CN117677695A - 与gd2特异性结合的单克隆抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物技术和医学领域，特别涉及与GD2(神经节苷脂GD2)特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段。本发明进一步涉及编码所述抗体的核酸，表达载体，宿主细胞及其生产方法，用于产生根据本发明的抗体的方法，包含根据本发明的抗体的药物组合物，包含根据本发明的抗体和其它治疗活性化合物的药物组合物，用于治疗由GD2介导的疾病或病症的方法，抗体或其药物组合物用于治疗由GD2介导的疾病或病症的用途，以及抗体和其它治疗活性化合物用于治疗由GD2介导的疾病或病症的用途。

Description

与GD2特异性结合的单克隆抗体
技术领域
本发明涉及生物技术和医学领域，特别涉及与GD2(神经节苷脂GD2)特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段。本发明进一步涉及编码所述抗体的核酸，表达载体，宿主细胞及其生产方法，用于产生根据本发明的抗体的方法，包含根据本发明的抗体的药物组合物，包含根据本发明的抗体和其它治疗活性化合物的药物组合物，用于治疗由GD2介导的疾病或病症的方法，抗体或其药物组合物用于治疗由GD2介导的疾病或病症的用途，以及抗体和其它治疗活性化合物用于治疗由GD2介导的疾病或病症的用途。
背景技术
GD2是被证明为用于癌症免疫治疗的有效靶抗原的首个神经节苷脂。
神经节苷脂由鞘糖脂和唾液酸(N-乙酰神经氨酸、Neu5Ac或NANA)组成，其为九碳单糖。神经节苷脂命名法基于NANA残基的数目和位置。首先将单糖加入神经酰胺中，以形成乳糖神经酰胺，然后加入NANA残基，以形成神经节苷脂。每种糖都由特定的糖基转移酶结合。GD2具有两个NANA(a-2,8唾液酸和a-2,3唾液酸)，并且通过经由GM2/GD2合酶(b1,4-N-乙酰半乳糖胺基转移酶)添加Gal-Nac而衍生自前体GD3。末端五寡糖构成最特异性的抗体针对其的GD2的特异性表位。负责制备GD2的这种关键酶GM2/GD2合酶已成功地用作骨髓中的最低限度残留的神经母细胞瘤的分子标记物，对患者存活具有重大预后影响。如关于神经节苷脂的合成途径中所述的，可以明确地限定GD2的表位邻域。例如，GD3和GD1b是抗GD2抗体识别的最常见的交叉反应的神经节苷脂。在末端唾液酸上具有9-O-乙酰基修饰的GD2-衍生物被称为O-乙酰基-GD2。虽然大多数抗GD2抗体与O-GD2交叉反应，但一些并不交叉反应。与GD2无交叉反应性的抗O-GD2抗体与正常神经元具有较少的交叉反应性。神经节苷脂在脊椎动物中的神经系统的细胞表面上发现。低等脊椎动物如鱼和两栖动物具有更多的多唾液酸神经节苷脂，含有4至5个NANA残基，而高等脊椎动物包括爬行动物、鸟类和哺乳动物中的神经节苷脂仅具有1至3个NANA残基(MAYA SUZUKI等人，Disialoganglioside GD2 asa therapeutic target for human diseases，Expert Opinion on TherapeuticTargets，2015，第15卷，第349-362页，PMID:25604432，DOI:10.1517/14728222.2014.986459)。
GD2在神经干细胞、间充质干细胞(MSC)和外周交感肾上腺素能祖细胞上表达，并且它涉及神经分化和增殖。虽然多唾液酸在神经元发育中的作用已得到广泛研究，但神经节苷脂，且具体而言GD2的确切功能仍是未知的。在出生后，GD2的表达仅限于CNS，占优势地在神经元细胞体和MSC中，以及以低水平在周围神经和皮肤黑素细胞中。GD2被认为在神经组织的维持和修复中发挥作用，所述神经组织通过调控补体激活和后续炎症而经历不断的进行性退行性变化，尽管确切的免疫机制仍不清楚。应该注意的是，GD2(+)MSC具有分化成多重克隆包括神经元的潜力(MAYA SUZUKI等人，Disialoganglioside GD2 as atherapeutic target for human diseases，Expert Opinion on Therapeutic Targets，2015，第15卷，第349-362页，PMID:25604432，DOI:10.1517/14728222.2014.986459)。
GD2在各种胚胎癌(神经母细胞瘤、脑瘤、视网膜母细胞瘤、尤文氏肉瘤、横纹肌肉瘤)、骨肿瘤(骨肉瘤、尤文氏肉瘤)、软组织肉瘤(平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤)、肺癌、黑色素瘤和乳腺癌中是超表达的。
肿瘤单克隆抗体(mAb)已证实了临床功效，因此成为用于癌症免疫治疗的重要方法。由于其在正常组织中的有限表达，在神经母细胞瘤细胞上表达的二唾液酸神经节苷脂GD2是用于mAb疗法的极佳候选物。
国际申请WO2005070967A2公开了针对GD2的抗体。
迄今为止，全世界仅存在2种针对GD2的抗体被批准用于治疗用途(地努妥昔单抗(dinutuximab)和那昔妥单抗(naxitamab))。与上文结合，存在产生与GD2特异性结合的新型拮抗性抗体的需要。
发明内容
本组发明的作者已开发出与GD2特异性结合，并且在可变结构域中还具有至少80％的人源化程度的抗体。主题抗体具有高热稳定性。
在一个方面，本发明涉及与GD2(神经节苷脂GD2)特异性结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有选自以下的氨基酸序列的CDR1：GHNMN(SEQ ID NO:1)或GKNMN(SEQ IDNO:2)，
(ii)具有氨基酸序列AIDPFYGGTSYNQKFKG(SEQ ID NO:3)的CDR2，
(iii)具有选自以下氨基酸序列的CDR3：GMIY(SEQ ID NO:4)、GMFY(SEQ ID NO:5)、GMYY(SEQ ID NO:6)或GMLY(SEQ ID NO:7)；和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有选自以下的氨基酸序列的CDR1：RSSRSLVHRNGNTYLH(SEQ ID NO:8)或RSSQNLVHRNGNTYLH(SEQ ID NO:9)，
(ii)具有选自以下的氨基酸序列的CDR2：KVSNRFG(SEQ ID NO:10)或KVNNRFS(SEQID NO:11)，
(iii)具有选自以下的氨基酸序列的CDR3：GQSTHVPPLT(SEQ ID NO:12)或SQSTHVPPLS(SEQ ID NO:13)。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链可变结构域，其包含：
(i)具有氨基酸序列QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGSSFT(SEQ ID NO:42)的FR1，
(ii)具有氨基酸序列WVRQNIGQGLEWMG(SEQ ID NO:43)的FR2，
(iii)具有氨基酸序列RVTLTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVS(SEQ ID NO:44)的FR3，和
(iv)具有氨基酸序列WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:45)的FR4。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链可变结构域，其包含：
(i)具有氨基酸序列DIVMTQTPLSLSVTPGERASLSC(SEQ ID NO:46)的FR1，
(ii)具有选自以下的氨基酸序列的FR2：WYLQKPGQSPKLLIH(SEQ ID NO:47)或WYLQKPGQSPQLLIH(SEQ ID NO:48)，
(iii)具有氨基酸序列GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFC(SEQ ID NO:49)的FR3，和
(iv)具有氨基酸序列FGQGTKLELK(SEQ ID NO:50)的FR4。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有氨基酸序列QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGSSFT(SEQ ID NO:42)的FR1，
(ii)具有氨基酸序列WVRQNIGQGLEWMG(SEQ ID NO:43)的FR2，
(iii)具有氨基酸序列RVTLTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVS(SEQ ID NO:44)的FR3，和
(iv)具有氨基酸序列WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:45)的FR4，并且其中
b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有氨基酸序列DIVMTQTPLSLSVTPGERASLSC(SEQ ID NO:46)的FR1，
(ii)具有选自以下的氨基酸序列的FR2：WYLQKPGQSPKLLIH(SEQ ID NO:47)或WYLQKPGQSPQLLIH(SEQ ID NO:48)，
(iii)具有氨基酸序列GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFC(SEQ ID NO:49)的FR3，和
(iv)具有氨基酸序列FGQGTKLELK(SEQ ID NO:50)的FR4。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR1，
(ii)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2，
(iii)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR3。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR1，
(ii)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2，
(iii)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR3。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的CDR1，
(ii)具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR2，
(iii)具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR3。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR1，
(ii)具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDR2，
(iii)具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR3。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链可变结构域，其包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸序列。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16或SEQID NO:17。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链可变结构域，其包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少96％同一性的氨基酸序列。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20或SEQID NO:21。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
(a)重链可变结构域，其包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸序列；
(b)轻链可变结构域，其包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少96％同一性的氨基酸序列；
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
(a)重链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17；
(b)轻链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的重链可变结构域；
(b)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的轻链可变结构域。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链可变结构域；
(b)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链可变结构域。
在本发明的一些实施方案中，与GD2特异性结合的分离的单克隆抗体是全长IgG抗体。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体是具有人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的全长IgG抗体。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体是具有人IgG1同种型的全长IgG抗体。
在本发明的一些实施方案中，与Fc片段的天然存在的序列相比，分离的单克隆抗体包含在Fc片段中的YTE突变(M252Y、S254T、T256E)和/或K322A。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体包括包含选自以下的氨基酸序列的重链：SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体包括包含选自以下的氨基酸序列的轻链：SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40或SEQ ID NO:41。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体包括：
(a)包含选自以下的氨基酸序列的重链：SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ IDNO:36或SEQ ID NO:37，和
(b)包含选自以下的氨基酸序列的轻链：SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ IDNO:40或SEQ ID NO:41。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体包括：
(a)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体包括：
(a)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的轻链。
在一个方面，本发明涉及编码任何上述抗体或其抗原结合片段的分离核酸。
在本发明的一些实施方案中，分离的核酸是DNA。
在一个方面，本发明涉及包含任何上述核酸的表达载体。
在一个方面，本发明涉及用于产生宿主细胞以产生任何上述抗体或其抗原结合片段的方法，并且包括用上述载体转化细胞。
在一个方面，本发明涉及用于产生任何上述抗体或其抗原结合片段的宿主细胞，该宿主细胞包含任何上述核酸。
在一个方面，本发明涉及用于产生任何上述抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在足以产生所述抗体的条件下，在生长培养基中培养所述宿主细胞，必要时，随后分离和纯化所得到的抗体。
在一个方面，本发明涉及用于治疗由GD2介导的疾病或病症的药物组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合、以治疗有效量的任何上述抗体或其抗原结合片段。
在药物组合物的一些实施方案中，由GD2介导的疾病或病症选自：脑瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、小细胞肺癌、肾癌、促结缔组织增生性小圆细胞纤维瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、乳腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤或软组织肉瘤。
在一个方面，本发明涉及用于治疗由GD2介导的疾病或病症的药物组合物，该药物组合包含任何上述抗体或其抗原结合片段和至少一种其它治疗活性化合物。
在药物组合物的一些实施方案中，由GD2介导的疾病或病症选自：脑瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、小细胞肺癌、肾癌、促结缔组织增生性小圆细胞纤维瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、乳腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤或软组织肉瘤。
在药物组合物的一些实施方案中，其它治疗活性化合物是抗体、化学治疗剂或激素治疗剂。
在药物组合物的一些实施方案中，其它治疗活性化合物是免疫检查点抑制剂。
在药物组合物的一些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂或CTLA-4抑制剂。
在药物组合物的一些实施方案中，PD-1抑制剂是与PD-1特异性结合的抗体。
在药物组合物的一些实施方案中，与PD-1特异性结合的抗体选自：prolgolimab、帕博利珠单抗、纳武单抗。
在药物组合物的一些实施方案中，CTLA-4抑制剂是与CTLA-4特异性结合的抗体。
在药物组合物的一些实施方案中，与CTLA-4特异性结合的抗体是伊匹木单抗或诺瑞利单抗。
在药物组合物的一些实施方案中，PD-L1抑制剂是与PD-L1特异性结合的抗体。
在药物组合物的一些实施方案中，与PD-L1特异性结合的抗体选自：度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、阿替利珠单抗、玛奈利单抗。
在药物组合物的一些实施方案中，其它治疗活性化合物选自：IL-2、GM-CSF、异维A酸、一种或多种其它细胞因子、或来自该组的治疗活性化合物的任何组合。
在一个方面，本发明涉及用于抑制需要此类抑制的受试者中GD2的生物活性的方法，其包括施用有效量的任何上述抗体或其抗原结合片段。
在一个方面，本发明涉及用于治疗由GD2介导的疾病或病症的方法，其包括向需要此类治疗的受试者施用以治疗有效量的任何上述抗体或其抗原结合片段或者所述药物组合物。
在一个方面，本发明涉及用于治疗由GD2介导的疾病或病症的方法，其包括在需要此类治疗的受试者中施用任何上述抗体或其抗原结合片段，并且选自：
a)施用至少一种其它治疗活性化合物，
b)放射疗法，
c)造血干细胞移植，
d)手术治疗以及必要时的辅助疗法，或
e)上述a)至d)的任何组合。
在治疗方法的一些实施方案中，由GD2介导的疾病或病症选自：脑瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、小细胞肺癌、肾癌、促结缔组织增生性小圆细胞纤维瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、乳腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤或软组织肉瘤。
在治疗方法的一些实施方案中，其它治疗活性化合物是抗体、化学治疗剂或激素治疗剂。
在治疗方法的一些实施方案中，其它治疗活性化合物是免疫检查点抑制剂。
在治疗方法的一些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂或CTLA-4抑制剂。
在治疗方法的一些实施方案中，PD-1抑制剂是与PD-1特异性结合的抗体。
在治疗方法的一些实施方案中，与PD-1特异性结合的抗体选自prolgolimab、帕博利珠单抗、纳武单抗。
在治疗方法的一些实施方案中，CTLA-4抑制剂是与CTLA-4特异性结合的抗体。
在治疗方法的一些实施方案中，与CTLA-4特异性结合的抗体是伊匹木单抗或诺瑞利单抗。
在治疗方法的一些实施方案中，PD-L1抑制剂是与PD-L1特异性结合的抗体。
在治疗方法的一些实施方案中，与PD-L1特异性结合的抗体选自：度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、阿替利珠单抗、玛奈利单抗。
在治疗方法的一些实施方案中，其它治疗活性化合物选自：IL-2、GM-CSF、异维A酸、一种或多种其它细胞因子、或来自该组的治疗活性化合物的任何组合。
在一个方面，本发明涉及上述抗体或其抗原结合片段或者上述药物组合物用于治疗需要此类治疗的受试者中由GD2介导的疾病或病症的用途。
在一个方面，本发明涉及任何上述抗体或其抗原结合片段和以下组中的至少一种用于治疗由GD2介导的疾病或病症的用途：
a)其它治疗活性化合物，
b)放射疗法，
c)造血干细胞移植，或
d)手术治疗以及必要时的辅助疗法。
在用途的一些实施方案中，由GD2介导的疾病或病症选自：脑瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、小细胞肺癌、肾癌、促结缔组织增生性小圆细胞纤维瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、乳腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤或软组织肉瘤。
在用途的一些实施方案中，其它治疗活性化合物是免疫检查点抑制剂。
在用途的一些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂或CTLA-4抑制剂。
在用途的一些实施方案中，PD-1抑制剂是与PD-1特异性结合的抗体。
在用途的一些实施方案中，与PD-1特异性结合的抗体选自：prolgolimab、帕博利珠单抗、纳武单抗。
在用途的一些实施方案中，CTLA-4抑制剂是与CTLA-4特异性结合的抗体。
在用途的一些实施方案中，与CTLA-4特异性结合的抗体是伊匹木单抗或诺瑞利单抗。
在用途的一些实施方案中，PD-L1抑制剂是与PD-L1特异性结合的抗体。
在用途的一些实施方案中，与PD-L1特异性结合的抗体选自：度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、阿替利珠单抗、玛奈利单抗。
在用途的一些实施方案中，其它治疗活性化合物选自：IL-2、GM-CSF、异维A酸、一种或多种其它细胞因子、或来自该组的治疗活性化合物的任何组合。
附图说明
图1是与GD2靶复合的Fab片段的结构。
图2是带有抗GD2抗体的重链遗传序列的载体图谱。
图3是带有抗GD2抗体的轻链遗传序列的载体图谱。
关于图2-3：
图4是通过梯度凝胶4-20％SDS-PAGE，在还原条件和非还原条件下，10-008候选物的电泳图。
1.分子量标记物；
2.在非还原条件下的10-0081μg；
3.在还原条件下的10-0081μg。
图5是显示了在使用SK-N-BE(2)靶细胞的测定法中，抗体10-008的抗体依赖性细胞毒性的存在的图。不含抗体的点用作阴性对照。
图6是显示了在使用SK-N-BE(2)靶细胞的测定法中，根据本发明的针对GD2的抗体的补体依赖性细胞毒性的图。该图显示了在添加人血清后的活体染料(用于显示活细胞的数目)的荧光水平相对于抗体浓度。EC50值基于逻辑模型在SigmaPlot 14.0软件中获得。
定义和一般方法
除非本文另有定义，否则与本发明结合使用的所有技术和科学术语都具有与本领域技术人员通常理解的相同的含义。
此外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数术语，并且复数术语应包括单数术语。通常，本文所述的细胞培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学、分析化学、有机合成化学、医学和药学化学、以及蛋白质和核酸的杂交和化学的本发明分类和方法是本领域技术人员众所周知，并且在本领域中广泛使用的。酶反应和纯化方法根据制造商的指南，如本领域中常见的或如本文所述的执行。
如本文使用的，术语"Ka"预期指特定抗体-抗原相互作用的结合速率，而术语"KD"或"Kd"预期指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。
“结合亲和力”一般指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，否则“结合亲和力”指固有的(特性的、真实的)结合亲和力，其反映了结合对的成员(例如抗体和抗原)之间的1:1相互作用。分子X对于其结合配偶体Y的亲和力一般可以由解离常数(Kd)表示。优选的Kd值是约200nM、150nM、100nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、8nM、6nM、4nM、2nM、1nM或更小。亲和力可以通过本领域已知的常见方法，包括本说明书中所述的方法来测量。低亲和力抗体一般缓慢地结合抗原并且趋于容易解离，而高亲和力抗体一般更快地结合抗原并且趋于保持结合更久。测量结合亲和力的各种方法是本领域已知的，所述方法中的任一种均可以用于本发明的目的。
术语"koff"或"kdis"指结合分子和抗原之间的特定相互作用的解离速率常数。解离速率常数koff可以使用生物层干涉测量法，例如使用OctetTM系统进行测量。
术语"kon"或“结合速率”指结合速率常数。
术语“解离速率筛选”指其中仅基于koff值检查候选物的筛选。
术语"R2"指决定系数。
术语“应答”指抗体-抗原结合信号。
术语“在体外”指在人工条件下，在机体外部的生物实体、生物过程或生物反应。例如，在体外生长的细胞应理解为在机体外部的环境中，例如在试管、培养小瓶或微量滴定板中生长的细胞。
如本文使用的，术语"IC50"(抑制浓度50％)指在其下可测量的活性或应答，例如细胞例如肿瘤细胞的生长/增殖被抑制50％的制剂浓度。IС50值可以使用适当的剂量应答曲线，使用用于曲线拟合的专门统计软件进行计算。
术语"ED50"(EC50)(50％有效剂量/浓度)指产生50％生物效应(其可以包括细胞毒性)的制剂浓度。
如本说明书和随后的权利要求中使用的，除非上下文另有规定，否则词语“具有(have)”、“包括(include)”和“包含(comprise)”，或者其变化例如“具有(has)”、“具有(having)”、“包括(includes)”、“包括(including)”、“包含(comprises)”或“包含(comprising)”，应理解为暗示包括所述整体或整体组，但不排除任何其它整体或整体组。
具体实施方式
抗体
本发明涉及与GD2(神经节苷脂GD2)特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段。
术语“单克隆抗体”或“mAb”指由单独的细胞克隆群体合成且分离的抗体。
本发明的抗体是重组抗体。
术语“重组抗体”指在包含编码抗体的核苷酸序列的细胞或细胞系中表达的抗体，其中所述核苷酸序列在自然界中与细胞并不结合。
在一个方面，本发明涉及与GD2(神经节苷脂GD2)特异性结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有选自以下的氨基酸序列的CDR1：GHNMN(SEQ ID NO:1)或GKNMN(SEQ IDNO:2)，
(ii)具有氨基酸序列AIDPFYGGTSYNQKFKG(SEQ ID NO:3)的CDR2，
(iii)具有选自以下氨基酸序列的CDR3：GMIY(SEQ ID NO:4)、GMFY(SEQ ID NO:5)、GMYY(SEQ ID NO:6)或GMLY(SEQ ID NO:7)；和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有选自以下的氨基酸序列的CDR1：RSSRSLVHRNGNTYLH(SEQ ID NO:8)或RSSQNLVHRNGNTYLH(SEQ ID NO:9)，
(ii)具有选自以下的氨基酸序列的CDR2：KVSNRFG(SEQ ID NO:10)或KVNNRFS(SEQID NO:11)，
(iii)具有选自以下的氨基酸序列的CDR3：GQSTHVPPLT(SEQ ID NO:12)或SQSTHVPPLS(SEQ ID NO:13)。
在本说明书中用于描述各种抗体的术语“分离的”，指已从抗体在其中表达的细胞或细胞培养物中鉴定和分开和/或再生的抗体。来自天然环境的杂质(污染物组分)是通常干扰多肽的诊断或治疗用途的材料，并且可以包括酶、激素和其它蛋白质或非蛋白质溶质。分离的多肽通常通过至少一个纯化步骤来制备。
GD2基因的扩增和/或其蛋白质的过表达已在许多癌症中，例如，在来自以下组的任何疾病中观察到：脑瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、小细胞肺癌、肾癌、促结缔组织增生性小圆细胞纤维瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、乳腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤或软组织肉瘤。
如本说明书中使用的，术语“抗体”或“免疫球蛋白”(Ig)包括完整抗体。术语“抗体”指包含通过二硫键互连的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白，或抗原结合部分。每条重链包含重链可变区(在本说明书中缩写为VH)和重链恒定区。已知的是由希腊字母表示的五种类型的哺乳动物抗体重链：α，δ，ε，γ和μ。(Janeway C.A.，Jr.等人，Immunobiology，第5版，由Garland Publishing出版，2001)。存在的重链类型限定了抗体的种类；这些链分别在IgA、IgD、IgE、IgG和IgM抗体中发现。(Rhoades R.A.，Pflanzer R.G.，Human Physiology，第4版，由Thomson Learning出版，2002)。不同的重链在大小和组成方面不同；α和γ含有大约450个氨基酸，而μ和ε具有大约550个氨基酸。恒定区在相同同种型的所有抗体中都是等同的，但在不同同种型的抗体中不同。重链γ、α和δ具有由三个恒定结构域CH1、СΗ2和CH3(成一条线)组成的恒定区，以及用于增加柔性的铰链区(Woof J.，Burton D.，Nat Rev Immunol 4，2004，cc.89-99)；重链μ和ε具有由四个恒定结构域CH1、СΗ2、CH3和CH4组成的恒定区(Janeway C.A.，Jr.等人，Immunobiology，第5版，由GarlandPublishing出版，2001)。在哺乳动物中，已知的是由lambda(λ)和kappa(κ)表示的仅两种类型的轻链。每条轻链由轻链可变区(在本说明书中缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链的大约长度是211至217个氨基酸。优选地，轻链是kappa(κ)轻链，并且恒定结构域CL优选是Ckappa(κ)。
根据本发明的“抗体”可以是任何种类(例如，IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，优选IgG)、或亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2，优选IgG1)。
VL和VH区可以进一步细分成称为互补决定区(CDR)的高变区，其散布在称为构架区(FR)的更保守区域之间。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基末端到羧基末端按下述次序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。
如本说明书中使用的，术语抗体的“抗原结合部分”或“抗原结合片段”(或简单地“抗体部分”或“抗体片段”)指抗体的一个或多个片段，其保留与抗原特异性结合的能力。已显示抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来执行。包括在术语抗体的“抗原结合部分”内的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含由在铰链区的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；(v)由VH/VHH结构域组成的dAb片段(Ward等人，(1989)Nature 341：544-546)。另外，Fv片段的两个区域VL和VH由不同的基因编码，它们可以使用合成接头使用重组方法进行连接，所述合成接头使得能够将其作为单条蛋白质链接受，在所述链中VL和VH区配对以形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如，Bird等人(1988)Science 242：423-426；以及Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883)。假定此类单链分子也包括在术语抗体的“抗原结合部分”内。使用本领域技术人员已知的常规技术产生此类抗体片段，并且以与完整抗体相同的方式筛选这些片段。
术语“可变结构域”指可变结构域的某些部分在抗体之间在序列方面极大不同的事实。V结构域介导抗原结合，并且决定每种特定抗体对于其特定抗原的特异性。然而，可变性在可变结构域的110个氨基酸跨度中并非均匀分布的。相反，V区由15-30个氨基酸的称为构架区(FR)的不变片段组成，所述不变片段由称为“高变区”或CDR的极度可变性的较短区域分开。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR，在很大程度上采用β-折叠构型，由三个高变区连接，所述三个高变区形成连接β-折叠结构，并且在一些情况下构成β-折叠结构的部分的环。每条链中的高变区通过FR紧密结合在一起，并且与另一条链中的高变区一起，促成抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest.第5版Public Health Service，National InstitutesofHealth，Bethesda，MD.(1991))。恒定结构域不直接涉及抗体与抗原的结合，而是显示出各种效应子功能，例如抗体依赖性细胞毒性(ADCC)中的抗体参与。
根据本说明书，术语“高变区”指负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。高变区通常包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基和/或来自“高变环”的那些残基。
如本申请中使用的，“Kabat编号方案”或“根据Kabat的编号”指用于编号氨基酸残基的系统，所述氨基酸残基比抗体重链和轻链的可变区中的其它氨基酸残基更易变(即高变)(Kabat等人Ann.N.Y.Acad.Sci.，190:382-93(1971)；Kabat等人Sequences ofProteinsof Immunological Interest，第5版，U.S.Department of Health and Human Services，NIH PublicationNo.91-3242(1991))。
“结合”靶抗原的本发明的抗体指以足够的亲和力结合抗原的抗体，使得该抗体可以用作靶向表达抗原的蛋白质或细胞或组织的诊断剂和/或治疗剂，并且与其它蛋白质轻微地交叉反应。根据分析方法：荧光激活细胞分选(FACS)、放射性免疫测定法(RIA)或ELISA，在此类实施方案中，抗体与非靶蛋白结合的程度小于抗体与特异性靶蛋白结合的10％。关于抗体与靶分子的结合，术语“特异性结合”或“特异性结合至”或“特异性针对”特定多肽或特定靶多肽上的表位，意指显著地(可测量地)不同于非特异性相互作用的结合。
特异性结合可以例如通过与对照分子的结合相比测定分子的结合来测量。例如，特异性结合可以通过与类似于靶的另一种分子(例如过量的未标记靶)竞争来测定。在这种情况下，如果标记的靶与探针的结合被过量的未标记靶竞争性抑制，则指示特异性结合。如本说明书中使用的，术语“特异性结合”或短语“特异性结合至”或“特异性针对”特定多肽或特定多肽靶上的表位，可以通过对于靶具有以下Kd的分子的实例进行描述：至少约200nM、或至少约150nM、或至少约100nM、或至少约60nM、或至少约50nM、或至少约40nM、或至少约30nM、或至少约20nM、或至少约10nM、或至少约8nM、或至少约6nM、或至少约4nM、或至少约2nM、或至少约1nM或更大。在一个实施方案中，术语“特异性结合”指其中分子结合特定多肽或特定多肽上的表位，而基本上不结合任何其它多肽或多肽上的表位的结合。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链可变结构域，其包含：
(i)具有氨基酸序列QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGSSFT(SEQ ID NO:42)的FR1，
(ii)具有氨基酸序列WVRQNIGQGLEWMG(SEQ ID NO:43)的FR2，
(iii)具有氨基酸序列RVTLTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVS(SEQ ID NO:44)的FR3，和
(iv)具有氨基酸序列WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:45)的FR4。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链可变结构域，其包含：
(i)具有氨基酸序列DIVMTQTPLSLSVTPGERASLSC(SEQ ID NO:46)的FR1，
(ii)具有选自以下的氨基酸序列的FR2：WYLQKPGQSPKLLIH(SEQ ID NO:47)或WYLQKPGQSPQLLIH(SEQ ID NO:48)，
(iii)具有氨基酸序列GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFC(SEQ ID NO:49)的FR3，和
(iv)具有氨基酸序列FGQGTKLELK(SEQ ID NO:50)的FR4。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有氨基酸序列QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGSSFT(SEQ ID NO:42)的FR1，
(ii)具有氨基酸序列WVRQNIGQGLEWMG(SEQ ID NO:43)的FR2，
(iii)具有氨基酸序列RVTLTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVS(SEQ ID NO:44)的FR3，和
(iv)具有氨基酸序列WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:45)的FR4，并且其中
b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有氨基酸序列DIVMTQTPLSLSVTPGERASLSC(SEQ ID NO:46)的FR1，
(ii)具有选自以下的氨基酸序列的FR2：WYLQKPGQSPKLLIH(SEQ ID NO:47)或WYLQKPGQSPQLLIH(SEQ ID NO:48)，
(iii)具有氨基酸序列GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFC(SEQ ID NO:49)的FR3，和
(iv)具有氨基酸序列FGQGTKLELK(SEQ ID NO:50)的FR4。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR1，
(ii)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2，
(iii)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR3。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR1，
(ii)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2，
(iii)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR3。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的CDR1，
(ii)具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR2，
(iii)具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR3。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR1，
(ii)具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDR2，
(iii)具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR3。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链可变结构域，其包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸序列。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGSSFTGKNMNWVRQNIGQGLEW MGAIDPFYGGTSYNQKFKGRVTLTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVSG MYYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:14)，
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGSSFTGHNMNWVRQNIGQGLEW MGAIDPFYGGTSYNQKFKGRVTLTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVSG MLYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:15)，
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGSSFTGKNMNWVRQNIGQGLEW MGAIDPFYGGTSYNQKFKGRVTLTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVSG MIYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:16)
或
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGSSFTGKNMNWVRQNIGQGLEWMGAIDPFYGGTSYNQKFKGRVTLTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVSGMFYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:17)。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链可变结构域，其包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少96％同一性的氨基酸序列。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括轻链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列：
DIVMTQTPLSLSVTPGERASLSCRSSRSLVHRNGNTYLHWYLQKPGQSP KLLIHKVSNRFGGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCGQSTHVPPLT FGQGTKLELK(SEQ ID NO:18)，
DIVMTQTPLSLSVTPGERASLSCRSSRSLVHRNGNTYLHWYLQKPGQSP QLLIHKVSNRFGGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCGQSTHVPPLT FGQGTKLELK(SEQ ID NO:19)，
DIVMTQTPLSLSVTPGERASLSCRSSRSLVHRNGNTYLHWYLQKPGQSP KLLIHKVNNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSTHVPPLS FGQGTKLELK(SEQ ID NO:20)
或
DIVMTQTPLSLSVTPGERASLSCRSSQNLVHRNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIHKVNNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCGQSTHVPPLTFGQGTKLELK(SEQ ID NO:21)。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
(a)重链可变结构域，其包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸序列；
(b)轻链可变结构域，其包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少96％同一性的氨基酸序列；
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
(a)重链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17；
(b)轻链可变结构域，其包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的重链可变结构域；
(b)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的轻链可变结构域。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链可变结构域；
(b)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链可变结构域。
在本发明的一些实施方案中，与GD2特异性结合的分离的单克隆抗体是全长IgG抗体。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体是具有人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的全长IgG抗体。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体是具有人IgG1同种型的全长IgG抗体。
在本发明的一些实施方案中，与Fc片段的天然存在的序列相比，分离的单克隆抗体包含在Fc片段中的YTE突变(M252Y、S254T、T256E)和/或K322A。
Fc片段中的上述突变根据关于抗体的氨基酸链的EU编号进行编号(Edelman，G.M.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 63(1969)，第78-85页；Kabat，E.A.等人，Sequences ofProteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，NationalInstitutes of Health，Bethesda，MD，(1991)。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体包括包含选自以下的氨基酸序列的重链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGSSFTGKNMNWVRQNIGQGLEWMGAIDPFYGGTSYNQKFKGRVTLTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVSGMYYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLN GKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQID NO:22)，
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGSSFTGHNMNWVRQNIGQGLEWMGAIDPFYGGTSYNQKFKGRVTLTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVSGMLYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQID NO:23)，
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGSSFTGKNMNWVRQNIGQGLEWMGAIDPFYGGTSYNQKFKGRVTLTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVSGMIYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQID NO:24)，
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGSSFTGKNMNWVRQNIGQGLEWMGAIDPFYGGTSYNQKFKGRVTLTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVSGMFYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQID NO:25)，
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGSSFTGKNMNWVRQNIGQGLEWMGAIDPFYGGTSYNQKFKGRVTLTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVSGMYYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQID NO:26)，
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或
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGSSFTGKNMNWVRQNIGQGLEWMGAIDPFYGGTSYNQKFKGRVTLTVDKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVSGMFYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQID NO:37)。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体包括包含选自以下的氨基酸序列的轻链：
DIVMTQTPLSLSVTPGERASLSCRSSRSLVHRNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIHKVSNRFGGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCGQSTHVPPLTFGQGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:38)，
DIVMTQTPLSLSVTPGERASLSCRSSRSLVHRNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIHKVSNRFGGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCGQSTHVPPLTFGQGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:39)，
DIVMTQTPLSLSVTPGERASLSCRSSRSLVHRNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIHKVNNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSTHVPPLSFGQGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:40)
或
DIVMTQTPLSLSVTPGERASLSCRSSQNLVHRNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIHKVNNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCGQSTHVPPLTFGQGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:41)。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体包括：
(a)包含选自以下的氨基酸序列的重链：SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ IDNO:36或SEQ ID NO:37，和
(b)包含选自以下的氨基酸序列的轻链：SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ IDNO:40或SEQ ID NO:41。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体包括：
(a)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链。
在本发明的一些实施方案中，分离的单克隆抗体包括：
(a)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的轻链。
在本发明的一些实施方案中，与GD2特异性结合的分离的单克隆抗体是抗体07-006。
抗体07-006包括：
(a)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链。
抗体07-006包括：
(a)重链可变结构域包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；
(b)轻链可变结构域包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。抗体07-006包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR1(Kabat)，
(ii)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2(Kabat)，
(iii)具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR3(Kabat)，和(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR1(Kabat)，
(ii)具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDR2(Kabat)，
(iii)具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR3(Kabat)。抗体07-006包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的CDR1(Chothia)，
(ii)具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR2(Chothia)，
(iii)具有SEQ ID NO:56的氨基酸序列的CDR3(Chothia)，和(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的CDR1(Chothia)，
(ii)具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR2(Chothia)，
(iii)具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR3(Chothia)。
抗体07-006包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR1(IMGT)，
(ii)具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的CDR2(IMGT)，
(iii)具有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的CDR3(IMGT)，和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的CDR1(IMGT)，
(ii)具有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的CDR2(IMGT)，
(iii)具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的CDR3(IMGT)。
在本发明的一些实施方案中，与GD2特异性结合的分离的单克隆抗体是抗体07-015。
抗体07-015包括：
(a)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链。
抗体07-015包括：
(a)重链可变结构域包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；
(b)轻链可变结构域包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列。
抗体07-015包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR1(Kabat)，
(ii)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2(Kabat)，
(iii)具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR3(Kabat)，和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR1(Kabat)，
(ii)具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDR2(Kabat)，
(iii)具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR3(Kabat)。
抗体07-015包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的CDR1(Chothia)，
(ii)具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR2(Chothia)，
(iii)具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的CDR3(Chothia)，和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的CDR1(Chothia)，
(ii)具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR2(Chothia)，
(iii)具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR3(Chothia)。
抗体07-015包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的CDR1(IMGT)，
(ii)具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的CDR2(IMGT)，
(iii)具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的CDR3(IMGT)，和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的CDR1(IMGT)，
(ii)具有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的CDR2(IMGT)，
(iii)具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的CDR3(IMGT)。
在本发明的一些实施方案中，与GD2特异性结合的分离的单克隆抗体是抗体07-016。
抗体07-016包括：
(a)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链。
抗体07-016包括：
(a)重链可变结构域包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；
(b)轻链可变结构域包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。
抗体07-016包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR1(Kabat)，
(ii)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2(Kabat)，
(iii)具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR3(Kabat)，和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR1(Kabat)，
(ii)具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDR2(Kabat)，
(iii)具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR3(Kabat)。
抗体07-016包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的CDR1(Chothia)，
(ii)具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR2(Chothia)，
(iii)具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的CDR3(Chothia)，和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的CDR1(Chothia)，
(ii)具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR2(Chothia)，
(iii)具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR3(Chothia)。
抗体07-016包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的CDR1(IMGT)，
(ii)具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的CDR2(IMGT)，
(iii)具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的CDR3(IMGT)，和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的CDR1(IMGT)，
(ii)具有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的CDR2(IMGT)，
(iii)具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的CDR3(IMGT)。
在本发明的一些实施方案中，与GD2特异性结合的分离的单克隆抗体是抗体07-028。
抗体07-028包括：
(a)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的轻链。
抗体07-028包括：
(a)重链可变结构域包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；
(b)轻链可变结构域包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。
抗体07-028包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR1(Kabat)，
(ii)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2(Kabat)，
(iii)具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR3(Kabat)，和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR1(Kabat)，
(ii)具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR2(Kabat)，
(iii)具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR3(Kabat)。
抗体07-028包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的CDR1(Chothia)，
(ii)具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR2(Chothia)，
(iii)具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的CDR3(Chothia)，和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的CDR1(Chothia)，
(ii)具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的CDR2(Chothia)，
(iii)具有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的CDR3(Chothia)。
抗体07-028包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的CDR1(IMGT)，
(ii)具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的CDR2(IMGT)，
(iii)具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的CDR3(IMGT)，和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的CDR1(IMGT)，
(ii)具有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的CDR2(IMGT)，
(iii)具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的CDR3(IMGT)。
在本发明的一些实施方案中，与GD2特异性结合的分离的单克隆抗体是抗体07-031。
抗体07-031包括：
(a)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链。
抗体07-031包括：
(a)重链可变结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；
(b)轻链可变结构域包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列。抗体07-031包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR1(Kabat)，
(ii)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2(Kabat)，
(iii)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR3(Kabat)，和(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR1(Kabat)，
(ii)具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDR2(Kabat)，
(iii)具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR3(Kabat)。抗体07-031包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的CDR1(Chothia)，
(ii)具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR2(Chothia)，
(iii)具有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR3(Chothia)，和(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的CDR1(Chothia)，
(ii)具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR2(Chothia)，
(iii)具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR3(Chothia)。
抗体07-031包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR1(IMGT)，
(ii)具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的CDR2(IMGT)，
(iii)具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的CDR3(IMGT)，和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的CDR1(IMGT)，
(ii)具有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的CDR2(IMGT)，
(iii)具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的CDR3(IMGT)。
在本发明的一些实施方案中，与GD2特异性结合的分离的单克隆抗体是抗体07-041。
抗体07-041包括：
(a)包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的轻链。
抗体07-041包括：
(a)重链可变结构域包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；
(b)轻链可变结构域包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
抗体07-041包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR1(Kabat)，
(ii)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2(Kabat)，
(iii)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR3(Kabat)，和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的CDR1(Kabat)，
(ii)具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR2(Kabat)，
(iii)具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR3(Kabat)。
抗体07-041包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的CDR1(Chothia)，
(ii)具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR2(Chothia)，
(iii)具有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的CDR3(Chothia)，和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的CDR1(Chothia)，
(ii)具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的CDR2(Chothia)，
(iii)具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR3(Chothia)。
抗体07-041包括：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR1(IMGT)，
(ii)具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的CDR2(IMGT)，
(iii)具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的CDR3(IMGT)，和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的CDR1(IMGT)，
(ii)具有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的CDR2(IMGT)，
(iii)具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的CDR3(IMGT)。
提供了抗体的氨基酸序列的修饰。例如，可能期望改善抗体的结合亲和力和/或其它生物学性质。通过将适当的核苷酸变化引入编码抗体的核酸内，或通过肽合成，来制备抗体的氨基酸序列变体。此类修饰包括例如抗体的氨基酸序列内的残基的缺失、和/或插入和/或取代。制备缺失、插入和取代的任何组合以得到最终构建体，条件是最终构建体具有所需特性。氨基酸变化还可以改变抗体中的翻译后过程，例如改变糖基化位点的数目或位置。
使用氨基酸取代的抗体氨基酸序列的修饰变体。此类变体是用不同的残基取代抗体分子中的至少一个氨基酸残基。对于取代诱变最有利的位点包括高变区或CDR，但也考虑了FR或Fc改变。保守取代显示于表1中的标题“优选取代”下。如果此类取代引起生物活性的改变，则可以进行进一步的实质改变，其在表A中表示为“示例性取代”，或者在描述氨基酸类别时，在下文更详细地描述的变化，并且还可以执行产物筛选。
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在本发明的一些实施方案中，抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031、07-041包括Fc片段，与Fc片段的天然存在的序列相比，所述Fc片段包含YTE突变(M252Y、S254T、T256E)和/或K322A。
在本发明的一些实施方案中，抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031、07-041包括Fc片段，与Fc片段的天然存在的序列相比，所述Fc片段包含YTE突变(M252Y、S254T、T256E)和K322A。
在本发明的一些实施方案中，抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031、07-041包括Fc片段，与Fc片段的天然存在的序列相比，所述Fc片段包含YTE突变(M252Y、S254T、T256E)。
在本发明的一些实施方案中，抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031、07-041包括Fc片段，与Fc片段的天然存在的序列相比，所述Fc片段包含K322A突变。
具有YTE和K322A突变的抗体07-006包括：
(a)包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链。
具有YTE和K322A突变的抗体07-015包括：
(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链。
具有YTE和K322A突变的抗体07-016包括：
(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链。
具有YTE和K322A突变的抗体07-028包括：
(a)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的轻链。
具有YTE和K322A突变的抗体07-031(或抗体10-02)包括：
(a)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链。
具有YTE和K322A突变的抗体07-041(或抗体10-08)包括：
(a)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的轻链。
具有YTE突变的抗体07-006包括：
(a)包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链。
具有YTE突变的抗体07-015包括：
(a)包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链。具有YTE突变的抗体07-016包括：
(a)包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链。具有YTE突变的抗体07-028包括：
(a)包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的轻链。具有YTE突变的抗体07-031(或抗体10-01)包括：(a)包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的重链；和(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链。具有YTE突变的抗体07-041(或抗体10-07)包括：(a)包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链；和(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的轻链。具有K322A突变的抗体07-006包括：
(a)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链。具有K322A突变的抗体07-015包括：
(a)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链。具有K322A突变的抗体07-016包括：
(a)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链。具有K322A突变的抗体07-028包括：
(a)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的轻链。具有K322A突变的抗体07-031(或抗体10-03)包括：(a)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链。
具有K322A突变的抗体07-041(或抗体10-09)包括：
(a)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的重链；和
(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的轻链。
在本发明的一些实施方案中，根据本发明的抗体可以是去岩藻糖基化抗体。
在本发明的一些实施方案中，根据本发明的抗体可以是岩藻糖基化抗体。
抗体岩藻糖基化的存在或不存在取决于用于产生根据本发明的抗体的细胞培养物。
抗体片段
在某些情况下，可建议使用抗体片段而不是完整抗体。片段的小尺寸促成其快速清除，并且可以促成更好地穿透到致密肿瘤内。
已开发了用于产生抗体片段的各种技术。常规地，这些片段经由完整抗体的蛋白酶解消化而衍生(参见例如，Morimoto等人，Journal of Biochemical and BiophysicalMethods，24，1992，第107-117页，以及Brennan等人，Science，229，1985，第81页)。然而，这些片段目前可以直接由重组宿主细胞产生。Fab、Fv和ScFv抗体片段可以在大肠杆菌中表达且由其分泌，因此允许促进大量这些片段的产生。可以从抗体噬菌体文库中分离抗体片段。根据另一个实施方案，Fab'-SH片段可以直接从大肠杆菌中分离，并且化学偶联以形成F(ab')2片段(Carter等人，Bio/Technology 10：163-167(1992)。根据另一种方法，可以直接从重组宿主细胞培养物中分离F(ab')2片段。在US 5869046中描述了具有增加的体内半衰期、保留表位结合受体残基的Fab和F(ab')2片段。用于产生抗体片段的其它技术对于本领域技术人员将是显而易见的。在其它实施方案中，选择的抗体是单链Fv片段(scFv)(参见WO93/16185；US 5571894和US 5587458)。Fv和scFv是具有完整结合位点的唯一种类，其缺乏恒定区；结果，它们适合于在体内使用过程中减少非特异性结合。可以构建scFv融合蛋白，以在scFv的N末端或C末端处产生效应蛋白的融合(参见上文Antibody Engineering，编辑Borrebaeck)。抗体片段也可以是例如如美国专利5641870中所述的“线性抗体”。
核酸分子
在一个方面，本发明涉及分离的核酸，其编码与GD2特异性结合的任何上述抗体或其抗原结合片段。
在任何上述实施方案中，核酸分子可以是分离的。
在本说明书中可互换使用的术语“核酸”、“核酸序列(nucleic sequence)”、“核酸序列(nucleic acid sequence)”、“多核苷酸”、“寡核苷酸”、“多核苷酸序列”和“核苷酸序列”，意指核苷酸的精确序列，修饰或未修饰，决定核酸的片段或区域，含有或不包含非天然核苷酸，并且是双链DNA或RNA、单链DNA或RNA、或所述DNA的转录产物。
此处还应该包括本发明并不涉及处于其天然染色体环境中，即处于天然状态的核苷酸序列。本发明的序列已进行分离和/或纯化，即，它们例如通过拷贝直接或间接地进行取样，其环境已被至少部分地修饰。因此，此处还应该提到通过重组遗传学，借助于例如宿主细胞获得的分离的核酸，或通过化学合成获得的分离的核酸。
除非另有说明，否则提及核苷酸序列涵盖其互补体。因此，提及具有特定序列的核酸应该理解为涵盖其互补链及其互补序列的核酸。
“分离的”核酸分子是从至少一个核酸分子-杂质中鉴定并且与之分开的核酸分子，前者在抗体核酸的天然来源中与所述杂质结合。分离的核酸分子不同于其中它在天然条件下发现的形式或集合。因此，分离的核酸分子不同于在天然条件下存在于细胞中的核酸分子。
在一个方面，本发明涉及核酸分子，其包含编码选自SEQ ID NO:1-76的氨基酸序列的核苷酸序列。核酸分子还可以包含所述核苷酸序列的任何组合。
在本发明的一些实施方案中，分离的核酸是DNA。
本发明的核酸分子可以从产生与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段的任何来源中分离。在某些实施方案中，本发明的核酸分子可以是合成的而不是分离的。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体07-006的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:77的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体07-006的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:78的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体07-015的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:79的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体07-015的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:80的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体07-016的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:81的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体07-016的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:82的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体07-028的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:83的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体07-028的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:84的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体07-031的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:85的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体07-031的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:86的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体07-041的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:87的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体07-041的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:88的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体10-001的重链的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:89的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体10-001的轻链的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:90的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体10-002的重链的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:91的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体10-002的轻链的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:92的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体10-003的重链的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:93的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体10-003的轻链的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:94的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体10-007的重链的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:95的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体10-007的轻链的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:96的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体10-008的重链的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:97的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体10-008的轻链的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:98的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体10-009的重链的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:99的核苷酸序列。
在本发明的一些实施方案中，核酸是编码抗体10-009的轻链的氨基酸序列的核酸，并且包括具有SEQ ID NO:100的核苷酸序列。
核酸分子可以用于表达与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段。
载体
在一个方面，本发明涉及包含上述分离的核酸的表达载体。本发明涉及适合于表达本文描述的任何核苷酸序列的载体。
如本文使用的，术语“载体”指能够转运它已与之连接的另一种核酸的核酸分子。在本发明的一些实施方案中，载体是质粒，即另外的DNA区段可以连接到其内的环状双链DNA片。在本发明的一些实施方案中，载体是病毒载体，其中另外的DNA区段可以连接到病毒基因组内。在本发明的一些实施方案中，载体能够在它们引入其内的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起始位点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。在本发明的进一步的实施方案中，载体(例如，非附加型哺乳动物载体)可以在引入宿主细胞内之后，整合到宿主细胞的基因组内，并且从而连同宿主基因一起复制。此外，某些载体能够指导它们与之可操作连接的基因的表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”(或简称为“表达载体”)。
如本文所述，本发明涉及包含核酸分子的载体，所述核酸分子编码与GD2特异性结合的单克隆抗体或其一部分的任何氨基酸序列(例如重链和/或轻链结合结构域序列)。本发明进一步涉及包含编码抗体或其片段的核酸分子的载体。
表达载体包括质粒、逆转录病毒、腺病毒、腺伴随病毒(AAV)、植物病毒、例如花椰菜花叶病毒、烟草花叶病毒、粘粒、YAC、EBV衍生的附加体等等。可以将DNA分子连接到载体中，使得载体内的转录和翻译控制序列发挥其预期的调节DNA转录和翻译的功能。表达载体和表达控制序列可以选择为与所使用的表达宿主细胞相容。可以将部分或完全编码第一结合结构域和第二结合结构域的序列(例如，重链和轻链序列，其中结合结构域包含重链和轻链序列)的DNA分子引入各个载体内。在一个实施方案中，将所述DNA分子的任何组合引入相同的表达载体内。可以通过标准方法(例如，抗体基因片段和载体上的互补限制性位点的连接，或者如果不存在限制性位点，则平端连接)，将DNA分子引入表达载体内。
在本发明的一些实施方案中，合适的载体是包括限制性位点的载体，使得如上所述，任何VH或VL序列都可以容易地插入且表达。聚腺苷酸化和转录终止可以在编码区下游的天然染色体位点处发生。重组表达载体还可以编码信号肽，其促进抗体链从宿主细胞中的分泌。可以将抗体链基因克隆到载体内，使得信号肽在框内连接至免疫球蛋白链的氨基末端。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即，来自非免疫球蛋白的信号肽)。
在本发明的一些实施方案中，除抗体链基因之外，本发明的重组载体表达还可以携带调节序列，所述调节序列控制抗体链基因在宿主细胞中的表达。本领域技术人员将理解，表达载体的设计，包括调节序列的选择，可以取决于此类因素如待转化的宿主细胞的选择、所需蛋白质的表达水平等等。用于哺乳动物中的表达宿主细胞的优选控制序列包括确保在哺乳动物细胞中高水平的蛋白质表达的病毒元件，例如衍生自以下的启动子和/或增强子：逆转录病毒LTR、巨细胞病毒(CMV)(例如CMV启动子/增强子)、猿猴病毒40(SV40)(例如SV40启动子/增强子)、腺病毒(例如主要晚期启动子腺病毒(AdMLP))、多瘤病毒和强哺乳动物启动子，例如天然免疫球蛋白启动子或肌动蛋白启动子。用于在细菌细胞或真菌细胞，例如酵母细胞中表达多肽的方法也是本领域众所周知的。
在本发明的一些实施方案中，除抗体链基因和调节序列之外，本发明的重组表达载体还可以携带另外的序列，例如调节载体在宿主细胞中的复制的序列(例如复制起点)和可选择标记物基因。可选择标记物基因促进载体已引入其内的宿主细胞的选择。
在本发明的一些实施方案中，载体可以包括表达控制序列。如本说明书中使用的，术语“表达控制序列”指这样的多核苷酸序列，其是实现它们与之连接的编码序列的表达和加工所必需的。表达控制序列包括适当的转录起始、终止、启动子和增强子序列；有效的RNA加工信号，例如剪接和聚腺苷酸化信号；稳定细胞质mRNA的序列；增强翻译效率的序列(即，Kozak共有序列)；增强蛋白质稳定性的序列；以及在需要时，增强蛋白质分泌的序列。此类控制序列的性质取决于宿主生物而不同；在原核生物中，此类控制序列一般包括核糖体结合位点的启动子和转录终止序列；在真核生物中，通常，此类控制序列包括启动子和转录终止序列。术语“控制序列”包括其存在对于表达和加工是必要的至少所有组分，并且还可以包括其存在是有利的另外组分，例如前导序列和融合配偶体序列。
宿主细胞
在一个方面，本发明涉及用于产生宿主细胞以产生与GD2特异性结合的任何上述抗体或其抗原结合片段的方法，并且包括用上述载体转化细胞。
在一个方面，本发明涉及用于产生与GD2特异性结合的任何上述抗体或其抗原结合片段的宿主细胞，该宿主细胞包含任何上述核酸。
如本文使用的，术语“重组宿主细胞”(或简称为“宿主细胞”)指重组表达载体已引入其内的细胞。本发明涉及宿主细胞，其可以包括例如上文描述的根据本发明的载体。本发明还涉及宿主细胞，其包含例如编码本发明结合分子的结合结构域的重链或其抗原结合部分的核苷酸序列、编码轻链或其抗原结合部分的核苷酸序列或两者。应该理解，“重组宿主细胞”和“宿主细胞”不仅指特定的受试细胞，而且还指此类细胞的后代。因为修饰可以由于突变或环境影响而在后续代中发生，因此，事实上，此类后代可能并不等同于亲代细胞，然而，此类细胞仍包括在如本文使用的术语“宿主细胞”的范围内。
编码根据本发明与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸分子和包含这些核酸分子的载体，可以用于转染合适的哺乳动物或其细胞，植物或其细胞，细菌或酵母宿主细胞。转化可以通过将多核苷酸引入宿主细胞内的任何已知技术。用于将异源多核苷酸引入哺乳动物细胞内的方法是本领域众所周知的，包括右旋糖酐介导的转染、阳离子聚合物-核酸复合物转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺介导的转染、原生质体融合、多核苷酸包封在脂质体中、以及DNA直接显微注射到核内。另外，可以通过病毒载体将核酸分子引入哺乳动物细胞内。
用作用于转化的宿主的哺乳动物细胞系是本领域众所周知的，并且包括多个可用的永生化细胞系。这些包括例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NS0细胞、SP2细胞、HEK-293T细胞、FreeStyle 293细胞(Invitrogen)、NIH-3T3细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、非洲绿猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如Hep G2)、A549细胞和许多其它细胞系。通过测定哪些细胞系具有高表达水平，并且提供产生的蛋白质的必需特性来选择细胞系。可以使用的其它细胞系是昆虫细胞系，例如Sf9或Sf21细胞。当将编码与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段的重组表达载体引入哺乳动物宿主细胞内时，通过将宿主细胞培养一段时间来产生抗体或其片段，所述时间段足以允许抗体或其片段在宿主细胞中表达，或更优选地，抗体或其片段分泌到宿主细胞在其中生长的培养基内。可以使用标准蛋白质纯化技术，从培养基中分离与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段。植物宿主细胞包括例如烟草属(Nicotiana)、拟南芥属(Arabidopsis)、浮萍、玉米、小麦、马铃薯等。细菌宿主细胞包括埃希氏菌属(Escherichia)和链霉菌属(Streptomyces)物种。酵母宿主细胞包括粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)。
此外，可以使用多种已知技术来增强来自生产细胞系的与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段的生产水平。例如，谷氨酰胺合成酶基因表达系统(GS系统)是在某些条件下用于增强表达的常见方法。
与彼此相比，来自各种细胞系的与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段很可能具有不同的糖基化谱。然而，由本文所述的核酸分子编码、或包含本文提供的氨基酸序列的与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段都是本发明的部分，而与结合分子的糖基化无关，并且一般而言，与翻译后修饰的存在或不存在无关。
上述宿主细胞并不指使用人胚胎产生的宿主细胞。
上述宿主细胞并不指通过修饰人种系细胞的遗传完整性而产生的宿主细胞。
获得抗体的方法
在一个方面，本发明涉及用于获得与GD2特异性结合的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在足以产生所述抗体或其片段的条件下，在生长培养基中培养上述宿主细胞，必要时，随后分离和纯化所得到的抗体或其片段。
本发明涉及用于获得根据本发明与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法。本发明的一个实施方案涉及用于产生如本文定义的，与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，其包括产生能够表达与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段的重组宿主细胞，在适合于与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段表达/产生的条件下，培养所述宿主细胞，并且分离所得到的与GD2特异性结合的单克隆抗体或其片段。通过在此类重组宿主细胞中的此类表达产生的与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，在本文中被称为“与GD2特异性结合的重组单克隆抗体”或“与GD2特异性结合的重组单克隆抗体的抗原结合片段”。本发明还涉及来自此类宿主细胞的后代。
药物组合物
本发明的另一个方面是药物组合物，其包含与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段作为活性成分(或作为唯一的活性成分)。
在一个方面，本发明涉及用于治疗由GD2介导的疾病或病症的药物组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合、以治疗有效量的任何上述抗体或其抗原结合片段。
“药物组合物”指包含本发明的抗体和选自以下的至少一种组分的组合物：药学上可接受的和药理学上相容的填料、溶剂、稀释剂、载体、助剂、分配剂和感测剂、递送剂，例如防腐剂、稳定剂、填料、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、增稠剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、抗菌剂、杀真菌剂、润滑剂和延长递送控制剂，其选择和合适的比例取决于施用的类型和途径以及剂量。助悬剂的实例是乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯、山梨糖醇和山梨糖醇醚、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂-琼脂和黄蓍胶以及其混合物。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、山梨酸和类似化合物，来提供针对微生物作用的保护。组合物还可以含有等渗剂，例如糖、多元醇、氯化钠等等。组合物的延长作用可以通过减慢活性成分的吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶来实现。合适的载体、溶剂、稀释剂和递送剂的实例是水、乙醇、多元醇及其混合物、天然油(例如橄榄油)和用于注射的有机酯(例如油酸乙酯)。填料的实例是乳糖(lactose)、乳糖(milk sugar)、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸钙等等。崩解剂和分配剂的实例是淀粉、海藻酸及其盐、硅酸盐等等。润滑剂的实例是硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石以及高分子量的聚乙二醇。用于单独或与另一种活性化合物组合的，活性成分的经口、舌下、经皮、眼内、肌内、静脉内、皮下、局部或直肠施用的药物组合物，可以在具有传统药物载体的混合物中，以标准施用形式施用于人和动物。合适的标准施用形式包括经口形式，例如片剂、明胶胶囊、丸剂、粉末、颗粒、口香糖和经口溶液或悬浮液；舌下和经颊施用形式；气溶胶；植入物；局部、经皮、皮下、肌内、静脉内、鼻内或眼内施用形式和直肠施用形式。
术语“赋形剂”或“辅助物质”在本文中用于描述除本发明的抗体外的任何成分。这些是无机或有机性质的物质，其用于药物生产/制造中，以便给予药物产品必要的物理化学性质。
在一些实施方案中，组合物预期改善、预防或治疗可能与GD2相关的病症。
术语“由GD2介导的疾病或病症”指与GD2直接或间接相关的任何疾病或病症，包括疾病或病症的病因、发展、进展、持续或病理学。
“治疗(Treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”指减轻或消除生物学病症和/或其伴随症状中的至少一种的方法。如本文使用的，“减轻”疾病、病症或状况意指减少疾病、病症或状况的症状的严重性和/或发生频率。进一步地，本文对“治疗”的提及包括对治愈性、姑息性和预防性治疗的提及。
在一个方面，治疗的受试者或患者是哺乳动物，优选人受试者。所述受试者可以是任何年龄的男性或女性。
术语“病症”意指将受益于用本发明化合物的治疗的任何状况。这包括慢性和急性病症或疾病，包括使哺乳动物易患所讨论的病症的那些病理状况。
“治疗有效量”指在治疗期间待施用的治疗剂的量，所述量在某种程度上减轻待治疗疾病的一种或多种症状。
在本发明的药物组合物的一些实施方案中，由GD2介导的疾病或病症选自：脑瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、小细胞肺癌、肾癌、促结缔组织增生性小圆细胞纤维瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、乳腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤或软组织肉瘤。
本发明的药物组合物及其制备方法对于本领域技术人员无疑是显而易见的。药物组合物应该优选遵照GMP(良好生产规范)要求进行制造。组合物可以包含缓冲剂组分、张度剂、稳定剂和增溶剂。组合物的延长作用可以通过减慢活性药物成分的吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶来实现。合适的载体、溶剂、稀释剂和递送剂的实例包括水、乙醇、多元醇及其混合物、油和用于注射的有机酯。
本领域公认的用于施用肽、蛋白质或抗体的任何方法都可以适当地用于根据本发明与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段。
术语“药学上可接受的”指适合于在哺乳动物，优选人中施用的一种或多种相容的液体或固体组分。
术语“缓冲液”、“缓冲剂组分”，“缓冲剂”指这样的溶液，其能够通过其酸碱共轭组分的作用而抵抗pH变化，并且允许与GD2特异性结合的抗体产物抵抗pH变化。一般地，药物组合物优选具有在4.0至8.0范围内的pH。所使用的缓冲液的实例包括但不限于乙酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、组氨酸、琥珀酸盐等缓冲溶液。
如本文使用的，术语“张度剂(tonic agent)”、“渗透物”或“渗透剂”指可以增加液体抗体制剂的渗透压的赋形剂。“等渗”药物是具有与人血相当的渗透压的药物。等渗药物通常具有约250至350mOsm/kg的渗透压。使用的等渗剂包括但不限于多元醇、糖和蔗糖、氨基酸、金属盐例如氯化钠等。
“稳定剂”指提供活性剂的物理和/或化学稳定性的赋形剂、或者两种或更多种赋形剂的混合物。稳定剂可以是氨基酸，例如但不限于精氨酸、组氨酸、甘氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸；表面活性剂，例如但不限于聚山梨醇酯20(商品名称：Tween 20)、聚山梨醇酯80(商品名称：Tween 80)、聚乙烯-聚丙二醇及其共聚物(商品名称：泊洛沙姆、普流尼克)、十二烷基硫酸钠(SDS)；抗氧化剂，例如但不限于甲硫氨酸、乙酰半胱氨酸、抗坏血酸、单硫代甘油、亚硫酸盐等；螯合剂例如但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、柠檬酸钠等。
根据本发明的药物组合物是稳定的组合物。
如果在指定的贮存温度例如2–8℃下，在指定的贮存期限过程中，活性剂保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性，则药物组合物是“稳定的”。优选地，活性剂保留物理和化学稳定性两者、以及生物活性。基于在加速或天然老化条件下的稳定性测试结果，来调整贮存期限。
根据本发明的药物组合物可以以现成制剂形式的单一单位剂量或多个单一单位剂量的形式制造，包装或广泛销售。如本文使用的，术语“单一单位剂量”指离散量的含有预定量的活性成分的药物组合物。活性成分的量通常等于待在受试者中施用的活性成分的剂量，或此类剂量的方便部分，例如此类剂量的一半或三分之一。
根据本发明的药物组合物通常适合于作为无菌制剂肠胃外施用，其预期借助于注射、输注和植入绕过胃肠道，通过皮肤和粘膜屏障中的破裂而在人体中施用。特别地，考虑肠胃外施用尤其包括皮下、腹膜内、肌内、静脉内、动脉内、鞘内、心室内、尿道内、颅内、滑膜内、经皮注射或输注和肾透析输液技术。还可以采用肿瘤内递送，例如肿瘤内注射。还考虑了区域灌注。优选的实施方案包括静脉内和皮下途径。本领域公认的用于施用肽或蛋白质的任何方法，都可以适当地用于根据本发明与GD2特异性结合的抗体或其抗原结合片段。
可注射制剂可以以单位剂量形式(而无限制)制备、包装或销售，例如在安瓿瓶、小瓶、塑料容器、预填充注射器、自动注射装置中。用于肠胃外施用的制剂尤其包括悬浮液、溶液、在油性或水性基质中的乳状液、糊剂等等。
在另一个实施方案中，本发明提供了用于肠胃外施用的组合物，其包含以干燥(即粉末或颗粒)形式提供的药物组合物，用于在施用前由合适的基质(例如灭菌无热原水)重构。此类药物制剂可以通过例如冻干进行制备，所述冻干即在本领域中称为冷冻干燥的过程，并且涉及将产物冷冻，随后为从冷冻材料中去除溶剂。
根据本发明与GD2特异性结合的抗体或其抗原结合片段还可以单独或作为具有合适的药学上可接受的赋形剂的混合物，鼻内施用或通过从吸入器(例如加压气溶胶容器、泵、喷射器、喷雾器或雾化器)吸入施用，其中使用或不使用合适的推进剂，或者作为滴鼻剂或喷雾剂施用。
用于肠胃外施用的药物制剂可以配制为立即释放或修饰释放。修饰释放药物制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控释放、靶向释放和程序释放。
在一个方面，本发明涉及用于治疗由GD2介导的疾病或病症的药物组合物，该药物组合包含任何上述抗体或其抗原结合片段和至少一种其它治疗活性化合物。
在本发明的药物组合物的一些实施方案中，其它治疗活性化合物是抗体、化学治疗剂或激素治疗剂。
在本发明的药物组合物的一些实施方案中，其它治疗活性化合物是免疫检查点抑制剂。
在本发明的药物组合物的一些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂或CTLA-4抑制剂。
在本发明的药物组合物的一些实施方案中，PD-1抑制剂是与PD-1特异性结合的抗体。
在本发明的药物组合物的一些实施方案中，与PD-1特异性结合的抗体选自：prolgolimab、帕博利珠单抗、纳武单抗。
在本发明的药物组合物的一些实施方案中，CTLA-4抑制剂是与CTLA-4特异性结合的抗体。
在本发明的药物组合物的一些实施方案中，与CTLA-4特异性结合的抗体是伊匹木单抗或诺瑞利单抗。
在本发明的药物组合物的一些实施方案中，PD-L1抑制剂是与PD-L1特异性结合的抗体。
在本发明的药物组合物的一些实施方案中，与PD-L1特异性结合的抗体选自：度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、阿替利珠单抗、玛奈利单抗。
在本发明的药物组合物的一些实施方案中，其它治疗活性化合物选自：IL-2、GM-CSF、异维A酸、一种或多种其它细胞因子、或来自该组的治疗活性化合物的任何组合。
与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段的治疗用途
在一个方面，与GD2特异性结合的抗体或其抗原结合片段用于治疗由GD2活性介导的病症。
在一个方面，治疗的受试者或患者是哺乳动物，优选人受试者。所述受试者可以是任何年龄的男性或女性。
在肿瘤(例如癌症)的情况下，治疗有效量的抗体或其片段(例如与GITR特异性结合的抗体或其片段)可以减少癌细胞的数量；减少初始肿瘤的大小；抑制(即，在一定程度上减慢并优选停止)癌细胞浸润到周围器官内；抑制(即，在一定程度上减慢并优选停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上减轻与病症相关的一种或多种症状。抗体或其片段可以在一定程度上阻止生长和/或杀死现有的癌细胞，它可以具有细胞生长抑制性的和/或细胞毒性的。对于癌症治疗，例如，可以通过评价存活、肿瘤进展时间(TTP)、对治疗的肿瘤应答率(RR)、应答持续时间和/或生活质量来测量体内功效。
本文涉及与GD2特异性结合的抗体或其抗原结合片段连同一种或多种其它治疗剂使用的用途或方法考虑意指下述、提及下述且包括下述：
1)与GD2特异性结合的抗体或其抗原结合片段和治疗剂的此类组合同时施用于需要治疗的患者，此时此类组分一起配制成单一剂型，所述单一剂型在基本上相同的时间将所述组分释放给所述患者，
2)与GD2特异性结合的抗体或其抗原结合片段和治疗剂的此类组合同时施用于需要治疗的患者，此时此类组分彼此分开配制成分开的剂型，所述分开的剂型在基本上相同的时间由所述患者服用，随即所述组分在基本上相同的时间释放给所述患者，
3)与GD2特异性结合的抗体或其抗原结合片段和治疗剂的此类组合序贯施用于需要治疗的患者，此时此类组分彼此分开配制成分开的剂型，所述分开的剂型在连续的时间由所述患者服用，其中在每次施用之间具有显著的时间间隔，随即所述组分在基本上不同的时间释放给所述患者；和
4)与GD2特异性结合的抗体或其抗原结合片段和治疗剂的此类组合序贯施用于需要治疗的患者，此时此类组分一起配制成单一剂型，所述单个剂型以受控方式释放所述组分，随后它们在相同和/或不同的时间同时、连续或联合释放给所述患者，其中每个部分可以通过相同或不同途径施用。
与GD2特异性结合的抗体或其抗原结合片段可以无需进一步治疗性治疗，即作为独立疗法进行施用。
在一个方面，本发明涉及用于抑制需要此类抑制的受试者中GD2的生物活性的方法，其包括施用有效量的任何上述抗体或其抗原结合片段。
在一个方面，本发明涉及用于治疗由GD2介导的疾病或病症的方法，其包括向需要此类治疗的受试者施用以治疗有效量的任何上述抗体或其抗原结合片段或者所述药物组合物。
在一个方面，本发明涉及用于治疗由GD2介导的疾病或病症的方法，其包括在需要此类治疗的受试者中施用任何上述抗体或其抗原结合片段，并且选自：
a)施用至少一种其它治疗活性化合物，
b)放射疗法，
c)造血干细胞移植，
d)手术治疗以及必要时的辅助疗法，或
e)上述a)至d)的任何组合。
在治疗方法的一些实施方案中，由GD2介导的疾病或病症选自：脑瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、小细胞肺癌、肾癌、促结缔组织增生性小圆细胞纤维瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、乳腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤或软组织肉瘤。
在治疗方法的一些实施方案中，其它治疗活性化合物是抗体、化学治疗剂或激素治疗剂。
“化学治疗剂”是可用于恶性瘤治疗中的化学化合物。化学治疗剂的实例包括烷化剂，例如噻替哌和环磷酰胺烷基磺酸盐，例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，例如苯并多巴、卡波醌、美妥替哌(meturedopa)和脲多巴(uredopa)；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺、三亚乙基三聚氰胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三甲基三聚氰胺；乙酸原化合物(acetogenin)(例如，布拉他辛和布拉他辛酮)；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚/>)；β-拉帕酮；拉帕醇；秋水仙碱；白桦脂酸；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康/>CPT-11(伊立替康、/>)、乙酰喜树碱、东茛菪素(scopolectin)和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊苷；念珠藻素(例如念珠藻素1和念珠藻素8)；多拉司他汀；多卡米星(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑素；氮芥，例如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、甲氯乙胺、盐酸氧化氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼氮芥、曲磷胺、尿嘧啶芥末；亚硝基脲，例如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫斯汀、尼莫斯汀和雷莫斯汀；抗生素，例如烯二炔抗生素(例如加利车霉素，例如加利车霉素γII和加利车霉素ωII(参见例如，Agnew，Chem.Intl.Ed.Engl.，33:183-186(1994))；达内霉素，包括达内霉素A；埃波霉素；以及新制癌菌素生色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素生色团)、阿克拉霉素、放线菌素D、氨茴霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、carabicin、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、更生霉素、柔红霉素、地托比星、6-重氮基5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(包括/>吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯代-多柔比星、多柔比星HCl脂质体注射剂/>多柔比星脂质体TLC D-99/>和聚乙二醇化(peglylated)多柔比星脂质体/>和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素如丝裂霉素C、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物，例如氨甲蝶呤、吉西他滨替加氟/>卡培他滨/>埃博霉素和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，例如二甲叶酸、氨甲蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，例如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，例如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟鸟苷、依诺他滨、氟尿苷；抗肾上腺素，例如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，例如亚叶酸；乙酰葡醛酯；醛磷酰胺糖苷；氨基酮戊酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil；比生群；依达曲沙；地磷酰胺；地美可辛；地吖醌；依氟鸟氨酸；依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登木素生物碱，例如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；硝氨丙吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；/>多糖复合物(JHS Natural Products，Eugene，OR)；雷佐生；根霉素；西索菲兰；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；单端孢霉烯(例如T-2毒素、疣孢菌素A、杆孢菌素A和蛇形菌素)；尿烷；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖胞苷("Ara-C")；噻替哌；类紫杉烷，例如紫杉醇/>白蛋白改造的紫杉醇纳米制剂/>和多西他赛/>苯丁酸氮芥；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；氨甲蝶呤；铂药剂，例如顺铂、奥沙利铂和卡铂；长春花生物碱，其防止微管蛋白聚合形成微管，包括长春碱长春新碱/>长春地辛/> 和长春瑞滨/>依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；甲酰四氢叶酸；诺肖林；依达曲沙；道诺霉素；氨甲蝶呤；伊班膦酸盐；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类维A酸，例如视黄酸，包括贝沙罗汀/>双膦酸盐，例如氯膦酸盐(例如/>或/>)、依替膦酸盐/>NE-58095、唑来膦酸/唑来膦酸盐/>阿仑膦酸盐/>帕米膦酸盐替鲁膦酸盐/>或利塞膦酸盐/>曲沙他滨(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，例如抑制牵涉异常细胞增殖的信号传导途径中的基因表达的那些，例如PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗，例如疫苗和基因治疗疫苗，例如/>疫苗和/>疫苗；拓扑异构酶1抑制剂(例如/>)；rmRH(例如)；BAY439006(索拉非尼；Bayer)；SU-11248(Pfizer)；哌立福新、COX-2抑制剂(例如塞来昔布或依托昔布)、蛋白体抑制剂(例如PS341)；硼替佐米/>CCI-779；替匹法尼(811577)；orafenib、ABT510；Bcl-2抑制剂，例如奥利默森钠匹克生琼；EGFR抑制剂(参见下文定义)；酪氨酸激酶抑制剂(参见下文定义)；以及上述任何的药学上可接受的盐、酸或衍生物；以及上述两种或更多种的组合，例如CHOP，关于环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙的组合疗法的缩写，以及FOLFOX，关于用与5-FU和甲酰四氢叶酸组合的奥沙利铂(ELOXATINTM)的治疗方案的缩写。
激素试剂是调节或抑制激素对肿瘤的作用的试剂。此类试剂的实例是具有混合的激动剂/拮抗剂概况的抗雌激素，包括他莫昔芬4-羟基他莫昔芬、托瑞米芬/>艾多昔芬、屈洛昔芬、雷洛昔芬/>曲沃昔芬、雷洛昔芬和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，例如SERM3；没有激动剂特性的纯抗雌激素，例如氟维司群/>和EM800(此类试剂可以阻断雌激素受体(ER)二聚化，抑制DNA结合，增加ER转换率，和/或压制ER水平)；芳香酶抑制剂，包括甾体芳香酶抑制剂，例如福美坦和依西美坦/>以及非甾体芳香酶抑制剂，例如阿那曲唑来曲唑/>和氨鲁米特)，以及其它芳香酶抑制剂包括伏氯唑/>乙酸甲地孕酮/>法曲唑、咪唑；促黄体生成激素释放激素激动剂，包括亮丙瑞林(/>和/>)、戈舍瑞林、布舍瑞林和曲普瑞林；性类固醇，包括孕激素，例如乙酸甲地孕酮和乙酸甲羟孕酮；雌激素，例如己烯雌酚和普力马；以及雄激素/类维A酸，例如氟甲睾酮；全反式视黄酸和芬维A胺；奥那斯酮；抗孕激素；雌激素受体下调剂(ERD)；抗雄激素，例如氟他胺、尼鲁米特和比卡鲁胺；睾内酯；以及上述任何的药学上可接受的盐、酸或衍生物；以及上述两种或更多种的组合。
在治疗方法的一些实施方案中，其它治疗活性化合物是免疫检查点抑制剂。
术语“免疫检查点抑制剂”(或“检查点抑制剂”)指抑制免疫检查点的活性的化合物。抑制包括功能降低和完全阻断。抑制性检查点分子的实例包括B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、KIR、PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG-3、TIM-3、TIGIT和VISTA。在本发明的一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是特异性识别免疫检查点蛋白的抗体。许多免疫检查点抑制剂是已知的，并且在不久的将来可能开发出与这些已知的免疫检查点蛋白抑制剂类似的、可替代的免疫检查点抑制剂。免疫检查点抑制剂包括但不限于肽、抗体、核酸分子和低分子量化合物。
在治疗方法的一些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂或CTLA-4抑制剂。
在治疗方法的一些实施方案中，PD-1抑制剂是与PD-1特异性结合的抗体。
在本发明的一些实施方案中，PD-1抑制剂是与PD-1特异性结合的抗体。与PD-1特异性结合的抗体的实例包括帕博利珠单抗、纳武单抗、prolgolimab、特瑞普利单抗、西米普利单抗、信迪利单抗及其它。最优选的抗体是prolgolimab、帕博利珠单抗、纳武单抗。
在治疗方法的一些实施方案中，与PD-1特异性结合的抗体选自prolgolimab、帕博利珠单抗、纳武单抗。
在治疗方法的一些实施方案中，CTLA-4抑制剂是与CTLA-4特异性结合的抗体。
在本发明的一些实施方案中，CTLA-4抑制剂是与CTLA-4特异性结合的抗体。与CTLA4特异性结合的抗体的实例包括伊匹木单抗、曲美木单抗、泽弗利单抗、诺瑞利单抗及其它。最优选的抗体是伊匹木单抗或诺瑞利单抗。
在治疗方法的一些实施方案中，与CTLA-4特异性结合的抗体是伊匹木单抗或诺瑞利单抗。
在治疗方法的一些实施方案中，PD-L1抑制剂是与PD-L1特异性结合的抗体。
在治疗方法的一些实施方案中，与PD-L1特异性结合的抗体选自：度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、阿替利珠单抗、玛奈利单抗。
在治疗方法的一些实施方案中，其它治疗活性化合物选自：IL-2、GM-CSF、异维A酸、一种或多种其它细胞因子、或来自该组的治疗活性化合物的任何组合。
在一个方面，本发明涉及上述抗体或其抗原结合片段或者上述药物组合物用于治疗需要此类治疗的受试者中由GD2介导的疾病或病症的用途。
在一个方面，本发明涉及任何上述抗体或其抗原结合片段和以下组中的至少一种用于治疗由GD2介导的疾病或病症的用途：
a)其它治疗活性化合物，
b)放射疗法，
c)造血干细胞移植，或
d)手术治疗以及必要时的辅助疗法。
在用途的一些实施方案中，由GD2介导的疾病或病症选自：脑瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、小细胞肺癌、肾癌、促结缔组织增生性小圆细胞纤维瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、乳腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤或软组织肉瘤。
在用途的一些实施方案中，其它治疗活性化合物是免疫检查点抑制剂。
在用途的一些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂或CTLA-4抑制剂。
在用途的一些实施方案中，PD-1抑制剂是与PD-1特异性结合的抗体。
在用途的一些实施方案中，与PD-1特异性结合的抗体选自：prolgolimab、帕博利珠单抗、纳武单抗。
在用途的一些实施方案中，CTLA-4抑制剂是与CTLA-4特异性结合的抗体。
在用途的一些实施方案中，与CTLA-4特异性结合的抗体是伊匹木单抗或诺瑞利单抗。
在用途的一些实施方案中，PD-L1抑制剂是与PD-L1特异性结合的抗体。
在用途的一些实施方案中，与PD-L1特异性结合的抗体选自：度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、阿替利珠单抗、玛奈利单抗。
在用途的一些实施方案中，其它治疗活性化合物选自：IL-2、GM-CSF、异维A酸、一种或多种其它细胞因子、或来自该组的治疗活性化合物的任何组合。
施用剂量和途径
根据本发明与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段将以有效治疗所讨论的状况的量施用，即以达到所需结果所需要的剂量和持续时间段。治疗有效量可以根据因素而变，所述因素例如待治疗的特定状况，患者的年龄、性别和重量，以及与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段是作为独立治疗施用、还是与一种或多种另外的药物或治疗组合施用。
可以调整剂量方案以提供最佳的所需应答。例如，可以施用单次推注，可以随着时间过去施用几个分开剂量，或者可以如由治疗情况的紧急程度指示的，按比例减少或增加剂量。以单位剂型配制肠胃外组合物是尤其有利的，用于施用的容易性和剂量的均匀性。如本文使用的，单位剂型指适于作为用于待治疗的患者/受试者的单位剂量的物理上离散的单位；每个单位含有预定量的活性化合物，所述预定量计算为与所需药物载体结合产生所需疗效。本发明的单位剂型的规格通常由以下因素决定，并直接取决于以下：(a)治疗剂的独特特性和待实现的特定治疗或预防效应，以及(b)配制用于治疗受试者中的敏感性的此类活性化合物的领域中固有的局限性。
因此，基于本文提供的公开内容，技术人员将了解，根据治疗领域中众所周知的方法来调整剂量和剂量方案。即，可以容易地测定最大可耐受剂量，并且还可以测定向患者提供可检测的疗效的有效量，以及施用每种药剂以向患者提供可检测的疗效的时间要求。因此，尽管本文例示了某些剂量和施用方案，但这些实例绝不限制在实践本发明的实施方案中可以提供给患者的剂量和施用方案。
应注意，剂量值可以随着待缓解的状况的类型和严重性而变，并且可以包括单一剂量或多重剂量。此外，应理解，对于任何特定受试者，应该根据个体需要和施用组合物或监督组合物施用的医学专业人员的判断，随着时间过去调整具体的剂量方案，并且本说明书阐述的剂量范围仅是示例性的，并不预期限制请求保护的组合物的范围或实践。此外，本发明组合物的施用方案可以基于各种因素，包括疾病的类型，患者的年龄、重量、性别、医学状况，状况的严重性，施用途径，以及所采用的与GD2特异性结合的特定单克隆抗体或其抗原结合片段。因此，剂量方案可以广泛改变，但可以使用标准方法照常规确定。例如，可以基于药代动力学和药效学参数来调整剂量，所述药代动力学和药效学参数可以包括临床效应，例如毒性效应或实验室值。因此，本发明涵盖由本领域技术人员确定的患者内剂量递增。用于确定适当剂量和方案的方法是本领域众所周知的，并且一旦提供了本文公开的构想，本领域技术人员就会理解。
上文提供了合适的施用方法的实例。
认为根据本发明与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段的合适剂量将在0.1-200mg/kg的范围内，优选0.1-100mg/kg，包括约0.5-50mg/kg，例如约1-20mg/kg。与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段可以例如以至少0.25mg/kg的剂量施用，例如至少0.5mg/kg，包括至少1mg/kg，例如至少1.5mg/kg，例如至少2mg/kg，例如至少3mg/kg，包括至少4mg/kg，例如至少5mg/kg；以及例如直到多达50mg/kg，包括直到多达30mg/kg，例如直到多达多20mg/kg，包括直到多达15mg/kg。通常以适当的时间间隔重复施用，例如每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次，并持续由主治医生认为适当的时间长度，在一些情况下，主治医生可以在必要时增加或减少剂量。
与GD2特异性结合的抗体的诊断用途
根据本发明的与GD2特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段也用于诊断目的(例如在体外、离体)。例如，根据本发明与GD2特异性结合的本文单克隆抗体或其抗原结合片段可以用于检测或测量得自患者的样品(例如组织样品或体液样品，例如炎性渗出物、血液、血清、肠液、唾液或尿)中的GD2水平。用于检测和测量的合适方法包括免疫测定法，例如流式细胞术、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、化学发光测定法、放射性免疫测定法和免疫组织学。
实施例
提供下述实施例用于更好地理解本发明。这些实施例仅出于说明目的，而不应解释为以任何方式限制本发明的范围。
本说明书中引用的所有出版物、专利和专利申请都通过引用并入本文。尽管前述发明已通过说明和实例的方式略微详细地进行描述用于清楚理解的目的，但根据本发明的教导，对于本领域的普通技术人员显而易见的是，可以对其进行某些改变和修改，而不背离所附实施方案的精神或范围。
材料和一般方法
关于人免疫球蛋白轻链和重链的核苷酸序列的一般信息在以下中给出：Kabat，E.A.等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public HealthService，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991)。抗体链的氨基酸根据EU编号进行编号(Edelman，G.M.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 63(1969)78-85；Kabat，E.A.等人，Sequences ofProteins ofImmunological Interest，第5版，Public HealthService，National Institutes ofHealth，Bethesda，MD，(1991)。
重组DNA技术
如Sambrook，J.等人，Molecular cloning：A laboratory manual；Cold SpringHarbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York，1989中所述，使用标准方法来操纵DNA。分子生物学试剂根据制造商的方案使用。
基因合成
从通过化学合成制备的寡核苷酸制备所需的基因区段。侧翼为单个限制性位点的300-1400bp长的基因区段，通过退火和寡核苷酸的连接包括PCR扩增进行组装，并且随后经由限制性位点进行克隆。通过DNA测序确认亚克隆基因片段的DNA序列。
DNA序列测定
通过桑格测序测定DNA序列。
DNA和蛋白质序列分析和序列数据管理
Unipro的UGENE套件版本1.29和SnapGene Viewer用于序列创建，绘图，分析，注释和说明。
表达载体
对于申请材料中描述的抗体的表达，应用预期用于在原核细胞(大肠杆菌)中表达，在真核细胞中(例如在CHO细胞中)瞬时表达抗体的表达质粒的变体。除了抗体表达盒以外，载体还含有：复制起点，其允许所述质粒在大肠杆菌中复制，在大肠杆菌中赋予对各种抗生素(例如，氨苄青霉素、卡那霉素)的抗性的基因。
如下文所述的包含所述抗体链的融合基因通过PCR和/或基因合成生成，并且用已知的重组方法和技术，通过连接相应的核酸区段，例如使用相应载体中的独特限制性位点进行组装。通过DNA测序验证亚克隆的核酸序列。对于瞬时转染，通过来自转化的大肠杆菌培养物的质粒制备物来制备较大量的质粒。
实施例1
抗GD2抗体序列的选择
使用在计算机芯片上获得的结构数据产生抗GD2抗体分子。使用JSC"Biocad"的内部算法执行在计算机芯片上的支架化。来自Schrodinger Suite 2017-2的PrepWizard工具用于制备结构。随后使用来自Schrodinger Suite 2017-2的Prime工具进行折叠。
应用了可变结构域的氨基酸组成的序贯修饰的方法。
抗体在计算机芯片上进行优化，从而产生用于进一步研究的抗体候选物，该抗体候选物在表1中指示。
表1.用于进一步研究的抗体候选物
如下从表1中选择6种先导抗体：07-006、07-015、07-016、07-028、07-031、07-041；这些抗体令人惊讶地显示了最好的参数(参见下文的实施例)。
实施例2
关于抗GD2抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031或07-041的轻/重链可变片段的同一性/人源化分析
表2显示了关于抗GD2抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031或07-041的重链可变片段的同一性分析。
表2.抗体VH中的同一性百分比
因此，根据本发明的抗GD2的重链可变片段彼此具有至少98％的同一性。
表3显示了关于抗GD2抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031或07-041的重链可变片段的人源化分析。
表3.抗体VH人源化程度
因此，根据本发明的抗GD2抗体的重链可变片段具有多于80％的人源化程度。
表4显示了关于抗GD2抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031或07-041的轻链可变片段的同一性分析
表4.抗体VL中的同一性百分比
因此，根据本发明的抗GD2抗体的轻链可变片段彼此具有至少96％的同一性。
表5显示了关于抗GD2抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031或07-041的轻链可变片段的人源化分析。
表5.VL人源化程度
因此，根据本发明的候选抗GD2的轻链可变片段具有多于80％的人源化程度。
实施例3
抗GD2抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031或07-041的序列的生产
根据本发明选自以下的针对GD2的抗体的重/轻链可变结构域的基因是从头合成的：07-006、07-015、07-016、07-028、07-031或07-041。为此，我们合成了55-60bp的寡核苷酸，每个寡核苷酸形成完全重叠的基因序列。使用两轮PCR来组装每个基因，所述两轮PCR导致产生各339bp的片段。使用已知的重组方法和过程，通过例如使用SOE-PCR(重叠延伸剪接术)连接适当的核酸区段，使用PCR和/或基因合成和组装，来执行重链可变结构域基因和人IgG1的Fc片段、轻链可变结构域和CK的融合。
将根据本发明选自以下的针对GD2的抗体的重链和轻链基因克隆到PEE质粒内，用于在哺乳动物细胞中产生以IgG1形式的蛋白质：07-006、07-015、07-016、07-028、07-031或07-041。通过DNA测序验证克隆的核酸序列。所需数量的所得到的质粒(图2和3)在大肠杆菌细胞中产生，并且使用来自Qiagen的商业质粒DNA分离试剂盒进行纯化。
将所得到的基因构建体转移用于在CHO细胞系中瞬时生产蛋白质。
实施例4
GD2抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031或07-041的Fc重链恒定结构域的修饰
为了产生具有改善特性的抗体，通过引入点突变M252Y、S254T、T256(YTE)和/或K322A来修饰Fc重链恒定结构域。YTE突变集合使得能够实现延长的药代动力学，而K322A突变的引入减少了所得到的抗体的补体依赖性细胞毒性。另外，由于在CHO-1g6-Fut8细胞系中的表达，抗体的Fc部分是去岩藻糖基化的，因此导致抗体依赖性细胞毒性增加。所得到的抗体显示于表6中。
表6.根据本发明的针对GD2的抗体的变体
遗传构建体的组装包括重链可变结构域基因和人IgG1的Fc的融合，在所述Fc内预先引入点突变。
将具有取代的重链基因克隆到pEE质粒内，用于在CHO-1g6-Fut8细胞系中以IgG1形式产生连同已经产生的轻链构建体一起的蛋白质。通过DNA测序验证克隆的核酸序列。所需数量的所得到的质粒(图2、3)在大肠杆菌细胞中进行培养，并且使用Qiagen试剂盒进行纯化。
将所得到的基因构建体转移用于在CHO-1g6-Fut8细胞系中瞬时生产蛋白质。
实施例5
从哺乳动物细胞的悬浮培养物中生产、分离和纯化针对GD2的抗体。
全长抗体在CHO细胞生长培养基中产生，去岩藻糖基化形式的全长抗体在CHO-1g6-Fut8细胞生长培养基中产生。在用表达载体转染细胞之后，轨道补料分批培养在无血清培养基中执行7天。使用用于蛋白A生物传感器上的分子相互作用分析的Pall ForteBio的OctetRED96 s系统，来监测所讨论的抗体的分泌。
在培养后，将细胞培养物在2000g下离心20分钟，并且通过0.22μm过滤器进行过滤。通过使用HiTrap rProtein A FF柱在Akta Pure 25层析系统上的亲和层析，从培养液中分离靶蛋白。将培养液施加到HiTrap rProtein A FF柱；其后，用PBS洗涤柱，并且用0.1M甘氨酸缓冲液pH 3的溶液洗脱蛋白质；其后，通过以1/5v/V的比率添加1M Tris-HClрΗ8来中和蛋白质溶液。然后通过透析将蛋白质转移到PBS pH 7.4中；其后，过滤(0.22μm)所得到的溶液。将产物贮存于-70℃下。所得到的蛋白溶液的纯度通过SDS凝胶电泳进行评估(图4)。
实施例6
使用Forte Bio OctetRed96，针对GD2抗体的对于神经节苷脂GD2的亲和力的动力学研究。
在OctetRed96(Pall)仪器上通过生物膜干涉法评估抗体与GD2的结合。AR2G传感器涂布有神经节苷脂GD2。然后将具有固定的GD2的传感器浸入含有抗体的孔中。在抗体和神经节苷脂的结合后，将传感器浸入工作溶液中，用于后续的解离阶段。在扣除参考信号后，使用Octet Data Analysis软件(版本8.2)根据标准程序，并使用1:1相互作用模型，来分析所得到的传感图。根据本发明的aGD2抗体的KD显示于表7中。
表7.针对GD2的抗体的解离常数
抗体名称 KD，M
07-006 7,58E-10
07-015 4,49E-10
07-016 7,03E-10
07-028 6,13E-10
07-031 10,6E-10
07-041 8,41E-10
10-008 7,56Ε-10
因此，所有测试的抗GD2抗体都以高亲和力与神经节苷脂GD2特异性结合(表7)。
实施例7
针对GD2的抗体的热稳定性分析。
抗体在PBS pH 7.4中使用塑料试管中的放大器在50℃下加热48小时，随后转变为+4℃。在程序结束后，使用在TSK Gel G3000SWxl柱上的分析凝胶层析，在加热之前和加热之后分析样品。比较在加热之前和加热之后样品的靶峰面积。在加热48小时之后单体峰面积的小于5％变化，指示了产物的稳定性和长期贮存的可能性(表8)。
表8.在加热之前和加热之后，在抗体产物的层析图上的峰面积比。
/>
因此，所有测试的抗GD2抗体都显示了高热稳定性(表8)。
实施例8
针对GD2的抗体的抗体依赖性细胞毒性的确定
我们使用基于Jurkat细胞系的报告细胞系；SK-N-BE(2)作为靶细胞，所述报告细胞系稳定地表达表面CD16，并且包含在NFAT启动子的控制下的编码萤火虫萤光素酶的基因。Jurkat-NFAT-Luc-CD16细胞在37℃与5％CO2下在RPMI-1640培养基(10％FBS、10μg/ml庆大霉素、2mM L-谷氨酰胺、0.3μg/ml嘌呤霉素和200μg/ml潮霉素)上培养)上进行培养；SK-N-BE(2)在相同条件下在DMEM/F12培养基(10％FBS、10mcg/ml庆大霉素和2mM L-谷氨酰胺)中进行培养。
将以50μl体积的25,000个Jurkat-NFAT-Luc-CD16效应细胞和25,000个SK-N-BE(2)靶细胞、以及以根据图的浓度以50μl体积的抗体稀释物引入96孔培养板的每个孔内。
不含抗体的点用作阴性对照。使板在37℃、5％CO2下温育4小时；其后，在Spark板阅读器(Tecan)上，使用萤光素酶底物(JSC BIOCAD)测量孔中的发光强度，使用SigmaPlot14.0软件执行数据处理和标绘。抗GD2抗体样品的EC50值显示于表9中。
表9.抗GD2抗体样品的EC50值
/>
图5显示了在使用报告Jurkat-NFAT-Luc-CD16细胞系的测定法中，抗体10-008具有抗体依赖性细胞毒性。
实施例9
补体依赖性细胞毒性的分析
SK-N-BE(2)(人神经母细胞瘤)细胞系用作分析的靶细胞。细胞在补充有10％牛血清的DMEM培养基中生长。为了执行分析，我们在补充有0.1％牛血清白蛋白的DMEM培养基中制备了浓度为1x106个细胞/ml的细胞悬浮液，并且制备了测试抗体候选物的多个稀释物。
将50μl抗体稀释物、50μl细胞悬浮液和50μl从健康供体中新鲜分离的人血清加入96孔培养板的每个孔中。使板在37℃、5％CO2下温育3小时。在温育后，将15μl"AlamarBlue"活体染料(Invitrogen)加入所有孔中，并且使板在37℃、5％CO2下温育18小时。
在用于搅拌的轨道振荡器上，将板在室温下振荡10-20分钟。使用TECAN Spark板阅读器获得荧光读数。检测到的荧光信号与活细胞的数量成比例。Excel和SigmaPlot 14.0软件用于数据处理和标绘。
测试抗体07-041dFuc((07-041的去岩藻糖基化变体))、10-007、10-008、10-009在人血清的存在下导致靶细胞死亡。与其它抗体相比，抗体10-008和10-009具有降低的效应(参见图6)。
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序列表
<110> JSC BIOCAD
<120> 与GD2特异性结合的单克隆抗体
<150> RU2021107773
<151> 24-03-2021
<160> 100
<170> BiSSAP 1.3.6
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体 07-015、07-016、07-028的重链可变结构域的氨基酸序列CDR1 (Kabat)
<400> 1
Gly His Asn Met Asn
1 5
<210> 2
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体 07-006、07-031、07-041、10-001、10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的重链可变结构域的氨基酸序列CDR1 (Kabat)
<400> 2
Gly Lys Asn Met Asn
1 5
<210> 3
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体 07-006、07-015、07-016、07-028、07-031、07-041、10-001、10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的重链可变结构域的氨基酸序列CDR2 (Kabat)
<400> 3
Ala Ile Asp Pro Phe Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 4
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体 07-031、10-001、10-002、10-003的重链可变结构域的氨基酸序列CDR3(Kabat)
<400> 4
Gly Met Ile Tyr
1
<210> 5
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-041、10-007、10-008、10-009的重链可变结构域的氨基酸序列CDR3(Kabat)
<400> 5
Gly Met Phe Tyr
1
<210> 6
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006的重链可变结构域的氨基酸序列CDR3 (Kabat)
<400> 6
Gly Met Tyr Tyr
1
<210> 7
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-015、07-016、07-028的重链可变结构域的氨基酸序列CDR3 (Kabat)
<400> 7
Gly Met Leu Tyr
1
<210> 8
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-028,07-031、10-001、10-002、10-003的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR1 (Kabat)
<400> 8
Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Arg Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 9
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-041、10-007、10-008、10-009的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR1(Kabat)
<400> 9
Arg Ser Ser Gln Asn Leu Val His Arg Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 10
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-031,10-001、10-002、10-003的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR2 (Kabat)
<400> 10
Lys Val Ser Asn Arg Phe Gly
1 5
<210> 11
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-028、07-041、10-007、10-008、10-009的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR2 (Kabat)
<400> 11
Lys Val Asn Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-031,07-041、10-001、10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR3 (Kabat)
<400> 12
Gly Gln Ser Thr His Val Pro Pro Leu Thr
1 5 10
<210> 13
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-028的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR3 (Kabat)
<400> 13
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Leu Ser
1 5 10
<210> 14
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006的重链可变结构域的氨基酸序列
<400> 14
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ser Phe Thr Gly Lys
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Asn Ile Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Ile Asp Pro Phe Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Ser Gly Met Tyr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 15
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-015、07-016和07-028的重链可变结构域的氨基酸序列
<400> 15
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ser Phe Thr Gly His
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Asn Ile Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Ile Asp Pro Phe Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Ser Gly Met Leu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 16
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-031、10-001、10-02、10-003的重链可变结构域的氨基酸序列
<400> 16
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ser Phe Thr Gly Lys
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Asn Ile Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Ile Asp Pro Phe Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Ser Gly Met Ile Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 17
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-041、10-007、10-08、10-009的重链可变结构域的氨基酸序列
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ser Phe Thr Gly Lys
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Asn Ile Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Ile Asp Pro Phe Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Ser Gly Met Phe Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 18
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006和07-016的轻链可变结构域的氨基酸序列
<400> 18
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Ser Leu Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Arg
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile His Lys Val Ser Asn Arg Phe Gly Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Gly Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 19
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-015、07-031、10-001、10-002、10-003的轻链可变结构域的氨基酸序列
<400> 19
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Ser Leu Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Arg
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile His Lys Val Ser Asn Arg Phe Gly Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Gly Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 20
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-028的轻链可变结构域的氨基酸序列
<400> 20
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Ser Leu Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Arg
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile His Lys Val Asn Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Leu Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 21
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-041、10-007、10-008、10-009的轻链可变结构域的氨基酸序列
<400> 21
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Ser Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Leu Val His Arg
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile His Lys Val Asn Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Gly Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 22
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006的重链的氨基酸序列
<400> 22
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ser Phe Thr Gly Lys
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Asn Ile Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Ile Asp Pro Phe Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
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Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
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Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
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<220>
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<400> 23
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<213> 人工序列
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<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 抗体07-006 + YTE的重链的氨基酸序列
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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<213> 人工序列
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<400> 27
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<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体10-001的重链的氨基酸序列
<400> 28
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435 440
<210> 29
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体10-007的重链的氨基酸序列
<400> 29
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260 265 270
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275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
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325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
340 345 350
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355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 30
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006 + YTE + K322A的重链的氨基酸序列
<400> 30
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ser Phe Thr Gly Lys
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Asn Ile Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Ile Asp Pro Phe Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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165 170 175
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180 185 190
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
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Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr
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Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
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Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
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Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Ala Val Ser
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Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
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<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-015 + YTE + K322A、07-016 + YTE + K322A和07-028 + YTE + K322A的重链的氨基酸序列
<400> 31
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Ala Val Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006 + K322A的重链的氨基酸序列
<400> 34
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
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Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-015 + K322A、07-016 + K322A和07-028 + K322A的重链的氨基酸序列
<400> 35
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ser Phe Thr Gly His
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<213> 人工序列
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195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 39
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-015、 07-031、10-001、10-002、10-003的轻链的氨基酸序列
<400> 39
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Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 40
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-028的轻链的氨基酸序列
<400> 40
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Ser Leu Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Leu Val His Arg
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile His Lys Val Asn Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Leu Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 41
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-041、10-007、10-008、10-009的轻链的氨基酸序列
<400> 41
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Ser Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Leu Val His Arg
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile His Lys Val Asn Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Gly Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 42
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031、07-041、10-001、10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的重链可变结构域的氨基酸序列FR1 (Kabat)
<400> 42
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ser Phe Thr
20 25 30
<210> 43
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031、07-041、10-001、10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的重链可变结构域的氨基酸序列FR2 (Kabat)
<400> 43
Trp Val Arg Gln Asn Ile Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 44
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031、07-041、10-001、10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的重链可变结构域的氨基酸序列FR3 (Kabat)
<400> 44
Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Ser
20 25 30
<210> 45
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031、07-041、10-001、10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的重链可变结构域的氨基酸序列FR4 (Kabat)
<400> 45
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 46
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-15、007-16、07-028、07-031,07-041、10-001、10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的轻链可变结构域的氨基酸序列FR1 (Kabat)
<400> 46
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Ser Leu Ser Cys
20
<210> 47
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-016、07-028、07-041,10-007、10-008、10-009的轻链可变结构域的氨基酸序列FR2 (Kabat)
<400> 47
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile His
1 5 10 15
<210> 48
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-015、07-031、10-001、10-002、10-003的轻链可变结构域的氨基酸序列FR2 (Kabat)
<400> 48
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile His
1 5 10 15
<210> 49
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-028,07-031、07-041、10-001、10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的轻链可变结构域的氨基酸序列FR3 (Kabat)
<400> 49
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 50
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-028,07-031、07-041、10-001、10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的轻链可变结构域的氨基酸序列FR4 (Kabat)
<400> 50
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 51
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-031、07-041、10-001,10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的重链可变结构域的氨基酸序列CDR1 (Chothia)
<400> 51
Gly Ser Ser Phe Thr Gly Lys
1 5
<210> 52
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-015、07-016、07-028的重链可变结构域的氨基酸序列CDR1 (Chothia)
<400> 52
Gly Ser Ser Phe Thr Gly His
1 5
<210> 53
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-028,07-031、07-041、10-001、10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的重链可变结构域的氨基酸序列CDR2 (Chothia)
<400> 53
Asp Pro Phe Tyr Gly Gly
1 5
<210> 54
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-031、10-001、10-002、10-003的重链可变结构域的氨基酸序列CDR3(Chothia)
<400> 54
Gly Met Ile Tyr
1
<210> 55
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-041、10-007、10-008、10-009的重链可变结构域的氨基酸序列CDR3(Chothia)
<400> 55
Gly Met Phe Tyr
1
<210> 56
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006的重链可变结构域的氨基酸序列CDR3 (Chothia)
<400> 56
Gly Met Tyr Tyr
1
<210> 57
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-015、07-016、07-028的重链可变结构域的氨基酸序列CDR3 (Chothia)
<400> 57
Gly Met Leu Tyr
1
<210> 58
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031、10-001、10-002、10-003的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR1 (Chothia)
<400> 58
Arg Ser Leu Val His Arg Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10
<210> 59
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-041、10-007、10-008、10-009的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR1(Chothia)
<400> 59
Gln Asn Leu Val His Arg Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10
<210> 60
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-031、10-001、10-002、10-003的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR2 (Chothia)
<400> 60
Lys Val Ser Asn Arg Phe Gly
1 5
<210> 61
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-028、07-041、10-007、10-008、10-009的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR2 (Chothia)
<400> 61
Lys Val Asn Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 62
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-031,07-041、10-001、10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR3 (Chothia)
<400> 62
Gly Gln Ser Thr His Val Pro Pro Leu Thr
1 5 10
<210> 63
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-028的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR3 (Chothia)
<400> 63
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Leu Ser
1 5 10
<210> 64
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-031、07-041、10-001,10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的重链可变结构域的氨基酸序列CDR1 (IMGT)
<400> 64
Gly Ser Ser Phe Thr Gly Lys Asn
1 5
<210> 65
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-015、07-016、07-028的重链可变结构域的氨基酸序列CDR1 (IMGT)
<400> 65
Gly Ser Ser Phe Thr Gly His Asn
1 5
<210> 66
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-028,07-031、07-041、10-001、10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的重链可变结构域的氨基酸序列CDR2 (IMGT)
<400> 66
Ile Asp Pro Phe Tyr Gly Gly Thr
1 5
<210> 67
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-031、10-001、10-002、10-003的重链可变结构域的氨基酸序列CDR3(IMGT)
<400> 67
Val Ser Gly Met Ile Tyr
1 5
<210> 68
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-041、10-007、10-008、10-009的重链可变结构域的氨基酸序列CDR3(IMGT)
<400> 68
Val Ser Gly Met Phe Tyr
1 5
<210> 69
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006的重链可变结构域的氨基酸序列CDR3 (IMGT)
<400> 69
Val Ser Gly Met Tyr Tyr
1 5
<210> 70
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-015、07-016、07-028的重链可变结构域的氨基酸序列CDR3 (IMGT)
<400> 70
Val Ser Gly Met Leu Tyr
1 5
<210> 71
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-028、07-031、10-001、10-002、10-003的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR1 (IMGT)
<400> 71
Arg Ser Leu Val His Arg Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 72
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-041、10-007、10-008、10-009的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR1(IMGT)
<400> 72
Gln Asn Leu Val His Arg Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 73
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-031、10-001、10-002、10-003的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR2 (IMGT)
<400> 73
Lys Val Ser
1
<210> 74
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-028、07-041、10-007、10-008、10-009的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR2 (IMGT)
<400> 74
Lys Val Asn
1
<210> 75
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-006、07-015、07-016、07-31、07-041、10-001、10-002、10-003、10-007、10-008、10-009的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR3 (IMGT)
<400> 75
Gly Gln Ser Thr His Val Pro Pro Leu Thr
1 5 10
<210> 76
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗体07-028的轻链可变结构域的氨基酸序列CDR2 (IMGT)
<400> 76
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Leu Ser
1 5 10
<210> 77
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体07-006的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 77
caggtacaac tcgtacaatc tggggccgaa gtgaagaaac caggcgcttc cgttaaggtg 60
tcctgcaaag ccagcgggag ctcgttcaca gggaagaaca tgaattgggt ccgacagaac 120
attggacagg gattagaatg gatgggcgct atagatccct tctatggagg cacatcctac 180
aaccagaaat tcaagggccg cgttaccctc acagtcgata agtctatctc taccgcatac 240
atggaactgt cccgcttacg gtcggatgat acagcagtgt actattgtgt tagtgggatg 300
tactactggg gtcagggcac tctggtgaca gtgtcgagt 339
<210> 78
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体07-006的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 78
gatatcgtga tgacacaaac cccattgagc ctgtccgtga cgccaggaga gcgcgctagt 60
ttaagttgtc ggagttcaag gtccctggtt caccggaatg gcaataccta cttgcactgg 120
tacttgcaga aacctgggca gtcgccaaag ctcctcatcc acaaagtatc caatagattc 180
ggcggcgtgc cagatagatt ctctggctct ggttctggta cagattttac tctgaagatt 240
tctcgggtgg aggccgagga cgtaggggtg tacttctgcg gccaaagtac acacgttcca 300
cccctaacct ttggacaagg gaccaagtta gaactgaaa 339
<210> 79
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体07-015的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 79
caggtacaac tcgtacaatc tggggccgaa gtgaagaaac caggcgcttc cgttaaggtg 60
tcctgcaaag ccagcgggag ctcgttcaca gggcacaaca tgaattgggt ccgacagaac 120
attggacagg gattagaatg gatgggcgct atagatccct tctatggagg cacatcctac 180
aaccagaaat tcaagggccg cgttaccctc acagtcgata agtctatctc taccgcatac 240
atggaactgt cccgcttacg gtcggatgat acagcagtgt actattgtgt tagtgggatg 300
ctgtactggg gtcagggcac tctggtgaca gtgtcgagt 339
<210> 80
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体07-015的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 80
gatatcgtga tgacacaaac cccattgagc ctgtccgtga cgccaggaga gcgcgctagt 60
ttaagttgtc ggagttcaag gtccctggtt caccggaatg gcaataccta cttgcactgg 120
tacttgcaga aacctgggca gtcgccacaa ctcctcatcc acaaagtatc caatagattc 180
ggcggcgtgc cagatagatt ctctggctct ggttctggta cagattttac tctgaagatt 240
tctcgggtgg aggccgagga cgtaggggtg tacttctgcg gccaaagtac acacgttcca 300
cccctaacct ttggacaagg gaccaagtta gaactgaaa 339
<210> 81
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体07-016的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 81
caggtacaac tcgtacaatc tggggccgaa gtgaagaaac caggcgcttc cgttaaggtg 60
tcctgcaaag ccagcgggag ctcgttcaca gggcacaaca tgaattgggt ccgacagaac 120
attggacagg gattagaatg gatgggcgct atagatccct tctatggagg cacatcctac 180
aaccagaaat tcaagggccg cgttaccctc acagtcgata agtctatctc taccgcatac 240
atggaactgt cccgcttacg gtcggatgat acagcagtgt actattgtgt tagtgggatg 300
ctgtactggg gtcagggcac tctggtgaca gtgtcgagt 339
<210> 82
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体07-016的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 82
gatatcgtga tgacacaaac cccattgagc ctgtccgtga cgccaggaga gcgcgctagt 60
ttaagttgtc ggagttcaag gtccctggtt caccggaatg gcaataccta cttgcactgg 120
tacttgcaga aacctgggca gtcgccaaag ctcctcatcc acaaagtatc caatagattc 180
ggcggcgtgc cagatagatt ctctggctct ggttctggta cagattttac tctgaagatt 240
tctcgggtgg aggccgagga cgtaggggtg tacttctgcg gccaaagtac acacgttcca 300
cccctaacct ttggacaagg gaccaagtta gaactgaaa 339
<210> 83
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体07-028的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 83
caggtacaac tcgtacaatc tggggccgaa gtgaagaaac caggcgcttc cgttaaggtg 60
tcctgcaaag ccagcgggag ctcgttcaca gggcacaaca tgaattgggt ccgacagaac 120
attggacagg gattagaatg gatgggcgct atagatccct tctatggagg cacatcctac 180
aaccagaaat tcaagggccg cgttaccctc acagtcgata agtctatctc taccgcatac 240
atggaactgt cccgcttacg gtcggatgat acagcagtgt actattgtgt tagtgggatg 300
ctgtactggg gtcagggcac tctggtgaca gtgtcgagt 339
<210> 84
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体07-028的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 84
gatatcgtga tgacacaaac cccattgagc ctgtccgtga cgccaggaga gcgcgctagt 60
ttaagttgtc ggagttcaag gtccctggtt caccggaatg gcaataccta cttgcactgg 120
tacttgcaga aacctgggca gtcgccaaag ctcctcatcc acaaagtaaa caatagattc 180
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tctcgggtgg aggccgagga cgtaggggtg tacttctgct ctcaaagtac acacgttcca 300
cccctatctt ttggacaagg gaccaagtta gaactgaaa 339
<210> 85
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体07-031的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 85
caggtacaac tcgtacaatc tggggccgaa gtgaagaaac caggcgcttc cgttaaggtg 60
tcctgcaaag ccagcgggag ctcgttcaca gggaagaaca tgaattgggt ccgacagaac 120
attggacagg gattagaatg gatgggcgct atagatccct tctatggagg cacatcctac 180
aaccagaaat tcaagggccg cgttaccctc acagtcgata agtctatctc taccgcatac 240
atggaactgt cccgcttacg gtcggatgat acagcagtgt actattgtgt tagtgggatg 300
atctactggg gtcagggcac tctggtgaca gtgtcgagt 339
<210> 86
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体07-031的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 86
gatatcgtga tgacacaaac cccattgagc ctgtccgtga cgccaggaga gcgcgctagt 60
ttaagttgtc ggagttcaag gtccctggtt caccggaatg gcaataccta cttgcactgg 120
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cccctaacct ttggacaagg gaccaagtta gaactgaaa 339
<210> 87
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体07-041的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 87
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<210> 88
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体07-041的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 88
gatatcgtga tgacacaaac cccattgagc ctgtccgtga cgccaggaga gcgcgctagt 60
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cccctaacct ttggacaagg gaccaagtta gaactgaaa 339
<210> 89
<211> 1329
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体10-001的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 89
caggtacaac tcgtacaatc tggggccgaa gtgaagaaac caggcgcttc cgttaaggtg 60
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attggacagg gattagaatg gatgggcgct atagatccct tctatggagg cacatcctac 180
aaccagaaat tcaagggccg cgttaccctc acagtcgata agtctatctc taccgcatac 240
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<210> 90
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体10-001的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 90
gatatcgtga tgacacaaac cccattgagc ctgtccgtga cgccaggaga gcgcgctagt 60
ttaagttgtc ggagttcaag gtccctggtt caccggaatg gcaataccta cttgcactgg 120
tacttgcaga aacctgggca gtcgccacaa ctcctcatcc acaaagtatc caatagattc 180
ggcggcgtgc cagatagatt ctctggctct ggttctggta cagattttac tctgaagatt 240
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<210> 91
<211> 1329
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体10-002的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 91
caggtacaac tcgtacaatc tggggccgaa gtgaagaaac caggcgcttc cgttaaggtg 60
tcctgcaaag ccagcgggag ctcgttcaca gggaagaaca tgaattgggt ccgacagaac 120
attggacagg gattagaatg gatgggcgct atagatccct tctatggagg cacatcctac 180
aaccagaaat tcaagggccg cgttaccctc acagtcgata agtctatctc taccgcatac 240
atggaactgt cccgcttacg gtcggatgat acagcagtgt actattgtgt tagtgggatg 300
atctactggg gtcagggcac tctggtgaca gtgtcgagtg ctagcaccaa gggcccatcg 360
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ccaaaaccca aggacaccct ctacatcacc cgggagcctg aggtcacatg cgtggtggtg 780
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<210> 92
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体10-002的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 92
gatatcgtga tgacacaaac cccattgagc ctgtccgtga cgccaggaga gcgcgctagt 60
ttaagttgtc ggagttcaag gtccctggtt caccggaatg gcaataccta cttgcactgg 120
tacttgcaga aacctgggca gtcgccacaa ctcctcatcc acaaagtatc caatagattc 180
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<210> 93
<211> 1329
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体10-003的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 93
caggtacaac tcgtacaatc tggggccgaa gtgaagaaac caggcgcttc cgttaaggtg 60
tcctgcaaag ccagcgggag ctcgttcaca gggaagaaca tgaattgggt ccgacagaac 120
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aaccagaaat tcaagggccg cgttaccctc acagtcgata agtctatctc taccgcatac 240
atggaactgt cccgcttacg gtcggatgat acagcagtgt actattgtgt tagtgggatg 300
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gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc 420
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cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 900
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ccgggtaaa 1329
<210> 94
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体10-003的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 94
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<210> 95
<211> 1329
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体10-007的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 95
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atggaactgt cccgcttacg gtcggatgat acagcagtgt actattgtgt tagtgggatg 300
ttctactggg gtcagggcac tctggtgaca gtgtcgagtg ctagcaccaa gggcccatcg 360
gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc 420
ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc 480
agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag gactctactc cctcagcagc 540
gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac 600
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acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc 720
ccaaaaccca aggacaccct ctacatcacc cgggagcctg aggtcacatg cgtggtggtg 780
gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 840
cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 900
gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 960
aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 1020
gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggacgagc tgaccaagaa ccaggtcagc 1080
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gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga cggctccttc 1200
ttcctctata gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1260
tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaaaagcct ctccctgtcc 1320
ccgggtaaa 1329
<210> 96
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体10-007的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 96
gatatcgtga tgacacaaac cccattgagc ctgtccgtga cgccaggaga gcgcgctagt 60
ttaagttgtc ggagttcaca gaacctggtt caccggaatg gcaataccta cttgcactgg 120
tacttgcaga aacctgggca gtcgccaaag ctcctcatcc acaaagtaaa caatagattc 180
tccggcgtgc cagatagatt ctctggctct ggttctggta cagattttac tctgaagatt 240
tctcgggtgg aggccgagga cgtaggggtg tacttctgcg gccaaagtac acacgttcca 300
cccctaacct ttggacaagg gaccaagtta gaactgaaac gtacggtggc tgcaccatct 360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480
caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600
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<210> 97
<211> 1329
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体10-008的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 97
caggtacaac tcgtacaatc tggggccgaa gtgaagaaac caggcgcttc cgttaaggtg 60
tcctgcaaag ccagcgggag ctcgttcaca gggaagaaca tgaattgggt ccgacagaac 120
attggacagg gattagaatg gatgggcgct atagatccct tctatggagg cacatcctac 180
aaccagaaat tcaagggccg cgttaccctc acagtcgata agtctatctc taccgcatac 240
atggaactgt cccgcttacg gtcggatgat acagcagtgt actattgtgt tagtgggatg 300
ttctactggg gtcagggcac tctggtgaca gtgtcgagtg ctagcaccaa gggcccatcg 360
gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc 420
ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc 480
agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag gactctactc cctcagcagc 540
gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac 600
aagcccagca acaccaaagt ggacaagaga gttgagccca aatcttgtga caaaactcac 660
acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc 720
ccaaaaccca aggacaccct ctacatcacc cgggagcctg aggtcacatg cgtggtggtg 780
gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 840
cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 900
gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg cgcggtctcc 960
aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 1020
gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggacgagc tgaccaagaa ccaggtcagc 1080
ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1140
gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga cggctccttc 1200
ttcctctata gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1260
tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaaaagcct ctccctgtcc 1320
ccgggtaaa 1329
<210> 98
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体10-008的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 98
gatatcgtga tgacacaaac cccattgagc ctgtccgtga cgccaggaga gcgcgctagt 60
ttaagttgtc ggagttcaca gaacctggtt caccggaatg gcaataccta cttgcactgg 120
tacttgcaga aacctgggca gtcgccaaag ctcctcatcc acaaagtaaa caatagattc 180
tccggcgtgc cagatagatt ctctggctct ggttctggta cagattttac tctgaagatt 240
tctcgggtgg aggccgagga cgtaggggtg tacttctgcg gccaaagtac acacgttcca 300
cccctaacct ttggacaagg gaccaagtta gaactgaaac gtacggtggc tgcaccatct 360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480
caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600
gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660
<210> 99
<211> 1329
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体10-009的重链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 99
caggtacaac tcgtacaatc tggggccgaa gtgaagaaac caggcgcttc cgttaaggtg 60
tcctgcaaag ccagcgggag ctcgttcaca gggaagaaca tgaattgggt ccgacagaac 120
attggacagg gattagaatg gatgggcgct atagatccct tctatggagg cacatcctac 180
aaccagaaat tcaagggccg cgttaccctc acagtcgata agtctatctc taccgcatac 240
atggaactgt cccgcttacg gtcggatgat acagcagtgt actattgtgt tagtgggatg 300
ttctactggg gtcagggcac tctggtgaca gtgtcgagtg ctagcaccaa gggcccatcg 360
gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc 420
ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc 480
agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag gactctactc cctcagcagc 540
gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac 600
aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga gttgagccca aatcttgtga caaaactcac 660
acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc 720
ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 780
gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 840
cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 900
gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg cgcggtctcc 960
aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 1020
gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggacgagc tgaccaagaa ccaggtcagc 1080
ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1140
gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga cggctccttc 1200
ttcctctata gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1260
tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaaaagcct ctccctgtcc 1320
ccgggtaaa 1329
<210> 100
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗体10-009的轻链可变结构域的氨基酸序列的核酸
<400> 100
gatatcgtga tgacacaaac cccattgagc ctgtccgtga cgccaggaga gcgcgctagt 60
ttaagttgtc ggagttcaca gaacctggtt caccggaatg gcaataccta cttgcactgg 120
tacttgcaga aacctgggca gtcgccaaag ctcctcatcc acaaagtaaa caatagattc 180
tccggcgtgc cagatagatt ctctggctct ggttctggta cagattttac tctgaagatt 240
tctcgggtgg aggccgagga cgtaggggtg tacttctgcg gccaaagtac acacgttcca 300
cccctaacct ttggacaagg gaccaagtta gaactgaaac gtacggtggc tgcaccatct 360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480
caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600
gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660

Claims (63)

1.一种与GD2(神经节苷脂GD2)特异性结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含：
(a)重链可变结构域，其包含：
(i)具有选自SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR1，
(ii)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2，
(iii)具有选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR3；和
(b)轻链可变结构域，其包含：
(i)具有选自SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9的氨基酸序列的CDR1，
(ii)具有选自SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR2，
(iii)具有选自SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR3。
2.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变结构域包含：
(i)具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的FR1，
(ii)具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的FR2，
(iii)具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的FR3，和
(iv)具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的FR4。
3.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变结构域包含：
(i)具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的FR1，
(ii)具有选自SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:48的氨基酸序列的FR2，
(iii)具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的FR3，和
(iv)具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的FR4。
4.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中
a)所述重链可变结构域包含：
(i)具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的FR1，
(ii)具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的FR2，
(iii)具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的FR3，和
(iv)具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的FR4，并且其中
b)所述轻链可变结构域包含：
(i)具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的FR1，
(ii)具有选自SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:48的氨基酸序列的FR2，
(iii)具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的FR3，和
(iv)具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的FR4。
5.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变结构域包含：
(i)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR1，
具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2，
具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR3；或
(ii)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR1，
具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2，
具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR3。
6.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变结构域包含：
(i)具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的CDR1，
具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR2，
具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR3；或
(ii)具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR1，
具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDR2，
具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR3。
7.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸序列。
8.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变结构域包含选自SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17的氨基酸序列。
9.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少96％同一性的氨基酸序列。
10.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变结构域包含选自SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
11.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中：
(a)所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少98％同一性的氨基酸序列；
(b)所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少96％同一性的氨基酸序列。
12.根据权利要求1的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中：
(a)所述重链可变结构域包含选自SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16或SEQID NO:17的氨基酸序列；
(b)所述轻链可变结构域包含选自SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20或SEQID NO:21的氨基酸序列。
13.根据权利要求14的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中：
(i)(a)所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；和
(b)所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；或
(ii)(a)所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；
(b)所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
14.根据权利要求1-13中任一项的分离的单克隆抗体，其中与GD2特异性结合的抗体是全长IgG抗体。
15.根据权利要求14的分离的单克隆抗体，其中所述全长IgG抗体属于人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。
16.根据权利要求1的分离的单克隆抗体，其中与Fc片段的天然序列相比，所述抗体包含在Fc片段中的YTE突变(M252Y、S254T、T256E)和/或K322A突变。
17.根据权利要求1的分离的单克隆抗体，其包括包含选自以下的氨基酸序列的重链：SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ IDNO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37。
18.根据权利要求1的分离的单克隆抗体，其包括包含选自以下的氨基酸序列的轻链：SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40或SEQ ID NO:41。
19.根据权利要求1的分离的单克隆抗体，其包括：
(a)包含选自以下的氨基酸序列的重链：SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ IDNO:36或SEQ ID NO:37，和
(b)包含选自以下的氨基酸序列的轻链：SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40或SEQ ID NO:41。
20.根据权利要求1的分离的单克隆抗体，其包括：
(i)(a)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的重链，和
(b)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链；或
(ii)(a)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链，和
(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的轻链。
21.一种分离的核酸，其编码根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段。
22.根据权利要求21的分离的核酸，其中所述核酸是DNA。
23.一种表达载体，包含根据权利要求21-22中任一项的核酸。
24.一种用于获得宿主细胞以获得根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括通过根据权利要求23的表达载体的细胞转化。
25.一种用于获得根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段的宿主细胞，其包含根据权利要求21-22中任一项的核酸。
26.一种用于获得根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在足以产生所述抗体的条件下，在生长培养基中培养根据权利要求25的宿主细胞，必要时，随后分离和纯化所得到的抗体。
27.一种药物组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合的根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段。
28.根据权利要求27的药物组合物，用于治疗由GD2介导的疾病或病症。
29.根据权利要求28的药物组合物，其中由GD2介导的疾病或病症选自脑瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、小细胞肺癌、肾癌、促结缔组织增生性小圆细胞纤维瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、乳腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤或软组织肉瘤。
30.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段和至少一种其它治疗活性化合物。
31.根据权利要求30的药物组合物，用于治疗由GD2介导的疾病或病症。
32.根据权利要求31的药物组合物，其中由GD2介导的疾病或病症选自脑瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、小细胞肺癌、肾癌、促结缔组织增生性小圆细胞纤维瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、乳腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤或软组织肉瘤。
33.根据权利要求30的药物组合物，其中所述其它治疗活性化合物是抗体、化学治疗剂、激素治疗剂或免疫检查点抑制剂，或
所述其它治疗活性化合物选自IL-2、GM-CSF、异维A酸、一种或多种其它细胞因子、或来自该组的治疗活性化合物的任何组合。
34.根据权利要求33的药物组合物，其中所述免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂或CTLA-4抑制剂。
35.根据权利要求34的药物组合物，其中所述PD-1抑制剂是与PD-1特异性结合的抗体。
36.根据权利要求35的药物组合物，其中与PD-1特异性结合的抗体选自prolgolimab、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivoluma)。
37.根据权利要求34的药物组合物，其中所述CTLA-4抑制剂是与CTLA-4特异性结合的抗体。
38.根据权利要求37的药物组合物，其中与CTLA-4特异性结合的抗体是伊匹木单抗(ipilimumab)或诺瑞利单抗(nurulimab)。
39.根据权利要求34的药物组合物，其中所述PD-L1抑制剂是与PD-L1特异性结合的抗体。
40.根据权利要求39的药物组合物，其中与PD-L1特异性结合的抗体选自度伐利尤单抗(durvalumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、阿替利珠单抗(atezolizumab)、玛奈利单抗(manelimab)。
41.一种用于抑制需要此类抑制的受试者中GD2的生物活性的方法，其包括施用有效量的根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段。
42.一种用于治疗由GD2介导的疾病或病症的方法，其包括向需要此类治疗的受试者施用以治疗有效量的根据权利要求1-20中任一项的抗体或其抗原结合片段、或者根据权利要求27或30中任一项的药物组合物。
43.根据权利要求42的方法，其中所述方法另外包括：
a)施用至少一种其它治疗活性化合物，
b)放射疗法，
c)造血干细胞移植，
d)手术治疗以及必要时的辅助疗法，或
e)上述a)至d)的任何组合。
44.根据权利要求42-43中任一项的方法，其中由GD2介导的疾病或病症选自脑瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、小细胞肺癌、肾癌、促结缔组织增生性小圆细胞纤维瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、乳腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤或软组织肉瘤。
45.根据权利要求43的方法，其中所述其它治疗活性化合物是抗体、化学治疗剂、激素治疗剂或免疫检查点抑制剂；或
所述其它治疗活性化合物选自IL-2、GM-CSF、异维A酸、一种或多种其它细胞因子、或来自该组的治疗活性化合物的任何组合。
46.根据权利要求45的方法，其中所述免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂或CTLA-4抑制剂。
47.根据权利要求46的方法，其中所述PD-1抑制剂是与PD-1特异性结合的抗体。
48.根据权利要求47的方法，其中与PD-1特异性结合的抗体选自prolgolimab、帕博利珠单抗、纳武单抗。
49.根据权利要求46的方法，其中所述CTLA-4抑制剂是与CTLA-4特异性结合的抗体。
50.根据权利要求49的方法，其中与CTLA-4特异性结合的抗体是伊匹木单抗或诺瑞利单抗。
51.根据权利要求46的方法，其中所述PD-L1抑制剂是与PD-L1特异性结合的抗体。
52.根据权利要求51的方法，其中与PD-L1特异性结合的抗体选自度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、阿替利珠单抗、玛奈利单抗。
53.根据权利要求1-30中任一项的抗体或其抗原结合片段、或者根据权利要求27或30中任一项的药物组合物用于治疗需要此类治疗的受试者中由GD2介导的疾病或病症的用途。
54.根据权利要求53的用途，其中根据权利要求1-30中任一项的抗体或其抗原结合片段、或者根据权利要求27或30中任一项的药物组合物和以下组中的至少一种用于治疗由GD2介导的疾病或病症的用途：
a)其它治疗活性化合物，
b)放射疗法，
c)造血干细胞移植，或
d)手术治疗以及必要时的辅助疗法。
55.根据权利要求53的用途，其中由GD2介导的疾病或病症选自脑瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、小细胞肺癌、肾癌、促结缔组织增生性小圆细胞纤维瘤、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、乳腺癌、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤或软组织肉瘤。
56.根据权利要求54的用途，其中所述其它治疗活性化合物是免疫检查点抑制剂，或
所述其它治疗活性化合物选自IL-2、GM-CSF、异维A酸、一种或多种其它细胞因子、或来自该组的治疗活性化合物的任何组合。
57.根据权利要求56的用途，其中所述免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂或CTLA-4抑制剂。
58.根据权利要求57的用途，其中所述PD-1抑制剂是与PD-1特异性结合的抗体。
59.根据权利要求58的用途，其中与PD-1特异性结合的抗体选自prolgolimab、帕博利珠单抗、纳武单抗。
60.根据权利要求57的用途，其中所述CTLA-4抑制剂是与CTLA-4特异性结合的抗体。
61.根据权利要求60的用途，其中与CTLA-4特异性结合的抗体是伊匹木单抗或诺瑞利单抗。
62.根据权利要求57的用途，其中所述PD-L1抑制剂是与PD-L1特异性结合的抗体。
63.根据权利要求62的用途，其中与PD-L1特异性结合的抗体选自度伐利尤单抗、阿维鲁单抗、阿替利珠单抗、玛奈利单抗。
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