CN110721312B - 用于治疗小儿呼吸道感染的药物组合物及其相关制剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物领域，具体来说，本发明涉及一种药物组合物及其用于治疗小儿呼吸道感染的应用和相关制剂。所述组合物包含利巴韦林和欧前胡素类似物，其中利巴韦林和欧前胡素类似物的重量比为1:0.01‑5。所述药物组合物还包含糖皮质激素，其中，利巴韦林、欧前胡素类似物和糖皮质激素的重量比为1:0.1‑1:0.05‑0.2。

Description

用于治疗小儿呼吸道感染的药物组合物及其相关制剂

技术领域

本发明涉及药物领域，具体来说，本发明涉及一种药物组合物及其用于治疗小儿呼吸道感染的应用和相关制剂。

背景技术

呼吸道感染包括上呼吸道感染及下呼吸道感染。上呼吸道感染是指病原体侵犯包括鼻、咽、喉等部位时出现的急性炎症反应，下呼吸道感染是指气管、支气管、细支气管和肺组织(包括肺泡和肺间质)等部位的炎症，是儿科最常见的疾病之一。本病无固定发病时间，全年任何时候都可以发病，但以秋冬季和春季气温变化时，发病率较高。发病次数也不固定，每个人常可以多次发病。营养不良，机体免疫力低下的小儿易患上呼吸道感染。小儿呼吸道感染是儿科的常见疾病，而且年龄愈小，病情愈重，并发症愈多，病死率也愈高。

经流行病学统计，小儿上呼吸道感染大部分为病毒感染所致，约占90％，常见的有鼻病毒、冠状病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒、副流感病毒、腺病毒及柯萨奇病毒等。感染性气管支气管炎的初始病原以病毒为主。毛细支气管炎病毒是主要病原，约占90％，其中RSV最常见。RSV是呼吸道感染常见病原体，对婴幼儿及小儿生长发育造成了严重影响，其中以支气管肺发育不良、有早产史婴儿、免疫抑制者为高危人群，目前尚无最有效、直接的防治药物。因此早期诊断、并加强防治是临床工作的重点。

目前针对由RSV导致的小儿呼吸道感染的治疗方向有以下几个方面：一、免疫治疗，在免疫治疗中，一方面是通过减毒活疫苗和亚单位疫苗进行主动免疫治疗，另一方面是通过静脉输注RSV免疫球蛋白和特异性单克隆抗体(例如，帕丽珠单抗，Palivizumab)特异性清除小儿体内的RSV进行被动型免疫治疗；二、采用抗病毒药物，例如利巴韦林或IFN用于清除小儿体内的RSV，三、支气管扩张剂，例如，异丙托溴铵等，对于小儿呼吸道感染患者可缓解喘憋症状并改善气道反应性。四、激素类药物，例如糖皮质激素可以有效的抑制RSV增殖并且减少气道的炎性反应。

从以上疗法可以看出，对于治疗由RSV导致的小儿呼吸道感染手段来说，病毒抑制是最主要的治疗手段，其他治疗方法仅仅可以缓解症状，如果患者免疫力得不到改善其他治疗方法是无法改善患者生存率的。因此帕丽珠单抗和利巴韦林是小儿呼吸道感染的最主要治疗手段，因为其可以有效降低或清除患者体内RSV载量。截止目前FDA批准用于防止RSV导致的小儿呼吸道感染的药物也只有帕丽珠单抗和利巴韦林，但是两种药物均存在着明显的缺陷，帕丽珠单抗只能预防给药，治疗性给药效果较差，并且价格极其昂贵并需要多次给药，这无疑极大的阻碍了帕丽珠单抗的推广应用，而利巴韦林是目前FDA唯一批准用于RSV呼吸道感染的小分子药物，但是其疗效和安全性近年来受到了较大的质疑。因此积极推进抗RSV病毒药物的研发，以满足小儿呼吸道感染的用药需求成为本领域的研究热点。

发明内容

本发明的目的之一，在于提供一种用于治疗小儿呼吸道感染的药物组合物，其包含利巴韦林和欧前胡素类似物，其中利巴韦林和欧前胡素类似物的重量比为1:0.01-5。

优选地，所述药物组合物中利巴韦林和欧前胡素类似物的重量比为1:0.1-1。

优选地，所述药物组合物中利巴韦林和欧前胡素类似物的重量比为1:0.5。

优选地，所述欧前胡素类似物为欧前胡素或异欧前胡素。

所述欧前胡素的结构式如下：

所述异欧前胡素的结构如下：

在一个实施方案中，所述药物组合物还包含糖皮质激素，其中，利巴韦林、欧前胡素类似物和糖皮质激素的重量比为1:0.1-1:0.05-0.2。

优选地，所述药物组合物中，利巴韦林、欧前胡素类似物和糖皮质激素的重量比为1:0.5:0.1。

本发明的目的之二，在于提供一种包含所述组合物的药物制剂，其由所述药物组合物和药学上可接受的载体组成。

药学上可接受的载体是指药学上可接受的材料、组合物或运载体，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、制造助剂(例如，润滑剂、滑石镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌，或硬脂酸)或溶剂包封材料，参与将主题化合物从一个器官或身体的一部分运送或运输到另一个器官或身体的一部分。在与配制品的其他成分相容并且对患者无害的意义上，每种载体必须是“可接受的”。可用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)粉状黄芪胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；(9)油类，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；(10)二醇类，如丙二醇；(11)多醇类，如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯类，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)pH缓冲溶液；(21)聚酯，聚碳酸酯和/或聚酸酐；和(22)药物配制品中使用的其他无毒相容物质。

