CN117736187B - 一种蛋白水解靶向嵌合体及其制备方法、药物组合物和应用 - Google Patents

一种蛋白水解靶向嵌合体及其制备方法、药物组合物和应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于化药合成技术领域，具体涉及一种蛋白水解靶向嵌合体及其制备方法、药物组合物和应用。蛋白水解靶向嵌合体的结构式如式I所示，其中，Linker为任一化学上可行的连接结构；X为不同取代位置的F原子或H；Y为N或O。本发明的制备过程简单易行，制备得到的蛋白水解靶向嵌合体或其在药学上可接受的盐具有高效靶向降解CDK9的效果，且具有较高选择性。且实验结果表明，该化合物可以利用泛素‑蛋白酶体系统诱导CDK9蛋白的靶向降解，并抑制其下游信号通路。在蛋白水平，细胞水平以及动物水平上实现对CDK9的选择性降解，并具有良好的抗肿瘤细胞增殖的作用。

Description

一种蛋白水解靶向嵌合体及其制备方法、药物组合物和应用
技术领域
本发明属于化药合成技术领域，具体涉及一种蛋白水解靶向嵌合体及其制备方法、药物组合物和应用。
背景技术
CDK9作为CDK激酶家族成员之一，在RNA转录中起关键作用，专门调节基因转录延长和mRNA的成熟。CDK9相关信号系统的失调存在于包括实体瘤和血液系统恶性肿瘤在内的多种癌细胞中，越来越多的证据表明，抑制CDK9介导的转录调控过程可导致癌基因（如MYC）和抗凋亡蛋白（如Mcl-1）的蛋白水平下调，这些蛋白在癌细胞的进展中起关键作用。尽管已有多种CDK9激酶抑制剂进入了临床试验阶段。然而，现有的CDK9激酶抑制剂存在单用抗肿瘤效果较差、生物标志物研究欠缺等问题，这给CDK9抑制剂的开发仍然面临着挑战。
蛋白水解靶向嵌合体（Proteolysis-targeting chimeras，PROTACs）是利用泛素-蛋白酶体系统（Ubiquitin-proteasome system，UPS）降解靶蛋白的一种新兴的化学生物学技术。PROTACs作为一种双功能分子，具有高选择性和催化特性，还可靶向不可成药靶点，有望改善药物的耐药性，解决脱靶性等问题，为当今药物研究开发提供了新的思路。然而，目前许多PROTAC分子的临床进展并不顺利，大多数PROTAC并未能度过药物开发的临床前研究阶段。这其中的原因很多，其中一个最具挑战性的障碍便是PROTAC的吸收水平和代谢毒性的问题。一般来讲，PROTAC分子通常不符合传统“5规则”，它们具有较高的分子量和极性表面积。渗透性是针对细胞内靶标活性的关键，它们通常随着分子量的增加而急剧下降。已经报道了一些小分子虽然超过了“5规则”，但它们具有很高的细胞渗透性和口服生物利用度，因此合理的优化至关重要。
发明内容
本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种蛋白水解靶向嵌合体及其制备方法、药物组合物和应用，具体采用以下的技术方案：
本发明的第一方面，提供了一种蛋白水解靶向嵌合体，其结构式如式I所示：
式I；其中，Linker为任一化学上可行的连接结构；X为不同取代位置的F原子或H；Y为N或O。
作为进一步优选的实施方式，Linker为饱和脂肪链、不饱和脂肪链或脂肪酸链。本发明的Linker结构通过引入不同类型的刚性结构得到不同空间构型的分子结构，以期得到预期的三元复合体结构来提升分子的活性和选择性。
作为进一步优选的实施方式，上述Linker为
、/>、/>、中的任意一种。
作为进一步优选的实施方式，蛋白水解靶向嵌合体的分子结构如式II、式III或式IV所示：
式II；
式III；
式IV。更优选地，上述蛋白水解靶向嵌合体的分子结构如式II所示：
式II。
本发明的第二方面，还提供了上述蛋白水解靶向嵌合体的制备方法，其制备路线为路线一、路线二、路线三或路线四所示：
路线一：
；
路线二：
；
路线三：
；
路线四：
。
本发明基于CDK9抑制剂AT-7519和新型的E3连接酶配体，设计合成了一系列分子，并筛选得到了药效药代动力学性质量好的候选分子，这为靶向CDK9的治疗途径的筛选提供了新的思路。
本发明的第三方面，还提供了上述蛋白水解靶向嵌合体或其在药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防癌症药物中的应用。优选地，上述癌症急性髓性白血病或非小细胞肺癌。此外，上述蛋白水解靶向嵌合体还可以应用在制备选择性降解CDK9抑制剂中。
本发明的第四方面，还提供了一种药物组合物，该药物组合物以上述的蛋白水解靶向嵌合体或其在药学上可接受的盐为主要活性成分。其药物组合物还包括一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体；上述赋形剂包括碳水化合物、聚合物、脂质或矿物中的至少一种。
本发明的有益效果为：本发明的制备过程简单易行，制备得到的蛋白水解靶向嵌合体或其在药学上可接受的盐具有高效靶向降解CDK9的效果，且具有较高选择性。本发明基于PROTAC技术原理，合成开发了一系列新型靶向CDK9的PROTAC化合物，其可以利用泛素-蛋白酶体系统诱导CDK9蛋白的靶向降解，并抑制其下游信号通路。在蛋白水平，细胞水平以及动物水平上实现对CDK9的选择性降解，并具有良好的抗肿瘤细胞增殖的作用。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果进行清楚、完整的描述，以充分地理解本发明的目的、方案和效果。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
本发明利用蛋白水解靶向嵌合体（PROTACs）技术，基于文献报道的小分子CDK9抑制剂AT-7519进行修饰得到了具有一定抑制活性的先导物，结合分子对接模型，选择先导物的哌啶作为连接部位引入Linker，连接CRBN配体，即沙利度胺，共设计并合成了一系列靶向CDK9的PROTAC分子。
实施例1
蛋白水解靶向嵌合体，其制备过程具体包括以下步骤：
化合物E1-E4的制备，其化合物E1-E4的化学式如下所示：
化合物E1-E4的合成路线如下：
（1）化合物E1的制备
化合物1的制备路线如下：
其化合物1的中文名称为：N-（1-（2-溴乙酰基）哌啶-4-基）-4-（2，6-二氯苯甲酰胺）-1H-吡唑-3-甲酰胺
制备过程如下：
将化合物AT7519（800 mg，2.10 mmol）加入到N,N-二甲基甲酰胺（20 mL）中，然后加入N,N-二异丙基乙胺（543 mg，4.20 mmol），再加入溴乙酰氯（397 mg，2.52 mmol）。室温下搅拌反应3小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。加入饱和氯化钠溶液（80mL），用二氯甲烷（2×100 mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=60∶1），得到化合物1（710 mg，67%），为米白色固体。
其检测结果如下：
M.p. 132.5-133.7 ℃;1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6)δ13.43 (s, 1H), 10.18 (s,1H), 8.46 (d,J= 8.2 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.61 – 7.49 (m, 3H), 4.36 (p,J=14.6, 13.7 Hz, 2H), 4.04 – 3.95 (m, 1H), 3.85 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 3.18 (d,J=5.2 Hz, 1H), 3.10 (t,J= 12.4 Hz, 1H), 2.70 (dd,J= 20.8, 8.0 Hz, 1H), 1.78 (t,J= 12.1 Hz, 2H), 1.63 (q,J= 11.4, 11.0 Hz, 1H), 1.51 (q,J= 11.7, 10.2 Hz,1H).13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6)δ164.8, 163.0, 160.3, 135.4, 132.3, 131.3,128.0, 121.7, 55.3, 49.0, 46.1, 44.8, 42.4, 41.7, 32.2, 31.8. HRMS (ESI) 预测值 C18H19BrCl2N5O3 +[M+H]+: 504.1780, 实测值 504.1784。
