CN117815261A - 一种锯叶棕果实提取物及其软胶囊的医药新用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种锯叶棕果实提取物及其软胶囊的医药新用途。申请人通过二次开发从锯叶棕果实中提取分离得到具有治疗人前列腺癌和/或卵巢癌的多糖,并公布在专利CN117164736A中。对这些多糖的进一步活性研究发现,多糖组分JYZ‑2对溃疡性结肠炎具有明显的治疗作用,可用于制备治疗溃疡性结肠炎的药物,具体可以多糖组分JYZ‑2为活性成分,用药学上可接受的辅料制成药学上可接受的剂型,如软胶囊。

Description

一种锯叶棕果实提取物及其软胶囊的医药新用途
技术领域
本发明属于医药领域,涉及植物提取物的新用途,具体涉及一种锯叶棕果实提取物及其软胶囊的医药新用途。
背景技术
锯叶棕果实提取物软胶囊为申请人在售产品,主要活性成分为脂肪酸和植物甾醇类。经二次开发,申请人从锯叶棕果实中提取分离得到三种多糖组分JYZ-0、JYZ-1、JYZ-2(见专利CN117164736A)。活性研究表明,多糖组分JYZ-1、JYZ-2具有治疗人前列腺癌和卵巢癌的作用,而多糖组分JYZ-0对人前列腺癌或卵巢癌均无明显抑制作用。
溃疡性结肠炎(UC)是临床中常见的肠道慢性炎症疾病,临床主要表现为腹泻、腹痛及黏液脓血便。UC发病原因尚不明确,可能与遗传、环境、精神刺激、肠道细菌或病毒感染以及自身免疫失衡等多种因素有关。药物治疗为该病主要治疗方法,尽管相关治疗药物众多,但是并无根治该病的有效方法,其治疗问题也是临床中的难点。
基于申请人对多糖组分JYZ-2活性研究的新发现,特提出本发明创造。
发明内容
本发明的目的在于提供一种锯叶棕果实提取物及其软胶囊的医药新用途。
本发明上述目的通过如下技术方案实现:
一种锯叶棕果实提取物用于制备治疗溃疡性结肠炎药物的用途,所述锯叶棕果实提取物通过如下步骤制备:以锯叶棕果实为原料,依次经脱脂、水提醇沉、脱蛋白得到粗多糖;将粗多糖用DEAE-52纤维素层析柱分离,依次用0.1、0.3、0.5mol/L的NaCl溶液进行洗脱,绘制DEAE-52纤维素洗脱曲线,收集0.5mol/LNaCl溶液洗脱峰相对应的多糖洗脱液,浓缩、透析脱盐、冷冻干燥。
优选地,水提醇沉步骤中加入4倍体积的无水乙醇,醇沉过夜。
优选地,DEAE-52纤维素层析柱分离步骤具体为:采用湿法装柱,将预处理的DEAE-52纤维素装于5cm×100cm的层析柱中,用去离子水将柱材料压实;取适量粗多糖,用适量去离子水溶解,上样于层析柱中,依次用0.1、0.3、0.5mol/L的NaCl溶液进行洗脱,先放空1个柱体积去离子水后,再按30mL/每管收集不同浓度NaCl溶液洗脱液,每个浓度收集50管。
更优选地,所述治疗溃疡性结肠炎药物以所述锯叶棕果实提取物为活性成分,用药学上可以接受的辅料制成药学上可以接受的剂型。
更更优选地,所述辅料为固体、液体或半固体辅料。
更更优选地,所述剂型包括软胶囊。
有益效果:
申请人通过二次开发从锯叶棕果实中提取分离得到具有治疗人前列腺癌和/或卵巢癌的多糖,并公布在专利CN117164736A中。对这些多糖的进一步活性研究发现,多糖组分JYZ-2对溃疡性结肠炎具有明显的治疗作用,可用于制备治疗溃疡性结肠炎的药物,具体可以多糖组分JYZ-2为活性成分,用药学上可接受的辅料制成药学上可接受的剂型,如软胶囊。
附图说明
图1为各组小鼠DAI分值;
图2为各组小鼠结肠长度(cm);
图3为各组小鼠紧密连接蛋白表达水平。
具体实施方式
下面结合实施例具体介绍本发明实质性内容,但并不以此限定本发明的保护范围。
一、材料
多糖组分JYZ-2的制备方法见专利CN117164736A,干燥保存。
SPF级雄性C57BL/6J小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
动物造模用葡聚糖硫酸钠(DSS)购自翌圣生物科技(上海)股份有限公司。
RIPA蛋白裂解液购自上海晶风生物科技有限公司。
BCA蛋白浓度测定试剂盒购自北京伊塔生物科技有限公司。
闭合蛋白(Occludin)和ZO-1蛋白一抗购自武汉博欧特生物科技有限公司。
GAPDH一抗和辣根过氧化物酶标记的二抗购自碧云天生物。
二、方法
1、动物饲养
SPF级雄性C57BL/6J小鼠,6-8周龄,保证自由进食进水,使用粮食、饮用水及垫料均经灭菌。饲养温度(22±2)℃,湿度(55±10)%,12小时白昼和12小时黑夜交替维持实验动物生物节律。适应性饲养一周后开展实验。
2、溃疡性结肠炎(UC)造模、分组和给药
将小鼠随机分为5组,每组6只:正常对照组(Control)、模型组(Model)、JYZ-2低剂量组(JYZ-2-L,100mg/kg/天)、JYZ-2中剂量组(JYZ-2-M,200mg/kg/天)和JYZ-2高剂量组(JYZ-2-H,400mg/kg/天)。
模型组、JYZ-2低剂量组、JYZ-2中剂量组和JYZ-2高剂量组在饮用水中加入3%的DSS,持续14天,以建立UC模型。其中,JYZ-2低剂量组、JYZ-2中剂量组和JYZ-2高剂量组小鼠在造模8~14天时每日灌胃给予相应剂量的多糖组分JYZ-2(以生理盐水为溶媒),模型组小鼠在造模8~14天时每日灌胃给予等剂量的生理盐水。
正常对照组小鼠在14天内给予正常饮用水,不灌胃给予JYZ-2或生理盐水。
各组小鼠在14天内正常饮食。
第15日收集小鼠的体重、大便性状和血便数据后进行后续实验。
3、疾病活动指数(DAI)测定
实验过程中每天记录小鼠的体重、大便性状和血便数据,根据评分表打分,并根据公式计算各组小鼠的DAI分值。
评分表
体重减轻 大便性状 血便 评分
正常 无血 0
1%~5% 粪便较软 / 1
5%~10% 粪便湿软 阳性隐血 2
10%~20% 半稀便 / 3
>20% 稀便 明显便血 4
计算公式:DAI=(体重减轻评分+大便性状评分+血便评分)÷3。
4、结肠形态观察
各组小鼠脱颈处死,解剖,取结肠,用预冷的PBS溶液缓慢清洗,测量记录结肠长度。
5、结肠紧密连接蛋白表达水平测定
取结肠远端片段约0.5cm,放入离心管中,加RIPA蛋白裂解液,用手持式匀浆机进行匀浆。匀浆完成后放置冰上充分裂解30min,4℃条件下12000r/min离心15min,收集上清液,采用BCA法测定蛋白浓度。取40μg蛋白上样,经10%SDS-PAGE电泳分离蛋白,然后用湿转法将蛋白质转移至PVDF膜上,在含5%脱脂奶粉的封闭液中室温封闭2h,分别加入闭合蛋白(Occludin)、ZO-1蛋白和GAPDH一抗,4℃过夜,洗膜后加入辣根过氧化物酶标记的二抗,37℃孵育60min,充分洗涤后,用Imager拍照分析。其中,GAPDH为内参。
6、统计学处理
采用统计学软件SPSS17.0软件包进行统计学分析,结果以均值±标准差表示,以P<0.05为差异具有统计学意义。
三、结果
1、DAI分值
各组小鼠DAI分值如表1和图1所示,与Control组相比,Model组DAI分值显著升高(P<0.05),说明溃疡性结肠炎模型造模成功;与Model组相比,JYZ-2低、中、高剂量组DAI分值显著降低(P<0.05),说明JYZ-2有效缓解了溃疡性结肠炎。
表1各组小鼠DAI分值
组别 均值 标准差
Control组 0.11 0.17
Model组 3.44 0.27
JYZ-2低剂量组 2.83 0.55
JYZ-2中剂量组 2.33 0.42
JYZ-2高剂量组 1.22 0.34
2、结肠长度
各组小鼠结肠长度如表2和图2所示,与Control组相比,Model组结肠长度显著变短(P<0.05),说明溃疡性结肠炎模型造模成功;与Model组相比,JYZ-2低、中、高剂量组结肠长度显著增长(P<0.05),说明JYZ-2有效缓解了溃疡性结肠炎。
表2各组小鼠结肠长度(cm)
组别 均值 标准差
Control组 7.73 0.51
Model组 6.15 0.47
JYZ-2低剂量组 6.85 0.44
JYZ-2中剂量组 7.42 0.55
JYZ-2高剂量组 7.70 0.49
3、紧密连接蛋白表达水平
肠道上皮细胞通过细胞间紧密连接形成整体,从而防止物质的扩散,维持自身极性,是构成肠道机械屏障的重要组成部分。紧密连接由闭合蛋白(Occludin)、密封蛋白(Claudin)、连接粘附分子(JAM)、ZO蛋白等蛋白组成,其中ZO蛋白属于细胞内的接头蛋白,将肌动蛋白纤维以及闭合蛋白(Occludin)、密封蛋白(Claudin)、连接粘附分子胞内区连接起来,以多种方式影响肠屏障的完整性(Mechanisms regulating intestinal barrierintegrity and its pathological implications[J].Experimental and MolecularMedicine,2018;紧密连接蛋白Occludin、ZO-1在溃疡性结肠炎中的表达及其临床意义[J].现代药物与临床,2018)。通过测定ZO-1和Occludin在结肠组织中的表达可以评价各组小鼠肠道屏障完整性。
各组小鼠结肠ZO-1和Occludin蛋白表达水平如图3所示,与Control组相比,Model组ZO-1和Occludin蛋白表达水平显著下调(P<0.05),说明溃疡性结肠炎模型造模成功;与Model组相比,JYZ-2低、中、高剂量组ZO-1和Occludin蛋白表达水平显著上调(P<0.05),说明JYZ-2有效缓解了溃疡性结肠炎。
综上可见,锯叶棕果实中提取分离得到的多糖组分JYZ-2对溃疡性结肠炎具有明显的治疗作用,可用于制备治疗溃疡性结肠炎的药物,具体可以多糖组分JYZ-2为活性成分,用药学上可接受的辅料制成药学上可接受的剂型,如软胶囊。

Claims (6)

1.一种锯叶棕果实提取物用于制备治疗溃疡性结肠炎药物的用途,所述锯叶棕果实提取物通过如下步骤制备:以锯叶棕果实为原料,依次经脱脂、水提醇沉、脱蛋白得到粗多糖;将粗多糖用DEAE-52纤维素层析柱分离,依次用0.1、0.3、0.5mol/L的NaCl溶液进行洗脱,绘制DEAE-52纤维素洗脱曲线,收集0.5mol/LNaCl溶液洗脱峰相对应的多糖洗脱液,浓缩、透析脱盐、冷冻干燥。
2.根据权利要求1所述的用途,水提醇沉步骤中加入4倍体积的无水乙醇,醇沉过夜。
3.根据权利要求1所述的用途,DEAE-52纤维素层析柱分离步骤具体为:采用湿法装柱,将预处理的DEAE-52纤维素装于5cm×100cm的层析柱中,用去离子水将柱材料压实;取适量粗多糖,用适量去离子水溶解,上样于层析柱中,依次用0.1、0.3、0.5mol/L的NaCl溶液进行洗脱,先放空1个柱体积去离子水后,再按30mL/每管收集不同浓度NaCl溶液洗脱液,每个浓度收集50管。
4.根据权利要求1~3任一所述的用途,所述治疗溃疡性结肠炎药物以所述锯叶棕果实提取物为活性成分,用药学上可以接受的辅料制成药学上可以接受的剂型。
5.根据权利要求4所述的用途,所述辅料为固体、液体或半固体辅料。
6.根据权利要求4所述的用途,所述剂型包括软胶囊。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN201088722Y (zh) * 2007-03-29 2008-07-23 东莞劲芳生物医药孵化器有限公司 锯叶棕果实提取物软胶囊
CN117164736A (zh) * 2023-09-22 2023-12-05 江苏弘惠医药有限公司 一种锯叶棕果实提取物、软胶囊及其在制备治疗性腺疾病药物中的应用

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