CN117752659A - 一种烟酸通过gpr109a受体用于制备缓解雏鸡白痢药物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种烟酸通过GPR109A受体用于制备缓解雏鸡白痢药物的应用，包括以下步骤：S1、购进60只SPF级的1日龄雏鸡，然后将60只1日龄小鸡分为六组每组10只，分别是：空白对照组、鸡白痢沙门菌组、烟酸低剂量治疗组(20mg/kg)、烟酸中剂量治疗组(60mg/kg)、烟酸高剂量治疗组(80mg/kg)、抗生素组，于1日龄开始攻菌，同时，饲喂不同剂量的烟酸和抗生素到14d。本发明通过制定全新的奶牛乳腺纤维化倾向缓解策略，通过体内实验证实GPR109A在雏鸡白痢发生发展的过程中发挥重要生物学功能，并且体内实验上添加GPR109A特异性激动剂烟酸来探究其对雏鸡白痢的影响。

Description

一种烟酸通过GPR109A受体用于制备缓解雏鸡白痢药物的 应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体为一种烟酸通过GPR109A受体用于制备缓解雏鸡白痢药物的应用。

背景技术

鸡白痢病(Pullorum disease,PD)是白痢沙门氏菌引起，是世界动物卫生组织列出的最重要的家禽疾病之一，它给家禽业造成了相当大的经济负担。该菌能在被污染的垃圾、饲料、水和其它有利环境中存活数月至数年。PD是由鸡白痢沙门氏菌引起的危害禽类养殖业的常见传染病之一，可造成不同年龄段的鸡发病，雏鸡常发生于1-2周龄，表现为拉白色糊状、不成形粪便，严重者粪便会糊住肛门，排粪时常因疼痛发出尖锐的叫声；育成鸡常发生于40-80日龄，主要表现为精神不振，下痢少食等症状。成年鸡一般为隐性感染，主要表现为生殖器官受损，产蛋率和孵化率均降低。剖检变化，雏鸡常呈败血症经过，卵黄吸收不全，肝脏肿大，并可见点状出血或灰白色针尖状的坏死点；脾脏肿大，质地易脆；肠道呈卡他样炎症，盲肠有干酪样物阻塞肠道。育成鸡常见肝脏肿大，约为正常的2-3倍，整个腹腔几乎被肝脏覆盖。成年鸡主要发生在生殖系统，表现为卵巢发育不全，卵泡变形，卵子呈灰色或者黄灰色等不正常色泽。目前对PD尚无有效的免疫方法和根治疗法。对于PD的治疗多采用抗生素治疗，但长期、大量应用抗生素，导致禽类耐药性增强；产生毒副作用；以及抗生素在动物体内残留，进而威胁到人类的健康。因此抗雏鸡白痢药物的研发具有重要意义。

烟酸又称尼克酸，属于B族维生素，是GPR109A的特异性配体。维生素是肉仔鸡基础日粮中最基本的组成成分，对肉鸡的生长起着重要的作用以及具有无残留和价格低廉的特点。因此在本研究中烟酸作为GPR109A的配体，探究其通过激活GPR109A对雏鸡白痢的影响。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种烟酸通过GPR109A受体应用于缓解雏鸡白痢的实验方法，通过ELASE检测血清免疫球蛋白和炎性因子以及GPR109A的表达情况，证实了烟酸通过激活GPR109A能够显著缓解雏鸡白痢的情况。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种烟酸通过GPR109A受体用于制备缓解雏鸡白痢药物的应用，包括以下步骤：

S1、购进60只SPF级的1日龄雏鸡，然后将60只1日龄小鸡分为六组每组10只，分别是：空白对照组、鸡白痢沙门菌组、烟酸低剂量治疗组(20mg/kg)、烟酸中剂量治疗组(60mg/kg)、烟酸高剂量治疗组(80mg/kg)、抗生素组，于1日龄开始攻菌，同时，饲喂不同剂量的烟酸和抗生素到14d。

S2、攻毒后12h有20只鸡出现精神萎顿、低头呆立、翅膀下垂、拉白色糊状的不成形粪便，少数病鸡有粪便粘连肛门的现象；攻毒后24h，有45只鸡出现精神萎顿、低头缩颈、翅膀下垂、拉白色糊状的不成形粪便，少数病鸡有粪便粘连肛门的现象；从有临床症状的45只鸡中挑选任意5只鸡进行剖检，剖检发现肝脏、脾脏肿大，肝脏和脾脏均有针尖状灰白色坏死点，取部分肝脏组织研磨，涂布于麦康凯培养基，在37℃恒温培养箱中培养18-24h，可见灰白色或无色菌落，挑取单菌落进行革兰氏染色，并用显微镜观察菌落变化。

S3、统计各个组的死亡率、发病率以及保护率

发病率统计方法：凡在试验期间出现拉白色稀粪等典型的鸡白痢临床症状者判为发病：根据发病鸡数占试验鸡的比例计算各组发病率；

死亡率统计方法：根据死亡鸡数占试验鸡的比例计算各组死亡率；

保护率：凡在试验期间，没有出现拉白色稀粪等症状者判为得到保护，根据得到保护的鸡只数占试验鸡的比例计算各组保护率；

有效率：凡在试验期间，用药后临床治愈的及临床未治愈、精神、食欲未恢复正常或仍有拉稀症状，但未死亡的，均判为有效：根据有效鸡数占实验鸡的比例计算各组的有效率。

S4、检测雏鸡十二指肠组织中GPR109A表达情况，收集正常和感染白痢沙门菌的雏鸡十二指肠组织，用于分析GPR109A在正常和感染白痢沙门菌的表达差异情况。

S5、收集各个组的雏鸡血清，用试剂盒检测各种免疫指标和炎性因子的含量。

优选的，应用ELASE的方法检测雏鸡血清当中的免疫球蛋白以及炎性因子的表达情况。

(三)有益效果

与现有技术相比，本发明提供了一种烟酸通过GPR109A受体用于制备缓解雏鸡白痢药物的应用，具备以下有益效果：

1、本发明通过制定全新的奶牛乳腺纤维化倾向缓解策略，通过体内实验证实GPR109A在雏鸡白痢发生发展的过程中发挥重要生物学功能，并且体内实验上添加GPR109A特异性激动剂烟酸来探究其对雏鸡白痢的影响。

2、本发明烟酸不易产生耐药性和其他抗生素污染，而且不会对雏鸡产生应激反应，有利于雏鸡白痢的缓解和预防。

附图说明

图1为正常雏鸡和鸡白痢沙门菌感染雏鸡的十二指肠组织中GPR109A表达情况；

图2为烟酸对鸡白痢沙门菌诱导的雏鸡血清中IgM水平的影响；

图3为烟酸对鸡白痢沙门菌诱导的雏鸡血清中IgG水平的影响；

图4为烟酸对鸡白痢沙门菌诱导的雏鸡血清中IL1β水平的影响；

图5为烟酸对鸡白痢沙门菌诱导的雏鸡血清中IL6水平的影响；

图6为烟酸对鸡白痢沙门菌诱导的雏鸡血清中TNF-a水平的影响。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1-6，本发明提供了一种烟酸通过GPR109A受体用于制备缓解雏鸡白痢药物的应用，包括以下步骤：

S1、购进60只SPF级的1日龄雏鸡，然后将60只1日龄小鸡分为六组每组10只，分别是：空白对照组、鸡白痢沙门菌组、烟酸低剂量治疗组(20mg/kg)、烟酸中剂量治疗组(60mg/kg)、烟酸高剂量治疗组(80mg/kg)、抗生素组，于1日龄开始攻菌，同时，饲喂不同剂量的烟酸和抗生素到14d。

S2、攻毒后12h有20只鸡出现精神萎顿、低头呆立、翅膀下垂、拉白色糊状的不成形粪便，少数病鸡有粪便粘连肛门的现象；攻毒后24h，有45只鸡出现精神萎顿、低头缩颈、翅膀下垂、拉白色糊状的不成形粪便，少数病鸡有粪便粘连肛门的现象；从有临床症状的45只鸡中挑选任意5只鸡进行剖检，剖检发现肝脏、脾脏肿大，肝脏和脾脏均有针尖状灰白色坏死点，取部分肝脏组织研磨，涂布于麦康凯培养基，在37℃恒温培养箱中培养18-24h，可见灰白色或无色菌落，挑取单菌落进行革兰氏染色，并用显微镜观察菌落变化。

S3、统计各个组的死亡率、发病率以及保护率

发病率统计方法：凡在试验期间出现拉白色稀粪等典型的鸡白痢临床症状者判为发病：根据发病鸡数占试验鸡的比例计算各组发病率；

死亡率统计方法：根据死亡鸡数占试验鸡的比例计算各组死亡率；

保护率：凡在试验期间，没有出现拉白色稀粪等症状者判为得到保护，根据得到保护的鸡只数占试验鸡的比例计算各组保护率；

有效率：凡在试验期间，用药后临床治愈的及临床未治愈、精神、食欲未恢复正常或仍有拉稀症状，但未死亡的，均判为有效：根据有效鸡数占实验鸡的比例计算各组的有效率。

S4、检测雏鸡十二指肠组织中GPR109A表达情况，收集正常和感染白痢沙门菌的雏鸡十二指肠组织，用于分析GPR109A在正常和感染白痢沙门菌的表达差异情况。

S5、收集各个组的雏鸡血清，用试剂盒检测各种免疫指标和炎性因子的含量。

应用ELASE的方法检测雏鸡血清当中的免疫球蛋白以及炎性因子的表达情况。

表1为各个组的发病率、死亡率以及发病率的统计；

组别	雏鸡数	发病率(％)	保护率(％)	死亡率(％)
					正常组	10	0	100	0
模型组	10	80	0	60
					低剂量组	10	40	60	20
剂量组	10	20	80	0
					高剂量组	10	10	90	0

模型组没有给药，因此保护率为0，从表1可以看出试验期间统计各组雏鸡的存活情况，感染组的发病率为别为80％，而日粮中添加不同剂量的烟酸的发病率分别为40％、20％、10％；结果表明，感染后饲喂烟酸能提高雏鸡的存活率。

从图1中可以看出与正常雏鸡十二指肠组织相比鸡白痢沙门菌感染的雏鸡的十二结肠组织中GPR109A的水平显著升高，而GPR109A可能在鸡白痢疾病过程中发挥积极缓解作用。

从图2中可以看出GPR109A的特异性激动剂烟酸添加到日粮后有效的降低了感染雏鸡血清中IgM的水平，IgM通过调理抗原破坏和固定补体发挥作用，因此日粮中添加烟酸能够有效的增加感染雏鸡血清中IgM的水平，从而缓解雏鸡白痢。

从图3中可以看出GPR109A的特异性激动剂烟酸添加到日粮后有效的降低了感染雏鸡血清中IgG的水平，IgG抗体直接促进免疫反应，包括中和毒素和病毒，因此日粮中添加烟酸能够有效的增加感染雏鸡血清中IgG的水平，从而缓解雏鸡白痢。

从图4中可以看出GPR109A的特异性激动剂烟酸添加到日粮后有效的降低了感染雏鸡血清中IL1β的水平，IL1β是参与先天免疫的重要促炎细胞因子之一，因此日粮中添加烟酸能够有效的降低了感染雏鸡血清中IL1β的水平，从而缓解雏鸡白痢。

从图5中可以看出GPR109A的特异性激动剂烟酸添加到日粮后有效的降低了感染雏鸡血清中IL6的水平，IL6是趋化因子家族的一种细胞因子，因此日粮中添加烟酸能够有效的降低了感染雏鸡血清中IL6的水平，从而缓解雏鸡白痢。

从图6中可以看出GPR109A的特异性激动剂烟酸添加到日粮后有效的降低了感染雏鸡血清中TNF-a的水平，TNF-a是多效细胞分子，在炎症、细胞凋亡和免疫系统发育中起着核心作用，因此日粮中添加烟酸能够有效的降低了感染雏鸡血清中TNF-a的水平，从而缓解雏鸡白痢。

综上所述，该实验证明了，日粮中添加烟酸能够显著降低由白痢沙门菌引起的炎性因子水平的升高，此外，日粮中添加烟酸也能显著缓解由白痢沙门菌引起的雏鸡免疫球蛋白指数的显著降低。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (2)

1.一种烟酸通过GPR109A受体用于制备缓解雏鸡白痢药物的应用，其特征在于，包括以下步骤：

S1、购进60只SPF级的1日龄雏鸡，然后将60只1日龄小鸡分为六组每组10只，分别是：空白对照组、鸡白痢沙门菌组、烟酸低剂量治疗组(20mg/kg)、烟酸中剂量治疗组(60mg/kg)、烟酸高剂量治疗组(80mg/kg)、抗生素组，于1日龄开始攻菌，同时，饲喂不同剂量的烟酸和抗生素到14d。

S2、攻毒后12h有20只鸡出现精神萎顿、低头呆立、翅膀下垂、拉白色糊状的不成形粪便，少数病鸡有粪便粘连肛门的现象；攻毒后24h，有45只鸡出现精神萎顿、低头缩颈、翅膀下垂、拉白色糊状的不成形粪便，少数病鸡有粪便粘连肛门的现象；从有临床症状的45只鸡中挑选任意5只鸡进行剖检，剖检发现肝脏、脾脏肿大，肝脏和脾脏均有针尖状灰白色坏死点，取部分肝脏组织研磨，涂布于麦康凯培养基，在37℃恒温培养箱中培养18-24h，可见灰白色或无色菌落，挑取单菌落进行革兰氏染色，并用显微镜观察菌落变化。

S3、统计各个组的死亡率、发病率以及保护率

发病率统计方法：凡在试验期间出现拉白色稀粪等典型的鸡白痢临床症状者判为发病：根据发病鸡数占试验鸡的比例计算各组发病率；

死亡率统计方法：根据死亡鸡数占试验鸡的比例计算各组死亡率；

保护率：凡在试验期间，没有出现拉白色稀粪等症状者判为得到保护，根据得到保护的鸡只数占试验鸡的比例计算各组保护率；

有效率：凡在试验期间，用药后临床治愈的及临床未治愈、精神、食欲未恢复正常或仍有拉稀症状，但未死亡的，均判为有效：根据有效鸡数占实验鸡的比例计算各组的有效率。

S4、检测雏鸡十二指肠组织中GPR109A表达情况，收集正常和感染白痢沙门菌的雏鸡十二指肠组织，用于分析GPR109A在正常和感染白痢沙门菌的表达差异情况。

S5、收集各个组的雏鸡血清，用试剂盒检测各种免疫指标和炎性因子的含量。

2.根据权利要求1所述的一种烟酸通过GPR109A受体用于制备缓解雏鸡白痢药物的应用，其特征在于：应用ELASE的方法检测雏鸡血清当中的免疫球蛋白以及炎性因子的表达情况。