化合物4的制备路线如下：
其化合物4的中文名称为：4-（（2，6-二氧代哌啶-3-基氨基）苯基）哌嗪-1-羧酸叔丁酯
制备过程如下：
将化合物2（1.00 g，3.60 mmol）加入乙腈（30 mL）中，然后加入N,N-二异丙基乙胺（928 mg，7.20 mmol），化合物3 （0.830 g，4.30 mmol），将混合物加热到80 ℃搅拌过夜。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。待混合物冷却至室温后减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=40∶1），得到化合物4（610 mg，43%），为深褐色固体。
其检测结果如下：
M.p. 143.5-2144.8 ℃;1H NMR (400 MHz, Chloroform-d)δ8.02 (s, 1H),7.16 – 7.07 (m, 2H), 6.91 (dd, J = 8.0, 3.2 Hz, 2H), 3.71 (dd, J = 8.7, 4.1Hz, 1H), 3.60 – 3.53 (m, 4H), 3.13 (s, 4H), 2.78 – 2.55 (m, 2H), 2.29 – 2.17(m, 2H), 1.79 (s, 1H), 1.48 (s, 9H).13C NMR (100 MHz, Chloroform-d)δ183.3,173.4, 172.3, 154.7, 150.7, 128.8, 128.2, 116.8, 79.9, 49.1, 47.1, 30.9,28.4, 26.3. HRMS (ESI) 预测值 C20H28N4O4 +[M+H]+: 388.4680, 实测值 388.4683。
化合物6的制备路线如下：
其化合物6的中文名称为：4-（（4-（（2，6-二氧代哌啶-3-基氨基）苯基）哌嗪-1-基）甲基）哌啶-1-羧酸叔丁酯
制备过程如下：
将化合物4（200 mg，0.520 mmol）加入到二氯甲烷（5 mL）中，随后将三氟乙酸（0.4mL）滴加至上述溶液中，并在室温下搅拌2小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。减压浓缩后向瓶中加入甲醇（5 mL）,随后加入化合物5 （1-Boc-4-哌啶甲醛（132 mg，0.620mmol）），并缓慢加入醋酸硼氢化钠（260 mg，1.24 mmol），再加入乙酸（1 mL），室温下搅拌反应5小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。0 ℃条件下缓慢加入饱和碳酸氢钠溶液（40 mL）淬灭反应，用乙酸乙酯（2×50 mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=15∶1），得到化合物6（227 mg，90%），为深紫色固体。
其检测结果如下：
M.p. 156.2-157.6 ℃;1H NMR (400 MHz, Chloroform-d)δ8.19 (s, 1H), 6.87(d,J= 6.6 Hz, 2H), 6.66 (d,J= 6.6 Hz, 2H), 4.50 (s, 1H), 4.09 (s, 2H), 4.00(d,J= 15.9 Hz, 1H), 3.10 (s, 4H), 2.90 – 2.81 (m, 1H), 2.77 – 2.59 (m, 6H),2.58 – 2.47 (m, 2H), 2.28 (s, 2H), 1.88 (s, 1H), 1.77 (d,J= 12.6 Hz, 2H),1.46 (s, 9H), 1.11 (d,J= 11.4 Hz, 2H).13C NMR (100 MHz, Chloroform-d)δ172.60,171.4, 154.9, 118.8, 115.0, 79.4, 64.2, 55.4, 53.6, 50.2, 43.8, 33.3, 31.2,30.7, 29.7, 28.5, 25.8, 22.7. HRMS (ESI) 预测值C26H30N5O4 +[M+H]+:486.6290, 实测值 486.6291。
化合物E1的制备路线如下：
其化合物E1的中文名称为：4-（2，6-二氯苯甲酰胺）-N-（4-（4-（2，6-二氧代哌啶-3-基氨基）苯基）哌嗪-1-基）甲基）哌啶-1-基）乙酰基）哌啶-4-基）-1H-吡唑-3-甲酰胺
制备过程如下：
将化合物6（0.130 g，0.270 mmol）加入到二氯甲烷（3 mL）中，随后将三氟乙酸（0.2 mL）滴加至上述溶液中，并在室温下搅拌2小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。减压浓缩后向瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺（3 mL）,然后加入N, N-二异丙基乙胺（104mg，0.810 mmol），加入化合物1（0.136 g，0.270 mmol），将混合物置于室温条件下搅拌过夜。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。加入饱和氯化钠溶液（40 mL），用二氯甲烷（2×50 mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=8∶1），得到化合物E1（48 mg，22%），为黄色固体。
其检测结果如下：
M.p. 247.2-247.7 ℃; IR(KBr): 3662, 2921, 1710, 1660, 1548, 1453,1368, 1196, 909, 798, 660 cm-1.1H NMR (400 MHz, Chloroform-d)δ11.34 (s, 1H),9.91 (s, 1H), 9.19 (d,J= 13.1 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.38 – 7.27 (m, 4H),7.07 (s, 1H), 6.86 (d,J= 8.3 Hz, 2H), 6.66 (d,J= 8.3 Hz, 2H), 4.65 – 4.46 (m,2H), 4.17 (t,J= 13.6 Hz, 2H), 4.06 – 3.98 (m, 1H), 3.49 (s, 2H), 3.33 (d,J=12.5 Hz, 1H), 3.07 (s, 4H), 2.88 (dd,J= 22.2, 13.2 Hz, 3H), 2.74 (t,J= 12.6Hz, 2H), 2.58 (s, 4H), 2.25 (d,J= 6.0 Hz, 2H), 2.04 (dt,J= 17.6, 13.0 Hz,4H), 1.91 (dd,J= 13.6, 2.9 Hz, 1H), 1.81 – 1.71 (m, 3H), 1.52 (dd,J= 27.7,13.2 Hz, 4H).13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6)δ174.9, 173.6, 163.1, 160.6, 153.8,147.0, 143.0, 143.2, 142.0, 135.8, 133.1, 132.0, 131.0, 128.9, 121.9, 121.1,121.7, 118.1, 114.7, 56.6, 53.7, 53.2, 50.1, 49.9, 46.4, 44.2, 41.2, 32.2,31.7, 31.1, 29.4, 25.8, 23.0, 22.9, 21.7, 19.2. HRMS (ESI) 预测值 C39H49Cl2N10O5 +[M+H]+: 808.7780, 实测值 808.7781。
（2）化合物E2的制备
化合物9的制备路线如下：
其化合物9的中文名称为：4-（4-（（2，6-二氧代哌啶-3-基）氨基）-2-氟苯基）哌嗪-1-羧酸叔丁酯
制备过程如下：
将化合物8（907 mg，3.07 mmol）加入到乙腈（30 mL）中，然后加入N,N-二异丙基乙胺（794 mg，6.14 mmol），化合物3（707 mg，3.68 mmol），将混合物加热到80 ℃搅拌过夜。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。待混合物冷却至室温后减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=20∶1），得到化合物9（1.55 g，75%），为白色固体。
其检测结果如下：
M.p. 168.4-169.8 ℃;1H NMR (400 MHz, Chloroform-d)δ8.25 (s, 1H), 6.84(t,J= 9.1 Hz, 1H), 6.48 – 6.36 (m, 2H), 4.63 (d,J= 3.5 Hz, 1H), 4.00 (dt,J=12.4, 4.2 Hz, 1H), 3.63 – 3.53 (m, 4H), 2.94 – 2.87 (m, 4H), 2.74 (ddd,J=18.1, 13.3, 5.1 Hz, 1H), 2.51 (dq,J= 12.7, 4.7 Hz, 1H), 1.89 (qd,J= 13.2, 4.6Hz, 1H), 1.69 (s, 1H), 1.47 (s, 9H).13C NMR (100 MHz, Chloroform-d)δ172.3,171.5, 158.2, 155.7, 154.7, 143.2, 142.9, 132.0, 131.9, 120.9, 120.9, 109.9,102.8, 102.2, 79.1, 54.7, 51.3, 31.1, 28.4, 25.5.19F NMR (376 MHz, Chloroform-d)δ-121.75. HRMS (ESI) 预测值 C20H28FN4O4 +[M+H]+:407.4584, 实测值 407.4587。
化合物10的制备路线如下：
其化合物10的中文名称为：4-（（4-（（2，6-二氧代哌啶-3-基）氨基）-2-氟苯基）哌嗪-1-基甲基）哌啶-1-羧酸叔丁酯
制备过程如下：
将化合物9（1.37 g，3.37 mmol）加入到二氯甲烷（30 mL）中，随后将三氟乙酸（2.5mL）滴加至上述溶液中，并在室温下搅拌2小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。减压浓缩后向瓶中加入甲醇（30 mL）,随后加入化合物5（1-Boc-4-哌啶甲醛（1.40 g，6.74mmol）），并缓慢加入醋酸硼氢化钠（2.10 g，10.1 mmol），再加入乙酸（4 mL），室温搅拌反应5小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。0 ℃条件下缓慢加入饱和碳酸氢钠溶液（100 mL）淬灭反应，用乙酸乙酯（2×150 mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=20∶1），得到化合物10（460 mg，27%），为淡黄色固体。
其检测结果如下：
M.p. 159.9-161.3 ℃;1H NMR (400 MHz, Chloroform-d)δ8.57 (s, 1H), 6.85(dt,J= 9.2, 5.4 Hz, 1H), 6.39 (t,J= 10.8 Hz, 2H), 4.63 (s, 1H), 4.16 – 3.91(m, 3H), 3.04 (s, 4H), 2.88 – 2.60 (m, 8H), 2.53 – 2.43 (m, 1H), 2.32 (s,2H), 1.92 – 1.75 (m, 4H), 1.43 (d,J= 3.5 Hz, 9H), 1.10 (d,J= 11.6 Hz, 2H).13CNMR (100 MHz, Chloroform-d)δ172.9, 171.4, 158.6, 155.2, 154.8, 142.5, 131.3,120.5, 120.0, 109.7, 102.1, 102.7, 79.3, 64.3, 54.0, 53.1, 50.2, 33.5, 31.1,30.1, 28.7, 25.7.19F NMR (376 MHz, Chloroform-d)δ-121.81. HRMS (ESI) 预测值C26H39FN5O4 +[M+H]+:504.6194, 实测值 504.6195。
化合物E2的制备路线如下：
其化合物E2的中文名称为：4-（2，6-二氯苯甲酰胺）-N-（2-（4-（4-（2，6-二氧代哌啶-3-基氨基）-2-氟苯基）哌嗪-1-基）甲基）哌啶-1-基）乙酰基）哌啶-4-基）-1H-吡唑-3-甲酰胺
制备过程如下：
将化合物10（0.151 g，0.300 mmol）加入到二氯甲烷（8 mL）中，随后将三氟乙酸（0.6 mL）滴加至上述溶液中，并在室温下搅拌2小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。减压浓缩后向瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺（3 mL），然后加入N, N-二异丙基乙胺（116mg，0.900 mmol），加入化合物1（0.150 mg，0.300 mmol），将混合物置于室温条件下搅拌过夜。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。加入饱和氯化钠溶液（40 mL），用二氯甲烷（2×50 mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=10∶1），得到化合物E2（150 mg，61%），为白色固体。
其检测结果如下：
M.p. 247.2-247.7 ℃; IR(KBr): 3660, 2924, 1709, 1659, 1547, 1430,1367, 1191, 972, 908, 798, 626 cm-1.1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6)δ13.52 (s, 1H),10.77 (s, 1H), 10.18 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.62 – 7.48 (m,3H), 6.82 (t,J= 8.8 Hz, 1H), 6.51 (d,J= 14.9 Hz, 1H), 6.42 (d,J= 8.3 Hz, 1H),5.83 (d,J= 5.9 Hz, 1H), 5.75 (d,J= 3.6 Hz, 1H), 4.33 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 4.25(qd,J= 7.8, 4.2 Hz, 1H), 3.99 (s, 2H), 3.07 – 2.96 (m, 2H), 2.86 (s, 4H),2.79 – 2.53 (m, 5H), 2.19 (s, 2H), 2.08 (d,J= 8.7 Hz, 1H), 1.92 – 1.83 (m,1H), 1.75 (s, 4H), 1.66 – 1.52 (m, 2H), 1.46 (d,J= 10.8 Hz, 1H).13C NMR (100MHz, DMSO-d 6)δ174.8, 173.4, 170.3, 167.4, 163.5, 160.6, 157.9, 155.5, 152.8,150.1, 145.8, 144.9, 135.4, 133.5, 132.3, 131.3, 130.1, 128.9, 121.9, 121.4,120.8, 108.8, 101.4, 101.9, 55.3, 53.9, 53.7, 51.6, 51.5, 46.2, 44.0, 41.8,40.8, 32.1, 31.4, 31.2, 25.1.19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6)δ-123.18. HRMS (ESI) 预测值 C39H47Cl2N10O5 +[M+H]+: 825.7684, 实测值 825.7686。
（3）化合物E3的制备
化合物12的制备路线如下：
其化合物12的中文名称为：4-（3-（（2，6-二氧代哌啶-3-基氨基）苯基）哌嗪-1-羧酸叔丁酯
制备过程如下：
将化合物11（420 mg，1.37 mmol）加入到乙腈（30 mL）中，然后加入N,N-二异丙基乙胺（354 mg，2.74 mmol），加入化合物3（316 mg，1.64 mmol），将混合物加热到80 ℃搅拌过夜。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。待混合物冷却至室温后减压浓缩。硅胶柱层析（石油醚∶乙酸乙酯=1∶1），得到化合物12（404 mg，76 %），为黄色固体。
其检测结果如下：
M.p. 143.6-145.2 ℃;1H NMR (400 MHz, Chloroform-d)δ8.31 (d,J= 18.8Hz, 1H), 7.13 (t,J= 8.0 Hz, 1H), 6.42 (d,J= 8.0 Hz, 1H), 6.26 (s, 1H), 6.21(d,J= 7.7 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.08 (d,J= 11.4 Hz, 1H), 3.57 (s, 4H), 3.12(s, 4H), 2.84 (t,J= 20.4 Hz, 2H), 2.57 (s, 1H), 1.74 – 1.64 (m, 1H), 1.49 (s,9H).13C NMR (100 MHz, Chloroform-d)δ172.4, 171.3, 171.9, 154.6, 152.8, 147.3,130.7, 107.1, 105.4, 102.6, 79.5, 54.3, 49.2, 31.7, 28.5, 25.3. HRMS (ESI) 预测值 C20H29N4O4 +[M+H]+: 389.4680, 实测值 389.4683。
化合物13的制备：
其化合物13的中文名称为：4-（（4-（3-（（2，6-二氧代哌啶-3-基氨基）苯基）哌嗪-1-基）甲基）哌啶-1-羧酸叔丁酯
制备过程如下：
将化合物12（0.900 g，2.32 mmol）加入到二氯甲烷（23 mL）中，随后将三氟乙酸（1.7 mL）滴加至上述溶液中，并在室温下搅拌2小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。减压浓缩后向瓶中加入甲醇（23 mL）,随后加入化合物5（1-Boc-4-哌啶甲醛（0.990g，4.64 mmol）），醋酸硼氢化钠（1.48 g，6.96 mmol），再加入乙酸（3 mL），室温下搅拌反应5小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。0 ℃条件下缓慢加入饱和碳酸氢钠溶液（80 mL）淬灭反应，用乙酸乙酯（2×100 mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=25∶1），得到化合物13（300 mg，27%），为黄色固体。
其检测结果如下：
M.p. 155.4-156.5 ℃;1H NMR (400 MHz, Chloroform-d)δ8.67 (s, 1H), 7.09(t,J= 8.1 Hz, 1H), 6.39 (dd,J= 8.2, 2.1 Hz, 1H), 6.24 (d,J= 2.2 Hz, 1H), 6.16(dd,J= 7.9, 2.0 Hz, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.19 – 3.98 (m, 3H), 3.19 (s, 4H),2.88 – 2.45 (m, 10H), 2.27 (s, 2H), 1.73 (t,J= 15.8 Hz, 3H), 1.45 (s, 9H),1.10 (q,J= 12.0, 11.3 Hz, 2H).13C NMR (100 MHz, Chloroform-d)δ172.1, 171.9,154.1, 152.5, 147.9, 130.0, 107.5, 104.6, 102.5, 79.2, 64.0, 54.6, 53.5,48.6, 43.0, 43.5, 33.4, 31.8, 30.9, 28.9, 25.1. HRMS (ESI) 预测值 C26H40N5O4 +[M+H]+: 486.6290, 实测值 486.6291。
化合物E3的制备
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其化合物E3的中文名称为：4-（2，6-二氯苯甲酰胺）-N-（4-（4-（3-（（2，6-二氧代哌啶-3-基氨基）苯基）哌嗪-1-基）甲基）哌啶-1-基）乙酰基）哌啶-4-基）-1H-吡唑-3-甲酰胺
制备过程如下：
将化合物13（250 mg, 0.51 mmol）加入到二氯甲烷（5 mL）中，随后将三氟乙酸（0.4 mL）滴加至上述溶液中，并在室温下搅拌2小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。减压浓缩后向瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺（3 mL），然后加入N, N-二异丙基乙胺（197mg，1.53 mmol）和化合物1（257 mg，0.51 mmol），将混合物置于室温条件下搅拌过夜。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。加入饱和氯化钠溶液（40 mL），用二氯甲烷（2×50mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=10∶1），得到化合物E3（255 mg，62%），为淡黄色固体。
其检测结果如下：
M.p. 205.8-206.1 ℃; IR(KBr): 3664, 2923, 1711, 1664, 1550, 1456,1369, 1198, 908, 796, 662 cm-1.1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6)δ13.48 (s, 1H), 10.77(s, 1H), 10.19 (s, 1H), 8.51 (d,J= 7.5 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.63 – 7.48 (m,3H), 6.90 (t,J= 7.9 Hz, 1H), 6.25 (s, 1H), 6.16 (dd,J= 15.4, 8.1 Hz, 2H),5.76 (s, 1H), 5.64 (d,J= 7.2 Hz, 1H), 4.32 (q,J= 11.6 Hz, 2H), 4.16 – 3.89(m, 3H), 3.17 (d,J= 3.2 Hz, 2H), 3.05 (s, 4H), 3.00 – 2.81 (m, 2H), 2.74(ddd,J= 16.6, 11.9, 4.6 Hz, 1H), 2.60 (s, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.13 (dd,J=34.1, 6.2 Hz, 5H), 1.80 – 1.65 (m, 4H), 1.64 – 1.37 (m, 4H), 1.20 – 1.06 (m,2H).13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6)δ174.2, 173.6, 163.1, 160.7, 152.4, 149.2,149.3, 135.3, 134.9, 133.3, 132.3, 131.7, 129.1, 129.2, 128.1, 121.9, 121.6,105.0, 104.7, 100.8, 64.2, 62.4, 55.7, 53.5, 52.0, 49.0, 48.8, 46.6. HRMS(ESI) 预测值 C39H49Cl2N10O5 +[M+H]+: 808.7780, 实测值 808.7783。
（4）化合物E4的制备
化合物15的制备路线如下：
其化合物15的中文名称为：4-（4-（（2，6-二氧代哌啶-3-基）氨基）-3-氟苯基）哌嗪-1-羧酸叔丁酯
制备过程如下：
将化合物14（900 mg，3.06 mmol）加入到乙腈（30 mL）中，然后加入N,N-二异丙基乙胺（790 mg，6.13 mmol），加入化合物3（703 mg，3.68 mmol），将混合物加热到80 ℃搅拌过夜。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。待混合物冷却至室温后减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=20∶1），得到化合物15（1.00 g，80%），为白色固体。
其检测结果如下：
M.p. 169.3-169.9 ℃;1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.25 (s, 1H),6.85 (t,J= 9.1 Hz, 1H), 6.48 – 6.37 (m, 2H), 4.63 (d,J= 3.5 Hz, 1H), 4.00(dt,J= 12.4, 4.2 Hz, 1H), 3.63 – 3.53 (m, 4H), 2.94 – 2.87 (m, 4H), 2.74(ddd,J= 18.1, 13.3, 5.1 Hz, 1H), 2.52 (dq,J= 12.7, 4.7 Hz, 1H), 1.90 (qd,J=13.2, 4.6 Hz, 1H), 1.69 (s, 1H), 1.48 (s, 9H).13C NMR (100 MHZ, Chloroform-d)δ 172.34, 171.46, 158.12, 155.68, 154.68, 142.93, 142.83, 131.98, 131.88,120.85, 120.81, 109.10, 102.39, 102.14, 79.72, 54.78, 51.22, 31.01, 28.36,25.46.19F NMR (376 MHz, Chloroform-d) δ -121.68. HRMS (ESI) 预测值 C20H28FN4O4 +[M+H]+:407.4584, 实测值 407.4586。
化合物16的制备路线如下：
其化合物16的中文名称为：4-（（4-（（2，6-二氧代哌啶-3-基）氨基）-3-氟苯基）哌嗪-1-基）甲基）哌啶-1-羧酸叔丁酯
制备过程如下：
将化合物15（1.30 g，3.33 mmol）加入到二氯甲烷（30 mL）中，随后将三氟乙酸（2.4 mL）滴加至上述溶液中，并在室温下搅拌2小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。减压浓缩后向瓶中加入甲醇（30 mL）,随后加入化合物5 （1-Boc-4-哌啶甲醛（1.38g，6.70 mmol）），并缓慢加入醋酸硼氢化钠（2.03 g，9.91 mmol），再加入乙酸（4 mL），搅拌十分钟后恢复至室温，搅拌反应5小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。0 ℃条件下缓慢加入饱和碳酸氢钠溶液（100 mL）淬灭反应，用乙酸乙酯（2×150 mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=20∶1），得到化合物16（520 mg，31%），为淡黄色固体。
其检测结果如下：
M.p. 158.1-159.0 ℃;1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.63 (s, 1H),6.91 (dt,J= 9.2, 5.4 Hz, 1H), 6.46 (t,J= 10.8 Hz, 2H), 4.70 (s, 1H), 4.22 –3.97 (m, 3H), 3.10 (s, 4H), 2.94 – 2.66 (m, 8H), 2.59 – 2.49 (m, 1H), 2.38(s, 2H), 1.88 (dd,J= 42.0, 12.8 Hz, 4H), 1.50 (d,J= 3.5 Hz, 9H), 1.16 (d,J=11.6 Hz, 2H).13C NMR (100 MHZ, Chloroform-d) δ 172.28, 171.38, 157.95, 155.51,154.77, 142.74, 131.82, 120.54, 120.49, 109.06, 102.40, 102.16, 79.24, 64.22,54.79, 53.60, 50.60, 33.14, 30.99, 30.70, 28.36, 25.46.19F NMR (376 MHz,Chloroform-d) δ -122.10. HRMS (ESI) 预测值 C26H39FN5O4 +[M+H]+:504.6194, 实测值504.6191。
化合物E4的制备路线如下：
其化合物E4的中文名称为：4-（2，6-二氯苯甲酰胺）-N-（4-（4-（2，6-二氧代哌啶-3-基氨基）-3-氟苯基）哌嗪-1-基）甲基）哌啶-1-基）乙酰基）哌啶-4-基）-1H-吡唑-3-甲酰胺
制备过程如下：
将化合物16（0.150 g，0.300 mmol）加入到二氯甲烷（8 mL）中，随后将三氟乙酸（0.6 mL）滴加至上述溶液中，并在室温下搅拌2小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。减压浓缩后向瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺（3 mL），然后加入N, N-二异丙基乙胺（0.116 g，0.900 mmol），加入化合物1（0.150 mg，0.300 mmol），将混合物置于室温条件下搅拌过夜。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。加入饱和氯化钠溶液（40 mL），用二氯甲烷（2×50 mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=10∶1），得到化合物E4（157 mg，63%），为白色固体。
其检测结果如下：
M.p. 248.2-248.9 ℃; IR(KBr): 3650, 2934, 1700, 1639, 1537, 1431,1360, 1181, 979, 918, 788, 656 cm-1.1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 13.55 (s, 1H),10.80 (s, 1H), 10.20 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.65 – 7.50 (m,3H), 6.84 (t,J= 8.8 Hz, 1H), 6.54 (d,J= 14.9 Hz, 1H), 6.44 (d,J= 8.3 Hz, 1H),5.85 (d,J= 5.9 Hz, 1H), 5.78 (d,J= 3.6 Hz, 1H), 4.36 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 4.28(qd,J= 7.8, 4.2 Hz, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.09 – 2.98 (m, 2H), 2.88 (s, 4H),2.81 – 2.56 (m, 5H), 2.21 (s, 2H), 2.11 (d,J= 8.7 Hz, 1H), 1.95 – 1.85 (m,1H), 1.78 (s, 4H), 1.68 – 1.55 (m, 2H), 1.49 (d,J= 10.8 Hz, 1H).13C NMR (100MHZ, DMSO-d 6) δ 173.98, 173.44, 163.05, 160.66, 157.84, 155.44, 150.23,145.07, 135.73, 133.25, 132.27, 131.63, 130.02, 128.81, 121.88, 121.04,120.74, 108.77, 101.34, 101.09, 55.29, 53.69, 53.07, 51.46, 51.45, 46.22,44.50, 41.58, 32.08, 31.33, 31.12, 25.01.19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6) δ -123.26.HRMS (ESI) 预测值 C39H47Cl2N10O5 +[M+H]+: 825.7684, 实测值 825.7687。
实施例2
蛋白水解靶向嵌合体，其制备过程具体包括以下步骤：
化合物E5-E7的制备，其化合物E5-E7的化学式如下所示：
化合物E5-E7的合成路线如下：
（1）化合物E5的制备
化合物7的制备路线如下：
其化合物7的中文名称为：3-（（4-（1-（2-溴乙酰基）哌啶-4-甲基）哌嗪-1-基）苯基）氨基）哌啶-2，6-二酮
制备过程如下：
将化合物6（1.00 g，2.06 mmol）加入到二氯甲烷（21 mL）中，随后将三氟乙酸（1.6mL）滴加至上述溶液中，并在室温下搅拌2小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。减压浓缩后向瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺（10 mL）,然后加入N,N-二异丙基乙胺（0.799 g，6.18 mmol），再加入溴乙酰氯（0.385 g，2.47 mmol）。将混合物置于室温条件下搅拌5小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。加入饱和氯化钠溶液（100 mL），用二氯甲烷（2×150 mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=20∶1），得到化合物7（447 mg，43%），为深紫色固体。
其检测结果如下：
M.p. 146.6-147.3 ℃;1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.24 (s, 1H),6.92 (d,J= 6.6 Hz, 2H), 6.70 (d,J= 6.6 Hz, 2H), 4.55 (s, 1H), 4.14 (s, 2H),4.05 (d,J= 15.9 Hz, 1H), 5.50 (s, 2H), 3.14 (s, 4H), 2.94 – 2.86 (m, 1H),2.82 – 2.64 (m, 6H), 2.63 – 2.52 (m, 2H), 2.32 (s, 2H), 1.92 (s, 2H), 1.81(d,J= 12.6 Hz, 2H), 1.15 (d,J= 11.4 Hz, 2H).13C NMR (100 MHz, Chloroform-d) δ172.58, 171.44, 154.87, 118.79, 114.99, 55.40, 53.56, 50.14, 31.14, 30.66,29.70, 28.46, 25.81, 22.69. HRMS (ESI) 预测值 C23H33BrN5O3 +[M+H]+:507.4450, 实测值 507.4451。
化合物E5的制备路线如下：
其化合物E5的中文名称为：4-（2，6-二氯苯甲酰胺）-N-（2-（4-（4-（2，6-二氧代哌啶-3-基氨基）苯基）哌嗪-1-基）甲基）哌啶-1-基）-2-氧代乙基）哌啶-4-基）-1H-吡唑-3-甲酰胺
制备过程如下：
将化合物7（200 mg，0.400 mmol）加入到N,N-二甲基甲酰胺（4 mL）中，然后加入三乙胺（121 mg，1.20 mmol），再加入化合物1（152 mg，0.400 mmol）；将混合物在室温条件下搅拌过夜。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。加入饱和氯化钠溶液（40 mL），用二氯甲烷（2×50 mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=10∶1），得到化合物E5（194 mg，60%），为深紫色固体。
其检测结果如下：
M.p. 243.1-244.2 ℃; IR(KBr): 3667, 2920, 1700, 1670, 1555, 1452,1364, 1190, 919, 788, 665 cm-1.1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 11.27 (s, 1H),9.84 (s, 1H), 9.12 (d,J= 13.1 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.31 – 7.20 (m, 4H),7.00 (s, 1H), 6.79 (d,J= 8.3 Hz, 2H), 6.59 (d,J= 8.3 Hz, 2H), 4.58 – 4.39 (m,2H), 4.10 (t,J= 13.6 Hz, 2H), 3.99 – 3.91 (m, 1H), 3.42 (s, 2H), 3.26 (d,J=12.5 Hz, 1H), 3.00 (s, 4H), 2.81 (dd,J= 22.2, 13.2 Hz, 3H), 2.67 (t,J= 12.6Hz, 2H), 2.51 (s, 4H), 2.18 (d,J= 6.0 Hz, 2H), 1.97 (dt,J= 17.6, 13.0 Hz,4H), 1.84 (dd,J= 13.6, 2.9 Hz, 1H), 1.74 – 1.63 (m, 3H), 1.55 – 1.39 (m, 4H).13C NMR (100 MHZ, DMSO-d 6) δ 174.38, 173.64, 160.76, 143.28, 135.80, 132.39,131.69, 128.90, 121.93, 121.09, 118.12, 114.06, 53.70, 53.51, 46.33, 39.31,32.23, 32.23, 31.46, 31.09, 25.27. HRMS (ESI) 预测值 C39H49Cl2N10O5 +[M+H]+:808.7780, 实测值 808.7785。
（2）化合物E6的制备
化合物17的制备路线如下：
其化合物17的中文名称为：叔丁基4-((4-(4-(2,6-二氯苯胺)- 1h -吡唑-3-羧胺)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸酯
制备过程如下：
将化合物AT7519（400 mg，1.05 mmol）加入到二氯乙烷（10 mL）中，随后在缓慢加入醋酸硼氢化钠（165 mg，2.63 mmol），N-Boc-4-哌啶甲醛（561 mg， 2.63 mmol）室温下搅拌反应3小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。0 ℃条件下缓慢加入饱和碳酸氢钠溶液（50 mL）淬灭反应，用乙酸乙酯（2×80 mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=20∶1），得到化合物17（620 mg，59%），为白色固体。
其检测结果如下：
M.p. 155.7-157.2 ℃;1H NMR (400 MHz, Chloroform-d)δ12.34 (s, 1H),9.88 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.35 – 7.27 (m, 3H), 6.93 (s, 1H), 4.17 – 4.05(m, 2H), 3.96 (s, 1H), 3.01 – 2.92 (m, 2H), 2.70 (t,J= 13.2 Hz, 2H), 2.30 (s,2H), 2.20 – 2.11 (m, 2H), 1.99 (d,J= 9.4 Hz, 2H), 1.87 – 1.79 (m, 2H), 1.74(d,J= 11.8 Hz, 3H), 1.45 (s, 9H), 1.13 (d,J= 11.4 Hz, 2H).13C NMR (100 MHz,Chloroform-d)δ163.3, 161.5, 154.8, 135.3, 133.1, 132.6, 130.9, 128.5, 122.2,121.1, 79.6, 64.4, 52.7, 45.7, 43.4, 33.1, 31.1, 30.3, 28.4. HRMS (ESI) 预测值 C27H37Cl2N6O4 +[M+H]+: 580.5230, 实测值 580.5231。
化合物18的制备路线如下：
其化合物18的中文名称为：N-(1-(1-(2-溴乙酰基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)-4-(2,6-二氯苯胺)- 1H -吡唑-3-羧酰胺
制备过程如下：
将化合物17（400 mg，0.690 mmol）加入到二氯甲烷（7 mL）中，随后将三氟乙酸（0.5 mL）滴加至上述溶液中，并在室温下搅拌2小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。减压浓缩后向瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺（7 mL），然后加入N,N-二异丙基乙胺（178mg，1.38 mmol），再加入溴乙酰氯（131 mg，0.830 mmol）。将混合物在室温条件下搅拌过夜。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。加入饱和氯化钠溶液（40 mL），用二氯甲烷（2×50 mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=40∶1），得到化合物18（156 mg，38%），为淡黄色固体。
其检测结果如下：
M.p. 187.7-188.9 ℃;1H NMR (400 MHz, Chloroform-d)δ11.62 (s, 1H),9.87 (s, 1H), 8.47 (d,J= 3.2 Hz, 1H), 7.37 – 7.24 (m, 4H), 6.94 (s, 1H), 4.55(d,J= 12.9 Hz, 1H), 4.08 (q,J= 12.5, 10.3 Hz, 2H), 3.95 (s, 1H), 3.86 (d,J=12.2 Hz, 1H), 3.10 (t,J= 12.4 Hz, 1H), 2.95 (s, 2H), 2.64 (t,J= 13.0 Hz, 1H),2.25 (d,J= 44.3 Hz, 4H), 1.99 (s, 2H), 1.91 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 1.87 – 1.72(m, 4H), 1.14 (q,J= 13.5, 12.5 Hz, 1H).13C NMR (100 MHz, Chloroform-d)δ165.0,163.0, 161.2, 135.4, 132.5, 131.3, 128.7, 122.9, 121.5, 63.9, 53.5, 52.9,46.3, 45.8, 42.4, 41.0, 33.9, 31.1, 31.2, 30.3. HRMS (ESI) 预测值C24H30BrCl2N6O3 +[M+H]+: 601.3390, 实测值 601.3392。
化合物E6的制备路线如下：
其化合物E6的中文名称为：4-（2，6-二氯苯甲酰胺）-N-（1-（2-（4-（（2，6-二氧代哌啶-3-基氨基）苯基）哌嗪-1-基）乙酰基）哌啶-4-基）甲基）哌啶-4-基）-1H-吡唑-3-甲酰胺
制备过程如下：
将化合物4（311 mg，0.800 mmol）加入到二氯甲烷（8 mL）中，随后将三氟乙酸（0.6mL）滴加至上述溶液中，并在室温下搅拌2小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。减压浓缩后向瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺（8 mL）,然后加入三乙胺（243 mg，2.40 mmol），加入化合物18（478 mg，0.800 mmol），将混合物置于室温条件下搅拌过夜。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。加入饱和氯化钠溶液（50 mL），用二氯甲烷（2×80 mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=10∶1），得到化合物E6（280 mg，62%），为深紫色固体。
其检测结果如下：
M.p. 243.9-244.5 ℃; IR(KBr): 3659, 2936, 1721, 1680, 1577, 1451,1369, 1210, 908, 797, 661 cm-1.1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 13.47 (s, 1H),10.76 (s, 1H), 10.18 (s, 1H), 8.50 (d,J= 7.5 Hz, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.62 –7.47 (m, 3H), 6.89 (t,J= 7.9 Hz, 1H), 6.24 (s, 1H), 6.15 (dd,J= 15.4, 8.1 Hz,2H), 5.75 (s, 1H), 5.63 (d,J= 7.2 Hz, 1H), 4.31 (q,J= 11.6 Hz, 2H), 4.15 –3.88 (m, 3H), 3.16 (d,J= 3.2 Hz, 2H), 3.04 (s, 4H), 2.99 – 2.80 (m, 3H), 2.73(ddd,J= 16.6, 11.9, 4.6 Hz, 1H), 2.59 (s, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.12 (dd,J=34.1, 6.2 Hz, 5H), 1.79 – 1.64 (m, 4H), 1.63 – 1.36 (m, 4H), 1.19 – 1.05 (m,2H).13C NMR (100 MHZ, DMSO-d 6) δ 174.25, 173.61, 163.14, 163.13, 160.79,152.50, 149.04, 135.84, 132.40, 131.73, 129.63, 128.93, 122.01, 121.19,121.17, 105.03, 104.68, 100.82, 55.38, 53.66, 52.92, 49.08, 48.89, 46.37,44.73, 41.00, 41.00, 32.27, 31.50, 31.20, 25.33. HRMS (ESI) 预测值C39H49Cl2N10O5 +[M+H]+: 808.7780, 实测值 808.7783。
（3）化合物E7的制备
化合物19的制备路线如下：
其化合物19的中文名称为：3-（4-（4-（2-溴乙酰基）哌嗪-1-基苯基）氨基）哌啶-2，6-二酮
制备过程如下：
将化合物4（400 mg，1.040 mmol）加入到二氯甲烷（10 mL）中，随后将三氟乙酸（0.8 mL）滴加至上述溶液中，并在室温下搅拌2小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。减压浓缩后向瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺（10 mL），然后加入N,N-二异丙基乙胺（403mg，3.12 mmol），再加入溴乙酰氯（145 mg，1.248 mmol）。将混合物在室温条件下搅拌过夜。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。加入饱和氯化钠溶液（50 mL），用二氯甲烷（2×80 mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=40∶1），得到化合物19（375 mg，88%），为深紫色固体。
其检测结果如下：
M.p. 145.3-145.9 ℃;1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.30 (d,J= 18.7Hz, 1H), 7.12 (t,J= 8.0 Hz, 1H), 6.42 (d,J= 8.0 Hz, 1H), 6.23 (s, 1H), 6.20(d,J= 7.7 Hz, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.07 (d,J= 11.4 Hz, 1H), 3.56 (s, 4H), 3.11(s, 4H), 2.82 (t,J= 20.4 Hz, 2H), 2.57 (s, 1H), 2.36 (s, 2H) 1.74-1.64 (m,1H).13C NMR (100 MHZ, Chloroform-d) δ 172.47, 171.43, 171.39, 154.76, 152.68,147.30, 130.17, 107.91, 105.04, 102.56, 79.95, 54.73, 49.42, 31.17, 28.45,25.83. HRMS (ESI) 预测值 C17H22BrN4O3 +[M+H]+: 410.2840, 实测值 410.2843。
化合物E7的
其化合物E7的的中文名称为：4-（2，6-二氯苯甲酰胺）-N-（1-（2-（4-（（2，6-二氧代哌啶-3-基氨基）苯基）哌嗪-1-基）-2-氧代乙基）哌啶-4-基）甲基）哌啶-4-基）-1H-吡唑-3-甲酰胺
制备过程如下：
将化合物17（300 mg，0.520 mmol）加入到二氯甲烷（5 mL）中，随后将三氟乙酸（0.4 mL）滴加至上述溶液中，并在室温下搅拌2小时。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。减压浓缩后向瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺（5 mL）,然后加入三乙胺（158 mg，1.56mmol），加入化合物19（213 mg，0.520 mmol），将混合物置于室温条件下搅拌过夜。TLC对原料进行检测，原料消失后停止反应。加入饱和氯化钠溶液（40 mL），用二氯甲烷（2×50 mL）萃取，收集有机相，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。硅胶柱层析（二氯甲烷∶甲醇=10∶1），得到化合物E7（244 mg，58%），为深紫色固体。
其检测结果如下：
M.p. 251.8-252.4 ℃; IR(KBr): 3665, 2931, 1760, 1640, 1553, 1462,1340, 1186, 923, 785, 640 cm-1.1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 13.46 (s, 1H),10.76 (s, 1H), 10.18 (s, 1H), 8.50 (d,J= 7.5 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.62 –7.47 (m, 3H), 6.89 (t,J= 7.9 Hz, 1H), 6.24 (s, 1H), 6.14 (dd,J= 15.4, 8.1 Hz,2H), 5.75 (s, 1H), 5.62 (d,J= 7.2 Hz, 1H), 4.31 (q,J= 11.6 Hz, 2H), 4.15 –3.88 (m, 3H), 3.15 (d,J= 3.2 Hz, 2H), 3.04 (s, 4H), 2.99 – 2.79 (m, 3H), 2.73(ddd,J= 16.6, 11.9, 4.6 Hz, 1H), 2.59 (s, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.12 (dd,J=34.1, 6.2 Hz, 5H), 1.79 – 1.64 (m, 4H), 1.63 – 1.36 (m, 4H), 1.19 – 1.05 (m,2H).13C NMR (100 MHZ, DMSO-d 6) δ 174.23, 173.59, 163.11, 163.10, 160.76,152.48, 149.02, 135.81, 132.37, 131.71, 129.61, 128.90, 121.98, 121.17,121.14, 105.01, 104.66, 100.79, 55.36, 53.64, 52.89, 49.05, 48.87, 46.35,44.71, 40.98, 40.98, 32.24, 31.47, 31.18, 25.31. HRMS (ESI) 预测值C39H49Cl2N10O5 +[M+H]+: 808.7780, 实测值 808.7785。
实施例3
化合物性能试验
（1）化合物降解活性的测定
通过Western Blot实验评价实施例1-实施例2中7个PROTAC分子对MV-4-11细胞中CDK9蛋白的降解作用。将0.1 μM的PROTAC分子与MV-4-11细胞共同孵育24 h后，收取全蛋白，用Western Blot实验检测细胞中CDK9蛋白的表达情况，并利用ImageJ软件进行量化，结果如表1所示。可以看到得到的化合物基本上对CDK9具有较好的降解能力，E1-E3降解能力较为突出。
表1 PROTAC分子对MV-4-11细胞CDK9降解活性的测定
+++：<5 nM；++：5 nM-50 nM；+：>50 nM
（2）化合物的血浆、缓冲液稳定性测定
血浆稳定性是评价药物能否成药的重要因素之一。取生理条件下缓冲液和小鼠全血血浆，加入一定浓度的E1，E2，E3溶液，并且在37℃孵育不同时间后取样，采用LC-MS/MS测定化合物在缓冲液和小鼠全血血浆中的剩余药量，分别计算化合物在缓冲液和血浆中的半衰期；试验结果表明化合物E1，E2，E3均具有较好的稳定性。
表2 候选化合物的血浆、缓冲液稳定性测试
血浆：+++：>3；++：1-3；+：<1；生理缓冲液：+++：>48；++：24-48；+：<24
（3）化合物动力学溶解性测定
将化合物准备成30mM的DMSO溶液，在96孔板(溶解度样品板)中向平底玻璃瓶中加入10µL/瓶原液，一式两份。在溶解度样品板中加入990µL/瓶的测定缓冲液。搅拌均匀后将溶解度样品板转移到恒温板摇床，1100 rpm，25℃，2小时。使用真空歧管将溶解度板样品转移到滤板中，将10µL过滤后的样品和10µL DMSO转移到980µL甲醇中，在甲醇:水(1:1)中进一步稀释10倍作为过滤后的样品进行LC-MS/MS分析。将30 mM测试化合物原液稀释到300 µM的DMSO中。将300µM DMSO样品和10µL分析缓冲液转移到980 µL甲醇中，在甲醇:水(1:1)中进一步稀释10倍，作为LC-MS/MS分析的标准样品。上述结果如表3所示，由表3可知，化合物中E1，E3的动力学溶解性较好，优于其他化合物。
表3 动力学溶解度测试
+++：>300；++：300-100；+：<100
（4）化合物药代动力学测定
接下来的动物实验中，我们评价了小鼠体内的血药浓度分布情况，检测其口服生物利用度。本试验通过单剂量灌胃给予受试物小鼠中，测定小鼠血浆中受试物的浓度，评价受试物在小鼠体内药代特征。本试验通过单剂量灌胃给予受试物于小鼠，测定小鼠血浆中受试物的浓度，评价体内药代特征，其结果如表4所示，结果表明，运用本发明技术所合成的化合物在大鼠中具有一定的口服生物利用度。
表4 药代动力学测试
（5）化合物动物肿瘤抑制实验
为了评估活性分子E1，E3在体内的抗肿瘤能力，我们进行了小鼠的四种的异种移植瘤模型的动物实验 (NCI-H446, MV-4-11, Kasumi-1, MOLM-13)。将小鼠分为4组，每组5只，分别为Control组，给药组（0.3 mg/kg）；0.3 mg/kg的E1，E3腹腔注射两天给药一次，分别给药14天，并记录每天的小鼠体重。如表5所示，E1，E3均表现出了抗肿瘤活性，E1，E3对Kasumi-1和NCI-H466模型具有较为明显的抑制作用。这说明化合物E1，E3能够在四种动物模型中表现出比较良好的抑瘤效果。
表5 化合物E1，E3动物实验
以上所述，只是本发明的较佳实施例而已，本发明并不局限于上述实施方式，只要其以相同的手段达到本发明的技术效果，都应属于本发明的保护范围。在本发明的保护范围内其技术方案和/或实施方式可以有各种不同的修改和变化。

Claims (7)

1.一种蛋白水解靶向嵌合体，其特征在于，其结构式如式I所示：
式I；其中，X为不同取代位置的F原子或H；Y为N或O；
所述Linker为
、/>、/>、中的任意一种。
2.根据权利要求1所述的蛋白水解靶向嵌合体，其特征在于，所述蛋白水解靶向嵌合体的分子结构如式II、式III、或式IV所示：
式II；
式III；
式IV。
3.一种权利要求1-2任一项所述的蛋白水解靶向嵌合体的制备方法，其特征在于，其制备路线为路线一、路线二、路线三或路线四所示：
路线一：
；
路线二：
；
路线三：
；
路线四：
。
4.一种权利要求1-2任一项所述的蛋白水解靶向嵌合体或其在药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防癌症药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，癌症为急性髓性白血病或非小细胞肺癌。
6.一种药物组合物，其特征在于，以权利要求1-2任一项所述的蛋白水解靶向嵌合体或其在药学上可接受的盐为主要活性成分。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括赋形剂。
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