自氮、氧或硫(N、O、S)的杂原子的单环杂环系的非限制性示例包括但不限于4元至8元杂环系,诸如氧杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吡喃基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基。除非另有说明,每一个都可通过任何可利用的环碳原子或氮原子与分子的其余部分结合,并且如果可能的话,根据实施方案可以任选地在碳和/或氮原子上被取代。4元至8元单环杂环基的任选取代基包括OH、OC1-4烷基、卤代、COOH、CONHCH3、NHCOC1-4烷基、NHCOC3-6环烷基和C1-4烷基。
术语″氰基″是指基团-CN。
术语″卤基″或″卤素″表示氯(Cl)、氟(F)、溴(Br)或碘(I)。
术语″氧代″表示=O。
术语″羟基″表示-OH。
术语″取代的″是指指定的基团或部分带有一个或多个取代基。术语″未取代的″是指特定的基团不带有取代基。术语″任选地取代的″是指特定的基团是未取代的或者被一个或多个取代基取代。如果术语″取代的″用于描述结构体系,则指取代在该体系上任何化合价允许的位置处发生。在指定的部分或基团没有明确指出被任何指定取代基任选地取代或取代的情况下,应理解这种部分或基团旨在表示是未被取代的。
术语″对位″、″间位″和″邻位″具有如本领域所理解的含义。因此,例如,完全取代的苯基基团在邻近苯环连接点的两个″邻″(o)位、两个″间″(m)位和连接点对面的一个″对″(p)位具有取代基。为了进一步澄清位于苯环的取代基的位置,这2个不同的邻位将被命名为″邻位和邻位′″,并且2个不同的间位被命名为″间位和间位’″。
当指吡啶基基团上的取代基时,术语″对位″、″间位″和″邻位″是指相对于吡啶基环连接点的取代基位置。例如,下方的结构被描述为具有在邻位的X1取代基、在间位的X2取代基和在对位的X3取代基的3-吡啶基:/>
为了提供更简明的描述,本文给出的一些数量表述没有用术语″约″修饰。应当理解,无论是否明确使用术语″约″,本文所给出的每个量意在指实际的给定值,并且其还意在指根据本领域一般技术将可合理推理得到的这些给定值的近似值,包括这些给定值的由实验和/或测量条件所引起的等价值和近似值。当收率以百分数的形式给出时,这种收率是指被给出该收率的实体的质量与同一实体在特定化学计量条件下可获得的最大量之比。除非另外指明,否则以百分数形式给出的浓度是指质量比。
根据它们的标准含义,术语″缓冲的″溶液或″缓冲″液在本文中可互换使用。缓冲液被用于控制介质的pH,并且它们的选择、使用和功能是本领域的普通技术人员已知的。参见,例如,G.D.Considine编,Van Nostrand’s Encyclopedia of Chemistry,第261页,第5版(2005)的描述,尤其是,缓冲溶液以及缓冲成分的浓度如何与缓冲液的pH值相关联。例如,通过将MgSO4和NaHCO3以10∶1的重量/重量比例添加到溶液中,以保持溶液的pH值为约7.5,从而获得缓冲溶液。
本文给出的任何式旨在表示具有该结构式所示的结构的化合物以及某些变型或形式。具体地,本文给出的任何式的化合物可具有不对称中心,因此以不同的对映体形式存在。通式所示的化合物的所有光学异构体及其混合物,均被认为是在该式的范围内。因此,本文给出任何式旨在表示外消旋体、一种或多种对映体形式、一种或多种非对映体形式、一种或多种阻转异构体、及其混合物。此外,某些结构可以作为几何异构体(即顺式和反式异构体)、作为互变异构体或作为阻转异构体存在。
还应当理解,那些具有相同分子式,但是在它们的原子键合的性质或顺序或它们的原子的空间排列上有所不同的化合物,被称为″异构体″。
彼此不为镜像的立体异构体称为″非对映体″,而彼此为不重叠镜像的立体异构体称为″对映体″。当化合物具有非对称中心时,例如,其被键合到四个不同的基团,并且一对对映体是可能的。对映体可由其不对称中心的绝对构型来表征,并且通过Cahn和Prelog的R-和S-顺序规则,或通过分子旋转偏振光平面并且命名为右旋或左旋(即分别为(+)或(-)异构体)的方式来描述。手性化合物可以其单独的对映体或以其混合物的形式存在。包含相同比例的对映体的混合物被称为″外消旋混合物″。
″互变异构体″是指为特定化合物结构的可互换形式,并且氢原子和电子的位置发生变化的化合物。因此,两种结构可经由π电子与原子(通常为H)的移动而处于平衡。例如,烯醇与酮是互变异构体,因为它们迅速地通过用酸或碱处理而互相转化。互变异构的另一个示例是同样通过用酸或碱处理形成的苯基硝基甲烷的″酸-″和″硝基-″形式。
互变异构体形式可能与所关注的化合物的最佳化学活性和生物学活性的获得相关。
本公开的化合物可具有一个或多个非对称中心;因此,此类化合物可作为单独的(R)-或(S)-立体异构体或作为其混合物制备。
除非另外指明,否则在说明书和权利要求中对特定化合物的描述或命名旨在包括其单独的对映体和混合物,所述混合物为外消旋混合物或其他混合物。立体化学的测定方法和立体异构体的分离方法是本领域熟知的。
某些示例包含被描绘成绝对的对映体的化学结构,但旨在表示具有未知构型的对映体纯物质。在这些情况下,(R*)或(S*)或(*R)或(*S)在名称中用于表示对应的立构中心的绝对立体化学是未知的。因此,被命名为(R*)或(*R)的化合物是指具有(R)或(S)的绝对构型的对映体纯化合物。在绝对的立体化学已被确认的情况下,使用(R)和(S)命名结构。
符号和/>用于表示本文所示的化学结构中相同的空间排列。类似的,符号/>和/>用于表示本文所示的化学结构中相同的空间排列。
某些式(I)的化合物或式(I)的化合物的药学上可接受的盐可以作为溶剂化物获得。溶剂化物包括由本公开的化合物与一种或多种溶剂相互作用或络合而形成的那些,其为溶液或为固体或晶体形式。在一些实施方案中,溶剂为水并且溶剂化物为水合物。
本文中对化合物的提及代表着对以下任何一者的提及:(a)这种化合物的实际述及的形式,和(b)这种化合物在提到化合物时所考虑的该化合物所处介质中的任何形式。例如,本文中对化合物诸如R-COOH的提及涵盖对例如R-COOH(s)、R-COOH(sol)和R-COO- (sol)中的任一者的提及。在此示例中,R-COOH(s)是指固体化合物,其例如可以为片剂或某些其他固体药物组合物或制剂的形式;R-COOH(sol)是指化合物在溶剂中的未离解形式;而R-COO- (sol)是指化合物在溶剂中的离解形式,诸如化合物在含水环境中的离解形式,无论此类离解形式是衍生自R-COOH、其盐还是衍生自在所考虑介质中经解离后产生R-COO-的任何其他实体。在另一个示例中,诸如″使实体暴露于式R-COOH的化合物″的表述是指使该实体暴露于化合物R-COOH在发生该暴露的介质中所存在的一种或多种形式。在又一个示例中,诸如″使实体与式R-COOH的化合物反应″之类的表述是指使(a)这种实体(为这种实体在发生该反应的介质中所存在的一种或多种化学相关形式)与(b)化合物R-COOH在发生该反应的介质中所存在的一种或多种化学相关形式反应。就这一点而言,如果该实体例如处于含水环境中,则应理解化合物R-COOH是在该相同介质中,因此该实体正被暴露于诸如R-COOH(aq)和/或R-COO- (aq)之类的物质,其中下标″(aq)″根据其在化学和生物化学中的常规含义代表″含水″。在这些命名示例中选择了羧酸官能团;然而,此选择并非意图进行限定,而仅为举例说明。应当理解,可用其他官能团提供类似的示例,这些官能团包括但不限于羟基、碱性氮成员(诸如在胺中的那些)和任何其他在含有该化合物的介质中按照已知方式进行相互作用或转化的基团。此类相互作用和转化包括但不限于解离、缔合、互变异构、溶剂分解包括水解、溶剂化包括水合、质子化和去质子化。就这一点本文不提供进一步的示例,因为在给定介质中的这些相互作用和转化为本领域任何普通技术人员所知。
在另一个示例中,本文通过提及已知会形成两性离子的化合物而涵盖两性离子化合物,即使它未被明确以其两性离子形式提到。诸如一种或多种两性离子及其同义词两性离子化合物之类的术语是IUPAC认可的标准名称,这些名称是众所周知的,并且是经定义的科学名称的标准集的一部分。在这点上,两性离子这个名称被生物学关联化学实体数据库(Chemical Entities of Biological Inerest,ChEBI)的分子实体词典分配CHEBI:27369这个名称标识。众所周知,两性离子或两性离子化合物是具有相反符号的形式单位电荷的中性化合物。有时,这些化合物用术语″内盐″来称谓。其他资料称这些化合物为″偶极离子″,不过这个术语被另外的其他资料认为是误称。作为具体示例,氨基乙酸(氨基酸甘氨酸)具有式H2NCH2COOH,并且它以两性离子+H3NCH2COO-形式存在于一些介质中(在这种情况下是在中性介质中)。两性离子、两性离子化合物、内盐和偶极离子这些术语按其已知和公认的含义落入本公开的范围内,如本领域普通技术人员在任何情况下均如此理解的。由于不必命名本领域普通技术人员会认识到的每一个实施方案,因此本文中没有明确给出与本公开化合物相关联的两性离子化合物的结构。但是,其为本公开实施方案的一部分。在这点上,本文中没有提供更多的示例,因为在给定介质中导致产生给定化合物的各种形式的相互作用和转化是本领域任何普通技术人员已知的。
本文给定的任何式还旨在表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有本文给出式所描绘的结构,不同的是一个或多个原子被具有选定的原子量或质量数的原子所代替。可以掺入到本公开化合物中的同位素的示例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素,分别诸如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F、36Cl、125I。此类同位素标记的化合物可用于代谢研究(优选地用14C)、反应动力学研究(用例如氘(即,D或2H);或氚(即,T或3H))、检测或成像技术,诸如正电子发射断层显像(PET)或单光子发射计算机断层显像(SPECT),包括药物或底物组织分布测定,或在患者的放射性治疗中。具体地,18F或11C标记的化合物对于PET或SPECT研究可能是尤其优选的。此外,用较重的同位素如氘(即2H)进行置换可以提供由更大的代谢稳定性所带来的某些治疗优势,例如体内半衰期延长或需要的剂量减少。同位素标记的本公开的化合物通常可以通过用容易获得的同位素标记的试剂替代非同位素标记的试剂以执行下文描述的″方案″中或″实施例和制备″中所公开的程序来制备。
当提及本文给出的任何式时,对于指定的变量,从可能的种类的列表中选择具体的部分并非意图限定所述变量在其他地方出现时要选择相同的种类。换句话讲,除非另外指明,否则当变量不止一次出现时,从指定列表中选择该种类与对式别处的同一变量选择该种类无关。
根据上文关于指派和命名的解释,应当理解,当在化学上有意义时和除非另外说明,本文明确提及一集合时,意味着独立提及该集合的各实施方案,并且是提及被明确提及的该集合的各个亚集合的各个和每一个可能实施方案。
作为取代基术语的第一个示例,如果取代基S1 实施例是S1和S2中的一者,并且取代基S2 实施例是S3和S4中的一者,然后这些指派是指根据以下选择给出的本公开的实施方案:S1 实施例是S1,并且S2 实施例是S3;S1 实施例是S1,并且S2 实施例是S4;S1 实施例是S2,并且S2 实施例是S3;S1 实施例是S2,并且S2 实施例是S4;以及此类选择中的每一个选择的等效物。较短的术语″S1 实施例是S1和S2中的一者,并且S2 实施例是S3和S4中的一者″因此在本文中为了简洁起见使用,但不是以限制的方式使用。上述以通用术语陈述的关于取代基术语的第一个示例,是旨在举例说明本文描述的不同取代基指派。当适用时,本文对取代基给出的上述约定延伸至诸如R1、R2、R3、R4、R5、G1、G2、G3、G4、G5、G6、G7、G8、G9、G10、G11、n、L、R、T、Q、W、X、Y和Z的成员以及本文所用的任何其他通用取代基符号。
此外,当对任何成员或取代基给出多于一种指派时,本公开的实施方案包括可从所列举的指派独立选取而作出的多种分组,及其等同物。作为取代基术语的第二个示例,如果本文所述的取代基S实施例是S1、S2和S3中的一者,则该列表是指这样的本公开实施方案:S实施例是S1;S实施例是S2;S实施例是S3;S实施例是S1和S2中的一者;S实施例是S1和S3中的一者;S实施例是S2和S3中的一者;S实施例是S1、S2和S3中的一者;并且S实施例是这些选择中的每一个选择的任何等效物。较短的术语″S实施例是S1、S2和S3中的一者″因此在本文中为了简洁起见使用,但不是以限制的方式使用。上述以通用术语陈述的关于取代基术语的第二个示例,是旨在举例说明本文描述的不同取代基指派。当适用时,本文对取代基给出的上述约定延伸至诸如R1、R2、R3、R4、R5、G1、G2、G3、G4、G5、G6、G7、G8、G9、G10、G11、n、L、R、T、Q、W、X、Y和Z的成员以及本文所用的任何其他通用取代基符号。
其中j>i的命名″Ci-j″当在本文中应用于一类取代基时,意在指这样的本公开实施方案:从i到j(包括i和j在内)的碳成员数目中的各个和每一个都是独立实现的。以举例的方式,术语C1-6独立地指具有一个碳成员的实施方案(C1)、具有两个碳成员的实施方案(C2)、具有三个碳成员的实施方案(C3)、具有四个碳成员的实施方案(C4)、具有五个碳成员的实施方案(C5)和具有六个碳成员的实施方案(C6)。
术语Cn-m烷基是指脂族链(无论是直链还是支链的),其中链中碳成员的总数N满足n≤N≤m,并且m>n。本文提及的任何二取代基是指当允许多于一种此类可能性时包含各种连接可能性。例如,本文提及二取代基-A-B-(其中A≠B)时,是指A连接第一被取代成员而B连接第二被取代成员的二取代基,其也指A连接第二被取代成员而B连接第一被取代成员的二取代基。
本公开还包括式(I)的化合物的药学上可接受的盐,优选上文所述的那些和本文例示的具体化合物的药学上可接受的盐,以及用此类盐进行治疗的方法。
术语″药学上可接受的″是指经联邦或州政府的监管机构或美国以外的国家的相应机构批准或可被其批准或在美国药典或其他公认的药典中被列为用于动物,尤其是人类。
″药学上可接受的盐″旨在表示由式(I)表示的化合物的游离酸或碱的盐,该盐是无毒的、生物学上可耐受的或以其他方式在生物学上适于施用给受试者。它应当具有母体化合物的所需的药理学活性。一般地,参见G.S.Paulekuhn等人,″Trends in ActivePharmaceutical Ingredient Salt Selection based on Analysis of the Orange BookDatabase″,J.Med.Chem.,2007,50:6665-72,S.M.Berge等人,″Pharmaceutical Salts″,JPharm Sci.,1977,66:1-19,以及Handbook of Pharmaceutical Salts,Properties,Selection,and Use,Stahl和Wermuth编辑,Wiley-VCH and VHCA,Zurich,2002.药学上可接受的盐的示例是那些药理学有效且适于与患者组织接触而不会有不当毒性、刺激或过敏反应的盐。式(I)的化合物可具有足够酸性的基团、足够碱性的基团或这两种类型的官能团,并因此与多种无机碱或有机碱以及无机酸和有机酸反应以形成药学上可接受的盐。
如本文所用,术语″组合物″或″药物组合物″是指本文提供的至少一种化合物与药学上可接受的载体的混合物。药物组合物有助于将化合物施用于患者或受试者。本领域存在的多种施用化合物的技术包括但不限于静脉内、口服、气雾剂、肠胃外、眼部、肺部以及局部施用。
如本文所用,术语″药学上可接受的载体″是指参与在患者体内运载或转运本文提供的化合物或者将其运载或转运给患者的药学上可接受的材料、组合物或载体,例如液体或固体填料、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或包封材料。通常,此类构建体从身体的一个器官或部分运载或转运到身体的另一个器官或部分。各载体必须是″可接受的″,其意指与制剂(包括本文提供的化合物)中其他成分相容并且对患者无害。可用作药学上可接受的载体的材料的一些示例包括:糖,诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖;淀粉,诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉;纤维素及其衍生物,诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素;粉末化黄蓍胶;麦芽;明胶;滑石;赋形剂,诸如可可油和栓剂蜡;油,诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油;二醇,诸如丙二醇;多元醇,诸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇;酯,诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯;琼脂;缓冲剂,诸如氢氧化镁和氢氧化铝;表面活性剂;藻酸;不含热原的水;等渗盐水;林格氏液;乙醇;磷酸盐缓冲溶液;以及用于药物制剂中的其他非毒性相容物质。如本文所用,″药学上可接受的载体″还包括与本文提供的化合物的活性相容的任何和所有包衣、抗菌剂和抗真菌剂、以及吸收延迟剂等等,并且对于患者是生理可接受的。还可将辅助活性化合物掺入到组合物中。″药学上可接受的载体″还可以包括本文提供的化合物的药学上可接受的盐。可包括在本文提供的药物组合物中的其他附加成分是本领域中是已知的并且描述于例如Remington′sPharmaceutical Sciences(Genaro编,Mack Publishing Co.,1985,Easton,PA)中,其以引用方式并入本文。
如本文所用,术语″稳定剂″是指能够化学地抑制或防止本文所公开的化合物降解的聚合物。将稳定剂添加到化合物制剂中以改善化合物的化学和物理稳定性。
如本文所用,术语″片剂″表示可口服给药的单剂量固体剂型,其可通过常规压片工艺压制药物物质或其药学上可接受的盐与合适的赋形剂(例如填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂和/或表面活性剂)来制备。
如本文所用,术语″胶囊″是指固体剂型,其中药物包封在硬或软的可溶性容器或″壳″内。容器或壳可由明胶、淀粉和/或其他合适的物质形成。
如本文所用,术语″有效量″、″药学有效量″和″治疗有效量″是指无毒但足以提供期望生物学结果的试剂用量。结果可以是疾病的体征、症状或病因减轻或缓和,或生物系统的任何其他所需的改变。在任何个体情况中,适当的治疗剂量可通过本领域的普通技术人员用常规实验测定出。
如本文所用,术语″组合″、″治疗组合″、″药物组合″或″组合产品″是指用于组合施用的非固定组合或成套药盒,其中两种或更多种治疗剂可独立施用、在时间间隔内同时或分开施用,尤其是在这些时间间隔允许组合伙伴显示出合作效应,例如协同效应的情况下。
术语″调节剂″包括抑制剂和活化剂,其中″抑制剂″是指降低、预防、灭活、脱敏或下调HBV组装和HBV复制或生成感染性颗粒所必需的其他HBV核心蛋白功能的化合物。
如本文所用,术语″衣壳组装调节剂″是指破坏或促进或抑制或阻碍或延迟或减少或修饰正常的衣壳组装(例如,在成熟期间)或正常的衣壳解组装(例如,在感染期间)或干扰衣壳稳定性的化合物,由此诱导异常的衣壳形态和功能。在一个实施方案中,衣壳组装调节剂促进衣壳组装和/或解组装,由此诱导异常的衣壳形态。在另一个实施方案中,衣壳组装调节剂与主要衣壳组装蛋白(CA)相互作用(例如,在活性位点结合,在别构部位结合,修饰和/或阻碍折叠等等),由此破坏衣壳组装或解组装。在又另一个实施方案中,衣壳组装调节剂致使CA的结构或功能扰乱(例如,CA组装、解组装,结合至底物,折叠为合适构象的能力等),其使病毒感染性衰减和/或对病毒是致死的。
如本文所用,术语″处理″或″治疗″被定义为向具有HBV感染、HBV感染的症状或者有发展成HBV感染的可能性的患者施加或施用治疗剂,即本公开的化合物(单独或与另一种药剂组合),或者将治疗剂施加或施用于与患者分离的组织或细胞系(例如,用于诊断或体外施用),目的在于治愈、医治、减轻、缓解、改变、补救、改进、改善或影响HBV感染、HBV感染的症状或者发展成HBV感染的可能性。此类治疗可基于获自药物基因组学领域的知识进行修改或改进。
如本文所用,术语″预防″或″防止″意指如果还未发生,则疾病或障碍没有发展,或者如果该障碍或疾病已经发生,则障碍或疾病没有进一步发展。还考虑了预防与障碍或疾病相关联的一些或所有症状的能力。
如本文所用,术语″患者″、″个体″或″受试者″是指人类或非人类哺乳动物。非人类哺乳动物包括例如牲畜和宠物,诸如绵羊、牛、猪、犬科、猫科和鼠科哺乳动物。优选地,患者、受试者或个体是人类。
在根据本公开的治疗方法中,将有效量的根据本公开的药剂施用于患有或诊断有此类疾病、障碍或病症的受试者。″有效量″是指足以总体上在需要对指定疾病、障碍或病症进行这种治疗的患者中产生期望的治疗或预防有益效果的量或剂量。本公开的化合物的有效量或剂量可通过常规方法确定,如建模、剂量递增研究或临床试验,和通过考虑常规因素来确定,如施用或药物递送的方式或途径,化合物的药代动力学,疾病、障碍或病症的严重程度和病程,受试者之前进行和现在进行的疗法,患者的健康状况和对药物的响应,以及主治医师的判断。剂量的示例在约0.001mg至约200mg化合物/kg受试者体重/天的范围内。化合物的剂量的示例为约1mg至约2,500mg。
一旦患者的疾病、障碍或病症发生改善,可以将剂量调整为预防性或维持性的治疗。例如,施用的剂量或频次或者这两方面可根据症状而降低到能维持期望的治疗或预防作用的水平。当然,如果症状已减轻到适当的水平,可停止治疗。然而,患者可能因病征的任何复发而需要长期的间歇性治疗。
可根据所公开的方法治疗的HBV感染包括HBV基因型A、B、C和/或D感染。然而,在一个实施方案中,所公开的方法可以治疗任何HBV基因型(″泛基因型治疗″)。HBV基因分型可使用本领域已知的方法进行,该方法例如HBV基因分型(InnogeneticsN.V.,Ghent,Belgium)。
如下提供一些示例性实施方案。
实施方案1.一种式(I)的化合物,
或其立体异构体或互变异构体形式,其中
R1选自由以下项组成的组:苯基、5元杂芳基和6元杂芳基,其各自被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、C3-6环烷基、CN、CF3、CHF2、OCHF2和OCF3;
R2选自由以下项组成的组:H、CHF2、CF3、C1-6烷基、C1-6烷基OC1-6烷基和C3-6环烷基;
Q表示选自由以下项组成的组的环:苯基、5元杂芳基和6元杂芳基;
n表示1、2或3;
每个R3独立地表示选自由以下项组成的组的取代基:CN、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、5元杂芳基、6元杂芳基、4-8元杂环基和卤基,C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、5元杂芳基、6元杂芳基和4-8元杂环基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、羟基、C1-6烷基和氧代基;
Rx和Ry各自独立地选自由氢和C1-6烷基组成的组;
其中排除了以下化合物:
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
实施方案2.根据实施方案1所述的化合物,其中R1是选自由以下项组成的组的环:苯基、5元杂芳基和6元杂芳基,其各自被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、C3-6环烷基、CF3、CHF2、OCHF2和OCF3;
优选地,R1是选自由以下项组成的组的环:苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基,其各自被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、C3-6环烷基、CF3、CHF2、OCHF2和OCF3。
实施方案3.根据前述实施方案中任一项所述的化合物,其中R1是苯基,其被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、CF3和CHF2。
实施方案4.根据实施方案1所述的化合物,其中式(I)中的结构单元满足式(Ia)
/>
其中R1a、R1b和R1c各自独立地选自由以下项组成的组:氢、卤基、C1-6烷基、C3-6环烷基、CN、CF3、CHF2、OCHF2和OCF3,其中R1a、R1b和R1c中的至少一者不为氢;
其中R1a、R1b和R1c各自独立地选自由以下项组成的组:氢、卤基、C1-6烷基、C3-6环烷基、CF3、CHF2、OCHF2和OCF3,其中R1a、R1b和R1c中的至少一者不为氢。
实施方案5.根据实施方案4所述的化合物,其中R1a和R1b独立地选自由卤基和CF3组成的组,并且其中R1c为氢。
实施方案6.根据前述实施方案中任一项所述的化合物,其中R2选自由以下项组成的组:CHF2、CF3、C1-6烷基、C1-6烷基OC1-6烷基和C3-6环烷基;
式(I)的结构具有式(I-1)或式(I-2)
实施方案7.根据前述实施方案中任一项所述的化合物,其中R2为甲基。
实施方案8.根据前述实施方案中任一项所述的化合物,其中Q是选自由以下项组成的组的环:苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、吡唑基和咪唑基。
实施方案9.根据前述实施方案中任一项所述的化合物,其中式(I)中的结构单元满足式(Ib)
其中
X1、X2、X3、X4和X5均为CH;或者
X1、X2、X3、X4和X5中的一者或两者为N,并且其余为CH。
实施方案10.根据实施方案9所述的化合物,其中式(I)的结构单元满足式(Ic)
其中
X1、X2、X4和X5均为CH;
X2为N,并且X1、X4和X5为CH;或者
X1为N,并且X2、X4和X5为CH。
实施方案11.根据实施方案9所述的化合物,其中
X1和X2均为N,并且X4和X5为CH;
X2和X4均为N,并且X1和X5为CH;
X1和X4均为N,并且X2和X5为CH;或者
X1和X5均为N,并且X2和X4为CH。
实施方案12.根据前述实施方案中任一项所述的化合物,其中式(I)中的结构单元满足式(Ib′)
其中Y1、Y2、Y3和Y4中的一者或两者为N或NH,并且其余为C。
实施方案13.根据前述实施方案中任一项所述的化合物,其中卤基是F、Cl或Br。
实施方案14.根据前述实施方案中任一项所述的化合物,其中n为1或2。
实施方案15.根据前述实施方案中任一项所述的化合物,其中Rx和Ry中的一者为氢,并且另一者为C1-6烷基。
实施方案16.根据前述实施方案中任一项所述的化合物,其中一个R3独立地选自由以下项组成的组:卤基、CH3、C(CH3)2OH、CH2CF3、CF3和OCHF2。
实施方案17.一种选自由表1和表2和实施例中的化合物或其立体异构体或互变异构体形式组成的组的化合物:
或其药学上可接受的盐、N-氧化物或溶剂化物。
实施方案18.一种药物组合物,所述药物组合物包含根据实施方案1至17中任一项所述的化合物,并且还包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
实施方案19.根据实施方案1至17中任一项所述的化合物或根据实施方案18所述的药物组合物,所述化合物或药物组合物用作药物。
实施方案20.根据实施方案1至17中任一项所述的化合物或根据实施方案18所述的药物组合物,所述化合物或药物组合物用于在对其有需要的受试者中预防或治疗HBV感染或HBV引起的疾病。
实施方案21.根据实施方案1至17中任一项所述的化合物或根据实施方案18所述的药物组合物,所述化合物或药物组合物用于预防或治疗慢性乙型肝炎。
实施方案22.一种在对其有需要的个体中治疗HBV感染或HBV引起的疾病的方法,所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据实施方案1至17中任一项所述的化合物或根据实施方案18所述的药物组合物。
实施方案23.一种包含第一化合物和第二化合物的产品,所述产品作为组合制剂同时、分开或相继用于在对其有需要的受试者中预防或治疗HBV感染或HBV引起的疾病,其中所述第一化合物不同于所述第二化合物,其中所述第一化合物是根据实施方案1至17中任一项所述的化合物或根据实施方案18所述的药物组合物,并且其中所述第二化合物是另一种HBV抑制剂。
实施方案24.根据实施方案23所述的产品,其中所述第二化合物是选自由以下项组成的组的另一种HBV抑制剂:选自HBV组合药物、HBV疫苗、HBV DNA聚合酶抑制剂、免疫调节剂、toll样受体(TLR)调节剂、干扰素α受体配体、透明质酸酶抑制剂、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制剂、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)抑制剂、亲环蛋白抑制剂、HBV病毒进入抑制剂、靶向病毒mRNA的反义寡核苷酸、短干扰RNA(siRNA)和ddRNAi核酸内切酶调节剂、核糖核苷酸还原酶抑制剂、HBV E抗原抑制剂、共价闭合环状DNA(cccDNA)抑制剂、法尼醇X受体激动剂、HBV抗体、CCR2趋化因子拮抗剂、胸腺素激动剂、细胞因子、核蛋白调节剂、视黄酸诱导型基因1刺激剂、NOD2刺激剂、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂、吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)途径抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、重组胸腺素α1、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、KDM抑制剂、HBV复制抑制剂、精氨酸酶抑制剂以及其他HBV药物的治疗剂。
实施方案25.根据实施方案1至17中任一项所述的化合物或根据实施方案18所述的药物组合物,所述化合物或药物组合物用于预防或治疗受试者中的HBV感染或HBV引起的疾病,其中所述化合物或药物组合物与另一种HBV抑制剂联合施用于所述受试者。
为了帮助本申请的读者,已将说明书分成各个段落或章节。这些分割不应被认为是将段落或章节的实质与另一段落或章节的实质拆开。相反,本说明书涵盖可预期的各个章节、段落和句子的所有组合。
本文所引用的所有参考文献的每个相关公开内容以引用的方式明确并入本文中。提供以下实施例是为了举例说明,而不是为了限制。
实施例
现在将参考示例性合成方案来描述可用于本公开的方法中的示例性化合物,以用于下文的它们的一般性制备和后面的具体实施例。本领域技术人员将认识到,为获得本文的多种化合物,可适当地选择原料,使得在根据需要进行保护或不保护的情况下,在整个反应方案中将携带最终需要的取代基,以得到所期望的产物。另选地,可能需要或者希望采用合适的基团代替最终期望的取代基,该合适的基团可经历整个反应方案,并且在适当情况下用所期望的取代基代替。除非另外指明,否则变量均如上文针对式(I)所定义。反应可在溶剂的熔点和回流温度之间进行,并且优选在介于0℃和溶剂的回流温度之间进行。可采用常规加热或微波加热来加热反应。反应还可在密闭压力容器中在高于溶剂的正常回流温度下进行。
式(I)中任一者的化合物可使用本领域普通技术人员已知的方法转化成它们相应的盐。例如,将式(I)的胺用三氟乙酸、HCl或柠檬酸在溶剂(诸如Et2O、CH2Cl2、THF、MeOH、氯仿或异丙醇)中进行处理,得到相应的盐形式。作为另外一种选择,通过反相HPLC纯化条件,获得三氟乙酸或甲酸盐。用极性溶剂(包括极性溶剂的混合物和极性溶剂的水性混合物)或用非极性溶剂(包括非极性溶剂的混合物),通过重结晶可以获得式(I)的化合物的药学上可接受的盐的结晶形式。
如果根据本公开的化合物具有至少一个手性中心,则它们可以对映体形式相应地存在。如果化合物具有两个或更多个手性中心,则它们还可以非对映体形式存在。应当理解,所有的此类异构体及其混合物涵盖在本公开的范围内。
通过SFC拆分来分离表示为″立体异构体混合物″(意指两种或更多种立体异构体的混合物,并且包括对映体、非对映体及它们的组合)的化合物。
化合物可通过形式特异性合成或者通过拆分来作为单一形式(诸如单一对映体)获得。作为另外一种选择,化合物可作为各种形式的混合物(诸如外消旋混合物(1∶1)或非外消旋混合物(非1∶1))获得。在获得对映体的外消旋混合物和非外消旋混合物的情况中,可以使用本领域普通技术人员已知的常规分离方法诸如手性色谱法、重结晶、非对映体盐形成法、衍生成非对映体加合物、生物转化或酶促转化来分离单一对映体。在获得区域异构体混合物或非对映体混合物的情况下,如适用,可以使用常规方法诸如色谱法或结晶来分离单一异构体。
1.一般信息
化学名
使用化学软件ACD/ChemSketch产生化学名,并且可优选地遵循IUPAC规则。
LCMS方法的一般程序
高效液相色谱(HPLC)测量使用LC泵、二极管阵列(DAD)或UV检测器和如相应方法中所规定的柱来进行。
将来自柱的流送入配置有大气压离子源的质谱仪(MS)。设置调整参数(例如,扫描范围、驻留时间......)以便获得允许识别化合物的标称单同位素分子量(MW)的离子在技术人员的知识范围内。用适当的软件进行数据采集。
通过实验保留时间(Rt)和离子来描述化合物。如果没有不同地规定,则所报告的分子离子对应于[M+H]+(质子化分子)和/或[M-H]-(去质子化分子)。在化合物不可直接电离的情况下,指定加合物的类型(即[M+NH4]+、[M+HCOO]-等)。所有结果都是在具有通常与所用方法相关的实验不确定性的情况下获得的。在下文中,″SQD″表示单四极检测器,″MSD″表示质量选择检测器,″RT″表示室温,″BEH″表示桥接乙基硅氧烷/二氧化硅杂化物,″DAD″表示二极管阵列检测器,″HSS″高强度二氧化硅,″Q-Tof″四极杆飞行时间质谱仪,″CLND″表示化学发光氮检测器,″ELSD″表示蒸发光扫描检测器。
NMR分析
1H NMR谱记录在1)Bruker DPX 400MHz光谱仪、或2)a Bruker Avance 400MHz光谱仪、或c)Bruker Avance III 400MHz光谱仪、或d)Bruker Avance600MHz光谱仪、或e)Bruker Avance NEO 400MHz光谱仪、或f)Bruker model AVIII 400光谱仪、g)ZKNJ BIXI-1300MHz、Bruker Avance III 400MHz、或h)Bruker AVANCE Neo 400MHz上。
除非另有说明,在环境温度下记录NMR谱。数据报告如下:在标度上相对于TMS(δ=0ppm)的以百万分率(ppm)计的化学位移、积分、多重态(s=单峰、d=双峰、t=三重峰、q=四重峰、quin=五重峰、sext=六重峰、sept=七重峰、m=多重峰、b=宽峰、或这些的组合)、以赫兹(Hz)计的耦合常数J。
MS分析
除非另外指明,否则在Shimadzu LCMS-2020MSD或Agilent 1200/G6110A MSD上使用正离子模式的电喷雾电离(ESI)获得质谱。
2.缩写
表3
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实验程序
中间体Int A
中间体Int A-2:
(R)-(2,3-二羟丙基)氨基甲酸苄酯
向(R)-3-氨基丙烷-1,2-二醇Int A-1(5g,54.9mmol)在四氢呋喃(30mL)和水(30mL)中的溶液中添加碳酸钠(8g,75.5mmol),并且在氮气气氛下于0℃滴加氯甲酸苄酯(8.3mL,58.4mmol)。在室温处搅拌过夜后,将混合物过滤,去除四氢呋喃并用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤并浓缩,得到呈白色固体的标题化合物(11g,由1H NMR测得为90%纯度,80%收率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)7.48-7.35(m,5H),5.27(br s,1H),5.16(br s,2H),3.89-3.78(m,1H),3.73-3.60(m,2H),3.47-3.31(m,2H),2.47-2.28(m,2H)。
中间体Int A-3:
(R)-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-羟丙基)氨基甲酸苄酯
在0℃处,向(R)-(2,3-二羟丙基)氨基甲酸苄酯Int A-2(11g,90%纯度,44.0mmol)在二氯甲烷(110mL)中的溶液中添加三乙胺(6.6mL,78.3mmol)、N,N-二甲基吡啶-4-胺(247mg,2.02mmol)和叔丁基氯二苯基硅烷(12mL,46.1mmol)。在室温处搅拌过夜后,将混合物浓缩、过滤并用二氯甲烷洗涤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1至2∶1)纯化,得到呈无色油状物的标题化合物(17g,由1H NMR测得为90%纯度,75%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)7.64-7.62(m,4H),7.45-7.30(m,11H),5.08(s,3H),3.84-3.79(m,1H),3.70-3.58(m,2H),3.45-3.39(m,1H),3.23-3.16(m,1H),1.06(s,9H)。
中间体Int A-4:
(R)-3-乙基2-((R)-10,10-二甲基-3-氧代-1,9,9-三苯基-2,8-二氧杂-4-氮杂-
9-硅杂十一烷-6-基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5(4H)-二甲酸5-叔丁
酯
在0℃处,向(R)-(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-羟丙基)氨基甲酸苄酯Int A-3(17g,90%纯度,33.0mmol)、(R)-3-乙基6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5(4H)-二甲酸5-叔丁酯(15g,48.5mmol)和三苯基膦(17g,64.8mmol)在四氢呋喃(300mL)中的溶液中添加偶氮二甲酸二叔丁酯(15g,65.1mmol)。在50℃处搅拌过夜后,将混合物浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1至2∶1)纯化,得到粗产物,将该粗产物通过C18柱(乙腈:水=95%至100%)进一步纯化,得到呈浅黄色油状物的标题化合物(21g,由LCMS测得为82%纯度,69%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.40min,C42H54N4O7Si的质量计算值为754.4,m/z实测值为755.1[M+H]+。
中间体Int A-5:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8, 9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯:
向(R)-3-乙基2-((R)-10,10-二甲基-3-氧代-1,9,9-三苯基-2,8-二氧杂-4-氮杂-9-硅杂十一烷-6-基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5(4H)-二甲酸5-叔丁酯Int A-4(13g,82%纯度,14.1mmol)的甲醇(150mL)溶液中添加10%钯/活性炭催化剂(1.5g,1.41mmol)。在室温处在氢气气氛下搅拌过夜后,过滤反应混合物。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1至2∶1)纯化,得到呈浅黄色油状物的标题化合物(6.7g,由1H NMR测得为100%纯度,83%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.03min,C32H42N4O4Si的质量计算值为574.3,m/z实测值为575.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)8.13(br s,1H),7.56-7.51(m,4H),7.48-7.40(m,6H),4.90(d,J=17.2Hz,1H),4.77-4.65(m,1H),4.58-4.54(m,1H),4.12-3.83(m,4H),3.71-3.65(m,1H),2.83(dd,J=15.6,6.0Hz,1H),2.56(d,J=15.6Hz,1H),1.43(s,9H),1.00(d,J=6.8Hz,3H),0.92(s,9H)。
中间体Int A-6:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢
吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮盐酸盐
在室温处,将(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯Int A-5(1.36g,2.37mmol)在4M盐酸盐的1,4-二氧杂环己烷(20mL)溶液中的溶液搅拌2小时。减压浓缩混合物,得到呈黄色固体的标题化合物(1.2g,93%纯度,92.3%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.34min,C27H34N4O2Si的质量计算值为474.3,m/z实测值为474.7[M+H]+。
中间体Int A:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3- 甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮IntA-6(1.5g,97%纯度,3.07mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液中添加3,4-二氯苯甲酸(800mg,4.19mmol)、2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(1.8g,4.73mmol)和三乙胺(1.5mL,10.8mmol)。将混合物于室温搅拌2小时。将混合物用水(50mL)稀释,用0.5M盐酸盐水溶液酸化至pH为约6,并用乙酸乙酯(80mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈黄色固体的Int A(1.87g,由LCMS测得为100%纯度,94.2%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.08min,C34H36Cl2N4O3Si的质量计算值为646.2,m/z实测值为647.1[M+H]+。
中间体Int B
中间体Int B-2:
(3S,4R,5S)-5-((S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)-3,4-二羟基二氢呋喃-2
(3H)-酮
在室温处,向L-(+)-古洛糖酸γ-内酯Int B-1(30g,168mmol)在四氢呋喃(125mL)和N,N-二甲基甲酰胺(125mL)中的溶液中添加4-甲基苯磺酸水合物(3.2g,16.8mmol)和2,2-二甲氧基丙烷(23.0g,221mmol)。在室温处搅拌16小时后,添加碳酸钠(30.0g)并搅拌1小时。过滤所得混合物,并用四氢呋喃洗涤滤饼。将滤液减压浓缩。将所得棕色固体用甲苯(300mL)研磨,过滤,用甲苯(50mL)洗涤,所得滤饼为呈黄色固体的标题产物(37.5g,由1HNMR测得为85%纯度,87%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.88(d,J=7.2Hz,1H),5.44(d,J=4.0Hz,1H),4.44-4.41(m,1H),4.30-4.25(m,2H),4.22-4.19(m,1H),4.07(dd,J=8.8和6.4Hz,1H),3.76(dd,J=8.8和6.4Hz,1H),1.35(s,3H),1.29(s,3H)。
中间体Int B-3:
(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醛
在室温处,向碳酸氢钠(27.0g,321mmol)的水(150mL)溶液中分批添加高碘酸钠(69.0g,323mmol)和(3S,4R,5S)-5-((S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)-3,4-二羟基二氢呋喃-2(3H)-酮Int B-2(36.0g,85%纯度,140mmol)在四氢呋喃(160mL)和水(10mL)中的溶液。在35℃处搅拌4.5小时后,将反应混合物冷却至5℃并于该温度保持14小时。通过过滤去除固体并用四氢呋喃(100mL)洗涤滤饼,然后将水相用四氢呋喃(80mL)萃取两次并用乙酸乙酯(40mL)萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥,过滤,浓缩,得到呈无色油状物的标题产物(18.0g,由1H NMR测得为70%纯度,69%收率),无需进一步纯化。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.60(d,J=1.2Hz,1H),4.13-4.06(m,1H),3.93-3.89(m,1H),3.70-3.67(m,1H),1.30(s,3H),1.25(s,3H)。
中间体Int B-5:
(S)-N-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
向1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙酮Int B-4(25g,134mmol)和(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(33g,272mmol)在四氢呋喃(400mL)中的溶液中添加四异丙醇钛(83mL,280mmol)。在70℃处搅拌24小时后,将反应混合物冷却至0℃,然后添加硼氢化钠(3.3g,87.2mmol),并在0℃处搅拌2小时。将反应用盐水(40mL)淬灭并用硅藻土过滤。用乙酸乙酯(200mL)洗涤滤饼。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=3∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(20g,由1H NMR测得为95%纯度,48.6%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.60min,C13H19F2NO2S的质量计算值为291.1,m/z实测值为292.0[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IBN-5 5μm4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=90∶10,1mL/min;温度:30℃;波长:230nm,RT=5.250min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35(d,J=8.4Hz,2H),7.10(d,J=8.4Hz,2H),6.50(t,J=74.0Hz,1H),4.57-4.52(m,1H),3.38(br s,1H),1.50(d,J=6.4Hz,3H),1.24(s,9H)。
中间体Int B-6:
(S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙胺
在0℃处,向(S)-N-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺Int B-5(20g,95%纯度,65.2mmol)的甲醇(210mL)溶液中缓慢添加4M盐酸盐的1,4-二氧杂环己烷(70mL)溶液。在0℃处搅拌2小时后,浓缩混合物,得到黄色残余物,将其溶解于水(200mL)中,用乙酸乙酯(40mL)萃取三次。将水层用饱和碳酸钠水溶液碱化至pH为约8,用乙酸乙酯(300mL)萃取五次。将合并的有机层用盐水洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(10.5g,由1H NMR测得为90%纯度,73.5%收率)。手性HPLC(柱:Chiralpak IB N-5 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH∶DEA=85∶15∶0.2,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=7.084min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35(d,J=8.4Hz,2H),7.08(d,J=8.4Hz,2H),6.49(t,J=74.0Hz,1H),4.13(q,J=6.4Hz,1H),1.79-1.72(m,2H),1.38(d,J=6.4Hz,3H)。
中间体Int B-7:
(S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基)
乙胺
向(S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙胺Int B-6(10.0g,90%纯度,48.1mmol)在甲醇(50mL)中的混合物中添加(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醛Int B-3(16.1g,70%纯度,86.6mmol)在四氢呋喃(50mL)和乙酸(4mL)中的溶液。在氮气气氛下于室温搅拌10分钟后,添加氰基三氢硼酸钠(7.6g,121mmol),并在氮气气氛下于室温搅拌1小时。然后添加水(200mL),并用乙酸乙酯(150mL)萃取三次。将合并的有机层减压浓缩。将所得残余物通过C18(乙腈:水(+0.02%乙酸铵)=10%至75%)纯化,得到呈无色油状物的标题化合物(10.0g,100%纯度,69%收率,97.9%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=1.64min,C15H21F2NO3的质量计算值为301.2,m/z实测值为302.0[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=98∶2,1mL/min;温度:30℃;波长:214nm,RT=6.421min)。
中间体Int B-8:
(R)-5-(叔丁氧羰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸
在0℃处,向(R)-3-乙基6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5(4H)-二甲酸5-叔丁酯(20g,90%纯度,58.2mmol)的甲醇(210mL)溶液中添加氢氧化钠(7.2g,180mmol)的水(70mL)溶液。在40℃处搅拌12小时后,向反应混合物中添加水(80mL)并浓缩,得到黄色残余物,将其添加到1M盐酸水溶液中,直到大量固体沉淀。过滤后,将滤饼用水(200mL)洗涤,在50℃的真空干燥烘箱中干燥3小时,然后冷却至室温,得到呈白色固体的标题化合物(17.2g,由1H NMR测得为95%纯度,99.8%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.16min,C13H19N3O4的质量计算值为281.1,m/z实测值为282.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.14(s,2H),4.89-4.85(m,1H),4.69(s,1H),4.03-3.99(m,1H),2.83(dd,J=15.6,5.6Hz,1H),2.54(d,J=8.0Hz,1H),1.42(s,9H),1.02(d,J=7.2Hz,3H)。
中间体Int B-9:
(R)-3-(((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)(((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-
4-基)甲基)氨基甲酰基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯
在室温处,向(S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)-N-(((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基)乙胺Int B-7(10.5g,95%纯度,33.1mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(350mL)溶液中添加(R)-5-(叔丁氧基羰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸Int B-8(11.7g,95%纯度,39.5mmol)、N,N-二甲基吡啶-4-胺(12g,98.2mmol)、HATU(19g,50.0mmol)。在55℃处搅拌12小时后,将混合物用水(1.2L)稀释并用乙酸乙酯(900mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(600mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(13g,由1H NMR测得为95%纯度,66.1%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.70min,C28H38F2N4O6的质量计算值为564.3,m/z实测值为565.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.43(m,2H),7.11-7.08(m,2H),6.50(t,J=73.6Hz,1H),5.02-4.88(m,2H),4.19-4.11(m,2H),4.00-3.98(m,1H),3.58-3.40(m,4H),2.99-2.94(m,1H),2.55(d,J=16.0Hz,1H),1.73-1.60(m,3H),1.48(s,9H),1.39-1.24(m,6H),1.13(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体Int B-10:
(R)-3-(((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)((R)-2,3-二羟丙基)氨基甲酰基)-
6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯
在室温处,向(R)-3-(((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)(((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基)氨基甲酰基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯IntB-9(11g,95%纯度,18.5mmol)在甲醇(220mL)和乙酸(110mL)中的溶液中添加。在60℃处搅拌16小时后,将混合物浓缩并用饱和碳酸氢钠水溶液调节至pH为约8,用乙酸乙酯(100mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(80mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(11g,78%纯度,88.4%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.50min,C25H34F2N4O6的质量计算值为524.2,m/z实测值为525.2[M+H]+。
中间体Int B-11:
(R)-3-(((R)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-羟丙基)((S)-1-(4-(二氟甲
氧基)苯基)乙基)氨基甲酰基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔
丁酯
在0℃处,向(R)-3-(((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)((R)-2,3-二羟丙基)氨基甲酰基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯Int B-10(11g,78%纯度,16.4mmol)的无水二氯甲烷(150mL)溶液中添加三乙胺(4.8mL,34.4mmol)、N,N-二甲基吡啶-4-胺(200mg,1.64mmol)和叔丁基氯二苯基硅烷(5.4g,19.6mmol)。在室温处搅拌16小时后,将混合物用二氯甲烷(150mL)稀释,并用水(50mL)洗涤两次,用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(8.1g,由LCMS测得为100%纯度,64.9%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.85min,C41H52F2N4O6Si的质量计算值为762.4,m/z实测值为762.9[M-H]-。
中间体Int B-12:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)
苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯
在0℃处,向(R)-3-(((R)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-羟丙基)((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)氨基甲酰基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯Int B-11(8.1g,100%纯度,10.6mmol)的四氢呋喃(160mL)溶液中添加三苯基膦(5.5g,21.0mmol)和二氮烯-1,2-二甲酸二叔丁酯(5.2g,22.6mmol)。在0℃处搅拌2小时后,减压浓缩混合物,得到粗产物,并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=2∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(8.2g,95%纯度,98.5%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.07min,C41H50F2N4O5Si的质量计算值为744.4,m/z实测值为744.9[M-H]-。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.61-7.56(m,4H),7.47-7.34(m,8H),7.13-7.11(m,2H),6.50(t,J=73.6Hz,1H),6.07(q,J=6.8Hz,1H),5.17-5.12(m,1H),4.90-4.80(m,1H),4.34-4.29(m,1H),4.22-4.18(m,1H),4.10-4.07(m,1H),3.80(t,J=9.6Hz,1H),3.62(dd,J=13.2和4.8Hz,1H),3.34(dd,J=13.2和4.4Hz,1H),2.90(dd,J=15.6和5.6Hz,1H),3.62(d,J=15.6Hz,1H),1.53(d,J=7.2Hz,3H),1.48(s,9H),1.07(d,J=6.8Hz,3H),1.03(s,9H)。
中间体Int B:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)
苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-
酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯Int B-12(15.6g,95%纯度,19.9mmol)的二氯甲烷(120mL)溶液中添加三氟乙酸(30mL)。在0℃处搅拌3小时后,将混合物浓缩并用饱和碳酸氢钠水溶液调节至pH为约8,用乙酸乙酯(150mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色固体的标题化合物(9.7g,由LCMS测得为100%纯度,75.6%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.99min,C36H42F2N4O3Si的质量计算值为644.3,m/z实测值为645.2[M+H]+。
化合物1A和1B
中间体1-2:
N-甲氧基-N,6-二甲基哒嗪-3-甲酰胺
在氮气气氛下在室温处,向6-甲基哒嗪-3-甲酸(3.5g,25.340mmol)、N,O-二甲基羟胺盐酸盐1-1(3.7g,37.932mmol)、1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(4.8g,35.523mmol)和三乙胺(5.3g,52.377mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(7.3g,38.080mmol)。在室温处搅拌过夜后,将混合物浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(3g,由1H NMR测得为90%纯度,59%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.85-7.73(m,1H),7.47-7.40(m,1H),3.79(s,3H),3.40(br s,3H),2.78(s,3H)。
中间体1-3:
1-(6-甲基哒嗪-3-基)乙酮
在0℃处,向N-甲氧基-N,6-二甲基哒嗪-3-甲酰胺1-2(3g,90%纯度,14.901mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中添加1M甲基溴化镁的四氢呋喃溶液(19mL,19mmol)。将混合物在0℃处搅拌1小时。将混合物用氯化铵水溶液(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(2g,由1H NMR测得为90%纯度,89%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.01(d,J=8.8Hz,1H),7.46(d,J=8.8Hz,1H),2.86(s,3H),2.80(s,3H)。
中间体1-4:
1-(6-甲基哒嗪-3-基)乙醇
在0℃处,向1-(6-甲基哒嗪-3-基)乙酮1-3(2g,90%纯度,13.221mmol)的甲醇(15mL)溶液中添加硼氢化钠(750mg,19.824mmol)。在0℃处搅拌1小时后,将混合物用0.5M盐酸水溶液(10mL)稀释并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.9g,由1H NMR测得为90%纯度,94%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(d,J=8.8Hz,1H),7.32(d,J=8.4Hz,1H),5.09(q,J=6.8Hz,1H),2.69(s,3H),1.54(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体1-5:
3-(1-溴乙基)-6-甲基哒嗪
在0℃处,向1-(6-甲基哒嗪-3-基)乙醇1-4(1.9g,90%纯度,12.376mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中添加三苯基膦(5g,19.063mmol)和全溴甲烷(5g,15.077mmol)。在25℃处搅拌12小时后,过滤混合物。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.5g,由1H NMR测得为90%纯度,54%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.64(d,J=8.8Hz,1H),7.38(d,J=8.0Hz,1H),5.46(q,J=6.8Hz,1H),2.74(s,3H),2.11(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体1-6:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-
甲基-9-(1-(6-甲基哒嗪-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-
a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(900mg,87%纯度,1.21mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶液中添加氢化钠(97mg,纯度60%,2.43mmol)。将混合物在室温处搅拌0.5小时后,向反应混合物中添加3-(1-溴乙基)-6-甲基哒嗪1-5(675mg,90%纯度,3.02mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液。将所得反应混合物在室温处搅拌4小时。将反应混合物倾注到10mL的冰水中并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈白色固体的标题化合物(1.2g,由LCMS测得为46%纯度,59%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.748min,C41H44Cl2N6O3Si的质量计算值为766.3,m/z实测值为769.0[同位素M+H]+。
中间体1-7:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(6-甲基哒嗪-3-基)
乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在室温处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(6-甲基哒嗪-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮1-6(1.2g,46%纯度,0.719mmol)的四氢呋喃(8mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1mL,1mmol)。在室温处搅拌1小时后,将反应混合物用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤两次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶乙酸乙酯=10∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(410mg,由LCMS测得为88%纯度,95%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.43min,C25H26Cl2N6O3的质量计算值为528.1,m/z实测值为529.4[M+H]+。
中间体1-8:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(6-甲基哒嗪-3-基)乙基)-10-氧
代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(6-甲基哒嗪-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮1-7(410mg,88%纯度,0.682mmol)、亚氯酸钠(155mg,1.371mmol)和2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(220mg,1.399mmol)在乙腈(6mL)中的溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(6mL)和次氯酸钠溶液(1mL,10%水溶液,1.679mmol)。在室温处搅拌过夜后,将反应混合物用饱和亚硫酸钠水溶液(10mL)淬灭,用1N盐酸盐酸化至pH为4,并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=40%至60%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(390mg,由LCMS测得为93%纯度,98%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.22min,C25H24Cl2N6O4的质量计算值为542.1,m/z实测值为543.2[M+H]+。
化合物1:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-(1-(6-甲基哒嗪-3-基)乙基)-
10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(6-甲基哒嗪-3-基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸1-8(220mg,93%纯度,0.377mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(8mL)溶液中添加甲胺盐酸盐(50mg,0.741mmol)、苯并三唑-1-醇(100mg,0.740mmol)、1-乙基-(3-(3-二甲基氨基)丙基)-碳二亚胺盐酸盐(140mg,0.730mmol)和三乙胺(187mg,1.848mmol)。将混合物于室温搅拌3小时。将混合物用水(10mL)稀释,用0.5M盐酸水溶液酸化至pH为5,并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=30%至60%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(180mg,由LCMS测得为100%纯度,86%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.38min,C26H27Cl2N7O3的质量计算值为555.2,m/z实测值为556.5[M+H]+。
化合物1A和1B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-((R*)-1-(6-甲基哒嗪-3-基)乙
基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
(1A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-((S*)-1-(6-甲基哒嗪-3-基)乙 基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺 (1B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-(1-(6-甲基哒嗪-3-基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺化合物1的外消旋混合物(210mg,100%纯度,0.409mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IB 5μm 30mm*250mm;流动相:ACN=100,25mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的化合物1A(57.5mg,由LCMS测得为99.0%纯度,32%收率,100%立体异构纯)和化合物1B(53.4mg,由LCMS测得为99.6%纯度,30%收率,100%立体异构纯)。
化合物1A:
LC-MS(ESI):RT=3.229min,C26H27Cl2N7O3的质量计算值为555.2,m/z实测值为556.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IB 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN=100,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=6.903min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.53-7.50(m,2H),7.33-7.24(m,3H),6.36-6.18(m,1H),5.96(br s,1H),5.67-5.15(m,1H),4.90-4.88(m,1H),4.74-4.28(m,2H),4.15-4.03(m,2H),3.17-2.92(m,1H),2.73-2.67(m,7H),1.76(d,J=6.8Hz,3H),1.28(d,J=6.4Hz,3H)。
化合物1B:
LC-MS(ESI):RT=3.251min,C26H27Cl2N7O3的质量计算值为555.2,m/z实测值为556.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IB 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN=100,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=8.563min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.51-7.48(m,2H),7.44-7.35(m,1H),7.31-7.29(m,1H),7.25-7.22(m,1H),6.09-5.83(m,2H),5.70-5.22(m,1H),4.93(s,1H),4.74-4.24(m,3H),3.97-3.94(m,1H),3.14-2.95(m,1H),2.81(d,J=4.4Hz,3H),2.73-2.65(m,4H),1.74(d,J=6.8Hz,3H),1.28(d,J=6.4Hz,3H)。
化合物2A和2B
中间体2-2:
1-(4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯基)乙醇
在氮气气氛下在0℃处,向4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯甲醛2-1(500mg,2.89mmol)的无水四氢呋喃(6mL)溶液中滴加1.0M甲基溴化镁的四氢呋喃溶液(4mL,4mmol)溶液。将反应混合物在20℃处搅拌12小时。然后,将其用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭,用乙酸乙酯(10mL)萃取三次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1至2∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(400mg,由LCMS测得为93%纯度,68.1%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.09min,C10H11N3O的质量计算值为189.1,m/z实测值为190.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.54(s,1H),8.10(s,1H),7.66(d,J=8.4Hz,2H),7.53(d,J=8.4Hz,2H),4.98(q,J=6.4Hz,1H),1.6(s,1H),1.54(d,J=6.0Hz,3H)。
中间体2-3:
1-(4-(1-溴乙基)苯基)-1H-1,2,4-三唑
在0℃处,向1-(4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯基)乙醇2-2(100mg,93%纯度,0.49mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中滴加三溴膦(300mg,0.37mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液。将所得混合物在0℃处搅拌3小时。减压浓缩滤液,得到呈白色固体的粗产物(540mg,由1HNMR测得为71%纯度,72.6%收率)。将粗制品用于下一步骤中,无需纯化。LC-MS(ESI):RT=1.65min,C10H10BrN3的质量计算值为251.0,m/z实测值为252.0[M+H]+。
中间体2-4:
(3R,7S)-9-(1-(4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯基)乙基)-7-(((叔丁基二苯基甲硅
烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]
吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在25℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(400mg,83%纯度,0.51mmol)和1-(4-(1-溴乙基)苯基)-1H-1,2,4-三唑2-3(380mg,65%纯度,0.98mmol)在2-甲基四氢呋喃(4mL)中的溶液中添加氢氧化钠(4mL,50%重量)和N-苄基-N,N-二乙基氯化乙铵(10mg,0.04mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时。将反应混合物倾注到水(10mL)中并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,得到呈黄色油状物的粗产物(600mg,由LCMS测得为61%纯度,87.2%收率)。该粗制品无需纯化即可用于下一步骤。LC-MS(ESI):RT=1.50min和2.11min,C44H45N2Cl7O3Si的质量计算值为817.3,m/z实测值为580.3[M+H-TBDPS]+和818.5[M+H]+。
中间体2-5:
(3R,7S)-9-(1-(4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-
7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-
酮
在0℃处,向(3R,7S)-9-(1-(4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯基)乙基)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮2-4(600mg,61%纯度,0.34mmol)的四氢呋喃(6mL)溶液中添加1.0M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(0.5mL,0.5mmol)。然后将反应混合物在20℃处搅拌2小时。将反应混合物倾注到水(10mL)中并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,将其通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=40%-60%)纯化,得到呈无色固体的标题产物(160mg,由1HNMR测得为90%纯度,55.5%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.44min,C28H27Cl2N7O3的质量计算值为579.2,m/z实测值为580.1[M+H]+。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.61(s,1H),8.15(s,1H),7.82-7.69(m,2H),7.66(d,J=6.3Hz,1H),7.59-7.49(m,3H),7.33-7.30(m,1H),6.28-6.06(m,1H),5.93-5.33(m,1H),5.29-4.77(m,1H),4.74-4.40(m,2H),4.37-4.25(m,1H),4.10-3.98(m,1H),3.92-3.71(m,1H),3.69-3.55(m,1H),3.40-3.21(m,1H),3.18-2.97(m,1H),2.72-2.50(m,1H),1.68(d,J=7.2Hz,3H),1.33-1.28(m,3H)。
中间体2-6:
(3R,7S)-9-(1-(4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-
3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-9-(1-(4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮2-5(160mg,90%纯度,0.25mmol)的乙腈(1.4mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾(1.4mL)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(80mg,0.51mmol)、亚氯酸钠(60mg,0.53mmol)并滴加10%次氯酸钠溶液(370mg,0.34mmol)。使反应混合物缓慢回到室温。在室温处搅拌14小时后,将反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液(2mL)淬灭,用1.0M盐酸溶液酸化至pH=4-5,并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到残余物。用(石油醚∶二氯甲烷=10∶1)研磨残余物。将所得固体通过砂漏斗过滤,用石油醚(3×5mL)冲洗并收集,得到呈白色固体的标题产物(160mg,由LCMS测得为92%纯度,99.8%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.25min,C28H25Cl2N7O4的质量计算值为593.1,m/z实测值为594.2[M+H]+。
化合物2:
(3R,7S)-9-(1-(4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-
N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-9-(1-(4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸2-6(160mg,90%纯度,0.24mmol)、甲胺盐酸盐(50mg,0.74mmol)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(95mg,0.5mmol)和1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(68mg,0.5mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的溶液中滴加三乙胺(160mg,1.58mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)溶液。然后将反应混合物在20℃处搅拌2小时。将反应混合物倾注到水(10mL)中并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=40%-60%)纯化,得到呈无色固体的标题物(80mg,由LCMS测得为94%纯度,51.1%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.46min,C29H28Cl2N8O3的质量计算值为606.2,m/z实测值为607.2[M+H]+。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.60(d,J=3.3Hz,1H),8.15(d,J=2.4Hz,1H),7.74-7.70(m,2H),7.58-7.56(m,3H),7.51-7.48(m,1H),7.33-7.32(m,1H),6.24-5.99(m,2H),5.82-5.24(m,1H),5.50-4.81(m,1H),4.73-4.31(m,1H),4.02-3.89(m,1H),3.47(dd,J=13.5,4.8Hz,1H),3.24(br s,1H),2.85(d,J=4.5Hz,2H),2.79-2.68(m,3H),1.69-1.66(m,3H),1.36-1.31(m,3H)。
化合物2A和2B:
(3R,7S)-9-((R*)-1-(4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰
基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(2A)和
(3R,7S)-9-((S*)-1-(4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰
基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(2B)
将(3R,7S)-9-(1-(4-(1H-1,2,4-三唑-1-基)苯基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺化合物2的外消旋混合物(130mg,94%纯度,0.2mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IE 5μm 20mm*250mm;流动相:MeOH∶EtOH=50∶50,25mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的化合物2A(32.3mg,99.6%纯度,26.3%收率,99.8%立体异构纯)和化合物2B(66.7mg,98.6%纯度,52.2%收率,100%立体异构纯)。
化合物2A:
LC-MS(ESI):RT=3.427min,C29H28Cl2N8O3的质量计算值为606.2,m/z实测值为607.2[M+H]+。手性分析:(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:MeOH∶EtOH=50∶50,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=8.411min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.32(s,1H),8.24(s,1H),7.85(d,J=8.4Hz,2H),7.79-7.74(m,3H),7.52-7.32(m,3H),5.91-5.66(m,1H),5.57-5.13(m,1H),4.98(s,1H),4.70-4.40(m,1H),4.32-4.13(m,1H),4.09-3.94(m,1H),3.44-3.33(m,1H),2.97-2.84(m,1H),2.60-2.52(m,1H),2.38(d,J=4.4Hz,3H),1.62-1.42(m,3H),1.29-1.11(m,3H)。
化合物2B:
LC-MS(ESI):RT=3.416min,C29H28Cl2N8O3的质量计算值为606.2,m/z实测值为607.3[M+H]+。手性分析:(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:MeOH∶EtOH=50∶50,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=11.881min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.30(s,1H),8.23(s,1H),8.08-7.98(m,1H),7.90-7.81(m,2H),7.75(d,J=8.4Hz,2H),7.60-7.40(m,3H),5.95-5.67(m,1H),5.53-5.17(m,1H),5.11-4.92(m,1H),4.70-4.36(m,1H),4.29-4.10(m,1H),3.78-3.50(m,2H),2.98-2.83(m,1H),2.64(d,J=4.4Hz,3H),2.58-2.52(m,1H),1.55-1.38(m,3H),1.31-1.11(m,3H)。
化合物3A和3B
中间体3-2:
5-乙基吡啶甲酸甲酯
在0℃处,向5-乙基吡啶甲酸3-1(500mg,3.31mmol)和碳酸钾(800mg,5.79mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的溶液中添加碘甲烷(800mg,5.64mmol)。将反应混合物在室温处搅拌4小时,将反应混合物用水(20mL)淬灭并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=40%-60%)纯化,得到呈无色油状物的标题物(280mg,由LCMS测得为100%纯度,51.2%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.34min,C9H11NO2的质量计算值为165.1,m/z实测值为166.1[M+H]+。
中间体3-3:
5-(1-溴乙基)吡啶甲酸甲酯
在25℃处,向5-乙基吡啶甲酸甲酯3-2(280mg,100%收率,1.70mmol)和N-溴琥珀酰亚胺(340mg,1.91mmol)在四氯甲烷(6mL)中的溶液中添加过氧化二苯甲酰(50mg,0.21mmol)。将所得混合物在80℃处搅拌2小时。将反应混合物倾注到水(10mL)中并用二氯甲烷(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=40%-60%)纯化,得到呈无色油状物的标题物(380mg,由LCMS测得为100%纯度,91.8%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.42min,C9H10BrNO2的质量计算值为243.0,m/z实测值为246.0[M+H]+。
中间体3-4:
5-(1-((3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰
基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-
基)乙基)吡啶甲酸甲酯
在20℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(750mg,90%纯度,1.04mmol)和5-(1-溴乙基)吡啶甲酸甲酯3-3(330mg,1.35mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中添加碳酸铯(900mg,2.76mmol)。然后将反应混合物在40℃处搅拌4小时。将反应混合物倾注到水(10mL)中并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=60%-90%)纯化,得到呈白色固体的标题物(710mg,由LCMS测得为98.2%纯度,82.5%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.12min和2.19min,C44H49N5Cl2O4Si的质量计算值为809.3,m/z实测值为810.6[M+H]+。
中间体3-5:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-
(1-(6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-3-基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]
吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在氮气下在0℃处,向5-(1-((3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-基)乙基)吡啶甲酸甲酯3-4(610mg,98.2%纯度,0.74mmol)的四氢呋喃(6mL)溶液中添加甲基溴化镁(1.0M四氢呋喃溶液,3mL,3mmol)。使所得混合物升温至40℃并搅拌13小时。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭,用乙酸乙酯(10mL)萃取三次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=70%-90%)纯化,得到呈白色固体的标题产物(400mg,由LCMS测得为81%纯度,54.1%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.14min和1.19min,C44H49N5Cl2O4Si的质量计算值为809.3,m/z实测值为810.6[M+H]+。
中间体3-6:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-9-(1-(6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-
3-基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3.4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-
酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-3-基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮3-5(300mg,81%纯度,0.3mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(0.3mL,0.3mmol)。然后将反应混合物在20℃处搅拌2小时。将反应混合物倾注到水(10mL)中并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,将其通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=40%-60%)纯化,得到呈无色固体的标题产物(160mg,由LCMS测得为81%纯度,75.5%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.45min,C28H31Cl2N5O4的质量计算值为571.2,m/z实测值为572.2[M+H]+。
中间体3-7:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-3-基)乙基)-
3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-9-(1-(6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-3-基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮3-6(160mg,81%纯度,0.23mmol)的乙腈(1.5mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾(1.5mL)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(75mg,0.48mmol)、亚氯酸钠(45mg,0.50mmol)并滴加10%次氯酸钠溶液(380mg,0.51mmol)。使反应混合物缓慢回到室温。在室温处搅拌14小时后,将反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液(2mL)淬灭,用1.0M盐酸溶液酸化至pH=4-5,并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到残余物。将残余物通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=30%-50%)纯化,得到呈白色固体的标题产物(130mg,由LCMS测得为100%纯度,97.9%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.23min,C28H29Cl2N5O5的质量计算值为585.2,m/z实测值为586.3[M+H]+。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.64-8.45(m,1H),8.12-7.91(m,1H),7.86-7.75(m,1H),7.74-7.67(m,2H),7.47-7.40(m,1H),6.15-5.76(m,1H),5.72-5.32(m,1H),5.26-5.08(m,1H),4.80-4.57(m,1H),4.55-4.27(m,1H),4.10-3.98(m,1H),3.88-3.67(m,1H),3.35-3.23(m,1H),3.15-2.99(m,1H),2.85-2.63(m,1H),1.77-1.65(m,3H),1.62(s,3H),1.58(s,3H),1.43-1.33(m,3H)。
化合物3:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-3-基)乙基)-
N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-3-基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸3-7(130mg,74%纯度,0.22mmol)、甲胺盐酸盐(40mg,0.59mmol)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(100mg,0.52mmol)和1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(80mg,0.59mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的溶液中滴加三甲胺(140mg,1.38mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)溶液。然后将反应混合物在20℃处搅拌2小时。将反应混合物倾注到水(10mL)中并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=40%-60%)纯化,得到呈无色固体的标题物(130mg,由LCMS测得为96%纯度,93.9%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.41min,C29H32Cl2N6O4的质量计算值为598.2,m/z实测值为599.3[M+H]+。
化合物3A和3B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((R*)-1-(6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-3-基)乙
基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(3A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S*)-1-(6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-3-基)乙
基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(3B)
将(3R,7R)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-3-基)乙基)-3,7-二甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮化合物3的外消旋物(130mg,96%纯度,0.21mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IE 5μm 20mm*250mm;流动相:ACN∶IPA∶DEA=70∶30∶0.2,25mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的化合物3A(25.8mg,98.5%纯度,20.4%收率,99.7%立体异构纯)和化合物3B(50mg,99.2%纯度,39.7%收率,99.8%立体异构纯)。
化合物3A:
LC-MS(ESI):RT=3.682min,C29H32Cl2N6O4的质量计算值为598.2,m/z实测值为599.3[M+H]+。手性分析:(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN∶IPA∶DEA=70∶30∶0.2,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=5.460min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.36(s,1H),7.78(dd,J=17.2和4.8Hz,3H),7.60(s,2H),7.46(d,J=7.6Hz,1H),5.88-5.63(m,1H),5.49-5.24(m,1H),5.20(s,1H),4.97(s,1H),4.70-4.37(m,1H),4.30-4.13(m,1H),4.09-3.92(m,1H),3.81-3.52(m,1H),2.96-2.84(m,1H),2.65-2.55(m,1H),2.35(d,J=4.4Hz,3H),1.62-1.45(m,3H),1.42(s,6H),1.30-1.09(m,3H)。
化合物3B:
LC-MS(ESI):RT=3.761min,C29H32Cl2N6O4的质量计算值为598.2,m/z实测值为599.2[M+H]+。手性分析:(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN∶IPA∶DEA=70∶30∶0.2,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=7.106min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.46(s,1H),8.07-7.98(m,1H),7.74(d,J=8.0Hz,3H),7.60-7.56(m,1H),7.45(d,J=8.0Hz,1H),5.88-5.60(m,1H),5.51-5.33(m,1H),5.20(s,1H),5.05(s,1H),4.65-4.40(m,1H),4.28-4.10(m,1H),3.83-3.57(m,2H),2.97-2.84(m,1H),2.64(d,J=4.8Hz,3H),2.51-2.50(m,1H),1.53-1.37(m,9H),1.29-1.10(m,3H)。
化合物4A和4B(制备方法A)
中间体4-2:
N-甲氧基-N-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺
在0℃处,向2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酸4-1(5.0g,26.0mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(55mL)溶液中添加N,O-二甲基羟胺盐酸盐(5.1g,52.3mmol)、苯并三唑-1-醇(7.1g,52.5mmol)、1-乙基-(3-(3-二甲基氨基)丙基)-碳二亚胺盐酸盐(10.1g,52.7mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(20.5g,158.6mmol)。将混合物于室温搅拌16小时。将混合物用水(100mL)稀释,用0.5M盐酸水溶液酸化至pH为约5,并用乙酸乙酯(100mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=30%至60%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(5g,由LCMS测得为100%纯度,81.7%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.40min,C8H8F3N3O2的质量计算值为235.1,m/z实测值为236.1[M+H]+。1H NMR(400M Hz,CDCl3)δ9.24(s,2H),3.62(s,3H),3.44(s,3H)。
中间体4-3:
1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮
在0℃处,向N-甲氧基-N-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酰胺4-2(5g,100%纯度,21.3mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液中滴加1M甲基溴化镁的2-甲基四氢呋喃(33.3mL,33.3mmol)溶液。在0℃处搅拌2小时后,将反应混合物倾注到饱和氯化铵水溶液(50mL)并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(4.5g,由LCMS测得为77%纯度,85.7%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.36min,C7H5F3N2O的质量计算值为190.0,m/z实测值为189.0[M-H]-。
中间体4-4:
1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙醇
在0℃处,向1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮4-3(4.5g,77%纯度,18.2mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液中添加硼氢化钠(1.54g,40.7mmol)。在0℃处搅拌1小时后,用饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭混合物,将其用乙酸乙酯(50mL)稀释,用水(50mL)洗涤两次,经Na2SO4(s)干燥并真空浓缩,得到残余物,将其通过C18(乙腈:水=40%至65%)纯化,得到呈黄色油状物的期望产物(2.3g,90%纯度,59.1%收率)。1H NMR(400M Hz,CDCl3)δ8.92(s,2H),5.15-5.06(m,1H),1.62-1.61(m,3H)。
中间体4-5:
5-(1-溴乙基)-2-(三氟甲基)嘧啶
在0℃处,向1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙醇4-4(2g,90%纯度,9.37mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中添加三苯基膦(5g,19.1mmol)和全溴甲烷(5g,15.1mmol)。在25℃处搅拌0.5小时后,过滤混合物。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=100∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(1g,由1H NMR测得为90%纯度,37.7%收率)。1H NMR(400M Hz,CDCl3)δ8.96(s,2H),5.18-5.17(m,1H),2.13-2.11(m,3H)。
中间体4-6:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-
甲基-9-(1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑
并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在30℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(1g,100%纯度,1.54mmol)、N-苄基-N,N-二乙基氯化乙铵(2mg,0.009mmol)和5-(1-溴乙基)-2-(三氟甲基)嘧啶4-5(1g,3.53mmol)的2-甲基四氢呋喃(12mL)溶液中缓慢添加50重量%氢氧化钠水溶液(12mL)。在30℃处搅拌2小时后,将反应混合物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(15mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤两次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩混合物,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.2g,73%纯度,69%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.94min,C41H41Cl2F3N6O3Si的质量计算值为820.2,m/z实测值为821.5[M+H]+。
中间体4-7:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(2-(三氟甲基)嘧
啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮4-6(1.2g,73%纯度,1.07mmol)的四氢呋喃(12mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵溶液(1.6mL)。在室温处搅拌1小时后,将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=20%至40%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(450mg,97%纯度,70%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.59min,C25H23Cl2F3N6O3的质量计算值为582.1,m/z实测值为583.4[M+H]+。
中间体4-8:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-
基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮4-7(390mg,97%纯度,0.648mmo))的乙腈(5mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾(5mL)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(203mg,1.3mmol)、亚氯酸钠(147mg,1.3mmol)并滴加5.5%次氯酸钠溶液(1.5mL,1.39mmol)。使反应混合物缓慢回到室温。在室温处搅拌过夜后,将反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液(10mL)淬灭,用1M盐酸溶液酸化至pH=4-5,并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至35%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(311mg,100%纯度,80%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.28min,C25H21Cl2F3N6O4的质量计算值为596.1,m/z实测值为595.1[M-H]-。
化合物4:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(2-(三氟甲基)嘧
啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸4-8(270mg,100%纯度,0.452mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(9mL)溶液中添加甲胺盐酸盐(76mg,1.13mmol)、1-羟基苯并三唑(122mg,0.903mmol)、1-乙基-(3-(3-二甲基氨基)丙基)-碳二亚胺盐酸盐(173mg,0.902mmol)和三乙胺(0.4mL,2.88mmol)。将混合物于室温搅拌3小时。将混合物用水(10mL)稀释,用0.5M盐酸水溶液酸化至pH为约5,并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=30%至60%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物P1(210mg,由LCMS测得为100%纯度,76%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.58min,C26H24Cl2F3N7O3的质量计算值为609.1,m/z实测值为610.3[M+H]+。
化合物4A和4B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((R)-1-(2-(三氟甲
基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(4A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S)-1-(2-(三氟甲
基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(4B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺化合物4的外消旋物(280mg,100%纯度,0.104mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IC 5μm 20mm*250mm;流动相:MeOH∶EtOH=50∶50,30mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的化合物4A(33.8mg,98.4%纯度,17.6%收率,99.9%立体异构纯)和呈白色固体的化合物4B(51.3mg,99.3%纯度,27%收率,100%立体异构纯)。
化合物4A:
LC-MS(ESI):RT=3.233min,C26H24Cl2F3N7O3的质量计算值为609.1,m/z实测值为610.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:MeOH∶EtOH=50∶50,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=5.195min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.83(s,2H),7.53-7.51(m,2H),7.27-7.4(m,1H),5.99-5.44(m,3H),4.89-4.46(m,3H),4.13-4.09(m,1H),3.94-3.90(m,1H),3.05(br s,1H),2.74-2.68(m,4H),1.72-1.70(m,3H),1.32-1.30(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)-70.22。
化合物4B:
LC-MS(ESI):RT=2.978min,C26H24Cl2F3N7O3的质量计算值为609.1,m/z实测值为610.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:MeOH∶EtOH=50∶50,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=6.976min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.92(s,2H),7.54-7.52(m,2H),7.26-7.24(m,1H),6.09(br s,1H),5.85-5.53(m,2H),4.93-4.30(m,4H),3.64-3.59(m,1H),3.07(br s,1H),2.83-2.70(m,4H),1.76-1.74(m,3H),1.29-1.28(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)-70.26。
化合物4B(制备方法B)
中间体4B-1:
(S)-2-甲基-N-((S)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺
向1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙酮4-3(19g,100%纯度,99.9mmol)和(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(20g,165mmol)在四氢呋喃(450mL)中的溶液中添加四异丙醇钛(IV)(60mL,205mmol)。在70℃处搅拌16小时后,将反应混合物冷却至0℃,然后添加硼氢化钠(2g,52.9mmol)并在室温处搅拌1小时。将反应用甲醇(30mL)淬灭,倾注到水(60mL)中,用硅藻土过滤。用乙酸乙酯(1L)洗涤滤饼。将滤液浓缩,通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=3∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(19g,96%纯度,62%收率,100%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=1.45min,C11H16F3N3OS的质量计算值为295.3,m/z实测值为296.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IG 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=80∶20,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=10.051min)。
中间体4B-2:
(S)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙-1-胺
向(S)-2-甲基-N-((S)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺4B-1(14g,96%纯度,45.5mmol)的甲醇(100mL)溶液中添加4M盐酸盐的1,4-二氧杂环己烷溶液(50mL,200mmol)。将反应混合物在0℃处搅拌2小时。将混合物浓缩并用饱和碳酸氢钠水溶液调节至pH为约8,然后用乙酸乙酯(60mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(120mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(7.0g,100%纯度,80%收率,99.7%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=1.18min,C7H8F3N3的质量计算值为191.2,m/z实测值为192.0[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak ID 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH∶DEA=95∶5∶0.2,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=10.854min)。
中间体4B-3:
(R)-2-羟基-3-(((S)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)氨基)丙酸甲酯
在30℃处,在密封管中,将(S)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙-1-胺4B-2(7.0g,100%纯度,26.5mmol)、(R)-环氧乙烷-2-甲酸甲酯(5g,49.0mmol)混合于丙-2-醇(60mL)中。在氮气气氛下于60℃搅拌16小时后,将混合物浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(6.5g,79%收率,95%纯度,99.7%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=1.31min,C11H14F3N3O3的质量计算值为293.2,m/z实测值为294.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm4.6mm*250mm;流动相:Hex∶IPA=90∶10,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=12.408min)。
中间体4B-4:
(R)-2-羟基-N-甲基-3-(((S)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)氨基)丙酰胺
在密封管(100mL)中,将(R)-2-羟基-3-(((S)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)氨基)丙酸甲酯4B-3(6.5g,95%纯度,21.1mmol)在2M甲胺的四氢呋喃(50mL,100mmol)溶液中的溶液于80℃搅拌16小时。浓缩混合物,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水(+0.02%乙酸铵)=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(6.2g,98%纯度,99%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.16min,C11H14F3N3O3的质量计算值为292.2,m/z实测值为293.3[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IH 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH∶DEA=90∶10∶0.2,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=7.772min)。
中间体4B-5:
(6R)-3-(((R)-2-羟基-3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)((S)1-(2-(三氟甲基)嘧啶-
5-基)乙基)氨基甲酰基)-6-甲基-2,4,6,7-四氢-5H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
在30℃处,向(R)-3-(1H-咪唑-1-羰基)-6-甲基-2,4,6,7-四氢-5H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯45-1(7.5g,100%纯度,22.6mmol)、(R)-2-羟基-N-甲基-3-(((S)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)
氨基)丙酰胺4B-4(6.2g,98%纯度,20.8mmol)在乙腈(120mL)中的溶液中添加碳酸铯(13g,39.9mmol)。在45℃处搅拌3小时后,向混合物中添加水(200mL),然后用乙酸乙酯(200mL)和盐水(200mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇=10∶1)纯化,得到呈浅黄色油状物的标题化合物(7.6g,100%纯度,66%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.29min,C24H32F3N7O5的质量计算值为555.6,m/z实测值为556.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IC 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH∶DEA=85∶15∶0.2,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=14.702min)。
中间体4B-6:
(3R,7S)-3-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-10-氧代-9-((S)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-
5-基)乙基)-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁
酯
在0℃处,将(6R)-3-(((R)-2-羟基-3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)((S)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)氨基甲酰基)-6-甲基-2,4,6,7-四氢-5H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯4B-5(7.6g,100%纯度,13.7mmol)、三丁基膦(4.2g,20.8mmol)和(E)-二氮烯-1,2-二甲酸二异丙酯(4.2g,20.8mmol)混合于四氢呋喃(120mL)中。在0℃处搅拌2小时后,减压浓缩混合物,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水(+0.02%乙酸铵)=5%至100%)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(13g,50%纯度(包含50%Bu3POMS:[219]),88%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.64min和2.67min,C24H30F3N7O4的质量计算值为537.5,m/z实测值为555.2[M+18]+。
中间体4B-7:
(3R,7S)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,
3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-3-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-10-氧代-9-((S)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯4B-6(9g,50%纯度,8.37mmol)的二氯甲烷(60mL)溶液中添加三氟乙酸(15mL)。在0℃处搅拌2小时后,将混合物浓缩并用饱和碳酸氢钠水溶液调节至pH为约8,然后用二氯甲烷(100mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(3g,75%收率,91%纯度)。LC-MS(ESI):RT=1.76min和1.88min,C19H22F3N7O2的质量计算值为437.1,m/z实测值为436.5[M-H]-。
化合物4B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S)-1-(2-(三氟甲
基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺
在0℃处,将(3R,7S)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺4B-7(3.0g,91%纯度,6.2mmol)、3,4-二氯苯甲酸(1.5g,7.85mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(3mL,16.2mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(3g,7.89mmol)混合于N,N-二甲基甲酰胺(45mL)中。在30℃处搅拌1小时后,将混合物浓缩并通过C18柱(乙腈:水(+0.02%乙酸铵)=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题粗化合物(3.2g,100%纯度,84%收率)。LC-MS(ESI):RT=3.26min,C26H24Cl2F3N7O3的质量计算值为609.1,m/z实测值为608.6[M-H]-。然后将4B(3.2g,100%纯度,5.24mmol)通过手性HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IC 5μm 30mm*250mm;流动相:ACN=100,20mL/min;温度:30℃;波长:214nm),得到呈白色固体的标题产物(2.8g,99.8%纯度,回收收率87.3%,100%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=8.337min,C26H24Cl2F3N7O3的质量计算值为609.1,m/z实测值为610.0[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IC 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN=100%,1mL/min;温度:30℃;波长:214nm;RT=10.028min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.92(s,2H),7.54-7.51(m,2H),7.26-7.24(m,1H),6.08-5.44(m,3H),4.93-4.30(m,4H),3.65-3.60(m,1H),3.14-2.96(m,1H),2.83-2.70(m,4H),1.75(d,J=7.2Hz,3H),1.28(d,J=6.8Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-70.28。
化合物5A和5B
中间体5-1
4-(1-((3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲醚
基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-
基)乙基)苯甲酸甲酯
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(1.40g,2.03mmol)的二甲基甲酰胺(15mL)溶液中添加氢化钠在矿物油中的60%分散体(81mg,2.03mmol)。将混合物在0℃处搅拌1小时。然后将4-(1-溴乙基)苯甲酸甲酯(490mg,2.02mmol)添加到混合物中。将反应混合物在0℃处搅拌1小时。将反应混合物用饱和氯化铵(30mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤并减压浓缩,得到残余物,将其通过硅胶柱(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(900mg,由LCMS测得为95%纯度,收率52%)。LC-MS(ESI):RT=1.77min和1.81min,C44H46Cl2N4O5Si的质量计算值为808.3,m/z实测值为808.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.04-7.92(m,2H),7.65-7.32(m,14H),7.24-7.21(m,1H),6.01-5.40(m,2H),4.82-4.29(m,3H),4.08-4.03(m,1H),3.92-3.89(m,3H),3.86-3.30(m,3H),3.10-2.91(m,1H),2.64-2.53(m,1H),1.56-1.55(m,3H),1.21(br s,3H),1.02-0.90(m,9H)。
中间体5-2
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-
(1-(4-(2-羟基丙-2-基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑
并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
将4-(1-((3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-基)乙基)苯甲酸甲酯5-1(750mg,0.87mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液冷却至0℃。然后在20分钟内滴加甲基溴化镁在四氢呋喃(4mL,4.00mmol)中的1.0M溶液。将反应混合物在0℃处搅拌2小时。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤并减压浓缩,得到呈黄色固体的标题化合物(540mg,由LCMS测得为92%纯度,收率70%)。LC-MS(ESI):RT=1.76min和1.79min,C45H50Cl2N4O4Si的质量计算值为808.3,m/z实测值为809.0[M+H]+。
中间体5-3
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-9-(1-(4-(2-羟基丙-2-基)苯基)
乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
将(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(2-羟基丙-2-基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮5-2(540mg,0.610mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液冷却至0℃。然后滴加四丁基氟化铵在THF(1.0mL,1.00mmol)中的1.0M溶液。将反应混合物在0℃处搅拌1小时。将反应混合物减压浓缩并通过硅胶柱(石油醚∶乙酸乙酯=1∶2)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(340mg,由LCMS测得为91%纯度,收率88%)。LC-MS(ESI):RT=1.32min和1.35min,C29H32Cl2N4O4的质量计算值为570.2,m/z实测值为553.3[M+H-18]+。
中间体5-4:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(2-羟基丙-2-基)苯基)乙基)-3-甲
基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-9-(1-(4-(2-羟基丙-2-基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮5-3(340mg,0.54mmol)的乙腈(4mL)悬浮液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(4mL)。将混合物冷却至0℃。然后添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(170mg,1.09mmol)、亚氯酸钠(123mg,1.09mmol)和次氯酸钠(0.65mL,1.09mmol)。将反应混合物在室温处搅拌16小时。将反应混合物用1M盐酸盐水溶液调节pH至5-6,并用二氯甲烷(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤并减压浓缩,得到残余物,将其通过硅胶柱(二氯甲烷∶甲醇=5∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(250mg,由LCMS测得为93%纯度,收率73%)。LC-MS(ESI):RT=0.68min,C29H30Cl2N4O5的质量计算值为584.2,m/z实测值为567.0[M+H-18]+。
化合物5
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(2-羟基丙-2-基)苯基)乙基)-N,3-二
甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(2-羟基丙-2-基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸5-4(250mg,0.40mmol)和甲胺盐酸盐(54mg,0.80mmol)在二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物中添加1-羟基苯并三唑(108mg,0.80mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(153mg,0.80mmol)。将混合物冷却至0℃,并在30分钟内滴加三乙胺(121mg,1.20mmol)的二甲基甲酰胺(1mL)溶液。将反应混合物在0℃处搅拌1小时。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(40mL)淬灭并用乙酸乙酯(40mL×3)萃取。将合并的有机层用水(30mL×3)和盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(S)干燥,过滤并减压浓缩,得到残余物,将其通过硅胶柱(二氯甲烷∶甲醇=12∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(190mg,由LCMS测得为97%纯度,收率78%)。LC-MS(ESI):RT=0.68min,C30H33Cl2N5O4的质量计算值为597.2,m/z实测值为580.3[M+H-18]+。
化合物5A和5B
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((R*)-1-(4-(2-羟基丙-2-基)苯基)乙基)-
N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(5A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S*)-1-(4-(2-羟基丙-2-基)苯基)乙基)-
N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(5B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(2-羟基丙-2-基)苯基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(280mg,0.47mmol)化合物5的外消旋物(280mg,0.47mmol)通过手性制备型HPLC分离条件进行分离:(柱:Chiralpak IE 250mm*4.6mm 5μm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,30mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的化合物5A(93.9mg,99.0%纯度,34.2%收率,100%立体异构纯)和呈白色固体的化合物5B(68.5mg,97.1%纯度,24.5%收率,100%立体异构纯)。
化合物5A:
LC-MS(ESI):RT=3.292min,C30H33Cl2N5O4的质量计算值为597.2,m/z实测值为620.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 250mm*4.6mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1.0mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=8.663min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.52-7.43(m,4H),7.27-7.24(m,4H),6.12-5.45(m,3H),4.80-4.25(m,3H),3.90-3.73(m,2H),3.17-2.96(m,1H),2.71-2.66(m,4H),1.60(s,3H),1.56(s,6H),1.29-1.28(m,3H)。
化合物5B:
LC-MS(ESI):RT=4.387min,C30H33Cl2N5O4的质量计算值为597.2,m/z实测值为620.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 250mm*4.6mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1.0mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=12.077min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.47-7.39(m,4H),7.24-7.19(m,4H),5.92-5.30(m,3H),4.75-4.33(m,3H),4.01-3.98(m,1H),3.35-3.31(m,1H),3.05-2.91(m,1H),2.74-2.72(m,3H),2.66-2.63(m,1H),1.53-1.50(m,9H),1.25-1.23(m,3H)。
化合物6A和6B(制备方法A)
中间体6-2:
1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙醇
向1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙酮6-1(1.2g,95%纯度,6.00mmo))的四氢呋喃(24mL)溶液中添加四氢硼酸钠(320mg,8.46mmol)和甲醇(6mL)。在0℃处搅拌1小时后,将混合物用水淬灭并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将有机层合并,用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.1g,由LCMS测得为78%纯度,74%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.063min,C7H7F3N2O的质量计算值为192.05,m/z实测值为193.2[M+H]+。
中间体6-3:
2-(1-溴乙基)-5-(三氟甲基)吡嗪
在氮气气氛下在0℃处,向1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙醇6-2(1.1g,78%纯度,4.47mmol)的二氯甲烷(22mL)溶液中添加四溴化碳(2.5g,7.54mmol)和三苯基膦(2.0g,7.63mmol)。将反应混合物在0℃处搅拌1小时。TLC显示6-2被消耗。将反应混合物通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1至5∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(920mg,由1H NMR测得为90%纯度,73%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.89(s,1H),8.85(s,1H),5.29(q,J=6.8Hz,1H),2.13(d,J=7.2Hz,3H)。
中间体6-4:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-
甲基-9-(1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑
并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(700mg,90%纯度,0.97mmol)在2-甲基四氢呋喃(6mL)和50重量%氢氧化钠水溶液(6mL)中的溶液中添加2-(1-溴乙基)-5-(三氟甲基)吡嗪6-3(350mg,90%纯度,0.35mmol)和N-苄基-N,N-二乙基氯化乙铵(35mg,0.15mmol)。将混合物于室温搅拌2小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.0g,由LCMS测得为67%纯度,84%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.07min,C41H41Cl2F3N6O3Si的质量计算值为820.23,m/z实测值为821.2[M+H]+。
中间体6-5:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(5-(三氟甲基)吡
嗪-2-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮6-4(1.5g,67%纯度,1.06mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵在四氢呋喃(1.4mL,1.4mmol)和乙酸(130mg,2.17mmol)中的溶液。将反应混合物在室温处搅拌2小时。将饱和氯化铵溶液(10mL)添加到反应混合物中。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至90%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(430mg,由LCMS测得为100%纯度,70%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.61min,C25H23Cl2F3N6O3的质量计算值为582.12,m/z实测值为583.2[M+H]+。
中间体6-6:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-
基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮6-5(430mg,100%纯度,0.74mmol)的乙腈(4mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾溶液(4mL)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(250mg,1.60mmol)、亚氯酸钠(190mg,1.68mmol)并滴加10%次氯酸钠溶液(1.0mL,1.68mmol)。使反应混合物缓慢回到室温。在室温处搅拌过夜后。将反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液(20mL)淬灭,用1M盐酸溶液酸化至pH=4-5,并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至45%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(380mg,由LCMS测得为97%纯度,84%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.33min,C25H21Cl2F3N6O4的质量计算值为596.10,m/z实测值为595.2[M-H]-。
化合物6:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(5-(三氟甲基)吡
嗪-2-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸6-6(325mg,97%纯度,0.53mmol)、甲胺盐酸盐(92mg,1.36mmol)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(210mg,1.10mmol)和1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(150mg,1.11mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的溶液中添加三甲胺(0.5mL,3.61mmol)。使反应混合物缓慢回到室温。在氮气气氛下于室温搅拌3小时后。将反应混合物用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(25mL)萃取三次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(235mg,由LCMS测得为100%纯度,73%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.60min,C26H24Cl2F3N7O3的质量计算值为609.13,m/z实测值为610.2[M+H]+。
化合物6A和6B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((R)-1-(5-(三氟甲
基)吡嗪-2-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(6A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S)-1-(5-(三氟甲
基)吡嗪-2-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(6B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺化合物6的外消旋混合物(275mg,100%纯度,0.45mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IE 5μm 20mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,60g/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的化合物6A(68.1mg,24.6%收率,99.5%纯度,100%立体异构纯)和呈白色固体的化合物6B(89.9mg,32.6%收率,99.7%纯度,99.9%立体异构纯)。
化合物6A:
LC-MS(ESI):RT=3.621min,C26H24Cl2F3N7O3的质量计算值为609.13,m/z实测值为610.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm,RT=7.403min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.16(s,1H),8.74-8.64(m,1H),7.80-7.74(m,3H),7.46(d,J=8.0Hz,1H),6.07-5.88(m,1H),5.43-5.23(m,1H),5.03(s,1H),4.62-4.40(m,1H),4.21-4.06(m,2H),3.73-3.59(m,1H),2.97-2.85(m,1H),2.63-2.53(m,1H),2.34(d,J=4.4Hz,3H),1.60-1.54(m,3H),1.24-1.17(m,3H)。19FNMR(376MHz,DMSO-d6)δ-66.20。
化合物6B:
LC-MS(ESI):RT=3.704min,C26H24Cl2F3N7O3的质量计算值为609.13,m/z实测值为610.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm,RT=9.817min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.15(s,1H),8.97-8.86(m,1H),8.11(s,1H),7.74-7.72(m,2H),7.45-7.42(m,1H),5.86-5.77(m,1H),5.39-5.10(m,2H),4.53-4.11(m,2H),3.93(s,2H),2.98-2.84(m,1H),2.65(d,J=4.4Hz,3H),2.59-2.55(m,1H),1.62-1.48(m,3H),1.23-1.11(m,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-66.13。
化合物6B(制备方法B)
/>
中间体6B-2:
N-甲氧基-N-甲基-5-(三氟甲基)吡嗪-2-甲酰胺
在0℃处,向5-(三氟甲基)吡嗪-2-甲酸6B-1(13g,67.7mmol)和N,O-二甲基羟胺盐酸盐(5.0g,81.9mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(70mL)中的溶液中添加三乙胺(30mL,216mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(38g,99.9mmol)。在室温处搅拌过夜后,将混合物用水(250mL)稀释,用乙酸乙酯(200mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤。将滤液浓缩,通过硅胶柱色谱法(石油醚∶丙酮=10∶1至3∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(14g,由1HNMR测得为90%纯度,79%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.41min,C8H8F3N3O2的质量计算值为235.1,m/z实测值为236.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.97(s,2H),3.76(s,3H),3.43(s,3H)。
中间体6-1:
1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙酮
在氮气气氛下在-78℃处,向N-甲氧基-N-甲基-5-(三氟甲基)吡嗪-2-甲酰胺6B-2(14.0g,90%纯度,53.6mmol)的四氢呋喃(140mL)溶液中添加1M甲基溴化镁的四氢呋喃(70mL,70mmol)溶液。将反应混合物在-78℃处搅拌2小时,然后用饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭。将混合物用二氯甲烷(100mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤,浓缩,得到粗产物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=20∶1至5∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(4.0g,由1HNMR测得为95%纯度,37%收率)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.32(s,1H),9.02(s,1H),2.77(s,3H)。
中间体6B-3:
(S)-2-甲基-N-((S)-1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺
向1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙酮6-1(5.0g,26.3mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液中添加(S)-(-)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(6.4g,52.8mmol)和四异丙醇钛(IV)(7.5g,26.4mmol)。在室温处搅拌过夜后,将反应混合物冷却至0℃,然后添加四氢硼酸钠(1.0g,26.4mmol)。在室温处搅拌1小时后,将混合物用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶丙酮=3∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(2.7g,由1HNMR测得为90%纯度,31%收率,98.5%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=1.46min,C11H16F3N3OS的质量计算值为295.1,m/z实测值为296.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IA5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=60∶40,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=5.382min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.89(s,1H),8.73(s,1H),4.79-4.72(m,1H),4.54(d,J=6.8Hz,1H),1.58(d,J=6.8Hz,3H),1.26(s,9H)。
中间体6B-4
(S)-1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙-1-胺盐酸盐
将(S)-2-甲基-N-((S)-1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺6B-3(2.7g,90%纯度,8.23mmol)和盐酸盐在1,4-二氧杂环己烷(30mL,120mmol)中的溶液在0℃处搅拌2小时,然后减压浓缩反应混合物,得到残余物,将其用石油醚∶乙酸乙酯=5∶1(20mL)研磨,得到呈黄色固体的标题化合物(2.0g,由1HNMR测得为90%纯度,96%收率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),9.10(s,1H),8.84(br s,3H),4.81(br s,1H),1.60(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体6B-5:
(R)-2-羟基-3-(((S)-1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙基)氨基)丙酸甲酯
在氮气气氛下在室温处,向(S)-1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙-1-胺盐酸盐6B-4(1.0g,90%纯度,3.95mmol)的甲醇(20mL)溶液中添加(R)-环氧乙烷-2-甲酸甲酯(480mg,4.70mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(2mL,12.1mmol)。在60℃处搅拌过夜后,将反应混合物减压浓缩,得到呈黄色油状物的粗化合物(1.2g,由LCMS测得为69%纯度,71%收率),其无需进一步纯化即可直接用于下一步骤。LC-MS(ESI):RT=1.36min,C11H14F3N3O3的质量计算值为293.1,m/z实测值为294.1[M+H]+。
中间体6B-6:
(R)-2-羟基-N-甲基-3-(((S)-1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙基)氨基)丙酰胺
在密封管中,将(R)-2-羟基-3-(((S)-1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙基)氨基)丙酸甲酯6B-5(1.2g,69%纯度,2.82mmol)和2.0M甲胺在四氢呋喃(12mL,24mmol)中的溶液于60℃搅拌过夜。将反应混合物减压浓缩并通过C18柱(乙腈:水(0.1%碳酸氢铵)=5%至60%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(500mg,由1HNMR测得为90%纯度,55%收率,89%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=0.770min,C11H15F3N4O2的质量计算值为292.1,m/z实测值为293.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak AS-H 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH∶DEA=85∶15∶0.2,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=7.474min)。
中间体6B-7:
(R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-N-甲基-3-(((S)-1-(5-(三氟甲基)吡
嗪-2-基)乙基)氨基)丙酰胺
在氮气气氛下在0℃处,向(R)-2-羟基-N-甲基-3-(((S)-1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙基)氨基)丙酰胺6B-6(2.7g,90%纯度,8.32mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中添加咪唑(1.8g,26.4mmol)和叔丁基氯二苯基硅烷(2.5g,16.6mmol)。在室温处搅拌8小时后,向反应混合物中添加水(100mL)并用二氯甲烷(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤,然后经Na2SO4(s)干燥,浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1至1∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(3.0g,由LCMS测得为97.4%纯度,86%收率,100%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=1.521min,C17H29F3N4O2Si的质量计算值为406.2,m/z实测值为407.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IA 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH∶DEA=85∶15∶0.2,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=4.574min)。
中间体6B-8:
(R)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯盐酸盐
在氮气气氛下,将(R)-3-乙基6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5(4H)-二甲酸5-叔丁酯(10.0g,100%纯度,32.3mmol)在4M盐酸盐的1,4-二氧杂环己烷(100mL)溶液中的溶液于室温搅拌2小时。减压浓缩混合物,得到呈黄色固体的标题化合物(8.0g,由1H NMR测得为95%纯度,96%收率),无需进一步纯化。LC-MS(ESI):RT=0.5min,C10H15N3O2的质量计算值为209.1,m/z实测值为210.2[M+H]+。
中间体6B-9:
(R)-5-(3,4-二氯苯甲酰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-
甲酸乙酯
在氮气气氛下在0℃处,向3,4-二氯苯甲酸(5.62g,29.4mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(5滴,3.35mmol)在二氯甲烷(200mL)中的溶液中滴加草酰氯(3.73mL,44.1mmol)。然后将混合物升温至室温并搅拌3小时。完成反应后,减压浓缩混合物,得到残余物。在0℃处,向残余物和(R)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯盐酸盐6B-8(7.15g,29.1mmol)在二氯甲烷(200mL)中的溶液中滴加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(14.6mL,88.3mmol),然后将混合物在室温处搅拌过夜。反应完成后,减压去除溶剂,得到棕色残余物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(8.75g,98%纯度,76%收率)。
中间体6B-10:
(6R)-5-(3,4-二氯苯甲酰基)-6-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4,5,6,7-四氢-
1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯
在氮气气氛下在室温处,向(R)-5-(3,4-二氯苯甲酰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯6B-9(69g,90%纯度,0.162mol)的甲苯(500mL)溶液中添加3,4-二氢-2H-吡喃(50g,0.594mol)和4-甲基苯磺酸(4g,23.0mmol)。在80℃处搅拌20小时后,减压浓缩混合物,得到粗产物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1至1∶1)纯化,得到呈白色固体的粗标题化合物(80g,由LCMS测得为71%纯度,75%收率)。在室温处,将粗产物6B-10(25g,38.1mmol)溶解于二氯甲烷(20mL)中。然后将混合物过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶丙酮=10∶1至6∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(16.3g,由LCMS测得为91%纯度)。LC-MS(ESI):RT=1.517min,C22H25Cl2N3O4的质量计算值为465.1,m/z实测值为466.1[M+H]+。
中间体6B-11:
(6R)-5-(叔丁氧羰基)-6-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑
并[4,3-c]吡啶-3-甲酸
在0℃处,向(6R)-5-(3,4-二氯苯甲酰基)-6-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯6B-10(15.0g,91%纯度,29.3mmol)的四氢呋喃(100mL)溶液中添加氢氧化钠(3.6g,90.0mmol)的水(70mL)溶液。在50℃处搅拌5小时后,将反应混合物用1M盐酸盐水溶液调节pH至4,并用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到呈黄色固体的标题化合物(13.7g,85%纯度,91%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.27min,C20H21Cl2N3O4的质量计算值为437.1,m/z实测值为437.9[M+H]+。
中间体6B-12:
(6R)-N-((R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)-
5-(3,4-二氯苯甲酰基)-6-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-N-((S)-1-(5-(三氟甲基)吡嗪-
2-基)乙基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酰胺
在0℃处,向(6R)-5-(叔丁氧基羰基)-6-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸6B-11(3.7g,85%纯度,7.18mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(40mL)溶液中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(3.70g,9.73mmol)。在室温处搅拌30分钟后,向反应混合物中添加(R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-N-甲基-3-(((S)-1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙基)氨基)丙酰胺6B-7(2.0g,97.4%纯度,4.78mmol)和N,N-二异丙基乙胺(4.0mL,24.2mmol)。然后将反应混合物在20℃处搅拌15小时。向反应混合物中添加另一批6B-11(1.3g,97%纯度,2.52mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(900mg,2.37mmol)。在20℃处搅拌7小时后,将混合物用水(150mL)稀释并用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将合并的有机层用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤三次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶乙酸乙酯=5∶1至1∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(4.0g,由LCMS测得为82%纯度,76%收率)。LC-MS(ESI):RT=4.02min,C37H48Cl2F3N7O5Si的质量计算值为825.3,m/z实测值为826.0[M+H]+。
中间体6B-13:
(R)-5-(3,4-二氯苯甲酰基)-N-((R)-2-羟基-3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)-6-甲
基-N-((S)-1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-
甲酰胺
在氮气气氛下在0℃处,向(6R)-N-((R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)-5-(3,4-二氯苯甲酰基)-6-甲基-2-(四氢-2H-吡喃-2-基)-N-((S)-1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酰胺6B-12(4.0g,82%纯度,3.97mmol)的二氯甲烷(120mL)溶液中添加三氟乙酸(40mL)。在0℃处搅拌5小时后,向反应混合物中添加冰水(150mL)。将有机相分离并用饱和碳酸氢钠水溶液(150mL)和盐水(150mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水(0.1%碳酸氢铵)=5%至60%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(2.3g,由LCMS测得为98%纯度,90%收率,92.5%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=2.66min,C26H26Cl2F3N7O4的质量计算值为627.1,m/z实测值为627.8[M+H]+。手性分析(柱:ChiralpakIB N-5 5μm 4.6mm*250mm;流动相:己烷∶EtOH∶DEA=70∶30∶0.2,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=8.911min)。
化合物6B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S)-1-(5-(三氟甲
基)吡嗪-2-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺
在氮气气氛下在-10℃处,向(R)-5-(3,4-二氯苯甲酰基)-N-((R)-2-羟基-3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)-6-甲基-N-((S)-1-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)乙基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酰胺6B-13(2.6g,98%纯度,4.06mmol)的四氢呋喃(52mL)溶液中添加三丁基膦(1.3g,6.43mmol)和(E)-二氮烯-1,2-二甲酸二异丙酯(1.3g,6.43mmol)。在-10℃处搅拌1小时后,在-10℃处用饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭混合物。将混合物用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶丙酮=10∶1至2∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(1.8g,由LCMS测得为92%纯度,88%收率,96.3%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=2.81min,C26H24Cl2F3N7O3的质量计算值为609.1,m/z实测值为609.8[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IC 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN=100,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=12.684min)。将6B粗产物(2.6g,89%纯度,3.79mmol)通过手性HPLC进一步分离(分离条件:柱:Chiralpak IC 5μm*30mm*250mm;流动相:MeCN=100,20mL/min;柱温:30℃;波长254nm),得到呈白色固体的标题化合物(2.0g,由LCMS测得为99.5%纯度,86.3%收率,99.9%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=8.682min,C26H24Cl2F3N7O3的质量计算值为609.1,m/z实测值为610.0[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IC 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN=100,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=12.496min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.15(s,1H),8.99-8.82(m,1H),8.10(s,1H),7.74-7.72(m,2H),7.45-7.42(m,1H),5.97-5.68(m,1H),5.46-5.01(m,2H),4.65-4.06(m,2H),3.93(s,2H),2.98-2.84(m,1H),2.65(d,J=4.4Hz,3H),2.61-2.52(m,1H),1.55(br s,3H),1.27-1.11(m,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-66.14。
化合物7A和7B
中间体7-2:
1-(6-氯吡啶-3-基)乙醇
在0℃处,向6-氯烟醛7-1(1.8g,12.7mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中添加1M甲基溴化镁的四氢呋喃(25mL,25mmol)溶液。将混合物在0℃处搅拌1小时。将混合物用饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.8g,90%纯度,80.8%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(d,J=6.4Hz,1H),7.71(dd,J=8.4和2.4Hz,1H),7.33(d,J=8.0Hz,1H),5.03-4.94(m,1H),1.97(d,J=7.6Hz,1H),1.52(d,J=5.6Hz,3H)。
中间体7-3:
5-(1-溴乙基)-2-氢吡啶
在0℃处,向1-(6-氯吡啶-3-基)乙醇7-2(1.6g,90%纯度,9.14mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中添加三苯基膦(4.8g,18.3mmol)和全溴甲烷(4.3g,13.0mmol)。在25℃处搅拌4小时后,过滤混合物。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.6,由1H NMR测得为90%纯度,62.3%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.59min,C7H7BrClN的质量计算值为219.0,m/z实测值为219.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.42(d,J=2.8Hz,1H),7.77(dd,J=8.0和2.4Hz,1H),7.33(d,J=8.4Hz,1H),5.16(q,J=6.8Hz,1H),2.04(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体7-4:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(6-氯吡啶-3-基)乙
基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-
a]吡嗪-10(7H)-酮
在室温处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(600mg,90%纯度,0.834mmol)在2-甲基四氢呋喃(6mL)和50重量%氢氧化钠水溶液(6mL,150.0mmol)中的溶液中添加5-(1-溴乙基)-2-氯吡啶7-3(320mg,90%纯度,1.3mmol)和N-苄基-N,N-二乙基氯化乙铵(27mg,0.119mmol)。将混合物于室温搅拌2小时。将反应混合物用水(20mL)淬灭并用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=50%至60%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(600mg,51%纯度,46.6%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.98min,C41H42Cl3N5O3Si的质量计算值为785.2,m/z实测值为786.4[M+H]+。
中间体7-5:
(3R,7S)-9-(1-(6-氯吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-
甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在室温处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(6-氯吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮7-4(600mg,51%纯度,0.389mmol)的四氢呋喃(6mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(0.8mL,0.8mmol)。在室温处搅拌1小时后,将反应混合物用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤两次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶乙酸乙酯=10∶1)纯化,得到呈白色固体的期望化合物(200mg,100%纯度,93.7%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.56min,C25H24Cl3N5O3的质量计算值为547.1,m/z实测值为548.2[M+H]+。
中间体7-6:
(3R,7S)-9-(1-(6-氯吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧
代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-9-(1-(6-氯吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮7-5(200mg,100%纯度,0.364mmol)、亚氯酸钠(80mg,80%纯度,0.708mmol)和2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(115mg,0.736mmol)在乙腈(2mL)中的溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(2mL)和10%次氯酸钠溶液(1mL,1.68mmol)。在室温处搅拌过夜后,将反应混合物用饱和亚硫酸钠水溶液(10mL)淬灭,用1N盐酸盐酸化至pH为约4,并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=50%至60%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(170mg,由LCMS测得为100%纯度,82.9%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.28min,C25H22Cl3N5O4的质量计算值为561.1,m/z实测值为562.1[M+H]+。
化合物7:
(3R,7S)-9-(1-(6-氯吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-
氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-9-(1-(6-氯吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸7-6(170mg,100%纯度,0.302mmol)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(117mg,0.61mmol)、甲胺盐酸盐(50mg,0.741mmol)和1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(85mg,0.629mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中添加三乙胺(0.35mL,1.97mmol)。在氮气气氛下于室温搅拌3小时后,将混合物用饱和氯化铵水溶液(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将其通过C18柱(乙腈:水(+0.1%碳酸氢铵)=45%至55%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(110mg,100%纯度,63.2%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.60min和2.68min,C26H25Cl3N6O3的质量计算值为574.1,m/z实测值为575.2[M+H]+。
化合物7A和7B:
(3R,7S)-9-((R*)-1-(6-氯吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲
基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
(7A)和
(3R,7S)-9-((S*)-1-(6-氯吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲
基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
(7B)
将(3R,7S)-9-(1-(6-氯吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺化合物7的外消旋物(140mg,100%纯度,0.243mmol)通过手性制备型HPLC(柱:Chiralpak IE 5μm 30mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=70∶30,30mL/min;柱温:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的化合物7A(30.6mg,99.6%纯度,21.8%收率,100%立体异构纯)和呈白色固体的化合物7B(19.0mg,99.7%纯度,13.5%收率,100%立体异构纯)。
化合物7A:
LC-MS(ESI):RT=3.546min,C26H25Cl3N6O3的质量计算值为574.1,m/z实测值为575.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=70∶30,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=5.415min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36-8.31(m,1H),7.62-7.58(m,1H),7.53-7.51(m,2H),7.32-7.30(m,1H),7.27-7.26(m,1H),7.26-7.25(m,1H),5.98-5.31(m,3H),4.92-4.83(m,1H),4.58-4.36(m,1H),4.00-3.85(m,2H),3.13-2.97(m,1H),2.76-2.66(m,4H),1.63-1.61(m,3H),1.30(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物7B:
LC-MS(ESI):RT=3.635min,C26H25Cl3N6O3的质量计算值为574.1,m/z实测值为575.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN:IPA=70:30,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=7.199min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)-δ8.44-8.36(m,1H),7.72-7.61(m,1H),7.55-7.50(m,2H),7.35-7.31(m,1H),7.29-7.27(m,1H),7.25-7.23(m,1H),6.25-5.97(m,2H),4.92-4.42(m,3H),4.21-4.11(m,1H),3.52-3.39(m,1H),3.14-2.97(m,1H),2.83-2.81(m,3H),2.73-2.69(m,1H),1.69-1.59(m,3H),1.29(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物8A和8B
中间体8-2:
1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙醇
在-70℃处,在2小时内向6-(三氟甲基)烟醛(900mg,5.14mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中滴加3M甲基溴化镁的四氢呋喃(2.7mL,8.10mmol)溶液。将反应混合物倾注到饱和氯化铵水溶液(40mL)中并用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈无色油状物的标题化合物(900mg,由1H NMR测得为90%纯度,82%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.68(br s,1H),7.93-7.91(m,1H),7.67(d,J=8.0Hz,1H),5.07-5.02(m,1H),2.64(br s,1H),1.55(d,J=6.4Hz,3H)。
中间体8-3:
5-(1-溴乙基)-2-(三氟甲基)吡啶
在0℃处,向1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙醇8-2(900mg,90%纯度,4.24mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中添加三苯基膦(2.0g,7.63mmol)和全溴甲烷(2.1g,6.33mmol)。在25℃处搅拌0.5小时后,过滤混合物。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯=100:1)纯化,得到呈无色油状物的标题化合物(1.0g,由1H NMR测得为90%纯度,84%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.77(br s,1H),7.98-7.95(m,1H),7.68(d,J=8.0,1H),5.24-5.18(m,1H),2.80(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体8-4:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-
甲基-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑
并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在室温处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(500mg,100%纯度,0.77mmol)和5-(1-溴乙基)-2-(三氟甲基)吡啶8-3(400mg,100%纯度,1.58mmol)在2-甲基四氢呋喃(2.5mL)中的溶液中缓慢添加50重量%氢氧化钠水溶液(2.5mL)和N-苄基-N,N-二乙基氯化乙铵(25mg,0.11mmol)。在室温处搅拌3小时后,将混合物用水(10mL)稀释并在室温处减压浓缩以去除挥发物。将剩余的水层用1M盐酸盐水溶液(30mL)酸化并用乙酸乙酯(60mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色固体的粗化合物(730mg,由LCMS测得为84%纯度,96.8%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.33min,C42H42Cl2F3N5O3Si的质量计算值为819.2,m/z实测值为820.2[M+H]+。
中间体8-5:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(6-(三氟甲基)吡
啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮8-4(730mg,84%纯度,0.75mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1mL,1mmol)。在0℃处搅拌1小时后,减压浓缩混合物,得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇=10∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(430mg,由LCMS测得为100%纯度,98.8%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.59min,C26H24Cl2F3N5O3的质量计算值为581.1,m/z实测值为582.0[M+H]+。
中间体8-6:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-
基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮8-5(430mg,100%纯度,0.74mmol)的乙腈(3mL)溶液中添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(240mg,1.54mmol)、亚氯酸钠(160mg,80%纯度,1.42mmol)、饱和磷酸二氢钾水溶液(3mL)和次氯酸钠(0.9mL,1.51mmol)。在0℃处搅拌过夜后,将混合物用饱和亚硫酸钠溶液(10mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(390mg,由LCMS测得为100%纯度,88.6%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.27min和1.29min,C26H22Cl2F3N5O4的质量计算值为595.1,m/z实测值为596.0[M+H]+。
化合物8:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,N,3-三甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三氟甲基)吡
啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在氮气气氛下在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸8-6(270mg,89%纯度,0.403mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中添加草酰氯(173mg,1.36mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(0.08mL)。在0℃处搅拌1小时后,浓缩反应混合物,得到粗产物,将其添加到1M二甲胺的四氢呋喃溶液(0.7mL,1.4mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(176mg,1.36mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液的混合物。在0℃处搅拌1小时后,将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层用水(30mL)洗涤三次,用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18(乙腈:水=40%至65%)和硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇100∶1至10∶1)纯化,得到呈灰白色固体的标题化合物(180mg,由LCMS测得为98%纯度,70%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.60min,C28H27Cl2F3N6O3的质量计算值为622.2,m/z实测值为623.2[M+H]+。
化合物8A和8B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,N,3-三甲基-10-氧代-9-((R*)-1-(6-(三氟 甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪- 7-甲酰胺(8A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,N,3-三甲基-10-氧代-9-((S*)-1-(6-(三氟
甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-
7-甲酰胺(8B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,N,3-三甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺8的外消旋物(180mg,98%纯度,0.283mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IE 5μm 20mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,18mL min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈灰白色固体的化合物8A(18.8mg,由LCMS测得为99%纯度,10%收率,100%立体异构纯)和化合物8B(53.8mg,由LCMS测得为99%纯度,30%收率,100%立体异构纯)。
化合物8A:
LC-MS(ESI):RT=4.081min,C28H27Cl2F3N6O3的质量计算值为622.2,m/z实测值为623.3[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=8.426min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.68(s,1H),7.84(d,J=8.0Hz,1H),7.67(d,J=8.4Hz,1H),7.54-7.50(m,2H),7.28-7.25(m,1H),6.22-6.06(m,1H),5.78-5.18(m,2H),4.85-4.30(m,2H),3.98-3.95(m,1H),3.27-3.24(m,1H),3.10-2.91(m,1H),2.77(s,3H),2.69-2.67(m,4H),1.64(d,J=6.4Hz,3H),1.30(d,J=5.2Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-67.92。
化合物8B:
LC-MS(ESI):RT=4.214min,C28H27Cl2F3N6O3的质量计算值为622.2,m/z实测值为623.3[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=10.671min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.71(s,1H),7.86-7.85(m,1H),7.69(d,J=8.4Hz,1H),7.54-7.50(m,2H),7.28-7.25(m,1H),6.18-6.04(m,1H),5.78-5.16(m,2H),4.86-4.27(m,2H),3.88-3.83(m,1H),3.39-3.37(m,1H),3.16(s,3H),3.04-2.95(m,4H),2.70-2.65(m,1H),1.63(d,J=6.8Hz,3H),1.27-1.25(m,3H)。19FNMR(376MHz,CDCl3)δ-67.93。
化合物9A和9B
/>
中间体9-2:
1-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙醇
在0℃处,向4-溴-2-(三氟甲基)吡啶9-1(500mg,2.21mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中缓慢添加异丙基氯化镁(2mL,2.60mmol)。将反应混合物在室温处搅拌30分钟,然后添加乙醛(0.2ml,3.56mmol)并将所得混合物在0℃处搅拌1小时。将其倾注到饱和氯化铵水溶液(20mL)中并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,并将残余物通过C18(乙腈:水(0.1%碳酸氢铵)=30%至80%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(300mg,由LCMS测得为73%纯度,52%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.33min,C8H8F3NO的质量计算值为191.1,m/z实测值为192.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(d,J=5.2Hz,1H),7.86(s,1H),7.69(d,J=4.8Hz,1H),5.64(br,s,1H),4.90(q,J=6.4Hz,1H),1.39(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体9-3:
4-(1-溴乙基)-2-(三氟甲基)吡啶
在0℃处,向1-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙醇9-2(1.7g,73%纯度,6.49mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液中缓慢添加全溴甲烷(4.3g,12.9mmol)。在室温处搅拌反应混合物。添加三苯基膦(3.4g,12.9mmol),并将反应混合物在室温处搅拌2小时。将反应混合物过滤。浓缩滤液,并将残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=20∶1至10∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(1.3g,由NMR测得为90%纯度,71%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.71(d,J=5.2Hz,1H),7.73(s,1H),7.54(d,J=5.2Hz,1H),5.12(q,J=6.8Hz,1H),2.05(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体9-4:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-
甲基-9-(1-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑
并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮IntA(800mg,100%纯度,1.24mmol)、4-(1-溴乙基)-2-(三氟甲基)吡啶9-3(520mg,90%纯度,1.84mmol)和N-苄基-N,N-二乙基氯化乙铵(45mg,0.20mmol)在2-甲基四氢呋喃(8mL)和50重量%氢氧化钠溶液(4mL)中的溶液。然后将反应混合物在室温处搅拌2小时。将反应混合物用水(20mL)淬灭并用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到粗产物,将其通过C18柱(乙腈:水=5%至90%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(960mg,由LCMS测得为100%纯度,95%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.25min,C42H42Cl2F3N5O3Si的质量计算值为819.2,m/z实测值为820.2[M+H]+。
中间体9-5:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(2-(三氟甲基)吡
啶-4-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在室温处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮9-4(960mg,100%纯度,1.17mmol)的四氢呋喃(9mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(2.5mL,2.5mmol),然后将混合物在室温处搅拌3小时。将反应混合物倾注到乙酸乙酯(30mL)中并用水(20mL)洗涤三次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇=40∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(595mg,由LCMS测得为99%纯度,86%收率)。LC-MS(ESI):RT=0.736min,C26H24Cl2F3N5O3的质量计算值为581.1,m/z实测值为582.0[M+H]+。
中间体9-6:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(2-(三氟甲基)吡啶-4-
基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮9-5(595mg,99%纯度,1.01mmol)的乙腈(6mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(9mL)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(320mg,2.05mmol)、亚氯酸钠(230mg,80%纯度,2.03mmol)、5.5%次氯酸钠溶液(1.2mL,2.02mmol)。使反应混合物缓慢回到室温。在室温处搅拌5小时后,将反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液(5mL)淬灭,用1M盐酸溶液酸化至pH=4-5,并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(540mg,由LCMS测得为99.7%纯度,87%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.18min,C26H22Cl2F3N5O4的质量计算值为595.1,m/z实测值为595.9[M+H]+。
化合物9:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(2-(三氟甲基)吡
啶-4-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸9-6(540mg,99.7%纯度,0.90mmol)、甲胺盐酸盐(185mg,2.74mmol)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(347mg,1.81mmol)和1-羟基苯并三唑(245mg,1.81mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(12mL)中的溶液中添加三乙胺(1.3mL,9.35mmol)。使反应混合物缓慢回到室温。在氮气气氛下于室温搅拌过夜。将反应混合物用水(20mL)淬灭并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(150mg,由LCMS测得为99.2%纯度,27%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.297min,C27H25Cl2F3N6O3的质量计算值为608.1,m/z实测值为609.0[M+H]+。
化合物9A和9B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((R*)-1-(2-(三氟甲
基)吡啶-4-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(9A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S*)-1-(2-(三氟甲 基)吡啶-4-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7- 甲酰胺(9B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺化合物9的外消旋混合物(300mg,98.9%纯度,0.49mmol)通过手性制备型HPLC(柱:Chiralpak IE 5μm,20mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,30g/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的化合物9A(89mg,29%收率,由LCMS测得为98.3%纯度,100%立体异构纯)和呈白色固体的化合物9B(110mg,37%收率,由LCMS测得为99.8%纯度,99.9%立体异构纯)。
化合物9A:
LC-MS(ESI):RT=3.982min,C27H25Cl2F3N6O3的质量计算值为608.1,m/z实测值为609.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,1.0mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=6.721min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78-8.70(m,1H),7.85-7.61(m,4H),7.53(br,s,1H),7.46(d,J=8Hz,1H),5.86-5.72(m,1H),5.44-5.24(m,1H),5.07(s,1H),4.65-4.41(m,1H),4.24-4.02(m,2H),3.51-3.41(m,1H),2.96-2.85(m,1H),2.60-2.52(m,1H),2.40(d,J=4.4Hz,3H),1.64-1.47(m,3H),1.30-1.12(m,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-66.28。
化合物9B:
LC-MS(ESI):RT=4.013min,C27H25Cl2F3N6O3的质量计算值为608.1,m/z实测值为609.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,1.0mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=7.922min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(s,1H),8.10-7.99(m,1H),7.85-7.70(m,3H),7.59(br s,1H),7.44(d,J=7.6Hz,1H),5.81-5.56(m,1H),5.50-5.16(m,1H),5.07(s,1H),4.67-4.39(m,1H),4.27-4.08(m,1H),3.90-3.66(m,2H),2.97-2.84(m,1H),2.67-2.67(m,3H),2.65-2.60(m,1H),1.62-1.44(m,3H),1.28-1.11(m,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-66.29。
化合物10A和10B
中间体10-1:
(3R,7S)-2-(4-溴-3-氯苯甲酰基)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-
甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在室温处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮IntA-6(1.5g,2.53mmol,80%纯度)、4-溴-3-氯苯甲酸(0.6g,2.55mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(1.45g,3.81mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的混合物中添加三乙胺(0.8g,7.91mmol)。将混合物在20℃处搅拌12小时。向反应混合物中添加水(80mL)并用二氯甲烷(80mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(80mL)洗涤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚∶丙酮=10∶1)纯化,得到呈白色固体的期望化合物(1.6g,82%收率,由1H NMR测得为90%纯度)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.67-7.62(m,5H),7.60-7.37(m,7H),7.26-7.25(m,1H),7.15-7.15(m,1H),5.68-5.47(m,1H),4.81-4.19(m,3H),4.06-4.01(m,1H),3.94-3.75(m,3H),3.12-2.89(m,1H),2.67-2.57(m,1H),1.26-1.12(m,3H),1.05(s,9H)。
中间体10-2:
(3R,7S)-2-(4-溴-3-氯苯甲酰基)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-
甲基-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑
并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-溴-3-氯苯甲酰基)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮10-1(700mg,90%纯度,0.91mmol)、5-(1-溴乙基)-2-(三氟甲基)吡啶8-3(390mg,90%纯度,1.38mmol)和N-苄基-N,N-二乙基氯化乙铵(30mg,0.13mmol)在2-甲基四氢呋喃(7mL)和50重量%氢氧化钠溶液(3.5mL)中的溶液。然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水(30mL)淬灭并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到粗产物,将其通过C18柱(乙腈:水=5%至90%)纯化,得到呈无色油状物的标题化合物(600mg,由LCMS测得为100%纯度,76%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.34min,C42H42BrClF3N5O3Si的质量计算值为863.2,m/z实测值为864.2[M+H]+。
中间体10-3:
(3R,7S)-2-(4-溴-3-氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(6-(三氟甲基)吡
啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在室温处,向(3R,7S)-2-(4-溴-3-氯苯甲酰基)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮10-2(600mg,100%纯度,0.69mmol)的四氢呋喃(6mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1.5mL,1.5mmol),然后将混合物在室温处搅拌3小时。将反应混合物倾注到水(20mL)中并用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇=40∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(410mg,由LCMS测得为97%纯度,91%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.426min,C26H24BrClF3N5O3的质量计算值为625.1,m/z实测值为627.9[M+H]+。
中间体10-4:
(3R,7S)-2-(4-溴-3-氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-
3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-溴-3-氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮10-3(410mg,97%纯度,0.63mmol)的乙腈(4mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(6mL)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(200mg,1.28mmol)、亚氯酸钠(145mg,80%纯度,1.28mmol)、5.5%次氯酸钠溶液(0.8mL,1.34mmol)。使反应混合物缓慢回到室温。在室温处搅拌5小时后,将反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液(5mL)淬灭,用1M盐酸溶液酸化至pH=4-5,并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(300mg,由LCMS测得为97%纯度,72%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.060min,C26H22BrClF3N5O4的质量计算值为639.1,m/z实测值为639.9[M+H]+。
化合物10:
(3R,7S)-2-(4-溴-3-氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三氟甲基)吡
啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-溴-3-氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸10-4(270mg,97%纯度,0.41mmol)、甲胺盐酸盐(83mg,1.23mmol)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(157mg,0.82mmol)和1-羟基苯并三唑(111mg,0.82mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的溶液中添加三乙胺(0.6ml,4.32mmol)。使反应混合物缓慢回到室温。在氮气气氛下于室温搅拌过夜。将反应混合物用水(20mL)淬灭并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(155mg,由LCMS测得为100%纯度,58%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.61min,C27H25BrClF3N6O3的质量计算值为652.1,m/z实测值为653.3[M+H]+。
化合物10A和10B:
(3R,7S)-2-(4-溴-3-氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((R*)-1-(6-(三氟甲
基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(10A)和
(3R,7S)-2-(4-溴-3-氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S*)-1-(6-(三氟甲
基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(10B)
将(3R,7S)-2-(4-溴-3-氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺化合物10的外消旋混合物(170mg,100%纯度,0.26mmol)通过手性制备型HPLC(柱:Chiralpak IE 5μm,20mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=70∶30,30g/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的化合物10A(34mg,由LCMS测得为99.5%纯度,20%收率,100%立体异构纯)和呈白色固体的化合物10B(91mg,由LCMS测得为99.5%纯度,53%收率,99.7%立体异构纯)。
化合物10A:
LC-MS(ESI):RT=3.771min,C27H25BrClF3N6O3的质量计算值为652.1,m/z实测值为653.1[M+H]+。手性分析:(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=70∶30,1.0mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=4.309min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.62(s,1H),7.99-7.85(m,3H),7.79-7.68(m,2H),7.36(d,J=7.6Hz,1H),5.98-5.76(m,1H),5.48-5.19(m,1H),5.01(s,1H),4.67-4.43(m,1H),4.25-3.38(m,2H),3.48-3.38(m,1H),2.94-2.85(m,1H),2.62-2.52(m,1H),2.36-2.30(m,3H),1.64-1.48(m,3H),1.27-1.12(m,3H)。19FNMR(376MHz,DMSO-d6)δ-66.38。
化合物10B:
LC-MS(ESI):RT=3.855min,C27H25BrClF3N6O3的质量计算值为652.1,m/z实测值为653.2[M+H]+。手性分析:(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=70∶30,1.0mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=4.752min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80-8.68(m,1H),8.04(s,2H),7.94-7.83(m,2H),7.73(s,1H),7.35(d,J=8.4Hz,1H),5.86-5.66(m,1H),5.46-5.21(m,1H),5.06(s,1H),4.61-4.41(m,1H),4.25-4.09(m,1H),3.88-3.69(m,2H),2.95-2.84(m,1H),2.64(d,J=4.4Hz,3H),2.58-2.52(m,1H),1.60-1.44(m,3H),1.27-1.11(m,3H)。19FNMR(376MHz,DMSO-d6)δ-66.31。
化合物11A和11B
中间体11-2:
6-羟基烟酸甲酯
在0℃处,向6-羟基烟酸11-1(2.0g,14.4mmol)的甲醇(20mL)溶液中添加二氯化亚硫(2mL,27.6mmol)。将混合物在75℃处搅拌4小时。浓缩混合物,得到呈黄色固体的标题化合物(2.18g,由NMR测得为90%纯度,89.1%收率)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.59(br s,1H),8.05(d,J=2.1Hz,1H),7.80(dd,J=9.6,1.8Hz,1H),6.38(d,J=9.6Hz,1H),3.77(s,3H)。
中间体11-3:
6-(二氟甲氧基)烟酸甲酯
向6-羟基烟酸甲酯11-2(1.18g,90%纯度,6.94mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中添加碳酸铯(6.9g,21.2mmol)和2-氯-2,2-二氟乙酸钠(2.1g,13.8mmol)。然后将混合物在95℃处搅拌4小时。将混合物用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=4∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(500mg,由NMR测得为95%纯度,33.7%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.84(d,J=2.0Hz,1H),8.32(dd,J=8.4和2.4Hz,1H),7.54(t,J=72.4Hz,1H),6.95(d,J=9.2Hz,1H),3.94(s,3H)。
中间体11-4:
6-(二氟甲氧基)烟酸
在0℃处,向6-(二氟甲氧基)烟酸甲酯11-3(1.2g,95%纯度,5.61mmol)在四氢呋喃(5mL)和甲醇(5mL)中的溶液中添加氢氧化锂一水合物(750mg,17.9mmol)的水(5mL)溶液。在0℃处搅拌1小时后,将混合物用0.1M盐酸盐水溶液酸化至pH=6,并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用水(30mL)洗涤三次、用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到呈黄色固体的标题化合物(1.05g,由LCMS测得为100%纯度,98.9%收率)。LC-MS(ESI):RT=0.694min,C7H5F2NO3的质量计算值为189.1,m/z实测值为188.1[M-H]-。
中间体11-5:
6-(二氟甲氧基)-N-甲氧基-N-甲基烟酰胺
将6-(二氟甲氧基)烟酸11-4(1.05g,100%纯度,5.55mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(7.4mL,44.8mmol)、N,O-二甲基羟胺盐酸盐(1.17g,12.0mmol)、1-乙基-(3-(3-二甲基氨基)丙基)-碳二亚胺盐酸盐(1.7g,8.87mmol)和苯并三唑-1-醇(1.17g,8.66mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的混合物在氮气下于30℃搅拌14小时。将混合物用0.5M盐酸盐水溶液酸化至pH=6,并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用水(40mL)洗涤三次,用盐水(40mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水=45%至75%)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.12g,由NMR测得为90%纯度,78.2%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.46min,C9H10F2N2O3的质量计算值为232.1,m/z实测值为233.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.63(d,J=2.0Hz,1H),8.13(dd,J=8.8和2.4Hz,1H),7.52(t,J=72.8Hz,1H),6.93(d,J=8.8Hz,1H),3.57(s,3H),3.39(s,3H)。
中间体11-6:
1-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)乙酮
在0℃处,向6-(二氟甲氧基)-N-甲氧基-N-甲基烟酰胺11-5(1.12g,90%纯度,4.34mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中滴加3M甲基溴化镁的四氢呋喃溶液(3mL,9.0mmol)。在室温处搅拌2小时后,将反应混合物倾注到饱和氯化铵水溶液(30mL)并用乙酸乙酯(40mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(900mg,由NMR测得为90%纯度,99.7%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.50min,C8H7F2NO2的质量计算值为187.1,m/z实测值为188.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.78(d,J=2.4Hz,1H),8.30(dd,J=8.4和2.4Hz,1H),7.54(t,J=72.0Hz,1H),6.98(d,J=8.8Hz,1H),2.61(s,3H)。
中间体11-7:
1-(6-(二氟甲氧基)-3-基)乙醇
在0℃处,向1-(6-(二氟甲氧基)-3-基)乙酮11-6(900mg,90%纯度,4.33mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中添加硼氢化钠(500mg,13.2mmol)。添加后,将混合物在室温处搅拌2小时。用水(30mL)淬灭混合物。分离有机相,并将水相用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤并减压浓缩,得到呈黄色油状物的期望产物(715mg,90%纯度,78.6%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.39min,C8H9F2NO2的质量计算值为189.1,m/z实测值为190.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16(d,J=2.4Hz,1H),7.78(dd,J=8.4,2.0Hz,1H),7.45(t,J=73.2Hz,1H),6.89(d,J=8.8Hz,1H),4.94(q,J=6.4Hz,1H),1.51(d,J=6.4Hz,3H)。
中间体11-8:
5-(1-溴乙基)-2-(二氟甲氧基)吡啶
在0℃处,向1-(6-(二氟甲氧基)-3-基)乙醇11-7(715mg,90%纯度,3.4mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中添加三溴膦(0.2mL,2.13mmol)。在0℃处搅拌0.5小时后,通过添加水淬灭混合物。将有机相用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤,经MgSO4干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到粗化合物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=100∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(260mg,由1H NMR测得为90%纯度,27.3%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.72min,C8H8BrF2NO的质量计算值为251.0,m/z实测值为252.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.21(d,J=2.8Hz,1H),7.85(dd,J=8.8,2.8Hz,1H),7.46(t,J=72.8Hz,1H),6.91(d,J=8.4Hz,1H),5.18(q,J=6.8Hz,1H),2.04(d,J=7.2Hz,3H)。
中间体11-9:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9- (1-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡 唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在室温处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(600mg,100%纯度,0.926mmol)在2-甲基四氢呋喃(6mL)和50重量%氢氧化钠水溶液(6mL,333mmol)中的溶液中添加5-(1-溴乙基)-2-(二氟甲氧基)吡啶11-8(525mg,90%纯度,1.87mmol)和苄基三乙基氯化铵(30mg,0.132mmol)。在室温处搅拌2小时后,将反应混合物用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈白色固体的标题化合物(800mg,73%纯度,77%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.20min,C42H43Cl2F2N5O4Si的质量计算值为817.2,m/z实测值为818.5[M+H]+。
中间体11-10:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)乙基)-7-
(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在室温处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮11-9(800mg,73%纯度,0.713mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1.2mL,1.2mmol)。在室温处搅拌1小时后,将反应混合物用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤两次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶乙酸乙酯=10∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(380mg,由1H NMR测得为90%纯度,82.6%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.27-8.23(m,1H),7.81-7.71(m,1H),7.60-7.49(m,3H),6.94(d,J=8.4Hz,1H),6.20-5.96(m,1H),5.26-4.85(m,1H),4.56-4.13(m,3H),4.09-3.79(m,2H),3.74-3.53(m,1H),3.37-3.02(m,2H).2.76-2.62(m,1H),2.21(s,2H),1.74-1.64(m,3H),1.40-1.12(m,3H)。LC-MS(ESI):RT=1.56min,C26H25Cl2F2N5O4的质量计算值为579.1,m/z实测值为580.0[M+H]+。
中间体11-11:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)乙基)-3-甲 基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)乙基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮11-10(380mg,90%纯度,0.589mmol)、亚氯酸钠(90mg,1.21mmol)和2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(185mg,1.18mmol)在乙腈(5mL)中的溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(5mL)和10%次氯酸钠水溶液(0.9mL,1.24mmol)。在室温处搅拌过夜后,将反应混合物用饱和亚硫酸钠水溶液(10mL)淬灭,用1M盐酸盐水溶液酸化至pH为约4,并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=50%至60%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(300mg,由LCMS测得为100%纯度,85.7%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.29min,C26H23Cl2F2N5O5的质量计算值为593.1,m/z实测值为594.0[M+H]+。
化合物11:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰 胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸11-11(220mg,100%纯度,0.37mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(143mg,0.746mmol)、甲胺盐酸盐(55mg,0.815mmol)和1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(99mg,0.733mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中添加三乙胺(0.4mL,2.26mmol)。在室温处搅拌3小时后,将混合物用饱和氯化铵水溶液(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水(0.1%碳酸氢铵)=45%至55%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(200mg,100%纯度,88.9%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.54min,C27H26Cl2F2N6O4的质量计算值为606.1,m/z实测值为607.4[M+H]+。
化合物11A和11B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((R*)-1-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)乙
基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(11A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S*)-1-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)乙
基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(11B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺化合物11(200mg,100%纯度,0.329mmol)的溶液通过手性制备型HPLC(柱:ChiralpakIE 5μm 30mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,9mL/min;柱温:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的化合物11A(30.3mg,99.4%纯度,15.1%收率,100%立体异构纯)和呈白色固体的化合物11B(72.9mg,98.9%纯度,36.0%收率,99.6%立体异构纯)。
化合物11A:
LC-MS(ESI):RT=3.594min,C27H26Cl2F2N6O4的质量计算值为606.1,m/z实测值为607.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=6.286min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.15(s,1H),7.67-7.64(m,1H),7.53-7.46(m,3H),7.30-7.27(m,1H),7.25-7.21(m,1H),6.88(d J=8.8Hz,1H),6.01-5.36(m,3H),4.90-4.83(m,1H),4.58-4.33(m,1H),3.97-3.83(m,2H),3.19-2.98(m,1H),2.75-2.64(m,4H),1.68-1.60(m,3H),1.33-1.26(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-88.37--89.62。
化合物11B:
LC-MS(ESI):RT=3.401min,C27H26Cl2F2N6O4的质量计算值为606.1,m/z实测值为607.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=8.462min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.24-8.19(m,1H),7.77-7.71(m,1H),7.63-7.45(m,3H),7.30-7.27(m,1H),7.26-7.24(m,1H),6.89(d J=8.8Hz,1H),6.14-5.55(m,3H),4.88-4.82(m,1H),4.61-4.42(m,1H),4.19-4.09(m,1H),3.47-3.39(m,1H),3.12-2.96(m,1H),2.80(d,J=5.2Hz,3H),2.73-2.69(m,1H),1.62-1.60(m,3H),1.34-1.24(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-88.98--89.18。
化合物12A和12B
化合物12:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)乙基)-3-甲
基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-甲基苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸11-11(400mg,93%纯度,0.626mmol)、碳酸氢铵(100mg,1.27mmol)和二碳酸二叔丁酯(265mg,1.21mmol)在1,4-二氧杂环己烷(9mL)和N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中添加吡啶(100mg,1.26mmol)。在氮气气氛下于30℃搅拌1.5小时后,将反应混合物用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(340mg,由LCMS测得为100%纯度,92%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.57min,C26H24Cl2F2N6O4的质量计算值为592.1,m/z实测值为593.1[M+H]+。
化合物12A和12B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((R*)-1-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)乙
基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(12A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S*)-1-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)乙
基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(12B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺化合物12的外消旋混合物(340mg,100%纯度,0.573mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IC 5μm 30mm*250mm;流动相:ACN=100,25mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的化合物12A(44.4mg,由LCMS测得为98.2%纯度,13%收率,99.2%立体异构纯)和化合物12B(90.8mg,由LCMS测得为98.8%纯度,26%收率,100%立体异构纯)。
化合物12A:
LC-MS(ESI):RT=3.517min,C26H24Cl2F2N6O4的质量计算值为592.1,m/z实测值为593.1[M+H]+。手性分析(Chiralpak IC 5um 4.6mm*250mm;流动相:ACN=100,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;Rt=5.839min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.17(s,1H),7.70-7.69(m,1H),7.64-7.46(m,3H),7.28-7.25(m,1H),6.87(d,J=8.4Hz,1H),6.07-5.90(m,2H),5.68-5.33(m,2H),4.91-4.89(m,1H),4.62-4.22(m,2H),3.97-3.85(m,2H),3.15-2.97(m,1H),2.69(d,J=16.4Hz,1H),1.63-1.61(m,3H),1.29-1.28(m,3H)。
化合物12B:
LC-MS(ESI):RT=3.750min,C26H24Cl2F2N6O4的质量计算值为592.1,m/z实测值为593.2[M+H]+。手性分析(Chiralpak IC 5um 4.6mm*250mm;流动相:ACN=100,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;Rt=8.807min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.22(s,1H),7.74-7.72(m,1H),7.54-7.45(m,3H),7.28-7.25(m,1H),6.89(d,J=8.4Hz,1H),6.22-5.93(m,2H),5.76-5.28(m,2H),4.89(br s,1H),4.67-4.29(m,2H),4.10(d,J=13.6Hz,1H),3.46-3.41(m,1H),3.15-2.87(m,1H),2.70(d,J=16.0Hz,1H),1.63-1.62(m,3H),1.28(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物13A和13B(制备方法A)
化合物13:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三氟甲基)吡
啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸8-6(330mg,100%纯度,0.55mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中添加甲胺盐酸盐(80mg,1.19mmol)、1-羟基苯并三唑(150mg,1.11mmol)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(210mg,1.10mmol)和三乙胺(0.6mL,4.31mmol)。将混合物于室温搅拌16小时。将混合物用水(20mL)稀释,用0.5M盐酸水溶液酸化至pH为约5,并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(145mg,由LCMS测得为100%纯度,43.0%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.60min,C27H25Cl2F3N6O3的质量计算值为608.1,m/z实测值为609.1[M+H]+。
化合物13A和13B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((R)-1-(6-(三氟甲
基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(13A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S)-1-(6-(三氟甲
基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(13B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺化合物13的外消旋物(145mg,100%纯度,0.24mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IE 5μm 30mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,30mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到粗产物P1和P2。将粗产物P1通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的化合物13A(30mg,98.2%纯度,20.3%收率)和另一粗产物峰,将其通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的化合物13B(75mg,98.6%纯度,51.0%收率)。
化合物13A:
LC-MS(ESI):RT=3.146min,C27H25Cl2F3N6O3的质量计算值为608.1,m/z实测值为609.0[M+H]+。手性HPLC(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=6.292min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.66(s,1H),7.83(d,J=7.6Hz,1H),7.67(d,J=8.4Hz,1H),7.52(d,J=9.2Hz,2H),7.27-7.27(m,1H),7.26-7.25(m,1H),5.97-5.43(m,3H),4.89-4.29(m,3H),4.03-3.89(m,2H),3.05(br s,1H),2.76-2.64(m,4H),1.67(d,J=7.2Hz,3H),1.30(d,J=6.4Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-67.90。
化合物13B:
LC-MS(ESI):RT=3.261min,C27H25Cl2F3N6O3的质量计算值为608.1,m/z实测值为609.0[M+H]+。手性HPLC(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=8.681min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.74(s,1H),7.88(d,J=6.8Hz,1H),7.68(d,J=8.0Hz,1H),7.54-7.52(m,2H),7.27-7.27(m,1H),7.25-7.25(m,1H),6.01-5.42(m,3H),4.88-4.44(m,3H),4.20(d,J=11.2Hz,1H),3.48(dd,J=12.8和4.8Hz,1H),3.04(br s,1H),2.82-2.70(m,4H),1.69(d,J=7.2Hz,3H),1.33-1.25(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-67.96。
化合物13B(制备方法B)
中间体13B-2:
6-(三氟甲基)烟酸锂
在氮气气氛下,向6-(三氟甲基)烟酸甲酯13B-1(40g,195mmol)在四氢呋喃(50mL)、甲醇(20mL)和水(10mL)中的溶液中添加氢氧化锂一水合物(10g,238mmol)。在室温处搅拌3小时后,在室温处浓缩反应混合物,得到呈白色固体的标题化合物(42g,90%纯度,98%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.14(s,1H),8.41(d,J=8.0Hz,1H),7.83(d,J=7.6Hz,1H)。
中间体13B-3:
N-甲氧基-N-甲基-6-(三氟甲基)烟酰胺
在氮气气氛下在室温处,向6-(三氟甲基)烟酸锂13B-2(42g,90%纯度,192mmol)、N,O-二甲基羟胺盐酸盐(18g,295mmol)、1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(39g,289mmol)和三乙胺(39g,385mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(300mL)中的溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(55g,287mmol)。在室温处搅拌过夜后,将混合物用水(120mL)稀释并用乙酸乙酯(130mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤三次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈浅黄色油状物的标题化合物(45g,由1H NMR测得为90%纯度,90%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.03(s,1H),8.21-8.18(m,1H),7.73(d,J=8.0Hz,1H),3.55(s,3H),3.40(s,3H)。
中间体13B-4:
1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙酮
在0℃处,向N-甲氧基-N-甲基-6-(三氟甲基)烟酰胺13B-3(45g,90%纯度,172.948mmol)的四氢呋喃(200mL)溶液中添加1M甲基溴化镁的四氢呋喃溶液(210mL,210mmol)。将混合物在0℃处搅拌1小时,然后将反应用氯化铵水溶液(100mL)淬灭并用乙酸乙酯(100mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(36g,由1H NMR测得为90%纯度,99%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.25(s,1H),8.43-8.41(m,1H),7.82(d,J=8.0Hz,1H),2.70(s,3H)。
中间体13B-5:
2-甲基-N-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺
向1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙酮13B-4(13g,90%纯度,61.8mmol)和(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(15g,123.8mmol)在四氢呋喃(80mL)中的溶液中添加四异丙醇钛(IV)(19mL,64.8mmol)。在70℃处搅拌24小时后,将反应混合物冷却至0℃,然后添加硼氢化钠(2g,52.9mmol),将反应混合物在0℃处搅拌2小时。将反应用饱和氯化铵(80mL)淬灭并用硅藻土过滤。用乙酸乙酯(80mL)洗涤滤饼。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=1∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(16g,由1H NMR测得为90%纯度,79%收率,99.7%立体异构纯)。手性分析(柱:IC 5μm 250mm*4.6mm;流动相:己烷∶EtOH=90∶10,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm,RT=9.082min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.73(s,1H),7.91-7.88(m,1H),7.68(d,J=8.0Hz,1H),4.70-4.64(m,1H),3.53(s,1H),1.59(d,J=6.4Hz,3H),1.25(s,9H)。
中间体13B-6:
(S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙胺二盐酸盐
在0℃处,向(S)-2-甲基-N-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺13B-5(16g,90%纯度,48.9mmol)的甲醇(50mL)溶液中缓慢添加4M盐酸盐的甲醇溶液(20mL,80mmol)。在0℃处搅拌2小时后,浓缩混合物,得到呈黄色油状物的标题化合物(15g,由1H NMR测得为90%纯度,92%收率)。手性分析(柱:IF 5μm 250mm*4.6mm;流动相:Hex∶EtOH=90∶10,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm,RT=9.611min,98.7%立体异构纯)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(s,1H),8.78(br s.2H),8.29(dd,J=8.0和2.0Hz,1H),8.03(d,J=8.0Hz,1H),4.56-4.67(m,1H),1.58(d,J=6.8Hz,3H)。为了与文献参比化合物进行比较,将13B-6(3g,13.3mmol)溶解于水(5mL)中后,添加1M氢氧化钠水溶液以将pH调节至约10,并将溶液用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经无水硫酸钠干燥,过滤并将滤液减压浓缩,得到呈无色油状物的13B-6的游离碱(2g,67%收率,98.5%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=1.06min,C27H36F3N5O5的质量计算值为190.2,m/z实测值为191.1[M+H]+。手性分析(柱:AD-H 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶IPA∶DEA=95∶5∶0.2,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm,RT=9.723min)。光学:[a]20 D处为-23.98°(c 0.5,CHCl3)(参考:对于R,[a]20 D处为+20°(c 0.5,CHCl3)。
中间体13B-7:
(S)-N-(((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-
基)乙胺
在室温处,向(S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙胺二盐酸盐13B-6(4.00g,90%纯度,15.9mmol)的甲醇(40mL)溶液中添加三乙胺(3.83g,37.8mmol)、(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醛Int B-3(5.00g,70%纯度,26.9mmol)和乙酸(2mL)。在室温处搅拌2小时后,向混合物中添加氰基三氢硼酸钠(2.38g,37.9mmol),然后在氮气气氛下在室温处继续搅拌1小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1至2∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(3.90g,由1H NMR测得为90%纯度,84%收率,98.9%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=1.53min,C14H19F3N2O2的质量计算值为304.3,m/z实测值为305.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IF 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=98∶2,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm,RT=9.255min)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.70-8.64(m,1H),7.92-7.87(m,1H),7.65(d,J=8.1Hz,1H),4.25-4.14(m,1H),4.03-3.89(m,3H),3.57-3.52(m,1H),2.68-2.61(m,1H),2.47-2.42(m,1H),1.40(s,6H),1.35(s,3H)。
中间体13B-8:
(R)-3-((((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基)((S)-1-(6-(三氟甲基)吡
啶-3-基)乙基)氨基甲酰基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁
酯
在氮气气氛下在室温处,向(R)-5-(叔丁氧基羰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸Int B-8(19.3g,95%纯度,65.2mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(300mL)溶液中添加N,N-二甲基吡啶-4-胺(18.6g,152mmol)、2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(V)(33.1g,87.1mmol)和(S)-N-(((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙胺13B-7(14.7g,90%纯度,43.5mmol)。在35℃处加热1小时,再在45℃处加热1小时并在55℃处加热过夜后,将混合物用水(200mL)稀释并用乙酸乙酯(200mL)萃取三次。将合并的有机层用水(200mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1至2∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(21.5g,由LCMS测得为58%纯度,51%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.70min,C27H36F3N5O5的质量计算值为567.3,m/z实测值为568.4[M+H]+。
中间体13B-9:
(R)-3-(((R)-2,3-二羟丙基)((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰
基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯
在氮气气氛下在0℃处,向(R)-3-((((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基)((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯13B-8(17.0g,58%纯度,17.4mmol)的乙腈(170mL)溶液中添加2M盐酸盐水溶液(170mL,340mmol)。在0℃处搅拌1小时后,向反应混合物中添加饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)并用乙酸乙酯(200mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(500mL)洗涤,然后经Na2SO4(s)干燥,浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1至1∶2)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(10.5g,由LCMS测得为82%纯度,94%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.39min,C24H32F3N5O5的质量计算值为527.2,m/z实测值为528.6[M+H]+。
中间体13B-10:
(R)-3-(((R)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-羟丙基)((S)-1-(6-(三氟甲
基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰基)-6-甲基-2,4,6,7-四氢-5H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-甲酸
叔丁酯
在氮气气氛下在0℃处,向(R)-3-(((R)-2,3-二羟丙基)((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯13B-9(16.7g,82%纯度,26.0mmol)的二氯甲烷(167mL)溶液中添加三乙胺(5.3g,52.4mmol)、N,N-二甲基吡啶-4-胺(3.5g,28.6mmol)和叔丁基氯二苯基硅烷(8.56g,31.1mmol)。在室温处搅拌1小时后,向反应混合物中添加水(300mL)并用二氯甲烷(100mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤,然后经Na2SO4(s)干燥,浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1至1∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(20g,由LCMS测得为97%纯度,98%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.61min,C40H50F3N5O5Si的质量计算值为765.4,m/z实测值为766.5[M+H]+。
中间体13B-11:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-10-氧代-9-((S)-1-
(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]
吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯
在氮气气氛下在0℃处,向(R)-3-(((R)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-羟丙基)((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)氨基甲酰基)-6-甲基-2,4,6,7-四氢-5H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯13B-10(21g,97%纯度,26.6mmol)的四氢呋喃(210mL)溶液中添加三苯基膦(17.4g,66.3mmol)和二氮烯-1,2-二甲酸二叔丁酯(15.3g,66.4mmol)。在0℃处搅拌2小时后,向反应混合物中添加水(200mL)并用乙酸乙酯(200mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤,然后经Na2SO4(s)干燥,浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1至1∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(30g,由1HNMR测得为45%纯度,68%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.26min,C40H48F3N5O4Si的质量计算值为747.3,m/z实测值为[M+H]+748.6。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.75(s,1H),7.85(d,J=6.4Hz,1H),7.68(d,J=8.4Hz,1H),7.60-7.56(m,4H),7.44-7.38(m,6H),6.17-6.14(m,1H),5.16-5.06(m,1H),4.91-4.80(m,1H),4.39-4.33(m,1H),4.18-4.08(m,2H),3.83(t,J=9.6Hz,1H),3.73-3.68(m,1H),3.39-3.34(m,1H),2.93-2.88(m,1H),2.54-2.50(m,1H),1.62(d,J=7.2Hz,3H),1.47(s,9H),1.07(d,J=6.8Hz,3H),1.03(s,9H)。
中间体13B-12:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-9-((S)-1-(6-(三氟
甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10
(7H)-酮
在氮气气氛下,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-10-氧代-9-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸酯13B-11(15g,45%纯度,9.03mmol)的二氯甲烷(75mL)溶液中添加三氟乙酸(37mL)。在0℃处搅拌1小时后,向反应混合物中添加饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)并用二氯甲烷(100mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤,然后经Na2SO4(s)干燥,浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1至1∶10)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(5.7g,由LCMS测得为100%纯度,97%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.14min,C35H40F3N5O2Si的质量计算值为647.3,m/z实测值为648.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.74(s,1H),7.85-7.83(m,1H),7.67(d,J=8.4Hz,1H),7.59-7.56(m,4H),7.46-7.36(m,6H),6.15-6.10(m,1H),4.35-4.27(m,2H),4.15-4.08(m,2H),4.01(d,J=16.4Hz,1H),3.77(t,J=9.6Hz,1H),3.71-3.66(m,1H),3.39-3.34(m,1H),2.98-2.94(m,1H),2.75-2.70(m,1H),2.30-2.23(m,1H),1.59(d,J=6.8Hz,3H),1.25(d,J=5.6Hz,3H),1.03(s,9H)。
中间体13B-13:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-
甲基-9-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]
吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在氮气气氛下在0℃处,向3,4-二氯苯甲酸(4.48g,23.5mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(100mL)溶液中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(9.5g,73.5mmol)、2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基异脲六氟磷酸盐(V)(11.2g,29.5mmol)和(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-9-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮13B-12(9.5g,100%纯度,14.7mmol)。在0℃处搅拌1小时后,向反应混合物中添加水(200mL)并用乙酸乙酯(200mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤,然后经Na2SO4(s)干燥,浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1至2∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(11.9g,由LCMS测得为100%纯度,99%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.30min,C42H42C12F3N5O3Si的质量计算值为819.2,m/z实测值为[M+H]+无质量。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.72(s,1H),7.90-7.77(m,1H),7.68(d,J=8.0Hz,1H),7.60-7.56(m,4H),7.52-7.38(m,8H),7.25-7.23(m,1H),6.19-6.01(m,1H),5.67-4.80(m,2H),4.49-4.30(m,2H),4.10-4.07(m,1H),3.83(t,J=9.6Hz,1H),3.75-3.69(m,1H),3.39-3.35(m,1H),3.04-2.92(m,1H),2.64-2.55(m,1H),1.61(d,J=6.8Hz,3H),1.20-1.16(m,3H),1.03(s,9H)。
中间体13B-14:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-((S)-1-(6-(三氟甲基)
吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮13B-13(12.9g,100%纯度,15.7mmol)的四氢呋喃(129mL)溶液中滴加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(21.5mL,21.5mmol),并将反应混合物在0℃处搅拌1小时。然后向反应混合物中添加水(300mL)并用乙酸乙酯(150mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤,然后经Na2SO4(s)干燥,浓缩并通过硅胶柱色谱法(甲醇∶乙酸乙酯=1∶100至1∶20)纯化,得到呈白色固体的标题产物(9.15g,由LCMS测得为100%纯度,99%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.61min,C26H24C12F3N5O3的质量计算值为581.1,m/z实测值为582.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.73(s,1H),7.87-7.82(m,1H),7.70(d,J=8.0Hz,1H),7.54-7.51(m,2H),7.28-7.27(m,1H),6.23-6.05(m,1H),5.71-4.80(m,2H),4.51-4.31(m,2H),4.06-3.96(m,2H),3.71-3.66(m,1H),3.27-3.17(m,1H),3.11-3.03(m,1H),2.93-2.87(m,1H),2.72-2.64(m,1H),1.68(d,J=6.8Hz,3H),1.25(d,J=7.2Hz,3H)。
中间体13B-15:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡
啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮13B-14(4.4g,99.2%纯度,7.49mmol)的乙腈(44mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(44mL)、亚氯酸钠(1.71g,80%纯度,15.1mmol)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(2.37g,15.2mmol)和次氯酸钠(9mL,10%纯度,15.1mmol)。在0℃处搅拌6小时后,向反应混合物中添加水(50mL)并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(60mL)洗涤,然后经Na2SO4(s)干燥,浓缩并用ACN(90mL)研磨,得到呈白色固体的标题产物(4.4g,由LCMS测得为100%纯度,98%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.22min,C26H22C12F3N5O4的质量计算值为595.1,m/z实测值为596.2[M+H]+。
化合物13B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S)-1-(6-(三氟甲
基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺
在氮气气氛下在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸13B-15(4.4g,100%纯度,7.38mmol)、甲胺盐酸盐(1.32g,19.6mmol)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(3.0g,15.6mmol)和1-羟基苯并三唑(2.11g,15.6mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(147mL)中的溶液中滴加三乙胺(5.1g,50.4mmol)。在0℃处搅拌1小时后,将混合物用水(300mL)稀释并用乙酸乙酯(300mL)萃取三次。将合并的有机层用1M盐酸盐水溶液(50mL)和盐水(300mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水(0.1%碳酸氢铵)=5%至95%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(2.82g,由LCMS测得为99.6%纯度,64%收率,99.7%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=8.142min,C27H25C12F3N6O3的质量计算值为608.1,m/z实测值为609.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IC 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=80∶20,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm,RT=5.378min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.74(s,1H),7.92-7.84(m,1H),7.68(d,J=8.0Hz,1H),7.54-7.51(m,2H),7.27-7.25(m,2H),6.12-5.28(m,3H),4.92-4.43(m,3H),4.24-4.13(m,1H),3.50-3.46(m,1H),3.12-2.97(m,1H),2.81(d,J=5.2Hz,3H),2.73-2.66(m,1H),1.68(d,J=7.2Hz,3H),1.29(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物14A和14B
中间体14-2:
1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
向吡唑-3-甲酸乙酯14-1(2g,14.3mmol)和2-碘-111-三氟乙烷(2.4mL,24.4mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液中添加碳酸钾(6g,43.4mmol)。在100℃处搅拌5小时后,将混合物冷却,用水(80mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=50%至60%)纯化,得到呈无色油状物的标题化合物(1.68g,由LCMS测得为100%纯度,53%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.47min,C8H9F3N2O2的质量计算值为222.1,m/z实测值为223.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.56(d,J=2.0Hz,1H),6.91(d,J=2.4Hz,1H),4.81(q,J=8.4Hz,2H),4.42(q,J=7.2Hz,2H),1.41(t,J=7.2Hz,3H)。
中间体14-3:
(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-基)甲醇
在0℃处,向1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯14-2(1.6g,90%纯度,6.48mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中添加氢化铝锂(300mg,7.90mmol)。在室温处搅拌1小时后,将反应混合物用硫酸钠十水合物(800mg)淬灭并过滤。浓缩滤液,得到呈无色油状物的标题化合物(1.1g,由LCMS测得为94%纯度,89%收率)。LC-MS(ESI):RT=0.96min,C6H7F3N2O的质量计算值为180.1,m/z实测值为181.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.47(d,J=2.0Hz,1H),6.36(d,J=2.4Hz,1H),4.71-4.64(m,4H),2.21(t,J=6.0Hz,1H)。
中间体14-4:
1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-甲醛
在0℃处,向(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-基)甲醇14-3(1.1g,94%纯度,5.74mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中添加Dess-Martin过碘烷(3g,7.07mmol)。在室温处搅拌3小时后,将混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液(20mL)淬灭并用二氯甲烷(20mL)萃取两次。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈白色固体的标题化合物(1.8g,由1H NMR测得为50%纯度,88%收率)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.00(d,J=0.8Hz,1H),7.59(d,J=2.8Hz,1H),6.90(d,J=2.4Hz,1H),4.82(q,J=8.4Hz,2H)。
中间体14-5:
1-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-基)乙醇
在氮气气氛下在0℃处,向1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-甲醛14-4(1.8g,50%纯度,5.05mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中添加甲基溴化镁(3.6mL,3M的2-甲基四氢呋喃溶液,10.8mmol)。将其逐渐升温至室温并搅拌3小时。将混合物用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(15mL)萃取三次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=20%至40%)纯化,得到呈无色油状物的标题化合物(570mg,由1H NMR测得为90%纯度,52%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45(d,J=2.0Hz,1H),6.32(d,J=2.4Hz,1H),4.96(q,J=6.4Hz,1H),4.66(q,J=8.4Hz,2H),2.30(br s,1H),1.53(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体14-6:
3-(1-溴乙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑
在0℃处,向1-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-基)乙醇14-5(500mg,90%纯度,2.32mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中添加三溴化磷(400mg,1.48mmol)。在室温处搅拌1小时后,将混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)淬灭并用二氯甲烷(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈棕色油状物的标题化合物(640mg,由1H NMR测得为90%纯度,97%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45(d,J=1.6Hz,1H),6.44(d,J=2.4Hz,1H),5.27(q,J=7.2Hz,1H),4.66(dq,J=8.4,1.2Hz,2H),2.05(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体14-7:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲
酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A-6(650mg,78%纯度,1.07mmol)和4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸(312mg,1.39mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的溶液中添加2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(V)(568mg,1.50mmol)和N,N-二异丙基乙胺(415mg,3.21mmol)。在25℃处搅拌过夜后,浓缩混合物,得到残余物。将残余物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷:甲醇=100:1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(700mg,由LCMS测得为94%纯度,90%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.04min,C35H36ClF3N4O3Si的质量计算值为680.2,m/z实测值为680.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)8.18-8.12(m,1H),7.92-7.79(m,3H),7.56-7.40(m,10H),5.43-5.24(m,1H),4.58-4.49(m,2H),4.16-4.12(m,1H),3.99-3.69(m,4H),3.00-2.95(m,1H),2.68-2.56(m,1H),1.09(br s,3H),0.92(s,9H)。
中间体14-8:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲
酰基)-3-甲基-9-(1-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶
并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮14-7(500mg,100%纯度,0.734mmol)和3-(1-溴乙基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑14-6(400mg,90%纯度,1.40mmol)在2-甲基四氢呋喃(5mL)中的溶液中添加50重量%氢氧化钠水溶液(5mL)和苄基三乙基氯化铵(20mg,0.088mmol)。在20℃处搅拌5小时后,将反应混合物用水(5mL)稀释并用乙酸乙酯(5mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色固体的P1和P2的混合物(800mg,由LCMS测得为55%纯度,70%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.04min和2.10min,C42H43ClF6N6O3Si的质量计算值为856.3,m/z实测值为857.1[M+H]+。
中间体14-9:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(1-(2,2,
2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]
吡嗪-10(7H)-酮
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮14-8(900mg,55%纯度,0.577mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中添加四丁基氟化铵溶液(1mL,1M的四氢呋喃溶液,1mmol)。在室温处搅拌1小时后,将反应混合物浓缩并通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇=10∶1)和C18柱(乙腈:水=50%至65%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(320mg,由LCMS测得为100%纯度,90%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.59min,C26H25ClF6N6O3的质量计算值为618.2,m/z实测值为619.0[M+H]+。
中间体14-10:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(1-(2,2,2-
三氟乙基)-1H-吡唑-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,
5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮14-9(320mg,100%纯度,0.517mmol)、亚氯酸钠(120mg,1.06mmol)和2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(160mg,1.02mmol)在乙腈(5mL)中的溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(5mL)和次氯酸钠溶液(0.6mL,10%水溶液,1.01mmol)。在室温处搅拌过夜后,将反应混合物用饱和亚硫酸钠水溶液(10mL)淬灭,用1N盐酸盐酸化至pH为约4,并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=40%至60%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(330mg,由LCMS测得为95%纯度,96%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.31min,C26H23ClF6N6O4的质量计算值为632.1,m/z实测值为633.0[M+H]+。
化合物14:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(1-(2,
2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并
[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸14-10(330mg,95%纯度,0.495mmol)和甲胺盐酸盐(80mg,1.13mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中添加三乙胺(0.3mL,2.16mmol)、3-(乙基亚氨基亚甲基氨基)-N,N-二甲基丙-1-胺盐酸盐(150mg,0.782mmol)和1-羟基苯并三唑(110mg,0.814mmol)。在室温处搅拌过夜后,将混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层浓缩并通过C18柱(乙腈:水=45%至60%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(150mg,由LCMS测得为92%纯度,43%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.57min,C27H26ClF6N7O3的质量计算值为645.2,m/z实测值为646.1[M+H]+。
化合物14A和14B:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((R*)-1-
(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]
吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(14A)和
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S*)-1-
(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]
吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(14B)
将(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺化合物14的外消旋物(150mg,92%纯度,0.214mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IA 5um 30mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,55mL/min;柱温:30℃;波长:230nm),得到粗产物P1和粗产物P2。将粗产物P1通过C18柱(乙腈:水(+0.2%碳酸氢铵)=5%至95%)纯化,得到呈白色固体的化合物14A(35mg,由LCMS测得为99.5%纯度,25%收率)。将粗产物P2通过C18柱(乙腈:水(+0.2%碳酸氢铵)=5%至95%)纯化,得到呈白色固体的化合物14B(65mg,由LCMS测得为99.8%纯度,47%收率)。
化合物14A:
LC-MS(ESI):RT=3.821min,C27H26ClF6N7O3的质量计算值为645.2,m/z实测值为646.4[M+H]+。手性HPLC(柱:Chiralpak IA 5um 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,1mL/min;温度:30℃;波长:230nm),RT=4.742min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.78(d,J=1.2Hz,1H),7.58(d,J=8.0Hz,1H),7.55-7.52(m,1H),7.46(d,J=2.0Hz,1H),7.26-7.25(m,1H),6.21(d,J=1.6Hz,1H),6.10-5.42(m,3H),4.86-4.33(m,4H),4.01-3.88(m,2H),3.08(br s,1H),2.75-2.71(m,4H),1.59-1.57(m,3H),1.31(d,J=6.4Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-62.82,-71.64。
化合物14B:
LC-MS(ESI):RT=3.015min,C27H26ClF6N7O3的质量计算值为645.2,m/z实测值为646.3[M+H]+。手性HPLC(柱:Chiralpak IA 5um 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,1mL/min;温度:30℃;波长:230nm),RT=6.612min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.78(d,J=1.6Hz,1H),7.58(d,J=7.6Hz,1H),7.53(dd,J=8.0和1.6Hz,1H),7.44(d,J=2.4Hz,1H),7.26-7.25(m,1H),6.27(s,J=1H),6.14-5.39(m,3H),4.87-4.34(m,4H),4.16(d,J=12.8Hz,1H),3.64(dd,J=13.6和5.6Hz,1H),3.07(br s,1H),2.80(d,J=4.8Hz,3H),2.73(d,J=16.0Hz,1H),1.57-1.55(m,3H),1.31(d,J=6.4Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-62.83,-71.76。
化合物15A和15B(制备方法A)
中间体15-1:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲
酰基)-3-甲基-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:
3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在室温处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮14-7(500mg,100%纯度,0.73mmol)和5-(1-溴乙基)-2-(三氟甲基)吡啶8-3(370mg,100%纯度,1.46mmol)在2-甲基四氢呋喃(2.5mL)中的溶液中缓慢添加50重量%氢氧化钠水溶液(2.5mL)和N-苄基-N,N-二乙基氯化乙铵(25mg,0.11mmol)。在室温处搅拌3小时后,将混合物用水(5mL)稀释并在室温处减压浓缩以去除挥发物。将剩余的水层用1M盐酸盐水溶液(30mL)酸化并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色固体的粗化合物(760mg,由LCMS测得为81%纯度,98.2%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.31min,C43H42ClF6N5O3Si的质量计算值为853.3,m/z实测值为854.2[M+H]+。
中间体15-2:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(6-(三氟
甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10
(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮15-1(760mg,81%纯度,0.72mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1mL,1mmol)。在0℃处搅拌1小时后,减压浓缩混合物,得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷:甲醇=10:1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(450mg,由LCMS测得为96%纯度,97.3%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.62min,C27H24ClF6N5O3的质量计算值为615.2,m/z实测值为616.0[M+H]+。
中间体15-3:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三氟甲基)
吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮15-2(450mg,96%纯度,0.70mmol)的乙腈(3mL)溶液中添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(230mg,1.47mmol)、亚氯酸钠(160mg,80%纯度,1.42mmol)、饱和磷酸二氢钾水溶液(3mL)和次氯酸钠(0.9mL,1.51mmol)。在0℃处搅拌过夜后,将混合物用饱和亚硫酸钠溶液(20mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(400mg,由LCMS测得为100%纯度,90.5%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.34min,C27H22ClF6N5O4的质量计算值为629.1,m/z实测值为630.0[M+H]+。
化合物15:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三
氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸15-3(340mg,100%纯度,0.54mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中添加甲胺盐酸盐(80mg,1.19mmol)、1-羟基苯并三唑(150mg,1.11mmol)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(220mg,1.15mmol)和三乙胺(0.6mL,4.31mmol)。将混合物于室温搅拌16小时。将混合物用水(20mL)稀释,用0.5M盐酸水溶液酸化至pH为约5,并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物P1(175mg,由LCMS测得为100%纯度,50.4%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.61min,C28H25ClF6N6O3的质量计算值为642.2,m/z实测值为643.1[M+H]+。
化合物15A和15B:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((R)-1-(6-
(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]
吡嗪-7-甲酰胺(15A)和
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S)-1-(6-
(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]
吡嗪-7-甲酰胺(15B)
将(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺化合物15的外消旋物(175mg,100%纯度,0.27mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IE 5μm 30mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,30mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到粗异构体,将其通过C18(乙腈:水=5%至100%)进一步纯化,得到呈白色固体的化合物15A(30mg,98.2%纯度,16.8%收率,100%立体异构纯)和呈白色固体的化合物15B(68mg,98.5%纯度,38.3%收率,99.6%立体异构纯)。
化合物15A:
LC-MS(ESI):RT=3.962min,C28H25ClF6N6O3的质量计算值为642.2,m/z实测值为643.3[M+H]+。手性HPLC(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=5.031min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.66(s,1H),7.83(d,J=7.6Hz,1H),7.78(d,J=1.2Hz,1H),7.67(d,J=8.4Hz,1H),7.61-7.53(m,2H),7.26-7.25(m,1H),5.96-5.46(m,3H),4.90-4.31(m,2H),4.03-3.89(m,2H),3.06(br s,1H),2.75-2.67(m,4H),1.67(d,J=6.8Hz,3H),1.32(d,J=6.8Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-62.85,-67.91。
化合物15B:
LC-MS(ESI):RT=4.042min,C28H25ClF6N6O3的质量计算值为642.2,m/z实测值为643.4[M+H]+。手性HPLC(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=6.442min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.74(s,1H),7.87(d,J=6.8Hz,1H),7.78(s,1H),7.68(d,J=8.4Hz,1H),7.61-7.53(m,2H),7.26-7.25(m,1H),6.01-5.45(m,3H),4.88-4.46(m,2H),4.20(d,J=11.6Hz,1H),3.48(dd,J=4.4,12.8Hz,1H),3.05(br s,1H),2.82-2.71(m,4H),1.69(d,J=7.2Hz,3H),1.31(d,J=6.4Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-62.84,-67.97。
化合物15B(制备方法B)
中间体15B-1:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲
酰基)-3-甲基-9-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,
3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在氮气气氛下在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-9-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮13B-12(10.8g,95%纯度,15.8mmol)和4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸(5.30g,23.6mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液中添加2-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(12.2g,32.1mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(13mL,76.7mmol)。在室温处搅拌过夜后,将反应用水(100mL)淬灭并用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=3∶1至1∶1)纯化,得到呈白色固体的化合物(13.6g,由1H NMR测得为95%纯度,99%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.15min,C43H42ClF6N5O3Si的质量计算值为853.3,m/z实测值为854.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.72(s,1H),7.87-7.76(m,2H),7.69(d,J=8.0Hz,1H),7.60-7.57(m,5H),7.53-7.37(m,7H),6.18-6.01(m,1H),5.76-5.26(m,1H),4.80-4.35(m,3H),4.09-4.08(m,1H),3.84(t,J=9.6Hz,1H),3.73-3.70(m,1H),3.39(dd,J=13.2和4.4Hz,1H),3.09-2.91(m,1H),2.63-2.59(m,1H),1.62(s,3H),1.60(s,3H),1.03(s,9H)。
中间体15B-2:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-((S)-1-(6-
(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-
10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-9-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮15B-1(13.6g,95%纯度,15.1mmol)的四氢呋喃(135mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(23.5mL,23.5mmol)。在0℃处搅拌1小时后,将反应混合物用水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤两次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=3∶1至0∶1)纯化,得到化合物,并将残余物从(石油醚/乙酸乙酯)=(v/v=75/50mL)重结晶,得到呈白色固体的标题化合物(7.0g,由LCMS测得为95%纯度,71%收率)。LC-MS(ESI):RT=3.023min,C27H24ClF6N5O3的质量计算值为615.2,m/z实测值为616.2[M+H]+。
中间体15B-3:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-((S)-1-(6-(三
氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酸
向(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮15B-2(6.28g,95%纯度,9.69mmol)的乙腈(95mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(95mL)、亚氯酸钠(2.20g,80%纯度,19.5mmol)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(3.14g,20.1mmol)和次氯酸钠(11.9mL,10%纯度,19.9mmol)。在0℃处搅拌8小时后,过滤反应混合物,用乙腈(30mL)洗涤,将反应用饱和亚硫酸钠水溶液(10mL)淬灭,用1M盐酸水溶液酸化至pH为约4,然后用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其用(石油醚/乙酸乙酯)=(v/v=10/2,30mL)研磨。将所得固体通过漏斗过滤,用(石油醚/乙酸乙酯)=(v/v=60/12mL)洗涤并收集,得到呈白色固体的标题化合物(6.20g,由LCMS测得为95%纯度,96%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.42min,C27H22ClF6N5O4的质量计算值为629.1,m/z实测值为630.4[M+H]+。
化合物15B:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S)-1-(6-
(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]
吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,在2小时内向(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸15B-3(7.19g,95%纯度,11.4mmol)、甲胺盐酸盐(1.93g,28.6mmol)、1-羟基苯并三唑(3.09g,22.9mmol)和N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(4.38g,22.8mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中的溶液中滴加三乙胺(10.4mL,74.6mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液。将反应混合物用水(200mL)稀释并用乙醚(100mL)萃取三次。将合并的有机相用0.5M盐酸盐水溶液酸化至pH=5并用乙酸乙酯(300mL)萃取两次。将合并的有机层用水(100mL)洗涤三次,用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液减压浓缩,通过C18柱(乙腈:水=30%至70%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(6.90g,由LCMS测得为98.6%纯度,82%收率,99.3%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=8.509min,C28H25ClF6N6O3的质量计算值为642.2,m/z实测值为643.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1.0mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=6.431min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.74(s,1H),7.88-7.86(m,1H),7.78(d,J=1.6Hz,1H),7.69(d,J=8.4Hz,1H),7.61-7.59(m,1H),7.55-7.52(m,1H),7.26-7.25(m,1H),6.18-6.00(m,2H),5.72-5.11(m,1H),4.88(s,1H),4.55-4.37(m,1H),4.21(d,J=11.2Hz,1H),3.50(dd,J=12.8,4.8Hz,1H),3.14-2.97(m,1H),2.81(d,J=4.8Hz,3H),2.75-2.71(m,1H),1.69(d,J=7.2Hz,3H),1.31(d,J=6.8Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-62.84,-67.97。
化合物16A和16B
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中间体16-1:
1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙醇
在0℃处,向1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙酮11-4(5.0g,26.9mmol)的甲醇(50mL)溶液中缓慢添加硼氢化钠(3.0g,79.3mmol)。在室温处搅拌3小时后,将反应用丙酮(50mL)缓慢淬灭并浓缩得到残余物。将该残余物溶解于乙酸乙酯(50mL)中,用盐水(50mL)洗涤两次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈无色油状物的标题化合物(5.3g,由1H NMR测得为90%纯度,94%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(d,J=8.4Hz,2H),7.10(d,J=8.4Hz,1H),6.50(t,J=74.0Hz,1H),4.91(q,J=6.0Hz,1H),1.80(d,J=3.6Hz,1H),1.49(d,J=6.4Hz,3H)。
中间体16-2:
1-(1-溴乙基)-4-(二氟甲氧基)苯
在0℃处,向1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙醇16-1(500mg,90%纯度,2.39mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中缓慢添加溴化磷(III)(650mg,2.40mmol)。在室温处搅拌2小时后,将反应混合物倾注到冰水(20mL)中并用二氯甲烷(30mL)萃取两次。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液(50mLx2)和盐水(50mLx2)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到呈无色油状物的标题化合物(590mg,由1H NMR测得为95%纯度,93%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(d,J=8.4Hz,2H),7.09(d,J=8.8Hz,2H),6.51(t,J=73.6Hz,1H),5.20(q,J=7.2Hz,1H),2.03(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体16-3:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯
基)乙基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2
(1H)-甲酸叔丁酯
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯IntA-5(1g,100%纯度,1.74mmol)的2-甲基四氢呋喃(4mL)溶液中添加1-(1-溴乙基)-4-(二氟甲氧基)苯16-2(1.4g,5.02mmol)、N-苄基-N,N-二乙基氯化乙铵(198mg,0.869mmol)和50重量%氢氧化钠水溶液(4mL)。在30℃处搅拌2小时后,将混合物用水(8mL)稀释并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(8mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(940mg,由LCMS测得为100%纯度,73%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.27min和2.33min,C41H50F2N4O5Si的质量计算值为744.4,m/z实测值为745.0[M+H]+。
中间体16-4:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯
基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮:
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯16-3(940mg,100%纯度,1.26mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中添加2,2,2-三氟乙酸(2mL)。在0℃处搅拌1小时后,将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)淬灭至pH=10-11,并用二氯甲烷(15mL)萃取三次。将有机层合并,用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈无色油状物的标题化合物(800mg,由LCMS测得为100%纯度,98%收率)。LC-MS(ESI):RT=0.77min和0.82min,C36H42F2N4O3Si的质量计算值为644.3,m/z实测值为645.5[M+H]+。
中间体16-5:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9- (1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并 [1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在室温处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮16-4(100mg,99%纯度,0.15mmol)、3,4-二氯苯甲酸(40mg,0.21mmol)和2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(V)(80mg,0.21mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(70mg,0.54mmol)。然后将反应混合物在氮气气氛下于室温处搅拌2小时。将反应混合物浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至90%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(130mg,由1H NMR测得为90%纯度,93%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.97min和2.04min,C43H44Cl2F2N4O4Si的质量计算值为816.24,m/z实测值为816.8[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.60-7.49(m,5H),7.46-7.29(m,10H),7.11(d,J=8.0Hz,1H),6.94(d,J=8.4Hz,1H),6.50(t,J=73.6Hz,1H),6.12-5.92(m,1H),5.70-5.39(m,1H),4.78-4.31(m,3H),4.11-4.01(m,1H),3.82-3.73(m,1H),3.63-3.53(m,1H),3.42-3.32(m,1H),3.02-2.60(m,2H),1.56-1.52(m,3H),1.24-1.12(m,3H),1.03(s,6H),0.94(s,3H)。
中间体16-6:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-7-(羟甲
基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在室温处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮16-5(1g,90%纯度,1.10mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵(0.75mL,0.75mmol),然后将混合物在室温处搅拌1小时。将反应混合物倾注到水(10mL)中并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇=50∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(670mg,由LCMS测得为95%纯度,100%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.721min,C27H26Cl2F2N4O4的质量计算值为578.13,m/z实测值为578.9[M+H]+。
中间体16-7:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-
10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮16-6(555mg,95%纯度,0.91mmol)的乙腈(4mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(4mL)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(285mg,1.82mmol)、亚氯酸钠(210mg,1.86mmol)、5.5%次氯酸钠溶液(1.1mL,1.85mmol)。使反应混合物缓慢回到室温。在室温处搅拌8小时后,将反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液(5mL)淬灭,用1M盐酸溶液酸化至pH=4-5,并用乙酸乙酯(15mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(480mg,由LCMS测得为100%纯度,89%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.35min,C27H24Cl2F2N4O5的质量计算值为592.1,m/z实测值为592.7[M+H]+。
化合物16:
(3R)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-二甲基-
10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸16-7(400mg,100%纯度,0.67mmol)、甲胺盐酸盐(148mg,2.19mmol)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(246mg,1.28mmol)和1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(246mg,1.82mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(7mL)中的溶液中添加三乙胺(395mg,3.90mmol)。使反应混合物缓慢回到室温。在氮气气氛下于室温搅拌过夜后,将反应混合物用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(340mg,由LCMS测得为100%纯度,83%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.437min,C28H27Cl2F2N5O4的质量计算值为605.1,m/z实测值为606.2[M+H]+。
化合物16A、16B、16C和16D:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-二甲
基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
(16A和16B),
(3R,7R)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((R*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-
二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺(16C)和
(3R,7R)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3- 二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰 胺(16D)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺化合物16(440mg,96%纯度,0.70mmol)的混合物通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IE 5μm 20mm*250mm;流动相:MeOH∶DCM=60∶40,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的化合物16C(3mg,0.7%收率)、呈白色固体的化合物化合物16D(4mg,0.8%收率)和呈白色固体的标题混合物化合物16A和16B(330mg,78%收率,由LCMS测得为100%纯度)。
化合物16A和16B:
LC-MS(ESI):RT=2.93min,C28H27Cl2F2N5O4的质量计算值为605.14,m/z实测值为605.8[M+H]+。
化合物16C:
LC-MS(ESI):RT=1.65min,C28H27Cl2F2N5O4的质量计算值为605.14,m/z实测值为622.8[M+18]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.98(s,1H),7.77-7.75(m,2H),7.49-7.39(m,3H),7.23-7.05(m,3H),6.06-5.50(m,2H),5.25-5.04(m,1H),4.56-4.10(m,2H),3.69-3.56(m,2H),2.98-2.94(m,1H),2.62(s,3H),2.21-2.08(m,1H),1.40(s,3H),1.18-1.12(m,3H)。19FNMR(376MHz,DMSO-d6)δ-82.08。
化合物16D:
LC-MS(ESI):RT=1.62min,C28H27Cl2F2N5O4的质量计算值为605.14,m/z实测值为622.8[M+18]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.56-7.52(m,2H),7.30-7.28(m,4H),7.09-7.07(m,2H),6.50(t,J=74.0Hz,1H),5.91-5.44(m,3H),4.86-4.36(m,2H),3.91-3.79(m,2H),3.08(br s,1H),2.71-2.67(m,4H),1.68-1.61(m,3H),1.26-1.25(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-80.85。
化合物16A和16B(制备方法A)
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((R)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-
二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺(16A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-
二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺(16B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺化合物16A和16B(330mg,100%纯度,0.544mmol)的混合物通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IE 5μm 20mm*250mm;流动相:HEX∶EtOH=40∶60,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的化合物16A(66.8mg,20%收率,98.5%纯度,100%立体异构纯)和呈白色固体的化合物16B(90.7mg,27%收率,99.4%纯度,99.9%立体异构纯)。
化合物16A:
LC-MS(ESI):RT=3.366min,C28H27Cl2F2N5O4的质量计算值为606,m/z实测值为607.2[M+H]+。手性分析:(柱:Chiralpak IE 5um 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm,RT=8.184min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54-7.51(m,2H),7.31-7.27(m,4H),7.09(d,J=8.8Hz,2H),6.51(t,J=74.0Hz,1H),6.07-5.44(m,3H),4.86-4.42(m,2H),3.92-3.81(m,2H),3.06(br s,1H),2.73-2.67(m,4H),1.60-1.58(m,3H),1.30(d,J=6.4Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-80.83。
化合物16B:
LC-MS(ESI):RT=3.093min,C28H27Cl2F2N5O4的质量计算值为606,m/z实测值为607.2[M+H]+。手性分析:(柱:Chiralpak IE 5um 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm,RT=10.821min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54-7.52(m,2H),7.37-7.28(m,4H),7.11(d,J=8.4Hz,2H),6.50(t,J=73.6Hz,1H),5.99-5.44(m,3H),4.83-4.40(m,2H),4.08-3.92(m,1H),3.40-3.36(m,1H),3.04(br s,1H),2.80-2.69(m,4H),1.58-1.56(m,3H),1.30(d,J=6.4Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.03。
化合物16B(制备方法B)
中间体16B-1:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9- ((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑 并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int B(10g,97%纯度,15.0mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(100mL)溶液中添加3,4-二氯苯甲酸(3.5g,18.3mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(9.5mL,51.5mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(9.0g,23.7mmol)。在30℃处搅拌1小时后,将混合物浓缩并通过C18柱(乙腈:水(+0.02%乙酸铵)=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(8.0g,100%纯度,65%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.06min,C43H44Cl2F2N4O4Si的质量计算值为816.3,m/z实测值为无质量。
中间体16B-2:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-7-(羟
甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮16B-1(15.0g,100%纯度,18.3mmol)的四氢呋喃(150mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵(25mL,25mmol)的四氢呋喃溶液。在0℃处搅拌4小时后,将混合物过滤并减压浓缩,得到残余物,在30℃处向其中添加乙酸乙酯(20mL)和石油醚(40mL)并在30℃处搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温并过滤。通过过滤收集滤饼,得到呈白色固体的标题化合物(8.4g,100%纯度,79%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.63min,C27H26Cl2F2N4O4的质量计算值为578.1,m/z实测值为579.2[M+H]+。
中间体16B-3:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲
基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮16B-2(4.0g,100%纯度,6.90mmol)的乙腈(60mL)溶液中添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(2.2g,14.1mmol)、次氯酸钠(8.4mL,14.1mmol)、亚氯酸钠(1.6g,14.1mmol)、饱和磷酸二氢钠水溶液(60mL)。在25℃处搅拌16小时后,将混合物用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(100mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色固体的标题化合物(4g,93%纯度,91%收率)。在30℃处,将粗产物16B-3(8.2g,93%纯度,12.9mmol)溶解于乙酸乙酯(20mL)和石油醚(40mL)中。在30℃处搅拌1小时后,将反应混合物冷却至室温并过滤。通过过滤收集滤饼,得到呈白色固体的标题化合物(7.5g,100%纯度,98%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.23min,C27H24Cl2F2N4O5的质量计算值为592.1,m/z实测值为593.2[M+H]+。
化合物16B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-
二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸16B-3(4.0g,100%纯度,6.74mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(120mL)溶液中添加甲胺盐酸盐(1.2g,16.9mmol)、1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(1.85g,13.7mmol)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(2.6g,13.6mmol)和三乙胺(6.4mL,44.3mmol)。在0℃处搅拌2小时后,向混合物中添加乙酸乙酯(150mL),用水(150mL)洗涤两次,用盐水(200mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到呈黄色固体的粗产物(4.0g,98%收率,100%纯度)。将粗产物16(7.5g,100%纯度,12.4mmol)通过C18柱(乙腈:水(+0.02%乙酸铵)=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(5.5g,72.7%收率,99.2%纯度,1H NMR包含0.03%的乙腈)和(700mg,9.2%收率,98.3%纯度)。将粗产物(5.32g,纯度99.2%,8.77mmol,包含0.03%乙腈)在40℃的真空干燥烘箱中再干燥2小时,然后冷却至室温,得到呈白色固体的标题化合物(5.3g,99.2%纯度,98.8%收率,99.6%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=8.800min,C28H27Cl2F2N5O4的质量计算值为605.1,m/z实测值为606.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm,在Rt=10.736min处99.8%立体异构纯)。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:MeOH∶DCM=60∶40,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;在Rt=3.984min处99.6%立体异构纯)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54-7.52(m,2H),7.37-7.35(m,2H),7.28-7.26(m,1H),7.12-7.09(m,2H),6.50(t,J=74.0Hz,1H),6.00-5.42(m,3H),4.82-4.36(m,3H),4.09-4.05(m,1H),3.37(dd,J=13.2和4.8Hz,1H),3.12-2.94(m,1H),2.80-2.69(m,4H),1.58-1.56(m,3H),1.29(d,J=6.8Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.06。
化合物17
中间体17-1:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9- (4-(二氟甲氧基)苄基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡 嗪-10(7H)-酮
在30℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮IntA(200mg,0.309mmol,100%纯度)和1-(溴甲基)-4-(二氟甲氧基)苯(130mg,0.548mmol)在2-甲基四氢呋喃(5mL)中的溶液中缓慢添加50重量%氢氧化钠水溶液(5mL)。在30℃处搅拌2小时后,将混合物用水(50mL)稀释并在室温处减压浓缩以去除挥发物。将剩余的水层用2M盐酸盐水溶液(20mL)酸化并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次,用盐水(60mL)萃取,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的粗产物(300mg,51%纯度,60%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.30min,C42H42Cl2F2N4O4Si的质量计算值为802.2,m/z实测值为803.1[M+H]+。
中间体17-2:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-7-(羟甲基)-3-甲
基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮17-1(450mg,51%纯度,0.286mmol)的四氢呋喃(6mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵(1mL,1mmol)的四氢呋喃溶液。在0℃处搅拌4小时后,将混合物过滤并减压浓缩,得到粗产物。将粗产物通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(170mg,98%收率,93%纯度)。LC-MS(ESI):RT=1.62min,C26H24Cl2F2N4O4的质量计算值为564.1,m/z实测值为565.1[M+H]+。
中间体17-3:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-3-甲基-10-氧代-1,
2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮17-2(170mg,93%纯度,0.280mmol)的乙腈(4mL)溶液中添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(90mg,0.576mmol)、次氯酸钠(0.35mL,0.588mmol)、亚氯酸钠(70mg,0.619mmol)、饱和磷酸二氢钠水溶液(4mL)。在0℃处搅拌1小时后,将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其溶解于乙腈(4mL)中。在40℃处搅拌1小时后,将混合物冷却至室温并过滤。通过过滤收集白色固体,得到标题化合物(160mg,100%纯度,99%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.32min,C26H22Cl2F2N4O5的质量计算值为578.1,m/z实测值为579.0[M+H]+。
化合物17:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-N,3-二甲基-10-氧
代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸17-3(160mg,0.276mmol,纯度100%)的N,N-二甲基甲酰胺(4mL)溶液中添加甲胺盐酸盐(55mg,0.774mmol)、1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(70mg,0.518mmol)、N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(110mg,0.574mmol)和三乙胺(0.3mL,2.08mmol)。在0℃处搅拌2小时后,向混合物中添加乙酸乙酯(50mL),用水(50mL)洗涤两次,用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到粗产物。将粗产物通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(70mg,42.4%收率,99.1%纯度)。LC-MS(ESI):RT=3.292min,C27H25Cl2F2N5O4的质量计算值为591.1,m/z实测值为592.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.53-7.51(m,2H),7.32-7.30(m,2H),7.27-7.26(m,1H),7.25-7.24(m,1H),7.09(d,J=8.4Hz,2H),6.49(t,J=73.6Hz,1H),6.14-6.32(m,2H),4.90-4.42(m,4H),4.19-4.15(m,1H),3.87(dd,J=13.2和4.0Hz,1H),3.13-2.97(m,1H),2.78-2.70(m,4H),1.29(d,J=6.8Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-80.95。
化合物18A和18B
中间体18-2:
1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙-1-醇
将1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙烯酮18-1(2.0g,100%纯度,10.1mmol)溶解于四氢呋喃(10mL)和甲醇(20mL)的混合物中,然后将溶液冷却至0℃,并添加四氢硼酸钠(305mg,8.06mmol)。使反应升温至室温并搅拌2小时,然后通过添加水淬灭,并用乙酸乙酯(40mL)萃取3次。将有机层合并,用盐水洗涤,经无水Na2SO4(s)干燥并减压浓缩,得到呈白色固体的标题化合物(1.9g,由1H NMR测得为95%纯度,89%收率)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.87(d,J=8.8Hz,2H),7.60(d,J=8.0Hz,2H),5.40(d,J=4.0Hz,1H),4.85-4.80(m,1H),3.19(s,3H),1.34(d,J=6.4Hz,3H)。
中间体18-3:
1-(1-溴乙基)-4-(甲基磺酰基)苯
在室温处,向1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙醇18-2(1.6g,95%纯度,7.59mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中添加全溴甲烷(4.5g,13.6mmol)和三苯基膦(3.6g,13.7mmol)。在氮气气氛下于40℃搅拌3小时后,将混合物减压浓缩,然后通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=1000∶1至1∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(1.8g,由1H NMR测得为95%纯度,86%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.92(d,J=8.4Hz,2H),7.78(d,J=8.0Hz,2H),5.58(q,J=6.8Hz,1H),3.23(s,3H),2.00(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体18-4:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯
基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(600mg,95%纯度,0.880mmol)和1-(1-溴乙基)-4-(甲基磺酰基)苯18-3(425mg,95%纯度,1.53mmol)在四氢呋喃(6mL)中的溶液中滴加苄基三乙基氯化铵(208mg,0.913mmol)和饱和氢氧化钠水溶液(4mL)。在室温处搅拌2小时后,添加水(30mL),用乙酸乙酯(60mL)萃取。将合并的有机层减压浓缩,将所得残余物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇=100∶1至16∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(400mg,由LCMS测得为100%纯度,77%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.49min,C27H28Cl2N4O5S的质量计算值为590.1,m/z实测值为591.1[M+H]+。
中间体18-5:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)-
10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮18-4(400mg,100%纯度,0.676mmol)的乙腈(6.0mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(4.0mL)、亚氯酸钠(153mg,1.35mmol)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(213mg,1.36mmol)和次氯酸钠水溶液(1.5mL,1.39mmol)。在0℃处搅拌1小时并在室温处搅拌2小时后,将混合物用亚硫酸钠饱和溶液(5mL)稀释,用1M盐酸盐水溶液酸化至pH=3,并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤并浓缩,得到呈白色固体的期望产物(370mg,由LCMS测得为100%纯度,90%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.30min,C27H26Cl2N4O6S的质量计算值为604.1,m/z实测值为605.1[M+H]+。
化合物18:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙
基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺’
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸18-5的外消旋混合物(320mg,100%纯度,0.528mol)、甲胺盐酸盐(89mg,1.32mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(203mg,1.06mmol)和1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(143mg,1.06mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中滴加三甲胺(240mg,2.37mmol)。在氮气气氛下于室温搅拌2小时后,将混合物用1M盐酸盐水溶液酸化至pH=3,并用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将合并的有机层减压浓缩,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水=5%至80%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(270mg,由LCMS测得为100%纯度,83%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.40min,C28H29Cl2N5O5S的质量计算值为617.1,m/z实测值为618.1[M+H]+。
化合物18A和18B(制备方法A):
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-((R)-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)
乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺(18A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-((S)-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)
乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺(18B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺1的外消旋物(300mg,100%纯度,0.485mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离方法:柱:Chiralpak IB 5μm 30mm*250mm;流动相:己烷∶乙醇=30∶70,60mL/min;柱温:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题产物18A(64.6mg,98.9%纯度,21%收率,100%立体异构纯)和18B(114.3mg,99.0%纯度,38%收率,100%立体异构纯)。
18A:
LC-MS(ESI):RT=3.424min,C28H29Cl2N5O5S的质量计算值为617.3,m/z实测值为618.0[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IB 5μm 4.6mm*250mm;流动相:己烷:乙醇=30:70,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=5.628min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.91(d,J=8.8Hz,2H),7.57-7.47(m,4H),7.27-7.25(m,1H),6.12-5.31(m,3H),4.99-4.24(m,3H),4.02-3.83(m,2H),3.16-2.98(m,4H),2.77-2.72(m,1H),2.69(d,J=5.2Hz,3H),1.64(d,J=7.2Hz,3H),1.30(d,J=6.8Hz,3H)。
18B:
LC-MS(ESI):RT=3.199min,C28H29Cl2N5O5S的质量计算值为617.3,m/z实测值为618.0[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IB 5μm 4.6mm*250mm;流动相:己烷∶乙醇=30∶70,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=8.082min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93(d,J=8.4Hz,2H),7.62-7.50(m,4H),7.28-7.23(m,1H),6.26-5.29(m,3H),4.85-4.26(m,3H),4.12(d,J=13.2Hz,1H),3.43(dd,J=13.2和4.8Hz,1H),3.16-2.95(m,4H),2.80(d,J=4.4Hz,3H),2.71(d,J=16.0Hz,1H),1.64(d,J=6.8Hz,3H),1.30(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物18B(制备方法B)
中间体18B-1:
(S)-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙-1-胺
将(S)-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙-1-胺盐酸盐(4.0g,17.0mmol)用饱和碳酸钠水溶液(20mL)溶解,然后用二氯甲烷和甲醇的溶液(10∶1,20mL)萃取四次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥,过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(3.5g,由1H NMR测得为95%纯度,98%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.90(d,J=8.0Hz,2H),7.57(d,J=8.4Hz,2H),4.24(q,J=6.4Hz,1H),3.05(s,3H),1.40(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体18B-2:
(R)-2-羟基-3-(((S)-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)氨基)丙酸甲酯
在室温处,向(S)-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙-1-胺18B-1(10.0g,42.4mmol)的甲醇(100mL)溶液中添加(R)-环氧乙烷-2-甲酸甲酯(4.7g,46.0mmol)。在60℃处搅拌15小时后,浓缩溶液,得到呈黄色油状物的标题化合物(13.5g,由LCMS测得为84%纯度,93%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.13min,C13H19NO5S的质量计算值为301.1,m/z实测值为302.0[M+H]+。
中间体18B-3:
(R)-2-羟基-N-甲基-3-(((S)-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)氨基)丙烯酰胺
向装有(R)-2-羟基-3-(((S)-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)氨基)丙酸甲酯18B-2(13.5g,84%纯度,37.6mmol)的密封管中添加2M甲胺的四氢呋喃溶液(60mL,120mmol)。在70℃处搅拌24小时后,浓缩溶液,得到呈无色油状物的标题化合物(11.0g,由1H NMR测得为90%纯度,84%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.89(d,J=8.4Hz,2H),7.48(d,J=8.4Hz,2H),6.97(br s,1H),3.93(t,J=5.2Hz,1H),3.85(q,J=6.4Hz,1H),3.05(s,3H),2.94-2.89(m,1H),2.84-2.78(m,4H),2.73-2.69(m,1H),1.38(d,J=6.4Hz,3H)。
中间体18B-4:
(R)-3-(((R)-2-羟基-3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)((S)-1-(4-(甲基磺酰基)苯
基)乙基)氨基甲酰基)-6-甲基-2,4,6,7-四氢-5H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
向(R)-2-羟基-N-甲基-3-(((S)-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)氨基)丙酰胺18B-3(11.0g,90%纯度,33.0mmol)和(R)-3-(1H-咪唑-1-羰基)-6-甲基-2,4,6,7-四氢-5H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯45-1(12.5g,98%纯度,37.0mmol)的乙腈(150mL)溶液中添加碳酸铯(16.5g,50.6mmol)。在80℃处搅拌3小时后,将反应混合物过滤,浓缩。将滤液通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶丙酮=3∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(10.8g,由LCMS测得为97%纯度,56%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.33min,C26H37N5O7S的质量计算值为563.2,m/z实测值为564.1[M+H]+。
中间体18B-5:
(3R,7S)-3-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-9-((S)-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)-
10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯
在氮气气氛下在0℃处,向R-3-(((R)-2-羟基-3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)((S)-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)氨基甲酰基)-6-甲基-2,4,6,7-四氢-5H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯18B-4(10.8g,97%纯度,18.6mmol)的四氢呋喃(300mL)溶液中添加三丁基膦(7mL,27.5mmol)和偶氮二甲酸二异丙酯(5.5mL,28.0mmol)。在室温处搅拌1小时后,将混合物浓缩,通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶乙腈=3∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(9.5g,由LCMS测得为100%纯度,94%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.39min,C26H35N5O6S的质量计算值为545.2,m/z实测值为544.0[M-H]-。
中间体18B-6:
(3R,7S)-N,3-二甲基-9-((S)-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,
4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺盐酸盐
在0℃处,向(3R,7S)-3-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-9-((S)-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯18B-5(9.5g,100%纯度,17.4mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中添加4M盐酸盐的1,4-二氧杂环己烷溶液(70mL,280mmol)。搅拌1小时后,浓缩混合物,得到无色油状物。将残余物用乙酸乙酯(50mL)洗涤,溶解于水(50mL)中,然后用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。浓缩水层,得到呈灰白色固体的标题化合物(8.0g,由LCMS测得为81%纯度,77%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.01min,C21H27N5O4S的质量计算值为445.2,m/z实测值为446.0[M+H]+。
化合物18B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-((S)-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)
乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺
向(3R,7S)-N,3-二甲基-9-((S)-1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺盐酸盐18B-6(8.0g,81%纯度,13.4mmol)和3,4-二氯苯甲酸(3.8g,20.3mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(7mL,40.2mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(7.7g,20.3mmol)。在室温处搅拌1小时后,将混合物用水(200mL)稀释,用乙酸乙酯(150mL)萃取两次。将合并的有机层用水(200mL)和盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤。将滤液浓缩,通过C18柱(乙腈:水=50%至70%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(7.5g,由SFC测得为65%纯度,59%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.42min,C28H29Cl2N5O5S的质量计算值为617.1,m/z实测值为618.0[M+H]+。手性分析(柱:ChiralpakIH 5μm 4.6mm*250mm;流动相:CO2∶ACN=60∶40,4mL/min;柱温:40℃;波长:230nm;Rt=11.38min)。将粗产物18B(7.5g,65%纯度,7.88mmol)通过手性制备型HPLC进行纯化(分离条件:柱:Chiralpak IH 5μm 30mm*250mm;流动相:CO2∶ACN=60∶40,25mL/min;柱温:40℃;波长:230nm),得到呈白色固体的标题化合物(3.8g,由LCMS测得为99.6%纯度,78%收率,99.6%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=9.292min,C28H29Cl2N5O5S的质量计算值为617.3,m/z实测值为618.0[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IH 5μm 4.6mm*250mm;流动相:CO2∶ACN=60∶40,4mL/min;柱温:40℃;波长:230nm;Rt=11.49min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.92(d,J=8.0Hz,2H),7.57-7.51(m,4H),7.27-7.25(m,1H),6.02-5.33(m,3H),4.85-4.38(m,3H),4.11(d,J=12.8Hz,1H),3.43(dd,J=13.2和4.8Hz,1H),3.12-2.94(m,4H),2.80(d,J=4.8Hz,3H),2.71(d,J=16.4Hz,1H),1.63(d,J=7.2Hz,3H),1.29(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物19A和19B
/>
中间体19-1:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(4-(甲基
磺酰基)苯基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-
酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮14-7(3.2g,100%纯度,4.70mmol)和1-(1-溴乙基)-4-(甲基磺酰基)苯18-3(2.28g,95%纯度,8.23mmol)在四氢呋喃(30mL)中的溶液中添加苄基三乙基氯化铵(1.1g,4.83mmol)并滴加饱和氢氧化钠水溶液(25mL)。在室温处搅拌2小时后,向混合物中添加水(80mL)并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机层减压浓缩。将所得残余物通过C18柱(乙腈:水=5%至65%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(1.65g,由LCMS测得为96%纯度,54%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.44min和1.46min,C28H28ClF3N4O5S的质量计算值为624.1,m/z实测值为625.0[M+H]+。
中间体19-2:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯
基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲
酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮19-1(200mg,97%纯度,0.307mmol)的乙腈(2.0mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(2.0mL)、亚氯酸钠(69mg,0.610mmol)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(97mg,0.617mmol)和次氯酸钠水溶液(0.7mL,0.646mmol)。在0℃处搅拌1小时并在室温处搅拌2小时后,用亚硫酸钠饱和溶液(20mL)稀释混合物。将混合物用1M盐酸盐水溶液酸化至pH=3,并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈白色固体的期望产物(200mg,由LCMS测得为92%纯度,94%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.08min和2.11min,C28H26ClF3N4O6S的质量计算值为638.1,m/z实测值为639.0[M+H]+。
化合物19:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)
苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸19-2(200mg,92%纯度,0.288mmol)、甲胺盐酸盐(47mg,0.696mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(110mg,0.574mmol)和1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(78mg,0.577mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物中滴加三甲胺(131mg,1.30mmol)。在氮气气氛下于0℃搅拌1小时后,将混合物用0.5M盐酸盐水溶液酸化至pH=5,并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层减压浓缩,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水=05%至65%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(135mg,由LCMS测得为100%纯度,72%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.70min,C29H29ClF3N5O5S的质量计算值为651.2,m/z实测值为652.0[M+H]+。
化合物19A和19B:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-((R*)-1-(4-(甲基磺
酰基)苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(19A)和
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-((S*)-1-(4-(甲基磺
酰基)苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(19B)
将(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺19(170mg,100%纯度,0.261mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离方法:柱:Chiralpak IB N-5,5μm 30mm*250mm;流动相:乙腈∶异丙醇=90∶10,60mL/min;柱温:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题化合物19A(32.4mg,96.6%纯度,18%收率,99.9%立体异构纯)和呈白色固体的19B(82.9mg,99.8%纯度,49%收率,99.9%立体异构纯)。
19A:
LC-MS(ESI):RT=3.424min,C29H29ClF3N5O5S的质量计算值为651.2,m/z实测值为652.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IB N-5,5μm 4.6mm*250mm;流动相:乙腈∶异丙醇=90∶10,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=3.730min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.91(d,J=8.4Hz,2H),7.77(d,J=1.6Hz,1H),7.60-7.50(m,4H),6.17-5.35(m,3H),4.93-4.34(m,3H),3.99-3.86(m,2H),3.18-2.98(m,4H),2.81-2.64(m,4H),1.64(d,J=7.2Hz,3H),1.32(d,J=6.8Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-62.84。
19B:
LC-MS(ESI):RT=3.424min,C29H29ClF3N5O5S的质量计算值为651.2,m/z实测值为652.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IB N-5,5μm 4.6mm*250mm;流动相:乙腈∶异丙醇=90∶10,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=4.882min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93(d,J=8.0Hz,2H),7.77(d,J=1.6Hz,1H),7.61-7.52(m,4H),6.28-5.33(m,3H),4.98-4.28(m,3H),4.13(d,J=10.8Hz,1H),3.44(dd,J=13.2和4.8Hz,1H),3.15-2.99(m,4H),2.81(d,J=4.8Hz,3H),2.73(d,J=15.6Hz,1H),1.64(d,J=7.2Hz,3H),1.31(d,J=6.4Hz,3H)。19FNMR(376MHz,CDCl3)δ-62.83。
化合物20A、20B和21
中间体20-2:
4-(环丙基磺酰基)苯甲醛
向4-氟苯甲醛20-1(300mg,2.42mmol)的二甲基亚砜(12ml)溶液中添加环丙烷磺酸钠盐(370mg,2.89mmol)。将反应混合物置于微波辐照炉上并于140℃加热1小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭,用乙酸乙酯(10mL)萃取三次,经Na2SO4(s)干燥,过滤。减压浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题产物(500mg,由1H NMR测得为90%纯度,88.5%收率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.17(s,1H),8.18-8.06(m,4H),2.60-2.47(m,1H),1.50-1.39(m,2H),1.19-1.06(m,2H)。
中间体20-3:
1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)乙-1-醇
在氮气气氛下在0℃处,向4-(环丙基磺酰基)苯甲醛20-2(400mg,90%纯度,1.71mmol)的无水四氢呋喃(4mL)溶液中滴加1M甲基溴化镁的四氢呋喃溶液(4mL,4mmol)。在0℃处搅拌2小时后,将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(20mL)淬灭,用乙酸乙酯(20mL)萃取三次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈无色油状物的标题化合物(400mg,由1HNMR测得为90%纯度,92.9%收率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.92(d,J=8.4Hz,2H),7.62(d,J=8.1Hz,2H),5.09-5.03(m,1H),2.60-2.44(m,1H),1.84-1.67(m,1H),1.58(d,J=6.6Hz,3H),1.47-1.36(m,2H),1.10-1.08(m,2H)。
中间体20-4:
1-(1-溴乙基)-4-(环丙基磺酰基)苯
在0℃处,向1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)乙-1-醇20-3(450mg,90%纯度,1.79mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中滴加三溴膦(450mg,1.66mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液。将所得混合物在0℃处搅拌2小时,然后倾注到水(20mL)中并用二氯甲烷(20mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(500mg,由1H NMR测得为80%纯度,77.3%收率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.01-7.91(m,2H),7.71-7.55(m,2H),5.83-5.53(m,1H),2.60-2.43(m,1H),2.43-2.29(m,3H),1.48-1.36(m,2H),1.11-1.09(m,2H)。
中间体20-5:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲
酰基)-9-(1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,
4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮14-7(420mg,100%纯度,0.62mmol)和1-(1-溴乙基)-4-(环丙基磺酰基)苯20-4(320mg,80%纯度,0.89mmol)在2-甲基四氢呋喃(4mL)中的溶液中添加氢氧化钠水溶液(2mL,50重量%)和苄基三乙基氯化铵(20mg,0.09mmol)。在50℃处搅拌2小时后,将反应倾注到水(10mL)中,用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,得到呈黄色固体的标题化合物(750mg,由LCMS测得为45%纯度,61.5%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.58min、2.08min和2.16min,C46H48ClF3N4O5SSi的质量计算值为888.3,m/z实测值为668.0[M-TBDPS+H3O]+、889.1[M+H]+。
中间体20-6:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-(1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)乙
基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10
(7H)-酮
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-(1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮20-5(750mg,45%纯度,0.38mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(0.4mL,0.4mmol)。在20℃处搅拌2小时后,将反应倾注到饱和氯化铵水溶液(10mL)中,用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,将其通过C18色谱法(乙腈∶水(+0.02%碳酸氢铵)=40%-60%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(220mg,由LCMS测得为100%纯度,89.1%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.57min,C30H30ClF3N4O5S的质量计算值为650.2,m/z实测值为668.0[M+H3O]+。
中间体20-7:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-(1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)乙
基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-(1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)乙基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮20-6(220mg,100%纯度,0.34mmol)的乙腈(2mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(2mL)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(110mg,0.70mmol)、亚氯酸钠(80mg,0.71mmol)并滴加10%次氯酸钠水溶液(500mg,0.67mmol)。使反应缓慢回到室温。在室温处搅拌3小时后,将反应混合物用饱和硫代硫酸钠(2mL)淬灭,用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=35%-55%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(190mg,由LCMS测得为100%纯度,84.5%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.31min,C30H28ClF3N4O6S的质量计算值为664.1,m/z实测值为665.6[M+H]+。
化合物20:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-(1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)乙
基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-(1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸20-7(190mg,100%纯度,0.29mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(110mg,0.57mmol)、1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(80mg,0.59mmol)和甲胺盐酸盐(60mg,0.89mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中滴加三甲胺(190mg,1.88mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液。在0℃处搅拌2小时后,将混合物倾注到水(10mL)中,用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=40%-60%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(170mg,由LCMS测得为94%纯度,82.5%收率)。注释:手性显示出88.3%20和11.7%21。LC-MS(ESI):RT=1.56min,C31H31ClF3N5O5S的质量计算值为677.2,m/z实测值为676.6[M+H]+。
化合物20A、20B和21:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-((R*)-1-(4-(环丙基磺酰基)苯
基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-
a]吡嗪-7-甲酰胺(20A)和
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-((S*)-1-(4-(环丙基磺酰基)苯
基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-
a]吡嗪-7-甲酰胺(20B)和
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-(4-(环丙基磺酰基)苄基)-N,3-二
甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
(21)
将外消旋物(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-(1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺与(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-(4-(环丙基磺酰基)苄基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺20(200mg,94%纯度,0.28mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IB N-5 5μm 20mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,25mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题化合物20A(47.5mg,99.7%纯度,25.2%收率,99.9%立体异构纯)、20B(71.2mg,99.5%纯度,37.7%收率,99.5%立体异构纯)和21(12.5mg,94.7%纯度,6.4%收率)。
20A:
LC-MS(ESI):RT=3.424min,C31H31ClF3N5O5S的质量计算值为677.2,m/z实测值为678.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IBN-5 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=6.532min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.93(s,1H),7.86-7.85(m,3H),7.80-7.79(m,2H),7.57-7.44(m,2H),5.94-5.68(m,1H),5.50-5.19(m,1H),5.05-4.93(m,1H),4.70-4.35(m,1H),4.29-3.93(m,2H),3.44-3.34(m,1H),2.98-2.81(m,2H),2.67-2.53(m,1H),2.36(d,J=3.6Hz,3H),1.63-1.43(m,3H),1.30-1.17(m,3H),1.12-1.11(m,2H),1.04-1.02(m,2H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-61.31。
20B:
LC-MS(ESI):RT=3.459min,C31H31ClF3N5O5S的质量计算值为677.2,m/z实测值为678.3[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IBN-5 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=10.778min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09-8.00(m,1H),7.92(s,1H),7.90-7.84(m,3H),7.82-7.75(m,1H),7.65-7.50(m,2H),5.92-5.63(m,1H),5.51-5.18(m,1H),5.11-4.97(m,1H),4.68-4.37(m,1H),4.26-4.11(m,1H),3.78-3.56(m,2H),2.98-2.78(m,2H),2.64(d,J=4.8Hz,3H),2.61-2.51(m,1H),1.55-1.38(m,3H),1.30-1.18(m,3H),1.15-1.09(m,2H),1.04-1.02(m,2H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-61.34。
21:
LC-MS(ESI):RT=3.553min,C30H29ClF3N5O5S的质量计算值为663.2,m/z实测值为664.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.98-7.96(m,1H),7.92(d,J=1.6Hz,1H),7.86-7.79(m,4H),7.57-7.41(m,2H),5.52-5.18(m,1H),5.12-4.91(m,2H),4.65-4.32(m,2H),4.26-4.04(m,2H),3.81-3.63(m,1H),2.94(dd,J=16.4,4.4Hz,1H),2.87-2.80(m,1H),2.64-2.51(m,4H),1.30-1.15(m,3H),1.14-1.08(m,2H),1.07-0.97(m,2H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-61.33。
化合物22A和22B
中间体22-2:
1-(4-(甲基磺酰基)苯基)丙-1-醇
在氮气气氛下在-78℃处,向4-(甲基磺酰基)苯甲醛22-1(3.0g,16.2mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液中添加2.0M乙基溴化镁的四氢呋喃溶液(12mL,24mmol)。将所得混合物搅拌2小时,将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(100mL)淬灭,用乙酸乙酯(50mL)萃取三次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=15%-30%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(2.0g,由1H NMR测得为90%纯度,51.5%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93(d,J=8.4Hz,2H),7.56(d,J=8.0Hz,2H),4.76-4.72(m,1H),3.05(s,3H),1.99-1.97(m,1H),1.84-1.75(m,2H),0.95(d,J=8.0Hz,3H)。
中间体22-3:
1-(1-溴丙基)-4-(甲基磺酰基)苯
在氮气气氛下在0℃处,向1-(4-(甲基磺酰基)苯基)丙-1-醇22-2(1.5g,90%纯度,6.3mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液中缓慢添加溴化磷(III)(3g,11.1mmol)。在室温处搅拌1小时后,将反应混合物减压浓缩以得到粗产物,将粗产物用乙酸乙酯(50mL)稀释,然后用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)洗涤两次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(600mg,由1HNMR测得为90%纯度,31%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93(d,J=8.4Hz,2H),7.59(d,J=8.4Hz,2H),4.88(t,J=6.9Hz,1H),3.07(s,3H),2.35-2.11(m,2H),1.02(t,J=7.2Hz,3H)。
中间体22-4:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-
甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯基)丙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并
[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(800mg,89%纯度,1.10mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中添加60%氢化钠的矿物油溶液(200mg,4.58mmol)。在0℃处搅拌30分钟后,向混合物中添加1-(1-溴丙基)-4-(甲基磺酰基)苯22-3(600mg,90%纯度,1.95mmol)。在0处搅拌1小时后,将反应混合物用水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤两次,经Na2SO4(S)干燥,过滤并减压浓缩,得到呈黄色固体的粗混合化合物(1g,由LCMS测得为83%纯度,89%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.45min,C44H48Cl2N4O5SSi的质量计算值为842.25,m/z实测值为605.4[M-OTBDPS]+。
中间体22-5:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯
基)丙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯基)丙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮22-4(1g,83%纯度,0.983mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1.5mL,1.5mmol)。在0℃处搅拌1小时后,减压浓缩反应混合物,得到粗产物,将其通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷:乙酸乙酯=5:1至3:1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(400mg,由LCMS测得为86%纯度,58%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.51min,C28H30Cl2N4O5S的质量计算值为604.13,m/z实测值为605.0[M+H]+。
中间体22-6:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯基)丙基)-
10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯基)丙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮22-5(400mg,86%纯度,0.568mmol)在乙腈(10mL)和饱和磷酸二氢钾水溶液(10mL)中的悬浮液中添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(200mg,1.28mmol)、亚氯酸钠(140mg,1.24mmol)和次氯酸钠水溶液(0.8mL,1.34mmol)。在室温处搅拌1小时后,将反应混合物用1M盐酸盐水溶液调节PH至5-6,并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4干燥,过滤并减压浓缩,得到呈黄色固体的粗化合物(400mg,由LCMS测得为87%纯度,99%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.25min和1.27min,C28H28Cl2N4O6S的质量计算值为618.11,m/z实测值为619.8[M+H]+。
化合物22:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯基)丙
基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯基)丙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸22-6(400mg,87%纯度,0.562mmol)、甲胺盐酸盐(130mg,1.93mmol)、1-羟基苯并三唑(200mg,1.48mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(300mg,1.57mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中滴加三乙胺(0.7mL,5.04mmol)。在0℃处搅拌1小时后,将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到粗产物,将其通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶丙酮=20∶1至5∶1)纯化,得到呈白色固体的化合物(250mg,由LCMS测得为73%纯度,51%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.48min,C29H31Cl2N5O5S的质量计算值为631.14,m/z实测值为648.9[M+H2O]+。
化合物22A和22B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-((R*)-1-(4-(甲基磺酰基)苯
基)丙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲
酰胺(22A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-((S*)-1-(4-(甲基磺酰基)苯
基)丙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲
酰胺(22B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-(1-(4-(甲基磺酰基)苯基)丙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺22的外消旋混合物(250mg,73%纯度,0.289mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IB N-5 250mm*20mm 5μm;流动相:ACN∶IPA=90∶10,15mL/min;温度:30℃;波长:254nm),然后通过制备型HPLC进一步纯化(柱:Xbridge C18(5μm 19mm*150mm),流动相A:水(+0.1%碳酸氢铵),流动相B:乙腈,UV:214nm,流速:15mL/min,梯度:30%-60%(%B)),得到呈白色固体的标题化合物22A(23.9mg,99.7%纯度,54%收率,99.9%立体异构纯)和呈白色固体的22B(46.3mg,99.8%纯度,60%收率,99.5%立体异构纯)。
22A:
LC-MS(ESI):RT=3.349min,C29H31Cl2N5O5S的质量计算值为631.14,m/z实测值为632.2[M+H]+。手性分析(Chiralpak IB N-5 250mm*4.6mm5μm:ACN∶IPA=90∶10,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=4.214min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.91(d,J=8.0Hz,2H),7.54-7.51(m,4H),7.30-7.27(m,1H),6.09-5.40(m,3H),4.93-4.45(m,3H),3.90(d,J=4.0Hz,2H),3.05(s,3H),3.01-2.95(m,1H),2.73-2.69(m,1H),2.64(d,J=4.8Hz,3H),2.14-2.00(m,2H),1.29(d,J=6.8Hz,3H),1.01(t,J=6.4Hz,3H)。
22B:
LC-MS(ESI):RT=3.404min,C29H31Cl2N5O5S的质量计算值为631.14,m/z实测值为632.2[M+H]+。手性分析(Chiralpak IB N-5 250mm*4.6mm 5μm:ACN∶IPA=90∶10,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=5.754min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93(d,J=8.4Hz,2H),7.62-7.57(m,2H),7.54-7.52(m,2H),7.29-7.27(m,1H),5.96-5.38(m,3H),4.84-4.38(m,3H),4.14-4.10(m,1H),3.36-3.31(m,1H),3.05(s,3H),3.02-2.96(m,1H),2.80(d,J=4.8Hz,3H),2.73-2.69(m,1H),2.12-2.04(m,2H),1.32(d,J=7.2Hz,3H),0.95(t,J=7.2Hz,3H)。
化合物23A和23B
中间体23-2:
4-(1-溴乙基)苯甲腈
将4-乙基苯甲腈23-1(1.2g,9.1mmol)的四氯化碳(5.0mL)溶液加热至回流。然后在UV照射下,在30分钟内缓慢添加溴(1.5g,9.39mmol)。将反应混合物回流4小时并冷却至室温。然后将混合物用二氯甲烷(50mL)稀释,并用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并减压去除溶剂,得到呈棕色液体的标题产物(2.0g,由1H NMR测得为60%纯度,62%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.65-7.63(m,2H),7.55-7.53(m,2H),5.16(q,J=7.2Hz,1H),2.04(d,J=7.2Hz,3H)。
中间体23-3:
4-(1-((3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰
基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-
基)乙基)苯甲腈
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮IntA(1.0g,90%纯度,1.39mmol)的2-甲基四氢呋喃(10mL)溶液中添加苄基三乙基氯化铵(65mg,0.285mmol)、4-(1-溴乙基)苯甲腈23-2(1.3g,60%纯度,3.71mmol)和50重量%氢氧化钠水溶液(10mL)。在室温处搅拌6小时后,将混合物用水(200mL)稀释,用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(250mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的粗化合物(1.9g,由LCMS测得为45%纯度,79%收率)。LC-MS(ESI):RT=4.30min和4.40min,C43H43Cl2N5O3Si的质量计算值为775.3,m/z实测值为776.1[M+H]+。
中间体23-4:
4-(1-((3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4, 7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-基)乙基)苯甲腈
在0℃处,向4-(1-((3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-基)乙基)苯甲腈23-3(1.9g,45%纯度,1.10mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(2.5mL,2.5mmol)。在0℃处搅拌1小时,再在室温处搅拌1小时后,将混合物用饱和氯化铵(80mL)淬灭,用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯∶石油醚=1∶1至5∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(628mg,由LCMS测得为72%纯度,76%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.81min和2.83min,C27H25Cl2N5O3的质量计算值为537.1,m/z实测值为538.1[M+H]+。
中间体23-5:
(3R,7S)-9-(1-(4-氰基苯基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-1,
2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向4-(1-((3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-基)乙基)苯甲腈23-4(307mg,72%纯度,0.411mmol)的乙腈(3mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(3mL)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(150mg,0.960mmol)、亚氯酸钠(120mg,1.061mmol)并滴加5.5%次氯酸钠水溶液(0.6mL,1.01mmol)。使反应缓慢冷却至室温。在室温处搅拌4小时后,将反应混合物用饱和硫代硫酸钠(8mL)淬灭,用1M盐酸盐水溶液(约4mL)酸化至pH 3-4,用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤。将滤液浓缩并通过在室温处用石油醚∶乙酸乙酯=5∶1(10mL)研磨来纯化。搅拌30分钟后,过滤混合物,得到呈白色固体的标题化合物(225mg,由LCMS测得为90%纯度,89%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.19min和2.22min,C27H23Cl2N5O4的质量计算值为551.1,m/z实测值为552.1[M+H]+。
化合物23:
(3R,7S)-9-(1-(4-氰基苯基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧
代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-9-(1-(4-氰基苯基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸23-5(225mg,90%纯度,0.367mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中添加1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(150mg,0.782mmol)、1-羟基苯并三唑(100mg,0.740mmol)、甲胺盐酸盐(75mg,1.11mmol)并滴加乙胺(0.4mL,2.88mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。在0℃处搅拌10分钟后,向混合物中添加水(50mL)并用乙酸乙酯(40mL)萃取三次。将有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至65%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(190mg,由LCMS测得为94%纯度,86%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.78min和2.82min,C28H26Cl2N6O3的质量计算值为564.1,m/z实测值为565.1[M+H]+。
化合物23A和23B:
(3R,7S)-9-((R*)-1-(4-氰基苯基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-
10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲醚胺(23A)
和
(3R,7S)-9-((S*)-1-(4-氰基苯基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-
10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(23B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺23的外消旋混合物(325mg,99%纯度,0.569mmol)通过手性HPLC进行纯化(分离条件:柱:Chiralpak IA 5μm 30mm*250mm;流动相:Hex:EtOH=30:70,25mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题化合物23A(100mg,99.2%纯度,31%收率,100%立体异构纯)和呈白色固体的23B(130mg,98.5%纯度,40%收率,100%立体异构纯)。
23A:
LC-MS(ESI):RT=3.714min,C28H26Cl2N6O3的质量计算值为564.1,m/z实测值为565.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IA 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=7.044min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.90-7.76(m,5H),7.53-7.35(m,3H),5.89-5.64(m,1H),5.47-5.11(m,1H),5.00(s,1H),4.66-3.92(m,3H),3.41-3.36(m,1H),2.98-2.82(m,1H),2.64-2.52(m,1H),2.40(d,J=4.0Hz,3H),1.60-1.40(m,3H),1.29-1.11(m,3H)。
23B:
LC-MS(ESI):RT=3.763min,C28H26Cl2N6O3的质量计算值为564.1,m/z实测值为565.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IA 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=9.973min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.03(s,1H),7.89-7.70(m,4H),7.59-7.38(m,3H),5.89-5.60(m,1H),5.49-5.14(m,1H),5.04(s,1H),4.65-4.04(m,2H),3.81-3.54(m,2H),2.97-2.83(m,1H),2.63(d,J=4.8Hz,3H),2.60-2.55(m,1H),1.46(s,3H),1.26-1.11(m,3H)。
化合物24A和24B
中间体24-2:
1-(4-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)乙酮
将1-(3-氟-4-羟基苯基)乙酮24-1(1.5g,9.73mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(15mL)和碳酸钾(1.6g,11.6mmol)的混合物在氮气气氛下搅拌10分钟。添加2-氯-2,2-二氟乙酸钠(1.8g,11.8mmol)并将混合物加热至100℃过夜。将混合物冷却至室温并用水(30mL)处理。将反应混合物用乙酸乙酯(30mL)萃取三次,经Na2SO4(s)干燥,过滤并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1)纯化,得到呈无色油状物的标题化合物(1.3g,由1HNMR测得为100%纯度,65.4%收率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.84-7.78(m,2H),7.37-7.31(m,1H),6.68(t,J=72.6Hz,1H),2.64(s,3H)。
中间体24-3:
1-(4-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)乙醇
在0℃处,向1-(4-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)乙酮24-2(1.3g,6.37mmol)的甲醇(15mL)溶液中添加硼氢化钠(150mg,3.97mmol),然后将混合物搅拌2小时。将该溶液用水(30mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次,用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈无色油状物的标题产物(1.3g,由1H NMR测得为100%纯度,99.0%收率)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ7.31-7.23(m,2H),7.16(d,J=8.7Hz,1H),6.58(t,J=73.5Hz,1H),4.93(q,J=6.3Hz,1H),1.99(s,1H),1.52(d,J=6.3Hz,3H)。
中间体24-4:
4-(1-溴乙基)-1-(二氟甲氧基)-2-氟苯
在0℃处,向1-(4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)苯基)乙醇24-3(600mg,100%纯度,2.91mmol)的二氯甲烷(6mL)溶液中滴加三溴膦(600mg,2.22mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液。在0℃处搅拌3小时后,将反应倾注到水(10mL)中,用二氯甲烷(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题产物(700mg,由1H NMR测得为90%纯度,80.5%收率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.35-7.31(m,2H),7.26-7.24(m,1H),6.60(t,J=73.5Hz,1H),5.18(q,J=6.9Hz,1H),2.23(d,J=6.9Hz,3H)。
中间体24-5:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-
(1-(4-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡
唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在25℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(750mg,100%纯度,1.16mmol)和4-(1-溴乙基)-1-(二氟甲氧基)-2-氟苯24-4(700mg,90%纯度,2.34mmol)在2-甲基四氢呋喃(6mL)中的溶液中添加氢氧化钠水溶液(3mL,50重量%)和苄基三乙基氯化铵(30mg,0.13mmol)。在50℃处搅拌2小时后,将反应倾注到水(10mL)中,用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到呈黄色油状物的粗产物(1.6g,由LCMS测得为58%纯度,95.9%收率)。该粗制品无需进一步纯化即可用于下一步骤。LC-MS(ESI):RT=2.36min,C43H43Cl2F3N4O4Si的质量计算值为834.2,m/z实测值为835.4[M+H]+。
中间体24-6:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基-3-氯苯基)乙基)-7-(羟
甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮24-5(1.6g,58%纯度,1.11mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1.2mL,1.20mmol)。在20℃处搅拌2小时后,将反应倾注到水(20mL)中,用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,然后通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1至2∶1)纯化,得到呈无色固体的标题产物(640mg,由LCMS测得为91%纯度,87.8%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.67min,C27H25Cl2F3N4O4的质量计算值为596.1,m/z实测值为597.1[M+H]+。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.59-7.54(m,2H),7.37-7.32(m,1H),7.30-7.29(m,1H),7.28-7.26(m,2H),6.60(t,J=72.9Hz,1H),6.08(s,1H),5.89-5.24(m,1H),5.09-4.22(m,3H),4.09-3.99(m,1H),3.95-3.74(m,1H),3.68-3.50(m,1H),3.36-3.19(m,1H),3.15-2.96(m,1H),2.76-2.73(m,1H),2.68-2.57(m,1H)1.62-1.57(m,3H),1.31(d,J=5.7Hz,3H)。
中间体24-7:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)乙基)-3-甲
基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)乙基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮24-6(300mg,91%纯度,0.46mmol)的乙腈(3mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(3mL)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(150mg,0.96mmol)、亚氯酸钠(85mg,0.94mmol)并滴加10%次氯酸钠水溶液(700mg,0.94mmol)。使反应缓慢回到室温。在室温处搅拌4小时后,将反应混合物用饱和硫代硫酸钠(7mL)淬灭,用1M盐酸盐水溶液酸化至pH=4-5,用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至40%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(210mg,由LCMS测得为100%纯度,75.2%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.35min,C27H23Cl2F3N4O5的质量计算值为610.1,m/z实测值为611.1[M+H]+。
化合物24:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)乙基)-N,3-
二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸24-7(210mg,100%纯度,0.34mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中滴加草酰氯(130mg,1.02mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mg,0.14mmol)。在20℃处搅拌1小时后,将混合物冷却至0℃,并在0℃处滴加2M甲胺的四氢呋喃溶液(1mL,2.00mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(150mg,1.16mmol)。将所得混合物在20℃处搅拌3小时,然后倾注到水(10mL)中并用二氯甲烷(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=40%-60%)纯化,得到呈无色固体的标题化合物(190mg,由LCMS测得为100%纯度,88.6%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.63min,C28H26Cl2F3N5O4的质量计算值为623.1,m/z实测值为624.1[M+H]+。
化合物24A和24B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((R*)-1-(4-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)乙
基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(24A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S*)-1-(4-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)乙
基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(24B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)-3-氟苯基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺24的外消旋物(190mg,100%纯度,0.25mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IE 5μm 20mm*250mm;流动相:Hex:EtOH=40:60,25mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题化合物24A(50.3mg,99.4%纯度,26.3%收率,100%立体异构纯)和化合物24B(61.1mg,99.6%纯度,32.0%收率,99.9%立体异构纯)。
化合物24A:
LC-MS(ESI):RT=4.104min,C28H26Cl2F3N5O4的质量计算值为623.1,m/z实测值为624.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=7.463min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.83(d,J=4.4Hz,1H),7.75(d,J=8.4Hz,2H),7.47-7.06(m,5H),5.85-5.57(m,1H),5.51-5.14(m,1H),5.06-4.95(m,1H),4.69-4.37(m,1H),4.29-4.12(m,1H),4.10-3.92(m,1H),3.43-3.31(m,1H),2.98-2.83(m,1H),2.60-2.52(m,1H),2.41(d,J=4.4Hz,3H),1.61-1.37(m,3H),1.32-1.09(m,3H)。19F NMR δ(376MHz,DMSO-d6)δ-82.60,-130.84。
化合物24B:
LC-MS(ESI):RT=3.972min,C28H26Cl2F3N5O4的质量计算值为623.1,m/z实测值为624.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=9.853min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.02(s,1H),7.74(d,J=8.4Hz,2H),7.46-7.05(m,5H),5.85-5.56(m,1H),5.51-5.15(m,1H),5.09-4.95(m,1H),4.67-4.41(m,1H),4.29-4.07(m,1H),3.77-3.54(m,2H),2.98-2.83(m,1H),2.63(d,J=4.4Hz,3H),2.59-2.52(m,1H),1.51-1.34(m,3H),1.30-1.09(m,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-82.32,-130.74。
化合物25
中间体25-2:
4-氯-3-(二氟甲基)苯甲酸甲酯
在0℃处,向4-氯-3-甲酰基苯甲酸甲酯25-1(200mg,1.01mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中添加二乙基氨基三氟化硫(0.5mL,3.79mmol)。在室温处搅拌过夜后,将混合物用碳酸氢钠水溶液(10mL)淬灭并用二氯甲烷(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(120mg,由1H NMR测得为95%纯度,51.3%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(s,1H),8.09(d,J=8.4Hz,1H),7.52(d,J=8.4Hz,1H),6.96(t,J=54.8Hz,1H),3.95(s,3H)。
中间体25-3:
4-氯-3-(二氟甲基)苯甲酸
在0℃处,向4-氯-3-(二氟甲基)苯甲酸甲酯25-2(200mg,95%纯度,0.86mmol)在四氢呋喃(2mL)和甲醇(2mL)中的溶液中添加氢氧化锂一水合物(120mg,2.86mmol)的水(2mL)溶液。在0℃处搅拌2小时后,将混合物用0.1M盐酸盐水溶液酸化至pH为约6,并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用水(30mL)洗涤三次、用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到呈黄色固体的标题化合物(180mg,由1H NMR测得为95%纯度,96.1%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.47(br s,1H),8.17(s,1H),8.09(d,J=8.8Hz,1H),7.76(d,J=8.8Hz,1H),7.28(t,J=54.4Hz,1H)。
中间体25-4:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(二氟甲基)苯甲
酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:
3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int B(380mg,82.2%纯度,0.48mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中添加4-氯-3-(二氟甲基)苯甲酸25-3(150mg,95%纯度,0.73mmol)、2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐水溶液(300mg,0.79mmol)和三甲胺(0.2mL,1.44mmol)。在室温处搅拌过夜后,将混合物用水(30mL)稀释,用0.5M盐酸水溶液酸化至pH为约6,并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(330mg,由1H NMR测得为90%纯度,73.6%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.13min,C44H45ClF4N4O4Si的质量计算值为832.3,m/z实测值为833.3[M+H]+。
中间体25-5:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(二氟甲基)苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙
基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10
(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(二氟甲基)苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮25-4(330mg,90%纯度,0.36mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1.2mL,1.2mmol)。在0℃处搅拌1小时后,减压浓缩混合物,得到粗产物。将粗产物通过C18柱(乙腈:水=30%至70%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(200mg,由1H NMR测得为90%纯度,84.9%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.59min,C28H27ClF4N4O4的质量计算值为594.2,m/z实测值为595.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75(s,1H),7.50(s,2H),7.34-7.33(m,2H),7.13-6.82(m,3H),6.52(t,J=73.6Hz,1H),6.11-5.94(m,1H),5.82-5.31(m,1H),5.03-4.26(m,3H),4.04-3.92(m,2H),3.55(t,J=12.8Hz,1H),3.20-2.96(m,3H),2.72-2.59(m,1H),1.74-1.57(m,3H),1.28-1.24(m,3H)。
中间体25-6:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(二氟甲基)苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙
基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-(二氟甲基)苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮25-5(200mg,90%纯度,0.30mmol)的乙腈(3mL)溶液中添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(95mg,0.61mmol)、亚氯酸钠(90mg,80%纯度,0.62mmol)、饱和磷酸二氢钾水溶液(3mL)和次氯酸钠水溶液(0.70mL,5.5%纯度,0.65mmol)。在20℃处搅拌过夜后,将混合物用饱和亚硫酸钠溶液(15mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18(乙腈:水=30%至55%)纯化,得到呈白色固体的期望产物(165mg,由1H NMR测得为90%纯度,80.6%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.219min,C28H25ClF4N4O5的质量计算值为608.1,m/z实测值为606.9[M-H]-。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.73(s,1H),7.53-7.48(m,2H),7.37-7.26(m,2H),7.12-6.83(m,3H),6.50(t,J=73.6Hz,1H),6.13-6.01(m,1H),5.93-5.43(m,1H).4.97-4.31(m,3H),3.82-3.75(m,1H),3.50(dd,J=14.0,4.8Hz,1H),2.89-2.67(m,2H),1.50(d,J=6.8Hz,3H),1.28-1.24(m,3H)。
化合物25:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(二氟甲基)苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙
基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(25)
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-(二氟甲基)苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸25-6(165mg,90%纯度,0.24mmol)、甲胺盐酸盐(40mg,0.59mmol)、1-乙基-(3-(3-二甲基氨基)丙基)-碳二亚胺盐酸盐(100mg,0.52mmol)和苯并三唑-1-醇(70mg,0.52mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中添加三乙胺(0.2mL,1.44mmol)。在氮气气氛下于30℃搅拌2小时后,将混合物用0.5M盐酸盐水溶液酸化至pH为约6,并用乙酸乙酯(40mL)萃取两次。将合并的有机层用水(30mL)洗涤三次、用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水=55%至75%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(82.5mg,98.6%纯度,53.6%收率)。LC-MS(ESI):RT=4.413min,C29H28ClF4N5O4的质量计算值为621.2,m/z实测值为622.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.73(s,1H),7.53-7.48(m,2H),7.40-7.34(m,2H),7.11-7.10(m,2H),6.97(t,J=54.4Hz,1H),6.50(t,J=73.6Hz,1H),5.99(br s,2H),5.72-5.11(m,1H),4.83-4.05(m,4H),3.38(dd,J=13.6,4.8Hz,1H),3.17-2.95(m,1H),2.80(d,J=4.8Hz,3H),2.74-2.62(m,1H),1.65-1.56(m,3H),1.39-1.23(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.05。
化合物26A和26B
中间体26-1:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯
基)乙基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2
(1H)-甲酸叔丁酯
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯IntA-5(1g,100%纯度,1.74mmol)的2-甲基四氢呋喃(4mL)溶液中添加1-(1-溴乙基)-4-(二氟甲氧基)苯16-2(1.4g,5.02mmol)、苄基三乙基氯化铵(198mg,0.869mmol)和50%氢氧化钠水溶液(4mL)。在30℃处搅拌2小时后,将混合物用水(8mL)稀释,用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(8mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(940mg,由LCMS测得为100%纯度,73%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.27min和2.33min,C41H50F2N4O5Si的质量计算值为744.4,m/z实测值为745.0[M+H]+。
中间体26-2:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯
基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮:
在0处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯26-1(940mg,100%纯度,1.26mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中添加2,2,2-三氟乙酸(2mL)。在0℃处搅拌1小时后,将反应混合物用饱和碳酸氢钠(10mL)淬灭至pH=10至11,用二氯甲烷(15mL)萃取三次。将有机层合并,用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈无色油状物的标题化合物(800mg,由LCMS测得为100%纯度,98%收率)。LC-MS(ESI):RT=0.77min和0.82min,C36H42F2N4O3Si的质量计算值为644.3,m/z实测值为645.5[M+H]+。
中间体26-3:
5-((3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基) 苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a] 吡嗪-2-羰基)-2-氯苯甲腈:
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮26-2(800mg,100%纯度,1.24mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(12mL)溶液中添加4-氯-3-氰基苯甲酸(293mg,1.61mmol)、2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基异脲六氟磷酸盐(V)(613mg,1.61mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.8mL,4.95mmol)。在室温处搅拌过夜后,向混合物中添加水(50mL),用乙酸乙酯(25mL)萃取三次。将有机层用盐水(25mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤并浓缩,得到呈浅黄色固体的标题化合物(900mg,由LCMS测得为99%纯度,88%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.12min和2.17min,C44H44ClF2N5O48i的质量计算值为807.3,m/z实测值为808.5[M+H]+。
化合物26-4:
2-氯-5-((3R,7S)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-7-(羟基甲基)-3-甲基-
10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羰基)苯甲腈
在0℃处,向5-((3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羰基)-2-氯苯甲腈26-3(900mg,99%纯度,1.10mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1.5mL,1.5mmol)。在室温处搅拌2小时后,将混合物用水(5mL)稀释并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈浅黄色固体的标题化合物(600mg,由LCMS测得为98%纯度,94%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.60min,C28H26ClF2N5O4的质量计算值为569.2,m/z实测值为570.2[M+H]+。
中间体26-5:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲
基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向2-氯-5-((3R,7S)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-7-(羟甲基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羰基)苯甲腈26-4(3g,90%纯度,4.74mmol)的乙腈(25mL)溶液中滴加饱和磷酸二氢钾水溶液(25mL)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(1.5g,9.60mmol)、亚氯酸钠(1.1g,9.73mmol)、5.5%次氯酸钠水溶液(11.3mL,10.4mmol)。使反应缓慢回到室温。在室温处搅拌过夜后,将反应混合物用饱和硫代硫酸钠(15mL)淬灭,用1M盐酸溶液酸化至pH=4-5,用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至35%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(2.0g,100%纯度,72.3%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.31min,C28H24ClF2N5O5的质量计算值为583.1,m/z实测值为583.9[M+H]+。
化合物26:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基-N-环丙基-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙
基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺
在氮气气氛下在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸26-5(100mg,100%纯度,0.171mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中滴加草酰氯(59mg,0.465mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(5mg,0.068mmol)。在0℃处搅拌1小时后,浓缩反应混合物,得到粗产物峰1。向环丙胺(53mg,0.928mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(60mg,0.464mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物中添加峰1。在0℃处搅拌1小时后,将混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用水(10mL)洗涤三次、用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18(乙腈:水=40%至65%)纯化,得到呈白色固体的期望产物(65mg,100%纯度,60.9%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.59min,C31H29ClF2N6O4的质量计算值为622.2,m/z实测值为622.9[M+H]+。
化合物26A和26B:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-N-环丙基-9-((R*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯 基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡 嗪-7-甲酰胺(26A)和
(3R,7S)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基-N-环丙基-9-((S*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯
基)乙基)-3-甲基-10-氢代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(26B)
将(3R,7S)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-N-环丙基-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺26的外消旋混合物(65mg,100%纯度,0.104mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IE 5μm 20mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,30mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题化合物26A(6.4mg,99.6%纯度,9.8%收率,100%立体异构纯)和呈白色固体的26B(13.1mg,99.5%纯度,20.1%收率,100%立体异构纯)。
化合物26A:
LC-MS(ESI):RT=9.516min,C31H29ClF2N6O4的质量计算值为622.2,m/z实测值为623.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=9.561min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(s,1H),7.60(s,2H),7.31(d,J=8.4Hz,2H),7.10(d,J=8.4Hz,2H),6.51(t,J=73.6Hz,1H),6.18-5.91(m,2H),5.47(br s,1H),4.82-4.52(m,3H),3.86(s,2H),3.10(br s,1H),2.74-2.70(m,1H),2.54(s,1H),1.59-1.58(m,3H),1.30-1.29(m,3H),0.74-0.72(m,2H),0.36-0.26(m,2H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-80.87。
化合物26B:
LC-MS(ESI):RT=9.737min,C31H29ClF2N6O4的质量计算值为622.2,m/z实测值为623.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=13.489min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(s,1H),7.61(s,2H),7.36-7.34(m,2H),7.10(d,J=8.4Hz,2H),6.50(t,J=73.6Hz,1H),6.13-6.00(m,2H),5.50(br s,1H),4.79-4.54(m,3H),4.08-4.05(m,1H),3.42-3.56(m,1H),3.07(brs,1H),2.74-2.65(m,2H),1.59-1.58(m,3H),1.30-1.29(m,3H),0.81-0.76(m,2H),0.41-0.37(m,2H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.62。
化合物27A和27B(制备方法A)
化合物27:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,N,3-
三甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺
在氮气气氛下在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸26-5(100mg,100%纯度,0.171mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中滴加草酰氯(59mg,0.465mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(5mg,0.068mmol)。在0℃处搅拌1小时后,浓缩反应混合物,得到粗产物峰1。向1M二甲胺的四氢呋喃溶液(1mL,1mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(60mg,0.464mmol)的二氯甲烷溶液(2mL)的混合物中添加峰1。在0℃处搅拌1小时后,将混合物用10mL水稀释并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用水(10mL)洗涤三次、用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18(乙腈:水=40%至65%)纯化,得到呈白色固体的期望产物(70mg,100%纯度,66.9%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.57min,C30H29CIF2N6O4的质量计算值为610.2,m/z实测值为610.8[M+H]+。
化合物27A和27B:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((R)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,
N,3-三甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(27A)和
(3R,7S)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,
N,3-三甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(27B)
将(3R,7S)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,N,3-三甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺27的外消旋混合物(70mg,100%纯度,0.115mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IA 5μm 20mm*250mm;流动相:CO2∶IPA(0.2%DEA)=60∶40,30g/min;柱温:40℃;波长:254nm,背压:100巴),得到呈白色固体的标题化合物27A(13.8mg,99.7%纯度,19.7%收率,99.4%立体异构纯)和呈白色固体的27B(22.9mg,99.8%纯度,32.6%收率,100%立体异构纯)。
化合物27A:
LC-MS(ESI):RT=9.422min,C30H29ClF2N6O4的质量计算值为610.2,m/z实测值为611.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IA 5μm 4.6mm*250mm;流动相:CO2∶IPA(0.2%DEA)=60∶40,3g/min;温度:40℃;波长:254nm;背压:100巴;RT=6.4min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(s,1H),7.63-7.58(s,2H),7.31(d,J=8.0Hz,2H),7.12(d,J=8.4Hz,2H),6.53(t,J=73.2Hz,1H),5.97(br s,1H),5.77-5.4(m,1H),5.25-5.23(m,1H),4.67-4.63(m,2H),3.91-3.87(m,1H),3.34-3.30(m,1H),3.07(br s,1H),2.73-2.69(m,7H),1.56-1.53(m,3H),1.33-1.32(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.29。
化合物27B:
LC-MS(ESI):RT=9.578min,C30H29ClF2N6O4的质量计算值为610.2,m/z实测值为611.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IA 5μm 4.6mm*250mm;流动相:CO2∶IPA(0.2%DEA)=60∶40,3g/min;温度:40℃;波长:254nm;背压:100巴;RT=4.19min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.73(s,1H),7.63-7.58(s,2H),7.32(m,2H),7.11(d,J=8.4Hz,2H),6.52(t,J=73.6Hz,1H),6.02(br s,1H),5.78-5.38(m,1H),5.12(s,1H),4.80-4.56(m,2H),3.79-3.74(m,1H),3.37-3.32(m,1H),3.11-3.03(m,7H),2.72-2.68(m,1H),1.53-1.51(m,3H),1.30-1.28(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.22。
化合物27B(制备方法B)
中间体27B-1:
5-((3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧
基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′3,4]吡唑并[1,5-
a]吡嗪-2-羰基)-2-氯苯甲腈
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int B(9.7g,100%纯度,14.2mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(100mL)溶液中添加4-氯-3-氰基苯甲酸(3g,16.5mmol)、2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(8.2g,21.6mmol)和三乙胺(6mL,43.0mmol)。在室温处搅拌20分钟后,将混合物用水(500mL)稀释,用0.5M盐酸水溶液酸化至pH为约6,并用乙酸乙酯(500mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(500mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(8g,由LCMS测得为100%纯度,69.5%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.02min,C44H44ClF2N5O4Si的质量计算值为807.3,m/z实测值为807.8[M+H]+。
中间体27B-2:
2-氯-5-((3R,7S)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧其)苯其)乙其)-7-(羟其甲其)-3-甲
基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羰基)苯
甲腈
在0℃处,向5-((3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羰基)-2-氯苯甲腈27B-1(8g,100%纯度,9.90mmol)的四氢呋喃(80mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(14.5mL,14.5mmol)。在0℃处搅拌1小时后,减压浓缩混合物,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到粗化合物。向粗化合物中添加乙腈(20mL),在室温处搅拌20分钟并过滤。通过过滤收集所获得的白色固体,得到呈白色固体的标题化合物(5.5g,由LCMS测得为100%纯度,97.5%收率,100%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=1.57min,C28H26ClF2N5O4的质量计算值为569.2,m/z实测值为569.8[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IA 5μm 4.6*250m,背压:100巴;流动相:CO2∶EtOH=60∶40,3g/min;柱温:40℃;波长∶214nm,RT=3.6min)。
中间体27B-3:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-
甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向2-氯-5-((3R,7S)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-7-(羟甲基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羰基)苯甲腈27B-2(5.5g,100%纯度,9.65mmol)的乙腈(100mL)溶液中添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(3g,19.2mmol)、亚氯酸钠(2.2g,80%纯度,19.5mmol)、饱和磷酸二氢钾水溶液(100mL)和次氯酸钠(12mL,20.2mmol)。在0℃处搅拌过夜后,将混合物用饱和亚硫酸钠溶液(50mL)稀释并用乙酸乙酯(150mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到残余物,向其中添加乙腈(20mL)并于室温搅拌20分钟并过滤。通过过滤收集所获得的白色固体,得到标题化合物(5.6g,由LCMS测得为100%纯度,99.4%收率,100%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=1.25min,C28H24ClF2N5O5的质量计算值为583.1,m/z实测值为584.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IA 5μm 4.6*250m,背压:100巴;流动相:CO2∶EtOH(0.2%TFA)=60∶40,3g/min;柱温:40℃;波长:254nm,RT=2.65min)。
化合物27B:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,
N,3-三甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺
在氮气气氛下在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸27B-3(200mg,100%纯度,0.342mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中添加草酰氯(66mg,0.520mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(5mg,0.068mmol)。在室温处搅拌1小时后,浓缩混合物,得到黄色固体A。在0℃处,向2M二甲胺的四氢呋喃溶液(0.4mL,0.8mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中滴加A的二氯甲烷(4mL)溶液和三乙胺(120mg,1.19mmol)。在室温处搅拌2小时后,将溶液用二氯甲烷(20mL)稀释,用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤。将滤液浓缩,通过C18柱(乙腈:水=50%至70%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(200mg,由LCMS测得为100%纯度,96%收率,97.3%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=1.58min,C30H29ClF2N6O4的质量计算值为610.2,m/z实测值为611.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak OJ-H 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;Rt=8.574min)。
将粗产物27B(300mg,97%纯度,0.476mmol,来自2批)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak OJ-H 5μm 30mm*250mm;流动相:己烷∶EtOH=40∶60,25mL/min;柱温:30℃;波长:254nm),得到粗产物,将其通过C18柱(乙腈:水(+0.2%碳酸氢铵)=50%至70%)纯化,得到两个级分的标题化合物27B:呈白色固体的级分1(100mg,由LCMS测得为99.7%纯度,34%收率,99.8%立体异构纯)和呈白色固体的级分2(130mg,由LCMS测得为99.2%纯度,44%收率,99.8%立体异构纯)。
级分1:LC-MS(ESI):RT=8.532min,C30H29ClF2N6O4的质量计算值为610.2,m/z实测值为611.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak OJ-H 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;Rt=8.672min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.73(s,1H),7.62-7.59(m,2H),7.32(d,J=7.2Hz,2H),7.12(d,J=7.2Hz,2H),6.52(t,J=73.6Hz,1H),5.99(br s,1H),5.82-5.33(m,1H),5.11(s,1H),4.85-4.18(m,2H),3.76(q,J=6.8Hz,1H),3.35(d,J=11.2Hz,1H),3.11-3.03(m,7H),2.70(d,J=15.6Hz,1H),1.52(d,J=7.2Hz,3H),1.29(d,J=5.6Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.21。
级分2:LC-MS(ESI):RT=8.543min,C30H29ClF2N6O4的质量计算值为610.2,m/z实测值为611.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak OJ-H 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=40∶60,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;Rt=8.697min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.73(s,1H),7.63-7.58(m,2H),7.32(d,J=7.2Hz,2H),7.12(d,J=8.4Hz,2H),6.52(t,J=73.2Hz,1H),5.99(br s,1H),5.79-5.38(m,1H),5.11(s,1H),4.79-4.25(m,2H),3.76(q,J=6.8Hz,1H),3.35(d,J=10.8Hz,1H),3.11-3.03(m,7H),2.70(d,J=16.4Hz,1H),1.52(d,J=7.2Hz,3H),1.29(d,J=5.6Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.21。
化合物28
中间体28-1:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲 酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并 [1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在30℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3-氯-4-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮14-7(200mg,0.294mmol,100%纯度)和1-(溴甲基)-4-(二氟甲氧基)苯(130mg,0.548mmol)在2-甲基四氢呋喃(5mL)中的溶液中缓慢添加50重量%氢氧化钠水溶液(5mL)。在30℃处搅拌2小时后,将混合物用水(50mL)稀释并在室温处减压浓缩以去除挥发物。将剩余的水层用2M盐酸盐水溶液(20mL)酸化并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次,用盐水(60mL)萃取,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的粗产物(250mg,83%纯度,84%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.27min,C43H42ClF5N4O4Si的质量计算值为836.3,m/z实测值为837.2[M+H]+。
中间体28-2:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-7-(羟甲
基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3-氯-4-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮28-1(370mg,83%纯度,0.367mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵(0.5mL,O.5mmol)的四氢呋喃溶液。在0℃处搅拌4小时后,将混合物过滤并减压浓缩,得到粗产物。将粗产物通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(180mg,95%纯度,78%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.63min,C27H24ClF5N4O4的质量计算值为598.1,m/z实测值为599.1[M+H]+。
中间体28-3:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-3-甲基- 10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3-氯-4-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮28-2(180mg,95%纯度,0.286mmol)的乙腈(4mL)溶液中添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(90mg,0.576mmol)、次氯酸钠水溶液(0.35mL,0.588mmol)、亚氯酸钠(65mg,0.575mmol)、饱和磷酸二氢钠水溶液(4mL)。在0℃处搅拌1小时后,将混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到粗产物。在40℃处,将粗产物溶解于乙腈(2mL)中。在40℃处搅拌1小时后,将反应混合物冷却至室温并过滤。通过过滤收集白色固体,得到标题化合物(150mg,100%纯度,86%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.32min,C27H22ClF5N4O5的质量计算值为612.1,m/z实测值为613.0[M+H]+。
化合物28:
(3R.7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-N.3-二甲
基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸28-3(150mg,100%纯度,0.245mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中添加甲胺盐酸盐(50mg,0.741mmol)、1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(70mg,0.518mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(100mg,0.522mmol)和三乙胺(0.2mL,1.38mmol)。在0℃处搅拌2小时后,向混合物中添加乙酸乙酯(20mL),用水(20mL)洗涤两次,然后用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到粗产物。将粗产物通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(70mg,98.4%纯度,45%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.63min,C28H25ClF5N5O4的质量计算值为625.2,m/z实测值为626.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.78(s,1H),7.60-7.52(m,2H),7.31(d,J=7.6Hz,2H),7.09(d,J=8.0Hz,2H),6.49(t,J=73.6Hz,1H),6.25-5.38(m,2H),5.03-4.42(m,5H),4.19-4.15(m,1H),3.87(dd,J=12.0和5.2Hz,1H),3.19-2.95(m,1H),2.78-2.71(m,4H),1.31(d,J=6.8Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-62.84,-80.98。
化合物29A和29B
中间体29-2:
5-(4-溴苯基)-1-甲基-1H-四唑
在25℃处,向4-溴-N-甲基苯甲酰胺29-1(2.0g,9.34mmol)的4-甲基吡啶(17mL)溶液中添加二苯基叠氮基磷酸酯水溶液(10mL,46.4mmol)。在149℃处搅拌21小时后,将反应混合物冷却至室温。将溶液倾注到2M盐酸盐水溶液(40mL)中并用乙酸乙酯(40mL)萃取两次。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)和盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到粗化合物,将其通过C18柱(乙腈:水=30%至55%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(1.23g,由1H NMR测得为90%纯度,49.6%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.42min,C8H7BrN4的质量计算值为238.0,m/z实测值为239.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.73(dd,J=6.4和1.6Hz,2H),7.64(dd,J=4.4和2.0Hz,2H),4.18(s,3H)。
中间体29-3:
5-(4-(1-乙氧基乙烯基)苯基)-1-甲基-1H-四唑
向5-(4-溴苯基)-1-甲基-1H-四唑29-2(1.23g,90%纯度,4.63mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(2mL,5.92mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的脱气溶液中添加四(三苯基膦)钯(850mg,0.74mmol)。在80℃处搅拌过夜后,将反应混合物冷却至室温并用氟化钾水溶液(80mL)处理。剧烈搅拌1小时后,用硅藻土过滤混合物。将滤液用乙酸乙酯(50mL)稀释,用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)、盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的粗产物(1.1g,67.5%纯度,69.6%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.084min,C12H14N4O的质量计算值为230.0,m/z实测值为231.2[M+H]+。
中间体29-4:
1-(4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯基)乙-1-酮
将5-(4-(1-乙氧基乙烯基)苯基)-1-甲基-1H-四唑29-3(1.1g,67.5%纯度,3.23mmol)在4M盐酸水溶液(10mL,40mmol)中的混合物在室温处搅拌2小时。然后将其用2M氢氧化钠水溶液调节至pH为7,用二氯甲烷(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到粗产物,将其通过C18柱(乙腈:水=5%至90%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(386mg,由1H NMR测得为90%纯度,53.3%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.12min,C10H10N4O的质量计算值为202.2,m/z实测值为203.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.15(d,J=8.4Hz,2H),7.89(d,J=8.8Hz,2H),4.22(s,3H),2.69(s,3H)。
中间体29-5:
1-(4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯基)乙-1-醇
在0℃处,向1-(4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯基)乙-1-酮29-4(286mg,90%纯度,1.27mmol)在四氢呋喃(1.5mL)和甲醇(0.5mL)中的溶液中添加硼氢化钠(100mg,2.64mmol)。在0℃处搅拌1小时后,将混合物用水(20mL)淬灭。分离有机相,并将水相用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(300mg,由1H NMR测得为80%纯度,92.3%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.21min,C10H12N4O的质量计算值为204.2,m/z实测值为205.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.64(d,J=8.4Hz,2H),7.51(d,J=8.0Hz,2H),4.94(q,J=8.0Hz,1H),4.10(s,3H),1.47(d,J=6.0Hz,3H)。
中间体29-6:
5-(4-(1-溴乙基)苯基)-1-甲基-1H-四唑
在0℃处,向1-(4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯基)乙-1-醇29-5(300mg,80%纯度,1.18mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中添加三溴膦(260mg,0.96mmol)。在0℃处搅拌1小时后,通过添加水淬灭混合物。将有机相用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=3∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(138mg,由1H NMR测得为85%纯度,37.4%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.51min,C10H11BrN4的质量计算值为266.0,m/z实测值为267.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75-7.73(m,2H),7.66-7.64(m,2H),5.28-5.22(m,1H),4.20(d,J=3.6Hz,3H),2.11-2.08(m,3H)。
中间体29-7:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(4-(1-甲基-1H-四
唑-5-基)苯基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-
酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮IntA(250mg,93%纯度,0.36mmol)和5-(4-(1-溴乙基)苯基)-1-甲基-1H-四唑29-6(138mg,85%纯度,0.44mmol)在2-甲基四氢呋喃(4mL)中的溶液中缓慢添加苄基三乙基铵(15mg,0.07mmol)和50重量%氢氧化钠水溶液(4mL)。在室温处搅拌过夜后,将反应混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤两次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色固体的标题化合物(200mg,由LCMS测得为88.1%纯度,82.4%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.49min,C28H28Cl2N8O3的质量计算值为594.1,m/z实测值为595.2[M+H]+。
中间体29-8:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯
基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲
酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基9-(1-(4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮29-7(200mg,88%纯度,0.30mmol)的乙腈(2mL)溶液中添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(95mg,0.61mmol)、亚氯酸钠(68mg,80%纯度,0.60mmol)、饱和磷酸二氢钾水溶液(2mL)和次氯酸钠水溶液(0.35mL,10%纯度,0.59mmol)。在0℃处搅拌2小时后,将混合物用饱和亚硫酸钠溶液(20mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到呈黄色固体的标题化合物(200mg,由LCMS测得为85.6%纯度,95.0%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.27min,C28H26Cl2N8O4的质量计算值为608.2,m/z实测值为609.1[M+H]+。
化合物29:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-(1-(4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)
苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸29-8(200mg,85.6%纯度,0.28mmol)、甲胺盐酸盐(45mg,0.67mmol)、1-乙基-(3-(3-二甲基氨基)丙基)-碳二亚胺盐酸盐(115mg,0.60mmol)和苯并三唑-1-醇(95mg,0.70mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中添加三乙胺(0.25mL,1.78mmol)。在氮气气氛下于0℃搅拌2小时后,将混合物用0.5M盐酸盐水溶液酸化至pH=6,并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用水(30mL)洗涤三次、用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水=55%至75%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(120mg,由1H NMR测得为90%纯度,61.7%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.49min,C29H29Cl2N9O3的质量计算值为621.2,m/z实测值为622.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.77-7.71(m,2H),7.58-7.50(m,4H),7.28-7.26(m,1H),6.12-5.93(m,2H),5.29-4.87(m,2H),4.46-4.12(m,5H),3.96-3.86(m,1H),3.48-3.42(m,1H),3.13-2.97(m,1H),2.82-2.68(m,4H),1.65(d,J=7.2Hz,3H),1.31(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物29A和29B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-((R*)-1-(4-(1-甲基-1H-四唑-
5-基)苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(29A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-((S*)-1-(4-(1-甲基-1H-四唑-
5-基)苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(29B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-(1-(4-(1-甲基-1H-四唑-5-基)苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺29的外消旋混合物(120mg,90%纯度,0.17mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IB N-5 5μm 20mm*250mm;流动相:100%ACN,25mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题化合物29A(30mg,由LCMS测得为99.8%纯度,27.7%收率,100%立体异构纯)和29B(40mg,由LCMS测得为99.8%纯度,37.0%收率,99.3%立体异构纯)。
化合物29A:
LC-MS(ESI):RT=3.449min,C29H29Cl2N9O3的质量计算值为621.2,m/z实测值为622.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IB N-5 5μm 4.6mm*250mm;流动相:100%ACN,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm;Rt=5.644min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.72(d,J=8.4Hz,2H),7.54-7.50(m,4H),7.28-7.26(m,1H),5.98-5.48(m,3H),4.88-4.42(m,3H),4.19(s,3H),3.92(d,J=4.0Hz,2H),3.17-2.97(m,1H),2.74-2.67(m,4H),1.66(d,J=6.8Hz,3H),1.31(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物29B:
LC-MS(ESI):RT=3.641min,C29H29Cl2N9O3的质量计算值为621.2,m/z实测值为622.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IB N-5 5μm 4.6mm*250mm;流动相:100%ACN,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm;Rt=9.617min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75(d,J=8.0Hz,2H),7.59-7.52(m,4H),7.28-7.26(m,1H),6.10-5.45(m,3H),4.86-4.38(m,3H),4.18-4.13(m,4H),3.46(dd,J=13.2,4.8Hz,1H),3.12-2.98(m,1H),2.81(d,J=4.8Hz,3H),2.74-2.70(m,1H),1.65(d,J=6.8Hz,3H),1.31(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物30A和30B
中间体30-2:
1-(4-(5-甲基-2H-四唑-2-基)苯基)乙-1-酮
将1-(4-氟苯基)乙-1-酮30-1(3g,21.7mmol)、5-甲基-2H-四唑(2.4g,28.5mmol)和碳酸铯(14g,43.0mmol)在1-甲基吡咯烷-2-酮(30mL)中的溶液于130℃搅拌48小时。然后将混合物用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用水(50mL)洗涤三次,用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将粗产物通过C18柱(乙腈:水=30%至80%)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(400mg,由1H NMR测得为90%纯度,8%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.14-8.21(m,4H),2.66(s,3H),2.62(s,3H)。
中间体30-3:
(4-(1-溴乙基)苯基)-5-甲基-2H-四唑
在0℃处,向1-(4-(5-甲基-2H-四唑-2-基)苯基)乙-1-酮30-2(400mg,90%纯度,1.78mmol)在甲醇(2mL)和四氢呋喃(4mL)中的溶液中添加硼氢化钠(27mg,0.714mmol)。在0℃处搅拌0.5小时后,将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(2mL)淬灭,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其用四氢呋喃(6mL)稀释,然后将三苯基膦(607mg,2.31mmol)和四溴化碳(666mg,2.01mmol)添加到该溶液中。在氮气气氛下于0℃搅拌2小时后,将反应混合物浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯=6:1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(400mg,由1H NMR测得为90%纯度,76%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.06(d,J=8.8Hz,2H),7.79(d,J=8.8Hz,2H),5.62(q,J=6.8Hz,1H),2.59(s,3H),2.03(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体30-4:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(4-(5-甲基-2H-四
唑-2-基)苯基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-
酮
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(750mg,100%纯度,1.16mmol)和2-(4-(1-溴乙基)苯基)-5-甲基-2H-四唑30-3(400mg,90%纯度,1.35mmol)在2-甲基四氢呋喃(5mL)中的溶液中添加50重量%氢氧化钠水溶液(5mL)和苄基三乙基氯化铵(53mg,0.232mmol)。在20℃处搅拌2小时后,将混合物添加到水(50mL)中并用二氯甲烷(50mL)萃取两次。将合并的有机层用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其稀释于四氢呋喃(20mL)中。将1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(2.5mL,2.5mmol)添加到该混合物中。在20℃处搅拌3小时后。将反应混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用水(30mL)洗涤三次,用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水=5%至95%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(450mg,由LCMS测得为100%纯度,65%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.60min,C28H28Cl2N8O3的质量计算值为594.2,m/z实测值为595.1[M+H]+。
化合物30:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-(1-(4-(5-甲基-2H-四唑-2-基)
苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基9-(1-(4-(5-甲基-2H-四唑-2-基)苯基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮30-4(300mg,100%纯度,0.504mmol)在饱和磷酸二氢钾水溶液(4.5mL)和乙腈(4.5mL)中的溶液中添加亚氯酸钠(114mg,80%纯度,1.01mmol)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(158mg,1.01mmol)和10%次氯酸钠水溶液(0.6mL,1.01mmol)。在0℃处搅拌4小时后,将反应混合物用0.1M盐酸盐水溶液(40mL)稀释并用乙酸乙酯(40mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其用(石油醚:乙酸乙酯,3mL:1mL)洗涤并过滤,得到残余物,将其用N,N-二甲基甲酰胺(3mL)稀释。然后在0℃处将甲胺盐酸盐(61mg,0.903mmol)、苯并三唑-1-醇(97mg,0.718mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(139mg,0.725mmol)和三乙胺(257mg,2.54mmol)添加到该溶液中。在0℃处搅拌2小时后,将混合物用0.05M盐酸盐水溶液酸化至pH=6,并用乙酸乙酯(60mL)萃取两次。将合并的有机层用水(60mL)洗涤三次,用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水=55%至60%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(150mg,100%纯度,67%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.60min,C29H29Cl2N9O3的质量计算值为621.2,m/z实测值为622.1[M+H]+。
化合物30A和30B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-((R*)-1-(4-(5-甲基-2H-四唑- 2-基)苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(30A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-((S*)-1-(4-(5-甲基-2H-四唑- 2-基)苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(30B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-(1-(4-(5-甲基-2H-四唑-2-基)苯基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺30的外消旋混合物(150mg,100%纯度,0.241mmol)通过手性HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IE 5μm 20mm*250mm;流动相:CAN∶IPA=70∶30,15mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题化合物30A(31.1mg,98.3%纯度,20%收率,99.98%立体异构纯)和呈白色固体的化合物30B(52.0mg,99.2%纯度,34%收率,99.9%立体异构纯)。
化合物30A:
LC-MS(ESI):RT=3.700min,C29H29Cl2N9O3的质量计算值为621.2,m/z实测值为622.1[M+H]+。手性分析(柱:Superchiral IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=70∶30,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;Rt=8.617min),1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08(d,J=8.8Hz,2H),7.54-7.46(m,4H),7.28-7.26(m,1H),6.01-5.47(m,3H),4.88-4.47(m,3H),3.97-3.88(m,2H),3.13-2.97(m,1H),2.74-2.68(m,4H),2.64(s,3H),1.65(d,J=7.2Hz,3H),1.31(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物30B:
LC-MS(ESI):RT=3.772min,C29H29Cl2N9O3的质量计算值为621.2,m/z实测值为622.1[M+H]+。手性分析(柱:Superchiral IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN:IPA=70:30,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;Rt=10.642min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08(d,J=8.4Hz,2H),7.54-7.52(m,4H),7.28-7.27(m,1H),6.08-5.39(m,3H),4.85-4.38(m,3H),4.14-4.10(m,1H),3.46-3.41(m,1H),3.13-2.98(m,1H),2.80(d,J=4.8Hz,3H),2.74-2.68(m,1H),2.64(s,3H),1.64(d,J=7.2Hz,3H),1.31(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物31A和31B
中间体31-2:
1-(6-甲氢基吡啶-3-基)乙酮
在氮气气氛下在-78℃处,向5-溴-2-甲氧基吡啶31-1(8g,42.5mmol)的四氢呋喃(80mL)溶液中滴加2.5M正丁基锂的己烷溶液(20mL,50mmol)。在-78℃处搅拌0.5小时后,向混合物中添加N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(9mL,84.7mmol),并将混合物于-78℃保持1小时。在室温处搅拌2小时后,将混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭,用乙酸乙酯(80mL)萃取三次。将有机层合并,用盐水(80mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=40∶1至10∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(4.7g,由LCMS测得为100%纯度,69%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.30min,C8H9NO2的质量计算值为151.1,m/z实测值为152.2[M+H]+。
中间体31-3:
1-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙醇
向1-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙-1-酮31-2(2g,95%纯度,12.6mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中添加硼氢化钠(550mg,14.5mmol)和甲醇(5mL)。在0℃处搅拌1小时后,将混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭,用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将有机层合并,用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈无色油状物的标题化合物(1.9g,由NMR测得为90%纯度,89%收率)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.09(d,J=2.4Hz,1H),7.67(dd,J=8.4和2.4Hz,1H),6.76(d,J=8.8Hz,1H),5.16(d,J=4.4Hz,1H),4.74-4.68(m,1H),3.82(s,3H),1.32(d,J=6.4Hz,3H)。
中间体31-4:
5-(1-氯乙基)-2-甲氧基吡啶
在0℃处,向1-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙醇31-3(1.9g,90%纯度,11.2mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中添加亚硫酰氯(0.9mL,12.4mmol)。在40℃处搅拌2小时后,去除溶剂。将混合物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化至pH 7-8,用二氯甲烷(20mL)萃取两次。将有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤并浓缩,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.4g,由1HNMR测得为95%纯度,69%收率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.15(d,J=2.1Hz,1H),7.68(dd,J=8.7,2.7Hz,1H),6.76(d,J=8.7Hz,1H),5.09(q,J=6.6Hz,1H),3.94(s,3H),1.84(d,J=6.6Hz,3H)。
中间体31-5:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-9-(1-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙 基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(1.7g,83%纯度,2.18mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液中添加60重量%氢化钠的矿物油溶液(170mg,4.25mmol)。在0℃处搅拌30分钟后,在0℃处向反应混合物中添加5-(1-氯乙基)-2-甲氧基吡啶31-4(591mg,95%纯度,3.27mmol)。在室温(25℃)处搅拌过夜后,将反应混合物用盐水(40mL)淬灭,用乙酸乙酯(20mL)萃取三次,经Na2SO4(s)干燥,过滤并浓缩,得到粗产物。在0℃处,向粗产物的四氢呋喃(3mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1.1mL,1.1mmol)。在室温处搅拌1小时后,将混合物浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶丙酮=4∶1至2∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(700mg,由LCMS测得为100%纯度,59%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.54min,C26H27Cl2N5O4的质量计算值为543.1,m/z实测值为544.3[M+H]+。
中间体31-6:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙基)-3-甲基-10-
氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-9-(1-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮31-5(700mg,100%纯度,1.29mmol)的乙腈(7mL)溶液中滴加饱和磷酸二氢钾水溶液(7mL)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(448mg,2.87mmol)、亚氯酸钠(340mg,3.01mmol)和5.5%次氯酸钠水溶液(1.8mL,3.02mmol)。使反应缓慢回到室温。在室温处搅拌4小时后,将反应混合物用饱和硫代硫酸钠(14mL)淬灭,用1M盐酸盐水溶液酸化至pH 4-5,用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过在室温处用石油醚∶乙酸乙酯=5∶1(10mL)研磨来纯化。搅拌30分钟后,过滤混合物,得到呈白色固体的标题化合物(700mg,由LCMS测得为78%纯度,76%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.163min,C26H25Cl2N5O5的质量计算值为557.1,m/z实测值为558.0[M+H]+。
化合物31:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙基)-N,3-二甲 基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八乙氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸31-6(800mg,78%纯度,1.12mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(9mL)溶液中添加1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(472mg,2.46mmol)、1-羟基苯并三唑(312mg,2.31mmol)、甲胺盐酸盐(192mg,2.84mmol)并滴加三乙胺(1.1mL,7.91mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(9mL)溶液。在0℃处搅拌10分钟后,向混合物中添加水(50mL)并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至65%)纯化,得到呈浅黄色固体的标题化合物(600mg,由LCMS测得为96%纯度,90%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.50min,C27H28Cl2N6O4的质量计算值为570.2,m/z实测值为571.3[M+H]+。
化合物31A和31B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((R*)-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙基)-N,3-
二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺(31A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S*)-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙基)-N,3-
二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺(31B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺31的外消旋物(600mg,96%纯度,1.01mmol)通过手性HPLC进行纯化(分离条件:柱:ChiralpakIB N-5 5μm 30mm*250mm;流动相:ACN-100,25mL/min;温度:30℃;波长:214nm),得到呈白色固体的标题化合物31A(233mg,由QC测得为98.2%纯度,40%收率,100%立体异构纯)和呈白色固体的31B(355mg,由QC测得为99.7%纯度,61%收率,99.9%立体异构纯)。
化合物31A:
LC-MS(ESI):RT=8.526min,C27H28Cl2N6O4的质量计算值为570.2,m/z实测值为571.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IB N-5 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN-100,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;Rt=7.707min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.12-7.99(m,1H),7.81-7.74(m,3H),7.56-7.45(m,2H),6.80-6.78(m,1H),5.82-4.96(m,3H),4.68-3.91(m,3H),3.84(s,3H),3.43-3.32(m,1H),2.99-2.82(m,1H),2.67-2.50(m,1H),2.37(d,J=4.0Hz,3H),1.50-1.17(m,6H)。
化合物31B:
LC-MS(ESI):RT=8.819min,C27H28Cl2N6O4的质量计算值为570.2,m/z实测值为571.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IB N-5 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN-100,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;Rt=10.316min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21-8.02(m,2H),7.76-7.44(m,4H),6.87-6.73(m,1H),5.85-4.94(m,3H),4.64-4.07(m,2H),3.84(s,3H),3.76-3.47(m,2H),2.96-2.84(m,1H),2.63(d,J=4.4Hz,3H),2.58-2.51(m,1H),1.47-1.12(m,6H)。
化合物32A和32B
/>
中间体32-2:
6-环丙基烟醛
向6-溴烟醛32-1(2.0g,10.8mmol)的1,4-二氧杂环己烷(20mL)溶液中添加环丙基硼酸(1.5g,17.5mmol)、碳酸铯(10.5g,32.2mmol)和(1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(II)(200mg)。将混合物在氮气气氛下于90℃搅拌过夜。然后将混合物用水(200mL)稀释,用乙酸乙酯(200mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤并真空浓缩,通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(500mg,由1H NMR测得为40%纯度,13%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.02(s,1H),8.86(d,J=1.6Hz,1H),8.04-8.00(m,1H),7.29(d,J=8.4Hz,1H),2.16-2.10(m,1H),1.20-1.10(m,4H)。
中间体32-3:
1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙醇
在氮气气氛下在0℃处,向6-环丙基烟醛32-2(500mg,40%纯度,1.36mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中添加1M甲基溴化镁的四氢呋喃溶液(3.0mL,3.0mmol)。将反应混合物在0℃处搅拌1小时。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(15mL)淬灭,并将混合物用二氯甲烷(20mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤,浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1至2∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(150mg,由1H NMR测得为90%纯度,61%收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.33(d,J=2.0Hz,1H),7.59-7.56(m,1H),7.21(d,J=8.0Hz,1H),5.17(d,J=4.4Hz,1H),4.74-4.68(m,1H),2.08-2.02(m,1H),1.32(d,J=6.4Hz,3H),0.93-0.85(m,4H)。
中间体32-4:
5-(1-溴乙基)-2-环丙基吡啶
在0℃处,向1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙醇32-3(5.30g,90%纯度,29.2mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液中添加三苯基膦(15.5g,59.1mmol)和全溴甲烷(14.5g,43.7mmol)。在室温处搅拌3小时后,将反应混合物浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=20∶1至8∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.80g,由1H NMR测得为70%纯度,19%收率)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.46(d,J=2.4Hz,1H),7.66(dd,J=8.0和3.2Hz,1H),7.13(d,J=8.0Hz,1H),5.21-5.15(m,1H),2.4-2.02(m,3H),1.52(d,J=6.0Hz,1H),1.03-1.00(m,4H)。
中间体32-5:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)
乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,
5-a]吡嗪-10(7H)-酮
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(500mg,90%纯度,0.695mmol)和5-(1-溴乙基)-2-环丙基吡啶32-4(360mg,70%纯度,1.11mmol)在2-甲基四氢呋喃(10mL)中的溶液中添加50重量%氢氧化钠水溶液(2mL)和苄基三乙基氯化铵(110mg,0.483mmol)。在20℃处搅拌4小时后,将混合物添加到水(10mL)中并用二氯甲烷(20mL)萃取两次。将合并的有机层用水(10mL)、盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水=20%至95%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(340mg,由1H NMR测得为90%纯度,56%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.00min和2.13min,C44H47Cl2N5O3Si的质量计算值为791.3,m/z实测值为792.4[M+H]+。
中间体32-6:
(3R,7S)-9-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲
基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在室温处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮32-5(340mg,90%纯度,0.386mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(0.6mL,0.6mmol)。在室温处搅拌1小时后,将反应混合物用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤两次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(DCM∶MeOH=20∶1)纯化,得到呈白色固体的期望化合物(210mg,由1H NMR测得为90%纯度,88%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.57min,C28H29Cl2N5O3的质量计算值为553.2,m/z实测值为554.3[M+H]+。
中间体32-7:
(3R,7S)-9-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10- 氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
向(3R,7S)-9-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮32-6(210mg,90%纯度,0.341mmol)的乙腈(2mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(2mL)、亚氯酸钠(85mg,80%纯度,0.752mmol)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(110mg,0.704mmol)和次氯酰基钠(0.5mL,10%纯度,0.84mmol)。在0℃处搅拌过夜后,向反应混合物中添加水(10mL)并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤,然后经Na2SO4(s)干燥,浓缩并通过C18柱(乙腈:水(0.1%碳酸氢铵)=5%至95%)纯化,得到呈白色固体的标题产物(170mg,由1H NMR测得为90%纯度,79%收率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.41-8.31(m,1H),7.78-7.58(m,3H),7.43-7.40(m,1H),7.30-7.20(m,1H),5.97-5.36(m,2H),4.70-4.36(m,2H),3.95-3.58(m,4H),3.07-2.97(m,1H),2.78-2.63(m,1H),1.69-1.31(m,6H),1.10-0.97(m,4H)。
化合物32:
(3R,7S)-9-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲 基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-9-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸32-7(235mg,90%纯度,0.372mmol)、甲胺盐酸盐(90mg,1.33mmol)、1-羟基苯并三唑(175mg,1.295mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(175mg,0.913mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中滴加三乙胺(0.3mL,2.15mmol)。在氮气气氛下于0℃搅拌2小时后,将混合物用0.5M盐酸盐水溶液酸化至pH=6,并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用水(10mL)洗涤三次、用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水=5%至95%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(150mg,由1H NMR测得为90%纯度,52%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.43(d,J=25.6Hz,1H),7.54-7.44(m,3H),7.27-7.24(m,1H),7.12(d,J=8.0Hz,1H),5.96-5.28(m,3H),5.12-4.22(m,3H),4.11-4.09(m,1H),3.92-3.80(m,1H),3.42-3.38(m,1H),3.11-3.01(m,1H),2.80-2.68(m,4H),2.04-1.98(m,1H),1.57-1.52(m,2H),1.30-1.29(m,3H),0.99-0.97(m,4H)。
化合物32A和32B:
(3R,7S)-9-((R*)-1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-
二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺(32A)和
(3R,7S)-9-((S*)-1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-
二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰
胺(32B)
将(3R,7S)-9-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺32的外消旋混合物(200mg,90%纯度,0.31mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(柱:Chiralpak IB N-5,5μm 30mm*250mm,流动相:ACN=100%,20mL/min,温度:30℃,波长:214nm),然后通过制备型HPLC进一步纯化(柱:sunfire waters C18(5μm 19mm*150mm),流动相A:水(0.1%碳酸氢铵),流动相B:乙腈,UV:214nm,流速:15mL/min,梯度:35%-85%(%B)),减压浓缩,得到呈白色固体的标题化合物32A(25.2mg,99.5%纯度,14%收率,100%立体异构纯)和呈白色固体的32B(24.9mg,99.5%纯度,14%收率,99.9%立体异构纯)。
化合物32A:
LC-MS(ESI):RT=3.696min,C29H30Cl2N6O3的质量计算值为580.2,m/z实测值为581.3[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IB N-5,5μm 4.6mm*250mm,流动相:ACN=100%,1mL/min,温度:30℃,波长:254nm,RT=8.211min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(s,1H),7.54-7.51(m,2H),7.47(d,J=7.6Hz,1H),7.27-7.25(m,1H),7.12(d,J=8.4Hz,1H),6.14-5.83(m,2H),5.64-5.01(m,1H),4.84(t,J=4.4Hz,1H),4.60-4.33(m,1H),3.90-3.80(m,2H),3.14-2.96(m,1H),2.73-2.68(m,4H),2.07-2.01(m,1H),1.58(s,3H),1.3l(d,J=6.8Hz,3H),1.05-0.97(m,4H)。
化合物32B:
LC-MS(ESI):RT=3.892min,C29H30Cl2N6O3的质量计算值为580.2,m/z实测值为581.3[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IB N-5,5μm 4.6mm*250mm,流动相:ACN=100%,1mL/min,温度:30℃,波长:254nm,RT=10.881min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.43(s,1H),7.54-7.50(m,3H),7.28-7.26(m,1H),7.12(d,J=8.0Hz,1H),6.08-5.87(m,2H),5.68-5.12(m,1H),4.86-4.80(m,1H),4.57-4.35(m,1H),4.12(d,J=14.4Hz,1H),3.43(dd,J=13.6Hz,5.2Hz,1H),3.13-2.96(m,1H),2.80(d,J=5.2Hz,3H),2.73(d,J=16.4Hz,1H),2.06-1.99(m,1H),1.57(s,3H),1.30(d,J=6.8Hz,3H),1.00(d,J=6.8Hz,4H)。
化合物33A和33B
中间体33-2:
6-氟烟酸甲酯
向6-氟烟酸33-1(3g,21.30mmol)和碳酸钾(9g,65.10mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中添加碘甲烷(6g,42.30mmol)。将混合物在20℃处搅拌3小时。将反应混合物倾注到水(100mL)中并用二氯甲烷(100mL)萃取三次。将有机相用盐水(100mL)洗涤三次并真空浓缩,得到呈黄色固体的期望化合物(3.3g,90%收率,由1H NMR测得为90%纯度)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ8.89(s,1H),8.44-8.38(m,1H),7.03-6.99(m,1H),3.96(s,3H)。
中间体33-3:
6-((2,2,2-三氟乙基)氨基)烟酸甲酯
向6-氟烟酸甲酯33-2(3.3g,19.10mmol,90%纯度)和2,2,2-三氟乙胺盐酸盐(14g,103.00mmol)在二甲基亚砜(100mL)中的溶液中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(40mL,242mmol)。将混合物在120℃处搅拌12小时。将反应混合物倾注到水(150mL)中并用二氯甲烷(100mL)萃取三次。将有机相用盐水(100mL)洗涤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1)纯化,得到呈黄色固体的期望化合物(3.4g,75.8%收率,由LCMS测得为100%纯度)。LC-MS(ESI):RT=1.47min,C9H9F3N2O2的质量计算值为234.2,m/z实测值为235.1[M+H]+。
中间体33-4:
6-((叔丁氧基羰基)(2,2,2-三氟乙基)氨基)烟酸甲酯
向6-((2,2,2-三氟乙基)氨基)烟酸甲酯33-3(3.4g,14.50mmol,100%纯度)和二碳酸二叔丁酯(4g,18.30mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液中添加三乙胺(3g,29.60mmol)和4-二甲基氨基吡啶(180mg,1.47mmol)。将混合物在20℃处搅拌2小时。将反应混合物倾注到水(100mL)中并用二氯甲烷(100mL)萃取三次。将有机相用盐水(100mL)洗涤并真空浓缩,得到呈黄色固体的期望化合物(4.7g,96.8%收率,由LCMS测得为100%纯度)。LC-MS(ESI):RT=1.87min,C14H17F3N2O4的质量计算值为334.3,m/z实测值为335.2[M+H]+。
中间体33-5:
6-((叔丁氧基羰基)(2,2,2-三氟乙基)氨基)烟酸
向6-((叔丁氧基羰基)(2,2,2-三氟乙基)氨基)烟酸甲酯33-4(4.7g,14.10mmol,100%纯度)在四氢呋喃(50mL)和水(20mL)中的溶液中添加氢氧化锂水合物(1.2g,28.60mmol)。将混合物于室温搅拌2小时。将反应混合物用1M氯化氢酸化至pH=4,并用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将有机相用盐水(100mL)洗涤并真空浓缩,得到呈黄色固体的期望产物(4.1g,91%收率,由LCMS测得为100%纯度)。LC-MS(ESI):RT=1.24min,C13H15F3N2o4的质量计算值为320.3,m/z实测值为319.0[M-H]-。
中间体33-6:
(5-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁酯
在室温处,向6-((叔丁氧基羰基)(2,2,2-三氟乙基)氨基)烟酸33-5(2.0g,6.25mmol,100%纯度)、N,O-二甲基羟胺盐酸盐(1.8g,18.50mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(2.4g,12.50mmol)和1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(1.7g,12.60mmol)在二氯甲烷(40mL)中的混合物中添加三乙胺(3.8g,37.60mmol)。将混合物于室温搅拌12小时。向反应混合物中添加水(100mL)并用二氯甲烷(100mL)萃取三次。将有机相用盐水(100mL)洗涤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=7∶1)纯化,得到呈黄色油状物的期望化合物(1.9g,83.7%收率,由LCMS测得为100%纯度)。LC-MS(ESI):RT=1.69min,C15H20F3N3O4的质量计算值为363.3,m/z实测值为364.1[M+H]+。
中间体33-7:
(5-乙酰基吡啶-2-基)(2,2,2-三氟乙基)氧基甲酸叔丁酯
在0℃处,向(5-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)吡啶-2-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁酯33-6(1.9g,5.23mmol,100%纯度)的四氢呋喃(20mL)溶液中添加1M甲基溴化镁的四氢呋喃溶液(10mL,10.00mmol)。将混合物在0℃处搅拌2小时。向反应混合物中添加氯化铵水溶液(60mL)并用二氯甲烷(60mL)萃取三次。将有机相用盐水(60mL)洗涤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1)纯化,得到呈黄色固体的期望化合物(1.4g,84%收率,由LCMS测得为100%纯度)。LC-MS(ESI):RT=1.76min,C14H17F3N2O3的质量计算值为318.3,m/z实测值为319.1[M+H]+。
中间体33-8:
(5-(1-羟乙基)吡啶-2-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁酯
向(5-乙酰基吡啶-2-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁酯33-7(1.4g,100%纯度,4.40mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中添加四氢硼酸钠(200mg,5.29mmol)。将混合物于室温搅拌2小时。向混合物中添加水(80mL)并用乙酸乙酯(80mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(80mL)洗涤并浓缩,得到呈黄色油状物的期望化合物(1.4g,94%收率,由1H NMR测得为95%纯度)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.38-8.35(m,1H),7.74-7.71(m,1H),7.62-7.59(m,1H),5.00-4.92(m,1H),4.76(q,J=8.7Hz,2H),1.54(s,3H),1.52(s,9H)。
中间体33-9:
(5-(1-溴乙基)吡啶-2-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃处,向(5-(1-羟乙基)吡啶-2-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁酯33-8(1.4g,95%纯度,4.15mmol)和全溴甲烷(2.1g,6.33mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中添加三苯基膦(1.64g,6.25mmol)。将混合物于室温搅拌12小时。将混合物通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.3g,由1H NMR测得为90%纯度,73.5%收率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.38-8.37(m,1H),7.80-7.76(m,1H),7.70-7.67(m,1H),5.19(q,J=6.9Hz,1H),4.79(q,J=8.7Hz,2H),2.05(d,J=6.9Hz,3H),1.53(s,9H)。
中间体33-10:
(5-(1-((3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氢基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰
基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-
基)乙基)吡啶-2-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁酯
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(1.5g,100%纯度,2.32mmol)和(5-(1-溴乙基)吡啶-2-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁酯33-9(1.3g,90%纯度,3.05mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液中添加碳酸铯(2.3g,7.06mmol)。将混合物在30℃处搅拌5小时。向混合物中添加水(80mL)并用乙酸乙酯(80mL)萃取三次。将合并的有机层用水(80mL)和盐水(80mL)洗涤并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚∶丙酮=10∶1)纯化,得到呈白色固体的期望化合物(2g,81.8%收率,由1H NMR测得为90%纯度)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.46-8.31(m,1H),7.88-7.35(m,15H),5.96-5.73(m,1H),5.50-5.18(m,1H),4.85-4.46(m,4H),4.24-3.64(m,4H),3.57-3.37(m,1H),3.00-2.87(m,1H),2.55-2.51(m,1H),1.66-1.51(m,3H),1.46(s,9H),1.20-1.02(m,3H),0.88-0.80(m,9H)。
中间体33-11:
(5-(1-((3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,
4,7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-基)乙基)吡啶-2-基)(2,2,2-
三氟乙基)氨基甲酸叔丁酯
向(5-(1-((3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-基)乙基)吡啶-2-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁酯33-10(2g,90%纯度,1.90mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中添加四丁基氟化铵(5mL,5.00mmol)。将混合物于室温搅拌2小时。向混合物中添加水(50mL)并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚∶丙酮=5∶1)纯化,得到呈白色固体的期望化合物(1.1g,80%收率,由LCMS测得为98%纯度)。LC-MS(ESI):RT=1.572min,C32H35Cl2F3N6O5的质量计算值为710.2,m/z实测值为712.0[M+H]+。
中间体33-12:
(3R,7S)-9-(1-(6-((叔丁氧基羰基)(2,2,2-三氟乙基)氨基)吡啶-3-基)乙基)-
2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氢代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡
唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向饱和磷酸二氢钾水溶液(6mL)、亚氯酸钠(320mg,80%纯度,2.83mmol)的乙腈(10mL)溶液和5.5%次氯酸钠水溶液(6mL)中添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(440mg,2.82mmol)。然后将(5-(1-((3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-基)乙基)吡啶-2-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁酯33-11(1.0g,98%纯度,1.38mmol)添加到该溶液中。在室温处搅拌5小时后,将反应混合物用水(80mL)淬灭并用乙酸乙酯(100mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(80mL)洗涤并浓缩。将残余物通过C18柱(乙腈:水=5%至80%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(930mg,由LCMS测得为94%纯度,87%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.41min,C32H33Cl2F3N6O6的质量计算值为724.2,m/z实测值为725.4[M+H]+。
中间体33-13:
(5-(1-((3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-10-氧
代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-基)乙基)吡啶-2-
基)(2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃处,向(3R,7S)-9-(1-(6-((叔丁氧基羰基)(2,2,2-三氟乙基)氨基)吡啶-3-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸33-12(500mg,0.65mmol,94%纯度)、甲胺盐酸盐(137mg,2.03mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(253mg,1.32mmol)和1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(180mg,1.33mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(12mL)中的混合物中添加三乙胺(400mg,3.95mmol)。将混合物于室温搅拌12小时。向反应混合物中添加水(50mL)并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将有机相用盐水(50mL)洗涤并真空浓缩。将残余物通过C18柱(乙腈:水=5%至80%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(320mg,由LCMS测得为100%纯度,66.8%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.77min,C33H36Cl2F3N7O5的质量计算值为737.2,m/z实测值为738.3[M+H]+。
中间体33
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(6-((2,2,2-三氟
乙基)氨基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氧吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]
吡嗪-7-甲酰胺
向(5-(1-((3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-基)乙基)吡啶-2-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁酯33(320mg,100%纯度,0.43mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中添加2,2,2-三氟乙酸(1.5mL)。将混合物于室温搅拌2小时。将混合物用2M碳酸氢钠水溶液碱化至pH=8,用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤并浓缩,得到呈白色固体的期望产物(260mg,94%收率,由LCMS测得为100%纯度)。LC-MS(ESI):RT=1.56min,C28H28Cl2F3N7O3的质量计算值为637.2,m/z实测值为638.2[M+H]+。
化合物33A和33B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((R*)-1-(6-((2,2,2-
三氟乙基)氨基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,
5-a]吡嗪-7-甲酰胺(33A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S*)-1-(6-((2,2,2- 三氟乙基)氨基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1, 5-a]吡嗪-7-甲酰胺(33B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(6-((2,2,2-三氟乙基)氨基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺33的外消旋物(300mg,100%纯度,0.47mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IC 5μm 30mm*250mm;流动相:ACN:IPA=70:30,25mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题化合物33A(35mg,99.6%纯度,11.6%收率,99.8%立体异构纯)和33B(152mg,99.6%纯度,50.4%收率,99.9%立体异构纯)。
化合物33A:
LC-MS(ESI):RT=3.340min,C28H28Cl2F3N7O3的质量计算值为637.2,m/z实测值为638.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IC 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN:IPA=70:30,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=3.548min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.97-7.87(m,1H),7.82-7.74(m,3H),7.50-7.43(m,1H),7.30-7.14(m,2H),6.62-6.55(m,1H),5.73-5.52(m,1H),5.45-5.17(m,1H),4.98-4.87(m,1H),4.65-4.40(m,1H),4.24-3.87(m,4H),3.43-3.32(m,1H),2.96-2.83(m,1H),2.69-2.52(m,1H),2.40-2.31(m,3H),1.52-1.33(m,3H),1.28-1.10(m,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-70.87。
化合物33B:
LC-MS(ESI):RT=3.355min,C28H28Cl2F3N7O3的质量计算值为637.2,m/z实测值为638.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IC 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN:IPA=70:30,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=7.013min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.06-7.94(m,2H),7.76-7.74(m,2H),7.46-7.31(m,2H),7.22-7.13(m,1H),6.65-6.54(m,1H),5.74-5.54(m,1H),5.46-5.18(m,1H),5.06-4.95(m,1H),4.61-4.43(m,1H),4.24-4.08(m,3H),3.71-3.43(m,2H),2.96-2.84(m,1H),2.69-2.54(m,4H),1.42-1.29(m,3H),1.26-1.10(m,3H)。19FNMR(376MHz,DMSO-d6)δ-70.83。
化合物34A和34B
中间体34-2:
1-(6-溴吡啶-3-基)乙醇
向1-(6-溴吡啶-3-基)乙-1-酮34-1(1.0g,5.00mmol)在四氢呋喃(10mL)和甲醇(1mL)中的溶液中添加四氢硼酸钠(100mg,2.64mmol)。在25℃处搅拌1小时后,将混合物用水淬灭并用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.1g,由LCMS测得为87%纯度,94.7%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.27min,C7H8BrNO的质量计算值为202.1,m/z实测值为203.9[M+H]+。
中间体34-3:
2-溴-5-(1-溴乙基)吡啶
在0℃处,向1-(6-溴吡啶-3-基)乙-1-醇34-2(1.1g,87%纯度,4.74mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中添加全溴甲烷(2.3g,6.94mmol)和三苯基膦(1.8g,6.86mmol)。在室温处搅拌2小时后,将混合物用饱和碳酸氢钠溶液(100mL)淬灭并用二氯乙烷(100mL)萃取两次。将有机层用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯=5:1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.3g,由LCMS测得为85%纯度,88%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.57min,C7H7Br2N的质量计算值为264.9,m/z实测值为265.8[M+H]+。
中间体34-4:
(3R,7S)-9-(1-(6-溴吡啶-3-基)乙基)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲
基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-
a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(1.3g,2.01mmol,100%纯度)和2-溴-5-(1-溴乙基)吡啶34-3(700mg,纯度90%,2.38mmol)在2-甲基四氢呋喃(6mL)中的溶液中缓慢添加50重量%氢氧化钠水溶液(6mL)。在0℃处搅拌2小时后,将混合物用水(60mL)稀释并在室温处减压浓缩以去除挥发物。将剩余的水层用乙酸乙酯(60mL)萃取两次,用盐水(120mL)萃取,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水(+0.02%乙酸铵)=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(1.4g,100%纯度,84%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.00min,C41H42BrCl2N5O3Si的质量计算值为829.2,m/z实测值为830.2[M+H]+。
中间体34-5:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-
甲基-9-(1-(6-(2-氧代吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:
3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在30℃处,将(3R,7S)-9-(1-(6-溴吡啶-3-基)乙基)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮34-4(400mg,100%纯度,0.481mmol)、吡咯烷-2-酮(400mg,4.70mmol)、碳酸铯(300mg,0.921mmol)、N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺(30mg,0.340mmol)和碘化铜(I)(24mg,0.126mmol)混合于1,4-二氧杂环己烷(15mL)和N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中。在80℃处搅拌2小时后,将混合物过滤并浓缩,得到粗产物。将粗产物用水(50mL)稀释,用乙酸乙酯(50mL)萃取两次,用盐水(120mL)萃取,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水(+0.02%乙酸铵)=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(350mg,98%纯度,85%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.79min和1.91min,C45H48Cl2N6O4Si的质量计算值为834.3,m/z实测值为835.5[M+H]+。
中间体34-6:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(6-(2-氧代吡咯烷-
1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10
(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(6-(2-氧代吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮34-5(350mg,98%纯度,0.410mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵(0.6mL,0.6mmol)的四氢呋喃溶液。在0℃处搅拌4小时后,将混合物过滤并减压浓缩,得到粗产物。将粗产物通过C18柱(乙腈:水(+0.02%乙酸铵)=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(220mg,100%纯度,90%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.50min,C29H30Cl2N6O4的质量计算值为596.2,m/z实测值为597.3[M+H]+。
中间体34-7:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(6-(2-氧代吡咯烷-1-
基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(6-(2-氧代吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮34-6(220mg,100%纯度,0.368mmol)的乙腈(5mL)溶液中添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(120mg,0.768mmol)、次氯酸钠水溶液(0.45mL,0.756mmol)、亚氯酸钠(85mg,0.752mmol)、饱和磷酸二氢钠水溶液(5mL)。在25℃处搅拌16小时后,将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到粗产物(200mg,82%纯度,73%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.93min,C29H30Cl2N6O5的质量计算值为610.2,m/z实测值为611.3[M+H]+。
化合物34:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(6-(2-氧代吡咯
烷-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(6-(2-氧代吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸34-7(200mg,0.268mmol,纯度82%)的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶液中添加甲胺盐酸盐(50mg,0.704mmol)、1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(75mg,0.56mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(100mg,0.522mmol)和三乙胺(0.3mL,2.08mmol)。在0℃处搅拌2小时后,向混合物中添加乙酸乙酯(50mL),用水(50mL)洗涤两次,用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液减压浓缩并通过C18柱(乙腈:水(+0.02%乙酸铵)=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(120mg,100%纯度,72%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.48min,C30H31Cl2N7O4的质量计算值为623.2,m/z实测值为624.5[M+H]+。
化合物34A和34B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((R*)-1-(6-(2-氧代
吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-
a]吡嗪-7-甲酰胺(34A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S*)-1-(6-(2-氧代
吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-
a]吡嗪-7-甲酰胺(34B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(6-(2-氧代吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺34的外消旋混合物(120mg,0.192mmol,100%纯度)通过手性HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IE,5μm 30mm*250mm,MeOH∶DCM=70∶30,25ml/min;柱温:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的期望产物化合物34A(40mg,98.6%纯度,33%收率,100%立体异构纯)和化合物34B(40mg,98.8%纯度,33%收率,100%立体异构纯)。
化合物34A:
LC-MS(ESI):RT=2.945min,C30H31Cl2N7O4的质量计算值为623.2,m/z实测值为624.5[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:MeOH∶DCM=70∶30,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=7.513min)。1H NMRδ8.38(d,J=8.8Hz,1H),8.29(s,1H),7.59-7.51(m,3H),7.28-7.26(m,1H),5.91-5.43(m,3H),4.86-4.39(m,3H),4.15-4.05(m,2H),3.90-3.82(m,2H),3.05(br s,1H),2.73-2.64(m,6H),2.17-2.09(m,2H),1.61(d,J=6.8Hz,3H),1.31(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物34B:
LC-MS(ESI):RT=3.065min,C30H31Cl2N7O4的质量计算值为623.2,m/z实测值为624.5[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:MeOH:DCM=70:30,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=11.058min)。1H NMRδ8.39-8.36(m,2H),7.67-7.65(m,1H),7.54-7.52(m,2H),7.28-7.26(m,1H),5.99-5.36(m,3H),4.83-4.35(m,3H),4.14-4.02(m,3H),3.43-3.38(m,1H),3.14-2.96(m,1H),2.80-2.73(m,3H),2.68-2.64(m,3H),2.17-2.10(m,2H),1.60(d,J=6.8Hz,3H),1.30-1.29(m,3H)。
化合物35A和35B
中间体35-2:
1-(6-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)吡啶-3-基)乙酮
将5-乙酰基-2-溴吡啶(5.00g,25.0mmol)、(3,5-二甲基异噁唑-4-基)硼酸35-1(4.00g,28.4mmol)、1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(2.00g,2.45mmol)和碳酸钾(10.0g,72.4mmol)在1,4-二氧杂环己烷(25mL)和水(5mL)中的溶液在氮气气氛下于90℃加热过夜。将所得混合物冷却并浓缩,将残余物通过硅胶色谱柱(乙酸乙酯∶石油醚=1∶5)纯化,获得呈黄色固体的标题化合物(4.00g,由1H NMR测得为90%纯度,67%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.37min,C12H12N2O2的质量计算值为216.1,m/z实测值为217.1[M+H]+。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.23(s,1H),8.36-8.32(m,1H),7.50(d,J=8.4Hz,1H),2.72(s,3H),2.69(s,3H),2.53(s,3H)。
中间体35-3:
1-(6-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)吡啶-3-基)乙醇
在0℃处,向1-(6-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)吡啶-3-基)乙烯酮35-2(4.00g,90%纯度,0.807mmol)的甲醇(4mL)溶液中添加硼氢化钠(100mg,2.64mmol)。在30℃处搅拌3小时后,在0℃处将混合物用饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(100mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤并浓缩,得到呈黄色油状物的标题化合物(3.80g,由LCMS测得为79%纯度,82%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.26min,C12H14N2O2的质量计算值为218.1,m/z实测值为219.1[M+H]+。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.70(s,1H),7.84(d,J=7.8Hz,1H),7.35(d,J=8.1Hz,1H),5.12-4.97(m,1H),2.59(s,3H),2.45(s,3H),1.87-1.79(m,1H),1.60(d,J=6.3Hz,3H)。
中间体35-4:
4-(5-(1-溴乙基)吡啶-2-基)-3,5-二甲基异-唑
在0℃处,向1-(6-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)-3-基)乙醇35-3(3.60g,79%纯度,12.9mmol)的四氢呋喃(36mL)溶液中添加三苯基膦(5.50g,21.0mmol)和全溴甲烷(5.50g,16.6mmol)。在25℃处搅拌2小时后,将反应物浓缩以得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=20∶1至5∶1)纯化,得到呈黄色油状物的期望化合物(2.80g,由1H NMR测得为90%纯度,69%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.59min,C12H13BrN2O的质量计算值为280.0,m/z实测值为281.0[M+H]+。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.74(s,1H),7.88(d,J=6.6Hz,1H),7.36(d,J=8.1Hz,1H),5.31-5.24(m,1H),2.61(s,3H),2.47(s,3H),2.13(d,J=6.9Hz,3H)。
中间体35-5:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)吡啶-3-
基)乙基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-10(7H)-酮
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(2.00g,90%纯度,2.78mmol)和4-(5-(1-溴乙基)吡啶-2-基)-3,5-二甲基异噁唑35-4(2.00g,90%纯度,6.40mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的混合物中添加碳酸铯(4.50g,13.8mmol)。在70℃处加热3小时后,将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=0∶1)纯化,得到呈黄色固体的期望化合物(1.20g,由LCMS测得为60%纯度,43%收率)。LC-MS(ESI):RT=0.98min和1.00min,C30H30Cl2N6O4的质量计算值为608.2,m/z实测值为609.1[M+H]+。
中间体35-6:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)吡啶-3-
基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)吡啶-3-基)乙基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮35-5(1.00g,60%纯度,0.984mmol)的乙腈(13mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(13mL)、亚氯酸钠(300mg,80%纯度,2.65mmol)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(500mg,3.20mmol)和次氯酸钠水溶液(2mL,10%纯度,3.36mmol)。在20℃处搅拌4小时后,将反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液(10mL)淬灭,用1M盐酸溶液酸化至pH=4-5,用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至95%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(500mg,由LCMS测得为95%纯度,77%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.31min和1.34min,C30H28Cl2N6O5的质量计算值为622.1,m/z实测值为623.1[M+H]+。
化合物35:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)吡啶-3-
基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-
a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)吡啶-3-基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸35-6(400mg,95%纯度,0.609mmol)、1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(150mg,1.11mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(220mg,1.15mmol)和甲胺盐酸盐(120mg,1.78mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的溶液中添加三乙胺(150mg,1.11mol)。在室温处搅拌2小时后,将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈白色固体的标题化合物(400mg,由LCMS测得为90%纯度,93%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.53min和1.56min,C31H31Cl2N7O4的质量计算值为635.2,m/z实测值为636.1[M+H]+。
化合物35A和35B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((R*)-1-(6-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)吡
啶-3-基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并
[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(35A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S*)-1-(6-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)吡
啶-3-基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并
[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(35B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)吡啶-3-基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺35的外消旋混合物(400mg,90%纯度,0.566mmol)通过制备型HPLC(乙腈:水(0.1%碳酸氢铵)=30%-50%)进行分离,得到呈白色固体的标题化合物35A(39mg,由手性HPLC测得为97.4%纯度,10.6%收率,97.4%立体异构纯)和呈白色固体的化合物35B(79mg,由手性HPLC测得为98.6%纯度,21.6%收率,98.6%立体异构纯)。
化合物35A:
LC-MS(ESI):RT=3.559min,C31H31Cl2N7O4的质量计算值为635.2,m/z实测值为636.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=70∶30,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=7.922min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.61(s,1H),7.69(d,J=9.6Hz,1H),7.54-7.52(m,2H),7.32-7.26(m,2H),5.98-5.15(m,3H),4.89-4.87(m,1H),4.63-4.30(m,2H),3.99-3.89(m,2H),3.20-2.95(m,1H),2.70-2.68(m,1H),2.68(d,J=5.2Hz,3H),2.58(s,3H),2.43(s,3H),1.66(d,J=6.8Hz,3H),1.31(d,J=6.4Hz,3H)。
化合物35B:
LC-MS(ESI):RT=3.596min,C31H31Cl2N7O4的质量计算值为635.2,m/z实测值为636.3[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=70∶30,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=10.583min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(s,1H),7.74(d,J=8.0Hz,1H),7.54-7.52(m,2H),7.33(d,J=8.0Hz,1H),7.28-7.26(m,1H),6.03-5.20(m,3H),4.88(s,1H),4.65-4.33(m,2H),4.19(d,J=13.2Hz,1H),3.53-3.49(m,1H),3.16-2.98(m,1H),2.81(d,J=4.8Hz,3H),2.74-2.68(m,1H),2.58(s,3H),2.43(s,3H),1.66(d,J=7.6Hz,3H),1.30(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物36A和36B
/>
中间体36-2:
1-(6-(二氟甲基)吡啶-3-基)乙酮
向5-溴-2-(二氟甲基)吡啶36-1(500mg,2.40mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(1.0mL,2.96mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中添加双(三苯基膦基)氯化钯(II)(20mg,0.03mmol)。在100℃处搅拌2.5小时后,将反应混合物用乙醚(20mL)稀释并用氟化钾水溶液(700mg氟化钾在20mL水中)处理。剧烈搅拌1小时后,用硅藻土过滤混合物。将滤液用乙酸乙酯(30mL)稀释,用饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)、盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤并减压浓缩,得到粗产物。在室温处,向该粗产物的四氢呋喃(10mL)溶液中添加2M盐酸盐水溶液(10mL,20mmol)。在室温处搅拌15分钟后,将反应混合物用水(20mL)淬灭,用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=4∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(400mg,由1H NMR测得为90%纯度,87.5%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.30min,C8H7F2NO的质量计算值为171.1,m/z实测值为172.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.18(d,J=1.2Hz,1H),8.38(dd,J=8.0Hz,1.6Hz,1H),7.77(d,J=8.0Hz,1H),6.69(t,J=55.2Hz,1H),2.68(s,3H)。
中间体36-3:
1-(6-(二氟甲基)吡啶-3-基)乙醇
在0℃处,向1-(6-(二氟甲基)-3-基)36-2(400mg,90%纯度,2.10mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中添加硼氢化钠(160mg,4.23mmol)。添加后,将混合物在室温处搅拌2小时。用水(30mL)淬灭混合物。分离有机相,并将水相用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤并减压浓缩,得到粗产物,将其通过C18柱(乙腈:水=30%至55%)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(264mg,由1H NMR测得为95%纯度,68.9%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.14min,C8H9F2NO的质量计算值为173.1,m/z实测值为174.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.64(s,1H),7.88(dd,J=8.0,2.0Hz,1H),7.63(d,J=8.0Hz,1H),6.64(t,J=55.6Hz,1H),5.03-5.02(m,1H),2.03(d,J=3.2Hz,1H),1.55(d,J=6.4Hz,3H)。
中间体36-4:
5-(1-溴乙基)-2-(二氟甲基)吡啶
在0℃处,向1-(6-(二氟甲基)-3-基)乙醇36-3(500mg,95%纯度,2.74mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中添加三苯基膦(1.2g,4.58mmol)和全溴甲烷(1.2g,3.62mmol)。在25℃处搅拌1小时后,过滤混合物。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(520mg,由1H NMR测得为95%纯度,76.3%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.60min,C8H8BrF2N的质量计算值为235.0,m/z实测值为236.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(d,J=1.2Hz,1H),7.94(dd,J=8.0和2.0Hz,1H),7.64(d,J=8.0Hz,1H),6.64(t,J=55.2Hz,1H),5.20(q,J=7.2Hz,1H),2.07(d,J=7.2Hz,3H)。
中间体36-5:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-
(1-(6-(二氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑
并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在30℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(250mg,100%纯度,0.39mmol)和5-(1-溴乙基)-2-(二氟甲基)吡啶36-4(120mg,95%纯度,0.48mmol)在2-甲基四氢呋喃(3mL)中的溶液中缓慢添加50重量%氢氧化钠水溶液(3mL)。在30℃处搅拌2小时后,将反应混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤两次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到呈黄色固体的粗化合物(400mg,由LCMS测得为72.5%纯度,93.6%收率)。该粗产物直接使用。LC-MS(ESI):RT=2.30min和2.32min,C42H43Cl2F2N5O3Si的质量计算值为801.3,m/z实测值为802.3[M+H]+。
中间体36-6:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-7-(羟 甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮36-5(400mg,72.5%纯度,0.36mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1mL,1mmol)。在0℃处搅拌1小时后,减压浓缩混合物,得到粗产物。将粗产物通过C18柱(乙腈:水=30%至70%)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(210mg,由LCMS测得为96.4%纯度,99.3%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.54min,C26H25Cl2F2N5O3的质量计算值为563.1,m/z实测值为564.2[M+H]+。
中间体36-7:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-3-甲
基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮36-6(210mg,96.4%纯度,0.36mmol)的乙腈(3mL)溶液中添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(115mg,0.74mmol)、亚氯酸钠(80mg,80%纯度,0.71mmol)、饱和磷酸二氢钾水溶液(3mL)和次氯酸钠水溶液(0.8mL,5.5%纯度,0.74mmol)。在20℃处搅拌过夜后,将混合物用饱和亚硫酸钠水溶液(20mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到粗产物,将其通过C18(乙腈:水=35%至55%)纯化,得到呈白色固体的期望产物(200mg,由LCMS测得为100%纯度,96.4%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.29min,C26H23Cl2F2N5O4的质量计算值为577.1,m/z实测值为578.1[M+H]+。
化合物36:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-N,3-二
甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸36-7(500mg,84%纯度,0.726mmol)、甲胺盐酸盐(150mg,2.22mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(280mg,1.46mmol)和1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(200mg,1.48mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的混合物中添加三甲胺(0.6mL,4.32mmol)。在氮气下于室温搅拌过夜后,将混合物用0.5M盐酸盐水溶液酸化至pH=6,并用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层减压浓缩,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水=05%至80%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(360mg,100%纯度,84%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.61min,C27H26Cl2F2N6O3的质量计算值为590.1,m/z实测值为591.3[M+H]+。
化合物36A和36B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((R*)-1-(6-(二氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-
N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(36A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S*)-1-(6-(二氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-
N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(36B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(6-(二氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺36的外消旋混合物(440mg,100%纯度,0.744mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离方法:柱:Chiralpak IB N-5,5μm 30mm*250mm;流动相:100%ACN,60mL/min;柱温:30℃;波长:254nm,背压:100巴),得到呈白色固体的化合物36A(101.3mg,97.6%纯度,22%收率,100%立体异构纯)和呈白色固体的化合物36B(178.1mg,99.5%纯度,40%收率,99.9%立体异构纯)。
化合物36A:
LC-MS(ESI):RT=3.024min,C27H26Cl2F2N6O3的质量计算值为590.1,m/z实测值为591.2[M+H]+。手性分析(柱:Superchiral TB N-5,5μm 4.6mm*250mm;流动相:100%CH3CN,1.0mL/min;温度:30℃;波长:254nm,背压:100巴;RT=4.974min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.59(s,1H),7.79(d,J=8.0Hz,1H),7.62(d,J=8.0Hz,1H),7.54-7.51(m,2H),7.28-7.25(m,1H),6.64(t,J=55.6Hz,1H),6.07-5.29(m,3H),4.89-4.29(m,3H),4.00-3.89(m,2H),3.17-2.98(m,1H),2.74-2.67(m,4H),1.65(d,J=7.2Hz,3H),1.30(d,J=6.4Hz,3H)。19FNMR(376MHz,CDCl3)δ-115.81。
化合物36B:
LC-MS(ESI):RT=3.063min,C27H26Cl2F2N6O3的质量计算值为590.1,m/z实测值为591.2[M+H]+。手性分析(柱:Superchiral IB N-5,5μm 4.6mm*250mm;流动相:100%CH3CN,1.0mL/min;温度:30℃;波长:254nm,背压:100巴;RT=6.219min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.67(s,1H),7.84(d,J=6.8Hz,1H),7.63(d,J=8.0Hz,1H),7.54-7.52(m,2H),7.28-7.25(m,1H),6.63(t,J=55.2Hz,1H),6.19-5.28(m,3H),4.95-4.31(m,3H),4.19-4.15(m,1H),3.45(dd,J=13.2,4.8Hz,1H),3.15-2.95(m,1H),2.81(d,J=4.8Hz,3H),2.73-2.69(m,1H),1.66(d,J=7.2Hz,3H),1.29(d,J=6.8Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-115.73。
化合物37A和37B:
中间体37-2:
2-(1-溴乙基)吡啶
向2-乙基吡啶37-1(2.0g,18.7mmol)、N-溴琥珀酰亚胺(3.7g,20.8mmol)和2,2′-偶氮双(2-甲基丙腈)(307mg,1.87mmol)在四氯化碳(50mL)中的溶液。在90℃处搅拌1小时后,将反应混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用水(30mL)洗涤三次,用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到粗产物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=100∶1至50∶1)纯化,得到呈红色油状物的标题化合物(2.4g,由1H NMR测得为90%纯度,62%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.58-8.57(m,1H),7.71-7.67(m,1H),7.46-7.44(m,1H),7.22-7.18(m,1H),5.24(q,J=7.2Hz,1H),2.08(d,J=6.8Hz,3H)
中间体37-3:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(吡啶-2-基)乙基)-
1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(1.5g,100%纯度,2.32mmol)和2-(1-溴乙基)吡啶37-2(957mg,90%纯度,4.63mmol)在2-甲基四氢呋喃(15mL)中的溶液中添加50重量%氢氧化钠水溶液(15mL)和苄基三乙基氯化铵(106mg,0.465mmol)。在20℃处搅拌3小时后,将混合物添加到水(50mL)中并用二氯甲烷(50mL)萃取两次。将合并的有机层用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其用四氢呋喃(20mL)稀释,将1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(2.3mL,2.3mmol)添加到该溶液中。在20℃处搅拌3小时后,将反应混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用水(30mL)洗涤三次,用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水=5%至95%)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(700mg,由LCMS测得为96%纯度,70%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.319min,C25H25Cl2N5O3的质量计算值为513.1,m/z实测值为514.2[M+H]+。
中间体37-4:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(吡啶-2-基)乙基)-1,
2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(吡啶-2-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮37-3(700mg,96%纯度,1.31mmol)的乙腈(10mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(10mL)、亚氯酸钠(300mg,80%纯度,2.65mmol)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(410mg,2.62mmol)和次氯酸钠水溶液(1.6mL,2.69mmol)。在0℃至20℃处搅拌14小时后,将反应混合物用0.1M盐酸盐水溶液(40mL)稀释并用乙酸乙酯(40mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水=45%至60%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(400mg,由LCMS测得为99%纯度,57%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.126min,C25H23Cl2N5O4的质量计算值为527.1,m/z实测值为528.0[M+H]+。
化合物37:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(吡啶-2-基)乙
基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(吡啶-2-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸37-4(400mg,99%纯度,0.749mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液中添加甲胺盐酸盐(127mg,1.88mmol)、苯并三唑-1-醇(203mg,1.50mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(287mg,1.50mmol)和三乙胺(530mg,5.24mmol)。在0℃处搅拌2小时后,将混合物用0.05M盐酸盐水溶液酸化至pH=6,并用乙酸乙酯(60mL)萃取两次。将合并的有机层用水(60mL)洗涤三次,用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液减压浓缩,得到残余物。将其通过C18柱(乙腈:水=55%至60%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(300mg,100%纯度,74%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.45min和1.47min,C26H26Cl2N6O3的质量计算值为540.1,m/z实测值为541.3[M+H]+。
化合物37A和37B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((R*)-1-(吡啶-2-基)
乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(37A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S*)-1-(吡啶-2-基)
乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(37B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(吡啶-2-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺37(300mg,100%纯度,0.554mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IH 5μm20mm*250mm;流动相:CAN,12mL/min;温度:30℃;波长:214nm),得到呈白色固体的标题化合物37-A(41.8mg,97.3%纯度,14%收率,100%立体异构纯)和呈白色固体的化合物37-B(66.4mg,98.5%纯度,22%收率,100%立体异构纯)。
化合物37A:
LC-MS(ESI):RT=3.346min,C26H26Cl2N6O3的质量计算值为540.1,m/z实测值为541.2[M+H]+。手性分析(柱:Superchiral I H 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN 100%,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;Rt=6.089min),1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.58(d,J=4.4Hz,1H),7.67-7.63(m,1H),7.54-7.50(m,2H),7.25-7.21(m,3H),5.93-5.45(m,3H),4.89-4.37(m,3H),4.13-3.97(m,2H),3.03(br s,1H),2.73-2.69(m,1H),2.65(d,J=4.8Hz,3H),1.65(d,J=7.2Hz,3H),1.29(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物37B:
LC-MS(ESI):RT=3.476min,C26H26Cl2N6O3的质量计算值为540.1,m/z实测值为541.2[M+H]+。手性分析(柱:Superchiral IH 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN 100%,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;Rt=7.514min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.55(d,J=4.0Hz,1H),7.68-7.64(m,1H),7.52-7.49(m,2H),7.34-7.32(m,1H),7.25-7.17(m,2H),6.03-5.30(m,3H),4.86-4.31(m,4H),3.80-3.73(m,1H),3.02(br s,1H),2.81(d,J=4.4Hz,3H),2.73-2.67(m,1H),1.64(d,J=6.8Hz,3H),1.30(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物38A和38B
中间体38-2:
1-(6-氯吡啶-2-基)乙-1-醇
在0℃处,向6-氯吡啶甲醛38-1(1.0g,7.06mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中添加1M甲基溴化镁的2-甲基四氢呋喃溶液(10mL,10mmol)。在0℃处搅拌1小时后,将混合物用氯化铵水溶液(20mL)淬灭并用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(35mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.0g,98%纯度,88%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.35min,C7H8ClNO的质量计算值为157.0,m/z实测值为158.3[M+H]+。
中间体38-3:
2-(1-溴乙基)-6-氯吡啶
在0℃处,向1-(6-氯吡啶-2-基)乙醇38-2(150mg,98%纯度,0.933mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液中添加三苯基膦(441mg,1.33mmol)和全溴甲烷(441mg,1.68mmol)。在25℃处搅拌4小时后,过滤混合物。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(190mg,100%纯度,92.4%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.62min,C7H7BrClN的质量计算值为218.9,m/z实测值为220.0[M+H]+。
中间体38-4:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(6-氯吡啶-2-基)乙
基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-
a]吡嗪-10(7H)-酮
在室温处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(420mg,90%纯度,0.584mmol)在2-甲基四氢呋喃(4mL)和50重量%氢氧化钠水溶液(4mL,125.0mmol)中的溶液中添加2-(1-溴乙基)-6-氯吡啶38-3(190mg,100%纯度,0.862mmol)和苄基三乙基氯化铵(21mg,0.092mmol)。在室温处搅拌2小时后,将反应混合物用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=50%至60%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(400mg,88%纯度,76.6%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.05min和2.10min,C41H42Cl3N5O3Si的质量计算值为785.2,m/z实测值为786.1[M+H]+。
中间体38-5:
(3R,7S)-9-(1-(6-氯吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-
甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在室温处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-9-(1-(6-氯吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮38-4(400mg,88%纯度,0.447mmol)的四氢呋喃(6mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(0.8mL,0.8mmol)。在室温处搅拌1小时后,将反应混合物用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤两次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶乙酸乙酯=10∶1)纯化,得到呈白色固体的期望化合物(230mg,100%纯度,93.7%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.60min,C25H24Cl3N5O3的质量计算值为547.1,m/z实测值为548.4[M+H]+。
中间体38-6:
(3R,7S)-9-(1-(6-氯吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧
代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R)-9-(1-(6-氯吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮38-5(280mg,100%纯度,0.510mmol)、亚氯酸钠(115mg,1.02mmol)和2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(160mg,1.02mmol)在乙腈(3mL)和饱和磷酸二氢钾水溶液(3mL)中的溶液中添加次氯酸钠水溶液(0.6mL,1.01mmol)。在室温处搅拌过夜后,将反应用饱和亚硫酸钠水溶液(10mL)淬灭,用1M盐酸盐酸化至pH为约4,并用乙酸乙酯(15mL)萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=50%至60%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(250mg,由LCMS测得为100%纯度,87.1%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.33min,C25H22Cl3N5O4的质量计算值为561.1,m/z实测值为562.4[M+H]+。
化合物38:
(3R,7S)-9-(1-(6-氯吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-
氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-9-(1-(6-氯吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸38-6(250mg,100%纯度,0.444mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(170mg,0.887mmol)、甲胺盐酸盐(70mg,1.04mmol)和1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(125mg,0.925mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中添加三乙胺(0.5mL,2.82mmol)。在室温处搅拌2小时后,将混合物用氯化铵水溶液(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水(0.1%碳酸氢铵=45%至55%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(200mg,100%纯度,78.2%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.60min,C26H25Cl3N6O3的质量计算值为574.1,m/z实测值为575.2[M+H]+。
化合物38A和38B:
(3R,7S)-9-((R*)-1-(6-氯吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-
10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(38A)和
(3R,7S)-9-((S*)-1-(6-氯吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-
10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(38B)
将(3R,7S)-9-(1-(6-氯吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺38(260mg,100%纯度,0.451mmol)通过手性制备型色谱进行分离(柱:Chiralpak IC 5μm30mm*250mm;流动相:MeOH∶EtOH=50∶50,25mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的化合物38A(59.6mg,99.3%纯度,22.8%收率,100%立体异构纯)和呈白色固体的化合物38B(62.9mg,99.5%纯度,24.1%收率,99.9%立体异构纯)。
化合物38A:
LC-MS(ESI):RT=2.349min,C26H25Cl3N6O3的质量计算值为574.1,m/z实测值为575.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IC 5μm 4.6mm*250mm;流动相:MeOH∶EtOH=50∶50,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=6.049min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.64-7.59(m,1H),7.56-7.48(m,2H),7.30-7.26(m,1H),7.26-7.23(m,1H),7.21-7.15(m,1H),6.06-5.40(m,3H),4.90-4.37(m,3H),4.22-4.12(m,1H),4.03-3.94(m,1H),3.18-2.96(m,1H),2.77-2.62(m,4H),1.63(d,J=6.8Hz,3H),1.38-1.22(m,3H)。
化合物38B:
LC-MS(ESI):RT=2.515min,C26H25Cl3N6O3的质量计算值为574.1,m/z实测值为575.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IC 5μm 4.6mm*250mm;流动相:MeOH∶EtOH=50∶50,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm,RT=7.141min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.64-7.59(m,1H),7.54-7.47(m,2H),7.25-7.20(m,3H),6.10-5.72(m,2H),5.63-5.23(m,1H),5.03-4.62(m,2H),4.52-4.20(m,2H),3.96-3.86(m,1H),3.18-2.96(m,1H),2.81(d,J=4.8Hz,3H),2.76-2.64(m,1H),1.62(d,J=6.8Hz,3H),1.34-1.25(m,3H)。
化合物39A和39B
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中间体39-2:
6-(1-乙氧基乙烯基)烟酸甲酯
在氮气气氛下在室温处,向6-溴烟酸甲酯39-1(5.00g,23.1mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(60mL)溶液中添加四(三苯基膦)钯(1.40g,1.21mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(10mL,29.6mmol)。在氮气气氛下于100℃搅拌过夜后,将混合物用饱和氟化钾水溶液(100mL)稀释并过滤。将滤液用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=20∶1)纯化,得到呈浅黄色固体的标题化合物(3.30g,由1H NMR测得为90%纯度,62%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.65min,C11H13NO3的质量计算值为207.1,m/z实测值为208.4[M+H]+。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.24-9.21(m,1H),8.37-8.33(m,1H),7.83(d,J=8.4Hz,1H),5.66-5.63(m,1H),4.60-4.55(m,1H),4.10-4.02(m,5H),1.53(t,J=6.9Hz,3H)。
中间体39-3:
6-乙酰基烟酸甲酯
在氮气气氛下在室温处,向6-(1-乙氧基乙烯基)烟酸甲酯39-2(3.30g,90%纯度,14.3mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液中添加2M盐酸水溶液(30mL,60.0mmol)。在室温处搅拌1小时后,向反应混合物中添加饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤,然后经Na2SO4(s)干燥,浓缩,得到呈白色固体的标题化合物(2.80g,由1H NMR测得为90%纯度,98%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.38min,C9H9NO3的质量计算值为179.1,m/z实测值为180.7[M+H]+。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.31(s,1H),8.49-8.45(m,1H),8.15(d,J=9.9Hz,1H),4.04(s,3H),2.81(s,3H)。
中间体39-4:
6-(1-羟乙基)烟酸甲酯
在0℃处,向6-乙酰基烟酸甲酯39-3(7.60g,57.5%纯度,24.4mmol)的甲醇(200mL)溶液中添加硼氢化钠(1.10g,29.1mmol)。在室温处搅拌2小时后,将混合物用饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭,然后用乙酸乙酯(100mL)萃取三次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(3.50g,由1H NMR测得为90%纯度,71.3%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.17min,C9H11NO3的质量计算值为181.1,m/z实测值为182.1[M+H]+。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ9.15(d,J=J=1.2Hz,1H),8.31(dd,J=2.1Hz,8.4Hz,1H),7.43(d,J=8.4Hz,1H),5.01-4.95(m,1H),4.22-4.11(m,1H),3.98(s,3H),1.55(d,J=6.6Hz,3H)。
中间体39-5:
6-(1-((甲基磺酰基)氧基)乙基)烟酸甲酯
在氮气气氛下在0℃处,向6-(1-羟乙基)烟酸甲酯39-4(3.50g,90%纯度,8.94mmol)的二氯甲烷(18mL)溶液中添加三乙胺(5.20g,51.4mmol)和甲磺酰氯(3.00g,26.2mmol)。在室温处搅拌3小时后,向反应混合物中添加饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)并用二氯甲烷(40mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,然后经Na2SO4(s)干燥,浓缩,得到呈黄色固体的标题化合物(4.40g,由1H NMR测得为90%纯度,87.9%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.37min,C10H13NO5S的质量计算值为259.1,m/z实测值为260.0[M+H]+。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.21(d,J=1.5Hz,1H),8.38(dd,J=8.1和2.1Hz,1H),7.60(d,J=8.4Hz,1H),5.86(d,J=6.6Hz,1H),3.99(s,3H),3.04(s,3H),1.80(d,J=6.6Hz,3H)。
中间体39-6:
6-(1-((3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰
基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-
基)乙基)烟酸甲酯
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(500mg,90%纯度,0.695mmol)和6-(1-((甲基磺酰基)氧基)乙基)烟酸甲酯39-5(900mg,3.12mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的混合物中添加碳酸铯(1.30g,3.99mmol)。在50℃处搅拌3小时后,将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水(0.1%碳酸氢铵)=50%-95%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(270mg,由LCMS测得为92.0%纯度,44.1%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.25min和2.34min,C43H45Cl2N5O5Si的质量计算值为809.3,m/z实测值为810.2[M+H]+。
中间体39-7:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-
(1-(5-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]
吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在-30℃处,向6-(1-((3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-9(10H)-基)乙基)烟酸甲酯39-6(600mg,90%纯度,0.667mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中添加1M甲基溴化镁的四氢呋喃溶液(4mL,4.00mmol)。将混合物在30℃处搅拌2小时。将混合物用饱和氯化铵水溶液(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色固体的标题化合物(650mg,由LCMS测得为59.8%纯度,72.0%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.70min和1.78min,C44H49Cl2N5O4Si的质量计算值为809.3,m/z实测值为810.2[M+H]+。
中间体39-8:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-9-(1-(5-(2-羟基丙-2-基)吡啶-
2-基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-
酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(5-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮39-7(600mg,93.8%纯度,0.694mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵(2mL,2mmol)。然后将反应溶液在氮气气氛下于室温处搅拌3小时。将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水(0.1%碳酸氢铵)=5%-95%)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(300mg,由LCMS测得为91.7%纯度,69.2%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.44min和1.47min,C28H31Cl2N5O4的质量计算值为571.2,m/z实测值为572.1[M+H]+。
中间体39-9:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(5-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基)乙基)-
3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-9-(1-(5-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮39-8(250mg,91.7%纯度,0.400mmol)的乙腈(2.5mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(2.5mL)、亚氯酸钠(75mg,80%纯度,0.663mmol)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(125mg,0.800mmol)和次氯酸钠水溶液(0.75mL,10%纯度,1.26mmol)。在20℃处搅拌16小时后,将反应混合物过滤,用乙腈(10mL)洗涤,然后用饱和亚硫酸钠水溶液(1mL)淬灭,用1M盐酸盐水溶液酸化至pH为约4,用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水(0.1%碳酸氢铵)=5%-95%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(170mg,由LCMS测得为90.3%纯度,65.4%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.23min,C28H29Cl2N5O5的质量计算值为585.2,m/z实测值为586.1[M+H]+。
化合物39:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(5-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基)乙基)-
N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺
0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(5-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸39-9(100mg,90%纯度,0.153mmol)、甲胺盐酸盐(30mg,0.444mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(60mg,0.313mmol)和1-羟基苯并三唑(45mg,0.333mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中缓慢添加三乙胺(100mg,0.988mmol)。在氮气气氛下于0℃搅拌3小时后。将反应混合物用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(50mg,由1H NMR测得为90%纯度,48.9%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.60min和1.62min,C29H32Cl2N6O4的质量计算值为598.2,m/z实测值为599.2[M+H]+。
化合物39A和39B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((R*)-1-(5-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基)乙
基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(39A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S*)-1-(5-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基)乙
基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺(39B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(5-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺39(90mg,90%纯度,0.135mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(柱:ChiralpakIE 10μm 30mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=80∶20,30mL/min;柱温:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题化合物39A(20mg,由LCMS测得为99.8%纯度,24.6%收率,100%立体异构纯)和呈白色固体的化合物39B(17mg,由LCMS测得为99.5%纯度,20.9%收率,99.2%立体异构纯)。
化合物39A:
LC-MS(ESI):RT=3.278min,C29H32Cl2N6O4的质量计算值为598.2,m/z实测值为599.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE;柱尺寸:5μm 4.6mm*250mm;流动相:己烷∶IPA=80∶20,30mL/min;柱温:30℃;波长:254nm;Rt=8.865min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.70(s,1H),7.80-7.78(m,1H),7.53-7.50(m,2H),7.25-7.22(m,2H),6.18-5.89(m,3H),4.84-4.00(m,5H),3.08-2.65(m,5H),1.61(d,J=3.2Hz,9H),1.29(d,J=6.0Hz,3H)。
化合物39B:
LC-MS(ESI):RT=3.313min,C29H32Cl2N6O4的质量计算值为598.2,m/z实测值为599.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE;柱尺寸:5μm 4.6mm*250mm;流动相:己烷∶IPA=80∶20,30mL/min;柱温:30℃;波长:254nm;Rt=10.729min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.67(s,1H),7.81-7.78(m,1H),7.52-7.47(m,2H),7.33-7.28(m,1H),7.24-7.22(m,1H),6.11-5.53(m,3H),4.89-3.73(m,5H),3.13-2.66(m,5H),1.68-1.58(m,9H),1.29(d,J=6.0Hz,3H)。
化合物40A和40B
中间体40-2:
1-(5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙-1-酮
在室温处,向1-(5-氟吡啶-2-基)乙-1-酮40-1(1.0g,7.19mmol)和1H-1,2,4-三唑(1.5g,21.7mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液中添加碳酸铯(4.7g,14.4mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.9g,7.37mmol)。在80℃处搅拌6小时后,将混合物用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(200mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=30%-40%)纯化,得到呈黄色固体的标题产物(900mg,由LCMS测得为100%纯度,67%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.17min,C9H8N4O的质量计算值为188.1,m/z实测值为189.1[M+H]+。
中间体40-3:
1-(5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙-1-醇
在0℃处,向1-(5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙-1-酮40-2(800mg,4.25mmol)在四氢呋喃(24mL)和甲醇(8mL)中的溶液中添加四氢硼酸钠(80mg,2.12mmol)。在0℃处搅拌1小时后,向混合物中添加乙酸乙酯(80mL),用水(16mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到呈黄色油状物的粗标题化合物(800mg,由LCMS测得为100%纯度,99%收率)。LC-MS(ESI):RT=0.33min,C9H10N4O的质量计算值为190.1,m/z实测值为191.1[M+H]+。
中间体40-4:
2-(1-溴乙基)-5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶
在0℃处,向1-(5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙-1-醇40-3(800mg,100%纯度,4.21mmol)的四氢呋喃(16mL)溶液中添加全溴甲烷(2.1g,6.33mmol)和三苯基膦(2.2g,8.39mmol)。在室温处搅拌1小时后,将混合物减压浓缩并通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=45%-65%)纯化,得到呈白色固体的标题产物(450mg,78%纯度,33%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.39min,C9H9BrN4的质量计算值为252.0,m/z实测值为253.0[M+H]+。
中间体40-5:
(3R,7S)-9-(1-(5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰
基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10
(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(670mg,1.03mmol)和2-(1-溴乙基)-5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶40-4(450mg,78%纯度,1.39mmol)在2-甲基四氢呋喃(7mL)中的溶液中缓慢添加50重量%氢氧化钠水溶液(7mL)。在室温处搅拌3小时后,向混合物中添加乙酸乙酯(100mL),用水(100mL)洗涤两次,用盐水(200mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=45%-65%)纯化,得到呈白色固体的标题产物(210mg,85%纯度,30%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.52min,C27H26Cl2N8O3的质量计算值为580.2,m/z实测值为581.0[M+H]+。
中间体40-6:
(3R,7S)-9-(1-(5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰
基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-9-(1-(5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮40-5(210mg,85%纯度,0.31mmol)的乙腈(5mL)溶液中添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(96mg,0.61mmol)、次氯酸钠水溶液(0.4mL,0.67mmol)、亚氯酸钠(56mg,0.62mmol)、饱和磷酸二氢钠水溶液(5mL)。在0℃处搅拌6小时后,将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(40mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到标题化合物(200mg,83%纯度,91%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.27min,C27H24Cl2N8O4的质量计算值为594.1,m/z实测值为593.0[M-H]-。
化合物40:
(3R,7S)-9-(1-(5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰
基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺
在0℃处,在60分钟内向(3R,7S)-9-(1-(5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸40-6(200mg,83%纯度,0.28mmol)、甲胺盐酸盐(47mg,0.70mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(107mg,0.558mmol)和1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(76mg,0.56mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物中滴加三乙胺(0.26mL,2.00mmol)。在0℃处搅拌1小时后,将混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(60mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=45%至60%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(140mg,由LCMS测得为100%纯度,83%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.44min,C28H27Cl2N9O3的质量计算值为607.2,m/z实测值为608.6[M+H]+。
化合物40A和40B:
(3R,7S)-9-((R*)-1-(5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1, 5-a]吡嗪-7-甲酰胺(40A)和
(3R,7S)-9-((S*)-1-(5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯
苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,
5-a]吡嗪-7-甲酰胺(40B)
将(3R,7S)-9-(1-(5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺40的外消旋混合物(160mg,100%纯度,0.26mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IB N-5 5μm 20mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=90∶10,15mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的峰1(50mg,由SFC测得为87.8%纯度,27%收率)和化合物40B(65mg,99.7%纯度,41%收率,98.9%立体异构纯)。将峰1通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IE 5μm 20mm*250mm;流动相:MeOH∶DCM=50∶50,15mL/min;温度:30℃;波长:230nm),得到呈白色固体的标题化合物化合物40A(35mg,99.6%纯度,79%收率,100%立体异构纯)。
化合物40A:
LC-MS(ESI):RT=2.977min,C28H27Cl2N9O3的质量计算值为607.2,m/z实测值为608.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IB N-5 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=90∶10,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;Rt=5.774min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.93(d,J=2.4Hz,1H),8.61(s,1H),8.15(s,1H),8.00-7.98(m,1H),7.54-7.51(m,2H),7.43(d,J=8.4Hz,1H),7.27-7.25(m,1H),5.98-5.35(m,3H),4.89-4.16(m,4H),4.04-4.00(m,1H),3.06(s,1H),2.73-2.69(m,1H),2.66(d,J=4.8Hz,3H),1.69(d,J=6.8Hz,3H),1.29(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物40B:
LC-MS(ESI):RT=2.972min,C28H27Cl2N9O3的质量计算值为607.2,m/z实测值为608.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IB N-5 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=90∶10,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;Rt=9.858min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.91(d,J=2.4Hz,1H),8.58(s,1H),8.15(s,1H),8.01-7.99(m,1H),7.51-7.49(m,3H),7.26-7.23(m,1H),5.94-5.37(m,3H),4.91-4.41(m,4H),3.87-3.82(m,1H),3.05-3.02(m,1H),2.82(d,J=4.8Hz,3H),2.72(d,J=16.4Hz,1H),1.68(d,J=7.2Hz,3H),1.29(d,J=6.8Hz,3H)。
化合物41A和41B
中间体41-2:
N-((二甲基氨基)亚甲基)乙酰胺
在0℃处,向乙酰胺41-1(1.0g,16.9mmol)的1,4-二氧杂环己烷(35mL)溶液中添加1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(3.4ml,25.59mmol)。然后将反应混合物在氮气气氛下于80℃搅拌2小时。浓缩反应混合物,得到呈黄色油状物的标题化合物(2.0g,由LCMS测得为96%纯度,99%收率)。LC-MS(ESI):RT=0.234min,C5H10N2O的质量计算值为114.1,m/z实测值为115.1[M+H]+。
中间体41-4:
2-溴-5-肼基吡啶
将6-溴吡啶-3-胺41-3(8.00g,90%纯度,41.6mmol)在6M盐酸水溶液(70mL,420mmol)中的溶液冷却至0℃。在5分钟内添加预冷却至0℃的亚硝酸钠(2.90g,42.0mmol)的水(120mL)溶液,并将反应混合物在0℃处搅拌45分钟。将氯化亚锡二水合物(24.0g,106mmol)悬浮于预冷却至0℃的6M盐酸水溶液(70mL,420mmol)中。然后,在5分钟内将其添加到反应混合物中。将反应混合物在0℃处搅拌60分钟。经由添加40%w/w氢氧化钾水溶液直至PH为12-14来淬灭反应。用水和乙酸乙酯稀释混合物。分离有机层,并将水层用乙酸乙酯(200mL)萃取三次。将合并的有机层经硫酸钠干燥,过滤并浓缩,得到呈棕色固体的期望化合物(8.00g,由LCMS测得为65%纯度,67%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.003min,C5H6BrN3的质量计算值为187.0,m/z实测值为188.0[M+H]+。
中间体41-5:
2-溴-5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶
在室温处,向2-溴-5-肼基吡啶41-4(2.40g,82%纯度,10.5mmol)的乙酸(40mL)溶液中添加N-((二甲基氨基)亚甲基)乙酰胺41-2(3.00g,96%纯度,25.1mmol)。在90℃处加热2小时后,过滤混合物,并将滤液用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将合并的有机层用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤并浓缩,得到呈黄色固体的期望化合物(2.10g,由LCMS测得为56%纯度,47%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.24min,C8H7BrN4的质量计算值为238.0,m/z实测值为239.0[M+H]+。
中间体41-6:
2-(1-乙氧基乙烯基)-5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶
在氮气气氛下,向2-溴-5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶41-5(8.20g,50%纯度,17.2mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(20mL,59.2mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(160mL)中的溶液中添加四(三苯基膦)钯(2.00g,1.73mmol)。在100℃处加热2小时后,将混合物用饱和氟化钾水溶液(200mL)稀释并过滤。将滤液用乙酸乙酯(200mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(80mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=50%至70%)纯化,得到呈黄色固体的期望化合物(1.90g,由LCMS测得为92%纯度,45%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.294min,C12H14N4O的质量计算值为230.1,m/z实测值为231.2[M+H]+。
中间体41-7:
1-(5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙酮
在氮气气氛下在0℃处,向2-(1-乙氧基乙烯基)-5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶41-6(2.00g,100%纯度,8.69mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中添加2M氯化氢水溶液(20mL,40mmol)。在室温处搅拌2小时后,向反应混合物中添加饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)并用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并浓缩,得到呈黄色固体的标题化合物(1.80g,由1H NMR测得为90%纯度,92%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.055min,C10H10N4O的质量计算值为202.1,m/z实测值为203.1[M+H]+。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.91(d,J=2.4Hz,1H),8.26(d,J=8.4Hz,1H),8.05-8.02(m,2H),2.81(s,3H),2.69(s,3H)。
中间体41-8:
1-(5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙醇
在0℃处,向1-(5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙酮41-7(3.00g,90%纯度,13.4mmol)的甲醇(40mL)溶液中添加硼氢化钠(500mg,13.2mmol)。在0℃处搅拌1小时后,将混合物用饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭,用乙酸乙酯(100mL)萃取三次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=0∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(2.00g,由1H NMR测得为90%纯度,66%收率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.71(d,J=2.1Hz,1H),8.00(s,1H),7.89-7.85(m,1H),7.55(d,J=8.4Hz,1H),5.07-5.00(m,1H),4.16-3.94(m,1H),2.60(s,3H),1.59(d,J=6.6Hz,3H)。
中间体41-9:
2-(1-溴乙基)-5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶
在0℃处,向1-(5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙醇41-8(1.20g,90%纯度,5.29mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中添加三苯基膦(2.70g,10.3mmol)和全溴甲烷(3.00g,9.05mmol)。在25℃处搅拌2小时后,将反应物浓缩以得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=10∶1至0∶1)纯化,得到呈白色固体的期望化合物(1.00g,由1H NMR测得为90%纯度,64%收率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.74(d,J=2.4Hz,1H),8.01(s,1H),7.90-7.86(m,1H),7.51-7.46(m,1H),5.32(q,J=13.8Hz,1H),2.63(s,3H),2.14(d,J=6.9Hz,3H)。
中间体41-10:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-
甲基-9-(1-(5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶
并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在30℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(900mg,90%纯度,1.25mmol)、苄基三乙基氯化铵(135mg,0.593mmol)和2-(1-溴乙基)-5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶41-9(700mg,90%纯度,2.36mmol)在2-甲基四氢呋喃(9mL)中的溶液中缓慢添加50重量%氢氧化钠水溶液(9mL)。在30℃处搅拌4小时后,将反应混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(100mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤两次,经Na2SO4(s)干燥,过滤并减压浓缩,得到呈黄色固体的标题化合物(1.50g,由LCMS测得为33%纯度,47%收率)。LC-MS(ESI):RT=2.08min和2.17min,C44H46Cl2N8O3Si的质量计算值为832.3,m/z实测值为833.3[M+H]+。
中间体41-11:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(5-(5-甲基-1H-1,
2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]
吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮41-10(2.00g,30%纯度,0.720mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵(2mL,2mmol)。在氮气气氛下于室温处搅拌3小时后,将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(80mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水(0.1%碳酸氢铵)=5%-95%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(480mg,由LCMS测得为88%纯度,99%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.47min,C28H28Cl2N8O3的质量计算值为594.2,m/z实测值为595.1[M+H]+。
中间体41-12:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-
基)吡啶-2-基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-
a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮41-11(380mg,88%纯度,0.561mmol)的乙腈(5mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(5mL)、亚氯酸钠(120mg,80%纯度,1.06mmol)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(200mg,1.28mmol)和次氯酸钠水溶液(0.8mL,10%纯度,1.25mmol)。在20℃处搅拌4小时后,将反应混合物通过C18柱(乙腈:水(0.1%碳酸氢铵)=5%-95%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(350mg,由LCMS测得为95%纯度,98%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.25min,C28H26Cl2N8O4的质量计算值为608.1,m/z实测值为609.1[M+H]+。
化合物41:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-(1-(5-(5-甲基-1H-1,2,4-三
唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并
[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸41-12(340mg,90%纯度,0.502mmol)、1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(130mg,0.962mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(190mg,0.991mmol)和甲胺盐酸盐(100mg,1.48)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的溶液中添加三乙胺(320mg,3.16mol)。在室温处搅拌4小时后,将反应混合物直接通过C18柱(乙腈:水(0.1%碳酸氢铵)=5%-95%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(200mg,由LCMS测得为91%纯度,58%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.43min,C29H29Cl2N9O3的质量计算值为621.2,m/z实测值为622.1[M+H]+。
化合物41A和41B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-((R*)-1-(5-(5-甲基-1H-1,2,
4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡
唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(41A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-((S*)-1-(5-(5-甲基-1H-1,2,
4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡
唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(41B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-9-(1-(5-(5-甲基-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2-基)乙基)-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺41(200mg,91%纯度,0.291mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(柱:Chiralpak IC 10μm 30mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=70∶30,25mL/min;柱温:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题化合物41A(40mg,由LCMS测得为99.8%纯度,22.0%收率,100%立体异构纯)和呈白色固体的化合物41B(50mg,由LCMS测得为99.8%纯度,27.5%收率,100%立体异构纯)。
化合物41A:
LC-MS(ESI):RT=3.237min,C29H29Cl2N9O3的质量计算值为621.2,m/z实测值为622.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IC 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=70∶30,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=6.179min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.71(d,J=2.4Hz,1H),7.98(s,1H),7.80-7.77(m,1H),7.54-7.43(m,3H),7.27-7.25(m,1H),6.02-4.49(m,6H),4.22-4.16(m,1H),4.03-3.98(m,1H),3.14-2.98(m,1H),2.75-2.69(m,1H),2.64(d,J=4.8Hz,3H),2.61(s,3H),1.70(d,J=6.8Hz,3H),1.29(d,J=6.4Hz,3H)。
化合物41B:
LC-MS(ESI):RT=3.178min,C29H29Cl2N9O3的质量计算值为621.2,m/z实测值为622.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IC 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN∶IPA=70∶30,1mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=7.120min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(d,J=2.4Hz,1H),7.97(s,1H),7.83-7.80(m,1H),7.52-7.50(m,3H),7.26-7.23(m,1H),5.95-4.45(m,7H),3.89-3.84(m,1H),3.13-2.70(m,5H),2.57(s,3H),1.69(d,J=7.2Hz,3H),1.30(d,J=6.4Hz,3H)。
化合物42A和42B
中间体42-2:
2-(1-乙氧基乙烯基)-4-氟吡啶
将2-溴-4-氟吡啶42-1(2g,11.4mmol)、三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(7ml,20.7mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(300mg,0.26mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中的混合物在氮气气氛下于120℃搅拌8小时。冷却至室温后,用饱和氟化钾水溶液(30mL)淬灭反应混合物。将混合物在室温处搅拌1.5小时并用乙酸乙酯(80mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=100∶1至10∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.52g,由LCMS测得为99%纯度,79%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.626min,C9H10FNO的质量计算值为167.1,m/z实测值为168.2[M+H]+。
中间体42-3:
1-(4-氟吡啶-2-基)乙酮
在0℃处,向2-(1-乙氧基乙烯基)-4-氟吡啶42-2(1.52g,99%纯度,9.00mmol)的四氢呋喃(28mL)溶液中添加1M盐酸在水(14mL)中的水性溶液。在室温处搅拌5小时后,将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液酸化至pH=8-9,并用二氯甲烷(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤两次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶丙酮=100∶1-50∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.1g,由LCMS测得为71%纯度,62%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.139min,C7H6FNO的质量计算值为139.0,m/z实测值为140.2[M+H]+。
中间体42-4:
1-(4-氟吡啶-2-基)乙醇
在0℃处,向1-(4-氟吡啶-2-基)乙酮42-3(1.1g,71%纯度,5.61mmol)的甲醇(12mL)溶液中缓慢添加四氢硼酸钠(215mg,5.68mmol)。在室温处搅拌2小时后,将反应用丙酮(10mL)逐滴淬灭并浓缩,得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇=100∶1-50∶1)纯化,得到呈无色油状物的标题化合物(365mg,由LCMS测得为99%纯度,46%收率)。LC-MS(ESI):RT=0.501min,C7H8FNO的质量计算值为141.1,m/z实测值为142.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53-8.50(m,1H),7.33-7.30(m,1H),7.19-7.14(m,1H),5.51-5.50(m,1H),4.77-4.71(m,1H),1.37(d,J=6.4Hz,3H)。
中间体42-5:
2-(1-溴乙基)-4-氟吡啶
在0℃处,向1-(4-氟吡啶-2-基)乙醇42-4(565mg,95%纯度,3.80mmol)的四氢呋喃(25mL)溶液中添加三苯基膦(1.8g,6.86mmol)和全溴甲烷(1.8g,5.43mmol)。在室温处搅拌2小时后,过滤混合物。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=100∶1-60∶1)纯化,得到呈无色油状物的标题化合物(600mg,由LCMS测得为97%纯度,75%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.318min,C7H7BrFN的质量计算值为203.0,m/z实测值为204.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.63-8.59(m,1H),7.54-7.51(m,1H),7.31-7.27(m,1H),5.46(q,J=7.2Hz,1H),2.00(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体42-6:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-
(1-(4-氟吡啶-2-基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]
吡嗪-10(7H)-酮
向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(1g,90%纯度,1.39mmol)、2-(1-溴乙基)-4-氟吡啶42-5(400mg,97%纯度,1.90mmol)和苄基三乙基氯化铵(65mg,0.29mmol)在2-甲基四氢呋喃(9mL)和50重量%氢氧化钠水溶液(9mL)中的溶液。将反应混合物在氮气气氛下于室温处搅拌3小时,用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(25mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到粗产物,将其通过C18柱(乙腈:水=5%至90%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(1.15g,由LCMS测得为86%纯度,92%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.680min,C41H42Cl2FN5O3Si的质量计算值为770.8,m/z实测值为771.0[M+H]+。
中间体42-7:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-氟吡啶-2-基)乙基)-7-(羟甲基)-3-
甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-氟吡啶-2-基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮42-6(1.15g,86%纯度,1.28mmol)的四氢呋喃溶液(12mL)中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1.2mL,1.2mmol),然后将混合物在室温处搅拌2小时。将反应混合物倾注到乙酸乙酯(25mL)中并用水(10mL)洗涤三次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇=90∶1-50∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(680mg,由LCMS测得为99%纯度,99%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.457min,C25H24Cl2FN5O3的质量计算值为531.1,m/z实测值为532.2[M+H]+。
中间体42-8:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-氟吡啶-2-基)乙基)-3-甲基-10-氧
代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-氟吡啶-2-基)乙基)-7-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮42-7(680mg,99%纯度,1.26mmol)的乙腈(7mL)溶液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(7mL)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(403mg,2.58mmol)、亚氯酸钠(295mg,2.61mmol)、次氯酸钠水溶液(1.55mL,2.60mmol)。使反应缓慢回到室温。在室温处搅拌过夜后,将反应混合物用饱和硫代硫酸钠(15mL)淬灭,用1M盐酸盐水溶液酸化至pH=6-7,并用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤。减压浓缩滤液,得到粗产物,将其通过C18柱(乙腈:水=5%至90%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(580mg,由LCMS测得为99%纯度,83%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.404min,C25H22Cl2FN5O4的质量计算值为545.1,m/z实测值为546.2[M+H]+。
化合物42:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-氟吡啶一2-基)乙基)-N,3-二甲基-
10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-氟吡啶-2-基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸42-8(580mg,99%纯度,1.05mmol)、甲胺盐酸盐(184mg,2.73mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(418mg,2.18mmol)和1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(298mg,2.21mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中添加三乙胺(1mL,7.21mmol)。使反应缓慢回到室温。在氮气气氛下于室温搅拌3小时后,将反应混合物用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(25mL)萃取三次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(370mg,由LCMS测得为100%纯度,63%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.52min,C26H25Cl2FN6O3的质量计算值为558.1,m/z实测值为559.4[M+H]+。
化合物42A和42B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((R*)-1-(4-氟吡啶-2-基)乙基)-N,3-二甲
基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
(42A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S*)-1-(4-氟吡啶-2-基)乙基)-N,3-二甲 基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺 (42B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-氟吡啶-2-基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺42(350mg,100%纯度,0.626mmol)的混合物通过手性HPLC进行分离(分离条件:柱:ChiralpakIE 5μm 20mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,60g/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题化合物42A(79.5mg,22.2%收率,97.7%纯度,100%立体异构纯)和呈白色固体的化合物42B(80.9mg,23%收率,99.7%纯度,100%立体异构纯)。
化合物42A:
LC-MS(ESI):RT=3.568min,C26H25Cl2FN6O3的质量计算值为558.1,m/z实测值为559.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm;RT=7.629min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.60-8.56(m,1H),7.88(d,J=4.4Hz,1H),7.76-7.74(m,2H),7.46(d,J=8.0Hz,1H),7.29-7.26(m,1H),7.08(br s,1H),5.87-5.65(m,1H),5.43-5.24(m,1H),5.02(s,1H),4.61-4.42(m,1H),4.26-4.00(m,2H),3.70-3.57(m,1H),2.93-2.89(m,1H),2.63-2.54(m,1H),2.42(d,J=4.4Hz,3H),1.54-1.49(m,3H),1.23-1.17(m,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-103.37。
化合物42B:
LC-MS(ESI):RT=3.558min,C26H25Cl2FN6O3的质量计算值为558.1,m/z实测值为559.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm;RT=9.002min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57(s,1H),8.06(s,1H),7.75-7.72(m,2H),7.46-7.26(m,3H),5.75-5.65(m,1H),5.41-5.23(m,1H),5.06(s,1H),4.63-4.35(m,1H),4.18(br s,1H),3.82(br s,2H),2.92-2.89(m,1H),2.64(d,J=4.4Hz,3H),2.59-2.52(m,1H),1.51-1.38(m,3H),1.22-1.11(m,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-103.07。
化合物43A和43B
中间体43-1:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲
酰基)-3-甲基-9-(1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:
3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮14-7(1.5g,90%纯度,1.98mmol)和5-(1-溴乙基)-2-(三氟甲基)嘧啶4-5(750mg,95%纯度,2.79mmol)在2-甲基四氢呋喃(15mL)中的溶液中缓慢添加苄基三乙基氯化铵(75mg,0.33mmol)和50重量%氢氧化钠水溶液(7mL)。在30℃处搅拌1小时后,将反应混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤两次,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到粗产物。将粗产物通过C18柱(乙腈:水=90%至95%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(270mg,由LCMS测得为100%纯度,15.9%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.94min,C42H41ClF6N6O3的质量计算值为854.3,m/z实测值为855.6[M+H]+。
中间体43-2:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(2-(三氟 甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10 (7H)-酮
在0℃处,向(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮43-1(320mg,100%纯度,0.37mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液中添加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(0.6mL,0.6mmol)。在0℃处搅拌2小时后,减压浓缩混合物,得到粗产物。将粗产物通过C18柱(乙腈:水=40%至55%)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(190mg,由1HNMR测得为90%纯度,74.1%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.62min,C26H23ClF6N6O3的质量计算值为616.1,m/z实测值为617.4[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.93-8.90(m,2H),7.79(s,1H),7.60-7.53(m,2H),6.21-6.03(m,1H),5.69-5.30(m,1H),4.78-4.25(m,3H),4.07-3.66(m,3H),3.46-3.24(m,1H),3.16-2.49(m,3H),1.73(d,J=6.4Hz,3H),1.28-1.24(m,3H)。
中间体43-3:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(2-(三氟甲
基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酸
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮43-2(190mg,90%纯度,0.28mmol)的乙腈(4mL)溶液中添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(90mg,0.58mmol)、亚氯酸钠(65mg,80%纯度,0.58mmol)、饱和磷酸二氢钾水溶液(4mL)和次氯酸钠水溶液(0.33mL,10%纯度,0.55mmol)。在0℃处搅拌2小时后,将混合物用饱和亚硫酸钠溶液(20mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈黄色固体的标题化合物(190mg,由LCMS测得为90.2%纯度,99.0%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.33min,C26H21ClF6N6O4的质量计算值为630.1,m/z实测值为631.3[M+H]+。
化合物43:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(2-(三
氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡
嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸43-3(190mg,90%纯度,0.27mmo))、甲胺盐酸盐(40mg,0.59mmol)、1-乙基-(3-(3-二甲基氨基)丙基)-碳二亚胺盐酸盐(110mg,0.57mmol)和苯并三唑-1-醇(80mg,0.59mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物中添加三甲胺(0.2mL,1.42mmol)。在氮气气氛下于0℃搅拌2小时后,将混合物用0.5M盐酸盐水溶液酸化至pH=6,并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用水(30mL)洗涤三次,用盐水(30mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18柱(乙腈:水=55%至75%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(97mg,由LCMS测得为100%纯度,55.6%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.60min,C27H24ClF6N7O3的质量计算值为643.2,m/z实测值为644.4[M+H]+。
化合物43A和43B:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((R*)-1-
(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,
5-a]吡嗪-7-甲酰胺(43A)和
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S*)-1-
(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,
5-a]吡嗪-7-甲酰胺(43B)
将(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺43的外消旋混合物(97mg,97.8%纯度,0.21mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件:柱:Chiralpak IE 5μm 20mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,25mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题化合物43A(20mg,由LCMS测得为99.6%纯度,20.5%收率,100%立体异构纯)和化合物43B(25mg,由LCMS测得为99.8%纯度,25.7%收率,100%立体异构纯)。
化合物43A:
LC-MS(ESI):RT=4.214min,C27H24ClF6N7O3的质量计算值为643.2,m/z实测值为644.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IC 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm;Rt=5.239min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.84(s,2H),7.77(s,1H),7.59-7.55(m,2H),5.99-5.50(m,3H),4.94-4.88(m,1H),4.78-4.30(m,2H),4.12-4.09(m,1H),3.95-3.90(m,1H),3.15-2.99(m,1H),2.76-2.68(m,4H),1.71(d,J=7.2Hz,3H),1.33(d,J=6.4Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-62.85,-70.25。
化合物43B:
LC-MS(ESI):RT=4.288min,C27H24ClF6N7O3的质量计算值为643.2,m/z实测值为644.2[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IC 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm;Rt=8.959min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.92(s,2H),7.77(s,1H),7.61-7.52(m,2H),6.11-5.36(m,3H),4.93-4.30(m,4H),3.65-3.61(m,1H),3.18-2.96(m,1H),2.82(d,J=4.8Hz,3H),2.75-2.65(m,1H),1.76(d,J=7.2Hz,3H),1.30(d,J=6.8Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-62.84,-70.29。
化合物44A和44B
中间体44-2:
1-(4-(三氟甲基)噻唑-2-基)乙酮
将2-溴-4-(三氟甲基)噻唑44-1(2.90g,12.5mmol)的四氢呋喃(40mL)溶液冷却至-60℃,然后在-60℃处滴加2.5M正丁基锂的四氢呋喃溶液(6mL,15.0mmol),并将混合物在-60℃处搅拌1小时。然后,在-60℃处滴加N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(1.90g,18.4mmol)。在-60℃处搅拌2小时并在室温处搅拌16小时后,将反应混合物冷却至0℃,用饱和氯化铵水溶液(100mL)淬灭,并用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤并减压浓缩,得到残余物,将其通过硅胶柱(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(2.00g,由1H NMR测得为87%纯度,71%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.07-8.05(m,1H),2.75(s,3H)。
中间体44-3:
1-(4-(三氟甲基)噻唑-2-基)乙醇
将1-(4-(三氟甲基)噻唑-2-基)乙酮44-2(2.00g,8.92mmol)的甲醇(20mL)溶液冷却至0℃,然后添加硼氢化钠(670mg,17.7mmol)。将该反应混合物在0℃处搅拌2小时,用水(2mL)淬灭并浓缩,得到残余物,将其通过硅胶柱(二氯甲烷∶甲醇=15∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(1.70g,由LCMS测得为71%纯度,69%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.05min,C6H6F3NOS的质量计算值为197.0,m/z实测值为198.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.39-8.37(m,1H),6.39-6.34(m,1H),5.02-4.94(m,1H),1.47(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体44-4:
2-(1-溴乙基)-4-(三氟甲基)噻唑
将1-(4-(三氟甲基)噻唑-2-基)乙醇44-3(1.20g,71%纯度,3.07mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液冷却至0℃。然后添加三苯基膦(1.70g,6.48mmol)和四溴甲烷(2.10g,6.33mmol)。在0℃至室温处搅拌8小时后,浓缩反应混合物,得到残余物,将其通过硅胶柱(石油醚∶乙酸乙酯=5∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(700mg,由1H NMR测得为90%纯度,56%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79-7.78(m,1H),5.44-5.38(m,1H),2.16(d,J=6.8Hz,3H)。
中间体44-5:
(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-
甲基-9-(1-(4-(三氟甲基)噻唑-2-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑
并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在0℃处,向2-(1-溴乙基)-4-(三氟甲基)噻唑44-4(400mg,1.38mmol)和(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮Int A(950mg,1.35mmol)在2-甲基四氢呋喃(15mL)和50重量%氢氧化钠水溶液(10mL)中的混合物中添加苄基三乙基氯化铵(100mg,0.42mmol)。将反应混合物在0℃至室温处搅拌3小时。用乙酸乙酯(100mL)稀释反应混合物,并将有机层用饱和氯化铵水溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机层经Na2SO4(s)干燥,过滤并减压浓缩,得到残余物,将其通过硅胶柱(二氯甲烷∶甲醇=12∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(1.20g,由LCMS测得为67%纯度,70%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.895min,C40H40Cl2F3N5o3SSi的质量计算值为825.2,m/z实测值为825.9[M+H]+。
中间体44-6:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(4-(三氟甲基)噻
唑-2-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3:4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
将(3R,7S)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-9-(1-(4-(三氟甲基)噻唑-2-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮44-5(1.20g,67%纯度,0.974mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液冷却至0℃,然后滴加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃(1.5mL,1.50mmol)溶液。在0℃处搅拌1小时后,将反应混合物减压浓缩并通过硅胶柱(二氯甲烷:甲醇=15:1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(550mg,由LCMS测得为95%纯度,91%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.44min,C24H22Cl2F3N5O3S的质量计算值为587.1,m/z实测值为587.9[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.81-7.76(m,1H),7.53-7.50(m,2H),7.25-7.24(m,1H),6.36-5.38(m,2H),4.87-4.32(m,3H),4.08-4.00(m,1H),3.98-3.72(m,3H),3.66-3.59(m,1H),3.12-2.98(m,1H),2.73-2.65(m,1H),1.76-1.74(m,3H),1.28-1.24(m,3H)。
中间体44-7:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(4-(三氟甲基)噻唑-2-
基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-(羟甲基)-3-甲基-9-(1-(4-(三氟甲基)噻唑-2-基)乙基)-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮44-6(550mg,95%纯度,0.890mmol)在乙腈(5mL)中的悬浮液中添加饱和磷酸二氢钾水溶液(5mL)。将混合物冷却至0℃,然后添加2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(347mg,2.22mmol)、亚氯酸钠(251mg,2.22mmol)和次氯酸钠水溶液(1.3mL,2.18mmol)。在室温处搅拌16小时后,将反应混合物用1M盐酸盐水溶液调节pH至5-6,并用二氯甲烷(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤并减压浓缩,得到残余物,将其通过硅胶柱(二氯甲烷∶甲醇=5∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(480mg,由LCMS测得为92%纯度,83%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.211min,C24H20Cl2F3N5O4S的质量计算值为601.1,m/z实测值为601.9[M+H]+。
化合物44:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(4-(三氟甲基)噻
唑-2-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
向(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-10-氧代-9-(1-(4-(三氟甲基)噻唑-2-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸44-7(480mg,92%纯度,0.730mmol)和甲胺盐酸盐(100mg,1.48mmol)在二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物中添加1-羟基苯并三唑(198mg,1.47mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(281mg,1.47mmol)。冷却至0℃后,在30分钟内滴加三乙胺(223mg,2.20mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液。将反应混合物在0℃处搅拌1小时。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(20mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将合并的有机层用水(50mL)洗涤三次,用盐水(50mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥,过滤并减压浓缩,将其通过硅胶柱(二氯甲烷∶甲醇=12∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题化合物(350mg,由LCMS测得为98%纯度,76%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.41min,C25H23Cl2F3N6O3S的质量计算值为614.1,m/z实测值为614.9[M+H]+。
化合物44A和44B:
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((R*)-1-(4-(三氟甲
基)噻唑-2-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(44A)和
(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S*)-1-(4-(三氟甲
基)噻唑-2-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-
甲酰胺(44B)
将(3R,7S)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-(1-(4-(三氟甲基)噻唑-2-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺44的外消旋混合物(350mg,98%纯度,0.560mmol)通过手性制备型HPLC进行纯化(柱:Chiralpak IA 5μm,20mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,30mL/min;温度:30℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题化合物44A(87.4mg,由LCMS测得为96.2%纯度,24.5%收率,100%立体异构纯)和呈白色固体的化合物44B(116mg,由LCMS测得为98.9%纯度,33.5%收率,99.9%立体异构纯)。
化合物44A:
LC-MS(ESI):RT=3.844min,C25H23Cl2F3N6O3S的质量计算值为614.1,m/z实测值为615.0[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IA 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1.0mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=6.112min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.78(s,1H),7.54-7.51(m,2H),7.28-7.26(m,1H),6.13-5.41(m,3H),4.93-4.32(m,3H),4.21-4.15(m,1H),4.00-3.97(m,1H),3.12-2.98(m,1H),2.78-2.71(m,4H),1.77-1.75(m,3H),1.32-1.30(m,3H)。
化合物44B:
LC-MS(ESI):RT=3.916min,C25H23Cl2F3N6O3S的质量计算值为614.1,m/z实测值为615.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IA 5μm 4.6mm*250mm;流动相:Hex∶EtOH=30∶70,1.0mL/min;温度:30℃;波长:254nm;RT=8.405min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(s,1H),7.52-7.50(m,2H),7.25-7.23(m,1H),6.23-5.35(m,3H),4.95-4.38(m,4H),3.88-3.82(m,1H),3.15-2.94(m,1H),2.82-2.70(m,4H),1.77-1.75(m,3H),1.30-1.28(m,3H)。
化合物45
/>
中间体45-1:
(R)-3-(1H-咪唑-1-羰基)-6-甲基-2,4,6,7-四氢-5H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-甲
酸叔丁酯
在0℃处,向(R)-5-(叔丁氧基羰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3c]吡啶-3-甲酸IntB-8(20g,100%纯度,71.1mmol)的乙腈(250mL)溶液中添加二(1H-咪唑-1-基)甲酮(12g,74.0mmol)。在0℃处搅拌1小时后,向混合物中添加水(100mL)和乙酸乙酯(200mL)。将有机层用盐水(200mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液,得到呈浅白色固体的标题化合物(21g,100%纯度,89.1%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.50min,C16H21N5O3的质量计算值为331.4,m/z实测值为332.1[M+H]+。
中间体45-2:
(R)-3-(((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)氨基)-2-羟基丙酸甲酯
在30℃处,在密封管中,向(S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙-1-胺Int B-6(4.2g,95%纯度,21.3mmol)的甲醇(40mL)溶液中添加(R)-环氧乙烷-2-甲酸甲酯(2.28g,23.3mmol)。在60℃处搅拌24小时后,LCMS显示剩余43%原料。然后,在30℃处,向混合物中添加(R)-环氧乙烷-2-甲酸甲酯(1.0g,9.8mmo))。在60℃处搅拌19小时后,LCMS显示剩余34%原料。将混合物减压浓缩并添加水(10mL)。将水层用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到呈黄色油状物的标题化合物(1.5g,由LCMS测得为50%纯度,12%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.385min,C13H17F2NO4的质量计算值为289.1,m/z实测值为290.2[M+H]+。
中间体45-3:
(R)-3-(((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)氧基)-2-羟基-N-甲基丙酰胺
在30℃处,向(R)-3-(((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)氨基)-2-羟基丙酸甲酯45-2(1.5g,50%纯度,2.59mmol)中添加2M甲胺的四氢呋喃溶液(3mL,6mmol)。在70℃处搅拌48小时后,将混合物减压浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至100%)纯化,得到粗产物,将其通过柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇=19∶1)纯化,得到呈黄色油状物的标题化合物(540mg,由LCMS测得为80%纯度,58%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.25min,C13H18F2N2O3的质量计算值为288.1,m/z实测值为289.1[M+H]+。
中间体45-4:
(R)-3-(((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)((R)-2-羟基-3-(甲基氨基)-3-氧
代丙基)氨基甲酰基)-6-甲基-2,4,6,7-四氢-5H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
在氮气气氛下在0℃处,向(R)-3-(((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)氨基)-2-羟基-N-甲基丙酰胺45-3(440mg,80%纯度,1.22mmol)的乙腈(9mL)溶液中添加(R)-3-(1H-咪唑-1-羰基)-6-甲基-2,4,6,7-四氢-5H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯45-1(485mg,1.46mmol)和碳酸铯(796mg,2.44mmol)。在45℃处搅拌4小时后,将混合物浓缩,通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇=19∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(430mg,由LCMS测得为93%纯度,59%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.15min,C26H35F2N5O6的质量计算值为551.3,m/z实测值为552.2[M+H]+。
中间体45-5:
(3R,7S)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-
10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯
在氮气气氛下在0℃处,向(R)-3-(((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)((R)-2-羟基-3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)氨基甲酰基)-6-甲基-2,4,6,7-四氢-5H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯45-4(430mg,93%纯度,0.73mmol)的四氢呋喃(16mL)溶液中添加三丁基膦(0.26mL,1.04mmol)和(E)-二氮烯-1,2-二甲酸二异丙酯(0.22mL,1.12mmol)。在室温处搅拌2小时后,将混合物浓缩,通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(340mg,由LCMS测得为98%纯度,86%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.203min,C26H33F2N5O5的质量计算值为533.2,m/z实测值为534.2[M+H]+。
中间体45-6:
(3R,7S)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,
4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯45-5(290mg,98%纯度,0.53mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中添加4M盐酸盐的1,4-二氧杂环己烷溶液(2.5mL,10mmol)。在室温处搅拌1小时后,将反应混合物用饱和碳酸氢钠洗涤并用二氯甲烷(10mL)萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。减压浓缩滤液,得到呈黄色固体的标题化合物(200mg,由1H NMR测得为95%纯度,82%收率),将其通过C18柱(乙腈:纯水=5%至66%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(42.5mg,由LCMS测得为98%纯度,22%收率,100%立体异构纯)。LC-MS(ESI):RT=2.427min,C21H25F2N5O3的质量计算值为433.2,m/z实测值为434.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiralpak IB N-5 5μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN=100%,1mL/min;柱温:30℃;波长:254nm,RT=5.632min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.93-7.89(m,1H),7.41-7.04(m,5H),5.77(q,J=J=6.8Hz,1H),4.96-4.94(m,1H),4.10-4.06(m,1H),3.79-3.75(m,1H),3.66-3.62(m,1H),3.51-3.46(m,1H),2.81-2.73(m,1H),2.62-2.58(m,4H),2.22-2.16(m,2H),1.40(d,J=7.2Hz,3H),1.15(d,J=6.0Hz,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-82.04。
化合物45:
(3R,7S)-2-(5-氯-6-(三氟甲基)吡啶甲酰基)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)
乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]
吡嗪-7-甲酰胺
在0℃处,向(3R,7S)-9-((S)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺45-6(9mg,99.3%纯度,0.02mmol)、5-氯-6-(三氟甲基)吡啶甲酸(6.5mg,0.03mmol)和HATU(12mg,0.03mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.01mL,0.06mmol)。在室温处搅拌1小时后,向反应混合物中添加水(1mL)并用乙酸乙酯(2mL)萃取三次。用盐水(1mL)洗涤有机层,将滤液浓缩并通过C18柱(乙腈:水=5%至95%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物(4mg,由LCMS测得为97.7%纯度,29.6%收率)。LC-MS(ESI):RT=3.722min,C28H26ClF5N6O4的质量计算值为640.2,m/z实测值为641.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.02-7.89(m,2H),7.40-7.33(m,2H),7.13-7.09(m,2H),6.50(t,J=73.6Hz,1H),6.09-5.28(m,3H),4.86-4.63(m,2H),4.45-4.40(m,1H),4.11-4.01(m,1H),3.40-3.11(m,2H),2.80(d,J=4.8Hz,3H),2.75-2.67(m,1H),1.60-1.57(m,3H),1.37-1.31(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-66.04,-66.17,-80.99,-81.04。
化合物46
中间体46-2:
4-氯-3-羟基苯甲酸甲酯
在0℃处,向4-氯-3-羟基苯甲酸46-1(3.0g,17.4mmol)的甲醇(30mL)溶液中滴加二氯化亚硫(2.48g,20.9mmol)。将所得混合物在0℃处搅拌10分钟,然后加热至60℃并搅拌2小时。冷却至室温后,浓缩反应混合物,得到残余物,将其溶解于乙酸乙酯(50mL)中,用5重量%碳酸氢钠水溶液(20mL)、盐水(20mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,得到呈黄色固体的标题产物(3.20g,由LCMS测得为96.4%纯度,95%收率)。LC-MS(ESI):RT=1.391min,C8H7ClO3的质量计算值为186.0,m/z实测值为373.1[2M+H]+。
中间体46-3:
4-氯-3-(二氟甲氧基)苯甲酸甲酯
向4-氯-3-羟基苯甲酸甲酯46-2(3.20g,17.2mmol)和碳酸钾(2.84g,20.6mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中添加2-氯-2,2-二氟乙酸钠(3.14g,20.6mmol)。将所得混合物在80℃处搅拌过夜。冷却至室温后,将反应混合物倾注到水(200mL)中,用乙酸乙酯(100mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,得到残余物,将其通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯=8∶1)纯化,得到呈黄色固体的标题产物(2.0g,由1NMR测得为90%纯度,44%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.89(s,1H),7.85(dd,J=8.4和1.6Hz,1H),7.53(d,J=8.4Hz,1H),6.59(t,J=72.8Hz,1H),3.93(s,3H)。
中间体46-4:
4-氯-3-(二氟甲氧基)苯甲酸
在20℃处,向4-氯-3-(二氟甲氧基)苯甲酸甲酯46-3(2.0g,90%纯度,7.61mmol)在甲醇(5mL)和四氢呋喃(15mL)中的溶液中添加氢氧化锂一水合物(638.5mg,15.2mmol)的水(10mL)溶液。将所得混合物在20℃处搅拌2小时,然后倾注到水(50mL)中并用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将水层用10重量%盐酸盐水溶液酸化至pH=4,并用二氯甲烷(20mL)萃取三次。将合并的二氯甲烷有机层用盐水(10mL)洗涤,经Na2SO4(s)干燥并过滤。真空浓缩滤液,得到呈黄色固体的标题产物(1.85g,由1NMR测得为90%纯度,98.3%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.97(s,1H),7.93(dd,J=8.4和1.6Hz,1H),7.58(d,J=8.4Hz,1H),6.61(t,J=72.8Hz,1H)。
化合物46:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(二氟甲氧基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S)-1-
(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,
5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在室温处,向(3R,7S)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(含有20%异构体(3R,7S)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((R)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺)4B-7(150mg,78.9%纯度,0.271mmol)和4-氯-3-(二氟甲氧基)苯甲酸46-4(80mg,90%纯度,0.33mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中添加2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基异脲六氟磷酸盐(V)(134mg,0.35mmol)。在0℃处搅拌10分钟后,在0℃处滴加三乙胺(82mg,0.81mmol)。然后在0℃处继续搅拌3小时。将反应混合物用盐水(10mL)淬灭,用乙酸盐(10mL)萃取三次,经Na2SO4(s)干燥,过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=40%-60%)纯化,得到呈白色固体的标题化合物混合物(85.2mg,由LCMS测得为96.5%纯度,47.4%收率)。LC-MS(ESI):RT=3.073min,C27H25ClF5N7O4的质量计算值为641.2,m/z实测值为642.1[M+H]+。将混合物用手性HPLC进一步纯化(柱:Chiral ART Cellulose-SC 10μm 50mm*250mm;流动相:ACN=100,100mL/min;柱温:25℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题化合物46(40mg,由LCMS测得为95.1%纯度,44.9%收率,99.4%立体异构纯)。
46:
LC-MS(ESI):RT=3.080min,C27H25ClF5N7O4的质量计算值为641.2,m/z实测值为642.1[M+H]+。手性分析(柱:Chiral ART Cellulose-SC 10μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN=100,1mL/min;柱温:25℃;波长:254nm,RT=5.067min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.92(s,2H),7.54-7.52(m,1H),7.31(s,1H),7.26-7.24(m,1H),6.57(t,J=72.8Hz,1H),6.07(brs,1H),5.85(br s,1H),5.69-5.30(m,1H),4.94(s,1H),4.82-4.30(m,3H),3.65-3.60(m,1H),3.04(br s,1H),2.82(d,J=4.8Hz,3H),2.74-2.70(m,1H),1.75(d,J=7.2Hz,3H),1.30-1.29(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-70.28,-81.58--82.77。
化合物47
化合物47:
(3R,7S)-2-(4-氯-3-(三氟甲氧基)苯甲酰基)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S)-1-
(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,
5-a]吡嗪-7-甲酰胺
向(3R,7S)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((S)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺(含有20%异构体(3R,7S)-N,3-二甲基-10-氧代-9-((R)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4′,3′:3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺)4B-7(150mg,78.9%纯度,0.27mmol)和4-氯-3-(三氟甲氧基)苯甲酸(78mg,0.33mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中添加2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基异脲六氟磷酸盐(V)(134mg,0.35mmol)。在0℃处搅拌10分钟后,在0℃处向反应中滴加三乙胺(82mg,0.81mmol)。然后在0℃处继续搅拌3小时。将反应混合物用盐水(10mL)淬灭,用乙酸盐(10mL)萃取三次,经Na2SO4(s)干燥,过滤。浓缩滤液,得到残余物,将其通过C18色谱法(乙腈:水(+0.02%碳酸氢铵)=40%-60%)纯化,得到呈白色固体的混合物(123mg,由LCMS测得为97.1%纯度,67.6%收率)。LC-MS(ESI):RT=3.307min,C27H24ClF6N7O4的质量计算值为659.2,m/z实测值为660.1[M+H]+。将混合物用手性HPLC进一步纯化(柱:Chiral ARTCellulose-SC 10μm 50mm*250mm;流动相:ACN=100,100mL/min;柱温:25℃;波长:254nm),得到呈白色固体的标题化合物47(35mg,28%收率,由1HNMR测得为95%纯度,99.7%立体异构纯)。
47:
LC-MS(ESI):RT=10.84min,C27H24ClF6N7O4的质量计算值为659.2,m/z实测值为660.6[M+H]+。手性分析(柱:Chiral ART Cellulose-SC 10μm 4.6mm*250mm;流动相:ACN=100,1mL/min;柱温:25℃;波长:254nm,RT=5.345min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.92(s,2H),7.57(d,J=8.4Hz,1H),7.39(s,1H),7.32(dd,J=8.4和2.0Hz,1H),6.09(br s,1H),5.84-5.45(m,2H),4.94(br s,1H),4.77-4.47(m,2H),4.32(d,J=12.4Hz,1H),3.63(d,J=12.4Hz,1H),3.08(br s,1H),2.82(d,J=4.8Hz,3H),2.75-2.71(m,1H),1.75(d,J=7.2Hz,3H),1.29(d,J=6.4Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-57.77,-70.28。
生物学实施例
式(I)的化合物的抗HBV活性
程序
使用HepG2.117细胞系测量抗HBV活性,该细胞系是一种稳定的诱导型HBV生产细胞系,其在不存在多西环素的情况下复制HBV(Tet-off系统)。HepG2细胞系可根据编号HB-8065从ATCCR获得。HepG2细胞系的转染可如Sun和Nassal 2006 Journal of Hepatology45(2006)636-645″Stable HepG2-and Huh7-based human hepatoma cell lines forefficient regulated expression of infectious hepatitis B virus″中所述进行。
对于抗病毒测定,诱导HBV复制,随后在96孔板中用连续稀释的化合物进行处理。在处理3天后,通过使用实时荧光PCR和HBV特异性引物组和探针定量细胞内HBV DNA来确定抗病毒活性。
使用HepG2或HepG2.117细胞测试化合物的细胞毒性,该细胞在化合物的存在下孵育3天或4天。使用PERKIN ELMER ATPlite发光测定系统评估细胞的活力。
式(I)的化合物的人肝脏微粒体稳定性t1/2(min)
程序
将合并的人肝微粒体(0.5mg/mL)与1μM测试化合物或对照化合物(维拉帕米、华法林和西立伐他汀)在含有1mM MgCl2的0.1M磷酸盐缓冲液pH 7.4中于37℃预孵育。DMSO和乙腈的最终浓度分别为0.05%和0.2%。对每种化合物单独进行所有孵育。添加NADPH以引发反应,最终浓度为1mM,并且最终孵育体积为400μL。
在6个时间点(0min、5min、10min、20min、40min和60min),通过将50μL孵育混合物按1∶3(v∶v)的比率移入含有乙腈的板中来终止反应。将板以3000rpm在4℃处离心10min,以沉淀蛋白质。在蛋白质沉淀后,将样品上清液合并在具有多达8种化合物的盒中。添加内标(1∶1上清液与内标溶液),并使用标准LC-MS条件分析样品。
由ln峰面积比(化合物峰面积/内标峰面积)对时间的图确定线的梯度。随后,使用以下公式计算半衰期:
消除速率常数(k)=(-梯度)
半衰期(t1/2)(min)=0.693/k
结果
N.A.=不适用
CC50值:3天孵育,除非用*标记(*=4天孵育)
表4
/>
/>
Ref 1、Ref 2、Ref 3、Ref 4和Ref 5可根据WO2020/243135的程序制备。
根据实验结果,本发明化合物显示出改善的人肝脏微粒体稳定性以及适当的抗HBV活性。与比较化合物(例如,参比化合物1-5)相比,本发明化合物的半衰期(t1/2)显著增加,显示出人代谢稳定性的极大改善。
所公开的主题不限于本文所述的具体实施方案和实施例的范围。实际上,除了所描述的那些之外,根据前面的描述和附图,本公开的各种修改形式对于本领域技术人员将变得显而易见。此类修改旨在落入所附权利要求书的范围内。本文引用的所有参考文献(例如,出版物或专利或专利申请)出于所有目的全文以引用方式并入本文中,其程度就如同每个单独的参考文献(例如,出版物或专利或专利申请)被具体地和单独地表示为出于所有目的全文以引用方式并入。其他实施方案在以下权利要求书内。
Claims (26)
1.一种式(I)的化合物,
或其立体异构体或互变异构体形式,其中
R1选自由以下项组成的组:苯基、5元杂芳基和6元杂芳基,其各自被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基和CN,C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个独立地选自由卤基、羟基和CN组成的组的取代基取代;
R2选自由以下项组成的组:H、CHF2、CF3、C1-6烷基、C1-6烷基OC1-6烷基和C3-6环烷基;
Q表示选自由以下项组成的组的环:苯基、5元杂芳基和6元杂芳基;
n表示0、1、2或3;
每个R3独立地表示选自由以下项组成的组的取代基:CN、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、5元杂芳基、6元杂芳基、4-8元杂环基、卤基、N(RS)2、S(O)RS和S(O)2RS,C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、5元杂芳基、6元杂芳基、4-8元杂环基、N(RS)2、S(O)RS和S(O)2RS各自任选地被1个、2个、3个、4个或5个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、羟基、C1-6烷基和氧代基;RS各自独立地选自由以下项组成的组:H、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基;
Rx和Ry各自独立地选自由以下项组成的组:氢、C1-6烷基和C3-6环烷基;
其中排除了以下化合物:
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
2.根据权利要求1所述的化合物,其中R1是选自由以下项组成的组的环:苯基、5元杂芳基和6元杂芳基,其各自被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、C3-6环烷基、CF3、CHF2、OCHF2、CN和OCF3;
优选地,R1是选自由以下项组成的组的环:苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基,其各自被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、C3-6环烷基、CF3、CHF2、OCHF2、CN和OCF3。
3.根据前述权利要求中任一项所述的化合物,其中R1是苯基或吡啶基,其被1个、2个或3个取代基取代,所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组:卤基、C1-6烷基、CF3、CN和CHF2。
4.根据权利要求1所述的化合物,其中式(I)中的结构单元满足式(Ia)
其中R1a、R1b和R1c各自独立地选自由以下项组成的组:氢、卤基、C1-6烷基、C3-6环烷基、CF3、CHF2、OCHF2、CN和OCF3,其中R1a、R1b和R1c中的至少一者不为氢。
5.根据权利要求4所述的化合物,其中R1a和R1b独立地选自由以下项组成的组:卤基、CN、CHF2、CF3、OCHF2和OCF3,并且其中R1c为氢。
6.根据前述权利要求中任一项所述的化合物,其中R2选自由以下项组成的组:CHF2、CF3、C1-6烷基、C1-6烷基OC1-6烷基和C3-6环烷基;
式(I)的结构具有式(I-1)或式(I-2)
7.根据前述权利要求中任一项所述的化合物,其中R2为甲基或乙基。
8.根据前述权利要求中任一项所述的化合物,其中Q是选自由以下项组成的组的环:苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、吡唑基、咪唑基和噻唑基。
9.根据前述权利要求中任一项所述的化合物,其中式(I)中的结构单元满足式(Ib)
其中
X1、X2、X3、X4和X5均为CH;或者
X1、X2、X3、X4和X5中的一者或两者为N,并且其余为CH。
10.根据权利要求9所述的化合物,其中式(I)的所述结构单元满足式(Ic)
其中
X1、X2、X4和X5均为CH;
X2为N,并且X1、X4和X5为CH;或者
X1为N,并且X2、X4和X5为CH。
11.根据权利要求9或10所述的化合物,其中
X1和X2均为N,并且X4和X5为CH;
X2和X4均为N,并且X1和X5为CH;
X1和X4均为N,并且X2和X5为CH;或者
X1和X5均为N,并且X2和X4为CH。
12.根据前述权利要求中任一项所述的化合物,其中式(I)中的所述结构单元满足式(Ib′)
其中Y1、Y2、Y3和Y4中的一者或两者为S、N或NH,并且其余为C。
13.根据前述权利要求中任一项所述的化合物,其中卤基是F、Cl或Br。
14.根据前述权利要求中任一项所述的化合物,其中n为1或2。
15.根据前述权利要求中任一项所述的化合物,其中
Rx和Ry中的一者为氢,并且另一者为C1-6烷基或C3-6环烷基;或者
Rx和Ry均为H或C1-6烷基;或者
Rx和Ry各自独立地选自由C1-6烷基和C3-6环烷基组成的组。
16.根据前述权利要求中任一项所述的化合物,其中一个R3独立地选自由以下项组成的组:卤基、CH3、C(CH3)2OH、CH2CF3、CF3、OCHF2、SO2CH3、/>OCH3、CN、环丙基、NHCH2CF3、/>CHF2和/>
17.一种化合物,所述化合物选自由以下化合物组成的组,
或其立体异构体或互变异构体形式:
或其药学上可接受的盐、N-氧化物或溶剂化物。
18.一种化合物,所述化合物选自由以下化合物组成的组,或其立体异构体或互变异构体形式:
/>
/>
/>
或其药学上可接受的盐、N-氧化物或溶剂化物。
19.一种药物组合物,所述药物组合物包含根据权利要求1至18中任一项所述的化合物,并且还包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
20.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物或根据权利要求19所述的药物组合物,所述化合物或药物组合物用作药物。
21.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物或根据权利要求19所述的药物组合物,所述化合物或药物组合物用于在对其有需要的受试者中预防或治疗HBV感染或HBV引起的疾病。
22.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物或根据权利要求19所述的药物组合物,所述化合物或药物组合物用于预防或治疗慢性乙型肝炎。
23.一种在对其有需要的个体中治疗HBV感染或HBV引起的疾病的方法,所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据权利要求1至18中任一项所述的化合物或根据权利要求19所述的药物组合物。
24.一种包含第一化合物和第二化合物的产品,所述产品作为组合制剂同时、分开或相继用于在对其有需要的受试者中预防或治疗HBV感染或HBV引起的疾病,其中所述第一化合物不同于所述第二化合物,其中所述第一化合物是根据权利要求1至18中任一项所述的化合物或根据权利要求19所述的药物组合物,并且其中所述第二化合物是另一种HBV抑制剂。
25.根据权利要求24所述的产品,其中所述第二化合物是选自由以下项组成的组的另一种HBV抑制剂:选自HBV组合药物、HBV疫苗、HBV DNA聚合酶抑制剂、免疫调节剂、toll样受体(TLR)调节剂、干扰素α受体配体、透明质酸酶抑制剂、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制剂、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)抑制剂、亲环蛋白抑制剂、HBV病毒进入抑制剂、靶向病毒mRNA的反义寡核苷酸、短干扰RNA(siRNA)和ddRNAi核酸内切酶调节剂、核糖核苷酸还原酶抑制剂、HBV E抗原抑制剂、共价闭合环状DNA(cccDNA)抑制剂、法尼醇X受体激动剂、HBV抗体、CCR2趋化因子拮抗剂、胸腺素激动剂、细胞因子、核蛋白调节剂、视黄酸诱导型基因1刺激剂、NOD2刺激剂、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂、吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)途径抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、重组胸腺素α1、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、KDM抑制剂、HBV复制抑制剂、精氨酸酶抑制剂以及其他HBV药物的治疗剂。
26.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物或根据权利要求19所述的药物组合物,所述化合物或药物组合物用于预防或治疗受试者中的HBV感染或HBV引起的疾病,其中所述化合物或药物组合物与另一种HBV抑制剂联合施用于所述受试者。
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