CN111374985B - 盐酸非那吡啶的医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种盐酸非那吡啶的医药用途。本发明所要解决的技术问题是如何治疗或/和预防冠状病毒所致疾病或冠状病毒感染。为了解决以上技术问题,本发明提供了盐酸非那吡啶或非那吡啶盐酸盐或非那吡啶的应用,所述应用为以下(a)和/或(b)和/或(c):(a)制备治疗冠状病毒所致疾病或冠状病毒感染的药物;(b)制备预防冠状病毒所致疾病或冠状病毒感染的药物;(c)制备冠状病毒抑制剂。本发明为进一步将盐酸非那吡啶应用于治疗由2019‑nCoV感染所导致的病毒性肺炎、严重急性呼吸综合征等疾病奠定了基础。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域,具体涉及一种盐酸非那吡啶的医药用途。
背景技术
中国将2019-nCoV引起的疾病命名为新型冠状病毒肺炎,世界卫生组织将 2019-nCoV引发的疾病命名为2019冠状病毒病,英文缩写COVID-19(Corona Virus Disease2019)。
目前,尚无针对2019-nCoV的疫苗和抗病毒药物,COVID-19的主要治疗方法均为支持性的,如暂试用的抗艾滋药物洛匹那韦/利托那韦、α-干扰素等。另外,利用针 对SARS、MERS蛋白酶、聚合酶等开发的抗病毒药物,或其它抗病毒药物(如新型核苷 类似物抗病毒药Remdesivir),但这些均尚未经临床试验证实。因此,亟需研制有效 的药物来治疗2019-nCoV引起的感染。
当前爆发的新型冠状病毒肺炎疫情以及2002年爆发的SARS疫情,均为以前未知的冠状病毒(Coronavirus,CoV)引起。冠状病毒由于其不可预测性,可通过飞沫传播、 接触呼吸道分泌物等途径传播,带来严重后果,已成为影响人类健康的重大威胁之一。
冠状病毒是一类有包膜的RNA病毒。病毒的基因组为无节段的单股正链RNA,是 目前已知最大的RNA病毒,编码DNA长度约为26-32kb。冠状病毒主要编码结构蛋白S、 M、E、N和非结构蛋白NSP1-16。S蛋白形成同源三聚体,构成病毒颗粒表面的刺突, 主要负责与宿主受体的结合。M蛋白可与核衣壳结合,在包膜的形成及装配过程中发 挥作用。E蛋白主要负责病毒的组装和释放。N蛋白为核衣壳蛋白,与病毒RNA基因组 结合。部分冠状病毒还编码HE糖蛋白,参与病毒与受体的结合过程。冠状病毒科分为 四个属,即α、β、γ和δ属。α属的229E、NL63和β属的SARS-CoV、MERS-CoV、 OC43-CoV、HKU1-CoV均可感染人类。
2019-nCoV与SARS-CoV、MERS-CoV同属于β属冠状病毒。经全基因组比对, 2019-nCoV与SARS-CoV有超过70%相似性,与MERS-CoV有约40%序列相似性。序列分 析发现,2019-nCoV与SARS病毒S蛋白编码基因有较大的差异性,但在病毒S蛋白的 宿主受体互作区(receptor-binding domain,RBD)比较相似。经过分子结构模拟的 计算方法,发现2019-nCoV的S蛋白中与ACE2(血管紧张素转换酶2)蛋白结合的5 个关键氨基酸中有4个发生改变,但并不影响S蛋白与ACE2互作的原结构构象,说明 2019-nCoV与SARS-CoV类似,通过S蛋白与ACE2结合来感染人的呼吸道上皮细胞。 经遗传进化分析,2019-nCoV和SARS-CoV的共同祖先是果蝠的HKU9-1类病毒,与 SARS-CoV类似,2019-nCoV在从蝙蝠到人的传染过程中很可能存在未知的中间宿主。
盐酸非那吡啶,是一种化学分子,它的分子量为249.70,分子式为C11H11N5·HCl,CAS登记号是136-40-3,化学名为2,6-二氨基-3-苯偶氮基吡啶盐酸盐,英文名为Phenazopyridine Hydrochloride。盐酸非那吡啶是一种局部镇痛剂,是临床常用于泌 尿系统的药物,能直接作用于尿道粘膜,适用于因感染、肿瘤、外科手术及内窥镜检 查等各种原因刺激尿道粘膜所引起的疼痛。盐酸非那吡啶主要从胃肠道吸收,部分在 肝脏代谢,主要代谢产物有N-乙酰-P-氨基苯酚、P-氨基苯酚和苯胺,主要经肾脏排 泄,65%以原形从尿中排出。尿液中的药物直接作用于泌尿道粘膜,发挥止痛作用, 从而明显缓解泌尿道刺激症状。盐酸非那吡啶安全性高,小鼠静脉注射盐酸非那吡啶 的LD50值为180mg/kg,大鼠口服给药的LD50值为403mg/kg,未见致突变、致癌性和 生殖毒性。
盐酸非那吡啶的结构式见式(Ⅰ)。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何治疗或/和预防冠状病毒所致疾病或冠状病毒感染。
为了解决以上技术问题,本发明提供了盐酸非那吡啶或非那吡啶盐酸盐或非那吡啶的应用,所述应用为以下(a)和/或(b)和/或(c):
(a)盐酸非那吡啶或非那吡啶盐酸盐或非那吡啶在制备治疗冠状病毒所致疾 病或冠状病毒感染的药物中的应用;
(b)盐酸非那吡啶或非那吡啶盐酸盐或非那吡啶在制备预防冠状病毒所致疾 病或冠状病毒感染的药物中的应用;
(c)盐酸非那吡啶或非那吡啶盐酸盐或非那吡啶在制备冠状病毒抑制剂中的 应用。
上述应用中,术语“非那吡啶盐酸盐”指在可靠的医学判断范围内,适合用 于与人类和低等动物的组织接触而不出现过度的毒性、刺激、过敏反应等,且与 合理的效果/风险比相称的盐。非那吡啶盐酸盐为盐酸非那吡啶药学上可接受的盐。 药学可接受的盐是本领域公知的。例如,S.M.Berge,et al.,J.Pharmaceutical Sciences,1977,66:1中对药学可接受的盐进行了详细描述。
上述应用中,制备药物时,盐酸非那吡啶或非那吡啶盐酸盐或非那吡啶可作为 有效成分之一,也可作为唯一有效成分。
上述应用中,制备药物时,盐酸非那吡啶或非那吡啶盐酸盐或非那吡啶可作为 活性成分之一,也可作为唯一活性成分。
上述应用中,制备药物时,还可加入载体材料。
载体材料包括但不限于水溶性载体材料(如聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、有机酸等)、难溶性载体材料(如乙基纤维素、胆固醇硬脂酸酯等)、肠溶性载体材料(如醋 酸纤维素酞酸酯和羧甲乙纤维素等)。使用这些材料可以制成多种剂型,包括但不限于 片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、 透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各 种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂,可以广泛使用本领域公知的各种载 体。关于载体的例子是,例如稀释剂与吸收剂,如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露 醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等;湿润 剂与粘合剂,如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡 萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚 乙烯吡咯烷酮等;崩解剂,例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠 与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯、山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、 乙基纤维素等;崩解抑制剂,例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等;吸收 促进剂,例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等;润滑剂,例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀 粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片,例 如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片,或双层片和多层片。为了将单位给药剂型制 成丸剂,可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是,例如稀释剂与吸 收剂,如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、高岭土、滑 石粉等;粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等;崩 解剂,如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素 等。