在用于口服、舌下给药、皮下给药、肌肉给药、静脉内给药、透皮给药、局部给药或直肠给药的药物组合物中，单独使用或与其他活性成分一起使用的活性成分可以与传统的药物载体混合，以给药单位剂型的形式给动物或人给药。适当的给药单位剂型包括口服的形式，如片剂、胶囊剂、丸剂、粉末剂、颗粒剂、喷雾剂、口香糖剂型和口服溶液或悬浮液、局部给药的形式、透皮给药的形式、皮下给药的形式、肌肉给药的形式、静脉内给药的形式或眼内和直肠给药的形式。

进一步地，所述药物制剂为喷雾剂或片剂。

本发明的目的之三，在于所述的药物组合物用于制备治疗小儿呼吸道感染药物的用途。

进一步地，所述小儿呼吸道感染为由RSV导致的小儿呼吸道感染。

本发明针对利巴韦林在临床上用于治疗小儿呼吸道感染时，安全性和有效性较差的问题，结合湖南省丰富的天然化合物资源，经过筛选获得了一种可明显提高抑制RSV疗效的药物组合物，从而可以有效降低利巴韦林的临床给药量，降低其毒副反应。考虑到在实际情况中小儿呼吸道感染不可避免带来炎症反应，本发明进一步考察了添加糖皮质激素的药物组合物效果，结果表明在动物模型中，药物组合物的效果进一步得到提高。

具体实施方式

还可进一步通过实施例来理解本发明，其中所述实施例说明了一些制备或使用方法。然而，要理解的是，这些实施例不限制本发明。现在已知的或进一步开发的本发明的变化被认为落入本文中描述的和以下要求保护的本发明范围之内。

实施例1药物组合物对RSV抑制效果的考察

1)50％组织培养感染剂量的测定(TCID₅₀)

病毒株RSVA亚型Long标准株，购自中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所。将RSV病毒原液以10倍比稀释成10^-1至10^-10等10个稀释度，冰浴备用。

将浓度1×10⁵个/ml的Hela细胞接种于96孔板，每孔100ul，培养至形成单层细胞后，吸取培养液，加入不同稀释度的病毒液100ul，每个稀释度5个复孔，在5％CO₂孵箱中培养，逐日在显微镜下观察，在细胞病变(cytopathiceffect，CPE)达75％以上时终止，并测定其TCID₅₀为10^-7.46/100ul。

2)药物半数中毒剂量的测定(TC₅₀)

将浓度1×10⁵个/ml的Hela细胞接种于96孔板，每孔100ul，培养24小时后，吸取培养液，加入不同浓度的含药维持液，再次置于5％CO₂孵箱中培养3天，然后采用MTT法检测药物对细胞的毒性作用，测定每种药物或药物组合物的最大无毒剂量(TC₀)和半数中毒剂量(TC₅₀)

3)药物对RSV在细胞内增殖的抑制作用

浓度1×10⁵个/ml的Hela细胞接种于96孔板，每孔100ul，培养至形成单层细胞后，吸取培养液，将50TCID₅₀的RSV病毒液接种于上述细胞中，每孔100ul，置于5％CO₂孵箱中培养2h后，使RSV吸附于Hela细胞，弃去含病毒的维持液。并在药物无毒浓度范围内加入不同浓度药物的维持液，每组药物中每个浓度设5个复孔，置于5％CO₂孵箱中继续培养，同时设置细胞对照组和病毒对照组，每组各5个复孔，添加不含药物的维持液。逐日在显微镜下观察细胞形态，以病毒对照组CPE达到70-80％并且细胞对照组生长情况正常作为观测终点，记录各组出现病变的程度，并计算每组中药物对CPE的抑制率，从而得到各组药物抑制RSV的半数有效浓度(EC₅₀)和治疗指数(TI)。

4)检测指标

CPE：RSV在Hela细胞中所致的CPE特征：细胞变圆，折光性较强，融合细胞突起，部分脱壁，胞浆有丝状突起等。

5)统计分析

采用Reed-muench法计算病毒的TCID₅₀；采用Probit回归法，计算各组药物的TC₅₀和EC₅₀，并进一步计算TI＝TC₅₀/EC₅₀；上述数据处理采用SPSS软件进行运算。

6)具体结果如下：

	TC<sub>50</sub>	EC<sub>50</sub>	TI
				利巴韦林	0.79mg/ml	28.76ug/ml	27.4
欧前胡素	4.68mg/ml	2.27mg/ml	2.1
				白当归素	3.54mg/ml	1.41mg/ml	2.5
花椒毒酚	3.19mg/ml	0.92mg/ml	3.5
				金丝桃苷	10.67mg/ml	4.59mg/ml	2.3
异鼠李素	8.94mg/ml	4.68mg/ml	1.9
				组合物1	2.18mg/ml	33.52ug/ml	65.0
组合物2	1.44mg/ml	56.19ug/ml	25.6
				组合物3	1.32mg/ml	53.28ug/ml	24.8
组合物4	1.53mg/ml	68.94ug/ml	22.2
				组合物5	1.67mg/ml	62.31ug/ml	26.8

其中，组合物1为利巴韦林：欧前胡素的重量比为1：1；组合物2为利巴韦林：白当归素的重量比为1：1；组合物3为利巴韦林：花椒毒酚的重量比为1：1；组合物4为利巴韦林：金丝桃苷的重量比为1：1；组合物5为利巴韦林：异鼠李素的重量比为1：1。

为了改善利巴韦林的毒性并提高抑制RSV病毒的活性，我们对湖南省道地药材中的白芷和吴茱萸中的典型黄酮类和香豆素类成分，进行了与利巴韦林联用的相关检测，以期找到可以和利巴韦林在抑制RSV感染方面产生协同作用的天然化合物。从上述结果可以看出，利巴韦林与欧前胡素的组合物组可以有效提高针对RSV的治疗指数，具有较好的开发前景，而其他组分与利巴韦林联用后其治疗指数与利巴韦林单味药组接近或更差。因此，利巴韦林与欧前胡素的最佳剂量比是后续研究的重点。

实施例2利巴韦林与欧前胡素的最佳剂量比筛选

实验方法同实施例1，区别在于组合物组分别按照利巴韦林：欧前胡素(重量)＝1：0.1(组合物1)；1：0.5(组合物2)；1：1(组合物3)；1：2(组合物4)或1：10(组合物5)进行配制药物溶液，计算各组合物组的TI。

具体结果如下：

	TI
		利巴韦林	28.3
欧前胡素	1.9
		组合物1	35.7
组合物2	72.6
		组合物3	63.8
组合物4	56.4
		组合物5	26.5

从上述结果可以看出，利巴韦林：欧前胡素(重量)在1：0.5时治疗指数最高，提示利巴韦林和欧前胡素的最佳配伍比可以在1：0.5左右。

实施例3药物对RSV呼吸道感染小鼠模型的影响

造模及给药方法：取BALB/c小鼠，体重15g左右，随机分组，每组10只，乙醚麻醉后，用注射器取50TCID₅₀的病毒悬液，缓慢滴入小鼠鼻孔，每只30ul，正常对照组麻醉后小鼠鼻孔内滴入等量生理盐水。RSV感染后2h，开始灌胃给药，各给药组给药剂量均为50mg/kg，给药组1为利巴韦林；给药组2为欧前胡素，给药组3为糖皮质激素，给药组4为利巴韦林与欧前胡素重量比1：0.5，给药组5为利巴韦林、欧前胡素和糖皮质激素重量比1：0.5：0.1，模型组给予等量生理盐水。各组均隔离饲养，防止交叉感染。在给药5天后处死小鼠，进行相关检测评价。

检测指标：

1、肺指数计算：肺指数＝肺湿重/小鼠体重×100％

2、肺组织中TNF-α和IL-1β含量检测：取各组小鼠小块肺组织置于生理盐水中，均浆5min，离心后取上清采用ELISA试剂盒进行相关检测。

具体结果如下：

1、肺指数情况

	肺指数
		正常组	0.76±0.08
模型组	1.49±0.06<sup>##</sup>
		给药组1	1.07±0.04*
给药组2	1.34±0.06
		给药组3	1.18±0.05*
给药组4	0.94±0.06**
		组合物5	0.89±0.07**

经Oneway-ANOVA检验，与模型组相比，*和**分别代表P<0.05或0.01

2、肺组织中TNF-α和IL-1β含量

经Oneway-ANOVA检验，与模型组相比，*和**分别代表P<0.05或0.01

我们考虑到临床上利巴韦林与糖皮质激素经常联合用于小儿呼吸道感染的情况，进一步在动物模型上考察了利巴韦林、欧前胡素和糖皮质激素联合应用的效果。结果表明，在等剂量条件下，利巴韦林和欧前胡素联用能明显改善RSV感染小鼠的肺指数和肺组织中炎症因子的含量，并且效果明显优于单味药组，这进一步证明了利巴韦林和欧前胡素联用的可行性，并且添加糖皮质激素后效果进一步提高。

本发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案，其中一个或更多个技术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合，这些经组合而得到的技术方案也在本申请保护范围内，就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开内容中具体记载一样。

Claims (1)

1.药物组合物在制备用于治疗由RSV导致的小儿呼吸道感染的药物中的应用，其特征在于，所述药物组合物由利巴韦林、欧前胡素类似物和糖皮质激素组成，其中，利巴韦林、欧前胡素类似物和糖皮质激素的重量比为1:0.5:0.1。