CN117860843A

CN117860843A - 台湾白及萃取物用于制备促进慢性伤口愈合的医药组合物的用途

Info

Publication number: CN117860843A
Application number: CN202311313498.2A
Authority: CN
Inventors: 黄聪龙; 张祐嘉
Original assignee: CHANG GUNG UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
Current assignee: CHANG GUNG UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
Priority date: 2022-10-12
Filing date: 2023-10-11
Publication date: 2024-04-12
Also published as: TW202415401A; US20240123017A1; EP4353246A1; JP2024057598A

Abstract

本发明提供一种植物萃取物用于制备促进慢性伤口愈合的医药组合物的用途，其中所述植物萃取物包括有效剂量的白及萃取物。

Description

台湾白及萃取物用于制备促进慢性伤口愈合的医药组合物的用途

技术领域

本发明涉及一种台湾白及(Bletilla formosana(Hayata)Schltr.)萃取物用于制备促进慢性伤口愈合的医药组合物的用途。

背景技术

糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一种代谢疾病，其是因为胰岛素和/或胰岛素生成功能受损进而导致高血糖。DM患者通常伴有许多并发症，其中之一就是自我修复能力受损。

糖尿病伤口愈合障碍与血管、神经病变、免疫和生化成分等多种因素有关。高血糖会使血管硬化，进而导致循环减慢和微血管功能障碍，并导致组织氧合减少；高血糖还会减少白血球迁移到伤口，以致于患者更容易受到感染。而糖尿病中的周围神经病变可能会导致该区域的麻木以及感觉疼痛的能力降低，这可能导致伤口未立即被注意到而采取适当的治疗(Spampinato SF,Caruso GI,De Pasquale R,Sortino MA,Merlo S.The Treatmentof Impaired Wound Healing in Diabetes:Looking among Old Drugs.Pharmaceuticals(Basel).2020；13(4):60.)。

特别注意的是，糖尿病足溃疡(DFU)是DM的主要并发症，其发生在15％的糖尿病患者中。与DFU有关的危险因子被认为是神经病变、血管疾病和感染。过去研究也发现，糖尿病患者下肢截肢的风险是非糖尿病患者的15至46倍。

天然化合物具备丰富来源与多样化骨架优势，是药物开发重要依据。从1981年到2019年，美国食品药物管理局新批准的药物中有近一半来自天然物或是其衍生物，如可卡因(cocaine)衍生的麻醉药品，由吗啡(morphine)衍生的止痛剂，长春新碱(vincristine)、阿霉素(doxorubicin)与紫杉醇(paclitaxel)用来治疗癌症，源自真菌的盘尼西林(penicillin)用来作为抗生素等，因此，本发明积极研究哪些天然化合物具有发展成促进慢性伤口愈合的新型药物的潜力。

发明内容

本发明选用台湾白及(Bletilla formosana(Hayata)Schltr.)作为研究目标。

本发明涉及一种台湾白及萃取物用于制备促进个体慢性伤口愈合的医药组合物的用途，其包括有效剂量的台湾白及萃取物。

在本发明中，其中所述医药组合物还可包括药学上可接受的载体。

在本发明中，所述慢性伤口包括糖尿病伤口或糖尿病足溃疡。

在本发明中，本发明的台湾白及萃取物的有效剂量为0.01毫克/公斤体重至100毫克/公斤体重。

进一步而言，本发明的台湾白及萃取物的有效剂量可为0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、100毫克/公斤体重。

优选地，本发明的有效剂量为1毫克/公斤体重至75毫克/公斤体重。

更优选地，本发明的有效剂量为25毫克/公斤体重至50毫克/公斤体重。

在本发明中，本发明所述个体为人类或哺乳动物。

本发明的医药组合物可包含医药上可接受的赋形剂，尤其是可进一步包含预定的溶剂或油类，如果需要，还可进一步包含分散剂。所用溶剂的实例包括但不限于水、乙醇、异丙醇、1,3-丁二醇、丙二醇、甘油等。所用的油类的实例选自由玉米油、芝麻油、亚麻油、棉花籽油、大豆油、花生油、单–甘油酯、二–甘油酯、三–甘油酯、矿物油、深海鱼鲛油角鲨烯(Squalene)、荷荷巴油(jojoba oil)、橄榄油、月见草油、琉璃苣油(Borage Oil)、葡萄籽油、椰子油、葵花籽油、乳油木果脂及其任意组合所组成的群组，但不以此为限。

溶剂及油类可单独使用或使用其任何的组合。

有益的分散剂实例可包含卵磷脂、有机单甘油酯、山黎醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、硬脂酸山梨醇酐酯等，但不以此为限。这些原料也可单独使用或使用其任何的组合。

优选地，本发明的医药组合物是一种注射剂或非经肠胃道的外用制剂。其中，所述外用制剂的实例包括但不限于乳霜、软膏、凝胶、洗剂、贴布、吸剂、气溶胶及栓剂等。

当该医药组合物作为外用制剂时，可使用适当的皮肤外用制剂作为基础原料，水性溶液、非水性溶剂、悬浮液、乳液或冻干制剂等均可被使用，并按照已知方法消毒。凝胶、乳霜、软膏等。凝胶、乳霜及软膏形式的组合物可根据组合物的形式使用已知方法，经由添加已知软化剂、乳化剂及增稠剂或其他技术中已知的原料而适当地制备。

凝胶形式的组合物例如可通过添加例如三甲基醇丙烷、聚乙二醇及甘油的软化剂、例如丙二醇、乙醇及异鲸蜡醇的溶剂、及纯水制备。

本发明中所述“有效剂量”是施用至个体时达到有效结果的剂量，或者是，在体内或体外拥有所需活性的剂量。在伤口愈合的情况中，与未治疗相比，有效的临床结果包括减缓伤口严重性、和/或延长个体寿命、和/或提高个体生活品质。

附图说明

图1显示了-W+EA有效刺激人类包皮纤维母细胞株Hs68的细胞迁移。图1A为细胞迁移染色影像，图1B为细胞迁移折线图。

图2为本发明的糖尿病伤口愈合试验流程图。

图3显示-W+EA对糖尿病伤口愈合的功效。图3A为未处理组、媒剂组及-W+EA组的伤口愈合照片，图3B为未处理组、媒剂组及-W+EA组的伤口愈合率折线图。*(p<0.05)及**(p<0.01)表示与未治疗组相比具有显著性差异。@(p<0.05)及@@(p<0.01)表示与媒剂组相比具有显著性差异。

图4显示-W+EA外用的情况下只促进糖尿病的伤口愈合，而并非是治疗糖尿病。

图5显示-W+EA对于实验动物的血液生化检测。

具体实施方式

以下实施方式是非限制性的，仅代表本发明的各个方面和特征。

台湾白及萃取物的制备

在本发明中，所取用于制备萃取物的白及样品为白及的根、茎或叶，抑或是其根、茎、叶所组成的混合物。所述白及样品是干燥磨碎后保存于-20℃下直到要用为止。

本发明中，首先将所述白及样品在室温下加入二次蒸馏水中进行超声波震荡，得到上层液及残留物，残留物经冷冻干燥后，再将该残留物以乙酸乙酯进行纯化萃取，得到本发明的台湾白及萃取物，命名为“-W+EA”。

体外伤口愈合试验

本发明首先测试-W+EA在体外促进伤口愈合的能力。

取人类包皮纤维母细胞株Hs68(购自Bioresource Collection and ResearchCenter；BCRC No.:60038)在含有10％胎牛血清和1％青霉素/链脲佐菌素的达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium；DMEM)中，培养于37℃、5％CO₂的培养箱中。

将细胞培养于24孔盘中，并分为三组，分别为对照组(Basal)、-W+EA低剂量组(给予0.1μg/mL的-W+EA)及-W+EA高剂量组(给予1μg/mL的-W+EA)，接着以IBIDI Culture-Inserts(购自GmbH,Germany)，根据制造商的说明书进行体外伤口愈合试验。

将IBIDI Culture-Inserts放入24孔细胞培养盘的孔洞中，并在顶部轻轻按压以确保紧密贴附。IBIDI Culture-Inserts是由一个500μm厚的壁隔开的两个池所组成，将等量的Hs68细胞(4.5×10⁴cells)分配到IBIDI Culture-Inserts的两个池中，培养24小时后，更换为没有胎牛血清的培养基(FBS-free medium)，将IBIDI Culture-Inserts轻轻移除，以形成500μm的间隙，并用PBS进行清洗。

细胞核用2μg/mL的Hoechst 33342进行染色10分钟，并以PBS洗涤，然后依据组别分别用0.1μg/mL的-W+EA及1μg/mL的-W+EA处理细胞，并在第0、6、9、12和24小时后，利用Citation 5成像系统(Biotek，England)观察细胞迁移并拍照。

如图1A及图1B所示，与对照组相比，-W+EA低剂量组及-W+EA高剂量组都有观察到细胞迁移效果，证实-W+EA可以有效促进伤口愈合。

糖尿病伤口愈合试验

本发明的所有动物实验均经长庚大学机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准。

本发明的糖尿病伤口愈合试验流程图如图2所示。

首先建立糖尿病动物模型，本发明选用体重20-25克重的8-9周龄C57BL/6雄性小鼠，将小鼠禁食4小时后连续五天以腹膜内注射55mg/kg体重的溶解在pH4.5柠檬酸盐缓冲液中的链脲佐菌素(STZ)，并在前4天注射STZ后，给予正常食物和3％葡萄糖水，以诱导糖尿病，最后一天则不再给予葡萄糖水，改成给予一般的饮用水。

在上述过程中，STZ注射后72小时，将小鼠禁食4小时，用Contour Plus便携式血糖仪(Ascensia，英国)刺穿小鼠尾巴并放血以测量空腹血糖值。空腹血糖值为150-250mg/dL的动物被认为是糖尿病前期，而>250mg/dL则被认为是糖尿病并用于后续实验。所有的小鼠空腹血糖值均>250mg/dL。

糖尿病动物模型建立后，接着建立糖尿病伤口愈合动物模型。

实验共使用20只C57BL/6雄性糖尿病小鼠，并随机分为4组：未治疗组5只、媒剂组5只(25％ Pluronic F-127及DMSO混合物)、低剂量-W+EA组5只(给予25mg/kg的-W+EA)及高剂量-W+EA组5只(给予50mg/kg的-W+EA)。

每只糖尿病小鼠的毛发均在麻醉下通过剃刀和使用脱毛膏去除，以医用胶带固定背部皮肤防止皮肤拉伸，并使用无菌活检穿孔器造成一左一右的两个直径6mm的全皮层伤口。

实验过程中，所有伤口均以开有圆形缺口的医用胶带固定，使伤口维持在缺口处，医用胶带则将伤口周围皮肤固定，以避免伤口愈合时的皮肤皱缩影响伤口面积计算，左侧伤口未进行任何处理，而右侧伤口则依据组别，分别给予媒剂组溶液(25％ Pluronic F-127及DMSO混合物)、25mg/kg及50mg/kg的-W+EA进行每日局部治疗，持续2周，并每日对伤口进行拍照。

伤口面积是使用Image J分析软件根据每天拍摄的照片进行计算，并表示为与第0天相比的伤口愈合百分比。

伤口愈合的结果如图3A及图3B所示，图3A显示未处理组、媒剂组、低浓度-W+EA组及高浓度-W+EA组的伤口愈合照片，图3B则将伤口面积量化后以折线图显示，结果可以发现，相较于未处理组及媒剂组，-W+EA组处理的小鼠伤口可以看到显著的伤口愈合。

为了进一步确认-W+EA外用的情况下只促进糖尿病的伤口愈合，而并非是治疗糖尿病，因此每只小鼠在第一周及第二周测量空腹血糖值，如图4所示，结果发现每只小鼠的空腹血糖值持续升高，证明-W+EA外用的情况下只促进糖尿病的伤口愈合，而非治疗了糖尿病。

血液生化检测

如图5所示，通过血液生化数值可以发现，-W+EA对于实验动物并未造成肝毒性(GOT、GPT)及肾脏毒性(CRE、BUN)，可见本发明的-W+EA对于实验动物具有高安全性。

尽管本发明已经被足够详细的描述和示例，以供本领域技术人员制作和实施，但在不脱离本发明的精神和范围的情况下，各种替代、修改和改进应该是显而易见的。

本领域技术人员容易理解，本发明很好地适用于实现所述目的并获得所提及的目的和优点以及其中固有的那些目的和优点。细胞、动物以及产生它们的过程和方法仅代表最佳实施方式，是示例性的，并不旨在限制本发明的范围。本领域技术人员能想到其中的修改和其他用途，这些修改包含在本发明的精神内并且由权利要求书的范围所限定。

Claims

1.一种植物萃取物用于制备促进慢性伤口愈合的医药组合物的用途，其中所述植物萃取物包括有效剂量的台湾白及(Bletilla formosana(Hayata)Schltr.)萃取物。

2.如权利要求1所述的用途，其中，所述医药组合物还包含药学上可接受的载体。

3.如权利要求1所述的用途，其中，所述医药组合物是肠胃外的外用制剂。

4.如权利要求1所述的用途，其中，所述医药组合物是皮肤局部用药。

5.如权利要求1所述的用途，其中，所述有效剂量为0.01毫克/公斤体重至100毫克/公斤体重。

6.如权利要求1所述的用途，其中，所述有效剂量为1毫克/公斤体重至75毫克/公斤体重。

7.如权利要求1所述的用途，其中，所述有效剂量为25毫克/公斤体重至50毫克/公斤体重。

8.如权利要求1所述的用途，其中，所述慢性伤口包括糖尿病伤口。

9.如权利要求1所述的用途，其中，所述慢性伤口包括糖尿病足溃疡。