CN117770236A - 一种野生大豆野外采样保存方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于野生大豆组织采样技术领域，具体涉及一种野生大豆野外采样保存方法。该采样保存方法包括样品采集和保存；所述样品采集时，采集的样品包括野生大豆的叶片、茎、根组织：所述样品保存是将采集的样品用纸巾包裹，再将纸巾放入密封的袋子内，再将袋子放入吸潮的容器内，将容器放置于阴凉的地方即可对野生大豆采集的组织样品进行保存。利用本发明提供的采样保存方法在野外采集的组织样品可长期保存，随用随取，并且可以用于后继各种分子生物学实验，为野外考察取样、保存提供新的方法，对野生大豆原生境考察，开展生物学研究具有重要意义。
Description
技术领域
本发明属于野生大豆组织采样技术领域，具体涉及一种野生大豆野外采样保存方法。
背景技术
一年生野生大豆是大豆的近缘野生种，是国家重点保护的二级野生植物资源之一。野生大豆遗传多样性丰富，是栽培大豆的基因源宝藏。目前野生大豆除新疆、青海、海南外，我国各省区都有不同程度的分布。近年来，由于生境恶化，野生大豆自然居群受到了严重的威胁，种群数锐减。自“六五”起，国家先后三次在全国范围内开展较大规模的野生大豆普查和收集工作，国家种子库(长期库和临时库)野生大豆资源总量达8518份。但鉴于人力和财力所限，国家库中保存的资源存在地区不平衡，边远地区和非大豆主产区收集力度不够，特别是对新建成的原位保护区资源收集存在空白，加之库存的大多数资源收集在上个世纪80年代，地理标志不清，无法跟踪其变化，随着时间推移，异位库保存资源在繁育更新过程中也有可能会丢失稀有基因而丧失部分遗传多样性。2002年，我国启动野生大豆原生境保护工作，至今在17个省区已建成48个原生境保护区。这些原生境保护区一定程上促进了野生大豆资源保护的可持续发展，但鉴于设施维护和后续管理的差异，会产生物种消长的负面影响，同时，原位保护的野生大豆群体的遗传多样性也会随着时间推移发生变化，因此加强对野生大豆的遗传多样性保护及优异基因挖掘是保障大豆可持续发展的重要途径，为我国大豆育种原始创新提供基础物质保障，为国家生态安全、农业可持续发展和农民增收提供科学技术支撑。
野生大豆遍布全国，对野生大豆的研究工作多为野外采集及保存工作。目前没有专门针对野生大豆野外采样保存方法，并且常规的植物野外采样的方法存在一定的局限性。目前野外近距离采样时一般需要携带液氮、干冰、冰盒等工具，占地且耗费体力，这些方法不适用于野生大豆组织远距离、长时间野外的采集和保存。
目前没有针对野生大豆组织野外采集和保存的适当方法，因此亟需一种野生大豆野外采样保存方法来填补适用于对野生大豆组织野外的采集和保存方法的空缺。
发明内容
为解决现有技术中没有针对野生大豆组织野外采集和保存的适当方法的问题，为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供一种野生大豆野外采样保存方法，包括样品采集和保存；
所述样品采集时，采集的样品包括野生大豆的叶片、茎、根组织：
所述样品保存是将采集的样品用纸巾包裹，再将纸巾放入密封的袋子内，再将袋子放入吸潮的容器内，将容器放置于阴凉的地方即可对野生大豆采集的组织样品进行保存。
优选地，所述纸巾的材质为棉浆、木浆、甘蔗浆中的任意一种单一桨或者它们其中两种及两种以上混合后的混合浆。优选地，所述纸巾的规格为230～400mm*230～400mm。
优选地，所述单个纸巾的厚度为0.2～0.6mm。
优选地，采集的野生大豆的叶片、茎、根组织放入纸巾的中间位置进行包裹。
优选地，所述盛放纸巾的袋子为种子袋。
优选地，所述袋子的材质为牛皮纸，规格为13～20cm*9～12cm。
优选地，所述吸潮的容器为内部装有生石灰的密封盒子或密封箱子。
优选地，所述密封盒子或密封箱子的材质为食品级PP材质，规格包括32cm*25cm*20cm、37.5cm*28.5cm*23cm、47.5cm*36cm*30cm。
优选地，所述保存的野生大豆的叶片、茎、根组织用于后继分子生物学实验。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供了一种野生大豆野外组织采样及保存方法。建立了野生大豆野外样品采集方法，适用于野生大豆叶片、茎、根等组织野外采集、保存及其后继分子生物学实验。本发明野外采集的组织样品可长期保存，随用随取，并且可以用于后继各种分子生物学实验，为野外考察取样、保存提供新的方法，对野生大豆原生境考察，开展生物学研究具有重要意义。
附图说明
图1为本发明实施例1中的样品采集装置中密封箱子的结构示意图；
图2为本发明实施例1中的样品采集装置中种子袋的结构示意图；
图3为本发明实施例1中的DNA凝胶电泳；
图4为本发明实施例1中的序列扩增电泳图；
图5为本发明实施例1中的HRM基因分型；
图6为本发明实施例1中的毛细管电泳基因分型；
图7为本发明实施例1中的AP1启动子扩增；
图1-2中：1-密封箱子、2-种子袋、3-生石灰块、4-样品标签。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明，但不应理解为本发明的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
一种野生大豆野外采样保存方法：
在天津保护区野外采集野生大豆叶片，按照居群采集样本110份，每份样品200mg，将它们分别放入230mm*230mm的棉浆制成的4层纸巾(单层厚度为0.05mm)中间，1份样品放入一个纸巾的中间位置，用纸巾进行包裹，将上述放有野生大豆不同组织样品的纸巾分别放入不同的18cm*10cm的材质为牛皮纸的种子袋中，一个纸巾放入一个种子袋中，同时按照采集地址时间样品进行标记，进而将所有标记好的种子袋放入一个内部装有4公斤生石灰块的食品级PP材质的密封箱子(密封箱子的规格为47.5cm*36cm*30cm)中，按照采集样品数量选择适宜大小密封箱子，采集样品可放入一个或者多个密封箱子中，密封箱子放入随行车中，待到达实验室后，选择阴凉地方保存。
实施例2
一种野生大豆野外采样保存方法：
在河南内乡保护区野外采集野生大豆茎，采集样本85份，每份样品500mg，将它们分别放入270mm*270mm的木浆制成的4层纸巾(单层厚度为0.1mm)中间，1份样品放入一个纸巾的中间位置，用纸巾进行包裹，将上述放有野生大豆不同组织样品的纸巾分别放入不同的13cm*9cm的材质为牛皮纸的种子袋中，一个纸巾放入一个种子袋中，同时按照采集地址时间样品进行标记，进而将所有标记好的种子袋放入一个内部装有2.5公斤生石灰块的食品级PP材质的密封箱子(密封箱子的规格为37.5cm*28.5cm*23cm)中，按照采集样品数量选择适宜大小密封箱子，采集样品可放入一个或者多个密封箱子中，密封箱子放入随行车中，待到达实验室后，选择阴凉地方保存。
实施例3
一种野生大豆野外采样保存方法：
在湖北赤壁保护区野外采集野生大豆根，采集样本20份，每份样品5g，将它们分别放入400mm*400mm的甘蔗浆制成的4层纸巾(单层厚度为0.15mm)中间，1份样品放入一个纸巾的中间位置，用纸巾进行包裹，将上述放有野生大豆不同组织样品的纸巾分别放入不同的20cm*12cm的材质为牛皮纸的种子袋中，一个纸巾放入一个种子袋中，同时按照采集地址时间样品进行标记，进而将所有标记好的种子袋放入一个内部装有1.5公斤生石灰块的食品级PP材质的密封盒子(密封盒子的规格为32.5cm*25cm*20cm)中，按照采集样品数量选择适宜大小密封盒子，采集样品可放入一个或者多个密封盒子中，密封盒子放入随行车中，待到达实验室后，选择阴凉地方保存。
