CN117695326A - 决明子在制备抗呼吸道合胞病毒的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了决明子在制备抗呼吸道合胞病毒的药物中的应用。决明子为临床常用药材，具有清热明目、润肠通便之功，主要用于治疗眼部疾病、便秘、高血压、高血脂及糖尿病。本发明首次发现决明子具有抗呼吸道合胞病毒的作用，因此，决明子具有开发成抗呼吸道合胞病毒药物的前景。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及决明子在制备抗呼吸道合胞病毒的药物中的应用。
背景技术
呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)是一种常见的通过空气传播的RNA病毒，是全球范围内引起5岁以下儿童急性下呼吸道感染(acute lowerrespiratory tract infection，ALRTI)最主要的病毒性病原体。在婴幼儿时期感染RSV主要表现为毛细支气管炎和肺炎等，并与反复喘息、气道高反应性及哮喘有密切联系，其中6月龄内婴儿是RSV疾病负担最大的年龄群体。老年人和免疫缺陷人群也是RSV的易感人群，RSV感染所引起的严重并发症会导致高住院率和高死亡率。
目前，全球尚未有专门针对RSV的有效防治手段。被批准用来预防RSV的人源化特异性抗体帕丽珠单抗价格昂贵，难以普及，利巴韦林副作用比较大。现有治疗以对症和支持治疗为主。随着近年来科学界对于RSV的感染机制有了更多的了解，全球范围内有多款预防疫苗、创新药物正处于不同的临床开发阶段，有望获得突破性进展，为患者带来更多治疗选择。
决明子为临床常用药材，具有清热明目、润肠通便之功，主要用于治疗眼部疾病、便秘、高血压、高血脂及糖尿病。2020版《中国药典》规定决明子为豆科植物决明Cassiaobtusifolia L.或小决明Cassia tora L.的干燥成熟种子。
目前没有决明子具有抗呼吸道合胞病毒活性的报道。
发明内容
本发明旨在克服现有技术不足，提供决明子在制备抗呼吸道合胞病毒的药物中的应用。
本发明上述目的通过如下技术方案实现：
决明子在制备抗呼吸道合胞病毒的药物中的应用。
进一步地，所述药物以决明子为活性成分，并用药学上可以接受的辅料制成药学上可以接受的剂型。
更进一步地，所述辅料为液体、固体或半固体辅料。
更进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊和软胶囊。
有益效果：
决明子为临床常用药材，具有清热明目、润肠通便之功，主要用于治疗眼部疾病、便秘、高血压、高血脂及糖尿病。本发明首次发现决明子具有抗呼吸道合胞病毒的作用，因此，决明子具有开发成抗呼吸道合胞病毒药物的前景。
附图说明
图1为各组小鼠肺部RSV-G、RSV-N基因表达水平(n＝5)。
具体实施方式
下面结合实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。
一、实验材料
1、仪器
Revco UXF超低温冰箱(美国Thermo Fisher公司)；CPA225D十万分之一电子天平(德国Sartorius公司)；Quant studio 7Flex荧光定量PCR仪(美国Life technologies公司)；蛋白核酸分析仪、PCR逆转录仪(德国Eppendorf公司)。
2、试剂
决明子，购于江苏省中医院；利巴韦林(Ribavirin)购自美国MedChemExpress公司；HiScript III RT SuperMix for qPCR(+gDNAwiper)、ChamQ Universal SYBRqPCRMaster Mix、Fast Pure Cell/Tissue Total RNAIsolation KitV2购自于南京诺唯赞生物科技有限公司；呼吸道合胞病毒株购于武汉病毒所。
二、实验方法
1、决明子水提物的制备
称取决明子100g，加8倍量的蒸馏水，于烧杯中浸泡1h，武火煮沸，再以文火煎煮30min，滤取药液，残渣加5倍量的蒸馏水，重复操作，合并两次滤液，将提取液混合浓缩至160mL，置4℃冰箱中保存备用。
2、病毒扩增
人喉癌上皮细胞(HEp-2)细胞系(CRL-9609)购自ATCC(Manassas，美国)。将细胞在DMEM培养基中培养，添加10％的热灭活胎牛血清，在37℃、5％CO2的培养箱中培养。病毒最初在HEp-2细胞中繁殖。
用TCID50法检测病毒滴度。采用Reed-Muench法计算病毒滴度。
3、动物RSV感染实验
雌性BALB/c小鼠购自南京青紫蓝科技有限公司(南京，中国)，6周龄，体重18-20g。随机分为Water组(经鼻接种等量蒸馏水)、Mock组(RSV+蒸馏水0.1mL/kg/天)、Ribavirin组(RSV+利巴韦林50mg/kg/天)、决明子组(RSV+决明子水提物0.4、0.8或1.6g/kg/天)。将RSV(1.8×106PFU/0.1mL/只)经鼻接种感染。接种RSV 1h后灌胃给药，连续给药3天，接种后第4天处死小鼠，收集肺组织。通过实时荧光定量PCR技术检测小鼠肺组织的病毒载量，评估药物体内抗病毒效果。
4、实时荧光能定量PCR实验
使用RNA提取试剂盒(RC101,Vazyme，南京，中国)提取RNA，蛋白核酸分析仪对RNA进行浓度定量分析。使用HiScript III RT SuperMix for qPCR试剂盒，将RNA反转录成cDNA。SYBR Green II实时荧光定量PCR法检RSV吸附蛋白以及膜融合蛋白mRNA基因转录水平。实时荧光定量PCR反应条件(采用两步法)：95℃预变性15s，95℃变性5s，60℃退火30s，40个循环，并使用QuantStudio Real-time PCR Software(ABI，美国)进行分析。测量的病毒RNA在每个图中以线性刻度绘制为与对照相比的百分比。
表1引物序列
5、数据分析
数据处理及作图采用统计软件GraphpadPrism 8，数据采用Mean±SD表示，多组数据采用非参数检验(Kruskal–Wallis test)分析，P<0.05表示差异有统计学意义。
三、实验结果
利用RSV(1.8×106PFU/0.1mL/只)感染BALB/c小鼠，在感染后1小时灌胃给药。持续给药三天后，在第四天处死小鼠并取肺组织，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RSV-G和RSV-N基因的相对表达，评估决明子的抗病毒的效果。图1中A、B结果显示，决明子给药治疗的小鼠肺部的RSV-G与RSV-N基因与Mock组相比显著下调，这表明决明子在小鼠体内产生良好的抗RSV病毒效果，且存在剂量依赖性，其中高剂量组抑制率能高达90％。
由此可见，决明子具有抗呼吸道合胞病毒的作用。因此，决明子具有开发成抗呼吸道合胞病毒药物的前景。
上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。
Claims (4)
1.决明子在制备抗呼吸道合胞病毒的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，所述药物以决明子为活性成分，并用药学上可以接受的辅料制成药学上可以接受的剂型。
3.根据权利要求2所述的应用，所述辅料为液体、固体或半固体辅料。
4.根据权利要求2所述的应用，所述剂型包括片剂、胶囊和软胶囊。
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