CN117695371B - 一种用于治疗痛经的中药发酵制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用于治疗痛经的中药发酵制剂及其制备方法，属于中药制药技术领域，该制剂由中药组合物和混合菌种发酵制成；中药组合物按重量份数计，包括：党参55‑65份、茯苓30‑35份、阿胶5‑9份、百合12‑17份、锌硒蛋白粉10‑15份、葛根‑覆盆子‑山药水蒸气提取物7‑11份、枸杞3‑5份、益智仁7‑10份、辣木叶3‑5份和丁香醇提取物3‑5份；混合菌种包括：枯草芽孢杆菌，活菌数106‑107CFU/mL，每100g中药组合物使用菌液25‑35mL；丁酸梭菌，活菌数106‑107CFU/mL，每100g中药组合物使用菌液10‑20mL；嗜酸乳杆菌，活菌数106‑107CFU/mL，每100g中药组合物使用菌液15‑25mL；枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为1：（0.4‑0.6）：（0.5‑0.8）。本发明制得中药发酵制剂重金属（铜、铅、镉）含量极低，镇痛功效即痛经治疗效果优异。

Description

一种用于治疗痛经的中药发酵制剂及其制备方法
技术领域
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种用于治疗痛经的中药发酵制剂及其制备方法。
背景技术
痛经，也称为月经痛，是指女性在月经期间或月经前后出现的下腹部疼痛，严重时可能伴有恶心、呕吐、头晕、腹泻等症状。中医上认为，痛经可能与气血瘀滞、寒湿凝滞等有关。西医上认为，痛经的原因可能有以下几种：1、月经期间，子宫内膜脱落，子宫需要收缩以排出脱落的组织，这种收缩可能导致疼痛；2、前列腺素是一种在子宫内膜脱落时产生的化学物质，它会引起子宫收缩，从而导致疼痛；3、内分泌失调，激素水平失衡可能导致痛经，例如雌激素和孕激素水平不平衡可能导致子宫内膜过度生长，从而引起疼痛；4、焦虑、紧张、抑郁等精神因素可能加重痛经症状。
西药中的非甾体抗炎药(NSAIDs)可以有效缓解痛经症状，如布洛芬、阿司匹林等。这些药物通过抑制前列腺素的合成，减少子宫收缩和炎症反应，从而快速缓解疼痛。但是，长期或过量使用NSAIDs可能会导致胃肠道不适、头痛、眩晕等副作用。此外，某些人可能对NSAIDs过敏，出现皮疹、呼吸困难等症状。某些人可能因为身体状况或其他原因无法使用NSAIDs，如有胃溃疡、肝肾功能不全、哮喘等疾病的人。
中药治疗痛经通常是从整体上调理身体，通过调节气血、活血化瘀等方法来改善痛经症状。中药的药性温和，不易产生副作用。但是，中药药材因生长环境、采收方式等原因会含有重金属，而对于一些女性来说，痛经可能每个月都会出现，而普通中药的治疗效果不理想，导致这些女性对该类治疗痛经的中药药物频繁服用，重金属元素在人体内积累过多可能会对人体健康造成危害。
发明内容
为解决背景技术中存在的问题，本发明提供了一种用于治疗痛经的中药发酵制剂及其制备方法，以降低中药发酵制剂重金属（铜、铅、镉）含量，提升镇痛功效即痛经治疗效果。
为了实现上述目的，本发明提供技术方案如下：
一种用于治疗痛经的中药发酵制剂，由中药组合物和混合菌种发酵制成；所述中药组合物按重量份数计，包括如下组分：党参55-65份、茯苓30-35份、阿胶5-9份、百合12-17份、锌硒蛋白粉10-15份、葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物7-11份、枸杞3-5份、益智仁7-10份、辣木叶3-5份和丁香醇提取物3-5份；
所述混合菌种包括如下组分：
枯草芽孢杆菌，菌液活菌数为106-107CFU/mL，每100g中药组合物对应使用枯草芽孢杆菌菌液的体积为25-35mL；
丁酸梭菌，菌液活菌数为106-107CFU/mL，每100g中药组合物对应使用丁酸梭菌菌液的体积为10-20mL；
嗜酸乳杆菌，菌液活菌数为106-107CFU/mL，每100g中药组合物对应使用嗜酸乳杆菌菌液的体积为15-25mL；
所述枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为1：（0.4-0.6）：（0.5-0.8）。
中药组合物中各组分的功效如下：
党参：具有补气养血的作用，可以改善气血不足引起的痛经症状；党参中的活性成分可以调节女性体内的激素水平，缓解内分泌失调引起的痛经；党参中的多糖和皂苷等成分可以促进血液循环，缓解子宫收缩引起的疼痛；党参中的黄酮类化合物具有一定的抗炎镇痛作用，可以减轻痛经时的疼痛感；因而，党参可以作为治疗痛经的君药使用。
茯苓：利水消肿、安神定志、抗炎抗氧化；可以作为治疗痛经的臣药使用。
阿胶：补血滋阴，润燥，止血。
百合：养阴润肺、清心安神。
锌硒蛋白粉：也叫锌硒，蛋白调节激素水平、抗氧化、促进血液循环、调节免疫系统；锌和硒是人体必需的微量元素，对于女性痛经有一定的缓解作用；锌对于女性痛经的作用主要体现在以下几个方面：①调节激素水平；锌可以促进体内激素的合成和分泌，有助于调节激素水平，从而缓解痛经症状；②抗氧化；锌具有抗氧化作用，可以减少炎症反应，缓解痛经症状；③促进血液循环；锌可以促进血液循环，有助于缓解痛经症状；硒对于女性痛经的作用主要体现在以下几个方面：①抗氧化；硒具有抗氧化作用，可以减少炎症反应，缓解痛经症状；②促进血液循环；硒可以促进血液循环，有助于缓解痛经症状；③调节免疫系统；硒可以调节免疫系统，有助于缓解痛经症状。
葛根：清热解毒、活血化瘀、缓解痛经。
覆盆子：滋阴补肾、调经止痛。
山药：补气养血、调和阴阳、补肾益精、活血化瘀、增强免疫力。
葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物，经试验验证，相较于单独存在及提取，组合在一起会产生协同效应，增强治疗效果。
枸杞：滋阴补肾、养血安神、缓解痛经。
益智仁：补肾益精、调经止痛。
辣木叶：清热解毒、活血化瘀、缓解痛经。
丁香提取物：止痛、抗炎、抗菌。
进一步的，葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物的制备方法如下：
A1、称取葛根、覆盆子和山药，混合得到原料；
A2、向A1所得原料中加入原料总重量3倍的70℃水，浸泡1小时，得浸泡物；
A3、向A2所得浸泡物中加入原料总重量10倍的水，蒸馏回流提取10小时，得到料液；
A4、将A3所得料液浓缩至原料总重量的3倍，静置10h，沉淀，取上清液减压浓缩至60℃下的相对密度为1.18，喷雾干燥，收粉，粉碎，即得葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物。
进一步的，A1中，所述葛根、覆盆子和山药的质量比为1：（1-1.5）：（1-2）。
进一步的，所述丁香醇提取物的制备方法如下：
B1、将丁香花蕾晒干使其含水量降至5%，放入研磨器中进行研磨，得到丁香粉末；
B2、将B1所得丁香粉末加入蒸馏罐，再加入乙醇溶液，加压使得乙醇溶液泡过丁香粉末，在常温下浸泡2h，得到浸泡液；
B3、从蒸馏罐底部通入水蒸气，对B2所得浸泡液进行加热，使浸泡液沸腾、提取，再经冷凝器冷凝、回流，得到油水混合物；
B4、将B3所得油水混合物经过油水分离器进行油水分离，得到丁香粗油和水；
B5、将B4所得丁香粗油经过萃取罐进行萃取，分层后，分出下层，即得丁香醇提取物。
进一步的，B2中，乙醇溶液体积分数为60%，所述丁香粉末的质量与乙醇溶液的体积比为1:12。
进一步的，B3中，提取温度60℃，回流浸提2h。
一种用于治疗痛经的中药发酵制剂的制备方法，用于制备上述的用于治疗痛经的中药发酵制剂，包括如下步骤：
S1、将党参、茯苓、阿胶、百合、锌硒蛋白粉、葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物、枸杞、益智仁和辣木叶混合，粉碎，过65-80目筛，得到粉碎料；
S2、将S1所得粉碎料与丁香醇提取物混合，即得中药组合物；
S3、将所述混合菌种与S2所得中药组合物投入发酵罐中，混合均匀，密闭发酵，即得用于治疗痛经的中药发酵制剂。
进一步的，S1中，过70目筛。
进一步的，S3中，发酵温度控制在30±2℃，发酵时长为4-8天。
本申请具有以下有益效果：
1、本发明中药组合物配伍理论符合中医“君臣佐使”理论，配伍有序，诸药功效协同，以达到治疗痛经的效果；中药组合物采用混合菌种发酵，混合菌种中，枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌能够制造出协同发酵环境，进而更好地降低最终制得中药发酵制剂的重金属（铜、铅、镉）含量；经试验验证，枯草芽孢杆菌为降低重金属含量的主功能发酵菌，丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌为辅功能发酵菌，三者功效协同，协同功效大于简单叠加。
本发明采用混合菌种对中药组合物进行发酵，最终制得中药发酵制剂能显著减少小鼠饲喂缩宫素30min内扭体次数，能显著延长（痛经）模型小鼠扭体潜伏期，具备优异的镇痛功效即痛经治疗效果；经试验验证，混合菌种中，枯草芽孢杆菌为提升镇痛功效的主功能发酵菌，丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌为提升镇痛功效的辅功能发酵菌，三者协同，协同功效大于简单叠加；同时，中药组合物中，葛根、覆盆子和山药复合同时进行水蒸气提取的操作工艺，也更有利于提升最终制得中药发酵制剂的镇痛功效，即更有利于提升对痛经的治疗效果。
中药组合物中，丁香先进行水蒸气提取工艺，再与其它中药组分混合发酵，更有利于提升最终制得中药发酵制剂的镇痛功效；锌硒蛋白粉和阿胶的加入，均有利于提升最终制得中药发酵制剂的镇痛功效，并且，经试验验证，两者功效协同，协同功效大于简单叠加。
附图说明
图1为本发明试验例1中检测实施例1-13和对比例1-15制得制剂铜含量比较趋势图；
图2为本发明试验例1中检测实施例1-13和对比例1-15制得制剂铅含量比较趋势图；
图3为本发明试验例1中检测实施例1-13和对比例1-15制得制剂镉含量比较趋势图；
图4为本发明试验例2中各组小鼠扭体潜伏期比较趋势图；
图5为本发明试验例2中各组小鼠30min内扭体次数比较趋势图；
图6为本发明试验例2中各组小鼠给药后扭体抑制率比较趋势图。
具体实施方式
以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。
本申请实施例及对比例的原料除特殊说明以外均为普通市售。
实施例1
一种用于治疗痛经的中药发酵制剂，由中药组合物和混合菌种发酵制成。
中药组合物按重量份数计，包括如下组分：党参55份、茯苓30份、阿胶5份、百合12份、锌硒蛋白粉10份、葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物7份、枸杞3份、益智仁7份、辣木叶3份和丁香醇提取物3份；
混合菌种包括如下组分：
枯草芽孢杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用枯草芽孢杆菌菌液的体积为30mL；
丁酸梭菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用丁酸梭菌菌液的体积为15mL；
嗜酸乳杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用嗜酸乳杆菌菌液的体积为21mL；
其中，枯草芽孢杆菌购于北京北纳创联生物技术研究院，编号为BNCC 336389；丁酸梭菌购于北京北纳创联生物技术研究院，编号为BNCC 337239；嗜酸乳杆菌购于北京北纳创联生物技术研究院，编号为BNCC 138598；相应菌液以无菌水稀释制得。
枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为1：0.5：0.7。
进一步的，葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物的制备方法如下：
A1、按照葛根、覆盆子和山药的质量比为1:1:1，称取葛根、覆盆子和山药，混合得到原料；
A2、向A1所得原料中加入原料总重量3倍的70℃水，浸泡1小时，得浸泡物；
A3、向A2所得浸泡物中加入原料总重量10倍的水，蒸馏回流提取10小时，得到料液；
A4、将A3所得料液浓缩至原料总重量的3倍，静置10h，沉淀，取上清液减压浓缩至60°C下的相对密度为1.18，喷雾干燥，收粉，粉碎，即得葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物。
丁香醇提取物的制备方法如下：
B1、将丁香花蕾晒干使其含水量降至5%，放入研磨器中进行研磨，得到丁香粉末；
B2、将B1所得丁香粉末加入蒸馏罐，再加入体积分数为60%乙醇溶液，丁香粉末的质量与乙醇溶液的体积比为1：12（g/mL），加压使得乙醇溶液泡过丁香粉末，在常温下浸泡2h，得到浸泡液；
B3、从蒸馏罐底部通入水蒸气，对B2所得浸泡液进行加热，使浸泡液沸腾、提取，提取温度60℃，再经冷凝器冷凝、回流，回流浸提2h，得到油水混合物；
B4、将B3所得油水混合物经过油水分离器进行油水分离，得到丁香粗油和水；
B5、将B4所得丁香粗油经过萃取罐进行萃取，分层后，分出下层，即得丁香醇提取物。
该用于治疗痛经的中药发酵制剂的制备方法，包括如下步骤：
S1、将党参、茯苓、阿胶、百合、锌硒蛋白粉、葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物、枸杞、益智仁和辣木叶混合，粉碎，过70目筛，得到粉碎料；
S2、将S1所得粉碎料与丁香醇提取物混合，即得中药组合物；
S3、将所述混合菌种与S2所得中药组合物投入发酵罐中，混合均匀，密闭发酵，发酵温度控制在30±2℃，发酵时长为6天，即得用于治疗痛经的中药发酵制剂。
实施例2
本实施例与实施例1的区别仅在于：中药组合物按重量份数计，包括如下组分：党参60份、茯苓32份、阿胶7份、百合15份、锌硒蛋白粉12份、葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物9份、枸杞4份、益智仁8份、辣木叶4份和丁香醇提取物4份。
实施例3
本实施例与实施例1的区别仅在于：中药组合物按重量份数计，包括如下组分：党参65份、茯苓35份、阿胶9份、百合17份、锌硒蛋白粉15份、葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物11份、枸杞5份、益智仁10份、辣木叶5份和丁香醇提取物5份。
实施例4
本实施例与实施例1的区别仅在于：中药组合物按重量份数计，包括如下组分：党参60份、茯苓33份、阿胶8份、百合16份、锌硒蛋白粉14份、葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物8份、枸杞4份、益智仁9份、辣木叶4份、丁香醇提取物3份。
实施例5
本实施例与实施例1的区别仅在于：中药组合物按重量份数计，包括如下组分：党参65份、茯苓35份、阿胶9份、百合12份、锌硒蛋白粉10份、葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物7份、枸杞3份、益智仁8份、辣木叶3份、丁香醇提取物5份。
实施例6
本实施例与实施例4的区别仅在于：混合菌种包括如下组分：
枯草芽孢杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用枯草芽孢杆菌菌液的体积为30mL；
丁酸梭菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用丁酸梭菌菌液的体积为12mL；
嗜酸乳杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用嗜酸乳杆菌菌液的体积为24mL；
以使总菌数相同且枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为1：0.4：0.8。
实施例7
本实施例与实施例4的区别仅在于：混合菌种包括如下组分：
枯草芽孢杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用枯草芽孢杆菌菌液的体积为31.45mL；
丁酸梭菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用丁酸梭菌菌液的体积为18.85mL；
嗜酸乳杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用嗜酸乳杆菌菌液的体积为15.7mL；
以使总菌数相同且枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为1：0.6：0.5。
实施例8
本实施例与实施例4的区别仅在于：混合菌种包括如下组分：
枯草芽孢杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用枯草芽孢杆菌菌液的体积为34.75mL；
丁酸梭菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用丁酸梭菌菌液的体积为13.9mL；
嗜酸乳杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用嗜酸乳杆菌菌液的体积为17.35mL；
以使总菌数相同且枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为1：0.4：0.5。
实施例9
本实施例与实施例4的区别仅在于：混合菌种包括如下组分：
枯草芽孢杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用枯草芽孢杆菌菌液的体积为27.5mL；
丁酸梭菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用丁酸梭菌菌液的体积为16.5mL；
嗜酸乳杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用嗜酸乳杆菌菌液的体积为22mL；
以使总菌数相同且枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为1：0.6：0.8。
实施例10
本实施例与实施例4的区别仅在于：葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物的制备中，葛根、覆盆子和山药的质量比为1：1：2。
实施例11
本实施例与实施例4的区别仅在于：葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物的制备中，葛根、覆盆子和山药的质量比为1：1.5：1。
实施例12
本实施例与实施例4的区别仅在于：葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物的制备中，葛根、覆盆子和山药的质量比为1：1.5：2。
实施例13
本实施例与实施例4的区别仅在于：葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物的制备中，葛根、覆盆子和山药的质量比为1：1.25：1.5。
对比例1
本对比例与实施例4的区别仅在于：混合菌种包括如下组分：
枯草芽孢杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用枯草芽孢杆菌菌液的体积为47mL；
丁酸梭菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用丁酸梭菌菌液的体积为9.5mL；
嗜酸乳杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用嗜酸乳杆菌菌液的体积为9.5mL；
以使总菌数相同且枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为1：0.2：0.2。
对比例2
本对比例与实施例4的区别仅在于：混合菌种包括如下组分：
枯草芽孢杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用枯草芽孢杆菌菌液的体积为23.6mL；
丁酸梭菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用丁酸梭菌菌液的体积为18.8mL；
嗜酸乳杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用嗜酸乳杆菌菌液的体积为23.6mL；
以使总菌数相同且枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为1：0.8：1。
对比例3
本对比例与实施例4的区别仅在于：混合菌种包括如下组分：
丁酸梭菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用丁酸梭菌菌液的体积为33mL；
嗜酸乳杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用嗜酸乳杆菌菌液的体积为33mL；
以使总菌数相同且枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为0：1：1。
对比例4
本对比例与实施例4的区别仅在于：混合菌种包括如下组分：
枯草芽孢杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用枯草芽孢杆菌菌液的体积为33mL；
嗜酸乳杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用嗜酸乳杆菌菌液的体积为33mL；
以使总菌数相同且枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为1：0：1。
对比例5
本对比例与实施例4的区别仅在于：混合菌种包括如下组分：
枯草芽孢杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用枯草芽孢杆菌菌液的体积为33mL；
丁酸梭菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用丁酸梭菌菌液的体积为33mL；
以使总菌数相同且枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为1：1：0。
对比例6
本对比例与实施例4的区别仅在于：混合菌种改为单一菌种，包括组分：枯草芽孢杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用枯草芽孢杆菌菌液的体积为66mL；
以使总菌数相同且枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为1：0：0。
对比例7
本对比例与实施例4的区别仅在于：混合菌种改为单一菌种，包括组分：丁酸梭菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用丁酸梭菌菌液的体积为66mL；
以使总菌数相同且枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为0：1：0。
对比例8
本对比例与实施例4的区别仅在于：混合菌种改为单一菌种，包括组分：嗜酸乳杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用嗜酸乳杆菌菌液的体积为66mL；
以使总菌数相同且枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为0：0：1。
对比例9
本对比例与实施例4的区别仅在于：采用实施例4中葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物的制备方法，分别制备葛根水蒸气提取物、覆盆子水蒸气提取物和山药水蒸气提取物。
对比例10
本对比例与实施例4的区别仅在于：葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物的制备中，葛根、覆盆子和山药的质量比为1：0.8：0.8。
对比例11
本对比例与实施例4的区别仅在于：葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物的制备中，葛根、覆盆子和山药的质量比为1：1.8：2.2。
对比例12
本对比例与实施例4的区别仅在于：丁香醇提取物改为丁香。
具体地，该用于治疗痛经的中药发酵制剂的制备方法，包括如下步骤：
S1、将党参、茯苓、阿胶、百合、锌硒蛋白粉、葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物、枸杞、益智仁、辣木叶和丁香混合，粉碎，过70目筛，得到粉碎料；
S2、将所述混合菌种与S1所得粉碎料投入发酵罐中，混合均匀，密闭发酵，发酵温度控制在30±2℃，发酵时长为6天，即得用于治疗痛经的中药发酵制剂。
对比例13
本对比例与实施例4的区别仅在于：原料组分中删除锌硒蛋白粉。
对比例14
本对比例与实施例4的区别仅在于：原料组分中删除阿胶。
对比例15
本对比例与实施例4的区别仅在于：原料组分中删除锌硒蛋白粉和阿胶。
试验例1
试验项目：重金属（铜、铅、镉）。
试验对象：实施例1-13和对比例1-15。
试验方法：石墨炉原子吸收分光光度法；进样前需要对待测物进行硝化处理。
试验结果：见表1。
表1.重金属检测数据
结果分析：由实施例1-13结合表1数据和图1-3可知，本发明实施例1-13制得中药发酵制剂的重金属（铜、铅、镉）含量远低于中国药典规定，其中，以实施例4为最佳实施例。
由实施例4和对比例1-8结合表1数据和图1-3可知，混合菌种中枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌产生协同发酵环境，更好地降低重金属（铜、铅、镉）含量；具体分析实施例4和对比例1-2并结合表1相应数据可知，枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的混合比例，在本发明的保护范围内时，更有利于降低重金属含量；具体分析实施例4和对比例3-8并结合表1相应数据可知，以枯草芽孢杆菌为降低重金属含量的主功能发酵菌，以丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌为辅功能发酵菌，三者协同，协同功效大于简单叠加。
由实施例4和对比例9-11结合表1数据和图1-3可知，对比例9制得中药发酵制剂的重金属（铜、铅、镉）含量>对比例11>对比例10>实施例4，分析可知，相较于分别制备葛根水蒸气提取物、覆盆子水蒸气提取物和山药水蒸气提取物，葛根、覆盆子和山药三者复合同时进行水蒸气提取的操作工艺更有利于降低最终制得中药发酵制剂的重金属（铜、铅、镉）含量；并且，葛根、覆盆子和山药的混合比例，在本发明的保护范围内时，更有利于降低重金属含量；
这里另设了对照组，与实施例4相比，区别仅在于葛根、覆盆子和山药均不进行水蒸气提取，而是直接与其他中药原料组分混合发酵，结果最终制得中药发酵制剂的重金属含量分别为：铜0.320、铅0.238、镉0.117，均高于本发明实施例1-13的对应检测数据，说明在混合发酵前对葛根、覆盆子和山药进行水蒸气提取的操作工艺更有利于降低最终制得中药发酵制剂的重金属（铜、铅、镉）含量。
试验例2
试验项目：小鼠扭体反应。
试验对象：空白例、模型例、实施例4、对比例1、对比例3-8、对比例9和对比例12-15。
试验方法：取健康雌性昆明小鼠75只，体重20±2g，随机分为15组，每组5只，分别对应各试验对象；
各组小鼠除空白例外，于每日上午灌胃给与己烯雌酚，每日一次，每次2mg/kg，连续7d(人工造成相同动情期，以便提高子宫平滑肌对药物的敏感性)；第8天开始下午给与已烯雌酚，每次2mg/kg;
从第8天开始，除空白例组和模型例组外的其它组按统一12g/kg剂量开始给相应制剂（药），每天2次，连续给药5d，空白例组和模型例组每天饲喂等重量的生理盐水；
末次给药1h后，腹腔注射缩宫素20U/kg，记录注射后30min内鼠扭体潜伏期和扭体次数，以扭体反应为子宫收缩(痛经)的指标(注：不发生扭体反应小鼠的潜伏期按30min计)，并计算扭体抑制率；
扭体抑制率＝(模型例组扭体次数-相应给药组扭体次数)/模型例组扭体次数×100％。
试验结果：见表2（P<0 .01）。
表2.扭体反应数据
结果分析：由空白例、模型例和实施例4结合表2数据和图4-6可知，本发明制得中药发酵制剂能显著减少小鼠饲喂缩宫素30min内扭体次数，能显著延长（痛经）模型小鼠扭体潜伏期，具备优异的镇痛功效。
由实施例4和对比例1、3-8结合表2数据和图4-6可知，混合菌种中枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌产生协同发酵环境，更好地提升中药发酵制剂的镇痛功效，更好地提升对痛经的治疗效果；具体分析实施例4和对比例1并结合表2相应数据可知，枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的混合比例，在本发明的保护范围内时，更有利于提升中药发酵制剂的镇痛功效；具体分析实施例4和对比例3-8并结合表2相应数据可知，枯草芽孢杆菌为提升镇痛功效的主功能发酵菌，丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌为提升镇痛功效的辅功能发酵菌，三者协同，协同功效大于简单叠加。
由实施例4和对比例9结合表2数据和图4-6可知，对比例9制得中药发酵制剂的镇痛功效比实施例4差，说明葛根、覆盆子和山药复合同时进行水蒸气提取的操作工艺，更有利于提升最终制得中药发酵制剂的镇痛功效，更有利于提升对痛经的治疗效果。
由实施例4和对比例12结合表2数据和图4-6可知，对比例12制得中药发酵制剂的镇痛功效比实施例4差，说明丁香先进行水蒸气提取工艺，再与其它中药组分混合发酵，更有利于提升最终制得中药发酵制剂的镇痛功效，更有利于提升对痛经的治疗效果。
由实施例4和对比例13-15结合表2数据和图4-6可知，锌硒蛋白粉和阿胶作为制备原料的加入，均有利于提升最终制得中药发酵制剂的镇痛功效，即有利于提升对痛经的治疗效果；并且，两者协同，协同功效大于简单叠加。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (4)

1.一种用于治疗痛经的中药发酵制剂，其特征在于，由中药组合物和混合菌种发酵制成；所述中药组合物按重量份数计，由如下组分制成：党参55-65份、茯苓30-35份、阿胶5-9份、百合12-17份、锌硒蛋白粉10-15份、葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物7-11份、枸杞3-5份、益智仁7-10份、辣木叶3-5份和丁香醇提取物3-5份；
所述混合菌种包括如下组分：
枯草芽孢杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用枯草芽孢杆菌菌液的体积为25-35mL；
丁酸梭菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用丁酸梭菌菌液的体积为10-20mL；
嗜酸乳杆菌，菌液活菌数为5*106CFU/mL，每100g中药组合物对应使用嗜酸乳杆菌菌液的体积为15-25mL；
所述枯草芽孢杆菌、丁酸梭菌和嗜酸乳杆菌的用量活菌数之比为1：（0.4-0.6）：（0.5-0.8）；
所述葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物的制备方法如下：
A1、称取葛根、覆盆子和山药，混合得到原料；
A2、向A1所得原料中加入原料总重量3倍的70°C水，浸泡1小时，得浸泡物；
A3、向A2所得浸泡物中加入原料总重量10倍的水，蒸馏回流提取10小时，得到料液；
A4、将A3所得料液浓缩至原料总重量的3倍，静置10h，沉淀，取上清液减压浓缩至60°C下的相对密度为1.18，喷雾干燥，收粉，粉碎，即得葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物；
A1中，所述葛根、覆盆子和山药的质量比为1：（1-1.5）：（1-2）；
所述丁香醇提取物的制备方法如下：
B1、将丁香花蕾晒干使其含水量降至5%，放入研磨器中进行研磨，得到丁香粉末；
B2、将B1所得丁香粉末加入蒸馏罐，再加入乙醇溶液，加压使得乙醇溶液泡过丁香粉末，在常温下浸泡2h，得到浸泡液；
B3、从蒸馏罐底部通入水蒸气，对B2所得浸泡液进行加热，使浸泡液沸腾、提取，再经冷凝器冷凝、回流，得到油水混合物；
B4、将B3所得油水混合物经过油水分离器进行油水分离，得到丁香粗油和水；
B5、将B4所得丁香粗油经过萃取罐进行萃取，分层后，分出下层，即得丁香醇提取物；
B2中，乙醇溶液体积分数为60%，所述丁香粉末的质量与乙醇溶液的体积比为1g：12mL；
B3中，提取温度60°C，回流浸提2h。
2.一种用于治疗痛经的中药发酵制剂的制备方法，其特征在于，用于制备如权利要求1所述的用于治疗痛经的中药发酵制剂，包括如下步骤：
S1、将党参、茯苓、阿胶、百合、锌硒蛋白粉、葛根-覆盆子-山药水蒸气提取物、枸杞、益智仁和辣木叶混合，粉碎，过65-80目筛，得到粉碎料；
S2、将S1所得粉碎料与丁香醇提取物混合，即得中药组合物；
S3、将所述混合菌种与S2所得中药组合物投入发酵罐中，混合均匀，密闭发酵，即得用于治疗痛经的中药发酵制剂。
3.根据权利要求2所述的用于治疗痛经的中药发酵制剂的制备方法，其特征在于，S1中，过70目筛。
4.根据权利要求2所述的用于治疗痛经的中药发酵制剂的制备方法，其特征在于，S3中，发酵温度控制在30±2℃，发酵时长为4-8天。
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