实施例4
一种野生大豆野外采样保存方法：
在河南内乡保护区野外采集野生大豆茎，采集样本85份，每份样品500mg，将它们分别放入330mm*330mm的棉浆、木浆、甘蔗浆三种混合制成的4层纸巾(单层厚度为0.1mm)中间，1份样品放入一个纸巾的中间位置，用纸巾进行包裹，将上述放有野生大豆不同组织样品的纸巾分别放入不同的13cm*9cm的材质为牛皮纸的种子袋中，一个纸巾放入一个种子袋中，同时按照采集地址时间样品进行标记，进而将所有标记好的种子袋放入一个内部装有2.5公斤生石灰块的食品级PP材质的密封箱子(密封箱子的规格为37.5cm*28.5cm*23cm)中，按照采集样品数量选择适宜大小密封箱子，采集样品可放入一个或者多个密封箱子中，密封箱子放入随行车中，待到达实验室后，选择阴凉地方保存。
实施例5
一种野生大豆野外采样保存方法：
在天津保护区野外采集野生大豆叶片，按照居群采集样本100份，每份样品200mg，将它们分别放入270mm*270mm的木浆制成的4层纸巾(单层厚度为0.1mm)中间，1份样品放入一个纸巾的中间位置，用纸巾进行包裹，将上述放有野生大豆不同组织样品的纸巾分别放入不同的18cm*10cm的材质为牛皮纸的种子袋中，一个纸巾放入一个种子袋中，同时按照采集地址时间样品进行标记，进而将所有标记好的种子袋放入一个内部装有2.5公斤生石灰块的食品级PP材质的密封箱子(密封箱子的规格为37.5cm*28.5cm*23cm)中，按照采集样品数量选择适宜大小密封箱子，采集样品可放入一个或者多个密封箱子中，密封箱子放入随行车中，待到达实验室后，选择阴凉地方保存。
对比例1
一种野生大豆野外采样保存方法：
在河南内乡保护区野外采集野生大豆茎，采集样本90份，每份样品500mg，将它们分别放入330mm*330mm的棉浆、木浆、甘蔗浆三种混合制成的4层纸巾(单层厚度为0.1mm)中间，1份样品放入一个纸巾的中间位置，用纸巾进行包裹，将上述放有野生大豆不同组织样品的纸巾分别放入不同的8cm*6cm的材质为牛皮纸的种子袋中，一个纸巾放入一个种子袋中，同时按照采集地址时间样品进行标记，进而将所有标记好的种子袋放入一个内部装有无水硫酸铜(鼎国生物技术有限公司)的食品级PP材质的密封箱子(密封箱子的规格为37.5cm*28.5cm*23cm)中，按照采集样品数量选择适宜大小密封箱子，采集样品可放入一个或者多个密封箱子中，密封箱子放入随行车中，待到达实验室后，选择阴凉地方保存。
对比例2
一种野生大豆野外采样保存方法：
在河南内乡保护区野外采集野生大豆茎，采集样本90份，每份样品500mg，将它们分别放入330mm*330mm的棉浆、木浆、甘蔗浆三种混合制成的4层纸巾(单层厚度为0.1mm)中间，1份样品放入一个纸巾的中间位置，用纸巾进行包裹，将上述放有野生大豆不同组织样品的纸巾分别放入不同的8cm*6cm的材质为牛皮纸的种子袋中，一个纸巾放入一个种子袋中，同时按照采集地址时间样品进行标记，进而将所有标记好的种子袋放入一个内部装有固体氯化钙(鼎国生物技术有限公司)的食品级PP材质的密封箱子(密封箱子的规格为37.5cm*28.5cm*23cm)中，按照采集样品数量选择适宜大小密封箱子，采集样品可放入一个或者多个密封箱子中，密封箱子放入随行车中，待到达实验室后，选择阴凉地方保存。
对比例3
一种野生大豆野外采样保存方法：
在天津保护区野外采集野生大豆叶片，按照居群采集样本100份，每份样品200mg，将它们分别放入270mm*270mm的木浆制成的4层纸巾(单层厚度为0.1mm)中间，1份样品放入一个纸巾的中间位置，用纸巾进行包裹，将上述放有野生大豆不同组织样品的纸巾分别放入不同的18cm*10cm的材质为牛皮纸的种子袋中，一个纸巾放入一个种子袋中，同时按照采集地址时间样品进行标记，进而将所有标记好的种子袋放入一个内部装有活性炭(鼎国生物技术有限公司)的食品级PP材质的密封箱子(密封箱子的规格为37.5cm*28.5cm*23cm)中，按照采集样品数量选择适宜大小密封箱子，采集样品可放入一个或者多个密封箱子中，密封箱子放入随行车中，待到达实验室后，选择阴凉地方保存。
对比例4
一种野生大豆野外采样保存方法：
在天津保护区野外采集野生大豆叶片，按照居群采集样本110份，每份样品200mg，将它们分别放入270mm*270mm的木浆制成的4层纸巾(单层厚度为0.1mm)中间，1份样品放入一个纸巾的中间位置，用纸巾进行包裹，将上述放有野生大豆不同组织样品的纸巾分别放入不同的18cm*10cm的材质为牛皮纸的种子袋中，一个纸巾放入一个种子袋中，同时按照采集地址时间样品进行标记，进而将所有标记好的种子袋放入一个内部装有商品化干燥剂(DX硅胶干燥剂)的食品级PP材质的密封箱子(密封箱子的规格为47.5cm*36cm*30cm)中，按照采集样品数量选择适宜大小密封箱子，采集样品可放入一个或者多个密封箱子中，密封箱子放入随行车中，待到达实验室后，选择阴凉地方保存。
对比例5
一种野生大豆野外采样保存方法：
在河南内乡保护区野外采集野生大豆茎，采集样本90份，每份样品500mg，将它们分别放入不同的13cm*9cm的材质为牛皮纸的种子袋中，1份样品放入一个种子袋内，一份样品放入一个种子袋中，同时按照采集地址时间样品进行标记，进而将所有标记好的种子袋放入一个内部装有生石灰的食品级PP材质的密封箱子(密封箱子的规格为47.5cm*36cm*30cm)中，按照采集样品数量选择适宜大小密封箱子，采集样品可放入一个或者多个密封箱子中，密封箱子放入随行车中，待到达实验室后，选择阴凉地方保存。
对比例6
一种野生大豆野外采样保存方法：
在河南内乡保护区野外采集野生大豆茎，采集样本90份，每份样品500mg，将它们分别放入270mm*270mm的木浆制成的4层纸巾(单层厚度为0.1mm)中间，1份样品放入一个纸巾的中间位置，用纸巾进行包裹，将上述放有野生大豆不同组织样品的纸巾按照采集地址时间样品进行标记，进而将所有标记好的纸巾放入一个内部装有生石灰的食品级PP材质的密封箱子(密封箱子的规格为47.5cm*36cm*30cm)中，一个纸巾放入一个密封箱子内，按照采集样品数量选择适宜大小密封箱子，采集样品可放入一个或者多个密封箱子中，密封箱子放入随行车中，待到达实验室后，选择阴凉地方保存。
对比例7
一种野生大豆野外采样保存方法：
在河南内乡保护区野外采集野生大豆茎，采集样本90份，每份样品500mg，将它们分别放入270mm*270mm的木浆制成的4层纸巾(单层厚度为0.1mm)中间，1份样品放入一个纸巾的中间位置，用纸巾进行包裹，将上述放有野生大豆不同组织样品的纸巾分别放入不同的13cm*9cm的材质为牛皮纸的种子袋中，一个纸巾放入一个种子袋中，同时按照采集地址时间样品进行标记，进而将所有标记好的种子袋放入放入随行车中，待到达实验室后，选择阴凉地方保存。
经统计，实施例1～5采样保存的野生大豆组织样品的保存时间是不一样的，实施例1采样保存的110份野生大豆叶片样品，其中110份保存的野生大豆叶片样品完好，保存的时间为2年；实施例2采样保存的85份野生大豆茎样品，其中84份保存的野生大豆茎样品保存完好，1份保存的野生大豆茎样品损坏保存的时间为2年；实施例3采样保存的20份野生大豆根样品，其中19份保存的野生大豆根样品保存完好，1份保存的野生大豆根样品变黑，平均保存的时间为22个月；实施例4采样保存的85份野生大豆茎样品，其中82份保存的野生大豆茎样品完好，2份保存的野生大豆茎样品腐烂，1份保存的野生大豆茎样品是变黑，平均的保存的时间为2年；实施例5采样保存的100份野生大豆叶片样品，其中100份保存的野生大豆叶片样品保存完好，保存的时间为2年。
对比例1采样保存的90份野生大豆茎样品，其中42份保存的野生大豆茎样品保存较为完好，48份保存的野生大豆茎样品腐烂，平均的保存的时间为6个月；对比例2采样保存的90份野生大豆茎样品，其中81份保存的野生大豆茎样品保存完好，9份保存的野生大豆茎样品腐烂，平均的保存的时间为15个月；对比例3采样保存的100份野生大豆叶片样品，其中62份保存的野生大豆叶片样品保存完好，48份保存的野生大豆叶片样品是褐变，平均的保存的时间为14个月；对比例4采样保存的110份野生大豆叶片样品，其中92份保存的野生大豆叶片样品完好，18份保存的野生大豆叶片样品褐变，平均的保存的时间为1年；对比例5采样保存的90份野生大豆茎样品，其中33份保存的野生大豆茎样品保存完好，57份保存的野生大豆茎样品腐烂，平均的保存的时间为5个月；对比例6采样保存的90份野生大豆茎样品，其中79份保存的野生大豆茎样品保存完好，11份保存的野生大豆茎样品腐烂，平均的保存的时间为10个月；对比例7采样保存的90份野生大豆茎样品，其中82份保存的野生大豆茎样品是保存完好，8份保存的野生大豆茎样品褐变，平均的保存的时间为1年。
上述结果可知，实施例1～5提供的野生大豆野外采样保存方法采集的野生大豆组织样品的保存时间为22～24个月(2年)，采用该方法采样保存的方法保存的样品在2年内保存完好。
与实施例1～5提供的野生大豆野外采样保存方法相比，对比例1～4中在密封箱体内部放入的物质不同，对比例1～4中在密封箱体内部放入的是几种常规的干燥剂，而实施例1～5中在密封箱体内部放入的是生石灰块。采用对比例1～4提供的野生大豆野外采样保存方法采集的野生大豆组织样品的保存时间为6～12个月(1年)，保存时间下相较于采用实施例1～5的保存时间缩短了至少1年，说明本发明实施例1～5所提供的野生大豆野外采样保存方法中在密封箱体内部放入生石灰块对于采集的野生大豆组织样品的保存时间要远大于对比例1～4中在密封箱体内部放入常规的干燥剂的保存时间；实施例1～5的野生大豆野外采样保存方法对于采集的野生大豆组织样品的好于保存效果要优于对比例1～4。该结果表明本发明所提供的野生大豆野外采样保存方法中在密封箱体内部放入的是生石灰块的效果远优于在密封箱体内部放入常规的干燥剂。
与实施例1～5提供的野生大豆野外采样保存方法相比，对比例5～7中的步骤分别比实施例1～5的步骤省略了其中一个关键步骤。采用对比例5～7提供的野生大豆野外采样保存方法采集的野生大豆组织样品的保存时间为5～12个月(1年)，保存时间下相较于实施例1～5的保存时间缩短了至少1年，说明本发明实施例1～5所提供的野生大豆野外采样保存方法中在密封箱体内部放入生石灰块对于采集的野生大豆组织样品的保存时间要远大于对比例1～4中在密封箱体内部放入常规的干燥剂的保存时间，同时说明，实施例1～5的野生大豆野外采样保存方法对于采集的野生大豆组织样品的好于保存效果要优于对比例1～4。该结果表明本发明所提供的野生大豆野外采样保存方法中每一个步骤都不能省略，只有每一个步骤依次配合，才可以实现对野生大豆组织样品的长时间保存。
综上，本发明所提供的野生大豆野外采样保存方法可以对采集的野生大豆样品进行长时间的保存。并且经观察比较发现，采用本发明提供的野生大豆野外采样保存方法保存的野生大豆样品可以长时间保持干燥的状态。
本发明提供的一种野生大豆野外采样保存方法是一种针对野生大豆组织野外采集和保存的适当方法，采用此种方法在野外对野生大豆进行采样，不需要携带液氮、干冰、冰盒等工具，不会耗费体力，适用于野生大豆组织远距离、长时间野外的采集和保存。采用本发明提供的野生大豆野外采样保存方法可以对采集的野生大豆样品进行长时间的保存，保存的野生大豆样品可以长时间保持干燥的状态，且随用随取，可以用于后继各种分子生物学实验，为野外考察取样、保存提供新的方法，对野生大豆原生境考察，开展生物学研究具有重要意义。
为了对本发明所提供的野生大豆野外采样保存方法的效果进行说明，以实施例1的方法为例，取其方法保存的野生大豆组织样品进行后继分子生物学实验，具体研究如下：
1、DNA提取
取2g上述采集、保存方法干燥后的野生大豆叶片(实施例1)，磁珠研磨，CTAB法提取野生大豆组织DNA。提取DNA(如图3所示)，DNA无蛋白污染。
CTAB法提取野生大豆DNA的具体步骤为：将水浴锅提前设置65℃，并将2×CTAB溶液(CTAB40g,NaCl63.64g,1mol/LTris-HCl200mL,0.5mol/LEDTA 80mL定容至2000mL)放入水浴锅提前进行预热。选取2g上述野生大豆叶片样品，置于2mL离心管中，速冻后使用组织研磨仪进行充分破碎，然后于离心管中加入700μL左右的2×CTAB溶液，混匀，放入提前设置好的水浴锅中水浴50min左右，在水浴过程中，将离心管上下倒置3次进行水浴。
待水浴结束，于离心管中等体积加入DNA抽提液后，使用摇床摇晃35min左右，使DNA抽提液与离心管内的野生大豆组织DNA充分作用，然后将其于12000rpm离心10min之后，吸取上清加入到新的离心管中；加入相应体积的异丙醇于原离心管内，加入异丙醇后上下倒置原离心管，使异丙醇反应完全，此时原离心管内会出现沉淀。将其于12000rpm离心5-10min，弃去上清液，保留沉淀，将沉淀用75％乙醇进行洗涤三次，最后在室温条件下使乙醇自然挥发，乙醇挥发时间约1h，待乙醇挥发完得到野生大豆组织DNA。最后使用50-100μL带有RNA酶的TE或ddH2O对野生大豆组织DNA进行溶解，得到野生大豆组织DNA溶液。
利用NanoDrop检测仪检测提取的野生大豆组织DNA溶液的浓度，并且根据A260/A280结果判断DNA质量，用1％的琼脂糖凝胶进行电泳判断野生大豆组织DNA降解程度，在100mLTAE中加入1.0g琼脂糖煮沸混合均匀，冷却到60℃左右加入8μLSuperGelRed得到1％琼脂糖凝胶。在恒定电压150V下电泳约25min后，用凝胶成像系统检测电泳结果(如图4所示)，将质量高的野生大豆组织DNA溶液做好标记至于-20℃保存，用于后续实验。
2、分子生物学实验
取上述保存的由野生大豆组织提取的野生大豆组织DNA，进行分子生物学实验，如基因组序列扩增、基因分型等实验。
2.1基因组序列扩增
野生大豆组织DNA可用于基因组序列扩增。以上述野生大豆组织DNA为模板，扩增AP1基因启动子。如图7所示成功AP1启动子。
2.2基因分型
野生大豆组织DNA可适用于不同手段的基因分型，包括高分辨溶解曲线和毛细管电泳。
以上述方法提取的野生大豆组织DNA为模板，进行PCR。高分辨率溶解曲线结果利用Eco软件进行分析。
毛细管电泳基因分型，PCR产物利用QIAxcelDNAScreeningKit跑毛细管电泳，结果利用软件QIAxcelScreenGel分析。
PCR扩增反应体系：反应液中包括10mmol/LTris_HCl，50mmol/LKCl，0.001％Gelatin，2.5mmol/LMgCl2，0.16mmol/LdNTP，0.25μmol/LSNP/InDel引物，1UTaqDNA聚合酶(TRANSGEN，TransStartFastPfu)，10～200ngDNA模板，0.1μL～0.3μLEvaGreen(20×EvaGreen,BiotiumInc.)，总反应体积10μL。扩增程序：94℃预变性4min，94℃变性10s，52℃退火15s，72℃延伸15s，36循环。熔解曲线分析：95℃变性15s，55℃～95℃，每秒上升0.2℃，每上升1℃获取10个信号，利用Eco软件对收集的信号进行分析。
高分辨溶解曲线方法进行基因分型(如图5所示)，从溶解曲线图可以清晰的分析基因型。利用毛细管电泳方法可以清晰的辨别基因型(如图6所示)。
现有技术中近距离野外采样时，根据实验要求，一般需要携带液氮、干冰、冰袋等用于样品的暂时保鲜方法。首先，液氮虽具有保鲜效果好的特点，但是在远距离野外采样时携带不方便，尤其是采样的样本量大时，则需要的液氮量大，需要大体积的液氮罐，普通交通工具无法满足此条件；同时，液氮不适宜长时间野外保存，野外长途运输中，液氮逐渐挥发，一旦挥发殆尽，样品暴露损毁。其次，相较于液氮，干冰保鲜效果次之，干冰挥发速度较液氮慢一些，但与液氮问题相似，同样不适宜野外长时间样品保存。最后，冰袋保存只能短暂保存，且保存效果差，野外长期途中会发生组织氧化、腐烂等现象。因此目前还没有适宜野外组织样品长时间保存的方法。
与现有技术相比，本发明提供的野生大豆野外采样保存方法方便、快捷，不受时间、环境、运输条件影响，能够长时间保存样品且进行后继实验。
需要说明的是，本发明权利要求书中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，为了防止赘述，本发明描述了优选的实施例。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (10)
1.一种野生大豆野外采样保存方法，其特征在于，包括样品采集和保存；
所述样品采集时，采集的样品包括野生大豆的叶片、茎、根组织：
所述样品保存是将采集的样品用纸巾包裹，再将纸巾放入密封的袋子内，再将袋子放入吸潮的容器内，将容器放置于阴凉的地方即可对野生大豆采集的组织样品进行保存。
2.根据权利要求1所述的一种野生大豆野外采样保存方法，其特征在于，所述纸巾的材质为棉浆、木浆、甘蔗浆中的任意一种单一桨或者它们其中两种及两种以上混合后的混合浆。
3.根据权利要求2所述的一种野生大豆野外采样保存方法，其特征在于，所述纸巾的规格为230～400mm*230～400mm。
4.根据权利要求3所述的一种野生大豆野外采样保存方法，其特征在于，所述单个纸巾的厚度为0.2～0.6mm。
5.根据权利要求1所述的一种野生大豆野外采样保存方法，其特征在于，采集的野生大豆的叶片、茎、根组织放入纸巾的中间位置进行包裹。
6.根据权利要求1所述的一种野生大豆野外采样保存方法，其特征在于，所述盛放纸巾的袋子为种子袋。
7.根据权利要求6所述的一种野生大豆野外采样保存方法，其特征在于，所述袋子的材质为牛皮纸，规格为13～20cm*9～12cm。
8.根据权利要求1所述的一种野生大豆野外采样保存方法，其特征在于，所述吸潮的容器为内部装有生石灰的密封盒子或密封箱子。
9.根据权利要求8所述的一种野生大豆野外采样保存方法，其特征在于；所述密封盒子或密封箱子的材质为食品级PP材质，规格包括32cm*25cm*20cm、37.5cm*28.5cm*23cm、47.5cm*36cm*30cm。
10.根据权利要求1所述的一种野生大豆野外采样保存方法，其特征在于，所述保存的野生大豆的叶片、茎、根组织用于后继分子生物学实验。
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