CN116744927A - 稠合杂环衍生物及其在治疗hbv感染中的用途 - Google Patents

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CN116744927A CN202180088032.XA CN202180088032A CN116744927A CN 116744927 A CN116744927 A CN 116744927A CN 202180088032 A CN202180088032 A CN 202180088032A CN 116744927 A CN116744927 A CN 116744927A
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Abstract

本申请描述了稠合杂环衍生化合物、包含这些化合物的药物组合物、用于制备这些化合物的化学方法以及它们在治疗与HBV感染相关的疾病中的用途。

Description

稠合杂环衍生物及其在治疗HBV感染中的用途
技术领域
本申请涉及稠合杂环衍生化合物、包含这些化合物的药物组合物、用于制备这些化合物的化学方法以及它们在治疗与HBV感染相关的疾病中的用途。
背景技术
慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是重大的全球健康问题，影响着世界人口的超过5％(全世界超过3亿5千万的人口和美国125万的个体)。
尽管可获得预防性HBV疫苗，但是慢性HBV感染的负担因发展中国家大部分地区的次优治疗选择和持续的新感染率而仍旧为一个重大且未能应对的世界性医学问题。目前的治疗无法提供治愈并且仅受限于两类试剂(干扰素α和病毒聚合酶的核苷类似物/抑制剂)；药物耐受性、低功效和耐药性问题限制了它们的影响。HBV的低治愈率至少部分归因于这样的事实：病毒产生的完全抑制难以用单一的抗病毒剂来实现。然而，HBV DNA的持久性抑制减缓了肝脏疾病的发展并且有助于预防肝细胞癌。对于HBV感染患者的当前治疗目标旨在将血清HBV DNA降至很低或不可检出的水平，并最终减少或预防硬化症和肝细胞癌的发展。
HBV衣壳蛋白在病毒生命周期期间发挥着重要功能。HBV衣壳/核心蛋白形成了在细胞间通过的过程中保护病毒基因组的亚稳态病毒颗粒或蛋白质壳，并且还在复制过程中发挥核心作用，包括基因组衣壳化、基因组复制、以及病毒体形态形成和释放。衣壳结构还对环境信号作出响应，以允许在病毒进入之后脱壳。相一致地，已发现衣壳组装和解组装的适当时序、适当的衣壳稳定性和核心蛋白的功能对病毒感染至关重要。
HBV衣壳蛋白的关键功能对病毒衣壳蛋白序列施加严格的进化限制，导致观察到的低序列变异性和高保守性。相一致地，HBV衣壳中破坏其组装的突变是致命的，并且干扰衣壳稳定性的突变严重地削弱病毒复制。对多功能HBV核心/衣壳蛋白的高功能限制与高序列保守性一致，因为许多突变对功能有害。事实上，核心/衣壳蛋白序列在HBV基因型之间>90％相同，并且仅显示少量的多态残基。因此，对HBV核心/衣壳蛋白结合化合物的抗性选择可能难以在对病毒复制适应性没有大的影响的情况下进行选择。
描述结合病毒衣壳并抑制HIV、鼻病毒和HBV复制的化合物的报道提供了病毒衣壳蛋白作为抗病毒药物靶标的概念的有力药理学证据。
本领域需要可提高对病毒产生的抑制并且可治疗、改善和/或预防HBV感染的治疗剂。对HBV感染患者施用此类治疗剂，无论是单一治疗药物施用，还是与其它HBV治疗或辅助治疗联合施用，都将导致病毒载量显著降低、预后改善、疾病发展减慢并且转化率增强。
鉴于HBV的临床重要性，鉴定可增加对病毒产生的抑制并且可治疗、改善和/或预防HBV感染的化合物代表了在开发新治疗剂中的有吸引力的途径。本文提供了此类化合物。
发明内容
本公开涉及一般和优选的实施方案，这些实施方案分别由本文所附的独立和从属权利要求限定，这些权利要求以引用的方式并入本文中。本发明涉及能够调节衣壳组装的化合物。本发明的化合物可提供相对于现有技术化合物的有益的性质平衡，例如，它们可显示不同的特征，显示改善的溶解性等。因此，特别地，本公开涉及式(I)的化合物：
或其立体异构体或互变异构体形式，其中
R1选自由以下项组成的组：苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基，其各自被1个、2个或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组：卤代、C1-4烷基、C3-6环烷基、CN、CF3、CHF2、OCHF2和OCF3；
R2是氢或选自由以下项组成的组的取代基：CHF2、CF3、C1-4烷基、C1-4烷基OC1-4烷基和C3-6环烷基；
Q表示选自由以下项组成的组的环：苯基、五元芳族杂环和六元芳族杂环；
n表示1、2或3；
每个R3独立地表示选自由以下项组成的组的取代基：CF3、CHF2、CH2F、C1-6烷基、OC1-6烷基、OCF3、OCF2H和C3-6环烷基；
在n表示2或3的情况下，相邻环原子上的两个R3与所述环原子一起任选地形成5元环或6元环，所述环任选地包含1个、2个或3个各自独立地选自N、O和S的杂原子，所述环任选地带有一个或多个氟或氧代取代基；
W为CHR4并且X为CHR5，其中R4和R5各自独立地选自由以下项组成的组：氢、CONR6R7、苯基、5元杂环基、6元杂环基、5元杂芳基、6元杂芳基、C3-6环烷基、C1-4烷基、被以下项取代的C1-4烷基：OH、OC1-4烷基、卤代、COOH、CONR8R9 NHCOC1-4烷基、NHCOC3-6环烷基、5元杂芳基、6元杂芳基、SO2NHC1-4烷基、SO2NHC3-6环烷基、NHSO2C1-4烷基或NHSO2C3-6环烷基；其中R4和R5不都是氢；
R6和R7各自独立地选自由以下项组成的组：氢；C3-6环烷基；C1-4烷基；以及被卤代、OH或OC1-4烷基取代的C1-4烷基；或者R6和R7与R6和R7所连接的氮合在一起形成任选地取代的4元至8元单环杂环基；
R8和R9各自独立地选自由以下项组成的组：氢、C3-6环烷基；C1-4烷基；以及被卤代、OH或OC1-4烷基取代的C1-4烷基，或者R8和R9与R8和R9所连接的氮合在一起形成任选地取代的4元至8元单环杂环基；
或者W和X一起为CR10＝N或CR11＝CR12；
R10、R11和R12各自独立地选自由以下项组成的组：氢、卤代、CONR13R14、苯基、5元杂环基、6元杂环基、5元杂芳基、6元杂芳基、C3-6环烷基、C1-4烷基以及任选地被以下项取代的C1-4烷基：OH、OC1-4烷基、卤代、COOH、CONR15R16、NHCOC1-4烷基、NHCOC3-6环烷基、SO2NHC1-4烷基、SO2NHC3-6环烷基、NHSO2C1-4烷基或NHSO2C3-6环烷基；
R13和R14各自独立地选自氢、C1-4烷基、C3-6环烷基，或者R13和R14与R13和R14所连接的氮合在一起形成任选地取代的4元至8元单环杂环基；
R15和R16各自独立地选自由以下项组成的组：氢、C1-4烷基和C3-6环烷基，或者R15和R16与R15和R16所连接的氮合在一起形成任选地取代的4元至8元单环杂环基；
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
另外的实施方案包括式(I)化合物的药学上可接受的盐和溶剂化物、以及式(I)化合物的立体异构体和互变异构体形式、以及其药学上可接受的盐。
在多个实施方案中，式(I)的化合物为选自下文具体实施方式中所描述或例举的那些种类的化合物。
本公开还涉及包含一种或多种式(I)化合物以及式(I)化合物的药学上可接受的盐和溶剂化物的药物组合物。药物组合物还可包含一种或多种药学上可接受的赋形剂或一种或多种其它药剂或治疗剂。
本公开还涉及使用式(I)的化合物的方法或式(I)的化合物的用途。在多个实施方案中，式(I)的化合物用于治疗或改善乙型肝炎病毒(HBV)感染，增加对HBV产生的抑制、干扰HBV衣壳组装或其它HBV病毒复制步骤或其产生。所述方法包括向需要这种方法的受试者施用有效量的至少一种式(I)化合物以及式(I)化合物的药学上可接受的盐和溶剂化物。具体实施方式中示出了治疗方法的另外的实施方案。
具体实施方式
由本公开的以下实施方式并通过其实践，本公开主题的另外的实施方案、特征和优点将显而易见。为简明起见，将本说明书中所引用的出版物(包括专利)以引用的方式并入本文中。
在一个实施方案中，本文提供了式(I)的化合物，
或其立体异构体或互变异构体形式，其中
R1选自由以下项组成的组：苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基，其各自被1个、2个或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组：卤代、C1-4烷基、C3-6环烷基、CN、CF3、CHF2、OCHF2和OCF3；
R2是氢或选自由以下项组成的组的取代基：CHF2、CF3、C1-4烷基、C1-4烷基OC1-4烷基和C3-6环烷基；
Q表示选自由以下项组成的组的环：苯基、五元芳族杂环和六元芳族杂环；
n表示1、2或3；
每个R3独立地表示选自由以下项组成的组的取代基：CF3、CHF2、CH2F、C1-6烷基、OC1-6烷基、OCF3、OCHF2和C3-6环烷基；
在n表示2或3的情况下，相邻环原子上的两个R3与所述环原子一起任选地形成5元环或6元环，所述环任选地包含1个、2个或3个各自独立地选自N、O和S的杂原子，所述环任选地带有一个或多个氟或氧代取代基；
W是CHR4并且X是CHR5，其中R4和R5各自独立地选自由以下项组成的组：氢；CONR6R7；苯基；5元杂环基；6元杂环基；5元杂芳基；6元杂芳基；C3-6环烷基；C1-4烷基；以及被以下项取代的C1-4烷基：OH、OC1-4烷基、卤代、COOH、CONR8R9、NHCOC1-4烷基、NHCOC3-6环烷基、5元杂芳基、6元杂芳基、SO2NHC1-4烷基、SO2NHC3-6环烷基、NHSO2C1-4烷基或NHSO2C3-6环烷基；其中R4和R5不都是氢；
R6和R7各自独立地选自由以下项组成的组：氢；C3-6环烷基；C1-4烷基；以及被卤代、OH或OC1-4烷基取代的C1-4烷基，或者R6和R7与R6和R7所连接的氮合在一起形成任选地取代的4元至8元单环杂环基；
R8和R9各自独立地选自由以下项组成的组：氢；C3-6环烷基；C1-4烷基；以及被卤代、OH或OC1-4烷基取代的C1-4烷基，或者R8和R9与R8和R9所连接的氮合在一起形成任选地取代的4元至8元单环杂环基；
或者W和X一起为CR10＝N或CR11＝CR12；其中
R10、R11和R12各自独立地选自由以下项组成的组：氢、卤代、CONR13R14、苯基、5元杂环基、6元杂环基、5元杂芳基、6元杂芳基、C3-6环烷基、C1-4烷基以及被以下项取代的C1-4烷基：OH、OC1-4烷基、卤代、COOH、CONR15R16、NHCOC1-4烷基、NHCOC3-6环烷基、SO2NHC1-4烷基、SO2NHC3-6环烷基、NHSO2C1-4烷基或NHSO2C3-6环烷基；
R13和R14各自独立地选自氢、C1-4烷基、C3-6环烷基，或者R13和R14与R13和R14所连接的氮合在一起形成任选地取代的4元至8元单环杂环基；
R15和R16各自独立地选自氢、C1-4烷基、C3-6环烷基，或者R15和R16与R15和R16所连接的氮合在一起形成任选地取代的4元至8元单环杂环基；
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
在另一个实施方案中，本公开提供了如本文所述的式(IA)的化合物及其立体异构体或互变异构体及其药学上可接受的盐：
其中R1a、R1b和R1c各自独立地选自由以下项组成的组：氢、卤代、C1-4烷基、C3-6环烷基、CN、CF3、CHF2、OCHF2和OCF3，其中R1a、R1b和R1c中的至少一个不为氢，并且其中R2、W、X、Q、R3和n如针对式(I)所定义。
在另一个实施方案中，本公开提供了如本文所述的式(IB)的化合物及其立体异构体或互变异构体及其药学上可接受的盐：
其中R1a、R1b和R1c、W、X、R2、R3和n如针对式(IA)所定义。
在另一个实施方案中，本公开提供了如本文所述的式(IC)的化合物及其立体异构体或互变异构体及其药学上可接受的盐：
其中R1、W、X、R2、R3和n如针对式(I)所定义。
在又一个实施方案中，本公开提供了如本文所述的式(ID)的化合物及其立体异构体或互变异构体及其药学上可接受的盐：
其中R1、W、X、R2和R3如针对式(I)所定义。
在又另一个实施方案中，本公开提供了如本文所述的式(IE)的化合物及其立体异构体或互变异构体及其药学上可接受的盐：
其中R1a、R1b、R1c、W、X、R2和R3如针对式(IA)所定义。
在另一个实施方案中，本公开提供了如上文所定义的式(I)、(IA)、(IB)、(IC)、(ID)或(IE)中任一者的化合物，其中R4和R5中的一个为H，并且另一个选自由以下项组成的组：CONHC1-4烷基、C1-4烷基、被OH取代的C1-4烷基和被NHCOC1-4烷基取代的C1-4烷基。
在另一个实施方案中，本公开提供了如上文所定义的式(I)、(IA)、(IB)、(IC)、(ID)或(IE)中任一者的化合物，其中W和X一起为CH＝N或CH＝CH。
在另一个实施方案中，本公开提供了如上文所定义的式(IA)、(IB)或(IE)中任一者的化合物，其中R1a是卤代，诸如氯代，R1b选自由以下项组成的组：卤代(诸如氯代)和氰基，并且其中R1c是氢。
在另一个实施方案中，本公开提供了式(I)、(IA)、(IB)、(IC)、(ID)或(IE)中任一者的化合物，其中一个R3是OCHF2。
在另一个实施方案中，本公开提供了式(I)、(IA)、(IB)或(IC)中任一者的化合物，其中n为1。
在另一个实施方案中，本公开提供了式(I)、(IA)、(IB)或(IC)中任一者的化合物，其中n为1并且其中R3为OCHF2。
在一个实施方案中，本公开提供了式(I)、(IA)、(IB)、(IC)、(ID)或(IE)中任一者的化合物，其中R2为H或CH3。
本公开的另一个实施方案是选自由以下项组成的组的化合物：下表1中所述的化合物、其立体异构体或互变异构体或其药学上可接受的盐。
表1
药物组合物
本文还公开了药物组合物，该药物组合物包含
(A)至少一种在上文所定义的任一实施方案中的式(I)、(IA)、(IB)、
(IC)、(ID)或(IE)中任一者的化合物或其药学上可接受的盐，以及
(B)至少一种药学上可接受的赋形剂。
在多个实施方案中，药物组合物包含至少一种另外的活性剂或治疗剂。另外的活性治疗剂可包括例如抗HBV剂诸如HBV聚合酶抑制剂、干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、衣壳组装调节剂、逆转录酶抑制剂、免疫调节剂诸如TLR-激动剂、或影响HBV生命周期和/或HBV感染后果的任何其它药剂。将本公开的活性剂单独使用或者与一种或多种另外的活性成分联合使用以配制本公开的药物组合物。
如本文所用，术语“组合物”或“药物组合物”是指本公开内可用的至少一种化合物与药学上可接受的载体的混合物。药物组合物有助于将化合物施用于患者或受试者。本领域存在的多种施用化合物的技术包括但不限于静脉内、口服、气雾剂、肠胃外、眼部、肺部以及局部施用。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指参与在患者体内运载或转运本公开内可用的化合物或者将其运载或转运给患者的药学上可接受的材料、组合物或载体，例如液体或固体填料、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或包封材料。通常，此类构建体从身体的一个器官或部分运载或转运到身体的另一个器官或部分。各载体必须是“可接受的”，其意指与制剂的其它成分(包括本公开内可用的化合物)相容并且对患者无害。可用作药学上可接受的载体的材料的一些示例包括：糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉末化黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，诸如可可油和栓剂蜡；油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝蔴油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，诸如丙二醇；多元醇，诸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；表面活性剂；藻酸；不含热原的水；等渗盐水；林格氏液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；以及用于药物制剂中的其它非毒性相容物质。
如本文所用，“药学上可接受的载体”还包括与本公开内可用的化合物的活性相容的任何和所有包衣、抗菌剂和抗真菌剂、以及吸收延迟剂等等，并且对于患者是生理上可接受的。还可将辅助活性化合物掺入组合物中。用于实施本公开的药物组合物中可包括的其它附加成分在本领域中是已知的并且描述于例如Remington's Pharmaceutical Sciences(Genaro编，Mack Publishing Co.，1985，Easton，PA)，其以引用方式并入本文。
“药学上可接受的赋形剂”是指无毒的、生物学上可耐受的或换句话讲在生物学上适于施用于受试者的物质，诸如惰性物质，其被加到药理学组合物或换句话讲用作媒介物、载体或稀释剂以促进药剂的施用并且其与该药剂相容。赋形剂的示例包括碳酸钙、磷酸钙、多种糖和多类淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。
含有一个或多个剂量单位的活性剂的药物组合物的递送形式，可用本领域技术人员已知的或者可利用的合适药物赋形剂和配混技术进行制备。这些组合物在本发明方法中可通过合适的递送途径施用，例如通过口服途径、肠胃外途径、直肠途径、局部途径或眼部途径施用，或者通过吸入施用。
制剂可为片剂、胶囊、囊剂、糖衣丸剂、散剂、颗粒剂、锭剂、重构用散剂、液体制剂或栓剂的形式。优选地，所述组合物配制成供静脉输注、局部施用或口服施用。
对于口服施用，本公开的化合物可以片剂或胶囊剂的形式提供，或者作为溶液、乳液或悬浮液提供。为制备口服组合物，可将化合物配制成能产生例如约0.05mg/kg/天至约100mg/kg/天或者约0.05mg/kg/天至约35mg/kg/天或者约0.1mg/kg/天至约10mg/kg/天的剂量。例如，每天约5mg至5g的每日总剂量可由每天服药一次、两次、三次或四次来完成。
口服片剂可包括与药学上可接受的赋形剂诸如惰性稀释剂、崩解剂、粘结剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂混合的根据本公开的化合物。合适的惰性填充剂包括碳酸钠和碳酸钙、磷酸钠和磷酸钙、乳糖、淀粉、糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露糖醇、山梨醇等。示例性液态口服赋形剂包括乙醇、甘油、水等。淀粉、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羟基乙酸淀粉钠、微晶纤维素和海藻酸是合适的崩解剂。粘结剂可包括淀粉和明胶。润滑剂(当存在时)可为硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。如果需要，片剂可用材料诸如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯进行包衣，以延迟在胃肠道中的吸收，或者可用肠溶衣进行包衣。
用于口服施用的胶囊剂包括硬明胶胶囊和软明胶胶囊。为制备硬明胶胶囊，可将本公开的化合物与固体、半固体或液体稀释剂混合。软明胶胶囊可通过将本公开的化合物与水、油(诸如花生油或橄榄油)、液体石蜡、短链脂肪酸的单甘油酯和二甘油酯的混合物、聚乙二醇400或丙二醇混合来制备。
口服施用的液体可为悬浮液、溶液、乳液或糖浆的形式，或者可冻干或作为干燥品呈现，供临用前用水或其它合适的媒介物进行重构。此类液体组合物可任选地包含：药学上可接受的赋形剂，诸如悬浮剂(例如，山梨醇、甲基纤维素、海藻酸钠、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶等)；非水性媒介物，例如油类(例如杏仁油或分级椰子油)、丙二醇、乙醇或水；防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)；润湿剂，诸如卵磷脂；以及(如果需要)矫味剂或染色剂。
本公开的活性剂还可以通过非口服途径施用。例如，组合物可配制成栓剂供直肠施用。对于肠胃外使用，包括静脉内途径、肌肉内途径、腹膜内途径或皮下途径，本公开的化合物可以无菌水溶液剂或混悬剂的形式提供，这些形式被缓冲至适当的pH和等渗性或者在胃肠外可接受的油中。合适的含水媒介物包括林格氏溶液和等渗氯化钠。此类形式将以单位剂量形式呈现，诸如安瓿或一次性注射装置，以多剂量形式呈现，诸如可从其中抽取适当剂量的小瓶，或者以可用来制备可注射制剂的固体形式或预浓缩物形式呈现。示例性的输注剂量可为约1μg/kg/分钟至1000μg/kg/分钟的化合物的范围，与药物载体混合在数分钟至数天的时间里输注。
对于局部施用，化合物可以与药物载体混合在一起，药物与媒介物的浓度比为约0.1％至约10％。另一种施用本公开化合物的方式可采用贴剂来实现透皮递送。
另选地，本公开的化合物可以在本公开的方法中通过经鼻或经口途径吸入施用，例如以还含有合适载体的喷雾制剂的形式。
使用方法
所公开的化合物可用于预防或治疗对其有需要的哺乳动物、更特别是对其有需要的人的HBV感染或HBV引起的疾病。
在一个非限制性方面，这些化合物可以(i)调节或破坏HBV组装以及HBV复制或产生感染性颗粒所必需的其它HBV核心蛋白功能，(ii)抑制感染性病毒颗粒的产生或感染，或(iii)作为衣壳组装调节剂与HBV衣壳相互作用以产生具有降低的感染性或复制能力的有缺陷的病毒颗粒。特别地并且不受任何特定作用机制的束缚，据信所公开的化合物通过破坏、加速、减少、延迟和/或抑制不成熟或成熟颗粒的正常病毒衣壳组装和/或解组装，从而诱导异常衣壳形态，导致抗病毒作用诸如破坏病毒体组装和/或解组装、病毒体成熟、病毒排出和/或靶细胞感染而可用于HBV治疗。所公开的化合物可充当与成熟或未成熟病毒衣壳相互作用的衣壳组装破坏者，以扰乱衣壳的稳定性，从而影响其组装和/或解组装。所公开的化合物可扰乱病毒衣壳的稳定性、功能和/或正常形态所必需的蛋白质折叠和/或盐桥，从而破坏和/或加速衣壳组装和/或解组装。所公开的化合物可结合衣壳并且改变细胞多蛋白和前体的代谢，导致蛋白质单体和/或寡聚物和/或异常颗粒的异常累积，这导致细胞毒性和感染细胞的死亡。所公开的化合物可导致无法形成具有最佳稳定性的衣壳，影响病毒的有效脱壳和/或解组装(例如，在感染期间)。当衣壳蛋白不成熟时，所公开的化合物可破坏和/或加速衣壳组装和/或解组装。当衣壳蛋白成熟时，所公开的化合物可破坏和/或加速衣壳组装和/或解组装。所公开的化合物可在病毒感染期间破坏和/或加速衣壳组装和/或解组装，这可进一步减弱HBV病毒感染性和/或减少病毒载量。通过所公开的化合物破坏、加速、抑制、延迟和/或减少衣壳组装和/或解组装可从宿主生物体中根除病毒。通过所公开的化合物从受试者中根除HBV有利地避免了对慢性长期治疗的需要和/或减少长期治疗的持续时间。
本公开的另一个实施方案是治疗患有HBV感染的受试者的方法，该方法包括向需要这种治疗的受试者施用有效量的至少一种式(I)的化合物。
在另一个方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中减少与HBV感染相关的病毒载量的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中减少HBV感染的复发的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
此外，HBV充当丁型肝炎病毒(HDV)的辅助病毒，并且据估计全世界超过1500万人可能是HBV/HDV共感染者，其与单独患有HBV的患者相比快速进展成肝硬化的风险增加且具有增加的肝代偿失调(Hughes,S.A.等人Lancet 2011,378,73-85)。HDV因此感染患有HBV感染的受试者。在特定的实施方案中，本发明的化合物可用于治疗和/或预防HBV/HDV共感染或与HBV/HDV共感染相关的疾病。因此，在特定的实施方案中，HBV感染尤其是HBV/HDV共感染，并且哺乳动物(特别是人)可以是HBV/HDV共感染的或处于HBV/HDV共感染的风险中。
在另一方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中抑制或减少含HBV DNA的颗粒或含HBV RNA的颗粒的形成或存在的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中减少HBV感染的不利生理影响的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中诱导由HBV感染所致的肝损伤的缓解的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中减少针对HBV感染的长期抗病毒疗法的生理影响的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中预防性地治疗HBV感染的方法，其中该个体患有潜伏性HBV感染，该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在多个实施方案中，所公开的化合物适于单一治疗。在多个实施方案中，所公开的化合物可有效对抗自然或天然的HBV毒株。在多个实施方案中，所公开的化合物可有效对抗对目前已知药物有抗性的HBV毒株。
在另一个实施方案中，本文提供的化合物可用于调节(例如，抑制或破坏)HBVcccDNA的活性、稳定性、功能和病毒复制特性的方法中。
在又另一个实施方案中，本公开的化合物可用于减少或预防HBV cccDNA形成的方法中。
在另一个实施方案中，本文提供的化合物可用于调节(例如，抑制或破坏)HBVcccDNA活性的方法中。
在又另一个实施方案中，本公开的化合物可用于减少HBV cccDNA形成的方法中。
在另一个实施方案中，所公开的化合物可用于调节、抑制或破坏HBV RNA颗粒在感染细胞内的产生或从感染细胞释放的方法中。
在另一个实施方案中，调节HBV RNA颗粒的总负荷(或浓度)。在优选的实施方案中，减少HBV RNA的总负荷。
在另一个实施方案中，本文所提供的方法使个体中的病毒载量相比于施用选自由以下项组成的组的化合物而言更大程度地降低或以更快速率降低：HBV聚合酶抑制剂、干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、不同衣壳组装调节剂、不同或未知机制的抗病毒化合物、及其任何组合。
在另一个实施方案中，本文所提供的方法导致病毒突变的发生率和/或病毒抗性比施用选自由以下项组成的组的化合物更低：HBV聚合酶抑制剂、干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、不同衣壳组装调节剂、不同或未知机制的抗病毒化合物、及它们的组合。
在另一个实施方案中，本文所提供的方法还包括向该个体施用至少一种HBV疫苗、核苷HBV抑制剂、干扰素或其任何组合。
在一个方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中治疗HBV感染的方法，该方法包括通过如下方式降低HBV病毒载量：向该个体单独施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或与逆转录酶抑制剂联合施用；并且还向个体施用治疗有效量的HBV疫苗。
本公开的另一个实施方案是治疗患有HBV感染的受试者的方法，该方法包括向需要这种治疗的受试者施用有效量的至少一种式(I)的化合物。
在另一个方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中减少与HBV感染相关的病毒载量的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中减少HBV感染的复发的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中抑制或减少含HBV DNA的颗粒或含HBV RNA的颗粒的形成或存在的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中减少HBV感染的不利生理影响的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中诱导由HBV感染所致的肝损伤的缓解的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中减少针对HBV感染的长期抗病毒疗法的生理影响的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中预防性地治疗HBV感染的方法，其中该个体患有潜伏性HBV感染，该方法包括向该个体施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本文所提供的方法还包括监测受试者的HBV病毒载量，其中该方法进行一个时间段使得HBV病毒不可检出。
组合
本文提供了一种或多种所公开的化合物与至少一种另外的治疗剂的组合。在多个实施方案中，本文所提供的方法还可包括向个体施用至少一种另外的治疗剂。在多个实施方案中，所公开的化合物适于联合治疗。本公开的化合物可用于与一种或多种另外的用于治疗HBV感染的化合物组合。这些另外的化合物可包括本公开的化合物或已知治疗、预防或减轻HBV感染的症状或效应的化合物。
在示例性的实施方案中，另外的活性成分是那些已知或被发现可有效治疗与HBV感染中所涉及的病症或障碍的活性成分，诸如另一种HBV衣壳组装调节剂或者对与HBV感染中所涉及的该特定病症或障碍或HBV感染它本身有关的另一个靶标有活性的化合物。该组合可用于提高功效(例如通过在组合中包含可增强根据本公开所述的活性剂的效力或有效性的化合物)，降低一种或多种副作用，或者降低根据本公开所述的活性剂的所需剂量。在另一个实施方案中，在对其有需要的个体中预防性地治疗HBV感染的情况下，相比于需要实现类似结果而单独施用至少一种另外的治疗剂，本文所提供的方法允许以更低的剂量或频率施用该至少一种另外的治疗剂。
此类化合物包括但不限于HBV组合药物、HBV疫苗、HBV DNA聚合酶抑制剂、免疫调节剂、toll样受体(TLR)调节剂、干扰素α受体配体、透明质酸酶抑制剂、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制剂、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)抑制剂、亲环蛋白抑制剂、HBV病毒进入抑制剂、靶向病毒mRNA的反义寡核苷酸、短干扰RNA(siRNA)和ddRNAi核酸内切酶调节剂、核糖核苷酸还原酶抑制剂、HBV E抗原抑制剂、共价闭合环状DNA(cccDNA)抑制剂、法尼醇(famesoid)X受体激动剂、HBV抗体、CCR2趋化因子拮抗剂、胸腺素激动剂、细胞因子、核蛋白调节剂、视黄酸诱导型基因1刺激剂、NOD2刺激剂、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂、吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)途径抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、重组胸腺素α1、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、KDM抑制剂、HBV复制抑制剂、精氨酸酶抑制剂、以及影响HBV生命周期和/或影响HBV感染后果的任何其它药剂或它们的组合。
在多个实施方案中，本公开的化合物可与HBV聚合酶抑制剂、免疫调节剂、干扰素(诸如聚乙二醇化干扰素)、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、衣壳组装调节剂、逆转录酶抑制剂、亲环蛋白/TNF抑制剂、免疫调节剂(诸如TLR激动剂)、HBV疫苗、以及影响HBV生命周期和/或影响HBV感染后果的任何其它药剂或它们的组合联合使用。特别地，本公开的化合物可与一种或多种选自由以下项组成的组的药剂(或其盐)联合使用：
HBV逆转录酶抑制剂，以及DNA和RNA聚合酶抑制剂，包括但不限于：拉米夫定(3TC、Zeffix、Heptovir、Epivir和Epivir-HBV)、恩替卡韦(Baraclude、Entavir)、阿德福韦酯(Hepsara、Preveon、双-POM PMEA)、富马酸替诺福韦酯(Viread、TDF或PMPA)；
干扰素，包括但不限于干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)、干扰素λ(IFN-λ)、以及干扰素γ(IFN-γ)；
病毒进入抑制剂；
病毒成熟抑制剂；
文献描述的衣壳组装调节剂，诸如但不限于BAY 41-4109；
逆转录酶抑制剂；
免疫调节剂，诸如TLR-激动剂；以及
不同或未知机制的试剂，诸如但不限于AT-61((E)-N-(1-氯-3-氧代基-1-苯基-3-(哌啶-1-基)丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺)、AT-130((E)-N-(1-溴-1-(2-甲氧基苯基)-3-氧代基-3-(哌啶-1-基)丙-1-烯-2-基)-4-硝基苯甲酰胺)、以及类似的类似物。
在多个实施方案中，该另外的治疗剂是干扰素。术语“干扰素”或“IFN”是指抑制病毒复制和细胞增殖并且调节免疫应答的高度同源种特异性的蛋白质家族的任何成员。人干扰素被分组成三类：I类，其包括干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)、干扰素ω(IFN-ω)，II类，其包括干扰素γ(IFN-γ)，以及III类，其包括干扰素λ(IFN-λ)。如本文所用，术语“干扰素”涵盖已开发并可商购获得的重组形式的干扰素。如本文所用，术语“干扰素”还涵盖亚型干扰素，诸如化学改性或突变的干扰素。化学改性的干扰素包括聚乙二醇化干扰素和糖基化干扰素。干扰素的示例还包括但不限于干扰素-α-2a、干扰素-α-2b、干扰素-α-n1、干扰素-β-1a、干扰素-β-1b、干扰素-λ-1、干扰素-λ-2、以及干扰素-λ-3。聚乙二醇化干扰素的示例包括聚乙二醇化干扰素-α-2a和乙二醇化干扰素α-2b。
因此，在一个实施方案中，式I的化合物可与选自由以下项组成的组的干扰素联合施用：干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)、干扰素λ(IFN-λ)和干扰素γ(IFN-γ)。在一个具体的实施方案中，干扰素为干扰素-α-2a、干扰素-α-2b、或干扰素-α-n1。在另一个具体的实施方案中，干扰素-α-2a或干扰素-α-2b是聚乙二醇化的。在一个优选的实施方案中，干扰素-α-2a是聚乙二醇化干扰素-α-2a(PEGASYS)。
在另一个实施方案中，附加治疗剂选自免疫调节剂或免疫刺激剂治疗剂，其包括属于干扰素类的生物制剂。
此外，附加治疗剂可为破坏其它原发性病毒蛋白或HBV复制或持久生存所需的宿主蛋白的功能的试剂。
在另一个实施方案中，附加治疗剂为阻断病毒进入或成熟或者靶定HBV聚合酶诸如核苷或核苷酸或非核苷类聚合酶抑制剂的抗病毒剂。在联合治疗的另一个实施方案中，逆转录酶抑制剂和/或DNA和/或RNA聚合酶抑制剂是齐多夫定、地达诺新、扎西他滨、ddA、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、恩曲他滨、恩替卡韦、阿立他滨、阿替韦拉平(Atevirapine)、三氮唑核苷、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、缬更昔洛韦、替诺福韦、阿德福韦、PMPA、西多福韦、依非韦伦、奈韦拉平、地拉夫定或依曲韦林。
在一个实施方案中，附加治疗剂为诱导天然限制性免疫应答的免疫调节剂，从而导致针对无关病毒诱导免疫应答。换句话讲，免疫调节剂可影响抗原递呈细胞的成熟、T细胞的增殖和细胞因子释放(例如，IL-12、IL-18、IFN-α、IFN-β和IFN–γ以及TNF-α等等)。
在另一个实施方案中，附加治疗剂为TLR调节剂或TLR激动剂，诸如TLR-7激动剂或TLR-9激动剂。在联合治疗的另一个实施方案中，TLR-7激动剂选自SM360320(9-苄基-8-羟基-2-(2-甲氧基-乙氧基)腺嘌呤)和AZD 8848([3-({[3-(6-氨基-2-丁氧基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)丙基][3-(4-吗啉基)丙基]氨基}甲基)苯基]乙酸甲酯)。
在本文提供的方法中的任一种中，该方法还可包括向个体施用至少一种HBV疫苗、核苷HBV抑制剂、干扰素或其任何组合。在一个实施方案中，HBV疫苗选自RECOMBIVAX HB、ENGERIX-B、ELOVAC B、GENEVAC-B、或SHANVAC B中的至少一种。
在另一个方面，本文提供了一种在对其有需要的个体中治疗HBV感染的方法，该方法包括通过如下方式降低HBV病毒载量：向该个体单独施用治疗有效量的本公开化合物或与逆转录酶抑制剂联合施用；并且还向个体施用治疗有效量的HBV疫苗。该逆转录酶抑制剂可为以下中的一种：齐多夫定、地达诺新、扎西他滨、ddA、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、恩曲他滨、恩替卡韦、阿立他滨、阿替韦拉平(Atevirapine)、三氮唑核苷、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、缬更昔洛韦、替诺福韦、阿德福韦、PMPA、西多福韦、依非韦伦、奈韦拉平、地拉夫定或依曲韦林。
对于本文所述的任何联合治疗，可例如使用诸如以下合适的方法计算协同效应：Sigmoid-Emax公式(Holford&Scheiner,19981,Clin.Pharmacokinet.6:429-453)、Loewe相加模型公式(Loewe&Muischnek,1926,Arch.Exp.Pathol Pharmacol.114:313-326)和中值效应公式(Chou&Talalay,1984,Adv.Enzyme Regul.22:27-55)。可将以上提及的各个公式用于实验数据来生成对应的图，以助于评估药物的组合效应。与以上提及公式相关联的对应曲线图分别是浓度-效应曲线、等效应曲线图以及联合指数曲线。
方法
本申请涉及一种用于制备如本文所述的式(I)的化合物的方法。
该方法包括步骤a)、b)、c)、d)、e)和f)中的至少一个步骤：
a)使式(II)的化合物与式(III)的化合物/>在NaBH3CN的存在下发生反应，以形成式(IV)的化合物/>
其中
G1是取代的苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基；
G3是氢，选自以下的基团：CHF2、CF3、C1-4烷基、C1-4烷基OC1-4烷基和C3-6环烷基；
G4是取代的苯基、或6元或5元芳族杂环；
b)使式(V)的化合物与式(VI)的化合物/>在碘化钾(KI)的存在下发生反应，以形成式(VII)的化合物/>
其中G1是取代的苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基或吡嗪基；
G5是氢或选自以下的基团：CHF2、CF3、C1-4烷基、C1-4烷基OC1-4烷基和C3-6环烷基；
G6是取代的苯基、或5元或6元芳族杂环；
c)使式(VIII)的化合物与1,5,7-三氮杂二环[4.4.0]癸-5-烯(TBD)或三甲基铝(Al(CH3)3)任选地在1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)的存在下发生反应，以形成式(IX)的化合物/>其中
R是氢或
G1是取代的苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基或叔丁醇；
G7是取代的苯基或5元或6元芳族杂环；
G8是氢、CHF2、CF3、C1-4烷基、C1-4烷基OC1-4烷基或C3-6环烷基；
d)使式(X)的化合物与式(XI)的化合物/>在非亲核碱(更具体地碳酸铯(Cs2CO3)、氢化钠(NaH)、氢氧化钠或氢氧化钠/苄基三乙基氯化铵)的存在下发生反应，以形成式(XII)的化合物/>
其中G1是取代的苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基或吡嗪基；
G9是氢、CHF2、CF3、C1-4烷基、C1-4烷基OC1-4烷基或C3-6环烷基，
G6是取代的苯基、或5元或6元芳族杂环；
L是溴化物、氯化物或碘化物；
W和X如式(I)-(IC)中所定义；
e)使式(XIII)的化合物与强酸(更具体地盐酸(HCl)或三氟乙酸(TFA)发生反应，以形成式(XIV)的化合物/>
其中G11是H、取代的苯基或5元或6元芳族杂环；
f)使式(XIV)的化合物与式(XV)的化合物/>在非亲核碱(更具体地是碳酸钠(Na2CO3)、三乙胺(Et3N)、二异丙基乙胺(DIPEA)的存在下发生反应，以形成式(XVI)的化合物/>
其中R1如针对式(I)-(IC)的化合物所定义，并且其中G11已在步骤e)中定义，
条件是
当该方法包括步骤a时，该方法还包括步骤c，
当该方法包括步骤b时，该方法还包括步骤c，并且
当该方法包括步骤e时，该方法还包括步骤f。
定义
以下列出了用于描述本公开的各种术语的定义。除非在特定情况下另作限定，当术语在整篇说明书和权利要求中单独地或作为较大基团的一部分使用时，这些定义均适用于该术语。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语通常具有与适用领域中普通技术人员通常所理解的相同的含义。一般来讲，本文所用的命名以及细胞培养、分子遗传、有机化学和肽化学中的实验规程在本领域中是众所周知且普遍应用的。
如本文所用，冠词“一个”和“一种”是指一个或多于一个(即至少一个)冠词的语法对象。以举例的方式，“元件”是指一个元件或多于一个元件。此外，使用的术语“包括”以及其他形式，如“包括”、“包含”和“含有”不是限制性的。
如说明书和权利要求中所用，术语“包含”可包括实施方案“由...组成”和“基本上由...组成”。如本文所用，术语“包含”、“包括”、“具有”、“可以”、“含有”及其变体旨在是开放式过渡性短语、术语或词语，其需要存在所命名的成分/步骤并且允许存在其它成分/步骤。然而，此类描述应被解释为也将组合物或方法描述为“由所列举的化合物组成”和“基本上由所列举的化合物组成”，其允许仅存在指定的化合物以及任何药学上可接受的载体，并且排除其它化合物。本文公开的所有范围包括所述的端点并且可独立地组合(例如，“50mg至300mg”的范围包括端点50mg和300mg，以及所有中间值)。本文公开的范围的端点和任何值不限于精确的范围或值；它们是足够不精确的，以包括接近这些范围和/或值的值。
如本文所用，可以应用近似语言来修改可以变化而不导致与其相关的基本函数改变的任何定量表示。因此，在一些情况下，由一个或多个术语诸如“基本上”修饰的值不能被限制为所指定的精确值。在至少一些情况下，近似语言可以对应于用于测量该值的仪器的精度。
作为基团或作为另一个基团的一部分的术语“烷基”是指在链中具有碳和氢原子的直链或支链烷基基团。烷基基团的示例包括甲基(Me，其也可在结构上以符号“/”表示)、乙基(Et)、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基(tBu)、戊基、异戊基、叔戊基、己基、异己基以及根据本领域的普通技能和本文提供的教导会被认为与前述示例中的任何一者等同的基团。如本文所用的术语C1-4烷基是指链中具有1个至4个碳原子的直链或支链烷基基团。本文所用的术语C1-6烷基是指链中具有1个至6个碳原子的直链或支链烷基基团。
术语“C3-6环烷基”是指具有3个至6个环原子的饱和单环碳环。环烷基基团的说明性示例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
术语“苯基”代表以下部分：
术语“杂芳基”是指具有5个至10个环成员，并含有碳原子和1个至4个杂原子的单环芳族环系或二环芳族环系，所述杂原子独立地选自N、O和S。具有5个或6个成员的芳族环(其中所述环由碳原子组成并具有至少一个杂原子成员)包括在术语杂芳基内。合适的杂原子包括氮、氧和硫。在5元环的情况下，杂芳基环优选地含有氮、氧或硫中的一个成员，此外还含有至多3个附加的氮。在6元环的情况下，杂芳环优选地含有1个至4个(例如四唑基)、更具体地1个至3个氮原子。对于其中6元环具有3个氮原子的情况，最多2个氮原子是相邻的。杂芳基的示例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、喹啉基、异喹啉基和喹唑啉基。除非另外指明，否则杂芳基在导致稳定结构的任何杂原子或碳原子上与其侧基连接。
本领域技术人员将认识到，上文列出或举例说明的杂芳基基团并非穷举性的，并且还可选择在这些限定术语范围内的其它物质。
除非另有说明，否则术语“杂环基”表示具有例如4个至8个环成员、更通常5个至6个环成员的非芳族单环或双环系统。单环基团的示例是含有4个至8个环成员的基团，更通常为5个或6个环成员。含有至少一个选自氮、氧或硫(N、O、S)的杂原子的单环杂环系的非限制性示例包括但不限于4元至8元杂环系，诸如氧杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吡喃基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基。除非另有说明，每一个都可通过任何可利用的环碳原子或氮原子与分子的其余部分结合，并且如果可能的话，根据实施方案可以任选地在碳和/或氮原子上被取代。4元至8元单环杂环基的任选取代基包括OH、OC1-4烷基、卤代、COOH、CONHCH3、NHCOC1-4烷基、NHCOC3-6环烷基和C1-4烷基。
术语“氰基”是指基团-CN。
术语“卤代”或“卤素”表示氯、氟、溴或碘。
术语“氧代”表示＝O。
术语“取代的”是指指定的基团或部分带有一个或多个取代基。术语“未取代的”是指特定的基团不带有取代基。术语“任选地取代的”是指特定的基团是未取代的或者被一个或多个取代基取代。如果术语“取代的”用于描述结构体系，则指取代在该体系上任何化合价允许的位置处发生。在指定的部分或基团没有明确指出被任何指定取代基任选地取代或取代的情况下，应理解这种部分或基团旨在表示是未被取代的。
术语“对位”、“间位”和“邻位”具有如本领域所理解的含义。因此，例如，完全取代的苯基基团在邻近苯环连接点的两个“邻”(o)位、两个“间”(m)位和连接点对面的一个“对”(p)位具有取代基。为了进一步澄清位于苯环的取代基的位置，这2个不同的邻位将被命名为“邻位和邻位'”，并且2个不同的间位被命名为“间位和间位’”。
当指吡啶基基团上的取代基时，术语“对位”、“间位”和“邻位”是指相对于吡啶基环连接点的取代基位置。例如，下方的结构被描述为具有在邻位的X1取代基、在间位的X2取代基、和在对位的X3取代基的3-吡啶基：
为了提供更简明的描述，本文给出的一些数量表述没有用术语“约”修饰。应当理解，无论是否明确使用术语“约”，本文所给出的每个量意在指实际的给定值，并且其还意在指根据本领域一般技术将可合理推理得到的这些给定值的近似值，包括这些给定值的由实验和/或测量条件所引起的等价值和近似值。当收率以百分数的形式给出时，这种收率是指被给出该收率的实体的质量与同一实体在特定化学计量条件下可获得的最大量之比。除非另外指明，否则以百分数形式给出的浓度是指质量比。
根据它们的标准含义，术语“缓冲的”溶液或“缓冲”液在本文中可互换使用。缓冲液被用于控制介质的pH，并且它们的选择、使用和功能是本领域的普通技术人员已知的。参见，例如，G.D.Considine编，Van Nostrand’sEncyclopedia of Chemistry，第261页，第5版(2005)的描述，尤其是，缓冲溶液以及缓冲成分的浓度如何与缓冲液的pH值相关联。例如，通过将MgSO4和NaHCO3以10:1的重量/重量比例添加到溶液中，以保持溶液的pH值为约7.5，从而获得缓冲溶液。
本文给出的任何式旨在表示具有该结构式所示的结构的化合物以及某些变型或形式。具体地，本文给出的任何式的化合物可具有不对称中心，因此以不同的对映体形式存在。通式所示的化合物的所有光学异构体及其混合物，均被认为是在该式的范围内。因此，本文给出任何式旨在表示外消旋体、一种或多种对映体形式、一种或多种非对映体形式、一种或多种阻转异构体、及其混合物。此外，某些结构可以作为几何异构体(即顺式和反式异构体)、作为互变异构体或作为阻转异构体存在。
还应当理解，那些具有相同分子式，但是在它们的原子键合的性质或顺序或它们的原子的空间排列上有所不同的化合物，被称为“异构体”。
彼此不为镜像的立体异构体称为“非对映体”，而彼此为不重叠镜像的立体异构体称为“对映体”。当化合物具有非对称中心时，例如，其被键合到四个不同的基团，并且一对对映体是可能的。对映体可由其不对称中心的绝对构型来表征，并且通过Cahn和Prelog的R-和S-顺序规则，或通过分子旋转偏振光平面并且命名为右旋或左旋(即分别为(+)或(-)异构体)的方式来描述。手性化合物可以其单独的对映体或以其混合物的形式存在。包含相同比例的对映体的混合物被称为“外消旋混合物”。
“互变异构体”是指为特定化合物结构的可互换形式，并且氢原子和电子的位置发生变化的化合物。因此，两种结构可经由π电子与原子(通常为H)的移动而处于平衡。例如，烯醇与酮是互变异构体，因为它们迅速地通过用酸或碱处理而互相转化。互变异构的另一个示例是同样通过用酸或碱处理形成的苯基硝基甲烷的“酸-”和“硝基-”形式。
互变异构体形式可能与所关注的化合物的最佳化学活性和生物学活性的获得相关。
本公开的化合物可具有一个或多个非对称中心；因此，此类化合物可作为单独的(R)-或(S)-立体异构体或作为其混合物制备。
除非另外指明，否则在说明书和权利要求中对特定化合物的描述或命名旨在包括其单独的对映体和混合物，所述混合物为外消旋混合物或其它混合物。立体化学的测定方法和立体异构体的分离方法是本领域熟知的。
某些示例包含被描绘成绝对的对映体的化学结构，但旨在表示具有未知构型的对映体纯物质。在这些情况下，(R*)或(S*)或(*R)或(*S)在名称中用于表示对应的立构中心的绝对立体化学是未知的。因此，被命名为(R*)或(*R)的化合物是指具有(R)或(S)的绝对构型的对映体纯化合物。在绝对的立体化学已被确认的情况下，使用(R)和(S)命名结构。
符号和/>用于表示本文所示的化学结构中相同的空间排列。类似的，符号/>和/>用于表示本文所示的化学结构中相同的空间排列。
某些式(I)的化合物或式(I)的化合物的药学上可接受的盐可以作为溶剂化物获得。溶剂化物包括由本公开的化合物与一种或多种溶剂相互作用或络合而形成的那些，其为溶液或为固体或晶体形式。在一些实施方案中，溶剂为水并且溶剂化物为水合物。
本文中对化合物的提及代表着对以下任何一者的提及：(a)这种化合物的实际述及的形式，和(b)这种化合物在提到化合物时所考虑的该化合物所处介质中的任何形式。例如，本文中对化合物诸如R-COOH的提及涵盖对例如R-COOH(s)、R-COOH(sol)和R-COO- (sol)中的任一者的提及。在此示例中，R-COOH(s)是指固体化合物，其例如可以为片剂或某些其它固体药物组合物或制剂的形式；R-COOH(sol)是指化合物在溶剂中的未离解形式；而R-COO- (sol)是指化合物在溶剂中的离解形式，诸如化合物在含水环境中的离解形式，无论此类离解形式是衍生自R-COOH、其盐还是衍生自在所考虑介质中经解离后产生R-COO-的任何其它实体。在另一个示例中，诸如“使实体暴露于式R-COOH的化合物”的表述是指使该实体暴露于化合物R-COOH在发生该暴露的介质中所存在的一种或多种形式。在又一个示例中，诸如“使实体与式R-COOH的化合物反应”之类的表述是指使(a)这种实体(为这种实体在发生该反应的介质中所存在的一种或多种化学相关形式)与(b)化合物R-COOH在发生该反应的介质中所存在的一种或多种化学相关形式反应。就这一点而言，如果该实体例如处于含水环境中，则应理解化合物R-COOH是在该相同介质中，因此该实体正被暴露于诸如R-COOH(aq)和/或R-COO- (aq)之类的物质，其中下标“(aq)”根据其在化学和生物化学中的常规含义代表“含水”。在这些命名示例中选择了羧酸官能团；然而，此选择并非意图进行限定，而仅为举例说明。应当理解，可用其它官能团提供类似的示例，这些官能团包括但不限于羟基、碱性氮成员(诸如在胺中的那些)和任何其它在含有该化合物的介质中按照已知方式进行相互作用或转化的基团。此类相互作用和转化包括但不限于解离、缔合、互变异构、溶剂分解包括水解、溶剂化包括水合、质子化和去质子化。就这一点本文不提供进一步的示例，因为在给定介质中的这些相互作用和转化为本领域任何普通技术人员所知。
在另一个示例中，本文通过提及已知会形成两性离子的化合物而涵盖两性离子化合物，即使它未被明确以其两性离子形式提到。诸如一种或多种两性离子及其同义词两性离子化合物之类的术语是IUPAC认可的标准名称，这些名称是众所周知的，并且是经定义的科学名称的标准集的一部分。在这点上，两性离子这个名称被生物学关联化学实体数据库(Chemical Entities of Biological Inerest，ChEBI)的分子实体词典分配CHEBI:27369这个名称标识。众所周知，两性离子或两性离子化合物是具有相反符号的形式单位电荷的中性化合物。有时，这些化合物用术语“内盐”来称谓。其它资料称这些化合物为“偶极离子”，不过这个术语被另外的其它资料认为是误称。作为具体示例，氨基乙酸(氨基酸甘氨酸)具有式H2NCH2COOH，并且它以两性离子+H3NCH2COO-形式存在于一些介质中(在这种情况下是在中性介质中)。两性离子、两性离子化合物、内盐和偶极离子这些术语按其已知和公认的含义落入本公开的范围内，如本领域普通技术人员在任何情况下均如此理解的。由于不必命名本领域普通技术人员会认识到的每一个实施方案，因此本文中没有明确给出与本公开化合物相关联的两性离子化合物的结构。但是，其为本公开实施方案的一部分。在这点上，本文中没有提供更多的示例，因为在给定介质中导致产生给定化合物的各种形式的相互作用和转化是本领域任何普通技术人员已知的。
本文给定的任何式还旨在表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有本文给出式所描绘的结构，不同的是一个或多个原子被具有选定的原子量或质量数的原子所代替。可以掺入到本公开化合物中的同位素的示例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，分别诸如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F、36Cl、125I。此类同位素标记的化合物可用于代谢研究(优选地用14C)、反应动力学研究(用例如氘(即，D或2H)；或氚(即，T或3H))、检测或成像技术，诸如正电子发射断层显像(PET)或单光子发射计算机断层显像(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定，或在患者的放射性治疗中。具体地，18F或11C标记的化合物对于PET或SPECT研究可能是尤其优选的。此外，用较重的同位素如氘(即2H)进行置换可以提供由更大的代谢稳定性所带来的某些治疗优势，例如体内半衰期延长或需要的剂量减少。同位素标记的本公开的化合物通常可以通过用容易获得的同位素标记的试剂替代非同位素标记的试剂以执行下文描述的“方案”中或“实施例和制备”中所公开的程序来制备。
当提及本文给出的任何式时，对于指定的变量，从可能的种类的列表中选择具体的部分并非意图限定所述变量在其它地方出现时要选择相同的种类。换句话讲，除非另外指明，否则当变量不止一次出现时，从指定列表中选择该种类与对式别处的同一变量选择该种类无关。
根据上文关于指派和命名的解释，应当理解，当在化学上有意义时和除非另外说明，本文明确提及一集合时，意味着独立提及该集合的各实施方案，并且是提及被明确提及的该集合的各个亚集合的各个和每一个可能实施方案。
作为取代基术语的第一个示例，如果取代基S1 实施例是S1和S2中的一者，并且取代基S2 实施例是S3和S4中的一者，然后这些指派是指根据以下选择给出的本公开的实施方案：S1 实施例是S1，并且S2 实施例是S3；S1 实施例是S1，并且S2 实施例是S4；S1 实施例是S2，并且S2 实施例是S3；S1 实施例是S2，并且S2 实施例是S4；以及此类选择中的每一个选择的等效物。较短的术语“S1 实施例是S1和S2中的一者，并且S2 实施例是S3和S4中的一者”因此在本文中为了简洁起见使用，但不是以限制的方式使用。上述以通用术语陈述的关于取代基术语的第一个示例，是旨在举例说明本文描述的不同取代基指派。当适用时，本文对取代基给出的上述约定延伸至诸如R1、R2、R3、R4、R5、G1、G2、G3、G4、G5、G6、G7、G8、G9、G10、G11、n、L、R、T、Q、W、X、Y和Z的成员以及本文所用的任何其它通用取代基符号。
此外，当对任何成员或取代基给出多于一种指派时，本公开的实施方案包括可从所列举的指派独立选取而作出的多种分组，及其等同物。作为取代基术语的第二个示例，如果本文所述的取代基S实施例是S1、S2和S3中的一者，则该列表是指这样的本公开实施方案：S实施例是S1；S实施例是S2；S实施例是S3；S实施例是S1和S2中的一者；S实施例是S1和S3中的一者；S实施例是S2和S3中的一者；S实施例是S1、S2和S3中的一者；并且S实施例是这些选择中的每一个选择的任何等效物。较短的术语“S实施例是S1、S2和S3中的一者”因此在本文中为了简洁起见使用，但不是以限制的方式使用。上述以通用术语陈述的关于取代基术语的第二个示例，是旨在举例说明本文描述的不同取代基指派。当适用时，本文对取代基给出的上述约定延伸至诸如R1、R2、R3、R4、R5、G1、G2、G3、G4、G5、G6、G7、G8、G9、G10、G11、n、L、R、T、Q、W、X、Y和Z的成员以及本文所用的任何其它通用取代基符号。
其中j>i的命名“Ci-j”，当在本文中应用于一类取代基时，意在指这样的本公开实施方案：从i到j(包括i和j在内)的碳成员数目中的各个和每一个都是独立实现的。以举例的方式，术语C1-4独立地指具有一个碳成员的实施方案(C1)、具有两个碳成员的实施方案(C2)、具有三个碳成员的实施方案(C3)和具有四个碳成员的实施方案(C4)。
术语Cn-m烷基是指脂族链(无论是直链还是支链的)，其中链中碳成员的总数N满足n≤N≤m，并且m>n。本文提及的任何二取代基是指当允许多于一种此类可能性时包含各种连接可能性。例如，本文提及二取代基–A-B-(其中A≠B)时，是指A连接第一被取代成员而B连接第二被取代成员的二取代基，其也指A连接第二被取代成员而B连接第一被取代成员的二取代基。
本公开还包括式(I)的化合物的药学上可接受的盐，优选上文所述的那些和本文例示的具体化合物的药学上可接受的盐，以及用此类盐进行治疗的方法。
术语“药学上可接受的”是指经联邦或州政府的监管机构或美国以外的国家的相应机构批准或可被其批准或在美国药典或其它公认的药典中被列为用于动物，尤其是人类。
“药学上可接受的盐”旨在表示由式(I)表示的化合物的游离酸或碱的盐，该盐是无毒的、生物学上可耐受的或以其它方式在生物学上适于施用给受试者。它应当具有母体化合物的所需的药理学活性。一般地，参见G.S.Paulekuhn等人，“Trends in ActivePharmaceutical Ingredient Salt Selection based on Analysis of the Orange BookDatabase”,J.Med.Chem.,2007,50:6665–72；S.M.Berge等人，“Pharmaceutical Salts”,JPharm Sci.,1977,66:1-19；以及Handbook of Pharmaceutical Salts,Properties,Selection,and Use,Stahl和Wermuth编辑，Wiley-VCH and VHCA,Zurich,2002。药学上可接受的盐的示例是那些药理学有效且适于与患者组织接触而不会有不当毒性、刺激或过敏反应的盐。式(I)的化合物可具有足够酸性的基团、足够碱性的基团或这两种类型的官能团，并因此与多种无机碱或有机碱以及无机酸和有机酸反应以形成药学上可接受的盐。
如本文所用，术语“组合物”或“药物组合物”是指本文提供的至少一种化合物与药学上可接受的载体的混合物。药物组合物有助于将化合物施用于患者或受试者。本领域存在的多种施用化合物的技术包括但不限于静脉内、口服、气雾剂、肠胃外、眼部、肺部以及局部施用。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指参与在患者体内运载或转运本文提供的化合物或者将其运载或转运给患者的药学上可接受的材料、组合物或载体，例如液体或固体填料、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或包封材料。通常，此类构建体从身体的一个器官或部分运载或转运到身体的另一个器官或部分。各载体必须是“可接受的”，其意指与制剂(包括本文提供的化合物)中其它成分相容并且对患者无害。可用作药学上可接受的载体的材料的一些示例包括：糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉末化黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，诸如可可油和栓剂蜡；油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝蔴油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，诸如丙二醇；多元醇，诸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；表面活性剂；藻酸；不含热原的水；等渗盐水；林格氏液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；以及用于药物制剂中的其它非毒性相容物质。如本文所用，“药学上可接受的载体”还包括与本文提供的化合物的活性相容的任何和所有包衣、抗菌剂和抗真菌剂、以及吸收延迟剂等等，并且对于患者是生理可接受的。还可将辅助活性化合物掺入到组合物中。“药学上可接受的载体”还可以包括本文提供的化合物的药学上可接受的盐。可包括在本文提供的药物组合物中的其它附加成分是本领域中是已知的并且描述于例如Remington'sPharmaceutical Sciences(Genaro编，Mack Publishing Co.,1985,Easton,PA)中，其以引用方式并入本文。
如本文所用，术语“稳定剂”是指能够化学地抑制或防止本文所公开的化合物降解的聚合物。将稳定剂添加到化合物制剂中以改善化合物的化学和物理稳定性。
如本文所用，术语“片剂”表示可口服给药的单剂量固体剂型，其可通过常规压片工艺压制药物物质或其药学上可接受的盐与合适的赋形剂(例如填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂和/或表面活性剂)来制备。
如本文所用，术语“胶囊”是指固体剂型，其中药物包封在硬或软的可溶性容器或“壳”内。容器或壳可由明胶、淀粉和/或其它合适的物质形成。
如本文所用，术语“有效量”、“药学有效量”和“治疗有效量”是指无毒但足以提供期望生物学结果的试剂用量。结果可以是疾病的体征、症状或病因减轻或缓和，或生物系统的任何其它所需的改变。在任何个体情况中，适当的治疗剂量可通过本领域的普通技术人员用常规实验测定出。
如本文所用，术语“组合”、“治疗组合”、“药物组合”或“组合产品”是指用于组合施用的非固定组合或成套药盒，其中两种或更多种治疗剂可独立施用、在时间间隔内同时或分开施用，尤其是在这些时间间隔允许组合伙伴显示出合作效应，例如协同效应的情况下。
术语“调节剂”包括抑制剂和活化剂，其中“抑制剂”是指降低、预防、灭活、脱敏或下调HBV组装和HBV复制或生成感染性颗粒所必需的其它HBV核心蛋白功能的化合物。
如本文所用，术语“衣壳组装调节剂”是指破坏或促进或抑制或阻碍或延迟或减少或修饰正常的衣壳组装(例如，在成熟期间)或正常的衣壳解组装(例如，在感染期间)或干扰衣壳稳定性的化合物，由此诱导异常的衣壳形态和功能。在一个实施方案中，衣壳组装调节剂促进衣壳组装和/或解组装，由此诱导异常的衣壳形态。在另一个实施方案中，衣壳组装调节剂与主要衣壳组装蛋白(CA)相互作用(例如，在活性位点结合，在别构部位结合，修饰和/或阻碍折叠等等)，由此破坏衣壳组装或解组装。在又另一个实施方案中，衣壳组装调节剂致使CA的结构或功能扰乱(例如，CA组装、解组装，结合至底物，折叠为合适构象的能力等)，其使病毒感染性衰减和/或对病毒是致死的。
如本文所用，术语“处理”或“治疗”被定义为向具有HBV感染、HBV感染的症状或者有发展成HBV感染的可能性的患者施加或施用治疗剂，即本公开的化合物(单独或与另一种药剂组合)，或者将治疗剂施加或施用于与患者分离的组织或细胞系(例如，用于诊断或体外施用)，目的在于治愈、医治、减轻、缓解、改变、补救、改进、改善或影响HBV感染、HBV感染的症状或者发展成HBV感染的可能性。此类治疗可基于获自药物基因组学领域的知识进行修改或改进。
如本文所用，术语“预防”或“防止”意指如果还未发生，则疾病或障碍没有发展，或者如果该障碍或疾病已经发生，则障碍或疾病没有进一步发展。还考虑了预防与障碍或疾病相关联的一些或所有症状的能力。
如本文所用，术语“患者”、“个体”或“受试者”是指人类或非人类哺乳动物。非人类哺乳动物包括例如牲畜和宠物，诸如绵羊、牛、猪、犬科、猫科和鼠科哺乳动物。优选地，患者、受试者或个体是人类。
在根据本公开的治疗方法中，将有效量的根据本公开的药剂施用于患有或诊断有此类疾病、障碍或病症的受试者。“有效量”是指足以总体上在需要对指定疾病、障碍或病症进行这种治疗的患者中产生期望的治疗或预防有益效果的量或剂量。本公开的化合物的有效量或剂量可通过常规方法确定，如建模、剂量递增研究或临床试验，和通过考虑常规因素来确定，如施用或药物递送的方式或途径，化合物的药代动力学，疾病、障碍或病症的严重程度和病程，受试者之前进行和现在进行的疗法，患者的健康状况和对药物的响应，以及主治医师的判断。剂量的示例在约0.001mg至约200mg化合物/kg受试者体重/天的范围内。化合物的剂量的示例为约1mg至约2,500mg。
一旦患者的疾病、障碍或病症发生改善，可以将剂量调整为预防性或维持性的治疗。例如，施用的剂量或频次或者这两方面可根据症状而降低到能维持期望的治疗或预防作用的水平。当然，如果症状已减轻到适当的水平，可停止治疗。然而，患者可能因病征的任何复发而需要长期的间歇性治疗。
可根据所公开的方法治疗的HBV感染包括HBV基因型A、B、C和/或D感染。然而，在一个实施方案中，所公开的方法可以治疗任何HBV基因型(“泛基因型治疗”)。HBV基因分型可使用本领域已知的方法进行，该方法例如HBV基因分型(InnogeneticsN.V.,Ghent,Belgium)。
为了帮助本申请的读者，已将说明书分成各个段落或章节。这些分割不应被认为是将段落或章节的实质与另一段落或章节的实质拆开。相反，本说明书涵盖可预期的各个章节、段落和句子的所有组合。
本文所引用的所有参考文献的每个相关公开内容以引用的方式明确并入本文中。提供以下实施例是为了举例说明，而不是为了限制。
实施例
现在将参考示例性合成方案来描述可用于本公开的方法中的示例性化合物，以用于下文的它们的一般性制备和后面的具体实施例。本领域技术人员将认识到，为获得本文的多种化合物，可适当地选择原料，使得在根据需要进行保护或不保护的情况下，在整个反应方案中将携带最终需要的取代基，以得到所期望的产物。另选地，可能需要或者希望采用合适的基团代替最终期望的取代基，该合适的基团可经历整个反应方案，并且在适当情况下用所期望的取代基代替。除非另外指明，否则变量均如上文针对式(I)和式(Ia)所定义。反应可在溶剂的熔点和回流温度之间进行，并且优选在介于0℃和溶剂的回流温度之间进行。可采用常规加热或微波加热来加热反应。反应还可在密闭压力容器中在高于溶剂的正常回流温度下进行。
式(I)、(IA)、(IB)、(IC)、(ID、(ID)和(IE)中任一者的化合物可使用本领域普通技术人员已知的方法转变成它们相应的盐。例如，将式(I)的胺用三氟乙酸、HCl或柠檬酸在溶剂(诸如Et2O、CH2Cl2、THF、MeOH、氯仿或异丙醇)中进行处理，得到相应的盐形式。作为另外一种选择，通过反相HPLC纯化条件，获得三氟乙酸或甲酸盐。用极性溶剂(包括极性溶剂的混合物和极性溶剂的水性混合物)或用非极性溶剂(包括非极性溶剂的混合物)，通过重结晶可以获得式(I)、(IA)、(IB)、(IC)、(ID、(ID)和(IE)的化合物的药学上可接受的盐的结晶形式。
如果根据本公开的化合物具有至少一个手性中心，则它们可以对映体形式相应地存在。如果化合物具有两个或更多个手性中心，则它们另外可以非对映体形式存在。应当理解，所有的此类异构体及其混合物涵盖在本公开的范围内。
通过SFC拆分来分离表示为“立体异构体混合物”(意指两种或更多种立体异构体的混合物，并且包括对映体、非对映体及它们的组合)的化合物。
化合物可通过形式特异性合成或者通过拆分来作为单一形式(诸如单一对映体)获得。作为另外一种选择，化合物可作为各种形式的混合物(诸如外消旋混合物(1:1)或非外消旋混合物(非1:1))获得。在获得对映体的外消旋混合物和非外消旋混合物的情况中，可以使用本领域普通技术人员已知的常规分离方法诸如手性层析、重结晶、非对映体盐形成法、衍生成非对映体加合物、生物转化或酶促转化来分离单一对映体。在获得区域异构体混合物或非对映体混合物的情况下，如适用，可以使用常规方法诸如层析法或结晶来分离单一异构体。
1.一般信息
化学名
使用化学软件ACD/ChemSketch产生化学名，并且可优选地遵循IUPAC规则。
LCMS方法的一般程序
高效液相色谱(HPLC)测量使用LC泵、二极管阵列(DAD)或UV检测器和如相应方法中所规定的柱来进行。
将来自柱的流送入配置有大气压离子源的质谱仪(MS)。设置调整参数(例如，扫描范围、驻留时间……)以便获得允许识别化合物的标称单同位素分子量(MW)的离子在技术人员的知识范围内。用适当的软件进行数据采集。
通过实验保留时间(Rt)和离子来描述化合物。如果没有不同地规定，则所报告的分子离子对应于[M+H]+(质子化分子)和/或[M-H]-(去质子化分子)。在化合物不可直接电离的情况下，指定加合物的类型(即[M+NH4]+、[M+HCOO]-等)。所有结果都是在具有通常与所用方法相关的实验不确定性的情况下获得的。
在下文中，“SQD”表示单四极检测器，“MSD”表示质量选择检测器，“RT”表示室温，“BEH”表示桥接乙基硅氧烷/二氧化硅杂化物，“DAD”表示二极管阵列检测器，“HSS”高强度二氧化硅，“Q-Tof”四极杆飞行时间质谱仪，“CLND”表示化学发光氮检测器，“ELSD”表示蒸发光扫描检测器。
NMR分析
1H NMR谱记录在1)Bruker DPX 400MHz光谱仪、或2)a Bruker Avance 400MHz光谱仪、或c)Bruker Avance III 400MHz光谱仪、或d)Bruker Avance 600MHz光谱仪、或e)Bruker Avance NEO 400MHz光谱仪、或f)Bruker model AVIII 400光谱仪、g)ZKNJ BIXI-1300MHz、Bruker Avance III 400MHz、或h)Bruker AVANCE Neo 400MHz上。
除非另有说明，在环境温度下记录NMR谱。数据报告如下：在标度上相对于TMS(δ＝0ppm)的以百万分之几(ppm)计的化学位移、积分、多重态(s＝单峰、d＝双峰、t＝三重峰、q＝四重峰、quin＝五重峰、sext＝六重峰、sept＝七重峰、m＝多重峰、b＝宽峰、或这些的组合)、以赫兹(Hz)计的耦合常数J。
MS分析
除非另外指明，否则在Shimadzu LCMS-2020MSD或Agilent1200/G6110A MSD上使用正离子模式的电喷雾电离(ESI)获得质谱。
2.缩写
表7
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实验程序
中间体Int A
中间体Int A-1：
(R)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯盐酸盐
将(R)-3-乙基6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5(4H)-二甲酸5-叔丁酯(10.0g，100％纯度，32.3mmol)在二氧杂环己烷(100mL)中的4M盐酸盐中的混合物在氮气气氛下在室温搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩，得到呈黄色固体的标题化合物(8.0g，通过HNMR测得的95％纯度，96％收率)，无需进一步纯化。LC-MS(ESI):RT＝0.5min，C10H15N3O2的质量计算值为209.1，m/z实测值为210.2[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.68(br s,1H),9.50(br s,1H),4.36-4.17(m,5H),3.75-3.50(m,1H),3.05(d,J＝16.0Hz,1H),2.75-2.69(m,1H),1.45-1.37(m,3H),1.34-1.26(m,3H)。
中间体Int A：
(R)-5-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶- 3-甲酸乙酯
在0℃下，向4-氯-3-氰基苯甲酸(5.9g，100％纯度，32.5mmol)在二氯甲烷(60mL)中的混合物中逐滴添加N,N-二甲基甲酰胺(235mg，3.22mmol)和草酰氯(4mL，47.3mmol)。在室温、氮气气氛下，搅拌2小时后，在减压下浓缩混合物。将所得残余物和(R)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯盐酸盐Int A-1(8.0g，95％纯度，30.9mmol)溶解在二氯甲烷(60mL)中，随后在0℃下逐滴添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(16mL，96.8mmol)。在搅拌1小时后，将混合物倾注到水(60mL)中并用1M盐酸盐水溶液调节至pH 5-6，并且用二氯甲烷(60mL)萃取两次。将合并的有机层减压浓缩。将所得残余物通过C18柱纯化(乙腈:水(+0.02％乙酸铵)＝10％至75％)，得到呈黄色固体的标题化合物(9.3g，90％纯度，69.1％收率)。LC-MS(ESI):RT＝1.38min，C18H17ClN4O3的质量计算值为372.1，m/z实测值为373.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.81(br s,1H),7.75(s,1H),7.61(s,2H),5.76-5.36(m,1H),4.82-4.17(m,4H),3.19-2.95(m,1H),2.71(d,J＝16.0Hz,1H),1.38(s,3H),1.26(s,3H)。
中间体Int B
中间体Int B-1：
(R)-5-(3,4-二氯苯甲酰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3- 甲酸乙酯
以与中间体Int A类似的方式合成中间体Int B-1。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.55(br s,1H),7.76-7.73(m,2H),7.45(d,J＝9.2Hz,1H),5.52-5.14(m,1H),4.59-4.01(m,4H),2.98(app s,1H),2.74-2.51(m,1H),1.45-0.99(m,6H)。
中间体Int B：
(R)-5-(3,4-二氯苯甲酰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3- 甲酸
在室温下，向(R)-5-(3,4-二氯苯甲酰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯Int B-1(2.0g，100％纯度，5.23mmol)在甲醇(30mL)中的混合物中添加在水(6mL)中的氢氧化钠(525mg，13.1mmol)。在50℃下，搅拌8小时后，在减压下浓缩混合物。将残余物用水(20mL)稀释，用1M盐酸盐水溶液调节至pH 4-5，并且用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。浓缩滤液，得到呈白色固体的所需产物(1.8g，95％纯度，92.3％收率)。LC-MS(ESI):RT＝1.25min，C15H13Cl2N3O3的质量计算值为353.0，m/z实测值为354.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.25(br s,2H),7.75(d,J＝8.4Hz,2H),7.46(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),5.39-5.22(m,1H),4.45(s,1H),4.15-4.08(m,1H),2.99-2.90(m,1H),2.55-2.45(m,1H),1.10(s,3H)。
化合物1B和1D
中间体1-3：
2-((1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)氨基)-3-羟基丙酸甲酯
向(S)-2-氨基-3-羟基丙酸甲酯盐酸盐1-1(6g，50.4mmol)在甲醇(50mL)中溶液中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(8.5mL，51.43mmol)。在室温下，搅拌30分钟后，在室温下添加1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙酮1-2(4.6g，24.7mmol)和氰基硼氢化钠(2.4g，38.2mmol)。在50℃下，搅拌过夜后，将混合物用0.5M盐酸盐水溶液(30mL)淬灭并且用乙酸乙酯(60mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(60mL)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液浓缩，并通过C18柱纯化(乙腈:水＝55％至60％)，得到呈白色固体的标题化合物(2.5g，90％纯度，31.5％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.49min，C13H17F2NO4的质量计算值为289.3，m/z实测值为290.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.32-7.27(m,2H),7.09-7.06(m,2H),6.49(t,J＝73.2Hz,1H),3.84-3.80(m,1H),3.78-3.71(m,2H),3.65(s,2H),3.62-3.48(m,2H),3.36-3.34(m,0.6H),3.20-3.17(m,0.4H),2.78(br s,0.5H),2.47(br s,0.5H),1.37(d,J＝6.4Hz,3H)。
中间体1-4：
(6R)-3-乙基2-(2-((1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙 基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5(4H)-二甲酸5-叔丁酯
在0℃下，向2-((1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)氨基)-3-羟基丙酸甲酯1-3(2.4g，90％纯度，7.47mmol)和三苯基膦(4.9g，18.7mmol)在四氢呋喃(50mL)中的混合物中添加(E)-二氮烯-1,2-二甲酸二叔丁酯(4.3g，18.7mmol)，随后添加(R)-3-乙基6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5(4H)-二甲酸5-叔丁酯(3.0g，92％纯度，8.92mmol)。在40℃下搅拌过夜后，将混合物冷却至室温并且在减压下浓缩以获得残余物，将该残余物通过C18柱纯化(乙腈:水＝50％至75％)，得到呈黄色油状物的标题化合物(1.5g，100％纯度，34.6％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.89min，C28H38F2N4O7的质量计算值为580.6，m/z实测值为581.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.21(d,J＝8.4Hz,1H),7.02(d,J＝8.4Hz,1H),6.96-6.94(m,2H),6.47(t,J＝74Hz,1H),5.05(br s,1H),4.91-4.65(m,3H),4.41-4.23(m,2H),4.15-4.09(m,2H),3.76-3.46(m,5H),3.00-2.89(m,1H),2.58-2.54(m,1H),1.51-1.49(m,9H),1.40-1.35(m,3H),1.26-1.23(m,3H),1.16-1.09(m,3H)。
中间体1-5：
(6R)-5-(叔丁氧基羰基)-2-(2-羧基-2-((1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)氨基) 乙基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸
在0℃下，向(6R)-3-乙基2-(2-((1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5(4H)-二甲酸5-叔丁酯1-4(1.5g，100％纯度，2.58mmol)在甲醇(4mL)和四氢呋喃(12mL)中溶液中添加氢氧化锂水合物(589mg，14.0mmol)的水(4mL)溶液。在30℃下，搅拌1小时后，将混合物用水(15mL)稀释，用0.5M盐酸盐水溶液酸化至pH～5并用乙酸乙酯(15mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液，得到呈黄色油状物的标题化合物(1.2g，98％纯度，84.5％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.29min，C25H32F2N4O7的质量计算值为538.5，m/z实测值为537.0[M-H]-。
中间体1-6：
(3R)-2-(叔丁氧基羰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代- 1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8-甲酸
在30℃下，将(6R)-5-(叔丁氧基羰基)-2-(2-羧基-2-((1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)氨基)乙基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸1-5(1.2g，98％纯，2.18mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(1.5g，11.6mmol)、2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基异脲鎓六氟磷酸盐(V)(1.1g，2.89mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(70mL)中的混合物搅拌14小时。用盐酸盐水溶液将混合物酸化至pH＝6，并且用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用水(X 3)、盐水洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，得到残余物，将该残余物用C18柱纯化(乙腈:水＝40％至60％)，得到呈黄色油状物的标题化合物(700mg，94％纯度，71％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.34min，C25H30F2N4O6的质量计算值为520.5，m/z实测值为519.0[M-H]-。
中间体1-7：
(3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-(羟基甲基)-3-甲基-10-氧代-3,4, 7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(3R)-2-(叔丁氧基羰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8-甲酸1-6(700mg，94％纯度，1.26mmol)和4-甲基吗啉(612mg，6.05mmol)在四氢呋喃(15mL)中的溶液中添加氯甲酸异丁酯(500mg，3.66mmol)。在0℃下，搅拌1小时后，添加硼氢化钠(229mg，6.05mmol)，并且继续搅拌1小时。将混合物用饱和氯化铵水溶液(15mL)淬灭，用乙酸乙酯(15mL)稀释，用水(15mL)洗涤两次，经Na2SO4干燥并真空浓缩以留下残余物。将残余物用C18纯化(乙腈:水＝40％至65％)，得到呈黄色油状物的所需产物(350mg，97％纯度，53％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.63min，C25H32F2N4O5的质量计算值为506.5，m/z实测值为507.1[M+H]+。
中间体1-8：
(3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-8-(((甲基磺酰基)氧基)甲 基)-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔 丁酯
在0℃下，向(3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-(羟甲基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯1-7(350mg，97％纯度，0.670mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加三乙胺(210mg，2.08mmol)和甲磺酰氯(120mg，1.05mmol)。在室温下，将反应物搅拌14小时。将混合物用二氯甲烷(10mL)稀释并用水(25mL)洗涤。将有机层用盐水(25mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩，得到残余物，将该残余物通过C18柱纯化(乙腈:水＝45％至70％)，得到呈黄色固体的所需产物(300mg，97％纯度，74.3％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.70min，C26H34F2N4O7S的质量计算值为584.6，m/z实测值为585.0[M+H]+。
中间体1-9：
(3R)-8-(氨基甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-3,4, 7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯
向(3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-8-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯1-8(300mg，97％纯度，0.498mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(12mL)中的溶液中添加叠氮化钠(100mg，1.54mmol)。在50℃下，搅拌36小时后，将反应混合物冷却至室温，用水(2mL)和四氢呋喃(10mL)稀释，随后添加三苯基膦(485mg，1.85mmol)。在搅拌1小时后，将混合物用乙酸乙酯(15mL)稀释，用水(15mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在真空下浓缩，得到残余物。通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化粗残余物，得到呈白色固体的标题化合物(195mg，78％纯度，60.4％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.55min，C25H33F2N5O4的质量计算值为505.6，m/z实测值为506.3[M+H]+。
中间体1-10：
(3R)-8-(乙酰胺基甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代- 3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(3R)-8-(氨基甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯1-9(195mg，78％纯度，0.301mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加乙酸酐(160mg，1.57mmol)和三乙胺(160mg，1.58mmol)。在该温度下搅拌1小时后，将反应混合物倾注到水(10mL)中，用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩，并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝1:1至二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(150mg，通过LCMS测得的100％纯度，74.7％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.63min，C27H35F2N5O5的质量计算值为547.6，m/z实测值为548.0[M+H]+。
中间体1-11：
N-(((3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9, 10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)甲基)乙酰胺盐酸盐
在0℃下，向(3R)-8-(乙酰胺基甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯1-10(150mg，100％纯度，0.274mmol)在1,4-二氧杂环己烷(0.5mL)中的溶液中添加在二氧杂环己烷(3mL)中的4M盐酸盐。在0℃下，搅拌4小时后，浓缩反应混合物，得到呈白色油状物的标题化合物(150mg，通过LCMS测得的86％纯度，97.3％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.47min，C22H28ClF2N5O3的质量计算值为483.9，m/z实测值为448.0[M+H]+。
化合物1：
N-(((3R)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲 基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)甲基) 乙酰胺
在30℃下，将N-(((3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)甲基)乙酰胺盐酸盐1-11(150mg，86％纯度，0.267mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(180mg，1.39mmol)、4-氯-3-氰基苯甲酸(84mg，0.463mmol)、2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基异脲鎓六氟磷酸盐(V)(204mg，0.537mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物搅拌14小时。用盐酸盐水溶液将混合物酸化至pH＝6，并且用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用水、盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，得到残余物，将该残余物用C18柱纯化(乙腈:水＝40％至60％)，得到呈白色固体的标题化合物(165mg，100％纯度，88.9％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.58min，C30H29ClF2N6O4的质量计算值为611.0，m/z实测值为611.0M+H]+。
化合物1B和1D：
N-(((3R,8R*)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((S*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙 基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8- 基)甲基)乙酰胺(1B)和
N-(((3R,8S*)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((S*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙 基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8- 基)甲基)乙酰胺(1D)
将N-(((3R)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)甲基)乙酰胺化合物1的外消旋物(187mg，100％纯度，0.306mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件：柱：Chiralpak IA 5μm20mm*250mm；流动相：CO2:MeOH(0.2％ DEA)＝65:35，3.0mL/min；柱温：40℃；波长：214nm，背压：100巴)，得到呈白色固体的化合物1C(18.5mg，99.6％纯度，9.9％收率，97.7％立体异构纯(stereopure))、呈白色固体的化合物1D(20.4mg，98.3％纯度，10.7％收率，98.3％立体异构纯)和包含两个峰的片段(60mg)。将该片段(60g)再次通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件：柱：Chiralpak IB 5μm 20mm*250mm；流动相：Hex:EtOH＝50:50，30mL/min；温度：30℃；波长：254nm)，得到呈白色固体的化合物1A(6.8mg，99.9％纯度，3.6％收率，98.4％立体异构纯)和呈白色固体的化合物1B(9.3mg，99.5％纯度，4.9％收率，100.0％立体异构纯)。
化合物1A：
LC-MS(ESI):RT＝3.534min，C30H29ClF2N6O4的质量计算值为611.0，m/z实测值为611.2[M+H]+。手性分析(柱：Chiralpak IA 5μm4.6mm*250mm；流动相：Chiralpak IA 5um4.6mm*250mm；流动相：CO2:MeOH(0.2％ DEA)＝65:35，3g/min；温度：40℃；波长：214nm；背压：100巴；RT＝2.63min)。1H NMR(400M Hz,CDCl3)7.74(s,1H),7.60-7.57(m,4H),7.14(d,J＝8.4Hz,2H),6.52(t,J＝76.8Hz,1H),5.94(br s,1H),5.44-5.41(m,1H),4.90-4.41(m,3H),4.36-4.16(m,3H),3.11(br s,1H),2.79-2.55(m,3H),1.87(s,3H),1.67-1.65(m,3H),1.27-1.26(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)-81.00(s,1F),-81.05(s,1F)。
化合物1B：
LC-MS(ESI):RT＝3.590min，C30H29ClF2N6O4的质量计算值为611.0，m/z实测值为611.2[M+H]+。手性分析(柱：Chiralpak IA 5μm4.6mm*250mm；流动相：Chiralpak IA 5um4.6mm*250mm；流动相：CO2:MeOH(0.2％ DEA)＝65:35，3g/min；温度：40℃；波长：214nm；背压：100巴；RT＝2.98min)。1H NMR(400M Hz,CDCl3)7.75(s,1H),7.60(s,2H),7.41(d,J＝8.4Hz,2H),7.09(d,J＝8.4Hz,2H),6.51(t,J＝76.4Hz,1H),5.99(br s,1H),5.83-5.80(m,1H),5.40-4.53(m,3H),4.22-4.19(m,1H),3.85-3.76(m,3H),3.08(br s,1H),2.79-2.64(m,2H),1.98(s,3H),1.83-1.81(m,3H),1.28-1.26(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)-81.12(s,2F)。
化合物1C：
LC-MS(ESI):RT＝3.628min，C30H29ClF2N6O4的质量计算值为611.0，m/z实测值为611.3[M+H]+。手性分析(柱：Chiralpak IA 5μm4.6mm*250mm；流动相：Chiralpak IA 5um4.6mm*250mm；流动相：CO2:MeOH(0.2％ DEA)＝65:35，3g/min；温度：40℃；波长：214nm；背压：100巴；RT＝4.12min)。1H NMR(400M Hz,CDCl3)7.75(s,1H),7.61(s,2H),7.43-7.41(m,2H),7.10(d,J＝8.4Hz,2H),6.51(t,J＝70.8Hz,1H),6.00(br s,1H),5.82-5.79(m,1H),5.70-5.42(m,1H),4.62-4.29(m,2H),4.22-4.18(m,1H),3.87-3.84(m,1H),3.79-3.68(m,2H),3.02(br s,1H),2.77-2.65(m,2H),1.98(s,3H),1.83-1.81(m,3H),1.30-1.29(m,3H)。19FNMR(376MHz,CDCl3)-81.10(s,2F)。
化合物1D：
LC-MS(ESI):RT＝3.534min，C30H29ClF2N6O4的质量计算值为611.0，m/z实测值为611.2[M+H]+。手性分析(柱：Chiralpak IA 5μm4.6mm*250mm；流动相：Chiralpak IA 5um4.6mm*250mm；流动相：CO2:MeOH(0.2％ DEA)＝65:35，3g/min；温度：40℃；波长：214nm；背压：100巴；RT＝5.81min)。1H NMR(400M Hz,CDCl3)7.74(s,1H),7.61(s,2H),7.56(br s,2H),7.14(d,J＝8.4Hz,2H),6.53(t,J＝73.6Hz,1H),5.93(br s,1H),5.70-5.39(m,2H),4.63-4.41(m,3H),4.22-4.16(m,2H),3.04(br s,1H),2.74-2.58(m,3H),1.86(s,3H),1.69-1.67(m,3H),1.29-1.27(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)-81.03(s,2F)。
化合物2B
中间体2-1：
(3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-8-(甲基氨基甲酰基)-10-氧 代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯
在0℃下，将(3R)-2-(叔丁氧基羰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8-甲酸1-6(1.2g，64％纯度，1.48mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(1.71g，13.2mmol)、甲胺盐酸盐(300mg，4.44mmol)和2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基异脲鎓六氟磷酸盐(V)(842mg，2.21mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的混合物在氮气下搅拌2小时。用0.05M盐酸盐水溶液将混合物酸化至pH＝6，并且用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用水(60mL)洗涤三次、用盐水(60mL)洗涤，经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，得到残余物，将该残余物用C18柱纯化(乙腈:水＝50％至65％)，得到呈白色固体的标题化合物(570mg，通过HNMR测得的90％纯度，65％收率)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.36-7.33(m,1H),7.17-7.12(m,2H),6.52(t,J＝73.2Hz,1H),6.23-6.11(m,1H),5.27-4.64(m,4H),4.31-4.16(m,2H),4.04-3.92(m,1H),2.98-2.86(m,1H),2.86-2.77(m,2H),2.59-2.54(m,1H),2.26-2.22(m,1H),1.60-1.59(m,3H),1.50(s,9H),1.14-1.05(m,3H)。
中间体2-2：
(3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9, 10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8-甲酰胺盐酸盐
在20℃下，将(3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-8-(甲基氨基甲酰基)-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯2-1(400mg，90％纯度，0.675mmol)在二氧杂环己烷(20mL，80mmol)中的4M盐酸盐(g)中的溶液搅拌2小时。浓缩混合物，得到呈黄色固体的标题产物(320mg，通过LCMS测得的98％纯度，99％收率)。RT＝1.26min和1.33min，C21H26ClF2N5O3的质量计算值为433.2，m/z实测值为434.2[M+H]+。
化合物2：
(3R)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-二甲 基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8-甲酰胺
在30℃下，将(3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8-甲酰胺盐酸盐2-2(320mg，98％纯度，0.667mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(776mg，6.00mmol)、4-氯-3-氰基苯甲酸(133mg，0.732mmol)和2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基异脲鎓六氟磷酸盐(V)(381mg，1.00mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中的混合物在氮气下搅拌14小时。用0.05M盐酸盐水溶液将混合物酸化至pH＝6，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层用水(30mL)洗涤三次、用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，得到残余物，将该残余物用C18柱纯化(乙腈:水＝65％至70％)，得到呈白色固体的标题化合物(280mg，通过LCMS测得的98％纯度，69％收率)。RT＝1.59min，C29H27ClF2N6O4的质量计算值为596.2，m/z实测值为597.0[M+H]+。
化合物2B：
(3R,8S*)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((S*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)- N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8- 甲酰胺(2B)
将(3R)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8-甲酰胺化合物2(280mg，98％纯度，0.460mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件：柱：Chiralpak OA 5μm 20mm*250mm；流动相：Hex:EtOH＝40:60，12mL/min；温度：30℃；波长：254nm)，提供呈白色固体的化合物2A(9.6mg，98.3％纯度，3.4％收率，100％立体异构纯)、化合物2B(26.1mg，99.1％纯度，9.4％收率，99.9％立体异构纯)、化合物2C(29.4mg，98.6％纯度，10.5％收率，99.4％立体异构纯)和化合物2D(17.9mg，98.0％纯度，6.4％收率，96.7％立体异构纯)。
化合物2A：
RT＝8.234min，C29H27ClF2N6O4的质量计算值为596.2，m/z实测值为597.2[M+H]+。手性HPLC(柱：Chiralpak IA 5μm 4.6mm*250mm；流动相：己烷:EtOH＝40:60，1.0mL/min；温度：30℃；波长：254nm,RT＝4.938min)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.18-8.10(m,1H),7.87-7.83(m,2H),7.57(br s,1H),7.41-7.01(m,5H),5.77-5.68(m,1H),5.53-5.20(m,1H),4.53-4.33(m,3H),4.30-4.08(m,2H)，3.00-2.81(m,1H),2.66-2.58(m,1H),2.18(s,3H),1.57-1.50(m,3H),1.20-1.09(m,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-82.33(s,2F)。
化合物2B：
RT＝3.349min，C29H27ClF2N6O4的质量计算值为596.2，m/z实测值为597.1[M+H]+。手性HPLC(柱：Chiralpak IA 5μm 4.6mm*250mm；流动相：己烷:EtOH＝40:60，1.0mL/min；温度：30℃；波长：254nm,RT＝7.687min)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20-8.11(m,2H),7.87-7.82(m,2H),7.41(br s,2H),7.24-7.05(m,3H),5.84-5.69(m,1H),5.53-5.19(m,1H),4.56-4.10(m,5H),2.95-2.83(m,1H),2.68-2.61(m,1H),2.58(d,J＝4.4Hz,3H),1.38(brs,3H),1.22-1.12(m,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-82.11(s,2F)。
化合物2C：
RT＝3.550min，C29H27ClF2N6O4的质量计算值为596.2，m/z实测值为597.2[M+H]+。手性HPLC(柱：Chiralpak IA 5μm 4.6mm*250mm；流动相：己烷:EtOH＝40:60，1.0mL/min；温度：30℃；波长：254nm,RT＝9.817min)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20-8.10(m,2H),7.85(brs,2H),7.46(br s,2H),7.42-7.05(m,3H),5.81-5.66(m,1H),5.44-5.24(m,1H),4.60-4.12(m,5H),3.02-2.85(m,1H),2.67-2.56(m,4H),1.38-1.31(m,3H),1.20-1.13(m,3H)。19FNMR(376MHz,DMSO-d6)δ-82.10(s,2F)。
化合物2D：
RT＝4.0390min，C29H27ClF2N6O4的质量计算值为596.2，m/z实测值为597.2[M+H]+。手性HPLC(柱：Chiralpak IA 5μm 4.6mm*250mm；流动相：己烷:EtOH＝40:60，1.0mL/min；温度：30℃；波长：254nm,RT＝12.279min)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21-8.13(m,1H),7.84(br s,2H),7.57(br s,1H),7.41-7.38(m,2H),7.20-7.01(m,3H),5.79-5.68(m,1H),5.44-5.25(m,1H),4.96-4.10(m,5H),3.01-2.84(m,1H),2.50-2.39(m,1H),2.18(s,3H),1.57(s,3H),1.22-1.12(m,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-82.32(s,2F)。
化合物3A
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化合物3A：
(3R,8R*)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8-甲酰胺
以与化合物2类似的方式合成化合物3。化合物2(240mg，100％纯度，0.41mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件：柱：Chiralpak IB 5μm 30mm*250mm；流动相：Hex:EtOH＝60:40，30mL/min；温度：30℃；波长：254nm)，然后通过制备型HPLC进一步纯化(柱：X-bridge C18；柱尺寸：(5μm 19mm*150mm)；流动相A：水(+0.1％碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：5％至95％(％B)，UV：254nm，15mL/min)，得到呈白色固体的化合物3A(43mg，99.7％纯度，17.9％收率，100％立体异构纯)和呈白色固体的化合物3B(88mg，99.7％纯度，36.6％收率，100％立体异构纯)。
化合物3A：
LC-MS(ESI)：RT＝8.524min，C28H25ClF2N6O4的质量计算值为582.2，m/z实测值为583.2[M+H]+。手性HPLC(柱：Chiralpak IB 5μm4.6mm*250mm；流动相：Hex:EtOH＝60:40，1mL/min；温度：30℃；波长：254nm,RT＝8.430min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(s,1H),7.60(s,2H),7.31(d,J＝8.0Hz,2H),7.12(d,J＝8.4Hz,2H),6.51(t,J＝73.2Hz,1H),5.75-5.38(m,3H),4.85(d,J＝13.2Hz,1.3H),4.57-4.08(m,4.7H),3.05(br s,1H),2.73(d,J＝4.8Hz,3H),2.69-2.65(m,1H),1.31-1.20(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.31(s,2F)。
化合物3B：
LC-MS(ESI)：RT＝8.671min，C28H25ClF2N6O4的质量计算值为582.2，m/z实测值为583.1[M+H]+。手性HPLC(柱：Chiralpak IB 5μm4.6mm*250mm；流动相：Hex:EtOH＝60:40，1mL/min；温度：30℃；波长：254nm,RT＝12.580min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75(s,1H),7.61(s,2H),7.39-7.29(m,2H),7.13(d,J＝8.4Hz,2H),6.51(t,J＝73.6Hz,1H),5.92-5.31(m,3H),4.88(d,J＝12.8Hz,1H),4.67-3.89(m,5H),3.02(br s,1H),2.73(d,J＝4.4Hz,3H),2.69-2.65(m,1H),1.33-1.23(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.29(s,2F)。
化合物4
中间体4-1：
(3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-(羟基甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9- 六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮盐酸盐
在0℃下，向(3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-(羟甲基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯1-7(40mg，100％纯度，0.079mmol)在1,4-二氧杂环己烷(2mL)中的溶液中添加在二氧杂环己烷(0.5mL)中的4M盐酸盐。在0℃下，搅拌4小时后，浓缩反应混合物，得到呈油状物的标题化合物(35mg，76％纯度，76％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.410min，C20H25ClF2N4O3的质量计算值为442.9，m/z实测值为407.0[M-HCl+H]+。
化合物4：
2-氯-5-((3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-(羟基甲基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羰基)苯甲腈
在30℃下，将(3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-(羟甲基)-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮盐酸盐4-1(35mg，76％纯度，0.06mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(49mg，0.379mmol)、4-氯-3-氰基苯甲酸(16mg，0.09mmol)、2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基异脲鎓六氟磷酸盐(V)(36mg，0.095mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物搅拌14小时。用盐酸盐水溶液将混合物酸化至pH＝6，并且用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用水(10mL)洗涤三次、用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，得到残余物，将该残余物通过制备型HPLC纯化(柱：sunfire Xbrige C18(5μm 19mm*150mm)，移动相A：水(+0.1％ NH4HCO3)，移动相B：乙腈，UV：214nm，流速：15mL/min，梯度：30％-60％(％B))，得到呈白色固体的标题化合物(10.1mg，99.5％纯度，29％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝3.439min，C28H26ClF2N5O4的质量计算值为569.2，m/z实测值为570.1[M+H]+。1HNMR(400M Hz,CDCl3)δ7.74(s,1H),7.60(s,2H),7.47-7.33(m,2H),7.14-7.12(m,2H),6.52(t,J＝73.2Hz,1H),5.97(br s,1H),5.71-5.42(m,1H),4.88-4.18(m,4H),3.87-3.78(m,2H),3.58-3.47(m,1H),3.09-3.04(m,1.6H),2.70-2.66(m,1.4H),1.66-1.65(m,3H),1.30-1.27(m,3H)。19FNMR(376MHz,CDCl3)δ-81.17--81.23(m,2F)。
化合物5
中间体5-2：
(S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)戊酸甲酯在0℃下，将(S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-羟基戊酸甲酯5-1(1.0g，4.04mmol)、叔丁基氯二苯基硅烷(1.5g，5.46mmol)、N,N-二甲基吡啶-4-胺(100mg，0.819mmol)和1H-咪唑(500mg，7.35mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液。在0℃下，搅拌4小时后，将混合物在减压下浓缩得到粗产物，将该粗产物通过C18柱纯化(乙腈:水＝5％至100％)，得到呈白色固体的标题化合物(2.0g，通过HNMR测得的95％纯度，97％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.65-7.62(m,4H),7.45-7.36(m,6H),4.67-4.65(m,1H),3.69-3.58(m,6H),2.36(t,J＝7.2Hz,2H),1.94 -1.79(m,2H),1.43(s,9H),1.07(s,9H)。
中间体5-3：
(S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)戊酸
在0℃、氮气气氛下，向(S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)戊酸甲酯5-2(1.9g，95％纯度，3.72mmol)在甲醇(15mL)和水(10mL)中的溶液中添加氢氧化钠(450mg，11.3mmol)。在室温下，搅拌2小时后，将混合物用水(30mL)稀释，在室温下在减压下浓缩以去除挥发物。将剩余的水层用1M盐酸盐水溶液(12mL)酸化并且用乙酸乙酯(30mL)萃取两次，用盐水(60mL)萃取，经Na2SO4干燥并过滤。浓缩滤液，得到呈黄色油状物的标题化合物(1.8g，通过HNMR测得的95％纯度，95％收率)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.0(s,1H),7.63-7.61(m,4H),7.48-7.38(m,6H),6.61(d,J＝8.4Hz,1H),3.59-3.49(m,3H),2.29-2.15(m,2H),1.88-1.76(m,1H),1.57-1.48(m,1H),1.37(s,9H),0.99(s,9H)。
中间体5-4：
(S)-(1-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-5-(甲基氨基)-5-氧代戊-2-基)氨基甲 酸叔丁酯
在0℃下，(S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)戊酸5-3(1.8g，95％纯度，3.37mmol)、甲胺盐酸盐(200mg，6.44mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(200mg，6.44mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(2g，5.26mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液。在30℃下，搅拌16小时后，将混合物在减压下浓缩，得到残余物。将粗残余物通过C18柱(乙腈:水＝5％至100％)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(1.5g，通过HNMR测得的95％纯度，87％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.65-7.63(m,4H),7.47-7.38(m,6H),6.47(br s,1H),4.84-4.82(m,1H),3.71-3.56(m,3H),2.80(d,J＝4.8Hz,3H),2.27-2.15(m,2H),1.87-1.82(m,2H),1.46(s,9H),1.07(s,9H)。
中间体5-5：
(S)-4-氨基-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-N-甲基戊酰胺盐酸盐
在室温下，向(S)-(1-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-5-(甲基氨基)-5-氧代戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯5-4(1.57g，3.08mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加2,2,2-三氟乙酸(5mL)搅拌2小时。将混合物真空浓缩，得到粗产物。然后用碳酸氢钠水溶液将混合物调节至pH～8，用二氯甲烷(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液，得到呈浅黄色油状物的标题化合物(1.2g，通过HNMR测得的95％纯度，96％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.64-7.63(m,4H),7.49-7.45(m,6H),6.99(br s,2H),3.68-3.56(m,2H),3.17-3.12(m,1H),2.55(d,J＝4.4Hz,3H),2.16(t,J＝7.2Hz,2H),1.87-1.66(m,2H),1.02(s,9H)。
中间体5-7：
(S)-(1-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-5-(甲基氨基)-5-氧代戊-2-基)(4-(二 氟甲氧基)苄基)氨基甲酸叔丁酯
向4-氨基-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-N-甲基戊酰胺5-5(1.2g，95％纯度，2.96mmol)和4-(二氟甲氧基)苯甲醛5-6(1.5g，8.71mmol)在甲醇(20mL)中的混合物中添加乙酸(0.5mL)。在30℃下，搅拌2小时后，将反应混合物冷却至0℃，随后添加氰基硼氢化钠(500mg，7.96mmol)并在室温下搅拌1小时。将反应用水(5mL)淬灭，并通过硅藻土垫过滤。将滤饼用乙酸乙酯(30mL)洗涤。将滤液浓缩，得到残余物。在0℃下，向在四氢呋喃(10mL)和水(10mL)中的粗产物中添加三乙胺(500mg，4.94mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.0g，4.58mmol)。在30℃下，搅拌1小时后，将反应混合物在减压下浓缩，得到残余物，将该残余物通过C18柱纯化(乙腈:水＝5％至100％)，得到呈黄色油状物的标题化合物(1.5g，80％纯度，75％收率)。
RT＝1.94min，C35H46F2N2O5Si的质量计算值为640.3，m/z实测值为640.9[M+H]+。
中间体5-8：
(S)-4-(二氟甲氧基)苄基(1-羟基-5-(甲基氨基)-5-氧代戊-2-基)氨基甲酸叔丁 酯
在0℃下，向在四氢呋喃(10mL)中的(S)-(1-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-5-(甲基氨基)-5-氧代戊-2-基)(4-(二氟甲氧基)苄基)氨基甲酸叔丁酯5-7(1.5g，80％纯度，1.87mmol)中添加在四氢呋喃(2mL，2mmol)中的1M四丁基氟化铵。在0℃下，搅拌4小时后，将混合物过滤并在减压下浓缩，得到残余物。将粗产物通过C18柱(乙腈:水＝5％至100％)纯化，得到呈黄色油状物的标题化合物(800mg，通过HNMR测得的90％纯度，96％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.31-7.29(m,2H),7.09-7.07(m,2H),6.50(t,J＝74.0Hz,1H),5.74-5.24(m,1H),4.51-4.30(m,2H),3.85-3.57(m,3H),3.36-3.19(m,1H),2.77(d,J＝4.8Hz,3H),2.17-2.10(m,1.5H),1.99-1.85(m,2.5H),1.43(s,9H)。
中间体5-9：
(R)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(4-(二氟甲氧基)苄基)氨基)-5-(甲基氨基)-5- 氧代戊基)-5-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3- 甲酸乙酯
在0℃下，向(R)-5-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯Int A(500mg，95％纯度，1.27mmol)、(S)-4-(二氟甲氧基)苄基(1-羟基-5-(甲基氨基)-5-氧代戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯5-8(700mg，1.74mmol)和三苯基膦(700mg，2.67mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中添加二氮烯-1,2-二甲酸二叔丁酯(600mg，2.61mmol)。在50℃下，搅拌4小时后，将混合物在减压下浓缩得到粗产物，将该粗产物通过C18柱纯化(乙腈:水＝5％至100％)，得到呈白色固体的标题化合物(550mg，100％纯度，57％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.67min和1.70min，C37H43ClF2N6O7的质量计算值为756.3，实测值为756.9[M+H]+。
中间体5-10：
(R)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(4-(二氟甲氧基)苄基)氨基)-5-(甲基氨基)-5- 氧代戊基)-5-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3- 甲酸
在0℃、氮气气氛下，向(R)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(4-(二氟甲氧基)苄基)氨基)-5-(甲基氨基)-5-氧代戊基)-5-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯5-9(500mg，100％纯度，0.66mmol)在甲醇(5mL)和水(5mL)中的溶液中添加氢氧化钠(100mg，2.50mmol)。在室温下，搅拌2小时后，将混合物用水(50mL)稀释，在减压下浓缩以去除挥发物。将剩余的水层用1M盐酸盐水溶液(3mL)酸化，用乙酸乙酯(40mL)萃取两次，用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。浓缩滤液，得到呈黄色油状物的标题化合物(400mg，97％纯度，81％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.37min，C35H39ClF2N6O7的质量计算值为728.3，m/z实测值为728.8[M+H]+。
中间体5-11：
(R)-5-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-2-((S)-2-((4-(二氟甲氧基)苄基)氨基)-5-(甲 基氨基)-5-氧代戊基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸
在0℃下，将(R)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)(4-(二氟甲氧基)苄基)氨基)-5-(甲基氨基)-5-氧代戊基)-5-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸5-10(400mg，97％纯度，0.532mmol)在1,4-二氧杂环己烷(4mL)中的4M盐酸盐中的溶液搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩，得到呈白色固体的标题化合物(330mg，94％纯度，88％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.31min，C30H31ClF2N6O5的质量计算值为628.2，实测值为628.9[M+H]+。
化合物5：
3-((3R,8S)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-3-甲基-10- 氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)-N-甲基丙酰 胺
在0℃下，向(R)-5-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-2-((S)-2-((4-(二氟甲氧基)苄基)氨基)-5-(甲基氨基)-5-氧代戊基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸5-11(330mg，94％纯度，0.466mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(400mg，3.10mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(280mg，0.736mmol)。在30℃下，搅拌16小时后，将混合物在减压下浓缩，得到残余物，将该残余物通过C18柱纯化(乙腈:水(+0.02％乙酸铵)＝5％至100％)，得到呈白色固体的标题化合物(150mg，98.3％纯度，60％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝3.291min，C30H29ClF2N6O4的质量计算值为610.2，实测值为611.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(s,1H),7.62-7.51(m,2H),7.36-7.34(m,2H),7.08(d,J＝8.4Hz,2H),6.49(t,J＝73.6Hz,1H),5.79-5.39(m,3H),4.85-3.81(m,6H),3.15-2.99(m,1H),2.83-2.65(m,4H),2.31-2.23(m,1H),2.15-2.03(m,2H),1.85-1.76(m,1H),1.28-1.26(m,3H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-80.998(s,2F)。
化合物6
化合物6A和化合物6B：
(3R,8R*)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-3,8-二甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮(6A)和(3R,8S*)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-3,8-二甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮(6B)
以与化合物2类似的方式合成(3R)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(4-(二氟甲氧基)苄基)-3,8-二甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮化合物6(160mg，100％纯度，0.291mmol)。化合物6通过手性制备型HPLC进行分离(分离方法：柱：Chiralpak IA 5μm 30mm*250mm；流动相：CO2:EtOH(0.2％ DEA)＝60:40，60g/min；柱温：40℃；波长：214nm，背压：100巴)，然后通过C18进一步纯化(乙腈:水(+0.02％乙酸铵)＝5％至95％)，得到呈白色固体的化合物6A(45.6mg，99.8％纯度，28％收率，100％立体异构纯)和呈白色固体的化合物6B(38.1mg，99.5％纯度，24％收率，100％立体异构纯)。
化合物6A：
LC-MS(ESI)：RT＝7.544min，C26H24Cl2F2N4O3的质量计算值为548.1，m/z实测值为549.1[M+H]+。手性分析(柱：Superchiral IA 5μm4.6mm*250mm；流动相：CO2:EtOH(0.2％DEA)＝60:40，1.20mL/min；温度：40℃；波长：254nm，背压：100巴；RT＝7.36min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54(d,J＝2.0Hz,1H),7.51(d,J＝8.0Hz,1H),7.36-7.26(m,3H),7.11(d,J＝8.8Hz,2H),6.50(t,J＝73.6Hz,1H),5.87-5.41(m,1H),5.37(d,J＝15.2Hz,1H),4.83-4.36(m,2H),4.27(dd,J＝13.6,4.4Hz,1H),4.13(d,J＝13.2Hz,1H),4.08-3.86(m,1H),3.82-3.74(m,1H),3.18-2.93(m,1H),2.77-2.60(m,1H),1.27(d,J＝6.4Hz,6H)。19FNMR(376MHz,CDCl3)δ-81.03(s,2F)。
化合物6B：
LC-MS(ESI)：RT＝7.587min，C26H24Cl2F2N4O3的质量计算值为548.1，m/z实测值为549.1[M+H]+。手性分析(柱：Superchiral IA 5μm4.6mm*250mm；流动相：CO2:EtOH(0.2％DEA)＝60:40，1.20mL/min；温度：40℃；波长：254nm，背压：100巴；RT＝9.57min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54(d,J＝2.0Hz,1H),7.51(d,J＝8.0Hz,1H),7.34-7.25(m,3H),7.10(d,J＝8.0Hz,2H),6.50(t,J＝73.2Hz,1H),5.96-5.20(m,2H),5.02-4.32(m,2H),4.27(dd,J＝12.8,4.4Hz,1H),4.13(dd,J＝13.2,2.4Hz,1H),4.02(d,J＝14.8,1H),3.86-3.76(m,1H),3.21-2.95(m,1H),2.67(d,J＝15.6Hz,1H),1.36-1.20(m,6H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.03(s,2F)。
化合物7
中间体7-2：
1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙醇
在0℃下，向1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙酮7-1(5.0g，26.9mmol)在甲醇(50mL)中的溶液中缓慢添加硼氢化钠(3.0g，79.3mmol)。在室温下，搅拌3小时后，将反应用丙酮(50mL)逐滴淬灭并浓缩得到残余物。将该残余物溶解于乙酸乙酯(50mL)中，用盐水(50mL)洗涤两次，经Na2SO4干燥并过滤。浓缩滤液，得到呈无色油状物的标题化合物(5.3g，通过HNMR测得的90％纯度，94％收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(d,J＝8.4Hz,1H),6.50(t,J＝74.0Hz,1H),4.91(q,J＝6.0Hz,1H),1.80(d,J＝3.6Hz,1H),1.49(d,J＝6.4Hz,3H)。
中间体7-3：
1-(1-溴乙基)-4-(二氟甲氧基)苯
在0℃下，向1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙醇7-2(500mg，90％纯度，2.39mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中缓慢添加溴化磷(III)(650mg，2.40mmol)。在室温下，搅拌2小时后，将反应混合物倾注到冰水(20mL)中，并用二氯甲烷(30mL)萃取两次。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液(50mLx2)和盐水(50mLx2)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，得到呈无色油状物的标题化合物(590mg，通过HNMR测得的95％纯度，93％收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(d,J＝8.4Hz,2H),7.09(d,J＝8.8Hz,2H),6.51(t,J＝73.6Hz,1H),5.20(q,J＝7.2Hz,1H),2.03(d,J＝6.8Hz,3H)。
中间体7-4：
(R)-3-(肼羰基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯
在室温下，向(R)-3-乙基6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5(4H)-二甲酸5-叔丁酯(2.0g，92％纯度，6.47mmol)在乙醇(20mL)中的溶液中添加一水合肼(4mL)。在85℃下，搅拌16小时后，在减压下浓缩混合物。将所得残余物用乙酸乙酯(40mL)溶解，用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥。浓缩有机层，得到呈白色固体的所需产物(2.0g，92％纯度，100％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.36min，C13H21N5O3的质量计算值为295.2，m/z实测值为296.2[M+H]+。
中间体7-5：
(R)-8-甲基-1-氧代-1,2,7,8-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三 嗪-9(10H)-甲酸叔丁酯
在室温下，向(R)-3-(肼羰基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯7-4(2.0g，92％纯度，6.23mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)和乙酸(5mL)中的溶液中添加三乙氧基甲烷(6.69g，45.1mmol)。在80℃下搅拌16小时后，用饱和碳酸钠溶液(50mL)稀释混合物，并用乙酸乙酯(100mL)萃取。将有机层用盐水(80mL)洗涤三次，经Na2SO4干燥并真空浓缩得到残余物。通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝5:1至3:1)纯化粗产物，得到呈白色固体的标题化合物(1.3g，通过HNMR测得的95％纯度，98％收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.53(br s,1H),8.32(s,1H),5.31-5.23(m,1H),5.03-4.91(m,1H),4.37(d,J＝18.0Hz,1H),3.10(dd,J＝16.4和6.4Hz,1H),2.77(d,J＝16.4Hz,1H),1.50(s,9H),1.14(d,J＝6.8Hz,3H)。
中间体7-6：
(8R)-2-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-甲基-1-氧代-1,2,7,8-
四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪-9(10H)-甲酸叔丁酯
在室温下，向(R)-8-甲基-1-氧代-1,2,7,8-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪-9(10H)-甲酸叔丁酯7-5(100mg，95％纯度，0.311mmol)、1-(1-溴乙基)-4-(二氟甲氧基)苯7-3(100mg，95％纯度，0.378mmol)在2-甲基四氢呋喃(1mL)中的溶液中添加50％氢氧化钠水溶液(1mL)。在50℃下，搅拌2小时后，将反应混合物用冰水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤两次，经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，得到粗产物，将该粗产物用C18柱纯化(乙腈:水＝60％至80％)，得到呈无色油状物的标题化合物(160mg，通过HNMR测得的90％纯度，97％收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(s,1H),7.48(t,J＝8.8Hz,2H),7.09(d,J＝8.4Hz,2H),6.48(t,J＝73.6Hz,1H),6.21(q,J＝7.2Hz,1H),5.30-5.25(m,1H),4.99-4.90(m,1H),4.39-4.32(m,1H),3.10-3.05(m,1H),2.75-2.71(m,1H),1.77(d,J＝7.2Hz,3H),1.49(d,J＝2.0Hz,9H),1.13-1.09(m,3H)。
中间体7-7：
(8R)-2-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4',3': 3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪-1(2H)-酮盐酸盐
在0℃下，向(8R)-2-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-甲基-1-氧代-1,2,7,8-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪-9(10H)-甲酸叔丁酯7-6(160mg，90％纯度，0.303mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加在1,4-二氧杂环己烷(2.0mL，4.0mmol)的2M盐酸盐。在室温下，搅拌3小时后，将混合物在减压下浓缩，得到呈白色固体的标题化合物(145mg，通过HNMR测得的80％纯度，93％收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.69(br s,2H),9.06(s,1H),7.44-7.41(m,2H),7.21(t,J＝73.6Hz,1H),7.14(d,J＝8.4Hz,2H),6.09(q,J＝5.6Hz,1H),4.53-4.42(m,2H),3.71-3.65(m,1H),3.23-3.19(m,1H),2.94-2.87(m,1H),1.70(d,J＝6.8Hz,3H),1.44-1.42(m,3H)。
化合物7：
(8R)-9-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-2-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8- 甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪-1(2H)-酮
在0℃下，向(8R)-2-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪-1(2H)-酮盐酸盐7-7(145mg，80％纯度，0.282mmol)、4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸(100mg，0.445mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.3mL，1.82mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中添加1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓-3-氧化物六氟磷酸盐(200mg，0.526mmol)。在室温下，搅拌16小时后，将反应混合物用水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(20mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤两次，经Na2SO4(s)干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，得到呈白色固体的标题化合物(180mg，通过LCMS测得的89％纯度，98％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.74min，C26H21ClF5N5O3的质量计算值为581.1，m/z实测值为582.2[M+H]+。
化合物7A和化合物7B：
(R)-9-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-2-((R*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙 基)-8-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪-1(2H)-酮 (7A)和
(R)-9-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-2-((S*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙 基)-8-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪-1(2H)-酮 (7B)
将(8R)-9-(4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基)-2-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪-1(2H)-酮7的外消旋物(180mg，89％纯度，0.275mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离方法：柱：Chiralpak IC 5μM 30mm*250mm；流动相：Hex:EtOH＝50:50，30mL/min；柱温：40℃；波长：214nm，背压：100巴)，得到呈白色固体的化合物7A(40.0mg，99.9％纯度，25％收率，100％立体异构纯)和呈白色固体的化合物7B(50.2mg，99.7％纯度，31％收率，99.9％立体异构纯)。
化合物7A：
LC-MS(ESI)：RT＝8.944min，C26H21ClF5N5O3的质量计算值为581.1，m/z实测值为582.1[M+H]+。手性分析(柱：Superchiral IC 5μm4.6mm*250mm；流动相：Hex:EtOH＝50:50，1.00mL/min；温度：30℃；波长：254nm，背压：98巴；Rt＝6.729min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.00(br s,1H),7.95(s,1H),7.86-7.81(m,2H),7.49-7.34(m,2.2H),7.20-7.01(m,2.8H),6.21-5.96(m,1H),5.66-5.25(m,1H),4.85-4.18(m,2H),3.21-3.02(m,1H),2.91-2.64(m,1H),1.69(s,3H),1.32-1.06(m,3H)。
19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-61.33(s,3F),-81.93(s,2F)。
化合物7B：
LC-MS(ESI)：RT＝9.105min，C26H21ClF5N5O3的质量计算值为581.1，m/z实测值为582.1[M+H]+。手性分析(柱：Superchiral IC 5μm4.6mm*250mm；流动相：Hex:EtOH＝50:50，1.00mL/min；温度：30℃；波长：254nm，背压：98巴；Rt＝8.213min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.01(br s,1H),7.96(s,1H),7.87-7.82(m,2H),7.50-7.44(m,2H),7.21(t,J＝74.4Hz,1H),7.14(d,J＝7.6Hz,2H),6.22-5.92(m,1H),5.67-5.20(m,1H),4.84-4.12(m,2H),3.23-3.03(m,1H),2.89-2.63(m,1H),1.69(s,3H),1.32-1.01(m,3H)。
19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-61.31(s,3F),-81.95(s,2F)。
化合物8A
化合物8A和化合物8B：
(R)-9-(3,4-二氯苯甲酰基)-2-((R*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-甲基- 7,8,9,10-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪-1(2H)-酮(8A)和
(R)-9-(3,4-二氯苯甲酰基)-2-((S*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-甲基- 7,8,9,10-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪-1(2H)-酮(8B)
以与化合物7类似的方式合成(8R)-9-(3,4-二氯苯甲酰基)-2-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪-1(2H)-酮8(410mg，95％纯度，0.710mmol)。将化合物8通过手性HPLC分离(分离条件：柱：Chiralpak IC 5μm 30mm*250mm，Hex:EtOH＝40:60，30ml/min，254nm；柱温：30℃)，通过C18柱进一步纯化(乙腈:水(+0.02％乙酸铵)＝5％至100％)，得到呈白色固体的化合物8A(120mg，99.8％纯度，70％收率，100％立体异构纯)和化合物8B(150mg，99.9％纯度，78.9％收率，99.9％立体异构纯)。
化合物8A：
LC-MS(ESI)：RT＝4.167min，C25H21Cl2F2N5O3的质量计算值为547.1，m/z实测值为548.1[M+H]+。手性分析(柱：Chiralpak IC 5μm4.6mm*250mm；流动相：Hex:EtOH＝40:60，1mL/min；温度：30℃；波长：254nm；Rt＝8.702min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.00(s,1H),7.78-7.74(m,2H),7.49-7.39(m,3.3H),7.20-7.02(m,2.7H),6.13-6.00(m,1H),5.58-5.27(m,1H),4.74-4.24(m,2H),3.16-3.04(m,1H),2.86-2.67(m,1H),1.74-1.62(m,3H),1.20-1.15(m,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-81.92(s,2F)。
化合物8B：
LC-MS(ESI)：RT＝4.223min，C25H21Cl2F2N5O3的质量计算值为547.1，m/z实测值为548.1[M+H]+。手性分析(柱：Chiralpak IC 5μm4.6mm*250mm；流动相：Hex:EtOH＝40:60，1mL/min；温度：30℃；波长：254nm；Rt＝10.917min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.01(s,1H),7.80-7.75(m,2H),7.50-7.39(m,3.3H),7.21-7.02(m,2.7H),6.11-6.00(m,1H),5.58-5.29(m,1H),4.67-4.26(m,2H),3.18-3.12(m,1H),2.84-2.67(m,1H),1.69(br s,3H),1.19-1.12(m,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-81.95(s,2F)。
化合物9A和化合物9B
化合物9A和化合物9B：
2-氯-5-((R)-2-((R*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-甲基-1-氧代-1,2,7, 8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪-9-羰基)苯甲腈(9A)和
2-氯-5-((R)-2-((S*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-甲基-1-氧代-1,2,7, 8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪-9-羰基)苯甲腈(9B)
以与化合物7类似的方式合成2-氯-5-((8R)-2-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-8-甲基-1-氧代-1,2,7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-d][1,2,4]三嗪-9-羰基)苯甲腈9(140mg，90％纯度，0.234mmol)。化合物9通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件：柱：Chiralpak IA 5μm 20mm*250mm；流动相：ACN:IPA＝70:30，30mL/min；温度：30℃；波长：254nm)，得到呈白色固体的化合物9A(18.4mg，99.2％纯度，14.5％收率，99.3％立体异构纯)和呈白色固体的化合物9B(22.2mg，99.5％纯度，17.5％收率，99.8％立体异构纯)。
化合物9A：LC-MS(ESI):RT＝7.569min，C26H21ClF2N6O3的质量计算值为538.9，m/z实测值为539.1[M+H]+。手性分析(柱：Chiralpak IA 5μm4.6mm*250mm；流动相：ACN:IPA＝70:30，1mL/min；温度：30℃；波长：254nm；RT＝4.247min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),7.75(s,1H),7.60(s,2H),7.47(d,J＝8.4Hz,2H),7.08(d,J＝8.4Hz,2H),6.48(t,J＝73.6Hz,1H),6.15(br s,1H),5.44(br s,1H),4.91-4.58(m,2H),3.17(br s,1H),2.85-2.81(m,1H),1.76(d,J＝6.8Hz,3H),1.26-1.25(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-80.97(s,2F)。
化合物9B：LC-MS(ESI)：RT＝7.579min，C26H21ClF2N6O3的质量计算值为538.9，m/z实测值为539.1[M+H]+。手性分析(柱：Chiralpak IA 5μm4.6mm*250mm；流动相：ACN:IPA＝70:30，1mL/min；温度：30℃；波长：254nm；RT＝6.917min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),7.75(s,1H),7.60(s,2H),7.48(d,J＝8.4Hz,2H),7.09(d,J＝8.4Hz,2H),6.48(t,J＝77.2Hz,1H),6.16(br s,1H),5.45(br s,1H),4.93-4.61(m,2H),3.17(br s,1H),2.85-2.81(m,1H),1.76(d,J＝7.2Hz,3H),1.26-1.25(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-80.97(s,2F)。
化合物10A和化合物10B
中间体10-1：
(R)-5-(3,4-二氯苯甲酰基)-N-(2,2-二甲氧基乙基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H- 吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酰胺
在室温下，向(R)-5-(3,4-二氯苯甲酰基)-6-甲基4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3c]吡啶-3-甲酸Int B(1.0g，90％纯度，2.54mmol)在乙腈(10mL)中的溶液中添加二(1H-咪唑-1-基)甲酮(600mg，3.70mmol)。在60℃下，搅拌2小时后，将2,2-二甲氧基乙胺(350mg，3.33mmol)添加到反应物中。在60℃下，将反应混合物搅拌3小时，然后冷却至室温并浓缩。将粗残余物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4(s)干燥并过滤。浓缩滤液，得到呈白色固体的标题化合物(1.0g，通过LCMS测得的93％纯度，83％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.52min，C19H22Cl2N4O4的质量计算值为440.1，m/z[M-H]-实测值为439.1。
中间体10-2：
(3R)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-羟基-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4',3': 3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮
在30℃下，将(R)-5-(3,4-二氯苯甲酰基)-N-(2,2-二甲氧基乙基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酰胺(1.0g，93％纯度，0.612mmol)在5M盐酸水溶液(20mL，100mmol)中的溶液搅拌16小时。将反应混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，得到粗产物，将该粗产物用C18柱纯化(乙腈:水＝50％至60％)，得到呈白色固体的标题化合物(600mg，通过1HNMR测得的90％纯度，65％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.45min，C17H16Cl2N4O3的质量计算值为394.1，m/z[M+H]+实测值为395.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21-8.10(m,1H),7.77-7.73(m,2H),7.46(t,J＝6.4Hz,1H),7.14-7.09(m,1H),5.68(brs,1H),5.50-5.20(m,1H),4.59-4.37(m,1H),4.24-4.11(m,1H),3.83-3.69(m,1H),3.43-3.35(m,1H),3.02-2.89(m,1H),2.67-2.57(m,1H),1.13-1.06(m,3H)。
中间体10-3：
(R)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并 [1,5-a]吡嗪-10(9H)-酮
在室温下，向(3R)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-7-羟基-3-甲基-1,2,3,4,8,9-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(7H)-酮10-2(400mg，95％纯度，0.880mmol)在甲苯(30mL)中的混合物中添加氯化亚砜(230mg，1.93mmol)，然后添加N,N-二甲基乙酰胺(0.05mL)。在50℃下，搅拌12小时后，将反应混合物冷却至室温，然后在减压下浓缩得到粗产物，将该粗产物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝3:1至1:1)，得到呈棕色固体的标题化合物(270mg，通过1HNMR测得的90％纯度，73％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.50min，C17H14Cl2N4O2的质量计算值为376.1，m/z实测值为377.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.99-9.25(m,1H),7.55-7.51(m,2H),7.41(d,J＝6.0Hz,1H),7.29-7.28(m,1H),6.61(brs,1H),5.97-5.74(m,0.4H),5.55-5.38(m,0.6H),5.04-4.39(m,2H),3.16(br s,1H),2.80-2.76(m,1H),1.31-1.21(m,3H)。
化合物10：
(3R)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2, 3,4-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(9H)-酮
向在室温下的(R)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-3-甲基-1,2,3,4-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(9H)-酮10-3(270mg，90％纯度，0.644mmol)、1-(1-溴乙基)-4-(二氟甲氧基)苯7-3(270mg，90％纯度，0.968mmol)在2-甲基四氢呋喃(4mL)中的溶液中添加50％氢氧化钠(2mL)和苄基三乙基氯化铵(20mg，0.088mmol)。在60℃、氮气气氛下搅拌2小时后，将反应用水(30mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。在减压下蒸发滤液，得到黄色粗固体，将该黄色粗固体通过C18柱纯化(乙腈:水＝50％至60％)，得到呈棕色固体的标题化合物(250mg，通过1HNMR测得的90％纯度，64％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.77min，C26H22Cl2F2N4O3的质量计算值为546.1，m/z实测值为547.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.78-7.68(m,3H),7.51-7.28(m,3.4H),7.22-7.17(m,2.6H),7.04-691(m,1H),6.21-5.96(m,1H),5.65-5.53(m,0.5H),5.35-5.17(m,0.5H),4.73-4.60(m,0.7H),4.36-4.20(m,1.3H),3.12-2.99(m,1H),2.78-2.58(m,1H),1.76-1.64(m,3H),1.16-1.10(m,3H)。
化合物10A和化合物10B：
(R)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((R*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基- 1,2,3,4-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(9H)-酮(10A)和
(R)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-((S*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基- 1,2,3,4-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(9H)-酮(10B)
将(3R)-2-(3,4-二氯苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-1,2,3,4-四氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-10(9H)-酮化合物10的外消旋混合物(200mg，90％纯度，0.329mmol)通过手性HPLC进行分离(分离条件：柱：Chiralpak IC 5μm20mm*250mm；流动相：Hex:EtOH＝50:50，30mL/min；温度：30℃；波长：254nm)，得到呈白色固体的化合物10A(47mg，25.5％收率，通过LCMS测得的97.7％纯度，100％立体异构纯)和呈白色固体的化合物10B(41mg，收率22.4％，通过LCMS测得的98.5％纯度，100％立体异构纯)。
化合物10A：
LC-MS(ESI)：RT＝7.127min，C26H22Cl2F2N4O3的质量计算值为546.1，m/z实测值为547.1[M+H]+。手性分析(柱：Chiralpak IC 5μm4.6mm*250mm；流动相：HEX:EtOH＝50:50，1mL/min；温度：30℃；波长：254nm；RT＝8.351min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.77-7.68(m,3H),7.48-7.36(m,3.3H),7.22-7.03(m,2.7H),7.00-6.89(m,1H),6.18-6.06(m,0.7H),6.02-5.94(m,0.3H),5.65-5.50(m,0.6H),5.30-5.27(m,0.4H),4.68-4.63(m,0.7H),4.31-4.19(m,1.3H),3.11-3.00(m,1H),2.78-2.60(m,1H),1.71(s,3H),1.23-1.10(m,3H)。19FNMR(376MHz,DMSO-d6)-82.08(s,2F)。
化合物10B：
LC-MS(ESI)：RT＝7.180min，C26H22Cl2F2N4O3的质量计算值为546.1，m/z实测值为547.1[M+H]+。手性分析(柱：Chiralpak IC 5μm4.6mm*250mm；流动相：HEX:EtOH＝50:50，1mL/min；温度：30℃；波长：254nm；RT＝10.356min)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.78-7.74(m,2H),7.70-7.68(m,1H),7.48-7.41(m,3.2H),7.22-7.17(s,2.5H),7.04-6.96(m,1.3H),6.15-5.98(m,1H),5.63-5.22(m,0.6H),5.34-5.22(m,0.4H),4.73-4.59(m,0.7H),4.39-4.14(m,1.3H),3.14-2.99(m,1H),2.80-2.60(m,1H),1.72(br s,3H),1.23-1.08(m,3H)。19FNMR(376MHz,DMSO-d6)-82.11(s,2F)。
化合物11B
中间体11-2
(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-羟基丙基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，向(2,3-二羟基丙基)氨基甲酸叔丁酯11-1(8g，41.8mmol)在无水二氯甲烷(150mL)中的溶液中添加三乙胺(9g，88.9mmol)、N,N-二甲基吡啶-4-胺(400mg，3.27mmol)和叔丁基氯二苯基硅烷(12g，43.7mmol)。在室温下，将混合物搅拌过夜。将混合物用二氯甲烷(100mL)稀释，并用水(150mL)洗涤两次、用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。通过硅胶色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝100:1至50:1)纯化滤液，得到呈浅黄色油状物的标题化合物(14g，通过HNMR测得的95％纯度，74％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.65-7.63(m,4H),7.46-7.37(m,6H),4.84(br s,1H),3.83-3.77(m,1H),3.69-3.58(m,2H),3.36-3.33(m,1H),3.17-3.11(m,1H),2.91-2.90(m,1H),1.41(s,9H),1.07(s,9H)。
中间体11-3：
1-氨基-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)丙-2-醇三氟乙酸盐
在0℃下，向(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-羟基丙基)氨基甲酸叔丁酯11-2(4.5g，95％纯度，9.95mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液中添加三氟乙酸(20mL)。在0℃下，搅拌4小时后，将混合物在减压下浓缩，得到呈黄色固体的标题化合物(4.5g，95％纯度，93％收率)。RT＝1.55min，C19H27NO2Si的质量计算值为329.2，m/z实测值为330.5[M+H]+。
中间体11-4：
(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-羟基丙基)氨基甲酸苄酯
在0℃、氮气气氛下，向1-氨基-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)丙-2-醇三氟乙酸盐11-3(4.5g，95％纯度，9.44mmol)和饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中逐滴添加氯甲酸苄酯(2mL，14.1mmol)。在室温下，搅拌过夜后，将混合物在减压下浓缩以去除四氢呋喃，随后添加水(50mL)并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液浓缩，并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)纯化，得到呈无色油状物的标题化合物(4g，通过HNMR测得的95％纯度，87％收率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.64-7.63(m,4H),7.45-7.29(m,11H),5.08(s,2H),3.88-3.77(m,1H),3.70-3.67(m,1H),3.62-3.58(m,1H),3.44-3.39(m,1H),3.23-3.16(m,1H),2.85-2.66(m,1H),1.06(s,9H)。
中间体11-5：
(6R)-3-乙基2-(10,10-二甲基-3-氧代-1,9,9-三苯基-2,8-二氧杂-4-氮杂-9-硅 杂十一烷-6-基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5(4H)-二甲酸5-叔丁酯
在0℃下，向(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-羟基丙基)氨基甲酸苄酯11-4(2.5g，95％纯度，5.12mmol)和(R)-3-乙基6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5(4H)-二甲酸5-叔丁酯(1.8g，5.53mmol，纯度95％)的四氢呋喃溶液(40mL)中添加三苯基膦(2.7g，10.3mmol)和二氮烯-1,2-二甲酸二叔丁酯(2.3g，9.99mmol)。在50℃下，搅拌4小时后，将混合物在减压下浓缩，得到残余物。将粗残余物通过C18柱(乙腈:水＝5％至100％)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(3g，通过HNMR测得的95％纯度，74％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.66-7.32(m,15H),5.73-5.65(m,0.8H),5.30-4.57(m,5.2H),4.35-3.72(m,6H),3.17-2.82(m,1H),2.67-2.45(m,1H),1.51-1.33(m,12H),1.11-0.92(m,12H)。
中间体11-6：
(3R)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9, 10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯
在室温下，向(6R)-3-乙基2-(10,10-二甲基-3-氧代-1,9,9-三苯基-2,8-二氧杂-4-氮杂-9-硅杂十一烷-6-基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5(4H)-二甲酸5-叔丁酯11-5(1g，95％纯度，1.26mmol)的甲醇溶液(20mL)中添加10％钯/活性炭(100mg)。在45℃、15psi氢气气氛下搅拌过夜后，将混合物过滤并浓缩，得到呈浅黄色油状物的标题化合物(700mg，通过HNMR测得的95％纯度，92％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.69-7.30(m,10H),5.72-5.51(m,1H),5.10-4.77(m,2H),4.54-3.76(m,6H),2.95-2.86(m,1H),2.63-2.52(m,1H),1.49-1.46(m,9H),1.09-0.81(m,12H)。
中间体11-7
(3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-7-(羟基甲基)-3-甲基-10-氧代-3,4, 7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯
在30℃下，向(3R)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯11-6(1.7g，2.81mmol，95％纯度)和1-(1-溴乙基)-4-(二氟甲氧基)苯7-3(1.2g，4.78mmol)在2-甲基四氢呋喃(8mL)中的溶液中缓慢添加在水(8mL)中的50％氢氧化钠。在30℃下，搅拌2小时后，将混合物用水(50mL)稀释并在室温下在减压下浓缩以去除挥发物。将剩余的水层用2M盐酸盐水溶液(50mL)酸化并且用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。浓缩滤液，得到粗产物。然后将粗产物溶解在四氢呋喃(15mL)中，随后在0℃下添加在四氢呋喃(5mL，5mmol)中的1M四丁基氟化铵。在0℃下，搅拌4小时后，将混合物过滤并在减压下浓缩，得到粗产物。将粗产物通过C18柱(乙腈:水＝5％至100％)纯化，得到呈黄色油状物的标题化合物(1.2g，通过HNMR测得的95％纯度，80％收率)。RT＝1.65min，C25H32F2N4O5的质量计算值为506.2，m/z实测值为507.1[M+H]+。
中间体11-8：
(3R)-2-(叔丁氧基羰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代- 1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸
在0℃、氮气气氛下，向(3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-7-(羟甲基)-3-甲基-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯11-7(1.2g，2.25mmol，95％纯度)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中添加戴斯-马丁氧化剂(2g，4.72mmol)。在30℃下，搅拌2小时后，将混合物用碳酸氢钠水溶液调节至pH～8，并且用二氯甲烷(40mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(80mL)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液浓缩，并通过C18柱纯化(乙腈:水＝5％至100％)，得到呈白色固体的标题化合物(500mg，93％纯度，40％收率)。RT＝1.35min，C25H30F2N4O6的质量计算值为520.2，m/z实测值为521.1[M+H]+。
中间体11-9：
(3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-10-氧 代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(3R)-2-(叔丁氧基羰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酸11-8(500mg，93％纯度，0.893mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(5mL)中添加甲胺盐酸盐(130mg，1.93mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(450mg，3.48mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(850mg，2.24mmol)。在30℃下，搅拌16小时后，将混合物在减压下浓缩，得到残余物。将粗残余物通过C18柱(乙腈:水＝5％至100％)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(400mg，通过HNMR测得的90％纯度，76％收率)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.41-7.37(m,1.3H),7.33-7.28(m,0.7H),7.12-7.08(m,2H),6.70-6.32(m,1H),6.05-5.88(m,2H),5.27-5.16(m,1H),4.98-4.81(m,2H),4.31-4.21(m,1H),4.08-4.04(m,0.6H),3.91-3.80(m,0.7H),3.44-3.35(m,0.7H),3.04-2.93(m,1H),2.79-2.77(m,2H),2.67-2.59(m,2H),1.59-1.56(m,3H),1.50-1.46(m,9H),1.18-1.11(m,3H)。
化合物11：
(3R)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-二甲 基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺
在25℃下，将(3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-7-(甲基氨基甲酰基)-10-氧代-3,4,7,8,9,10-六氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2(1H)-甲酸叔丁酯11-9(400mg,0.675mmol,90％纯度)在二氧杂环己烷(5mL，20mmol)中的4M盐酸盐中的溶液搅拌3小时。然后将反应混合物浓缩，得到残余物。在0℃下，向粗残余物的N,N-二甲基甲酰胺溶液(4mL)中添加4-氯-3-氰基苯甲酸(200mg，1.10mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(500mg，3.87mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(600mg，1.58mmol)。在30℃下，搅拌2小时后，将混合物在减压下浓缩得到粗残余物，将该粗残余物通过C18柱纯化(乙腈:水＝5％至100％)，得到呈白色固体的标题化合物(320mg，75％收率，95％纯度)。RT＝1.61min，C29H27ClF2N6O4的质量计算值为596.2，m/z实测值为596.9[M+H]+。
化合物11A和11B和11C和11D：
(3R,7R*)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((R*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)- N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7- 甲酰胺(11A)和
(3R,7R*)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((S*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)- N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7- 甲酰胺(11B)和
(3R,7S*)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((R*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)- N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7- 甲酰胺(11C)和
(3R,7S*)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((S*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)- N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7- 甲酰胺(11D)
将(3R)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-N,3-二甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-甲酰胺化合物11的外消旋物(400mg，95％纯度，0.637mmol)通过手性HPLC进行分离(分离条件：柱：Chiralpak IA,5μm 30mm*250mm，MeOH:DCM＝80:20，25ml/min；柱温：30℃；波长：254nm)，得到呈白色固体的所需级分A(100mg，化合物11A和化合物11B的混合物)、化合物11C(77mg，99.9％纯度，20.3％收率，99.8％立体异构纯)和化合物11D(40mg，99.8％纯度，10.5％收率，99.6％立体异构纯)。级分A(100mg)通过手性HPLC进行分离(分离条件：柱：ChiralpakIE,5μm30mm*250mm，Hex:EtOH＝40:60，20ml/min；柱温：30℃；波长：254nm)，得到呈白色固体的所需产物化合物11A(25mg，96.8％纯度，6.37％收率，100％立体异构纯)和化合物11B(25mg，99.0％纯度，6.51％收率，100％立体异构纯)。
化合物11A：
RT＝2.206min，C29H27ClF2N6O4的质量计算值为596.2，m/z实测值为597.2[M+H]+。
手性HPLC(柱：Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm；流动相：己烷:EtOH＝40:60，1.0mL/min；温度：30℃；波长：254nm,RT＝10.639min)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(s,1H),7.60(s,2H),7.30(d,J＝7.6Hz,2H),7.09(d,J＝8.0Hz,2H),6.51(t,J＝73.6Hz,1H),6.10-5.40(m,3H),4.85-4.26(m,3H),3.91-3.81(m,2H),3.17-2.97(m,1H),2.76-2.68(m,4H),1.68-1.57(m,3H),1.32(d,J＝6.0Hz,3H)。1FNMR(376MHz,CDCl3)δ-80.89(s,2F)。
化合物11B：
RT＝3.584min，C29H27ClF2N6O4的质量计算值为596.2，m/z实测值为597.1[M+H]+。
手性HPLC(柱：Chiralpak IE 5μm 4.6mm*250mm；流动相：己烷:EtOH＝40:60，1.0mL/min；温度：30℃；波长：254nm,RT＝13.735min)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(s,1H),7.61(s,2H),7.35(d,J＝7.6Hz,2H),7.11(d,J＝8.4Hz,2H),6.50(t,J＝73.6Hz,1H),5.98-5.36(m,3H),4.83-4.51(m,3H),4.09-4.06(m,1H),3.39(dd,J＝13.6,5.2Hz,1H),3.13-2.99(m,1H),2.81-2.72(m,4H),1.58-1.57(m,3H),1.32(d,J＝6.8Hz,3H)。1F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.11(s,2F)。
化合物11C：
RT＝2.604min，C29H27ClF2N6O4的质量计算值为596.2，m/z实测值为597.2[M+H]+。
手性HPLC(柱：Chiralpak IA 5μm 4.6mm*250mm；流动相：MeOH:DCM＝80:20，1.0mL/min；温度：30℃；波长：254nm,RT＝5.941min)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.78(s,1H),7.65-7.59(m,2H),7.38(d,J＝8.0Hz,2H),7.11(d,J＝8.8Hz,2H),6.50(t,J＝74.0Hz,1H),5.96-5.43(m,3H),4.83-4.30(m,3H),4.09(dd,J＝13.6,3.2Hz,1H),3.43(dd,J＝13.6,4.8Hz,1H),3.21-3.04(m,1H),2.79(d,J＝4.8Hz,3H),2.71(d,J＝17.6Hz,1H),1.56-1.55(m,3H),1.27(d,J＝6.0Hz,3H)。1F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.09(s,2F)。
化合物11D：
RT＝2.405min，C29H27ClF2N6O4的质量计算值为596.2，m/z实测值为597.2[M+H]+。
手性HPLC(柱：Chiralpak IA 5μm 4.6mm*250mm；流动相：MeOH:DCM＝80:20，1.0mL/min；温度：30℃；波长：254nm,RT＝13.281min)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.77(s,1H),7.65-7.60(m,2H),7.29-7.26(m,2H),7.08(d,J＝8.4Hz,2H),6.50(t,J＝73.6Hz,1H),5.95-5.33(m,3H),4.86-4.30(m,3H),3.92-3.80(m,2H),3.21-2.97(m,1H),2.73-2.68(m,4H),1.60(d,J＝7.2Hz,3H),1.27(d,J＝6.4Hz,3H)。1F NMR(376MHz,CDCl3)δ-80.89(s,2F)。
化合物12、化合物13B和化合物13D
中间体12-1：
(6R)-5-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-6-甲基-2-(2,2,11,11-四甲基-9-氧代-3,3-二 苯基-4,10-二氧杂-8-氮杂-3-硅杂十二烷-6-基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶- 3-甲酸乙酯
向(R)-5-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯Int A(1.5g，90％纯度，3.62mmol)、(3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-羟基丙基)氨基甲酸叔丁酯11-2(2g，95％纯度，4.42mmol)和三苯基膦(1.35g，5.15mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中添加偶氮二甲酸二叔丁酯(1.2g，5.21mmol)。在50℃下，搅拌过夜后，将反应冷却至室温。将反应混合物倾注到水(30mL)中，并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩，并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(2.2g，通过LCMS测得的97％纯度，75％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝2.18min和2.23min，C42H50ClN5O6Si的质量计算值为783.3，m/z实测值为784.0[M+H]+。
中间体12-2：
(6R)-2-(1-氨基-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)丙-2-基)-5-(4-氯-3-氰基 苯甲酰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯
向(6R)-5-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-6-甲基-2-(2,2,11,11-四甲基-9-氧代-3,3-二苯基-4,10-二氧杂-8-氮杂-3-硅杂十二烷-6-基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯12-1(2.2g，97％纯度，2.84mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加三氟乙酸(5mL)。在0℃下，搅拌1小时后，将混合物在减压下浓缩，得到呈无色油状物的标题化合物(2.3g，通过LCMS测得的94％纯度，95％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.26min和1.39min，C37H42ClN5O4Si的质量计算值为683.3，m/z实测值为684.1[M+H]+。
中间体12-3：
5-((3R)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4, 7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羰基)-2-氯苯甲腈
向(6R)-2-(1-氨基-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)丙-2-基)-5-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸乙酯三氟乙酸盐12-2(2.3g，94％纯度，2.71mmol)在1,4-二氧杂环己烷(100mL)中的溶液中添加1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]癸-5-烯(1.9g，13.7mmol)。在100℃下，搅拌2小时后，将反应混合物冷却，浓缩，倾注到水(30mL)中，并用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩，并通过C18柱纯化(乙腈:水＝90％至100％)，得到呈白色固体的标题化合物(1.7g，通过LCMS测得的86％纯度，85％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.35min和1.40min，C35H36ClN5O3Si的质量计算值为637.2，m/z实测值为638.4[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.75-7.55(m,7H),7.47-7.34(m,6H),6.13-5.32(m,2H),4.80-4.19(m,3H),4.08-4.02(m,1H),3.94-3.78(m,2H),3.21-2.87(m,1H),2.66-2.62(m,1H),1.32-1.16(m,3H),1.07-1.05(m,9H)。
化合物12：
2-氯-5-((3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-7-(羟基甲基)-3-甲基-10-氧 代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羰基)苯甲腈
向5-((3R)-7-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羰基)-2-氯苯甲腈12-3(200mg，86％纯度，0.269mmol)和1-(1-溴乙基)-4-(二氟甲氧基)苯7-3(100mg，90％纯度，0.358mmol)在2-甲基四氢呋喃(4mL)中的溶液中添加50％氢氧化钠水溶液(2mL)和苄基三乙基氯化铵(6mg，0.026mmol)。在50℃下，搅拌2小时后，将反应混合物冷却至室温，用水(10mL)稀释，浓缩以去除2-甲基四氢呋喃，并且用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液浓缩，得到黄色残余物。向上述黄色残余物的在四氢呋喃(0.6mL)中的溶液中添加在四氢呋喃(0.6mL，0.6mmol)中的1M四丁基氟化铵。在室温下，搅拌1小时后，将反应混合物用水(5mL)稀释并用乙酸乙酯(10mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩，并通过C18柱纯化(乙腈:水＝60％至75％)，得到呈白色固体的标题化合物(120mg，通过LCMS测得的98.0％纯度，66％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝2.868min、3.055min、3.202min、3.315min，C28H26ClF2N5O4的质量计算值为569.2，m/z实测值为570.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(s,1H),7.60(s,2H),7.43-7.29(m,2H),7.17-7.08(m,2H),6.73-6.33(m,1H),6.17-5.25(m,2H),4.90-4.22(m,3H),4.04-3.88(m,1H),3.83-3.23(m,2H),3.19-2.91(m,2H),2.75-2.60(m,1H),1.61-1.53(m,3H),1.35-1.22(m,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.11--81.24(m,2F)。
中间体13-1：
5-((3R)-7-(氨基甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1, 2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羰基)-2-氯苯甲腈
在0℃下，向2-氯-5-((3R)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-7-(羟甲基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羰基)苯甲腈化合物12(1.1g，93％纯度，1.80mmol)在二氯甲烷(12mL)中的溶液中添加甲磺酰氯(0.2mL，2.62mmol)和三乙胺(0.8mL，5.76mmol)。在室温下，搅拌30分钟后，将反应混合物用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(15mL)萃取两次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩，得到残余物。向上述残余物在N,N-二甲基甲酰胺(14mL)中的溶液中添加叠氮化钠(800mg，12.3mmol)。在50℃下，搅拌24小时后，将反应混合物冷却至室温，用水(14mL)和四氢呋喃(14mL)稀释，随后添加三苯基膦(6.4g，2.44mmol)。在搅拌1小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(15mL)萃取三次。将合并的有机层经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩，并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝1:1至二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(1.1g，通过LCMS测得的33％纯度，36％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.65min，C28H27ClF2N6O3的质量计算值为568.2，m/z实测值为568.9[M+H]+。
化合物13：
N-(((3R)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲 基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-基)甲基) 乙酰胺
在0℃下，向5-((3R)-7-(氨基甲基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-羰基)-2-氯苯甲腈13-1(1.1g，33％纯度，0.638mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中添加乙酸酐(100mg，0.882mmol)和三乙胺(0.2mL，1.44mmol)。在该温度下搅拌1小时后，将反应混合物倾注到水(5mL)中，并且用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4(s)干燥并过滤。将滤液浓缩，并通过硅胶柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝1:1至二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得到粗产物，将该粗产物通过C18柱纯化(乙腈:水＝50％至65％)，得到呈白色固体的标题化合物(220mg，通过LCMS测得的97％纯度，55％收率)。LC-MS(ESI)：RT＝1.54min，C30H29ClF2N6O4S的质量计算值为610.2，m/z实测值为610.9[M+H]+。
化合物13A、化合物13B、化合物13C和化合物13D：
N-(((3R,7R*)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((R*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙 基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7- 基)甲基)乙酰胺(13A)和
N-(((3R,7R*)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((S*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙 基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7- 基)甲基)乙酰胺(13B)和
N-(((3R,7S*)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((R*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙 基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7- 基)甲基)乙酰胺(13C)和
N-(((3R,7S*)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-((S*)-1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙 基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7- 基)甲基)乙酰胺(13D)
将N-(((3R)-2-(4-氯-3-氰基苯甲酰基)-9-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-3-甲基-10-氧代-1,2,3,4,7,8,9,10-八氢吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-基)甲基)乙酰胺化合物13的外消旋物(220mg，97％纯度，0.349mmol)通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件：柱：Chiralpak IA 5μm30mm*250mm；流动相：CO2:EtOH＝60:40，25g/min；柱温：40℃；波长：214nm)，得到级分I和两种粗纯手性异构体，将其用C18柱进一步纯化(乙腈:水(+0.2％碳酸氢铵)＝5％至95％)，得到呈白色固体的化合物13A(15mg，通过LCMS测得的98.6％纯度，7％收率，100％立体异构纯)和化合物13D(12mg，通过LCMS测得的98.8％纯度，6％收率，97.8％立体异构纯)。将级分I通过手性制备型HPLC进行分离(分离条件：柱：Chiralpak IB N-5 5μm 30mm*250mm；流动相：CO2:MeOH＝75:25，25g/min；柱温：40℃；波长：214nm)，得到另外两种粗纯手性异构体，将其通过C18柱纯化(乙腈:水(+0.2％碳酸氢铵)＝5％至95％)，得到呈白色固体的化合物13B(26mg，通过LCMS测得的99.9％纯度，12％收率，100％立体异构纯)和化合物13C(31mg，通过LCMS测得的99.6％纯度，14％收率，100％立体异构纯)。
化合物13A：
LC-MS(ESI)：RT＝4.023min，C30H29ClF2N6O4S的质量计算值为610.2，m/z实测值为611.3[M+H]+。手性HPLC(柱：Chiralpak IA 5μm4.6mm*250mm；流动相：CO2:EtOH＝60:40，3g/min；温度：40℃；波长：230nm，RT＝5.15min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(s,1H),7.60(s,2H),7.39(d,J＝7.6Hz,2H),7.17(d,J＝8.4Hz,2H),6.54(t,J＝73.2Hz,1H),6.16-5.95(m,1H),5.84-5.23(m,2H),4.94-4.36(m,3H),3.64-3.60(m,1H),3.38(s,2H),3.12-2.99(m,2H),2.68(d,J＝16.0Hz,1H),1.89(s,3H),1.59-1.57(m,3H),1.29(d,J＝6.0Hz,3H)。19FNMR(376MHz,CDCl3)δ-81.32(s,2F)。
化合物13B：
LC-MS(ESI)：RT＝4.039min，C30H29ClF2N6O4S的质量计算值为610.2，m/z实测值为611.3[M+H]+。手性HPLC(柱：Chiralpak IB N-5 5μm4.6mm*250mm；流动相：CO2:MeOH＝75:25，3g/min；温度：40℃；波长：214nm，RT＝6.73min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75(s,1H),7.60(s,2H),7.32(d,J＝8.0Hz,2H),7.11(d,J＝8.4Hz,2H),6.52(t,J＝73.6Hz,1H),6.40(br s,1H),5.98(br s,1H),5.53-4.35(m,3H),4.16(s,1H),4.04-3.97(m,1H),3.53-3.46(m,1H),3.41(dd,J＝13.2,10.0Hz,1H),3.26(dd,J＝13.2,4.4Hz,1H),3.08(br s,1H),2.69(d,J＝16.0Hz,1H),2.00(s,3H),1.59-1.56(m,3H),1.30(d,J＝6.0Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.01(s,2F)。
化合物13C：
LC-MS(ESI)：RT＝4.124min，C30H29ClF2N6O4S的质量计算值为610.2，m/z实测值为611.3[M+H]+。手性HPLC(柱：Chiralpak IB N-5 5μm4.6mm*250mm；流动相：CO2:MeOH＝75:25，3g/min；温度：40℃；波长：214nm，RT＝7.78min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(s,1H),7.61(s,2H),7.34(d,J＝8.0Hz,2H),7.12(d,J＝8.4Hz,2H),6.53(t,J＝73.6Hz,1H),6.37-6.30(m,1H),5.98(br s,1H),5.83-5.31(m,1H),4.83-4.31(m,2H),4.22-4.12(m,1H),4.03-3.96(m,1H),3.60-3.48(m,1H),3.41(dd,J＝12.8,10.4Hz,1H),3.27(dd,J＝12.8,4.4Hz,1H),3.08(br s,1H),2.70(d,J＝16.0Hz,1H),2.00(s,3H),1.55(d,J＝6.8Hz,3H),1.30(d,J＝6.4Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-80.99(s,2F)。
化合物13D：
LC-MS(ESI)：RT＝3.556min，C30H29ClF2N6O4S的质量计算值为610.2，m/z实测值为611.2[M+H]+。手性HPLC(柱：Chiralpak IA 5μm4.6mm*250mm；流动相：CO2:EtOH＝60:40，3g/min；温度：40℃；波长：214nm，RT＝8.23min)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75(s,1H),7.61(s,2H),7.36(d,J＝7.2Hz,2H),7.15(d,J＝8.4Hz,2H),6.53(t,J＝73.6Hz,1H),6.03(br s,1H),5.79-5.25(m,2H),4.87-4.33(m,3H),3.59(dd,J＝13.2,4.4Hz,1H),3.53-3.30(m,2H),3.06(dd,J＝13.2,7.2Hz,2H),2.68(d,J＝16.0Hz,1H),1.90(s,3H),1.65-1.53(m,3H),1.28(d,J＝6.0Hz,3H)。19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-81.30(s,2F)。
式(I)的化合物的抗HBV活性
规程
使用HepG2.117细胞系测量抗HBV活性，该细胞系是一种稳定的
诱导性HBV生产细胞系，其在没有多西环素的情况下复制HBV(Tet-off系统)。HepG2细胞系可根据编号HB-8065从ATCCR获得。HepG2细胞系的转染可如Sun和Nassal2006Journal of Hepatology 45(2006)636-645“Stable HepG2-and Huh7-based humanhepatoma cell lines for efficient regulated expression of infectioushepatitis B virus”中所述进行。
对于抗病毒测定，诱导HBV复制，随后在96孔板中用连续稀释的化合物进行处理。在处理3天后，通过使用实时荧光PCR和HBV特异性引物组和探针定量细胞内HBV DNA来确定抗病毒活性。
使用HepG2或HepG2.117细胞测试化合物的细胞毒性，该细胞在化合物的存在下孵育3天或4天。使用PERKIN ELMER ATPlite发光测定系统评估细胞的活力。
结果
N.D＝未确定
CC50值：3天孵育，除非用*标记(*＝4天孵育)
化合物编号 EC50(μM，平均值) CC50(μM，平均值)
1B 1.477 >50.0
1D 0.491 >50.0
2B 0.183 >50.0
3A 0.427 >50.0
4 0.227 25.0
5 0.414 >50.0
6A 0.032 4.5
7A 0.194 46.3
7B 0.262 >50.0
8A 0.067 >50.0
9A 0.553 >50.0
9B 0.13 >50.0
10A 0.072 32.8
10B 0.294 >50.0
11B 0.058 >50.0
12 0.068 24.9
13B 0.167 >50.0
13D 0.344 >50.0
HBc斑点的诱导或不诱导
在不存在多西环素的情况下在DMSO或测试化合物的存在下培养HepG2.117细胞。
在甲醛固定和Triton-X-100透化后，用一抗抗HBc抗体免疫标记乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)。ALEXA 488缀合的二抗用于初级HBV核心信号的荧光检测。CELLMASK DeepRed和HOECHST 33258分别用于细胞质和细胞核的检测，其允许细胞区室的分割。
使用允许检测不同形态表型的图像分析软件来确定细胞质或细胞核中HBV核心的水平(高含量成像测定)。

Claims (21)

1.一种式(I)的化合物，
或其立体异构体或互变异构体形式，其中
R1选自由以下项组成的组：苯基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基，其各自被1个、2个或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由以下项组成的组：卤代、C1-4烷基、C3-6环烷基、CN、CF3、CHF2、OCHF2和OCF3；
R2是氢或选自由以下项组成的组的取代基：CHF2、CF3、C1-4烷基、C1-4烷基OC1-4烷基和C3-6环烷基；
Q表示选自由以下项组成的组的环：苯基、五元芳族杂环和六元芳族杂环；
n表示1、2或3；
每个R3独立地表示选自由以下项组成的组的取代基：CF3、CHF2、CH2F、C1-6烷基、OC1-6烷基、OCF3、OCHF2和C3-6环烷基；
在n表示2或3的情况下，相邻环原子上的两个R3与所述环原子一起任选地形成5元环或6元环，所述环任选地包含1个、2个或3个各自独立地选自N、O和S的杂原子，所述环任选地带有一个或多个氟或氧代取代基；
W是CHR4并且X是CHR5，其中R4和R5各自独立地选自由以下项组成的组：氢；CONR6R7；苯基；5元杂环基；6元杂环基；5元杂芳基；6元杂芳基；C3-6环烷基；C1-4烷基；以及被以下项取代的C1-4烷基：OH、OC1-4烷基、卤代、COOH、CONR8R9 NHCOC1-4烷基、NHCOC3-6环烷基、5元杂芳基、6元杂芳基、SO2NHC1-4烷基、SO2NHC3-6环烷基、NHSO2C1-4烷基或NHSO2C3-6环烷基；其中R4和R5不都是氢；
R6和R7各自独立地选自氢、C3-6环烷基、C1-4烷基、被卤代、OH或OC1-4烷基取代的C1-4烷基，或者R6和R7与R6和R7所连接的氮合在一起形成任选地取代的4元至8元单环杂环基；
R8和R9各自独立地选自氢、C3-6环烷基、C1-4烷基、被卤代、OH或OC1-4烷基取代的C1-4烷基，或者R8和R9与R8和R9所连接的氮合在一起形成任选地取代的4元至8元单环杂环基；
或者W和X一起为CR10＝N或CR11＝CR12；
R10、R11和R12各自独立地选自由以下项组成的组：氢、卤代、CONR13R14、苯基、5元杂环基、6元杂环基、5元杂芳基、6元杂芳基、C3-6环烷基、C1-4烷基以及被以下项取代的C1-4烷基：OH、OC1-4烷基、卤代、COOH、CONR15R16、NHCOC1-4烷基、NHCOC3-6环烷基、SO2NHC1-4烷基、SO2NHC3-6环烷基、NHSO2C1-4烷基或NHSO2C3-6环烷基；
R13和R14各自独立地选自氢、C1-4烷基、C3-6环烷基，或者R13和R14与R13和R14所连接的氮合在一起形成任选地取代的4元至8元单环杂环基；
R15和R16各自独立地选自氢、C1-4烷基、C3-6环烷基，或者R15和R16与R15和R16所连接的氮合在一起形成任选地取代的4元至8元单环杂环基；
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述式(I)的结构满足式(IA)
其中R1a、R1b和R1c各自独立地选自由以下项组成的组：氢、卤代、C1-4烷基、C3-6环烷基、CN、CF3、CHF2、OCHF2和OCF3，其中R1a、R1b和R1c中的至少一者不为氢。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中，所述式(IA)的结构满足式(IB)
4.根据权利要求3所述的化合物，其中，所述式(IB)的结构满足式(IE)
5.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述式(I)的结构满足式(IC)
6.根据权利要求5所述的化合物，其中，所述式(IC)的结构满足式(ID)
7.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中，R4和R5中的一者是H，并且另一者选自由以下项组成的组：CONHC1-4烷基、C1-4烷基、被OH取代的C1-4烷基和被NHCOC1-4烷基取代的C1-4烷基。
8.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中，W和X一起为CH＝N或CH＝CH。
9.根据权利要求2至4中任一项所述的化合物，其中，R1a是卤代，R1b选自由以下项组成的组：卤代和氰基，并且其中，R1c是氢。
10.根据权利要求9所述的化合物，其中，卤代是氯。
11.根据权利要求1、2、3或5中任一项所述的化合物，其中，n为1。
12.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中，一个R3是OCHF2。
13.一种选自由下列化合物1至13或其立体异构体或互变异构体形式组成的组的化合物：
或其药学上可接受的盐、N-氧化物或溶剂化物。
14.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至13中任一项所述的化合物，并且还包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
15.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物或根据权利要求14所述的药物组合物，所述化合物或药物组合物用作药物。
16.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物或根据权利要求14所述的药物组合物，所述化合物或药物组合物用于在对其有需要的受试者中预防或治疗HBV感染或HBV引起的疾病。
17.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物或根据权利要求14所述的药物组合物，所述化合物或药物组合物用于预防或治疗慢性乙型肝炎。
18.一种在对其有需要的个体中治疗HBV感染或HBV引起的疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据权利要求1至13中任一项所述的化合物或根据权利要求14所述的药物组合物。
19.一种包含第一化合物和第二化合物的产品，所述产品作为组合制剂同时、分开或相继用于在对其有需要的受试者中预防或治疗HBV感染或HBV引起的疾病，其中，所述第一化合物不同于所述第二化合物，其中，所述第一化合物是根据权利要求1至13中任一项所述的化合物或根据权利要求14所述的药物组合物，并且其中，所述第二化合物是另一种HBV抑制剂。
20.根据权利要求19所述的产品，其中，所述第二化合物是选自由以下项组成的组的另一种HBV抑制剂：选自HBV组合药物、HBV疫苗、HBV DNA聚合酶抑制剂、免疫调节剂、toll样受体(TLR)调节剂、干扰素α受体配体、透明质酸酶抑制剂、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制剂、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)抑制剂、亲环蛋白抑制剂、HBV病毒进入抑制剂、靶向病毒mRNA的反义寡核苷酸、短干扰RNA(siRNA)和ddRNAi核酸内切酶调节剂、核糖核苷酸还原酶抑制剂、HBV E抗原抑制剂、共价闭合环状DNA(cccDNA)抑制剂、法尼醇X受体激动剂、HBV抗体、CCR2趋化因子拮抗剂、胸腺素激动剂、细胞因子、核蛋白调节剂、视黄酸诱导型基因1刺激剂、NOD2刺激剂、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂、吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)途径抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、重组胸腺素α1、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、KDM抑制剂、HBV复制抑制剂、精氨酸酶抑制剂以及其它HBV药物的治疗剂。
21.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物或根据权利要求14所述的药物组合物，所述化合物或药物组合物用于预防或治疗受试者中的HBV感染或HBV引起的疾病，其中，所述化合物或药物组合物与另一种HBV抑制剂联合施用给所述受试者。
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