为了将单位给药剂型制成栓剂,可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体 的例子是,例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘 油酯等。为了将单位给药剂型制成注射用制剂,如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬 剂,可以使用本领域常用的所有稀释剂,例如,水、乙醇、聚乙二醇、1,3-丙二醇、 乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外,为了 制备等渗注射液,可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油,此外,还 可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。此外,如需要,也可以向药物制剂中 添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。使用上述剂型可以经注射 给药,包括皮下注射、静脉注射、肌肉注射和腔内注射等;腔道给药,如经直肠和阴 道;呼吸道给药,如经鼻腔;粘膜给药。
本发明还保护用于治疗冠状病毒所致疾病或冠状病毒感染的盐酸非那吡啶。
本发明还保护用于治疗冠状病毒所致疾病或冠状病毒感染的非那吡啶盐酸盐。
本发明还保护用于治疗冠状病毒所致疾病或冠状病毒感染的非那吡啶。
本发明还保护一种抑制冠状病毒感染动物的方法,包括如下步骤:给受体动物 施用盐酸非那吡啶或非那吡啶盐酸盐或非那吡啶以抑制冠状病毒感染动物。
本发明还保护一种治疗冠状病毒所致疾病的方法,包括如下步骤:给受体动物 施用盐酸非那吡啶或非那吡啶盐酸盐或非那吡啶进行治疗冠状病毒所致疾病。
本发明还保护一种预防冠状病毒所致疾病的方法,包括如下步骤:给受体动物 施用盐酸非那吡啶或非那吡啶盐酸盐或非那吡啶进行预防冠状病毒所致疾病。
以上任一所述冠状病毒可为β属冠状病毒。
以上任一所述冠状病毒具体可为2019-nCoV。
上文中,所述冠状病毒所致疾病可为呼吸系统感染和/或消化系统感染。所述 呼吸系统感染为呼吸道感染和/或肺部感染,所述呼吸道感染可为鼻咽炎、鼻炎、 咽喉炎、气管炎和/或支气管炎,所述肺部感染可为肺炎。所述消化系统感染可为 腹泻。
上文中,冠状病毒所致疾病通常包括病毒性肺炎、严重急性呼吸综合征等。
上文中,冠状病毒感染通常引起病毒性肺炎、严重急性呼吸综合征等疾病。
2019-nCoV,其序列特征包括但不局限于代表病毒(发表于Lancet.2020Jan 30.pii:S0140-6736(20)30251-8.doi:10.1016/S0140-6736(20)30251-8.)。
本发明通过实验证明盐酸非那吡啶能在体外有效抑制2019-nCoV的复制,针对2019-nCoV的EC50为5.37μM,显示盐酸非那吡啶具有良好的抗2019-nCoV活性,具有 重要的治疗2019-nCoV感染应用前景。本发明为进一步将盐酸非那吡啶应用于治疗由 2019-nCoV感染所导致的病毒性肺炎、严重急性呼吸综合征等疾病奠定了基础。
附图说明
图1为病毒复制抑制率结果。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明,但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料,如无特殊说明, 均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验,均设置三次重复实 验,结果取平均值。DMEM培养基为常见的用于细胞培养的液体培养基,又称为DMEM培 养液。Vero-E6细胞:非洲绿猴肾细胞系。盐酸非那吡啶:Selleck公司,产品目录号 为S4235。
实施例中所用的2019-nCoV为新型冠状病毒株01(C-Tan-nCoV strain)。新型冠状病毒株01:中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所;CHPC2020.00001;NPRC2020.00001;文献:China CDC Weekly,2020,2(6):81-82。
实施例、盐酸非那吡啶的体外抗2019-nCoV活性效果检测
实验在中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所的BSL-3实验室进行。
供试药物为盐酸非那吡啶。
细胞培养采用37℃,5%CO2培养箱。
1、取96孔板,接种Vero-E6细胞(1×104个细胞/孔),采用含10%胎牛血清的 DMEM培养基培养16小时(此时80%细胞成片),然后吸弃上清液,加入含2%胎牛血 清的DMEM培养基(100μL/孔)。
2、完成步骤1后,取所述96孔板,加入2019-nCoV病毒液(5μL/孔,其中病毒 含量为100PFU),培养2小时,然后吸弃上清,然后用DMEM培养基洗涤一次(洗涤后 吸弃上清)。
3、完成步骤2后,取所述96孔板,3个孔加入DMEM培养基(100μL/孔),3个 孔加入含0.4μM供试药物的培养基(100μL/孔),3个孔加入含2.0μM供试药物的 培养基(100μL/孔),3个孔加入含10.0μM供试药物的培养基(100μL/孔),3个孔 加入含50.0μM供试药物的培养基(100μL/孔),然后培养24小时。加入DMEM培养 基的孔称为对照孔,加入含供试药物的培养基的孔统称为供试孔。
其中,含0.4μM供试药物的培养基是向DMEM培养基中加入盐酸非那吡啶母液至 体系中盐酸非那吡啶含量为0.4μM得到的。含2.0μM供试药物的培养基是向DMEM 培养基中加入盐酸非那吡啶母液至体系中盐酸非那吡啶含量为2.0μM得到的。含10.0 μM供试药物的培养基是向DMEM培养基中加入盐酸非那吡啶母液至体系中盐酸非那吡 啶含量为10.0μM得到的。含50.0μM供试药物的培养基是向DMEM培养基中加入盐酸 非那吡啶母液至体系中盐酸非那吡啶含量为50.0μM得到的。将盐酸非那吡啶溶于 DMSO,使其浓度为10mM,即为盐酸非那吡啶母液。
4、完成步骤3后,每孔取100μl上清液,通过荧光定量获得病毒基因的转录水 平,作为病毒复制水平的考量指标。
具体方法如下:
(1)取100μl上清液,采用Qiagen Viral RNA Mini Kit提取RNA,以RNA为 模板进行RT-PCR,获得Ct值,得到3个复孔的平均Ct值。
RT-PCR采用的引物探针组如下(靶序列位于2019-nCoV的ORF1ab基因):
上游引物:5’-CCCTGTGGGTTTTACACTTAA-3’;
下游引物:5’-ACGATTGTGCATCAGCTGA-3’;
探针:5’-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ1-3’。
反应体系(30μL):15μL 2×Taqman One-Step RT-PCR Master Mix Reagents(4309169,Applied Biosystems,ThermoFisher),0.5μL 40×MultiScribe and RNaseinhibitor mixture,0.75μL上游引物溶液(上游引物溶液中,上游引物浓度为 10μmol/L),0.75μL下游引物溶液(下游引物溶液中,下游引物浓度为10μmol/L), 0.375μL探针溶液(探针溶液中,探针的浓度为10μmol/L),2μL模板RNA,余量为 无菌双蒸水。
反应条件:42℃30min、95℃10min,1个循环;95℃15s、58℃45s,40个循 环,延伸后采集荧光信号。
(2)利用步骤(1)得到的平均Ct值,计算△Ct。△Ct=Ct对照孔-Ct供试孔。
(3)计算病毒复制抑制率。病毒复制抑制率(%)=(1-2△Ct)×100%。
病毒复制抑制率结果见图1和表1。盐酸非那吡啶对2019-nCoV的体外半数抑制 浓度为5.37μM。
表1
平均Ct值 | 病毒复制抑制率(%) | |
对照孔 | 24.82 | 0 |
0.4μM供试药物 | 24.63 | -14.07 |
2μM供试药物 | 24.72 | -7.18 |
10μM供试药物 | 27.33 | 82.44 |
50μM供试药物 | 30.49 | 98.05 |
SEQUENCE LISTING
<110> 中国医学科学院医药生物技术研究所
<120> 盐酸非那吡啶的医药用途
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<212> DNA
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ccgtctgcgg tatgtggaaa ggttatgg 28
Claims (3)
1.盐酸非那吡啶或非那吡啶在制备治疗冠状病毒所致疾病的药物中的应用;所述冠状病毒为2019-nCoV。
2.盐酸非那吡啶或非那吡啶在制备预防冠状病毒所致疾病的药物中的应用;所述冠状病毒为2019-nCoV。
3.盐酸非那吡啶或非那吡啶在制备冠状病毒抑制剂中的应用;所述冠状病毒为2019-nCoV。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |