CN117750889A - 稳定的初乳组合物 - Google Patents

稳定的初乳组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN117750889A
CN117750889A CN202280031259.5A CN202280031259A CN117750889A CN 117750889 A CN117750889 A CN 117750889A CN 202280031259 A CN202280031259 A CN 202280031259A CN 117750889 A CN117750889 A CN 117750889A
Authority
CN
China
Prior art keywords
colostrum
composition
pro
growth factor
vaccine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202280031259.5A
Other languages
English (en)
Inventor
雷蒙德·约翰·普莱福德
迈克尔·詹姆斯·维瑟
塔尼亚·马奇班克
桑德拉·约翰娜·玛丽亚·滕布鲁根卡特
乔治·斯塔尼蒂
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pan Sirui Co
Original Assignee
Pan Sirui Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pan Sirui Co filed Critical Pan Sirui Co
Publication of CN117750889A publication Critical patent/CN117750889A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/5005—Wall or coating material
    • A61K9/5015—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/20—Milk; Whey; Colostrum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/125—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols; containing starch hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/19—Dairy proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/40—Complete food formulations for specific consumer groups or specific purposes, e.g. infant formula
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1808—Epidermal growth factor [EGF] urogastrone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/55—Protease inhibitors
    • A61K38/57—Protease inhibitors from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/32—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on the health of the digestive tract
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/54—Proteins
    • A23V2250/542—Animal Protein
    • A23V2250/5424—Dairy protein
    • A23V2250/54252—Whey protein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55516—Proteins; Peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55583—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pediatric Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明提供了包含促修复因子例如初乳、减少所述促修复因子的酶促消化的营养性蛋白酶抑制剂和任选的稳定剂，以允许所述促修复因子在口服施用后完整到达小肠的组合物。本发明提供了用于治疗、减轻和预防炎症性肠病(IBD)和胃肠道的其他病症的方法。

Description

稳定的初乳组合物
优先权要求
本申请要求2021年2月26日提交的题为“稳定的初乳组合物”(StabilizedColostrum Compositions)的美国临时申请号63/154,495的优先权利益，所述临时申请的全部内容通过引用并入本文。
序列表
本申请包括序列表，其以ASCI格式电子提交且其全部内容通过引用并入本文。名为“序列表-40735-0056USP1”的所述ASCI副本创建于2021年2月26日，与美国临时申请号63/154,495一起提交，并具有36.4千字节(KB)的大小。
技术领域
本文提供的实施方式涉及稳定的初乳组合物及其使用方法。
背景技术
炎症性肠病(IBD)是一种主要影响胃肠道的严重的复发性病况，并细分为影响大肠的溃疡性结肠炎(UC)和可能影响整个胃肠道尤其是末端回肠的克罗恩病。在两种病况中，过度的炎症反应都会导致粘膜完整性的破坏，管腔内容物进入粘膜和血液，并进一步加剧炎症过程。目前的治疗方法包括具有严重副作用的强效免疫调节剂例如泼尼松龙、硫唑嘌呤或针对炎症级联(例如TNFα)的单克隆抗体等，其均具有严重感染和/或骨髓抑制的相关风险。因此，需要新的治疗方法。
初乳是分娩后最初几天产生的第一批乳汁。与随后产生的乳汁相比，它特别富含免疫球蛋白、抗菌肽(例如乳铁蛋白、乳过氧化物酶)和其他生物活性分子，包括生长因子。
牛初乳(BC)可能有助于预防和治疗各种胃肠道病况，但初乳在胃肠道中的降解阻碍了其用途。仍然需要稳定的初乳组合物和用于治疗、减轻、预防影响胃肠道的病况和/或预防所述病况的复发的安全、有效和经济的方法，所述病况包括炎症性肠病(IBD)，例如影响大肠的溃疡性结肠炎(UC)或可能影响整个胃肠道尤其是末端回肠的克罗恩病。还需要用于膳食补充、功能食品和饮料中以及用于支持正常胃肠道和免疫功能的稳定的初乳组合物。
发明内容
本公开提供了稳定的初乳组合物。所述组合物可以包含促修复因子、营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。
本公开提供了组合物，其包含促修复因子、稳定剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。
本公开提供了一种在有需要的受试者中治疗、减轻或预防与胃肠道炎症相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用组合物，所述组合物包含：治疗有效量的促修复因子、免疫因子或其组合；营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂；和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。所述营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂可以是营养性胰蛋白酶抑制剂。在某些实施方式中，所述组合物可以进一步包含稳定剂。
本公开提供了一种在有需要的受试者中治疗、减轻或预防与胃肠道炎症相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用组合物，所述组合物包含：治疗有效量的促修复因子和/或免疫因子；稳定剂；和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。
本公开提供了一种在受试者中提高疫苗接种抗体滴度的方法，所述方法包括向所述受试者口服施用治疗有效量的组合物。所述组合物可以包含：促修复因子、免疫因子或其组合；营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂；任选的营养学上可接受的载体或赋形剂；和任选的稳定剂。所述在受试者中提高疫苗接种抗体滴度的方法包括向所述受试者施用疫苗。
本公开提供了一种组合物，其包含纯化的乳铁蛋白、稳定剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。
本公开尤其是基于下述令人惊讶的发现，即添加某些组合产品可协同保护初乳免于胃消化，表明包含初乳和所述组合产品的组合物提供了更加有益的口服生物利用度特性。
附图说明
图1A描述了体外样品酶促消化方案的示意图。
图1B描述了示出在人类AGS细胞系中通过Alamar蓝细胞增殖测定法测定的蛋白酶抑制剂对体外生长因子保存的影响的条形图。
图1C示出了在人类AGS细胞系中通过Alamar蓝细胞增殖测定法测定的蛋白酶抑制剂对体外生长因子保存的影响的条形图。
图1D示出了组合产品对BC体外稳定性的影响的条形图。稳定性通过Alamar蓝细胞增殖测定法测量。
图1E描述了示出组合产品对BC的体外稳定性的影响的条形图。稳定性通过牛IgG大肠杆菌结合来测量。
图2A描述了示出通过ELISA测定的组合产品对IgG免疫反应性的影响的条形图。
图2B描述了示出组合产品对生长因子免疫反应性的影响的条形图。TGFβ免疫反应性通过ELISA测量。
图2C描述了示出组合产品对生长因子免疫反应性的影响的条形图。EGF免疫反应性通过ELISA测量。
图2D描述了示出组合产品对生长因子免疫反应性的影响的条形图。乳铁蛋白免疫反应性通过ELISA测量。
图3A描述了在DSS诱导的大鼠结肠炎中9天内的大鼠累积总体重变化，以及丝氨酸蛋白酶抑制剂对BC+蛋(egg)或EGF的保护活性的影响的条形图。
图3B描述了在DSS诱导的大鼠结肠炎中9天内的累积疾病活动指数(DAI)评分，以及丝氨酸蛋白酶抑制剂对BC+蛋或EGF的保护活性的影响的条形图。
图3C描述了在DSS诱导的大鼠结肠炎中9天内的结肠组织髓过氧化物酶(MPO)浓度，以及丝氨酸蛋白酶抑制剂对BC+蛋或EGF的活性的影响的条形图。
图3D描述了在DSS诱导的结肠炎模型中大鼠总组织学结肠炎评分的条形图。
图4A-4H示出了在与图2A-2D相同的大鼠中DSS诱导的结肠炎中的形态显微照片。更具体来说：
图4A示出了正常(无DSS)大鼠隐窝结构的显微照片。
图4B示出了施用DSS 7天后大鼠结肠的显微照片。
图4C示出了单独用丝氨酸蛋白酶抑制剂卵类粘蛋白治疗后大鼠结肠的显微照片。
图4D示出了单独用丝氨酸蛋白酶抑制剂SBTI治疗后大鼠结肠的显微照片。
图4E示出了在接受BC+蛋的动物中大鼠结肠的显微照片。
图4F示出了在接受BC+蛋+卵类粘蛋白的组合的动物中大鼠结肠的显微照片。
图4G示出了单独用EGF治疗后大鼠结肠的显微照片。
图4H示出了在接受EGF+SBTI的组合的动物中大鼠结肠的显微照片。
图5A描述了示出接受指定治疗的小鼠在7天内总体重增加的条形图。
图5B示出了针对为接受指定治疗的小鼠确定的累积疾病活动指数(DAI)评分的条形图。
图5C示出了针对接受指定治疗的小鼠确定的最终疾病活动指数(DAI)评分的条形图。
图6A描述了示出在DSS诱导的结肠炎模型中小鼠结肠组织中的髓过氧化物酶(MPO)活性的条形图。
图6B示出了图6A的DSS诱导的结肠炎模型中每个结肠的组织学评分的条形图。代表性显微照片示出在图7A-7G中。
图7A示出了在DSS诱导的结肠炎模型中“无DSS对照”小鼠的结肠组织的代表性显微照片。
图7B示出了在DSS诱导的结肠炎模型中“单独的DSS”小鼠的结肠组织的代表性显微照片。
图7C示出了在DSS诱导的结肠炎模型中“DSS+C77 mg/kg”小鼠的结肠组织的代表性显微照片。
图7D示出了在DSS诱导的结肠炎模型中“DSS+C720 mg/kg”小鼠的结肠组织的代表性显微照片。
图7E示出了在DSS诱导的结肠炎模型中“DSS+C127 mg/kg”小鼠的结肠组织的代表性显微照片。
图7F示出了在DSS诱导的结肠炎模型中“DSS+C1220 mg/kg”小鼠的结肠组织的代表性显微照片。
图7G示出了在DSS诱导的结肠炎模型中“DSS+C1720 mg/kg”小鼠的结肠组织的代表性显微照片。
图8描述了示出在耐酸胶囊或相对非耐酸的常规胶囊中指定组的增殖效果的条形图。
具体实施方式
定义
本文使用的术语仅用于描述特定实施方式的目的，并不旨在限制本公开。除非另有定义，否则本说明书中使用的包括技术和科学术语在内的所有术语均具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。在术语冲突的情况下，以本说明书为准。
本说明书和所附的权利要求书中使用的没有具体数目的指称包括复数指称物，除非上下文另有明确说明。因此，例如，含有“促修复因子”的组合物包括两种或更多种促修复因子的混合物。
术语“或”通常在其包括“和/或”的意义上使用，这旨在涵盖一个或多个相关列出项目的任何和所有可能的组合，除非上下文另有明确说明。
本文所使用的术语“约”在指称可测量的值例如量、持续时间等时，意在涵盖与指定值±20％、或±10％、或±5％、或±1％、或±0.5％、或±0.1％的变化，因为这种变化适合于执行所公开的方法。
术语“其他活性试剂”是指可以在患有疾病或病症的受试者的治疗、预防或姑息治疗中单独使用、同时施用、顺序施用或与一种或多种其他试剂联合使用的试剂。其他活性试剂可以是例如抗生素、抗真菌剂、抗病毒剂、抗菌剂、抗寄生虫剂、微量营养素、口服补液盐、止泻吸附剂、抗胆碱能药物、抗分泌剂、抗蠕动药物或初乳成分或其组合。其他活性试剂也可以是组胺2型受体阻滞剂或质子泵抑制剂。组胺2型受体阻滞剂可以是雷尼替丁、法莫替丁、尼扎替丁或西咪替丁。质子泵抑制剂可以是奥美拉唑、兰索拉唑、雷贝拉唑、泮托拉唑、埃索美拉唑或右兰索拉唑。其他活性试剂可以与本文公开的任何组合物共同施用。在某些实施方式中，其他活性试剂可以以先前单独用作“护理标准”的量用于本文公开的任何组合物中。在某些实施方式中，其他活性试剂可以以低于先前单独用作“护理标准”的量用于所述组合物中。在某些实施方式中，例如与没有所述其他活性试剂的组合物相比，其他活性试剂可以以有效引起与胃肠道炎症或损伤相关的疾病、病症或病况的症状或体征的可测量的减少、肠道炎症减少、肠道微生物组改变、肠道绒毛钝化减少、肠道完整性增加、溃疡减少、肠道内容物渗漏减少、全身炎症减少、生物标志物显著变化、腹泻量减少、腹泻持续时间减少、腹痛减少、恶心减少、痉挛减少、肠道控制丧失或腹泻症状紧迫性减少的量，或者以增加医生评估的受试者的良好状态的量在本文描述的任何组合物中共同施用或使用。
术语“团聚”是指用于提高细粉粒度的技术。粒度的增加提高了可润湿性和溶解度，并因此为本公开的组合物提供速溶的性质。所述过程可以涉及重新润湿细小的喷雾干燥粉末，然后进行第二次干燥循环，产生“团聚体”。
术语“初乳”是指在分娩(即生产)后至多24小时、48小时或72小时(例如约2、5、10、12、24、36、48或72小时)从哺乳动物获得的第一批乳汁。初乳可以从牛、绵羊、山羊、水牛或其他哺乳动物获得。在某些实施方式中，所述初乳是牛初乳。在某些实施方式中，所述初乳不是人初乳。术语“晚期初乳”是指在分娩后72小时至7天(例如分娩后约3、4、5、6或7天)之间获得的初乳。
在理解本公开的范围时，本文所使用的术语“包含”及其衍生词旨在作为开放式术语，指定所陈述的特点、要素、组分、组、整数、操作和/或步骤的存在，但不排除其他未陈述的特点、要素、组分、组、整数、操作和/或步骤的存在。上述说明也适用于具有类似含义的词语，如术语“包括”、“具有”及其衍生词。在将术语“包含”用作过渡短语的实施方式或权利要求中，此类实施方式也可以被设想为将术语“包含”、“包括”、“具有”及其衍生词替换为术语“由……组成”或“基本上由……组成”。术语“由……组成”及其衍生词旨在作为封闭性术语，指定所陈述的特点、要素、组分、组、整数和/或步骤的存在。本文所使用的术语“基本上由……组成”旨在指定所陈述的特点、要素、组分、组、整数和/或步骤以及那些不实质性影响这些特点、要素、组分、组、整数和/或步骤的基本和新颖特征的特点、要素、组分、组、整数和/或步骤的存在。本文中说明性描述的实施方式可以在不存在本文具体公开或未具体公开的任何一个或多个要素、一个或多个限制的情况下适合地实践。因此，例如，在本文的每个实例中，术语“包含”、“基本上由……组成”和“由……组成”中的任一者都可以用其他两个术语中的任一者代替，同时保留它们的普通含义。本文描述的任何单个术语、单个要素、单个短语、成组术语、成组短语或成组要素都可以具体地从权利要求中排除。最后，本文所使用的程度术语例如“实质上”、“约”和“大概”意味着所修饰的术语的合理偏差，使得最终结果不会显著改变。这些程度术语应该被解释为包括所修饰的术语的至少±5％的偏差，如果这种偏差不会使其修饰的词语的含义无效的话。
术语“蛋”或“蛋制品”均指禽类来源的全壳蛋(常规的、免疫的或其他)或从其衍生的任何产品或级分。所述禽类可以例如是选自鸡、鸭、鹅、火鸡、珍珠鸡、鸽子、鹌鹑、鸸鹋或鸵鸟中的一种或多种驯养禽类物种的雌禽。
本文所使用的术语“免疫因子”是指调节免疫应答的肽或其他因子。免疫因子可以是但不限于免疫球蛋白、细胞因子或抗菌肽。本文所使用的术语“免疫球蛋白”是指在免疫系统的血清和细胞中存在的一类起到抗体作用的蛋白质。免疫球蛋白可以是但不限于IgG、IgA或IgM。本文所使用的术语“细胞因子”是指由免疫系统的细胞分泌并对其他细胞具有效应的大量物质中的任一者。细胞因子可以是但不限于白介素(例如IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、IL-17)、肿瘤坏死因子α、干扰素γ、粒细胞、巨噬细胞或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子。本文所使用的术语“抗菌肽”是指由所有多细胞生物体作为第一道防线产生天然存在的分子。这些可以具有直接杀死细菌、酵母、真菌、病毒和甚至是癌细胞的广泛活性。抗菌肽可以是但不限于乳铁蛋白、乳过氧化物酶或溶菌酶。
本文所使用的术语“包括”在范围上是非限制性的，因此除了那些列出的要素之外还可能设想了其他要素；该术语在任何情况下均可被理解为“包括但不限于”。
体征或症状或生物标志物的减轻或改善可能在施用所述组合物1周至2年、2周至18个月、3周至12个月、4周至9个月、6周至6个月或8周至3个月的一段时间后或开始施用后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月发生。
组分或组合物的“有效量”在本文中可以被进一步定义为当暴露于相同条件下相同的时间段时，例如相对于不含所述试剂的相同组分或组合物，有效提供所需活性，或将所述组合物的组分的稳定性或所述组合物的稳定性保存或提高至少10％、20％、30％、50％、70％、100％或2倍、3倍、4倍或更高的量。在某些实施方式中，“有效量”和“治疗有效量”可互换使用，并且是指本文所述的化合物、制剂、材料、组分或组合物的有效实现特定生物学结果或提供治疗或预防益处的量。此类结果可以包括但不限于当施用到哺乳动物时导致患者样品中髓过氧化物酶(MPO)减少的量。所述患者样品可以是组织、血液、血清、血浆、唾液或粪便样本。在某些实施方式中，有效量的组合物可以减少受试者中的粪便MPO。所述组合物的有效量可以减少结肠或直肠组织样品中的MPO。MPO的减少可以是减少约0.1、1、5、10、20、30、40、50％或更多。所述组合物的有效量可以是根据组合物的每日治疗剂量以干重计约0.5g至100g、1g至75g、2g至50g、3g至20g或至少1克、2克、3克、4克、5克、6克、7克、8克、9克、10克。组合物可以采取干燥、粉末状、半固体、固体、糊状或液体的形式。
术语“营养学上可接受的载体或赋形剂”是指无毒惰性固体、半固体或液体填充剂、载体、稀释剂、赋形剂、媒介物、包封材料或任何类型的制剂助剂。本文提供了可以充当营养学上可接受的载体的材料的一些实例，其包括例如糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；环糊精，例如α-、β-和γ-环糊精；淀粉，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉；部分水解的淀粉，例如糊精；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、醋酸纤维素；黄芪胶粉；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，例如二氧化硅、可可脂、栓剂蜡；植物油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；中链甘油三酯，例如从棕榈仁油或椰子油提取的；二醇类，例如丙二醇；酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁、氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇和磷酸盐缓冲溶液，以及其他无毒性相容润滑剂例如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁，并且根据配方师的判断，增溶剂、着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、防腐剂和抗氧化剂，也可以存在于所述组合物中。调味剂可以是天然调味剂。
术语“患者”或“受试者”包括但不限于人类，所述术语还可以涵盖其他哺乳动物或家畜或外来动物，例如猪、马、绵羊、牛、公牛、山羊、羊驼、美洲驼、骆驼、狗、猫、雪貂、兔或鸟类。在某些实施方式中，所述受试者是人类受试者。人类受试者可以是28天或28天以下的新生儿受试者、28天以上的非新生儿受试者、18岁以下的青少年受试者、18岁或18岁以上的成年受试者或60岁或60岁以上的老年受试者。在具体的实施方式中，所述受试者是非新生儿人类受试者。在其他实施方式中，所述受试者是家畜。在某些实施方式中，所述家畜可以是新生家畜，例如小牛、仔猪、小山羊、羔羊或马驹。在某些实施方式中，所述家畜可以是妊娠或哺乳的雌性家畜。在某些实施方式中，所述家畜可以是生产动物。生产动物可以是奶牛、奶山羊、肉牛、猪、家禽、产羊毛动物如绵羊、羊驼、安哥拉兔、骆驼、山羊、美洲驼、麝牛。在某些实施方式中，家畜可以是伴侣动物，例如马、狗、猫、雪貂或兔。在某些实施方式中，家畜可以是表演动物，例如赛马、表演马、演出马、牧羊犬或猎犬。
术语“促修复因子”是指影响细胞生长、分化、发育和功能的小分子和肽，例如生长因子。此类促修复因子包括但不限于表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)、胰岛素样生长因子II(IGF-II)和血小板衍生生长因子(PDGF)。术语促修复因子可以是指单个因子例如分离的促修复肽，或一组因子，或包含促修复因子的混合物例如初乳。
术语“治疗有效量”是指本文所述的化合物、制剂、材料、组分或组合物的有效实现特定生物学结果或提供治疗或预防益处的量。此类结果可以包括但不限于疾病、病症或副作用的改善的治疗、治愈、预防或改善，或疾病或病症的进展速度的降低。此类结果可以包括但不限于患者样品中MPO的降低。专业技术人员将会理解，“治疗有效量”可以根据化合物、疾病及其严重程度、施用途径以及待治疗受试者的状况、年龄、体重、性别等而变。
术语疾病状态或病况的“治疗”包括：(i)预防疾病状态或病况，即导致在可能暴露于或易感所述疾病状态或病况但尚未经历或表现出所述疾病状态或病况的症状的受试者中不发生所述疾病状态或病况的一种或多种临床症状，(ii)抑制或减轻所述疾病状态或病况，即阻止所述疾病状态或病况或其一种或多种临床症状的发展，(iii)缓解所述疾病状态或病况，即导致所述疾病状态或病况或其一种或多种临床症状的暂时或永久消退，或(iv)降低受试者经历的疾病或病症的至少一种体征或症状的频率或严重程度。
所有代词都旨在以其最广泛的含义提供。除非另有说明，否则雌性代词包含雄性，雄性代词包含雌性，单数代词包含复数，复数代词包含单数。
在本公开全文中，实施方式的各个方面可以以范围的形式呈现。应当理解，采取范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，不应被解释为不灵活的限制。因此，对范围的描述应该被认为已经具体公开了所有可能的子范围以及该范围内的各个数值。此外，这些数字范围应该被解释为对针对该范围内的任何数字或数字子集的权利要求提供支持。例如，从1至10的公开应该被解释为支持从2至8、从3至7、从5至6、从1至9、从3.6至4.6、从3.5至9.9等的范围，以及该范围内的单个数字，例如1、2、2.3、3、4、5、5.7、6、7、8、8.9、9、9.5、9.9和10。无论范围有多大这一点都适用。除非另有明确相反的说明，否则所公开的范围还包括所述范围的端点。
术语“实质相同”或“实质同一性”意在表示多肽或核酸分子与参考氨基酸序列(例如本文描述的氨基酸序列中的任一者)或核酸序列(例如本文描述的核酸序列中的任一者)具有至少50％的同一性。在某些实施方式中，序列可以在氨基酸水平或核酸水平上与用于比较的序列具有例如至少60％、80％、85％、90％、95％、99％或更高的同一性。
序列同一性可以使用序列分析软件(例如威斯康星大学生物技术中心遗传学计算组(Genetics Computer Group,University of Wisconsin Biotechnology Center,1710University Avenue,Madison,Wis.53705)的序列分析软件包、BLAST、BESTFIT、GAP或PILEUP/PRITYBOX程序)来测量/确定。此类软件通过为各种取代、缺失和/或其他修饰进行同源度赋值来匹配相同或相似的序列。保守取代通常包括下述组内的取代：甘氨酸、丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸；天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺；丝氨酸、苏氨酸；赖氨酸、精氨酸；以及苯丙氨酸、酪氨酸。在确定同一性程度的示例性方法中，可以使用BLAST程序，其中e3和e100之间的概率得分指示密切相关的序列。在某些实施方式中，通过使用具有默认设置的BLAST来确定序列同一性。
在本文提供的实施方式包括包含各种蛋白质的组合物的范围内，在某些情况下，这些蛋白质可以包含与本文公开的氨基酸序列具有序列同一性的氨基酸序列。因此，在某些实施方式中，取决于具体序列，所述序列与本文公开的SEQ ID NO的序列同一性程度可以大于约50％(例如50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)。这些蛋白质可以包括同源物、直系同源物、等位基因变体和功能突变体。通常，两个多肽序列之间50％或更高的同一性被认为是功能上等同的标志。多肽之间的同一性可以通过在MPSRCH程序(Oxford Molecular)中执行的Smith-Waterman同源性搜索算法，使用仿射空位搜索来确定，参数为空位开放罚分-12和空位扩展罚分＝1。
与公开的蛋白质相比，这些蛋白质可以包括一个或多个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个等)保守氨基酸替换，即将具有相关侧链的另一个氨基酸替换一个氨基酸。基因编码的氨基酸通常分为四个家族：(1)酸性，即天冬氨酸、谷氨酸；(2)碱性，即赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性，即丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸；和(4)不带电荷的极性，即甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸有时被统称为芳香族氨基酸。一般来说，这些家族内单个氨基酸的取代不会对生物活性产生重大影响。相对于公开的蛋白质序列，蛋白质可以具有一个或多个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个等)单氨基酸缺失。相对于所公开的蛋白质序列，蛋白质还可以包括一个或多个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个等)插入(例如各自为1、2、3、4或5个氨基酸的插入)。
在某些实施方式中，“营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂”可以是成熟的分泌形式或其实质上相同的变体肽、功能同源物或其包含所述营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂的连续氨基酸序列的活性肽片段。营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂可以抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶中的一者或多者。营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂可以源自可食用营养源，并且能够表现出丝氨酸蛋白酶抑制剂活性。在一个实例中，丝氨酸蛋白酶抑制剂是大豆制品。在某些实施方式中，营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂是营养性胰蛋白酶抑制剂。营养性胰蛋白酶抑制剂可以是酶活性大豆制品。营养性胰蛋白酶抑制剂可以是能够表现出胰蛋白酶抑制剂活性的卵类粘蛋白。
术语“片段”在本文中用于定义直接衍生自感兴趣的氨基酸序列，或者合成为与所述感兴趣的氨基酸序列相同或合成为与所述感兴趣的氨基酸序列相比具有至少90％、至少95％、至少97％或至少99％序列同一性的任何非全长氨基酸残基串。在某些非限制性实施方式中，片段能够表现出胰蛋白酶抑制剂活性。肽片段可以包含所述感兴趣的蛋白质或肽的至多52个连续氨基酸残基、至多50个连续氨基残基、至多40个连续氨基残基、至多30个连续氨基酸残基、15至30个连续氨基残基或18至25个连续氨基酸残基。
“功能同源物”可以被定义为包含感兴趣的蛋白质的全长氨基酸序列或片段，其具有一个或多个、两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个或五个或更多个氨基酸残基的突变。功能同源物可以保留亲本蛋白质或肽的至少50％、70％、80％、90％、95％、99％或更多的活性，并且可以是但不限于具有一个或多个、两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个或五个或更多个突变的全长或片段蛋白质的重组版本。
不囿于任何特定理论，已发现由本文提供的实施方式所说明的组合物相对于各种肽酶的消化提供了增加的初乳稳定性。这些用于治疗溃疡性结肠炎或克罗恩病的初乳组合物可能受到所述初乳组合物的生物利用度的阻碍。由于包括胰腺蛋白酶的胃消化在内的各种因素，诸如灌肠疗法或口服施用的传统方法都不成功。通过将初乳与各种营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂和稳定剂组合，实现了初乳对胃消化的抗性。令人惊讶的是抗性的量具有协同作用，因为某些组合物导致胰蛋白酶抑制剂活性超过基于单个组分的理论抑制剂活性。这允许用含有初乳的组合物对小鼠进行口服治疗，这在溃疡性结肠炎的小鼠模型中产生保护作用。
组合物
本文公开的实施方式涉及稳定的初乳。在某些实施方式中，所述组合物包含促修复因子、营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。在某些实施方式中，提供了包含促修复因子、营养性胰蛋白酶抑制剂和营养学上可接受的载体或赋形剂的组合物。在某些实施方式中，提供了包含促修复因子、营养性胰蛋白酶抑制剂、稳定剂和营养学上可接受的载体或赋形剂的组合物。在某些实施方式中，提供了包含纯化的乳铁蛋白、稳定剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂的组合物。
在某些实施方式中，组合物进一步包含稳定剂。在某些实施方式中，所述稳定剂是酪蛋白、酪蛋白酸盐、聚葡萄糖、海藻糖、外源性初乳脂肪、硬脂、海藻酸盐、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体、海藻酸盐加乙基纤维素、海藻酸盐加玉米淀粉、海藻酸盐加丙烯酸聚合物或其组合。在某些实施方式中，所述稳定剂可以是基质稳定剂、脂质稳定剂、多糖稳定剂、二糖稳定剂、糖醇稳定剂或蛋白质稳定剂。所述稳定剂可以是微胶囊化剂、耐酸包衣材料和/或肠溶包衣材料。
在某些实施方式中，所述促修复因子是初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳、初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、蛋制品、分离的促修复肽或蛋白质、其营养学上可接受的盐或其组合。在某些实施方式中，所述初乳是牛初乳。在某些实施方式中，所述牛初乳是脱脂牛初乳、部分脱脂牛初乳、全牛初乳或其组合。
在某些实施方式中，所述促修复因子可以是天然组合营养品、分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐。所述天然组合营养品可以是初乳、蛋制品或其组合。
在某些实施方式中，所述初乳可以是牛初乳。所述牛初乳可以是脱脂牛初乳、部分脱脂牛初乳、全牛初乳或其组合。
在某些实施方式中，所述分离的促修复肽或蛋白质可以是重组或分离的促修复肽或蛋白质，其选自由表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)、胰岛素样生长因子II(IGF-II)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、乳脂肪球-表皮生长因子8(MFG-E8)或其营养学上可接受的盐组成的组。
在某些实施方式中，分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐的治疗有效量可以是每天约0.001mg/kg至约10mg/kg、约0.005mg/kg至约5mg/kg、约0.01mg/kg至约1mg/kg或约20μg/kg至约200μg/kg受试者体重。
在某些实施方式中，本文公开的组合物中分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐的治疗有效量可以是每天约0.01mg至约500mg、约0.05mg至约80mg、约0.1至约50mg、约0.5至约10mg或约1mg至约5mg。
在某些实施方式中，营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂是营养性胰蛋白酶抑制剂，其中所述营养性胰蛋白酶抑制剂是酶活性大豆制品、卵类粘蛋白、大豆胰蛋白酶抑制剂或其组合。在某些实施方式中，所述酶活性大豆制品是生大豆粉、生豆粕、生大豆制品、微加工大豆制品或其组合。在某些实施方式中，酶活性大豆制品是酶活性大豆粉。在某些实施方式中，营养性胰蛋白酶抑制剂可以包括来自木豆、鹰嘴豆、扁豆、乌头叶菜豆、绿豆、利马豆、黑豆、干豆、豌豆、豇豆、花菜豆或蚕豆的具有酶活性的植物产品，只要所述营养性胰蛋白酶抑制剂的胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)为至少约10胰蛋白酶抑制单位(TUI)/mg样品(例如至少约10、11、12、13、14、15、20、30、40个或更多TUI/mg)和/或iii)当按照美国油类化学家学会(AOCS)标准程序Ba10b-09(其全部内容通过引用并入本文)测试时蛋白质分散度指数(PDI)值大于40(例如约大于40、45、50、55、60、65、70或更大的DPI)即可。在某些实施方式中，所述组合物包含约40wt％至约90wt％(例如约40、45、50、60、70、80、90wt％或更多或约40wt％至90wt％之间的任何范围)的初乳，约5wt％至约25wt％的酶活性大豆制品(例如约5、10、15、20、25wt％或更多或约5wt％至25wt％之间的任何范围)，以及约5wt％至约40wt％(例如约5、10、15、20、25、30、35、40wt％或更多或约5wt％至40wt％之间的任何范围)的稳定剂。在某些具体的实施方式中，所述组合物可以包含约40wt％至约95wt％的初乳、约0wt％至约25wt％的酶活性大豆制品和约5wt％至约50wt％的一种或多种组合的稳定剂。
在某些实施方式中，所述酶活性大豆制品可以表现出：i)当按照国际标准化组织的方法(ISO 14902:2001，其全部内容通过引用并入本文)测试时至少10mg/g样品(例如约至少10、15、20或更大的mg/g)的胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)；ii)至少10胰蛋白酶抑制单位(TUI)/mg样品(例如约至少10、11、12、13、14、15、20、25、30或更大的TUI/mg)的胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)；和/或iii)当按照美国油类化学家学会(AOCS)标准程序Ba 10b-09(其全部内容通过引用并入本文)测试时大于40(例如约40、45、50、55、60、65或更大)的蛋白质分散度指数(PDI)值。
在某些实施方式中，所述组合物包含的初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳或初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物与酶活性大豆制品的重量比为约1:1至约20:1，任选为约5:1至约15:1。
在某些实施方式中，所述组合物包含促修复因子；营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂；和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。在某些实施方式中，所述组合物包含约40wt％至约95wt％(例如约40、45、50、60、70、80、90、95wt％或更多或约40wt％至95wt％之间的任何范围)的初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳或初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物，以及约5wt％至约25wt％(例如约5、10、15、20、25wt％或更多或约5wt％至25wt％之间的任何范围)的酶活性大豆制品。在某些实施方式中，所述组合物包含约5wt％至约40wt％(例如约5、10、15、20、25、30、35、40wt％或更多或约5wt％至40wt％之间的任何范围)的稳定剂。在某些实施方式中，所述组合物进一步包含大豆凝集素、中链甘油三酯、乳清蛋白浓缩物、脱脂奶粉、乳蛋白浓缩物或其组合。在某些实施方式中，所述组合物包含至多约2wt％(例如约0.01、0.1、1.0、1.5、2.0wt％)的大豆卵磷脂、至多约2wt％(例如约0.01、0.1、1.0、1.5、2.0wt％)的中链甘油三酯、至多约2wt％(例如约0.01、0.1、1.0、1.5、2.0wt％)的调味剂、至多约50wt％(例如约5、10、20、30、40、50wt％)的乳清蛋白浓缩物、至多约10wt％(例如约1、2、5、7、10wt％)的脱脂奶粉、至多约10wt％(例如约1、2、5、7、10wt％)的乳蛋白浓缩物或其组合。在某些实施方式中，所述初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为约1:20至约20:1。在某些实施方式中，所述初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为约60:40。
在某些实施方式中，所述组合物包含的总蛋白质含量为所述组合物的约50wt％至约80wt％(例如约50、60、70、80wt％)。在某些实施方式中，所述组合物包含免疫球蛋白G，其含量为所述组合物的约15wt％至约60wt％(例如约15、20、30、40、50、60wt％)。
本文公开的实施方式涉及稳定的初乳。在某些实施方式中，所述组合物包含促修复因子、稳定剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。
在某些实施方式中，所述促修复因子是初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳、初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、蛋制品、分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐或其组合。在某些实施方式中，所述初乳是牛初乳。
在某些实施方式中，所述牛初乳是脱脂牛初乳、晚期牛初乳、部分脱脂牛初乳、牛初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、全牛初乳或其组合。
在某些实施方式中，所述分离的促修复肽或蛋白质是选自由表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)、胰岛素样生长因子II(IGF-II)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、乳脂肪球-表皮生长因子8(MFG-E8)或其营养学上可接受的盐组成的组的重组促修复肽或蛋白质。
在某些实施方式中，所述稳定剂是酪蛋白、酪蛋白酸盐、聚葡萄糖、海藻糖、外源性初乳脂肪、硬脂、海藻酸盐、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体、海藻酸盐加乙基纤维素、海藻酸盐加玉米淀粉和海藻酸盐加丙烯酸聚合物。在某些实施方式中，所述稳定剂是酪蛋白酸钙、酪蛋白酸钠和来自初乳的酪蛋白酸盐分离物。在某些实施方式中，所述组合物包含约2wt％至约75wt％(例如约2、5、10、20、30、40、50、60、70、75wt％)的酪蛋白酸钙。
在某些实施方式中，所述组合物包含约40wt％至约98wt％(例如约40、50、60、70、80、90、98wt％)的初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳或初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物。在某些实施方式中，所述组合物进一步包含约25wt％至约40wt％(例如约25、30、35、40wt％)的稳定剂。在某些实施方式中，所述组合物进一步包含大豆凝集素、中链甘油三酯、乳清蛋白浓缩物、脱脂奶粉、乳蛋白浓缩物或其组合。在某些实施方式中，所述组合物包含至多约2wt％(例如约0.01、0.1、1.0、1.5、2.0wt％)的大豆卵磷脂、至多约2wt％(例如约0.01、0.1、1.0、1.5、2.0wt％)的中链甘油三酯、至多约2wt％(例如约0.01、0.1、1.0、1.5、2.0wt％)的调味剂、至多约50wt％(例如约5、10、20、30、40、50wt％)的乳清蛋白浓缩物、至多约10wt％的脱脂奶粉(例如约1、2、5、7、10wt％)、至多约10wt％(例如约1、2、5、7、10wt％)的乳蛋白浓缩物或其组合。在某些实施方式中，所述初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为约1:20至约20:1。在某些实施方式中，所述初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为约60:40。
在某些实施方式中，所述组合物包含的总蛋白质含量为所述组合物的约50wt％至约80wt％(例如约50、60、70、80wt％)。在某些实施方式中，所述组合物包含免疫球蛋白G，其含量为所述组合物的约15wt％至约60wt％(例如约15、20、30、40、50、60wt％)。
本文公开的实施方式涉及一种剂型。在某些实施方式中，所述剂型包含含有促修复因子、营养性蛋白酶抑制剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂的组合物。在某些实施方式中，所述剂型包含含有促修复因子、稳定剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂的组合物。
在某些实施方式中，所述剂型是粉剂、颗粒剂、片剂、口服崩解片剂、胶囊、耐酸胶囊、锭剂、含片、营养棒、软咀嚼物、水凝胶、软糖、酸奶、混悬剂或即饮饮料。在某些实施方式中，所述剂型是耐酸胶囊。
在某些实施方式中，提供了一种膳食补充剂，其包含根据本公开的任何实施方式的组合物。所述膳食补充剂可用于支持受试者正常的健康生理。所述正常的健康生理可以是胃肠道生理、免疫生理、肌肉骨骼生理和呼吸生理。
营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂可以包含SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25中的任一者的氨基酸序列或具有胰蛋白酶抑制剂活性能力的活性肽片段或其功能同源物。
活性肽片段或功能同源物可以是蛋白质或肽，其与感兴趣的营养性胰蛋白酶抑制剂具有至少一定的序列同一性，并具有胰蛋白酶抑制剂活性能力。在具体的实施方式中，本发明的活性蛋白质或肽片段由感兴趣的胰蛋白酶抑制剂肽或其功能同源物的至多150个氨基酸残基、至多100个氨基酸残基、至多50个氨基酸残基、至多40个氨基酸残基、至多30个氨基酸残基例如15至150个连续氨基酸残基或50至100个氨基酸残基组成，所述功能同源物具有至多3个氨基酸取代，例如2个氨基酸取代或1个氨基酸取代。
牛初乳含有影响细胞生长、分化和功能的多种促修复因子或生长因子，其分子量范围广，包括但不限于表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)、胰岛素样生长因子II(IGF-II)、血小板衍生生长因子(PDGF)等。在BC中已经描述了超过20种不同的肽生长因子。促修复因子可以是BC本身或从其衍生的分离或重组生长因子。尽管它们单独具有活性，但它们的功能是相互关联的，因为初乳中各种因子之间的协同活性已被证实。例如，牛乳铁蛋白与EGF的共同施用可产生协同活性，刺激大鼠肠上皮细胞系IEC-18的生长。
胰岛素样生长因子(IGF，生长调节素)包括IGF-I和IGF-II，其促进细胞增殖和分化，并且在牛和人IGF之间存在100％的序列同源性。它们在结构上与胰岛素原相似，并且IGF可以在高浓度下发挥类似胰岛素的作用。BC含有的IGF-I浓度远高于人初乳(500mg L-1相比于18mg L-1)，而成熟牛乳中IGF-I含量较低(10mg L-1)。这些生长因子在热和酸性条件下都相对稳定，因此在商业牛奶加工和胃酸的苛刻条件下都存活下来以保持生物活性。IGF-I可以促进蛋白质积累，即它是一种合成代谢剂，至少部分负责介导生长激素的生长促进活性。BC中高浓度的IGF表明其可能在介导局部肠道合成代谢-修复作用中是重要的。
表皮生长因子受体配体家族包括具有与EGF受体(也被称为c-erb1受体)结合的共同性质的一组多肽，包括EGF本身、TGF-α、乳源性生长因子II(MDGF-II)、β细胞素和人乳生长因子III(HMGF-III)。具有这些结合特征但在初乳中不以显著浓度存在的其他相关多肽是双调蛋白和肝素结合性EGF。
表皮生长因子(EGF)是一种53个氨基酸的肽，由唾液腺和十二指肠布伦纳(Brunner)腺体产生。EGF存在于人初乳(200mg L-1)和牛奶(30-50mg L-1)以及许多其他物种中。乳汁携带的EGF在典型的胃蛋白水解条件下不失活，而成人胃液由于将其切割成EGF1-49形式，导致EGF的生物活性显著降低。一旦EGF进入小肠，它在禁食条件下易被蛋白水解消化，但在摄入的食物蛋白包括酪蛋白和胰蛋白酶抑制剂存在下仍能保存。
转化生长因子α(TGF-α)是一种50个氨基酸的分子，以远低于EGF的浓度(2.2–7.2mg L–1)存在于人初乳和牛奶中。与EGF不同，TGF-α在整个胃肠道的粘膜内产生。TGF-α的全身施用可以刺激胃肠道生长和修复，抑制胃酸分泌，刺激粘膜损伤后复原，并增加胃粘蛋白。在小肠和结肠内，TGF-α的表达主要发生在上部(非增殖性)区域，表明其生理作用可能是影响分化和细胞迁移，而不是细胞增殖。
转化生长因子β家族的分子在结构上与TGF-α不同，并且在大多数系统中抑制增殖而不是刺激增殖。TGF-β至少有35种不同亚型，它们的主要表达部位在正常胃肠道的浅表区中。TGF-β具有多种功能，是中性粒细胞的化学引诱剂，刺激伤口部位处上皮细胞的迁移。因此，它可能对刺激修复过程的早期阶段重要，在该修复过程中来自伤口边缘的存活细胞迁移到剥落区以重建上皮的连续性。TGF-β和TGF-β样分子以高浓度存在于牛乳(1–2mg L–1)和初乳(20–40mg L–1)中，这些浓度足以在大鼠中阻止吲哚美辛引起的胃损伤。
血小板衍生生长因子(PDGF)最初从血小板中鉴定出，但也由巨噬细胞产生和分泌。PDGF是酸稳定的，由2个二硫键连接的多肽组成：A链(14kDa)和B链(17kDa)。二聚体以3种亚型(AA、AB和BB)存在，可与酪氨酸激酶型受体结合。PDGF是成纤维细胞和动脉平滑肌细胞的高效有丝分裂原。在动物模型中，已显示外源性PDGF的口服施用促进溃疡愈合。尽管PDGF存在于人和牛的乳汁和初乳中，但牛乳中大多数PDGF样促有丝分裂活性源自与PDGF具有序列同源性的牛初乳生长因子。
血管内皮生长因子(VEGF)是一种34–42kD的肝素结合性同二聚体糖蛋白，是与PDGF相关的强效血管生成、促有丝分裂和血管通透性增强因子。在哺乳的第一周期间VEGF在人类乳汁中以约75mg L-1存在，并在产后第二周降至约25mg L-1。由于其血管生成活性，BC的VEGF内含物可能在诸如消化性溃疡的病况中具有增强局部血管供应方面的价值。
乳脂肪球-表皮生长因子8(MFG-E8)是一种在脊椎动物中发现的分泌蛋白。它最初作为乳脂肪球的关键组分被发现，并以高浓度存在于BC中，可能影响哺乳新生儿的免疫和修复反应。MFG-E8有助于从组织中吞噬清除受损和凋亡的细胞，诱导VEGF介导的新血管形成，维持肠上皮稳态，并促进粘膜愈合。
在摄入后，初乳中的促修复生长因子被包括胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶在内的消化酶失活并降解。胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶消化酶，在精氨酸和赖氨酸残基的C-端处特异性水解酰胺、肽和蛋白质。胰蛋白酶抑制剂包括大豆胰蛋白酶抑制剂和卵类粘蛋白。
营养性蛋白酶抑制剂可以是源自食品的营养性胰蛋白酶抑制剂。营养性蛋白酶抑制剂可以包含Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域或Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域。营养性胰蛋白酶抑制剂可以是具有胰蛋白酶抑制剂活性的大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)、具有胰蛋白酶抑制剂活性的大豆制品或具有胰蛋白酶抑制剂活性的卵类粘蛋白。营养性蛋白酶抑制剂可以是酪蛋白。所述酪蛋白可以从牛、绵羊、山羊、水牛或其他哺乳动物获得。所述酪蛋白可以采取酪蛋白酸钙、酪蛋白酸钠或胶体酪蛋白胶束的形式。
营养性蛋白酶抑制剂可以是包含胰蛋白酶抑制剂活性的任何适合的食品，或者可以是浓缩、分离、纯化、商购或通过本领域中已知的任何适合的重组技术或合成技术制备的蛋白质或肽，或包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的蛋白质或肽。
营养性胰蛋白酶抑制剂可以是任何适合的膳食胰蛋白酶抑制剂。胰蛋白酶抑制剂是一类丝氨酸蛋白酶抑制剂。胰蛋白酶是一种参与消化过程中蛋白质分解的酶。胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)水平在大豆中特别高，但也可以存在于各种豆科植物例如豇豆、花豆、木豆、芸豆、乌头叶菜豆和海军豆以及鹰嘴豆和绿豆中。某些其他食物可能表现出低水平的胰蛋白酶抑制剂活性。胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)可能因加工而被破坏，特别是涉及加热或其他蛋白质变性过程的加工。传统上，胰蛋白酶抑制剂被认为是抗营养因子。因此，大豆制品需要热加工才能达到最大的营养价值。相反，本公开提供了一种营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂，其能够表现出至少最低水平的胰蛋白酶抑制剂活性。例如，营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂可用于在胃肠道中，例如在下部小肠中稳定或延长初乳中的促修复因子和免疫因子的活性。
酶活性大豆制品
所述营养性胰蛋白酶抑制剂可以是酶活性大豆制品，其在胰蛋白酶抑制测定中包含至少10mg/g样品的胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)(例如约至少10、15、20、30、35、40mg/g TIA或更多)。在某些实施方式中，营养性胰蛋白酶抑制剂可以是酶活性大豆制品，其包含在胰蛋白酶抑制测定中至少20mg/g样品的胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)(例如约至少20、30、35、40、50、60mg/g TIA或更多)。
大豆属(大豆，soybean，soya bean)是豆科Fabaceae的一个属。栽培大豆是大豆(Glycine max)。在大豆中发现了两种主要类型的胰蛋白酶抑制剂：Kunitz胰蛋白酶抑制剂(KTI)和Bowman-Birk抑制剂(BBI)。KTI是一种大的(～20,100道尔顿)强胰蛋白酶抑制剂，与胰凝乳蛋白酶结合弱，而BBI则小得多(～8,000道尔顿)，并抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶两者。包括大豆粉在内的许多大豆制品都含有这两种类型的抑制剂，尽管一些大豆食品的含量要低得多。传统上，这两种抑制剂都被认为在体内具有抗营养作用，通过阻碍肠道中蛋白质水解和其他酶的活化来影响消化。在大豆中，发现KTI的浓度远高于BBI。此外，研究了大豆Kunitz或Bowman-Birk胰蛋白酶抑制剂在大鼠小肠中的存活情况，尽管只有少量(4.8％)的Bowman-Burk抑制剂存活，但大多数Kunitz抑制剂(76％)保持免疫化学完整。全大豆含有17-27mg/克样品的胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)；生大豆粉含有28-32mg/g样品的TIA；烘烤大豆粉含有8-9mg/g样品的TIA；并且分离物含有1-30mg/g样品的TIA。胰蛋白酶抑制剂可以通过加热或化学变性来灭活。
大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI，Kunitz胰蛋白酶抑制剂，KTI)属于丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpins)家族，并且是大豆中发现的几种蛋白酶抑制剂之一。胰蛋白酶以1:1的摩尔比被抑制，而胰凝乳蛋白酶和纤溶酶以更低的程度被抑制。SBTI也抑制其他丝氨酸蛋白酶。SBTI可以从例如Roche,California、大豆胰蛋白酶抑制剂、ThermoFisherScientific或Sigma-Aldrich商购。
大豆制品可以是任何适合的酶活性大豆制品。适合的大豆制品包含至少10mg/g样品的胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)(例如约至少10、15、20、30、35、40mg/g TIA或更多)。
在某些实施方式中，营养性胰蛋白酶抑制剂是大豆胰蛋白酶抑制剂。在某些实施方式中，所述大豆胰蛋白酶抑制剂包含SEQ ID NO：1、2、3、4、20、21、22、23、24或25中的任一者的氨基酸序列，或者是其基本上相同的同源物或活性片段。
所述大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)可以是Kunitz大豆胰蛋白酶抑制剂。所述大豆胰蛋白酶抑制剂可以包含具有登记号1BA7_B或
(SEQ ID NO：1)(181个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
所述大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)可以包含具有登记号1BA7_A或
(SEQ ID NO：2)(181个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
所述大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)可以包含具有登记号1AVU_A或
(SEQ ID NO：3)(181个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
所述大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)可以包含具有登记号TISYC或
(SEQ ID NO：4)(181个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
在某些实施方式中，营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂可以是Bowman-Birk型蛋白酶抑制剂。Bowman-Birk型蛋白酶抑制剂可以源自栽培大豆。在某些实施方式中，Bowman-Birk型蛋白酶抑制剂可以包含具有登记号AF106676.1或
1 DDESSKPCCD QCACTKSNPP QCRCSDMRLN SCHSACKSCI CA
(SEQ ID NO：20)(42个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
在某些实施方式中，所述营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂可以是Bowman-Birk型蛋白酶抑制剂的一部分，其包含具有登记号AF106675.1或
1 KSCICALSYP AQCFCVDITD FCYEPCKPSE DDKEN
(SEQ ID NO：21)(35个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
在某些实施方式中，营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂可以是Bowman-Birk型蛋白酶抑制剂，其包含具有登记号P01055或
(SEQ ID NO：22)(110个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
在某些实施方式中，营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂可以是Bowman-Birk型蛋白酶抑制剂前体[栽培大豆]。Bowman-Birk型蛋白酶抑制剂前体可以包含具有登记号NM_001250058.3或
(SEQ ID NO：23)(118个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
在某些实施方式中，大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)可以是Kunitz胰蛋白酶抑制剂[栽培大豆]，其具有登记号AB070269.1或
(SEQ ID NO：24)(217个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
在某些实施方式中，大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)可以是Kunitz胰蛋白酶抑制剂[野生大豆]，其具有登记号AB308133.1或
(SEQ ID NO：25)(217个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
所述组合物可以包含约0g/天至约10g/天、约0.1g/天至约8g/天、约0.5g/天至约5g/天或约1g/天至约5g/天，或约0wt％至约10wt％、约0.1wt％至约8wt％或约1wt％至约5wt％范围内的营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂。
酶活性大豆制品源自大豆，并包含至少约10mg/g制品的胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)(例如约至少10、15、20、30、35、40mg/g TIA或更多)。酶活性大豆制品可以是生大豆粉、生豆粕、生大豆制品或微加工大豆制品。大豆制品可以是通过100号筛网的大豆粉。大豆制品可以是通过16号筛网的豆粕。在某些实施方式中，大豆制品可以是生大豆制品或微加工大豆制品。在某些实施方式中，大豆制品含有可测量的最低水平的胰蛋白酶抑制剂活性。大豆制品可以是非脱脂、全脂或脱脂大豆制品。组合物可以包含约0wt％至约30wt％、约5wt％至约30wt％、约0.5wt％至约25wt％、约2wt％至约20wt％或约5wt％至约15wt％的酶活性大豆制品。
根据加工，适合的大豆制品可以包含各种水平的大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)。营养性胰蛋白酶抑制剂例如SBTI可以表现出胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)，其可以通过任何适合的TIA抑制剂测定法确定。
为了测定营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂、营养性胰蛋白酶抑制剂、大豆制品、SBTI或卵类粘蛋白中的胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)，可以例如按照Liu,K.，大豆胰蛋白酶抑制剂测定：对美国油类化学家学会和国际谷物化学家美国协会批准并重新批准的标准方法的进一步改进(Soybean Trypsin Inhibitor Assay:Further Improvement ofthe StandardMethod Approved and Reapproved by American Oil Chemists’Society and AmericanAssociation ofCereal Chemists International)，J Am Chem Soc(2019)96:635-645的方法进行胰蛋白酶抑制剂测定。在某些实施方式中，当按照本发明实施例3或Liu 2019的方法测定时，营养性胰蛋白酶抑制剂具有大于约10TUI/mg、大于约20TUI/mg、大于约30TUI/mg或大于约40TUI/mg的胰蛋白酶抑制剂活性。
或者，为了测定胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)，可以按照ISO 14902:2001，(2012)，国际标准化组织，标准14902:2001，动物饲料——大豆制品的胰蛋白酶抑制剂活性的测定(Animal feeding stuffs—Determination oftrypsin inhibitor activity ofsoyaproducts)，2001年10月批准，2012年8月重新批准，Geneva,Switzerland的方法进行胰蛋白酶抑制剂测定。该国际标准规定了测定大豆制品的胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)的方法。这种胰蛋白酶抑制剂活性表明了这些制品烘烤程度。所述方法的检测限为约0.5mg/g。可以使用来自牛胰腺的天然胰蛋白酶，例如Merck 24579。简而言之，在pH 9.5下从样品提取胰蛋白酶抑制剂。通过加入苯甲酰基-L-精氨酸-对硝基苯胺(L-BAPA)作为底物来测定剩余的胰蛋白酶活性。使用光谱法测量释放的对硝基苯胺的量。所述胰蛋白酶抑制剂活性以每克样品被抑制的胰蛋白酶的毫克数表示。本文所定义的营养性胰蛋白酶抑制剂例如酶活性大豆制品可以表现出至少约10mg/g样品或至少约20mg/g样品的胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)。
蛋白质分散度指数(PDI)可用于测定例如在试验条件下大豆制品中的可分散蛋白质。PDI测试可以根据美国油类化学家学会(AOCS)标准程序Ba 10b-09的方法进行。在某些实施方式中，当按照AOCS标准程序Ba 10b-09测试时，所述大豆制品具有大于约40、大于约50、大于约60或大于约70的PDI。
卵类粘蛋白
所述营养性胰蛋白酶抑制剂可以是卵类粘蛋白。卵类粘蛋白是一种糖基化蛋白质和丝氨酸蛋白酶抑制剂，占鸡蛋清蛋白的约11％。卵类粘蛋白也被称为蛋清胰蛋白酶抑制剂。卵类粘蛋白大小约为28kD，并且能够抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶。大多数禽类蛋清中富含卵类粘蛋白或胰蛋白酶抑制剂。鸡卵蛋白由186个氨基酸残基组成，并且被高度糖基化。它具有高度免疫原性，已知是许多鸡蛋过敏的原因。卵类粘蛋白抑制消化酶例如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶。
所述卵类粘蛋白可以是包含胰蛋白酶抑制剂活性的任何适合的卵类粘蛋白。所述卵类粘蛋白可以是分离的卵类粘蛋白或重组卵类粘蛋白。所述重组卵类粘蛋白可以例如从细菌、真菌、藻类生物生产提供。例如，卵类粘蛋白可以是鸡卵类粘蛋白、火鸡卵类粘蛋白、珍珠鸡卵类粘蛋白或鸭卵类粘蛋白。卵类粘蛋白包含胰蛋白酶抑制剂活性。卵类粘蛋白可以源自禽类蛋清，作为分离、部分纯化、纯化的材料，或者可以商购。例如，鸡卵类粘蛋白可以源自或纯化自鸡蛋清或购自商业供应商例如technology LLC或Sigma-Aldrich。在某些实施方式中，所述卵类粘蛋白包含SEQ ID NO：5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19中的任一者的氨基酸序列，或者是其基本上相同的同源物或活性片段，并且能够表现出胰蛋白酶抑制剂活性。
鸡卵类粘蛋白(OMCHI)也被称为过敏原Gal d 1，是鸡蛋清中的主要过敏原。已知Gal d 1是一种具有3个结构域的胰蛋白酶抑制剂；然而，胰蛋白酶抑制活性主要位于第二结构域中。Kato等，Biochemistry,1987Jan 13；26(1):193-201.doi:10.1021/bi00375a027。对Gal d 1的超敏反应是因为它与免疫球蛋白E(IgE)高效结合的能力而发生。可以对一个或多个半胱氨酸残基进行点突变，以降低与IgE结合的能力。在某些实施方式中，卵类粘蛋白包含含有选自C192A和C210A的点突变的氨基酸。
鸡卵类粘蛋白可以包括卵类粘蛋白亚型1前体[原鸡]，其具有登记号NP_001295423.1或
(SEQ ID NO：5)(210个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
鸡卵类粘蛋白可以包括卵类粘蛋白亚型2前体[原鸡]，其具有登记号NP_001106132.1或
(SEQ ID NO：6)(208个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
鸡卵类粘蛋白可以包括卵类粘蛋白[原鸡]，其具有登记号ACJ04729.1或
(SEQ ID NO：7)(210个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
鸡卵类粘蛋白可以包括卵类粘蛋白，其具有登记号0807280A或
(SEQ ID NO：8)(186个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
鸡卵类粘蛋白可以包括卵类粘蛋白亚型X2[原鸡]，其具有XP_015149250.1或
(SEQ ID NO：9)(208个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
鸡卵类粘蛋白可以包括卵类粘蛋白亚型X1[原鸡]，其具有登记号XP_015149249.1或
(SEQ ID NO：10)(210个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
在某些实施方式中，营养性蛋白酶抑制剂可以是任何适合的火鸡卵类粘蛋白。火鸡卵类粘蛋白可以源自野生火鸡或驯养火鸡(普通火鸡)或眼斑火鸡(眼斑火鸡)的蛋。
火鸡卵类粘蛋白可以包括卵类粘蛋白[普通火鸡]，其具有登记号XP_031411566.1或
(SEQ ID NO：11)(209个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
火鸡卵类粘蛋白可以包括卵类粘蛋白[普通火鸡]，其具有登记号P68390.1或
(SEQ ID NO：12)(185个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
禽类卵类粘蛋白可以是头盔珍珠鸡的卵类粘蛋白，其包括卵类粘蛋白[盔珠鸡]，其具有登记号XP_021266564.1或
(SEQ ID NO：13)(208个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
禽类卵类粘蛋白可以是鸭卵类粘蛋白。鸭卵类粘蛋白可以包括卵类粘蛋白[绿头鸭]的一部分，其具有登记号EOA95437.1或
(SEQ ID NO：14)(171个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
鸭卵类粘蛋白可以包括卵类粘蛋白[绿头鸭]，其具有登记号XP_005027968.1或
(SEQ ID NO：15)(77个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
鸭卵类粘蛋白可以包括卵类粘蛋白，其具有登记号P68150.1或1VATVDCSGYPKPACTMEYMP LCGSDNKTYG NKCNFCNAVV DSNGTLTLSH FGEC(SEQ ID NO：16)(54个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
鸭卵类粘蛋白可以包括卵类粘蛋白，其具有登记号P68156.1或1VATVDCSGYPKPACTMEYMP LCGSDNKTYG NKCNFCNAVV DSNGTLTLSH FGEC(SEQ ID NO：17)(54个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
鸭卵类粘蛋白可以包括卵类粘蛋白亚型X2[绿头鸭]，其具有登记号XP_038042576.1或
(SEQ ID NO：18)(226个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
鸭卵类粘蛋白可以包括卵类粘蛋白亚型X1[绿头鸭]，其具有登记号XP_038042575.1或
(SEQ ID NO：19)(245个氨基酸)的氨基酸序列，或其包含胰蛋白酶抑制剂活性的基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
组合物可以包含等效剂量为约0g/天至约10g/天、约0.1g/天至约8g/天、约0.5g/天至约5g/天或约1g/天至约5g/天(例如约0、0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15g/天)，或约0wt％至约10wt％、约0.1wt％至约8wt％或约1wt％至约5wt％(例如约0、0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15wt％)的卵类粘蛋白。
组合物
正如本文中所示，牛初乳中存在的促修复因子和免疫因子的生物活性对消化酶敏感。这些因子只有在胃消化后存活下来并到达小肠的情况下才有效。
在某些实施方式中，提供了一种增强口服施用的促修复因子和/或免疫因子(例如牛初乳中存在的)的生物利用度的方法，其通过对干粉组合物进行预处理，以产生稳定有效的递送系统。
可商购的喷雾干燥的牛初乳粉可通过共喷涂、包封和/或团聚进行预处理，以在初乳周围产生保护性涂层。所述保护性涂层可用于延迟释放、提高生物利用度、耐酸性、肠溶包衣、物理屏障，或增强促修复因子例如初乳的小肠释放。所述涂层可以采取包被或包围初乳粒子的脂质体、胶束或微胶囊结构的形式。所述保护性涂层可以采取肠溶包衣的形式。肠溶包衣可以在消化过程的早期提供一定程度的保护，免受胃酸和胃蛋白酶影响，允许促修复因子和其他对酸敏感的组分能够以显著更高的速率完整地在胃消化中存活，从而增强这些因子在小肠中的靶位点处的活性。
提供了用于肠内施用的稳定的初乳组合物。提供的组合物包含初乳、营养性胰蛋白酶抑制剂和任选的稳定剂。
初乳可以是牛初乳。牛初乳可以是全脂初乳(全初乳)、部分脱脂初乳或完全脱脂初乳(脱脂初乳)。所述初乳可以在分娩的约24小时内、约48小时内或几天内(例如分娩后约2、5、10、12、24、36、48或72小时)获得。初乳可以被浓缩或分离。初乳可以被喷雾干燥、冻干、团聚和/或速溶化。商业初乳可以包括全初乳、部分脱脂初乳或脱脂初乳。通过AOAC 932.06方法测定，商业全初乳可以包含约7wt％至约30wt％或约17.5wt％至约28wt％(例如约7、10、15、17.5、20、22、25、28wt％)的脂肪。通过AOAC 932.06方法测定，商业脱脂初乳可能包含约0wt％至约6wt％或约2wt％至约6wt％(例如约0、1、2、3、4、5、6wt％)的脂肪。初乳可以被巴氏消毒、速溶化和/或团聚。商业初乳可以在低压和低温下加工，以保存生物活性。商业初乳可以被喷雾干燥。商业初乳可以从例如APS BioGroup,Inc.Phoenix,AZ或LaBelleAssociates,Inc.,Bellingham,WA获得。在某些实施方式中，所述初乳可以含有全初乳和/或脱脂初乳，以及乳蛋白浓缩物、脱脂奶粉、甜乳清、乳清蛋白浓缩物、中链甘油三酯、卵磷脂和二氧化硅中的一者或多者。在某些实施方式中，所述初乳可以含有约80wt％至约99wt％的全初乳或脱脂初乳(例如约80、85、90、95、99wt％)、约0wt％至约20wt％(例如约0、2、5、10、15、20wt％)的乳清蛋白浓缩物(WPC)、约0wt％至约20wt％(例如约0、2、5、10、15、20wt％)的脱脂奶粉(NFDM)、约0wt％至约20wt％(例如约0、2、5、10、15、20wt％)的甜乳清、约0wt％至约1wt％(例如约0、0.01、0.1、0.5、1.0wt％)的调味剂、约0wt％至约1wt％(例如约0、0.01、0.1、0.5、1.0wt％)的卵磷脂、约0wt％至约1wt％(例如约0、0.01、0.1、0.5、1.0wt％)的中链甘油三酯。在某些实施方式中，所述全初乳可以包含约89.5wt％的全速溶化初乳、约10wt％的WPC、约0.5wt％的调味剂。在某些实施方式中，所述脱脂初乳可以包含约97.5％的脱脂初乳、约1wt％的乳蛋白浓缩物(MPC)70、约1wt％的NFDM和约0.5wt％的调味剂。在某些实施方式中，组合物包含约30wt％至约95wt％的初乳、约40wt％至约90wt％的初乳或约50wt％至约75wt％的初乳。
在某些实施方式中，组合物包含的总蛋白质含量为所述组合物的约50wt％至约80wt％(例如约50、60、70、80wt％)。在某些实施方式中，所述组合物包含的总蛋白质含量为所述组合物的约60wt％至约70wt％。
在某些实施方式中，所述组合物包含免疫球蛋白G，其含量为所述组合物的约15wt％至约60wt％(例如约15、20、30、40、50、60wt％)。在某些实施方式中，所述组合物包含免疫球蛋白G，其含量为所述组合物的约20wt％至约30wt％。
营养性胰蛋白酶抑制剂可以是酶活性大豆制品、分离或重组的大豆胰蛋白酶抑制剂或分离或重组的卵类粘蛋白。在某些实施方式中，营养性胰蛋白酶抑制剂是酶活性生大豆粉。在某些实施方式中，在共喷雾之前将酶活性大豆粉与初乳混合。
正如本文所定义的，当通过胰蛋白酶抑制测定时，营养性胰蛋白酶抑制剂能够表现出至少约10mg/g样品的胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)或至少约20mg/g样品的TIA。酶活性大豆制品可以包括全大豆、生大豆粉、生豆粕、某些大豆蛋白浓缩物、某些大豆蛋白分离物。在某些实施方式中，所述酶活性大豆制品不是豆腐、豆奶、大豆味噌或大豆婴儿配方，因为它们通常表现出小于约10mg/g样品的TIA的低水平TIA。
任选地，初乳组合物可以“掺”有分离或重组的生长因子，例如表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)、胰岛素样生长因子II(IGF-II)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、乳脂肪球-表皮生长因子8(MFG-E8)等或其基本上相同的变体、功能同源物或活性片段。
任选地，组合物可以包含蛋制品。蛋制品可以以所述组合物的约0wt％至约70wt％、约5wt％至约50wt％或约30wt％至约40wt％(例如约0、10、20、30、40、50、60、70wt％)的量存在。所述蛋制品可以是巴氏消毒、喷雾干燥的全蛋、蛋黄或蛋清。在某些实施方式中，所述组合物包含约40wt％至约95wt％的初乳和约5wt％至约25wt％的营养性胰蛋白酶抑制剂。在某些实施方式中，所述组合物包含约35wt％至约95wt％(例如约35、40、50、60、70、80、90、95wt％)的初乳、约0wt％至约60wt％(例如约0、10、20、30、40、50、60wt％)的蛋制品和约5wt％至约25wt％(例如约5、10、15、20、25wt％)的营养性胰蛋白酶抑制剂。
稳定剂可用于在胃肠道条件和/或储存条件下稳定组合物。稳定剂可用作与初乳混合或掺混的基质材料，和/或可用作基质混合物或剂型的包衣材料。稳定剂材料可以选自本文提供的赋形剂列表或如下所示，例如磷脂(例如卵磷脂，ADM)、卵磷脂、中链甘油三酯(MCT)、海藻酸、海藻酸盐、初乳脂肪、乙基纤维素水性分散体(Colorcon)、玉米淀粉、虫胶(例如25％的脱蜡水基虫胶，Emerson Resources)、碳酸氢钠、假乳胶、豌豆淀粉、羟丙基甲基纤维素(HPMC)，水溶性HPMC(例如F4M或K15M，Dupont)、HPMC醋酸琥珀酸酯、麦芽糖醇粉(例如(例如Roquette))、麦芽糖糊精(例如Roquette)、二糖(例如海藻糖，Treha)、酪蛋白或酪蛋白酸盐例如酪蛋白酸钙、酪蛋白酸钠、酪蛋白酸钾、酪蛋白酸镁、乳清蛋白浓缩物、乳蛋白浓缩物、甜乳清、脱脂奶粉、黄原胶(例如ADM)、聚葡萄糖(例如Tate and Lyle，DuPont)、玉米来源的醇溶谷蛋白、从玉米分离的水不溶性蛋白(例如玉米醇溶蛋白，FloZein)、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体(例如Colorcon)、硬脂、硬脂酸甘油酯、氢化植物油、海藻酸盐加乙基纤维素(例如EN，Sensient)、海藻酸盐加玉米淀粉(例如EudraguardNatural，Evonik)、羟丙基豌豆淀粉(例如Roquette)、部分氢化大豆油、氢化大豆油、醋酸琥珀酸羟丙甲纤维素(例如Shin-Etsu)、水性纤维素乙酸酯邻苯二甲酸酯聚合物(例如CPD，Colorcon)、海藻酸盐加丙烯酸聚合物(例如Control，Evonik)或乙基纤维素水性分散胶体(例如ECD，Colorcon)。稳定剂可以以与组合物的总重量相比约0wt％至约50wt％、约0.5wt％至约40wt％、约5wt％至约40wt％、约1wt％至约30wt％或约5wt％至约25wt％(例如约0、10、20、30、40、50wt％)的量存在于所述组合物中。
稳定剂可以是基质稳定剂。在某些实施方式中，基质稳定剂可以是稳定化脂质。在某些实施方式中，稳定化脂质可以是磷脂、卵磷脂、中链甘油三酯、氢化大豆油、部分氢化大豆油、硬脂、外源酪蛋白、酪蛋白酸盐或外源性初乳脂肪。在某些实施方式中，基质稳定剂可以是多糖稳定剂或二糖稳定剂。例如多糖稳定剂可以是淀粉、海藻酸盐、海藻酸、聚葡萄糖、瓜尔胶、黄原胶、麦芽糖糊精、羟丙基甲基纤维素(HPMC；羟丙甲纤维素)、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、卡拉胶或果胶。二糖稳定剂可以是海藻糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、乳果糖或纤维二糖。稳定化二糖可以是还原二糖。稳定化二糖可以是非还原二糖。在一个实例中，稳定化二糖可以是海藻糖。稳定剂可以是糖醇稳定剂。糖醇稳定剂可以是麦芽糖醇、甘露糖醇、木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇。稳定剂可以是稳定化蛋白质。稳定化蛋白质可以是酪蛋白、营养学上可接受的盐例如酪蛋白酸钙、酪蛋白酸镁、酪蛋白酸钠、酪蛋白酸钾、乳清蛋白浓缩物、乳清蛋白分离物、乳蛋白浓缩物、甜乳清或脱脂奶粉。
组合物可以包括酸抑制剂。酸抑制剂可以是pH调节剂。pH调节剂可以是抗胃酸剂。抗胃酸剂可以是例如碳酸氢钠、碳酸氢三钠、碳酸氢钾、氢氧化镁、碳酸镁、氧化镁、磷酸镁、碳酸钙、磷酸二钙、磷酸三钙、氢氧化铝、磷酸铝、二羟基氨基乙酸铝、二羟基碳酸铝钠。pH调节剂可以是氢氧化钙、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠。在某些实施方式中，稳定剂可以是基质稳定剂。基质稳定剂可以是海藻糖、聚葡萄糖或麦芽糖糊精。稳定剂可以是微胶囊化剂、耐酸包衣材料和/或肠溶包衣材料。在某些实施方式中，微胶囊化剂或肠溶包衣材料可以是海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体(例如Colorcon)、海藻酸盐加乙基纤维素(例如EN，Sensient)、海藻酸盐加玉米淀粉(例如Eudraguard Natural，Evonik)、羟丙基豌豆淀粉(例如Roquette)、醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯(例如Shin-Etsu)、水性纤维素乙酸邻苯二甲酸酯聚合物(例如CPD，Colorcon)、海藻酸盐加丙烯酸聚合物(例如Control，Evonik)或乙基纤维素水性分散胶体(例如ECD，Colorcon)。酸抑制剂可以包括pH调节剂。所述pH调节剂可以是任何适合的GRAS pH调节剂，只要它不显著干扰所述营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂活性即可。在某些实施方式中，所述pH调节剂可以选自碳酸氢钠、碳酸氢三钠或碳酸氢钾。所述pH调节剂可以是碳酸氢钠。在某些实施方式中，所述pH调节剂可以以约0.5wt％至约25wt％或约1wt％至约10wt％的范围添加到所述组合物。例如，所述pH调节剂例如碳酸氢钠可以中和胃中普遍存在的一些酸，并且可用于保护促修复生长因子免于由胃蛋白酶消化引起的降解。
基质稳定化
在某些实施方式中，所述稳定剂可用于基质稳定化，用于与本公开的组合物共喷雾干燥或以其他方式混合。基质材料包括例如海藻糖、聚葡萄糖、酪蛋白酸钙、酪蛋白酸钠、改性豌豆淀粉(例如 )、黄原胶、乙基纤维素水性分散体(例如Colorcon)、海藻酸盐加玉米淀粉(例如Eudraguard Natural，Evonik)和羟丙基甲基纤维素(例如Methocel F4M或K15M)。
稳定剂可以包括中链甘油三酯(MCT)。中链甘油三酯可以是具有两个或三个脂肪酸酯的甘油三酯，每个脂肪酸酯具有中链脂肪酸的脂族尾部，其具有约6至约12个碳原子。MCT存在于棕榈仁油和椰子油中，可以通过分馏进行分离。所述脂族尾部可以包括直链脂肪酸或支链脂肪酸。
稳定剂可以包括磷脂。磷脂可以是蛋磷脂或卵磷脂。蛋磷脂可以作为蛋黄的组分存在，包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和溶血磷脂酰胆碱(LPC)。磷脂(“PL”)是细胞膜中的关键生物组分。它们在饮食中主要作为甘油磷脂和鞘脂类存在。膳食甘油磷脂在胃肠道中以高于约90％的高效率被吸收。根据美国农业部的数据(U.S.Department ofAgriculture,A.R.S.USDA National Nutrient Database for Standard Reference,Release 26.Nutrient Data Laboratory Home Page.USDA；Washington,DC,USA:2013)，鸡蛋的PL含量约为总脂质重量的28％，并且鸡蛋黄平均含有约1.3g PL。来自鸡蛋的PL吸收良好。
稳定剂可以包括海藻酸(或褐藻胶)，其是来自褐藻的亲水性多糖。褐藻胶与矿物质例如钙或钠的盐被称为海藻酸盐。当暴露于水时，海藻酸盐形成粘稠的胶质。在食品和制药工业中，海藻酸盐的这些胶凝特质被用于赋予食品以质地，提供大量增稠，作为胶凝剂并作为输送含有药物活性物质的水凝胶的载体。海藻酸盐的胶凝性质减缓消化并减少向胃中的酸和胃蛋白酶的暴露。
稳定剂可以包括初乳脂肪。初乳脂肪可以是商业牛初乳制备的副产物。与乳脂相比，初乳脂肪含有水平升高的ω-6和ω-3脂肪酸(FA)和胆固醇。
稳定剂可以包括酪蛋白或酪蛋白酸盐例如酪蛋白酸钙。乳蛋白可以分为两组：可溶性蛋白(乳清蛋白)和不溶性蛋白(酪蛋白)，两种组分都提供营养和生物活性性质。酪蛋白是一种主要的磷蛋白，约占牛奶和奶酪中蛋白质的四分之三。研究证实，酪蛋白的共同存在可以部分保护表皮生长因子(EGF)免于在人体中被消化。酪蛋白和酪蛋白酸盐可以从初乳分离。不受理论限制，酪蛋白或其盐例如酪蛋白酸钙、酪蛋白酸钠等可以作为竞争性酶底物，以便保护促修复因子。
微胶囊化
在某些实施方式中，组合物被微胶囊化。微胶囊化是用外部涂层包被粒子的过程。得到的微粒可以具有在约1μm至约约1000μm之间，例如约5μm至约800μm、约100μm至约750μm或约150μm至约600μm的微米范围内的平均直径。微胶囊化可以采取简单涂层的形式，也可以形成脂质体或胶束结构。脂质体是具有至少一个脂质双层的磷脂分子的微囊。在结构上，脂质体具有将内部水性内含物与构建水性相分开的脂质双层。胶束也是磷脂分子的微囊，但具有至少一个具有脂肪酸核心和极性表面(或者在反胶束的情况下具有脂肪酸表面的极性核心)的脂质单层。脂质体和胶束两者已被用于靶向药物递送。在某些实施方式中，所述脂质体或胶束可用于提高牛初乳中的促修复因子的生物利用度，特别是在小肠中。
本公开提供了一种使用鸡蛋磷脂(PL)制备牛初乳脂质体的方法。可以将牛初乳的水性溶液与蛋PL在特定时间和温度下混合。脂质体可以自发形成，然后将所述混合物在低温下喷雾干燥。在所述方法的另一个实施方式中，将牛初乳和海藻酸钠或海藻酸钙的水性混合物与蛋PL混合。然后将所述混合物在低温下喷雾干燥。任选地，可以将所述组合物团聚和/或速溶化。
所得到的采取蛋PL脂质体形式的包含牛初乳和营养性胰蛋白酶抑制剂的组合物，通过保护促修复因子以免于胃酸和胃肠道酶消化增强了牛初乳的生物利用度，正如通过体外生长因子生物活性或体内DSS结肠炎模型所测量的。
包衣材料
本文描述的组合物可以包含包衣。包衣可以是保护性包衣。在某些实施方式中，保护性包衣可以包括肠溶包衣。
可以使用任何适合的保护性包衣。在某些实施方式中，包衣包含公认安全(GRAS)的组分。在某些实施方式中，包衣可以是肠溶包衣。包衣可以是耐酸包衣。肠溶包衣可以是可商购肠溶包衣。保护性包衣可以增强组合物在货架储存中的稳定性和/或增强所述组合物在生物活性方面的稳定性。包衣浓度可以在所述组合物总重量的约1wt％至约25wt％、约3wt％至约20wt％或约5wt％至约15wt％(例如约1、5、10、15、20、25wt％)的范围内。
包衣可以包含成膜剂、增塑剂、面层、防结块剂、着色剂、助流剂和/或调味剂。
适合用于标题组合物和方法的成膜剂包括例如pH依赖性聚合物、水不溶性聚合物和低熔点疏水材料、其共聚物及其混合物。在某些实施方式中，所述成膜剂是美国食品和药品监督管理局批准的公认安全(“GRAS”)的化合物。成膜剂被描述在例如EP 2916828A1中。
适合的水不溶性聚合物的实例包括但不限于乙基纤维素、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚己内酯、醋酸纤维素及其衍生物、丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、丙烯酸共聚物、其共聚物及其混合物。适合的低熔点疏水材料包括但不限于脂肪、脂肪酸酯、磷脂、蜡及其混合物。适合的脂肪的实例包括但不限于氢化植物油例如可可脂、氢化棕榈仁油、氢化棉籽油、氢化葵花籽油、氢化大豆油、游离脂肪酸及其盐，以及它们的混合物。适合的脂肪酸酯的实例包括但不限于蔗糖脂肪酸酯、甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯、山嵛酸甘油酯、棕榈硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三月硅酸甘油酯、肉豆蔻酸甘油酯、GlycoWax-932、月桂酰聚乙二醇-32甘油酯、硬脂酰聚乙二醇-32甘油酯及其混合物。适合的磷脂的实例包括磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸及其混合物。适合的蜡的实例包括但不限于巴西棕榈蜡、鲸蜡、蜂蜡、小烛树蜡、虫胶蜡、微晶蜡和石蜡，含脂肪混合物例如巧克力，以及它们的混合物。在一个优选实施方式中，所述成膜剂是乙基纤维素。用作成膜剂的适合的pH依赖性聚合物包括但不限于肠溶纤维素衍生物例如羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、纤维素乙酸邻苯二甲酸酯，天然树脂例如虫胶和玉米醇溶蛋白，肠溶乙酸酯衍生物例如聚乙酸邻苯二甲酸乙烯酯、纤维素乙酸邻苯二甲酸酯、乙醛二甲基纤维素乙酸酯，以及肠溶丙烯酸酯衍生物例如基于聚甲基丙烯酸酯的聚合物如聚(甲基丙烯酸,甲基丙烯酸甲酯)1:2(其商品名为EUDRAGITTM)和聚(甲基丙烯酸,甲基丙烯酸甲酯)1:1(其可以在商品名EUDRAGITTM下商购)，及其混合物。
组合物或剂型可以包含可商购的营养性水性肠溶包衣，包括使用允许在胃肠道中延迟释放的pH敏感性聚合物。例如，肠溶包衣可以在酸性环境例如胃中(例如pH 1.5-3.5)保持完整，这可以帮助保护被包封的材料。在经过胃后，包衣随后在具有更偏碱性环境(例如pH 6.5-7.6)的小肠(十二指肠)中崩解。(Colorcon Inc.)是一种可商购的营养性水性肠溶包衣，包括使用包含水性乙基纤维素和海藻酸钠的pH敏感性聚合物，其允许在胃肠道中延迟释放。ProtectTMEN(Sensient Pharmaceutical)是一种包含水性虫胶和海藻酸钠的肠溶包衣。
在某些实施方式中，稳定剂可以包括耐酸包衣或胶囊壳。适合的耐酸包衣或胶囊壳组合物被描述在例如US 9,452,141中。耐酸包衣或胶囊壳可以包含水溶性肠溶聚合物。水溶性肠溶聚合物可以具有耐酸性，换句话说，它在胃条件(约pH 1.2)下是不溶的，并且在肠道条件(约pH 6.8)下可以溶解。例如，水溶性肠溶聚合物可以是果胶、丙二醇海藻酸盐或黄原胶。耐酸包衣或胶囊壳可以包含水溶性成膜聚合物。水溶性成膜聚合物可以是普鲁兰多糖、聚乙烯醇、改性淀粉、纤维素酯或明胶。纤维素酯可以是羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素或羟乙基甲基纤维素。耐酸包衣或胶囊壳可以包含结冷胶或卡拉胶，以及作为胶凝助剂的盐例如氯化钠、氯化钙或氯化钾。本文所提供的耐酸胶囊可以递送更加完整的初乳活性，从酸性胃蛋白酶阶段存活到肠道消化阶段(胰蛋白酶/胰凝乳蛋白酶)，如与常规非耐酸胶囊相比，AGS细胞中的增殖(％)活性提高，如图8所示。
在某些实施方式中，所述包衣材料可以包括海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体(例如Colorcon)、海藻酸盐加玉米淀粉(例如Evonik)、氢化大豆油、海藻酸盐加虫胶(例如ProtectSensient)、含有假乳胶的乙基纤维素分散体(例如Colorcon)、羟丙基豌豆淀粉(例如Roquette)、25％虫胶水基溶液(例如Emerson Resources)和醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(例如Shin-Etsu)。
任选地，还可以在肠溶包衣组合物中包括增塑剂例如柠檬酸三乙酯或聚乙二醇，以及防结块剂例如单硬脂酸甘油酯或滑石粉。
在另一个实施方式中，方法进一步包括向所述肠溶包衣组合物施加面层，其可以是成膜剂。在一个实施方式中，面层可以是公认安全(GRAS)的成膜成分。在另一个实施方式中，面层可以选自由羟丙基甲基纤维素(HMPC)、聚乙烯醇(PVA)或氨基甲基丙烯酸酯共聚物例如Eudragit E组成的组。
在某些实施方式中，代表性的稳定初乳组合物提供在表1中。
表1.稳定初乳组合物的实例
在某些实施方式中，本公开提供了一种稳定的组合物，其包含约40wt％至约95wt％的初乳、约5wt％至约30wt％的酶活性大豆制品和约0wt％至约50wt％的稳定剂。在某些实施方式中，本公开提供了一种稳定的组合物，其包含约40wt％至约90wt％的初乳、约5wt％至约25wt％的酶活性大豆制品和约5wt％至约40wt％的稳定剂。在某些实施方式中，本公开提供了一种稳定的组合物，其包含约50wt％至约90wt％的初乳、约10wt％至约20wt％的酶活性大豆制品和约5wt％至约30wt％的稳定剂。在某些实施方式中，本公开提供了一种稳定的组合物，其包含约40wt％至约95wt％的初乳、约0wt％至约30wt％的酶活性大豆制品和约5wt％至约50wt％的稳定剂。
本公开提供了一种组合物，其包含纯化的乳铁蛋白、稳定剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。所述乳铁蛋白可以以约1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0ng/ml或更高的量存在。所述乳铁蛋白可以以约0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0、13.0、14.0、15.0mg/ml的量存在。所述乳铁蛋白可以以至多约98wt％(例如约2、5、10、20、30、40、50、60、70、75、80、90、98wt％)的量存在。所述乳铁蛋白可以源自牛、绵羊、山羊、水牛或其他哺乳动物。所述乳铁蛋白可以是基于人、奶牛、绵羊、山羊、水牛和其他哺乳动物乳铁蛋白的重组乳铁蛋白。所述稳定剂和营养学上可接受的载体或赋形剂可以是本文所描述的任何稳定剂(例如酪蛋白、酪蛋白酸盐、聚葡萄糖、海藻糖、外源性初乳脂肪、硬脂、海藻酸盐、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体、海藻酸盐加乙基纤维素、海藻酸盐加玉米淀粉、海藻酸盐加丙烯酸聚合物、基质稳定剂、脂质稳定剂、多糖稳定剂、二糖稳定剂、糖醇稳定剂、蛋白质稳定剂、微胶囊化剂、耐酸包衣材料、肠溶包衣材料或其组合)。稳定剂可以占所述组合物的约2wt％至约90wt％(例如约2、5、10、15、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90wt％或更多或约2wt％至90wt％之间的任何范围)。在某些情况下，所述稳定剂是酪蛋白酸钙、酪蛋白酸钠或从初乳中分离的酪蛋白酸盐。在某些实施方式中，所述组合物包含约2wt％至约90wt％(例如约2、5、10、20、30、40、50、60、70、75、80、90wt％)的酪蛋白酸钙。
使用方法
各个实施方式提供了在有需要的受试者中治疗、减轻或预防与胃肠道炎症相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含治疗有效量的促修复因子、免疫因子或其组合、营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂的组合物。
本文公开的实施方式涉及在有需要的受试者中治疗、减轻或预防与胃肠道炎症相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含治疗有效量的促修复因子、免疫因子或其组合、稳定剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂的组合物。
在某些实施方式中，方法包括使用一种进一步包含稳定剂的组合物。在某些实施方式中，稳定剂是酪蛋白、酪蛋白酸盐、聚葡萄糖、海藻糖、外源性初乳脂肪、硬脂、海藻酸盐、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体、海藻酸盐加乙基纤维素、海藻酸盐加玉米淀粉和海藻酸盐加丙烯酸聚合物或其组合。
在某些实施方式中，方法使用的促修复因子是初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳、初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、蛋制品、分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐或其组合。在某些实施方式中，初乳是牛初乳。在某些实施方式中，牛初乳是脱脂牛初乳、晚期牛初乳、部分脱脂牛初乳、牛初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、部分脱脂牛初乳、全牛初乳或其组合。
在某些实施方式中，提供了其中分离的促修复肽或蛋白质是选自由表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)、胰岛素样生长因子II(IGF-II)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、乳脂肪球-表皮生长因子8(MFG-E8)或其营养学上可接受的盐组成的组的重组促修复肽或蛋白质的方法。
在某些实施方式中，所述治疗有效量的分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐以每天约0.001mg/kg至约10mg/kg、约0.005mg/kg至约5mg/kg、约0.01mg/kg至约1mg/kg或约20μg/kg至约200μg/kg(例如约0.001、0.01、0.02、0.1、1.0、2.0、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、125、150、175、200、225、250mg/kg)受试者体重的量施用。在某些实施方式中，所述治疗有效量的分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐以每天约0.01mg至约500mg、约0.05mg至约80mg、约0.1至约50mg、约0.5至约10mg或约1mg至约5mg(例如每天约0.1、1.0、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、125、150、175、200、225、250、300、400、500、600、700mg)的量施用。
在某些实施方式中，提供了其中所述免疫因子是免疫球蛋白、细胞因子、抗菌肽或其组合的方法。
在某些实施方式中，提供了其中所述营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂是营养性胰蛋白酶抑制剂的方法。在某些实施方式中，营养性胰蛋白酶抑制剂是酶活性大豆制品、卵类粘蛋白、大豆胰蛋白酶抑制剂或其组合。
在某些实施方式中，提供了中所述组合物包含约40wt％至约95wt％(例如约40、50、60、70、80、90、95、99wt％)的初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳或初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物，以及约5wt％至约25wt％(例如约5、10、15、20wt％)的酶活性大豆制品的方法。
在某些实施方式中，提供了其中所述组合物包含稳定剂的方法。在某些实施方式中，所述稳定剂是酪蛋白、酪蛋白酸盐、聚葡萄糖、海藻糖、外源性初乳脂肪、硬脂、海藻酸盐、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体、海藻酸盐加乙基纤维素、海藻酸盐加玉米淀粉、海藻酸盐加丙烯酸聚合物或其组合。在某些实施方式中，所述稳定剂可以是选自由脂质稳定剂、多糖稳定剂、二糖稳定剂、糖醇稳定剂或蛋白质稳定剂组成的组的基质稳定剂。所述稳定剂可以是微胶囊化剂、耐酸包衣材料和/或肠溶包衣材料。在某些实施方式中，所述组合物包含约5wt％至约40wt％(例如约5、10、20、30或40wt％)的稳定剂。
在某些实施方式中，提供了其中所述组合物进一步包含大豆凝集素、中链甘油三酯、乳清蛋白浓缩物、脱脂奶粉、乳蛋白浓缩物或其组合的方法。在某些实施方式中，所述组合物包含至多约2wt％(例如约0.01、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0wt％)的大豆卵磷脂、至多约2wt％(例如约0.01、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0wt％)的中链甘油三酯、至多约2wt％(例如约0.01、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0wt％)的调味剂、至多约50wt％(例如约5、10、15、20、30、40、50wt％)的乳清蛋白浓缩物、至多约10wt％(例如约1.0、2.0、5.0、7.0、10wt％)的脱脂奶粉、至多约10wt％(例如约1.0、2.0、5.0、7.0、10wt％)的乳蛋白浓缩物或其组合。在某些实施方式中，所述初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为约1:20至约20:1。在某些实施方式中，所述初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为60:40。
在某些实施方式中，提供了其中组合物包含的总蛋白质含量为所述组合物的约50wt％至约80wt％(例如约50、60、70、80wt％)的方法。在某些实施方式中，所述组合物包含免疫球蛋白G，其含量为所述组合物的约15wt％至约60wt％(例如约15、20、30、40、50、60wt％)。
在某些实施方式中，提供了其中所述疾病或病症是炎症性肠病、非甾类消炎药(NSAID)胃肠道病症、化疗诱导的黏膜炎、放疗诱导的黏膜炎、假膜性结肠炎、胃炎、消化性溃疡、坏死性小肠结肠炎、肠易激综合征、肠漏、小肠细菌过度生长(SIBO)、非溃疡性消化不良或功能性消化不良的方法。在某些实施方式中，所述炎症性肠病是溃疡性结肠炎、未定型结肠炎或克罗恩病。
在某些实施方式中，提供了其中所述组合物有效降低受试者中的髓过氧化物酶(MPO)水平的方法。
在某些实施方式中，提供了其中与相同条件下单独的促修复因子和/或免疫因子的活性相比，所述组合物能有效地显著保存所述促修复因子或免疫因子在经受胃液或盐酸盐/胃蛋白酶消化和胰凝乳蛋白酶/胰蛋白酶消化时的活性的方法。
在某些实施方式中，方法进一步包括向所述受试者共同施用有效量的一种或多种其他活性试剂。在某些实施方式中，所述受试者是人类非新生儿受试者。
本文公开的实施方式涉及在受试者中提高疫苗接种抗体滴度的方法，所述方法包括a)向所述受试者口服施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含：i)促修复因子、免疫因子或其组合；ii)营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂；iii)任选的营养学上可接受的载体或赋形剂；和iv)任选的稳定剂；以及b)向所述受试者施用疫苗。
在某些实施方式中，所述疫苗是COVID-19疫苗、流感疫苗、肺炎球菌疫苗、破伤风疫苗、破伤风-白喉-百日咳疫苗、麻疹-流行性腮腺炎-风疹疫苗、人乳头瘤病毒疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、脑膜炎球菌疫苗、乙型流感嗜血杆菌疫苗或带状疱疹疫苗。
在某些实施方式中，所述疫苗是兽用疫苗，例如犬瘟热疫苗、狂犬病疫苗、细小病毒疫苗、禽流感疫苗、马西尼罗病毒疫苗、马流感病毒疫苗、猫白血病病毒疫苗、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒疫苗、牛病毒性腹泻病毒疫苗、猫免疫缺陷病毒疫苗、猪疱疹病毒疫苗、口蹄疫病毒疫苗、牛疱疹病毒1型相关疾病疫苗或新城疫病毒疫苗。
剂型
组合物可以是肠内组合物。组合物可以是口服组合物。在某些实施方式中，本文提供的组合物可以以固体形式提供，例如粉剂、团聚粉剂、速溶化粉剂、冻干粉剂、颗粒剂、片剂、口服崩解片剂、胶囊、锭剂或含片。在某些实施方式中，所述组合物可以采取即用形式，例如固体食品形式如营养棒、软咀嚼物、水凝胶或软糖，半固体形式如酸奶，或采取液体形式例如混悬剂或即饮饮料。在某些实施方式中，所述组合物可以在软膏、栓剂或营养灌肠剂中。在某些实施方式中，所述剂型可以是喷雾干燥粉剂。在某些实施方式中，所述剂型可以是采取即混形式的喷雾干燥的速溶化粉剂。
在某些实施方式中，剂型是口服剂型例如粉剂、胶囊、片剂、锭剂、液体或囊片。所述粉剂可用于胶囊填充，或以单剂量包装销售用于与食品例如苹果酱或酸奶混合，或者可以是以单剂量包装销售的泡腾粉剂制剂，用于悬浮在液体中。一方面，胶囊、片剂、含片旨在通过吞咽摄入。另一方面，片剂、胶囊或含片可在口中崩解。另一方面，片剂、胶囊、含片或锭剂是缓释组合物。另一方面，片剂、含片、锭剂或胶囊是速释组合物。另一方面，口服组合物可以是预包装的液体饮品，其中将制剂悬浮在调味液体中。在某些方面，组合物采取片剂、胶囊或粉剂的形式，用于与食品例如苹果酱或酸奶混合。尽管本公开的组合物主要是口服形式，但也设想了其他施用方式例如肠内形式，例如胃造口术形式或肛门栓剂。
除了上面指定的组分之外，本公开的片剂、胶囊和囊片形式可以包含其他各种添加剂，例如载体、粘合剂、崩解剂、润滑剂、增稠剂、表面活性剂、渗透压调节剂、电解质、甜味剂、调味剂、香料、色素、pH调节剂和其他适当需要的添加剂。
在另一个实施方式中，本公开的组合物和剂型可以任选地进一步包含一种或多种调味剂。可以添加任选的调味剂以提高患者的可接受性和对推荐的施用计划的依从性。可以使用的调味剂包括专业技术人员已知的调味剂，例如天然和人工调味剂。这些调味剂可以选自合成调味油和调味香料和/或源自于植株、叶、花、果实等的油、油树脂和提取物，以及它们的组合。非限制性的代表性调味油包括留兰香油、肉桂油、冬青油(水杨酸甲酯)、薄荷油、丁香油、月桂油、茴香油、桉树油、百里香油、雪松叶油、肉豆蔻油、多香果油、鼠尾草油、肉豆蔻油(mace)、苦杏仁油和桂皮油。其他有用的调味剂是人工、天然和合成的水果调味剂，例如香草和柑橘油(包括但不限于柠檬、橙子、酸橙、葡萄柚)以及水果香精，包括苹果、梨、桃、葡萄、草莓、覆盆子、樱桃、李子、菠萝、杏等。这些调味剂可以以液体或固体形式使用，并且可以单独或混合使用。常用的调味剂包括薄荷如胡椒薄荷、薄荷醇、人造香草、肉桂衍生物和各种水果调味剂，无论是单独还是混合使用。其他有用的调味剂包括醛和酯，例如可以使用乙酸肉桂酯、肉桂醛、柠檬醛二乙缩醛、乙酸二氢香芹酯、甲酸丁香酯、对甲基苯甲醚等。在特定情况下，所述调味剂是留兰香油。所述调味剂任选地以抗病毒组合物的重量的约0.1wt％至约5wt％(例如约0.1、0.5、1、2、3、4、5wt％)的量存在。
片剂可以是模制片剂或压缩片剂。片剂以通过湿法制粒、干法制粒和直接压片形成。这些技术是本领域技术人员已知的，并描述在例如美国药典国家处方集(UnitedStates Pharmacopeia National Formulary)USP XXII，1990，pp.1696-1697中。可以向组合物添加各种维生素。片剂可以任选地进一步包含调味剂或甜味剂。一方面，将增甜调味的片剂用作将在口中溶解的含片。本公开的组合物也可以以可咀嚼形式或泡腾形式制备。对于泡腾制剂来说，本公开中的制备方法与常用泡腾制剂例如泡腾片的制备方法基本上相同。也就是说，将各组分称重，混合，并通过粉末压缩法、干颗粒或湿颗粒压缩法等直接制备。口服崩解片剂被描述在例如美国专利号7,431,942中。具有硬糖基料的含片可以例如通过美国专利号6,316,008的技术来制备。
液体组合物可以进一步包含其他营养物。这种液体组合物可以如美国专利号6,037,375所述来制备。本公开的营养液体组合物可以包含初乳和酶活性大豆制品，并以与常规食品和饮料相同的方式制备，并且可以适当添加其他食品材料。也可以添加甜味剂例如有机酸和糖类。有机酸组分包括例如柠檬酸、酒石酸、苹果酸和琥珀酸。这些有机酸通常以约100mg/100mL至约1500mg/100mL、优选地约250mg/100mL至约800mg/100mL(例如约100、200、250、300、400、500、600、700、800、900mg/100mL)的范围添加，并且可以制备饮料形式的材料组合物。
在本公开的片剂、液体、胶囊、含片或锭剂制剂中可以任选地使用各种甜味剂。糖类和甜味剂的实例包括单糖例如葡萄糖和果糖，二糖例如麦芽糖、蔗糖、其他常用糖，糖醇例如木糖醇、山梨糖醇、甘油和赤藓糖醇，多糖例如糊精和环糊精，以及寡糖例如低聚果糖、低聚半乳糖和低聚乳果糖。其他甜味剂包括天然甜味剂例如奇异果甜蛋白、甜叶菊提取物、莱鲍迪苷A、甘草酸等，以及合成甜味剂例如糖精、阿斯巴甜等。这些糖类也可以作为糖类混合物例如异构化糖和精制糖添加。所述甜味剂可以任选地以固体组合物重量的约0.1％至约5％(例如约0.1、0.5、1、2、3、4、5)存在。所述糖类的混合可以是100mL本公开的饮料组合物中约1g至约15g或约3g至约12g(例如100mL中约1、2、3、5、7、9、10、12、15g)。寡糖的含量可以是约0.5g至约10g或约1g至约3g(例如约0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10g)。
本公开的液体营养组合物可以通过将这些组分混合来制备，并且对制备方法没有特别限制，并且可以同时混合所有组分。在一个实施方式中，可以将脂溶性组分初步溶解在油中，并将水溶性组分溶解在水中，然后可以使用乳化剂将溶液乳化，以便可以制备本公开的组合物。
乳化可以通过使用适合的乳化机例如均质混合器或高压均质器，采取完全通行系统或循环系统来进行。乳化后的乳液可以通过常规方法过滤，倾倒在适合的容器中并灭菌，从而获得所需的饮料产品。灭菌可以通过巴氏消毒法进行。
本公开的液体组合物也可以以泡腾形式制备。除了本公开的必需组分之外，所述泡腾形式应该含有适量的碳酸钠和/或碳酸氢钠和中和剂作为发泡组分。本文中使用的中和剂可以是能够通过中和碳酸钠或碳酸氢钠而产生二氧化碳的酸性化合物。此类化合物包例如L-酒石酸、柠檬酸、富马酸、抗坏血酸和其他有机酸。抗坏血酸兼具中和剂作用和抗氧化剂作用。
本公开的组合物和剂型可以经受涉及高热(UHT(超高温例如约135℃至约140℃，2至4秒)、HTST(高温，短时间；也被称为快速巴氏消毒，例如约72℃至约74℃，15至20秒)、LTLT(低温，长时间；例如约63℃，30分钟))和/或高压过程(HPP)的巴氏消毒过程，和/或使用高热的其他食品或补充剂相关过程(软糖、酸奶、RTD饮料、烘焙营养棒等)。
提高疫苗接种抗体滴度
在某些实施方式中，本公开提供了在接受疫苗的受试者中提高疫苗接种抗体滴度的方法。例如，提供了一种在受试者中提高疫苗接种抗体滴度的方法，所述方法包括向所述受试者口服施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含：促修复因子和/或免疫因子；营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂；营养学上可接受的载体或赋形剂；和任选的稳定剂；以及向所述受试者施用疫苗。如本发明的实施例1所示，在胰酶存在的情况下，营养性蛋白酶抑制剂可稳定BC和/或蛋中的促修复因子的生长因子活性。此外，在实施例4中提供了免疫因子稳定性提高的证据，该实施例公开了原型初乳组合物和“数字热图”表(图7A和图7B)，显示了当使用某些稳定剂或约10wt％的本文描述的营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂酶活性大豆粉)时IgG(μg/ml)和乳铁蛋白(ng/ml)的免疫生物稳定性提高。不受理论限制，由于口服施用的促修复因子和免疫因子在配制本公开的组合物中时被稳定化，因此这些组合物可用于在接受疫苗的受试者中提高疫苗接种抗体滴度。
在某些实施方式中，本公开提供了在受试者中提高疫苗接种抗体滴度的方法，所述方法包括：向所述受试者口服施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含：i)促修复因子和/或免疫因子；ii)营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂；iii)营养学上可接受的载体或赋形剂；和iv)任选的稳定剂；以及b)向所述受试者施用疫苗。所述疫苗可以选自由COVID-19疫苗、流感疫苗、肺炎球菌疫苗、破伤风疫苗、破伤风-白喉-百日咳疫苗、麻疹-流行性腮腺炎-风疹疫苗、人乳头瘤病毒疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、脑膜炎球菌疫苗、乙型流感嗜血杆菌疫苗和带状疱疹疫苗组成的组。在某些实施方式中，所述疫苗是兽用疫苗。所述兽用疫苗可以是例如犬瘟热疫苗、狂犬病疫苗、细小病毒疫苗、禽流感疫苗、马西尼罗病毒疫苗、马流感病毒疫苗、猫白血病病毒疫苗、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒疫苗、牛病毒性腹泻病毒疫苗、猫免疫缺陷病毒疫苗、猪疱疹病毒疫苗、口蹄疫病毒疫苗、牛疱疹病毒1型相关疾病疫苗或新城疫病毒疫苗。
稳定性
本公开的组合物和剂型可以在不同的时间范围内(1个月、2个月、3个月、6个月、12个月、18个月等)进行实时稳定性测试(25℃和60％)和加速稳定性测试(40℃和75％RH)。
施用
本公开的组合物可以通过肠内施用途径施用。施用方法可以包括口服、颊、舌下、胃和直肠。
剂量
当随着时间的推移间歇性或定期服用时，本公开的组合物可以有效治疗、减轻胃肠道病症、降低胃肠道病症的症状严重程度、预防胃肠道病症的发作或降低胃肠道病症发生率。这可以是每日、一次或分次服用或间歇性服用。例如，15岁或15岁以上、平均体重约70kg、尚未患有胃肠道病症的人可以服用以粉剂计约0.3g/天至约100g/天、约0.5g/天至约33g/天、约1g/天至约15g/天或约2g/天至约10g/天(例如约0.1、0.5、1、5、10、15、20、30、33或更多g/天)的单剂量或多剂量。
当随着时间的推移间歇性或定期服用时，本公开的组合物可以有效用于膳食补充、功能食品和饮料以及用于支持正常胃肠道和免疫功能。这可以是每日、一次或分次服用或间歇性服用。例如，15岁或15岁以上、平均体重约70kg、尚未患有胃肠道病症的人可以服用以粉剂计约0.3g/天至约100g/天、约0.5g/天至约33g/天、约1g/天至约15g/天或约2g/天至约10g/天(例如约0.1、0.5、1、5、10、15、20、30、33或更多g/天)的单剂量或多剂量。
其他实施方式
实施方式A涉及一种组合物，其包含促修复因子、营养性蛋白酶抑制剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。
在实施方式B中，根据实施方式A所述的组合物，其中所述组合物进一步包含稳定剂。
在实施方式C中，根据实施方式B所述的组合物，其中所述稳定剂是酪蛋白、酪蛋白酸盐、聚葡萄糖、海藻糖、外源性初乳脂肪、硬脂、海藻酸盐、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体、海藻酸盐加乙基纤维素、海藻酸盐加玉米淀粉、海藻酸盐加丙烯酸聚合物或其组合。
在实施方式D中，根据实施方式A至C中任一项所述的组合物，其中所述促修复因子是初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳、初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、蛋制品、分离的促修复肽或蛋白质、其营养学上可接受的盐或其组合。
在实施方式E中，根据实施方式D所述的组合物，其中所述初乳是牛初乳。
在实施方式F中，根据实施方式所述E的组合物，其中所述牛初乳选自脱脂牛初乳、部分脱脂牛初乳或全牛初乳。
在实施方式G中，根据实施方式所述D的组合物，其中所述分离的促修复肽或蛋白质是选自由表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)、胰岛素样生长因子II(IGF-II)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、乳脂肪球-表皮生长因子8(MFG-E8)或其营养学上可接受的盐组成的组的重组促修复肽或蛋白质。
在实施方式H中，根据实施方式A至D中任一项所述的组合物，其中所述营养性蛋白酶抑制剂是酪蛋白。
在实施方式I中，根据实施方式A至D中任一项所述的组合物，其中所述营养性蛋白酶抑制剂是营养性胰蛋白酶抑制剂。
在实施方式J中，根据实施方式H所述的组合物，其中所述营养性胰蛋白酶抑制剂是酶活性大豆制品、卵类粘蛋白、大豆胰蛋白酶抑制剂或其组合。
在实施方式K中，根据实施方式I所述的组合物，其中所述酶活性大豆制品是生大豆粉、生豆粕、生大豆制品、微加工大豆制品或其组合。
在实施方式L中，根据实施方式J所述的组合物，其中所述酶活性大豆制品是酶活性大豆粉。
在实施方式M中，根据实施方式K所述的组合物，其包含的初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳或初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物与酶活性大豆制品的重量比为约1:1至约20:1，任选为约5:1至约15:1。
在实施方式N中，根据实施方式A至K中任一项所述的组合物，其包含约40wt％至约95wt％的初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳或初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物，以及约5wt％至约25wt％的酶活性大豆制品。
在实施方式O中，根据实施方式M所述的组合物，其包含约5wt％至约40wt％的稳定剂。
在实施方式P中，根据实施方式N所述的组合物，其包含约5wt％至约40wt％的营养性蛋白酶抑制剂。
在实施方式Q中，根据实施方式N所述的组合物，其包含约2wt％至约7wt％的酪蛋白。
在实施方式R中，根据实施方式N所述的组合物，其进一步包含大豆凝集素、中链甘油三酯、乳清蛋白浓缩物、脱脂奶粉、乳蛋白浓缩物或其组合。
在实施方式S中，根据实施方式R所述的组合物，其包含至多约2wt％的大豆卵磷脂、至多约2wt％的中链甘油三酯、至多约2wt％的调味剂、至多约50wt％的乳清蛋白浓缩物、至多约10wt％的脱脂奶粉、至多约10wt％的乳蛋白浓缩物或其组合。
在实施方式T中，根据实施方式所述N的组合物，其中所述初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为约1:20至约20:1。
在实施方式U中，根据实施方式N所述的组合物，其中所述初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为60:40。
在实施方式V中，根据实施方式N至U中任一项所述的组合物，其中所述组合物的总蛋白质含量是所述组合物的约50wt％至约80wt％。
在实施方式W中，根据实施方式N至U中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含免疫球蛋白G，其含量为所述组合物的约15wt％至约60wt％。
实施方式X涉及一种组合物，其包含促修复因子、稳定剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。
在实施方式Y中，根据实施方式X所述的组合物，其中所述促修复因子选自初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳、初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、蛋制品、分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐或其组合。
在实施方式Z中，根据实施方式Y所述的组合物，其中所述初乳是牛初乳。
在实施方式AA中，根据实施方式Z所述的组合物，其中所述牛初乳是脱脂牛初乳、晚期牛初乳、部分脱脂牛初乳、牛初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、全牛初乳或其组合。
在实施方式BB中，根据实施方式Y所述的组合物，其中所述分离的促修复肽或蛋白质是选自由表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)、胰岛素样生长因子II(IGF-II)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、乳脂肪球-表皮生长因子8(MFG-E8)或其营养学上可接受的盐组成的组的重组促修复肽或蛋白质。
在实施方式CC中，根据实施方式X至BB中任一项所述的组合物，其中所述稳定剂选自由酪蛋白、酪蛋白酸盐、聚葡萄糖、海藻糖、外源性初乳脂肪、硬脂、海藻酸盐、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体、海藻酸盐加乙基纤维素、海藻酸盐加玉米淀粉和海藻酸盐加丙烯酸聚合物组成的组。
在实施方式DD中，根据实施方式X至CC中任一项所述的组合物，其包含约40wt％至约98wt％的初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳或初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物。
在实施方式EE中，根据实施方式DD所述的组合物，其包含约2wt％至约40wt％的稳定剂。
在实施方式FF中，根据实施方式DD所述的组合物，其进一步包含大豆凝集素、中链甘油三酯、乳清蛋白浓缩物、脱脂奶粉、乳蛋白浓缩物或其组合。
在实施方式GG中，根据实施方式FF所述的组合物，其包含至多约2wt％的大豆卵磷脂、至多约2wt％的中链甘油三酯、至多约2wt％的调味剂、至多约50wt％的乳清蛋白浓缩物、至多约10wt％的脱脂奶粉、至多约10wt％的乳蛋白浓缩物或其组合。
在实施方式HH中，根据实施方式DD所述的组合物，其中所述初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为约1:20至约20:1。
在实施方式II中，根据实施方式DD所述的组合物，其中所述初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为60:40。
在实施方式JJ中，根据实施方式DD至II中任一项所述的组合物，其中所述稳定剂选自由酪蛋白酸钙、酪蛋白酸钠和来自初乳的酪蛋白酸盐分离物组成的组。
在实施方式KK中，根据实施方式JJ所述的组合物，其包含约2wt％至约7wt％的酪蛋白酸钙。
在实施方式LL中，根据实施方式DD至KK中任一项所述的组合物，其中所述组合物的总蛋白质含量是所述组合物的约50wt％至约80wt％。
在实施方式MM中，根据实施方式DD至KK中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含免疫球蛋白G，其含量为所述组合物的约15wt％至约60wt％。
实施方式NN涉及一种剂型，其包含根据实施方式A至MM中任一项所述的组合物。
在实施方式OO中，根据实施方式NN所述的剂型，其中所述剂型是粉剂、颗粒剂、片剂、口服崩解片剂、胶囊、耐酸胶囊、锭剂、含片、营养棒、软咀嚼物、水凝胶、软糖、酸奶、混悬剂或即饮饮料。
在实施方式PP中，根据实施方式NN至LL中任一项所述的剂型，其中所述剂型是耐酸胶囊。
实施方式QQ涉及一种在有需要的受试者中治疗、减轻或预防与胃肠道炎症相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用组合物，所述组合物包含：a)治疗有效量的促修复因子、免疫因子或其组合；b)营养性蛋白酶抑制剂；和c)任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。
在实施方式RR中，根据实施方式QQ所述的方法，其中所述组合物进一步包含稳定剂。
在实施方式SS中，根据实施方式RR所述的方法，其中所述稳定剂是酪蛋白、酪蛋白酸盐、聚葡萄糖、海藻糖、外源性初乳脂肪、硬脂、海藻酸盐、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体、海藻酸盐加乙基纤维素、海藻酸盐加玉米淀粉和海藻酸盐加丙烯酸聚合物或其组合。
在实施方式TT中，根据实施方式QQ至SS中任一项所述的方法，其中所述促修复因子选自初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳、初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、蛋制品、分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐或其组合。
在实施方式UU中，根据实施方式TT所述的方法，其中所述初乳是牛初乳。
在实施方式VV中，根据实施方式UU所述的方法，其中所述牛初乳选自由脱脂牛初乳、晚期牛初乳、部分脱脂牛初乳、牛初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、部分脱脂牛初乳、全牛初乳或其组合组成的组。
在实施方式WW中，根据实施方式TT所述的方法，其中所述分离的促修复肽或蛋白质是选自由表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)、胰岛素样生长因子II(IGF-II)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、乳脂肪球-表皮生长因子8(MFG-E8)或其营养学上可接受的盐组成的组的重组促修复肽或蛋白质。
在实施方式XX中，根据实施方式TT所述的方法，其中所述治疗有效量的分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐以每天约0.001mg/kg至约10mg/kg、约0.005mg/kg至约5mg/kg、约0.01mg/kg至约1mg/kg或约20μg/kg至约200μg/kg受试者体重的量施用。
在实施方式YY中，根据实施方式TT所述的方法，其中所述治疗有效量的分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐以每天约0.01mg至约500mg、约0.05mg至约80mg、约0.1至约50mg、约0.5至约10mg或约1mg至约5mg的量施用。
在实施方式ZZ中，根据实施方式QQ所述的方法，其中所述免疫因子选自由免疫球蛋白、细胞因子、抗菌肽或其组合组成的组。
在实施方式AAA中，根据实施方式QQ所述的方法，其中所述营养性蛋白酶抑制剂是酪蛋白。
在实施方式BBB中，根据实施方式QQ所述的方法，其中所述营养性蛋白酶抑制剂是营养性胰蛋白酶抑制剂。
在实施方式CCC中，根据实施方式BBB所述的方法，其中所述营养性胰蛋白酶抑制剂是酶活性大豆制品、卵类粘蛋白、大豆胰蛋白酶抑制剂或其组合。
在实施方式DDD中，根据实施方式CCC所述的方法，其中所述酶活性大豆制品是生大豆粉、生豆粕、生大豆制品、微加工大豆制品或其组合。
在实施方式EEE中，根据实施方式QQ至DDD中任一项所述的方法，其中所述组合物包含约40wt％至约95wt％的初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳或初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物，以及约5wt％至约25wt％的酶活性大豆制品。
在实施方式FFF中，根据实施方式EEE所述的方法，其中所述组合物包含约5wt％至约40wt％的稳定剂。
在实施方式GGG中，根据实施方式EEE所述的方法，其中所述组合物包含约5wt％至约40wt％的酪蛋白。
在实施方式HHH中，根据实施方式EEE所述的方法，其中所述组合物包含约2wt％至约7wt％的酪蛋白。
在实施方式III中，根据实施方式EEE所述的方法，其中所述组合物进一步包含大豆凝集素、中链甘油三酯、乳清蛋白浓缩物、脱脂奶粉、乳蛋白浓缩物或其组合。
在实施方式JJJ中，根据实施方式EEE所述的方法，其中所述组合物包含至多约2wt％的大豆卵磷脂、至多约2wt％的中链甘油三酯、至多约2wt％的调味剂、至多约50wt％的乳清蛋白浓缩物、至多约10wt％的脱脂奶粉、至多约10wt％的乳蛋白浓缩物或其组合。
在实施方式KKK中，根据实施方式EEE所述的方法，其中所述初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为约1:20至约20:1。
在实施方式LLL中，根据实施方式EEE所述的方法，其中所述初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为60:40。
在实施方式MMM中，根据实施方式YY至EEE中任一项所述的方法，其中所述组合物的总蛋白质含量是所述组合物的约50wt％至约80wt％。
在实施方式NNN中，根据实施方式EEE至MMM中任一项所述的方法，其中所述组合物包含免疫球蛋白G，其含量为所述组合物的约15wt％至约60wt％。
实施方式OOO涉及一种在有需要的受试者中治疗、减轻或预防与胃肠道炎症相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用组合物，所述组合物包含：a)治疗有效量的促修复因子和/或免疫因子；b)稳定剂；和c)任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。
在实施方式PPP中，根据实施方式OOO所述的方法，其中所述稳定剂是酪蛋白、酪蛋白酸盐、聚葡萄糖、海藻糖、外源性初乳脂肪、硬脂、海藻酸盐、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体、海藻酸盐加乙基纤维素、海藻酸盐加玉米淀粉和海藻酸盐加丙烯酸聚合物或其组合。
在实施方式QQQ中，根据实施方式OOO所述的方法，其中所述促修复因子选自初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳、初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、蛋制品、分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐或其组合。
在实施方式RRR中，根据实施方式QQQ所述的方法，其中所述初乳是牛初乳。
在实施方式SSS中，根据实施方式RRR所述的方法，其中所述牛初乳选自由脱脂牛初乳、晚期初乳、牛初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、部分脱脂牛初乳、全牛初乳或其组合组成的组。
在实施方式TTT中，根据实施方式QQQ所述的方法，其中所述分离的促修复肽或蛋白质是选自表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)、胰岛素样生长因子II(IGF-II)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、乳脂肪球-表皮生长因子8(MFG-E8)或其营养学上可接受的盐的重组促修复肽或蛋白质。
在实施方式UUU中，根据实施方式TTT所述的方法，其中所述治疗有效量的分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐以每天约0.001mg/kg至约10mg/kg、约0.005mg/kg至约5mg/kg、约0.01mg/kg至约1mg/kg或约20μg/kg至约200μg/kg受试者体重的量施用。
在实施方式VVV中，根据实施方式TTT所述的方法，其中所述治疗有效量的分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐以每天约0.01mg至约500mg、约0.05mg至约80mg、约0.1至约50mg、约0.5至约10mg或约1mg至约5mg的量施用。
在实施方式WWW中，根据实施方式OOO所述的方法，其中所述免疫因子选自由免疫球蛋白、细胞因子、抗菌肽或其组合组成的组。
在实施方式XXX中，根据实施方式QQ至WWW中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是炎症性肠病、非甾类消炎药(NSAID)胃肠道病症、化疗诱导的黏膜炎、放疗诱导的黏膜炎、假膜性结肠炎、胃炎、消化性溃疡、坏死性小肠结肠炎、肠易激综合征、肠漏、小肠细菌过度生长(SIBO)、非溃疡性消化不良或功能性消化不良。
在实施方式YYY中，根据实施方式XXX所述的方法，其中所述炎症性肠病是溃疡性结肠炎、未定型结肠炎或克罗恩病。
在实施方式ZZZ中，根据实施方式QQ至YYY中任一项所述的方法，其中所述组合物有效降低所述受试者中的髓过氧化物酶水平。
在实施方式AAAA中，根据实施方式QQ至YYY中任一项所述的方法，其中与相同条件下单独的促修复因子和/或免疫因子的活性相比，所述组合物能有效地显著保存所述促修复因子或免疫因子在经受胃液或盐酸盐/胃蛋白酶消化和胰凝乳蛋白酶/胰蛋白酶消化时的活性。
在实施方式BBBB中，根据实施方式QQ至YYY中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括向所述受试者共同施用有效量的一种或多种其他活性试剂。
在实施方式CCCC中，根据实施方式QQ至BBBB中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类非新生儿受试者。
实施方式DDDD涉及一种在受试者中提高疫苗接种抗体滴度的方法，所述方法包括：a)向所述受试者口服施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含：i)促修复因子、免疫因子或其组合；ii)营养性蛋白酶抑制剂；iii)任选的营养学上可接受的载体或赋形剂；和iv)任选的稳定剂；以及b)向所述受试者施用疫苗。
在实施方式EEEE中，根据实施方式DDDD所述的方法，其中所述疫苗是COVID-19疫苗、流感疫苗、肺炎球菌疫苗、破伤风疫苗、破伤风-白喉-百日咳疫苗、麻疹-流行性腮腺炎-风疹疫苗、人乳头瘤病毒疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、脑膜炎球菌疫苗、乙型流感嗜血杆菌疫苗或带状疱疹疫苗。
在实施方式FFFF中，根据实施方式DDDD所述的方法，其中所述疫苗是兽用疫苗，任选地其中所述兽用疫苗是犬瘟热疫苗、狂犬病疫苗、细小病毒疫苗、禽流感疫苗、马西尼罗病毒疫苗、马流感病毒疫苗、猫白血病病毒疫苗、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒疫苗、牛病毒性腹泻病毒疫苗、猫免疫缺陷病毒疫苗、猪疱疹病毒疫苗、口蹄疫病毒疫苗、牛疱疹病毒1型相关疾病疫苗或新城疫病毒疫苗。
实施方式GGGG涉及一种膳食补充剂，其包含实施方式A至MM中任一项所述的组合物。
实施方式HHHH涉及一种组合物，其包含纯化的乳铁蛋白、稳定剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。
在实施方式IIII中，根据实施方式HHHH所述的组合物，其中所述稳定剂时酪蛋白、酪蛋白酸盐、聚葡萄糖、海藻糖、外源性初乳脂肪、硬脂、海藻酸盐、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体、海藻酸盐加乙基纤维素、海藻酸盐加玉米淀粉或海藻酸盐加丙烯酸聚合物。
本文中引用的所有专利、专利出版物和同行评审出版物(即“参考文献”)均明确地通过引用并入，其程度与每个单独的参考文献被具体且单独地指明通过引用并入的程度相同。在本公开内容与并入的参考文献之间存在冲突的情况下，以本公开内容为准。
实施例
实施例1.营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂稳定化促修复因子的生长因子活性
在这一系列实验中，研究了营养性蛋白酶抑制剂卵类粘蛋白(存在于蛋中)或大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI，来自于大豆)是否能够减少牛初乳(BC)和/或蛋中存在的生长因子生物活性被胰酶的破坏。此外，研究了当使用重组表皮生长因子(EGF)作为BC中存在的生长因子的实例时是否可以保存增殖生物活性。使用体内大鼠DSS诱导的结肠炎模型来研究单独提供卵类粘蛋白或SBTI是否可以截断DSS诱导的损伤(通过保存内源性管腔生长因子)以及它们是否可以增强口服施用的BC±蛋或EGF的保护作用。
材料和方法
巴氏消毒的BC粉和市售全蛋粉由Pantheryx Inc.(Boulder,CO,USA)提供。初乳粉在产犊后前24小时内收集并随后制粉，每100g粉末含有48.32g蛋白质、16.25g脂肪、24.53g碳水化合物、4.5g水分和6.4g灰分。每100g蛋粉含有50.45g蛋白质、42.71g脂肪、1.25g碳水化合物、1.72g水分和3.87g灰分。BC+蛋的组合以40:60的重量比使用。
其他肽的来源如下：人EGF(Peprotech,New Jersey,USA)，SBTI(Roche,California,USA)，卵类粘蛋白(Sigma,USA)，BSA(Sigma)。AGS细胞系源自一位54岁女性的胃腺癌患者(ATCC,LGC Standards,UK)。
研究1.蛋白酶抑制剂对生长因子体外保存的影响
样品消化
为了重现肽在胃和小肠内的管腔内暴露，使用图1A中所示的方案，测试了未消化的、暴露于单独的HCl/胃蛋白酶(1h)或暴露于HCl/胃蛋白酶(1h)然后暴露于胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶(1h)的样品。简单来说，在存在或不存在卵类粘蛋白(500mg)或SBTI(1g)的情况下将单独的BC(400mg)、单独的蛋(400mg)、BC+蛋(总重量400mg，比例为60:40)和EGF(100μg)的等分试样配制在10ml PBS中，在不添加胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或胰蛋白酶的情况下在37℃下温育(未消化的对照)，或者在旋转培养箱中在37℃和pH2的胃蛋白酶(1mg/ml)下温育1小时，然后用NaOH中和至pH7。然后取出一半的等分试样(胃蛋白酶消化样品)，并将剩余物在胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶(1mg/ml)中温育1小时(胰凝乳蛋白酶/胰蛋白酶消化样品)。另外的样品研究了单独的卵类粘蛋白或SBTI对消化的敏感性。随后在相同的测定中分析所有样品的增殖生物活性。
增殖测定
细胞增殖测定使用Alamar blue(Invitrogen,Paisley,UK)，按照制造商的说明书进行。简单来说，将细胞以2000个细胞/孔接种在96孔板中，在DMEM培养基和10％FCS中生长过夜。第二天，将细胞用无血清培养基(SFM)清洗，并在单独的SFM中(阴性对照)或在稀释至相同终浓度的未消化或消化样品存在下温育。BC±蛋组成成分以1mg粉剂/ml、卵类粘蛋白以1.25mg/ml、EGF以0.25μg/ml并且SBTI以2.5mg/mL进行测试。这些浓度基于初步剂量-响应比较。
结果
研究1.蛋白酶抑制剂对生长因子体外保存的影响
使用单独的牛初乳(BC)或单独的蛋观察到类似的结果；暴露于HCl/胃蛋白酶使生物活性降低约50％，并且在暴露于CT后进一步降低15％(图1B)。卵类粘蛋白或SBTI的共同存在不影响HCl/胃蛋白酶敏感性，但使CT消化降低约80％(均为P<0.01)。BC+蛋显示出与单独温育各个因子相似的对HCl/胃蛋白酶和CT消化的敏感性。SBTI的共同存在不影响消化性HCl/胃蛋白酶敏感性，但降低CT敏感性。卵类粘蛋白的共同存在使两者均降低。营养性蛋白酶抑制剂卵类粘蛋白或SBTI显著保护BS、蛋或BC+蛋的增殖活性免受CT消化影响。卵类粘蛋白还显著保护BC+蛋的增殖活性免受P消化影响。
单独的EGF与HCl/胃蛋白酶温育导致生物活性降低76％，并在与CT温育后进一步降低20％(图1C)。卵类粘蛋白的共同存在不影响HCl/胃蛋白酶敏感性，但显著减少由CT引起的生物活性丧失。SBTI的共同存在降低了HCl/胃蛋白酶和CT两者的生物活性丧失。SBTI在单独提供时不刺激增殖。单独的卵类粘蛋白刺激增殖，但这种刺激在HCl/胃蛋白酶消化后完全丧失。营养性蛋白酶抑制剂卵类粘蛋白或SBTI显著保护EGF的增殖活性免受P和CT消化影响。
研究2.大鼠DSS结肠炎模型
动物研究在美国博尔德生物病理实验室(BolderBiopath Laboratories,Boulder,Co,USA)内进行，其符合世界卫生组织基础生物医学研究质量实践指南商业试验设施标准操作程序和许可证，并符合所有州和联邦法规，包括USDA动物福利法9CFR第1-3部分(Federal Register 39129,July 22,1993)。
雌性Sprague-Dawley大鼠(174-204g)获自Envigo RMS,Inc.(Indianapolis,USA)，饲养在标准笼中(每笼5只)，并随意喂食Envigo Teklad 8640饮食和自来水。用于大鼠葡聚糖硫酸钠(DSS)结肠炎模型的方法如Playford,R.J.等，“巴氏灭菌的鸡蛋粉刺激AGS、RIE1和Caco-2细胞的增殖和迁移并减少小鼠中NSAID诱导的损伤和大鼠中的结肠炎”(Pasteurized Chicken Egg Powder Stimulates Proliferation and Migration ofAGS,RIE1,and Caco-2 Cells and Reduces NSAID-Induced Injury in Mice andColitis in Rats)，The Journal ofNutrition,2020,150,1434–1442中所述。对8个组进行了测试(每组N＝10)。所有大鼠每天接受一次1ml口服灌胃(用3％碳酸氢钠配制，以中和胃酸)，持续9天。阴性对照组不接受DSS，但每天接受牛血清白蛋白(20mg/kg，BSA)灌胃。阳性对照组接受DSS和20mg/kg BSA灌胃。其余6组接受单独的BC+蛋(40:60比例，20mg/kg)、EGF(100μg/剂)、卵类粘蛋白(5000μg/剂)或SBTI(10.8mg/剂)。最后两组包括EGF+SBTI或BC+蛋+卵类粘蛋白的组合。选择这些组是基于研究1的结果，因为观察到卵类粘蛋白对BC+蛋和SBTI对EGF具有最佳保护作用。
从测试产品灌胃期的第3天开始通过向饮用水添加5％(w/v)DSS(分子量为40-50kDa；Spectrum，目录哈DE136，批号1IG1103)共7天，来诱导结肠炎。每天记录每个笼子的平均DSS和食物消耗量。每天对大鼠称重并目测检查是否有痛苦、腹泻和直肠出血的体征。在诱导结肠炎后每天评估疾病活动指数(DAI，基于Cooper,H.S.等，“葡聚糖硫酸钠实验性鼠类结肠炎的临床病理学研究”(Clinicopathologic Study ofDextran Sulfate SodiumExperimental Murine Colitis)，Lab Invest,1993,69,238–49)。DAI将体重减轻、粪便稠度和出血的评分合并除以3。然后确定7天DSS治疗期间的累积评分。
研究结束时，将大鼠处死，收集结肠组织用于生物化学和组织病理学评估。使用Williams，K.L.等，“在过表达生长激素的转基因小鼠中葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎后的存活率和粘膜修复能力增强”(Enhanced Survival and Mucosal Repair after DextranSodium Sulfate-Induced Colitis in Transgenic Mice that Overexpress GrowthHormone)，Gastroenterology,120,925–37(2001)描述的评分系统评估显微镜损伤。结肠炎总组织学评分源自i)炎症严重程度、ii)炎症范围、iii)隐窝损伤和iv)受累百分率这四个分项评分之和。还分析了组织的髓过氧化物酶(MPO)活性(用作中性粒细胞浸润的标志物)。
统计数据
所有结果均表示为平均值+/-SEM。使用Graphpad Prism 8版本8.3.1进行统计。使用Shapiro-Wilks检验的数据正态性检验显示了组之间的方差相等。使用单因素方差分析(ANOVA)对增殖和体内研究进行分析。当观察到显著影响时(P<0.05)，使用基于从ANOVA获得的组平均值、残差和自由度的t检验进行个体比较，这等效于重复测量分析的方法。
结果
研究2：大鼠DSS结肠炎模型
未接受DSS的大鼠在9天内显示出总体重增加11.8+/-1.9g(图3A)。相比之下，接受单独的DSS的动物在同一时间段内显示出明显的体重减轻(-10.2+/-1.5g)(与无DSS相比P<0.01)。对DSS处理的动物单独施用卵类粘蛋白不显著影响体重减轻，而BC+蛋显著截断由DSS诱导的体重减轻(与单独的DSS相比P<0.01)。在同时给予BC+蛋+卵类粘蛋白的动物体重改善最大(P<0.01)。单独给予EGF或SBTI不影响由DSS诱导的体重减轻。相比之下，EGF+SBTI的组合与单独的DSS相比显示出显著的体重改善(P<0.01)。
如图3B中所示的累积疾病活动指数(DAI)评分的分析给出了与在动物体重改变后观察到的相似的结果。单独给予卵类粘蛋白不影响DAI评分。使用BC+蛋观察到有益的效果，并且使用BC+蛋+卵类粘蛋白的组合观察到最佳结果(与单独的DSS或DSS处理的动物中的BC+蛋相比P<0.01)。单独给予EGF或SBTI不影响DSS诱导的DAI变化，而联合给予显著降低DAI评分(P<0.01)。
如图2C所示的来自髓过氧化物酶(MPO)分析的结果与体重变化和DAI评分一致。MPO是中性粒细胞浸润的标志物，并且可以指示免疫激活或感染。单独施用DSS导致结肠MPO增加13倍。对DSS处理的动物单独施用卵类粘蛋白不提高MPO水平，而BC+蛋则截断由DSS引起的MPO浓度的升高(P<0.01)。如果BC+蛋与卵类粘蛋白共同施用，则会观察到到额外的益处(与单独的DSS、DSS+卵类粘蛋白或DSS+BC+蛋相比P<0.01)。单独给予EGF或SBTI不影响DSS诱导的MPO变化，而联合给予显著降低MPO水平(P<0.01)。
形态学显示，与正常(无DSS)对照(图3A)相比，DSS的施用导致正常隐窝结构几乎完全丧失，并伴有炎性细胞的大量浸润(图3B)。使用单独的卵类粘蛋白(图3C)、SBTI(图3D)或单独的EGF(图3G)治疗不影响DSS的损伤作用。在接受BC+蛋的动物中观察到改善，炎性浸润较不明显，隐窝结构部分维持(图3E)。接受BC+蛋+卵类粘蛋白(图3F)或EGF+SBTI(图3H)组合的动物显示出显著改善，具有最小的炎症浸润并维持隐窝结构。正式的组织学评分(图2D)显示出与在形态学上看到的结果相似的结果；使用单独的卵类粘蛋白、单独的SBTI或单独的EGF均未发现有益效果。使用BC+蛋观察到显著改善(与单独的DSS相比P<0.05)，并且在接受BC+蛋+卵类粘蛋白或EGF+SBTI的动物中观察到最大改善(与单独的DSS相比P<0.01)。
本实施例支持下述结论，即本公开的组合物和方法可以对多种GI病况有价值，包括NSAID诱导的小肠肠道损伤(因为酸抑制剂不影响SI损伤)、UC(结肠损伤)和克罗恩病(其主要影响末端小肠)。
实施例2.酶活性大豆粉和初乳在体内协同降低疾病活动指数并降低结肠炎性活性
使用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎的动物模型来确定初乳和/或大豆粉对疾病活动指数(DAI)的影响，并在使用测试产品9天后确定DAI评分，其中DSS使用7天(从第3天开始)导致结肠炎。在本测定中，初乳是60-20脱脂初级初乳(APS 60-20I脱脂初乳粉剂，APS BioGroup)，并且大豆是酶活性全脂生大豆粉(EASY100，Natural Products,Inc.,Grinnell,Iowa)。
在本测定中，对接受正常(对照)、单独的DSS(以引起结肠炎)和剂量为20mg/kg和7mg/kg的标准初乳(C7)的小鼠确定了疾病活动指数(DAI)评分，以显示剂量响应。单独的大豆粉(C17)以0.7mg/kg和2mg/kg的剂量进行测试。含有10％大豆粉的初乳的混合物以相同的剂量(7和20mg/kg的C12)进行测试。结果示出在图5A至图5C中。图5A示出了在用DSS共同处理的7天内的总体重增加。图5B示出了累积疾病活动指数(DAI)评分，并且图5B示出了最终DAI。图5C的y轴是疾病活动指数评分(动物健康的标准度量)。用DSS处理在7天的DSS处理期间急剧减缓小鼠的体重增加(图5A)。初乳组合物(C7)和初乳+大豆粉组合物(C12)两者均能挽救DSS诱导的体重增加的减少。令人惊讶的是，在相同的初乳剂量下C12组合物的表现明显优于C7组合物。对于累积DAI评分和最终DAI而言，令人惊讶地发现含有10％大豆粉的低剂量初乳混合物(C126.3 mg/kg初乳+0.7mg/kg大豆粉)与较高剂量同样有效，并且与较高剂量的单独的初乳C7(初乳20mg/kg)同样有效，如图5A和5B中所示。因此，使用所述组合与使用单独的初乳相比疗效高三倍(7mg/kg的C12相比于20mg/kg的C7)(见带有$$符号的统计数据，P<0.05)。C17柱条显示了以与初乳+大豆组合中相同的量(即0.7和2mg/kg)给予单独的大豆(C17)对防止DSS诱导的体重增加的减少或DAI评估没有实际效果。因此，证实了初乳+10％大豆粉的组合在体重增加和疾病活动指数(DAI)评分方面的协同响应。
还测量了小鼠结肠组织中的髓过氧化物酶(MPO)活性作为炎症的指示。如图6A中所示，C7(单独的初乳)在减轻炎症的能力(MPO水平)方面显示出剂量响应。C17单独的大豆没有显示出效果。C12初乳+大豆显示出显著改善的效果，剂量为7mg/kg的组合与20mg/kg单独的初乳同样有效，即提高三倍。因此，当同时使用促修复因子(初乳)和营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂(酶活性大豆粉)时，在降低结肠炎症活性方面证实了协同响应。
图6B示出了在图6A的DSS诱导的结肠炎模型中每个结肠的组织学评分的条形图，具有相同的变量和统计数据。正如预期，无DSS显示出正常组织学和零损伤评分。单独的DSS显示出正常体系结构的几乎完全丧失和炎性细胞的大量涌入。这在图上给出了高评分。C17(其是单独的大豆)不改善组织学或组织学评分上的损伤。如组织学评分图上所反映的，C7单独的初乳显示出良好的剂量响应，在7mg/kg剂量下有一定改善，并且当在20mg/kg下使用时有更大的改善。C12初乳+大豆显示出非常好的保护作用，7mg/kg和20mg/kg两者均给出显著改善的外观。正式评分显示，与单独的DSS相比，7mg/kg和20mg/kg两种剂量给出的评分均显著改善。剂量为7mg/kg的组合与20mg/kg单独的初乳给出相似的外观，因此在wt/wt的基础上显示出生物活性大约3倍的提高。这些发现与图6A中示出的MPO结果一致。
DSS诱导的结肠炎模型中的代表性显微照片示出在图7A至图7G中。图7A示出了在DSS诱导的结肠炎模型中，无DSS对照小鼠的结肠组织中的代表性显微照片，正如预期具有正常的组织学和零损伤评分。图7B示出了在DSS诱导的结肠炎模型中，单独的DSS小鼠的结肠组织中的代表性显微照片，其中正常体系结构几乎完全丧失并且炎性细胞大量涌入。图7C示出了在DSS诱导的结肠炎模型中，DSS+C7初乳7mg/kg剂量的小鼠的结肠组织中的代表性显微照片，显示出一定改善。图7D示出了在DSS诱导的结肠炎模型中，DSS+C7初乳20mg/kg剂量的小鼠的结肠组织中的代表性显微照片，显示出比7mg/kg剂量更大的改善。图7E示出了在DSS诱导的结肠炎模型中，C12初乳+大豆的小鼠的结肠组织中的代表性显微照片，显示出非常好的保护作用，其中7mg/kg给出显著改善的外观。图7F示出了在DSS诱导的结肠炎模型中，C12初乳+大豆的小鼠的结肠组织中的代表性显微照片，显示出非常好的保护作用，其中20mg/kg也给出显著改善的外观。图7G示出了在DSS诱导的结肠炎模型中，C17(其是单独的大豆)的小鼠的结肠组织中的代表性显微照片，与单独的DSS相比未改善组织学损伤或组织学评分。
实施例3.大豆胰蛋白酶抑制剂活性测定
为了测定大豆制品中的胰蛋白酶抑制剂活性(TIA)，可以按照Liu,K.，“大豆胰蛋白酶抑制剂测定：美国油类化学家学会和国际谷物化学家美国协会批准并重新批准的标准方法的进一步改进”(Soybean Trypsin Inhibitor Assay:Further Improvement of theStandard Method Approved and Reapproved by American Oil Chemists’Society andAmerican Association ofCereal Chemists International)，J Am Chem Soc,96:635-645(2019)的方法进行大豆胰蛋白酶抑制剂测定。
材料
结晶牛胰蛋白酶(基本上不含盐，冻干粉剂)、合成底物N-α-苯甲酰基-DL-精氨酸-对硝基苯胺盐酸盐(DL-BAPA)、Tris碱三(羟甲基)氨基甲烷和脱水氯化钙购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO,USA)。在整个测定过程中使用去离子水。
试剂
通过将6.05g Tris碱和2.94g二水合氯化钙溶解在900mL水中，调整到pH 8.2并稀释至1000mL，来制备测定缓冲液(50mM Tris缓冲液，pH 8.2，含有20mM CaCl2)。将该测定缓冲液用于制备BAPA工作溶液。将HCl溶液(1mM，含有5mM CaCl2)用于制备胰蛋白酶储备液和工作溶液。通过将30mL冰乙酸与70mL水混合来制备用于终止胰蛋白酶反应的乙酸溶液(30％v/v)。BAPA储备溶液(40mg mL-1)：将400mg DL-BAPA溶解在10mL二甲基亚砜中。该溶液即使在室温下也非常稳定。BAPA工作溶液(0.4mg mL-1)：使用在37℃下预热的测定缓冲液将0.5mL BAPA储备溶液稀释至总体积为50mL。每天为TIA测定制备新鲜的BAPA工作溶液。胰蛋白酶储备溶液(0.2mg mL-1)：将10mg牛胰蛋白酶溶解在50mL上述HCl溶液中，pH约为2.5。将溶液保存在5℃下。胰蛋白酶工作溶液(20μg mL-1)：使用HCl溶液将2.5mL胰蛋白酶储用物溶液稀释至25mL。
将大豆制品样品例如大豆粉、浓缩物或分离物通过美国标准100号筛(相当于150um直径的筛孔)。在烧杯中使用磁力搅拌器在低设定下将1克样品用50.0mL 10mM NaOH提取1小时。对于生的、煮熟的、烤箱烘焙的大豆，可以在咖啡研磨机中磨碎，通过美国标准50号筛(300um直径的筛孔)，并如上所述提取3小时。稀释样品悬液，使得在空白读数校正后2.0mL的稀释样品引起30-70％的胰蛋白酶抑制。
在一组试管(例如16mL离心管)中，按照下述顺序添加试剂：稀释的大豆提取物(2mL，单位为mg/mL)、DL-BAPA(5mL，0.4mg/mL)和胰蛋白酶(2mL，20ug/mL)。整个测定在37℃水浴中进行。添加胰蛋白酶溶液并立即混合后正好10min，通过添加1.0mL 30％乙酸溶液终止显色反应。将混合物离心或过滤进行澄清。410nm处的样品吸光度读数(A410)是在样品抑制剂存在下胰蛋白酶活性的度量。同时，用等量的水代替样品提取物，反应也在不存在抑制剂的情况下进行。相应的吸光度是参比读数(在某些其他文献中也被称为标准读数)，用符号A410R表示。此外，还通过在胰蛋白酶溶液之前添加乙酸溶液，进行了用于样品读数的空白试剂(被称为空白样品，A410SB)和用于参比读数的空白试剂(被称为空白参比，A410RB)。对于所有吸光度读数来说，使用去离子水作为参比。样品读数和参比读数运行一式两份。
TIA值的计算可以在10mL测定的条件下进行，其中胰蛋白酶单位(TU)被定义为在410nm处吸光度增加0.01。胰蛋白酶抑制活性以每mg样品的胰蛋白酶抑制单位(TUI)或胰蛋白酶抑制剂单位(TIU)表示，并如下计算：每mg样品的TUI＝{[(A410R-A410RB)-(A410S-A410SB)×100]×mL稀释大豆提取物}/(每mL用于测定的稀释大豆提取物的样品mg数)。
Liu 2019测定了几种大豆制品中的典型胰蛋白酶抑制剂活性(其中1TU＝0.01A410)，结果如下。大豆(生)46.84±0.06TUI/mg样品；大豆粉(具有酶活性的，全脂)48.24±0.14TUI/mg样品；大豆粉(脱脂，PDI＝90)65.70±0.14TUI/mg样品；大豆粉(脱脂，PDI＝70)49.46±0.17TUI/mg样品；大豆粉(低脂)34.28±0.19TUI/mg样品；大豆(烤箱烘焙)6.30±0.22TUI/mg样品；大豆(煮熟)3.18±0.18TUI/mg样品；大豆粉(烘焙，全脂)9.68±0.32TUI/mg样品；大豆粉(脱脂，烘焙，PDI＝20)11.99±0.23TUI/mg样品；大豆蛋白浓缩物9.46±0.20TUI/mg样品；大豆蛋白分离物8.03±0.36TUI/mg样品。PDI＝蛋白质分散度指数。TUI＝胰蛋白酶抑制单位。
在某些实施方式中，当按照实施例3或Liu 2019的方法测定时，酶活性大豆制品具有大于10TUI/mg、大于20TUI/mg、大于30TUI/mg或大于40TUI/mg的胰蛋白酶抑制剂活性。在某些实施方式中，当按照AOCS标准程序Ba 10b-09测试时，大豆制品具有大于50、大于60或大于70的PDI。
实施例4.原型初乳组合物
使用用于超团聚、微胶囊化或基质稳定化的各种稳定剂制备原型稳定初乳组合物。在对照组合物A1中使用了市售6020I(速溶化)牛脱脂初乳，其具有1.8％总脂肪(根据AOAC 932.06)、64％蛋白质(干基)(根据AOAC991.20)和31.6％IgG(HPLC)蛋白G(干基)(根据AOAC 2010.01)。原型组合物分别示出在表2-4中，使用了相同的初乳和各种不同其他组分。
表2中示出的A2-A8原型通过修改用于处理初乳的正常团聚步骤来制备。进行团聚过程是为了速溶化，以确保粒度一致性，从而快速溶解在液体中。团聚过程从喷雾干燥过程开始，通过将初乳细粉输送回到经过喷雾干燥器喷嘴出来的液体初乳中。液体通过喷嘴输送到干燥室中，产生第一道粉剂。然后将那些细粉收集在袋式集尘室中，并输送回喷雾流中，直至粒度变得足够大以落入流化床(FB)中。然后使用FB来减少水分并添加所需的任何涂层例如卵磷脂、MCT等。1X是团聚的典型量。
表2.超团聚体初乳组合物
代码标识 原型 初乳wt％
A2 超团聚体-卵磷脂/MCT1X ND
A3 超团聚体-卵磷脂/MCT2X ND
A4 超团聚体-卵磷脂/MCT3X ND
A6 超团聚体-初乳脂肪1X ND
A7 超团聚体-初乳脂肪2X ND
A8 超团聚体-初乳脂肪3X ND
ND＝未确定
表3中示出的B1-B21原型如下制备：将粉状初乳悬浮在流化床装置中，在流化床装置将其用可商购包衣材料喷雾至一定的重量百分率。将选定的B原型筛分并测定粒度。B原型B5、B10、B16和B21的粒度在直径为149-594um的范围内。
表3.微胶囊化的初乳组合物
表4中所示的C1-C13原型具有混合到均质后初乳中的添加剂，然后喷雾干燥。每种添加剂测试了三种不同的包含率。
表4.基质稳定化初乳组合物
对表2-4中的原型组合物进行图1A中概述的消化过程方案。每种原型组合物在体外增殖测定中的生长因子活性测定(作为未消化的对照的％)、作为EGF(ng/ml)和TGF-β(pg/ml)的生长因子结构稳定性、作为大肠杆菌结合的体外免疫因子活性测定(A450 nm处的吸光度)以及作为IgG(ug/ml)和乳铁蛋白(ng/ml)的免疫因子结构稳定性的测定结果的数值热图示出在表9和表10中。图1D和图1E以及图2A至图2D示出了所选组合物的图形表示。对于图1D至图2D中的每种组合物来说，包含10％的所述的组合产物。因此，“BC+硬脂”对应于BC+10％的硬脂。
分别评估了海藻糖、硬脂、酪蛋白和大豆粉影响BC体外稳定性的能力。如图1D中所示，正如通过Alamar蓝测定法测量的，将单独的BC暴露于HCl/胃蛋白酶降低了BC的增殖生物活性，并且在暴露于CT后增殖进一步降低。BC与海藻糖、硬脂或酪蛋白的组合没有保存BC对HCl/胃蛋白酶或CT的增殖生物活性。然而，添加大豆粉确实保存了BC对HCl/胃蛋白酶和CT消化的增殖活性。在对BC稳定性的进一步评估中，评估了牛IgG与大肠杆菌的结合。如图1E中所示，将单独的BC暴露于HCl/胃蛋白酶降低了通过ELISA测定法测量的IgG：大肠杆菌结合，并且在暴露于CT后结合进一步降低。BC与硬脂的组合不影响HCl/胃蛋白酶消化，但确实提高了对CT消化的稳定性。BC与海藻糖的组合对HCl/胃蛋白酶或CT没有有益效果。然而，BC与酪蛋白或大豆的组合显著提高了对HCl/胃蛋白酶和CT消化的稳定性。
进一步分别评估了海藻糖、硬脂、酪蛋白和大豆粉影响生长因子和IgG免疫反应性的能力，作为它们对BC体外稳定性的影响的度量。IgG免疫反应性和所有生长因子免疫反应性均通过ELISA测量。如图2A中所示，将单独的BC暴露于HCl/胃蛋白酶降低了IgG免疫反应性，并且在CT存在下免疫反应性被进一步降低。BC和海藻糖的组合没有效果。BC和酪蛋白的组合减弱了由HCl/胃蛋白酶造成的免疫反应性丧失，但对由CT造成的免疫反应性丧失没有影响。硬脂的存在部分减少了HCl/胃蛋白酶和CT两者介导的免疫反应性丧失。BC和大豆粉的组合对HCl/胃蛋白酶和CT两者保存IgG免疫反应性方面最为有益。
关于生长因子，图2B显示了将单独的BC暴露于HCl/胃蛋白酶引起TGFβ免疫反应性的丧失，并且当将单独的BC暴露于CT时，TGFβ免疫反应性完全丧失。硬脂、海藻糖和酪蛋白都提高TGFβ免疫反应性对抗HCl/胃蛋白酶的稳定性，但对于对抗CT没有影响。相比之下，在大豆粉存在的情况下，BC在HCl/胃蛋白酶和CT暴露后仍维持其>90％的免疫反应性。图2C显示，将单独的BC暴露于HCl/胃蛋白酶引起EGF免疫反应性的丧失，并且暴露于CT导致EGF免疫反应性的进一步降低。在CT暴露时硬脂部分保存了BC，但对HCl/胃蛋白酶暴露的作用很小或没有作用。海藻糖和酪蛋白对HCl/胃蛋白酶和CT均无效。然而，在暴露于HCl/胃蛋白酶和CT两者后大豆粉在保存EGF免疫反应性的活性方面高度有效。图2D显示，将单独的BC暴露于HCl/胃蛋白酶引起乳铁蛋白免疫反应性的丧失，并且暴露于CT导致乳铁蛋白免疫反应性的进一步降低。硬脂在减少免疫反应性丧失方面无效，而海藻糖和酪蛋白截断了CT暴露后免疫反应性的丧失。然而，任一者在CT暴露后保存免疫反应性方面均无效。将大豆粉与BC共同包装提高了对暴露于HCl/胃蛋白酶和CT两者的稳定性。
也在各种测定法中测试了表2至表4的组合物，作为BC的体外生物活性和结构稳定性的度量。结果呈现在表5A至表5C中。
表5A.组合物A2-A8和B1-B8的数值热图。体外消化的样品中生长因子和免疫因子的生物活性和结构稳定性。
表5B.组合物B9-B21的数值热图。体外消化的样品中生长因子和免疫因子的生物活性和结构稳定性。
表5C.组合物C1-C13的数值热图。体外消化的样品中生长因子和免疫因子的生物活性和结构稳定性。
在体外生长因子活性测定中，与对照组合物A1相比，原型组合物B17、B18、B20和B21(17硬脂，氢化大豆油，10％、20％、40％、50％)、C5、C6(聚葡萄糖，15％和20％)、C8、C9(酪蛋白酸钙，5％和10％)以及C11、C12和C13(酶活性大豆粉，5％、10％、15％)表现出增殖(作为未消化的对照的％)的提高。
在生长因子结构稳定性测定中，与对照初乳A1相比，原型组合物A2、A3、A4(卵磷脂/MCT超团聚体，1X、2X、3X)、A7(初乳脂肪超团聚体，2X)、B1、B2、B3(海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体，10％、20％、30％)、B6、B7、B8(Protect ENTM，海藻酸盐加虫胶，10％、20％、30％)、B13、B15(EudraguardTM，海藻酸盐加玉米淀粉，20％、40％)、B17、B18、B19、B21(硬脂17、氢化植物油，10％、20％、30％、50％)、C1、C2、C3(海藻糖，10％、15％、20％)、C4、C5、C6(聚葡萄糖，10％、15％、20％)、C8、C9、C10(酪蛋白酸钙，5％、10％、15％)以及C11、C12、C13(酶活性大豆粉，5％、10％、15％)表现出EGF(mg/ml)稳定性的提高。
在生长因子结构稳定性测定中，与对照初乳A1相比，原型组合物A2、A4(卵磷脂/MCT超团聚体，1X、3X)、A6、A7(初乳脂肪超团聚体，1X、2X)、C1、C2、C3(海藻糖，10％、15％、20％)、C5(聚葡萄糖，15％)、C11、C12、C13(酶活性大豆粉，5％、10％、15％)表现出TGFβ(mg/ml)稳定性的提高。
在体外免疫因子活性测定中，与对照初乳A1相比，原型组合物A6、A7、A8(初乳脂肪超团聚体，1X、2X、3X)、B17(硬脂微胶囊化，10％)、C1、C2、C3(海藻糖基质稳定化，10％、15％、20％)、C4、C5(聚葡萄糖基质稳定化，10％、15％)、C8、C9、C10(酪蛋白酸钙基质稳定化，5％、10％、15％)和C12(酶活性大豆粉，10％)表现出大肠杆菌结合(A450 nm)的提高。
在免疫因子结构稳定性测定中，与对照初乳A1相比，原型组合物A8(初乳脂肪超团聚体，3X)、B17、B18(硬脂微胶囊化，10％、20％)、C1(海藻糖基质稳定化，10％)、C4、C5(聚葡萄糖基质稳定化，10％、15％)、C8、C9(酪蛋白酸钙基质稳定化，5％、10％)、C11、C12(酶活性大豆粉，5％、10％)表现出IgG(ug/ml)结构稳定性的提高。
在因子结构稳定性测定中，与对照初乳A1相比，原型组合物A3(卵磷脂/MCT超团聚体)、A8(初乳脂肪超团聚体，3X)、B3(Nutrateric，海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体，30％)、B8(Protect ENTM微胶囊化，海藻酸盐加虫胶，30％)、C5(聚葡萄糖基质稳定化，15％)、C8、C9(酪蛋白酸钙，5％、10％)和C12(酶活性大豆粉，10％)表现出乳铁蛋白(ug/ml)结构稳定性的提高。
实施例5.耐酸胶囊对抗酸/胃蛋白酶消化提供保护
将如上所述的单独全初乳、初乳+蛋和单独的蛋粉用耐酸胶囊(bioVXR耐酸HPMC胶囊，BioCaps,El Monte,CA)或常规胶囊(牛明胶)包封。对包封的组合物进行图1A中概述的消化过程方案。简单来说，使样品在旋转温箱中在37℃下经历1mg/mL酸/胃蛋白酶处理1小时。添加氢氧化钠以中和样品，并留取一半的样品(P)。使另一半的(P)样品在旋转温箱中在37℃下经历1mg/ml胰凝乳蛋白酶/胰蛋白酶消化1h。该样品被标记为CT。在如上文详述的使用AGS细胞的体外增殖测定中，将样品(P)和(CT)各自与未消化的样品(U)进行比较。
如图8中所示，耐酸胶囊改进了初乳、初乳+蛋和单独的蛋粉向小肠的递送(即在胃消化后存活率为约90％，相比于在非耐酸常规胶囊中的约50％)，这使得向胰蛋白酶/胰凝乳蛋白酶阶段递送得更多，因此在CT消化后剩余的量约为在正常非耐酸胶囊中的3倍高。因此，与常规非耐酸胶囊相比，耐酸胶囊向肠消化阶段递送更多的完整初乳，因此剩余量更多，如通过AGS细胞中增殖(％)活性的提高所显示的。
实施例6.胰蛋白酶抑制剂测定
使用基于Erlander等的方法的标准Na-苯甲酰基-DL-精氨酸-对硝基苯胺(BAPNA)胰蛋白酶抑制剂测定法，对所有样品进行胰蛋白酶抑制剂测定评估。
包含初乳和酶活性大豆粉的组合物的制备示出在表5中。调查了每种材料的胰蛋白酶抑制剂(TI)活性。具体而言，测定了单独的促修复因子初乳(C7)、营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂酶活性全脂大豆粉(C17)和稳定剂酪蛋白酸钙(C16)以及大豆粉和初乳的各种组合的的TI活性。
使用基于Erlander等，“胰蛋白酶的两种新显色底物的制备和性质”(ThePreparation and Properties ofTwo New Chromogenic Substrates ofTrypsin)，Archives ofBiochemistry andBiophysics,95:2:第271-278页(1961)的方法的标准Na-苯甲酰基-DL-精氨酸-对硝基苯胺(BAPNA)胰蛋白酶抑制测定法来评估胰蛋白酶抑制剂活性。所述测定如下进行：将170μl样品(在测定缓冲液50mM Tris–HCl，pH 8，20mM CaCl2中稀释)与20μg胰蛋白酶(在100mM HCl，T9253，Merck Life Sciences中配制)混合，并添加1mL0.3mg/mL BAPNA(溶解在DMSO中，并在预热至37℃的测定缓冲液中稀释，B4875，Merck LifeSciences)。将样品在37℃下温育10分钟，并通过添加143μl 30％乙酸终止反应。使用微孔板读板器在405nm处测量对硝基苯胺的形成。通过添加100mM HCl代替胰蛋白酶，为每个样品制备空白对照。
还确定了三个不同批次的酶活性全脂大豆粉(Easy 100，Natural Products,Inc.,Grinnell,Iowa)S1、S2和S3的胰蛋白酶抑制剂活性。初乳/大豆粉的三种混合物包括5wt％大豆粉/95wt％初乳(C11)、10wt％大豆粉/90wt％初乳(C12)和15wt％大豆粉/85wt％初乳(C13)，如表6中所示来制备，并在TI测定之前喷雾干燥。测量液体初乳的固体％，并在总固体(初乳加大豆)百分率的基础上计算添加的大豆量。因此，例如C12(批次11)具有总共800克固体，其中～80g是大豆粉，720g是初乳。每个批量使用4.0kg液体初乳，其中包括水82％、18％固体、以及固体0.72kg。
表6.包含初乳+酶活性大豆粉的组合物
胰蛋白酶抑制剂测定的结果示出在表7中。使用适合的空白对样品进行一式两份的分析。样品的剂量响应曲线显示出结果的线性。
表7.胰蛋白酶抑制剂测定的结果
理论结果是根据单独添加的子组分的预期贡献推导得出的。正如可以在表7中看到的，当将大豆与初乳组合时观察到约为预期TI活性的25％的出人意料的协同响应，这表明这两种组分以互补方式工作以增强胰蛋白酶抑制活性。
还基于如上所述的Erlander的方法评估了组合产品硬脂、海藻糖、酪蛋白和大豆粉的胰蛋白酶抑制剂活性。结果示出在表8中。
表8.单独和组合测试的组合产品的胰蛋白酶抑制剂活性
正如可以在表8中看到的，在单独测试时，硬脂和海藻糖具有可忽略量的TI活性。当每种组分单独测试时，基于每mg，大豆粉的TI活性是酪蛋白的12倍，是BC活性的5倍。令人惊讶的是，当将BC分别与酪蛋白或大豆粉组合时，观察到预期TI活性的约21％和约57％的出人意料的协同响应，这表明这两种组分以互补方式工作以增强胰蛋白酶抑制活性。
使用基于Erlander等的方法的标准Na-苯甲酰基-DL-精氨酸-对硝基苯胺(BAPNA)胰蛋白酶抑制测定法，评估了牛初乳(BC)、蛋、BC+蛋、卵类粘蛋白和SBTI样品的胰蛋白酶抑制剂活性。结果示出在表9中。使用适合的空白对样品一式两份进行分析。样品的剂量响应曲线显示出结果呈线性。结果表示为平均值+/-sem。
表9.胰蛋白酶抑制剂测定的进一步结果
样品 被1mg样品抑制的胰蛋白酶的μg
BC 7.41+/-0.44
蛋 42.93+/-4.41
BC+蛋 19.44+/-0.99
EGF 1.43+/-0.12
卵类粘蛋白 702.54+/-7.52
SBTI 838.0+/-8.94
如表9中所示，营养性丝氨酸蛋白酶抑制剂卵类粘蛋白和SBTI具有强的胰蛋白酶抑制剂活性，蛋和BC具有中等活性，而EGF几乎不具有胰蛋白酶抑制活性。
序列表
<110> 潘思瑞公司
雷蒙德·约翰·普莱福德
迈克尔·詹姆斯·维瑟
塔尼亚·马奇班克
桑德拉·约翰娜·玛丽亚·滕布鲁根卡特
乔治·斯塔尼蒂
<120> 稳定的初乳组合物
<130> 40735.0056USP1
<140> 新提交
<141> 2021-02-26
<160> 25
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 181
<212> PRT
<213> 栽培大豆（Glycine max）
<400> 1
Asp Phe Val Leu Asp Asn Glu Gly Asn Pro Leu Glu Asn Gly Gly Thr
1 5 10 15
Tyr Tyr Ile Leu Ser Asp Ile Thr Ala Phe Gly Gly Ile Arg Ala Ala
20 25 30
Pro Thr Gly Asn Glu Arg Cys Pro Leu Thr Val Val Gln Ser Arg Asn
35 40 45
Glu Leu Asp Lys Gly Ile Gly Thr Ile Ile Ser Ser Pro Tyr Arg Ile
50 55 60
Arg Phe Ile Ala Glu Gly His Pro Leu Ser Leu Lys Phe Asp Ser Phe
65 70 75 80
Ala Val Ile Met Leu Cys Val Gly Ile Pro Thr Glu Trp Ser Val Val
85 90 95
Glu Asp Leu Pro Glu Gly Pro Ala Val Lys Ile Gly Glu Asn Lys Asp
100 105 110
Ala Met Asp Gly Trp Phe Arg Leu Glu Arg Val Ser Asp Asp Glu Phe
115 120 125
Asn Asn Tyr Lys Leu Val Phe Cys Pro Gln Gln Ala Glu Asp Asp Lys
130 135 140
Cys Gly Asp Ile Gly Ile Ser Ile Asp His Asp Asp Gly Thr Arg Arg
145 150 155 160
Leu Val Val Ser Lys Asn Lys Pro Leu Val Val Gln Phe Gln Lys Leu
165 170 175
Asp Lys Glu Ser Leu
180
<210> 2
<211> 181
<212> PRT
<213> 栽培大豆（Glycine max）
<400> 2
Asp Phe Val Leu Asp Asn Glu Gly Asn Pro Leu Glu Asn Gly Gly Thr
1 5 10 15
Tyr Tyr Ile Leu Ser Asp Ile Thr Ala Phe Gly Gly Ile Arg Ala Ala
20 25 30
Pro Thr Gly Asn Glu Arg Cys Pro Leu Thr Val Val Gln Ser Arg Asn
35 40 45
Glu Leu Asp Lys Gly Ile Gly Thr Ile Ile Ser Ser Pro Tyr Arg Ile
50 55 60
Arg Phe Ile Ala Glu Gly His Pro Leu Ser Leu Lys Phe Asp Ser Phe
65 70 75 80
Ala Val Ile Met Leu Cys Val Gly Ile Pro Thr Glu Trp Ser Val Val
85 90 95
Glu Asp Leu Pro Glu Gly Pro Ala Val Lys Ile Gly Glu Asn Lys Asp
100 105 110
Ala Met Asp Gly Trp Phe Arg Leu Glu Arg Val Ser Asp Asp Glu Phe
115 120 125
Asn Asn Tyr Lys Leu Val Phe Cys Pro Gln Gln Ala Glu Asp Asp Lys
130 135 140
Cys Gly Asp Ile Gly Ile Ser Ile Asp His Asp Asp Gly Thr Arg Arg
145 150 155 160
Leu Val Val Ser Lys Asn Lys Pro Leu Val Val Gln Phe Gln Lys Leu
165 170 175
Asp Lys Glu Ser Leu
180
<210> 3
<211> 181
<212> PRT
<213> 栽培大豆（Glycine max）
<400> 3
Asp Phe Val Leu Asp Asn Glu Gly Asn Pro Leu Glu Asn Gly Gly Thr
1 5 10 15
Tyr Tyr Ile Leu Ser Asp Ile Thr Ala Phe Gly Gly Ile Arg Ala Ala
20 25 30
Pro Thr Gly Asn Glu Arg Cys Pro Leu Thr Val Val Gln Ser Arg Asn
35 40 45
Glu Leu Asp Lys Gly Ile Gly Thr Ile Ile Ser Ser Pro Tyr Arg Ile
50 55 60
Arg Phe Ile Ala Glu Gly His Pro Leu Ser Leu Lys Phe Asp Ser Phe
65 70 75 80
Ala Val Ile Met Leu Cys Val Gly Ile Pro Thr Glu Trp Ser Val Val
85 90 95
Glu Asp Leu Pro Glu Gly Pro Ala Val Lys Ile Gly Glu Asn Lys Asp
100 105 110
Ala Met Asp Gly Trp Phe Arg Leu Glu Arg Val Ser Asp Asp Glu Phe
115 120 125
Asn Asn Tyr Lys Leu Val Phe Cys Pro Gln Gln Ala Glu Asp Asp Lys
130 135 140
Cys Gly Asp Ile Gly Ile Ser Ile Asp His Asp Asp Gly Thr Arg Arg
145 150 155 160
Leu Val Val Ser Lys Asn Lys Pro Leu Val Val Gln Phe Gln Lys Leu
165 170 175
Asp Lys Glu Ser Leu
180
<210> 4
<211> 181
<212> PRT
<213> 栽培大豆（Glycine max）
<400> 4
Asp Phe Val Leu Asp Asn Glu Gly Asn Pro Leu Glu Asn Gly Gly Thr
1 5 10 15
Tyr Tyr Ile Leu Ser Asp Ile Thr Ala Phe Gly Gly Ile Arg Ala Ala
20 25 30
Pro Thr Gly Asn Glu Arg Cys Pro Leu Thr Val Val Gln Ser Arg Asn
35 40 45
Glu Leu Asp Lys Gly Ile Glu Thr Ile Ile Ser Ser Pro Tyr Arg Ile
50 55 60
Arg Phe Ile Ala Glu Gly His Pro Leu Ser Leu Lys Phe Asp Ser Phe
65 70 75 80
Ala Val Ile Met Leu Cys Val Gly Ile Pro Thr Glu Trp Ser Val Val
85 90 95
Glu Asp Leu Pro Glu Gly Pro Ala Val Lys Ile Gly Glu Asn Lys Asp
100 105 110
Ala Met Asp Gly Trp Phe Arg Leu Glu Arg Val Ser Asp Asp Glu Phe
115 120 125
Asn Asn Tyr Lys Leu Val Phe Cys Pro Gln Gln Ala Glu Asp Asp Lys
130 135 140
Cys Gly Asp Ile Gly Ile Ser Ile Asp His Asp Asp Gly Thr Arg Arg
145 150 155 160
Leu Val Val Ser Lys Asn Lys Pro Leu Val Val Gln Phe Gln Lys Leu
165 170 175
Asp Lys Glu Ser Leu
180
<210> 5
<211> 210
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 5
Met Ala Met Ala Gly Val Phe Val Leu Phe Ser Phe Val Leu Cys Gly
1 5 10 15
Phe Leu Pro Asp Ala Ala Phe Gly Ala Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe
20 25 30
Pro Asn Ala Thr Asp Lys Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Asn Lys
35 40 45
Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Thr Asn Asp
50 55 60
Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Ser Ile Glu Phe Gly Thr Asn Ile Ser Lys
65 70 75 80
Glu His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Thr Val Pro Met Asn Cys Ser Ser
85 90 95
Tyr Ala Asn Thr Thr Ser Glu Asp Gly Lys Val Met Val Leu Cys Asn
100 105 110
Arg Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn
115 120 125
Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Lys Val Glu Gln Gly Ala Ser Val Asp
130 135 140
Lys Arg His Asp Gly Gly Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val
145 150 155 160
Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Asp Cys Thr Ala Glu Asp Arg Pro
165 170 175
Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys
180 185 190
Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly
195 200 205
Lys Cys
210
<210> 6
<211> 208
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 6
Met Ala Met Ala Gly Val Phe Val Leu Phe Ser Phe Val Leu Cys Gly
1 5 10 15
Phe Leu Pro Asp Ala Ala Phe Gly Ala Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe
20 25 30
Pro Asn Ala Thr Asp Lys Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Asn Lys
35 40 45
Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Thr Asn Asp
50 55 60
Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Ser Ile Glu Phe Gly Thr Asn Ile Ser Lys
65 70 75 80
Glu His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Thr Val Pro Met Asn Cys Ser Ser
85 90 95
Tyr Ala Asn Thr Thr Ser Glu Asp Gly Lys Val Met Val Leu Cys Asn
100 105 110
Arg Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn
115 120 125
Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Lys Val Glu Gln Gly Ala Ser Val Asp
130 135 140
Lys Arg His Asp Gly Gly Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Asp Cys
145 150 155 160
Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Asp Cys Thr Ala Glu Asp Arg Pro Leu Cys
165 170 175
Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala
180 185 190
Val Val Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 7
<211> 210
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 7
Met Ala Met Ala Gly Val Phe Val Leu Phe Ser Phe Val Leu Cys Gly
1 5 10 15
Phe Leu Pro Asp Ala Val Phe Gly Ala Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe
20 25 30
Pro Asn Ala Thr Asp Met Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Asn Lys
35 40 45
Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Thr Asn Asp
50 55 60
Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Ser Val Glu Phe Gly Thr Asn Ile Ser Lys
65 70 75 80
Glu His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Thr Val Pro Met Asn Cys Ser Ser
85 90 95
Tyr Ala Asn Thr Thr Ser Glu Asp Gly Lys Val Met Val Leu Cys Asn
100 105 110
Arg Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn
115 120 125
Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Lys Val Glu Gln Gly Ala Ser Val Asp
130 135 140
Lys Arg His Asp Gly Gly Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val
145 150 155 160
Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Asp Cys Thr Ala Glu Asp Arg Pro
165 170 175
Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys
180 185 190
Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly
195 200 205
Lys Cys
210
<210> 8
<211> 186
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 8
Ala Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Ala Thr Asp Lys Glu Gly
1 5 10 15
Lys Asp Val Leu Val Cys Asn Lys Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr
20 25 30
Asp Gly Val Thr Tyr Asn Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Ser Ile
35 40 45
Glu Phe Gly Thr Asn Ile Ser Lys Glu His Asp Gly Glu Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Val Pro Met Asn Cys Ser Ser Tyr Ala Asn Thr Thr Ser Glu Asp
65 70 75 80
Gly Lys Val Met Val Leu Cys Asn Arg Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly
85 90 95
Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Lys
100 105 110
Val Glu Gln Gly Ala Ser Val Asp Lys Arg His Asp Gly Glu Cys Arg
115 120 125
Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro
130 135 140
Asp Cys Thr Ala Glu Asp Arg Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr
145 150 155 160
Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
180 185
<210> 9
<211> 208
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 9
Met Ala Met Ala Gly Val Phe Val Leu Phe Ser Phe Val Leu Cys Gly
1 5 10 15
Phe Leu Pro Asp Ala Ala Phe Gly Ala Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe
20 25 30
Pro Asn Ala Thr Asp Lys Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Asn Lys
35 40 45
Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Thr Asn Asp
50 55 60
Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Ser Ile Glu Phe Gly Thr Asn Ile Ser Lys
65 70 75 80
Glu His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Thr Val Pro Met Asn Cys Ser Ser
85 90 95
Tyr Ala Asn Thr Thr Ser Glu Asp Gly Lys Val Met Val Leu Cys Asn
100 105 110
Arg Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn
115 120 125
Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Lys Val Glu Gln Gly Ala Ser Val Asp
130 135 140
Lys Arg His Asp Gly Gly Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Asp Cys
145 150 155 160
Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Asp Cys Thr Ala Glu Asp Arg Pro Leu Cys
165 170 175
Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala
180 185 190
Val Val Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 10
<211> 210
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 10
Met Ala Met Ala Gly Val Phe Val Leu Phe Ser Phe Val Leu Cys Gly
1 5 10 15
Phe Leu Pro Asp Ala Ala Phe Gly Ala Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe
20 25 30
Pro Asn Ala Thr Asp Lys Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Asn Lys
35 40 45
Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Thr Asn Asp
50 55 60
Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Ser Ile Glu Phe Gly Thr Asn Ile Ser Lys
65 70 75 80
Glu His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Thr Val Pro Met Asn Cys Ser Ser
85 90 95
Tyr Ala Asn Thr Thr Ser Glu Asp Gly Lys Val Met Val Leu Cys Asn
100 105 110
Arg Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn
115 120 125
Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Lys Val Glu Gln Gly Ala Ser Val Asp
130 135 140
Lys Arg His Asp Gly Gly Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val
145 150 155 160
Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Asp Cys Thr Ala Glu Asp Arg Pro
165 170 175
Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys
180 185 190
Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly
195 200 205
Lys Cys
210
<210> 11
<211> 209
<212> PRT
<213> 普通火鸡（Meleagris gallopavo）
<400> 11
Met Ala Met Ala Gly Ile Phe Val Leu Phe Ser Phe Ala Leu Cys Gly
1 5 10 15
Phe Leu Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe
20 25 30
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Thr Glu
35 40 45
Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr His Ser Glu Cys
50 55 60
Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys Glu
65 70 75 80
His Asp Gly Glu Cys Arg Glu Ala Val Pro Met Asp Cys Ser Arg Tyr
85 90 95
Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Val Met Ile Leu Cys Asn Lys
100 105 110
Ala Leu Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu
115 120 125
Cys Val Leu Cys Ala His Asn Leu Glu Gln Gly Thr Ser Val Gly Lys
130 135 140
Lys His Asp Gly Gly Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Ser Val Asp
145 150 155 160
Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Ala Cys Thr Leu Glu Tyr Arg Pro Leu
165 170 175
Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn
180 185 190
Ala Val Val Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys
195 200 205
Cys
<210> 12
<211> 185
<212> PRT
<213> 普通火鸡（Meleagris gallopavo）
<400> 12
Val Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly
1 5 10 15
Lys Asp Val Leu Val Cys Thr Glu Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr
20 25 30
Asp Gly Val Thr His Ser Glu Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu
35 40 45
Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys Glu His Asp Gly Glu Cys Arg Glu Ala
50 55 60
Val Pro Met Asp Cys Ser Arg Tyr Pro Asn Thr Thr Ser Glu Glu Gly
65 70 75 80
Lys Val Met Ile Leu Cys Asn Lys Ala Leu Asn Pro Val Cys Gly Thr
85 90 95
Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Val Leu Cys Ala His Asn Leu
100 105 110
Glu Gln Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys His Asp Gly Glu Cys Arg Lys
115 120 125
Glu Leu Ala Ala Val Ser Val Asp Cys Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Ala
130 135 140
Cys Thr Leu Glu Tyr Arg Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr
145 150 155 160
Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Glu Ser Asn Gly Thr
165 170 175
Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
180 185
<210> 13
<211> 208
<212> PRT
<213> 头盔珍珠鸡（Numida meleagris）
<400> 13
Met Ala Met Ala Gly Val Phe Val Leu Phe Ser Phe Ala Leu Cys Gly
1 5 10 15
Phe Leu Pro Asp Ala Ala Phe Gly Val Glu Val Asp Cys Ser Arg Phe
20 25 30
Pro Asn Ala Thr Asn Glu Glu Gly Lys Asp Val Leu Val Cys Thr Glu
35 40 45
Asp Leu Arg Pro Ile Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser Asn Asp
50 55 60
Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys
65 70 75 80
Glu His Asp Gly Glu Cys Arg Glu Ala Val Pro Val Asp Cys Ser Arg
85 90 95
Tyr Pro Asn Met Thr Ser Glu Glu Gly Lys Val Leu Ile Leu Cys Asn
100 105 110
Lys Ala Phe Asn Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn
115 120 125
Glu Cys Leu Leu Cys Ala His Asn Val Glu Gln Gly Thr Ser Val Gly
130 135 140
Lys Lys His Asp Gly Glu Cys Arg Lys Glu Leu Ala Ala Val Asp Cys
145 150 155 160
Ser Glu Tyr Pro Lys Pro Ala Cys Thr Met Glu Tyr Arg Pro Leu Cys
165 170 175
Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Asp Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala
180 185 190
Val Val Glu Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly Lys Cys
195 200 205
<210> 14
<211> 171
<212> PRT
<213> 绿头鸭（Anas platyrhynchos）
<400> 14
Gln Val Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys
1 5 10 15
Glu Val Leu Leu Cys Thr Lys Glu Leu Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp
20 25 30
Gly Val Thr Tyr Ser Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu
35 40 45
Tyr Gly Thr Asn Ile Ser Lys Asp His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Ala
50 55 60
Val Pro Ala Asp Cys Ser Met Tyr Pro Asn Met Thr Asn Glu Glu Gly
65 70 75 80
Lys Met Thr Leu Leu Cys Asn Lys Met Phe Ser Pro Val Cys Gly Thr
85 90 95
Asp Gly Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Met Leu Cys Ala His Asn Val
100 105 110
Glu Gln Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys Tyr Asp Gly Lys Cys Lys Lys
115 120 125
Glu Val Ala Thr Val Ser Val Asp Cys Ser Gly Tyr Pro Lys Pro Ala
130 135 140
Cys Thr Met Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr
145 150 155 160
Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val
165 170
<210> 15
<211> 77
<212> PRT
<213> 绿头鸭（Anas platyrhynchos）
<400> 15
Met Arg Thr Ala Gly Val Val Val Leu Leu Ala Leu Ala Leu Cys Cys
1 5 10 15
Cys Pro Asp Thr Val Ala Leu Lys Gly Tyr Cys Ser Asn Tyr Val Val
20 25 30
Pro Arg Asn Phe Cys Thr Leu Glu Tyr Ile Pro His Cys Gly Ser Asp
35 40 45
Gly Val Thr Tyr Ala Asn Lys Cys Leu Phe Cys Asn Ala Phe Leu Arg
50 55 60
Ser Arg Arg Thr Leu Arg Leu Leu Tyr Leu Arg Glu Cys
65 70 75
<210> 16
<211> 54
<212> PRT
<213> 绿头鸭（Anas platyrhynchos）
<400> 16
Val Ala Thr Val Asp Cys Ser Gly Tyr Pro Lys Pro Ala Cys Thr Met
1 5 10 15
Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys
20 25 30
Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu
35 40 45
Ser His Phe Gly Glu Cys
50
<210> 17
<211> 54
<212> PRT
<213> 绿头鸭（Anas platyrhynchos）
<400> 17
Val Ala Thr Val Asp Cys Ser Gly Tyr Pro Lys Pro Ala Cys Thr Met
1 5 10 15
Glu Tyr Met Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys
20 25 30
Cys Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu
35 40 45
Ser His Phe Gly Glu Cys
50
<210> 18
<211> 226
<212> PRT
<213> 绿头鸭（Anas platyrhynchos）
<400> 18
Met Val Leu Ser Val Leu Pro Pro Phe Thr Gln Val Thr Leu Ala Gln
1 5 10 15
Gly His Gly Ala Leu Thr Cys Cys Pro Arg His Pro Glu Thr Cys Pro
20 25 30
Glu Leu Glu Arg Ser Thr Ser Trp Arg Gly Ile Lys Val Asp Cys Ser
35 40 45
Arg Phe Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val Leu Leu Cys
50 55 60
Thr Lys Glu Leu Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr Ser
65 70 75 80
Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly Thr Asn Ile
85 90 95
Ser Lys Asp His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Ala Val Pro Ala Asp Cys
100 105 110
Ser Met Tyr Pro Asn Met Thr Asn Glu Glu Gly Lys Met Thr Leu Leu
115 120 125
Cys Asn Lys Met Phe Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val Thr Tyr
130 135 140
Asp Asn Glu Cys Met Leu Cys Ala His Asn Val Glu Gln Gly Thr Ser
145 150 155 160
Val Gly Lys Lys Tyr Asp Gly Lys Cys Lys Lys Glu Val Ala Thr Val
165 170 175
Asp Cys Ser Gly Tyr Pro Lys Pro Ala Cys Thr Met Glu Tyr Met Pro
180 185 190
Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys Asn Phe Cys
195 200 205
Asn Ala Val Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser His Phe Gly
210 215 220
Glu Cys
225
<210> 19
<211> 245
<212> PRT
<213> 绿头鸭（Anas platyrhynchos）
<400> 19
Met Ile Ser Thr Ser Ser Gly Gln Leu Gln Asp Asn Ile Ser Cys Ile
1 5 10 15
Thr Ser Lys Leu Pro Ser Leu Val Leu Pro Pro Phe Thr Gln Val Thr
20 25 30
Leu Ala Gln Gly His Gly Ala Leu Thr Cys Cys Pro Arg His Pro Glu
35 40 45
Thr Cys Pro Glu Leu Glu Arg Ser Thr Ser Trp Arg Gly Ile Lys Val
50 55 60
Asp Cys Ser Arg Phe Pro Asn Thr Thr Asn Glu Glu Gly Lys Glu Val
65 70 75 80
Leu Leu Cys Thr Lys Glu Leu Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly Val
85 90 95
Thr Tyr Ser Asn Glu Cys Leu Leu Cys Ala Tyr Asn Ile Glu Tyr Gly
100 105 110
Thr Asn Ile Ser Lys Asp His Asp Gly Glu Cys Lys Glu Ala Val Pro
115 120 125
Ala Asp Cys Ser Met Tyr Pro Asn Met Thr Asn Glu Glu Gly Lys Met
130 135 140
Thr Leu Leu Cys Asn Lys Met Phe Ser Pro Val Cys Gly Thr Asp Gly
145 150 155 160
Val Thr Tyr Asp Asn Glu Cys Met Leu Cys Ala His Asn Val Glu Gln
165 170 175
Gly Thr Ser Val Gly Lys Lys Tyr Asp Gly Lys Cys Lys Lys Glu Val
180 185 190
Ala Thr Val Asp Cys Ser Gly Tyr Pro Lys Pro Ala Cys Thr Met Glu
195 200 205
Tyr Met Pro Leu Cys Gly Ser Asp Asn Lys Thr Tyr Gly Asn Lys Cys
210 215 220
Asn Phe Cys Asn Ala Val Val Asp Ser Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser
225 230 235 240
His Phe Gly Glu Cys
245
<210> 20
<211> 42
<212> PRT
<213> 栽培大豆（Glycine max）
<400> 20
Asp Asp Glu Ser Ser Lys Pro Cys Cys Asp Gln Cys Ala Cys Thr Lys
1 5 10 15
Ser Asn Pro Pro Gln Cys Arg Cys Ser Asp Met Arg Leu Asn Ser Cys
20 25 30
His Ser Ala Cys Lys Ser Cys Ile Cys Ala
35 40
<210> 21
<211> 35
<212> PRT
<213> 栽培大豆（Glycine max）
<400> 21
Lys Ser Cys Ile Cys Ala Leu Ser Tyr Pro Ala Gln Cys Phe Cys Val
1 5 10 15
Asp Ile Thr Asp Phe Cys Tyr Glu Pro Cys Lys Pro Ser Glu Asp Asp
20 25 30
Lys Glu Asn
35
<210> 22
<211> 110
<212> PRT
<213> 栽培大豆（Glycine max）
<400> 22
Met Val Val Leu Lys Val Cys Leu Val Leu Leu Phe Leu Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Thr Ser Ala Asn Leu Arg Leu Ser Lys Leu Gly Leu Leu Met Lys
20 25 30
Ser Asp His Gln His Ser Asn Asp Asp Glu Ser Ser Lys Pro Cys Cys
35 40 45
Asp Gln Cys Ala Cys Thr Lys Ser Asn Pro Pro Gln Cys Arg Cys Ser
50 55 60
Asp Met Arg Leu Asn Ser Cys His Ser Ala Cys Lys Ser Cys Ile Cys
65 70 75 80
Ala Leu Ser Tyr Pro Ala Gln Cys Phe Cys Val Asp Ile Thr Asp Phe
85 90 95
Cys Tyr Glu Pro Cys Lys Pro Ser Glu Asp Asp Lys Glu Asn
100 105 110
<210> 23
<211> 118
<212> PRT
<213> 栽培大豆（Glycine max）
<400> 23
Met Gly Leu Lys Asn Asn Met Val Val Leu Lys Val Cys Leu Val Leu
1 5 10 15
Leu Phe Leu Val Gly Gly Thr Thr Ser Ala Asn Leu Arg Leu Ser Lys
20 25 30
Leu Gly Leu Leu Met Lys Ser Asp His His Gln His Ser Asn Asp Asp
35 40 45
Glu Ser Ser Lys Pro Cys Cys Asp Gln Cys Ala Cys Thr Lys Ser Asn
50 55 60
Pro Pro Gln Cys Arg Cys Ser Asp Met Arg Leu Asn Ser Cys His Ser
65 70 75 80
Ala Cys Lys Ser Cys Ile Cys Ala Leu Ser Tyr Pro Ala Gln Cys Phe
85 90 95
Cys Val Asp Ile Thr Asp Phe Cys Tyr Glu Pro Cys Lys Pro Ser Glu
100 105 110
Asp Asp Lys Glu Asn Tyr
115
<210> 24
<211> 217
<212> PRT
<213> 栽培大豆（Glycine max）
<400> 24
Met Lys Ser Thr Ile Phe Phe Leu Phe Ala Leu Phe Cys Ala Phe Thr
1 5 10 15
Thr Ser Tyr Leu Pro Ser Ala Ile Ala Asp Phe Val Leu Asp Asn Glu
20 25 30
Gly Asn Pro Leu Glu Asn Gly Gly Thr Tyr Tyr Ile Leu Ser Asp Ile
35 40 45
Thr Ala Phe Gly Gly Ile Arg Ala Ala Pro Thr Gly Asn Glu Arg Cys
50 55 60
Pro Leu Thr Val Val Gln Ser Arg Asn Glu Leu Asp Lys Gly Ile Gly
65 70 75 80
Thr Ile Ile Ser Ser Pro Tyr Arg Ile Arg Phe Ile Ala Glu Gly His
85 90 95
Pro Leu Ser Leu Lys Phe Asp Ser Phe Ala Val Ile Met Leu Cys Val
100 105 110
Gly Ile Pro Thr Glu Trp Ser Val Val Glu Asp Leu Pro Glu Gly Pro
115 120 125
Ala Val Lys Ile Gly Glu Asn Lys Asp Ala Met Asp Gly Trp Phe Lys
130 135 140
Leu Glu Arg Val Ser Asp Asp Glu Phe Asn Asn Tyr Lys Leu Val Phe
145 150 155 160
Cys Pro Gln Gln Ala Glu Asp Asp Lys Cys Gly Asp Ile Gly Ile Ser
165 170 175
Ile Asp His Asp Asp Gly Thr Arg Arg Leu Val Val Ser Lys Asn Lys
180 185 190
Pro Leu Val Val Gln Phe Gln Lys Leu Asp Lys Glu Ser Leu Ala Lys
195 200 205
Lys Asn His Gly Leu Ser Arg Ser Glu
210 215
<210> 25
<211> 217
<212> PRT
<213> 野生大豆（Glycine soja）
<400> 25
Met Lys Ser Thr Ile Phe Phe Ala Leu Phe Leu Phe Cys Ala Phe Thr
1 5 10 15
Thr Ser Tyr Leu Pro Ser Ala Ile Ala Asp Phe Val Leu Asp Asn Glu
20 25 30
Gly Asn Pro Leu Glu Asn Gly Gly Thr Tyr Tyr Ile Leu Ser Asp Ile
35 40 45
Thr Ala Phe Gly Gly Ile Arg Ala Ala Pro Thr Gly Asn Glu Arg Cys
50 55 60
Pro Leu Thr Val Val Gln Ser Arg Asn Glu Leu Asp Lys Gly Ile Gly
65 70 75 80
Thr Ile Ile Ser Ser Pro Tyr Arg Ile Arg Phe Ile Ala Glu Gly His
85 90 95
Pro Leu Ser Leu Lys Phe Asp Ser Phe Ala Val Ile Met Leu Cys Ala
100 105 110
Gly Ile Pro Thr Glu Trp Ser Val Val Glu Asp Leu Pro Glu Gly Pro
115 120 125
Ala Val Lys Ile Gly Glu Asn Lys Asp Ala Met Asp Gly Trp Phe Arg
130 135 140
Leu Glu Arg Val Ser Asp Asp Glu Phe Asn Asn Tyr Lys Leu Val Phe
145 150 155 160
Cys Pro Gln Gln Ala Glu Asp Asp Lys Cys Gly Asp Ile Gly Ile Ser
165 170 175
Ile Asp His Asp Asp Gly Thr Arg Arg Leu Val Val Ser Lys Asn Lys
180 185 190
Pro Leu Val Val Gln Phe Gln Lys Leu Asp Lys Glu Ser Leu Ala Lys
195 200 205
Lys Asn His Gly Leu Ser Arg Ser Glu
210 215

Claims (87)

1.一种组合物，其包含促修复因子、营养性蛋白酶抑制剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物进一步包含稳定剂。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述稳定剂是酪蛋白、酪蛋白酸盐、聚葡萄糖、海藻糖、外源性初乳脂肪、硬脂、海藻酸盐、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体、海藻酸盐加乙基纤维素、海藻酸盐加玉米淀粉、海藻酸盐加丙烯酸聚合物或其组合。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述促修复因子是初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳、初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、蛋制品、分离的促修复肽或蛋白质、其营养学上可接受的盐或其组合。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述初乳是牛初乳。
6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述牛初乳选自脱脂牛初乳、部分脱脂牛初乳或全牛初乳。
7.根据权利要求4所述的组合物，其中所述分离的促修复肽或蛋白质是包含表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)、胰岛素样生长因子II(IGF-II)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、乳脂肪球-表皮生长因子8(MFG-E8)或其营养学上可接受的盐的重组促修复肽或蛋白质。
8.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述营养性蛋白酶抑制剂是酪蛋白。
9.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述营养性蛋白酶抑制剂是营养性胰蛋白酶抑制剂。
10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述营养性胰蛋白酶抑制剂是酶活性大豆制品、卵类粘蛋白、大豆胰蛋白酶抑制剂或其组合。
11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述酶活性大豆制品是生大豆粉、生豆粕、生大豆制品、微加工大豆制品或其组合。
12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述酶活性大豆制品是酶活性大豆粉。
13.根据权利要求12所述的组合物，其包含的初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳或初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物与酶活性大豆制品的重量比为约1:1至约20:1，任选为约5:1至约15:1。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的组合物，其包含：
约40wt％至约95wt％的初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳或初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物；和
约5wt％至约25wt％的酶活性大豆制品。
15.根据权利要求14所述的组合物，其包含约5wt％至约40wt％的稳定剂。
16.根据权利要求14所述的组合物，其包含约5wt％至约40wt％的营养性蛋白酶抑制剂。
17.根据权利要求14所述的组合物，其包含约2wt％至约7wt％的酪蛋白。
18.根据权利要求14所述的组合物，其进一步包含大豆凝集素、中链甘油三酯、乳清蛋白浓缩物、脱脂奶粉、乳蛋白浓缩物或其组合。
19.根据权利要求18所述的组合物，其包含至多约2wt％的大豆卵磷脂、至多约2wt％的中链甘油三酯、至多约2wt％的调味剂、至多约50wt％的乳清蛋白浓缩物、至多约10wt％的脱脂奶粉、至多约10wt％的乳蛋白浓缩物或其组合。
20.根据权利要求14所述的组合物，其中初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为约1:20至约20:1。
21.根据权利要求14所述的组合物，其中初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为60:40。
22.根据权利要求14至21中任一项所述的组合物，其中所述组合物的总蛋白质含量是所述组合物的约50wt％至约80wt％。
23.根据权利要求14至21中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含免疫球蛋白G，其含量为所述组合物的约15wt％至约60wt％。
24.一种组合物，其包含促修复因子、稳定剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。
25.根据权利要求24所述的组合物，其中所述促修复因子选自初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳、初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、蛋制品、分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐或其组合。
26.根据权利要求25所述的组合物，其中所述初乳是牛初乳。
27.根据权利要求26所述的组合物，其中所述牛初乳是脱脂牛初乳、晚期牛初乳、部分脱脂牛初乳、牛初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、全牛初乳或其组合。
28.根据权利要求25所述的组合物，其中所述分离的促修复肽或蛋白质是包含表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)、胰岛素样生长因子II(IGF-II)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、乳脂肪球-表皮生长因子8(MFG-E8)或其营养学上可接受的盐的重组促修复肽或蛋白质。
29.根据权利要求24至28中任一项所述的组合物，其中所述稳定剂是酪蛋白、酪蛋白酸盐、聚葡萄糖、海藻糖、外源性初乳脂肪、硬脂、海藻酸盐、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体、海藻酸盐加乙基纤维素、海藻酸盐加玉米淀粉、海藻酸盐加丙烯酸聚合物或其组合。
30.根据权利要求24至29中任一项所述的组合物，其包含约40wt％至约98wt％的初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳或初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物。
31.根据权利要求230所述的组合物，其包含约2wt％至约40wt％的稳定剂。
32.根据权利要求30所述的组合物，其进一步包含大豆凝集素、中链甘油三酯、乳清蛋白浓缩物、脱脂奶粉、乳蛋白浓缩物或其组合。
33.根据权利要求32所述的组合物，其包含至多约2wt％的大豆卵磷脂、至多约2wt％的中链甘油三酯、至多约2wt％的调味剂、至多约50wt％的乳清蛋白浓缩物、至多约10wt％的脱脂奶粉、至多约10wt％的乳蛋白浓缩物或其组合。
34.根据权利要求30所述的组合物，其中初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为约1:20至约20:1。
35.根据权利要求30所述的组合物，其中初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为60:40。
36.根据权利要求30至35中任一项所述的组合物，其中所述稳定剂是酪蛋白酸钙、酪蛋白酸钠、来自初乳的酪蛋白酸盐分离物或其组合。
37.根据权利要求36所述的组合物，其包含约2wt％至约7wt％的酪蛋白酸钙。
38.根据权利要求30至37中任一项所述的组合物，其中所述组合物的总蛋白质含量是所述组合物的约50wt％至约80wt％。
39.根据权利要求30至37中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含免疫球蛋白G，其含量为所述组合物的约15wt％至约60wt％。
40.一种剂型，其包含根据权利要求1至39中任一项所述的组合物。
41.根据权利要求40所述的剂型，其中所述剂型是粉剂、颗粒剂、片剂、口服崩解片剂、胶囊、耐酸胶囊、锭剂、含片、营养棒、软咀嚼物、水凝胶、软糖、酸奶、混悬剂或即饮饮料。
42.根据权利要求40或41中任一项所述的剂型，其中所述剂型是耐酸胶囊。
43.一种在有需要的受试者中治疗、减轻或预防与胃肠道炎症相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用组合物，所述组合物包含：
a)治疗有效量的促修复因子、免疫因子或其组合；
b)营养性蛋白酶抑制剂；和
c)任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。
44.根据权利要求40所述的方法，其中所述组合物进一步包含稳定剂。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述稳定剂是酪蛋白、酪蛋白酸盐、聚葡萄糖、海藻糖、外源性初乳脂肪、硬脂、海藻酸盐、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体、海藻酸盐加乙基纤维素、海藻酸盐加玉米淀粉和海藻酸盐加丙烯酸聚合物或其组合。
46.根据权利要求43至45中任一项所述的方法，其中所述促修复因子选自初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳、初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、蛋制品、分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐或其组合。
47.根据权利要求46所述的方法，其中所述初乳是牛初乳。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述牛初乳是脱脂牛初乳、晚期牛初乳、部分脱脂牛初乳、牛初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、部分脱脂牛初乳、全牛初乳或其组合。
49.根据权利要求46所述的方法，其中所述分离的促修复肽或蛋白质是包含表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)、胰岛素样生长因子II(IGF-II)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、乳脂肪球-表皮生长因子8(MFG-E8)或其营养学上可接受的盐的重组促修复肽或蛋白质。
50.根据权利要求46所述的方法，其中所述治疗有效量的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐以每天约0.001mg/kg至约10mg/kg、约0.005mg/kg至约5mg/kg、约0.01mg/kg至约1mg/kg或约20μg/kg至约200μg/kg受试者体重的量施用。
51.根据权利要求46所述的方法，其中所述治疗有效量的分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐以每天约0.01mg至约500mg、约0.05mg至约80mg、约0.1至约50mg、约0.5至约10mg或约1mg至约5mg的量施用。
52.根据权利要求43所述的方法，其中所述免疫因子是免疫球蛋白、细胞因子、抗菌肽或其组合。
53.根据权利要求43所述的方法，其中所述营养性蛋白酶抑制剂是酪蛋白。
54.根据权利要求43所述的方法，其中所述营养性蛋白酶抑制剂是营养性胰蛋白酶抑制剂。
55.根据权利要求54所述的方法，其中所述营养性胰蛋白酶抑制剂是酶活性大豆制品、卵类粘蛋白、大豆胰蛋白酶抑制剂或其组合。
56.根据权利要求55所述的方法，其中所述酶活性大豆制品是生大豆粉、生豆粕、生大豆制品、微加工大豆制品或其组合。
57.根据权利要求43至56中任一项所述的方法，其中所述组合物包含：
约40wt％至约95wt％的初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳或初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物；和
约5wt％至约25wt％的酶活性大豆制品。
58.根据权利要求57所述的方法，其中所述组合物包含约5wt％至约40wt％的稳定剂。
59.根据权利要求57所述的方法，其中所述组合物包含约5wt％至约40wt％的酪蛋白。
60.根据权利要求57所述的方法，其中所述组合物包含约2wt％至约7wt％的酪蛋白。
61.根据权利要求57所述的方法，其中所述组合物进一步包含大豆凝集素、中链甘油三酯、乳清蛋白浓缩物、脱脂奶粉、乳蛋白浓缩物或其组合。
62.根据权利要求57所述的方法，其中所述组合物包含至多约2wt％的大豆卵磷脂、至多约2wt％的中链甘油三酯、至多约2wt％的调味剂、至多约50wt％的乳清蛋白浓缩物、至多约10wt％的脱脂奶粉、至多约10wt％的乳蛋白浓缩物或其组合。
63.根据权利要求57所述的方法，其中初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为约1:20至约20:1。
64.根据权利要求57所述的方法，其中初乳乳清浓缩物与乳清蛋白浓缩物的比例为60:40。
65.根据权利要求51至56中任一项所述的方法，其中所述组合物的总蛋白质含量是所述组合物的约50wt％至约80wt％。
66.根据权利要求57至65中的任一项所述的方法，其中所述组合物包含免疫球蛋白G，其含量为所述组合物的约15wt％至约60wt％。
67.一种在有需要的受试者中治疗、减轻或预防与胃肠道炎症相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用组合物，所述组合物包含：
a)治疗有效量的促修复因子和/或免疫因子；
b)稳定剂；和
c)任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。
68.根据权利要求67所述的方法，其中所述稳定剂是酪蛋白、酪蛋白酸盐、聚葡萄糖、海藻糖、外源性初乳脂肪、硬脂、海藻酸盐、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体、海藻酸盐加乙基纤维素、海藻酸盐加玉米淀粉和海藻酸盐加丙烯酸聚合物或其组合。
69.根据权利要求67所述的方法，其中所述促修复因子选自初乳、晚期初乳、脱脂初乳、部分脱脂初乳、初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、蛋制品、分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐或其组合。
70.根据权利要求69所述的方法，其中所述初乳是牛初乳。
71.根据权利要求70所述的方法，其中所述牛初乳是脱脂牛初乳、晚期初乳、牛初乳乳清浓缩物和乳清蛋白浓缩物的混合物、部分脱脂牛初乳、全牛初乳或其组合。
72.根据权利要求69所述的方法，其中所述分离的促修复肽或蛋白质是包含表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)、胰岛素样生长因子II(IGF-II)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、乳脂肪球-表皮生长因子8(MFG-E8)或其营养学上可接受的盐的重组促修复肽或蛋白质。
73.根据权利要求72所述的方法，其中所述治疗有效量的分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐以每天约0.001mg/kg至约10mg/kg、约0.005mg/kg至约5mg/kg、约0.01mg/kg至约1mg/kg或约20μg/kg至约200μg/kg受试者体重的量施用。
74.根据权利要求72所述的方法，其中所述治疗有效量的分离的促修复肽或蛋白质或其营养学上可接受的盐以每天约0.01mg至约500mg、约0.05mg至约80mg、约0.1至约50mg、约0.5至约10mg或约1mg至约5mg的量施用。
75.根据权利要求67所述的方法，其中所述免疫因子是免疫球蛋白、细胞因子、抗菌肽或其组合。
76.根据权利要求43至75中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是炎症性肠病、非甾类消炎药(NSAID)胃肠道病症、化疗诱导的黏膜炎、放疗诱导的黏膜炎、假膜性结肠炎、胃炎、消化性溃疡、坏死性小肠结肠炎、肠易激综合征、肠漏、小肠细菌过度生长(SIBO)、非溃疡性消化不良或功能性消化不良。
77.根据权利要求76所述的方法，其中所述炎症性肠病是溃疡性结肠炎、未定型结肠炎或克罗恩病。
78.根据权利要求43至77中任一项所述的方法，其中所述组合物有效降低所述受试者中的髓过氧化物酶水平。
79.根据权利要求43至77中任一项所述的方法，其中与相同条件下单独的促修复因子和/或免疫因子的活性相比，所述组合物能有效地显著保存所述促修复因子或免疫因子在经受胃液或盐酸盐/胃蛋白酶消化和胰凝乳蛋白酶/胰蛋白酶消化时的活性。
80.根据权利要求43至77中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括向所述受试者共同施用有效量的一种或多种其他活性试剂。
81.根据权利要求43至80中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类非新生儿受试者。
82.一种在受试者中提高疫苗接种抗体滴度的方法，所述方法包括：
a)向所述受试者口服施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含：
i)促修复因子、免疫因子或其组合；
ii)营养性蛋白酶抑制剂；
iii)任选的营养学上可接受的载体或赋形剂；和
iv)任选的稳定剂；以及
b)向所述受试者施用疫苗。
83.根据权利要求82所述的方法，其中所述疫苗是COVID-19疫苗、流感疫苗、肺炎球菌疫苗、破伤风疫苗、破伤风-白喉-百日咳疫苗、麻疹-流行性腮腺炎-风疹疫苗、人乳头瘤病毒疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、脑膜炎球菌疫苗、乙型流感嗜血杆菌疫苗或带状疱疹疫苗。
84.根据权利要求82所述的方法，其中所述疫苗是兽用疫苗，任选地其中所述兽用疫苗是犬瘟热疫苗、狂犬病疫苗、细小病毒疫苗、禽流感疫苗、马西尼罗病毒疫苗、马流感病毒疫苗、猫白血病病毒疫苗、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒疫苗、牛病毒性腹泻病毒疫苗、猫免疫缺陷病毒疫苗、猪疱疹病毒疫苗、口蹄疫病毒疫苗、牛疱疹病毒1型相关疾病疫苗或新城疫病毒疫苗。
85.一种膳食补充剂，其包含根据权利要求1至39中任一项所述的组合物。
86.一种组合物，其包含纯化的乳铁蛋白、稳定剂和任选的营养学上可接受的载体或赋形剂。
87.根据权利要求86所述的组合物，其中所述稳定剂是酪蛋白、酪蛋白酸盐、聚葡萄糖、海藻糖、外源性初乳脂肪、硬脂、海藻酸盐、海藻酸盐加乙基纤维素水性分散体、海藻酸盐加乙基纤维素、海藻酸盐加玉米淀粉或海藻酸盐加丙烯酸聚合物。
CN202280031259.5A 2021-02-26 2022-02-25 稳定的初乳组合物 Pending CN117750889A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163154495P 2021-02-26 2021-02-26
US63/154,495 2021-02-26
PCT/US2022/017937 WO2022183012A1 (en) 2021-02-26 2022-02-25 Stabilized colostrum compositions

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117750889A true CN117750889A (zh) 2024-03-22

Family

ID=83048482

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280031259.5A Pending CN117750889A (zh) 2021-02-26 2022-02-25 稳定的初乳组合物

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20220362303A1 (zh)
EP (1) EP4297589A1 (zh)
KR (1) KR20240004268A (zh)
CN (1) CN117750889A (zh)
AU (1) AU2022227009A1 (zh)
WO (1) WO2022183012A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11805995B1 (en) * 2022-11-22 2023-11-07 King Faisal University Saliva collection kit
WO2024178252A1 (en) * 2023-02-22 2024-08-29 Lactea Therapeutics Llc Purified lactoferrin compositions and methods of use

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AUPP327198A0 (en) * 1998-04-30 1998-05-21 Northfield Laboratories Pty Ltd A food composition and method of using same
JP6449771B2 (ja) * 2013-08-26 2019-01-09 株式会社明治 乳酸菌を用いた抗体価上昇剤
WO2019106147A1 (en) * 2017-12-01 2019-06-06 Nestec S.A. Human milk fortifier composition
US20220047646A1 (en) * 2019-02-26 2022-02-17 Pantheryx, Inc. Compositions for management of disorders of the gastrointestinal tract

Also Published As

Publication number Publication date
AU2022227009A1 (en) 2023-09-21
EP4297589A1 (en) 2024-01-03
WO2022183012A1 (en) 2022-09-01
KR20240004268A (ko) 2024-01-11
US20220362303A1 (en) 2022-11-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240245761A1 (en) Methods of treating celiac disease
CN117750889A (zh) 稳定的初乳组合物
US10300133B2 (en) Compositions for delivery of food allergens to the stomach
JP2003520862A (ja) 腸内送達用組成物
RU2723097C1 (ru) Способ получения яичного желтка с высоким содержанием af-16
JP2018531214A6 (ja) 高含量のａｆ−１６を有する卵黄の産生方法
KR100460173B1 (ko) 헬리코박터 파일로리 정착 억제제
ES2827254T3 (es) Hidrolizado de proteína de la leche para su uso en el tratamiento de la diarrea
JP2005522203A (ja) 生理的反応を調節または免疫応答を誘導するための組成物
JP3366770B2 (ja) 抗アレルギー栄養組成物
JP3255161B2 (ja) ヘリコバクター・ピロリ定着阻害剤
JP3597784B2 (ja) 消化性潰瘍抑制組成物及びそれを含有する飲食品
JP3007694B2 (ja) 胃潰瘍予防または治療のための医薬及び飲食品
Losso et al. Egg Bioactives and Chronic Degenerative Diseases
KR20220085633A (ko) LFRFamide 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 복족류의 산란 유도용 조성물
JP2003206235A (ja) 消化器系疾患予防・治療用組成物
WO2023212604A1 (en) Targeted anti-sglt1 avian igy antibodies as treatment of pre-diabetes, type 2 diabetes and gestational diabetes
TWM526402U (zh) 含天然活性胜肽粉末的腸溶膠囊劑型
TWM526400U (zh) 含天然活性胜肽粉末的胃崩膠囊
TWM520900U (zh) 含天然活性胜肽粉末的舌下膠囊劑型
TW200902046A (en) Agents for preventing renal failure

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination