CN117777237A - 一种靶向bcma的多肽及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种靶向BCMA的多肽及其应用。本发明的多肽对BCMA蛋白具有高度亲和力，能识别靶向BCMA阳性细胞。本发明的靶向BCMA的多肽可以结合抗癌制剂或者造影剂进一步设计为肿瘤靶向显像剂、免疫治疗药物、多肽偶联药物等，为肿瘤的早期诊断、免疫检查点的动态监测、肿瘤靶向治疗提供新思路。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种靶向BCMA的多肽及其应用。
背景技术
多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是一种年龄相关的骨髓浆细胞异常增殖且伴有单克隆免疫球蛋白或轻链(M蛋白)过度生成的恶性疾病。其临床表现是骨质破坏，缺乏特异性，诊断主要依赖于骨髓活检中克隆性骨髓浆细胞增多，属于有创性检查，且骨穿位置选择不当会导致假阴性的结果。B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen，BCMA)在MM的恶性浆细胞表面呈显著高选择性表达，而且几乎只表达在浆细胞上，在正常组织细胞(除部分成熟B细胞和浆细胞)及CD34+干细胞上不表达，研究还发现BCMA在MM的不同阶段(从未治疗到复发)的表达水平相似，BCMA在MM细胞表面的一致性上调和唯一性，使得BCMA成为MM诊疗的理想靶抗原。目前，不同类别的BCMA靶向药物，包括抗体-药物偶联物(antibody-drug conjugate，ADC)，双特异性抗体(bispecific antibodies，BsAbs)和嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)T细胞，均在复发和难治性MM患者中显示出良好的疗效和安全性。但回顾既往研究，靶向药物的应用可产生细胞因子释放综合征、脱靶效应、过敏反应等各种毒性反应，并且部分患者未见临床获益，缺乏有效监测和评价疗效的生物标志物，导致疾病进展。因此，如何能够通过无创性方法在活体水平有效发现BCMA高表达病灶，对于BCMA靶向治疗患者的筛选和疗效评估亦具有重要价值。
MM作为骨髓浆细胞异常增殖的恶性肿瘤，在大多数情况下，血液或尿液中可以检测到M蛋白或尿本周蛋白。然而，这并不适用于诊断所有类型的MM。对于一些寡分泌型患者，无法通过M蛋白准确评价病情进展和治疗反应。目前国内外指南均强调获取肿瘤组织进行病理检测的重要性，但其具有创伤性，需要活检取得离体组织，特别是骨髓穿刺检查，往往在特定部位进行，无法提前筛选有效病灶进行活检，并且受限于活检组织的大小，无法代表肿瘤整体而可能出现假阴性情况。相比之下，分子影像具备无创性优势，能够在活体水平反映某一特定分子的表达和分布。
核医学具有分子影像的先天优势，对特定探针进行放射性核素标记后，用单光子计算机断层扫描(SPECT)或正电子计算机断层扫描(PET/CT)能够检测特定靶标分子的活体分布。氟代脱氧葡萄糖(18F-FDG)是糖代谢显像剂，18F-FDG PET/CT检查被广泛应用于恶性肿瘤的诊断、分期、治疗指导和疗效监测，但是对于MM具有明显的局限性。MM细胞的葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)和己糖激酶-2(HK-2)常呈低表达，导致18F-FDG显像剂难以区分良性病变和低代谢的MM病变，超过三分之一的MM髓内病变无法检出。其他PET/CT显像剂亦被应用于MM研究，例如11C-乙酸盐和胆碱、氨基酸。但是类似于18F-FDG，这些显像剂均不具备肿瘤特异性，对于MM的分子特征难以体现。有研究利用MM细胞表面的整合素与基质环境之间的相互作用，针对肿瘤新生血管α4β1蛋白进行受体显像，但其正常骨髓放射性分布本底过高(11.6±2.0％ID/g)，降低了其价值。全身MRI具备很好的软组织对比度和空间分辨率，能够显示骨髓的肿瘤浸润情况，动态造影增强(DCE)MRI还能够显示骨髓血管的情况，但一些生理活动或感染引起的骨髓激活会导致假阳性出现。综上，既往的代谢显像、受体显像的价值有限，不能反映MM特定的分子特征，需要寻求特异性标记物作为显像靶点开展进一步研究。
BCMA是一种由184个氨基酸组成的III型跨膜糖蛋白，又称CD269，是肿瘤坏死因子受体家族(tumor necrosis factor receptor，TNFR)的成员，由位于16号染色体短臂(16p13.13)上的2.92kb的TNFRSF17基因编码。BCMA及其配体之间的相互作用促进MM的进展，通过激活AKT、MAPK和NF-kB等信号通路，增强恶性浆细胞的生长。大量研究已证实BCMA在几乎所有的MM细胞系(80～100％)的表面高选择性表达，支持其作为MM诊疗的理想靶向位点。目前不同类别的BCMA靶向药物，包括ADC、BsAb和CAR-T细胞疗法，在复发/难治性MM中取得了显著疗效，使缓解率和生存进一步得到提高。可见，活体无创性评价BCMA的表达水平对于MM诊断、治疗指导、疗效评估均具有价值。
免疫PET显像(immunoPET)是近年来新兴发展起来的特异性活体显像方法，结合正电子发射断层扫描(PET/CT)的高灵敏度和单克隆抗体的特异性，能够无创地对靶向标志物的表达及活体生物分布进行活体评价。本课题组前期已成功地对包括daratumumab等多种单抗进行了放射性标记，这些显像探针在靶向肿瘤中显示出显著的特异性浓聚。但同时我们发现这些基于完整单克隆抗体的免疫PET显像的缺点：肿瘤的放射性摄取峰时处于注射后数天后，注射后血液中的放射性本底过高，导致肿瘤显示对比度不高，不利于临床转化。因此，能否在注射当天显像并获得更优的肿瘤/本底对比度，是BCMA靶向的免疫PET显像进行临床转化的重要挑战和亟待解决的问题。
基于完整抗体的成像/诊断试剂的一个主要限制是血循环半衰期过长。除此之外，抗体的制备过程复杂，成本较高，导致治疗费用昂贵。且抗体作为生物大分子，实体瘤的穿透性差，免疫原性强，临床上有许多不可避免的副作用。相比之下，多肽的生物相容性更好，不仅可以保留部分蛋白类功能，例如靶向性、选择性，还能利用分子量小的优势，降低免疫原性，提高肿瘤部位的穿透性。成熟的固相合成技术也使得多肽的制备更加简单，生产成本低。相比于抗体，线性的多肽也更容易进行药物设计和修饰。
设计特异性靶向BCMA的多肽可以替代单克隆抗体，在血液循环中有效的在肿瘤部位富集。通过合理的结构设计，靶向多肽可以结合不同的影像剂，例如核素分子等，实现肿瘤部位精准显像，为肿瘤的早期诊断，免疫治疗的动态监测提供可能。与此同时，靶向多肽还可以结合有抗癌效果的小分子药物，形成多肽偶联药物(PDC)，提高肿瘤渗透性，为肿瘤的靶向治疗提供新思路。
发明内容
本发明通过对BCMA复合物晶体结构进行分析，提取结合的热点氨基酸位点，进行单点突变，计算机模拟辅助设计出肽库，结合Docking打分和结合能大小，初步筛出候选肽。随后，利用表面等离子共振技术(SPRi)筛选出一系列BCMA高亲和性多肽。
经大量实验验证筛选后最终获得了本发明的靶向BCMA的多肽(SEQ IDNo.1EEYCFYDPYFC)，该多肽可以特异性亲和BCMA蛋白，并选择性结合BCMA高表达的肿瘤细胞。本发明还提供了由该多肽所衍生的能与BCMA特异性结合的产品及所述多肽及其衍生物在肿瘤治疗、诊断、成像中的用途。
基于此，本发明提出如下发明内容。
第一方面，本发明提供了一种靶向BCMA的多肽，其氨基酸序列为SEQ ID No.1所示。
所述靶向BCMA的多肽，对BCMA具有高度亲和力和特异性。
多肽的氨基酸残基可以是L-型，D-型，镜像结构，或L-型与D-型的混合，以及镜像结构的序列变化体，环肽结构，PEG或脂肪酸链等修饰的变化体。
本发明所述靶向BCMA的多肽可采用Fmoc固相多肽合成法制备得到。
第二方面，本发明提供了所述多肽的异构体、衍生物、混合物、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物；
所述衍生物为所述多肽形成的二价体或多价体。
所述的二价体或多价体能够靶向BCMA。
优选地，所述的二价体或多价体通过连接分子经共价连接或非共价连接形成，或者通过与多聚体混合经非共价连接形成。
优选地，连接体为聚乙二醇(PEG)、GSGS或8-氨基辛酸。
更优选地，所述共价连接的连接分子为异硫氰酸荧光素、6-叔丁氧羰肼基烟酸、1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺或N-羟基琥珀酰亚胺、1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸中的至少一种。
更优选地，所述的非共价连接的连接分子包括但不限于亲脂性近红外染料，如ICG，IRDye800。
更优选地，所述多聚体为聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、环糊精、聚酰胺-胺型树枝状高分子(PAMAM)、聚乳酸(PLA)、聚乳酸-乙醇胺(PLGA)、脂质体中的至少一种。
第三方面，本发明提供了编码所述多肽的核酸。
第四方面，本发明提供了一种生物材料，其包括所述的多肽、或所述的多肽的异构体、衍生物、混合物、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物、或所述的核酸；优选地，所述生物材料为载体、表达盒、转座子、宿主细胞或转基因细胞系。
所述载体包括但不限于克隆载体、表达载体、质粒载体，所有包含至少一个拷贝的所述编码本发明所述靶向BCMA多肽的核酸的载体均在本发明的保护范围内。
所述宿主细胞或转基因细胞系可以为来源于微生物、植物或动物的细胞或细胞系；植物细胞或植物细胞系丧失发育为完整植株个体的能力。
第五方面，本发明提供了一种药物，其包括药学上可接受的辅料和选自以下组分中的至少一种：所述的多肽、或所述的多肽的异构体、衍生物、混合物、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物、或所述的核酸、或所述的生物材料。
优选地，所述药物的活性成分还包含能够杀伤肿瘤细胞的制剂。
更优选地，所述能够杀伤肿瘤细胞的制剂为能够杀伤肿瘤细胞的化学药物、生物药物、纳米药物、放射性药物、光热治疗或光动力治疗药物中的至少一种；或者，为烷化剂、抗代谢药物、抗肿瘤天然药物、抗肿瘤抗生素、激素、金属络合物或肿瘤放射靶向标记物中的至少一种。
更优选地，所述药物还包括与所述的多肽、所述多肽的衍生物相缀合或混合的载体。
所述载体包括但不限于用于制备靶向药物的载体。
所述载体包括纳米材料、脂质体、油性化合物中的至少一种。
第六方面，本发明提供了一种偶联物，其包括载体和选自以下组分中的至少一种：所述的多肽、或所述的多肽的异构体、衍生物、混合物、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物、或所述的核酸、或所述的生物材料。
所述偶联物由所述多肽或所述多肽的衍生物与载体以共价或非共价的方式连接或作用得到。
优选地，所述载体为荧光素、抗体、多聚物、高分子材料、纳米材料、脂质体、油性化合物、无机材料中的至少一种。
进一步优选地，所述高分子材料为聚酯、聚酸酐、聚酰胺磷脂聚合物胶束、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚乙二醇、壳聚糖中的至少一种。
进一步优选地，所述无机材料为纳米金、碳材料、钙材料、磁性材料、介孔硅材料、量子点中的至少一种。
优选地，所述载体为荧光素、抗体、多聚物、高分子材料、纳米材料、脂质体、油性化合物、无机材料中的任意一种或多种。
第七方面，本发明提供了一种显像制剂，其包括成像剂和选自以下组分中的至少一种：所述的多肽、或所述的多肽的异构体、衍生物、混合物、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物、或所述的核酸、或所述的生物材料、或所述的药物、或所述的偶联物；所述成像剂为放射性核素、放射性核素标记物、荧光分子、磁共振造影剂或分子影像制剂中的至少一种。
优选地，所述荧光分子为IRDye800CW、Cy7、Cy5.5、罗丹明或吲哚菁绿ICG中的至少一种，所述放射性核素为131I、177Lu、64Cu、99mTc、18F或68Ga中的至少一种。
优选地，所述的多肽、或所述的多肽的异构体、衍生物、混合物、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物、或所述的核酸、或所述的生物材料、或所述的药物、或所述的偶联物与所述成像剂相偶联、缀合或混合。
由于所述多肽具有靶向BCMA蛋白的作用，可以作为归巢肽偶联小分子药物或载有药物的载体；或偶联放射性核素等多种显像分子形成肿瘤造影剂等，为肿瘤治疗和成像诊断提供了更多可能性。
第八方面，本发明提供了一种试剂或试剂盒，其包括所述的多肽、或所述的多肽的异构体、衍生物、混合物、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物、或所述的核酸、或所述的生物材料、或所述的药物、或所述的偶联物、或所述的显像制剂。
优选地，所述试剂或试剂盒用于BCMA相关疾病的诊断。
第九方面，本发明提供了所述的多肽、或所述的多肽的异构体、衍生物、混合物、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物、或所述的核酸、或所述的生物材料、或所述的药物、或所述的偶联物、或所述的显像制剂或所述的试剂或试剂盒在以下至少一方面的应用：
(1)检测细胞BCMA表达水平；
(2)制备检测细胞BCMA表达水平的试剂；
(3)制备药品；所述药品用于诊断、预防或治疗BCMA为标志物的疾病；
(4)制备诊断试剂、诊断试剂盒、或显影制剂；
(5)制备用于检测以BCMA为标志物疾病分期或辅助分期产品。
优选地，所述疾病为肿瘤、自身免疫性疾病中的至少一种。
更优选地，所述肿瘤包括多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)、肺腺癌、肺鳞状细胞癌中的至少一种。
本发明的BCMA特异性多肽对BCMA具有极高的亲和力，因而可以用于检测BCMA的表达水平、诊断BCMA相关的肿瘤、预测BCMA相关肿瘤的治疗效果或治疗BCMA相关肿瘤。特别地，由本发明的BCMA特异性多肽制备的BCMA特异性分子影像探针具有亲和力显著提高、正常组织摄取非特异性摄取明显降低、且图像质量明显提高的特点，可用于无创、精准、高效探测人BCMA的表达，因此特别适合用于诊断BCMA相关的肿瘤和预测BCMA相关肿瘤的治疗效果。在选择合适的放射性核素进行偶联后，也可以用于精准治疗BCMA相关肿瘤。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明的多肽是首次报道的新型特异性靶向BCMA的多肽，具有高度的选择性，分子量小，生物安全性高，免疫原性低，肿瘤渗透性高。该多肽可以采用化学合成的方法合成，操作简单，生产成本低。小分子多肽更易于药物设计和修饰，可进一步优化成为多功能的靶向材料，有很强的实用性和应用前景。
(2)本发明的多肽可以与显像剂结合，加以临床转化应用，作为分子探针用于检测肿瘤细胞中BCMA的表达情况，以实时监控免疫治疗的疗效，可以作为BCMA免疫治疗的预测和伴随诊断试剂。还可以作为归巢肽，与抗癌制剂结合，形成多肽偶联药物，用于多种肿瘤的靶向治疗和联合治疗。
附图说明
图1为本发明中BP1多肽筛选示意图。
图2为本发明中BP1分子结构式和MS质谱图。
图3为本发明中利用表面等离子共振(SPRi)方法检测BP1多肽与人BCMA蛋白的亲和力。
图4为本发明中通过流式细胞术分析5-TAMRA标记BP1多肽及阴性对照多肽与BCMA阳性细胞系H929以及阴性细胞系K562的特异亲和性检测结果。
图5为本发明中通过激光共聚焦荧光成像分析5-TAMRA标记BP1多肽与BCMA阳性细胞系H929以及阴性细胞系K562的特异亲和性检测结果。
图6为68Ga标记BP1多肽的标记率和放化纯HPLC测定结果。
图7为小动物PET成像显示68Ga标记的BP1多肽在BCMA阳性肿瘤H929、阴性肿瘤K562以及68Ga标记的阴性对照多肽在BCMA阳性肿瘤H929的活体特异检测结果。
图8为通过小动物PET成像勾画感兴趣区，定量分析68Ga标记的BP1多肽及68Ga标记的阴性对照多肽在BCMA阳性肿瘤H929和阴性肿瘤K562的SUVmax结果。
图9为注射68Ga标记的BP1及阴性对照多肽20min后，对比BCMA阳性肿瘤H929以及阴性肿瘤K562的肿瘤和各脏器的放射性分布摄取的差异。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明中的附图，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例中未注明具体技术或条件者，均为常规方法或者按照本领域的文献所描述的技术或条件进行，或者按照产品说明书进行。所用试剂和仪器等未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
实施例1 BCMA靶向多肽的制备方法
采用标准Fmoc固相合成方法合成多肽文库。将目标肽库的C-端羧基以共价键形式与高分子树脂相连，然后以这个氨基酸的氨基作为起点，与另一氨基酸的羧基作用形成肽键。固相合成顺序从C端向N端，不断重复上一步骤，将单个氨基酸逐个偶联到固相树脂上，直到得到目标多肽产物。反应完成后，去除保护基，用裂解液将肽链与树脂分离，即得到目标肽库。然后肽库与BCMA蛋白孵育后经过微芯片筛选获得阳性候选多肽微球如图1所示，随后用二级质谱测序检索得到阳性多肽序列命名为BP1(SEQ ID No.1)。通过固相合成以后进行质谱鉴定用于后续试验。多肽的结构式和质谱结果如图2所示，表明合成靶向多肽的正确性。
实施例2通过表面等离子共振(SPRi)方法检测BP1多肽与人BCMA蛋白的亲和作用
将BP1多肽溶液点到SPRi芯片上，4℃湿润条件下孵育过夜，10×PBS清洗10min，1×PBS清洗10min，去离子水清洗2次，每次10min，5％脱脂牛奶封闭过夜，重复上述清洗步骤，随后氮气吹干，在PlexeraHT表面等离子共振成像系统进行检测。
流动相依次通过1×PBS、2×PBS、27.57nM、55.14nM、110.28nM、220.57nM和441.1nM的BCMA蛋白样品，记录分析SPRi信号。由图3可以看出，BP1的SPRi信号随着蛋白浓度的增加逐渐增强，且KD值达到10-7M，说明本发明的多肽对BCMA都有很强的亲和力，可以满足后续的体内应用。
实施例3 5-TAMRA标记多肽的制备
5-羧基四甲基罗丹明(5-TAMRA)偶联物采用固相合成方法获得，在固相合成的多肽树脂上继续偶联ε-氨基己酸。在吡啶/N，N二甲基甲酰胺/二氯甲烷比例为1:5:7的溶液中，将5-TAMRA与肽珠混合反应过夜，注意避光。经裂解液裂解后得到多肽5-TAMRA偶联物，采用MALDI-TOF鉴定和HPLC纯化用于后续实验。
实施例4流式鉴定BP1多肽与BCMA蛋白亲和力
实验选择的阳性细胞为人骨髓瘤细胞H929，阴性细胞为人慢性髓系白血病细胞K562，用含10％FBS的RPMI 1640培养基培养。将20μg/mL 5-TAMRA偶联的BP1多肽、阴性对照多肽(SEQ ID No.2：ASHESWYGNHC)分别与H929和K562在冰上孵育20min，PBS洗涤3次，再用500μL PBS重悬。荧光强度测定由FACS Calibur分析仪(BD Biosciences)和FlowJo软件(Tree Star)分析。
结果如图4所示，BP1与H929细胞有明显位移，与K562细胞几乎没有位移，表明多肽BP1与H929具有良好结合力，对K562没有结合力，说明BP1多肽具有特异性，只识别BCMA阳性细胞。
实施例5激光共聚焦荧光成像分析BP1多肽与BCMA蛋白亲和力
实验选择的阳性细胞为H929，阴性细胞为K562，用含10％FBS的RPMI1640培养基培养。将两种细胞与10ug/mL的BP1及阴性对照多肽的5-TAMRA偶联物分别孵育，后种植到包被有多聚赖氨酸载玻片上，37℃，5％CO2细胞培养箱中培养30min，2％多聚甲醛固定，PBS清洗2次。随后用DAPI试剂进行细胞染核，室温孵育10min。用激光扫描共聚焦显微镜(Leica TCSSP8)检测细胞中的荧光分布情况。
结果如图5所示，H929细胞膜有明显的5-TAMRA红色荧光信号，而K562细胞膜几乎没有荧光。结果表明目标多肽能有效结合在BCMA高表达的肿瘤细胞的细胞膜上，而不能结合低表达的肿瘤细胞，由此可见，BP1多肽对BCMA的识别具有特异性，与SPR数据相符合。
实施例6多肽探针在荷瘤小鼠模型的PET显像及生物分布分析
所有动物实验均按照北京大学第一医院动物管理和使用委员会批准的方案进行。选择缺乏T细胞、B细胞以及NK细胞的NCG重度免疫缺陷型小鼠(4-6周龄，雌性)用于多发性骨髓瘤皮下肿瘤模型的构建，将小鼠随机分为两组，即实验组和对照组，每组5只。NCG免疫缺陷小鼠为江苏集萃药康生物科技股份有限公司产品。于小鼠右侧腋窝皮下分别注射含1×107个H929和K562细胞的100μLMatrigel混悬液(Corning,USA)。隔天监测小鼠的健康状况和肿瘤体积。当肿瘤体积达1cm3时，可用于活体显像和生物分布实验。
使用0.05M高纯盐酸淋洗68Ge-68Ga锗镓发生器得到GaCl3溶液，取1mL Ga-68溶液，加入100微升醋酸钠(1M)，盖上盖子，混匀，用0-6精密pH试纸测pH为4-4.5，将要标记的分子加入已经调好的溶液。90℃加热10min后洗脱。冷却反应液后，将其加入活化后的Sep-PakLightC18小柱(5mL去离子水，5mL乙醇，5mL去离子水，按照水-乙醇-水活化)。以3.0mL纯水淋洗杂质并弃去。加上0.22μm无菌微孔滤膜，以0.5mL乙醇溶液收集产品到无菌真空瓶中，向体系中加入5.0mL生理盐水，待用。
68Ga-DOTA-BP1多肽标记产物进一步通过高效液相色谱法测定，色谱条件：色谱柱为C18色谱柱(4.6×150mm，5μm，XBridge，Waters)，流动相A相为去离子水(0.1％三氟乙酸)，B相为乙腈(0.1％三氟乙酸)，流速为1.0毫升每分钟。具体分析方法为：0-2min，10％B；2-10min，10％-60％B；10-12min，60％B；12-15min，60％-10％B。收集放射性谱图。
结果如图6所示，制剂放射性色谱峰保留时间差别不大于0.5min，68Ga-DOTA-BP1多肽标记产物放射化学纯度接近99.9％。
待荷瘤小鼠肿瘤体积长至约1cm3时，分别尾静脉注射11.1MBq的68Ga-DOTA-BP1、68Ga-DOTA-阴性对照多肽探针。
注射后使用micro-PET/CT扫描仪(SuperChina)进行时长一小时的动态PET采集。通过使用Avatar 1.0软件绘制感兴趣区域(region of interest，ROI)并进行定量分析，获得活体中不同时间点肿瘤、心血池(血液)、肝脏、肾脏、膀胱、肌肉内的放射性浓聚情况。放射性探针的含量用每克组织的放射性计数占总注入的放射性计数的百分比(％ID/g)表示，代表放射性摄取量。
结果如图7所示，最大密度投影(maximumintensity projection，MIP)结果显示，在BCMA表达阳性的H929肿瘤模型中，68Ga-DOTA-BP1注射后10min，肿瘤即可见明显的放射性浓聚，且从10min到60min均有较高的摄取。而在BCMA表达阴性的K562肿瘤模型中，肿瘤均未见明显放射性浓聚。此外，68Ga标记的阴性对照多肽在H929肿瘤模型中也未见明显摄取。通过使用相应配套软件绘制感兴趣区域(region of interest，ROI)并进行定量分析，获得活体中不同时间点肿瘤的放射性浓聚情况。结果如图8所示，在10min到60min的各个时间点，68Ga-DOTA-BP1在H929肿瘤中的摄取明显高于K562肿瘤。与68Ga-DOTA-阴性对照多肽相比，68Ga-DOTA-BP1在H929肿瘤中的摄取也明显更高。在注射68Ga-DOTA-BP1及68Ga-DOTA-阴性对照多肽20min后，解剖肿瘤、血液、心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、膀胱、肌肉、小腿长骨、脑、尾巴，样品称重，并使用自动γ计数器对样品放射性进行计数，计算不同器官/组织中放射性示踪剂的摄取量并计算生物分布，并以％ID/g(平均值±SD)表示。生物分布结果如图9所示，BP1探针在H929肿瘤摄取(3.48+0.68％ID g-1)高于K562肿瘤(1.51+0.26％ID g-1)，也高于阴性多肽在H929肿瘤摄取(0.98+0.5％ID g-1，P<0.05)。与PET显像结果一致。
上述结果证明了本发明的多肽小分子探针具有快速靶向BCMA靶向性，同时具有较好的肿瘤穿透能力，可以实现微小肿瘤的高灵敏度活体成像。
综上所述，本发明的多肽具有靶向表达BCMA阳性肿瘤细胞的特性，因而在实际应用中，可以将本发明的多肽作为归巢肽，与抗癌药物或者显像剂结合，用于肿瘤的靶向治疗和成像。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种靶向BCMA的多肽，其特征在于，其氨基酸序列为SEQ ID No.1所示。
2.权利要求1所述多肽的异构体、衍生物、混合物、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物；
所述衍生物为所述多肽形成的二价体或多价体。
3.编码权利要求1所述多肽的核酸。
4.一种生物材料，其特征在于，其包括权利要求1所述的多肽、或权利要求2所述的多肽的异构体、衍生物、混合物、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物、或权利要求3所述的核酸；优选地，所述生物材料为载体、表达盒、转座子、宿主细胞或转基因细胞系。
5.一种药物，其特征在于，其包括药学上可接受的辅料和选自以下组分中的至少一种：权利要求1所述的多肽、或权利要求2所述的异构体、衍生物、混合物、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物、或权利要求3所述的核酸、或权利要求4所述的生物材料。
6.一种偶联物，其特征在于，其包括载体和选自以下组分中的至少一种：权利要求1所述的多肽、或权利要求2所述的异构体、衍生物、混合物、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物、或权利要求3所述的核酸、或权利要求4所述的生物材料。
7.根据权利要求6所述的偶联物，其特征在于，所述载体为荧光素、抗体、多聚物、高分子材料、纳米材料、脂质体、油性化合物、无机材料中的任意一种或多种。
8.一种显像制剂，其特征在于，其包括成像剂和选自以下组分中的至少一种：权利要求1所述的多肽、或权利要求2所述的异构体、衍生物、混合物、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物、或权利要求3所述的核酸、或权利要求4所述的生物材料、或权利要求5所述的药物、或权利要求6或7所述的偶联物；
所述成像剂为放射性核素、放射性核素标记物、荧光分子、磁共振造影剂或分子影像制剂中的至少一种。
9.一种试剂或试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1所述的多肽、或权利要求2所述的异构体、衍生物、混合物、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物、或权利要求3所述的核酸、或权利要求4所述的生物材料、或权利要求5所述的药物、或权利要求6或7所述的偶联物、或权利要求8所述的显像制剂。
10.权利要求1所述的多肽、或权利要求2所述的异构体、衍生物、混合物、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物、或权利要求3所述的核酸、或权利要求4所述的生物材料、或权利要求5所述的药物、或权利要求6或7所述的偶联物、或权利要求8所述的显像制剂、或权利要求9所述的试剂或试剂盒在以下至少一方面的应用：
(1)检测细胞BCMA表达水平；
(2)制备检测细胞BCMA表达水平的试剂；
(3)制备药品；所述药品用于诊断、预防或治疗BCMA为标志物的疾病；
(4)制备诊断试剂、诊断试剂盒、或显影制剂；
(5)制备用于检测以BCMA为标志物疾病分期或辅助分期产品。
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