CN117959435A - 山海丹胶囊对高脂血症引起冠心病治疗中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及山海丹胶囊的新应用技术领域，具体公开了一种山海丹胶囊中的化合物在下述中至少一种的应用:对高脂血症引起的冠心病抑制与治疗中的应用；对低密度的脂蛋白过滤清除治疗中的应用；对高脂血症引起的冠状动脉粥样硬化治疗中的应用；对高脂血症、动脉粥样硬化引起的心肌细胞增大与损伤，减少炎性细胞浸润及空泡变性中的应用。

Description

山海丹胶囊对高脂血症引起冠心病治疗中的应用

技术领域

本发明涉及一种山海丹胶囊新应用技术领域，具体的涉及一种山海丹胶囊对高脂血症引起冠心病治疗中的应用。

背景技术

山海丹胶囊剂由人参、黄芪、三七、红花、丹参、川芎、葛根等16味中药制成，具有活血通络，疏通瘀阻，缓解胸痹等功效；在临床用于冠心病的治疗，取得明显的治疗效果；通过进一步的研究发现，山海丹胶囊剂对高脂血症引起的冠心病以及冠状动脉粥样硬化也具有良好的应用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种胶囊剂化合物综合评价方法。

为实现上述目的，本发明提供了一种山海丹胶囊中的化合物在下述中至少一种的应用:

对高脂血症引起的冠心病抑制与治疗中的应用；

对低密度的脂蛋白过滤清除治疗中的应用；

对高脂血症引起的冠状动脉粥样硬化治疗中的应用；

对高脂血症、动脉粥样硬化引起的心肌细胞增大与损伤，减少炎性细胞浸润及空泡变性中的应用。

进一步地，山海丹胶囊中化合物综合评分大于60分的化合物具有下述中至少一种的应用:

对高脂血症引起的冠心病抑制与治疗中的应用；

对低密度的脂蛋白过滤清除治疗中的应用；

对高脂血症引起的冠状动脉粥样硬化治疗中的应用；

对高脂血症、动脉粥样硬化引起的心肌细胞增大与损伤，减少炎性细胞浸润及空泡变性中的应用。

以SD雌性大鼠作为研究对象，采用维生素D3结合高脂饲料喂养18周复制高脂血症引起的动脉粥样硬化心脏功能不全动物模型，经动脉粥样硬化指数、非创及创伤性心脏功能检查、心电监测，以及组织病理学检查证明模型复制成功。停止高脂饲料摄入，同时应用0.15g/kg.d、0.5g/k.d g或1.5g/kg.d的山海丹胶囊进行实验治疗3周后，动物低密度脂蛋白LDL呈明显的降低趋势(γ＝-0.980)。

临床人用量等效剂量范围的山海丹胶囊能明显改善高脂血症引起的冠状动脉粥样硬化心脏功能障碍，能降低左心室舒张末期压，提高左心室收缩压上升与下降的速率±dp/dt，缩小左心室收缩内径(LVIDs)，提高左室后壁收缩期厚度(LVPWs)，心室短轴缩短指数(％FS)，左室射血分数(EF％)。

山海丹胶囊能显著抑制大鼠主动脉粥样硬化的形成，减少内膜下泡沫细胞数，抑制血管壁的增厚，以及动脉粥样硬化斑块的形成。

山海丹胶囊能改善高脂血症、动脉粥样硬化引起的大鼠心肌细胞增大与损伤，减少炎性细胞浸润及空泡变性。

附图说明

图1为山海丹胶囊的高分辨质谱分析图谱；

图2为山海丹胶囊对高脂饲料引起的大鼠体重的影响.Mean±SD，n＝6；

图3为山海丹胶囊对高脂饲料摄入引起大鼠动脉粥样硬化指数的影响.Mean±SD，n＝6；

图4为山海丹胶囊对高脂血症引起大鼠B超心脏功能不全的影响.Mean±SD，n＝6；

图5为山海丹对高脂血症引起大鼠左心室功能的影响.Mean±SD，n＝6；

图6为山海丹胶囊对高脂血症引起的冠心病大鼠主动脉血管病理形态的影响；

图7为山海丹胶囊对高脂血症引起的冠心病大鼠心脏病理形态的影响；

图8为山海丹胶囊对高脂血症引起的冠心病大鼠肝脏病理形态的影响；

图9为山海丹胶囊对高脂血症引起的冠心病大鼠肾脏病理形态的影响。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

1：实验目的

山海丹胶囊剂由人参、黄芪、三七、红花、丹参、川芎、葛根等16味中药制成，具有活血通络，疏通瘀阻，缓解胸痹等功效；在临床用于冠心病的治疗，取得明显的治疗效果。为深入研究山海丹胶囊对高脂血症引起的动脉粥样硬化性心病的防治作用，及其可能的作用机制，本实验采用维生素D3结合高脂饲料复制大鼠高脂血症，进而引起冠状动脉粥样硬化引起的心功能不全动物模型，在停止高脂饲料摄入，并给予不同剂量的山海丹胶囊进行实验治疗的条件下，观察山海丹胶囊对高脂血症引起的冠状动脉粥样硬化心功能不全治疗作用，初步探讨其作用机制，为山海丹胶囊防治冠心病提供实验依据。

2实验材料

2.1供试品

名称：山海丹胶囊

来源：陕西医药控股集团山海丹药业有限公司

性状：内容物为黄棕色粉末

规格：0.5g/粒

批号：202104002

有效期至：2023.03

保存地点：室温保存

剂量设计：根据山海丹胶囊的临床人用量(5粒/次，每天3次)计算得到大鼠等效剂量(0.5g/kg·d)作为中剂量，设置3个剂量分别为1.5g/kg·d、0.5g/kg·d、0.15g/kg·d，相当于生药3.48g/kg·d、1.16g/kg·d或0.29g/kg·d，以0.5ml/100g的体积，灌胃(ig)给药，每天一次，连续3周，对照组给予0.5％的羧甲基纤维素钠(CMC)水溶液。

2.2对照品

名称：立普妥

来源：辉瑞制药有限公司(辽宁)

规格：20mg/片

批号：ET6351

2.3模型复制材料

(1)高脂饲料，D12109C，含胆固醇1.25％。

来源：睿迪生物科技(深圳)有限公司

性状：浅绿色块料

规格：2.5/袋

批号：22010611

保存条件：密封，4-5℃保存

(2)维生素D₃

来源：浙江新和成股份有限公司

性状：白色粉末

规格：150mg/袋

批号：01200702DR

保存条件：密封，避光、室温保存

配制方法：15％乙醇溶解、20％PEG400助溶，5％GS稀释成所需浓度。

给药：造模前，按60mg/kg，ip一次性给药，同时摄入高脂饲料。

2.4主要试剂

总胆固醇测定试剂盒(胆固醇氧化酶，HMMPS法，批号：DM422，日本Wako公司)；甘油三酯测定试剂盒(GPO，HMMPS法，去游离甘油法，批号，DJ169，日本Wako公司)；高密度脂蛋白测定试剂盒(直接测定法，抗体阻碍法；批号，DJ152，日本Wako公司)；低密度脂蛋白测定试剂盒(直接测定法，选择保护法，批号，TN593，日本Wako公司)；

乌拉坦，上海山浦化工有限公司，批号：2019321；α-氯醛糖，上海麦克林生化科技有限公司，批号C13017963。

2.5实验仪器

(1)色谱仪，UltiMate 3000RS，赛默飞世尔科技(中国)有限公司。

(2)质谱仪，UHPLC-Q-Orbitrap HRMS(Thermo Q Exactive)，赛默飞世尔科技(中国)有限公司。

(3)日立7600全自动生化分析仪，日本HITACHI公司。

(4)便携式小动物彩色多普勒超声仪，飞依诺VINNO 6 VET，北京益仁恒业科技有限公司。

(5)泰盟BL-420I生物信号采集与分析系统，成都泰盟软件有限公司。

(6)高级倒置显微镜，OlympuslX73十DP74，日本Olympus公司。

(7)麻醉机，MSS，英国MSS公司。

(8)ME204分析天平，万分之一，梅特勒-托利多仪器有限公司。

(9)Direct-5纯水/超纯水系统，德国默克密理博

3实验系统

3.1实验动物

种属：SD鼠；

等级：SPF级；

动物数量和性别：雌性，40只；

生产许可证号：SCXK(陕)2019001；

体重：241±19g；

来源：空军军医大学实验动物中心；

3.2饲养管理

(1)环境适应

实验前环境适应一周，选择健康雌性无孕SD大鼠用于实验；

适应期主要观察：体重增长及摄食、饮水，以及动物自主活动、行为活动；

(2)饲养地点：

屏障系统，实验动物使用许可证：SYXK(陕)2019-001；

(3)饲养条件

饲养密度：4，6只/笼；

(4)饲养环境条件

饲养环境条件标准：中华人民共和国国标GB14925-2010；

饲养环境控制系统：自动控制全新风中央空调系统

温度：20℃-26℃(日温差≦4℃)

湿度：相对湿度50％-80％

光照：人工照明12小时明暗交替(07点30分开灯，19点30分关灯，如因实验需要，黑暗期间可以暂时照明)。

换气次数：屏障系统最小换气指数15次/小时，100％全新风。

(5)饲料

①标准SPF级全价鼠饲料，空军军医大学实验动物中心；

②D12109C高脂饲料，含胆固醇1.25％，睿迪生物科技(深圳)有限公司。

常规营养成分指标：粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、粗灰分、水分、钙和磷。

(6)饮水

种类：纯化水

供水方法：饮水瓶盛装，自由摄取。

4实验方法

4.1实验方法

(1)山海丹胶囊的质谱分析：称取山海丹胶囊剂粉末100mg，加入1000μl80％甲醇溶液和研磨珠，研磨5min，涡旋10min。在4℃条件下20000g离心10min，取上层清液过滤后上机分析。①质谱条件：离子源：电喷雾电离源(ESI)；扫描方式：正负离子切换扫描；检测方式：Full mass/dd-MS2；分辨率：70000(full mass)，17500(dd-MS2)；扫描范围(scanrange)：100.0～1500.0m/z；电喷雾电压(Spary Voltage)：3.8kV(Positive)；毛细管温度(Capillary Temperature)：300℃；碰撞气：高纯氩气(纯度≥99.999％)；碰撞能(N)CE：30；鞘气：氮气(纯度≥99.999％)，40Arb；辅助气(Aux gas heater temp)：氮气(纯度≥99.999％)，350℃；数据采集时间：30.0min。②色谱条件，色谱柱：AQ-C18，150×2.1mm，1.8μm，Welch；流速：0.30mL/min：水相：0.1％甲酸/水溶液，有机相：甲醇；柱温箱温度：35℃；自动进样器温度：10.0℃；自动进样器进样体积：5.00μl。③结果分析，将高分辨液质系统采集的数据通过CD2.1(Thermo Fisher)数据整理后，进行数据库检索比对(mzCloud)，记录匹配到的所有化合物以及综合评分大于60分的化合物。以下以综合评分大于60分的化合物作为主要的研究实验对象。

表1.色谱梯度

(2)高脂血症动脉粥样硬化动物模型复制：40只动物适应环境饲养1周，随机分为6组，每组6只，包括正常对照组、模型对照组、阳性对照组，山海丹低剂量治疗组、中剂量治疗组及高剂量治疗组；多余的4只作为模型对照1组，用于监测模型进展情况。除正常对照组以外，其余各组分别腹腔注射(ip)维生素D360 mg/kg，给予高脂饲料喂养，自由饮水；正常对照组给予普通饲料。第18周，大鼠经异氟烷麻醉，眶后静脉采血1.5ml，静置30min后，4000rpm离心8min，取上清用生化仪测定血清总胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白，作为动脉粥样硬化评价指数；采用飞依诺VINNO 6VET小动物彩色多普勒超声仪，进行无创心脏功能指标测定监测，并记录II导联心电图(ECG)。确定造模成功后，于第19周停止高脂饲料摄入，同时开始给药治疗，正常对照组和模型对照组给予0.5％CMC溶液，0.5ml/100g的体积灌胃(ig)给药，每天一次，阳性对照组给予5.0mg/kg的立普妥-0.5％CMC溶液，山海丹低、中、高3个剂量组分别给予0.15g/kg、0.5g/kg或1.5g/kg的山海丹进行实验治疗，连续3周；于第21周按上述方法眼眶后静脉采血，测定血清总胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白，评价血脂恢复情况；再次采用小动物多普勒超声仪进行无创心脏功能指标测定；然后进行左心室插管，用BL-420I生物信号采集与分析系统测定左室内压收缩、舒张末期压，以及收缩压上升和下降的速率(±dp/dt)，作为评价左心室功能的有创检测指标；并监测记录II导联心电图(ECG)。最后，放尽血液处死动物，取心、肝、脾、肾称重，测定脏体比；并取心脏、主动脉、肝、肾组织，4％多聚甲醛固定，进行病理组织学检查。

(3)无创小动物多普勒超声心功能监测：大鼠采用异氟烷持续麻醉，仰卧位固定四肢于保温大鼠手术台，将前胸脱毛。采用便携式小动物彩色多普勒超声仪(飞依诺VINNO6VET，探头X10-23L)检测大鼠心功能。探头垂直于大鼠前胸水平面，确定心脏左心室从尖部到基部的平行于长轴的横切面，即心脏长轴(纵轴)面，在小动物多普勒超声仪上呈现的是大鼠的从左心尖到右心基的四腔图，记录心动图监测数据，采用VINNO 6VET内置心脏功能分析系统，分析大鼠心脏功能指标：室间隔舒张期厚度(IVSd)，左心室收缩内径(LVIDs)，左室后壁收缩期厚度(LVPWs)，左室射血分数(EF％)心室短轴缩短指数(％FS)。

(4)创伤性左室收缩与舒张功能检查：采用700mg/kg乌拉坦-50mg/kgα-氯醛ip麻醉大鼠，将大鼠仰位固定于保温大鼠手术台，肝素化大鼠颈动脉插管连接压力传感器，接通BL-420I生物信号采集与分析系统。颈部75％酒精消毒/脱脂，正中切口，分离右侧颈动脉，做左心室插管，进行心功能检查，记录并分析左室内压，包括收缩压、舒张末期压，以及收缩压上升和下降的速率(±dp/dt)。

(5)II导联心电图检查：大鼠采用异氟烷持续麻醉，仰卧位固定四肢于保温大鼠手术台，采用BL-420I生物信号采集与分析系统，大鼠四肢皮下连接ECG导线，监测记录II导联心电图(ECG)，系统分析HR、P-R、QRS、QT、S-T等指标变化情况。

4.2观察指标

(1)山海丹胶囊功效成分鉴定：将高分辨液质系统采集的数据通过CD2.1(ThermoFisher)完成数据初步整理后，进行数据库检索比对(mzCloud)，记录山海丹胶囊样品在mzCloud中共匹配到的所有化合物，并在mzCloud best match中选择综合评分大于60分的化合物。

(2)笼旁观察、体重及摄食量：每天观察大鼠进食，自主活动，与行为活动；每周记录体重一次。

(3)动脉粥样硬化评价指标：维生素D3一次性给药结合高脂饲料摄入14周后，对模型对照1组4只动物采血，测定血清总胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白，监测高脂血症的进展情况。于给予高脂饲料摄入第18周，对所有动物进行眶后静脉采血分离血清，用生化仪测定血清总胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白，作为动脉粥样硬化评价指数。

(4)无创小动物多普勒超声心功能监测：包括室间隔舒张期厚度IVSd(mm)，左心室舒张期内径LVIDd(mm)，左室后壁舒张期厚度LVPWd(mm)，室间隔收缩期厚度IVSs(mm)，左心室收缩内径LVIDs(mm)，左室后壁收缩期厚度LVPWs(mm)，左室射血分数EF(M-Tech)％，心室短轴缩短指数％FS(M)，从左心室收缩与舒张时心室壁的厚度，心室的内径判断左心室的收缩与舒张功能；并根据左心室的射血分数，以及心室短轴缩短指数评价心室的泵血功能。

(5)左室收缩与舒张功能检查：本实验采用传统的创伤性左室检测指标左室收缩压LVSP(mmHg)及其收缩压上升的速率+dp/dt，以及左室舒张末期压LVDP(mmHg)及其舒张压下降的速率-dp/dt，评价其左室功能。

(6)II导联心电图检测：于第18周和21周记录II导联心电图(ECG)，用该系统分析HR、P-R、QRS、QT、S-T等指标变化情况。

(7)心、肝、肾脏器重量/脏体比值测定：实验结束，放尽血液处死动物，进行病理解剖，取心、肝、肾称重，计算脏器指数，脏器指数(％)＝肾脏重量(mg)/体重(g)*100％。

(8)心脏/血管病理解剖与组织病理学观察：取心脏/主动脉4％多聚甲醛中固定，依次进行脱水、透明、石蜡包埋、切片、苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色，于光学显微镜下观察组织形态学变化。

(9)统计学处理：采用Graph.pad Prism 8.0软件进行统计学分析，实验数据以表示，组间比较使用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义，量-效关系评价采用直线回归分析。

5、实验结果

5.1山海丹胶囊的高分辨质谱分析

参照图1，图1中第1栏黑色为负离子模式总离子图，第2栏红色为正离子模式总离子流图采用Thermo Scientific^TM UltiMate^TM3000二元快速分离系统，串联四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)将采集的数据通过CD2.1(Thermo Fisher)完成数据整理后，再进行数据库检索比对(mzCloud)，山海丹胶囊样品在mzCloud中共匹配得到827个化合物，在mzCloud best match中综合评分大于60分的化合物共有421个。

5.2山海丹胶囊对大鼠体重及脏器指数的影响：

图2、表2可见，在21周的实验期间，各组大鼠体重逐渐增长，与正常对照组比较未见明显的统计学差异(P＞0.05)。表3显示，各组动物在摄入高脂饲料18周后，停用高脂饲料，经普通饲料喂养3周后心脏、肝脏和双侧肾脏的重量及其脏体指数，表中数据各组之间未见明显的统计学差异。

表2.山海丹胶囊对高脂饲料引起的大鼠体重的影响.Mean±SD，n＝6.

表3.山海丹胶囊对高脂饲料引起的大鼠心、肝、肾重量(g)及其脏器指数的影响Mean±SD，n＝6.

脏器指数(g/g)＝肾脏重量/结束体重×100％.

5.3山海丹胶囊对大鼠动脉粥样硬化指数的影响：

图3A，B可见，高脂饲料摄入18周，各组动物血清总胆固醇和低密度脂蛋白较正常对照组十分明显地升高，高达10倍至数十倍，组间未见显著性差异。停止高脂饲料的摄入3周后，各组动物血清总胆固醇和低密度脂蛋白明显回落；经3个剂量的山海丹治疗3周后，动物低密度脂蛋白LDL则呈明显的降低趋势(γ＝-0.980)。

A治疗前，B治疗后；TCHO总胆固醇，TG甘油三脂，HDL高密度脂蛋白，LDL低密度脂蛋白；#P<0.05，##P<0.01vs正常对照组。

5.4山海丹胶囊对高脂血症冠心病大鼠无创心脏功能的影响：

图4可见，大鼠摄入高脂饲料18周，小动物B型心脏超声测得室间隔舒张期厚度(IVSd)，左心室舒张期内径(LVIDd)，左室后壁舒张期厚度(LVPWd)，室间隔收缩期厚度(IVSs)，左心室收缩内径(LVIDs)，左室后壁收缩期厚度(LVPWs)，左室射血分数(EF％)，心室短轴缩短指数(％FS)各指标变化，其中心室短轴缩短指数(％FS)明显降低，表明高脂血症引起心脏功能下降，但这些变化未见明显的组间差异。经立普妥或山海丹胶囊治疗3周后，室间隔舒张期厚度(IVSd)，左心室舒张期内径(LVIDd)，左室后壁收缩期厚度(LVPWs)，左室射血分数(EF％)，心室短轴缩短指数(％FS)明显上升，左心室收缩内径(LVIDs)则明显下降，与模型对照组相比较P<0.05，其中左室后壁收缩期厚度(LVPWs)和心室短轴缩短指数(％FS)呈现出明显的剂量依赖关系(γ＝0.935，γ＝0.860)。结果表明，立普妥或山海丹胶囊均具有明显的改善高脂血症引起的心脏功能障碍作用。

IVSd(mm)：室间隔舒张期厚度，LVIDd(mm)：左心室舒张期内径；LVPWd(mm)：左室后壁舒张期厚度；IVSs(mm)：室间隔收缩期厚度；LVIDs(mm)：左心室收缩内径；LVPWs(mm)：左室后壁收缩期厚度；EF(M-Tech)％：左室射血分数；％FS(M)：心室短轴缩短指数；*P<0.05，**P<0.01vs模型对照组，##P<0.01vs正常对照组。

5.5山海丹胶囊对高脂血症冠心病大鼠左室收缩与舒张功能的影响

图5可见，大鼠摄入高脂饲料18周，停止摄入高脂饲料3周后，模型对照组大鼠左室舒张末期压较正常对照组明显升高，左心室舒张的速率-dp/dp明显降低，提示高脂血症导致的左室功能障碍尚未完全恢复，经立普妥或山海丹胶囊治疗3周后，上述情况得到明显改善，表现为左心室收缩压上升的速率+dp/dt明显升高，左室舒张末期压明显降低，其舒张压下降的速率明显升高。表明立普妥或山海丹胶囊均具有明显的改善高脂血症引起的左心室功能障碍作用。

LVSP(mmHg)左室收缩压，LVDP(mmHg)左室舒张末期压，dp/dt收缩压上升的速率，-dp/dt舒张压下降速率；*P＜0.05，**P＜0.01vs模型对照组，##P＜0.01vs正常对照组。

5.6山海丹对高脂血症冠心病大鼠心电图的影响

表4可见，高脂饲料摄入第18周，在给药治疗前共有3只动物出现心律失常，主要表现为室性早搏，分别是模型对照组1只，山海丹胶囊小剂组2只，治疗后模型对照组和山海丹胶囊小剂量各一只恢复。心率HR，P-R间期，Q-T间期，QRS，S-T段未见明显异常。

表4.山海丹胶囊对高脂饲料引起的大鼠II导联心电图的影响.Mean±SD，n＝6.

5.7山海丹胶囊对心脏、主动脉、肾脏及肝脏组织病理学形态的影响：

主动脉组织病理学检查(图6)可见，正常对照组大鼠主动脉组织形态结构清晰、完整，无脂质堆积和斑块形成，内皮光滑，无损伤，呈健康状态，中膜区域可见典型的梭形排列的平滑肌细胞，外膜为疏散的结缔组织结构。模型组有3只大鼠主动脉血管内皮损伤，内膜下少量泡沫细胞，可见大量脂质及坏死物质沉积，内弹性膜断裂，中膜萎缩变薄，伴有严重的斑块形成，形成典型的动脉粥样硬化病理形态；立普妥治疗组有1只大鼠内膜下可见大量脂质及坏死物质沉积，内弹性膜断裂，中膜萎缩变薄，伴有斑块形成，3只大鼠主动脉血管内膜下少量泡沫细胞，血管壁增厚，2只大鼠主动脉血管未见明显异常；山海丹胶囊给药小剂量组仅1只大鼠内膜下可见大量脂质及坏死物质沉积，内弹性膜断裂，中膜萎缩变薄，伴有严重斑块形成，4只大鼠主动脉血管内膜下少量泡沫细胞，血管壁增厚，1只大鼠主动脉血管未见明显异常；山海丹胶囊给药中剂量组仅1只大鼠内膜下可见大量脂质及坏死物质沉积，内弹性膜断裂，中膜萎缩变薄，伴有斑块形成，3只大鼠主动脉血管内膜下少量泡沫细胞，血管壁增厚，2只大鼠主动脉血管未见明显异常；山海丹胶囊给药大剂量组大鼠主动脉血管未见明显斑块形成，3只大鼠主动脉血管内膜下少量泡沫细胞，血管壁增厚，3只大鼠主动脉血管未见明显异常。结果表明，立普妥和山海丹胶囊均显著抑制大鼠主动脉粥样硬化的形成，山海丹胶囊治疗呈现剂量依赖性改善大鼠主动脉粥样硬化。

A：正常对照；B：模型对照；C：立普妥；D：山海丹0.15mg/kg；E：山海丹0.50mg/kg；F：山海丹1.50mg/kg，比例尺为50μm。

心脏组织病理学检查，图7可见正常组大鼠心肌细胞排列整齐，结构清晰；较正常组，模型组大鼠心肌细胞体积增大，排列较紊乱，偶有空泡样变性；山海丹胶囊组和立普妥组大鼠心肌细胞增大情况好转，排列较整齐，炎性细胞浸润及空泡变性情况少见。

A：正常对照；B：模型对照；C：立普妥；D：山海丹0.15mg/kg；E：山海丹0.50mg/kg；F：山海丹1.50mg/kg，比例尺为50μm。

肝脏组织病理学检查图8可见，在正常大鼠肝脏结构完整，可见肝窦肝索，围绕中央静脉呈辐射状排列，肝细胞呈圆形，细胞核位于肝细胞中央，胞质呈淡粉染色，肝脏间质未见炎性反应。与正常组相比较，模型组大鼠肝细胞肿胀变性，胞质内存在大小不一的空泡。山海丹胶囊和立普妥给药组大鼠肝细胞肿胀变性显著程度降低，胞质内大小不一的空泡明显减少。

A：正常对照；B：模型对照；C：立普妥；D：山海丹0.15mg/kg；E：山海丹0.50mg/kg；F：山海丹1.50mg/kg，比例尺为50μm。

肾组织病理学检查图9可见，在正常大鼠肾小球完整清晰，肾小管结构完整规则；与正常组相比较，模型组和给药各组均未发现明显的病理变化。

A：正常对照；B：模型对照；C：立普妥；D：山海丹0.15mg/kg；E：山海丹0.50mg/kg；F：山海丹1.50mg/kg，比例尺为50μm。

6讨论

山海丹胶囊剂由人参、黄芪、三七、红花、丹参、川芎、葛根等16味中药制成；本实验采用Thermo Scientific^TMUltiMate^TM3000二元快速分离系统，串联四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)将采集的数据通过CD2.1整理、数据库检索比对，发现山海丹胶囊样品中含有数百个化合物，初步分析结果表明，这些化合物作为组方药材的有效成分。

临床研究结果表明，山海丹胶囊用于冠心病的治疗，能使患者心电图S-T段电压回升，T波变浅，提高左室射血分数。为了深入研究山海丹胶囊对高脂血症引起的动脉粥样硬化性心脏病的防治作用，探讨其可能的作用机制，本实验以SD雌性大鼠作为研究对象，采用维生素D3结合高脂高胆固醇(1.25％)饲料喂养18周，复制高脂血症动脉粥样硬化引起的心脏功能不全动物模型，经动脉粥样硬化指数、非创及创伤性心脏功能检查、心电监测，以及组织病理学检查证明模型复制成功。长期(18周)的高脂饲料摄入，可引起血清总胆固醇和低密度脂蛋白呈数十倍的升高，这种情况容易引起动脉粥样硬化形成，引起心脏收缩与舒张功能障碍。本实验采用停止高脂饲料摄入的同时，根据临床人用量计算得到大鼠等效剂量(0.5g/kg·d)作为中剂量，上下浮动分别设置3个剂量为1.5g/kg·d、0.5g/kg·d、0.15g/kg·d，ig给药进行实验治疗，每天一次，连续3周，证明山海丹胶囊对实验性高脂血症动脉粥样硬化引起的心功能不全具有明显的治疗作用。

病理组织学检查可见，成年SD大鼠摄入正常饲料，经过21周的饲养，主动脉组织形态结构清晰、完整，无脂质堆积和斑块形成，内皮光滑，无损伤，呈健康状态；中膜区域可见典型的梭形排列的平滑肌细胞，外膜为疏散的结缔组织结构。然而，模型对照组动物摄入高脂饲料18周，停止高脂饲料摄入3周，还可见血管内皮损伤，内膜下少量泡沫细胞，以及大量脂质与坏死物质沉积，内弹性膜断裂，中膜萎缩变薄，伴有严重的斑块形成，形成典型的动脉粥样硬化病理形态；进而引起心肌细胞体积增大，排列较紊乱，甚至空泡样变性；从而影响心脏收缩与舒张功能；使左心室舒张末期压明显高于正常对照组，左心室舒张的速率-dp/dp明显低正常对照组，这种状态一直持续3周以上不能完全恢复。

本实验停止高脂饲料摄入，同时应用0.15g/kg.d、0.5g/k.d g或1.5g/kg.d的山海丹胶囊进行实验治疗3周后，表现为低密度脂蛋白降低，明显改善高脂血症引起的冠状动脉粥样硬化心脏功能障碍，能降低左心室舒张末期压，提高左心室收缩压上升与下降的速率±dp/dt，缩小左心室收缩内径(LVIDs)，提高左室后壁收缩期厚度(LVPWs)，心室短轴缩短指数(％FS)，左室射血分数(EF％)。

6.2结论：

临床人用量等效剂量范围的山海丹胶囊对高脂血症、动脉粥样硬化引起的冠状动脉粥样硬化大鼠心脏功能不全，具有明显的治疗作用；能降低低密度脂蛋白LDL含量，减少主动脉内膜下泡沫细胞的聚集，抑制血管壁的增厚，以及动脉粥样硬化斑块的形成；同时改善高脂血症、动脉粥样硬化引起的大鼠心肌细胞增大与损伤，减少炎性细胞浸润及空泡变性，从而改善心脏的收缩与舒张功能。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (8)

1.一种山海丹胶囊中的化合物在下述中至少一种的应用:

对高脂血症引起的冠心病抑制与治疗中的应用。

2.一种山海丹胶囊中的化合物在下述中至少一种的应用:

对低密度的脂蛋白过滤清除治疗中的应用。

3.一种山海丹胶囊中的化合物在下述中至少一种的应用:

对高脂血症引起的冠状动脉粥样硬化治疗中的应用。

4.一种山海丹胶囊中的化合物在下述中至少一种的应用:

对高脂血症、动脉粥样硬化引起的心肌细胞增大与损伤，减少炎性细胞浸润及空泡变性中的应用。

5.根据权利要求1所述的山海丹胶囊中的化合物的应用，其特征在于，山海丹胶囊中化合物综合评分大于60分的化合物具有下述中至少一种的应用:

对高脂血症引起的冠心病抑制与治疗中的应用。

6.根据权利要求1所述的山海丹胶囊中的化合物的应用，其特征在于，山海丹胶囊中化合物综合评分大于60分的化合物具有下述中至少一种的应用:

对低密度的脂蛋白过滤清除治疗中的应用。

7.根据权利要求1所述的山海丹胶囊中的化合物的应用，其特征在于，山海丹胶囊中化合物综合评分大于60分的化合物具有下述中至少一种的应用:

对高脂血症引起的冠状动脉粥样硬化治疗中的应用。

8.根据权利要求1所述的山海丹胶囊中的化合物的应用，其特征在于，山海丹胶囊中化合物综合评分大于60分的化合物具有下述中至少一种的应用:

对高脂血症、动脉粥样硬化引起的心肌细胞增大与损伤，减少炎性细胞浸润及空泡变性中的应用。