CN117777287A - 靶向降钙素原的抗体f4b4及其应用 - Google Patents
靶向降钙素原的抗体f4b4及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117777287A CN117777287A CN202310557427.0A CN202310557427A CN117777287A CN 117777287 A CN117777287 A CN 117777287A CN 202310557427 A CN202310557427 A CN 202310557427A CN 117777287 A CN117777287 A CN 117777287A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- procalcitonin
- pad
- detection
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108010048233 Procalcitonin Proteins 0.000 title claims description 85
- CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N procalcitonin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(O)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CSSC1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N 0.000 title claims description 76
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title claims description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 57
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 claims abstract description 10
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 19
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 17
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 7
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 7
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 5
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 4
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims description 4
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 4
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 claims description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 39
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 33
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 33
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 13
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 8
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 7
- 238000013461 design Methods 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 7
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 7
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 6
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 6
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 5
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 5
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010000 Agranulocytosis Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 2
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 206010018687 Granulocytopenia Diseases 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 2
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 2
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 230000005477 standard model Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000008718 systemic inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 238000010989 Bland-Altman Methods 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010061819 Disease recurrence Diseases 0.000 description 1
- 241000390128 Eutrema Species 0.000 description 1
- 208000037194 Fever of Unknown Origin Diseases 0.000 description 1
- 208000035357 Focal Infection Diseases 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 206010069351 acute lung injury Diseases 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000013211 curve analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000004412 neuroendocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 208000012111 paraneoplastic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000003904 radioactive pollution Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明提供一种靶向降钙素原的抗体F4B4及其应用。抗体F4B4的轻链、重链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、2所示。利用该抗体开发了侧向流免疫层析检测试剂。该抗体灵敏度高,特异性好,在免疫诊断领域具有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及免疫检测技术领域,具体地说,涉及一种靶向降钙素原的抗体F4B4及其应用。
背景技术
降钙素原(procalcitonin,PCT)是一种由116个氨基酸组成的非激素活性糖蛋白,是降钙素(Calcitonin,CT)的前体。PCT是20世纪80年代在肿瘤标志物研究中发现的。20世纪90年代,在对急性肺损伤标志物的研究中,发现脓毒症和感染性休克患者的血清PCT指数会出现急剧升高。引入该主题是为了讨论PCT与感染之间是否存在关系,后续研究表明,PCT可作为严重细菌感染尤其是脓毒症的血清标志物,是早期辅助鉴别诊断全身炎症反应的重要指标,可作为判断疾病严重程度、治疗疗效和预后的重要指标。
PCT参与免疫调节作为炎症检测指标的临床应用:
作为一种免疫调节蛋白,PCT是检测炎症最常用的标志物之一。PCT诱导受到机体严格的调控,其激活步骤在时间和功能上均高度关联,这种关联性可能被用于反映疾病的严重程度。在生理条件下,PCT由甲状腺滤泡旁细胞合成。在存在细菌感染的情况下,身体其他部位的细胞(例如单核细胞和神经内分泌细胞)在细胞因子刺激下激活降钙素原对应的CALC-I基因的诱导表达,进而导致PCT被持续表达和释放。此外,PCT在体内外非常稳定,易于检测,其浓度升高不易受到机体免疫抑制状态的影响。正因如此,PCT被认为是在全身炎症反应的早期检测中起着重要作用的生物标记物,从而广泛用于包括细菌感染性疾病在内的多种临床症状的鉴别诊断、病情的判断和预后的评估,包括但不限于重大创伤(意外创伤、手术、烧伤)、多器官功能不全、严重胰腺炎或严重肝病或肾病、新生儿初生早期。另外,非感染性的PCT升高可能与严重的组织损伤、血浆促炎细胞因子水平升高、严重的器官环境障碍或者副肿瘤综合征等因素有关。PCT对区分感染性和非感染性发热(如肿瘤热、药物热)具有高敏感性和特异性。淋巴瘤患者在化疗后由于免疫功能障碍和粒细胞缺乏症,很容易并发严重感染。研究表明,伴有明显感染和发热的粒细胞减少患者PCT水平明显升高,而局灶性感染或不明原因发热患者PCT水平无明显改变,为细菌性血流感染的早期诊断以及避免抗生素的过度应用提供了参考。
PCT大幅升高通常表明血液感染和脓毒症性休克等不良后果,这些都是疾病诊疗和预后管理的重要参考。此外,在实体瘤中,PCT与肿瘤负荷、复发、预后等指标具有一定的相关性。这些慢性抗原持续刺激带来的炎症反应与淋巴瘤的病理过程有关,也在一定程度上解释了没有明显感染的淋巴瘤患者PCT增加的原因。特定细胞因子(如IL-6)通过促进肿瘤细胞活化和调节相关DNA活性(如实体瘤中的高突变进程)参与淋巴瘤的病理过程,从而促进淋巴瘤的发展。这些细胞因子也可诱导PCT表达释放,反映了PCT与淋巴瘤发生发展和发病机制的密切关系,为淋巴瘤分型和临床分期提供依据。PCT可用作疾病的早期指标并对患者预后评估有参考意义。需要注意的是,患者治疗后免疫功能和整体身体状况的变化可以使得PCT指标的临床敏感性降低。PCT指标可以反映患者的整体状态、肿瘤负荷等状况,与淋巴瘤患者的长期生存和疾病复发相关,在疾病早期提供预后评估的参考,有助于确定患者对化疗的耐受性,从而为评估治疗风险提供更全面的信息。
PCT的标准化检测方法:
PCT半衰期为25-30h,体外稳定性好,便于检测,室温采血24h后PCT浓度下降约12%。在4℃下储存时仅减少6%。因此,如果血液采集后不能立即进行检测,样本必须低温保存。目前PCT临床检测方法主要有化学发光免疫分析法、放射免疫分析法、胶体金法、透射免疫比浊法、时间分辨荧光免疫分析技术等,其基本原理是抗原与抗体的免疫结合反应。
侧向层析快速诊断试剂盒的检测方法通常只能提供定性结果,不太适用于需要根据精细的定量结果对感染情况进行诊断的特定病原体(如某些细菌、支原体、病毒等),而基于时间分辨荧光免疫分析技术的侧向层析快速诊断试剂盒,在使用特定仪器和利用上述(比如基于稀土元素的螯合物等新型设计)特定抗体化学标记的前提下,具有高灵敏度、便捷操作、自动化程度高、标准曲线宽、不受天然样品荧光干扰、标记物制备简单稳定、无放射性污染等特点,可广泛用于快速检测或诊断。通过免疫反应可以考虑使用定量或半定量的方法估算标记抗体的浓度,并推算所结合靶标抗原的浓度,从而理论上可以实现对特定病原微生物的快速诊断和精细(半)定量。
无论如何,侧向层析快速诊断试剂盒达到了灵敏度、稳定性、经济性和易用性兼顾的一般标准,通常情况下并不需要快速诊断所需的设备,因而具有重要而广泛的实用价值。侧流免疫层析快速诊断试剂盒的这些优势对于缺乏专业设备和未经培训的技术人员的单位和地区尤为重要,而对于拥有专业设备和经过培训的技术人员的单位和地区,相应的产品的新型设计依然能够满足精细的定量或半定量的要求。
发明内容
本发明的目的是提供一种靶向降钙素原的抗体F4B4及其应用。
为了实现本发明目的,第一方面,本发明提供一种靶向降钙素原的抗体F4B4,所述抗体的轻链高变区CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别为RSSQSLVDSNGNTYLH、SVSNEFS和SQSIDVPWT,抗体F4B4的重链高变区CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别为RYTMH、GVWPNNGGTTYSQEFKG和YTIYSDGSSYAMDY。
所述抗体的轻链、重链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、2所示。
第二方面,本发明提供所述抗体在制备降钙素原检测试剂或试剂盒中的应用。
第三方面,本发明提供由所述抗体制备的降钙素原检测试剂或试剂盒。
第四方面,本发明提供所述抗体在制备降钙素原免疫层析检测试纸条或试剂盒中的应用。
第五方面,本发明提供所述抗体在制备降钙素原侧向流免疫层析诊断试剂盒中的应用。
第六方面,本发明提供一种降钙素原免疫层析检测试纸条,包括样品垫、结合垫、NC膜、吸水垫和底板,所述反应膜上设有检测线和质控线,所述样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫依次粘贴在底板上。
其中,所述结合垫上包被有免疫(荧光)微球偶联的靶向降钙素原的抗体A4D7;所述检测线包被有抗体F4B4,所述质控线包被有羊抗鼠多抗。
抗体A4D7的轻链、重链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:3、4所示。
优选地,所述结合垫上包被的抗体A4D7的浓度为10-15μg/mL。
优选地,所述检测线上包被的抗体F4B4的浓度为1.5-2mg/mL。
优选地,所述样品垫、所述吸水垫的材质为纤维素,所述结合垫的材质为玻璃纤维。
第七方面,本发明提供降钙素原定性和(半)定量快速检测方法(含非诊断目的),所述检测方法为双抗体夹心法,所用第一抗体为靶向降钙素原的抗体A4D7(其轻链、重链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:3、4所示),所用第二抗体为抗体F4B4。
本发明中,抗体F4B4和A4D7分别结合于降钙素原的不同表位。
本发明中,相应的抗原氨基酸序列为进行相应调整或修饰后的氨基酸序列,修饰材料包括但不限于纳米材料、荧光材料、酶类、生物素和蛋白质中的一种或几种。有利于将调整或修饰的氨基酸序列应用于降钙素原的检测、降钙素原的免疫抗原设计等。
借由上述技术方案,本发明至少具有下列优点及有益效果:
(一)本发明提供一种靶向识别降钙素原的抗体F4B4,并将其用于侧向流免疫层析快速诊断试剂盒的构建。该抗体具有高特异性和高亲和力特性,以各氨基酸序列中的一个或多个为核心,将其应用于降钙素原治疗靶点设计,可以设计出针对降钙素原的治疗制剂,所述治疗靶点设计包括但不限于治疗性抗体的靶点设计。
(二)该抗体不仅可以有效用于降钙素原的定量和/或定性检测,还可用于ELISA检测、免疫化学发光法检测和免疫荧光法检测等多种检测方法,应用范围广、适用性强。
(三)本发明基于侧向流免疫层析快速诊断试剂盒的优势在于检测限较低,灵敏度较高;并且选用的抗体是特异性靶向具有高度保守氨基酸序列的抗原表位,降低检测成本,缩短检测时间,提高检测效率。侧向流免疫层析快速诊断试剂盒是一项具有重要应用价值的检测技术,能够实现快速诊断所要求的灵敏、稳定、经济、用户友好和无需设备等通用标准。该侧向流免疫层析快速诊断试剂盒的这些优势,尤其是对于缺乏专业设备和缺乏受过良好训练的技术人员的单位或地区具有重要意义。
附图说明
图1为本发明较佳实施例中利用纯化的重组PCT蛋白的蛋白电泳的结果。
图2为本发明较佳实施例中抗体F4B4在梯度浓度下分别与重组降钙素原蛋白抗原结合曲线图。其中,0.5μg(/mL)为每孔包被抗原50ng(100μL每孔)的结合曲线,1μg(/mL)为包被每孔抗原100ng(100μL每孔)的结合曲线。
图3为本发明较佳实施例中单抗的配对筛选实验结果;其中,A为F4B4搭配A4D7,B为F4B4搭配C2F9,C为F4B4搭配E4F4。
图4为本发明较佳实施例中抗体F4B4的稳定性考察结果。
图5和图6为本发明较佳实施例中使用降钙素原溶液标准物质对基于本发明抗体开发的侧向流免疫层析快检试剂进行检测(不同稀释度)的结果;其中,图5为不分批次的分析结果,图6为分批次的分析结果。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。若未特别指明,实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段,所用原料均为市售商品。
实施例1产单克隆抗体的杂交瘤制备
1、降钙素原蛋白抗原的设计、制备及载体偶联
根据GenBank上的降钙素原基因的相关信息(NM_001741.3,SEQ ID NO:5),获得降钙素原的氨基酸序列(SEQ ID NO:6)。经过免疫原性、亲疏水性及表面可及性分析,最终筛选降钙素原CDS区全长141个氨基酸的多肽序列为抗原(图1),该抗原降钙素原为自行表达合成(将基因全长克隆到表达载体pET20b上)。
2、免疫小鼠
将合成抗原降钙素原蛋白与弗氏完全佐剂按1:1混匀500μL乳化后,皮下多点注射6-8周龄雌性Balb/c小鼠3只,每只小鼠抗原接种剂量为50μg,三周后抗原与弗氏不完全佐剂按1:1混匀500μL乳化后皮下多点注射,每只小鼠抗原接种剂量为50μg,间隔三周后50μg不加佐剂腹腔注射,共免疫4次。结果见表1:
表1合成抗原降钙素原蛋白免疫小鼠的结果测定
3、免疫血清效价测定
采用间接ELISA法测定免疫血清效价。取50μg合成抗原降钙素原蛋白溶解于10mL0.05M pH9.6磷酸盐缓冲液,包被聚苯乙烯96孔板,100μL/孔,4℃过夜。使用PBS(含有0.05%v/v Tween-20)洗板三次,用10mM PBS含1%BSA封闭液100μL/孔,37℃封闭2h,用PBS(含有0.05%v/v Tween-20)洗板三次,第三次免疫后10天小鼠尾静脉采血,鼠免疫血清用含1%BSA的10mM PBS进行10-2~10-8倍稀释,加入96孔板,100μL/孔37℃1h,PBS(含有0.05%v/v Tween-20)洗板三次后,加入1:10000倍稀释辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠IgG(Sigma,INC.),100μL/孔,37℃30min,同上洗板后,TMB显色,100μL/孔,室温避光10min,加50μL/孔2M H2SO4终止反应,测450nm吸收值,以免疫前小鼠血清作为阴性对照,以测定值与对照值之比≥2.1为阳性判断值来确定免疫血清效价。
4、杂交瘤的制备
取血清效价大于1:105的小鼠,融合前3天,取合成的抗原降钙素原蛋白与等体积的PBS混匀后,以每只50μg/500μL的量腹腔注射BALB/c待融合小鼠进行加强免疫。无菌取小鼠脾脏,制成脾细胞悬液与对数生长期的小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0按1:1的比例混合,1000g室温离心5min,弃上清,用手指轻弹离心管底部,使沉淀松散,离心管置于37℃水浴中,将在37℃水浴保温的50%聚乙二醇(PEG,MW4000,Sigma)用滴管一滴滴加入离心管中,边滴边摇动离心管,1min内滴完,滴完后静置2min,每隔1min加入37℃预热的无血清1640培养基1mL、2mL、3mL、4mL、5mL和10mL来终止聚乙二醇的作用,细胞混合物1000g室温离心5min,弃上清,加入HAT培养液(次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)(HAT,Sigma))轻轻重悬细胞,将细胞分至96孔板中,每孔200μL。培养三天后,观察细胞融合情况,更换一半HAT培养液,连续数日,直至有克隆形成,融合后七天更换HT培养液(次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶核苷(T)(HT,Sigma))培养。
5、筛选分泌抗降钙素原单克隆抗体的杂交瘤细胞
间接ELISA法筛选细胞培养上清,选择效价较高的阳性克隆杂交瘤细胞进行亚克隆化(表2),并用有限稀释法连续克隆化2-3次,直至到100%细胞阳性率,最后获得稳定分泌抗降钙素原蛋白单克隆抗体细胞株,标记为F4B4等。将克隆化后阳性率达100%的细胞扩增培养后液氮冻存。
表2单克隆抗体筛选结果
6、腹水的制备和纯化
将杂交瘤细胞株F4B4以1×106/只的量注入液体石蜡预处理的8-10周龄的BALB/c雌性小鼠腹腔,饲养观察10-14天后小鼠腹部膨大时抽取腹水。采用亲和色谱法Protein GSepharose Fast Flow纯化单克隆抗体,以SDS-PAGE测定单克隆抗体的纯度,纯度达到90%以上。
实施例2单克隆抗体F4B4的特性鉴定
1、抗体浓度的测定:经杂交瘤细胞F4B4等制备的腹水经纯化后获得抗降钙素原的单克隆抗体F4B4等,使用Thermofisher公司生产的Nanodrop核酸蛋白测定仪测定,其浓度为>1mg/ml。
2、抗体亚型鉴定:采用Thermofisher的鼠单抗亚型鉴定试剂盒鉴定杂交瘤细胞株的亚型,F4B4分泌抗体的亚型为IgG1型,轻链为κ链。
3、纯化抗体的效价鉴定:50μg合成降钙素原蛋白溶于10mL pH9.6的0.05M碳酸盐包被缓冲液中,加入96孔板,每孔100μL,4℃过夜。PBS(含有0.05%v/v Tween-20)洗板三次,用含1%BSA的10mM PBS的封闭液(150μL/孔),37℃封闭2h,使用PBS(含有0.05%v/vTween-20)洗板三次,每孔加入100μL纯化抗体,37℃孵育1h,PBS(含有0.05%v/v Tween-20)洗板三次,加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG多克隆抗体为二抗,37℃孵育30min,PBS(含有0.05%v/v Tween-20)洗板三次,每孔加入100μL,TMB显色,37℃孵育15min后,加入2M H2SO4溶液终止反应,酶标仪在吸光度值450nm处检测。
4、抗体结合力测试:
用1×CB将降钙素原蛋白分别稀释到0.5μg/mL、1μg/mL,以100μL/孔的量加入酶标板孔中,并做复孔,置于4℃过夜或37℃吸附2小时。将包被好的微孔板甩干,按照洗板机设定的操作程序(AFP程序)清洗一遍,按200μL/孔的量加入封闭液,置于37℃温箱中2h,之后置于4℃过夜。临用前,将封闭好的微孔板从4℃取出,甩干,加入清洗液(1×PBS-T)使酶标版湿润;将本发明所述单克隆抗体F4B4用1×PBS预稀释至30μg/mL,并记录预稀释的倍数m,再稀释10倍即3μg/mL作为(S1)最高浓度,然后再以1:3梯度稀释(在96深孔板中稀释),一共8个稀释梯度(S1-S8)。
将100μL稀释好的抗体,加入在吸水纸上拍干净的96孔微孔板,37℃孵育30min;孵育后将酶标板甩干,在吸水纸上拍干,用洗板机清洗酶标板3次,1-4列每孔加入100μL的1×PBS;5列与6列每孔,加入200μL尿素处理液,37℃孵育30min;孵育后将酶标板甩干,在吸水纸上拍干,用洗板机清洗酶标板3次,每孔加入100μL预先用二抗稀释液稀释10000倍的GAM-HRP酶标二抗,37℃孵育30min;孵育后将酶标板甩干,在吸水纸上拍干,用洗板机清洗酶标板3次,取TMB显色液,每孔加入100μL显色液,37℃孵育5-10min;显色后每孔加入50μL终止液。在酶标仪上设置进行450nm/630nm读值。
分别在0.5μg/mL和1μg/mL抗原包被的条件下,测试了ELISA抗原抗体结合力实验,通过测试吸光值OD得到数据(图2),并拟合得到对应的多项式曲线,相应的结合随着抗体稀释倍比的变化可以看到明显的梯度性,同时,在0.5μg/mL和1μg/mL抗原包被的条件下两条曲线反映出的亲和性结合,体现了结合的特异性,并且反映抗体结合力所对应浓度分别达到2.05E-09mol/L(0.5μg/mL抗原包被条件下,最高的OD读的50%,即抗原-抗体复合物的浓度占总浓度的一半时,抗体对应的浓度值K0.5)和6.67E-10mol/L(1μg/mL抗原包被条件下,最高的OD读的50%,即抗原-抗体复合物的浓度占总浓度的一半时,抗体对应的浓度值K1)。
结合力计算:分别计算在0.5μg/mL和1μg/mL抗原包被条件下,尿素处理前后S1-S8抗体浓度的复孔平均值OD读值。将读值代入结合力计算公式:
5、单抗配对筛选实验:
取纯化后的F4B4单克隆抗体完成偶联工作。与其他三株降钙素原的单克隆抗体进行搭配,三株抗体的克隆号分别为A4D7、C2F9、E4F4。利用搭配之后的产品检测了49例临床样本,获得了检测结果。经过Bland-Altman曲线进行分析,结果如下:
通过曲线分析,可以看出当F4B4搭配A4D7进行样本检测,检测结果与血清样本的背景值相关性最高。因此F4B4与A4D7为最优搭配方案(图3,A~C)。
6、抗体稳定性验证:
实验操作方法如下:
6.1取2mg抗体F4B4,均分为4个0.5mg/支,用封口膜封存。
6.2取其中一支进行处理偶联,做成试剂。将试剂保存。
6.3随机取其中一支冷冻保存,另一支放在37℃温箱内保存。保存时间为2天(48小时)。
6.4保存结束之后,将抗体恢复至室温。
6.5将抗体按照工艺进行试剂准备。准备结束之后,使用样本检测三个实验组。
对比对照保存方式、冷冻保存以及37℃保存下的检测结果。抗体的稳定性以及使用抗体制备的试剂的稳定性均显示着良好的结果(图4)。
7、单抗F4B4测序
取纯化后的杂交瘤细胞F4B4制备的降钙素原的单克隆抗体F4B4。对轻链可变区与重链可变区的测序可知,抗体F4B4的轻链、重链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、2所示。上述靶向降钙素原抗体的轻链可变区序列为CDR-L1(RSSQSLVDSNGNTYLH)、CDR-L2(SVSNEFS)和CDR-L3(SQSIDVPWT),重链可变区序列为CDR-H1(RYTMH)、CDR-H2(GVWPNNGGTTYSQEFKG)和CDR-H3(YTIYSDGSSYAMDY)。具有相应可变区序列的抗体亲和力高,特异性好;因此相应的抗体可变区域可以用于重组抗体、单链抗体、双特异性抗体的开发,用于诊断用途或者治疗用途的相关产品开发。
实施例3降钙素原侧向流免疫层析试剂性能测试
免疫(荧光)微球是应用于免疫层析检测试剂盒的标记材料之一,通过其表面修饰羧基末端等方式,从而以共价方式结合带有胺基端的蛋白质等生物大分子。通过这种温和的偶联结合,能最大限度地保留生物大分子的活性,以上优势使得免疫(荧光)微球成为目前市面上广泛使用的商品化的免疫层析试纸条中的标记材料。
侧向流免疫层析快速诊断试剂盒是一种基于试纸的、适用于即时检测的结果报告方法。其核心元件即为侧向流免疫层析试纸条,一般为窄条形,通常宽度在4-6毫米,长度不超过6-7厘米。一个标准的侧向流免疫层析试纸应该包括四个主要部分,分别为:样品垫区的主要材料由纤维素制成,使用时将样品垫区充分浸没到待测物中;结合垫区的主要材料由玻璃纤维制成,结合垫区一般含有(偶联)抗原或(偶联)抗体;检测区的主要材料由硝酸纤维素膜(NC膜)制成,在检测区主要有检测线和质控线,检测线和质控线分别包含相应的抗体;吸水垫区的主要材料由纤维素制成。
当侧向层析试纸插入待测溶液时,溶液会从样品垫区流入结合垫区。当溶液中含有被检测物质时,被检测物质将会和结合垫区的(偶联)抗原或(偶联)抗体相结合。通过溶液再次水化的(偶联)抗体或(偶联)抗原或与待测样品所形成的复合物,将会在毛细作用力的作用下依次经过检测区(NC膜)和吸水垫区。此时,侧向层析试纸将会有两种结果显示模型,分别是标准模型和竞争模型:
当侧向流免疫层析试纸采用的是标准模型(检测PCT蛋白抗原)时,检测线(包含靶向PCT蛋白抗原的特异性抗体)只能捕获被待测抗原和(偶联)一抗的复合物:如果溶液中存在待测抗原,此时检测线便能捕获到待测抗原和(偶联)一抗所形成的复合物,而由于(偶联)一抗本身始终会被质控线(包含相应的二抗)捕获,因此此时检测线和质控线均出现颜色变化,结果判定为阳性反应。如果溶液中不存在待测抗原,则只有质控线(包含相应的二抗)能够捕获胶体金(偶联)一抗并发生颜色变化,此时质控线显色而检测线不显色,结果判定为阴性反应。
当侧向层析试纸采取的是竞争模型(检测靶向PCT蛋白抗原的IgG抗体)时,待测抗体与结合垫区包被的(偶联)PCT蛋白抗原发生结合,并且待测抗体和胶体金(偶联)PCT蛋白抗原各自都可以被检测线(包含抗IgG的抗体)所捕获:当待测抗体存在时,其能够被检测线所捕获而(偶联)抗原将无法被检测线捕获(因为待测抗体的竞争性封闭),进而无法发生颜色变化,但质控线(包含PCT蛋白抗原配对抗体)依然能够捕获(偶联)抗原,此时检测线不显色而质控线显色,结果判定为阳性反应;如果溶液中不存在待测抗体,则检测线和质控线均能捕获(偶联)抗原,此时检测线和质控线均会发生颜色变化,结果判定为阴性反应。
抗体(F4B4和A4D7)配对后通过上述方法,实施对靶向纯化后的降钙素原蛋白的抗体的(半)定量关系的评估:采用杭州华葵金配生物科技有限公司生产的靶向降钙素原蛋白抗体的质控品、(罗氏)抗原的产品等分别对本发明所述抗体开发的侧向流免疫层析快检试剂盒进行检测,在使用特定仪器(FIC-Q1)和抗体(靶向降钙素原的抗体)特定化学标记的前提下,利用时间分辨荧光免疫分析的手段,在一定浓度区间内相对准确地估算标记抗体的浓度(并比较其他公司同质化产品用于估算标记抗体浓度的定量的准确性)。由于靶标抗原PCT和配对的抗体均为公司自研的纯化蛋白产品,因此可以用于评估在一定浓度范围内的定量关系的准确性。由表3对比可见,通过比较质控产品拟合的曲线估算的抗体浓度(QC-product-based Ab-concentration estimation,或者“QC-based Ab-con”)和T/C的关系、直接测量的抗原(罗氏)背景估算的抗体浓度(Ag-background-based Ab-concentrationestimation,或者“Ag-based Ab-con”)和T/C的关系,以及成品盒推荐的固定参数得到的拟合曲线推算的抗体浓度(Product-fixed-model-based Ab-concentration estimation,或者“Product-based Ab-con”)和T/C的关系等的比较,结果提示通过成品盒推荐的固定参数得到的抗体浓度推算方法和通过质控品抗体浓度的推算方法,相对于直接测量的抗原背景估算抗体浓度的方法,能够在更大的浓度范围内维持稳定的线性关系,从而实现相对更准确地定量(不分批次的分析结果见图5,分批次的分析结果见图6)。
表3相关性分析表
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之做一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.靶向降钙素原的抗体F4B4,其特征在于,所述抗体的轻链高变区CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别为RSSQSLVDSNGNTYLH、SVSNEFS和SQSIDVPWT,抗体F4B4的重链高变区CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别为RYTMH、GVWPNNGGTTYSQEFKG和YTIYSDGSSYAMDY。
2.根据权利要求1所述的抗体,其特征在于,所述抗体的轻链、重链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、2所示。
3.权利要求1或2所述抗体在制备降钙素原检测试剂或试剂盒中的应用。
4.由权利要求1或2所述抗体制备的降钙素原检测试剂或试剂盒。
5.权利要求1或2所述抗体在制备降钙素原免疫层析检测试纸条或试剂盒中的应用。
6.权利要求1或2所述抗体在制备降钙素原侧向流免疫层析诊断试剂盒中的应用。
7.降钙素原免疫层析检测试纸条,其特征在于,包括样品垫、结合垫、NC膜、吸水垫和底板,所述反应膜上设有检测线和质控线,所述样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫依次粘贴在底板上;
其中,所述结合垫上包被有免疫微球偶联的靶向降钙素原的抗体A4D7;所述检测线包被有权利要求1或2所述抗体,所述质控线包被有羊抗鼠多抗;
抗体A4D7的轻链、重链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:3、4所示。
8.根据权利要求7所述的试纸条,其特征在于,所述结合垫上包被的抗体A4D7的浓度为10-15μg/mL;
所述检测线上包被的抗体F4B4的浓度为1.5-2mg/mL。
9.根据权利要求7或8所述的试纸条,其特征在于,所述样品垫、所述吸水垫的材质为纤维素,所述结合垫的材质为玻璃纤维。
10.降钙素原定性和半定量快速检测方法,其特征在于,所述检测方法为双抗体夹心法,所用第一抗体的轻链、重链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:3、4所示,所用第二抗体为权利要求1或2所述抗体。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310557427.0A CN117777287A (zh) | 2023-05-17 | 2023-05-17 | 靶向降钙素原的抗体f4b4及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310557427.0A CN117777287A (zh) | 2023-05-17 | 2023-05-17 | 靶向降钙素原的抗体f4b4及其应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN117777287A true CN117777287A (zh) | 2024-03-29 |
Family
ID=90387721
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202310557427.0A Pending CN117777287A (zh) | 2023-05-17 | 2023-05-17 | 靶向降钙素原的抗体f4b4及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN117777287A (zh) |
-
2023
- 2023-05-17 CN CN202310557427.0A patent/CN117777287A/zh active Pending
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5807300B2 (ja) | 試料中のc反応性蛋白質の測定方法及び測定試薬 | |
KR101593641B1 (ko) | 중동호흡기증후군 코로나바이러스 뉴클레오캡시드를 인식하는 항체 및 그의 용도 | |
US9823251B2 (en) | Anti-Uroplakin II antibodies systems and methods | |
CN104530234B (zh) | 检测人vegf的组合试剂、试剂盒及其使用方法 | |
CN106916225B (zh) | 一种检测n端脑钠肽前体的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用 | |
CN112679605B (zh) | 针对新型冠状病毒核衣壳蛋白的抗体或其抗原结合片段及其应用 | |
US5767247A (en) | Anti-annexin-V monoclonal antibodies, and preparation and use thereof | |
WO2008054724A2 (en) | Monoclonal antibodies against osteopontin | |
JP2020507775A (ja) | 喘息またはアレルギー疾患迅速診断用キット | |
JP5798679B2 (ja) | ヒト肝−カルボキシルエステラーゼ1を特異的に認識するモノクローナル抗体、前記抗体を生産するハイブリドーマ細胞株及びその用途 | |
CN115806611B (zh) | 抗新型冠状病毒n蛋白的抗体及其应用 | |
CN116655779A (zh) | 新型冠状病毒抗体及其应用 | |
CN117777287A (zh) | 靶向降钙素原的抗体f4b4及其应用 | |
JPWO2009044561A1 (ja) | 抗proNT/NMNモノクローナル抗体 | |
CN117777286A (zh) | 靶向降钙素原的抗体a4d7及其应用 | |
JP4071330B2 (ja) | 抗ヒトメダラシンモノクローナル抗体、その製造方法及びそれを用いる免疫学的測定方法 | |
JP6961172B2 (ja) | 心不全検出方法、心不全検出用器具、サンドイッチ免疫学的測定方法、並びに抗体の組合せ | |
KR20210116115A (ko) | 돼지 유행성 설사병 바이러스와 결합하는 항체 및 이의 용도 | |
CN115873112B (zh) | 一种降钙素原抗体及其应用 | |
CN115850459B (zh) | 靶向新型冠状病毒n蛋白的抗体及其应用 | |
CN116284382A (zh) | 抗降钙素原抗体及其应用 | |
JP3841364B2 (ja) | 抗ヒトビトロネクチン・トロンビン・アンチトロンビンiii 複合体モノクローナル抗体、ハイブリドーマ及び免疫学的測定方法 | |
US10316103B1 (en) | Systems and methods for anti-Uroplakin III antibodies | |
JP6793514B2 (ja) | 新規甲状腺癌関連抗原に結合する抗体および甲状腺癌診断剤 | |
CN117603349A (zh) | 一种用于检测血浆中tn含量的单克隆抗体及其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |