BR112020017382A2

BR112020017382A2 - anticorpos anti-cd73 e métodos de uso dos mesmos

Info

Publication number: BR112020017382A2
Application number: BR112020017382-7A
Authority: BR
Inventors: Nicholas Stuart Wilson; Jeremy Dale Waight; Shawn Michael Jennings; Olga Ignatovich; Emmanuel Cyrille Pascal Briend; Benjamin Maxime Morin; Oliver Schon; Spencer Campbell
Original assignee: Agenus Inc.
Priority date: 2018-03-09
Filing date: 2019-03-08
Publication date: 2021-01-26
Also published as: KR20200130403A; EP3762421A2; US20230416397A1; PE20210628A1; CN112074535A; PH12020551317A1; US20190352418A1; AU2022259823A1; AU2019231791B2; AU2019231791A1; WO2019173692A3; US11692042B2; WO2019173692A2; JP7319992B2; CA3093468A1; MX2020009394A; AR114275A1; CR20200392A; SG11202007927WA; JP2023129543A

Abstract

a presente invenção fornece anticorpos que se ligam especificamente a cd73 (por exemplo, cd73 humana) e antagonizam a função de cd73. também são fornecidos anticorpos anti-cd73 que adicionalmente compreendem uma porção de ligação a tgfß ou uma porção de ligação a vegf. a presente invenção fornece adicionalmente composições farmacêuticas compreendendo esses anticorpos, ácidos nucleicos que codificam esses anticorpos, vetores de expressão e células hospedeiras para a produção desses anticorpos e métodos de tratamento de um objeto usando esses anticorpos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTICORPOS ANTI-CD73 E MÉTODOS DE USO DOS MESMOS".

PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Este pedido reivindica a prioridade ao Pedido de Patente Provisório U.S. No. de série 62/640.850, depositado em 9 de março de 2018, cuja invenção inteira é no presente documento incorporada por referência.

REFERÊNCIA À LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS ENVIADA ELETRONICAMENTE

[002] O conteúdo da listagem de sequência submetida eletronicamente em arquivo de texto ASCIIl (Nome: AGBW- I125PC SeqList ST25.txt) é incorporado no presente documento por referência em sua totalidade.

1. CAMPO

[003] A presente invenção se refere a anticorpos que se ligam especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana) e métodos de uso dos mesmos.

2. ANTECEDENTES

[004] CD73, também conhecido como ecto-5'-nucleotidase, ecto- 5'-NT, 5-NT e NTSE, é uma enzima de superfície celular ligada a glicosilfosfatidilinisotol (GPI). A atividade enzimática de CD73 catalisa a hidrólise do monofosfato de adenosina extracelular (AMP) em adenosina. Esta atividade, juntamente com a atividade de CD39 para catalisar a hidrólise do trifosfato de adenosina extracelular (ATP) em AMP, constitui um importante sistema gerador de adenosina no espaço extracelular. A adenosina é um ligando de vários receptores acoplados à proteina G (GPCRs) e está implicada no escape imunológico, angiogênese e motilidade tumoral. A CD73 é amplamente expressa em muitos tecidos e foi considerada como sendo regulada positivamente em tumores primários e metastáticos em estágio avançado. Estudos em modelos animais mostraram que o bloqueio da atividade de CD73 usando um anticorpo anti-CD73 suprime o crescimento do tumor e prolonga a sobrevivência, promovendo a imunidade adaptativa antitumoral (Forte et al. (2012) J Immunol. L89 (5): 2226-33).

[005] Fator-B de crescimento de transformação (TGFB) é uma citocina pleiotrópica que é expressa em níveis elevados em tumores primários e metastáticos de estágio avançado e está associado com proliferação, invasão, metástase e angiogênese de células tumorais. O TGFB também demonstrou promover a expansão de populações imunossupressoras, tais como células T reguladoras (Tregs) e células supressoras derivadas de mieloides (MDSCs). Vide Wang et al. (2017) Front Immunol. 8: 1934.

[006] Dado o papel aparente de CD73 humana e TGFB na modulação das respostas imunes a tumores, os agentes terapêuticos concebidos para antagonizar a atividade de CD73, ou a atividade de CD73 e a sinalização de TGFB, são uma grande promessa para o tratamento do câncer.

3. SUMÁRIO

[007] A presente invenção fornece anticorpos que se ligam especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana) e antagonizam a função de CD73, por exemplo, a atividade enzimática para promover a conversão de AMP em adenosina. Também são fornecidas composições farmacêuticas que compreendem esses anticorpos, ácidos nucleicos que codificam esses anticorpos, vetores de expressão e células hospedeiras para fazer esses anticorpos e métodos de tratar um objeto usando esses anticorpos. Os anticorpos no presente documento descritos são particularmente úteis para aumentar as respostas imunes a um antígeno tumoral e, portanto, são úteis para o tratamento de câncer em um objeto.

[008] Por conseguinte, em um aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, o anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo regiões determinantes de complementaridade (CDRs) CDRH1, CDRH2 e CDRH3, e uma região variável de cadeia leve que compreende as regiões determinantes de complementaridade CDRL1, CDRL2 e CDRL3, em que:

(a) CDRH1 compreende a sequência de aminoácidos de X1X2WX3X4 (SEQ ID NO: 13), em que XléSouN;

X2éSourY, X3élouM;e X4é NouH;

(b) CDRH2 compreende a sequência de aminoácidos de X1IYPRX2X3DTNYX4X5KFKX6 (SEQ ID NO: 14), em que XléRouT;

X2é N,AouS; X3éGousS; X4é NAouS; X5éGouQ;e XeéDouG;

(c) CDRH3 compreende a sequência de aminoácidos de LLDYSMDY (SEQ ID NO: 7);

(d) CDRL1 compreende a sequência de aminoácidos de RASQDISX1X2LN (SEQ ID NO: 16), em que XléNoule X2éYousS;

(e) CDRL2 compreende a sequência de aminoácidos de YTSRLHS (SEQ ID NO: 10); e/ou

(f) CDRL3 compreende a sequência de aminoácidos de QQGNTLPXT (SEQ ID NO: 17), em que:

XéLouW.

[009] Em certas modalidades, CDRH1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 1 e 2. Em certas modalidades, CDRH2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 3-6. Em certas modalidades, CDRL1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 8 e 9. Em certas modalidades, CDRL3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 11 e 12.

[010] Em certas modalidades, (a) CDRH1 compreende a sequência de aminoácidos de SSWIN (SEQ ID NO: 2); (b) CDRH2 compreende a sequência de aminoácidos de RIYPRX1IGDTNYX2GKFKD (SEQ ID NO: 15), em que X1éN AouS;e X2é N,AouS; (c) CDRL1 compreende a sequência de aminoácidos de RASQDISX1X2LN (SEQ ID NO: 16), em que XléNoule X2éYousS; e/ou (d) CDRL3 compreende a sequência de aminoácidos de QQGNTLPLT (SEQ ID NO: 12).

[011] Em certas modalidades, CDRH2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 4-6. Em certas modalidades, CDRL1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQIDNOs:8eo9.

[012] Em certas modalidades, CDRH1, CDRH2 e CDRH3 compreendem as sequências de aminoácidos CDRH1, CDRH2 e

CDRHB3, respectivamente, apresentadas em SEQ ID NOs: 2,4 e 7;2,5 e7;1,3e7;0u2,6e7.Em certas modalidades, CDRL1, CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos CDRL1, CDRL2 e CDRL3, respectivamente, apresentadas em SEQ ID NOs: 8, 10 e 12; 9, 10 e 12; ou 8, 10 e 11. Em certas modalidades, CDRH1, CDRH?2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3, respectivamente, apresentadas em SEQ ID NOs: 2, 4,7,8, 10 e 12;2, 5,7,8, 106 12;1,3,7,8,10e 11;2,4,7,8,10e 11;2,4,7,9,10 e 12; 2,6,7,8,10e12;2,5,7,9, 10 e 12; ou 2,6,7,9, 10 e 12. Em certas modalidades, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3, respectivamente, estabelecido em SEQ ID NOs: 2,4,7,8, 10 e 12; ou 2, 5,7, 8, 10 e 12.

[013] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, o anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo CDRs CDRH1, CDRH2 e CDRH3, e uma região variável de cadeia leve compreendendo regiões determinantes de complementaridade CDRL1, CDRL2 e CDRL3, em que CDRH3 compreende a sequência de aminoácidos de LLDYSMDY (SEQ ID NO: 7); e/ou CDRL3 compreende a sequência de aminoácidos de QQGNTLPLT (SEQ ID NO: 12) ou QQGNTLPWT (SEQ ID NO: 11).

[014] Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 31. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs:

19-21 e 23-30. Em certas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 19-21 e 23-30. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 100% idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 23-30. Em certas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 23-30. Em certas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24 ou

27. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada de uma sequência da linhagem germinativa humana, conforme estabelecido em SEQ ID NO: 22.

[015] Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 41 ou 42. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 33-35 e 37-40. Em certas modalidades, a região variável de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 33-35 e 37-

40. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 100% idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 37-40. Em certas modalidades, a região variável de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 37-40. Em certas modalidades, a região variável de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 37. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada de uma sequência da linhagem germinativa humana como apresentado em SEQ ID NO: 36.

[016] Em certas modalidades, a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve, respectivamente, compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 24 e 37; 27 e 37; 196 33;20 e 34;21e035;23e03/7;23e038;24e038;25037/7;26e 37; 28 e 37; 25 e 38; 26 e 38; 27 e 38; 28 e 38; 29 e 37; 30 e 37; 23 e 39; ou 23 e 40. Em certas modalidades, a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve, respectivamente, compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 24 e 37; ou 27 e 37.

[017] Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica às SEQ ID NOs: 27, e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica às SEQ ID NOs: 37

[018] Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica às SEQ ID NOs: 85 e/ou uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%,

85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à SEQ ID NOs: 97.

[019] Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica às SEQ ID NOs: 115 e/ou uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à SEQ ID NOs: 97.

[020] Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma região constante de cadeia pesada selecionada a partir do grupo consistindo em IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2 humana. Em certas modalidades, a região constante de cadeia pesada é I9gG1. Em certas modalidades, a sequência de aminoácidos de I9gG1 compreende uma mutação N297A, numerada de acordo com o sistema de numeração EU. Em certas modalidades, a região constante de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50, 49, 46, 45, 55 ou 56. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de grupo consistindo em SEQ ID NOs: 63-88.

[021] Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma região constante de cadeia leve selecionada a partir do grupo consistindo em IgK humana e IgA. Em certas modalidades, a região constante de cadeia leve é Igx. Em certas modalidades, a região constante de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 93 ou 89. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NO: 92 e 94-98.

[022] Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve compreendendo as sequências de aminoácidos estabelecidas em qualquer fileira da Tabela 4, preferivelmente a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 79 e 97; 85 e 97; 77 e 9/7; 80 e 97; 86 e 97; 64 e 92; 70 e 96; ou 78 e 97, respectivamente.

[023] Em certas modalidades que recitam qualquer uma das SEQ ID NOs: 19, 20 e 65-68, o X em qualquer uma das SEQ ID NOs: 19, 20 e 65-68 é glutamina. Em certas modalidades que recitam qualquer uma das SEQ ID NOs: 21, 23-30, 63, 64, 69-88, o X em qualquer uma das SEQ ID NOs: 21, 23-30, 63, 64, 69-88 é glutamato. Em certas modalidades que recitam qualquer uma das SEQ ID NOs: 19-21, 23-30 e 63-88, o X em qualquer uma das SEQ ID NOs: 19-21, 23-30 e 63-88 é piroglutamato.

[024] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga ao mesmo epítopo de CD73 humana que o anticorpo de qualquer uma das reivindicações precedentes.

[025] Em certas modalidades de qualquer um dos aspectos precedentes, o anticorpo é um anticorpo humanizado. Em certas modalidades, o anticorpo é antagônico a CD73 humana. Em certas modalidades, o anticorpo desativa, reduz ou inibe uma atividade de CD73 humana. Em certas modalidades, o anticorpo atenua a capacidade de CD73 humana de converter monofosfato de adenosina em adenosina. Em certas modalidades, o anticorpo é internalizado após a ligação a células que expressam CD73 humana.

[026] Em certas modalidades, o anticorpo isolado adicionalmente compreende uma porção de ligação a TGFRB. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB está ligada à região variável de cadeia pesada. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB está ligada à região variável de cadeia pesada por meio de um ligante peptídico. Em certas modalidades, o anticorpo isolado adicionalmente compreende uma porção de ligação a TGFB1igada à região constante de cadeia pesada. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB está ligada ao resíduo C-terminal da região constante de cadeia pesada. Em certas modalidades, o resíduo N-terminal da porção de ligação a TGFRB está ligado ao resíduo C-terminal da região constante de cadeia pesada por meio de um ligante peptídico. Em certas modalidades, o ligante peptídico compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 103-108.

[027] Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB se liga especificamente a TGFB humano. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB compreende um domínio extracelular de um receptor de TGFB humano. Em certas modalidades, o receptor de TGFB humano é selecionado a partir do grupo consistindo em TGFBR1, TGFBR2 e TGFEBR3 humano. Em certas modalidades, o receptor de TGFB humano é TGFBR2 humano. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a uma sequência selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFRB consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma sequência selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112, preferivelmente SEQ ID NO: 111. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFRB consiste em uma sequência de aminoácidos selecionado a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112, preferivelmente SEQ ID NO: 111.

[028] Em certas modalidades, o anticorpo isolado compreende um polipeptíideo — compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 113-121, preferivelmente SEQ ID NO: 114 ou 115. Em certas modalidades, o anticorpo isolado compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 113-121 e um polipeptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 92 ou 97. Em certas modalidades, o anticorpo isolado compreende dois polipeptídeos, cada um compreendendo uma sequência de aminoácido de ácido selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 113-121 e dois polipeptídeos, cada um compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 92 ou 97. Em certas modalidades, o anticorpo isolado compreende dois polipeptídeos, cada um compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:115 e dois polipeptídeos, cada um compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97.

[029] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, o anticorpo compreendendo uma porção de ligação a TGFB. Em certas modalidades, o anticorpo é antagônico a CD73 humana. Em certas modalidades, o anticorpo desativa, reduz ou inibe uma atividade de CD73 humana. Em certas modalidades, o anticorpo atenua a capacidade de CD73 humana de converter monofosfato de adenosina em adenosina. Em certas modalidades, o anticorpo, quando ligado ao TGFRB, é antagonista a CD73 humana.

[030] Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB se liga especificamente a TGFB humano. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB compreende um domínio extracelular de um receptor de TGFB humano. Em certas modalidades, o receptor de TGFB humano é selecionado a partir do grupo consistindo em TGFBR1, TGFBR2 e TGFEBR3 humano. Em certas modalidades, o receptor de TGFB humano é TGFBR2 humano. Em certas modalidades, a porção de ligação a

TGFB compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma sequência selecionado a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFRB consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica a uma sequência selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112, preferivelmente SEQ ID NO: 111. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFRB consiste em uma sequência de aminoácidos selecionado a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112, preferivelmente SEQ ID NO: 111.

[031] Em certas modalidades, o anticorpo isolado adicionalmente compreende uma porção de ligação a VEGF. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF está ligada à região variável de cadeia pesada. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF está ligada à região variável de cadeia pesada por meio de um ligante peptídico. Em certas modalidades, o anticorpo isolado adicionalmente compreende uma porção de ligação a VEGF ligada à região constante de cadeia pesada. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF está ligada ao resíduo C-terminal da região constante de cadeia pesada. Em certas modalidades, o resíduo N-terminal da porção de ligação a VEGF está ligado ao resíduo C-terminal da região constante de cadeia pesada por meio de um ligante peptídico. Em certas modalidades, o ligante peptídico compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 103-108.

[032] Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF se liga especificamente a VEGF humano. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF compreende um domínio extracelular de um receptor de VEGF humano. Em certas modalidades, o receptor de VEGF humano é selecionado a partir do grupo consistindo em VEGFRI1, VEGFR2 e VEGFR3 humanos. Em certas modalidades, o receptor de VEGF humano é VEGFR1 humano. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 122. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 294%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 122. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO:

122. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF consiste na sequência apresentada em SEQ ID NO: 122.

[033] Em certas modalidades, o anticorpo isolado compreende um polipeptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 123-127. Em certas modalidades, o anticorpo compreende um polipeptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 123-127 e um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 92, 128 e 97. Em certas modalidades, o anticorpo compreende dois polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 123-127 e dois polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 92, 128 e 97.

[034] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, o anticorpo compreendendo uma porção de ligação a VEGF. Em certas modalidades, o anticorpo é antagônico a CD73 humana. Em certas modalidades, o anticorpo desativa, reduz ou inibe uma atividade de CD73 humana. Em certas modalidades, o anticorpo atenua a capacidade de CD73 humana de converter monofosfato de adenosina em adenosina. Em certas modalidades, o anticorpo, quando ligado a VEGF, é antagônico a CD73 humana.

[035] Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF se liga especificamente a VEGF humano. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF compreende um domínio extracelular de um receptor de VEGF humano. Em certas modalidades, o receptor de VEGF humano é selecionado a partir do grupo consistindo em VEGFRI1, VEGFR2 e VEGFR3 humanos. Em certas modalidades, o receptor de VEGF humano é VEGFR1 humano. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 122. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 294%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 122. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF compreende a sequência de aminoácidos conforme apresentada em SEQ ID NO: 122. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF consiste na sequência de aminoácidos conforme apresentada em SEQ ID NO: 122.

[036] Em certas modalidades de qualquer um dos aspectos precedentes, o anticorpo adicionalmente compreende um agente citotóxico conjugado, agente citostático, toxina, radionuclídeo ou marcador detectável.

[037] Em certas modalidades de qualquer um dos aspectos precedentes, o anticorpo se liga a um epítopo localizado dentro de uma região de CD73 humana, a sequência de aminoácidos da região consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 90 e/ou 91.

[038] Em certas modalidades, o anticorpo se liga a pelo menos um resíduo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 90 e/ou 91.

[039] Em certas modalidades, o anticorpo se liga a um ou mais resíduos de aminoácidos de CD73 humana selecionados a partir do grupo consistindo em Y 158, Y 161, P165 ou D168, numerados de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[040] Em certas modalidades, a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 133 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

141.

[041] Em certas modalidades, a ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 133 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%) em relação à ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[042] Em certas modalidades, a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 134 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

141.

[043] Em certas modalidades, a ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 134 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%) em relação à ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[044] Em certas modalidades, o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido Y158 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[045] Em certas modalidades, a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 59 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

141.

[046] Em certas modalidades, o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido Y161 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[047] Em certas modalidades, a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 60 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

141.

[048] Em certas modalidades, a ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 60 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%) em relação à ligação máxima do anticorpo para uma proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[049] Em certas modalidades, o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido P165 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[050] Em certas modalidades, a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 139 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

141.

[051] Em certas modalidades, o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido D168 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[052] Em certas modalidades, a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 140 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

141.

[053] Em certas modalidades, a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 135 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

141.

[054] Em certas modalidades, a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 136 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

141.

[055] Em certas modalidades, a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141, e em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 não é substancialmente reduzido (por exemplo, não é reduzido em mais de 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[056] Em certas modalidades, a ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%) em relação à ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141, e em que a ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 não é substancialmente reduzido (por exemplo, não é reduzido em mais de 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%) em relação à ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[057] Em certas modalidades, a afinidade de ligação do anticorpo a uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ

ID NO: 142 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141, e em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 138 não é substancialmente reduzido (por exemplo, não é reduzida em mais de 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[058] Em certas modalidades, a ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%) em relação à ligação máxima do anticorpo para uma proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141, e em que a ligação máxima do anticorpo para uma proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 138 não é substancialmente reduzido (por exemplo, não reduzido em mais de 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%) em relação à ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 141.

[059] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que o anticorpo se liga a um epítopo localizado dentro de uma região de CD73 humana, a sequência de aminoácidos da região consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 90 e/ou 91.

[060] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que o anticorpo se liga a pelo menos um resíduo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 90 e/ou 91.

[061] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que o anticorpo se liga a um ou mais resíduos de aminoácidos de CD73 humana selecionados a partir do grupo consistindo em Y158, Y161, P165 ou D168, numerada de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[062] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 133 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida por pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[063] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que a ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 133 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%) em relação à ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[064] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 134 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida por pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[065] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que a ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 134 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida por pelo menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%) em relação à ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[066] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido Y158 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

99.

[067] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 59 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida por pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[068] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido Y161 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

99.

[069] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 60 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida por pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[070] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que a ligação máxima do anticorpo para uma proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 60 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida em pelo menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%) em relação à ligação máxima do anticorpo para uma proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[071] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido P165 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

99.

[072] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 139 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida por pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[073] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido D168 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

99.

[074] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 140 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida por pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[075] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 135 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida por pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[076] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 136 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida por pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[077] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida por pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141, e em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 não é substancialmente reduzida (por exemplo, não reduzida em mais de 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[078] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que a ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida por pelo menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%) em relação à ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141, e em que o máximo a ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 não é substancialmente reduzida (por exemplo, não reduzida em mais de 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%) em relação à ligação máxima do anticorpo a uma proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

141.

[079] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo a uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida por pelo menos 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141, e em que o afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 138 não é substancialmente reduzida (por exemplo, não reduzida em mais de 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, ou 10 vezes) em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[080] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, em que a ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142 é substancialmente reduzida (por exemplo, reduzida por pelo menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%) em relação à ligação máxima do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141, e em que o máximo a ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 138 não é substancialmente reduzida (por exemplo, não reduzida em mais de 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90%) em relação à ligação máxima do anticorpo a uma proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:

141.

[081] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um composto ou molécula que compreende uma porção de ligação a CD73 e uma porção de ligação a TGFB.

[082] Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo no presente documento — descrito e um transportador ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

[083] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo do anticorpo no presente documento descrito. Em certas modalidades, o polinucleotídeo compreende cDNA ou mRNA. Em outro aspecto, a presente invenção fornece um vetor que compreende o polinucleotídeo. Em certas modalidades, o vetor é um vetor plasmídeo ou viral. Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma célula hospedeira recombinante compreendendo o polinucleotídeo ou o vetor. Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma nanopartícula de lipídeo compreendendo o polinucleotídeo ou o vetor. Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método de produção de um anticorpo, o método compreendendo cultivar a célula hospedeira sob condições adequadas de modo que o polinucleotídeo seja expresso e o anticorpo seja produzido. Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo, polinucleotídeo, vetor ou nanopartícula lipídica e um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

[084] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método de tratamento do câncer em um objeto, o método compreendendo administrar ao objeto uma quantidade eficaz do anticorpo, polinucleotídeo, “vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica no presente documento descrita. Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método para inibir a metástase de câncer em um objeto, o método compreendendo administrar ao objeto uma quantidade eficaz do anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica no presente documento descrita. Em certas modalidades, o anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica são administrados por via intravenosa, intratumoral, subcutânea, intradérmica, intramuscular, intravesical, intracraniana, intracavitária ou intraventricular. Em certas modalidades, o anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica são administrados por via intratumoral.

[085] Em certas modalidades, o método adicionalmente compreende a administração de um ou mais agentes terapêuticos adicionais ao objeto. Em certas modalidades, o anticorpo, polinucleotídeo, “vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica e um ou mais agentes terapêuticos adicionais são coadministrados de acordo com o mesmo cronograma (por exemplo, coadministrados nos mesmos intervalos de tempo). Em certas modalidades, o anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica e um ou mais agentes terapêuticos adicionais são coadministrados de acordo com diferentes cronogramas (por exemplo, coadministrados em diferentes intervalos de tempo). Em certas modalidades, o anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula de lipídeo ou composição farmacêutica é coadministrado com um ou mais agentes terapêuticos compreendendo um ativador ou agonista de um receptor de tirosina quinase 3 (FLT3; CD 135) relacionado a fms, um receptor tipo toll (TLR) ou um receptor de genes de estimulador de interferon (STING). Em certas modalidades, o agonista ou ativador de TLR é selecionado a partir do grupo consistindo em um agonista de TLR2, um agonista de TLR3, um agonista de TLR7, um agonista de TLR8 e um agonista de TLR9. Em certas modalidades, o agonista ou ativador do receptor STING é selecionado a partir do grupo consistindo em ADU-S100 (MIW-815), SB-11285, MK-1454, SR-8291, AdVCAO0848, GSK-532, SYN-STING, MSA- |, SR-8291, ácido 5,6-dimetilxantenona- 4-acético (DMXAA), GAMP cíclico (CGAMP) e di-AMP cíclico.

Em certas modalidades, o anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula de lipídeo, ou a composição farmacêutica é coadministrada com um ou mais agentes terapêuticos adicionais compreendendo um inibidor ou antagonista de: proteína tirosina fosfatase, não receptor tipo 11 (PTPN11 ou SHP2), regulador de apoptose de sequência de leucemia de células mieloides 1 (MCL1); proteína quinase quinase quinase quinase 1 ativada por mitogênio (MAP4K1) (também chamada de Progenitor quinase 1 hematopoiético (HPK1)); diacilglicerol quinase alfa (DGKA, DAGK, DAGK1 ou DGK-alfa); 5'-nucleotidase ecto (NT5E ou CD73); fator de crescimento transformador beta 1 (TGFB1 ou TGFB); heme oxigenase 1 (HMOX1, HO-1 ou HO1); fator de crescimento endotelial vascular A (VEGFA ou VEGF); tirosina quinase 2 de receptor erb-b2 (ERBB2 HER2, HER2/neu ou CD340); receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR, ERBB, ERBB1 ou HER1); tirosina quinase do receptor ALK (ALK, CD246); poli (ADP-ribose) polimerase 1 (PARP1 ou PARP); quinase 4 dependente de ciclina (CDK4); quinase 6 dependente de ciclina (CDK6); receptor 8 de quimiocina com motivo C- C (CCR8, CDwI98); molécula CD274 (CD274, PDL1 ou PD-L1); morte celular programada 1 (PDCD1, PD1 ou PD-1); e/ou proteína 4 associada a linfócitos T citotóxicos (CTLA4, CTLA-4, CD152). Em certas modalidades, o inibidor compreende uma molécula de ligação ao antígeno, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em certas modalidades, o inibidor compreende uma pequena molécula orgânica. Em certas modalidades, o inibidor de MCL1 é selecionado a partir do grupo consistindo em AMG-176, AMG-397, S- 64315, AZD-5991, 483-LM, A 1210477, UMI-77 e JKY-5-037. Em certas modalidades, o inibidor de PTPN11 ou SHP2 é selecionado a partir do grupo consistindo em TNO155 (SHP-099), RMC-4550, JAB-3068 e RMC-4630.

[086] Em certas modalidades, um ou mais agentes terapêuticos adicionais são um agente quimioterapêutico, antineoplásico, radioterapêutico ou de ponto de controle. Em certas modalidades, um ou mais agentes antineoplásicos ou quimioterápicos são selecionados a partir do grupo consistindo em um análogo de nucleosídeo (por exemplo, B5-fluorouracil, gencitabina, citarabina), um taxano (por exemplo, paclitaxel, nab-paclitaxel, docetaxel, cabazitaxel), um complexo de coordenação de platina (cisplatina, carboplatina, oxaliplatina, nedaplatina, tetranitrato de triplatina, fenantriplatina, picoplatina, satraplatina, dicicloplatina,y eptaplatina, lobaplatina, miriplatina) um inibidor de di-hidrofolato redutase (DHFR), metotrexedutase (DHFR), (por exemplo, metrotexato, trimetrexato,

pemetrexed), um inibidor de topoisomerase (por exemplo, doxorrubicina, daunorrubicina, dactinomicina, eniposídeo, epirrubicina, etoposídeo, idarrubicina, irinotecano, mitoxantrona, pixantrona, sobuzoxane, topotecan, MM-398 (irinotecano lipossomal), vosaroxina e GPX-150, aldoxorrubicina, AR-67, mavelertinibe, AST-2818, avitinibe (ACEA-0010), irofulven (MGI-114)), um agente alquilante (por exemplo, uma mostarda de nitrogênio (por exemplo, ciclofosfamida, clormetina, uramustina ou mostarda de uracila, melfalano, clorambucil, ifosfamida, bendamustina, temozolomida, carmustina), uma nitrosoureia (por exemplo, carmustina, lomustina, estreptozocina), um alquil sulfonato (por exemplo, busulfanato) e misturas dos mesmos.

[087] Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional é um agente de direcionamento de ponto de controle. Em certas modalidades, o agente de direcionamento de ponto de controle é selecionado a partir do grupo consistindo em um anticorpo antagonista anti-PD-1, um anticorpo antagonista anti-PD-L1i, um anticorpo antagonista anti-PD-L2, um anticorpo antagonista anti-CTLA-4, um anticorpo antagonista anti-TIM-3, um anticorpo antagonista anti-LAG-3, um anticorpo antagonista anti-CEACAM1, um anticorpo agonista anti- GITR, um anticorpo antagonista anti-TIGIT, um anticorpo antagonista anti-VISTA, um agonista anti-CD137, e um anticorpo agonista anti- OX40. Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional é um anticorpo anti-PD-1, opcionalmente em que o anticorpo anti-PD-1 é pembrolizumabe ou nivolumabe. Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional é um inibidor de indoleamina-2, 3-dioxigenase (IDO). Em certas modalidades, o inibidor é selecionado a partir do grupo consistindo em epacadostat, FO01287, indoximod e NLG919. Em certas modalidades, o inibidor é epacadostat. Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional é uma vacina. Em certas modalidades, a vacina compreende um complexo de peptídeo proteína de choque térmico (HSPPC) que compreende uma proteína de choque térmico complexada com um peptídeo antigênico. Em certas modalidades, a proteína de choque térmico é hsc70 e é complexada com um peptídeo antigênico associado a tumor. Em certas modalidades, a proteína de choque térmico é gp96 e é complexada com um peptídeo antigênico associado a tumor, em que o HSPPC é derivado de um tumor obtido de um objeto. Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional é etoposídeo ou doxorrubicina.

[088] Em outro aspecto, o anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica são coadministrados com um regime FOLFOX, um regime FOLFOXIRI ou um regime FOLFIRINOX. Em outro aspecto, o anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica são coadministrados com uma imunoterapia, uma terapia imunoestimuladora, uma terapia celular ou uma terapia genética.

[089] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica no presente documento descritos para uso no tratamento de câncer.

[090] Em outro aspecto, a presente invenção fornece o uso de um anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica no presente documento descritos para a preparação de um medicamento para o tratamento do câncer.

[091] Em certas modalidades de qualquer um dos aspectos do método de tratamento do câncer em um objeto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica para uso no tratamento de câncer, ou uso de um anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica isolada no presente documento descritos para a preparação de um medicamento para o tratamento do câncer, o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um tumor sólido, um câncer hematológico e uma lesão metastática.

Em certas modalidades, o câncer é um tumor sólido.

Em certas modalidades, o tumor sólido é selecionado a partir do grupo consistindo em um sarcoma, um sarcoma fibroblástico, um carcinoma e um adenocarcinoma.

Em certas modalidades, o câncer é um câncer hematológico.

Em certas modalidades, o câncer hematológico é selecionado a partir do grupo consistindo em uma leucemia, um linfoma e um mieloma.

Em certas modalidades, o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um câncer de pulmão, um melanoma, um câncer renal, um câncer de fígado, um mieloma, um câncer de próstata, um câncer de mama, um câncer de ovário, um câncer colorretal, um câncer pancreático, um câncer de cabeça e pescoço, um câncer anal, um câncer gastroesofágico, um mesotelioma, um câncer nasofaríngeo, um câncer de tireoide, um câncer cervical, um câncer epitelial, um câncer peritoneal, uma doença linfoproliferativa, uma leucemia linfoblástica aguda (ALL), uma leucemia mieloide aguda (AML), uma leucemia linfocítica crônica (CLL), uma leucemia mieloide crônica (CML), uma leucemia mielomonocítica crônica (CMML), uma leucemia de células pilosas, um linfoma de células B, um linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), um linfoma difuso de grandes células B ativado (ABC), um linfoma difuso de células B do centro germinativo (GCB), um linfoma de células do manto, um linfoma de Hodgkin, um linfoma não-Hodgkin, um linfoma não-Hodgkin recidivante, um linfoma não-Hodgkin refratário, um linfoma não-Hodgkin folicular recorrente, um linfoma de Burkitt, um linfoma linfocítico pequeno, um linfoma folicular, um linfoma linfoplasmacítico e um linfoma de zona marginal extranodal.

Em certas modalidades, o câncer é um tumor sólido em ou decorrente de um tecido ou órgão selecionado a partir do grupo consistindo em: osso (por exemplo, adamantinoma, cistos ósseos aneurismáticos,

angiossarcoma, condroblastoma, condroma, fibroma condromixoide, condrossarcoma, cordoma, condrossarcoma desdiferenciado, encondroma, hemangioendotelioma epitelioide, displasia fibrosa do osso, tumor de células gigantes do osso, hemangiomas e lesões relacionadas, — osteoblastoma, — osteocondroma, osteossarcoma, osteoma osteoide, osteoma, condroma periosteal, tumor desmoide, sarcoma de Ewing); lábios e cavidade oral (por exemplo, ameloblastoma odontogênico, leucoplasia oral, carcinoma de células escamosas oral, melanoma primário da mucosa oral); glândulas salivares (por exemplo, adenoma de glândula salivar pleomórfica, carcinoma adenoide cístico de glândula salivar, carcinoma mucoepidermoide de glândula salivar, tumores de Warthin de glândula salivar); esôfago (por exemplo, esôfago de Barrett, displasia e adenocarcinoma); trato gastrointestinal, incluindo estômago (por exemplo, adenocarcinoma gástrico, linfoma gástrico primário, tumores estromais gastrointestinais (GISTs), depósitos metastáticos, carcinoides gástricos, sarcomas gástricos, carcinoma neuroendócrino, carcinoma gástrico de células escamosas primárias, adenoacantomas gástricos), intestinos e músculo liso (por exemplo, leiomiomatose intravenosa), cólon (por exemplo, adenocarcinoma colorretal), reto, ânus; pâncreas (por exemplo, neoplasias serosas, incluindo — cistadenoma “seroso microcístico ou macrocístico, cistadenoma seroso sólido, neoplasias serosas císticas associadas a Von Hippel-Landau (VHL), cistadenocarcinoma seroso, neoplasias císticas mucinosas (MCN), neoplasias mucaductais intraductais neoplasias papilares oncocíticas (IOPN), neoplasias tubulares intraductais, neoplasias acinares císticas, incluindo cistadenoma de células —acinares, cistadenocarcinoma de células acinares, adenocarcinoma pancreático, adenocarcinoma ductal pancreático invasivo, incluindo adenocarcinoma tubular, carcinoma adenoquamoso, carcinoide — coloide, carcinoma medular, carcinoma hepatoide,

carcinoma de células em anel de sinete, carcinoma indiferenciado, carcinoma indiferenciado com células gigantes similares a osteoclastos, carcinoma de células acinares, neoplasias neuroendócrinas, microadenoma neuroendócrino, tumores neuroendócrinos (NET), carcinoma neuroendócrino (NEC), incluindo NEC de pequenas células ou grandes células, insulinoma, gastrinoma, glucagonoma, NET produtor de serotonina, somatostatinoma, VlPoma, neoplasias pseudopapilares sólidas (SPN), pancreatoblastoma); vesícula biliar (por exemplo, carcinoma da vesícula biliar e dutos biliares extra-hepáticos, colangiocarcinoma intra-hepático); neuroendócrino (por exemplo, carcinoma cortical adrenal, tumores carcinoides, feocromocitoma, adenomas hipofisários); tireoide (por exemplo, carcinoma anaplásico (indiferenciado), carcinoma medular, tumores oncocíticos, carcinoma papilar, adenocarcinoma); fígado (por exemplo, adenoma, combinação hepatocelular e colangiocarcinoma, carcinoma fibrolamelar, hepatoblastoma, carcinoma hepatocelular, mesenquimal, tumor epitelial estromal aninhado, carcinoma indiferenciado, carcinoma hepatocelular, colangiocarcinoma intra-hepático, cistadenocarcinoma do duto biliar, hemangioendotelioma epitelioide, angiossarcoma, sarcoma embrionário, rabdomiossarcoma, tumor fibroso solitário, teratoma, tumor Yolk sac, carcinosarcoma, tumor rabinoide); rim (por exemplo, carcinoma de células renais rearranjado por ALK, carcinoma de células renais cromófobo, carcinoma de células renais de células claras, sarcoma de células claras, adenoma metanéfrico, adenofibroma metanéfrico, carcinoma mucinoso tubular e de células fusiformes, nedea, nefroblastoma (tumor de Wilms), adenoma papilar, carcinoma papilar de células renais, oncocitoma renal, carcinoma de células renais, carcinoma de células renais com deficiência de succinato desidrogenase, carcinoma do duto coletor); mama (por exemplo, carcinoma dutal invasivo, incluindo, sem limitação, carcinoma de células acínicas, carcinoma adenoide cístico, carcinoma apócrino, carcinoma cribriforme, células claras/ricas em glicogênio, carcinoma inflamatório, carcinoma rico em lipídios, carcinoma medular, carcinoma metaplásico, carcinoma micropapilar, carcinoma mucinoso, carcinoma neuroendócrino, carcinoma sebácea, carcinoma sebocítico, carcinoma sebocítico, carcinoma sebáceo, carcinoma da mama secretor, carcinoma tubular, carcinoma lobular, incluindo, sem limitação, carcinoma pleomórfico, carcinoma de células em anel de sinete, peritônio (por exemplo, mesotelioma, câncer peritoneal primário)); tecidos de órgãos sexuais femininos, incluindo ovário (por exemplo, coriocarcinoma, tumores epiteliais, tumores de células germinativas, tumores estromais do cordão sexual), trompas de Falópio (por exemplo, adenocarcinoma seroso, adenocarcinoma mucinoso, adenocarcinoma endometrioide, adenocarcinoma de células claras, carcinoma de células transicionais, — carcinoma de células escamosas, carcinoma indiferenciado, tumores mullerianos, adenossarcona, leiomiossarcoma teratoma, tumores de células germinativa, coriocarcinoma, tumores trofoblásticos); útero (por exemplo, carcinoma do cérvix, pólipos endometriais, hiperplasia endometrial, carcinoma intraepitelial (EIC), carcinoma endometrial, (por exemplo, carcinoma endometrioide, carcinoma ceroso, carcinoma de células claras carcinoma mucinoso, carcinoma de células escamosas, carcinoma transicional, carcinoma de pequenas células, carcinoma indiferenciado, neoplasia mesenquimal), leiomioma “(por exemplo, nódulo estromal do endométrio, leiomiossarcoma, sarcoma estromal do endométrio (ESS) tumores mesenquimais), tumores mesenquimais e epiteliais misturados (por exemplo, adenofibroma, carcinofibroma, adenossarcoma (sacorma mesodérmico misturado maligno — MMMT)), tumores estromais do endométrio, tumores misturados mullerianos malignos do endométrio, tumores trofoblásticos gestacionais (mola hidatiforme parcial, mola hidatiforme completa, mola hidatiforme invasiva, tumor do sítio placentário)), vulva, vagina; tecidos de órgãos sexuais masculinos, incluindo próstata, testículos (por exemplo, tumores de células germinativas, seminoma espermatocítico), pênis; bexiga (por exemplo, carcinoma de células escamosas, carcinoma urotelial, carcinoma urotelial da bexiga); cérebro, (por exemplo, gliomas (por exemplo, astrocitomas, incluindo não infiltrantes, de baixo grau, anaplásicos, glioblastomas; oligodendrogliomas, ependimomas), meningiomas, gangliogliomas, schwannomas (neurilemomas), craniofaringiomas, cordomas, linfomas, não-Hodgkin, linfomas pituitários; olho (por exemplo, retinoma, retinoblastoma, melanoma ocular, melanoma uveal posterior, hamartoma da íris); cabeça e pescoço (por exemplo, carcinoma nasofaríngeo, tumor do saco endolinfático (ELST), carcinoma epidermoide, cânceres laringeais incluindo carcinoma de células escamosas (SCC) (por exemplo, carcinoma glótico, carcinoma supraglótico, carcinoma subglótico, carcinoma transglótico), carcinoma in situ, verrucoso, células fusiformes e SCC basaloide, carcinoma indiferenciado, adenocarcinoma laríngeo, carcinoma adenoide cístico, carcinoma neuroendócrino, sarcoma de laringe), paraganglioma de cabeça e pescoço (por exemplo, corpo carotídeo, jugulotimpânico, vagal); timo (por exemplo, timoma); coração (por exemplo, mixoma cardíaco); pulmão (por exemplo, carcinoma de células pequenas (SCLC), carcinoma de células não pequenas do pulmão (NSCLC), incluindo carcinoma de células escamosas (SCC), adenocarcinoma e carcinoma de células grandes, carcinoides (típico ou atípico), carcinossarcomas, blastomas pulmonares, carcinomas de células gigantes, carcinomas de células fusiformes, blastoma pleuropulmonar); linfa (por exemplo, linfomas, incluindo linfoma de Hodgkin, linfoma não- Hodgkin, doenças linfoproliferativas associadas ao vírus Epstein-Barr (EBV), incluindo linfomas de células B e linfomas de células T (por exemplo, linfoma de Burkitt, linfoma de grandes células B, linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), linfoma de células do manto, linfoma de células B indolente, linfoma de células B de baixo grau, linfoma difuso de células grandes associado à fibrina; linfoma de efusão primário; linfoma plasmblástico; linfoma extranodal de células NK/T, tipo nasal; linfoma de células T periférico, linfoma cutâneo de células T, linfoma de células T angioimunoblástico; linfoma de células T foliculares; linfoma de células T sistêmico), linfangioleiomiomatose); sistema nervoso central (SNC) (por exemplo, gliomas incluindo tumores astrocíticos (por exemplo, astrocitoma pilocítico, astrocitoma pilomixoide, astrocitoma subependimário de células gigantes, xantoastrocitoma pleomórfico, astrocitoma difuso, astrocitoma fibrilar, astrocitoma gemistocítico, astrocitoma protoplástico, astrocitoma anaplásico, glioblastoma (por exemplo, glioblastoma de células gigantes, gliosarcoma, glioblastoma multiforme) e gliomastose cerebral), tumores oligodendrogliais (por exemplo, oligodendroglioma, oligodendroglioma anaplásico), tumores oligoastrocítico (por exemplo, oligoastrocitoma, oligoastrocitoma anaplásico), tumores ependimais (subependimoma, ependimoma mixopapilar, ependimomas (por exemplo, celular, papilar, células claras, tanicíticos(, ependimoma anaplásico), glioma do nervo óptico, e não gliomas (tumores do plexo coroide, tumores neuronais e gliais neoronais misturados, tumores da região pineal, tumores embrionários, meduloblastoma, tumores meningeais, linfomas do SNC primário, tumores de células germinativas, adenomas pituitários, tumores do nervo paraespinhal e craniano, tumores da região estelar), neurofibroma, meningioma, tumores da bainha nervosa periférica, tumores — neuroblásticos — periféricos — (incluindo, sem limitação, neuroblastoma, ganglioneuroblastoma, ganglioneuroma), trissomia 19 ependimoma); tecidos neuroendócrinos (por exemplo, sistema paraganglionar incluindo medula adrenal (feocromocitomas) e paraganglia extra-adrenal (paragangliomas (extra-adrenal)); pele (por exemplo, hidradenoma de células claras, histiocitomas fibrosos cutâneos benignos, cilindroma, hidradenoma, melanoma, incluindo melanoma cutâneo, melanoma da mucosa), pilomatricoma, tumores de Spitz); e tecidos moles (por exemplo, angiomixoma agressivo, rabdomiossarcoma alveolar, sarcoma alveolar de partes moles, angiofibroma, histiocitoma fibroso angiomatoide, sarcoma sinovial, sarcoma sinovial bifásico, sarcoma "de células claras, dermatofibrosarcoma protuberante, fibromatose do tipo desmoide, tumor de pequenas células redondas, tumor desmoplásico de pequenas células redondas, elastofibroma, rabdomiossarcoma embrionário, tumor de Ewing/tumores neurectodérmicos primitivos (PNET), condrossarcoma mixoide extraesquelético, osteossarcoma extraesquelético, sarcoma paraespinhal, tumor miofibroblástico inflamatório, lipoblastoma, lipoma, lipossarcoma/ tumores lipomatosos malignos, lipossarcoma lipossarcoma mixoide, sarcoma fibromixoide, linfangioleiomioma, mioepitelioma maligno, melanoma maligno de partes moles, carcinoma mioepitelial, mioepitelioma, sarcoma fibroblástico mixoinflamatório, sarcoma indiferenciado, pericitoma, rabdomiossarcoma, sarcoma de tecidos moles não rabdomiossarcoma (NRSTS), leiomiossarcoma de tecidos moles, sarcoma indiferenciado, lipoposarcoma bem diferenciado.

Em certas modalidades, o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um melanoma, um câncer gástrico, um câncer de mama triplo-negativo (TNBC), um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), um adenocarcinoma retal, um câncer colorretal, um carcinoma de células renais, um câncer de ovário, um câncer de próstata, um carcinoma de células escamosas orais (SCC), um carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), um câncer de bexiga urotelial, um glioblastoma (GBM), um meningioma, câncer adrenal e um câncer endometrial.

[092] Em outro aspecto, a presente invenção fornece o uso de um anticorpo isolado, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica como descritos neste documento em qualquer um dos métodos precedentes para o tratamento de câncer.

[093] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo isolado, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica, conforme descritos neste documento, para uso em qualquer um dos métodos precedentes para o tratamento de câncer.

[094] Modalidades adicionais ou alternativas da invenção descrita neste documento são estabelecidas abaixo.

[095] Modalidade 1. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, o anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo regiões determinantes de complementaridade (CDRs) CDRH1, CDRH2 e CDRH3, e uma região variável de cadeia leve compreendendo regiões determinantes de complementaridade CDRL1, CDRL?2, e CDRL3, em que: (a) CDRH1 compreende a sequência de aminoácidos de X1X2WX3X4 (SEQ ID NO: 13), em que X1léSouN, X2éSouY; X3élouM;e X4é NouH; (b) CDRH2 compreende a sequência de aminoácidos de X1IYPRX2X3DTNYX4X5KFKX6 (SEQ ID NO: 14), em que X1léRouT; X2éN,AouS; X3éGousS; X4é NAousS; X5éGouQ;e XeéDouG;

(c) CDRH3 compreende a sequência de aminoácidos de LLDYSMDY (SEQ ID NO: 7); (d) CDRL1 compreende a sequência de aminoácidos de RASQDISX1X2LN (SEQ ID NO: 16), em que XléNoule X2éYousS; (e) CDRL2 compreende a sequência de aminoácidos de YTSRLHS (SEQ ID NO: 10); e/ou (f) CDRL3 compreende a sequência de aminoácidos de QQGNTLPXT (SEQ ID NO: 17), em que: Xé L ou W.

[096] Modalidade 2. O anticorpo da modalidade 1, em que CDRH1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 1 e 2.

[097] Modalidade 3. O anticorpo da modalidade 1 ou 2, em que CDRH2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 3-6.

[098] Modalidade 4. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que CDRL1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 8 e 9.

[099] Modalidade 5. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que CDRL3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 11 e 12.

[100] Modalidade 6. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que: (a) CDRH1 compreende a sequência de aminoácidos de SSWIN (SEQ ID NO: 2); (b) CDRH2 compreende a sequência de aminoácidos de RIYPRX1IGDTNYX2GKFKD (SEQ ID NO: 15), em que

X1éN AouS;e X2éN,AouS; (c) CDRL1 compreende a sequência de aminoácidos de RASQDISX1X2LN (SEQ ID NO: 16), em que XléNoule X2éYousS; e/ou (d) CDRL3 compreende a sequência de aminoácidos de QQGNTLPLT (SEQ ID NO: 12).

[101] Modalidade 7. O anticorpo da modalidade 6, em que CDRH2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 4-6.

[102] Modalidade 8. O anticorpo da modalidade 6 ou 7, em que CDRL1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 8 e 9.

[103] Modalidade 9. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que CDRH1, CDRH2 e CDRH3 compreendem as sequências de aminoácidos CDRH1, CDRH2 e CDRHB3, respectivamente, apresentadas em SEQ ID NOs: 2,4 e 7;2,5 e7;1,3e7;0uU2,6e7.

[104] Modalidade 10. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que CDRL1, CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos CDRL1, CDRL2 e CDRL3, respectivamente, apresentadas em SEQ ID NOs: 8, 10 € 12;9, e 12; ou 8, 10e 11

[105] Modalidade 11. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL?2 e CDRL3, respectivamente, apresentadas em SEQ ID NOs: 2, 4,7, 8, 106 12;2,5,7,8, 10e 12;1, 3,7,8, 10e 11;2,4,7,8,10e 11;2,4,7,9,10e12;2,6,7,8,10 e 12;

2,5,7,9, 10 e 12; ou 2,6,7,9, 10 e 12.

[106] Modalidade 12. O anticorpo da modalidade 11, em que CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3, respectivamente, apresentadas em SEQ ID NOs: 2, 4,7,8, e 12; ou 2, 5,7,8, 10 e 12.

[107] Modalidade 13. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, o anticorpo compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo CDRs CDRH1, CDRH2 e CDRH3, e uma região variável de cadeia leve compreendendo regiões determinantes de complementaridade CDRL1, CDRL2 e CDRL3, em que CDRH3 compreende a sequência de aminoácidos de LLDYSMDY (SEQ ID NO: 7); elou CDRL3 compreende a sequência de aminoácidos de QQGNTLPLT (SEQ ID NO: 12) ou QQGNTLPWT (SEQ ID NO: 11).

[108] Modalidade 14. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 31.

[109] Modalidade 15. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 19-21 e 23-30.

[110] Modalidade 16. O anticorpo da modalidade 15, em que a região variável de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 19-21 e 23-30.

[111] Modalidade 17. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 23-30.

[112] Modalidade 18. O anticorpo da modalidade 17, em que a região variável de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 23-30.

[113] Modalidade 19. O anticorpo da modalidade 18, em que a região variável de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24 ou 27.

[114] Modalidade 20. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada de uma sequência da linhagem germinativa humana como apresentado em SEQ ID NO: 22.

[115] Modalidade 21. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 41 ou 42.

[116] Modalidade 22. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 33-35 e 37-

40.

[117] Modalidade 23. O anticorpo da modalidade 22, em que a região variável de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 33-35 e 37-40.

[118] Modalidade 24. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 37-40.

[119] Modalidade 25. O anticorpo da modalidade 24, em que a região variável de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 37-40.

[120] Modalidade 26. O anticorpo da modalidade 25, em que a região variável de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 37.

[121] Modalidade 27. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada de uma sequência da linhagem germinativa humana como apresentado em SEQ ID NO: 36.

[122] Modalidade 28. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve, respectivamente, compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 24 e 37; 27 e 37; 196 33;20 e 34;21e035;23e03/7;23e038;24e038;25037/7;26e 37; 28 e 37; 25 e 38; 26 e 38; 27 e 38; 28 e 38; 29 e 37; 30 e 37; 23 e 39; ou 23 e 40.

[123] Modalidade 29. O anticorpo da modalidade 28, em que a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve,

respetivamente, compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 24 e 37; ou 27 e 37.

[124] Modalidade 30. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo compreende uma região constante de cadeia pesada selecionada a partir do grupo consistindo em IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2 humanas.

[125] Modalidade 31. O anticorpo da modalidade 30, em que a região constante de cadeia pesada é IgG1.

[126] Modalidade 32. O anticorpo da modalidade 31, em que a sequência de aminoácidos de IgG1 compreende uma mutação N297A, numerada de acordo com o sistema de numeração EU.

[127] Modalidade 33. O anticorpo da modalidade 32, em que a região constante de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50, 49, 46, 45, 55 ou 56.

[128] Modalidade 34. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 63-88.

[129] Modalidade 35. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo compreende uma região constante de cadeia leve selecionada a partir do grupo consistindo em IgK humana e IgA.

[130] Modalidade 36. O anticorpo da modalidade 35, em que a região constante de cadeia leve é Igk.

[131] Modalidade 37. O anticorpo da modalidade 36, em que a região constante de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 93 ou 89.

[132] Modalidade 38. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NO: 92 e 94-98.

[133] Modalidade 39. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve compreendendo as sequências de aminoácidos estabelecidas em qualquer fileira da Tabela 4, preferivelmente a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 79 e 97; 85 e 97; 77 e 9/7; 80 e 97; 86 e 97; 64 e 92; 70 e 96; ou 78 e 97, respectivamente.

[134] Modalidade 40. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 15-39, em que o X em qualquer uma das SEQ ID NOs: 19, e 65-68 é glutamina.

[135] Modalidade 41. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 15-39, em que o X em qualquer uma das SEQ ID NOs: 21, 23-30, 63, 64, 69-88 é glutamato.

[136] Modalidade 42. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 15-39, em que o X em qualquer uma das SEQ ID NOs: 19- 21, 23-30 e 63-88 é piroglutamato.

[137] Modalidade 43. Um anticorpo que se liga ao mesmo epítopo de CD73 humana que o anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes.

[138] Modalidade 44. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo é um anticorpo humanizado.

[139] Modalidade 45. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo é antagonista de CD73 humana.

[140] Modalidade 46. O anticorpo da modalidade 45, em que o anticorpo desativa, reduz ou inibe uma atividade de CD73 humana.

[141] Modalidade 47. O anticorpo da modalidade 45 ou 46, em que o anticorpo atenua a capacidade de CD73 humana para converter monofosfato de adenosina em adenosina.

[142] Modalidade 48. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo é internalizado após ligação a células que expressam CD73 humana.

[143] Modalidade 49. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 1-48, adicionalmente compreendendo uma porção de ligação a TGFRB.

[144] Modalidade 50. O anticorpo da modalidade 49, em que a porção de ligação a TGFB está ligada à região variável de cadeia pesada.

[145] Modalidade 51. O anticorpo da modalidade 50, em que a porção de ligação a TGFB está ligada à região variável de cadeia pesada através de um ligante peptídico.

[146] Modalidade 52. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 30-48, adicionalmente compreendendo uma porção de ligação a TGFB1igada à região constante de cadeia pesada.

[147] Modalidade 53. O anticorpo da modalidade 52, em que a porção de ligação a TGFB está ligada ao resíduo C-terminal da região constante de cadeia pesada.

[148] Modalidade 54. O anticorpo da modalidade 52 ou 53, em que o resíduo N-terminal da porção de ligação a TGFB está ligado ao resíduo C-terminal da região constante de cadeia pesada através de um ligante peptídico.

[149] Modalidade 55. O anticorpo da modalidade 51 ou 54, em que o ligante peptídico compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 103-108.

[150] Modalidade 56. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 49-55, em que a porção de ligação a TGFB se liga a TGFB humano.

[151] Modalidade 57. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 49-56, em que a porção de ligação a TGFB compreende um domínio extracelular de um receptor de TGFB humano.

[152] Modalidade 58. O anticorpo da modalidade 57, em que o receptor de TGFB humano é selecionado a partir do grupo consistindo em TGFBR1, TGFBR2 e TGFBR3 humanos.

[153] Modalidade 59. O anticorpo da modalidade 57 ou 58, em que o receptor de TGFB humano é TGFBR2 humano.

[154] Modalidade 60. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 49-59, em que a porção de ligação a TGFB compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma sequência selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112.

[155] Modalidade 61. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 49-60, em que a porção de ligação a TGFB consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma sequência selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112.

[156] Modalidade 62. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 49-61, em que a porção de ligação a TGFB compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112, preferivelmente SEQ ID NO: 111.

[157] Modalidade 63. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 49-62, em que a porção de ligação a TGFB consiste em uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112, preferivelmente SEQ ID NO: 111.

[158] Modalidade 64. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 49-63, o anticorpo compreendendo um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 113-121, preferivelmente SEQ ID NO: 114 ou 115.

[159] Modalidade 65. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 49-64, em que o anticorpo compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 113-121 e um polipeptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 92 ou 97.

[160] Modalidade 66. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 49-65, em que o anticorpo compreende dois polipeptídeos, cada um compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 113-121 e dois polipeptídeos, cada um compreendendo o aminoácido sequência de SEQ ID NO: 92 ou 97.

[161] Modalidade 67. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 49-66, em que o anticorpo compreende dois polipeptídeos, cada um compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 115 e dois polipeptídeos, cada um compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97.

[162] Modalidade 68. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, o anticorpo compreendendo uma porção de ligação a TGFB.

[163] Modalidade 69. O anticorpo da modalidade 68, em que o anticorpo é antagonista a CD73 humana.

[164] Modalidade 70. O anticorpo da modalidade 69, em que o anticorpo desativa, reduz ou inibe uma atividade de CD73 humana.

[165] Modalidade 71. O anticorpo da modalidade 69 ou 70, em que o anticorpo atenua a capacidade de CD73 humana para converter monofosfato de adenosina em adenosina.

[166] Modalidade 72. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 68-71, em que o anticorpo, quando ligado a TGFB, é antagonista a CD73 humana.

[167] Modalidade 73. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 68-72, em que a porção de ligação a TGFB se liga a TGFB humano.

[168] Modalidade 74. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 68-73, em que a porção de ligação a TGFB compreende um domínio extracelular de um receptor de TGFB humano.

[169] Modalidade 75. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 68-74, em que o receptor de TGFB humano é selecionado a partir do grupo consistindo em TGFBR1, TGFBR2 e TGFBR3 humanos.

[170] Modalidade 76. O anticorpo da modalidade 74 ou 75, em que o receptor de TGFB humano é TGFBR2 humano.

[171] Modalidade 77. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 68-76, em que a porção de ligação a TGFB compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma sequência selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112.

[172] Modalidade 78. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 68-77, em que a porção de ligação a TGFB consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma sequência selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112.

[173] Modalidade 79. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 68-78, em que a porção de ligação a TGFB compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112, preferivelmente SEQ ID NO: 111.

[174] Modalidade 80. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 68-79, em que a porção de ligação a TGFB consiste em uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112, preferivelmente SEQ ID NO: 111.

[175] Modalidade 81. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 1-48, adicionalmente compreendendo uma porção de ligação a VEGF.

[176] Modalidade 82. O anticorpo da modalidade 81, em que a porção de ligação a VEGF está ligada à região variável de cadeia pesada.

[177] Modalidade 83. O anticorpo da modalidade 82, em que a porção de ligação a VEGF está ligada à região variável de cadeia pesada por meio de um ligante peptídico.

[178] [00177] Modalidade 84. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 30-48, adicionalmente compreendendo uma porção de ligação a VEGF ligada à região constante de cadeia pesada.

[179] [00178] Modalidade 85. O anticorpo da modalidade 84, em que a porção de ligação a VEGF está ligada ao resíduo C-terminal da região constante de cadeia pesada.

[180] [00179] Modalidade 86. O anticorpo da modalidade 84 ou 85, em que o resíduo N-terminal da porção de ligação a VEGF está ligado ao resíduo C-terminal da região constante de cadeia pesada por meio de um ligante peptídico.

[181] Modalidade 87. O anticorpo da modalidade 83 ou 86, em que o ligante peptídico compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 103-108.

[182] Modalidade 88. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 81-87, em que a porção de ligação a VEGF se liga ao VEGF humano.

[183] Modalidade 89. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 81-88, em que a porção de ligação a VEGF compreende um domínio extracelular de um receptor de VEGF humano.

[184] Modalidade 90. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 81-89, em que o receptor de VEGF humano é selecionado a partir do grupo consistindo em VEGFR1, VEGFR2 e VEGFR3 humanos.

[185] Modalidade 91. O anticorpo da modalidade 89 ou 90, em que o receptor de VEGF humano é VEGFR1 humano.

[186] Modalidade 92. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 81-91, em que a porção de ligação a VEGF compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 294%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 122.

[187] Modalidade 93. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 81-92, em que a porção de ligação a VEGF consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 294%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 122.

[188] Modalidade 94. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 81-93, em que a porção de ligação a VEGF compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 122.

[189] Modalidade 95. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 81-94, em que a porção de ligação a VEGF consiste na sequência apresentada em SEQ ID NO: 122.

[190] Modalidade 96. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 81-92, o anticorpo compreendendo um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 123-127.

[191] Modalidade 97. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 81-96, em que o anticorpo compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 123-127 e um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 92, 128 e 97.

[192] Modalidade 98. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 81-97, em que o anticorpo compreende dois polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 123-127 e dois polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 92, 128 e 97.

[193] Modalidade 99. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, o anticorpo compreendendo uma porção de ligação a VEGF.

[194] Modalidade 100. O anticorpo da modalidade 99, em que o anticorpo é antagonista a CD73 humana.

[195] Modalidade 101. O anticorpo da modalidade 100, em que o anticorpo desativa, reduz ou inibe uma atividade de CD73 humana.

[196] Modalidade 102. O anticorpo da modalidade 100, em que o anticorpo atenua a capacidade de CD73 humana de converter monofosfato de adenosina em adenosina.

[197] Modalidade 103. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 99-102, em que o anticorpo, quando ligado a VEGF, é antagônico a CD73 humana.

[198] Modalidade 104. O anticorpo da modalidade qualquer uma das modalidades 99-103, em que a porção de ligação a VEGF se liga ao VEGF humano.

[199] Modalidade 105. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 99-104, em que a porção de ligação a VEGF compreende um domínio extracelular de um receptor de VEGF humano.

[200] Modalidade 106. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 99-105, em que o receptor de VEGF humano é selecionado a partir do grupo consistindo em VEGFR1, VEGFR?2 e VEGFR3 humanos.

[201] Modalidade 107. O anticorpo da modalidade 105 ou 106, em que o receptor de VEGF humano é VEGFR1 humano.

[202] Modalidade 108. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 99-107, em que a porção de ligação a VEGF compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 294%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 122.

[203] Modalidade 109. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 99-108, em que a porção de ligação a VEGF consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 294%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 122.

[204] Modalidade 110. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 99-109, em que a porção de ligação a VEGF compreende a sequência de aminoácidos como apresentado em SEQ ID NO: 122.

[205] Modalidade 111. O anticorpo de qualquer uma das modalidades 99-110, em que a porção de ligação a VEGF consiste na sequência de aminoácidos como apresentado em SEQ ID NO: 122.

[206] Modalidade 112. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, adicionalmente compreendendo um agente citotóxico conjugado, agente citostático, toxina, radionuclídeo ou marcador detectável.

[207] Modalidade 113. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo se liga a um epítopo localizado dentro de uma região de CD73 humana, a sequência de aminoácidos da região consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 90 e/ou 91.

[208] Modalidade 114. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo se liga a pelo menos um resíduo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 90 e/ou 91.

[209] Modalidade 115. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo se liga a um ou mais resíduos de aminoácidos de CD73 humana selecionados a partir do grupo consistindo em Y 158, Y 161, P165 ou D168, numerados de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[210] Modalidade 116. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 133 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para um proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[211] Modalidade 117. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 134 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para um proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[212] Modalidade 118. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido Y158 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[213] Modalidade 119. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 59 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para um proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[214] Modalidade 120. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido Y161 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[215] Modalidade 121. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 60 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para um proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[216] Modalidade 122. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido P165 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[217] Modalidade 123. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 139 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para um proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[218] Modalidade 124. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido D168 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[219] Modalidade 125. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 140 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para um proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[220] Modalidade 126. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de

SEQ ID NO: 135 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para um proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[221] Modalidade 127. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 136 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para um proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[222] Modalidade 128. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para um proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141, e em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 não é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[223] Modalidade 129. O anticorpo de qualquer uma das modalidades precedentes, em que a afinidade de ligação do anticorpo a uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para um proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141, e em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 138 não é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[224] Modalidade 130. Um anticorpo que se liga a CD73 humana,

em que o anticorpo se liga a um epítopo localizado dentro de uma região de CD73 humana, a sequência de aminoácidos da região consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 90 e/ou 91.

[225] Modalidade 131. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, em que o anticorpo se liga a pelo menos um resíduo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 90 e/ou 91.

[226] [Modalidade 132. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, em que o anticorpo se liga a um ou mais resíduos de aminoácidos de CD73 humana selecionados a partir do grupo consistindo em Y158, Y161, P165 ou D168, numerados de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[227] Modalidade 133. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 133 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[228] Modalidade 134. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 134 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[229] Modalidade 135. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, em que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido Y158 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[230] Modalidade 136. Anticorpo que se liga a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 59 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[231] Modalidade 137. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, em que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido Y161 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[232] Modalidade 138. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 60 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[233] Modalidade 139. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, em que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido P165 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[234] Modalidade 140. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 139 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[235] Modalidade 141. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, em que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido D168 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

[236] Modalidade 142. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 140 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[237] Modalidade 143. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 135 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[238] Modalidade 144. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 136 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[239] Modalidade 145. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141, e em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 não é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[240] Modalidade 146. Um anticorpo que se liga a CD73 humana, em que a afinidade de ligação do anticorpo a uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141, e em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 138 não é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

[241] Modalidade 147. Um composto ou molécula compreendendo uma porção de ligação a CD73 e uma porção de ligação a TGFB.

[242] Modalidade 148. Um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo do anticorpo de qualquer uma das modalidades 1-146.

[243] Modalidade 149. O polinucleotídeo da modalidade 148, em que o polinucleotídeo compreende cDNA ou mRNA.

[244] Modalidade 150. Um vetor que compreende o polinucleotídeo da modalidade 148 ou 149.

[245] Modalidade 151. O vetor da modalidade 150, em que o vetor é um vetor plasmídeo ou um vetor viral.

[246] Modalidade 152. Uma célula hospedeira recombinante compreendendo o polinucleotídeo da modalidade 148 ou 149, ou o vetor da modalidade 150 ou 151.

[247] Modalidade = 153. Uma nanopartícula de lipídeo compreendendo o polinucleotídeo da modalidade 148 ou 149, ou o vetor da modalidade 150 ou 151.

[248] Modalidade 154. Uma composição farmacêutica que compreende o anticorpo, polinucleotídeo, vetor ou nanopartícula lipídica de qualquer uma das modalidades 1-146 ou 148-153 e um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

[249] Modalidade 155. Um método de produção de um anticorpo, o método compreendendo cultivar a célula hospedeira da modalidade 152 sob condições adequadas de modo que o polinucleotídeo seja expresso e o anticorpo seja produzido.

[250] Modalidade 156. Método de tratamento de câncer em um objeto, o método compreendendo administrar ao objeto uma quantidade eficaz do anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades 1-146, 148-151, 153 ou 154.

[251] Modalidade 157. Método para inibir a metástase de câncer em um objeto, o método compreendendo administrar ao objeto uma quantidade eficaz do anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades 1-146, 14-151, 153 ou 154.

[252] Modalidade 158. Método da modalidade 156 ou 157, em que os anticorpos, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica são administrados por via intravenosa, intratumoral, subcutânea, intradérmica, intramuscular, intravesical, intracraniana, intracavitária ou intraventricular.

[253] Modalidade 159. Método da modalidade 156 ou 157, em que os anticorpos, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica são administrados por via intratumoral.

[254] Modalidade 160. Método de qualquer uma das modalidades 156-159, adicionalmente compreendendo a administração de um ou mais agentes terapêuticos adicionais ao objeto.

[255] Modalidade 161. Método de qualquer uma das modalidades 156-160, em que o anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica e um ou mais agentes terapêuticos adicionais são coadministrados de acordo com o mesmo cronograma (por exemplo, coadministrado nos mesmos intervalos de tempo).

[256] Modalidade 162. O método de qualquer uma das modalidades 156-160, em que os anticorpos, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica e um ou mais agentes terapêuticos adicionais são coadministrados de acordo com diferentes esquemas (por exemplo, coadministrados em diferentes intervalos de tempo).

[257] Modalidade 163. Método de qualquer uma das modalidades 156-162, em que os anticorpos, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica é coadministrados com um ou mais agentes terapêuticos adicionais compreendendo um ativador ou agonista de um receptor de tirosina quinase 3 relacionada a fms (FLT3; CD135), um receptor do tipo toll (TLR) ou um estimulador do receptor de genes de interferon (STING).

[258] Modalidade 164. Método da modalidade 163, em que o agonista ou ativador de TLR é selecionado a partir do grupo consistindo em um agonista de TLR2, um agonista de TLR3, um agonista de TLR7, um agonista de TLR8 e um agonista de TLRO9.

[259] Modalidade 165. Método da modalidade 163, em que o agonista ou ativador do receptor STING é selecionado a partir do grupo consistindo em ADU-S100 (MIW-815), SB-11285, MK-1454, SR-8291, AdVCAO0848, GSK-532, SYN-STING, MSA-l, SR-8291, ácido 5,6- dimetilxantenona-4-acético (DMXAA), GAMP cíclico (CGAMP) e di-AMP cíclico.

[260] Modalidade 166. O método de qualquer uma das modalidades 156-165, em que os anticorpos, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula de lipídeo, ou a composição farmacêutica são coadministrados com um ou mais agentes terapêuticos adicionais compreendendo um inibidor ou antagonista de: proteína tirosina fosfatase, não receptor tipo 11 (PTPN11 ou SHP2), regulador de apoptose de sequência de leucemia de células mieloides 1 (MCL1); proteína quinase quinase quinase quinase 1 ativada por mitogênio (MAP4K1) (também chamada de Progenitor quinase 1 hematopoiético (HPK1)); diacilglicerol quinase alfa (DGKA, DAGK, DAGK1 ou DGK- alfa); 5'-nucleotidase ecto (NT5SE ou CD73); fator de crescimento transformador beta 1 (TGFB1 ou TGFB); heme oxigenase 1 (HMOX1,

HO-1 ou HO1); fator de crescimento endotelial vascular A (VEGFA ou VEGF); tirosina quinase 2 de receptor erb-b2 (ERBB2 HER2, HER2/neu ou CD340); receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR, ERBB, ERBB1 ou HER1); tirosina quinase do receptor ALK (ALK, CD246); poli (ADP-ribose) polimerase 1 (PARP1 ou PARP); quinase 4 dependente de ciclina (CDKA4); quinase 6 dependente de ciclina (CDK6); receptor 8 de quimiocina com motivo C-C (CCR8, CDwlI98); molécula CD274 (CD274, PDL1 ou PD-L1); morte celular programada 1 (PDCD1, PD1 ou PD-1); e/ou proteína 4 associada a linfócitos T citotóxicos (CTLAA, CTLA-4, CD152).

[261] Modalidade 167. Método da modalidade 166, em que o inibidor compreende uma molécula de ligação ao antígeno, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

[262] Modalidade 168. Método da modalidade 166, em que o inibidor compreende uma pequena molécula orgânica.

[263] Modalidade 169. Método da modalidade 166, em que o inibidor de MCL1 é selecionado a partir do grupo consistindo em AMG- 176, AMG-397, S-64315, AZD-5991, 483-LM, A 1210477, UMI-77 e JKY-5-037.

[264] Modalidade 170. Método da modalidade 166, em que o inibidor de PTPN11 ou SHP2 é selecionado a partir do grupo consistindo em TNO155 (SHP-099), RMC-4550, JAB-3068 e RMC-4630.

[265] Modalidade 171. Método da modalidade 160, em que o agente terapêutico adicional é um agente quimioterapêutico, antineoplásico, radioterapêutico ou de ponto de controle.

[266] Modalidade 172. O método da modalidade 160, em que os um ou mais agentes antineoplásicos ou quimioterápicos são selecionados a partir do grupo consistindo em um análogo de nucleosídeo (por exemplo, 5-fluorouracil, gencitabina, citarabina), um taxano (por exemplo, paclitaxel, nab-paclitaxel, docetaxel, cabazitaxel),

um complexo de coordenação de platina (cisplatina, carboplatina, oxaliplatina, nedaplatina, tetranitrato de triplatina, fenantriplatina, picoplatina, satraplatina, dicicloplatina,y eptaplatina, lobaplatina, miriplatina) um inibidor de di-hidrofolato redutase (DHFR), metotrexedutase (DHFR), (por exemplo, metrotexato, trimetrexato, pemetrexed), um inibidor de topoisomerase (por exemplo, doxorrubicina, daunorrubicina, dactinomicina, eniposídeo, epirrubicina, etoposídeo, idarrubicina, irinotecano, mitoxantrona, pixantrona, sobuzoxane, topotecan, MM-398 (irinotecano lipossomal), vosaroxina e GPX-150, aldoxorrubicina, AR-67, mavelertinibe, AST-2818, avitinibe (ACEA-0010), irofulven (MGI-114)), um agente alquilante (por exemplo, uma mostarda de nitrogênio (por exemplo, ciclofosfamida, clormetina, uramustina ou mostarda de uracila, melfalano, clorambucil, ifosfamida, bendamustina, temozolomida, carmustina), uma nitrosoureia (por exemplo, carmustina, lomustina, estreptozocina), um alquil sulfonato (por exemplo, busulfanato) e suas misturas.

[267] Modalidade 173. Método da modalidade 160, em que o agente de direcionamento de ponto de controle é selecionado a partir do grupo consistindo em um anticorpo antagonista anti-PD-1, um anticorpo antagonista anti-PD-L1, um anticorpo antagonista anti-PD-L2, um anticorpo antagonista anti-CTLA-4, um anticorpo antagonista anti- TIM-3, um anticorpo antagonista anti-LAG-3, um anticorpo antagonista anti-CEACAM1, um anticorpo agonista anti-GITR, um anticorpo antagonista anti-TIGIT, e anticorpo antagonista anti-VISTA, um anticorpo agonista anti-CD137 e um anticorpo agonista anti-OX40.

[268] Modalidade 174. Método da modalidade 173, em que o agente terapêutico adicional é um anticorpo anti-PD-1, opcionalmente em que o anticorpo anti-PD-1 é pembrolizumabe ou nivolumabe.

[269] Modalidade 175. O método da modalidade 160, em que o agente terapêutico adicional é um inibidor da indoleamina-2, 3-

dioxigenase (IDO).

[270] Modalidade 176. O método da modalidade 175, em que o inibidor é selecionado a partir do grupo consistindo em epacadostat, FO01287, indoximod e NLG919.

[271] Modalidade 177. Método da modalidade 176, em que o inibidor é epacadostat.

[272] Modalidade 178. Método da modalidade 160, em que o agente terapêutico adicional é uma vacina.

[273] Modalidade 179. Método da modalidade 178, em que a vacina compreende um complexo de peptídeo proteína de choque térmico (HSPPC) que compreende uma proteína de choque térmico complexada com um peptídeo antigênico.

[274] Modalidade 180. Método da modalidade 179, em que a proteína de choque térmico é hsc70 e é complexada com um peptídeo antigênico associado a tumor.

[275] Modalidade 181. Método da modalidade 179, em que a proteína de choque térmico é gp96 e é complexada com um peptídeo antigênico associado a tumor, em que o HSPPC é derivado de um tumor obtido de um objeto.

[276] Modalidade 182. O método da modalidade 160, em que o agente terapêutico adicional é etoposídeo ou doxorrubicina.

[277] Modalidade 183. Método de qualquer uma das modalidades 156-182, em que os anticorpos, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica é coadministrados com um regime FOLFOX, um regime FOLFOXIRI ou um regime FOLFIRINOX.

[278] Modalidade 84. Método, de acordo com qualquer uma das modalidades 156-183, em que os anticorpos, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica é coadministrados com uma imunoterapia, uma terapia imunoestimuladora, uma terapia celular ou uma terapia genética.

[279] Modalidade 185. Método de qualquer uma das modalidades 156-184, em que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um tumor sólido, um câncer hematológico e uma lesão metastática.

[280] Modalidade 186. Método da modalidade 185, em que o tumor sólido é selecionado a partir do grupo consistindo em um sarcoma, um sarcoma fibroblástico, um carcinoma e um adenocarcinoma.

[281] Modalidade 187. Método da modalidade 185, em que o câncer hematológico é selecionado a partir do grupo consistindo em uma leucemia, um linfoma e um mieloma.

[282] Modalidade 188. Método de qualquer uma das modalidades 156-184, em que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um câncer de pulmão, um melanoma, um câncer renal, um câncer de fígado, um mieloma, um câncer de próstata, um câncer de mama, câncer de ovário, câncer colorretal, câncer de pâncreas, câncer de cabeça e pescoço, câncer anal, câncer gastroesofágico, mesotelioma, câncer de nasofaringe, câncer de tireoide, câncer cervical, câncer epitelial, câncer peritoneal, uma doença linfoproliferativa, uma leucemia linfoblástica aguda (LLA), uma leucemia mieloide aguda (AML), uma leucemia linfocítica crônica (CLL), uma leucemia mieloide crônica (CML), uma leucemia mielomonocítica crônica (CMML), uma leucemia de células pilosas, um linfoma de células B, um linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), um linfoma difuso de grandes células B tipo células B ativadas (ABC), um linfoma difuso de células B de células B de centro germinativo (GCB), um linfoma de células do manto, um linfoma de Hodgkin, um linfoma não-Hodgkin, um linfoma não-Hodgkin recidivante, um linfoma não-Hodgkin refratário, um linfoma não-Hodgkin folicular recorrente, um linfoma de Burkitt, um linfoma linfocítico pequeno, um linfoma folicular, um linfoma linfoplasmocitário e um linfoma extranodal de zona marginal.

[283] Modalidade 189. Método de qualquer uma das modalidades 156 a 184, em que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um tumor epitelial (por exemplo, um carcinoma, um carcinoma de células escamosas, um carcinoma de células basais, uma neoplasia intraepitelial escamosa), um tumor glandular (por exemplo, um adenocarcinoma, um adenoma, um adenomioma), um tumor mesenquimal ou de tecido mole (por exemplo, um sarcoma, um rabdomiossarcoma, um leiomiossarcoma, um lipossarcoma, um fibrossarcoma, um dermatofibrossarcoma, um neurofibrossarcoma, um neurofibrossarcoma histiocitoma, um angiossarcoma, um angiomixoma, um leiomioma, um condroma, um condrossarcoma, um sarcoma de partes moles alveolar, um hemangioendotelioma epitelioide, um tumor de Spitz, um sarcoma sinovial) e um linfoma.

[284] Modalidade 190. Método de qualquer uma das modalidades 156 a 184, em que o câncer é um tumor sólido em ou decorrente de um tecido ou órgão selecionado a partir do grupo consistindo em: osso (por exemplo, adamantinoma, cistos Ósseos aneurismáticos, angiossarcoma, condroblastoma, condroma, fibroma condromixoide, condrossarcoma, cordoma, condrossarcoma desdiferenciado, encondroma, hemangioendotelioma epitelioide, displasia fibrosa do osso, tumor de células gigantes do osso, hemangiomas e lesões relacionadas, — osteoblastoma, — osteocondroma, osteossarcoma, osteoma osteoide, osteoma, condroma periosteal, tumor desmoide, sarcoma de Ewing); lábios e cavidade oral (por exemplo, ameloblastoma odontogênico, leucoplasia oral, carcinoma de células escamosas oral, melanoma primário da mucosa oral); glândulas salivares (por exemplo, adenoma de glândula salivar pleomórfica, carcinoma adenoide cístico de glândula salivar, carcinoma mucoepidermoide de glândula salivar, tumores de Warthin de glândula salivar); esôfago (por exemplo, esôfago de Barrett, displasia e adenocarcinoma); trato gastrointestinal, incluindo estômago (por exemplo, adenocarcinoma gástrico, linfoma gástrico primário, tumores estromais gastrointestinais (GISTs), depósitos metastáticos, carcinoides gástricos, sarcomas gástricos, carcinoma neuroendócrino, carcinoma gástrico de células escamosas primárias, adenoacantomas gástricos), intestinos e músculo liso (por exemplo, leiomiomatose intravenosa), cólon (por exemplo, adenocarcinoma colorretal), reto, ânus; pâncreas (por exemplo, neoplasias serosas, incluindo — cistadenoma “seroso microcístico ou macrocístico, cistadenoma seroso sólido, neoplasias serosas císticas associadas a Von Hippel-Landau (VHL), cistadenocarcinoma seroso, neoplasias císticas mucinosas (MCN), neoplasias mucaductais intraductais neoplasias papilares oncocíticas (IOPN), neoplasias tubulares intraductais, neoplasias acinares císticas, incluindo cistadenoma de células —acinares, cistadenocarcinoma de células acinares, adenocarcinoma pancreático, adenocarcinoma ductal pancreático invasivo, incluindo adenocarcinoma tubular, carcinoma adenoquamoso, carcinoide — coloide, carcinoma medular, carcinoma hepatoide, carcinoma de células em anel de sinete, carcinoma indiferenciado, carcinoma indiferenciado com células gigantes similares a osteoclastos, carcinoma de células acinares, neoplasias neuroendócrinas, microadenoma neuroendócrino, tumores neuroendócrinos (NET), carcinoma neuroendócrino (NEC), incluindo NEC de pequenas células ou grandes células, insulinoma, gastrinoma, glucagonoma, NET produtor de serotonina, somatostatinoma, VlPoma, neoplasias pseudopapilares sólidas (SPN), pancreatoblastoma); vesícula biliar (por exemplo, carcinoma da vesícula biliar e dutos biliares extra-hepáticos, colangiocarcinoma intra-hepático); neuroendócrino (por exemplo, carcinoma cortical adrenal, tumores carcinoides, feocromocitoma, adenomas hipofisários); tireoide (por exemplo, carcinoma anaplásico (indiferenciado), carcinoma medular, tumores oncocíticos, carcinoma papilar, adenocarcinoma); fígado (por exemplo, adenoma, combinação hepatocelular e colangiocarcinoma, carcinoma fibrolamelar, hepatoblastoma, carcinoma hepatocelular, mesenquimal, tumor epitelial estromal aninhado, carcinoma indiferenciado, carcinoma hepatocelular, colangiocarcinoma intra-hepático, cistadenocarcinoma do duto biliar, hemangioendotelioma epitelioide, angiossarcoma, sarcoma embrionário, rabdomiossarcoma, tumor fibroso solitário, teratoma, tumor Yolk sac, carcinosarcoma, tumor rabinoide); rim (por exemplo, carcinoma de células renais rearranjado por ALK, carcinoma de células renais cromófobo, carcinoma de células renais de células claras, sarcoma de células claras, adenoma metanéfrico, adenofibroma metanéfrico, carcinoma mucinoso tubular e de células fusiformes, nedea, nefroblastoma (tumor de Wilms), adenoma papilar, carcinoma papilar de células renais, oncocitoma renal, carcinoma de células renais, carcinoma de células renais com deficiência de succinato desidrogenase, carcinoma do duto coletor); mama (por exemplo, carcinoma dutal invasivo, incluindo, sem limitação, carcinoma de células acínicas, carcinoma adenoide cístico, carcinoma apócrino, carcinoma cribriforme, células claras/ricas em glicogênio, carcinoma inflamatório, carcinoma rico em lipídios, carcinoma medular, carcinoma metaplásico, carcinoma micropapilar, carcinoma mucinoso, carcinoma neuroendócrino, carcinoma sebácea, carcinoma sebocítico, carcinoma sebocítico, carcinoma sebáceo, carcinoma da mama Ssecretor, carcinoma tubular, carcinoma lobular, incluindo, sem limitação, carcinoma pleomórfico, carcinoma de células em anel de sinete, peritônio (por exemplo, mesotelioma, câncer peritoneal primário)); tecidos de órgãos sexuais femininos, incluindo ovário (por exemplo, coriocarcinoma, tumores epiteliais, tumores de células germinativas, tumores estromais do cordão sexual), trompas de Falópio (por exemplo, adenocarcinoma seroso, adenocarcinoma mucinoso, adenocarcinoma endometrioide, adenocarcinoma de células claras, carcinoma de células transicionais, — carcinoma de células escamosas, carcinoma indiferenciado, tumores mullerianos, adenossarcona, leiomiossarcoma teratoma, tumores de células germinativa, coriocarcinoma, tumores trofoblásticos); útero (por exemplo, carcinoma do cérvix, pólipos endometriais, hiperplasia endometrial, carcinoma intraepitelial (EIC), carcinoma endometrial, (por exemplo, carcinoma endometrioide, carcinoma ceroso, carcinoma de células claras carcinoma mucinoso, carcinoma de células escamosas, carcinoma transicional, carcinoma de pequenas células, carcinoma indiferenciado, neoplasia mesenquimal), leiomioma “(por exemplo, nódulo estromal do endométrio, leiomiossarcoma, sarcoma estromal do endométrio (ESS) tumores mesenquimais), tumores mesenquimais e epiteliais misturados (por exemplo, adenofibroma, carcinofibroma, adenossarcoma (sacorma mesodérmico misturado maligno — MMMT)), tumores estromais do endométrio, tumores misturados mullerianos malignos do endométrio, tumores trofoblásticos gestacionais (mola hidatiforme parcial, mola hidatiforme completa, mola hidatiforme invasiva, tumor do sítio placentário)), vulva, vagina; tecidos de órgãos sexuais masculinos, incluindo próstata, testículos (por exemplo, tumores de células germinativas, seminoma espermatocítico), pênis; bexiga (por exemplo, carcinoma de células escamosas, carcinoma urotelial, carcinoma urotelial da bexiga); cérebro, (por exemplo, gliomas (por exemplo, astrocitomas, incluindo não infiltrantes, de baixo grau, anaplásicos, glioblastomas; oligodendrogliomas, ependimomas), meningiomas, gangliogliomas, schwannomas (neurilemomas), craniofaringiomas, cordomas, linfomas, não-Hodgkin, linfomas pituitários; olho (por exemplo, retinoma, retinoblastoma, melanoma ocular, melanoma uveal posterior, hamartoma da íris); cabeça e pescoço (por exemplo, carcinoma nasofaríngeo, tumor do saco endolinfático (ELST),

carcinoma epidermoide, cânceres laringeais incluindo carcinoma de células escamosas (SCC) (por exemplo, carcinoma glótico, carcinoma supraglótico, carcinoma subglótico, carcinoma transglótico), carcinoma in situ, verrucoso, células fusiformes e SCC basaloide, carcinoma indiferenciado, adenocarcinoma laríngeo, carcinoma adenoide cístico, carcinoma neuroendócrino, sarcoma de laringe), paraganglioma de cabeça e pescoço (por exemplo, corpo carotídeo, jugulotimpânico, vagal); timo (por exemplo, timoma); coração (por exemplo, mixoma cardíaco); pulmão (por exemplo, carcinoma de células pequenas (SCLC), carcinoma de células não pequenas do pulmão (NSCLC), incluindo carcinoma de células escamosas (SCC), adenocarcinoma e carcinoma de células grandes, carcinoides (típico ou atípico), carcinossarcomas, blastomas pulmonares, carcinomas de células gigantes, carcinomas de células fusiformes, blastoma pleuropulmonar); linfa (por exemplo, linfomas, incluindo linfoma de Hodgkin, linfoma não- Hodgkin, doenças linfoproliferativas associadas ao vírus Epstein-Barr (EBV), incluindo linfomas de células B e linfomas de células T (por exemplo, linfoma de Burkitt, linfoma de grandes células B, linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), linfoma de células do manto, linfoma de células B indolente, linfoma de células B de baixo grau, linfoma difuso de células grandes associado à fibrina; linfoma de efusão primário; linfoma plasmblástico; linfoma extranodal de células NK/T, tipo nasal; linfoma de células T periférico, linfoma cutâneo de células T, linfoma de células T angioimunoblástico; linfoma de células T foliculares; linfoma de células T sistêmico), linfangioleiomiomatose); sistema nervoso central (SNC) (por exemplo, gliomas incluindo tumores astrocíticos (por exemplo, astrocitoma pilocítico, astrocitoma pilomixoide, astrocitoma subependimário de células gigantes, xantoastrocitoma pleomórfico, astrocitoma difuso, astrocitoma fibrilar, astrocitoma gemistocítico, astrocitoma protoplástico, astrocitoma anaplásico, glioblastoma (por exemplo, glioblastoma de células gigantes, gliosarcoma, glioblastoma multiforme) e gliomastose cerebral), tumores oligodendrogliais (por exemplo, oligodendroglioma, oligodendroglioma anaplásico), tumores oligoastrocítico (por exemplo, oligoastrocitoma, oligoastrocitoma anaplásico), tumores ependimais (subependimoma, ependimoma mixopapilar, ependimomas (por exemplo, celular, papilar, células claras, tanicíticos(, ependimoma anaplásico), glioma do nervo óptico, e não gliomas (tumores do plexo coroide, tumores neuronais e gliais neoronais misturados, tumores da região pineal, tumores embrionários, meduloblastoma, tumores meningeais, linfomas do SNC primário, tumores de células germinativas, adenomas pituitários, tumores do nervo paraespinhal e craniano, tumores da região estelar), neurofibroma, meningioma, tumores da bainha nervosa periférica, tumores — neuroblásticos — periféricos — (incluindo, sem limitação, neuroblastoma, ganglioneuroblastoma, ganglioneuroma), trissomia 19 ependimoma); tecidos neuroendócrinos (por exemplo, sistema paraganglionar incluindo medula adrenal (feocromocitomas) e paraganglia extra-adrenal (paragangliomas (extra-adrenal)); pele (por exemplo, hidradenoma de células claras, histiocitomas fibrosos cutâneos benignos, cilindroma, hidradenoma, melanoma, incluindo melanoma cutâneo, melanoma da mucosa), pilomatricoma, tumores de Spitz); e tecidos moles (por exemplo, angiomixoma agressivo, rabdomiossarcoma alveolar, sarcoma alveolar de partes moles, angiofibroma, histiocitoma fibroso angiomatoide, sarcoma sinovial, sarcoma . sinovial bifásico, sarcoma de células claras, dermatofibrosarcoma protuberante, fibromatose do tipo desmoide, tumor de pequenas células redondas, tumor desmoplásico de pequenas células redondas, elastofibroma, rabdomiossarcoma embrionário, tumor de Ewing/tumores neurectodérmicos primitivos (PNET), condrossarcoma mixoide extraesquelético, osteossarcoma extraesquelético, sarcoma paraespinhal, tumor miofibroblástico inflamatório, lipoblastoma, lipoma, lipossarcoma/ tumores lipomatosos malignos, lipossarcoma lipossarcoma mixoide, sarcoma fibromixoide, linfangioleiomioma, mioepitelioma maligno, melanoma maligno de partes moles, carcinoma mioepitelial, mioepitelioma, sarcoma fibroblástico mixoinflamatório, sarcoma indiferenciado, pericitoma, rabdomiossarcoma, sarcoma de tecidos moles não rabdomiossarcoma (NRSTS), leiomiossarcoma de tecidos moles, sarcoma indiferenciado, liposarcoma bem diferenciado.

[285] Modalidade 191. Método de qualquer uma das modalidades 156-184, em que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um melanoma, um câncer gástrico, um câncer de mama triplo- negativo (TNBC), um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), um adenocarcinoma retal, um câncer colorretal, um carcinoma de células renais, um câncer de ovário, um câncer de próstata, um carcinoma de células escamosas orais (SCC), um carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), um câncer de bexiga urotelial, um glioblastoma (GBM), um meningioma, câncer adrenal e um câncer endometrial.

[286] Modalidade 192. O anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades 1-146, 148-151, 153 ou 154 para uso no tratamento de câncer.

[287] Modalidade 193. O anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica para uso na modalidade 192, em que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um tumor sólido, um câncer hematológico e uma lesão metastática.

[288] Modalidade 194. O anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica para uso da modalidade 192, em que o tumor sólido é selecionado a partir do grupo consistindo em um sarcoma, um sarcoma fibroblástico, um carcinoma e um adenocarcinoma.

[289] Modalidade 195. O anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica para uso da modalidade 192, em que o câncer hematológico é selecionado a partir do grupo consistindo em uma leucemia, um linfoma e um mieloma.

[290] Modalidade 196. O anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula de lipídio ou composição farmacêutica para uso de qualquer uma das modalidades 192-195, em que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um câncer de pulmão, um melanoma, um câncer renal, um câncer de fígado, um mieloma, um câncer de próstata, um câncer de mama, um câncer de ovário, um câncer colorretal, um câncer pancreático, um câncer de cabeça e pescoço, um câncer anal, um câncer gastroesofágico, um mesotelioma, um câncer nasofaríngeo, um câncer da tireoide, um câncer cervical, um câncer epitelial, um câncer peritoneal, uma doença linfoproliferativa, uma leucemia linfoblástica aguda (LLA), uma leucemia mieloide aguda (AML), uma leucemia linfocítica crônica (CLL), uma leucemia mieloide crônica (CML), uma leucemia mielomonocítica crônica (CMML), uma leucemia de células, um linfoma de células B, um linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), um linfoma difuso de grandes células B de células B ativadas (ABC), um linfoma difuso de grandes células B de células B de centro germinativo (GCB), um linfoma celular do manto, um linfoma de Hodgkin, um linfoma não-Hodgkin, um linfoma não-Hodgkin recorrente, um linfoma não-Hodgkin refratário, um linfoma não-Hodgkin folicular recorrente, um linfoma de Burkitt, um linfoma linfocítico pequeno, um linfoma folicular, um linfoma limfoplasmacítico, e um linfoma extranodal da zona marginal.

[291] Modalidade 197. O anticorpo, polinucleotídeo, vetor,

nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades 192-195, em que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um melanoma, um câncer gástrico, uma mama triplo- negativa câncer (TNBC), um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), um adenocarcinoma retal, um câncer colorretal, um carcinoma de células renais, um câncer de ovário, um câncer de próstata, um carcinoma de células escamosas orais (SCC), um carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), um câncer de bexiga urotelial, um glioblastoma (GBM), um meningioma, câncer adrenal e um câncer endometrial.

[292] Modalidade 198. Uso do anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades 1-146, 148-151, 153 ou 154 para a preparação de um medicamento para o tratamento do câncer.

[293] Modalidade 199. O uso da modalidade 198, em que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um tumor sólido, um câncer hematológico e uma lesão metastática.

[294] Modalidade 200. A utilização da modalidade 199, em que o tumor sólido é selecionado a partir do grupo consistindo em um sarcoma, um sarcoma fibroblástico, um carcinoma e um adenocarcinoma.

[295] Modalidade 201. O uso da modalidade 199, em que o câncer hematológico é selecionado a partir do grupo consistindo em uma leucemia, um linfoma e um mieloma.

[296] Modalidade 202. O uso de qualquer uma das modalidades 198-201, em que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um câncer de pulmão, um melanoma, um câncer renal, um câncer de fígado, um mieloma, um câncer de próstata, um câncer de mama, câncer de ovário, câncer colorretal, câncer de pâncreas, câncer de cabeça e pescoço, câncer anal, câncer gastroesofágico, um mesotelioma, um câncer de nasofaringe, um câncer de tireoide, um câncer cervical, um câncer epitelial, um câncer peritoneal, uma doença linfoproliferativa, uma leucemia linfoblástica aguda (LLA), uma leucemia mieloide aguda (AML), uma leucemia linfocítica crônica (CLL), uma leucemia mieloide crônica (CML), uma leucemia mielomonociítica crônica (CMML), uma leucemia de células pilosas, um linfoma de células B, um linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), um linfoma difuso de grandes células B tipo células B ativadas (ABC), um linfoma difuso de células B de centro germinativo (GCB), um linfoma de células do manto, um linfoma de Hodgkin, um linfoma não-Hodgkin, um linfoma não-Hodgkin recidivante, linfoma não-Hodgkin refratário, linfoma não- Hodgkin folicular recorrente, linfoma de Burkitt, linfoma linfocítico pequeno, linfoma folicular, linfoma linfoplasmocitário e linfoma de zona marginal extranodal.

[297] Modalidade 203. O uso de qualquer uma das modalidades 198-201, em que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um melanoma, um câncer gástrico, um câncer de mama triplo- negativo (TNBC), um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), um adenocarcinoma retal, um câncer colorretal, um carcinoma de células renais, um câncer de ovário, um câncer de próstata, um carcinoma de células escamosas orais (SCC), um carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), um câncer de bexiga urotelial, um glioblastoma (GBM), um meningioma, câncer adrenal e um câncer endometrial.

[298] Modalidade 204. O anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades 1-146, 148-151, 153 ou 154, para uso no método de qualquer uma das modalidades 156-191.

[299] Modalidade 205. Uso do anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica de qualquer uma das modalidades 1-146, 148-151, 153 ou 154 no método de qualquer uma das modalidades 156-191.

4. BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[300] Figura 1 é um conjunto de gráficos que mostram a ligação de anticorpos anti-CD73 (BAO013, BAO14, BAO1IS ou anticorpo de referência ("RAOO01")), ou um anticorpo de controle de isótipo, para células ovarianas de hamster chinês (CHO) ectopicamente expressando camundongo, cinomolgos ou CD73 humana (da esquerda para a direita na figura), conforme medido por citometria de fluxo. Os valores de intensidade de fluorescência média (MFI) são representados graficamente contra as concentrações de anticorpos.

[301] Figuras 2A-2B são um conjunto de gráficos que mostram a extensão da inibição da atividade enzimática de CD73 por anticorpos anti-CD73 (BA013, BAO14, BAO15 ou RAOO1) ou um controle de isótipo (Figura 2A), ou por anticorpo anti-CD73 BAO015 ou o controle de isótipo (Figura 2B). A atividade percentual de CD73 ectopicamente expressa na superfície das células Jurkat (Figura 2A) ou células CHO (Figura 2B) é representada graficamente como níveis de luminescência (medidos em Unidade de Luz Relativa (RLU)) em relação aos níveis observados na ausência de anticorpo.

[302] Figuras 3A-3C são um conjunto de gráficos e imagens que mostram a internalização de anticorpos anti-CD73 e a internalização mediada por anticorpos de CD73. Figura 3A mostra os resultados de um ensaio de citotoxicidade medindo a internalização de anticorpos incubando células que expressam CD73 com anticorpos de teste (BAO15, RAOO1 ou um segundo anticorpo de referência ("RAOO02")), controle de isótipo ou nenhum anticorpo, e um anticorpo secundário conjugado com monometil auristatina citotóxica E (MMAE). Os níveis de internalização de anticorpos são representados graficamente como a viabilidade de células que expressam CD73 (normalizadas para a viabilidade de células de controle que não foram tratadas com quaisquer anticorpos primários ou secundários ("NT")) contra a concentração de anticorpos. Figura 3B mostra uma série de imagens representativas de um ensaio de internalização de CD73, em que as células que expressam uma proteína de fusão HaloTag&-CD73 são detectadas por microscopia de fluorescência confocal após incubação das células com um ligando HaloTagO Alexa Fluor'y 488 que cora a proteína de fusão e tratamento com anti-CD73 ou anticorpos de controle. Figura 3C é um gráfico que mostra a quantificação de HaloTag&-CD73 intracelular a partir de quatro imagens adquiridas no canal FITC (para detectar o HaloTagO Alexa FluorT?Y 488) a cada hora para cada condição ao longo de um curso de 6 horas.

[303] Figuras 4A-4P são um conjunto de gráficos que mostram a ligação de um controle de isótopo, RAO01, RAOO2, BAO15 e anticorpos anti-CD73 humanizados BAO19-BAO3O para células CHO que expressam ectopicamente CD73 de cinomolgos, conforme medido por citometria de fluxo. Os valores de MFI são representados graficamente contra as concentrações de anticorpos para mostrar as curvas de ligação.

[304] Figuras 5A-5P são um conjunto de gráficos que mostram a ligação de um controle de isótopo, RAO01, RAOO2, BAO15 e anticorpos anti-CD73 humanizados BAO19-BAO3O para células CHO que expressam ectopicamente CD73 humana, conforme medido por citometria de fluxo. Um controle negativo sem qualquer anticorpo, designado "sem anticorpo", foi usado para comparação na Figura 5A. Os valores de MFI são representados graficamente contra as concentrações de anticorpos para mostrar as curvas de ligação.

[305] Figuras 6A-6P são um conjunto de gráficos que mostram a extensão da inibição da atividade enzimática de CD73 por um controle de isótopo, RAOO01, RAOO2, BAO15 e anticorpos anti-CD73 humanizados

BAO19-BAO3O0. A atividade percentual de CD73 ectopicamente expressa na superfície das células Jurkat é representada graficamente como níveis de luminescência (medidos em RLU) em relação aos níveis na ausência de anticorpo.

[306] Figuras 7A-7P são um conjunto de gráficos que mostram a extensão da inibição da atividade enzimática de CD73 por um controle de isótopo, RAOO1, RAOO2, BAO15 e anticorpos anti-CD73 humanizados BAO19-BAO3O0. A atividade percentual! de CD73 recombinante imobilizado é representada graficamente como níveis de luminescência (medidos em RLU) em relação aos níveis na ausência de anticorpo.

[307] Figuras 8A-8M são um conjunto de gráficos que mostram os resultados de um ensaio de citotoxicidade que mede a internalização do anticorpo incubando células que expressam CD73 sem anticorpo, controle de isótopo, BAO015 ou um anticorpo anti-CD73 humanizado e um anticorpo secundário conjugado com MMAE. Os níveis de internalização de anticorpos são representados graficamente como a viabilidade das células que expressam CD73 (normalizadas para a viabilidade das células de controle que não foram tratadas com quaisquer anticorpos primários ou secundários ("NT")) contra as concentrações de anticorpos.

[308] Figuras 9A-9E são um conjunto de gráficos que mostram as capacidades de um anticorpo anti-CD73 (BA012) ou uma proteína de fusão armadilha anti-CD73-TGFB (BAO35), mas sem controles de isótipo (um controle de anticorpo de isótipo e um controle de proteína de fusão compreendendo tal anticorpo de isótipo e a armadilha TGFB), para ligar CD73 e inibir a atividade enzimática de CD73. Figuras 9A e 9B mostram a ligação de BA012 ou BAO35, mas não de controles de isótipo, a células CHO que expressam ectopicamente CD73 de camundongo na ausência (Figura 9A) ou presença (Figura 9B) de TGFRB1. Os níveis de ligação, medidos por citometria de fluxo, são representados graficamente como valores MFI absolutos (Figura 9A) ou como valores MFI percentuais em relação ao valor MFI de cada condição de teste na ausência de TGFB1 (Figura 9B). Figuras 9C-9E mostram a inibição da atividade enzimática de CD73 por BAO12 ou BAO035, mas não o controle de isótipo, na ausência (Figuras 9C e 9D) ou presença (Figura 9E) de TGFB1. A atividade percentual de CD73 ectopicamente expressa na superfície das células CHO é representada graficamente como níveis de luminescência (medidos em RLU) em relação aos níveis na ausência de anticorpo.

[309] Figuras 10A e 10B são um conjunto de gráficos que mostram o antagonismo da sinalização induzida por TGFB por BAO012 ou BAO35, mas não controles de isótipo. Na Figura 10A, os níveis de luminescência relativa, que se correlacionam com a expressão induzida por TGFRB1 de luciferase em células repórter HEK293-SMAD, são representados graficamente como valores percentuais em relação aos níveis de luminescência na ausência de anticorpo. Na Figura 10B, os níveis de expressão da proteína fluorescente vermelha (RFP), que se correlacionam com a expressão induzida por TGFB1 de Vimentina em células AS49-Vimentina-RFP, são representados graficamente como valores de fluorescência absoluta menos os níveis de fluorescência de fundo na ausência de anticorpo ou TGFRB1.

[310] Figuras 11A e 11B são um conjunto de gráficos que mostram a inibição do crescimento tumoral e metástase por anticorpos anti-CD73 (um controle de isótopo, BAO0 12, e um anticorpo de referência compreendendo o domínio variável de RAOO01 e um domínio constante IgG2a-N297A de murino, designado RAOOI-IgG2a-N297A). Figura 11A mostra os volumes tumorais médios calculados de 8-10 camundongos/grupo implantados subcutaneamente com células tumorais CT26 e tratados com os anticorpos indicados. Figura 11B mostra o número de nódulos tumorais nos pulmões de cada camundongo implantado por via intravenosa com células tumorais EMTSG e tratado com BAO012 ou anticorpo de controle de isótipo.

[8311] Figuras 12A e 12B são um conjunto de gráficos que mostram a inibição do crescimento do tumor por BAO12, BAO35 ou controles de isótipo. Figura 12A mostra os volumes tumorais médios calculados de 5-7 camundongos/grupo implantados com células tumorais TC1 por via subcutânea e tratados com os anticorpos indicados. Figura 12B mostra os volumes de tumor calculados de 8-10 camundongos/grupo implantados com células tumorais EMTG6 por via subcutânea e tratados com os anticorpos indicados.

[312] Figuras 13A e 13B são um conjunto de gráficos que mostram a ligação de um anticorpo anti-CD73 (BA025), uma proteína de fusão armadilha anti-CD73-TGFB (BAO37), um anticorpo de controle de isótipo, ou uma armadilha de isótipo-TGFRB para células T CD8+ isoladas de PBMCs de qualquer humano (Figura 13A) ou macaco cinomolgos (Figura 13B), conforme medido por citometria de fluxo. Os valores médios de MFI são representados graficamente contra as concentrações de anticorpos.

[313] Figuras 14A-14D são um conjunto de gráficos que mostram a extensão da inibição da atividade enzimática de CD73 humana recombinante em um ensaio bioquímico por um anticorpo anti-CD73 (BAO025), uma proteína de fusão armadilha anti-CD73-TGFB (BAO037), um anticorpo de controle de isótipo ou uma armadilha de isótipo-TGFB. Os resultados de dois experimentos são mostrados. A atividade de CD73 ligado à placa imobilizado (Figuras 14A e 14B) ou CD73 solúvel (Figuras 14C e 14D) é representada graficamente como níveis de luminescência (medidos em RLU) em relação aos níveis na ausência de anticorpo.

[314] Figuras 15A-15D são um conjunto de gráficos que mostram a extensão da inibição da atividade enzimática de CD73 de macaco cinomolgo recombinante em um ensaio bioquímico por um anticorpo anti-CD73 (BA025), uma proteína de fusão armadilha anti-CD73-TGFRB (BAO37), um anticorpo de controle de isótipo ou uma armadilha de isótipo-TGFB. Os resultados de dois experimentos são mostrados. À atividade de CD73 ligado à placa imobilizada (Figuras 15A e 15B) ou CD73 solúvel (Figuras 15C e 15D) é representada graficamente como níveis de luminescência (medidos em RLU) em relação aos níveis na ausência de anticorpo.

[315] Figuras 16A e 16B são um conjunto de gráficos que mostram a extensão da inibição da atividade enzimática de CD73 por um anticorpo anti-CD73 (BA025), uma proteína de fusão armadilha anti- CD73-TGFRB (BAO37), um anticorpo de controle de isótipo, ou uma armadilha de isótipo-TGFEB. A atividade percentual de CD73 ectopicamente expressa na superfície de células Jurkat em dois experimentos (Figura 16A e Figura 16B) é representada graficamente como níveis de luminescência (medidos em RLU) em relação aos níveis na ausência de anticorpo.

[316] Figuras 17A-17C são um conjunto de gráficos que mostram o antagonismo da sinalização induzida por TGFB em um ensaio repórter SMAD-luciferase HEK293 por um anticorpo anti-CD73 (BA0O25), uma proteína de fusão armadilha anti-CD73-TGFB (BAO37), um anticorpo de controle de isótipo ou uma armadilha de isótipo-TGFB. Cada isoforma de TGFRB foi testada separadamente. A atividade de sinalização SMAD induzida por TGFB (que se correlaciona com a atividade da luciferase nas células HEK293-SMAD-luciferase) é representada graficamente como níveis de luminescência (medidos em RLU) em relação aos níveis na ausência de anticorpo.

[8317] Figuras 18A-181 são um conjunto de gráficos que mostram o antagonismo da sinalização induzida por TGFB em um ensaio de célula repórter AS49-Vimentina-RFP por um anticorpo anti-CD73

(BAO025), uma proteína de fusão armadilha anti-CD73-TGFB (BAO037), um anticorpo de controle de isótipo ou uma armadilha de isótipo-TGFB. Cada isoforma de TGFB foi testada separadamente. Os resultados de três experimentos são mostrados. Dois experimentos (Figuras 18A- 18C e 18D-18F) foram conduzidas à temperatura ambiente. Um experimento (Figuras 18G-181) foi conduzido a 37 ºC. A atividade de sinalização induzida por TGFB (que se correlaciona com a expressão de RFP nas células A549-Vimentina-RFP) é representada graficamente como MFI de RFP em relação aos níveis na ausência de anticorpo.

[318] Figuras 19A-19D são um conjunto de gráficos que mostram a internalização de anticorpos anti-CD73 e a internalização mediada por anticorpos de CD73. Os gráficos mostram os resultados de um ensaio de citotoxicidade medindo a internalização do anticorpo incubando células que expressam CD73 com um anticorpo anti-CD73 (BA025), uma proteína de fusão armadilha anti-CD73-TGFB (BAO37), um anticorpo de controle de isótipo, ou nenhum anticorpo, em cada caso junto com um anticorpo secundário conjugado com o agente citotóxico DM1. Os níveis de internalização de anticorpos são medidos pela morte celular, que é indicada por uma perda de intensidade de fluorescência (medida em RLU). Os dados são representados graficamente como RLU de células que expressam CD73 contra a concentração de anticorpos. Os dados de dois experimentos são mostrados.

[319] Figuras 20A e 20B são um conjunto de gráficos que mostram a capacidade de um anticorpo anti-CD73 (BA025), uma proteína de fusão armadilha anti-CD73-TGFB (BAO37), um anticorpo de controle de isótipo, uma armadilha de isótipo-TGFB e um anti-CD73 competente para Fc para ativar os receptores FcyR em células Jurkat contendo um construto repórter NFAT-luciferase e expressando FCyRIIA (H131) (Figura 20A) ou Jurkat FCyRIIIA (V158) (Figura 20B), em cada caso na presença de células CHO que expressam CD73. À ativação do receptor FcyR é representada graficamente como níveis de luminescência (medidos em RLU) em relação aos níveis na ausência de anticorpo.

[320] Figura 21 é um gráfico que mostra a inibição de metástases por BAO35. O gráfico mostra o número de nódulos tumorais nos pulmões de cada camundongo implantado por via intravenosa com células tumorais EMTG6 e tratado com BAO012, BAO35 ou anticorpo de controle de isótipo.

[321] Figura 22 é um gráfico que mostra a inibição do crescimento do tumor por BAO0 12, BAO35 ou controles de isótipo. O gráfico mostra os volumes tumorais médios calculados de 5-7 camundongos/grupo implantados com células tumorais LLC e tratados com os anticorpos indicados.

[322] Figura 23 é um gráfico que mostra a inibição do crescimento do tumor por BAO0 12, BAO35 ou controles de isótipo. O gráfico mostra os volumes tumorais médios calculados de 8-10 camundongos/grupo implantados com células tumorais Detroit562 por via subcutânea e tratados com os anticorpos indicados.

[323] Figuras 24A-24D são um conjunto de gráficos que mostram a inibição do crescimento do tumor por BAO012, BAO35 ou controles de isótipo, administrados isoladamente ou em combinação com um anticorpo anti-PD-1 ou doxorrubicina. Os gráficos mostram os volumes de tumor calculados de 6-9 camundongos/grupo implantados subcutaneamente com células tumorais EMT6 e tratados com os anticorpos indicados. Figura 24A mostra dados de camundongos que não receberam um tratamento de combinação. Figura 24B mostra dados de camundongos que receberam anti-PD-1 em adição aos anticorpos indicados. Figuras 24C e 24D mostram dados de camundongos que receberam doxorrubicina em adição aos anticorpos indicados. O gráfico na Figura 24D mostra os mesmos dados que o gráfico na Figura 24C, exceto que os dados de controle de isótipo foram removidos e o eixo x foi replotado para melhor separar os dados dos diferentes grupos de tratamento.

[324] Figura 25 é um gráfico que mostra a inibição do crescimento do tumor por BA0 12, BAO35 ou controles de isótipo em combinação com etoposídeo, ou por etoposídeo sozinho. O gráfico mostra os volumes tumorais médios calculados de 5-8 camundongos/grupo implantados subcutaneamente com células tumorais CT26 e tratados com os anticorpos indicados.

5. DESCRIÇÃO DETALHADA

[325] A presente invenção fornece anticorpos que se ligam especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, CD73 de cinomolgos ou CD73 de camundongo) e antagonizam a função de CD73, por exemplo, a atividade enzimática para promover a conversão de AMP em adenosina. Também são fornecidas composições farmacêuticas que compreendem esses anticorpos, ácidos nucleicos que codificam esses anticorpos, vetores de expressão e células hospedeiras para fazer esses anticorpos e métodos de tratamento de um objeto usando esses anticorpos. Os anticorpos no presente documento descritos são particularmente úteis para aumentar as respostas imunes a um antígeno tumoral e, portanto, são úteis para o tratamento de câncer em um objeto. Todos os casos de "anticorpos isolados" no presente documento descritos são contemplados adicionalmente como anticorpos que podem ser, mas não precisam ser, isolados. Todos os casos de "polinucleotídeos isolados" descritos neste documento são contemplados adicionalmente como polinucleotídeos que podem ser, mas não precisam ser, isolados. Todos os casos de "anticorpos" no presente documento descritos são contemplados adicionalmente como anticorpos que podem ser, mas não precisam ser, isolados. Todos os casos de "polinucleotídeos" descritos neste documento são contemplados adicionalmente como polinucleotídeos que podem ser, mas não precisam ser, isolados.

5.1 Definições

[326] Conforme usado neste documento, os termos "cerca de" e "aproximadamente", quando usados para modificar um valor numérico ou faixa numérica, indicam que desvios de 5% a 10% acima (por exemplo, até 5% a 10% acima) e 5% a 10% abaixo (por exemplo, até 5% a 10% abaixo) o valor ou faixa permanece dentro do significado pretendido do valor ou faixa recitados.

[327] Tal como no presente documento utilizado, o termo "CD73" (também conhecido como ecto-5'-nucleotidase, ecto-5-NT, 5-NT e NTÕSE) refere-se a uma proteína que em humanos é codificada pelo gene NTSE. Tal como no presente documento utilizado, o termo "CD73 humana" refere-se a uma proteína CD73 codificada por um gene NT5E humano (por exemplo, um gene NT5E humano de tipo selvagem) ou um domínio extracelular de tal uma proteína. Proteínas CD73 humanas de tipo selvagem exemplares são fornecidas pelos números de acesso do GenBank'“ NP 002517.1, NP 001191742.1, AAH65937 e EAWA48635. Para esta definição e as definições de outras proteínas no presente documento, o especialista apreciará que uma proteína codificada por um gene pode estar em sua forma madura, por exemplo, com seu peptídeo sinal removido. Sequências de aminoácidos exemplares de uma proteína CD73 humana imatura são fornecidas como SEQ ID NOs: 99, 100, 129 e 130. Sequências de aminoácidos exemplares de uma proteína CD73 humana madura são fornecidas como resíduos de aminoácidos Trp27-GIn574 de SEQ ID NO: 99 e resíduos de aminoácidos Trp27-GlIn524 de SEQ ID NO: 100. Sequências de aminoácidos exemplares de um domínio extracelular de uma proteína CD73 humana madura são fornecidas como resíduos de aminoácidos Trp27-Lys547 de SEQ ID NO: 99 e Trp27 - Lys497 de SEQ ID NO: 100.

[328] Conforme usado neste documento, os termos "fator de crescimento transformador beta" e "TGFB" referem-se a qualquer uma das proteínas da família TGFB que em humanos são codificadas pelos genes TGFB1, TGFB2 e TGFB3. Tal como no presente documento utilizado, o termo "TGFB1 humano" refere-se a uma proteína de TGFB1 codificada por um gene TGFB1 humano (por exemplo, um gene TGFB1 humano de tipo selvagem). Uma proteína de TGFB1 humano de tipo selvagem exemplar é fornecida pelo número de acesso GenBank'TY NP 000651.3. Tal como no presente documento utilizado, o termo "TGFB2 humano" refere-se a uma proteína de TGFB2 codificada por um gene TGFB2 humano (por exemplo, um gene TGFB2 humano de tipo selvagem). Proteínas de TGFB2 humano de tipo selvagem exemplares são fornecidas pelos números de acesso do GenBank'TY NP 001129071.1 e NP 003229.1. Tal como no presente documento utilizado, o termo "TGFB3 humano" refere-se a uma proteína de TGFB3 codificada por um gene TGFB3 humano (por exemplo, um gene TGFB3 humano de tipo selvagem). Proteínas de TGFB3 humano de tipo selvagem exemplares são fornecidas pelos números de acesso do GenBank'“ NP 003230.1, NP 001316868.1 e NP 00I316867.1.

[329] Conforme usado neste documento, os termos "receptor do fator de crescimento transformador beta" e "receptor de TGFB" referem- se a qualquer uma das proteínas da família de receptores de TGFB que em humanos são codificados pelo genes TGFBR1, TGFBR2 e TGFEBR3. Tal como no presente documento utilizado, o termo "TGFBR1 humano" refere-se a uma proteína de TGFBR1 codificada por um gene TGFBR1 humano (por exemplo, um gene TGFBR1 humano de tipo selvagem). Proteínas de TGFBR1 humano de tipo selvagem exemplares são fornecidas pelos números de acesso do GenBank'Y NP 004603.1, NP 001124388.1 e NP 0012931391. Tal como no presente documento utilizado, o termo "TGFB2 humano" refere-se a uma proteína de TGFB2 codificada por um gene TGFB2 humano (por exemplo, um gene TGFB2 humano de tipo selvagem). Proteínas de TGFB2 humano de tipo selvagem exemplares são fornecidas pelos números de acesso do GenBank'?y NP 001129071.1 e NP 003229.1.Tal como no presente documento utilizado, o termo "TGFB3 humano" refere-se a uma proteína de TGFB3 codificada por um gene TGFB3 humano (por exemplo, um gene TGFB3 humano de tipo selvagem). Proteínas de TGFB3 humano de tipo selvagem exemplares são fornecidas pelos números de acesso GenBank'" NR 003230.1, NR 001316868.1 e NP 001316867.1.

[330] Conforme usado neste documento, os termos "fator de crescimento endotelial vascular" e "VEGF" referem-se a qualquer uma das proteínas da família VEGF que em humanos são codificadas pelos genes VEGFA, VEGFB, VEGFC e VEGFD. Tal como no presente documento utilizado, o termo "VEGF-A humano" refere-se a uma proteína de VEGF-A codificada por um gene VEGFA humano (por exemplo, um gene VEGFA humano de tipo selvagem). Proteínas de VEGF-A humano de tipo selvagem exemplares são fornecidas pelos números de acesso do GenBank'TY NP 001020537.2, NR 001020538.2, NR 001020539.2, NP 001020540.2, NP 001020541.2, NP 001/028928.1, NP 0011/65093.1, NP 001165094.1, NP 001165095,1, NP 001165096.1, NP 001165097,1, NP 001165098.1, NP 001165099.1, NP 001165100,1, NR 001165101.1, NR 001191313.1, NR 0011913141, NR 001273973.1, NR 001303939.1 e NP 003367.4. Tal como no presente documento utilizado, o termo "VEGF-B humano" refere-se a uma proteína de VEGF-B codificada por um gene VEGFB humano (por exemplo, um gene VEGFB humano de tipo selvagem). Proteínas de VEGF-B humano de tipo selvagem exemplares são fornecidas pelos números de acesso do GenBank'TY NP 00/230662.1 e NP 003368.1. Tal como no presente documento utilizado, o termo "VEGF-C humano" refere-se a uma proteína de VEGF- C codificada por um gene VEGFC humano (por exemplo, um gene VEGFC humano de tipo selvagem). Proteínas de VEGF-C humano de tipo selvagem exemplares são fornecidas pelo número de acesso do GenBank'yY NP 005420.1. Tal como no presente documento utilizado, o termo "VEGF-D humano" refere-se a uma proteína de VEGF-D codificada por um gene VEGFD humano (por exemplo, um gene VEGFD humano de tipo selvagem). Proteínas de VEGF-D humano de tipo selvagem exemplares são fornecidas pelo GenBank'Y número de acesso NP 004460.1.

[331] Tal como no presente documento utilizado, os termos "anticorpo" e "anticorpos" incluem anticorpos de comprimento completo, fragmentos de ligação a antígeno de anticorpos de comprimento completo, e moléculas compreendendo CDRs de anticorpos, regiões VH e/ou regiões VL. Exemplos de anticorpos incluem, sem limitação, anticorpos monoclonais, anticorpos produzidos de forma recombinante, anticorpos monoespecíficos, anticorpos multiespecíficos (incluindos anticorpos biespecíficos), anticorpos humanos, anticorpos humanizados, anticorpos quiméricos, imunoglobulinas, anticorpos sintéticos, anticorpos tetraméricos compreendendo moléculas de duas cadeias pesadas e duas cadeias leves, um monômero de cadeia leve de anticorpo, um monômero de cadeia pesada de anticorpo, um dímero de cadeia leve de anticorpo, um dímero de cadeia pesada de anticorpo, um par de cadeia leve de anticorpo-cadeia pesada, intracorpos, anticorpos heteroconjugados, conjugados anticorpo-droga, anticorpos de domínio único, anticorpos monovalentes, anticorpos de cadeia simples ou Fvs de cadeia única (scFv), anticorpos camelizados, corpos de afinidade, fragmentos Fab, fragmentos F(ab')2, Fvs ligados por dissulfeto (sdFv), anticorpos anti-idiotípico (anti-id) (incluindo, por exemplo, anticorpos anti-anti-ld) e fragmentos de ligação a antígeno de qualquer um dos acima, e conjugados ou proteínas de fusão compreendendo qualquer um dos acima. Em certas modalidades, os anticorpos no presente documento descritos referem-se a populações de anticorpos policlonais. Os anticorpos podem ser de qualquer tipo (por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA ou IgY), qualquer classe (por exemplo, I9G1, I9G2, I19G3, IgG4, IgA1, ou IgA2), ou qualquer subclasse (por exemplo, IgG1, IgG2a ou IgG2b) de molécula de imunoglobina. Em certas modalidades, os anticorpos no presente documento descritos são anticorpos IgG, ou uma classe (por exemplo, IgG1 ou IgG4 humana) ou subclasse dos mesmos. Em uma modalidade específica, o anticorpo é um anticorpo monoclonal humanizado. Em outra modalidade específica, o anticorpo é um anticorpo monoclonal humano. Em certas modalidades, um anticorpo, conforme descrito neste documento, compreende um anticorpo de comprimento completo (por exemplo, um anticorpo de comprimento completo que se liga especificamente a CD73), ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, ligado a uma porção de ligação a ligando que se liga especificamente a uma molécula diferente de CD73 (por exemplo, uma porção de ligação a ligando que se liga especificamente a TGFB ou VEGF, por exemplo, uma porção de ligação a ligando compreendendo um ou mais ectodomínios de um receptor de TGFB ou receptor de VEGF).

[332] Tal como no presente documento utilizado, os termos "região VH" e "região VL" referem-se, respectivamente, a regiões variáveis de cadeia leve e pesada de anticorpo único, compreendendo FR (Regiões de Estrutura) 1, 2, 3 e 4 e CDR (Regiões de Determinação de Complementaridade) 1, 2 e 3 (vide Kabat et a/., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest (NIH Publication No. 91-3242, Bethesda), que é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade).

[333] Conforme usado neste documento, o termo "CDR" ou "região determinante de complementaridade" significa os sítios de combinação de antígeno não contíguos encontrados dentro da região variável de ambos os polipeptídeos de cadeia pesada e leve. Estas regiões particulares foram descritas por Kabat et a/l., J. Biol. Chem. 252, 6609- 6616 (1977) e Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest. (1991), por Chothia et a/., J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987) e por MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996), todos os quais são no presente documento incorporados por referência em sua totalidade, onde as definições incluem sobreposição ou subconjuntos de resíduos de aminoácidos quando comparados uns com os outros. Em certas modalidades, o termo "CDR" é uma CDR conforme definido por MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996) e Martin A. "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains," em Antibody Engineering, Kontermann e Dubel, eds., Capítulo 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001). Em certas modalidades, o termo "CDR" é uma CDR conforme definida por Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977) e Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest. (1991). Em certas modalidades, as CDRs de cadeia pesada e as CDRs de cadeia leve de um anticorpo são definidas usando diferentes convenções. Em certas modalidades, CDRs de cadeia pesada e/ou CDRs de cadeia leve são definidas por meio da realização de análise estrutural de um anticorpo e da identificação de resíduos na (s) região (s) variável (s) prevista (s) para fazer contato com uma região de epítopo de uma molécula alvo (por exemplo, humana e/ou CD73 de cinomolgos). CDRH1, CDRH2 e CDRH3 denotam as CDRs de cadeia pesada e CDRL1, CDRL2 e CDRL3 denotam as CDRs de cadeia leve.

[334] Tal como no presente documento utilizado, o termo "resíduos de aminoácidos de estrutura (FR)" refere-se aos aminoácidos na região de estrutura de uma região variável de anticorpo. O termo "região estrutural" ou "região FR", conforme usado neste documento, inclui os resíduos de aminoácidos que fazem parte da região variável, mas não fazem parte das CDRs (por exemplo, usando a definição de Kabat ou MacCallum de CDRs).

[335] Conforme usado neste documento, os termos "região variável" e "domínio variável" são usados indistintamente e são comuns na técnica. A região variável refere-se tipicamente a uma porção de um anticorpo, geralmente, uma porção de uma cadeia leve ou pesada, tipicamente cerca do terminal amino 110 a 120 aminoácidos ou 110 a 125 aminoácidos na cadeia pesada madura e cerca de 90 a 115 aminoácidos na cadeia leve madura, que diferem extensivamente na sequência entre os anticorpos e são usados na ligação e especificidade de um anticorpo particular para seu antígeno particular. A variabilidade na sequência está concentrada nas regiões chamadas regiões determinantes de complementaridade (CDRs), enquanto as regiões mais altamente conservadas no domínio variável são chamadas de regiões estruturais (FR). Sem desejar estar limitado por qualquer mecanismo ou teoria particular, acredita-se que as CDRs das cadeias leve e pesada são as principais responsáveis pela interação e especificidade do anticorpo com o antígeno. Em certas modalidades, a região variável é uma região variável humana. Em certas modalidades, a região variável compreende CDRs de roedores ou murinos e regiões estruturais humanas (FRs). Em modalidades particulares, a região variável é uma região variável de primata (por exemplo, primata não humano). Em certas modalidades, a região variável compreende CDRs de roedores ou murinos e regiões estruturais (FRs) de primatas (por exemplo, primatas não humanos).

[336] Os termos "VL" e "domínio VL" são usados indistintamente para se referir à região variável de cadeia leve de um anticorpo.

[337] Os termos "VH" e "domínio VH" são usados indistintamente para se referir à região variável de cadeia pesada de um anticorpo.

[338] Conforme usado neste documento, os termos "região constante" e "domínio constante" são intercambiáveis e são comuns na técnica. A região constante é uma porção de anticorpo, por exemplo, uma porção de terminal carboxila de uma cadeia leve e/ou pesada que não está diretamente envolvida na ligação de um anticorpo ao antígeno, mas que pode exibir várias funções efetoras, como a interação com um receptor Fc (por exemplo, receptor Fc gama). A região constante de uma molécula de imunoglobulina geralmente tem uma sequência de aminoácidos mais conservada em relação a um domínio variável de imunoglobulina.

[339] Conforme usado neste documento, o termo "cadeia pesada" quando usado em referência a um anticorpo pode se referir a qualquer tipo distinto, por exemplo, alfa (a), delta (5), épsilon (e), gama (y) e mu (4), com base na sequência de aminoácidos do domínio constante, que dá origem às classes de anticorpos IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, respectivamente, incluindo subclasses de IgG, por exemplo, IgG1, IgG2, IgGv e IgG4.

[340] Como usado no presente documento, o termo "cadeia leve" quando usado em referência a um anticorpo pode se referir a qualquer tipo distinto, por exemplo, kappa (k) ou lambda (A) com base na sequência de aminoácidos dos domínios constantes. As sequências de aminoácidos de cadeia leve são bem conhecidas na área. Em modalidades específicas, a cadeia leve é uma cadeia leve humana.

[341] Conforme usado neste documento, o termo "sistema de numeração EU" refere-se à convenção de numeração EU para as regiões constantes de um anticorpo, conforme descrito em Edelman, GM et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969) e Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, 5º edição, 1991, cada um dos quais é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade.

[342] Conforme usado neste documento, o termo "porção de ligação" refere-se a uma porção que tem a capacidade de se ligar especificamente a uma molécula ou complexo alvo. A porção de ligação pode compreender uma pequena molécula, peptídeo, peptídeo modificado (por exemplo, peptídeos com resíduos de aminoácidos não naturais e/ou peptídeos grampeados), polipeptídeo, proteína, anticorpo, fragmento de anticorpo, scFv, polipeptídeo contendo Fc, anticorpo de fusão, ligando, aptâmero, ácido nucleico, variantes dos mesmos ou qualquer combinação dos mesmos. Em certas modalidades, a porção de ligação compreende um domínio de uma proteína natural ou uma variante da mesma, em que a proteína natural se liga à molécula alvo ou complexo por meio do domínio. Por exemplo, o termo "porção de ligação a TGFB" refere-se a uma porção que se liga especificamente a uma ou mais proteínas da família TGFB (por exemplo, TGFB1, TGFB2 ou TGFB3), e em certas modalidades pode compreender um domínio extracelular de um receptor de TGFB (por exemplo, TGFBR1, TGFBR2 ou TGFBR3). O termo "porção de ligação a VEGF" refere-se a uma porção que se liga especificamente a uma ou mais proteínas da família VEGF (por exemplo, VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C ou VEGF-D), e em certas modalidades pode compreendem um domínio extracelular de um receptor VEGF (por exemplo, VEGFR1, VEGFR2 ou VEGFR3).

[343] "Afinidade de ligação" geralmente se refere à força da soma total de interações não covalentes entre um único sítio de ligação de uma molécula (por exemplo, um anticorpo) e seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno). A menos que indicado de outra forma, tal como no presente documento utilizado, "afinidade de ligação" refere-se à afinidade de ligação intrínseca que reflete uma interação 1:1 entre membros de um par de ligação (por exemplo, anticorpo e antígeno). À afinidade de uma molécula X por seu parceiro Y geralmente pode ser representada pela constante de dissociação (Kp). A afinidade pode ser medida e/ou expressa de várias maneiras conhecidas na área, incluindo, mas não se limitando a, constante de dissociação de equilíbrio (Ko) e constante de associação de equilíbrio (Ka). A KD é calculada a partir do quociente de koff/kOn, enquanto Ka é calculada a partir do quociente de kon/koff. kon refere-se à constante de velocidade de associação de, por exemplo, um anticorpo a um antígeno, e koff refere- se à constante de velocidade de dissociação de, por exemplo, um anticorpo para um antígeno. O kon e koff podem ser determinadas por técnicas conhecidas de um versado comum na técnica, tais como BIAcore& ou KinExA. Conforme usado neste documento, uma "afinidade inferior" se refere a uma Kp maior.

[344] Conforme usado neste documento, o termo "ligação máxima" refere-se ao sinal máximo (expresso em unidades de ressonância (RU)) observado para a ligação de um antígeno (por exemplo, uma proteína CD73) em uma determinada concentração a um anticorpo (por exemplo, um anticorpo anti-CD73) em um ensaio de ligação de ressonância plasmônica de superfície (por exemplo, um ensaio de ligação de ressonância plasmônica de superfície descrito na seção 6.5.2 deste documento).

[345] Tal como no presente documento utilizado, no contexto de afinidade de ligação, a afinidade de ligação de um anticorpo de teste para um primeiro antígeno é "substancialmente reduzida" em relação à afinidade de ligação do anticorpo de teste para um segundo antígeno se a afinidade de ligação do anticorpo de teste para o primeiro antígeno for reduzida em pelo menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90% em relação à afinidade de ligação do anticorpo de teste para o segundo antígeno, por exemplo, em um determinado experimento, ou usando valores médios de experimentos múltiplos, conforme avaliado por, por exemplo, um ensaio de afinidade de ligação no presente documento descrito. Conforme usado neste documento, no contexto de ligação máxima, a ligação entre um anticorpo de teste e um primeiro antígeno é "substancialmente reduzida" em relação à ligação máxima entre o anticorpo de teste e um segundo antígeno se a ligação máxima entre o anticorpo de teste e o primeiro antígeno é reduzida em pelo menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90% em relação à ligação máxima entre o anticorpo de teste e o segundo antígeno, por exemplo, em um determinado experimento, ou usando valores médios de vários experimentos, conforme avaliado por, por exemplo, um ensaio de ligação no presente documento descrito.

[346] Conforme usado neste documento, os termos "se liga especificamente", "reconhece especificamente", "se liga imunoespecificamente" e "reconhece imunoespecificamente" são termos análogos no contexto de anticorpos e se referem a moléculas que se ligam a um antígeno (por exemplo, epítopo ou complexo imune) como tal ligação é entendida por um versado na técnica. Por exemplo, uma molécula que se liga especificamente a um antígeno pode se ligar a outros peptídeos ou polipeptídeos, geralmente com afinidade inferior conforme determinado por, por exemplo, imunoensaios, BIAcoreO, Instrumento KinExA 3000 (Sapidyne Instruments, Boise, ID), ou outros ensaios conhecidos na técnica. Em uma modalidade específica, as moléculas que se ligam especificamente a um antígeno se ligam ao antígeno com uma Ka que é pelo menos 2 logs (por exemplo, fatores de 10), 2,5 logs, 3 logs, 4 logs ou mais do que a Ka quando as moléculas se ligam não especificamente para outro antígeno. O especialista apreciará que um anticorpo, conforme descrito neste documento, pode ligar-se especificamente a mais de um antígeno (por exemplo, através de diferentes regiões da molécula de anticorpo). Por exemplo, um anticorpo, como no presente documento descrito, pode ligar-se especificamente a CD73 e TGFB ou ligar-se especificamente a CD73 e

VEGF.

[347] Conforme usado neste documento, o termo "cadeia de imunoglobulina" refere-se a um polipeptídeo de um anticorpo que compreende um anticorpo VH ou VL, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Uma cadeia de imunoglobulina pode compreender, por exemplo, um VH, um VL, uma cadeia pesada de anticorpo de comprimento completo, uma cadeia leve de anticorpo de comprimento completo ou um fragmento de ligação ao antígeno de qualquer um dos precedentes.

[348] Conforme usado neste documento, o termo "ligado a" refere- se à ligação covalente ou não covalente entre duas moléculas ou porções. O especialista apreciará que quando uma primeira molécula ou porção está ligada a uma segunda molécula ou porção, a ligação não precisa ser direta, mas em vez disso, pode ser por meio de uma molécula ou porção interveniente. Por exemplo, quando uma região variável de cadeia pesada de um anticorpo de comprimento completo está ligada a uma porção de ligação a ligando, a porção de ligação a ligando pode se ligar a uma região constante (por exemplo, uma região constante de cadeia pesada) do anticorpo de comprimento completo (por exemplo, através de uma ligação peptídica), em vez de se ligar diretamente à região variável de cadeia pesada.

[349] Em outra modalidade específica, as moléculas que se ligam especificamente a um antígeno não apresentam reação cruzada com outras proteínas em condições de ligação similares. Em outra modalidade específica, as moléculas que se ligam especificamente a CD73 não apresentam reação cruzada com outras proteínas não CD73. Em uma modalidade específica, é fornecido no presente documento um anticorpo que se liga a CD73 (por exemplo, CD73 humana) com maior afinidade do que a outro antígeno não relacionado. Em certas modalidades, é fornecido no presente documento um anticorpo que se liga a CD73 (por exemplo, CD73 humana) com 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou afinidade mais alta do que outro antígeno não relacionado, conforme medido por, por exemplo, um radioimunoensaio, ressonância plasmônica de superfície ou ensaio de exclusão cinética. Em uma modalidade específica, a extensão da ligação de um anticorpo anti- CD73 no presente documento descrito a uma proteína não CD73 não relacionada é inferior a 10%, 15% ou 20% da ligação do anticorpo à proteina “CD73 conforme medido por; por exemplo, um radioimunoensaio.

[350] Conforme usado neste documento, um "epítopo" é um termo na técnica e se refere a uma região localizada de um antígeno ao qual um anticorpo pode se ligar especificamente. Um epítopo pode ser, por exemplo, aminoácidos contíguos de um polipeptídeo (epítopo linear ou contíguo) ou um epítopo pode, por exemplo, vir junto de duas ou mais regiões não contíguas de um polipeptídeo ou polipeptídeos (epítopo conformacional, não linear, descontínuo ou não contíguo). Em certas modalidades, o epítopo ao qual um anticorpo se liga pode ser determinado por, por exemplo, espectroscopia de RMN, estudos de cristalografia de difração de raios-X, ensaios de ELISA, troca de hidrogênio/deutério acoplada com espectrometria de massa (por exemplo, espectrometria de massa de electrospray de cromatografia líquida), ensaios de varredura de oligopeptídeo baseado em arranjo (por exemplo, restrição de peptídeos usando CLIPS (Ligação Química de Peptídeos em Scaffolds) para mapear epítopos descontínuos ou conformacionais) e/ou mapeamento de mutagênese (por exemplo, mapeamento de mutagênese dirigida ao sítio). Para cristalografia de raios-X, a cristalização pode ser realizada usando qualquer um dos métodos conhecidos na técnica (por exemplo, Giegé R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A

(1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269- 1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303, cada um dos quais é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade). Anticorpo: cristais de antígeno podem ser estudados usando técnicas de difração de raios-X bem conhecidas e podem ser refinados usando software de computador como X-PLOR (Yale University, 1992, distribuído por Molecular Simulations, Inc.; vide por exemplo, Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.; U.S. 2004/0014194), e BUSTER (Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361- 423, ed Carter CW; Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323), cada um dos quais é no presente documento incorporado por referência em sua totalidade.

Os estudos de mapeamento de mutagênese podem ser realizados usando qualquer método conhecido por um versado na técnica.

Vide, por exemplo, Champe M et a/., (1995) J Biol Chem 270: 1388-1394 e Cunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085, cada um dos quais é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade, para um descrição de técnicas de mutagênese, incluindo técnicas de mutagênese por varredura de alanina.

CLIPS (Ligação Química de Peptídeos em Scaffolds) é uma tecnologia para apresentar um ou mais peptídeos em uma configuração estruturalmente restrita para se comportar como mímicos funcionais de domínios complexos de proteínas.

Vide, por exemplo, Publicação U.S.

Nos.

US 2008/0139407 Al e US 2007/099240 A1, e Patente U.S.

No. 7.972.993, cada uma das quais é no presente documento incorporada por referência em sua totalidade.

Em uma modalidade específica, o epítopo de um anticorpo é determinado usando estudos de mutagênese de varredura de alanina.

Em uma modalidade específica, o epítopo de um anticorpo é determinado usando troca de hidrogênio/deutério acoplada com espectrometria de massa. Em uma modalidade específica, o epítopo de um anticorpo é determinado usando Tecnologia de Mapeamento de Epítopo CLIPS da Pepscan Therapeutics. Em uma modalidade específica, o epítopo de um anticorpo é determinado por mutagênese de proteínas, por exemplo, gerando mutantes de troca de um antígeno com porções de seu ortólogo de outra espécie e, em seguida, testando os mutantes de troca quanto à perda de ligação do anticorpo (por exemplo, por um ensaio de ligação de células baseado em FACS, como no presente documento descrito).

[351] Conforme usado neste documento, o termo "um epítopo localizado dentro de" uma região de CD73 humana se refere a um epítopo compreendendo um ou mais dos resíduos de aminoácidos da região especificada. Em certas modalidades, o epítopo compreende cada um dos resíduos de aminoácidos localizados dentro da região especificada. Em certas modalidades, o epítopo consiste em cada um dos resíduos de aminoácidos localizados dentro da região especificada. Em certas modalidades, um ou mais resíduos de aminoácidos adicionais de CD73 humana fora da região especificada ligam-se a um anticorpo juntamente com um epítopo localizado dentro da região especificada.

[352] Tal como no presente documento utilizado, os termos "receptor de células T" e "TCR" são usados indistintamente e referem- se a TCRs ab ou yô heterodiméricos de comprimento completo, fragmentos de ligação a antígeno de TORs de comprimento completo e moléculas compreendendo CDRs de TCR ou variáveis regiões. Exemplos de TCRs incluem, mas não estão limitadas a, TORs de comprimento completo, fragmentos de ligação a antígeno de TCRs de comprimento completo, TOCRs solúveis sem regiões transmembranares e citoplasmáticas, TORs de cadeia única contendo regiões variáveis de TCRs anexados por um ligante flexível, cadeias de TCR ligadas por uma ligação dissulfeto “manipulada, TCRs monoespecíficos, TCRs multiespecíficos (incluindo TOCRs biespecíficos), fusões de TOR, TORs humanos, TCRs humanizados, TCRs quiméricos, TORs produzidos de forma recombinante e TCRs sintéticos. O termo abrange TCRs de tipo selvagem e TCRs geneticamente modificados (por exemplo, um TOR quimérico que compreende uma cadeia de TCR quimérico que inclui uma primeira porção de um TCR de uma primeira espécie e uma segunda porção de um TCR de uma segunda espécie).

[353] Conforme usado neste documento, os termos "complexo principal de histocompatibilidade" e "MHC" são usados indistintamente e referem-se a uma molécula de MHC de classe | e/ou uma molécula de MHC de classe |l.

[354] Tal como no presente documento utilizado, o termo "complexo de peptídeo-MHC" refere-se a uma molécula de MHC (MHC de classe | ou MHC de classe |1l) com um peptídeo ligado na bolsa de ligação de peptídeo reconhecida na área do MHC.

[355] Conforme usado neste documento, os termos "tratar", "tratando" e "tratamento" referem-se a medidas terapêuticas ou preventivas no presente documento descritas. Os métodos de "tratamento" usam a administração de um anticorpo a um objeto com uma doença ou distúrbio, ou predisposto a ter tal doença ou distúrbio, a fim de prevenir, curar, retardar, reduzir a gravidade ou melhorar um ou mais sintomas da doença ou distúrbio ou doença ou distúrbio recorrente, ou a fim de prolongar a sobrevivência de um objeto além do esperado na ausência de tal tratamento.

[356] Conforme usado neste documento, o termo "quantidade eficaz" no contexto da administração de uma terapia a um objeto refere- se à quantidade de uma terapia que atinge um efeito profilático ou terapêutico desejado.

[357] Conforme usado neste documento, o termo "objeto" inclui qualquer animal humano ou não humano. Em uma modalidade, o objeto é um mamífero humano ou não humano. Em uma modalidade, o objeto é um humano.

[358] A determinação da "porcentagem de identidade" entre duas sequências (por exemplo, sequências de aminoácidos ou sequências de ácido nucleico) pode ser realizada usando um algoritmo matemático. Um exemplo específico e não limitante de um algoritmo matemático utilizado para a comparação de duas sequências é o algoritmo de Karlin S & Altschul SF (1990) PNAS 87: 2264-2268, modificado como em Karlin S & Altschul SF (1993) PNAS 90: 5873-5877, cada um dos quais é incorporado neste documento por referência em sua totalidade. Esse algoritmo é incorporado nos programas NBLAST e XBLAST de Altschul SF et al., (1990) J Mol Biol 215: 403, que é no presente documento incorporado por referência em sua totalidade. As pesquisas de nucleotídeos BLAST podem ser realizadas com os parâmetros do programa de nucleotídeos NBLAST definidos, por exemplo, para pontuação = 100, comprimento de palavra = 12 para obter sequências de nucleotídeos homólogas a moléculas de ácido nucleico no presente documento descritas. As pesquisas de proteína BLAST podem ser realizadas com os parâmetros do programa XBLAST definidos, por exemplo, para pontuação 50, comprimento de palavra = 3 para obter sequências de aminoácidos homólogas a uma molécula de proteína no presente documento descrita. Para obter alinhamentos com lacunas para fins de comparação, Gapped BLAST pode ser utilizado como descrito em Altschul SF et a/., (1997) Nuc Acids Res 25: 3389-3402, que é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade. Alternativamente, PSI BLAST pode ser usado para realizar uma pesquisa iterada que detecta relações distantes entre moléculas (Id). Ao utilizar os programas BLAST, Gapped BLAST e PSI Blast, os parâmetros padrão dos respectivos programas (por exemplo, de

XBLAST e NBLAST) podem ser usados (vide, por exemplo, Centro Nacional de Informação sobre Biotecnologia (NCBI) na rede mundial, ncbi.nlm.nih.gov). Outro exemplo específico e não limitativo de um algoritmo matemático utilizado para a comparação de sequências é o algoritmo de Myers e Miller, 1988, CABIOS 4: 11-17, que é no presente documento incorporado por referência em sua totalidade. Esse algoritmo é incorporado no programa ALIGN (versão 2.0) que faz parte do pacote de software de alinhamento de sequência GCG. Ao utilizar o programa ALIGN para comparar sequências de aminoácidos, uma tabela de resíduos de peso PAM120, uma penalidade de comprimento de lacuna de 12 e uma penalidade de lacuna de 4 podem ser usadas.

[359] A porcentagem de identidade entre duas sequências pode ser determinada usando técnicas similares às descritas acima, com ou sem permitir lacunas. Ao calcular a porcentagem de identidade, normalmente apenas correspondências exatas são contadas.

[360] Conforme usado neste documento, o termo "nanopartícula de lipídio" refere-se a uma ou mais nanopartículas esféricas com um diâmetro médio dentre cerca de 10 a cerca de 1000 nanômetros e que compreendem uma matriz sólida de núcleo de lipídeo que pode solubilizar moléculas lipofílicas. Em certas modalidades, o núcleo lipídico é estabilizado por surfactantes (por exemplo, emulsificantes) e pode compreender um ou mais triglicerídeos (por exemplo, tristearina), diglicerídeos (por exemplo, bahenato de glicerol), monoglicerídeos (por exemplo, monoestearato de glicerol), ácidos graxos (por exemplo, ácido esteárico), esteroides (por exemplo, colesterol) e ceras (por exemplo, palmitato de cetila), incluindo suas combinações. Nanopartículas lipídicas são descritas, por exemplo, em Petrilli et a/., Curr Pharm Biotechnol. 15: 847-55, 2014; e Patentes U.S. Nos. 6.217.912;

6.881.421; 7.402.573; 7.404.969; 7.550.441; 7.727.969; 8.003.621;

8.691.750; 8, 871.509; 9.017.726; 9.173.853; 9.220.779; 9.227.917; e

9.278.130, cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

5.2 Anticorpos anti-CD73

[361] Em um aspecto, a presente invenção fornece anticorpos que se ligam especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, CD73 de cinomolgos ou CD73 de camundongo) e antagonizam a função de CD73. As sequências de aminoácidos de anticorpos exemplares são apresentadas na Tabela 1, no presente documento. Tabela 1. Sequências de aminoácidos de anticorpos anti-CD73 exemplares.

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO BA010 CDRHI NYWMH 1 (Kabat) BAO011 CDRHI SSWIN 2 (Kabat) BA010 CDRH2 TIYPRNSDTNYNQKFKG 3 (Kabat) BAO011 CDRH2 RIYPRNGDTNYNGKFKD 4 (Kabat) BA023 CDRH2 RIYPRAGDTNYAGKFKD 5 (Kabat) BA024 CDRH2 RIYPRSGDTNYSGKFKD (Kabat) BAO010 CDRH3 LLDYSMDY 7 (Kabat) BAO010 CDRL1 RASQDISNYLN (Kabat) BA021 CDRL1 RASQDISISLN (Kabat) BAO010 CDRL2 YTSRLHS 10 (Kabat) BAO010 CDRL3 QQGNTLPWT 11 (Kabat)

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO BA012 CDRL3 QQGNTLPLT 12 (Kabat) BA025 CDRHI GYAFSSSW 143 (IMGT unique) BA025 CDRH2 IYPRAGDT 144 (IMGT unique) BA025 CDRH3 ASLLDYSMDY 145 (IMGT unique) BA025 CDRL1 QDISNY 146 (IMGT unique) BA025 CDRL2 YTS 147 (IMGT unique) BA025 CDRL3 QQGNTLPLT 12 (IMGT unique) BA025 CDRHI GYAFSSS 148 (Chothia) BA025 CDRH2 YPRAGD 149 (Chothia) BA025 CDRH3 LLDYSMDY 7 (Chothia) BA025 CDRL1 RASQDISNYLN (Chothia) BA025 CDRL2 YTSRLHS 10 (Chothia) BA025 CDRL3 QQGNTLPLT 12 (Chothia) BA025 CDRHI ASGYAFSSSW 150 (AHo) BA025 CDRH2 IYPRAGDTNYAGKFKDQ 151 (AHo) BA025 CDRH3 LLDYSMD 152 (AHo) BA025 CDRL1 ASQDISNY 153 (AHo) BA025 CDRL2 YTSRLHSGVPSR 154 (AHo)

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO BA025 CDRL3 GNTLPL 155 (AHo) BA020 CDRHI GYAFSSSW 143 (IMGT unique) BA020 CDRH2 IYPRNGDT 156 (IMGT unique) BA020 CDRH3 ASLLDYSMDY 145 (IMGT unique) BA020 CDRL1 QDISNY 146 (IMGT unique) BA020 CDRL2 YTS 147 (IMGT unique) BA020 CDRL3 QQGNTLPLT 12 (IMGT unique) BA020 CDRHI GYAFSSS 148 (Chothia) BA020 CDRH2 YPRNGD 157 (Chothia) BA020 CDRH3 LLDYSMDY 7 (Chothia) BA020 CDRL1 RASQDISNYLN (Chothia) BA020 CDRL2 YTSRLHS 10 (Chothia) BA020 CDRL3 QQGNTLPLT 12 (Chothia) BA020 CDRHI ASGYAFSSSW 150 (AHo) BA020 CDRH2 IYPRNGDTNYNGKFKDQ 158 (AHo) BA020 CDRH3 LLDYSMD 152 (AHo) BA020 CDRL1 ASQDISNY 153 (AHo) BA020 CDRL2 YTSRLHSGVPSR 154 (AHo)

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO BA020 CDRL3 GNTLPL 155 (AHo) Sequência de X1X2WX3Xa, em que: 13 consenso de CDRHI |X1éSounN; X2éSouY; XsélouM;e Xs é Nou H Sequência 1 de XIIYPRX2X3:DTNY XaXs5KFKXs, em que: | 14 consenso de CDRH2 |X éRouT; X2éN,A,ouS; X3éGousS; XsÉéN,A,ouS; XséGouQ;e Xsé Dou G Sequência 2 de RIYPRXIGDTNYX:GKFKD, em que: 15 consenso de CDRH2 |X,éN,A,ouS;e X-éN,A,ouS Sequência de RASQDISX X2LN, em que: 16 consenso de CDRLI |X é NouL e X-éYouS Sequência de QQGNTLPXT, em que: 17 consenso de CDRL3 |XéLouW Sequência de QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKAS | 18 linhagem germinativa | GYTFTSYYIHWVKQRPGQGLEWIG Van de murino YIYPRDGSTNYNEKFKGKATLTADT mulgHV1S12 SSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCAR BAO010 Vu (murino) | XVQLOQPGTVLARPGASVKMSCKT | 19

SGYTFTNY WMHWVKQRPGQGLEW IGTIYPRNSDTNYNQKFKGKAKLTA

VTSASTAYMELSSLTNEDSAIYYCA SLLDYSMDY WGQGTSVTVSS, em que X é Q ou piroglutamato BAO011 Vu (murino) | XVQLKQSGPELVKPGASVKISCKAS | 20

GYAFSSSWINWVNQRPGKGLEWIG RIYPRNGDTNYNGKFKDRATLTAD

RSSSTAYLQLSSLTPEDSAVYFCASL LDYSMDY WGQGTSVTVSS, em que X é Q ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO BAO012 Vu (murino) | XVKLVESGPELVKPGASVKISCKAS |21

GYAFSSSWINWVNQRPGKGLEWIG RIYPRNGDTNYNGKFKDRATLTAD

RSSSTAYLQLSSLTSEDSAVYFCASL LDYSMDY WGQGTSVTVSS, em que X é E ou piroglutamato Sequência de EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS |22 linhagem germinativa | GYSFTSY WTGWVRQMPGKGLEWM Vn humano GIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADK hulgHV5-51*02 SISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAR BAO019 VnH XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS | 23 (humanizado) GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM

GRIYPRNGDTNYNGKFKDQVTISAD

KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA RLLDYSMDY WGQGTLVTVSS, em que X é E ou piroglutamato BA020 VnH XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKAS | 24 (humanizado) GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM

GRIYPRNGDTNYNGKFKDQVTISAD

KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS LLDYSMDY WGQGTLVTVSS, em que X é E ou piroglutamato BA023 VnH XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS | 25 (humanizado) GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM

GRIYPRAGDTNYAGKFKDQVTISAD

KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA RLLDYSMDY WGQGTLVTVSS, em que X é E ou piroglutamato BA024 VnH XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS | 26 (humanizado) GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM

GRIYPRSGDTNYSGKFKDQVTISAD

KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA RLLDYSMDY WGQGTLVTVSS, em que X é E ou piroglutamato BA025 VnH XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKAS | 27 (humanizado) GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM

GRIYPRAGDTNYAGKFKDQVTISAD

KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS LLDYSMDY WGQGTLVTVSS, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO BA026 Vu XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKAS | 28 (humanizado) GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM

GRIYPRSGDTNYSGKFKDQVTISAD

KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS LLDYSMDY WGQGTLVTVSS, em que X é E ou piroglutamato BAO031 Vu XVKLVESGAEVKKPGESLKISCKAS |29 (humanizado) GYAFSSSWINWVNQMPGKGLEWIG

RIYPRNGDTNYNGKFKDQVTISADK

SISTAYLQWSSLKASDTAMYYCASL LDYSMDY WGQGTLVTVSS, em que X é E ou piroglutamato BA032 Vn XVKLVESGAEVKKPGESLKISCKAS |30 (humanizado) GYAFSSSWINWVNQMPGKGLEWIG

RIYPRNGDTNYNGKFKDQVTLSAD

RSSSTAYLQWSSLKASDTAMYYCA SLLDYSMDY WGQGTLVTVSS, em que X é E ou piroglutamato Sequência de Xi VQLVOSGAEVKKPGESLKISCKX, | 31 consenso de Vn SGYAFSSSWINWVRQMPGKGLEW humanizado MGRIYPRX;GDTNYXGKFKDQVTIS

ADKSISTAYLQWSSLKASDTAMY Y CAXsLLDYSMDY WGQGTLVTVSS, em que: Xi é E ou piroglutamato; XéGouA; X; éN, A, ouS; X1éN,A,ouS;e XséRouS Sequência DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRAS |32 germinativa VL de QDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYT murino mulgKV10- | SRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISN 9% LEQEDIATYFCQQGNTLP BAO010 V1 (murino) | DIQMTQSTSSLSASLGDRVTISCRAS | 33

QDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYT SRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISN LEQEDIATYFCQQGNTLPWTFGGGT KLEIK

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO BAO011 V1 (murino) | DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRAS | 34

QDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYT SRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISN LEQEDIATYFCQQGNTLPWTFGGGT

KLEIK BAO012 V1 (murino) | DIQMTQOSTSSLSASLGDRVTISCRAS |35

QDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYT SRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISN LEQEDIATYFCQQGNTLPLTFGAGT

KLELK Sequência DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQAS | 36 germinativa VL QDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYD humano huIgK V1- ASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISS 33*01 LQPEDIATYYCQQYDNLPP BAO019 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS | 37 (humanizado) QDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYT

SRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSL QPEDIATY YCQQGNTLPLTFGQGTK

VEIK BAO021 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS | 38 (humanizado) QDISISLNWYQQKPGKAPKLLIYYTS

RLHSGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSL QPEDIATY YCQQGNTLPLTFGQGTK

VEIK BA033 VL DIQMTQTPSSLSASVGDRVTISCRAS | 39 (humanizado) QDISISLNWYQQKPGKTPKLLIYYTS

RLHSGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSL QPEDIATY YCQQGNTLPLTFGQGTK

VEIK BAO034 VL DIQMTQTTSSLSASVGDRVTISCRAS | 40 (humanizado) QDISISLNWYQQKPGKTPKLLIYYTS

RLHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSL QPEDIATYFCQQGNTLPLTFGQGTK VEIK

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Sequência de DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS | 41 consenso | de V1 QDISXIX0LNWYQQKPGKAPKLLIYY humanzado TSRLHSGVPSRFSGSGSGTDX;TFTIS

SLQPEDIATY YCQQGNTLPLTFGQG TKVEIK, em que: X1éNoul; XéYouS;e X;éFouY Sequência de DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS | 42 consenso 2 de V1 QDISXIX0LNWYQQKPGKAPKLLIYY humanizado TSRLHSGVPSRFSGSGSGTDX;TFTIS

SLQPEDIATY YCQQGNTLPLTFGQG TKVEIK, em que: XIX: é NY ou IS; e X;éFouY Região constante de — | AKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTL | 43 cadeia pesada de GCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGV IgG2a de HTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWP camundongo SQSITOCNVAHPASSTKVDKKIEPRGP

TIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPK IKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPD VQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDY NSTLRVVSALPIQHQODWMSGKEFK CKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAP QVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVT DFMPEDIY VEWTNNGKTELNYKNT EPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWYV ERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSR TPGK

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Região constante de =| AKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTL | 44 cadeia pesada de GCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGV IgG2a de HTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWP camundongo (sem SQSITOCONVAHPASSTKVDKKIEPRGP lisina C-terminal) TIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPK

IKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPD VQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDY NSTLRVVSALPIQHODWMSGKEFK CKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAP QVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVT DFMPEDIY VEWTNNGKTELNYKNT EPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWV ERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSR

TPG Região constante de =| AKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTL | 45 cadeia pesada de GCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGV IgG2a de HTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWP camundongo com SQSITOCNVAHPASSTKVDKKIEPRGP mutação N297A TIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPK

IKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPD VQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDY ASTLRVVSALPIQHODWMSGKEFK CKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAP QVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVT DFMPEDIY VEWTNNGKTELNYKNT EPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWV ERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSR

TPGK Região constante de =| AKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTL | 46 cadeia pesada de GCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGV IgG2a de HTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWP camundongo com SQSITOCNVAHPASSTKVDKKIEPRGP N297A mutação (sem | TIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPK lisina C-terminal) IKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPD

VQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDY ASTLRVVSALPIQHODWMSGKEFK CKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAP QVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVT DFMPEDIY VEWTNNGKTELNYKNT EPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWV ERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSR TPG

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO região constante de ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG | 47 cadeia pesada de CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV IgG1 humana HTFPAVLQOSSGLYSLSSVVTVPSSSL

GTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPK SCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQODWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVYMHEALHNHY TQKSL

SLSPGK região constante de ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG | 48 cadeia pesada IgG1 CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV humana (sem lisina HTFPAVLQOSSGLYSLSSVVTVPSSSL C-terminal) GTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPK

SCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQODWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVYMHEALHNHY TQKSL

SLSPG região constante de ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG | 49 cadeia pesada IgG1 CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV humana com N297A | HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSL mutação GTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPK

SCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYASTYRVVSVLTVLHQODWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVYMHEALHNHY TQKSL SLSPGK

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO região constante de ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG | 50 cadeia pesada IgG1 CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV humana com N297A | HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSL mutação (sem lisina GTQTYICNVYNHKPSNTKVDKRVEPK C-terminal) SCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP

PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYASTYRVVSVLTVLHQODWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVYMHEALHNHY TQKSL

SLSPG região constante de ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALG |51 cadeia pesada IgG, CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV humano HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNF

GTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVER KCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE VQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQF NSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYK CKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP MLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSP

GK região constante de ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALG | 52 cadeia pesada IgG, CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV humano (sem lisina HTFPAVLQOSSGLYSLSSVVTVPSSNF C-terminal) GTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVER

KCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE VQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQF NSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYK CKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP MLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSP G

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO região constante de ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALG | 53 cadeia pesada híbrida | CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV IgG: humana A330S- | HTFPAVLQOSSGLYSLSSVVTVPSSNF P331S/G> GTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVER

KSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ YNSTYRVVSVLTVLHQODWLNGKEY KCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSP

GK constante de cadeia ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALG | 54 pesada híbrida IgG, CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV humana A330S- HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNF P331S/G2 região (sem | GTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVER lisina C-terminal) KSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKP

KDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ YNSTYRVVSVLTVLHQODWLNGKEY KCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSP

G região constante de ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALG | 55 cadeia pesada híbrida | CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV IgG, humana HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNF N297A/G2 GTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVER

KSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ YASTYRVVSVLTVLHQODWLNGKEY KCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSP GK

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO região constante de ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALG | 56 cadeia pesada híbrida | CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV IgG: humana HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNF N297A/G, (sem lisina | GTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVER C-terminal) KSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKP

KDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ YASTYRVVSVLTVLHODWLNGKEY KCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQG NVFSCSVYMHEALHNHY TQKSLSLSP

G região constante de ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALG | 57 cadeia pesada IgGa CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV huamana com HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSL mutação S228P GTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVES

KYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDP EVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ FNSTYRVVSVLTVLHQODWLNGKEY KCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPRE PQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEG NVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSL

GK Região constante de — | ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALG | 58 cadeia pesada IgGa CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV humana com mutação | HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSL S228P (sem lisina C- | GIKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVES terminal) KYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPK

PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDP EVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ FNSTYRVVSVLTVLHQODWLNGKEY KCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPRE PQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEG NVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSL G

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Cadeia pesada de XVKLVESGPELVKPGASVKISCKAS | 63 murino de GYAFSSSWINWVNQRPGKGLEWIG commprimento RIYPRNGDTNYNGKFKDRATLTAD completo BA012 RSSSTAYLQLSSLTSEDSAVYFCASL (estrutura principal de | LDYSMDY WGQGTSVTVSSAKTTAP IgG2a de murino com | SYYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKG N297A mutação) YFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAV

LQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITC NVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCP PCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVL MISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISW FVNNVEVHTAQTQTHREDYASTLR VVSALPIQHODWMSGKEFKCKVNN KDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVL PPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPE DIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLD

SDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSY SCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK, em que X é E ou piroglutamato cadeia pesada de XVKLVESGPELVKPGASVKISCKAS | 64 murino de GYAFSSSWINWVNQRPGKGLEWIG commprimento RIYPRNGDTNYNGKFKDRATLTAD completo BA012 RSSSTAYLQLSSLTSEDSAVYFCASL (estrutura principal de | LDYSMDY WGQGTSVTVSSAKTTAP IgG2s de murino com | SYYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKG mutação N297A e YFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAV sem lisina C-terminal) | LOSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITC

NVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCP PCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVL MISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISW FVNNVEVHTAQTQTHREDYASTLR VVSALPIQHODWMSGKEFKCKVNN KDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVL PPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPE DIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLD

SDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSY SCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPG, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO cadeia pesada XVQLQQPGTVLARPGASVKMSCKT | 65 quimérica de SGYTFTNY WMHWVKQRPGQGLEW comprimento IGTIYPRNSDTINYNQKFKGKAKLTA completo BA013 VTSASTAYMELSSLTNEDSAIYYCA (domínio variável de | SLLDYSMDY WGQGTSVTVSSASTK murino + domínio GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV constante de IgG1 KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP humana com N297A | AVLQOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT mutação) YICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK

THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY ASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG

NVFSCSVYMHEALHNHY TQKSLSLSP GK, em que X é Q ou piroglutamato Cadeia pesada XVQLQQPGTVLARPGASVKMSCKT quimérica de SGYTFTNY WMHWVKQRPGQGLEW comprimento IGTIYPRNSDTINYNQKFKGKAKLTA completo BA013 VTSASTAYMELSSLTNEDSAIYYCA (domínio variável de | SLLDYSMDY WGQGTSVTVSSASTK murino + domínio GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV constante de IgG1 KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP humana com N297A | AVLQOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT mutação e sem lisina | YICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK C-terminal) THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK

DTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY ASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG

NVFSCSVYMHEALHNHY TQKSLSLSP G, em que X é Q ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Cadeia pesada XVQLKQSGPELVKPGASVKISCKAS | 67 quimérica de GYAFSSSWINWVNQRPGKGLEWIG comprimento RIYPRNGDTNYNGKFKDRATLTAD completo BA014 RSSSTAYLQLSSLTPEDSAVYFCASL (domínio variável de | LDYSMDYWGQGTSVTVSSASTKGP murino + domínio SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKD constante de IgG] YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV humana com N297A | LOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI mutação) CNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKT

HTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYAS TYRVVSVLTVLHODWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV

FSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK , em que X é Q ou piroglutamato Cadeia pesada XVQLKQSGPELVKPGASVKISCKAS quimérica de GYAFSSSWINWVNQRPGKGLEWIG comprimento RIYPRNGDTNYNGKFKDRATLTAD completo BA014 RSSSTAYLQLSSLTPEDSAVYFCASL (domínio variável de | LDYSMDYWGQGTSVTVSSASTKGP murino + domínio SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKD constante de IgG] YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV humana com N297A | LOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI mutação e sem lisina | CNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKT C-terminal) HTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKD

TLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYAS TYRVVSVLTVLHODWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL

DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPG, em que X é Q ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Cadeia pesada XVKLVESGPELVKPGASVKISCKAS quimérica de GYAFSSSWINWVNQRPGKGLEWIG comprimento RIYPRNGDTNYNGKFKDRATLTAD completo BA015 RSSSTAYLQLSSLTSEDSAVYFCASL (domínio variável de | LDYSMDYWGQGTSVTVSSASTKGP murino + domínio SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKD constante de IgG] YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV humana com N297A | LOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI mutação) CNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKT

FSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK , em que X é E ou piroglutamato Cadeia pesada XVKLVESGPELVKPGASVKISCKAS |70 quimérica de GYAFSSSWINWVNQRPGKGLEWIG comprimento RIYPRNGDTNYNGKFKDRATLTAD completo BA015 RSSSTAYLQLSSLTSEDSAVYFCASL (domínio variável de | LDYSMDYWGQGTSVTVSSASTKGP murino + domínio SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKD constante de IgG] YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV humana com N297A | LOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI mutação e sem lisina | CNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKT C-terminal) HTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKD

DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPG, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Cadeia pesada XVKLVESGPELVKPGASVKISCKAS |71 quimérica de GYAFSSSWINWVNQRPGKGLEWIG comprimento RIYPRNGDTNYNGKFKDRATLTAD completo BA016 RSSSTAYLQLSSLTSEDSAVYFCASL (região variável de LDYSMDY WGQGTSVTVSSASTKGP murino + região SVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDY constante de IgG2 FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL humana) QSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTC

NVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECP PCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIS RTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRV VSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSN KGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTL PPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD

GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVEFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPGK, em que X é E ou piroglutamato Cadeia pesada XVKLVESGPELVKPGASVKISCKAS |72 quimérica de GYAFSSSWINWVNQRPGKGLEWIG comprimento RIYPRNGDTNYNGKFKDRATLTAD completo BA016 RSSSTAYLQLSSLTSEDSAVYFCASL (região variável de LDYSMDY WGQGTSVTVSSASTKGP murino + região SVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDY constante de IgG2 FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL humana e sem lisina — | QSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTC C-terminal) NVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECP

PCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIS RTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRV VSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSN KGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTL PPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSD

GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVEFSCS VMHEALHNHYTQKSLSLSPG, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Cadeia pesada XVKLVESGPELVKPGASVKISCKAS |73 quimérica de GYAFSSSWINWVNQRPGKGLEWIG comprimento RIYPRNGDTNYNGKFKDRATLTAD completo BA017 RSSSTAYLQLSSLTSEDSAVYFCASL (região variável de LDYSMDY WGQGTSVTVSSASTKGP murino + IgG1- SVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDY A330S-P331S FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL humana/Região QSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTC constante híbrida de — | NVDHKPSNTKVDKTVERKSCVECPP 1g8G2) CPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISR

TPEVTCVVVDVSHEDPEVKFENWYV DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVV SVLTVLHQODWLNGKEYKCKVSNKA LPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS REEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF

FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSPGK, em que X é E ou piroglutamato Cadeia pesada XVKLVESGPELVKPGASVKISCKAS |74 quimérica de GYAFSSSWINWVNQRPGKGLEWIG comprimento RIYPRNGDTNYNGKFKDRATLTAD completo BA017 RSSSTAYLQLSSLTSEDSAVYFCASL (região variável de LDYSMDY WGQGTSVTVSSASTKGP murino + IgG1- SVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDY A330S-P331S FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL humana/Região QSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTC constante híbrida de — | NVDHKPSNTKVDKTVERKSCVECPP IgG2 e sem lisina C- | CPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISR terminal) TPEVTCVVVDVSHEDPEVKFENWYV

DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVV SVLTVLHQODWLNGKEYKCKVSNKA LPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS REEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAV EWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF

FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSPG, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Cadeia pesada XVKLVESGPELVKPGASVKISCKAS |75 quimérica de GYAFSSSWINWVNQRPGKGLEWIG comprimento RIYPRNGDTNYNGKFKDRATLTAD completo BA018 RSSSTAYLQLSSLTSEDSAVYFCASL (região variável de LDYSMDY WGQGTSVTVSSASTKGP murino + IgG1- SVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDY N297A FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL humana/Região QSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTC constante híbrida de — | NVDHKPSNTKVDKTVERKSCVECPP 1g8G2) CPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISR

TPEVTCVVVDVSHEDPEVKFENWYV DGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVV SVLTVLHQODWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSV MHEALHNHYTQKSLSLSPGK, em que X é E ou piroglutamato Cadeia pesada XVKLVESGPELVKPGASVKISCKAS |76 quimérica de GYAFSSSWINWVNQRPGKGLEWIG comprimento RIYPRNGDTNYNGKFKDRATLTAD completo BA018 RSSSTAYLQLSSLTSEDSAVYFCASL (região variável de LDYSMDY WGQGTSVTVSSASTKGP murino + IgG1- SVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDY N297A FPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL humana/Região QSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTC constante híbrida de — | NVDHKPSNTKVDKTVERKSCVECPP IgG2 e sem lisina C- | CPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISR terminal) TPEVTCVVVDVSHEDPEVKFENWYV

DGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVV SVLTVLHQODWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS

FFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSV MHEALHNHYTQKSLSLSPG, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS | 77 humanizada de GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM comprimento GRIYPRNGDTNYNGKFKDQVTISAD completo BA019 KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA (estrutura principal de | RLLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTK IgG1 humana com GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV N297A mutação) KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP

AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY ASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG

NVFSCSVYMHEALHNHY TQKSLSLSP GK, em que X é E ou piroglutamato Cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS | 78 humanizada de GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM comprimento GRIYPRNGDTNYNGKFKDQVTISAD completo BA019 KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA (estrutura principal de | RLLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTK IgG1 humana com GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV N297A mutação e KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP sem lisina C-terminal) | AVLOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT

YICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY ASTYRVVSVLTVLHODWLNGKEYK CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG

NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP G, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKAS | 79 humanizada de GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM comprimento GRIYPRNGDTNYNGKFKDQVTISAD completo BA020 KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS (estrutura principal de | LLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTKG IgG1 humana com PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK N297A mutação) DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA

VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKT HTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYAS TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV

FSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK , em que X é E ou piroglutamato Cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKAS humanizada de GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM comprimento GRIYPRNGDTNYNGKFKDQVTISAD completo BA020 KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS (estrutura principal de | LLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTKG IgG1 humana com PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK N297A mutação e DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA sem lisina C-terminal) | VLOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

ICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKT HTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYAS TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS humanizada de GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM comprimento GRIYPRAGDTNYAGKFKDQVTISAD completo BA023 KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA (estrutura principal de | RLLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTK IgG1 humana com GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV N297A mutação) KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP

NVFSCSVYMHEALHNHY TQKSLSLSP GK, em que X é E ou piroglutamato Cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS | 82 humanizada de GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM comprimento GRIYPRAGDTNYAGKFKDQVTISAD completo BA023 KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA (estrutura principal de | RLLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTK IgG1 humana com GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV N297A mutação e KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP sem lisina C-terminal) | AVLOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT

NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP G, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS | 83 humanizada de GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM comprimento GRIYPRSGDTNYSGKFKDQVTISAD completo BA024 KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA (estrutura principal de | RLLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTK IgG1 humana com GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV N297A mutação) KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP

NVFSCSVYMHEALHNHY TQKSLSLSP GK, em que X é E ou piroglutamato Cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS | 84 humanizada de GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM comprimento GRIYPRSGDTNYSGKFKDQVTISAD completo BA024 KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA (estrutura principal de | RLLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTK IgG1 humana com GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV N297A mutação e KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP sem lisina C-terminal) | AVLOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT

NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP G, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKAS | 85 humanizada de GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM comprimento GRIYPRAGDTNYAGKFKDQVTISAD completo BA025 KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS (estrutura principal de | LLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTKG IgG1 humana com PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK N297A mutação) DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA

FSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK , em que X é E ou piroglutamato Cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKAS humanizada de GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM comprimento GRIYPRAGDTNYAGKFKDQVTISAD completo BA025 KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS (estrutura principal de | LLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTKG IgG1 humana com PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK N297A mutação e DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA sem lisina C-terminal) | VLOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKAS | 87 humanizada de GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM comprimento GRIYPRSGDTNYSGKFKDQVTISAD completo BA026 KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS (estrutura principal de | LLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTKG IgG1 humana com PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK N297A mutação) DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA

FSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK , em que X é E ou piroglutamato Cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKAS humanizada de GYAFSSSWINWVRQMPGKGLEWM comprimento GRIYPRSGDTNYSGKFKDQVTISAD completo BA026 KSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS (estrutura principal de | LLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTKG IgG1 humana com PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK N297A mutação e DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA sem lisina C-terminal) | VLOSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Região constante de = |! RADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVV cadeia leve Igx de CFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNG murino VLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTK

DEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSF

NRNEC Cadeia leve de DIQMTQSTSSLSASLGDRVTISCRAS |92 comprimento QDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYT completo BA012 SRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISN (murino) LEQEDIATYFCQQGNTLPLTFGAGT

KLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSG GASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGS ERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSS TLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTST

SPIVKSFNRNEC Regisão constante de | RIVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVV | 93 cadeia leve Igx CLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSG humano NSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSK

ADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

SFNRGEC Cadeia leve de DIQMTQSTSSLSASLGDRVTISCRAS | 94 comprimento QDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYT completo BA013 SRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISN (quimérico; variável. | LEQEDIATYFCQQGNTLPWTFGGGT de murino + regisão — | KLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSG constante Igx TASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDN humano) ALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS

TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL

SSPVTKSFNRGEC Cadeia leve de DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRAS | 95 comprimento QDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYT completo BA014 SRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISN (quimérico; variável. | LEQEDIATYFCQQGNTLPWTFGGGT de murino + regisão — | KLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSG constante Igx TASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDN humano) ALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS

TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL SSPVTKSFNRGEC

Descrição Sequência de aminoácido SEQ ID

NO Cadeia leve de DIQMTQSTSSLSASLGDRVTISCRAS comprimento QDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYT completo BA015 SRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISN (quimérico; variável LEQEDIATYFCQQGNTLPLTFGAGT de murino + regisão KLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSG constante Igx TASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDN humano) ALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS

TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGL

SSPVTKSFNRGEC Cadeia leve de DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS | 97 comprimento QDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYT completo BA019 SRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSL (humanizado) QPEDIATY YCQQGNTLPLTFGQGTK

VEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGT ASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSS

PVTKSFNRGEC Cadeia leve de DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS comprimento QDISISLNWYQQKPGKAPKLLIYYTS completo A021 RLHSGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSL (humanizado) QPEDIATY YCQQGNTLPLTFGQGTK

PVTKSFNRGEC Tabela 2. Sequência de CDR de cadeia pesada de anticorpos anti- CD73 exemplares Anticor- | CDRH1 CDRH2 CDRH3 (SEQ ID po (SEQID NO) | (SEQ ID NO) NO)

Anticor- | CDRH1 CDRH2 CDRH3 (SEQ ID

As CDRs Vr na Tabela 2 são determinadas de acordo com Kabat.

Tabela 3. Sequências de CDR de cadeia leve de anticorpos anti- CD73 exemplares (SEQ ID NO) (SEQ ID NO) (SEQ ID NO)

(SEQ ID NO) (SEQ ID NO) (SEQ ID NO) As CDRs V. na Tabela 3 são determinadas de acordo com Kabat.

Tabela 4. Sequências de VH, VL, cadeia pesada de comprimento completo e cadeia leve de comprimento completo de anticorpos* anti-CD73 exemplares cadeia pesada de NO. Vz cadeia leve de comprimento comprimento completo completo cadeia pesada de NO. Vz cadeia leve de comprimento comprimento completo completo *Nesta tabela, um polipeptídeo de um anticorpo anti-CD73 que compreende uma porção de ligação a ligando é referido como uma cadeia pesada de comprimento completo se compreender uma cadeia pesada de comprimento completo. Tabela 5. Sequências exemplares de CD73 e membros da família.

Descrição Sequência de aminoácido SEQ

Isoforma | de CD73 | MCPRAARAPATLLLALGAVLWPAAGAWELTILHT humana NDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVARLFTKV

QQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKGAEVAH (Sequência de FMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLKEAKFP Referência NCBI: ILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEVVGIVG NP 002517.1) YTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKLKTLN

VNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGHSNT FLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVVQAY AFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPS IKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRF RECNMGNLICDAMINNNLRHTDEMFWNHVSMCIL NGGGIRSPIDERNNGTITWENLAAVLPFGGTFDLVQ LKGSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYD LSRKPGDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEVYK VILPNFLANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINVVST YISKMKVIYPAVEGRIKFSTGSHCHGSFSLIFLSLWA

VIFVLYQ Isoforma 2 de CD73 | MCPRAARAPATLLLALGAVLWPAAGAWELTILHT |100 humana NDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVARLFTKV

QQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKGAEVAH (Sequência de FMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLKEAKFP Referência NCBI: ILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEVVGIVG NP 0011917421) — | YTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKLKTLN

VNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGHSNT FLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVVQAY AFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPS IKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRF RECNMGNLICDAMINNNLRHTDEMFWNHVSMCIL NGGGIRSPIDERNNGIHVVYDLSRKPGDRVVKLDV LCTKCRVPSYDPLKMDEVYKVILPNFLANGGDGFQ MIKDELLRHDSGDQDINVVSTYISKMKVIYPAVEGR IKFSTGSHCHGSFSLIFLSLWAVIFVLYQ

Isoforma 3 de CD73 | MCPRAARAPATLLLALGAVLWPAAGAWELTILHT [129 humana NDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVARLFTKV

QQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKGAEVAH (Sequência de FMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLKEAKFP Referência NCBI: ILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEVVGIVG AAH65937) YTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKLKTLN

VNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGHSNT FLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVVQAY AFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPS IKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRF RECNMGNLICDAMINNNLRHADETFWNHVSMCIL NGGGIRSPIDERNNGTITWENLAAVLPFGGTFDLVQ LKGSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYD LSRKPGDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEVYK VILPNFLANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINVVST YISKMKVIYPAVEGRIKFSTGSHCHGSFSLIFLSLWA

VIFVLYQ Isoforma 4 de CD73 | MCPRAARAPATLLLALGAVLWPAAGAWELTILHT [130 humana NDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVARLFTKV

QQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKGAEVAH (Sequência de FMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLKEAKFP Referência NCBI: ILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEVVGIVG EAWA8635.1) YTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKLKTLN

VNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGHSNT FLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVVQAY AFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPS IKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRF RECNMGNLICDAMINNNLRHADEMFWNHVSMCIL NGGGIRSPIDERNNGIHVVYDLSRKPGDRVVKLDV LCTKCRVPSYDPLKMDEVYKVILPNFLANGGDGFQ MIKDELLRHDSGDQDINVVSTYISKMKVIYPAVEGR IKFSTGSHCHGSFSLIFLSLWAVIFVLYQ

Variant de CD73 MCPRAARAPATLLLAVGALLWSAAGAWELTILHT [101 cinomolgo 1 NDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVARLFTKV

QQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKGAEVAH (Sequência de FMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLKEAKFP Referência NCBI: ILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEVVGIVG XP 001086989.1) — | YTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKLKTLN

VNKIIALGHSGFETDKLIAQKVRGVDVVVGGHSNT FLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVVQAY AFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPS IKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRF RECNMGNLICDAMINNNLRHADEMFWNHVSMCIL NGGGIRSPIDERNNGTITWENLAAVLPFGGTFDLVQ LKGSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYD LSRKPGDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEIYKV ILPNFLANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINVVSTY ISKMKVIYPAVEGRIKFSTGSHCHGSFSLIFLSFCAVI

FVLYQ Variant de CD73 MCPRAARAPAKLLLAVGALLWSAAGAWELTILHT |131 cinomolgo 2 NDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVARLFTKV

QQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKGAEVAH (Sequência de FMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLKEAKFP Referência NCBI: ILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEVVGIVG EHH53214.1) YTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKLKTLN

VNKIIALGHSGFETDKLIAQKVRGVDVVVGGHSNT FLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVVQAY AFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPS IKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRF RECNMGNLICDAMINNNLRHADEMFWNHVSMCIL NGGGIRSPIDERNNGTITWENLAAVLPFGGTFDLVQ LKGSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYD LSRKPGDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEIYKV ILPNFLANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINVVSTY ISKMKVIYPAVEGRIKFSTGSHCHGSFSLIFLSFCAVI FVLYQ

CD73 de MRPAAAKVPKWLLLALSALLPQWPAASAWELTIL |102 camundongo HTNDVHSRLEQTSDDSTKCLNASLCVGGVARLFTK

VQQIRKEEPNVLFLDAGDQYQGTIWFTVYKGLEVA (Sequência de HFMNILGYDAMALGNHEFDNGVEGLIDPLLRNVKF Referência NCBI: PILSANIKARGPLAHQISGLFLPSKVLSVGGEVVGIV NP 035981.1) GYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEISALQPEVDKLKTL

NVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDIVVGGHSN TFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTADDGRQVPVVQA YAFGKYLGYLKVEFDDKGNVITSYGNPILLNSSIPE DATIKADINQWRIKLDNYSTQELGRTIVYLDGSTQT CRFRECNMGNLICDAMINNNLRHPDEMFWNHVSM CIVNGGGIRSPIDEKNNGTITWENLAAVLPFGGTFD LVQLKGSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHV VYDINRKPWNRVVQLEVLCTKCRVPIYEPLEMDKV YKVTLPSYLANGGDGFQMIKDELLKHDSGDQDISV VSEYISKMKVVYPAVEGRIKFSAASHYQGSFPLVIL

SFWAMILILYQ Isoforma 1 de CD73 | WELTILHTNDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGV | 141 1 com marcador His- | ARLFTKVQQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVY

KGAEVAHFMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEP LLKEAKFPILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVG DEVVGIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEV DKLKTLNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVV VGGHSNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRK VPVVQAYAFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILL NSSIPEDPSIKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLD GSSQSCRFRECNMGNLICDAMINNNLRHTDEMFW NHVSMCILNGGGIRSPIDERNNGTITWENLAAVLPF GGTFDLVQLKGSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQV GGIHVVYDLSRKPGDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPL KMDEVYKVILPNFLANGGDGFQMIKDELLRHDSGD QDINVVSTYISKMKVIYPAVEGRIKENLYFQGLEHH HHHHHHHHGGSGGLPETGGDR WELTILHTNDVHSRLEQTSDDSTKCLNASLCVGGV ARLFTKVQQIRKEEPNVLFLDAGDQYQGTIWFTVY KGLEVAHFMNILGYDAMALGNHEFDNGVEGLIDPL LRNVKFPILSANIKARGPLAHOQISGLFLPSKVLSVG GEVVGIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEISALQPE

VDKLKTLNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDIV CD73d VGGHSNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTADDGR e

QVPVVQAYAFGKYLGYLKVEFDDKGNVITSYGNPI camundongo com 142

LLNSSIPEDATIKADINQWRIKLDNYSTQELGRTIVY marcador His

LDGSTATCRFRECNMGNLICDAMINNNLRHPDEM FWNHVSMCIVNGGGIRSPIDEKNNGTITWENLAAV LPFGGTFDLVOQLKGSTLKKAFEHSVHRYGQOSTGE FLQVGGIHVVYDINRKPWNRVVQLEVLCTKCRVPI YEPLEMDKVYKVTLPSYLANGGDGFQMIKDELLKH DSGDQDISVVSEYISKMKVVYPAVEGRIKENLYFQ GLEHHHHHHHHHHGGSGGLPETGGDR WELTILHTNDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGG VARLFTKVQQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTV YKGAEVAHFMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIE PLLKEAKFPILSANIKAKGPLASQISGLALPYKVLPV GDEVVGIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQP EVDKLKTLNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDV

VVGGHSNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGR CD73 humana

KVPVVQOAYAFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPIL mutante Y158A 59

LNSSIPEDPSIKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYL com marcador His

DGSSQSCRFRECNMGNLICDAMINNNLRHTDEMF WNHVSMCILNGGGIRSPIDERNNGTITWENLAAVL PFGGTFDLVQLKGSTLKKAFEHSVHRYGOSTGEF LQVGGIHVVYDLSRKPGDRVVKLDVLCTKCRVPSY DPLKMDEVYKVILPNFLANGGDGFQMIKDELLRHD SGDQDINVVSTYISKMKVIYPAVEGRIKENLYFQGL EHHHHHHHHHHGGSGGLPETGGDR WELTILHTNDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGG VARLFTKVQQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTV YKGAEVAHFMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIE PLLKEAKFPILSANIKAKGPLASQISGLYLPAKVLPV GDEVVGIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQP EVDKLKTLNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDV

VVGGHSNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGR CD73 humana

KVPVVQOAYAFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPIL mutante YI61A

LNSSIPEDPSIKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYL com marcador His

DGSSQSCRFRECNMGNLICDAMINNNLRHTDEMF WNHVSMCILNGGGIRSPIDERNNGTITWENLAAVL PFGGTFDLVQLKGSTLKKAFEHSVHRYGOSTGEF LQVGGIHVVYDLSRKPGDRVVKLDVLCTKCRVPSY DPLKMDEVYKVILPNFLANGGDGFQMIKDELLRHD SGDQDINVVSTYISKMKVIYPAVEGRIKENLYFQGL EHHHHHHHHHHGGSGGLPETGGDR WELTILHTNDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVA RLFTKVQQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKG AEVAHFMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLK EAKFPILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLAVGDEV VGIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKL KTLNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGH

SNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVYVQA CD73 humana

YAFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPS mutante PI65SA 139

IKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRFR com marcador His

ECNMGNLICDAMINNNLRHTDEMFWNHVSMCILNG GGIRSPIDERNNGTITWENLAA VLPFGGTFDLVQLKG STLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYDLSRK PGDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEVYKVILPNF LANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINVVSTYISKMK VIYPAVEGRIKENLYFQGLEHHHHHHHHHHGGSGGL PETGGDR WELTILHTNDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVA RLFTKVQQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKG AEVAHFMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLK EAKFPILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGAEV VGIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKL KTLNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGH

SNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVYVQA CD73 humana

YAFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPS mutante DI68A 140

IKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRFR com marcador His

ECNMGNLICDAMINNNLRHTDEMFWNHVSMCILNG GGIRSPIDERNNGTITWENLAA VLPFGGTFDLVQLKG STLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYDLSRK PGDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEVYKVILPNF LANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINVVSTYISKMK VIYPAVEGRIKENLYFQGLEHHHHHHHHHHGGSGGL PETGGDR WELTILHTNDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVA RLFTKVQQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKG AEVAHFMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLK EAKFPILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEV VGIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEIAALQPEVDKL KTLNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGH

SNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVYVQA CD73 humana

YAFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPS mutante TI98A 61

IKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRFR com marcador His

ECNMGNLICDAMINNNLRHTDEMFWNHVSMCILNG GGIRSPIDERNNGTITWENLAA VLPFGGTFDLVQLKG STLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYDLSRK PGDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEVYKVILPNF LANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINVVSTYISKMK VIYPAVEGRIKENLYFQGLEHHHHHHHHHHGGSGGL PETGGDR WELTILHTNDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVA RLFTKVQQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKG AEVAHFMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLK EAKFPILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEV VGIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKL KTLNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGH

SNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRAVPVVQA CD73 humana

YAFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPS mutante K274A 62

IKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRFR com marcador His

SNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTADDGRKVPVVQ CD73 humana

AYAFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPED mutante S269A 132

PSIKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRF com marcador His

RECNMGNLICDAMINNNLRHTDEMFWNHVSMCILN GGGIRSPIDERNNGTITWENLAAVLPFGGTFDLVQLK GSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYDLSR KPGDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEVYKVILPN FLANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINVVSTYISKM KVIYPAVEGRIKENLYFQGLEHHHHHHHHHHGGSGG LPETGGDR WELTILHTNDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVA RLFTKVQQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKG AEVAHFMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLK EAKFPILSANIKAKGPLASQISGLALPAKVLAVGAEV VGIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKL

KTLNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGH CD73 humana

SNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVYVQA mutante Y158A,

YAFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPS YI61A, PI65A, 133

IKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRFR DI68A com

ECNMGNLICDAMINNNLRHTDEMFWNHVSMCILNG marcador His

GGIRSPIDERNNGTITWENLAA VLPFGGTFDLVQLKG STLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYDLSRK PGDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEVYKVILPNF LANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINVVSTYISKMK VIYPAVEGRIKENLYFQGLEHHHHHHHHHHGGSGGL PETGGDR WELTILHTNDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVA RLFTKVQQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKG AEVAHFMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLK EAKFPILSANIKAKGPLASQISGLFLPSKVLSVGGEVV GIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKLKT

LNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGHSN CD73 humana

TFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVVQAY mutante Y158F,

AFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPSI YI6IS, PI65S, 134

KADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRFRE DI168G com . CNMGNLICDAMINNNLRHTDEMFWNHVSMCILNGG marcador His

GIRSPIDERNNGTITWENLAA VLPFGGTFDLVQLKGS TLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYDLSRKP GDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEVYKVILPNFL ANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINVVSTYISKMKV IYPAVEGRIKENLYFQGLEHHHHHHHHHHGGSGGLP ETGGDR WELTILHTNDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVA RLFTKVQQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKG AEVAHFMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLK EAKFPILSANIKAKGPLAHQISGLFLPSKVLPVGDEVV GIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKLKT

LNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGHSN CD73 humana TFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVVQAY mutante S152H, AFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPSI 135 Y158F, YI61S KADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRFRE com marcador His | CNMGNLICDAMINNNLRHTDEMFWNHVSMCILNGG

GIRSPIDERNNGTITWENLAAVLPFGGTFDLVQLKGS TLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYDLSRKP GDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEVYKVILPNFL ANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINVVSTYISKMKV IYPAVEGRIKENLYFQGLEHHHHHHHHHHGGSGGLP ETGGDR WELTILHTNDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMGGVA RLFTKVQQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKG AEVAHFMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIEPLLK EAKFPILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLSVGGEV VGIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKL

KTLNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDVVVGGH CD73 humana SNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPVVQA mutante P165S, YAFGKYLGYLKIEFDERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPS 136 DI168G com IKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCRFR marcador His ECNMGNLICDAMINNNLRHTDEMFWNHVSMCILNG

GGIRSPIDERNNGTITWENLAAVLPFGGTFDLVQLKG STLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYDLSRK PGDRVVKLDVLCTKCRVPSYDPLKMDEVYKVILPNF LANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINVVSTYISKMK VIYPAVEGRIKENLYFQGLEHHHHHHHHHHGGSGGL PETGGDR WELTILHTNDVHSRLEQTSDDSTKCLNASLCVGGVA RLFTKVQQIRKEEPNVLFLDAGDQYQGTIWFTVYKG LEVAHFMNALRYDAMALGNHEFDNGVEGLIDPLLR

NVKFPILSANIKARGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEV Mouse CD73 VGIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKL mutante 1109A, KTLNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGVDIVVGGH GI11R, H154S, SNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTADDGRQVPVVQ FI60Y, S163Y, AYAFGKYLGYLKVEFDERGNVITSYGNPILLNSSIPE 137 S167P, G170D, DATIKADINQWRIKLDNYSTQELGRTIVYLDGSTQTC S200T, D298E, RFRECNMGNLICDAMINNNLRHPDEMFWNHVSMCI K299R com VNGGGIRSPIDEKNNGTITWENLAAVLPFGGTFDLVQ marcador His LKGSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYDI

NRKPWNRVVQLEVLCTKCRVPIYEPLEMDKVYKVT LPSYLANGGDGFQMIKDELLKHDSGDQDISVVSEYIS KMKVVYPAVEGRIKENLYFQGLEHHHHHHHHHHGG

SGGLPETGGDR WELTILHTNDVHSRLEQTSDDSTKCLNASLCVGGVA |138

RLFTKVQQIRKEEPNVLFLDAGDQYQGTIWFTVYKG LEVAHFMNILGYDAMALGNHEFDNGVEGLIDPLLRN VKFPILSANIKARGPLAHQISGLFLPYKVLPVGDEVV GIVGYTSKETPFLSNPGTNLVFEDEISALQPEVDKLKT

LNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQK VRGVDIVVGGHSN Mouse CD73 TFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTADDGRQVPVVQAY mutante S163Y, AFGKYLGYLKVEFDDKGNVITSYGNPILLNSSIPEDA S167P, G170D TIKADINQWRIKLDNYSTQELGRTIVYLDGSTQTCRF com marcador His | RECNMGNLICDAMINNNLRHPDEMFWNHVSMCIVN

GGGIRSPIDEKNNGTITWENLAAVLPFGGTFDLVQLK GSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHVVYDINR KPWNRVVQLEVLCTKCRVPIYEPLEMDKVYKVTLPS YLANGGDGFQMIKDELLKHDSGDQDISVVSEYISKM KVVYPAVEGRIKENLYFQGLEHHHHHHHHHHGGSG

GLPETGGDR Tabela 6. Sequências exemplares de ligantes, porções de ligação a ligando e anticorpos anti-CD73 compreendendo porções de ligação a ligando* Descrição Sequência de aminoácidos SEQ ss xo [emp E RERAREERARE Variante de domínio IPPHVQKSDVEMEAQKDEIICPSCNRTAHPLRHIN extracelular de TGFBR2 | NDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKS 1 de isoform A de CMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETV TGFRBR2 CHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFF

MCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD Variante de domínio TIPPHVQKSDVEMEAQKDEIICPSCNRTAHPLRHIN | 110 extracelular de TGFBR2 | NDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSC 2 de isoform A de MSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCH TGFRBR2 DPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCS

CSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDLLLVIFQ Variante de domínio IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVR | 111 extracelular de TGFBR2 | ESTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKN 3 de isoform B de DENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEK TGFRBR2 KKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD Variante de domínio TIPPHVQKSVYNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCD | 112 extracelular de TGFBR2 | VRESTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWR 4 de isoform B de KNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIM TGFRBR2 KEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNP

DLLLVIFQ

Descrição Sequência de aminoácidos SEQ ss ÇE Cadeia pesada de XVKLVESGPELVKPGASVKISCKASGYAFSSSWI | 113 murino de comprimento | NW VNQRPGKGLEWIGRIYPRNGDTNYNGKFKD completo BA035 RATLTADRSSSTAY LQLSSLTSEDSAVYFCASLL

DYSMDYWGQGTSVTVSSAKTTAPSVYPLAPVC GDTTGSSVTLGCLVKGY FPEPVTLTWNSGSLSSG VHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCN VAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLL GGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDD PDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYASTLRVV SALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTIS KPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVT DFMPEDIY VEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGS YFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNH HTTKSFSRTPGGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKS VNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDN QKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITL

ETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGE TFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácidos SEQ ss OE cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYAFSSSWI | 114 humanizada de NWVRQMPGKGLEWMGRIYPRNGDTNYNGKFK comprimento completo | DOVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS BA036 LLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS

SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDV SHEDPEVKFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQYAS TYRVVSVLTVLHQODWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSCG GGSGIPPHVQKSVYNNDMIVTDNNGAVKFPQLCK FCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVA VWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPK

CIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNT SNPD, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácidos SEQ ss OE cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYAFSSSWI | 115 humanizada de NWVRQMPGKGLEWMGRIYPRAGDTNYAGKFK comprimento completo | DOVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS BA037 LLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS

CIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNT SNPD, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácidos SEQ ss OE cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYAFSSSWI | 116 humanizada de NWVRQMPGKGLEWMGRIYPRNGDTNYNGKFK comprimento completo | DOVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS BA043 LLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS

SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDV SHEDPEVKFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQYAS TYRVVSVLTVLHQODWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGIPPHVQKSVNND MIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCM SNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCH

DPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMC SCSSDECNDNIIFSEEY NTSNPD, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácidos SEQ ss OE cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYAFSSSWI | 117 humanizada de NWVRQMPGKGLEWMGRIYPRAGDTNYAGKFK comprimento completo | DOVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS BA044 LLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS

Descrição Sequência de aminoácidos SEQ ss OE cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYAFSSSWI | 118 humanizada de NWVRQMPGKGLEWMGRIYPRNGDTNYNGKFK comprimento completo | DOVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS BA045 LLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS

SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDV SHEDPEVKFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQYAS TYRVVSVLTVLHQODWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGAEAAAKEAAAKAIPPHVQ KSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCD NQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAV WRKNDENIT

LETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPG ETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEY NTSNPD, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácidos SEQ ss OE cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYAFSSSWI | 119 humanizada de NWVRQMPGKGLEWMGRIYPRAGDTNYAGKFK comprimento completo | DOVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS BA046 LLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS

Descrição Sequência de aminoácidos SEQ ss OE cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYAFSSSWI | 120 humanizada de NWVRQMPGKGLEWMGRIYPRNGDTNYNGKFK comprimento completo | DOVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS BA047 LLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS

SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDV SHEDPEVKFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQYAS TYRVVSVLTVLHQODWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGGSAGSAAGSGEFIPPHVQK SVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDN QKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITL

Descrição Sequência de aminoácidos SEQ ss OE cadeia pesada XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYAFSSSWI | 121 humanizada de NWVRQMPGKGLEWMGRIYPRAGDTNYAGKFK comprimento completo | DOVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS BAO048 LLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS

ETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGE TFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD, em que X é E ou piroglutamato Domínio extracelula de SDTGRPFVEMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSP 122 VEGFRI humano NITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATY

KEIGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNT

Descrição Sequência de aminoácidos SEQ ss E cadeia pesada de XVKLVESGPELVKPGASVKISCKASGYAFSSSWI | 123 comprimento completo | NWVNQRPGKGLEWIGRIYPRNGDTNYNGKFKD BA038 (cadeia pesada RATLTADRSSSTAY LQLSSLTSEDSAVYFCASLL de anticorpo de murino | DYSMDYWGQGTSVTVSSAKTTAPSVYPLAPVC + domínio extracelula GDTTGSSVTLGCLVKGY FPEPVTLTWNSGSLSSG de VEGFR1 humano) VHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCN

VAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLL GGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDD PDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYASTLRVV SALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTIS KPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVT DFMPEDIY VEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGS YFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNH HTTKSFSRTPGGGGGSGGGGSSDTGRPFVEMYS EIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDT

LIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKEIGLLTCEATVN GHLYKTNYLTHRQTNT, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácidos SEQ ss OE cadeia pesada de XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYAFSSSWI | 124 comprimento completo | NWVRQMPGKGLEWMGRIYPRNGDTNYNGKFK BA039 1 (variável DQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS humanizada + constante | LLDYSMDY WGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPV de murino + domínio CGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSS extracelula de VEGFRI | GVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITC humano) NVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNL

LGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSED DPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYASTLRV VSALPIQHQODWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTI SKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMV TDFMPEDIY VEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDG SYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHN HHTTKSFSRTPGGGGGSGGGGSSDTGRPFVEMY SEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLD

TLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKEIGLLTCEATV NGHLYKTNYLTHRQTNT, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácidos SEQ ss OE cadeia pesada de XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYAFSSSWI | 125 comprimento completo | NWVRQMPGKGLEWMGRIYPRAGDTNYAGKFK BAO040 2 (variável DQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS humanizada + constante | LLDYSMDY WGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPV de murino + domínio CGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSS extracelula de VEGFRI | GVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITC humano) NVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNL

Descrição Sequência de aminoácidos SEQ ss OE cadeia pesada de XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYAFSSSWI | 126 comprimento completo | NWVRQMPGKGLEWMGRIYPRNGDTNYNGKFK BAO041 (humanizada) DQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS

LLDYSMDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYI CNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDV SHEDPEVKFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQYAS TYRVVSVLTVLHQODWLNGKEYKCKVSNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSSDTGRPFV EMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKF

PLDTLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKEIGLLTCE ATVNGHLYKTNYLTHRQTNT, em que X é E ou piroglutamato

Descrição Sequência de aminoácidos SEQ ss OS cadeia pesada de XVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYAFSSSWI | 127 comprimento completo | NWVRQMPGKGLEWMGRIYPRAGDTNYAGKFK BA042 (humanizada) DQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAS

PLDTLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKEIGLLTCE ATVNGHLYKTNYLTHRQTNT, em que X é E ou piroglutamato cadeia leve de DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLN 128 comprimento completo | WYQQKPGKAPKLLIY YTSRLHSGVPSRFSGSGSG BA039 (chimeric; TDFTFTISSLQPEDIATY YCQQGNTLPLTFGQGTK variável humanizada + VEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNN constante de murino) FYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDS

TYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPI

VKSFNRNEC * Nesta tabela, um polipeptídeo de um anticorpo anti-CD73 que compreende uma porção de ligação a ligando é referido como uma cadeia pesada de comprimento completo se compreender uma cadeia pesada de comprimento completo.

[362] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), o anticorpo compreendendo um domínio VH compreendendo uma, duas ou todas as três das CDRs de um Domínio VH estabelecido na Tabela 1 no presente documento. Em certas modalidades, o anticorpo compreende a CDRH1 de um domínio VH estabelecido na Tabela 1. Em certas modalidades, o anticorpo compreende a CDRH2 de um domínio VH estabelecido na Tabela 1. Em certas modalidades, o anticorpo compreende a CDRH3 de um VH domínio estabelecido na Tabela 1.

[363] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo um domínio VL compreendendo uma, duas ou todas as três das CDRs de um Domínio VL descrito na Tabela 1 no presente documento. Em certas modalidades, o anticorpo compreende a CDRL1 de um domínio VL estabelecido na Tabela 1. Em certas modalidades, o anticorpo compreende a CDRL2 de um domínio VL estabelecido na Tabela 1. Em certas modalidades, o anticorpo compreende a CDRL3 de uma VL domínio estabelecido na Tabela 1.

[364] Em certas modalidades, as CDRs de um anticorpo podem ser determinadas de acordo com Kabat et a/., J. Biol. Chem. 252, 6609- 6616 (1977) e Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest (1991), cada uma das quais é no presente documento incorporada por referência na sua totalidade. Em certas modalidades, as CDRs de cadeia leve de um anticorpo são determinadas de acordo com Kabat e as CDRs de cadeia pesada de um anticorpo são determinadas de acordo com MacCallum (supra) Em certas modalidades, CDRs de cadeia pesada e/ou CDRs de cadeia leve são definidas por meio da realização de análise estrutural de um anticorpo e da identificação de resíduos na (s) região (s) variável (s) prevista (s) para fazer contato com uma região de epítopo de uma molécula alvo (por exemplo, CD73 humana e/ou de cinomolgos).

[365] Em certas modalidades, as CDRs de um anticorpo podem ser determinadas de acordo com o esquema de numeração de Chothia, que se refere à localização de loops estruturais de imunoglobulina (vide, por exemplo, Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917; Al- Lazikani B et a/., (1997) J Mol Biol 273: 927-948; Chothia C et a/., (1992) J Mol Biol 227: 799-817; Tramontano A et a/l., (1990) J Mol Biol 215 (1): 175-82; e Patente U.S. No. 7.709.226, todas as quais são no presente documento incorporadas por referência em sua totalidade). Normalmente, ao usar a convenção de numeração de Kabat, o loop CDRH1 de Chothia está presente nos aminoácidos da cadeia pesada 26 a 32, 33 ou 34, o loop CDRH2 de Chothia está presente nos aminoácidos da cadeia pesada 52 a 56 e o loop CDRH3 de Chothia está presente nos aminoácidos de cadeia pesada 95 a 102, enquanto o loop de CDRL1 Chothia está presente nos aminoácidos da cadeia leve 24 a 34, o loop CDRL?2 de Chothia está presente nos aminoácidos da cadeia leve 50 a 56, e o loop CDRL3 de Chothia está presente nos aminoácidos da cadeia leve 89 a 97. O final do loop CDRH1 de Chothia quando numerado usando a convenção de numeração Kabat varia entre H32 e H34, dependendo do comprimento do loop (isso ocorre porque o esquema de numeração Kabat coloca as inserções em H35A e H35B; se nem 35A nem 35B estiverem presentes, o loop termina em 32; se apenas 35A estiver presente, o loop termina em 33; se ambos 35A e 35B estiverem presentes, o loop termina em 34).

[366] Em certas modalidades, as CDRs de um anticorpo podem ser determinadas de acordo com MacCallum RM et a/l., (1996) J Mol Biol 262: 732-745, no presente documento incorporado por referência na sua totalidade. Vide também, por exemplo, Martin A. "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains", em Antibody Engineering, Kontermann e Diibel, eds., Capítulo 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001), no presente documento incorporado por referência em sua totalidade.

[367] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo as CDRs VH de Chothia de um VH descrito na Tabela 1 no presente documento. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo as CDRs VL de Chothia de uma VL descrito na Tabela 1 no presente documento. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo os CDRs VH de Chothia e CDRs VL de Chothia de um anticorpo descrito na Tabela 1 no presente documento. Em certas modalidades, os anticorpos que se ligam especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) compreendem uma ou mais CDRs, em que as CDRs de Chothia e Kabat têm a mesma sequência de aminoácidos. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e compreende combinações de CDRs de Kabat e CDRs de Chothia.

[368] Em certas modalidades, as CDRs de um anticorpo podem ser determinadas de acordo com o sistema de numeração IMGT, conforme descrito em Lefranc MP, (1999) The Immunologist 7: 132-136 e Lefranc MP et a/., (1999) Nucleic Acids Res 27: 209-212, cada um dos quais é incorporado neste documento por referência em sua totalidade. De acordo com o esquema de numeração IMGT, CDRH1 está nas posições 26 a 35, CDRH?2 está nas posições 51 a 57, CDRH3 está nas posições 93 a 102, CDRL1 está nas posições 27 a 32, CDRL?2 está nas posições 50 a 52 e CDRL3 está nas posições 89 a 97. A numeração exclusiva IMGT também pode ser definida como em Lefranc MP et al., (2009) Nucleic Acids Res 37: D1006-D1012 e o banco de dados IMGT.

[369] Em certas modalidades, a presente invenção fornece anticorpos que se ligam especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e compreendem CDRs de um anticorpo descrito na Tabela 1 no presente documento, conforme determinado pelo sistema de numeração IMGT, por exemplo, conforme descrito em Lefranc MP (1999) supra e Lefranc MP et a/., (1999) supra ou Lefranc MP et a/., (2009) supra.

[370] Em certas modalidades, as CDRs de um anticorpo podem ser determinadas de acordo com o esquema de numeração AbM, que se refere a regiões hipervariáveis de ADM, que representam um compromisso entre as CDRs de Kabat e loops estruturais de Chothia, e são usados pelo software de modelagem de anticorpos ADM da Oxford Molecular (Oxford Molecular Group, Inc.), no presente documento incorporado por referência em sua totalidade. Em uma modalidade particular, a presente invenção fornece anticorpos que se ligam especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e compreendem CDRs de um anticorpo descrito na Tabela 1 no presente documento conforme determinado pelo esquema de numeração AbM.

[871] Em certas modalidades, as CDRs de um anticorpo podem ser determinadas de acordo com o sistema de numeração AHo (conforme descrito em Honegger e PIrickthun, A., J. Mol. Biol. 309: 657- 670 (2001), no presente documento incorporado por referência na sua totalidade). Em certas modalidades, a presente invenção fornece anticorpos que se ligam especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e compreendem CDRs de um anticorpo descrito na Tabela 1 no presente documento, conforme determinado pelo esquema de numeração AHo.

[372] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo as sequências de aminoácido da região de CDRH1, CDRH2 e CDRH3 de um domínio VH apresentado em SEQ ID NO: 19, 20, 21, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30, e uma região variável de cadeia leve compreendendo as sequências de aminoácidos da região CDRL1, CDRL2 e CDRL3 de um domínio VL apresentado em SEQ ID NO: 33, 34, 35, 37, 38, 39 ou 40, em que cada CDR é definida de acordo com a definição de MacCallum, a definição de Kabat, a definição de Chothia, o sistema de numeração IMGT, a definição ADM de CDR, análise estrutural ou uma combinação dos mesmos, em que a análise estrutural identifica resíduos na (s) região (s) variável (s) prevista (s) para fazer contato com uma região de epítopo de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos). Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo as sequências de aminoácidos da região CDRH1, CDRH2 e CDRH3 de um domínio VH e uma região variável de cadeia leve compreendendo as sequências de aminoácidos da região CDRL1, CDRL?2 e CDRL3 de um domínio VL, em que o domínio VH e o domínio VL compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 19 6 33; 20 e 34;21 e 35; 23 6 37; 24 e 37; 250 37;26e 37; 27 e 37;28 e 3/7; 29 e 3/7; 30e37;23e038;24e038;25e038;26e 38; 27 e 38; 28 e 38; 23 e 39; ou, 23 e 40, respectivamente, e em que cada CDR é definida de acordo com a definição de MacCallum, a definição de Kabat, a definição de Chothia, o sistema de numeração IMGT, a definição ADM de CDR, análise estrutural ou uma combinação dos mesmos, em que o a análise estrutural identifica resíduos na (s) região (s) variável (s) prevista (s) para fazer contato com uma região de epítopo de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos). Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e compreende uma combinação de CDRs definidas pela definição de Kabat e CDRs definidas por análise estrutural do anticorpo, em que o a análise estrutural identifica resíduos na (s) região (s) variável (s) prevista (s) para fazer contato com uma região de epítopo de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos).

[373] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo os seis CDRs presentes no anticorpo BAO25 descrito neste documento, conforme definido por um ou mais dos esquemas de numeração de anticorpos Kabat, IMGT (por exemplo, IMGT exclusivo), AHo ou Chothia. Em certas modalidades, o anticorpo compreende pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro ou pelo menos cinco das CDRs presentes no anticorpo BAO25. As CDRs de Kabat, IMGT esclusivo, Aho e Chothia do anticorpo BA025 são fornecidas na Tabela 1 no presente documento.

[374] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo as seis CDRs presentes no anticorpo BAO20 descrito neste documento, conforme definido por um ou mais dos esquemas de numeração de anticorpos de Kabat, IMGT (por exemplo, IMGT exclusivo), AHo ou Chothia. Em certas modalidades, o anticorpo compreende pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro ou pelo menos cinco dos CDRs presentes no anticorpo BAO020. As CDRs Kabat, IMGT exclusivo, Aho e Chothia do anticorpo BAO020 são fornecidas na Tabela 1 no presente documento.

[375] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo: (a) CDRH1 compreende a sequência de aminoácidos de X1X2WX3X4 (SEQ ID NO: 13), em que XléSouN; X2éSourY, X3élouM;e X4é NouH; (b) CDRH2 compreende a sequência de aminoácidos de X1IYPRX2X3DTNYX4X5KFKX6 (SEQ ID NO: 14), em que X1léRouT; X2é N,AouS; X3éGousS; X4é NAouS; X5éGouQ;e XeéDouG; (c) CDRH3 compreende a sequência de aminoácidos de LLDYSMDY (SEQ ID NO: 7); (d) CDRL1 compreende a sequência de aminoácidos de RASQDISX1X2LN (SEQ ID NO: 16), em que XléNoule X2éYousS; (e) CDRL2 compreende a sequência de aminoácidos de YTSRLHS (SEQ ID NO: 10); e/ou (f) CDRL3 compreende a sequência de aminoácidos de

QQGNTLPXT (SEQ ID NO: 17), em que XéLouW.

[376] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo: (a) CDRH1 compreende a sequência de aminoácidos de SSWIN (SEQ ID NO: 2); (b) CDRH2 compreende a sequência de aminoácidos de RIYPRX1IGDTNYX2GKFKD (SEQ ID NO: 15), em que X1éN AouS;e X2é N,AouS; (c) CDRH3 compreende a sequência de aminoácidos de LLDYSMDY (SEQ ID NO: 7); (d) CDRL1 compreende a sequência de aminoácidos de RASQDISX1X2LN (SEQ ID NO: 16), em que XléNoule X2éYousS; (e) CDRL2 compreende a sequência de aminoácidos de YTSRLHS (SEQ ID NO: 10); e/ou (f) CDRL3 compreende a sequência de aminoácidos de QQGNTLPLT (SEQ ID NO: 12)

[877] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende um domínio VH compreendendo as sequências de aminoácidos CDRH1, CDRH2 e CDRH3 apresentadas em SEQ ID NOs: 1,3 e7, respectivamente. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende um domínio VH compreendendo as sequências de aminoácidos CDRH1, CDRH2 e CDRH3 apresentadas em SEQ ID NOs: 2, 4 e 7, respectivamente. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende um domínio VH compreendendo as sequências de aminoácidos CDRH1, CDRH2 e CDRH3 apresentadas em SEQ ID NOs: 2, 5 e 7, respectivamente. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende um domínio VH compreendendo as sequências de aminoácidos CDRH1, CDRH2 e CDRH3 apresentadas em SEQ ID NOs: 2, 6 e 7, respectivamente. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende um domínio VL compreendendo as sequências de aminoácidos CDRL1, CDRL2 e CDRL3 apresentadas em SEQ ID NOs: 8, 10 e 11, respectivamente. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende um domínio VL compreendendo as sequências de aminoácidos CDRL1, CDRL2 e CDRL3 apresentadas em SEQ ID NOs: 9, 10 e 12, respectivamente. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende um domínio VL compreendendo as sequências de aminoácidos CDRL1, CDRL2 e CDRL3 apresentadas em SEQ ID NOs: 8, 10 e 12, respectivamente.

[378] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo regiõês CDRH1, CDRH2 e CDRH3, e uma região variável de cadeia leve que compreende as regiões CDRL1, CDRL2 e CDRL3, em que as regiões CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 1, 3, 7, 8, 10 e 11, respectivamente.

Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo regiões CDRH1, CDRH2 e CDRHB3, e uma região variável de cadeia leve que compreende as regiões CDRL1, CDRL2 e CDRL3, em que CDRH1, em que as regiões CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 2, 4, 7, 8, 10 e 11, respectivamente.

Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo regiõês CDRH1, CDRH2 e CDRH3, e uma região variável de cadeia leve que compreende as regiões CDRL1, CDRL2 e CDRL3, em que as regiões CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 2, 4, 7, 8, 10, e 12, respectivamente.

Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo regiões CDRH1, CDRH2 e CDRHB3, e uma região variável de cadeia leve compreendendo as regiões

CDRL1, CDRL2 e CDRL3, em que as regiões CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 2, 4, 7, 9, 10 e 12, respectivamente.

Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo regiões CDRH1, CDRH2 e CDRH3, e uma região variável de cadeia leve compreendendo regiões CDRL1, CDRL2 e CDRL3, em que as regiões CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 2, 5,7, 8, e 12, respectivamente.

Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo regiõêês CDRH1, CDRH2 e CDRH3, e uma região variável de cadeia leve que compreende as regiões CDRL1, CDRL2 e CDRL3, em que as regiões CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 8, 10 e 12, respectivamente.

Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo as regiões CDRH1, CDRH2 e CDRH3, e uma região variável de cadeia leve compreendendo as regiõêês CDRL1, CDRL2 e CDRL3, em que as regiões CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 2, 5, 7, 9, 10 e 12, respectivamente.

Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), em que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo regiões CDRH1, CDRH2 e CDRHB3, e uma região variável de cadeia leve compreendendo as regiões CDRL1, CDRL2 e CDRL3, em que as regiões CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 2, 6, 7, 9, 10 e 12, respectivamente.

[379] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 31. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 19-21 e 23-30. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 100% (por exemplo, pelo menos 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99%) idêntica a uma sequência de aminoácido selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 19-21 e 23-30.

[380] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 41 ou 42. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 33-35 e 37-40. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 100% (por exemplo, pelo menos 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99%) idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 33-35 e 37-40.

[381] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 31 e um região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 41 ou 42. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 19-21 e 23-30, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 33-35 e 37-40. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, ou 100% (por exemplo,, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99%) idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 19-21 e 23-30, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 100% (por exemplo, pelo menos 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99%) idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 33-35 e 37-40.

[382] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada e uma região variável de cadeia leve compreendendo as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 19 e 33; 20 e 34; 21 e 35; 23 e 37; 24 e 37; 250 37; 26 e 37; 27e3/;28e03/;29e037;30e37;23e038;24e038;25e038;26e38; 27 e 38; 28 e 38; 23 e 39; ou, 23 e 40, respectivamente. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 33. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 20 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 34. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 21, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 35. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 37. Em certa em modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 37. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 23, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 37. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 26, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 37. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 37. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 28 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 37. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 26, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 28 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 29, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 37. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 30, e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 37. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 39. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23 e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 40.

[383] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada de uma sequência de linhagem germinativa de IgHVISI2 de murino. Em certas modalidades, a sequência da linhagem germinativa de IgHVISI2 de murino é apresentada em SEQ ID NO: 18. Uma ou mais regiões selecionadas a partir da estrutura 1, estrutura 2, estrutura 3, CDRH1 e CDRH?2 (por exemplo, duas, três, quatro ou cinco destas regiões) podem ser derivadas de uma sequência da linhagem germinativa de IgHVISI2 de murino. Em uma modalidade, estrutura 1, estrutura 2, estrutura 3, CDRH1 e CDRH2 são todos derivados de uma sequência de linhagem germinativa de IGgHVISI2 de murino. Em certas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7.

[384] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada de uma sequência da linhagem germinativa

IgxV10-96 de murino. Em certas modalidades, a sequência da linhagem germinativa de IgkxV10-96 de murino é apresentada em SEQ ID NO: 32. Uma ou mais regiões selecionadas a partir da estrutura 1, estrutura 2, estrutura 3, CDRL1 e CDRL?2 (por exemplo, duas, três, quatro ou cinco dessas regiões) podem ser derivadas de uma sequência de linhagem germinativa IgkV10-96 de murino. Em uma modalidade, estrutura 1, estrutura 2, estrutura 3, CDRL1 e CDRL2 são todos derivados de uma sequência de linhagem germinativa IgkxV10-96 de murino. Em certas modalidades, a região variável de cadeia leve compreende uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 11 ou 12.

[385] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada de uma sequência de linha germinativa de IgHV1IS12 de murino (por exemplo, SEQ ID NO: 18); e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada de uma sequência de linhagem germinativa murina derivada de uma sequência de linhagem germinativa de IgkxV 10-96 de murino (por exemplo, SEQ ID NO: 32). Em certas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7, e a região variável de cadeia leve compreende uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 11 ou 12.

[386] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada de uma sequência de linhagem germinativa de

IgHV5-51 humana. Em certas modalidades, a sequência da linhagem germinativa de IgHV5-51 humana é uma sequência da linhagem germinativa de IgHV5-51*02 humana (por exemplo, compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22). Uma ou mais regiões selecionadas a partir da estrutura 1, estrutura 2, estrutura 3, CDRH1 e CDRH2 (por exemplo, duas, três, quatro ou cinco dessas regiões) podem ser derivadas de uma sequência de linhagem germinativa de IgHV5-51 humana. Em uma modalidade, estrutura 1, estrutura 2, estrutura 3, CDORH1 e CDRH?2 são todas derivadas de uma sequência de linhagem germinativa de I9gHV5-51 humana. Em certas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7.

[387] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada de uma sequência da linhagem germinativa IGKV1-33 humana (por exemplo, IGKV1-33*01, por exemplo, compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 36). Uma ou mais regiões selecionadas a partir da estrutura 1, estrutura 2, estrutura 3, CDRL1 e CDRL?2 (por exemplo, duas, três, quatro ou cinco dessas regiões) podem ser derivadas de uma sequência da linhagem germinativa humana selecionada a partir do grupo consistindo em IGKV1-33 (por exemplo, IGKV1-33*01, por exemplo, compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 36). Em uma modalidade, estrutura 1, estrutura 2, estrutura 3, CDRL1 e CDRL2 são todas derivadas de uma sequência de linhagem germinativa IGKV1-33 humana (por exemplo, IGKV1-33*01, por exemplo, compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 36). Em certas modalidades,

a região variável de cadeia leve compreende uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 12.

[388] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada de uma sequência de linhagem germinativa de IgHV5-51 humana (por exemplo, uma sequência de linhagem germinativa de IgHV5-51*02 humana, por exemplo, compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22); e uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada de uma sequência de linhagem germinativa IGKV1-33 humana (por exemplo, IGKV1-33*01, por exemplo, compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 36). Em certas modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende uma CDRH3 compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7, e a região variável de cadeia leve compreende uma CDRL3 compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 12.

[389] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que compete de forma cruzada para a ligação a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) com qualquer um dos anticorpos anti-CD73 descritos neste documento, incluindo um anticorpo que compreende as sequências de aminoácidos da região variável de cadeia pesada e região variável de cadeia leve apresentadas em SEQ ID NOs: 19 e 33; 20 e 34; 21 e 35; 23 e 37; M e 37; 256 37; 26 6 37; 27 e 3/1; 28 06 37; 29 6 37; 30 e 37; 23 e 38; MH e 38; 25 e 38; 26 e 38; 27 e 38; 28 e 38; 23 e 39; ou, 23 e 40, respectivamente. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que compete de forma cruzada para a ligação a

CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) com um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos da região variável de cadeia pesada e leve apresentadas em SEQ ID NOs: 24 e 37, respectivamente. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que compete de forma cruzada para a ligação a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) com um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos da região variável de cadeia pesada e leve apresentadas em SEQ ID NOs: 27 e 37, respectivamente.

[390] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga ao mesmo ou a um epítopo de sobreposição de CD73 (por exemplo, um epítopo de CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) como um anticorpo no presente documento descrito, por exemplo, um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos da região variável de cadeia pesada e leve apresentadas em SEQ ID NOs: 19 e 33; 20 e 34; 21 e 35; 23 e 37; M e 37; 256 37; 26 6 37; 27 e 3/1; 28 06 37; 29 6 37; 30 e 37; 23 e 38; MH e 38; 25 e 38; 26 e 38; 27 e 38; 28 e 38; 23 e 39; ou, 23 e 40, respectivamente. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga ao mesmo ou a um epítopo de sobreposição de CD73 (por exemplo, um epítopo de CD73 humana, de camundongo ou um epítopo de cinomolgos) como um anticorpo no presente — documento — descrito, por exemplo, um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos da região variável de cadeia pesada e leve apresentadas em SEQ ID NOs: 24 e 37, respectivamente. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga ao mesmo ou a um epítopo de sobreposição de CD73 (por exemplo, um epítopo de CD73 humana, de camundongo ou um epítopo de cinomolgos) como um anticorpo no presente — documento — descrito, por exemplo, um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos da região variável de cadeia pesada e leve apresentadas em SEQ ID NOs: 27 e 37, respectivamente.

Em certas modalidades, o epítopo de um anticorpo pode ser determinado por, por exemplo, espectroscopia RMN, ressonância plasmônica de superfície (BIAcoreO), estudos de difração de cristalografia e raio-x, ensaios ELISA, troca de hidrogênio/deutério acoplada a espectrometria de massa (por exemplo, espectrometria de massa por eletrospray cromatografia líquida), ensaios de varredura de oligopeptídeos baseados em arranjo, e/ou mapeamento de mutagênese (por exemplo, mapeamento de mutagênese dirigido a sítio). Para cristalografia de raios-X, a cristalização pode ser realizada usando qualquer um dos métodos conhecidos na técnica (por exemplo, Giegé R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300- 6303, todos no presente documento incorporados por referência na sua totalidade). Anticorpo: os cristais de antígeno podem ser estudados usando técnicas de difração de raios-X bem conhecidas e podem ser refinados usando um software de computador como o X-PLOR (Universidade de Yale, 1992, distribuído por Molecular Simulations, Inc.; vide, por exemplo, Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al/.; Pedido de Ptente U.S.

No. 2004/0014194), e BUSTER (Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW; Roversi P et a/., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323 todos no presente documento incorporados por referência na sua totalidade). Os estudos de mapeamento de mutagênese podem ser realizados usando qualquer método conhecido por um versado na técnica.

Vide, por exemplo, Champe M el A1, (1995) supra e Cunningham BC & Wells JA (1989) supra para uma descrição de técnicas de mutagênese, incluindo técnicas de mutagênese de varredura de alanina.

Além disso, os anticorpos que reconhecem e se ligam aos mesmos epítopos ou epítopos sobrepostos de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) podem ser identificados usando técnicas de rotina, como um imunoensaio, por exemplo, mostrando a capacidade de um anticorpo para bloquear a ligação de outro anticorpo a um antígeno alvo, isto é, um ensaio de ligação competitiva.

Os ensaios de ligação comptetitiva também podem ser usados para determinar se dois anticorpos têm especificidade de ligação similar para um epítopo.

A ligação competitiva pode ser determinada em um ensaio no qual a imunoglobulina em teste inibe a ligação específica de um anticorpo de referência a um antígeno comum, tal como CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos). Numerosos tipos de ensaios de ligação competitiva são conhecidos, por exemplo: radioimunoensaio direto ou indireto em fase sólida (RIA), imunoensaio enzimático direto ou indireto em fase sólida (EIA), ensaio de competição em sanduíche (vide Stahli C etal, (1983) Methods Enzymol 9: 242-253); EIA de biotina-avidina direto em fase sólida (vide Kirkland TN et a/., (1986) J Immunol 137: 3614-9); ensaio de marcação direta em fase sólida, ensaio em sanduíche de marcação direta em fase sólida (vide Harlow E & Lane D, (1988) Antibodies: À Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press); RIA de marcação direta em fase sólida usando marcador |-125 (vide Morel GA et a/., (1988) Mol Immunol 25 (1): 7-15); EIA de biotina-avidina direto em fase sólida (vide Cheung RC etal, (1990) Virology 176: 546-52); e RIA de marcação direto (vide Moldenhauer G et a/., (1990) Scand J Immunol 32: 77-82), todos no presente documento incorporados por referência na sua totalidade.

Normalmente, tal um ensaio envolve o uso de antígeno purificado (por exemplo, CD73, como CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) ligado a uma superfície sólida ou células contendo qualquer um destes, uma imunoglobulina de teste não marcada e uma imunoglobulina de referência marcada. A inibição competitiva pode ser medida determinando a quantidade de marcador ligado à superfície sólida ou células na presença da imunoglobulina de teste. Normalmente, a imunoglobulina de teste está presente em excesso. Normalmente, quando um anticorpo competidor está presente em excesso, ele inibirá a ligação específica de um anticorpo de referência a um antígeno comum em pelo menos 50-55%, 55-60%, 60-65%, 65-70%, 70-75% ou mais. Um ensaio de ligação de competição pode ser configurado em um grande número de formatos diferentes usando antígeno marcado ou anticorpo marcado. Em uma versão comum deste ensaio, o antígeno é imobilizado em uma placa de 96 poços. A capacidade dos anticorpos não marcados de bloquear a ligação dos anticorpos marcados ao antígeno é então medida usando marcadores radioativos ou enzimáticos. Para mais detalhes vide, por exemplo, Wagener C et al., (1983) J Immunol 130: 2308-2315; Wagener C et al., (1984) J Immunol Methods 68: 269-274; Kuroki M et a/., (1990) Cancer Res 50: 4872- 4879; Kuroki M et a/., (1992) Immunol Invest 21: 523-538; Kuroki M et al., (1992) Hybridoma 11: 391-407 e Antibodies: A Laboratory Manual, Ed Harlow E & Lane D editors supra, pp. 386-389, todos no presente documento incorporados por referência na sua totalidade.

[391] Qualquer região constante de imunoglobulina (lg) pode ser usada nos anticorpos no presente documento descritos. Em certas modalidades, a região de Ig é uma molécula de imunoglobulina humana IgG, IgE, IgM, 1gD, IgA ou IgY, qualquer classe (por exemplo, IgG1, IgG2, I9G3, IgG4, IgA1, e IgA2), ou qualquer subclasse (por exemplo, IgG2a e IgGa) da molécula de imunoglobulina.

[392] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma região constante de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57 ou 58. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma região constante de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 89 ou 93.

[393] Em certas modalidades, uma, duas ou mais mutações (por exemplo, substituições de aminoácidos) são introduzidas na região Fc de um anticorpo no presente documento descrito (por exemplo, domínio CH?2 (resíduos 231-340 de IgG1 humana) e/ou domínio CH3 (resíduos 341-447 de IgG1 humana) e/ou a região de dobradiça, numerada de acordo com o sistema de numeração EU, para alterar uma ou mais propriedades funcionais do anticorpo, como meia-vida sérica, fixação de complemento, ligação ao receptor Fc, e/ou citotoxicidade celular dependente de antígeno.

[394] Em certas modalidades, uma, duas ou mais mutações (por exemplo, substituições de aminoácidos) são introduzidas na região de dobradiça da região Fc (domínio CH1) de modo que o número de resíduos de cisteína na região de dobradiça é alterado (por exemplo, aumentado ou diminuído) conforme descrito, por exemplo, na Patente U.S. No. 5.677.425, no presente documento incorporada por referência em sua totalidade. O número de resíduos de cisteína na região de dobradiça do domínio CH1 pode ser alterado para, por exemplo, facilitar a montagem das cadeias leve e pesada, ou para alterar (por exemplo, aumentar ou diminuir) a estabilidade do anticorpo.

[395] Em uma modalidade específica, uma, duas ou mais mutações de aminoácidos (por exemplo, substituições, inserções ou deleções) são introduzidas em um domínio constante de IgG, ou fragmento de ligação a FcRn do mesmo (preferivelmente um fragmento de domínio Fc ou Fc de dobradiça) para alterar (por exemplo, diminuir ou aumentar) a meia-vida do anticorpo in vivo. Vide, por exemplo, Publicação Internacional Nos. WO 02/060919; WO 98/23289; e WO 97/34631; e Patentes U.S. Nos. 5.869.046, 6.121.022, 6.277.375 e

6.165.745, todas no presente documento incorporadas por referência na sua totalidade, para exemplos de mutações que irão alterar (por exemplo, diminuir ou aumentar) a meia-vida de um anticorpo in vivo. Em certas modalidades, uma, duas ou mais mutações de aminoácidos (por exemplo, substituições, inserções ou deleções) são introduzidas em um domínio constante de IgG, ou fragmento de ligação a FcRn do mesmo (preferivelmente um fragmento de domínio Fc ou Fc de dobradiça) para diminuir a meia-vida do anticorpo in vivo. Em outras modalidades, uma, duas ou mais mutações de aminoácidos (por exemplo, substituições, inserções ou deleções) são introduzidas em um domínio constante de IgG ou fragmento de ligação a FcRn do mesmo (preferivelmente um fragmento de domínio Fc ou Fc de dobradiça) para aumentar a meia- vida do anticorpo in vivo. Em uma modalidade específica, os anticorpos podem ter uma ou mais mutações de aminoácidos (por exemplo, substituições) no segundo domínio constante (CH2) (resíduos 231-340 de IgG1 humana) e/ou no terceiro domínio constante (CH3) (resíduos 341-447 de IgG1 humana), numerado de acordo com o sistema de numeração EU. Em uma modalidade específica, a região constante da IgG1 de um anticorpo no presente documento descrito compreende uma substituição de metionina (M) por tirosina (Y) na posição 252, uma substituição de serina (S) por treonina (T) na posição 254 e uma substituição de treonina (T) por ácido glutâmico (E) na posição 256, numerada de acordo com o sistema de numeração EU. Vide Patente

U.S. No. 7.658.921, que é no presente documento incorporada por referência na sua totalidade. Este tipo de IgG mutante, referido como "mutante YTE", demonstrou apresentar meia-vida quatro vezes maior em comparação com as versões de tipo selvagem do mesmo anticorpo (vide Dall' Acqua WF et a/., (2006) J Biol Chem 281: 23514-24, que é no presente documento incorporado por referência em sua totalidade). Em certas modalidades, um anticorpo compreende um domínio constante de IgG compreendendo uma, duas, três ou mais substituições de aminoácidos de resíduos de aminoácidos nas posições 251-257, 285- 290, 308-314, 385-389 e 428-436, numerados de acordo com o sistema de numeração EU.

[396] Em certas modalidades, uma, duas ou mais mutações (por exemplo, substituições de aminoácidos) são introduzidas na região Fc de um anticorpo no presente documento descrito (por exemplo, domínio CH?2 (resíduos 231-340 de IgG1 humana) e/ou CH3 (resíduos 341-447 de IgG1 humana) e/ou a região de dobradiça, numerada de acordo com o sistema de numeração EU, para aumentar ou diminuir a afinidade do anticorpo para um receptor Fc (por exemplo, um receptor Fc ativado) na superfície de uma célula efetora. Mutações na região Fc de um anticorpo que diminuem ou aumentam a afinidade de um anticorpo para um receptor Fc e técnicas para a introdução de tais mutações no receptor Fc ou fragmento do mesmo são conhecidas por aqueles versados na técnica. Exemplos de mutações no receptor Fc de um anticorpo que podem ser feitas para alterar a afinidade do anticorpo para um receptor Fc são descritos em, por exemplo, Smith P et a/., (2012) PNAS 109: 6181-6186, Patente U.S. No. 6.737.056, e Publicações Internacionais Nos. WO 02/060919; WO 98/23289; e WO 97/34631, todos no presente documento incorporados por referência na sua totalidade.

[397] Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma região constante de cadeia pesada que é uma variante de uma região constante de cadeia pesada de tipo selvagem, em que a região constante de cadeia pesada variante se liga a FCcyRIIB com maior afinidade do que a região constante de cadeia pesada do tipo selvagem que se liga a FCcyRIIB. Em certas modalidades, a região constante de cadeia pesada variante é uma região constante de cadeia pesada humana variante, por exemplo, uma IgGIl humana variante, uma I9G2 humana variante ou uma região constante de cadeia pesada IgG4 humana variante. Em certas modalidades, a região constante de cadeia pesada de IgG humana variante compreende uma ou mais das seguintes mutações de aminoácidos, de acordo com o sistema de numeração EU: G236D, P238D, S239D, S267E, L328F e L328E. Em certas modalidades, a região constante de cadeia pesada de IgG humana variante compreende um conjunto de mutações de aminoácidos selecionadas a partir do grupo consistindo em: S267E e L328F; P238D e L328E; P238D e uma ou mais substituições selecionadas a partir do grupo consistindo em E233D, G237D, H268D, P271G e ASSOR; P238D, E233D, G237D, H268D, P271G e A3S3OR; G236D e S267E; S239D e S267E; V262E, S267E e L328F; e V264E, S267E e L328F, de acordo com o sistema de numeração EU. Em certas modalidades, o FCcyRIIB é expresso em uma célula selecionada a partir do grupo consistindo em macrófagos, monócitos, células B, células dendríticas, células endoteliais e células T ativadas.

[398] Em uma outra modalidade, uma, duas ou mais substituições de aminoácidos são introduzidas em uma região Fc de domínio constante de IgG para alterar a (s) função (s) efetora (s) do anticorpo. Por exemplo, um ou mais aminoácidos selecionados a partir dos resíduos de aminoácidos 234, 235, 236, 237, 239, 243, 267, 292, 297, 300, 318, 320, 322, 328, 330, 332 e 396, numerados de acordo com o sistema de numeração EU, podem ser substituídos por um resíduo de aminoácido diferente de modo que o anticorpo tenha uma afinidade alterada para um ligando efetor, mas retém a capacidade de ligação ao antígeno do anticorpo parental. O ligando efetor para o qual a afinidade é alterada pode ser, por exemplo, um receptor Fc ou o componente C1 do complemento. Esta abordagem é descrita em mais detalhes nas Patentes U.S. Nos. 5.624.821 e 5.648.260, cada uma das quais é no presente documento incorporada por referência em sua totalidade. Em certas modalidades, a deleção ou inativação (por meio de mutações pontuais ou outros meios) de um domínio de região constante pode reduzir a ligação ao receptor Fc do anticorpo circulante, aumentando assim a localização do tumor. Vide, por exemplo, Patentes U.S. Nos.

5.585.097 e 8.591.886, cada uma das quais é no presente documento incorporada por referência em sua totalidade, para uma descrição de mutações que excluem ou inativam o domínio constante e, assim, aumentam a localização do tumor. Em certas modalidades, uma ou mais substituições de aminoácidos podem ser introduzidas na região Fc de um anticorpo no presente documento descrito para remover sítios de glicosilação potenciais na região Fc, o que pode reduzir a ligação ao receptor Fc (vide, por exemplo, Shields RL el A1, (2001) J Biol Chem 276: 6591-604, que é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade). Em várias modalidades, uma ou mais das seguintes mutações na região constante de um anticorpo no presente documento descrito podem ser feitas: uma substituição N297A; uma substituição N297Q; uma substituição L234A; uma substituição L234F; uma substituição L235A; uma substituição L235F; uma substituição L235V; uma substituição L237A; uma substituição S239D; uma substituição E233P; uma substituição L234V; uma substituição L235A; uma deleção C236; uma substituição P238A; uma substituição S239D; uma substituição F243L; uma substituição D265 A; uma substituição S267E; uma substituição L328F; uma substituição R292P; uma substituição Y300L; uma substituição A327Q; uma substituição P329A; uma substituição A332L; uma substituição 1332E; ou uma substituição P396L, numerada de acordo com o sistema de numeração EU.

[399] Em certas modalidades, uma mutação selecionada a partir do grupo consistindo em D265A, P329A e uma combinação dos mesmos, numerada de acordo com o sistema de numeração EU, pode ser feita na região constante de um anticorpo no presente documento descrito. Em certas modalidades, uma mutação selecionada a partir do grupo consistindo em L235A, L237A e uma combinação dos mesmos, numerada de acordo com o sistema de numeração EU, pode ser feita na região constante de um anticorpo no presente documento descrito. Em certas modalidades, uma mutação selecionada a partir do grupo consistindo em S267E, L328F e uma combinação dos mesmos, numerada de acordo com o sistema de numeração EU, pode ser feita na região constante de um anticorpo no presente documento descrito. Em certas modalidades, uma mutação selecionada a partir do grupo consistindo em S239D, 1332E, opcionalmente A330L e uma combinação dos mesmos, numerada de acordo com o sistema de numeração EU, pode ser feita na região constante de um anticorpo no presente documento descrito. Em certas modalidades, uma mutação selecionada a partir do grupo consistindo em L235V, F243L, R292P, Y300L, P396L e uma combinação dos mesmos, numerada de acordo com o sistema de numeração EU, pode ser feita na região constante de um anticorpo no presente documento descrito. Em certas modalidades, uma mutação selecionada a partir do grupo consistindo em S267E, L328F e uma combinação dos mesmos, numerada de acordo com o sistema de numeração EU, pode ser feita na região constante de um anticorpo no presente documento descrito.

[400] Em uma modalidade específica, um anticorpo no presente documento descrito compreende o domínio constante de uma IgG1 com uma substituição de aminoácido N297Q ou N297A, numerada de acordo com o sistema de numeração EU. Em uma modalidade, um anticorpo no presente documento descrito compreende o domínio constante de uma IgG1 com uma mutação selecionada a partir do grupo consistindo em D265A, P329A e uma combinação dos mesmos, numerada de acordo com o sistema de numeração EU. Em outra modalidade, um anticorpo no presente documento descrito compreende o domínio constante de uma IgG1 com uma mutação selecionada a partir do grupo consistindo em L234A, L235A e uma combinação dos mesmos, numerada de acordo com o sistema de numeração EU. Em outra modalidade, um anticorpo no presente documento descrito compreende o domínio constante de uma IgG1 com uma mutação selecionada a partir do grupo consistindo em L234F, L235F, N297A e uma combinação dos mesmos, numerada de acordo com o sistema de numeração EU. Em certas modalidades, os resíduos de aminoácidos na região constante de um anticorpo no presente documento descrito nas posições correspondentes às posições L234, L235 e D265 em uma cadeia pesada de IgG1 humana, numerada de acordo com o sistema de numeração EU, não são L, L e D, respectivamente. Esta abordagem é descrita em detalhes na Publicação Internacional No. WO 14/108483, que é no presente documento incorporada por referência em sua totalidade. Em uma modalidade particular, os aminoácidos correspondentes às posições L234, L235 e D265 em uma cadeia pesada de IgG1 humana são F, E e A; ou A, A e A, respectivamente, numerada de acordo com o sistema de numeração EU.

[401] Em certas modalidades, um ou mais aminoácidos selecionados a partir dos resíduos de aminoácidos 329, 331 e 322 na região constante de um anticorpo no presente documento descrito, numerados de acordo com o sistema de numeração EU, podem ser substituídos por um resíduo de aminoácido diferente de modo que o anticorpo tenha alterado a ligação de C1iq e/ou citotoxicidade dependente de complemento (CDC) reduzida ou abolida. Esta abordagem é descrita em mais detalhes na Patente U.S. No. 6.194.551 (Idusogie et al), que é no presente documento incorporada por referência em sua totalidade. Em certas modalidades, um ou mais resíduos de aminoácidos nas posições de aminoácidos 231 a 238 na região N-terminal do domínio CH2 de um anticorpo no presente documento descrito são alterados para, assim, alterar a capacidade do anticorpo de fixar complemento, numerado de acordo com o Sistema de numeração EU. Esta abordagem é descrita adicionalmente na Publicação Internacional No. WO 94/29351 que é no presente documento incorporada por referência em sua totalidade. Em certas modalidades, a região Fc de um anticorpo no presente documento descrito é modificada para aumentar a capacidade do anticorpo de mediar a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) e/ou para aumentar a afinidade do anticorpo para um receptor de Fcy por mutação de um ou mais aminoácidos ácidos (por exemplo, introdução de substituições de aminoácidos) nas seguintes posições: 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 ou 439, numerada de acordo com o sistema de numeração EU. Esta abordagem é descrita mais adiante na Publicação Internacional No. WO 00/42072, que é no presente documento incorporada por referência em sua totalidade.

[402] Em certas modalidades, um anticorpo no presente documento descrito compreende um domínio constante modificado de uma IgG1, em que a modificação aumenta a capacidade do anticorpo de mediar a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC). Em certas modalidades, 0,1, 1 ou 10 ug/ml do anticorpo é capaz de induzir a morte celular de pelo menos 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% ou 60% das células que expressam CD73 em 1, 2 ou 3 horas, conforme avaliado pelos métodos no presente documento descritos e/ou conhecidos por um versado na técnica. Em certas modalidades, o domínio constante modificado de uma IgG1 compreende substituições S239D e |1332E, numeradas de acordo com o sistema de numeração EU. Em certas modalidades, o domínio constante modificado de uma IgG1 compreende substituições S239D, A330L e 1332E, numeradas de acordo com o sistema de numeração EU. Em certas modalidades, o domínio constante modificado de uma IgG1 compreende substituições L235V, F243L, R292P, Y300L e P396L, numeradas de acordo com o sistema de numeração EU. Em certas modalidades, o anticorpo é capaz de induzir a morte celular em células T efetoras e Tregs, em que a porcentagem de Tregs que sofre morte celular é maior do que a porcentagem de células T efetoras que sofre morte celular em pelo menos 1,2 vez, 1,3 vez, 1,4 vez, 1,5 vez, 1,6 vez, 1,7 vez, 1,8 vez, 1,9 vez, 2 vezes, 2,5 vezes, 3 vezes, 3,5 vezes, 4 vezes, 4,5 vezes ou 5 vezes.

[403] Em certas modalidades, um anticorpo no presente documento descrito compreende a região constante de um anticorpo IgG4 e a serina no resíduo de aminoácido 228 da cadeia pesada, numerada de acordo com o sistema de numeração EU, é substituída por prolina. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma região constante de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 26.

[404] Em certas modalidades, qualquer uma das mutações ou modificações da região constante no presente documento descritas podem ser introduzidas em uma ou em ambas as regiões constantes da cadeia pesada de um anticorpo no presente documento descrito tendo duas regiões constantes da cadeia pesada.

[405] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 63-88. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 63. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 64. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 65. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 66. Em certas modalidades, Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 67. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 68. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 69. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 70. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 71. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 72. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 73. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 74. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 75. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 76. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 77. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 78. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 79. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 80. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 81. Em certas formas de realização, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 82. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 83. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 84. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 85. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 86. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 87. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 88.

[406] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 92-98. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 92. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 93. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 94. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 95. Em certas modalidades, Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 96. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 98.

[407] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo,

CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 63-88; e uma cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 92-98. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 63; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 92. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 64; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 92. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 65; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 94. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 66; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 94. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 67; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 95. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 68; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 95. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 69; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 96. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 70; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 96. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 71; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 96. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 72; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID

NO: 96. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 73; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 96. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 74; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 96. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 75; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 96. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 76; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 96. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 77; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 78; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 79; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 80; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 77; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 78; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 79; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 80; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 81; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 82; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 83; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 84; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo,

CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 85; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 86; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 87; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 88; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 81; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 82; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 83; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 84; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 85; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 86; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 87; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98. Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo), o anticorpo compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 88; e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 98.

[408] Qualquer formato de anticorpo pode ser usado nos anticorpos no presente documento descritos. Em certas modalidades, o anticorpo é um anticorpo de cadeia única ou Fv de cadeia única (scFv). Em certas modalidades, o anticorpo é um scFv fundido com uma região Fc (scFv-Fc). Em certas modalidades, o anticorpo é um fragmento Fab. Em certas modalidades, o anticorpo é um fragmento F(ab'),.

[409] Em certas modalidades, o anticorpo descrito neste documento é um anticorpo multiespecífico (por exemplo, um anticorpo biespecífico) que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e um segundo antígeno.

[410] Em certas modalidades, o anticorpo descrito neste documento é conjugado a um segundo anticorpo que se liga especificamente a um segundo antígeno. Em certas modalidades, o anticorpo no presente documento descrito é covalentemente conjugado a um segundo anticorpo. Em certas modalidades, o anticorpo no presente documento descrito é conjugado de forma não covalente a um segundo anticorpo. Em certas modalidades, o anticorpo no presente documento descrito é reticulado a um segundo anticorpo. Em certas modalidades, o segundo antígeno é um antígeno associado a tumor (por exemplo, um polipeptídeo superexpresso em um tumor, um polipeptídeo derivado de um oncovírus, um polipeptídeo compreendendo uma modificação pós-tradução específica para um tumor, um polipeptídeo especificamente mutado em um tumor). Em certas modalidades, o antígeno associado ao tumor é EGFR (por exemplo, EGFR humano), opcionalmente, em que o segundo anticorpo é cetuximabe. Em certas modalidades, o antígeno associado ao tumor é Her2 (por exemplo, Her2 humano), opcionalmente em que o segundo anticorpo é trastuzumabe. Em certas modalidades, o antígeno associado ao tumor é CD20 (por exemplo, CD20 humano).

[411] Em certas modalidades, o anticorpo descrito neste documento é conjugado a um agente citotóxico, agente citostático, toxina, radionuclídeo ou marcador detectável. Em certas modalidades, o agente citotóxico é capaz de induzir a morte ou destruição de uma célula em contato com o mesmo. Em certas modalidades, o agente citostático é capaz de prevenir ou reduzir substancialmente a proliferação e/ou inibir a atividade ou função de uma célula em contato com ela. Em certas modalidades, o agente citotóxico ou agente citostático é um agente quimioterapêutico. Em certas modalidades, o radionuclídeo é selecionado a partir do grupo consistindo nos isótopos 3H, "E, 32P, 35S, 36C), S Cr, Co, Co, s%Fe, STCu, Oy, Toc, Vin, Lu, 121, 1241, 1251, 11, 198Au, 211At, 213Bj, 225AC e 186Re, Em certas modalidades, o marcador detectável compreende uma porção fluorescente ou uma manipulação química de clique.

[412] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e funciona como um antagonista (por exemplo, diminui ou inibe a atividade de CD73).

[413] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e diminui ou inibe a atividade de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) em pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, ou 99%, conforme avaliado pelos métodos descritos neste documento e/ou conhecidos por um versado na técnica, em relação à atividade de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) sem qualquer anticorpo ou com um anticorpo não relacionado (por exemplo, um anticorpo que não se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos)). Em certas modalidades, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e diminui ou inibe a atividade de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) em pelo menos cerca de 1,2 vez, 1,3 vez, 1,4 vez, 1,5 vez, 2 vezes, 2,5 vezes, 3 vezes, 3,5 vezes, 4 vezes, 4,5 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 15 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 40 vezes, 50 vezes, 60 vezes, 70 vezes, 80 vezes, 90 vezes, 100 vezes ou mais, conforme avaliado por métodos no presente documento descritos e/ou conhecidos por um versado na técnica, em relação à atividade CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) sem qualquer anticorpo ou com um anticorpo não relacionado (por exemplo, um anticorpo que não se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana)). Exemplos não limitativos de atividade de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) podem incluir sinalização de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos); CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) ligando-se aos seus parceiros de ligação e/ou substratos (por exemplo, AMP ou um análogo ou variante do mesmo); CD73 catalisando a conversão de pelo menos um de seus substratos (por exemplo, AMP ou um análogo ou variante do mesmo), facilitação do crescimento tumoral e metástase e outras funções conhecidas (por exemplo, vide Gao etal. (2014) BioMedRes.

Int.

Artigo ID 460654). Em modalidades específicas, a redução em uma atividade de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) é avaliada conforme descrito nos Exemplos, infra.

[414] Em modalidades específicas, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e diminui ou inibe CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) atividade enzimática (por exemplo, catalisando a conversão de AMP em adenosina) em pelo menos cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 99%, conforme avaliado pelos métodos no presente documento descritos (vide os Exemplos, infra) ou conhecidos por um versado na técnica, em relação à atividade enzimática de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) sem qualquer anticorpo ou com um anticorpo não relacionado (por exemplo, um anticorpo que não se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos). Em modalidades específicas, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo, cinomolgo) e diminui ou inibe atividade enzimática de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo, cinomolgo) (por exemplo, catalisando a conversão de AMP em adenosina) em pelo menos cerca de 1,2 vez, 1,3 vez, 1,4 vez, 1,5 vez, 2 vezes, 2,5 vezes, 3 vezes, 3,5 vezes, 4 vezes, 4,5 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 15 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 40 vezes, 50 vezes, 60 vezes, 70 vezes, 80 vezes, 90 vezes ou 100 vezes, conforme avaliado pelos métodos descritos neste documento (vide os Exemplos, infra) ou conhecido por um versado na técnica, em relação à atividade enzimática de CD73 (por exemplo, CD73 humano) sem qualquer anticorpo ou com um anticorpo não relacionado (por exemplo, um anticorpo que não se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo, cinomolgo)).

[415] Em modalidades específicas, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e reduz a progressão do câncer (por exemplo, proliferação e/ou metástase de células no microambiente de um câncer tipo descrito no presente documento) em pelo menos cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 99%, conforme avaliado pelos métodos no presente documento descritos (vide os Exemplos, infra) ou conhecidos por um versado na técnica, em relação à progressão do câncer sem qualquer anticorpo ou com um anticorpo não relacionado (por exemplo, um anticorpo que não se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos)). Em modalidades específicas, a presente invenção fornece um anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e reduz a progressão do câncer (por exemplo, proliferação e/ou metástase de células no microambiente de um tipo de câncer no presente documento descrito) em pelo menos cerca de 1,2 vez, 1,3 vez, 1,4 vez, 1,5 vez, 2 vezes, 2,5 vezes, 3 vezes, 3,5 vezes, 4 vezes, 4,5 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 15 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 40 vezes, 50 vezes, 60 vezes, 70 vezes, 80 vezes, 90 vezes, ou 100 vezes, ou mais, conforme avaliado pelos métodos descritos neste documento (vide os Exemplos, infra) ou conhecido por um versado na técnica, em relação à progressão do câncer sem qualquer anticorpo ou com um anticorpo não relacionado (por exemplo, um anticorpo que não se liga especificamente ao CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos)).

5.3 Anticorpos anti-CD73 compreendendo porções de ligação a ligando

[416] Em um aspecto, a presente invenção fornece anticorpos que se ligam especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, CD73 de cinomolgos ou CD73 de camundongo) e compreendem uma porção de ligação a ligando (por exemplo, uma porção de ligação a TGFB ou uma porção de ligação a VEGF).

[417] Anticorpos anti-CD73 que compreendem uma porção de ligação a ligando podem compreender uma cadeia de imunoglobulina de qualquer anticorpo anti-CD73. Anticorpos anti-CD73 exemplares são descritos na Seção 5.2 do presente relatório descritivo. Anticorpos anti- CD73 exemplares adicionais são descritos em WO02016055609A1, WO02016075099A1, WO2016081748A2, WO02016131950A1, WO02017064043A1, WO02017100670A1, WO?2017118613A1, WO2017152085A1 e US9388249B2, cada um dos quais é incorporado no presente documento por referência na sua totalidade. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende um VH e uma VL de um anticorpo anti-CD73 conforme descrito na Seção 5.2. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve de um anticorpo anti-CD73, conforme descrito na Seção 5.2.

[418] Uma porção de ligação a ligando pode ser ligada a qualquer porção de uma cadeia de imunoglobulina de um anticorpo anti-CD73, incluindo o resíduo de aminoácido N- ou C-terminal. A porção de ligação a ligando pode ser ligada (covalente ou não covalentemente) à cadeia de imunoglobulina diretamente ou por meio de um ligante (por exemplo, um ligante peptídico). A ligação covalente pode ser uma ligação química ou genética (ou seja, para formar uma proteína de fusão). Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada (por exemplo, covalentemente) ao resíduo de aminoácido C-terminal da cadeia de imunoglobulina. Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada ao resíduo de aminoácido C-terminal de uma cadeia de imunoglobulina sem um ligante (por exemplo, por meio de um ligante peptídico). Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando é ligada (por exemplo, covalentemente) ao resíduo de aminoácido C- terminal da cadeia de imunoglobulina por meio de um ligante. Em certas modalidades, o ligante é um ligante peptídico. Em certas modalidades, o ligante peptídico tem a fórmula geral (G4S)n, onde n é um número inteiro. Em certas modalidades, o ligante peptídico compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 294%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com a SEQ ID NO: 103, 104, 105, 106, 107 ou 108. Em certas modalidades, o ligante peptídico consiste em uma sequência de aminoácidos com pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID NO: 103, 104, 105, 106, 107 ou 108. Em certas modalidades, o ligante peptídico está ligado à cadeia de imunoglobulina por meio de uma ligação peptídica.

[419] Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada (por exemplo, covalentemente) a uma VH do anticorpo anti- CD73. A porção de ligação a ligando pode ser ligada (por exemplo, covalentemente) a qualquer porção da VH, incluindo o resíduo de aminoácido N ou C-terminal. Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando é ligada (por exemplo, covalentemente) ao resíduo de aminoácido C-terminal da VH. Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada ao resíduo de aminoácido C-terminal da VH sem um ligante (por exemplo, através de uma ligação peptídica). Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada (por exemplo, covalentemente) ao resíduo de aminoácido C-terminal do VH via ligante. Em certas modalidades, o ligante é um ligante peptídico. Em certas modalidades, o ligante peptídico compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com a SEQ ID NO: 103, 104, 105, 106, 107 ou 108. Em certas modalidades,

o ligante peptídico consiste em uma sequência de aminoácidos com pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com a SEQ ID NO: 103, 104, 105, 106, 107 ou 108. Em certas modalidades, o ligante peptídico está ligado a VH através de uma ligação peptídica.

[420] Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada (por exemplo, covalentemente) a uma VL do anticorpo anti-CD73. A porção de ligação a ligando pode ser ligada (por exemplo, covalentemente) a qualquer porção da VL, incluindo o resíduo de aminoácido N- ou C-terminal. Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada (por exemplo, covalentemente) ao resíduo de aminoácido C-terminal da VL. Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada ao resíduo de aminoácido C-terminal da VL sem um ligante (por exemplo, através de uma ligação peptídica). Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada (por exemplo, covalentemente) ao resíduo de aminoácido C-terminal da VL via ligante. Em certas modalidades, o ligante é um ligante peptídico. Em certas modalidades, o ligante peptídico compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com a SEQ ID NO: 103, 104, 105, 106, 107 ou 108. Em certas modalidades, o ligante de peptídeo consiste em uma sequência de aminoácidos com pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com a SEQ ID NO: 103, 104, 105, 106, 107 ou 108. Em certas modalidades, o ligante peptídico está ligado a VL por meio de uma ligação peptídica.

[421] Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada (por exemplo, covalentemente) a uma região constante de cadeia pesada do anticorpo anti-CD73. A porção de ligação a ligando pode ser ligada (por exemplo, covalentemente) a qualquer porção da região constante de cadeia pesada. Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada (por exemplo, covalentemente) ao resíduo de aminoácido C-terminal da região constante de cadeia pesada. Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada ao resíduo de aminoácido C-terminal da região constante de cadeia pesada sem um ligante (por exemplo, através de uma ligação peptídica). Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada (por exemplo, covalentemente) ao resíduo de aminoácido C-terminal da região constante de cadeia pesada via ligante. Em certas modalidades, o ligante é um ligante peptídico. Em certas modalidades, o ligante de peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com a SEQ ID NO: 103, 104, 105, 106, 107 ou 108. Em certas modalidades, o ligante peptídico consiste em uma sequência de aminoácidos com pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID NO: 103, 104, 105, 107 ou 108. Em certas modalidades, o ligante peptídico está ligado à região constante de cadeia pesada por meio de uma ligação peptídica.

[422] Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada (por exemplo, covalentemente) a uma região constante de cadeia leve do anticorpo anti-CD73. A porção de ligação a ligando pode ser ligada (por exemplo, covalentemente) a qualquer porção da região constante de cadeia leve. Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada (por exemplo, covalentemente) ao resíduo de aminoácido C-terminal da região constante de cadeia leve. Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada ao resíduo de aminoácido C-terminal da região constante de cadeia leve sem um ligante (por exemplo, através de uma ligação peptídica). Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando está ligada (por exemplo,

covalentemente) ao resíduo de aminoácido C-terminal da região constante de cadeia leve via ligante. Em certas modalidades, o ligante é um ligante peptídico. Em certas modalidades, o ligante de peptídeo compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com a SEQ ID NO: 103, 104, 105, 106, 107 ou 108. Em certas modalidades, o ligante peptídico consiste em uma sequência de aminoácidos com pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID NO: 103, 104, 105, 106, 107 ou 108. Em certas modalidades, o ligante peptídico está ligado à região constante da cadeia leve por meio de uma ligação peptídica.

[423] A porção de ligação a ligando pode ser qualquer porção que tenha a capacidade de se ligar especificamente a uma molécula ou complexo alvo. Em certas modalidades, a porção de ligação a ligando compreende um peptídeo ou polipeptídeo. Em certas modalidades, o peptídeo ou polipeptídeo está ligado à cadeia de imunoglobulina do anticorpo anti-CD73 por meio de uma ligação peptídica. Em certas modalidades, o peptídeo ou polipeptídeo está ligado à cadeia de imunoglobulina do anticorpo anti-CD73 por meio de um ligante peptídico, em que o peptídeo ou polipeptídeo está ligado ao ligante peptídico por meio de uma ligação peptídica. Em certas modalidades, o resíduo de aminoácido N-terminal do peptídeo ou polipeptídeo está ligado ao resíduo de aminoácido C-terminal da cadeia de imunoglobulina ou o ligante peptídico através de uma ligação peptídica.

[424] Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende um polipeptídeo que compreende (a) uma cadeia de imunoglobulina, (b) uma porção de ligação a ligando e, opcionalmente, (c) um ligante peptídico conforme descrito neste documento. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende um polipeptídeo compreendendo do

N-terminal ao C-terminal a cadeia de imunoglobulina e a porção de ligação. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende um polipeptídeo compreendendo do N-terminal ao C-terminal: a cadeia de imunoglobulina, o ligante peptídico e a porção de ligação. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 consiste em um polipeptídeo que compreende (a) uma cadeia de imunoglobulina, (b) a porção de ligação a ligando e, opcionalmente, (c) um ligante peptídico como no presente documento descrito. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 consiste em um polipeptídeo compreendendo do N-terminal ao C- terminal a cadeia de imunoglobulina e a porção de ligação. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 consiste em um polipeptídeo compreendendo do N-terminal! ao C-terminall: a cadeia de imunoglobulina, o ligante peptídico e a porção de ligação. Em certas modalidades, a cadeia de imunoglobulina é uma cadeia pesada de comprimento completo. Em certas modalidades, a cadeia de imunoglobulina que compreende é uma cadeia leve de comprimento completo.

[425] Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende uma porção de ligação capaz de antagonizar e/ou inibir a via de sinalização de TGFB. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende uma porção de ligação capaz de antagonizar e/ou inibir TGFRB. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende uma porção de ligação a TGFRB. A porção de ligação a TGFB pode ser qualquer porção que se liga especificamente a um ou mais membros da família ou isoformas de TGFB. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFRB se liga especificamente a TGFB1 (por exemplo, TGFB1 humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB se liga especificamente a TGFB2 (por exemplo, TGFB2 humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB se liga especificamente a TGFRB3 (por exemplo, TGFB3 humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB se liga especificamente a pelo menos dois de TGFB1 (por exemplo, TGFB1 humano). TGFB2 (por exemplo, TGFB2 humano) e TGFB3 (por exemplo, TGFB3 humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB se liga especificamente a TGFB1 (por exemplo, TGFB1 humano) e TGFB3 (por exemplo, TGFB3 humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB se liga especificamente a TGFB1 (por exemplo, TGFB1 humano), TGFB2 (por exemplo, TGFB2 humano) e TGFB3 (por exemplo, TGFB3 humano). O especialista apreciará que uma porção de ligação a TGFB que se liga especificamente a um membro da família ou isoforma de TGFB pode se ligar a um ou mais outros membros da família ou isoformas de TGFB com afinidade similar ou superior. Porções de ligação a TGFB exemplares são descritas em De Crescenzo el al. (2008) Transforming Growth Fator-b in Cancer Therapy, Volume Il, Cancer Drug Discovery and Development, Humana Press; Zwaagstra et al. (2012) Mol Cancer Ther. 11 (7): 1477-87; Ravi e col. (2018) Nat. Comum. 9: 741; EPO0975771B1, US7786261B2, US8993524B2 e US20150225483A1, cada um dos quais é incorporado neste documento por referência em sua totalidade.

[426] Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB compreende um domínio de uma proteína que se liga a TGFB1 (por exemplo, TGFB1 humano). TGFB2 (por exemplo, TGFB2 humano) e/ou TGFB3 (por exemplo, TGFB3 humano), ou uma variante do mesmo que tem afinidade de ligação de TGFB similar ou melhorada. Em certas modalidades, o domínio é um domínio extracelular de um receptor de TGFRB (por exemplo, um receptor de TGFB humano). Em certas modalidades, o domínio é um domínio de ligação a TGFB de um receptor de TGFB (por exemplo, um receptor de TGFB humano). Em certas modalidades, o receptor de TGFB é selecionado a partir do grupo consistindo em TGFBR1 (por exemplo, TGFBR1 humano), TGFBR2 (por exemplo, TGFBR2 humano) e TGFBR3 (por exemplo, TGFBR3 humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 109, 110, 111 ou 112. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 109, 110, 111, ou 112. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFRB consiste em uma sequência de aminoácidos de pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada na SEQ ID NO: 109, 110, 111 ou 112. Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFRB consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 109, 110, 111 ou 112.

[427] Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120 ou 121. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende um polipeptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120 ou 121. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende um polipeptídeo que consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120 ou 121. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende um polipeptídeo que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120 ou 121.

[428] Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreendendo uma porção de ligação a TGFB adicionalmente compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 294%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 97, 92 ou 128. Em certas modalidades, anticorpo anti-CD73 compreendendo uma porção de ligação a TGFB adicionalmente compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreendendo uma porção de ligação a TGFB adicionalmente compreende um polipeptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 que compreende uma porção de ligação a TGFB adicionalmente compreende um polipeptídeo que consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreendendo uma porção de ligação a TGFB adicionalmente compreende um polipeptídeo que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 97.

[429] Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende um primeiro polipeptídeo e um segundo polipeptídeo, em que o primeiro e o segundo polipeptídecos compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 113 e 92, 114 e 97, 115e 97, 116 e 97, 117 e 97, 118 e 97, 119 e 97, 120 e 97 ou 121 e 97, respectivamente. Em certas modalidades, o primeiro e o segundo polipeptídeos consistem nas sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 113 e 92, 114 e 97, 1156 97, 116 e 97, 117 e 97, 118 e 97, 119 e 97, 120 e 97 ou 121 e 97, respectivamente. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende dois polipeptídeos, cada um compreendendo a sequência de aminoácidos do primeiro polipeptídeo e dois polipeptídeos, cada um compreendendo a sequência de aminoácidos do segundo polipeptídeo. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende duas cópias do primeiro polipeptídeo e duas cópias do segundo polipeptídeo. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 consiste em duas cópias do primeiro polipeptídeo e duas cópias do segundo polipeptídeo.

[430] Em certas modalidades, a porção de ligação a TGFB compreende um anticorpo que se liga especificamente a TGFB1 (por exemplo, TGFB1 humano). TGFB2 (por exemplo, TGFB2 humano) e/ou TGFB3 (por exemplo, TGFB3 humano), ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Anticorpos anti-TGFB exemplares incluem fresolumimabe e metelimumabe e são descritos em US6492497B1, US7151169B2, US7723486B2, que são incorporados neste documento por referência na sua totalidade.

[431] Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende uma porção de ligação capaz de antagonizar e/ou inibir uma via de sinalização de VEGF. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende uma porção de ligação capaz de antagonizar e/ou inibir VEGF. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende uma porção de ligação a VEGF. A porção de ligação a VEGF pode ser qualquer porção que se liga especificamente a um ou mais membros da família ou isoformas de VEGF. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF se liga especificamente a VEGF-A (por exemplo, VEGF- A humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF se liga especificamente a VEGF-B (por exemplo, VEGF-B humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF se liga especificamente a VEGF-C (por exemplo, VEGF-C humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF se liga especificamente a VEGF-D (por exemplo, VEGF-D humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF se liga especificamente a pelo menos dois de VEGF-A (por exemplo, VEGF-A humano), VEGF-B (por exemplo, VEGF-B humano), VEGF-C (por exemplo, VEGF-C humano), e VEGF-D (por exemplo, VEGF-D humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF se liga especificamente a VEGF-A (por exemplo, VEGF- A humano) e VEGF-B (por exemplo, VEGF-B humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF se liga especificamente a VEGF-C (por exemplo, VEGF-C humano) e VEGF-D (por exemplo, VEGF-D humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF se liga especificamente a pelo menos três de VEGF-A (por exemplo, VEGF-A humano), VEGF-B (por exemplo, VEGF-B humano), VEGF-C (por exemplo, VEGF-C humano), e VEGF-D (por exemplo, VEGF-D humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF se liga especificamente a VEGF-A (por exemplo, VEGF-A humano), VEGF-B (por exemplo, VEGF-B humano), VEGF-C (por exemplo, VEGF-C humano), e VEGF-D (por exemplo, VEGF-D humano). O especialista apreciará que uma porção de ligação a VEGF que se liga especificamente a um membro da família ou isoforma de VEGF pode se ligar a um ou mais outros membros da família ou isoformas de VEGF com afinidade similar ou superior. Porções de ligação a VEGF exemplares incluem aflibercept e são descritas em Holash et a/. (2002) PNAS 99 (17): 11393-988; US7306/99B2, US7608261B2; e US7531173B2, cada um dos quais é incorporado no presente documento por referência na sua totalidade...

[432] Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF compreende um domínio de uma proteína que se liga a VEGF-A (por exemplo, VEGF-A humano), VEGF-B (por exemplo, VEGF-B humano), VEGF-C (por exemplo, VEGF-C humano) e/ou VEGF-D (por exemplo,

VEGF-D humano), ou uma variante deste que tem afinidade de ligação de VEGF similar ou melhorada.

Em certas modalidades, o domínio é um domínio extracelular de um receptor de VEGF (por exemplo, um receptor de VEGF humano). Em certas modalidades, o domínio é um domínio de ligação a VEGF de um receptor de VEGF (por exemplo, um receptor de VEGF humano). Em certas modalidades, o domínio de ligação a VEGF compreende um, dois, três, quatro, cinco, seis ou sete dos domínios do tipo imunoglobulina de um receptor de VEGF (por exemplo, um receptor de VEGF humano). Em certas modalidades, o domínio de ligação a VEGF compreende um ou mais, dois ou mais, três ou mais, quatro ou mais, cinco ou mais, ou seis ou mais dos domínios similares a imunoglobulinas de um receptor de VEGF (por exemplo, um receptor de VEGF humano). Em certas modalidades, o domínio de ligação a VEGF compreende no máximo dois, três, quatro, cinco ou seis dos domínios do tipo imunoglobulina de um receptor de VEGF (por exemplo, um receptor de VEGF humano). Em certas modalidades, o receptor de VEGF é selecionado a partir do grupo consistindo em VEGFR1 (por exemplo, VEGFR1 humano), VEGFR2 (por exemplo, VEGFR2 humano) e VEGFR3 (por exemplo, VEGFR3 humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF compreende um domínio extracelular de VEGFR1 (por exemplo, VEGFR1 humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 122. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF compreende uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 122. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 294%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 122. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF consiste em uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 122. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF compreende um domínio extracelular de VEGFR2 (por exemplo, VEGFR2 humano). Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF compreende um domínio extracelular de VEGFR3 (por exemplo, VEGFR3 humano).

[433] Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 123, 124, 125, 126 ou 127. Em certas modalidades, o anti- CD73 anticorpo compreende um polipeptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 123, 124, 125, 126 ou 127. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende um polipeptídeo que consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 123, 124, 125, 126 ou 127. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende um polipeptídeo que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 123, 124, 125, 126 ou 127.

[434] Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreendendo uma porção de ligação a VEGF adicionalmente compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 294%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 97, 92 ou 128. Em certas modalidades, anticorpo anti-CD73 compreendendo uma porção de ligação a VEGF adicionalmente compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreendendo uma porção de ligação a VEGF adicionalmente compreende um polipeptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 97. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 que compreende uma porção de ligação a VEGF adicionalmente compreende um polipeptídeo que consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 97. Em certas — modalidades, o anticorpo anticCD73 adicionalmente compreendendo uma porção de ligação a VEGF compreende um polipeptídeo que consiste na sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 97.

[435] Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende um primeiro polipeptídeo e um segundo polipeptídeo, em que o primeiro e o segundo polipeptídecos compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 123 e 92, 124 e 128, 125 e 128, 126 e 97 ou 127 e 97, respectivamente. Em certas modalidades, o primeiro e o segundo polipeptídeos consistem nas sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 123 e 92, 124 e 128, 125 e 128, 126 e 97, ou 127 e 97, respectivamente. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende dois polipeptídeos, cada um compreendendo a sequência de aminoácidos do primeiro polipeptídeo e dois polipeptídeos compreendendo a sequência de aminoácidos do segundo polipeptídeo. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 compreende duas cópias do primeiro polipeptídeo e duas cópias do segundo polipeptídeo. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD73 consiste em duas cópias do primeiro polipeptídeo e duas cópias do segundo polipeptídeo. Em certas modalidades, a porção de ligação a VEGF compreende um anticorpo que se liga especificamente a VEGF- A (por exemplo, VEGF-A humano), VEGF-B (por exemplo, VEGF-B humano), VEGF-C (por exemplo, VEGF-C humano), e/ou VEGF-D (por exemplo, VEGF-D humano), ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Anticorpos anti-VEGF exemplares incluem bevacizumab e ranibizumab e são descritos em WO1998045331A2 e WO1998045332A2, que são incorporados neste documento por referência em sua totalidade.

5.4 Composições farmacêuticas

[436] São fornecidas no presente documento composições que compreendem um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou de cinomolgos) descrito neste documento tendo o grau de pureza desejado em um veículo, excipiente ou estabilizador fisiologicamente —* aceitável (vide, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA). Os veículos, excipientes ou estabilizadores aceitáveis são não tóxicos para os destinatários nas dosagens e concentrações utilizadas e incluem tampões, tais como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (tais como cloreto de octadecildimetilbenzilamônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio; fenol, álcool butílico ou benzílico; alquilparabenos, tais como metil ou propilparabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos de cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tais como glicina, glutamina, asparagina, histidinay arginina ou lisina monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes como EDTA; açúcares como sacarose,

manitol, trealose ou sorbitol; contraíons formadores de sal, tais como sódio; complexos metálicos (por exemplo, complexos Zn-proteína); e/ou surfactantes não iônicos, tais como TWEENTY, PLURONICS'Y ou polietilenoglicol (PEG).

[437] Em uma modalidade específica as composições farmacêuticas compreendem um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descrito neste documento e, opcionalmente, um ou mais agentes profiláticos ou terapêuticos adicionais, em um veículo farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade específica, as composições farmacêuticas compreendem uma quantidade eficaz de um anticorpo no presente documento descrito e, opcionalmente, um ou mais agentes profiláticos ou terapêuticos adicionais, em um veículo farmaceuticamente aceitável. Em certas modalidades, o anticorpo é o único ingrediente ativo incluído na composição farmacêutica. As composições farmacêuticas no presente documento descritas podem ser úteis na redução ou inibição da atividade de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e no tratamento de uma condição, como câncer ou uma doença infecciosa. Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica da presente invenção compreendendo um anticorpo anti-CD73 da presente invenção para uso como um medicamento. Em outra modalidade, a presente invenção se refere a uma composição farmacêutica da presente invenção para uso em um método para o tratamento de câncer ou uma doença infecciosa.

[438] Os veículos farmaceuticamente aceitáveis usados em preparações parenterais incluem veículos aquosos, veículos não aquosos, agentes antimicrobianos, agentes isotônicos, tampões, antioxidantes, anestésicos locais, agentes de suspensão e dispersão, agentes emulsionantes, agentes sequestrantes ou quelantes e outras substâncias farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos de veículos aquosos incluem Injeção de Cloreto de Sódio, Injeção de Ringers, Injeção Isotônica de Dextrose, Injeção de Água Estéril, Injeção de Dextrose e Lactato de Ringer. Os veículos parenterais não aquosos incluem óleos fixos de origem vegetal, óleo de semente de algodão, óleo de milho, óleo de gergelim e óleo de amendoim. Agentes antimicrobianos em concentrações bacteriostáticas ou fungistáticas podem ser adicionados a preparações parenterais embaladas em recipientes de dose múltipla que incluem fenóis ou cresóis, mercuriais, álcool benzílico, clorobutanol, ésteres de ácido p-hidroxibenzóico metílico e propílico, timerosal, cloreto de benzalcônio e cloreto de benzetônio. Os agentes isotônicos incluem cloreto de sódio e dextrose. Os tampões incluem fosfato e citrato. Os antioxidantes incluem bissulfato de sódio. Os anestésicos locais incluem cloridrato de procaína. Os agentes de suspensão e dispersão incluem carboximetilcelulose de sódio, hidroxipropilmetilcelulose e polivinilpirrolidona. Os agentes emulsificantes incluem Polissorbato 80 (TWEEN hidroxipropilmetilcelulose e polivinilpirrolidona. Os agentes emulsificantes incluem Polissorbato 80 (TWEEN hidroxipropilmetilcelulose e polivinilpirrolidona. Os agentes emulsificantes incluem Polissorbato 80 (TWEENG 80). Um agente sequestrante ou quelante de íons metálicos inclui EDTA. Os veículos farmacêuticos também incluem álcool etílico, polietilenoglicol e propilenoglicol para veículos miscíveis em água; e hidróxido de sódio, ácido clorídrico, ácido cítrico ou ácido láctico para ajuste de pH.

[439] Uma composição farmacêutica pode ser formulada para qualquer via de administração a um objeto. Exemplos específicos de vias de administração incluem intranasal, oral, pulmonar, transdérmica, intradérmica e parenteral. A administração parenteral, caracterizada por injeção subcutânea, intramuscular ou intravenosa, também está contemplada neste documento. Os injetáveis podem ser preparados em formas convencionais, como soluções ou suspensões líquidas, formas sólidas adequadas para solução ou suspensão em líquido antes da injeção, ou como emulsões. Os injetáveis, soluções e emulsões também contêm um ou mais excipientes. Os excipientes adequados são, por exemplo, água, solução salina, dextrose, glicerol ou etanol. Além disso, se desejado, as composições farmacêuticas a serem administradas também podem conter pequenas quantidades de substâncias auxiliares não tóxicas, como agentes umectantes ou emulsificantes, agentes tamponantes de pH, estabilizadores, intensificadores de solubilidade e outros agentes, tais como, por exemplo, acetato de sódio, monolaurato de sorbitano, trietanolamina oleato e ciclodextrinas

[440] As preparações para administração parenteral de um anticorpo incluem soluções estéreis prontas para injeção, produtos solúveis secos estéreis, como pós liofilizados, prontos para serem combinados com um solvente imediatamente antes do uso, incluindo comprimidos hipodérmicos, suspensões estéreis prontas para injeção, estéreis produtos insolúveis secos prontos para serem combinados com um veículo imediatamente antes do uso e emulsões estéreis. As soluções podem ser aquosas ou não aquosas.

[441] Se administrados por via intravenosa, os veículos adequados incluem soro fisiológico ou soro fisiológico tamponado com fosfato (PBS) e soluções contendo agentes espessantes e solubilizantes, tais como glicose, polietilenoglicol e polipropilenoglicol e suas misturas.

[442] Misturas tópicas compreendendo proteínas de anticorpo são preparadas conforme descrito para a administração local e sistêmica. À mistura resultante pode ser uma solução, suspensão, emulsões ou similares e pode ser formulada como cremes, géis, pomadas, emulsões, soluções, elixires, loções, suspensões, tinturas, pastas, espumas, aerossóis, irrigações, sprays, supositórios, bandagens, adesivos dérmicos ou quaisquer outras formulações adequadas para administração tópica.

[443] Um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descrito no presente documento pode ser formulado como um aerossol para aplicação tópica, tal como por inalação (vide, por exemplo, Patentes U.S. Nos. 4.044.126, 4.414.209 e

4.364.923, que descrevem aerossóis para distribuição de um esteroide útil para o tratamento de doenças inflamatórias, particularmente asma e são no presente documento incorporados por referência na sua totalidade). Estas formulações para administração ao trato respiratório podem estar na forma de um aerossol ou solução para um nebulizador, ou como um pó microfino para insuflações, sozinhas ou em combinação com um veículo inerte como a lactose. Nesse caso, as partículas da formulação terão, em uma modalidade, diâmetros de menos de 50 mícrons, em uma modalidade, menos de 10 mícrons.

[444] Um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descrito no presente documento pode ser formulado para aplicação local ou tópica, tal como para aplicação tópica na pele e nas membranas das mucosas, tal como no olho, na forma de géis, cremes e loções e para aplicação nos olhos ou para aplicação intracistemal ou intraespinhal. A administração tópica é contemplada para distribuição transdérmica e também para administração aos olhos ou mucosa, ou para terapias de inalação. Também podem ser administradas soluções nasais do anticorpo sozinho ou em combinação com outros excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[445] Os adesivos transdérmicos, incluindo dispositivos iontoforéticos e eletroforéticos, são bem conhecidos pelos versados na técnica e podem ser usados para administrar um anticorpo. Por exemplo, tais emplastros são descritos nas Patentes U.S. Nos.

6.267.983, 6.261.595, 6.256.533, 6.167.301, 6.024.975, 6.010715,

5.985.317, 5.983.134, 5.948.433 e 5.860.957, todos no presente documento incorporados por referência em sua totalidade.

[446] Em certas modalidades, uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo no presente documento descrito é um pó liofiizado, que pode ser reconstituído para administração como soluções, emulsões e outras misturas. Também pode ser reconstituído e formulado como sólidos ou géis. O pó liofiizado é preparado por dissolução de um anticorpo no presente documento descrito, ou um seu derivado farmaceuticamente aceitável, em um solvente adequado. Em certas modalidades, o pó liofilizado é estéril. O solvente pode conter um excipiente que melhora a estabilidade ou outro componente farmacológico do pó ou solução reconstituída, preparada a partir do pó. Excipientes que podem ser usados incluem, mas não estão limitados a, dextrose, sorbitol, frutose, xarope de milho, xilitol, glicerina, glicose, sacarose ou outro agente adequado. O solvente também pode conter um tampão, tal como citrato, fosfato de sódio ou potássio ou outro tampão conhecido dos versados na técnica, em uma modalidade, a pH neutro. A filtração estéril subsequente da solução seguida por liofiização sob condições padrão conhecidas dos versados na técnica fornece a formulação desejada. Em uma modalidade, a solução resultante será distribuída em frascos para liofilização. Cada frasco conterá uma dosagem única ou dosagens múltiplas do composto. O pó liofiizado pode ser armazenado sob condições apropriadas, como a cerca de 4 ºC até a temperatura ambiente. A reconstituição deste pó liofiizado com água para injeção fornece uma formulação para uso em administração parenteral. Para reconstituição, o pó liofiizado é adicionado a água estéril ou outro veículo adequado. A quantidade precisa depende do composto selecionado. Essa quantidade pode ser determinada empiricamente.

[447] Os anticorpos anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descritos neste documento e outras composições fornecidas neste documento também podem ser formulados para serem direcionados a um determinado tecido, receptor ou outra área do corpo do objeto ser tratado. Muitos desses métodos de direcionamento são bem conhecidos dos versados na técnica. Todos esses métodos de direcionamento são contemplados neste documento para uso nas presentes composições. Para exemplos não limitativos de métodos de direcionamento, vide, por exemplo, as Patentes U.S. Nos.

6.316.652, 6.274.552, 6.271.359, 6.253.872, 6.139.865, 6.131.570,

6.120.751, 6.071.495, 6.060.082, 6.048.736, 6.039.975, 6.004.534,

5.985.307, 5.972.366, 5.900.252, 5.840.674, 5.759.542 e 5.709.874, todas no presente documento incorporadas por referência em sua totalidade. Em uma modalidade específica, um anticorpo no presente documento descrito é direcionado a um tumor.

[448] As composições a serem utilizadas para administração in vivo podem ser estéreis. Isso é facilmente realizado por filtração através de, por exemplo, membranas de filtração estéreis.

5.5 Métodos de uso e usos

[449] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método de tratamento de um objeto usando os anticorpos anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) no presente documento descritos. Qualquer doença ou distúrbio em um objeto que se beneficiaria da diminuição da função de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e/ou sinalização relacionada a TGFB, VEGF e/ou adenosina pode ser tratado usando o anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) no presente documento descritos. Em certas modalidades, a doença ou distúrbio é resistente a uma imunoterapia, tal como um agente de direcionamento de ponto de controle (por exemplo, um anticorpo antagonista anti-CTLA-4, um anticorpo antagonista anti-PD-L1, um anticorpo antagonista anti-PD-L2, um anticorpo antagonista anti-PD-1, um anticorpo antagonista anti-TIM-3, um anticorpo antagonista anti- LAG-3, um anticorpo antagonista anticCEACAM1, um anticorpo agonista anti-GITR, um anticorpo antagonista anti-TIGIT, um anticorpo antagonista anti-VISTA, um anticorpo agonista anti-CD137 ou um anticorpo agonista anti-OX40), uma terapia de células T TOR, ou uma terapia de células T de receptor de antígeno quimérico (CAR) (por exemplo, uma terapia de células T CAR CD19). Em certas modalidades, a doença ou distúrbio é recorrente após o tratamento com uma imunoterapia, como um agente de direcionamento de ponto de controle (por exemplo, um anticorpo antagonista anti-CTLA-4, um anticorpo antagonista anti-PD-L1, um anticorpo antagonista anti-PD-L2, um anticorpo antagonista anti-PD-1, um anticorpo antagonista anti-TIM-3, um anticorpo antagonista anti-LAG-3, um anticorpo antagonista anti- CEACAM1, um anticorpo agonista anti-GITR, um anticorpo antagonista anti- TIGIT, um anticorpo antagonista anti-VISTA, um anticorpo agonista anti-CD137 ou um anticorpo agonista anti-OX40), uma terapia com células T TCR ou uma terapia com células T CAR.

Em certas modalidades, a doença ou distúrbio é resistente a uma quimioterapia (por exemplo, uma terapia à base de platina (por exemplo, cisplatina, carboplatina ou oxabplatina), um inibidor de tirosina quinase (por exemplo, VEGFR, Raf) (por exemplo, sorafenibe), um agente indutor de danos ao DNA (por exemplo, gencitabina), um agente hipometilante (por exemplo, azacitidina) e/ou uma combinação de múltiplas quimioterapias (por exemplo, um dupleto de platina ou um regime FOLFOX (por exemplo, FOLFIRINOX ou mFOLFOXS6))). Em certas modalidades, a doença ou distúrbio é recorrente após o tratamento com quimioterapia (por exemplo, uma terapia à base de platina (por exemplo, cisplatina, carboplatina ou oxabplatina), um inibidor de tirosina quinase (por exemplo, VEGFR, Raf) (por exemplo, sorafenib), um agente indutor de danos ao DNA (por exemplo, gencitabina), um agente hipometilante (por exemplo, —azacitidina) e/ou uma combinação de múltiplas quimioterapias (por exemplo, um dupleto de platina ou um regime FOLFOX (por exemplo, FOLFIRINOX ou mFOLFOXS6))). Em certas modalidades, a doença ou distúrbio é resistente a uma terapia antiangiogênica (por exemplo, bevacizumabe). Em certas modalidades, a doença ou distúrbio é recorrente após o tratamento com uma terapia antiangiogênica (por exemplo, bevacizumabe). Em certas modalidades, o tumor sólido é uma doença mensurável.

[450] Os anticorpos anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana) no presente documento descritos são particularmente úteis para inibir a tolerância do sistema imunológico a tumores e, consequentemente, podem ser usados como uma imunoterapia para objetos com câncer. Por exemplo, em certas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento de câncer em um objeto, o método compreendendo administrar ao objeto uma quantidade eficaz do anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica, como no presente documento descrito.

[451] Os cânceres que podem ser tratados com os anticorpos anti- CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou de cinomolgos) ou composições farmacêuticas no presente documento descritas incluem, sem limitação, um tumor sólido, um câncer hematológico (por exemplo, leucemia, linfoma, mieloma, por exemplo, mieloma múltiplo) e uma lesão metastática. Em uma modalidade, o câncer é um tumor sólido. Exemplos de tumores sólidos incluem doenças malignas, por exemplo, sarcomas, sarcoma fibroblástico e carcinomas, por exemplo, adenocarcinomas dos vários sistemas de órgãos, como aqueles que afetam o pulmão, mama, ovário, linfoide, gastrointestinal (por exemplo, cólon), anal, genitais e trato geniturinário (por exemplo, células renais, uroteliais, da bexiga, próstata), faringe, SNC (por exemplo, cérebro,

células neurais ou gliais), cabeça e pescoço, pele (por exemplo, melanoma) e pâncreas, bem como adenocarcinomas que incluem doenças malignas, como câncer de cólon, câncer retal, carcinoma de células renais, câncer de fígado, câncer de pulmão (por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas ou câncer de pulmão de células pequenas), câncer do intestino delgado e câncer do esôfago. O câncer pode estar em um estágio inicial, intermediário, tardio ou metastático. Em certas modalidades, o câncer é resistente a uma imunoterapia, como um agente de direcionamento de ponto de controle (por exemplo, um anticorpo antagonista anti-CTLA-4, um anticorpo antagonista anti- PD-L1, um anticorpo antagonista anti-PD-L2 ou um anticorpo antagonista anti-PD-1). Em certas modalidades, o câncer é recorrente após o tratamento com uma imunoterapia, como um agente de direcionamento de ponto de controle (por exemplo, um anticorpo antagonista anti-CTLA-4, um anticorpo antagonista anti-PD-L1, um anticorpo antagonista anti-PD-L2, um anticorpo antagonista anti-PD-1, um anticorpo antagonista anti-TIM-3, um anticorpo antagonista anti- LAG-3, um anticorpo antagonista anticCEACAM1, um anticorpo agonista anti-GITR, um anticorpo antagonista anti-TIGIT, um antagonista anticorpo anti-VISTA, um anticorpo agonista anti-CD137 ou um anticorpo agonista anti-OX40).

[452] Em uma modalidade, o câncer é escolhido de câncer de pulmão (por exemplo, adenocarcinoma de pulmão ou câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) (por exemplo, NSCLC com histologia escamosa e/ou não escamosa, ou adenocarcinoma de NSCLC)), melanoma (por exemplo, um melanoma avançado), câncer renal (por exemplo, um carcinoma de células renais), câncer de fígado (por exemplo, carcinoma hepatocelular), mieloma (por exemplo, um mieloma múltiplo), um câncer de próstata (por exemplo, câncer de próstata resistente à castração), um câncer de mama (por exemplo, um câncer de mama que não expressa um, dois ou todos os receptores de estrogênio, receptor de progesterona ou Her2/neu, por exemplo, um câncer de mama triplo negativo), um câncer de ovário, um câncer colorretal, um câncer pancreático, um câncer de cabeça e pescoço (por exemplo, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), glioblastoma (GBM), meningioma, câncer endometrial, câncer gástrico ou de estômago, câncer adrenal, câncer anal, câncer gastroesofágico (por exemplo, células escamosas de esôfago carcinoma), mesotelioma, câncer nasofaríngeo, câncer de tireoide, cervical ca ncer, câncer epitelial, câncer peritoneal ou uma doença linfoproliferativa (por exemplo, uma doença linfoproliferativa pós- transplante). Em uma modalidade específica, o câncer é um câncer cervical.

[453] Em uma modalidade, o câncer é um câncer hematológico, por exemplo, uma leucemia, um linfoma ou um mieloma. Em uma modalidade, o câncer é uma leucemia, por exemplo, leucemia linfoblástica aguda (ALL) (por exemplo, ALL de células não B), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), leucemia mielomonocítica crônica (CMML) ou leucemia de células pilosas. Em uma modalidade, o câncer é um linfoma, por exemplo, linfoma de células B, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma difuso de células B grandes tipo células B ativadas (ABC), linfoma difuso de células B grandes de células B do centro germinativo (GCB), linfoma de células do manto, linfoma de Hodgkin, linfoma não-Hodgkin, linfoma não-Hodgkin recidivante, linfoma não-Hodgkin refratário, linfoma não-Hodgkin folicular recorrente, linfoma de Burkitt, linfoma linfocítico pequeno, linfoma folicular, linfoma linfoplasmocitário, linfoma extranodal da zona marginal ou doença residual mínima. Em uma modalidade, o câncer é um mieloma, por exemplo, mieloma múltiplo.

[454] Em outra modalidade, o câncer é escolhido de um carcinoma (por exemplo, carcinoma avançado ou metastático), melanoma ou um carcinoma de pulmão, por exemplo, um carcinoma de células não pequenas do pulmão.

[455] Em uma modalidade, o câncer é um câncer de pulmão, por exemplo, um adenocarcinoma de pulmão, câncer de pulmão de células não pequenas ou câncer de pulmão de células pequenas.

[456] Em uma modalidade, o câncer é um melanoma, por exemplo, um melanoma avançado. Em uma modalidade, o câncer é um melanoma avançado ou irressecável que não responde a outras terapias. Em outras modalidades, o câncer é um melanoma com uma mutação BRAF (por exemplo, uma mutação BRAF V600). Em ainda outras modalidades, o anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) ou composição farmacêutica no presente documento descrita, é administrado após o tratamento com um anticorpo anti-CTLA-4 (por exemplo, ipilimumabe) com ou sem um inibidor BRAF (por exemplo, vemurafenib ou dabrafenib).

[457] Em outra modalidade, o câncer é um hepatocarcinoma, por exemplo, um hepatocarcinoma avançado, com ou sem uma infecção viral, por exemplo, uma hepatite viral crônica.

[458] Em outra modalidade, o câncer é um câncer de próstata, por exemplo, um câncer de próstata avançado.

[459] Em ainda outra modalidade, o câncer é um mieloma, por exemplo, mieloma múltiplo.

[460] Em ainda outra modalidade, o câncer é um câncer renal, por exemplo, um carcinoma de células renais (RCC) (por exemplo, um RCC metastático, carcinoma de células renais de células claras (CCRCC) ou carcinoma de células pilosas renais).

[461] Em ainda outra modalidade, o câncer é escolhido de um câncer de pulmão, um melanoma, um câncer renal, um câncer de mama, um câncer colorretal, uma leucemia ou uma lesão metastática do câncer.

[462] Em certas modalidades, a presente invenção fornece um método de prevenção ou tratamento de uma doença infecciosa em um objeto, o método compreendendo administrar ao objeto uma quantidade eficaz de um anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo) anticorpo ou composição farmacêutica do mesmo, conforme descrito no presente documento. Em uma modalidade, são fornecidos no presente documento métodos para prevenir e/ou tratar uma infecção (por exemplo, uma infecção viral, uma infecção bacteriana, uma infecção fúngica, uma infecção por protozoário ou uma infecção parasitária). A infecção evitada e/ou tratada de acordo com os métodos pode ser causada por um agente infeccioso no presente documento identificado. Em uma modalidade específica, um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) no presente documento descrito ou uma composição do mesmo é o único agente ativo administrado a um objeto. Em certas modalidades, um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descrito no presente documento ou uma composição do mesmo é usado em combinação com intervenções anti- infecciosas (por exemplo, antivirais, antibacterianos, antifúngicos ou anti-helmínticos) para o tratamento de doenças infecciosas. Portanto, em uma modalidade, a presente invenção se refere a um anticorpo e/ou composição farmacêutica da presente invenção para uso em um método de prevenção e/ou tratamento de uma doença infecciosa, opcionalmente em que o anticorpo ou composição farmacêutica é o único agente ativo administrado a um objeto, ou em que o anticorpo ou composição farmacêutica é usado em combinação com intervenções anti-infecciosas.

[463] Doenças infecciosas que podem ser tratadas e/ou prevenidas por anticorpos anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) ou composições farmacêuticas descritas neste documento são causadas por agentes infecciosos, incluindo, mas não se limitando a bactérias, parasitas, fungos, protozoários e vírus. Em uma modalidade específica, a doença infecciosa tratada e/ou prevenida por anticorpos anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo) ou composições farmacêuticas no presente documento descritas é causada por um vírus. As doenças virais ou infecções virais que podem ser prevenidas e/ou tratadas de acordo com os métodos descritos neste documento incluem, mas não estão limitadas a, aquelas causadas por hepatite tipo A, hepatite tipo B, hepatite tipo C, influenza (por exemplo, influenza A ou influenza B), varicela, adenovírus, herpes simplex tipo | (HSV-I), herpes simplex tipo Il (HSV-II), peste bovina, rinovírus, ecovírus, rotavírus, vírus sincicial respiratório, vírus do papiloma, vírus papova, citomegalovírus, equinovírus, arbovírus, huntavírus, vírus coxsackie, vírus da caxumba, vírus do sarampo, vírus da rubéola, vírus da poliomielite, varíola, vírus da imunodeficiência humana vírus tipo | (HIV-I), vírus da imunodeficiência humana tipo |l (HIV-II) e agentes de doenças virais, como meningite viral, encefalite, dengue ou varíola.

[464] As infecções bacterianas que podem ser prevenidas e/ou tratadas incluem infecções causadas por Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Proteus vulgaris, Staphylococcus viridans e Pseudomonas aeruginosa. As doenças bacterianas causadas por bactérias (por exemplo, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Proteus vulgaris, Staphylococcus viridans e Pseudomonas aeruginosa) que podem ser evitadas e/ou tratadas de acordo com os métodos no presente documento descritos incluem, mas não são limitadas a, Mycobacteria rickettsia, Mycoplasma, Neisseria, S.

pneumonia, Borrelia burgdorferi (doença de Lyme), Bacillus antracis (antrax), tétano, Streptococcus, Staphylococcus, mycobacterium, pertissus, cólera, peste, difteria, clamídia, S. aureus e legionella.

[465] Doenças de protozoários ou infecções de protozoários causadas por protozoários que podem ser prevenidas e/ou tratadas de acordo com os métodos descritos neste documento incluem, mas não estão limitados a, leishmania, coccidiose, tripanossoma esquistossomático ou malária. As doenças parasitárias ou infecções parasitárias causadas por parasitas que podem ser evitadas e/ou tratadas de acordo com os métodos descritos neste documento incluem, mas não estão limitados a, clamídia e rickettsia.

[466] Doenças fúngicas ou infecções fúngicas que podem ser prevenidas e/ou tratadas de acordo com os métodos descritos neste documento incluem, mas não estão limitados a, aquelas causadas por infecções por Candida, zigomicose, mastite por Candida, tricosporonose disseminada progressiva com tricosporonemia latente, candidíase disseminada, paracoccidioidomicose pulmonar, aspergilose pulmonar, pneumonia por Pneumocystis carinii, meningite criptocócica, meningoencefalite coccidioidal e vasculite cerebrospinal, infecção por Aspergillus niger, Fusarium keratitis, micoses dos seios paranasais, endocardite por Aspergillus fumigatus, discondroplasia tibial, vaginite por Candida glabrata, candidíase orofaríngea, doença granulomatosa crônica ligada a X, tinea pedis, candidíase cutânea, placentite micótica, tricosporonose disseminada, aspergilose broncopulmonar alérgica, ceratite micótica, infecção por Cryptococcus neoformans, peritonite fúngica, infecção por Curvularia geniculata, endoftalmite estafilocócica, esporotricose e dermatofitose.

[467] Em certas modalidades, os anticorpos anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) ou composições "farmacêuticas descritas neste documento são administrados ao objeto como uma monoterapia.

[468] Em certas modalidades, esses métodos adicionalmente compreendem a administração de um agente terapêutico adicional ao objeto. Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional compreende um agente quimioterapêutico. Em certas modalidades, o agente quimioterapêutico compreende um agente hipometilante (por exemplo, —azacitidina)à;N Em certas modalidades, o agente quimioterapêutico compreende um agente indutor de danos ao DNA (por exemplo, gencitabina)) Em certas modalidades, o agente quimioterapêutico compreende uma terapia à base de platina (por exemplo, cisplatinay carboplatina ou oxaliplatina)à» Em certas modalidades, o agente quimioterapêutico compreende um inibidor de tirosina quinase (por exemplo, VEGFR, Raf) (por exemplo, sorafenibe). Em certas modalidades, o agente quimioterapêutico compreende uma combinação de múltiplas quimioterapias (por exemplo, um dupleto de platina ou um regime FOLFOX (por exemplo, FOLFIRINOX ou mMFOLFOXSG6)). Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional compreende uma terapia antiangiogênica (por exemplo, bevacizumabe). Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional compreende um conjugado anticorpo-droga. Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional compreende um agente radioterapêutico. Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional é capaz de causar morte celular imunogênica (por exemplo, morte de células tumorais).

[469] Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional compreende um agente de direcionamento de ponto de controle. Em certas modalidades, o agente de direcionamento de ponto de controle é selecionado a partir do grupo consistindo em um anticorpo antagonista anti-CTLA-4, um anticorpo antagonista anti-PD-L1, um anticorpo antagonista anti-PD-L2, um anticorpo antagonista anti-PD-1, um anticorpo antagonista anti-TIM-3, um anticorpo antagonista anti-LAG-3, um anticorpo antagonista anti-TIGIT, um anticorpo antagonista anti- VISTA, um anticorpo antagonista anti-CD96, um anticorpo antagonista anti-CEACAM1, um anticorpo agonista anti-CD137, um anticorpo agonista anti-GITR e um anticorpo agonista anti-OX40. Em certas modalidades, o agente de direcionamento de ponto de controle é selecionado a partir do grupo consistindo em um anticorpo antagonista anti-CTLA-4, um anticorpo antagonista anti-PD-L1, um anticorpo antagonista anti-PD-L2, e um anticorpo antagonista anti-PD-1, em que os anticorpos anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo) ou composições farmacêuticas descritas neste documento sinergizam com o agente de direcionamento de ponto de controle.

[470] Em uma modalidade, a presente invenção se refere a um anticorpo e/ou composição farmacêutica da presente invenção para uso em um método da presente invenção, em que o método adicionalmente compreende a administração de um agente terapêutico adicional ao objeto. Em uma modalidade, a presente invenção se refere a (a) um anticorpo e/ou composição farmacêutica da presente invenção e (b) um agente terapêutico adicional para uso como medicamento. Em uma modalidade, a presente invenção se refere a (a) um anticorpo e/ou composição farmacêutica da presente invenção, e (b) um agente terapêutico adicional para uso em um método para o tratamento de câncer. Em outra modalidade, a presente invenção se refere a uma composição farmacêutica, kit ou kit de peças compreendendo (a) um anticorpo e/ou composição farmacêutica da presente invenção e (b) um agente terapêutico adicional. Em uma modalidade, o agente terapêutico adicional é um agente quimioterapêutico, radioterapêutico ou de ponto de controle.

[471] Em certas modalidades, um anticorpo anti-PD-1 é usado em métodos no presente documento descritos. Em certas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é nivolumabe, também conhecido como BMS- 936558 ou MDX1106, desenvolvido pela Bristol-Myers Squibb. Em certas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é pembrolizumabe, também conhecido como lambrolizumabe ou MK-3475, desenvolvido pela Merck & Co. Em certas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é pidilizumabe, também conhecido como CT-011, desenvolvido pela CureTech. Em certas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é MEDIO680, também conhecido como AMP-514, desenvolvido pela Medimmune. Em certas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é PDROO1 desenvolvido pela Novartis Pharmaceuticals. Em certas modalidades, o anticorpo anti-PD- 1 é REGN2810, desenvolvido pela Regeneron Pharmaceuticals. Em certas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é PF-06801591, desenvolvido pela Pfizer. Em certas modalidades, o anticorpo anti-PD- 1 é BGB-A317 desenvolvido pela BeiGene. Em certas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é TSR-042 desenvolvido por AnaptysBio e Tesaro. Em certas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é SHR-1210, desenvolvido por Hengrui.

[472] Outros exemplos não limitativos de anticorpos anti-PD-1 que podem ser usados em métodos de tratamento descritos neste documento são descritos nas seguintes patentes e pedidos de patentes, todos os quais são no presente documento incorporados por referência em sua totalidade para todos os fins: Patente No. 6.808.710; Patente U.S. No. 7.332.582; Patente U.S. No. 7.488.802; Patente U.S. No.

8.008.449; Patente U.S. No. 8.114.845; Patente U.S. NO. 8.168.757; Patente U.S. No. 8.354.509; Patente U.S. No. 8.686.119; Patente U.S. No. 8.735.553; Patente U.S. No. 8.747.847; Patente U.S. No. 8.779.105; Patente U.S. No. 8.927.697; Patente U.S. No. 8.993.731; Patente U.S. No. 9.102.727; Patente U.S. No. 9.205.148; Publicação U.S. No. US 2013/0202623 A1; Publicação U.S. No. US 2013/0291136 A1;

Publicação U.S. No. US 2014/0044738 A1; Publicação U.S. No. US 2014/0356363 A1; Publicação dos EUA nº US 2016/0075783 A1; e Publicação PCT No. WO 2013/033091 A1; Publicação PCT No. WO 2015/036394 A1; Publicação PCT No. WO 2014/179664 A2; Publicação PCT No. WO 2014/209804 A1; Publicação PCT No. WO 2014/206107 A1; Publicação PCT No. WO 2015/058573 A1; Publicação PCT No. WO 2015/085847 A1; Publicação PCT No. WO 2015/200119 A1; Publicação PCT No. WO 2016/015685 A1; e Publicação PCT No. WO 2016/020856 A1.

[473] Em certas modalidades, um anticorpo anti-PD-L1 é usado em métodos no presente documento descritos. Em certas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 é atezolizumabe desenvolvido pela Genentech. Em certas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 é durvalumabe desenvolvido pela AstraZeneca, Celgene e Medimmune. Em certas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 é avelumabe, também conhecido como MSBO0010718C, desenvolvido pela Merck Serono e Pfizer. Em certas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 é MDX-1105 desenvolvido pela Bristol-Myers Squibb. Em certas modalidades, o anticorpo anti-PD- L1 é AMP-224 desenvolvido pela Amplimmune e GSK.

[474] Exemplos não limitativos de anticorpos anti-PD-L1 que podem ser usados em métodos de tratamento descritos neste documento são descritos nas seguintes patentes e pedidos de patentes, todos no presente documento incorporados por referência em sua totalidade para todos os fins: Patente US No. 7,943,743; Patente US No. 8,168,179; Patente US No. 8,217,149; Patente U.S. No. 8,552,154; Patente U.S. No. 8,779,108; Patente U.S. No. 8,981,063; Patente U.S. No. 9,175,082; Publicação U.S. No. US 2010/0203056 A1; Publicação U.S. No. US 2003/0232323 A1; Publicação U.S. No. US 2013/0323249 A1; Publicação U.S. No. US 2014/0341917 A1; Publicação U.S. No. US 2014/0044738 A1; Publicação U.S. No. US 2015/0203580 A1;

Publicação U.S. No. US 2015/0225483 A1; Publicação U.S. No. US 2015/0346208 A1; Publicação U.S. No. US 2015/0355184 A1; e Publicação PCT No. WO 2014/100079 A1; Publicação PCT No. WO 2014/022758 A1; Publicação PCT No. WO 2014/055897 A2; Publicação PCT No. WO 2015/061668 A1; Publicação PCT No. WO 2015/109124 A1; Publicação PCT No. WO 2015/195163 A1; Publicação PCT No. WO 2016/000619 A1; e Publicação PCT No. WO 2016/030350 A1.

[475] Em certas modalidades, um anticorpo anti-CTLA-4 é usado em métodos no presente documento descritos. Em certas modalidades, o anticorpo anti-CTLA-4 é ipilimumabe desenvolvido pela Bristol-Myers Squibb.

[476] Em certas modalidades, um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, camundongo ou cinomolgo) descrito neste documento é administrado a um objeto em combinação com um composto que tem como alvo uma enzima (s) imunomoduladora, tal como IDO (indoleamina-(2,3)-dioxigenase) e/ou TDO (triptofano 2,3- dioxigenase). Portanto, em uma modalidade, o agente terapêutico adicional é um composto que tem como alvo uma enzima (s) imunomoduladora, tal como um inibidor de indolamina(2,3)-dioxigenase (IDO). Em certas modalidades, tal composto é selecionado a partir do grupo consistindo em epacadostat (Incyte Corp; vide, por exemplo, WO 2010/005958 que é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade), FO01287 (Flexus Biosciences/Bristol-Myers Squibb), indoximod (NewLink Genetics) e NLG919 (NewLink Genetics). Em uma modalidade, o composto é epacadostat. Em outra modalidade, o composto é FO001287. Em outra modalidade, o composto é indoximod. Em outra modalidade, o composto é NLG919. Em uma modalidade específica, um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana) descrito no presente documento é administrado a um objeto em combinação com um inibidor de IDO para o tratamento de câncer. O inibidor de IDO como no presente documento descrito para uso no tratamento de câncer está presente em uma forma de dosagem sólida de uma composição farmacêutica, como um comprimido, uma pílula ou uma cápsula, em que a composição farmacêutica inclui um inibidor de IDO e um excipiente farmaceuticamente aceitável. Como tal, o anticorpo como no presente documento descrito e o inibidor de IDO como no presente documento descrito podem ser administrados separadae, sequencial ou simultaneamente como formas de dosagem separadas. Em uma modalidade, o anticorpo é administrado por via parenteral e o inibidor de IDO é administrado por via oral. Em modalidades particulares, o inibidor é selecionado a partir do grupo consistindo em epacadostat (Incyte Corporation), FO01287 (Flexus Biosciences/Bristol- Myers Squibb), indoximod (NewLink Genetics) e NLG919 (NewLink Genetics). Epacadostat foi descrito na Publicação PCT No. WO 2010/005958, que é no presente documento incorporada por referência em sua totalidade para todos os fins. Em uma modalidade, o inibidor é epacadostat. Em outra modalidade, o inibidor é FO01287. Em outra modalidade, o inibidor é indoximod. Em outra modalidade, o inibidor é NLG919.

[477] Em certas modalidades, um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descrito no presente documento é administrado a um objeto em combinação com uma vacina. A vacina pode ser, por exemplo, uma vacina de peptídeo, uma vacina de DNA ou uma vacina de RNA. Em certas modalidades, a vacina é uma vacina de tumor à base de proteína de choque térmico ou uma vacina de patógeno à base de proteína de choque térmico. Em uma modalidade específica, um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descrito no presente documento é administrado a um objeto em combinação com uma vacina de tumor baseada em proteína de choque térmico. As proteínas de choque térmico (HSPs) são uma família de proteínas altamente conservadas encontradas de forma ubíqua em todas as espécies.

Sua expressão pode ser fortemente induzida a níveis muito mais elevados como resultado de choque térmico ou outras formas de estresse, incluindo exposição a toxinas, estresse oxidativo ou privação de glicose.

Cinco famílias foram classificadas de acordo com o peso molecular: HSP-110, -90, -70, -60 e -28. HSPs entregam peptídeos imunogênicos por meio da via de apresentação cruzada em células apresentadoras de antígenos (APCs), como macrófagos e células dendríticas (DCs), levando à ativação de células T.

As HSPs funcionam como acompanhantes de peptídeos antigênicos associados a tumor, formando complexos capazes de induzir imunidade específica ao tumor.

Após a liberação de células tumorais mortas, os complexos HSP- antígeno são absorvidos por células apresentadoras de antígeno (APCs), em que os antígenos são processados em peptídeos que se ligam a moléculas de MHC de classe | e classe Il, levando à ativação de células T antitumorais CD8+ e CD4+. A imunidade induzida por complexos de HSP derivados de preparações de tumor é especificamente dirigida contra o repertório de peptídeo antigênico único expresso pelo câncer de cada objeto.

Portanto, em uma modalidade, a presente invenção se refere a (a) um anticorpo e/ou composição farmacêutica da presente invenção e (b) uma vacina para uso como medicamento, por exemplo, para uso em um método para o tratamento de câncer.

Em uma modalidade, a presente invenção se refere a uma composição farmacêutica, kit ou kit de peças compreendendo (a) um anticorpo e/ou composição farmacêutica da presente invenção e (b) uma vacina.

Em uma modalidade, a vacina é uma vacina contra tumores baseada em proteínas de choque térmico.

Em uma modalidade, a vacina é uma vacina de patógeno à base de proteína de choque térmico.

Em certas modalidades, a vacina é conforme descrito em WO 2016/183486, no presente documento incorporado por referência em sua totalidade.

[478] Um complexo de peptídeo proteína de choque térmico (HSPPC) é um complexo de peptídeo proteína que consiste em uma proteína de choque térmico complexada de forma não covalente com peptídeos antigênicos. HSPPCs induzem respostas imunes inatas e adaptativas. Em uma modalidade específica, o peptídeo (s) antigênico exibe antigenicidade para o câncer a ser tratado. HSPPCs são eficientemente apreendidos por APCs através de receptores de membrana (principalmente CD91) ou pela ligação a receptores tipo Toll. A internalização de HSPPC resulta na maturação funcional das APCs com a produção de quimiocinas e citocinas, levando à ativação de células assassinas naturais (NK), monócitos e respostas imunes mediadas por Th1 e Th-2. Em certas modalidades, HSPPCs usados em métodos no presente documento descritos compreendem uma ou mais proteínas de choque térmico da família hsp60, hsp70 ou hsp90 de proteínas de estresse complexadas com peptídeos antigênicos. Em certas modalidades, HSPPCs compreendem hsc70, hsp70, hsp90, hsp110, grp170, gp96, calreticulina ou combinações de dois ou mais dos mesmos.

[479] Em uma modalidade específica, o complexo de peptídeo proteína de choque térmico (HSPPC) compreende proteínas de choque térmico recombinantes (por exemplo, hsp70 ou hsc70) ou um domínio de ligação de peptídeo das mesmas complexado com peptídeos antigênicos = recombinantes. As proteínas de choque térmico recombinantes podem ser produzidas por tecnologia de DNA recombinante, por exemplo, usando a sequência hsc70 humana conforme descrito em Dwomiczak e Mirault, Nucleic Acids Res. 15: 5181-5197 (1987) e acesso ao GenBank no. P11142 e/ou Y00371, cada um dos quais é incorporado neste documento por referência em sua totalidade. Em certas modalidades, as sequências de Hsp70 são conforme descritas em Hunt e Morimoto Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82 (19), 6455-6459 (1985) e acesso ao GenBank no. PODMV8 e/ou M11717, cada um dos quais é incorporado no presente documento por referência na sua totalidade. Os peptídeos antigênicos também podem ser preparados por métodos de DNA recombinante conhecidos na técnica.

[480] Em certas modalidades, os peptídeos antigênicos compreendem um aminoácido modificado. Em certas modalidades, o aminoácido modificado compreende uma modificação pós-tradução. Em certas modalidades, o aminoácido modificado compreende um mimético de uma modificação pós-tradução. Em certas modalidades, o aminoácido modificado é Tyr, Ser, Thr, Arg, Lys ou His que foi fosforilado em uma hidroxila ou amina da cadeia lateral. Em certas modalidades, o aminoácido modificado é um mimético de um aminoácido Tyr, Ser, Thr, Arg, Lys ou His que foi fosforilado em uma hidroxila ou amina da cadeia lateral.

[481] Em uma modalidade específica, um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descrito neste documento é administrado a um objeto em combinação com um complexo de peptídeo proteína de choque térmico (HSPPC), por exemplo, complexo de peptídeo proteína de choque térmico-96 (HSPPC-96), para tratar o câncer. O HSPPC-96 compreende uma proteína de choque térmico (Hsp) de 96 kDa, gp96, complexada com peptídeos antigênicos. HSPPC-96 é uma imunoterapia contra o câncer fabricada a partir do tumor de um objeto e contém a "impressão digital" antigênica do câncer. Em certas modalidades, esta impressão digital contém antígenos únicos que estão presentes apenas nas células cancerosas específicas daquele objeto em particular e a injeção da vacina se destina a estimular o sistema imunológico do objeto a reconhecer e atacar quaisquer células com a impressão digital de câncer específica. Portanto, em uma modalidade, a presente invenção se refere a um anticorpo e/ou composição farmacêutica da presente invenção em combinação com um complexo de peptídeo proteína de choque térmico (HSPPC) para uso como um medicamento e/ou para uso em um método para o tratamento de câncer.

[482] Em certas modalidades, o HSPPC, por exemplo, HSPPC-96, é produzido a partir do tecido tumoral de um objeto. Em uma modalidade específica, o HSPPC (por exemplo, HSPPC-96) é produzido a partir de um tumor do tipo de câncer ou metástase do mesmo sendo tratado. Em outra modalidade específica, o HSPPC (por exemplo, HSPPC-96) é autólogo para o objeto a ser tratado. Em certas modalidades, o tecido tumoral é tecido tumoral não necrótico. Em certas modalidades, pelo menos 1 grama (por exemplo, pelo menos 1, pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos 5, pelo menos 6, pelo menos 7, pelo menos 8, pelo menos 9, ou pelo menos 10 gramas) de tecido tumoral não necrótico é usado para produzir um regime de vacina. Em certas modalidades, após a ressecção cirúrgica, o tecido tumoral não necrótico é congelado antes de ser usado na preparação da vacina. Em certas modalidades, o HSPPC, por exemplo, HSPPC-96, é isolado do tecido tumoral por técnicas de purificação, filtrado e preparado para uma vacina injetável. Em certas modalidades, um objeto recebe 6-12 doses de HSPPC, por exemplo, HSPCC-96. Em tais modalidades, as doses de HSPPC, por exemplo, HSPPC-96, podem ser administradas semanalmente para as primeiras 4 doses e, em seguida, quinzenalmente para as 2-8 doses adicionais.

[483] Outros exemplos de HSPPCs que podem ser usados de acordo com os métodos descritos neste documento são descritos nas seguintes patentes e pedidos de patentes, todos os quais são no presente documento incorporados por referência em sua totalidade:

Patentes U.S. Nos. 6.391.306, 6.383.492, 6.403.095, 6.410.026,

6.436.404, 6.447.780, 6.447.781 e 6.610.659. Exemplos de HSPPCs incluem, sem limitação, Prophage”", AutoSynVaxTY e PhosphoSynVaxTY,

[484] Em certas modalidades, um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descrito neste documento é administrado a um objeto em combinação com um adjuvante. Vários adjuvantes podem ser usados dependendo do contexto de tratamento. Exemplos não limitativos de adjuvantes apropriados incluem, mas não se limitam a, Adjuvante Completo de Freund (CFA), Adjuvante Incompleto de Freund (IFA), montanide ISA (adjuvante Seppic incompleto), o sistema de adjuvante Ribi (RAS), Titer Max, peptídeos muramil, Formulação de Adjuvante Syntex (SAF), alúmen (hidróxido de alumínio e/ou fosfato de alumínio), adjuvantes de sal de alumínio, adjuvantes GerbuG, antígeno absorvido por nitrocelulose, antígeno encapsulado ou aprisionado, monofosforil libídeo A 3 De-O-acilado (3 D-MPL), oligonucleotídeos imunoestimuladores, ligandos de receptor tipo Toll (TLR), ligandos de lectina de ligação a manana (MBL), agonistas de STING, complexos imunoestimulantes, como saponinas, Quil A, QS-21, QS-T7, ISCOMATRIX e outros. Outros adjuvantes incluem oligonucleotídeos CpG e moléculas de RNA de filamento duplo, como poli (A) e poli (U). Também podem ser utilizadas combinações dos adjuvantes precedentes. Vide, por exemplo, Patentes U.S. Nos. 6.645.495;

7.029.678; e 7.858.589, todos os quais são incorporados neste documento por referência na sua totalidade. Em uma modalidade, o adjuvante usado no presente documento é QS-21 STIMULON.

[485] Em certas modalidades, um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descrito neste documento é administrado a um objeto em combinação com um agente terapêutico adicional compreendendo um TCR. Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional é um TCR solúvel. Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional é uma célula que expressa um TCR. Portanto, em uma modalidade, a presente invenção se refere a um anticorpo e/ou composição farmacêutica da presente invenção em combinação com um agente terapêutico adicional que compreende um TCR para uso como medicamento e/ou para uso em um método para o tratamento de câncer.

[486] Em certas modalidades, um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descrito neste documento é administrado a um objeto em combinação com uma célula que expressa um receptor de antígeno quimérico (CAR). Em certas modalidades, a célula é uma célula T. Terapias de células T CAR exemplares são fornecidas em Pettitt el al. (2017) Molecular Therapy 26 (2): 342-53, que é incorporado por referência neste documento em sua totalidade. Em certas modalidades, a terapia com células T CAR compreende uma terapia com células T CD19 CAR (por exemplo, YESCARTATY e KYMRIAHTY). Em certas modalidades, o objeto tem um câncer CD19+ (por exemplo, uma malignidade hematológica CD19+). Em certas modalidades, tal câncer CD19+ é resistente apenas à terapia com células T CAR. Em certas modalidades, os objetos com um tumor ou indicação clínica em que a taxa de resposta a uma terapia com células T CAR não é superior a 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, ou menos, são selecionados para tratamento com o anticorpo e/ou composição farmacêutica descrita neste documento, sozinho ou em combinação com a terapia de células T CAR. Em certas modalidades, um objeto com um linfoma difuso de grandes células B não especificado de outra forma (DLBCL-nos), linfoma de grandes células B mediastinal primário, linfoma de células B de alto grau ou DLBCL decorrente de linfoma folicular é selecionado para tratamento com o anticorpo e/ou composição farmacêutica no presente documento descrita, sozinho ou em combinação com uma terapia com células T CD 19 CAR (por exemplo, YESCARTAT!Y). Em certas modalidades, um objeto com o precursor de células B ALL é selecionado para tratamento com o anticorpo e/ou composição farmacêutica no presente documento descrita, sozinho ou em combinação com uma terapia com células T CD19 CAR (por exemplo, KYMRIAHTY). Em certas modalidades, o objeto teve uma resposta inadequada, apesar de exibir uma expansão adequada da terapia com células T CAR infundidas.

[487] Em modalidades específicas, o câncer CD19+ é uma malignidade hematológica CD19+. Em certas modalidades, a malignidade hematológica CD19+ é uma LLA precursora de células não B (por exemplo, linfoma difuso de grandes células B ou linfoma de células do manto). Em certas modalidades, o câncer CD19+ é resistente ou recorrente após o tratamento com um tratamento precedente (por exemplo, uma terapia de anticorpo monoclonal anti-CD20 ou um regime de quimioterapia contendo antraciclina). Em certas modalidades, o objeto tem uma resposta inadequada a pelo menos uma infusão de uma terapia com células T CD19 CAR (por exemplo, YESCARTAT!Y ou KYMRIAHTY). Em certas modalidades, o objeto tem uma doença mensurável.

[488] Em certas modalidades, um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descrito neste documento é administrado a um objeto em combinação com um anticorpo mimetizador de TOR. Em certas modalidades, o anticorpo mimetizador de TOR é um anticorpo que se liga especificamente a um complexo peptídeo-MHC. Para exemplos não limitativos de anticorpos mimetizadores de TCR, consulte, por exemplo, Patente U.S. No.

9.074.000 e Publicação U.S. Nos. US 2009/0304679 A1 e US 2014/0134191 A1, todos os quais são incorporados neste documento por referência em sua totalidade.

[489] Em certas modalidades, um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descrito neste documento é administrado a um objeto em combinação com um engager de células T biespecífico (BiTE) (por exemplo, como descrito em WO02005061547A2, que é incorporado por referência no presente documento em sua totalidade) e/ou um anticorpo de redirecionamento de afinidade dupla (DART) (por exemplo, como descrito em WOZ2012162067 A2, que é incorporado por referência no presente documento em sua totalidade). Em certas modalidades, o BITE e/ou DART se liga especificamente a um antígeno associado ao tumor (por exemplo, um polipeptídeo superexpresso em um tumor, um polipeptídeo derivado de um oncovírus, um polipeptídeo compreendendo uma modificação pós-tradução específica para um tumor, um polipeptídeo especificamente mutado em um tumor) e uma molécula em uma célula efetora (por exemplo, CD3 ou CD16). Em certas modalidades, o antígeno associado ao tumor é EGFR (por exemplo, EGFR humano), opcionalmente em que o BiTE e/ou DART compreende as sequências VH e VL de cetuximabe. Em certas modalidades, o antígeno associado ao tumor é Her2 (por exemplo, Her2 humano), opcionalmente em que o BiTE e/ou DART compreende as sequências VH e VL de trastuzumabe. Em certas modalidades, o antígeno associado ao tumor é CD20 (por exemplo, CD20 humano).

[490] O anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e o agente terapêutico adicional (por exemplo, agente quimioterapêutico, radioterapêutico, de direcionamento de ponto de controle, inibidor de IDO, vacina, adjuvante, um TCR solúvel, uma célula que expressa um TCR, uma célula que expressa um receptor de antígeno quimérico e/ou um anticorpo mimetizador de TOR) pode ser administrado separada, sequencial ou simultaneamente como formas de dosagem separadas. Em uma modalidade, um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) é administrado por via parenteral e um inibidor de IDO é administrado por via oral.

[491] Um anticorpo ou composição farmacêutica no presente documento descrito pode ser entregue a um objeto por uma variedade de vias. Estes incluem, mas não estão limitados a, vias parenteral, intranasal, intratraqueal, oral, intradérmica, tópica, intramuscular, intraperitoneal, transdérmica, intravenosa, intratumoral, conjuntival, intra-arterial e subcutânea. A administração pulmonar também pode ser usada, por exemplo, pelo uso de um inalador ou nebulizador, e formulação com um agente aerossolizante para uso como um spray. Em certas modalidades, o anticorpo ou composição farmacêutica no presente documento descrito é administrado por via subcutânea ou intravenosa. Em certas modalidades, o anticorpo ou composição farmacêutica no presente documento descrito é administrado por via intra-arterial. Em certas modalidades, o anticorpo ou composição farmacêutica no presente documento descrito é administrado por via intratumoral. Em certas modalidades, o anticorpo ou composição farmacêutica no presente documento descritos é entregue em um linfonodo de drenagem de tumor.

[492] A quantidade de um anticorpo ou composição que será eficaz no tratamento e/ou prevenção de uma condição dependerá da natureza da doença e pode ser determinada por técnicas clínicas padrão.

[493] A dose precisa a ser usada em uma composição dependerá também da via de administração e da gravidade da infecção ou doença por ela causada, e deve ser decidida de acordo com o julgamento do médico e das circunstâncias de cada objeto. Por exemplo, as doses eficazes também podem variar dependendo do meio de administração,

sítio alvo, estado fisiológico do paciente (incluindo idade, peso corporal e saúde), se o paciente é humano ou animal, outros medicamentos administrados ou se o tratamento é profilático ou terapêutico. Normalmente, o paciente é um ser humano, mas mamíferos não humanos, incluindo mamíferos transgênicos, também podem ser tratados. As dosagens de tratamento são tituladas de forma ideal para otimizar a segurança e eficácia.

[494] Um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, camundongo humano ou CD73 de cinomolgos) descrito no presente documento também pode ser usado para testar os níveis de proteína CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) em uma amostra biológica usando métodos imuno-histológicos clássicos conhecidos por aqueles versados na técnica, incluindo imunoensaios, tais como o ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA), imunoprecipitação ou Western blotting. Os marcadores de ensaio de anticorpo adequados são conhecidos na técnica e incluem marcadores de enzima, tais como glicose oxidase; radioisótopos, tais como iodo (1261, 1211), carbono (*ºC), enxofre (*S), trítio (ºH), índio (ln), e tencnécio (Tc); marcadores luminescentes, como luminol; e marcadores fluorescentes, como fluoresceína e rodamina, e biotina. Esses marcadores podem ser usados para marcar um anticorpo no presente documento descrito. Alternativamente, um segundo anticorpo que reconhece um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descrito no presente documento pode ser marcado e usado em combinação com um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) para detectar CD73 (por exemplo, humano, camundongo, ou níveis de proteína de CD73 de cinomolgos). Portanto, em uma modalidade, a presente invenção se refere ao uso de um anticorpo da presente invenção para a detecção in vitro da proteína CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou de cinomolgos) em uma amostra biológica. Em uma outra modalidade, a presente invenção se refere ao uso de um anticorpo anti- CD73 da invenção, para ensaio e/ou detecção de níveis de proteína CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) em uma amostra biológica in vitro, opcionalmente em que o anticorpo anti- CD73 é conjugado a um radionuclídeo ou marcador detectável e/ou carrega um marcador descrito no presente documento, e/ou em que um método imuno-histológico é usado.

[495] O ensaio para o nível de expressão da proteína CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) se destina a incluir a medição qualitativa ou quantitativa ou a estimativa do nível de proteína CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) em uma primeira amostra biológica diretamente (por exemplo, determinando ou estimando o nível absoluto de proteína) ou relativamente (por exemplo, comparando com o nível de proteína associada à doença em uma segunda amostra biológica). O nível de expressão do polipeptídeo CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) na primeira amostra biológica pode ser medido ou estimado e comparado a um nível de proteína CD73 padrão (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), o padrão sendo tomado, por exemplo, a partir de uma segunda amostra biológica obtida de um indivíduo sem o transtorno ou sendo determinado pela média dos níveis de uma população de indivíduos sem o transtorno. Como será apreciado na técnica, uma vez que o nível de polipeptídeo "padrão" CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) é conhecido, ele pode ser usado repetidamente como um padrão para comparação. Portanto, em uma outra modalidade, a presente invenção se refere a um método in vitro para ensaio e/ou detecção de níveis de proteína CD73, por exemplo, níveis de proteína CD73 humana, em uma amostra biológica, compreendendo medir ou estimar qualitativa ou quantitativamente o nível de proteína CD73, por exemplo, da proteína CD73 humana, em uma amostra biológica, por um método imuno-histológico.

[496] Tal como no presente documento utilizado, o termo "amostra biológica" refere-se a qualquer amostra biológica obtida a partir de um objeto, linhagem celular, tecido ou outra fonte de células que potencialmente expressam CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo). Os métodos para obter biópsias de tecido e fluidos corporais de animais (por exemplo, humanos ou macacos cinomolgos) são bem conhecidos na técnica. As amostras biológicas incluem células sanguíneas mononucleares periféricas.

[497] Um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) no presente documento descrito pode ser usado para aplicações de prognóstico, diagnóstico, monitoramento e triagem, incluindo aplicações in vitro e in vivo bem conhecidas e padrão para o especialista na técnica e com base na presente descrição. Ensaios de prognóstico, diagnóstico, monitoramento e triagem e kits para avaliação in vitro e avaliação do estado do sistema imunológico e/ou resposta imunológica podem ser utilizados para prever, diagnosticar e monitorar para avaliar amostras de pacientes, incluindo aqueles conhecidos por terem ou suspeitos de terem uma disfunção no sistema imunológico ou em relação a uma resposta do sistema imunológico antecipada ou desejada, resposta ao antígeno ou resposta à vacina. A análise e avaliação do estado do sistema imunológico e/ou resposta imunológica também é útil para determinar a adequação de um paciente para um ensaio clínico de uma droga ou para a administração de um agente quimioterapêutico, um agente radioterapêutico ou um anticorpo particular, incluindo combinações destes, versus um agente ou anticorpo diferente. Este tipo de monitoramento e avaliação prognóstica e diagnóstica já está em prática utilizandos anticorpos contra a proteína HER2 no câncer de mama (HercepTest'Y, Dako), onde o ensaio também é usado para avaliar pacientes para terapia de anticorpos usando HerceptinO. As aplicações in vivo incluem terapia celular dirigida e modulação do sistema imunológico e imagiologia de rádio de respostas imunológicas. Portanto, em uma modalidade, a presente invenção se refere a um anticorpo anti-CD73 e/ou composição farmacêutica da presente invenção para uso como um diagnóstico. Em uma modalidade, a presente invenção se refere a um anticorpo anti- CD73 e/ou composição farmacêutica da presente invenção para uso em um método para a predição, diagnóstico e/ou monitoramento de um objeto com ou suspeito de ter uma disfunção do sistema imunológico e/ou em relação a uma resposta do sistema imunológico antecipada ou desejada, resposta do antígeno ou resposta da vacina. Em outra modalidade, a presente invenção refere-se ao uso de anticorpo anti- CD73 da invenção, para predizer, diagnosticar e/ou monitorar um objeto que tem ou é suspeito de ter uma disfunção do sistema imunológico e/ou em relação a uma ou resposta desejada do sistema imunológico, resposta ao antígeno ou resposta da vacina por ensaio e/ou detecção dos níveis de proteína CD73 humana em uma amostra biológica do objeto in vitro.

[498] Em uma modalidade, um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) pode ser usado em imunohistoquímica de amostras de biópsia. Em uma modalidade, o método é um método in vitro. Em outra modalidade, um anticorpo anti- CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) pode ser usado para detectar níveis de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), ou níveis de células que contêm CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) em sua superfície de membrana, cujos níveis podem então ser associados a certos sintomas de doença. Os anticorpos anti-CD73

(por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descritos neste documento podem transportar um marcador detectável ou funcional e/ou podem ser conjugados a um radionuclídeo ou marcador detectável.. Quando marcadores de fluorescência são usados, microscopia atualmente disponível e análise de classificação de células ativadas por fluorescência (FACS) ou combinação de ambos os procedimentos de métodos conhecidos na técnica podem ser utilizados para identificar e quantificar os membros de ligação específica.

Anticorpos anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) no presente documento descritos podem carregar ou podem ser conjugados a um marcador de fluorescência.

Marcadores de fluorescência exemplares incluem, por exemplo, sondas reativas e conjugadas, por exemplo, Aminocumarina, Fluoresceína e vermelho Texas, corantes Alexa Fluor, corantes Cy e corantes DyLight.

Um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) pode carregar ou pode ser conjugado a um marcador radioativo ou radionuclídeo, tais como os isótopos 3H, 1ºC, 32P, 35S, 36CI, SICr, Co, S8Co, s%Fe, Cu, Oy, Toe, Vin, Lu, 12, 124, 1251, 134, 19BAU, 211At, 218Bi, 2PAc e *%Re.

Quando os marcadores radioativos são usados, os procedimentos de contagem atualmente disponíveis conhecidos na técnica podem ser utilizados para identificar e quantificar a ligação específica do anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos). No caso em que o marcador é uma enzima, a detecção pode ser realizada por qualquer uma das técnicas colorimétricas, espectrofotométricas, fluorospectrofotométricas, amperométricas ou gasométricas atualmente utilizadas, como conhecidas na área.

Isso pode ser alcançado pelo contato de uma amostra ou uma amostra de controle com um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) sob condições que permitem a formação de um complexo entre o anticorpo e a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos). Quaisquer complexos formados entre o anticorpo e CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) são detectados e comparados na amostra e no controle. À luz da ligação específica dos anticorpos no presente documento descritos para CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), os anticorpos podem ser usados para detectar especificamente a expressão de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) na superfície das células. Os anticorpos no presente documento descritos também podem ser usados para purificar CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) por meio de purificação por imunoafinidade. Também está incluído neste documento um sistema de ensaio que pode ser preparado na forma de um kit de teste, kit ou Kit de peças para a análise quantitativa da extensão da presença de, por exemplo, CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) ou complexos de ligante CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos)/CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos). O sistema, kit de teste, kit ou kit de peças pode compreender um componente marcado, por exemplo, um anticorpo marcado, e um ou mais reagentes imunohistoquímico adicionais.

[499] Em certas modalidades, os anticorpos e as composições farmacêuticas no presente documento descritos podem ser usados ou combinados com um ou mais dentre um agente quimioterapêutico, um agente anticâncer, um agente antiangiogênico, um agente antifibrótico, um agente imunoterapêutico, um anticorpo terapêutico, um anticorpo biespecífico e uma proteína terapêutica "tipo um anticorpo" (como DARTsO, DuobodiesO, Bites, XMAbsO, TandAbsO, derivados de Fab), um conjugado anticorpo-droga (ADC) um agente radioterapêutico, um agente antineoplásico, um agente antiproliferação, um vírus oncolítico, um modificador de gene ou editor (como CRISPR/Cas9, nucleases de dedo de zinco ou nucleases sintéticas, TALENs), um agente imunoterapêutico de células T de CAR (receptor de antígeno quimérico), um receptor de células T modificado (TCR-T) ou qualquer combinação dos mesmos. Esses agentes terapêuticos podem estar na forma de compostos, anticorpos, polipeptídeos ou polinucleotídeos. Em certas modalidades, o pedido fornece um produto compreendendo um composto no presente documento descrito e um agente terapêutico adicional como uma preparação combinada para uso simultâneo, separado ou sequencial em terapia, por exemplo, um método de tratamento de uma doença, distúrbio ou condição que responda a inibição de CD73 e/ou inibição de sinalização de TGFRB.

[500] Em certas modalidades, os anticorpos e as composições farmacêuticas no presente documento descritos podem ser usados ou combinados com um inibidor DDR2 (por exemplo, dasatinibe), opcionalmente em combinação com um inibidor do ponto de controle imunológico (por exemplo, um inibidor PD-1). Alvos

[501] Em certas modalidades, os anticorpos e as composições farmacêuticas no presente documento descritos podem ser usados ou combinados com um ou mais dos agentes terapêuticos adicionais. Os um ou mais agentes terapêuticos incluem, mas não estão limitados a, um inibidor, agonista, antagonista, ligando, modulador, estimulador, bloqueador, ativador ou supressor de um gene, ligante, receptor, proteína, fator tal como: gene de homólogo da oncogene viral de leucemia murina de Albelson (ABL, como ABL1), Acetil-CoA carboxilase (como ACC1/2), quinase CDC ativada (ACK, tais como ACK1), Adenosina desaminase, receptor de adenosina (como AZB, A2a, A3), adenilato ciclase, ADP ribosil ciclase-1, receptor de hormônio adrenocorticotrópico (ACTH), aerolisina, gene AKT1, proteína quinase AIk-5, fosfatase alcalina, adrenoceptor alfa 1, adrenoreceptor alfa 2, alfa-cetoglutarato desidrogenase (KGDH), aminopeptidase N, proteína quinase ativada por AMP, linfoma quinase anaplásico (ALK, tal como ALK1), receptor de andrógeno, angiopoietina (tais como ligando-1, ligando-2), gene angiotensinogênio (AGT), proteína quinase do homólogo da oncogene viral de timoma murino 1 (AKT) (tal como AKT1, AKT2, AKT3), gene de apolipoproteína A-| (APOA1), fator de indução de apoptose, proteína de apoptose (como 1, 2), quinase reguladora de sinal de apoptose (ASK, tal como ASK1), Arginase (Il), Arginina desiminase, Aromatase, gene homólogo de asteroide 1 (ASTE1), proteína quinase de serina/treonina quinase relacionada com ataxia telangiectasia e Rad 3 (ATR), proteína quinase Aurora (tal como 1, 2), eeceptor de tirosina quinase Axl, gene de repetição de IAP baculoviral contendo 5 (BIRC5), Basigina, gene de linfoma 2 de células B (BCL2), componente 3 de ligação de Bcl2, proteína Bcl2, gene BCL2L11, proteína e gene BCR (região de cluster de ponto de ruptura), beta adrenoceptor, beta-catenina, antígeno de linfócitos B CD19, antígeno de linfócitos B CD20, molécula de adesão de células de linfócitos B, ligando estimulador de linfócitos B, ligand de proteína 10 morfogenética óssea, modulador de ligando de proteína 9 morfogenética óssea, proteína de Brachyury, receptor de bradicinina, proto-oncogene B-Raf (BRAF), tirosina quinase Brc-Abl, bromodomínio e proteína contendo bromodomínio e domínio externo (BET) (como BRD2, BRD3, BRD4), tirosina quinase de Bruton (BTK), calmodulina, proteína quinase dependente de calmodulina (CaMK, como CAMKII), antígeno de testículo de câncer 2, Antígeno de testículo de câncer NY-ESO-1, gene de antígeno de testículo/câncer 1B (CTAG1), receptor de canabinoide (tal como CB1, CB2), anidrase carbônica, caseína quinase (CK, como CKI, CKII), caspase (como caspase -3, caspase-7, Caspase-9),

regulador tipo CASP8-FADD de cisteína peptidase relacionada à apoptose de caspase 8, proteína 15 de domínio de recrutamento de caspase, Catepsina G, gene CCR5, quinase ativadora de CDK (CAK), quinase de ponto de controle (como CHK1, CHK2), receptor de quimiocina (motivo C-C) (como CCR2, CCR4, CCR5, CCR8), receptor de quimiocina (motivo C-X-C) (como CXCR4, CXCR1 e CXCR2), ligando de quimiocina CC21, receptor de colecistoquinina CCK2, gonadotrofina coriônica, c-Kit (kit tirosina-proteína quinase ou CD117), Claudin (como 6, 18), agrupamento de diferenciação (CD), como CDA, CD27, CD29, CD30, CD33, CD37, CD40, receptor de ligando CDA40, ligando CD40, gene CD40LG, CD44, CD45, CD47, CD49b, CDB51, CD52, CD55, CD58, CD66e, Gene CD70, CD74, CD79, CD79b, gene CD79B, CD80, CD95, CD99, CD117, CD122, CDw123, CD134, CDw137, CD158a, CD158b1, CD158b2, CD223, antígeno CD276; gene clusterina (CLU), Clusterina, c-Met (receptor do fator de crescimento de hepatócitos (HGFR)), Complemento C3, fator de crescimento do tecido conjuntivo, subunidade 5 de COP9 sinalossomo, CSF-1 (receptor do fator estimulador de colônias 1), gene CSF2, receptor CTLA-4 (proteína 4 de linfócito T citotóxico), Ciclina D1, Ciclina G1, quinases dependentes de ciclina (CDK, tais como CDK1, CDK1IB, CDK2-9), ciclooxigenase (tais como 1, 2), gene CYP2B1, Cisteína palmitoiltransferase porco- espinho, citocromo P450 11B2, citocromo P450 17, citocromo P450 17A1, citocromo P450 2D6, citocromo P450 3A4, citocromo P450 redutase, sinalização de citocina-1, sinalização de citocina-3, isocitrato citoplasmático desidrogase, citosina desaminase, DNA de citosina metiltransferase, proteína-4 de linfócito citotóxica, gene DDR2, ligando de proteína tipo Delta (tais como 3, 4), Desoxirribonuclease, deoxiribonuclease, ligando Dickkopf-1, dihidrofolato redutase (DHFR), Diidropirimidina desidrogenase, Dipeptidil peptidase IV, receptor de domínio de discoidina (DDR, tal como DDR1), proteína de ligação ao

DNA (como HU-beta), proteína quinase dependente de DNA, DNA girase, DNA metiltransferase, DNA polimerase (tal como alfa), DNA primase, dUTP pirofosfatase, L-dopacromo tautomerase, proteína 4 tipo microtúbulo equinodermo, receptor de tirosina quinase EGFR, elastase, fator de alongamento 1 alfa 2, Fator de alongamento 2, Endoglina, Endonuclease, Endoplasmina, Endosialina, Endostatina, endotelina (tais como ET-A, ET-B), melhorador de zeste homólogo 2 (EZH2), Efrina (EPH) tirosina quinase (tal como Epha3, Ephb4), Ligando B2 de efrina, fator de crescimento epidérmico, receptores de fator de crescimento epidérmico (EGFR), gene do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), Epigen, Molécula de adesão de células epiteliais (EpCAM), receptor de tirosina quinase Erb-b2 (homólogo 2 da oncogene viral de leucemia eritroblástica aviária v-erb-b2), receptor de tirosina quinase Erb-b3, receptor de tirosina quinase Erb-b4, E-selectina, estradiol 17 beta desidrogenase, receptor de estrogênio (como alfa, beta), receptor relacionado ao estrogênio, gene 5A do fator de iniciação de tradução eucariótico (EIFSA), Exportina 1, quinase relacionada ao sinal extracelular (como 1, 2), quinases reguladas pelo sinal extracelular (ERK), Fator (como Xa, Vila), receptor farnesoide x (FXR), ligando Fas, ácido graxo sintase (FASN), Ferritina, ligando FGF-2, ligando FGF-5, fato de crescimento de fibroblasto (FGF, tais como FGF1, FGF2, FGF4), Fibronectina, tirosina quinase 3 relacionada a Fms (FIt3), ligando de tirosina quinase-3 tipo Fms (FLT3L), quinase de adesão focal (FAK, tal como FAK2), antígeno membranar específico da próstata de folato hidrolase 1 (FOLH1), receptor de folato (como alfa), folato, transportador de folato 1, tirosina quinase FYN, enzima de clivagem de aminoácidos básicos pareados (FURIN), beta-glucuronidase, Galactosiltransferase, Galectina-3, Gangliosídeo GD2, glucocorticoide, receptor GITR da proteína relacionada a TNFR induzido por glicocorticoide, Glutamato carboxipeptidase |l, glutaminase, Glutationa S-transferase P, glicogênio sintase quinase (GSK, como 3-beta), Glipican 3 (GPC3), hormônio de liberação de gonadotropina (GNRH), receptor do fator estimulador de colônia de granulócitos e macrófagos (GM-CSF), ligando do fator de estimulação de colônias de granulócitos (GCSF), proteína 2 ligada ao receptor do fator de crescimento (GRB2), proteína de ligação de cálcio de Grp78 (proteína regulada por glicose de 78 kDa), gene groEL2 da chaperona molecular, heme oxigenase 1 (HO1), proteína de choque térmico (como 27, 70, 90 alfa, beta), gene da proteína de choque térmico, receptor de enterotoxina estável ao calor, proteína Hedgehog, Heparanase, fator de crescimento de hepatócitos, proteína 2 de associação de HERV-HLTR, hexose quinase, receptor de histamina H2, histona metiltransferase (DOT1L), histona desacetilase (HDAC, como 1, 2,3,6,10,11), Histona H1, Histona H3, antígeno HLA classe | (A-2 alfa), antígeno HLA classe |l, proteína Homeobox NANOG, gene HSPB1, antígeno leucocitário humano (HLA), proteína do papilomavírus humano (como E6, E7), ácido hialurônico, hialuronidase, fator-1 alfa induzível por hipóxia (HIF10), gene impresso de transcrição maternalmente expresso (H19), proteína quinase quinase quinase quinase 1 ativada por mitogênio (MAP4K1), tirosina-proteína quinase HCK, I-Kappa-B quinase (IKK, como IlKKbe), IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-12, gene IL-12, IL-15, IL-17, gene IL-2, subunidade alfa do receptor IL-2, IL-2, receptor IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, imunoglobulina (como G, G1, G2, K, M), receptor Fc de imunoglobulina, receptor Fc de imunoglobulina gama (como |, II, IA), indoleamina 2,3-dioxigenase (IDO, como IDO1), inibidor 1 de indoleamina pirrol 2,3-dioxigenase, receptor de insulina, fator de crescimento tipo insulina (como 1, 2), integrina alfa-4/beta-1, integrina alfa-4/beta-7, integrina alfa-5/beta-1, integrina alfa-V/beta-3, integrina alfa-V/beta-5, integrina alfa-V/beta-6, molécula de adesão intercelular 1 (ICAM-1), interferon (tal como alfa, alfa 2, beta, gama), proteína induzível por interferon ausente no melanoma 2 (AIM2), receptor de interferon tipo |, ligando de interleucina 1, receptor 13 alfa 2 de interleucina, ligando de interleucina 2, quinase 4 associada ao receptor de interleucina-1 (IRAKA4), interleucina-2, ligando de interleucina-29, isocitrato desidrogenase (como IDH1, IDH2), quinase Janus (JAK, tal como JAK1, JAK2), quinase N-terminal de Jun, gene da peptidase 3 relacionado à calicreína (KLK3), receptor do tipo Ig de célula assassina, receptor do domínio de inserção da quinase (KDR), proteína do tipo cinesina KIF11, gene de homólogo da oncogene viral de sarcoma de rato Kirsten (KRAS), receptor Kisspeptina (KiSS-1), gene KIT, tirosina quinase do homólogo da oncogene viral de sarcoma felino v-kit Hardy- Zuckerman 4 (KIT), lactoferrina, Lanosterol-14 desmetilase, proteína relacionada ao receptor LDL-1, Leucotrieno A4 hidrolase, Listeriolisina, L-selectina, receptor de hormônio luteinizante, Liase, proteína do gene 3 de ativação de linfócitos (LAG-3), antígeno de linfócitos 75, receptor de antígeno-3 de função de linfócitos, proteína tirosina quinase específica de linfócitos (LCK), Linfotactina, tirosina quinase Lyn (Lck/Sim, novo), lisina desmetilases (como KDM1, KDM2, KDMA4, KDMS5, KDMG6, A/B/C/D), receptor de lisofosfatidato-1, gene da família de proteínas membranares associadas a lisossoma (LAMP), homólogo de lisil oxidase 2, proteína lisil oxidase (LOX), proteína tipo lisil oxidase (LOXL, como LOXL2), Progenitor quinase hematopoiético 1 (HPK1), gene receptor do fator de crescimento de hepatócitos (MET), ligando do fator estimulador de colônias de macrófagos (MCSF), fator inibidor de migração de macrófago, gene MAGEC1, gene MAGEC?, proteína da abóbada principal, proteína quinase ativada por MAPK (como MHK2), receptor acoplado à proteína G relacionado a Mas, metaloprotease de matriz (MMP, como MMP2, MMP9), proteína de diferenciação Mcl-1, proteína de ligação a p53 Mdm?2, proteína Mdm4, Melan-A (MART-1) antígeno de melanoma, proteína de melanócito Pmel 17, ligando de hormônio estimulador de melanócito, gene da família A3 de antígeno de melanoma (MAGEA3), antígeno associado ao melanoma (como 1,2,3,6), amina oxidase de cobre membranar, mesotelina, MET tirosina quinase, receptor metabotrópico de glutamato 1, metaloredutase STEAP1 (seis antígenos epiteliais transmembranares da próstata 1), metastina, metionina aminopeptidase-2, metiltransferase, mitocondrial 3 cetoacil CoA tiolase, proteína quinase ativada por mitogênio (MAPK), proteína quinase ativada por mitogênio (MEK, tal como MEK1, MEK2), mTOR (alvo mecanístico de rapamicina) (serina/treonina quinase), complexo mTOR (tal como 1,2), mucina (tal como 1, 5A, 16), homólogo mut T (MTH, como MTH1), proteína proto-oncogene Myc, gene da leucemia de células mieloides 1 (MCL1), proteína de substrato de proteína quinase C rica em alanina miristoilada (MARCKS), NAD ADP ribosiltransferase, receptor C de peptídeo natriurético, molécula 1 de adesão de células neuronais, receptor de neurocinina 1 (NK1), receptor de neurocinina, Neuropilina 2, proteína ativadora kappa B de NF, quinase 9 relacionada a NIMA (NEK9), óxido nítrico sintase, receptor de células NK, receptor NK3, receptor NK de ativação A B de NKG?2, transportador de noradrenalina, Notch (tais como receptor Notch-2, receptor Notch-3, receptor Notch-4), fator 2 relacionado a eritroide nuclear 2, kappa B de fator nuclear (NF), Nucleolina, Nucleofosmina, linfoma quinase de nucleofosmina anaplásica (NPM-ALK), oxoglutarato desidrogenase 2, 2,5-oligoadenilato sintetase, DNA metiltransferase de O-metilguanina, “receptor opioide (tal como delta) Ornitina descarboxilase, Orotato fosforibosiltransferase, receptor de hormônio nuclear órfão NR4A1, Osteocalcina, fator de diferenciação de osteoclastos, Osteopontina, OX-40 (membro da superfamília do receptor do fator de necrose tumoral 4 TNFRSFA4, ou CD134) receptor, proteína P3, p38 quinase, p38 MAP quinase, proteína supressora de tumor p53, ligando de hormônio da paratireoide, receptores ativados por proliferador de peroxissoma (PPAR, tais como alfa, delta, gama), P-

glicoproteína (tal como 1), homólogo de fosfatase e tensina (PTEN), fosfatidilinositol 3-quinase (PISK), fosfoinositídeo-3 quinase (PI3SK tais como alfa, delta, gama), fosforilase quinase (PK), gene PKN3, fator de crescimento da placenta, fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF, como alfa, beta), fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF, como alfa, beta), transportador de resistência a drogas pleiotrópicas, Plexina B1, gene PLK1, quinase tipo polo (PLK), quinase 1 tipo polo, Poly ribose polimerase de ADP (PARP, tais como PARP1, 2 e 3), antígeno expresso preferivelmente no gene de melanoma (PRAME), proteína de ligação de prenila (PrPB), fator de transcrição PML provável, receptor de progesterona, morte celular programada 1 (PD-1), inibidor de ligando de morte celular programada 1 (PD-L1), gene da Prosaposina (PSAP), receptor da prostanoide (EP4), antígeno específico da próstata, fosfatase ácida da próstata, proteassoma, Proteína E7, Proteína farnesiltransferase, proteína quinase (PK, como A, B, C), proteína tirosina quinase, Proteína tirosina fosfatase beta, proteína serina/treonina quinase da proto-oncogene (PIM, tais como PIM-1, PIM-2, PIM-3), P-Selectina, nucleosídeo fosforilase de purina, canal iônico 7 fechado para ligando P2X de receptor purinérgico (P2X7), Piruvato desidrogenase (PDH), Piruvato desidrogenase quinase, Piruvato quinase (PYK), 5-Alfa-redutase, proteína quinase Raf (tal como 1, B), gene RAF1, gene Ras, Ras GTPase, gene RET, receptor tirosina quinase Ret, proteína associada ao retinoblastoma, receptor de ácido retinóico (tal como gama), receptor retinoide X, Rheb (Homólogo Ras enriquecido no cérebro) GTPase, proteína quinase 2 associada a Rho (homólogo de Ras), ribonuclease, Ribonucleotídeo redutase (como a subunidade M2), proteína ribossômica S6 quinase, RNA polimerase (tais como |, II), tirosina quinase Ron (Recepteur d'Origine Nantais), gene ROS1 (ROS proto-oncogene 1, tirosina quinase de receptor), tirosina quinase de Ros1, fator 3 de transcrição relacionado a Runt,

gama-secretase, proteína A9 de ligação de cálcio S100, ATPase cálcica endoplasmática Sarco, segundo ativador derivado de mitocôndrias da proteína caspase (SMAC), proteína-2 relacionada a frizzled secretada, Semaforina-4D, Serina protease, serina/treonina quinase (STK), serina/treonina-proteína quinase (TBK, como TBK1), transdução de sinal e transcrição (STAT, tais como STAT-1, STAT-3, STAT-5S), membro 7 da família da molécula de ativação linfocítica de sinalização (SLAM), gene do antígeno epitelial seis-transmembrana da próstata (STEAP), ligando de citocina SL, receptor smoothened (SMO), cotransportador de iodeto de sódio, cotransportador de fosfato de sódio 2B, receptor de somatostatina (tais como 1, 2, 3, 4, 5), proteína Sonic hedgehog, Son of sevenless (SOS), Fator de transcrição da proteína específica 1 (Sp1), esfingomielina sintase, esfingosina quinase (tal como 1,2), receptor-1 de esfingosina-1-fosfato, tirosina quinase do baço (SYK), gene SRC, tirosina quinase Src, gene STAT3, sulfatase esteroide, estimulador de receptor de genes interferon (STING), estimulador de proteínas de genes interferon, ligando do fator 1 derivado de células do estroma, SUMO (modificador tipo ubiquitina pequena), superóxido dismutase, proteína Survivina, Sinapsina 3, Sindecan-1, Sinucleína alfa, Glicoproteína de superfície de células T CD28, quinase de ligação ao tanque (TBK), gene da subunidade B polimerase | de RNA do fator associado à proteína de ligação box TATA (TAF1B), cadeia zeta da glicoproteína CD3 da célula T, antígeno de diferenciação da célula T CDG6, imunoglobulina de célula T e domínio de mucina contendo-3 (TIM- 3), glicoproteína de superfície de células T CD8, proteína tirosina quinase Tec, receptor de tirosina quinase Tek, telomerase, gene da transcriptase reversa da telomerase (TERT), Tenascina, ligando beta 2 de TGF, receptor de trombopoietina, Timidina quinase, Timidina fosforilase, Timidilato sintase, Timosina (tal como alfa 1), receptor de hormônio da tireoide, receptor de hormônio estimulante da tireoide, fator de tecido, ligando indutor de apoptose relacionado a TNF, proteína de domínio de morte associada a TNFR1, receptor de ligando indutor de aptose (TRAIL), gene TNFSF11, gene TNFSF9, receptor tipo Toll (TLR tal como 1-13), topoisomerase (tais como |, II, III), fator de transcrição, transferase, transferrina, quinase do fator de crescimento de transformação (TGF, tal como beta), quinase de receptor TGF-B do fator de crescimento de transformação, Transglutaminase, proteína associada à translocação, Glicoproteína transmembranar NMB, transdutor de sinal de cálcio Trop-2, gene da glicoproteína trofoblástica (TPBG), glicoproteína trofoblástica, receptor quinase do receptor de tropomiosina (Trk) (tais como TrkA, TrkB, TrkC), Triptofano 5- hidroxilase, Tubulina, fator de necrose tumoral (TNF, tais como alfa, beta), receptor de fator de necrose tumoral 13C, locus de progressão tumoral 2 (TPL2), gene da proteína tumoral 53 (TP53), candidato 2 de supressor tumoral (TUSC2), neoantígenos específicos de tumor, Tirosinase, tirosina hidroxilase, tirosina quinase (TK), receptor de tirosina quinase, tirosina quinase com receptores tipo imunoglobulina e EGF (TIE), inibidor de proteína quinase de tirosina ABL1, Ubiquitina, isoenzima L5 de ubiquitina carboxil hidrolase, Ubiquitina tioesterase-14, enzima de conjugação de ubiquitina E2l (UBE2|, UBC9), Urease, ativador de plasminogênio de uroquinase, uteroglobina, Vanilloid VR1, proteína 1 de adesão de célula vascular, receptor de fator de crescimento endotelial vascular (VEGFR), supressor de lg de domínio V de ativação de células T (VISTA), receptor VEGF-1, receptor VEGF- 2, receptor VEGF-3, VEGF-A, VEGF-B, Vimentina, receptor de vitamina D3, tirosina-proteína quinase da proto-oncogene Mer, Yes, proteína quinase Wee-1, antígeno 1 de tumor de Wilms, proteína de tumor de Wilms, inibidor ligado ao X da proteína de apoptose, fator de transcrição de proteína de dedo de zinco ou qualquer combinação dos mesmos.

Mecanismo de Ação

[502] Os anticorpos e composições farmacêuticas no presente documento descritos podem ser usados ou combinados com um ou mais dos agentes terapêuticos adicionais. Os agentes terapêuticos podem ser categorizados por seu mecanismo de ação em, por exemplo, os seguintes grupos:

[503] - agentes antimetabolitos/anticancerígenos, tais como análogos de pirimidina floxuridina, capecitabina, citarabina, CPX-351 (citarabina lipossomal, daunorrubicina) e TAS-118;

[504] - análogos de purina, antagonistas de folato (tais como pralatrexato) e inibidores relacionados;

[505] - agentes antiproliferativos/antimitóticos, incluindo produtos naturais, tais como alcaloides vinca (vinblastina, vincristina) e desreguladores de microtúbulos, tais como taxano (paclitaxel, docetaxel), vinblastina, nocodazol, epotilonas, vinorelbina (NAVELBINEO), e epipodofilotoxinas (etoposídeo, teniposídeo);

[506] - agentes que danifcam DNA, como actinomicina, amsacrina, busulfan, carboplatina, clorambucil, cisplatina, ciclofosfamida (CYTOXANO), dactinomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, iposfamida, melfalano, mercloretamina, mitomicina C, mitoxantrona, nitrosoureia, procarbazina, taxol, Taxotere, teniposídeo, etoposídeo e trietilenotiofosforamida;

[507] - agentes hipometilantes de DNA, tais como guadecitabina (SGI-110), ASTX727;

[508] - antibióticos, tais como dactinomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, idarrubicina, antraciclinas, mitoxantrona, bleomicinas, plicamicina (mitramicina);

[509] - enzimas como a L-asparaginase que metaboliza sistemicamente a L-asparagina e priva as células que não têm a capacidade de sintetizar a sua própria asparagina;

[510] - agentes antiplaquetários;

[511] - oligonucleotídeos DNAi direcionados a Bel-2, como PNT2258;

[512] - agentes que ativam ou reativam o vírus da imunodeficiência humana latente (HIV), tais como panobinostat e romidepsina;

[513] - estimuladores de asparaginase, tais como crisantaspase (Erwinase&) e GRASPA (ERY-001, ERY-ASP), calaspargase pegol;

[514] - inibidores de pan-Trk, ROS1 e ALK, como entrectinibe, TPX-0005;

[515] - inibidores da quinase de linfoma anaplásico (ALK), tais como alectinibe, ceritinibe;

[516] - agentes alquilantes antiproliferativos/antimitóticos, tais como ciclofosfamida de mostarda de nitrogênio e análogos (melfalano, clorambucil, hexametilmelamina, — tiotepa), alquil | nitrosureias (carmustina) e análogos, estreptozocina e triazenos (dacarbazina);

[517] - antimetabolitos antiproliferativos/antimitóticos, tais como análogos do ácido fólico (metotrexato);

[518] - complexos de coordenação de platina (cisplatina, oxiloplatina e carboplatina), procarbazina, hidroxiureia, mitotano e aminoglutetimida;

[519] - "hormônios, análogos de hormônios (estrogênio, tamoxifeno, goserelina, bicalutamida e nilutamida) e inibidores da aromatase (letrozol e anastrozol);

[520] - anticoagulantes, tais como heparina, sais de heparina sintéticos e outros inibidores de trombina;

[521] - agentes fibrinolíticos, tais como ativador do plasminogênio tecidual, estreptoquinase, uroquinase, aspirina, dipiridamol, ticlopidina e clopidogrel;

[522] - agentes antimigratórios;

[523] - agentes antissecretores (brefeldina);

[524] - imunossupressores, tais como tacrolimus, sirolimus,

azatioprina e micofenolato;

[525] - inibidores do fator de crescimento e inibidores do fator de crescimento endotelial vascular;

[526] - inibidores do fator de crescimento de fibroblastos, como FPA1A;

[527] - anticorpos anti-VEGFR, tais como IMC-3C5, GNR-011, tanibirumabe;

[528] - anticorpos anti-VEGF/DDLA4, como ABT-165;

[529] - anticorpos anticaderinas, como HKT-288;

[530] - anticorpos anti-CD70, como AMG-172; repetição rica em anti-leucina contendo 15 (LRRC15) anticorpos, como ABBV-O085.

ARGX-110;

[531] - bloqueadores do receptor da angiotensina, doadores de óxido nítrico;

[532] - oligonucleotídeos antissentido, tais como AEG35156, lonia- KRAS-2.5Rx, EZN-3042, RX-0201 chega S-Ar-Rx 2.5, ou BP-100 (prexigebersen), lonia-STAT3-2.5Rx;

[533] - oligonucleotídeos de interferência de DNA, como PNT2258, AZD-9150;

[534] - anticorpos anti-ANG-2, como MEDI3617 e LY3127804;

[535] - anticorpos anti-ANG-1/ANG-2, como AMG-780;

[536] - anticorpos anti-MET/EGFR, como LY3164530;

[537] - anticorpos anti-EGFR, tais como ABT-414, AMG-595, necitumumabe, ABBV-221, depatuxizumab mafodotina (ABT-414), tomuzotuximab, ABT-806, vectibix, modotuximab, RM-1929;

[538] - anticorpos anti-CSFIR, tais como emactuzumabe, LY3022855, AMG-820, FPA-O008 (cabiralizumab);

[539] - anticorpos anti-CD40, tais como RG7876, SEA-CD40, APX- OO5M, ABBV-428;

[540] - anticorpos antiendoglina, tal como TRC105 (carotuximab);

[541] - anticorpos anti-CD45, tais como 1311-BC8 (lomab-B);

[542] - anticorpos anti-HER3, tais como LJM716, GSK2849330;

[543] - anticorpos anti-HER2, tais como margetuximab, MEDI4276, BAT-8001;

[544] - anticorpos anti-HLA-DR, como IMMU-14;

[545] - anticorpos anti-IL-3, tal como JNJ-56022473;

[546] - anticorpos anti-OX40, tais como MEDI6469, MEDI6383, MEDIOS562 (tavolixizumabe), MOXRO916, PF-04518600, RG-7888, GSK-3174998, BMS-986178, GBR-8383, ABBV- 368;

[547] - anticorpos anti-EphA3, como KB-004;

[548] - anticorpos anti-CD20, tais como obinutuzumabe, IGN-002;

[549] - anticorpos anti-CD20/CD3, tal como RG7828;

[550] - anticorpos anti-CD37, tais como AGS67E, otlertuzumab (TRU-016);

[551] - anticorpos anti-ENPP3, tal como AGS-16C3F;

[552] - anticorpos anti-FGFR-3, tais como LY3076226, B-701;

[553] - anticorpos anti-FGFR-2, tal como GAL-F2;

[554] - anticorpos anti-C5, tal como ALXN-1210;

[555] - anticorpos anti-CD27, tais como varlilumab (CDX-| 127);

[556] - anticorpos anti- TROP-2, tal como IMMU-I 32

[557] - anticorpos anti-NKG2a, tal como monalizumab;

[558] - anticorpos anti-VISTA, tal como HMBD-002;

[559] - anti-PVRIG antibodies, tal como COM-701;

[560] - anticorpos anti-EpCAM, tal como VB4-845;

[561] - anticorpos anti-BCMA, tal como GSK-2857916

[562] - anticorpos anti-CEA, tal como RG-7813;

[563] - anticorpos anticluster de diferenciação 3 (CD3), tal como MGDO015;

[564] - anticorpos antirreceptor de folato alfa, tal como IMGN853;

[565] - inibidores de epha2, como MM-310;

[566] - anticorpos anti LAG-3, tais como relatliimab (ONO-4482), LAG-525, MK-4280, REGN- 3767;

[567] - inibidores de raf quinase/VEGFR, tal como RAF-265;

[568] - inibidores de proteínas de poli pente (EED), como MAK683;

[569] - anticorpos anti-proteína de ativação de fibroblastos (FAPY/IL-2R, tal como RG7461;

[570] - anticorpos antiproteína de ativação de fibroblastos (FAPYTRAIL-R2, tal como RG7386;

[571] - anticorpos anti-fucosil-GMI, tal como BMS-986012;

[572] - inibidores da p38 MAP quinase, tal como ralimetinibe;

[573] - inibidores PRMT1, tal como MS203;

[574] - inibidores da esfingosina quinase 2 (SK2), como opaganib;

[575] - inibidores de FLT3-ITD, tal como BCl1-332;

[576] - inibidores da tirosina quinase FLT3-ITD/Mer, tal como MRX-2843;

[577] - estimuladores do fator 2 relacionado ao eritroide 2 nuclear, tal como omaveloxolona (RTA-408);

[578] - inibidores da quinase de receptor da tropomiosina (TRK), tais como LOXO-195, ONO-7579;

[579] - anticorpos anti-I|COS, tais como JTX-2011, GSK3359609;

[580] - anticorpos anti-DR5 (TRAIL2), tal como DS-8273;

[581] - anticorpos anti-GD2, tal como APN-301;

[582] - anticorpos anti-interleucina-17 (IL-17), tal como CJM-112;

[583] - anticorpos antianidrase carbônica IX, tal como TX-250;

[584] - anti-CD38-attenucina, tal como TAK573;

[585] - anticorpos anti-mucina 1, tal como gatipotuzumab;

[586] - anticorpos anti-FTL3, tais como Flysyn, ASP-1235;

[587] - anticorpos BiTE anti-FLT3/CD3, tal como AMG-427;

[588] - inibidores de mucina 1, tal como GO-203-2C;

[589] - inibidores da proteína MARCKS, tal como BIO-11006;

[590] - antagonistas de folato, tal como arfolitixorina;

[591] - inibidores da galectina-3, tal como GR-MD-02;

[592] - inibidores de P68 fosforilados, tal como RX-5902;

[593] - moduladores de CD95/TNF, tal como ofranergeno obadenovec;

[594] - inibidores de PISK/AKkI/mTOR, tal como ABTL-0812;

[595] - inibidores de pan-PIM quinase, tal como INCB-053914;

[596] - inibidores da quinase PIM/FLT3, tal como MEN-1703 (SEL- 24);

[597] - estimuladores do gene 1IL-12, tais como EGEN-001, telseplasmídeo tavokinogene;

[598] - inibidores da proteína de choque térmico HSP90, tais como TAS-116, PEN-866;

[599] - antagonistas de VEGF/HGF, tal como MP-0250;

[600] - inibidores de tirosina quinase SYK/FLT3 tirosina quinase, tais como TAK-659 (mivavotinibe);

[601] - inibidores da tirosina quinase SYK/tirosina quinase JAK, tal como ASN-002;

[602] - inibidores da quinase JAK3/JAK1I/TBK1, tal como CS- 12912;

[603] - tirosina quinases FLT3, tais como FF-10101, HM-43239, SKI-G-801;

[604] - ligando de tirosina quinase-3 tipo FMS (FLT3L), tal como CDX-301;

[605] - inibidores da tirosina quinase EGFR/FLT3/ABL, tal como SKLB-1028;

[606] - inibidores FLT3/MEK1, tal como E-6201;

[607] - antagonista de IL-24, tal como AD-IL2ZA4;

[608] - agonistas RIG-I, tal como RGT-100;

[609] - estimuladores de aerolisina, tal como topsalisina;

[8610] - inibidores da P-glicoproteína 1, tal como HM-30181A;

[611] - antagonistas de CSF-1, tais como ARRY-382, BLZ-945;

[612] - inibidores de CCRB8, tais como 1-309, SB-649701, HG-1013, RAP-310;

[8613] - anticorpos antimesotelina, tal como SEL-403;

[614] - estimuladores da timidina quinase, tal como aglatimagene besadenovec;

[615] - inibidores da quinase 1 do tipo Polo, tal como PCM-075;

[616] - agonistas de TLR-7, tal como TMX-101 (imiquimod);

[6817] - inibidores de NEDDB8, tal como pevonedistat (MLN-4924), TAS-4464; Moduladores da via pleiotrópica, tal como avadomida (CC- 122);

[618] - inibidores FoxMl, como tiostrepton;

[8619] - anticorpos anti-MUCI, tal como Mab-AR-20.5;

[620] - anticorpos anti-CD38, tais como isatuximab, MOR-202;

[621] - inibidores de UBA1, como TAK-243;

[622] - inibidores da tirosina quinase Src, tal como VAL-201;

[623] - inibidores VDAC/HK, tal como VDA-l 102;

[624] - inibidores de BRAF/PI3K, tal como ASN-003;

[625] - inibidores de Elf4a, tais como rohinitib, eFT226;

[626] - estimuladores do gene TP53, tal como ad-p53;

[627] - inibidores de PD-LI/EGFR, tal como GNS-1480 (lazertinibe);

[628] - inibidores PD-1/CTLA-A, tal como PF-06936308;

[629] - inibidores do receptor alfa do ácido retinóico (RARa), tal como SY-1425;

[630] - inibidores de SIRT3, tal como YC8-02;

[631] - inibidores de ligando do fator 1 derivado de células estromais, tal como pegol olaptesed (NOX-A12);

[632] - moduladores do receptor de IL-4, tal como MDNA-55;

[633] - estimuladores de arginase-l, tal como pegzilarginase;

[634] - inibidor da topoisomerase l/inibidores do fator 1 alfa indutível por hipóxia, tal como PEG-SN38 (firtecan pegol);

[635] - inibidores do fator 1 alfa induzível por hipóxia, tais como PT-2977, PT-2385;

[636] - agonistas de CD122, tal como NKTR-214;

[637] - estimuladores da proteína supressora tumoral p53, tal como kevetrina;

[638] - inibidores da proteína de ligação a p53 Mdm4/Mdm?2, tal como ALRN-6924;

[639] - inibidores da proteína spindle da cinesina (KSP), tal como filanesib (ARRY-520);

[640] - inibidores da proteína de fusão CD80-fc, tal como FPT-155;

[641] - inibidores de leucemia de linhagem mista e menin (MLL), tal como KO-539;

[642] - agonistas do receptor do fígado x, tal como RGX-104;

[643] - agonistas de IL-10, tal como AM-0010;

[644] - inibidores de EGFR/ErbB-2, tal como varlitinibe;

[645] - inibidores de VEGFR/PDGFR, tal como vorolanib;

[646] - inibidores de IRAKA, tal como CA-4948;

[647] - anticorpos anti- TLR-2, tal como OPN-305;

[648] - moduladores de calmodulina, tal como CBP-501;

[649] - antagonistas do receptor de glicocorticoide, tal como relacorilant (CORT-125134);

[650] - inibidores do segundo ativador derivado de mitocôndrias da proteína caspase (SMAC), tal como BlI-891065;

[651] - moduladores de lactoferrina, tal como LTX-315;

[652] - antagonistas da tirosina quinase kit/receptor alfa PDGF, tal como DCC-2618;

[653] - inibidores de KIT, tal como PLX-9486;

[654] - inibidores de exportina 1, tal como eltanexor;

[655] - inibidores de EGFR/ErbB2/EphbA4, tal como tesevatinibe;

[656] - anticorpos anti-CD33, tal como IMGN-779;

[657] - anticorpos anti-KMA, tal como MDX-1097;

[658] - anticorpos anti-TIM-3, tais como TSR-022, LY-3321367, MBG-453;

[659] - anticorpos anti-CD55, tal como PAT-SC1;

[660] - anticorpos anti-PSMA, tal como ATL-101;

[661] - anticorpos anti-CD 100, tal como VX-15;

[662] - anticorpos anti-EPHA3, tal como fibatuzumab;

[663] - anticorpos anti-Erbb, tais como CDX-3379, HLX-02, seribantumab;

[664] - anticorpos anti-APRIL, tal como BION-1301;

[665] - anticorpos anti-Tigit, tais como BMS-986207, RG-6058;

[666] - inibidores do gene CHST15, tal como STNM-01;

[667] - inibidores de RAS, tal como NEO-100;

[668] - antagonista do receptor da somatostatina, tal como OPS- 201;

[669] - estimuladores do gene CEBPA, tal como MTL-501;

[670] - moduladores do gene DKK3, tal como MTG-201;

[671] - inibidores de p70s6Kk, tal como MSC2363318A;

[672] - inibidores da metionina aminopeptidase 2 (MetAP2), tais como M8891, APL-1202;

[673] - inibidores de arginina N-metiltransferase 5, tal como GSK- 3326595;

[674] - anticorpos antiproteína 1 de morte celular programada (anti-PD-1), tais como nivolumabe (OPDIVOGO, BMS-936558, MDX- 1106), pembrolizumabe (KEYTRUDAG, MK-3477, SCH-900475, lambrolizumabe, CAS Reg. No. 1374853-91-4), pidilizumabe, PF- 06801591, BGB-A317 (tislelizumabe), GLS-010 (WBP-3055), AK-103

(HX-008), CS-1003, HLX-10, MGA-012, BlI-754091, REGN-2810 (cemiplimabe), JS-001 (toripalimabe), JNJ-63723283, genolimzumabe (CBT-501), LZM-009, BCD-100, LY-3300054, SHR-1201, SHR-1210 (camrelizumabe), Sym-021, ABBV-181, AK-105, PD1-PIK, BAT-1306 e anticorpos antiligando 1 de morte programada (anti-PD-L1), tais como BMS-936559, atezolizumabe (MPDL3280A), durvalumabe (MEDI- 4736), avelumabe, CK-301, (MSBOO0I0718C), MEDI-O0680, CX-072, CBT-502, PDR-001 (espartalizumabe), TSR-042 (dostarlimabe), MSB- 2311, JTX-4014, BGB-A333, SHR-1316, CS-1001 (WBP-3155, KN-035, IBI-308 (sintilimab), HLX-20, KL-A167, STI-A1014, STI-A1015 (IMC- 001), BCD-135, FAZ-053 e MDX1105-01;

[675] - antagonistas de PD-L1/VISTA, tal como CA-170;

[676] - inibidores PD-1/PD-L1, tais como GS-4416, INCBO086550, GS-4224;

[677] - anticorpos anti-PD-L1/TGFRB, tal como M-7824;

[678] - anticorpos anti-transferrina, tais como CX-2029;

[679] - anticorpos anti-IL-8 (Interleucina-8), tal como HuMax- Inflam;

[680] - inibidores de ATM (ataxia telangiectasia), tal como AZDO0156;

[681] - inibidores de CHK1, tais como GDC-0575, LY2606368 (prexasertib), SRA737, RG7741 (CHK1/2);

[682] - antagonistas de CXCRA, tais como BL-8040, LY2510924, burixafor (TG-0054), X4P-002, X4P-001-10;

[683] - inibidores de EXH2, tais como GSK2816126; Inibidores de HER2, tais como neratinibe, tucatinibe (ONT-380);

[684] - inibidores de KDM1, tais como ORY-1001, IMG-7289, INCB-59872, GSK-2879552;

[685] - antagonistas de CXCR2, como AZD-5069;

[686] - anticorpos GM-CSF, como lenzilumab;

[687] - inibidores da proteína quinase dependente de DNA, como MSC2490484A (nedisertib), VX-984, AsiDNA (DT-01);

[688] - inibidores da proteína quinase C (PKC), como LXS-196, sotrastaurina;

[689] - reguladores negativos do receptor de estrogênio seletivo (SERD), tais como fulvestrant (Faslodex&O), RG6046, RG6047, elacestrant (RAD-1901) e AZD9496;

[690] - antagonistas covalentes do receptor de estrogênio seletivo (SERCAs), como H3B-6545;

[691] - modulador seletivo do receptor de andrógeno (SARM), como GTX-024, darolutamida;

[692] - antagonistas de quinase do fator de crescimento transformador beta (TGFB-beta), tais como galunisertib;

[693] - anticorpos antifator de crescimento transformante beta (TGFB-beta), tais como LY 3022859, NIS793, XOMA 089;

[694] - anticorpos biespecíficos, tais como MM-141 (IGF-1/ErbB3), MM-111 (Erb2/Erb3), JNJ-64052781 (CD1I9/CD3), PRS-343 (CD- 137/HER2), AFM26 (BCMA/CD16A), JNJ-61186372 (EGFR/cCMET), AMG-211 (CEA/CD3), RG7802 (CEA/CD3), ERY-974 (CD3/GPC3) vancizumabe (angiopoietinas/VEGF), PF-06671008 (Caderinas/CD3), AFM-13 (CD1I6/CD30) APVO436 (CD123/CD3), flotetuzumab (CD123/CD3), REGN-1979 (CD20/CD3), MCLA-117 (CD3/CLEC12A), MCLA-128 (HER2/HER3), JNJ-0819, JNJ-7564 (CD3/heme), AMG-757 (DLL3-CD3), MGD-013 (PD-I/LAG-3), FS-118 (LAG-3/PD-L1) MGD-019 (PD-1/CTLA-4), KN-046 (PD-1/CTLA-4), MEDI-5752 (CTLA-4/PD-1), RO-7121661 (PD-1/TIM-3)), XmAb-207I7 (PD-1/CTLA-4), AK-104 (CTLA-4/PD-1), AMG-330 (CD33/CD3), AMG-420 (BCMA/CD3), BI- 836880 (VEFG/ANG2), JNJ-63709178 (CD123/CD3), MGD-O007 (CD3/gpA33) e MGD-009 (CD3/B7H3);

[695] - inibidores de EGFR seletivos de mutantes, tais como PF-

06747775, EGF816 (nazartinibe), ASP8273, ACEA-0010, BI-1482694;

[696] - anticorpos anti-GITR (proteína relacionada ao receptor do fator de necrose tumoral induzida por glicocorticoide), tais como MEDI1873, FPA-154, TRX-518, BMS-986156, MK-1248, GWN-323;

[697] - anticorpos antiligando da proteína tipo delta 3 (DDL3), tais como rovalpituzumab tesirina;

[698] - anticorpos anti-clusterina, como AB-16B5;

[699] - anticorpos anti-Efrina-A4 (EFNA4), como PF-06647263;

[700] - anticorpos anti-RANKL, como denosumab;

[701] - anticorpos anti-mesothebn, tais como BMS-986148, anti- MSLN-MMAE;

[702] - anticorpos antifosfato cotransportador 2B (NaP2B), tais como anticorpos bfastuzumab anti-c-Met, tais como ABBV-399;

[703] - antagonistas do receptor de adenosina AZA, tais como CPI- 444, AZD-4635, pré-ladenante, PBF-509;

[704] - inibidores da alfa-cetoglutarato desidrogenase (KGDH), como o CPI-613;

[705] - inibidores XPOI, como selinexor (KPT-330);

[706] - inibidores da isocitrato desidrogenase 2 (IDH2), como enasidenib (AG-221);

[707] - inibidores de IDH1, tais como AG-120 e AG-881 (IDH1 e IDH2), IDH-305, BAY -1436032;

[708] - moduladores do receptor de interleucina-3 (IL-3R), como SL-401;

[709] - —estimuladores de arginina desiminase, como pegargiminase (ADI-PEG-20);

[710] - conjugados anticorpo-droga, tais como MLNO264 (anti- GCC, guanilil ciclase C), T-DM1 (trastuzumabe emtansina, Kadcicla), milatuzumabe-doxorubicina (hCD74-DOX), brentuximabe vedotin, DCDT2980S, polatuzumabe vedotinn SGN-CD70A, SGN-CD19A,

inotuzumabe ozogamicina, lorvotuzumabe mertansinay SAR3419, isactuzumabe govitecano, enfortumabe vedotina (ASG-22ME), ASG- 15ME, DS-8201 ((trastuzumabe deruxtecan), 225Ac-lintuzumabe, U3- 1402, 177LU-tetraxetan-tetuloma, tosotumbe vedotinn anetumab ravtansina, CX-2009, SAR-566658, W-0101, polatuzumab vedotin, ABBV-085;

[711] - inibidores de claudina-18, tal como claudiximab;

[712] - inibidores de B-catenina, tal como CWP-291;

[713] - anticorpos anti-CD73, tais como MEDI-9447 (oleclumabe), CPX-006, IPH-53, BMS-986179, NZV-930;

[714] - inibidores de CD73, tais como AB-680, PSB-12379, PSB- 12441, PSB-12425, CB-708;

[715] - inibidores de CD39/CD73, tal como PBF-1662;

[716] - inibidores do receptor 2 de quimiocina (CCR), tais como PF- 04136309, CCX-872, BMS-813160 (CCR2/CCR5)

[717] - inibidores da timidilato sintase, tal como ONX-0801;

[718] - inibidores ALK/ROS1, tal como lorlatinibe;

[719] - inibidores de tanquirase, tal como G007-LK;

[720] - inibidores da proteína de ligação a p53 Mdm2, tais como CMG-097, HDM-201;

[721] - inibidores de c-PIM, tal como PIM447;

[722] - inibidores de BRAF, tais como dabrafenib, vemurafenib, encorafenib (LGX818), PLX8394;

[723] - inibidores da esfingosina quinase-2 (SK2), tais como Yeliva& (ABC294640);

[724] - inibidores do ciclo celular, como selumetinibe (MEK1/2) e sapacitabina;

[725] - inibidores de AKT, tais como MK-2206, ipatasertib, afuresertib, AZD5363 e ARQ-092, capivasertib, triciribina;

[726] - inibidores anti-CTLA-4 (proteína 4 do linfócito T citotóxico),

como tremelimumabe. BMS- 986218;

[727] - inibidores de c-MET, tais como AMG-337, savobtinibe, tivantinibe (ARQ-197), capmatinibe e tepotinibe, ABT-700, AG213, AMG-208, JNJ-38877618 (OMO-1), merestinibe, HQP-8361;

[728] - inibidores de c-Met/VEGFR, como BMS-817378, TAS-15;

[729] - inibidores de c-Met/RON, como BMS-777607;

[730] - inibidores de c-Met/VEGF2/AXL/RON/Mer/FLT3, como CT- 053 (ningetinibe);

[731] - inibidores de c-Kitl/l VEGFR2/PDGFR/VEGFR3/FLT1/FLT3, como SHR-1020 (famitinibe L-malato);

[732] - inibidores de BRAF/EGFR, como BGB-283;

[733] - inibidores de bcr/abl, como rebastinibe, asciminibe;

[734] - inibidores de MNK1/MNK2, como eFT-508;

[735] - inibidor de mMTOR/estimuladores do citocromo P450 3A4, como TYME-88

[736] - inibidores de desmetilase-1 específicos de lisina (LSD1), como CC-90011;

[737] - inibidores de Pan-RAF, como LY3009120, LXH254, TAK- 580;

[738] - inibidores Raf/MEK, como RG7304;

[739] - -nibidores de CSFIR/KIT e FLT3, como pexidartinibe (PLX3397);

[740] - inibidores da quinase, como vandetanib;

[741] - antagonistas da selectina E, como GMI-1271;

[742] - indutores de diferenciação, como tretinoína;

[743] - inibidores do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), como osimertinibe (AZD-9291);

[744] - inibidores da topoisomerase, tais como doxorrubicina, daunorrubicina, dactinomicina, eniposídeo, epirrubicina, etoposídeo, idarrubicina, irinotecano, mitoxantrona, pixantrona,y sobuzoxano,

topotecano, irinotecano, MM-398 (irinotecano liposomal), vosaroxina e GPX-150, aldoxorrubicina, AR-67, mavelertinibe, AST-2818, avitinibe (ACEA-0010), irofulven (MGI1-114);

[745] - corticosteroides, tais como cortisona, dexametasona, hidrocortisona, metilprednisolona, prednisona, prednisolona;

[746] - inibidores da quinase de transdução de sinal do fator de crescimento;

[747] - análogos de nucleosídeos, como DFP-10917;

[748] - inibidores de Axl, tais como BGB-324 (bemcentinibe), SLC- 0211;

[749] - inibidores de BET, tais como INCB-054329, INCB057643, TEN-010, AZD-5153, ABT-767, BMS-986158, CC-90010, GSK525762 (molibresib), NHWD-870, ODM-207, GSK-2820151, GSK-1210151A, ZBC246, ZBC260, ZEN3694, FT-1101, RG-6146, CC-90010, mivebresib, BI-894999, PLX-2853, PLX-51107, CPI-0610, GS-5829;

[750] - inibidores de PARP, tais como olaparibe, rucaparibe, veliparibe, talazoparibe, ABT-767, BGB-290;

[751] - inibidores de proteassoma, como ixazomib, carfilzomib (KyprobsO), marizomib;

[752] - inibidores da glutaminase, como CB-839;

[753] - vacinas, como a vacina de peptídeo TG-01 (RAS), GALE- 301, GALE-302, nelipepimut-s, SurVaxM, DSP-7888, TPIV-200, PVX- 410, VXL-100, DPX-E7, ISA-101, 68MHP, OSE-2101, galinpepimut-S, SVN53-67/M57-KLH, IMU-131; vacinas de vetores bacterianos, tais como CRS-207/GVAX, axalimogene filolisbac (ADXS11-001); vacinas de vetor de adenovírus, tais como nadofaragene firadenovec; vacina autóloga Gp96; vacinas de células dendríticas, tais como CVactm, stapuldencel-T, eltrapuldencel-T, SL-701, BSKO1ITM, rocapuldencel-T (AGS-003), DCVAC, CVactm, stapuldencel-T, eltrapuldencel-T, SL-701, BSKO1ITM, ADX31M-142; vacinas oncolíticas, tais como talimogene laherparepvec, pexastimogene devacirepvec, GL-ONC1, MG1-MA3, parvovírus H-1, ProstAtak, enadenotucirev, MG1MA3, ASN-002 (TG- 1042); vacinas terapêuticas, tais como CVAC-301, CMP-001, PF- 06753512, VBI-1901, TG-4010, ProscaVax'Y"; vacinas de células tumorais, tal como Vigil& (IND-14205), vacina Oncoquest-L; vacina de poliovírus do serótipo 1, vivo atenuado, recombinante, tais como PVS- RIPO; Adagloxad simolenina; MEDI-0457; DPV-001, uma vacina contra câncer enriquecida com autofagossomo, derivada de tumor; vacinas de RNA, tais como, CV-9209, LV-305; vacinas de DNA, tais como MEDI- 0457, MVI-816, INO-5401; vacina de contra vírus Ancara vaccinia modificada expressando p53, tal como MVA-p53; DPX-Survivac; BriaVaxTY; GI-6301; GI-6207; G1-4000;

[754] - anticorpos anti-DLL4 (ligando 4 tipo delta), tal como demcizumab;

[755] - inibidores de STAT-3, como napabucasina (BBl1-608);

[756] - inibidores de ATPase p97, como CB-5083;

[757] - inibidores do receptor smoothened (SMO), tais como OdomzoPO (sonidegiby precedentemente LDE-225) LEQS506, vismodegib (GDC-0449), BMS-833923, glasdegib (PF-04449913), LY 2940680 e itraconazol;

[758] - moduladores do ligando interferon alfa, tais como interferon alfa-2b, interferon alfa-2a biossimilar (Biogenômica), ropeginterferon alfa-2b (AOP-2014, P-1101, PEG IFN alfa-2b), Multiferon (Alfanativo, Viragen), interferon alfa 1b, Roferon-A (Canferon, Ro-25-3036), interferon alfa-2a biológico de acompanhamento (Biosidus) (Inmutag, Inter 2A), interferon alfa-2b biológico de acompanhamento (Biosidus - Bioferon, Citopheron, Ganapar, Beijing Kawin Technology - Kaferon), Alfaferona, interferon alfa-1b peguilado, peginterferon alfa-2b biológico de seguimento (Amega), interferon alfa-1Ib humano recombinante, interferon alfa-2/a humano recombinante, interferon alfa-2b humano recombinante, conjugado veltuzumab-IFN alfa 2b, Dynavax (SD-101) e interferon alfa-n1 (Humoferon, SM-10500, Sumiferon);

[759] - moduladores do ligando interferon gama, tal como interferon gama (OH-6000, Ogamma 100);

[760] - moduladores do receptor de IL-6, tais como tocilizumabe, siltuximabe, AS-101 (CB-06-02, IVX-Q-101);

[761] - moduladores da telomerase, tais como tertomotida (GV- 1001, HR-2802, Riavax) e imetelstat (GRN-163, JNJ-63935937);

[762] - inibidores de DNA metiltransferases, como temozolomida (CCRG-81045), decitabina, guadecitabina (S-110, SGI-110), KRX-0402, RX-3117, RRx-001 e azacitidina;

[763] - inibidores da girase de DNA, tais como pixantrona e sobuzoxano;

[764] - inibidores de proteínas da família Bcl-2, tais como ABT-263, venetoclax (ABT-199), ABT-737 e AT-101;

[765] - inibidores de Notch, como LY3039478 (crenigacestat), tarextumab (anti-Notch2/3), BMS-906024;

[766] - inibidores antimiostatina, tal como landogrozumab;

[767] - estimuladores de hialuronidase, tal como PEGPH-20;

[768] - inibidores da via Wnt, tal como SM-04755, PRI-724, WNT- 974;

[769] - inibidores da gama-secretase, tais como PF-03084014, MK-0752, RO-4929097;

[770] - inibidores de Grb-2 (proteína-2 ligada ao receptor do fator de crescimento), tal como BP1001;

[771] - compostos indutores da via TRAIL, tais como ONC201, ABBV-621;

[772] - inibidores da quinase de adesão focal, tais como VS-4718, defactinibe, GSK2256098;

[773] - inibidores de hedgehog, como saridegib, sonidegib

(LDE225), glasdegib e vismodegib;

[774] - iinibidores da Aurora quinase, tais como alisertib (MLN- 8237) e AZD-2811, AMG-900, barasertib, ENMD-2076;

[775] - moduladores de HSPB1 (proteína de choque térmico 27, HSP27), como brivudina, apatorsen;

[776] - inibidores de ATR, tais como BAY-937, AZD6738, AZD6783, VX-803, VX-970 (berzosertib) e VX-970;

[777] - inibidores de mMTOR, como sapanisertibe e vistusertibe (AZD2014), ME-344;

[778] - inibidores de mTOR/PISK, tais como gedatobsib, GSK2141795, omipabsib, RG6114;

[779] - inibidores de Hsp90, como AUY922, onalespib (AT13387), SNX-2112, SNX5422;

[780] - inibidores de oncogene murino de minuto duplo (mdm2), como DS-3032b, RG7775, AMG-232, HDM201 e idasanutbn (RG7388);

[781] - agonistas de CD137, como urelumabe, utomilumab (PF- 05082566);

[782] - agonistas de STING, tais como ADU-S100 (MIW-815), SB- 11285, MK-1454, SR-8291, AdVCAO0848, GSK-532, SYN-STING, MSA- 1, SR-8291;

[783] - inibidores de FGFR, tais como FGF-401, INCB-054828, BAY-1163877, AZD4547, JNJ-42756493, LY2874455, Debio-1347;

[784] - inibidores da sintase de ácidos graxos (FASN), tal como TVB-2640;

[785] - anticorpos monoclonais anti-KIR, tais como lirilumab (IPH- 2102), IPH-4102;

[786] - inibidores de CD19 de antígeno, tais como MOR208, MEDI- 551, AFM-11, inebilizumab;

[787] - aglutinantes de CD44, tal como A6;

[788] - inibidores da proteína fosfatease 2A (PP2A), como LB-100;

[789] - inibidores de CYP17, tais como seviteronel (VT-464), ASN- 001, ODM-204, CFG920, acetato de abiraterona;

[790] - agonistas de RXR, como IRX4204;

[791] - antagonistas de hedgehog/smoothened (hh/Smo), tais como taladegib, patidegib;

[792] - moduladores de complemento C3, tal como Imprime PGG;

[793] - agonistas de IL-15, tais como ALT-803, NKTR-255 e hetlL- 15;

[794] - inibidores de EZH2 (potenciador do homólogo zeste 2), tais como tazemetostat, CPI-1205, GSK-2816126;

[795] - Vírus oncolíticos, tais como pelareorep, CG-0070, terapia MV-NIS, HSV-1716, DS-1647, VCN-01, ONCOS-102, TBlI-1401, tasadenoturev (DNX-2401), vocimagene amiretrorepvec, RP-1, CVA21, Celyvir, LOAd-703, OBP-301;

[796] - inibidores DOT1L (histona metiltransferase), como pinometostat (EPZ-5676);

[797] - toxinas tais como toxina da cólera, ricina, exotoxina de Pseudomonas, toxina de adenilato ciclase de Bordetella pertussis, toxina da difteria e ativadores de caspase;

[798] - plasmídeos de DNA, tal como BC-819

[799] - inibidores de PLK de PLK 1, 2 e 3, tal como volasertib (PLK1);

[800] - inibidores de WEE1, tal como AZD-1775 (adavosertib);

[801] - inibidores de Rho quinase (ROCK), tais como AT13148, KD025;

[802] - inibidores de ERK, tais como GDC-0994, LY3214996, MK- 8353;

[803] - inibidores de IAP, tais como ASTX660, debio-H43, birinapant, APG-1387, LCL-161;

[804] - inibidores da polimerase de RNA, tais como lurbinectedina

(PM-1183), CX-5461;

[805] - inibidores da tubulina, tais como PM-184, BAL-101553 (lisavanbulin) e OX1-4503, fluorapacina (AC-0001), plinabulina;

[806] - agonistas do receptor 4 tipo Toll (TL4), tais como G100, GSK1795091 e PEPA-10;

[807] - inibidores de alfa 2 do fator de alongamento 1, tal como a plitidepsina;

[808] - inibidores de CD95, tais como APG-101, APO-010, asunercept;

[809] - inibidores de WT1, tal como DSP-7888;

[810] - inibidores da subunidade 3B do fator de emenda (SF3B1), tal como H3B-8800

[811] - inibidores específicos do mutante PDGFR alfa/KIT, tal como BLU-285;

[812] - agonistas do receptor gama do retinoide Z (RORy), tal como LYC-55716;

[813] - inibidores do regulador de apoptose de sequência 1 de leucemia de células mieloides (MCL1), tais como AMG-176, AMG-397, S-64315, AZD-5991, 483-LM, A-1210477, UMI-77, JKY-5-037; e derivados de tetra-hidronaftaleno, incluindo aqueles descritos em WO2016033486, WO02017147410 e WO2018183418.

[814] - inibidores da proteína tirosina fosfatase, não receptor tipo 11 (PTPN11 ou SHP2), tais como TNO155 (SHP-099), RMC-4550, JAB- 3068, RMC-4630; Exemplos de inibidores de SHP2 incluem, mas não estão limitados àqueles descritos em WO-2018172984 e WO- 2017211303;

[815] - inibidores da quinase 1 do progenitor hematopoiético (HPK1); Exemplos de inibidores da quinase 1 do progenitor hematopoiético (HPK1) incluem, mas não estão limitados àqueles descritos em WO-2018183956, WO-2018183964, WO-2018167147,

WO-2018183964, WO-2016205942, WO-2018049214, WO- 2018049200, WO-2018049191, WO-2018102366, WO-2018049152 e WO-2016090300;

[816] - inibidores da quinase reguladora do sinal de apoptose (ASK): inibidores de ASK incluem os inibidores de ASK1. Exemplos de inibidores de ASK1 incluem, mas não estão limitados àqueles descritos em WO 2011/008709 (Gilead Sciences) e WO 2013/112741 (Gilead Sciences).

[817] - inibidores de tirosina quinase de Bruton (BTK): Exemplos de inibidores de BTK incluem, mas não estão limitados a, (S)-6-amino- 9-(1-(but-2-inoil)pirrolidin-3-il)-7-(4-fenoxifenil)-7 H-purin-8(9H)-ona, acalabrutinibe (ACP-196), BGB-3111, CB988, HM7122A, ibrutinibe, M- 2951 (evobrutinibe), M7583, tirabrutinibe (ONO-4059), PRN-1008, spebrutinibe (CC-292), TAK-020, vecabrutinibe, ARQ-531, SHR-1459, DTRMWXHS-12, TAS-5315

[818] - inibidores de cluster de diferenciação 47 (CD47): Exemplos de inibidores de CD47 incluem, mas não estão limitados a mAbs anti- CDA47 (Vx-1004), mAbs CD47 anti-humanos (CNTO-7108), CC-90002, CC-90002-ST-001, anticorpo anti-CD47 humanizado (Hu5F9-G4), NI- 1701, NI-1801, ROT-1938 e TT1-621.

[819] - inibidores de quinase dependente de ciclina (CDK): inibidores de CDK incluem inibidores de CDK 1, 2, 3, 4, 86,7 e 9, como abemaciclib, alvocidib (HMR-1275, flavopiridol), AT-7519, dinaciclib, ibrance, FLX-925, LEEOO01, palbociclib, ribociclib, rigosertib, selinexor, UCN-01, SY 1365, CT-7001, SY-1365, G1T38, milciíclib, trilaciclib e TG-

02.

[820] - inibidores do receptor de domínio de discoidina (DDR): inibidores de DDR incluem inibidores de DDR1 e/ou DDR2. Exemplos de inibidores de DDR incluem, mas não estão limitados àqueles descritos em WO 2014/047624 (Gilead Sciences), US 2009-0142345

(Takeda Pharmaceutical), Us 2011-0287011 (Oncomed Pharmaceuticals), WO 2013/027802 (Chugai Pharmaceutical) e WO 2013/034933 (Imperial Innovations).

[821] - inibidores de histona desacetilase (HDAC): exemplos de inibidores de HDAC incluem, mas não estão limitados a, abexinostate, ACY-241, AR-42, BEBT-908, belinostat, CKD-581, CS-055 (HBI-8000), CUDC-907 (fimepinostat),) entinostat, givinostat, mocetinostat, panobinostat, pracinostat, quisinostat (JNJ-26481585), resminostat, ricolinostat, SHP-141, ácido valproico (VAL-O001), vorinostate, tinostamustina, remetinostat, etinostat.

[822] - inibidores de indoleamina-pirrol-2,3-dioxigenase (IDOI): Exemplos de inibidores de IDOI incluem, mas não estão limitados a, BLV-0801, epacadostat, F-001287, GBV-1012, GBV-1028, GDC-0919, indoximod, NKTR-218, vacina baseada em NLG-919, PF-06840003, derivados de piranonaftoquinona (SN-35837), resminostat, SBLK- 200802, BMS-986205 e shiDO-ST, EOS-200271, KHK-2455, LY-

3381916.

[823] - inibidores de Janus quinase (JAK): inibidores de JAK inibem JAK1, JAK2 e/ou JAK3. Exemplos de inibidores de JAK incluem, mas não estão limitados a, AT9283, AZD1480, baricitinibe, BMS- 911543, fedratinibe, filgotinibe (GLPGO0634), gandotinibe (LY2784544), INCBO039110 (itacitinibe), lestaurtinibe, momelotinibe (CYT0387), NS- 018, pacritinibe (SB1518), peficitinibe (ASPO1I5K), ruxolitinibe, tofacitinibe (precedentemente tasocitinibe), INCBO52793 e XL019.

[824] - inibidores da proteína tipo lisil oxidase (LOXL): inibidores de LOXL incluem inibidores da LOXL1, LOXL2, LOXL3, LOXLA4 e/ou LOXL5. Exemplos de inibidores de LOXL incluem, mas não estão limitados a, os anticorpos descritos em WO 2009/017833 (Arresto Biosciences). Exemplos de inibidores de LOXL2 incluem, mas não estão limitados a, os anticorpos descritos em WO 2009/017833 (Arresto

Biosciences) WO 2009/035791 (Arresto Biosciences) e WO 2011/097513 (Gilead Biologies).

[825] - inibidores de matriz metaloprotease (MMP): inibidores de MMP incluem inibidores de MMP1 a 10. Exemplos de inibidores de MMP9 incluem, mas não estão limitados a, marimastat (BB-2516), cipemastat (Ro 32-3555), GS-5745 (andecaliximab) e aqueles descritos em WO 2012/027721 (Gilead Biologies).

[826] - inibidores da proteína quinase ativada por mitogênio (MEK): inibidores da MEK incluem antroquinonol, binimetinibe, cobimetinibe (GDC-0973, XL-518), MT-144, selumetinibe (AZD6244), sorafenibe, trametinibe (GSK1120212), uprosertibe + trametinibe, PD-0325901, pimasertib, LTT462, AS703988, CC-90003, refametinibe.

[827] - inibidores da fosfatidibnositol 3-quinase (PI3K): inibidores de PISK incluem inibidores de RI3Ky, PISKô, RISKB, RI3Ka e/ou pan- PISK. Exemplos de inibidores de PISK incluem, mas não estão limitados a, ACP-319, AEZA-129, AMG-319, AS252424, AZD8186, BAY 10824391, BEZ235, buparbsib (BKM120) BYL719 (alpebsib), CH5132799, copanbsib (BAY 80-6946), duvebsib, GDC-0032, GDC- 0077, GDC-0941, GDC-0980, GSK2636771, GSK2269557, idelabsib (Zydelig&), INCB50465, IPI-145, IP1I-443, IPI-549, KAR4 141, LY 294002, LY3023414, MLN1117, OXY111A, PA799, PX-866, RG7604, rigosertib, RP5090, RP6530, SRX3177, tasebsiby TG100115, TGR-1202 (umbrabsib), TGX221, WX-037, X-339, X-414, XL147 (SAR245408), XL499, XL756, wortmannina, ZSTK474, e os compostos descritos em WO 2005/113556 (ICOS), WO 2013/052699 (Gilead Cabstoga), WO 2013/116562 (Gilead Cabstoga), WO 2014/100765 (Gilead Cabstoga), WO 2014/100767 (Gilead Cabstoga) e WO 2014/201409 (Gilead Sciences).

[828] - inibidores de tirosina-quinase (TKIs): os TKIs podem ter como alvo os receptores do fator de crescimento epidérmico (EGFRs) e os receptores do fator de crescimento de fibroblastos (FGF), fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF) e fator de crescimento endotelial vascular (VEGF). Exemplos de TKls incluem, mas não estão limitados a, afatinibe, ARQ-087 (derazantinibe), asp5878, AZD3759, AZD4547, —bosutinibe, brigatinibe, cabozantinibe, cediranibe, crenolanibe, dacomitinibe, dasatinibe, dovitinibe, E-6201, erdafitinibe, erlofitinibe, gefitinibe, gilteritinibe (ASP-2215), FP-1039, HM61713, icotinibe, imatinibe, KX2-391 (Src), lapatinibe, lestaurtinibe, lenvatinibe, midostaurina, nintedanibe, ODM-203, osimertinibe (AZD-9291), ponatinibe, poziotinibe, quizartinibe, radotinibe, rociletinibe, sulfatinibe (HMPL-012), sunitinibe, L-malato de famitinibe, (MAC-4), tivoanibe, TH- 4000 e MEDI-575 (anticorpo anti-PDGFR). TKIs também podem ter como alvo tirosina quinase do baço (SYK). Exemplos de inibidores de SYK incluem, mas não estão limitados a, 6-(1H-indazol-6-il)-N-(4- morfobnofenil)imidazo[1,2-a]pirazin-8-amina, BAY-61-3606, cerdulatinibe (PRT-062607), entospletinibe, fostamatinibe (R788), HMPL-523, NVP-QAB 205 AA, R112, R343, tamatinibe (R406), e aqueles descritos em US 8450321 (Gilead Connecticut) e aqueles descritos em US 2015/0175616. Moduladores Receptor Tipo Toll (TLR)

[829] Em uma modalidade, o agente terapêutico adicional é um modulador TLR. Os moduladores de TLR podem incluir moduladores de TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLRIO, TLR11, TLR12 e TLR13.

[830] Em certas modalidades, os anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno no presente documento descritos são combinados com um agonista de TLR. Exemplos de agonistas de TLR incluem, sem limitação: vesatolimod (GS-9620), lefitolimod, tilsotolimod, rintatolimod, DSP-0509, AL-O34, G-100, cobitolimod, AST-008, motolimod, GSK- 1795091, GSK-2245035, GSK-2245035, V-1463, GS-9688, LHC-165,

BDB-001, RG-7854, telratolimod. Exemplos adicionais incluem, mas não estão limitados aos compostos descritos na Patente U.S. No.

8.367.670 e os compostos descritos na Publicação do Pedido de Patente U.S. No. 2016/0289229. Em uma modalidade, o anticorpo da presente invenção pode ser combinado com agonista de TLR7, como Vesatolimod. Em outra modalidade, o anticorpo da presente invenção pode ser combinado com o agonista de TLR8.

[831] Exemplos de moduladores TLR3 incluem rintatolimod, poli- ICLC, RIBOXXONGO, Apoxxim, RIBOXXIMO, IPH-33, MCT-465, MCT- 475 e ND-1.1. Exemplos de moduladores TLR7 incluem GS-9620, GSK- 2245035, imiquimod, resiquimod, DSR-6434, DSP-3025, IMO-4200, MCT-465, MEDI-9197, 3M-051, SB-9922, 3M-052, Limtop, TMX-30X, TMX-202, RG-7863, RG-7795 e os compostos descritos em US20100143301 (Gilead Sciences), US20110098248 (Gilead Sciences) e US20090047249 (Gilead Sciences). Exemplos de moduladores TLR8 incluem motolimod, resiquimod, 3M-051, 3M-052, MCT-465, IMO-4200, VTX-763, VTX-1463 e os compostos descritos em US20140045849 (Janssen), US20140073642 (Janssen), WO2014/056953 (Janssen), WO?2014/076221 (Janssen), WO?2014/128189 (Janssen), US20140350031 (Janssen), WO?2014/023813 (Janssen), US20080234251 (Array Biopharma)) US20080306050 (Array Biopharma), US20100029585 (Ventirx Pharma), US20110092485 (Ventirx Pharma), US20110118235 (Ventirx Pharma), US20120082658 (Ventirx Pharma), US20120219615 (Ventirx Pharma), US20140066432 (US014ir180ma), US2014ir180280 (Novira Therapeutics). Exemplos de moduladores TLR9 incluem BB-001, BB-006, CYT-003, IMO-2055, IMO- 2125, IMO-3100, IMO-8400, IR-103, IMO-9200, agatolimod, DIMS- 9054, DV-1079, DV-1179, AZD-1419, leftolimod (MGN-1703), litenimod e CYT-003-QbG10.

[832] Exemplos de inibidores de TLR8 incluem, mas não estão limitados a, E-6887, IMO-4200, IMO-8400, IMO-9200, MCT-465, MEDI- 9197, motobmod, resiquimod, GS-9688, VTX-1463 e VTX-763.

[833] Exemplos de inibidores de TLR9 incluem, mas não estão limitados a, AST-008, IMO-2055, IMO-2125, lefitobmod, btenimod, MGN-1601 e PUL-042. Agentes Quimioterapêuticos

[834] isto é, Exemplos de agentes quimioterapêuticos incluem, mas não se limitam a: agentes alquilantes, tais como tiotepa e ciclofosfamida (CYTOXANO); sulfonatos de alquila, tais como busulfan, improsulfan e piposulfan; aziridinas, tais como benzodepa, carboquona, meturedepa e uredepa; etileniminas e metilamelaminas incluindo altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida e trimemilolomelamina; acetogeninas, especialmente bullatacin e bullatacinona; uma camptotecina, incluindo topotecano análogo sintético; briostatina, calistatina; CC-1065, incluindo seus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina e bizelesina; criptoficinas, particularmente criptoficina 1 e criptoficina 8; dolastatina; duocarmicina, incluindo os análogos sintéticos KW-2189 e CBI-TMI; eleuterobina; —5-azacitidina; pancratistatinay uma sarcodictina; espongistatina; mostardas de nitrogênio, tais como clorambucil, clomafazina, ciclofosfamida, glufosfamida, evofosfamida, bendamustina, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, novembiquina, fenesterina, prednimustina e mostosilamida; nitrosoureias, tais como carmustina, clorozotocina, foremustina, lomustina, nimustina e ranimustina; antibióticos, tais como os antibióticos enedina (por exemplo, caliqueamicina, especialmente calicheamicina gammall e calicheamicina phil1), dinemicina incluindo dinemicina A, bifosfonatos, tais como clodronato, uma esperamicina, cromóforo neocarzinostatina e cromóforo de antibiótico de enediina de cromoproteína relacionada,

aclacinomicina, actinomicina, autramicina, azacerina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-0x0-L- norleucina, doxorrubicina (incluindo morfolino-doxorrubicina, cianomorfolino-doxorubicina, 2-pirrobno-doxorrubicina e deoxidoxorrubicina), epirubicina, esorubicina, mitocinofenol, mitocinofenol, idarubicinofeno!l, idarubicina, marcelomicina, mitomicinas, tal como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, porfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina e zorubicina; anti-metabólitos, tais como metotrexato e 5- fluorouracil (5-FU); análogos de ácido fólico, tais como demopterina, metotrexato, pteropterina e trimetrexato; análogos de purina, tais como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina e tioguanina; análogos de pirimidina, tais como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, dideoxiuridina, doxifluridina, enocitabina e floxuridina; andrógenos, tais como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano e testolactona; antiadrenais, tais como aminoglutetimida, mitotano e trilostano; reforçadores de ácido fólico, como ácido frolínico; agentes radioterapêuticos, tais como Radium-223; tricotecenos, especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A e anguidina; taxoides ou taxanos, tais como paclitaxel (TAXOLO), abraxano, docetaxel (TAXOTEREOGO), cabazitaxel, BIND-014, tesetaxel; análogos de platina, tais como cisplatina e carboplatina, nanoplatina NC-6004; aceglatona; glicosídao de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; eniluracil; amsacrina; hestrabucil;i bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elformtina; acetato de eliptínio; uma epotilona; etoglucida; nitrato de gálio; hidroxiureia; lentinan; leucovorin; lonidamina; maitansinoides, tais como maitansina e ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidamol; nitracrina;

pentostatina; fenameto; pirarrubicina; losoxantrona; fluoropirimidina; ácido folínico; ácido podofilínico; 2-etil-hidrazida; procarbazina; polissacarídeo-K (PSK); razoxano; rizoxina; sizofiran; espirogermânio; ácido tenuazônico; trabectedina, triaziquona; 2,2,2”- tricUorotriemilamina; uretano; vindesina; dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobroman; gacitosina; arabinosídeo ("Ara-C"); ciclofosfamida; tiopeta; clorambucil; gemcitabina (GEMZARIoO); 6- tioguanina; —mercaptopurina;y metotrexato; vinblastina; platina; etoposídeo (VP-16); ifosfamida; mitroxantrona; vancristina; vinorelbina (NAVELBINEO); novantrona; teniposídeo; edatrexato; daunomicina; aminopterina; xeoloda; ibandronato; CPT-11; inibidor de topoisomerase RFS 2000; difluorometilomitina (DFMO); retinoides, tal como ácido retinóico; capecitabina; NUC-1031; um regime FOLFOX (5-fluorouracil, leucovorina, oxaliplatina) (por exemplo, FOLFOX-4, FOLFOX-6, FOLFOX-6 “modificado (MFOLFOX-6)) FOLFOX-7)) FOLFIRI (fluorouracil, leucovorina e irinotecano); e sais farmaceuticamente aceitáveis, ácidos ou derivados de qualquer um dos acima. Agentes Anti-Hormonais

[835] Exemplos de antiestrogênios e SERMs incluem, por exemplo, tamoxifeno (incluindo NOLVADEXTM ), raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, queroxifeno, LY117018, onapristona e toremifeno (FARESTONO).

[836] Inibidores da enzima aromatase regulam a produção de estrogênio nas glândulas suprarrenais. Exemplos incluem 4(5)- imidazóis, aminoglutetimida, acetato de megestrol (MEGACEO), exemestano, formestano, fadrozol, vorozol (RIVISORO), letrozol (FEMARAGO) e anastrozol (ARIMIDEXO).

[837] Exemplos de antiandrógenos incluem apalutamida, abiraterona, — enzalutamida, flutamida, galeterona, nilutamida, bicalutamida, leuprolida, goserelina, ODM-201, APC-100, ODM-204.

[838] Exemplos de antagonistas do receptor de progesterona incluem onapristona. Agentes Antiangiogênicos

[839] Agentes antiangiogênicos incluem, mas não estão limitados a, ácido retinoide e seus derivados, 2-metoxestradiol, ANGIOSTATINGO, ENDOSTATING, regorafenibe, necuparanibe, suramina, esqualamina, inibidor de tecido de metaloproteinase-1, inibidor de tecido de metaloproteinase-2, inibidor-1 de ativador de plasminogênio, inibidor-2 de ativador de plasminogênio, inibidor derivado de cartilagem, paclitaxel (nab-paclitaxel), fator plaquetário 4, sulfato de protamina (clupeína), derivados sulfatados de quitina (preparados a partir da casca do caranguejo rainha), complexo sulfatado polissacarídeo peptidoglicano (sp-pg), estaurosporina, moduladores do metabolismo de matriz incluindo análogos de prolina, tal como ácido 1-azetidina-2-carboxílico (LACA), cishidroxiprolina, d,1-3,4-desidroprolina, tiaprolina, a,a'-dipiridil, fumarato de beta-aminopropionitrila, 4-propil-5-(4-piridinil)-2(3h)- oxazolona, metotrexato, mitoxantrona, heparina, interferons, 2 macroglobulina-sérico, inibidor de metaloproteinase-3 de frango (ChIMP-3), quimostatina, tetradecassulfato de Dbeta-ciclodextrina, eponemicina, fumagilina, tiomalato de sódio de ouro, d-penicilamina, beta-1-colageno-sérico, alfa-2-antiplasmina, bisantreno, lobenzarit dissódico, inibidores de n-2-carboxifenil-4-cloroantronílico dissódico ou "CCA", talidomida, esteroide angiostático, carboxiaminoimidazol|, inibidores de metaloproteinase, tais como BB-94, inibidores de S100A9, tais como S100A9 tasquinimod. Outros agentes anti-angiogênese incluem anticorpos, preferivelmente anticorpos monoclionais contra estes fatores de crescimento angiogênicos: beta-FGF, alfa-FGF, FGF- 5, isoformas de VEGF, VEGF-C, HGF/SF e Ang-1/Ang-2. Agentes Antifibróticos

[840] Os agentes antifibróticos incluem, mas não estão limitados a, os compostos, tais como beta-aminoproprionitrila (BAPN), bem como os compostos descritos em US 4965288 relativos a inibidores de lisil oxidase e seu uso no tratamento de doenças e condições associadas à deposição anormal de colágeno e US 4997854 relativa a compostos que inibem LOX para o tratamento de vários estados fibróticos patológicos, que são no presente documento incorporados por referência. Outros exemplos de inibidores são descritos em US 4943593 relativos a compostos, tais como 2-isobutil-3-fluoro-, cloro- ou bromo-alilamina, US 5021456, US 5059714, US 5120764, US 5182297, US 5252608 relativos a 2-(1-naftiloximemil)-3-fluoroalilamina e US 2004-0248871, que são no presente documento incorporados por referência.

[841] Agentes antifibróticos exemplares também incluem as aminas primárias que reagem com o grupo carbonila do sítio ativo das lisil oxidases, e mais particularmente aqueles que produzem, após a ligação com a carbonila, um produto estabilizado por ressonância, como as seguintes aminas primárias: emilenamina, hidrazina, fenilhidrazina e seus derivados; semicarbazida e derivados de ureia; aminonitrilas, tais como BAPN ou 2-nitroetilamina; haloaminas insaturadas ou saturadas, tais como 2-bromoetilamina, 2-cloroetilamina, 2-trifluoroetilamina, 3- bromopropilamina e p-halobenzilaminas; e lactona de seleno- homocisteína.

[842] Outros agentes antifibróticos são agentes quelantes de cobre que penetram ou não nas células. Compostos exemplares incluem inibidores indiretos que bloqueiam os derivados de aldeído originários da desaminação oxidativa dos resíduos lisila e hidroxilisila pelas lisil oxidases. Exemplos incluem as tiolaminas, particularmente D- penicilamina e seus análogos, tais como ácido 2-amino-5-mercapto-5- metilhexanóico, ácido D-2-amino-3-metil-3-((2- acetamidoetil)ditio)butanóico, ácido p-2-amino-3-metil-3-((2- aminoetil)ditio) butanóico, sulfurato de sódio-4-((p-1-dimetil-2-amino-2-

carboxietil)ditio)butano, sulfanato de 2-acetamidoetil-2- acetamidoetanotiol e tri-hidrato de sódio-4-mercaptobutanossulfinato. Agentes Imunoterapêuticos

[843] Os agentes imunoterapêuticos incluem e não estão limitados a anticorpos terapêuticos adequados para o tratamento de pacientes. Alguns exemplos de anticorpos terapêuticos incluem abagovomabe, ABP-980, adecatumumabe, afutuzumabe, alemtuzumabe, altumomabe, amatuximabe, anatumomabe, arcitumomabe, bavituximabe, bectumomabe, — bevacizumabe, — bivatuzumabe, blinatumomabe, brentuximad, — cantuzumab, — catumaxomabe, CC49, cetuximabe, citatuzumabe, — cuxutumumabe, clivatuzumabe, conatumumabe, dacetuzumabe, dalotuzumabe, daratumumabe, detumomabe, dinutuximabe, drozitumabe, duligotumabe, dusigitumabe, ecromeximabe, elotuzumabe, emibetuzumabe, ensituximabe, ertumaxomabe, — etaracizumabe, farletuzumabe, ficlatuzumabe, figitumumabe, flanvotumabe, futuximab, ganitumabe, gemtuzumabe, girentuximabe, glembatumumabe, ibritumomabe, igovomabe, imgatuzumabe, indatuximabe, inotuzumabe, intetumumabe, ipiimumabe (YERVOYO, MDX-010, BMS-734016 e MDX-101), iratumumabe, labetuzumabe, lexatumumabe, lintuzumabe, lorvotuzumabe, — lucatumumabe, — mapatumumabe, — matuzumabe, milatuzumabe, minretumomabe, “mitumomabe, mogamulizumabe, moxetumumabe, — naptumomabe, —narnatumabe, necitumumabe, nimotuzumabe, nofetumomab, OB1-833, obinutuzumabe, ocaratuzumabe, ofatumumabe, olaratumabe, onartuzumabe, oportuzumabe, — oregovomabe, — panitumumabe, parsatuzumabe, pasudotox, patritumabe, pemtumomabe, pertuzumabe, pintumomabe, pritumumabe, racotumomabe, radretumabe, ramucirumabe (Cyramza6), rilotumumabe, rituximabe, robatumumabe, samalizumabe, satumomabe, sibrotuzumabe, siltuximabe, solitomabe, simtuzumabe,

tacatuzumabe, taplitumomabe, tenatumomabe, teprotumumabe, tigatuzumabe, tositumomabe, trastuzumabe, tucotuzumabe, ublituximabe, veltuzumabe, vorsetuzumabe, votumumabe, zalutumumabe e 3F8.

[844] Os anticorpos terapêuticos exemplificados podem ser ainda marcados ou combinados com uma partícula de radioisótopo, como índio-111, ítrio-90 ou iodo-131. Terapia Gênica e Terapia Celular de Câncer

[845] Terapia gênica do câncer e terapia celular incluem a inserção de um gene normal em células cancerosas para substituir um gene mutado ou alterado; modificação genética para silenciar um gene mutado; abordagens genéticas para matar diretamente as células cancerosas; incluindo a infusão de células imunológicas projetadas para substituir a maior parte do próprio sistema imunológico do paciente para aumentar a resposta imunológica às células cancerosas ou ativar o próprio sistema imunológico do paciente (células T ou células assassinas naturais) para matar células cancerosas, ou encontrar e matar o células cancerosas; abordagens genéticas para modificar a atividade celular para alterar ainda mais a responsividade imunológica endógena contra o câncer. Editores Genéticos

[846] O sistema de edição de genoma é selecionado a partir do grupo consistindo em: um sistema CRISPR/Cas9, um sistema de nuclease de dedo de zinco, um sistema TALEN, um sistema de endonucleases de homing e um sistema de meganuclease. Terapia Celular CAR-T e Terapia Celular TOR-T

[847] Uma população de células efetoras imunes projetadas para expressar um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende um domínio de ligação ao antígeno tumoral. A célula imune efetora é uma célula T ou uma célula NK. As células TOR-T são projetadas para atingir peptídeos derivados de tumor presentes na superfície das células tumorais. As células podem ser autólogas ou alogênicas.

[848] Em algumas modalidades, o CAR compreende um domínio de ligação ao antígeno, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização intracelular.

[849] Em algumas modalidades, o domínio intracelular compreende um domínio de sinalização primário, um domínio coestimulador ou ambos de um domínio de sinalização primário e um domínio coestimulador.

[850] Em algumas modalidades, o domínio de sinalização primário compreende um domínio de sinalização funcional de uma ou mais proteínas selecionadas a partir do grupo consistindo em CD3 zeta, CD3 gama, CD3 delta, CD3 epsilon, FcR gama comum (FCERIG), FcR beta (Fc Epsilon R1b), CD79a, CD79b, Fegama Rlla, DAP10 e DAP12.

[851] Em algumas modalidades, o domínio coestimulador compreende um domínio funcional de uma ou mais proteínas selecionadas a partir do grupo consistindo em CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, antígeno-1 associado à função linfocitária (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, um ligando que se liga especificamente a CD83, CDS, ICAM-1, GITR, BAFFR, HVEM (LIGHTR), SLAMF7, NKp80 (KLRFI), CD160, CD19, CDA4, CD 8alfa, CD8beta, IL2R beta, IL2PR gama, IL7R alfa, ITGAA, VLA1, CD49a, ITGAA, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD 1 Id, ITGAE, CD 103, ITGAL, CD 1 la, LFA-1, ITGAM, CD1 lb, ITGAX, CD1 lc, ITGB1, CD29, ITGB2, CD 18, LFA-1, ITGB7, TNFR2, TRAN CE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD 84, CD96 (Táti), CEACAM1, CRT AM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Lyl08), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD 162), LTBR, LAT,

GADS, SLP-76, PAG/Cbp, NKp44, NKp30, NKp46 e NKG2D.

[852] Em algumas modalidades, o domínio transmembranar compreende um domínio transmembranar de uma proteína selecionada a partir do grupo consistindo na cadeia alfa, beta ou zeta do receptor de células T, CD28, CD3 epsilon, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, KIRDS2, OX40, CD2, CD27, LFA-1 (CD1 la, CD18), ICOS (CD278), 4- IBB (CD137), GITR, CD40, BAFFR, HVEM (LIGHTR), SLAMF7, NKp80 (KLRF1), CD 160, CD 19, IL2R beta, IL2R gama, IL7R u, ITGA1, VLAS, CD49a, ITGAA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD1 ld, ITGAE, CD 103, ITGAL, CD1 la, LFA-1, ITGAM, CD1 Ib, ITGAX, CD1 lc, ITGB1, CD29, ITGB2, CD 18, LFA-1, ITGB7, TNFR2, DNAM1 (CD226), SLAMFA4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tátil), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), SLAMFG6 (NTB-A, Lyl08), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD 162), LTBR, PAG/Cbp, NKp44, NKp30, NKp46, NKG2D e NKG2C.

[853] Em algumas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga a um antígeno tumoral. Em algumas modalidades, o antígeno tumoral é selecionado a partir do grupo consistindo em: CD19; CD123; CD22; CD30; CD171; CS-1 (também referido como subconjunto 1 CD?2, CRACC, SLAMF7, CD319 e 19A24); molécula 1 tipo lectina do tipo C (CLL-1 ou CLECLI); CD33; variante Ill do receptor do fator de crescimento — epidérmico — (EGFRvIII); gangbosídeo G2 (GD2); gangliosídeo GD3 (aNeuSAc(2-8)aNeuSAc(2-3)bDGaip(1- 4)bDGIcp(II)Cer); maturação de células do membro B da família de receptores de TNF (BCMA); antígeno Tn ((Tn Ag) ou (GalNAcu- Ser/Thr)); antígeno de membrana específico da próstata (PSMA); receptor órfão 1 tipo tirosina quinase de receptor (RORI); Tirosina Quinase 3 tipo Fms, (FLT3); Glicoproteína 72 associada ao tumor (TAG72); CD38; CD44v6; Antígeno carcinoembrionário (CEA); Molécula de adesão de células epiteliais (EPCAM); B7H3 (CD276); KIT (CD117); Subunidade alfa-2 do receptor da interleucina-13 (IL-13Ra2 ou CD213A2); Mesotelina; Receptor alfa da interleucina 11 (IL-11Ra); antígeno de células-tronco da próstata (PSCA); Protease Serina 21 (Testisin ou PRSS21); receptor 2 do fator de crescimento endotelial vascular (VEGFR2); Antígeno de Lewis (Y); CD24; Receptor beta do fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGFR-beta); Antígeno-4 específico de estágio embrionário (SSEA-4); CD20; tipo delta 3 (DLL3); Receptor alfa de folato; Receptor tirosina-proteína quinase, ERBB2 (Her2/neu); Mucina 1, associado à superfície celular (MUC1); receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR); molécula de adesão de células neurais (NCAM); Prostase; fosfatase ácida prostática (PAP); fator de alongamento 2 mutado (ELF2M); Efrina B2; proteína alfa de ativação de fibroblastos (FAP); receptor do fator 1 de crescimento tipo insulina (receptor IGF-1); anidrase carbônica IX (CAIX); Subunidade de Proteassoma (Prosome, Macropaina)) Tipo Beta, 9 (LMP2); glicoproteína 100 (gp100); proteína de fusão da oncogene consistindo em região de cluster de ponto de interrupção (BCR) e homólogo 1 da oncogene viral de murinoleucemia de Abelson (Abl) (bcr-abl); tirosinase; receptor 2 de efrina tipo A (EphA2); Fucosil GM1; molécula de adesão de Lewis de sialila (sLe); gangliosídeo GM3 (aNeuSAc(2-3)bDGalp(1- 4)bDGIcp(II)Cer); transglutaminase 5 (TGS5); antígeno associado a melanoma de alto peso molecular (HMWMAA); gangliosídeo o-acetil- GD2 (OAcGD?2); Receptor beta de folato; marcador endotelial tumoral 1 (TEM1/CD248); marcador endotelial tumoral relacionado a 7 (TEM7R); antígeno epitelial seis-transmembranar da próstata | (STEAP1); claudina 6 (CLDN6); receptor do hormônio estimulador da tireoide (TSHR); Receptor acoplado à proteína G membro D, grupo 5 de classe C, (GPRCSD); quadro de leitura aberta 61 do cromossomo X (CXORF61); CD97; CD179a; linfoma quinase anaplásico (ALK); Ácido poli siálico; específico da placenta 1 (PLAC1); porção hexassacárida da glicoceramida globoH (GloboH); antígeno de diferenciação da glândula mamária (NY-BR-1); uroplacina 2 (UPK2); Receptor celular 1 do vírus da hepatite A (HAVCR1); adrenoceptor beta 3 (ADRB3); panexina 3 (PANX3); Receptor 20 acoplado à proteína G (GPR20); complexo de antígeno linfocitário 6, locus K 9 (LY 6K); Receptor olfativo 51E2 (ORS IE2); Proteína do quadro de leitura alternativa gama TCR (TARP); Proteína de tumor de Wilms (WT1); Antígeno 1 de câncer/testículo (NY- ESO-1); Antígeno 2 de câncer/testículo (LAGE-1a); Antígeno 1 associado a melanoma (MAGE-A1); Gene 6 da variante de translocação ETS, localizado no cromossomo 12r (ETV6-AML); proteína do esperma 17 (SPA17); Família de Antígenos X, Membro 1A (XAGE1); receptor 2 da superfície celular de ligação à angiopoietina (Tie 2); antígeno-1 de testículo de câncer de melanoma (MADCT-1); antígeno-2 de testículo de câncer de melanoma (MAD-CT-2); Antígeno 1 relacionado a Fos; proteína tumoral p53, (p53); mutante p53; prosteína; survivina; telomerase; antígeno-1 de tumor de carcinoma da próstata (PCTA-1 ou Galectina 8), antígeno de melanoma reconhecido por células T 1 (MelanA ou MARTI); Sarcoma de rato (Ras) mutante; transcriptase reversa da telomerase humana (hTERT); pontos de interrupção de translocação de sarcoma; inibidor de apoptose de melanoma (ML-IAP); ERG (protease transmembrana, gene de fusão ETS serina 2 (TMPRSS2)); N-acetil glucosaminil-transferase V (NA17); proteína box emparelhada Pax-3 (PAX3); Receptor de andrógeno; Ciclina B1; homólogo derivado de neuroblastoima da oncogene viral mielocitomatose aviária v-myc derivado (MYCN); Membro C da Família do Homólogo Ras (RhoC); Proteína 2 relacionada com a tirosinase (TRP-2); Citocromo P450 IBI (CYP IBI); Fator de ligação de CCCTC tipo (Protéina de Zinco) (BORIS ou Irmão do Regulador de Sitos Impressos), Antígeno de Carcinoma de Célula Escamosa Reconhecido por Células

T 3 (SART3); Proteína box emparelhada Pax-5 (PAX5); proteína de ligação à proacrosina sp32 (OY-TES |); proteína tirosina quinase específica de linfócitos (LCK); proteína A âncora de quinase 4 (AKAP- 4); sarcoma sinovial, ponto de interrupção 2 de X (SSX2); Receptor para produtos finais de glicação avançada (RAGE-I); renal ubíquo 1 (RUI); renal ubíquo 2 (RU2); legumaína; vírus do papiloma humano E6 (HPV E6); vírus do papiloma humano E7 (HPV E7); carboxil esterase intestinal; proteína de choque térmico 70-2 mutada (mut hsp70-2); CD79a; CD79b; CD72; Receptor 1 do tipo imunoglobulina associada a leucócitos (LAIRI); Fragmento Fc do receptor de IgA (FCAR ou CD89); Membro 2 da subfamília A do receptor tipo imunoglobulina de leucócitos (LILRA2); Membro da família f do tipo molécula CD300 (CD300LF); Membro A da família 12 de domínio de lectina de tipo C (CLEC12A); antígeno 2 de células estromais da medula óssea (BST2); receptor tipo 2 de hormônio tipo mucina contendo módulo tipo EGF (EMR2); antígeno linfocitário 75 (LY75); Glipican-3 (GPC3); receptor Fc tipo 5 (FCRL5); e polipeptídeo 1 tipo a imunoglobulina lambda (IGLL1).

[854] Em algumas modalidades, o antígeno tumoral é selecionado a partir de CD150, 5T4, ActRIIA, B7, BMCA, CA-125, CCNA1, CD123, CD126, CD138, CD14, CD148, CD15, CD19, CD20, CD200, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD26, CD261, CD262, CD30, CD33, CD362, CD37, CD38, CD4, CD40, CD40L, CD44, CD46, CD5, CD52, CD53, CD54, CD56, CD66a-d, CD74, CD8, CD80, CD92, CE7, CS-1, CSPGA, fibronectina ED-B, EGFR, EGFRvIIl, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, ErbB3, ErbB4, FBP, GD2, GD3, HERI-HER2 em combinação, HER2-HER3 em combinação, HERV-K, glicoproteína de envelope de HIV-1 gpl20, glicoproteína de envelope de HIV-1 gp4l, HLA-DR, HM1.24, HMW-MAA, Her2, Her2/neu, IGF-1R, IL-1 IRalfa, IL-I3R-alfa2, I1L-2, 11L-22R-alfa, IL-6, IL-G6R, la, li, LI-CAM, molécula de adesão de células L1, Lewis Y, LE-CAM, MAGE A3, MAGE-A1, MART-1, MUC1,

ligandos NKG2C, Ligandos NKG2D, NYESO-1, OEPHa2, PIGF, PSCA, PSMA, ROR1, T101,TAC, TAG72, TIM-3, TRAIL-R1, TRAIL-R1 (DRA4), TRAIL-R2 (DR5), VEGF, VEGFR2, WT-1, um receptor acoplado à proteína G, alfafetoproteína (AFP), um fator de angiogênese, uma molécula de ligação cognata exógena (ExoCBM), produto oncogene, receptor antifolato, c-Met, antígeno carcinoembrionário (CEA), ciclina (D 1), efrinaB2, antígeno de tumor epitelial, receptor de estrogênio, receptor fetal de aceticolina e, proteína de ligação de folato, gp100, antígeno de superfície da hepatite B, cadeia kappa, cadeia leve kappa, kdr, cadeia lambda, livina, antígeno associado a melanoma, mesotelina, homólogo duplo minuto 2 de camundongo (MDM2), mucina 16 (MUC16), p53 mutado, ras mutado, antígenos de necrose, antígeno oncofetal, ROR2, receptor de progesterona, antígeno específico da próstata, teEGFR, tenascina, P2-Microgiobuiína, Receptor Fc tipo 5 (FCRL5).

[855] Exemplos não limitantes de terapias celulares são: Algenpantucel-L, Sipuleucel-T, (BPX-501) rivogenlecleucel US9089520, WO02016100236, AU-105, ACTR-087, células assassinas naturais alogênicas ativadas CNDO-109-AANK, MG-4101, AU-101, BPX-601, FATE-NK100, células-tronco hematopoéticas LFU-835, Imilecleucel-T, baltaleucel-T, PNK-007, UCARTCS1, ET-1504, ET-1501, ET-1502, ET- 190, CD19-ARTEMIS, ProHema, terapia com células-tronco da medula óssea tratada com FT-1050, células CD4CARNK-92, CryoStim, AlloStim, células huCART-meso transduzidas por lentivírus, células CART-22, Células T CAR EGFRi/19-282/4-IBBL, células T autólogas 4H11-28z/fIL-I12/EFGRt, COR5-SBC-728-HSPC, CAR4-1BBZ, CH-296, dnTGFEBRII-NY-ESOc259T, Ad-RTS-IL-I2, IMA-101, IMA-201, CARMA- 0508, TT-18, CMD-501, CMD-503, CMD-504, CMD-502, CMD-60I, CMD-602, CSG-005.

[856] Em certas modalidades, a terapia celular compreende um agente direcionado a: Alfa-fetoproteína, tal como ET-1402 e AFP-TCR; Receptor 1 da toxina do antraz, como terapia de células T anti- TEM8 CAR; Antígenos de maturação de células B (BCMA), tais como bb-2121, UCART-BCMA, ET-140, KITE-585, MCM-998, LCAR-B38M, CART- BCMA, SEA-BCMA, BB212, UCART-BCMA, ET-140, P-BCMA-101 e AUTO-2 (APRIL-CAR); Anticorpos anti-CLL-1, tal como KITE-796; Terapia de célula de tanque anti-PD-L1-CAR, como KD-045; Homólogo 6 B7, tais como CAR-NKp30 e CAR-B7H6; CD19 de antígeno de linfócito B, tal como TBI-1501, células T CTL-119 huCART-19, JCAR- 015 US7446190, JCAR-014, JCAR-017, (WOZ2016196388, WO02016033570, WO2015157386), axicabtagene ciloleucel (KTE-C19), US7741465, US6319494, UCART-19, EBV-CTL, T tisagenlecleucel-T (CTLO19), WO2012079000, WO2017049166, células T expressando CDI9CAR-CD28-CD3zeta-EGFRt, Terapia com células T CAR blindadas por CD19/4-1BBL, C-CAR-011, CIK-CAR.CD19, células T CD19CAR-28-zeta, PCAR-019, MatchCART, DSCAR-01 e IM19 CAR- T; Antígeno CD20 de linfócitos B, como ACTR707 + Rituximabe; Antígeno CD22 de linfócitos B, tal como JCAR-018 (vide WO2016090190); NY-ESO-, tal como GSK-3377794 e TBlI-1301; Anidrase carbônica, como DC-Ad-GMCAIX; Gene suicida da caspase 9, como CaspaClDe DLI e BPX-501; CCR5, como SB-728; CDwl23, como MB-102 e UCART-123; CD20m como CBM-C20.1; CD22 como UCART- 22; CDA4, como ICG-122; CD30, como CART30 (CBM-C30.1; CD33, como CIK-CAR.CD33; CD38, como T-007, UCART-38; ligando de CDA40, como BPX-201; moduladores da proteína 5 CEACAM, como MG7-CART; Claudin 6, como CSG-002; EBV, como CMD-003; MUC16, como célula T 4H11-28z/fIL-12/EFGRt autóloga; Endonuclease, como PGN-514 e PGN-201; linfócitos T específicos do vírus Epstein-Barr, tais como TT-10; Gangliosídeo (GD2), como 4SCAR-GD2; Glutamato carboxipeptidase |l, como CIK-CAR.PSMA, CART-PSMA-TGFBRDN.

P-PSMA-101; Hemoglobina, como PGN-236; Receptor do fator de crescimento de hepatócitos, como anti-cc-Met RNA CAR T; Proteína E7 do papilomavírus humano, como KITE-439; Receptor |ll de imunoglobulina gama Fc, tal como ACTRO87; IL-12, como DC-RTS-IL- 12; Agonista/mucina 16 de IL-12, como JCAR-020; IL-13 alfa 2, como MB-101; K-Ras GTPase, tal como terapia com células MTCR anti-KRAS G12V; Molécula de adesão de células neurais LI L1CAM (CD171), como JCAR-023; Proteína 1 da membrana latente/Proteína 2 da membrana latente, tais como células dendríticas autólogas transduzidas por Ad5f35-LMPd1-2; Antígeno 10 associado ao melanoma, tal como MAGE-A10C796T MAGE-A1O0 TCR; Antígeno associado ao melanoma 3/Antígeno associado ao melanoma 6 (MAGE A3/A6), tal como KITE- 718; Mesotelina, tal como CSG-MESO, TC-210; NKG2D, como NKR-2; Receptor de tirosina quinase Ntrkrl, tal como JCAR-024; PRAME, como BPX-701; antígeno gp100, como IMCgp100; Proteína de tumor de Wilms, como JTCR-016 e WT1-CTL.

Tipos de Câncer

[857] Em algumas modalidades, o câncer é linfoma de Burkitt, linfoma de Hodgkin, linfoma não-Hodgkin (NHL), linfoma não-Hodgkin indolente (iNHL), iNHL refratário, mieloma múltiplo (MM), leucemia mieloide crônica (CML), leucemia linfocítica (LLA), LLA de células B, leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma linfocítico pequeno (SLL), síndrome mielodisplásica (MDS), doença mieloproliferativa (MPD), linfoma de células do manto (MCL), linfoma folicular (FL), macroglobulinemia de Waldestrom (WM), linfoma de células T, linfoma de células B, linfoma difuso de grandes células B (DLBCL) ou linfoma de zona marginal (MZL). Em uma modalidade, o câncer é doença residual mínima (MRD). Em uma modalidade adicional, o câncer é selecionado de linfoma de Hodgkin, linfoma não-Hodgkin (NHL), linfoma não-Hodgkin indolente (iNHL), e refratário inHL. Em certa modalidade, o câncer é linfoma não-Hodgkin indolente (iNHL). Em algumas modalidades, o câncer é refratário iNHL. Em uma modalidade, o câncer é leucemia linfocítica crônica (CLL). Em outra modalidade, o câncer é linfoma difuso de grandes células B (DLBCL).

[858] Em certas modalidades, o câncer é um tumor sólido selecionado a partir do grupo consistindo em câncer pancreático; Câncer de bexiga; câncer colorretal; câncer de mama, incluindo câncer de mama metastático; câncer da próstata, incluindo câncer da próstata dependente de andrógeno e independente de andrógeno; rim ou câncer renal, incluindo, por exemplo, carcinoma de células renais metastático; câncer hepatocelular; câncer de pulmão, incluindo, por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), carcinoma bronquioloalveolar (BAC) e adenocarcinoma do pulmão; câncer do ovário, incluindo, por exemplo, câncer epitelial progressivo ou peritoneal primário; câncer cervical; câncer de intestino; câncer de esôfago; câncer de cabeça e pescoço, incluindo, por exemplo, carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço; melanoma; câncer neuroendócrino, incluindo tumores neuroendócrinos metastáticos; tumores cerebrais, incluindo, por exemplo, glioma, oligodendroglioma anaplásico, glioblastoma multiforme adulto e astrocitoma anaplásico adulto; câncer Nos ossos; e sarcoma de tecidos moles, carcinoma hepático, câncer retal, carcinoma peniano, câncer vulval, câncer de tireoide, carcinoma de glândula salivar, carcinoma endometrial ou uterino, hepatoma, câncer hepatocelular, câncer de fígado, câncer gástrico ou de estômago, incluindo câncer gastrointestinal, câncer de peritônio, carcinoma escamoso do pulmão, câncer gastroesofágico, câncer do trato biliar, câncer de vesícula biliar, câncer colorretal/apendicular, câncer de células escamosas (por exemplo, câncer de células escamosas epiteliais).

[859] Qualquer um dos métodos de tratamento fornecidos pode ser usado para tratar o câncer em vários estágios. A título de exemplo, o estágio do câncer inclui, mas não está limitado a inicial, avançado, localmente avançado, remissão, refratário, recorrente após a remissão e progressivo. Objetos

[860] Qualquer um dos métodos de tratamento fornecidos pode ser usado para tratar um objeto (por exemplo, humano) que foi diagnosticado com ou é suspeito de ter câncer. Tal como no presente documento utilizado, um objeto refere-se a um mamífero, incluindo, por exemplo, um humano.

[861] Em algumas modalidades, o objeto pode ser um ser humano que exibe um ou mais sintomas associados ao câncer ou doença hiperproliferativa. Em algumas modalidades, o objeto pode ser um ser humano que exibe um ou mais sintomas associados ao câncer. Em algumas modalidades, o objeto está em um estágio inicial de câncer. Em outras modalidades, o objeto está em um estágio avançado de câncer.

[862] Em certos casos, o objeto pode ser um ser humano em risco, ou geneticamente ou de outra forma predisposto (por exemplo, fator de risco) a desenvolver câncer ou doença hiperproliferativa que foi ou não diagnosticado. Conforme usado neste documento, um objeto "em risco" é um objeto que está em risco de desenvolver câncer. O objeto pode ou não ter doença detectável e pode ou não ter apresentado doença detectável antes dos métodos de tratamento no presente documento descritos. Um objeto em risco pode ter um ou mais chamados fatores de risco, que são parâmetros mensuráveis que se correlacionam com o desenvolvimento de câncer, que são descritos neste documento. Um objeto com um ou mais desses fatores de risco tem uma probabilidade maior de desenvolver câncer do que um indivíduo sem esses fatores de risco. Esses fatores de risco podem incluir, por exemplo, idade, sexo,

raça, dieta, histórico de doença precedente, presença de doença precursora, considerações genéticas (por exemplo, hereditárias) e exposição ambiental. Em algumas modalidades, os objetos em risco para câncer incluem, por exemplo, aqueles que têm parentes que sofreram da doença e aqueles cujo risco é determinado pela análise de marcadores genéticos ou bioquímicos.

[863] Além disso, o objeto pode ser um humano que está sendo submetido a uma ou mais terapias padrão, como quimioterapia, radioterapia, imunoterapia, cirurgia ou uma combinação das mesmas. Consequentemente, um ou mais inibidores da quinase podem ser administrados antes, durante ou após a administração de quimioterapia, radioterapia, imunoterapia, cirurgia ou combinação dos mesmos.

[864] Em certas modalidades, o objeto pode ser um humano que é (i) substancialmente refratário a pelo menos um tratamento de quimioterapia, ou (ii) está em reincidência após o tratamento com quimioterapia, ou ambos (i) e (ii). Em algumas modalidades, o objeto é refratário a pelo menos dois, pelo menos três ou pelo menos quatro tratamentos de quimioterapia (incluindo quimioterapias padrão ou experimentais). Terapia Combinada para Linfoma ou Leucemia

[865] Alguns agentes de quimioterapia são adequados para o tratamento de linfoma ou leucemia. Esses agentes incluem aldesleucina, alvocidib, tri-hidrato de amifostina, aminocamptotecina, antineoplaston A1O, antineoplaston AS2-1, globulina antitimócito, trióxido de arsênico, inibidor de proteína da família Bcl-2 ABT-263, beta aletina, BMS-3455ib1, bortomez — (VELCADEO), bortezomib (VELCADEG, PS-341), briostatihna 1, bulsulfanoy, campath-1H, carboplatina, carfizomib (Kyprolis8), carmustinay acetato de caspofungina, —CC-5103, clorambucil CHOP (ciclofosfamida, doxorrubicina, vinistina e prednisona), cisplatina, cladribina, clofarabina,

curcumina, CVP (ciclofosfamida, vincristhna e prednisona), ciclofosfamida, — ciclosporina, citarabina, — denileucina — diftitox, dexametasona, docetaxel, dolastatina 10, doxorubicina, cloridrato de doxorubicina, DT-PACE (dexametasona, talidomida, cisplatina, doxorrubicina, ciclofosfamida e etoposídeo), enzastaurina, epoetina alfa, etoposídeo, everolimus (RADOO01) FCM (fludarabina, ciclofosfamida e mitoxantrona, e mitoxantrona), FCR (fludarambina, ciclofosfamida, e rituximabe), fenretinida, filgrastim, flavopirido|, fludarabina, FR (fludarabina e rituximabe), geldanamicina (17 AAG), hiperCVAD (ciclofosfamida hiperfracionada, vincristina, doxorrubicina, dexametasona, metotrexosato, e citarabida),) ICE (ifosfamida, carboplatina, e etoposídeo), ifosfamida, cloridrato de irinotecano, interferon alfa-2b, ixabepilona, lenalidomida (REVLIMIDO, CC-5013), células assassinas ativadas por linfocinaga MCP (mitoxantrona, clorambucil e prednisolona),) melfalano, mesna, metotrexato, mitoxantrona, cloridrato de mitoxantrona, gadolínio de motexafim, micofenolato mofetil, nelarabina, obatoclax (GX15-070), oblimersen, acetato de octreotida, ácidos graxos ômega-3, Omr-lgG-am (WNIG, Omrix), oxaliplatina, paclitaxel, palbociclib (PDO332991), pegfilgrastim, cloridrcato “de doxorrubicina lipossomal PEGuilado, perifosina, prednisolona, prednisona, ligando fltã recombinante, trombopoietina humana recombinante, interferon alfa recombinante, interleucina-11 recombinante, interleucina-12 recombinante, rituximabe, R-CHOP (rituximabe e CHOP), rituximabe e CVP), R-FCOM (rituximabe e FCM), R-ICE (rituximabe e ICE) e R MCP (rituximabe e MCP), R-roscovitina (seliciclibe, CYC202), sargramostim, citrato de sildenafila, sinvastatina, sirolimus, sulfonas de estírila, tacrolimus, tanespimicina, temsirolimus (CCI-779), talidomida, linfócitos alogênicos terapêuticos, tiotepa, tipifarnib, vincristina, sulfato de vincristina, ditartrato de vinorelbina, ácido SAHA (ácido suberanilohidroxâmico, ou suberoíla, amiílida, e ácido hidroxâmico), vemurafenibe (Zelboraf&O), venetoclax (ABT-199).

[866] Uma abordagem modificada é a radioimunoterapia, em que um anticorpo monoclonal é combinado com uma partícula de radioisótopo, como índio-111, ítrio-90 e iodo-131. Exemplos de terapias de combinação incluem, mas não estão limitados a, iodo-131 tositumomabe — (BEXXARG), ítrio-d0 ibritimomabe tiuxetano (ZEVALINO) e BEXXARGO com CHOP.

[867] As terapias acima mencionadas podem ser complementadas ou combinadas com o transplante ou tratamento de células-tronco. Os procedimentos terapêuticos incluem transplante de células-tronco de sangue periférico, transplante de células-tronco hematopoéticas autólogas, transplante de medula óssea autóloga, terapia de anticorpos, terapia biológica, terapia com inibidor de enzima, irradiação corporal total, infusão de células-tronco, ablação da medula óssea com suporte de células-tronco, transplante de células-tronco de sangue periférico tratadas in vitro, transplante de sangue do cordão umbilical, técnica de imunoenzima, terapia de raios gama cobalto-60 de baixo LET, bleomicina, cirurgia convencional, radioterapia e transplante de células- tronco hematopoéticas alogênicas não mieloablativas. Terapia Combinada de Linfomas não-Hodgkin

[868] O tratamento de linfomas não-Hodgkin (NHL), especialmente aqueles de origem em células B, inclui o uso de anticorpos monoclionais, abordagens de quimioterapia padrão (por exemplo, CHOP, CVP, FCM, MCP e similares), radioimunoterapia e suas combinações, especialmente integração de uma terapia de anticorpos com quimioterapia.

[869] Exemplos de anticorpos monoclonais não conjugados para o tratamento de cânceres de células B/NHL incluem rituximabe, alemtuzumabe, anticorpos anti-cCD20 humano ou humanizado, lumiliximabe, ligando indutor de apoptose relacionado a anti-TNF (anti -

TRAIL), bevacizumabe, galiximabe, epratuzumabe, SGN-40 e anti- CD74.

[870] Exemplos de agentes de anticorpos experimentais usados no tratamento de cânceres de células NHL/B incluem ofatumumabe, ha20, PRO0131921, alemtuzumabe, galiximab, SGN-40, CHIR-12.12, epratuzumabe, lumilixóimabe, — apolizumabe, milatuzumabe e bevacizumabe.

[871] Exemplos de regimes padrão de quimioterapia para cânceres de células NHL/B incluem CHOP, FCM, CVP, MCP, R-CHOP, R-FCM, R-CVP e R MCP.

[872] Exemplos de radioimunoterapia para cânceres de células B/NHL incluem ítrio-290 ibritumomabe tiuxetano (ZEVALINO) e iodo-131 tositumomabe (BEXXARGO). Terapia Combinada de Linfoma de Células do Manto

[873] Os tratamentos terapêuticos para linfoma de células do manto (MCL) incluem quimioterapias de combinação, tais como CHOP, hyperCVAD e FCM. Esses regimes também podem ser suplementados com o anticorpo monoclonal rituximabe para formar as terapias de combinação R-CHOP, hyperCVAD-R e R-FCM. Qualquer uma das terapias acima mencionadas pode ser combinada com o transplante de células-tronco ou ICE para tratar MCL.

[874] Uma abordagem alternativa para o tratamento de MCL é a imunoterapia. Uma imunoterapia usa anticorpos monoclonais como o rituximabe. Outro usa vacinas contra o câncer, como GTOP-99, que são baseadas na composição genética do tumor de um paciente individual.

[875] Uma abordagem modificada para tratar MCL é a radioimunoterapia, em que um anticorpo monoclonal é combinado com uma partícula de radioisótopo, tal como iodo-131 tositumomabe (BEXXARO) e ítrio-90 ibritumomabe tiuxetano (ZEVALINO). Em outro exemplo, BEXXARGO é usado no tratamento sequencial com CHOP.

[876] Outras abordagens para o tratamento de MCL incluem transplante autólogo de células-tronco acoplado a quimioterapia de alta dose, administração de inibidores de proteassoma, como bortezomibe (VELCADES ou PS-341) ou administação de agentes antiangiogênicos, como talidomida, especialmente em combinação com rituximabe.

[877] Outra abordagem de tratamento é a administração de drogas que levam à degradação da proteína Bcl-2 e aumentam a sensibilidade das células cancerosas à quimioterapia, como o oblimersen, em combinação com outros agentes quimioterápicos.

[878] Uma abordagem de tratamento adicional inclui a administração de inibidores de MTOR, que podem levar à inibição do crescimento celular e até mesmo à morte celular. Exemplos não limitativos são sirolimus, temsirolimus (TORISELGO, CCI-779), CC-115, CC-223, SF-1126, PQR-309 (bimiralisibe), voxtalisibe, GSK-2126458 e temsirolimus em combinação com RITUXANG, VELCADEGO ou outros agentes quimioterápicos.

[879] Outras terapias recentes para MCL foram descritas. Tais exemplos incluem flavopiridol, palbociclib (PDO332991), R-roscovitina (selicicilib, C(YC202), sulfonas de estirila, obatoclax (GX15-070), TRAIL, receptores de morte anti- TRAIL DR4 e anticorpos DR5, temsirolimus (TORISELO, —“CC1-779), everolimus (RADO01) BMS-345541, curcumina, SAHA, talidomida, lenalidomida (REVLIMIDO, CC-5013) e geldanamicina (17 AAG). Terapia combinada de macroglobulinemia de Waldenstrom

[880] Os agentes terapêuticos usados para tratar a macroglobulinemia de Waldenstrom (WM) incluem aldesleucina, alemtuzumabe, alvocidibe, tri-hidrato de amifostina, aminocamptotecina, antineoplaston A1O, antineoplaston AS2-1, globulina anti-timócito, tricóxido arsênico, HSPPC-96 derivada de tumor humano autólogo, inibidor de proteína da família Bcl-2 ABT-263, beta aletina, bortezomibe (VELCADEO)), briostatina 1, busulfan, campath-1H, carboplatina, carmustina, acetato de caspofungina, CC-5103, cisplatina, clofarabina, ciclofosfamida, ciclosporina, citarabamida, denileucina diftitox, dexametasona, docetaxel, dolastatina 10, cloridrato de doxorrubicina, DT-PACE, enzastaurina, epoetina alfa, epratuzumabe (hLL2-anticorpo humanizado anti-CD22), etoposídeo, everolimus, fenretinida, filgrastim, fludarabina, ifosfamida, anticorpo monoclional índio-111 MN-14, iodo-131 tositumomab, cloridrato de irinotecano, ixabepilona, células assassinas ativadas por linfocina, melfalano, mesna, metotrexato, cloridrato de mitoxantrona, anticorpo monocional CD19 (tal como tisagenlecleucel-T, CART-19, CTL-019), anticorpo monoclonal CD20, gadolínio de motezafin, micofenolato mofetil, nelarabina, oblimersen, acetato de octreotida, ácidos graxos ômega-3, oxaliplatina, pacbtaxel, pegfilgrastim, cloridrato de doxorrubicina lipossomal PEGuilado, pentostatina, perifosina, prednisona, ligando fIt3 recombinante, trombinopoietina humana recombinante, interferon alfa recombinante, intercleucina-11 recombinante, interleucina-12 recombinante, rituximabe, sargramostim, citrato de sildenafil (VIAGRAO), sinvastatina, sirolimus, tacrolimus, tanespimicina, talidomida, linfócitos alogênicos terapêuticos, tiotepa, tipifamibe, tositumomabe, veltuzumabe, sulfato de vinscritina, ditatrato de vinorelbina, vorinostat, WT1, vacina de peptídeo WT1 126-134, vacina de peptídeo análogo WT-1, ibritumomabe tiuxetano de ítrio-90, epratuzumabe de ítrio-90 humanizado e qualquer combinação dos mesmos.

[881] Exemplos de procedimentos terapêuticos usados para tratar WM incluem transplante de células-tronco de sangue periférico, transplante de células-tronco hematopoéticas autólogas, transplante de medula óssea autóloga, terapia de anticorpos, terapia biológica, terapia com inibidor de enzima, irradiação de corpo total, infusão de células- tronco, ablação de medula óssea com suporte de células-tronco, transplante de células-tronco de sangue periférico tratadas in vitro, transplante de sangue do cordão umbilical, técnicas de imunoenzima, terapia de raios gama cobalto-60 de baixo LET, bleomicina, cirurgia convencional, — radioterapia e transplante de células-tronco hematopoéticas alogênicas não mieloablativas. Terapia Combinada para Linfoma Difuso de Células B Grandes

[882] Os agentes terapêuticos usados para tratar o linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) incluem ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina, prednisona, anticorpos monoclonais anti-CD20, etoposídeo, bleomicina, muitos dos agentes listados para WM e qualquer combinação dos mesmos, tais como ICE e RICE. Terapia Combinada de Leucemia Linfocítica Crônica

[883] Exemplos de agentes terapêuticos usados para tratar leucemia linfocítica crônica (CLL) incluem clorambucil, ciclofosfamida, fludarabina, —pentostatina, cladribinay doxorrubicina, vincristina, prednisona, prednisolona, alemtuzumabe, muitos dos agentes listados para WM, e combinação de quimioterapia e quimioimunoterapia, incluindo os seguintes regimes de combinação comuns: CVP, R-CVP, ICE, R-ICE, FOR e FR. Terapia de Combinação de Mielofibrose

[884] Os agentes inibidores da mielofibrose incluem, mas não estão limitados a, inibidores de hedgehog, inibidores de histona desacetilase (HDAC) e inibidores de tirosina quinase. Exemplos não limitativos de inibidores de hedgehog são saridegib e vismodegib.

[885] Exemplos de inibidores de HDAC incluem, mas não estão limitados a, pracinostat e panobinostat.

[886] Exemplos não limitativos de inibidores da tirosina quinase são lestaurtinibe, bosutinibe, imatinibe, gilteritinibe, radotinibe e cabozantinibe.

Terapia Combinadas para Transtorno Hiperproliferativo

[887] Gemrcitabina, nab-pacbtaxel e gemcitabina/nab-paclitaxel podem ser usados com um inibidor de CD73 e/ou inibidor de TGFB para tratar distúrbios hiperproliferativos.

Terapia Combinada de Câncer de Bexiga

[888] Os agentes terapêuticos usados para tratar o câncer de bexiga incluem atezolizumabe, carboplatina, cisplatina, docetaxel, doxorrubicina, fluorouracil (5-FU), gemcitabina, idosfamida, interferon alfa-2b, metotrexato, mitomicina, nab-paclitaxel, paclitaxel, pemetrexed, tiotepa, vinblastina e qualquer combinação dos mesmos.

Terapia Combinada de Câncer de Mama

[889] Os agentes terapêuticos usados para tratar o câncer de mama incluem paclitaxel ligado à albumina, anastrozol, capecitabina, carboplatina, cisplatina, ciclofosfamida, docetaxel, doxorrubicina, epirrubicina, — everolimus, — exemestane, fluorouracil, fulvestrant, gemcitabina, ixabepilona, lapatinibe, letrozol, metotrexato, mitoxantrona, —paclitaxeli doxorrubicina lipossomal peguilada, pertuzumabe, tamoxifeno, toremifeno, trastuzumabe, vinorelbina e quaisquer combinações dos mesmos.

Terapia Combinada de Câncer de Mama Triplo Negativo

[890] Os agentes terapêuticos usados para tratar o câncer de mama triplo negativo incluem ciclofosfamida, docetaxel, doxorrubicina, epirrubicina, fluorouracil, pacbtaxel e combinações dos mesmos.

Terapia Combinada de Câncer Colorretal

[891] Os agentes terapêuticos usados para tratar o câncer colorretal'— incluem — bevacizumabe, capecitabinay cetuximabe, fluorouracil, irinotecano, leucovorina, oxaliplatina, panitumumabe, ziv- aflibercept e quaisquer combinações dos mesmos.

Terapia Combinada de Câncer de Próstata Resistente à Castração

[892] Os agentes terapêuticos usados para tratar o câncer de próstata resistente à castração incluem abiraterona, cabazitaxel, docetaxel, enzalutamida, prednisona, sipuleucel-T e quaisquer combinações dos mesmos.

Terapia Combinada de Câncer da Junção Esofágica e Esofagogástrica

[893] Os agentes terapêuticos usados para tratar o câncer da junção esofagogástrica e esofágica incluem capecitabina, carboplatina, cisplatina, docetaxel, epirrubicina, fluoropirimidina, fluorouracil, irinotecano, leucovorina, oxaliplatina, paclitaxel, ramucirumabe, e quaisquer combinações dos mesmos.

Terapia Combinada de Câncer Gástrico

[894] Os agentes terapêuticos usados para tratar o câncer gástrico incluem capecitabina, carboplatina, cisplatina, docetaxel, epirrubicina, fluoropirimidina, fluorouracil, irinotecano, leucovorina, mitomicina, oxaliplatina, paclitaxel, ramucirumabe, trastuzumabe e quaisquer combinações dos mesmos.

Terapia Combinada de Câncer de Cabeça e Pescoço

[895] Os agentes terapêuticos usados para tratar o câncer de cabeça e pescoço incluem afatinibe, bleomicina, capecitabina, carboplatina, — cetuximabe, —cisplatinay docetaxel, fluorouracil, gemcitabina, hidroxiureia, —metotrexato, nivolumabe, paclitaxel, pembrolizumabe, qualquer combinação dos mesmos.

Terapia Combinada de Câncer Hepatobiliar

[896] Os agentes terapêuticos usados para tratar o câncer hepatobiliar incluem capecitabina, cisplatina, fluoropirimidina, 5- fluorourcil, — gemecitabina, — oxaliplatina, sorafenib e quaisquer combinações dos mesmos.

Terapia Combinada de Carcinoma Hepatocelular

[897] Os agentes terapêuticos usados para tratar o carcinoma hepatocelular incluem capecitabina, doxorrubicina, gencitabina,

sorafenib e quaisquer combinações dos mesmos. Terapia Combinada de Câncer de Pulmão de Células não Pequenas

[898] Os agentes terapêuticos usados para tratar o câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) incluem afatinibe, paclitaxel ligado à albumina, alectinibe, bevacizumabe, bevacizumabe, cabozantinibe, carboplatina, cisplatina, crizotinibe, dabrafenibe, docetaxel, erlotinibe, etoposídeo, gemcitabina, nivolumab, paclitaxel, pembrolizumabe, pemetrexedo, ramucirumabe, trametinibe, trastuzumabe, vandetanibe, vemurafenibe, vinblastina, vinorelbina e quaisquer combinações dos mesmos. Terapia Combinada de Câncer de Pulmão de Pequenas Células

[899] Os agentes terapêuticos usados para tratar o câncer de pulmão de células pequenas (SCLC) incluem bendamustima, carboplatina, cisplatina, ciclofosfamida, docetaxel, doxorrubicina, etoposídeo, gencitabina, ipilimumabe, irinotecano, nivolumabe, paclitaxel, temozolomida, topotecan, vinistina, vinorelbina, e qualquer combinações dos mesmos. Terapia Combinada de Melanoma

[900] Os agentes terapêuticos usados para tratar o câncer de melanoma incluem paclitaxel ligado à albumina, carboplatina, cisplatina, cobiemtinibe, dabrafenibe, dacrabazina, IL-2, imatinibe, interferon alfa- 2b, ipilimumabe, nitrosoureia, nivolumabe, paclitaxel, pembrolimizumabe, pilimumab, temozolomida, trametinibe, vemurafenib, vinblastina e quaisquer combinações dos mesmos. Terapia Combinada de Câncer de Ovário

[901] Os agentes terapêuticos usados para tratar o câncer de ovário incluem 5-fluorouracil, paclitaxel ligado à albumina, altretamina, anastrozol, bevacizumabe, capecitabina, carboplatina, cisplatina, ciclofosfamida, docetaxel, doxorubicina, etoposídeo, exemestano, gemcibabina, ifosfamida, irinotecano, letrozol, acetato de leuprolida,

doxorrubicina lipossomal, acetato de megestrol, melfalano, olaparibe, oxaliplatina, paclitaxel, Pazopanibe, pemetrexedo, tamoxifeno, topotecano, vinorelbina e quaisquer combinações dos mesmos. Terapia Combinada de Câncer de Pâncreas

[902] Os agentes terapêuticos usados para tratar o câncer pancreático incluem S5-fluorourcil, paclitaxel ligado à albumina, capecitabina, cisplatinay docetaxel, erlotinibe, fluoropirimidina, gemcitabina, irinotecano, leucovorina, oxaliplatinay paclitaxel e quaisquer combinações dos mesmos. Terapia Combinada de Carcinoma de Células Renais

[903] Os agentes terapêuticos usados para tratar o carcinoma de células renais incluem axitinibe, bevacizumabe, cabozantinibe, erlotinibe, everolimus, levantinibe, nivolumabe, pazopanibe, sorafenibe, sunitinibe, temsirolimus e quaisquer combinações dos mesmos.

5.6 Polinucleotídeos, Vetores e Métodos de Produção de Anticorpos Anti-CD73

[904] Em outro aspecto, são fornecidos no presente documento polinucleotídeos compreendendo uma sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo no presente documento descrito ou um fragmento do mesmo (por exemplo, uma região variável de cadeia leve e/ou região variável de cadeia pesada) que se liga especificamente a um antígeno de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e vetores, por exemplo, vetores que compreendem tais polinucleotídeos para expressão recombinante em células hospedeiras (por exemplo, células de E. coli e mamífero). São fornecidos no presente documento polinucleotídeos compreendendo sequências de nucleotídeos que codificam um polipeptídeo (por exemplo, uma cadeia pesada e/ou leve) de qualquer um dos anticorpos fornecidos neste documento, bem como vetores compreendendo tais sequências de polinucleotídeos, por exemplo, vetores de expressão para sua expressão eficiente em células hospedeiras, por exemplo, células de mamíferos.

[905] Tal como no presente documento utilizado, um polinucleotídeo ou molécula de ácido nucleico "isolada" é aquele que é separado de outras moléculas de ácido nucleico que estão presentes na fonte natural (por exemplo, em um camundongo ou humano) da molécula de ácido nucleico. Além disso, uma molécula de ácido nucleico "isolada", como uma molécula de cDNA, pode ser substancialmente livre de outro material celular ou meio de cultura quando produzida por técnicas recombinantes, ou substancialmente livre de precursores químicos ou outros produtos químicos quando quimicamente sintetizada. Por exemplo, a linguagem "substancialmente livre" inclui preparações de polinucleotídeo ou molécula de ácido nucleico com menos de cerca de 15%, 10%, 5%, 2%, 1%, 0,5% ou 0,1% (em particular menos de cerca de 10%) de outro material, por exemplo, material celular, meio de cultura, outras moléculas de ácido nucleico, precursores químicos e/ou outros produtos químicos. Em uma modalidade específica, uma molécula de ácido nucleico que codifica um anticorpo descrito no presente documento é isolada ou purificada.

[906] Em aspectos particulares, são fornecidos no presente documento — polinucleotídecos — compreendendo — sequências — de nucleotídeos que codificam anticorpos, que se ligam especificamente a um polipeptídeo CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e compreende uma sequência de aminoácidos como no presente documento descrita, bem como anticorpos que competem com tais anticorpos pela ligação a um polipeptídeo CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) (por exemplo, de uma maneira dependente de dose), ou que se liga ao mesmo epítopo de tais anticorpos.

[907] Em certos aspectos, são fornecidos no presente documento polinucleotídeos compreendendo uma sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo (por exemplo, a cadeia leve ou cadeia pesada) de um anticorpo no presente documento descrito. Os polinucleotídeos podem compreender sequências de nucleotídeos que codificam uma cadeia leve compreendendo as VL FRs e CDRs de anticorpos descritos neste documento (vide, por exemplo, Tabela 1) ou sequências de nucleotídeos que codificam uma cadeia pesada compreendendo as VH FRs e CDRs de anticorpos descritos neste documento (vide, por exemplo, Tabela 1).

[908] Também são fornecidos no presente documento polinucleotídeos que codificam um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) que são otimizados, por exemplo, por otimização de códon/RNA, substituição com sequências de sinal heterólogas, e eliminação de elementos de instabilidade de MRNA. Métodos para gerar ácidos nucleicos otimizados que codificam um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) ou um fragmento do mesmo (por exemplo, cadeia leve, cadeia pesada, domínio VH ou domínio VL, opcionalmente ligado a uma porção de ligação a ligando) para expressão recombinante através da introdução de alterações de códons e/ou eliminação de regiões inibidoras no MRNA podem ser realizados adaptando os métodos de otimização descritos, por exemplo, nas Patentes U.S. Nos. 5.965.726;

6.174.666; 6.291.664; 6.414.132; e 6.794.498, em conformidade, todos os quais são no presente documento incorporados por referência na sua totalidade. Por exemplo, sítios de emenda potenciais e elementos de instabilidade (por exemplo, elementos ricos em A/T ou A/U) dentro do RNA podem ser mutados sem alterar os aminoácidos codificados pelas sequências de ácido nucleico para aumentar a estabilidade do RNA para a expressão recombinante. As alterações utilizam àa degenerescência do código genético, por exemplo, usando um códon alternativo para um aminoácido idêntico. Em certas modalidades, pode ser desejável alterar um ou mais códons para codificar uma mutação conservadora, por exemplo, um aminoácido similar com estrutura química e propriedades similares e/ou função como o aminoácido original. Tais métodos podem aumentar a expressão de um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo) ou fragmento do mesmo em pelo menos 1 vez, 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 40 vezes, 50 vezes, 60 vezes, 70 vezes, 80 vezes, 90 vezes ou 100 vezes ou mais em relação à expressão de um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo) codificado por polinucleotídeos que não foram otimizados.

[909] Em certas modalidades, uma sequência polinucleotídica otimizada que codifica um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) no presente documento descrito ou um fragmento do mesmo (por exemplo, domínio VL e/ou domínio VH) pode hibridizar com um polinucleotídeo antissentido (por exemplo, complementar) de uma sequência polinucleotídica não otimizada que codifica um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo) no presente documento descrito ou um fragmento do mesmo (por exemplo, domínio VL e/ou domínio VH). Em modalidades específicas, uma sequência de nucleotídeos otimizada que codifica um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou de cinomolgos) no presente documento descrito ou um fragmento hibridiza sob condições de alto rigor com o polinucleotídeo antissentido de uma sequência de polinucleotídeo não otimizada que codifica um anti-CD73 (por exemplo, humano, de camundongo ou de CD73 de cinomolgos) no presente documento descrito ou um fragmento do mesmo. Em uma modalidade específica, uma sequência de nucleotídeos otimizada que codifica um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou de cinomolgos) no presente documento descrito ou um fragmento deste hibridiza sob condições de alta severidade, intermediária ou menor severidade de hibridização com um polinucleotídeo antissentido de uma sequência de nucleotídeos não otimizado que codifica um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) no presente documento descrito ou um fragmento deste. As informações sobre as condições de hibridização foram descritas, consulte, por exemplo, a Publicação do Pedido de Patente U.S. 2005/0048549 (por exemplo, parágrafos 72-73), que é no presente documento incorporado por referência em sua totalidade.

[910] Os polinucleotídeos podem ser obtidos, e a sequência de nucleotídeos dos polinucleotídeos determinada, por qualquer método conhecido na técnica. Sequências de nucleotídeos que codificam anticorpos descritos no presente documento, por exemplo, anticorpos descritos na Tabela 1, e versões modificadas desses anticorpos podem ser determinados usando métodos bem conhecidos na técnica, ou seja, códons de nucleotídeos conhecidos por codificar aminoácidos específicos são montados de modo a gerar um ácido nucleico que codifica o anticorpo. Tal um polinucleotídeo que codifica o anticorpo pode ser montado a partir de oligonucleotídeos sintetizados quimicamente (por exemplo, como descrito em Kutmeier G et a/., (1994), BioTechniques 17: 242-6, no presente documento incorporado por referência em sua totalidade), que, resumidamente, envolve o síntese de oligonucleotídeos sobrepostos contendo porções da sequência que codifica o anticorpo, recozimento e ligação desses oligonucleotídeos e, em seguida, amplificação dos oligonucleotídeos ligados por PCR.

[911] Alternativamente, um polinucleotídeo que codifica um anticorpo no presente documento descrito pode ser gerado a partir de ácido nucleico de uma fonte adequada (por exemplo, um hibridoma) usando métodos bem conhecidos na técnica (por exemplo, PCR e outros métodos de clonagem molecular). Por exemplo, a amplificação por PCR usando iniciadores sintéticos hibridizáveis nas extremidades 3' e 5' de uma sequência conhecida pode ser realizada usando DNA genômico obtido de células de hibridoma que produzem o anticorpo de interesse. Tais métodos de amplificação por PCR podem ser usados para obter ácidos nucleicos compreendendo a sequência que codifica a cadeia leve e/ou cadeia pesada de um anticorpo. Esses métodos de amplificação por PCR podem ser usados para obter ácidos nucleicos compreendendo a sequência que codifica a região variável de cadeia leve e/ou a região variável de cadeia pesada de um anticorpo. Os ácidos nucleicos amplificados podem ser clonados em vetores para expressão em células hospedeiras e para clonagem adicional, por exemplo, para gerar anticorpos quiméricos e humanizados.

[912] Se um clone contendo um ácido nucleico que codifica um determinado anticorpo não está disponível, mas a sequência da molécula de anticorpo é conhecida, um ácido nucleico que codifica a imunoglobulina pode ser sintetizado quimicamente ou obtido de uma fonte adequada (por exemplo, uma biblioteca de cDNA de anticorpo ou uma biblioteca de cDNA gerada a partir de, ou ácido nucleico, preferivelmente poli A + RNA, isolado de, qualquer tecido ou células que expressam o anticorpo, tal como células de hibridoma selecionadas para expressar um anticorpo no presente documento descrito) por amplificação por PCR usando iniciadores sintéticos hibridizáveis com os extremidades 3' e 5' da sequência ou por clonagem usando uma sonda oligonucleotídica específica para a sequência do gene particular para identificar, por exemplo, um clone de cDNA de uma biblioteca de cDONA que codifica o anticorpo. Os ácidos nucleicos amplificados gerados por PCR podem então ser clonados em vetores de clonagem replicáveis usando qualquer método bem conhecido na técnica.

[913] Os anticorpos de DNA que codificam anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou de cinomolgos) descritos neste documento podem ser facilmente isolados e sequenciados usando procedimentos convencionais (por exemplo, usando sondas de oligonucleotídeos que são capazes de se ligar especificamente a genes que codificam as cadeias pesada e leves dos anticorpos anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos). As células de hibridoma podem servir como uma fonte desse DNA. Uma vez isolado, o DNA pode ser colocado em vetores de expressão, que são então transfectados em células hospedeiras, como células de E. coli, células COS de símio, células de ovário de hamster chinês (CHO) (por exemplo, células CHO do CHO GS System“ (Lonza)), ou células de mieloma que não produzem proteína de imunoglobulina, para obter a síntese de anticorpos anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou de cinomolgos) nas células hospedeiras recombinantes.

[914] Para gerar anticorpos inteiros, os iniciadores de PCR incluindo sequências de nucleotídeos VH ou VL, um sítio de restrição e uma sequência de flanqueamento para proteger o sítio de restrição podem ser usados para amplificar as sequências VH ou VL em clones de scFv. Utilizando técnicas de clonagem conhecidas pelos versados na técnica, os domínios VH amplificados por PCR podem ser clonados em vetores que expressam uma região constante de cadeia pesada, por exemplo, a região constante gama 1 humana ou gama 4 humana, e os domínios VL amplificados por POR podem ser clonados em vetores que expressam uma região constante de cadeia leve, por exemplo, regiões constantes kappa ou lambda humanas. Em certas modalidades, os vetores para expressar os domínios VH ou VL compreendem um promotor EF-la, um sinal de secreção, um sítio de clonagem para a região variável, domínios constantes e um marcador de seleção, como a neomicina. Os domínios VH e VL também podem ser clonados em um vetor que expressa as regiões constantes necessárias. Os vetores de conversão de cadeia pesada e vetores de conversão de cadeia leve são então cotransfectados em linhagens celulares para gerar linhagens celulares estáveis ou transitórias que expressam anticorpos de comprimento completo, por exemplo, IgG, usando técnicas conhecidas pelos versados na técnica.

[915] O DNA também pode ser modificado, por exemplo, substituindo a sequência de codificação para os domínios constantes de cadeia pesada e leve humana no lugar das sequências de murino, ou por ligação covalente à sequência de codificação de imunoglobulina toda ou parte da sequência de codificação para um polipeptídeo não imunoglobulina.

[916] Também são fornecidos polinucleotídeos que hibridizam sob condições de hibridização de alto rigor, intermediário ou baixo rigor para polinucleotídeos que codificam um anticorpo no presente documento descrito. Em modalidades específicas, os polinucleotídeos no presente documento descritos hibridizam em condições de hibridização de alto rigor, intermediário ou baixo rigor para polinucleotídeos que codificam um domínio VH e/ou domínio VL no presente documento fornecidos.

[917] As condições de hibridização foram descritas na técnica e são conhecidas por aqueles versados na técnica. Por exemplo, a hibridização sob condições rigorosas pode envolver a hibridização com o DNA ligado ao filtro em 6x de cloreto de sódio/citrato de sódio (SSC) a cerca de 45ºC seguido por uma ou mais lavagens em 0,2x8SC/0.1% de SDS a cerca de 50-65ºC; a hibridização sob condições altamente rigorosas pode envolver a hibridização com ácido nucleico ligado ao filtro em 6xSSC a cerca de 45 ºC seguido por uma ou mais lavagens em 0,1xS8SC/0.2%6 de SDS a cerca de 68ºC. Hibridação sob outras condições *estringentes de hibridização são conhecidas dos especialistas na técnica e foram descritas, vide, por exemplo, Ausubel FM et a/l., eds., (1989) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. |,

Green Publishing Associates, Inc. e John Wiley & Sons, Inc., New York nas páginas 6.3.1-6.3.6 e 2.10.3, que é no presente documento incorporado por referência em sua totalidade.

[918] Em certos aspectos, são fornecidas no presente documento células (por exemplo, células hospedeiras) que expressam (por exemplo, de forma recombinante) anticorpos descritos neste documento que se ligam especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e polinucleotídeos relacionados e vetores de expressão. São fornecidos no presente documento vetores (por exemplo, vetores de expressão) compreendendo polinucleotídeos compreendendo sequências de nucleotídeos que codificam anticorpos anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) ou um fragmento para expressão recombinante em células hospedeiras, preferivelmente em células de mamíferos (por exemplo, células CHO) Também são fornecidas neste documento células hospedeiras que compreendem tais vetores para a expressão recombinante de anticorpos anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descritos neste documento (por exemplo, anticorpo humano ou humanizado). Em um aspecto particular, são fornecidos no presente documento métodos para a produção de um anticorpo no presente documento descrito, compreendendo expressar tal anticorpo a partir de uma célula hospedeira.

[919] Expressão recombinante de um anticorpo no presente documento descrito (por exemplo, um anticorpo de comprimento completo, cadeia pesada e/ou leve de um anticorpo, ou um anticorpo de cadeia única opcionalmente compreendendo uma porção de ligação a ligando no presente documento descrita) que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) geralmente envolve a construção de um vetor de expressão contendo um polinucleotídeo que codifica o anticorpo. Uma vez que um polinucleotídeo que codifica um anticorpo, um polipeptídeo (por exemplo, cadeia pesada e/ou leve) de um anticorpo, ou um fragmento do mesmo (por exemplo, regiões variáveis de cadeia pesada e/ou leve) no presente documento descrito foi obtido, o vetor para a produção do anticorpo pode ser produzido por tecnologia de DNA recombinante usando técnicas bem conhecidas na área. Portanto, métodos para preparar uma proteína por expressão de um polinucleotídeo contendo um anticorpo ou fragmento de anticorpo (por exemplo, cadeia leve ou cadeia pesada) que codifica a sequência de nucleotídeos são no presente documento descritos. Os métodos que são bem conhecidos pelos versados na técnica podem ser usados para construir vetores de expressão contendo sequências de codificação de anticorpo ou fragmento de anticorpo (por exemplo, cadeia leve ou cadeia pesada) e sinais de controle de transcrição e tradução apropriados. Esses métodos incluem, por exemplo, técnicas de DNA recombinante in vitro, técnicas sintéticas e recombinação genética in vivo. Também são fornecidos vetores replicáveis compreendendo uma sequência de nucleotídeos que codifica um anticorpo no presente documento descrito, um polipeptídeo (por exemplo, cadeia pesada ou leve) de um anticorpo, uma região variável de cadeia pesada ou leve de um anticorpo ou um fragmento deste, ou uma CDR de cadeia pesada ou leve, operacionalmente ligada a um promotor. Tais vetores podem, por exemplo, incluir a sequência de nucleotídeos que codifica a região constante da molécula de anticorpo (vide, por exemplo, Publicação Internacional Nos. WO 86/05807 e WO 89/01036; e Patente U.S. No.

5.122.464, que são no presente documento incorporadas por referência na sua totalidade) e as regiões variáveis do anticorpo podem ser clonadas em tal vetor para a expressão de um polipeptídeo inteiro (por exemplo, a cadeia pesada inteira ou a cadeia leve inteira), ou ambas as cadeias pesadas e leves inteiras.

[920] Um vetor de expressão pode ser transferido para uma célula (por exemplo, célula hospedeira) por técnicas convencionais e as células resultantes podem então ser cultivadas por técnicas convencionais para produzir um anticorpo no presente documento descrito ou um fragmento do mesmo.

Assim, são fornecidas no presente documento células hospedeiras contendo um polinucleotídeo que codifica um anticorpo no presente documento descrito ou fragmentos do mesmo, ou uma cadeia pesada ou leve dos mesmos, ou fragmentos dos mesmos, ou um anticorpo de cadeia única no presente documento descrito, operacionalmente ligado a um promotor para a expressão de tais sequências na célula hospedeira.

Em certas modalidades, para a expressão de anticorpos de cadeia dupla, os vetores que codificam ambas as cadeias pesada e leve, individualmente, podem ser coexpressos na célula hospedeira para a expressão de toda a molécula de imunoglobulina, conforme detalhado abaixo.

Em certas modalidades, uma célula hospedeira contém um vetor que compreende um polinucleotídeo que codifica a cadeia pesada e a cadeia leve de um anticorpo no presente documento descrito, ou um fragmento do mesmo.

Em modalidades específicas, uma célula hospedeira contém dois vetores diferentes, um primeiro vetor compreendendo um polinucleotídeo que codifica uma cadeia pesada ou uma região variável de cadeia pesada de um anticorpo no presente documento descrito, ou um fragmento do mesmo, e um segundo vetor que compreende um polinucleotídeo que codifica uma cadeia leve ou uma região variável de cadeia leve de um anticorpo no presente documento descrito, ou um fragmento do mesmo.

Em outras modalidades, uma primeira célula hospedeira compreende um primeiro vetor compreendendo um polinucleotídeo que codifica uma cadeia pesada ou uma região variável de cadeia pesada de um anticorpo no presente documento descrito, ou um fragmento do mesmo, e uma segunda célula hospedeira compreende um segundo vetor compreendendo um polinucleotídeo que codifica uma cadeia leve ou uma região variável de cadeia leve de um anticorpo no presente documento descrito. Em modalidades específicas, uma região variável de cadeia pesada/cadeia pesada expressa por uma primeira célula associada a uma região variável de cadeia leve/cadeia leve de uma segunda célula para formar um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) descrito no presente documento. Em certas modalidades, é fornecida no presente documento uma população de células hospedeiras compreendendo essa primeira célula hospedeira e essa segunda célula hospedeira.

[921] Em uma modalidade particular, é fornecida no presente documento uma população de vetores compreendendo um primeiro vetor compreendendo um polinucleotídeo que codifica uma região variável de cadeia leve/cadeia leve de um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, humano, de camundongo ou CD73 de cinomolgo) no presente documento descrito, e um segundo vetor compreendendo um polinucleotídeo que codifica uma região variável de cadeia pesada/cadeia pesada de um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo) no presente documento descrito.

[922] Uma variedade de sistemas de vetor de expressão de hospedeiro pode ser utilizada para expressar o anticorpo no presente documento descrito (vide, por exemplo, a Patente U.S. No. 5.807.715, que é no presente documento incorporada por referência na sua totalidade). Tais sistemas de expressão de hospedeiro representam veículos pelos quais as sequências de codificação de interesse podem ser produzidas e subsequentemente purificadas, mas também representam células que podem, quando transformadas ou transfectadas com as sequências de codificação de nucleotídeos apropriadas, expressar uma molécula de anticorpo no presente documento descrita in situ.

Estes incluem, mas não estão limitados a micro-organismos tais como bactérias (por exemplo, E. coli e B. subtilis) transformadas com, por exemplo, DNA bacteriófago recombinante, DNA de plasmídeo ou vetores de expressão de DNA de cosmídeo contendo sequências de codificação de anticorpos; levedura (por exemplo, Saccharomyces Pichia) transformada com, por exemplo, vetores de expressão de levedura recombinantes contendo sequências de codificação de anticorpos; sistemas de células de insetos infectados com, por exemplo, vetores de expressão de vírus recombinantes (por exemplo, baculovírus) contendo sequências de codificação de anticorpos; sistemas de células vegetais (por exemplo, algas verdes, como Chlamydomonas reinhardtii) infectadas com, por exemplo, vetores de expressão de vírus recombinantes (por exemplo, vírus do mosaico da couve-flor, CaMV; vírus do mosaico do tabaco, TMV) ou transformadas com, por exemplo, vetores de expressão de plasmídeo recombinante (por exemplo, Plasmídeo Ti) contendo sequências de codificação de anticorpos; ou sistemas de células de mamíferos (por exemplo, COS (por exemplo, células COS1 ou COS), CHO, BHK, MDCK, HEK-293, NSO0, PER.C6, VERO, CRL7030, HsS78Bst, HeLa, e NIH 313, HEK-293T, HepG2, SP210, RI. 1, BW, LM, BSC1, BSCA40, YB/20 e BMT10) que abrigam, por exemplo, construtos de expressão recombinante contendo promotores derivados do genoma de células de mamíferos (por exemplo, promotor de metalotioneína) ou de vírus de mamíferos (por exemplo, o promotor tardio de adenovírus; o Promotor vírus vaccinia 7.5K). Em uma modalidade específica, as células para expressar os anticorpos no presente documento descritos são células de ovário de hamster chinês (CHO), por exemplo, células CHO do CHO GS System'" (Lonza). Em certas modalidades, um polipeptídeo (por exemplo, a cadeia pesada e/ou cadeia leve) de um anticorpo produzido por uma célula CHO pode ter uma glutamina N-terminal ou resíduo de glutamato substituído por piroglutamato. Em uma modalidade particular, as células para expressar anticorpos no presente documento descritos são células humanas, por exemplo, linhagens celulares humanas. Em uma modalidade específica, um vetor de expressão de mamífero é pOPptivECTY ou pcDNA3.3. Em uma modalidade particular, células bacterianas, como Escherichia coli, ou células eucarióticas (por exemplo, células de mamíferos), especialmente para a expressão de anticorpo recombinante total, são usadas para a expressão de um anticorpo recombinante. Por exemplo, células de mamíferos, como células CHO, em conjunto com um vetor, como o principal elemento promotor de gene inicial intermediário de citomegalovírus humano, é um sistema de expressão eficaz para anticorpos (Foecking MK & Hofstetter H (1986) Gene 45: 101-5; e Cockett MI et a/., (1990) Biotechnology 8 (7): 662-7, cada um dos quais é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade). Em certas modalidades, os anticorpos no presente documento descritos são produzidos por células CHO ou células NS0. Em uma modalidade específica, a expressão de sequências de nucleotídeos que codificam os anticorpos no presente documento descritos que se ligam especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) são reguladas por um promotor constitutivo, promotor induzível ou promotor específico de tecido.

[923] Em sistemas bacterianos, uma série de vetores de expressão podem ser vantajosamente selecionados dependendo do uso pretendido para o anticorpo a ser expresso. Por exemplo, quando uma grande quantidade de tal anticorpo deve ser produzida, para a geração de composições farmacêuticas de um anticorpo, vetores que direcionam a expressão de altos níveis de produtos de proteína de fusão que são prontamente purificados podem ser desejáveis. Esses vetores incluem, mas não estão limitados a, o vetor de expressão de E. coli pUR278 (Ruether U & Mueller-Hill B (1983) EMBO J 2: 1791-1794), em que a sequência de codificação do anticorpo pode ser ligada individualmente ao vetor em quadro com a região de codificação lac Z de modo que uma proteína de fusão seja produzida; vetores plN (Inouye S & Inouye M (1985) Nuc Acids Res 13: 3101-3109; Van Heeke G & Schuster SM (1989) J Biol Chem 24: 5503-5509); e similares, todos no presente documento incorporados por referência na sua totalidade. Por exemplo, os vetores pGEX também podem ser usados para expressar polipeptídeos estranhos como proteínas de fusão com glutationa 5- transferase (GST). Em geral, tais proteínas de fusão são solúveis e podem ser facilmente purificadas a partir de células lisadas por adsorção e ligação à esferas de agarose glutadiona de matriz seguida de eluição na presença de glutationa livre. Os vetores pGEX são concebidos para incluir trombina ou sítios de clivagem da protease do fator Xa de modo que o produto do gene alvo clonado possa ser liberado da porção GST.

[924] Em um sistema de inseto, o vírus da poliedrose nuclear Autographa californica (ACNPV), por exemplo, pode ser usado como um vetor para expressar genes estranhos. O vírus cresce em células de Spodoptera frugiperda. A sequência de codificação do anticorpo pode ser clonada individualmente em regiões não essenciais (por exemplo, o gene da poliedrina) do vírus e colocada sob o controle de um promotor ACNPV (por exemplo, o promotor poliedrina).

[925] Em células hospedeiras de mamíferos, uma série de sistemas de expressão baseados em vírus pode ser utilizada. Nos casos em que um adenovírus é usado como um vetor de expressão, a sequência de codificação do anticorpo de interesse pode ser ligada a um complexo de controle de transcrição/tradução de adenovírus, por exemplo, o promotor tardio e a sequência líder tripartida. Este gene quimérico pode então ser inserido no genoma do adenovírus por recombinação in vitro ou in vivo. A inserção em uma região não essencial do genoma viral (por exemplo, região E1 ou E3) resultará em um vírus recombinante que é viável e capaz de expressar o anticorpo em hospedeiros infectados (por exemplo, vide Logan J & Shenk T (1984) PNAS 81 (12): 3655-9, que é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade). Os sinais de iniciação específicos também podem ser necessários para a tradução eficiente das sequências de codificação do anticorpo inseridas. Esses sinais incluem o códon de iniciação ATG e sequências adjacentes. Além disso, o codão de iniciação deve estar em fase com o quadro de leitura da sequência de codificação desejada para assegurar a tradução de toda a inserção. Estes sinais de controle de tradução exógenos e códons de iniciação podem ser de uma variedade de origens, naturais e sintéticas. A eficiência da expressão pode ser aumentada pela inclusão de elementos potenciadores de transcrição apropriados, terminadores de transcrição, etc. (vide, por exemplo, Bitter G et al., (1987) Methods Enzymol. 153: 516-544, que é no presente documento incorporado por referência em sua totalidade).

[926] Além disso, pode ser escolhida uma cepa de célula hospedeira que modula a expressão das sequências inseridas ou modifica e processa o produto do gene da maneira específica desejada. Essas modificações (por exemplo, glicosilação) e processamento (por exemplo, clivagem) de produtos proteicos podem ser importantes para a função da proteína. Diferentes células hospedeiras têm mecanismos característicos e específicos para o processamento pós-tradução e modificação de proteínas e produtos gênicos. Linhagens celulares ou sistemas hospedeiros apropriados podem ser escolhidos para garantir a modificação e processamento corretos da proteína estranha expressa. Para este fim, podem ser utilizadas células hospedeiras eucarióticas que possuem a maquinaria celular para o processamento adequado do transcrito primário, glicosilação e fosforilação do produto do gene. Essas células hospedeiras de mamífero incluem, mas não estão limitadas a células CHO, VERO, BHK, Hela, MDCK, HEK-293, NIH 313, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT20 e T47D, NSO (uma linhagem celular de mieloma murino que não endogenamente produz quaisquer cadeias de imunoglobulina), CRL7030, COS (por exemplo, COS1 ou COS), PER.C6, VERO, HsS78Bst, HEK-293T, HepG2, SP210, RI.l, BW, LM, BSC1, BSC40, YB/20, BMT10 e HsS78Bst. Em certas modalidades, os anticorpos anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) no presente documento descritos são produzidos em células de mamíferos, como células CHO.

[927] Em uma modalidade específica, os anticorpos no presente documento descritos têm teor de fucose reduzido ou nenhum teor de fucose. Esses anticorpos podem ser produzidos usando técnicas conhecidas por um especialista na técnica. Por exemplo, os anticorpos podem ser expressos em células deficientes ou sem a capacidade de fucosilar. Em um exemplo específico, as linhagens celulares com um knockout de ambos os alelos de A1, 6-fucosiltransferase podem ser usadas para produzir anticorpos com conteúdo de fucose reduzido. O sistema Potelligent& (Lonza) é um exemplo desse sistema que pode ser usado para produzir anticorpos com reduzido teor de fucose.

[928] Para a produção de longo prazo e alto rendimento de proteínas recombinantes, células de expressão estável podem ser geradas. Por exemplo, as linhagens celulares que expressam de forma estável um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) no presente documento descrito podem ser projetadas. Em modalidades específicas, uma célula no presente documento fornecida expressa de forma estável uma região variável de cadeia leve/cadeia leve e uma região variável de cadeia pesada/cadeia pesada que se associam para formar um anticorpo descrito no presente documento, opcionalmente, em que pelo menos uma da região variável de cadeia leve/cadeia leve e a região variável de cadeia pesada/cadeia pesada está ligada a uma porção de ligação a ligando.

[929] Em certos aspectos, em vez de usar vetores de expressão que contêm origens virais de replicação, as células hospedeiras podem ser transformadas com DNA controlado por elementos de controle de expressão apropriados (por exemplo, promotor, intensificador, sequências, terminadores de transcrição, sítios de poliadenilação, etc.) e um marcador selecionável. Após a introdução do DNA/polinucleotídeo estranho, as células modificadas podem crescer por 1-2 dias em um meio enriquecido e, em seguida, são trocadas por um meio seletivo. O marcador selecionável no plasmídeo recombinante confere resistência à seleção e permite que as células integrem de forma estável o plasmídeo em seus cromossomos e cresçam para formar focos que, por sua vez, podem ser clonados e expandidos em linhagens celulares. Este método pode ser vantajosamente usado para manipular linhagens celulares que expressam um anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) no presente documento descrito ou um fragmento do mesmo. Essas linhagens celulares manipuladas podem ser particularmente úteis na triagem e avaliação de composições que interagem direta ou indiretamente com a molécula de anticorpo.

[930] Uma série de sistemas de seleção pode ser usada, incluindo, mas não se limitando à timidina quinase do vírus herpes simplex (Wigler M et al, (1977) Cell 11 (1): 223-32), hipoxantineguanina fosforibosiltransferase (Szybalska EH & Szybalski W (1962) PNAS 48 (12): 2026-2034) e adenina fosforibosiltransferase (Lowy | et a/l., (1980) Cell 22 (3): 817-23) genes em células tk-., hgprt- ou aprt, respectivamente, todos os quais são no presente documento incorporados por referência em sua totalidade. Além disso, a resistência a antimetabólitos pode ser usada como base de seleção para os seguintes genes: dhfr, que confere resistência ao metotrexato (Wigler M et al., (1980) PNAS 77 (6): 3567-70; O'Hare K et a/., (1981) PNAS 78: 1527-31); gpt, que confere resistência ao ácido micofenólico (Mulligan RC & Berg P (1981) PNAS 78 (4): 2072-6); neo, que confere resistência ao aminoglicosídeo G-418 (Wu GY & Wu CH (1991) Biotherapy 3: 87- 95; Tolstoshev P (1993) Ann Rev Pharmacol Toxicol 32: 573-596; Mulligan RC (1993) Science 260: 926-932; e Morgan RA & Anderson WF (1993) Ann Rev Biochem 62: 191-217; Nabel GJ & FelgnerPL (1993) Trends Biotechnol 11 (5): 211-5); e hygro, que confere resistência à higromicina (Santerre RF et a/., (1984) Gene 30 (1-3): 147-56), todos os quais são no presente documento incorporados por referência na sua totalidade. Métodos comumente conhecidos na técnica de tecnologia de DNA recombinante podem ser rotineiramente aplicados para selecionar o clone recombinante desejado e tais métodos são descritos, por exemplo, em Ausubel FM et a/., (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler M, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); e nos capítulos 12 e 13, Dracopoli NC et al., (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); Colbere-Garapin F et al., (1981) J Mol Biol 150: 1-14, todos no presente documento incorporados por referência na sua totalidade.

[931] Os níveis de expressão de um anticorpo podem ser aumentados por amplificação de vetor (para uma revisão, vide Bebbington CR & Hentschel CCG, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3 (Academic Press, New York, 1987), que é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade). Quando um marcador no sistema de vetor que expressa o anticorpo é amplificável, o aumento no nível do inibidor presente na cultura da célula hospedeira aumentará o número de cópias do gene marcador. Uma vez que a região amplificada está associada ao gene do anticorpo, a produção do anticorpo também aumentará (Crouse GF et a/., (1983) Mol Cell Biol 3: 257-66, que é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade).

[932] A célula hospedeira pode ser cotransfectada com dois ou mais vetores de expressão no presente documento descritos, o primeiro vetor que codifica um polipeptídeo derivado de cadeia pesada e o segundo vetor que codifica um polipeptídeo derivado de cadeia leve. Os dois vetores podem conter marcadores selecionáveis idênticos que permitem a expressão igual de polipeptídeos derivados de cadeia pesada e leve. As células hospedeiras podem ser cotransfectadas com diferentes quantidades de dois ou mais vetores de expressão. Por exemplo, as células hospedeiras podem ser transfectadas com qualquer uma das seguintes razões de um primeiro vetor de expressão e um segundo vetor de expressão: cerca de 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:12, 1:15, 1:20, 1:25, 1:25, 1:30, 1:35, 1:40, 1:45, ou 1:50.

[933] Alternativamente, um único vetor pode ser usado que codifica, e é capaz de expressar, polipeptídeos de cadeia pesada e leve. Em tais situações, a cadeia leve deve ser colocada antes da cadeia pesada para evitar um excesso de cadeia pesada livre tóxica (Proudfoot NJ (1986) Nature 322: 562-565; e Kóhler G (1980) PNAS 77: 2197-2199, cada um dos quais é no presente documento incorporado por referência em sua totalidade). As sequências de codificação para as cadeias pesada e leve podem compreender cDNA ou DNA genômico. O vetor de expressão pode ser monocistrônico ou multicistrônico. Um construto de ácido nucleico multicistrônico pode codificar 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8,9, 10 ou mais genes/sequências de nucleotídeos, ou na faixa de 2-5, 5-10 ou 10-20 genes/sequências de nucleotídeos. Por exemplo, um construto de ácido nucleico bicistrônico pode compreender, na seguinte ordem, um promotor, um primeiro gene (por exemplo, cadeia pesada de um anticorpo opcionalmente ligado a uma porção de ligação a ligando como no presente documento descrito), e um segundo gene e (por exemplo, cadeia leve de um anticorpo opcionalmente ligado a uma porção de ligação a ligando como no presente documento descrito). Em tal vetor de expressão, a transcrição de ambos os genes pode ser conduzida pelo promotor, enquanto a tradução do mMRNA do primeiro gene pode ser por um mecanismo de varredura dependente de cap e a tradução do mRNA do segundo gene pode ser por um mecanismo independente de cap, por exemplo, por um IRES.

[934] Uma vez que um anticorpo no presente documento descrito foi produzido por expressão recombinante, ele pode ser purificado por qualquer método conhecido na técnica para purificação de uma molécula de imunoglobulina, por exemplo, por cromatografia (por exemplo, troca iônica, afinidade, particularmente por afinidade para o antígeno específico após a proteína A, e cromatografia de coluna de dimensionamento), centrifugação, solubilidade diferencial ou por qualquer outra técnica padrão para a purificação de proteínas. Além disso, os anticorpos descritos neste documento podem ser fundidos a sequências polipeptídicas heterólogas no presente documento descritas ou de outra forma conhecidas na área para facilitar a purificação.

[935] Em modalidades específicas, um anticorpo no presente documento descrito é isolado ou purificado. Geralmente, um anticorpo isolado é aquele que está substancialmente livre de outros anticorpos com diferentes especificidades antigênicas do que o anticorpo isolado. Por exemplo, em uma modalidade particular, uma preparação de um anticorpo no presente documento descrito é substancialmente livre de material! celular e/ou precursores químicos. A linguagem "substancialmente livre de material celular" inclui preparações de um anticorpo em que o anticorpo é separado dos componentes celulares das células das quais é isolado ou produzido de forma recombinante. Assim, um anticorpo que é substancialmente livre de material celular inclui preparações de anticorpo com menos de cerca de 30%, 20%, 10%, 5%, 2%, 1%, 0,5% ou 0,1% (em peso seco) de proteína heteróloga (também referida no presente documento como uma "proteína contaminante") e/ou variantes de um anticorpo, por exemplo, diferentes formas modificadas pós-tradução de um anticorpo ou outras versões diferentes de um anticorpo (por exemplo, fragmentos de anticorpos). Quando o anticorpo é produzido de forma recombinante, também é geralmente substancialmente livre de meio de cultura, ou seja, o meio de cultura representa menos do que cerca de 20%, 10%, 2%, 1%, 0,5% ou 0,1% do volume da preparação de proteína. Quando o anticorpo é produzido por síntese química, geralmente é substancialmente livre de precursores químicos ou outros produtos químicos, isto é, é separado dos precursores químicos ou outros produtos químicos que estão envolvidos na síntese da proteína. Consequentemente, tais preparações do anticorpo têm menos do que cerca de 30%, 20%, 10%, ou 5% (em peso seco) de precursores químicos ou compostos diferentes do anticorpo de interesse. Em uma modalidade específica, os anticorpos no presente documento descritos são isolados ou purificados.

[936] Os anticorpos ou fragmentos dos mesmos que se ligam especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) podem ser produzidos por qualquer método conhecido na técnica para a síntese de anticorpos, por exemplo, por síntese química ou por técnicas de expressão recombinante. Os métodos no presente documento descritos usam, a menos que indicado de outra forma, técnicas convencionais em biologia molecular, microbiologia, análise genética, DNA recombinante, química orgânica, bioquímica,

PCR, síntese e modificação de oligonucleotídeos, hibridização de ácido nucleico e campos relacionados dentro da habilidade da técnica. Essas técnicas são descritas, por exemplo, nas referências no presente documento citadas e são totalmente explicadas na literatura. Vide, por exemplo, Maniatis T et al/., (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al, (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda Edição, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et a/., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel FM et a/., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 e atualizações anuais); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 e atualizações anuais) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: À Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren B et al., (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, todos no presente documento incorporados por referência na sua totalidade.

[937] Em uma modalidade específica, um anticorpo no presente documento descrito é um anticorpo (por exemplo, anticorpo recombinante) preparado, expresso, criado ou isolado por qualquer meio que envolve a criação, por exemplo, via síntese, engenharia genética de sequências de DNA. Em certas modalidades, tal anticorpo compreende sequências (por exemplo, sequências de DNA ou sequências de aminoácidos) que não existem naturalmente dentro do repertório de germes de anticorpos de um animal ou mamífero (por exemplo, humano) in vivo.

[938] Em um aspecto, é fornecido no presente documento um método de produção de um anticorpo que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos)

compreendendo cultivar uma célula ou célula hospedeira no presente documento descrita. Em uma modalidade, o método é realizado in vitro. Em um determinado aspecto, é fornecido no presente documento um método de produção de um anticorpo que se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo) compreendendo a expressão (por exemplo, expressão recombinante) do anticorpo usando uma célula ou célula hospedeira no presente documento descrita (por exemplo, uma célula ou uma célula hospedeira compreendendo polinucleotídeos que codificam um anticorpo no presente documento descrito). Em uma modalidade particular, a célula é uma célula isolada. Em uma modalidade particular, os polinucleotídeos exógenos foram introduzidos na célula. Em uma modalidade particular, o método adicionalmente compreende a etapa de purificar o anticorpo obtido da célula ou cpelula hospedeira.

[939] Métodos para a produção de anticorpos policlonais são conhecidos na técnica (vide, por exemplo, Capítulo 11 em: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5º Ed., Ausubel FM et a/., eds., John Wiley and Sons, New York, que é no presente documento incorporado por referência em sua totalidade).

[940] Os anticorpos monoclonais podem ser preparados usando uma ampla variedade de técnicas conhecidas na área, incluindo o uso de tecnologias de hibridoma, recombinante e de exibição de fago, ou uma combinação das mesmas. Por exemplo, os anticorpos monoclonais podem ser produzidos utilizando técnicas de hibridoma incluindo aquelas conhecidas na área e ensinadas, por exemplo, em Harlow E & Lane D, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2º ed. 1988); Hammerling GJ et al., em: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681 (Elsevier, NY, 1981), cada um dos quais é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade. O termo "anticorpo monoclonal", conforme usado neste documento, não está limitado a anticorpos produzidos por meio de tecnologia de hibridoma. Por exemplo, anticorpos monoclonais podem ser produzidos de forma recombinante a partir de células hospedeiras que expressam exogenamente um polipeptídeo de um anticorpo no presente documento descrito ou um fragmento do mesmo, por exemplo, cadeia leve e/ou cadeia pesada de tal anticorpo.

[941] Em modalidades específicas, um "anticorpo monoclonal", tal como no presente documento utilizado, é um anticorpo produzido por uma única célula (por exemplo, hibridoma ou célula hospedeira que produz um anticorpo recombinante), em que o anticorpo se liga especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) conforme determinado, por exemplo, por ELISA ou outro ensaio de ligação ao antígeno ou competitivo conhecido na técnica ou nos exemplos no presente documento fornecidos. Em modalidades particulares, um anticorpo monoclonal pode ser um anticorpo quimérico ou um anticorpo humanizado. Em certas modalidades, um anticorpo monoclonal é um anticorpo monovalente ou multivalente (por exemplo, bivalente). Em modalidades particulares, um anticorpo monoclonal é um anticorpo monoespecífico ou multiespecífico (por exemplo, anticorpo biespecífico). Os anticorpos monoclonais no presente documento descritos podem, por exemplo, ser feitos pelo método de hibridoma, conforme descrito em Kohler G & Milstein C (1975) Nature 256: 495, que é no presente documento incorporado por referência em sua totalidade, ou podem, por exemplo, ser isolados de bibliotecas de fago usando as técnicas no presente documento descritas, para exemplo. Outros métodos para a preparação de linhagens celulares clonais e de anticorpos monoclonais assim expressos são bem conhecidos na técnica (vide, por exemplo, Capítulo 11 em: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5º Ed., Ausubel FM et a/., supra).

[942] Tal como no presente documento utilizado, um anticorpo se liga a um antígeno multivalentemente (por exemplo, bivalentemente) quando o anticorpo compreende pelo menos dois (por exemplo, dois ou mais) domínios de ligação monovalente, cada domínio de ligação monovalente capaz de se ligar a um epítopo no antígeno. Cada domínio de ligação monovalente pode se ligar ao mesmo ou a diferentes epítopos no antígeno.

[943] Métodos para produzir e rastrear anticorpos específicos usando tecnologia de hibridoma são rotineiros e bem conhecidos na técnica. Por exemplo, no método de hibridoma, um camundongo ou outro animal hospedeiro apropriado, como uma ovelha, cabra, coelho, rato, hamster ou macaco macaque, é imunizado para induzir linfócitos que produzem ou são capazes de produzir anticorpos que se ligarão especificamente à proteína (por exemplo, CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) usada para imunização. Alternativamente, os linfócitos podem ser imunizados in vitro. Os linfócitos são então fundidos com células de mieloma usando um agente de fusão adequado, como polietilenoglicol, para formar uma célula de hibridoma (Goding JW (Ed), Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986), no presente documento incorporado por referência na sua totalidade). Além disso, uma técnica RIMMS (múltiplos sítios de imunização repetitiva) pode ser usada para imunizar um animal (Kilpatrick KE el A1, (1997) Hybridoma 16: 381-9, no presente documento incorporado por referência na sua totalidade).

[944] Em certas modalidades, os camundongos (ou outros animais, como ratos, macacos, burros, porcos, ovelhas, hamster ou cães) podem ser imunizados com um antígeno (por exemplo, CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos)) e uma vez que uma resposta imune é detectada, por exemplo, anticorpos específicos para o antígeno são detectados no soro do camundongo, o baço do camundongo é colhido e os esplenócitos isolados. Os esplenócitos são então fundidos por meio de técnicas bem conhecidas para quaisquer células de mieloma adequadas, por exemplo, células de linhagem celular de SP20, disponíveis a partir da American Type Culture Collection (ATCC &) (Manassas, VA), para formar hibridomas. Os hibridomas são selecionados e clonados por diluição limitada. Em certas modalidades, os nódulos linfáticos dos camundongos imunizados são colhidos e fundidos com células de mieloma NSO.

[945] As células de hibridoma assim preparadas são semeadas e cultivadas em um meio de cultura adequado que, preferivelmente, contém uma ou mais substâncias que inibem o crescimento ou a sobrevivência das células de mieloma parentais não fundidas. Por exemplo, se as células de mieloma parentais carecem da enzima hipoxantina guanina fosforibosil transferase (HGPRT ou HPRT), o meio de cultura para os hibridomas normalmente incluirá hipoxantina, aminopterina e timidina (meio HAT), cujas substâncias impedem o crescimento de células deficientes em HGPRT.

[946] Modalidades específicas usam células de mieloma que se fundem de forma eficiente, suportam a produção estável de alto nível de anticorpos pelas células produtoras de anticorpos selecionadas e são sensíveis a um meio como o meio HAT. Entre essas linhagens celulares de mieloma estão as linhagens de mieloma murino, como a linhagem celular NSO ou aquelas derivadas de tumores de camundongo MOPC- 21 e MPC-11 disponíveis no Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, CA, EUA, e células SP-2 ou X63-Ag8.653 disponíveis na American Type Culture Collection, Rockville, MD, EUA. As linhagens celulares de mieloma humano e de heteromieloma de camundongo- humano também foram descritas para a produção de anticorpos monoclonais humanos (Kozbor D (1984) J Immunol 133: 3001-5; Brodeur et al. Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., Nova York, 1987), cada um dos quais no presente documento incorporado por referência na sua totalidade.

[947] O meio de cultura no qual as células de hibridoma estão crescendo é testado para a produção de anticorpos monocionais dirigidos contra CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos). A especificidade de ligação de anticorpos monoclionais produzidos por células de hibridoma é determinada por métodos conhecidos na técnica, por exemplo, imunoprecipitação ou por um ensaio de ligação in vitro, tal como radioimunoensaio (RIA) ou ensaio imunoabsorvente ligado à enzima (ELISA).

[948] Após as células de hibridoma serem identificadas que produzem anticorpos com a especificidade, afinidade e/ou atividade desejadas, os clones podem ser subclonados por procedimentos de diluição limitante e cultivados por métodos padrão (Goding JW (Ed), Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, supra). Os meios de cultura adequados para este fim incluem, por exemplo, meio D-MEM ou RPMI 1640. Além disso, as células de hibridoma podem ser cultivadas in vivo como tumores de ascite em um animal.

[949] Os anticorpos monoclonais secretados pelos subclones são adequadamente separados do meio de cultura, fluido ascítico ou soro por procedimentos convencionais de purificação de imunoglobulina, tais como, por exemplo, proteína A-Sepharose, cromatografia de hidroxilapatita, eletroforese em gel, diálise ou cromatografia de afinidade.

[950] Os anticorpos no presente documento descritos incluem, por exemplo, fragmentos de anticorpos que reconhecem um CD73 específico (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) e que podem ser gerados por qualquer técnica conhecida pelos versados na técnica. Por exemplo, os fragmentos Fab e F(ab')2 no presente documento descritos podem ser produzidos por clivagem proteolítica de moléculas de imunoglobulina, usando enzimas como papaína (para produzir fragmentos Fab) ou pepsina (para produzir fragmentos F(ab')). Um fragmento Fab corresponde a um dos dois braços idênticos de um anticorpo e contém a cadeia leve completa emparelhada com os domínios VH e CH1 da cadeia pesada. Um fragmento F(ab'), contém os dois braços de ligação ao antígeno de uma molécula de anticorpo ligada por ligações dissulfeto na região da dobradiça.

[951] Além disso, os anticorpos descritos neste documento também podem ser gerados usando vários métodos de exibição de fago conhecidos na técnica. Em métodos de exibição de fago, domínios de anticorpo funcionais são exibidos na superfície de partículas de fago que carregam as sequências de polinucleotídeo que as codificam. Em particular, as sequências de DNA que codificam os domínios VH e VL são amplificadas a partir de bibliotecas de cDNA de animais (por exemplo, bibliotecas de CDNA humano ou murino de tecidos afetados). O DNA que codifica os domínios VH e VL é recombinado juntamente com um ligante scFv por PCR e clonado em um vetor fagemídeo. O vetor é eletroporado em E. colie o E. coli é infectado com fago auxiliar. Os fagos usados nestes métodos são tipicamente fagos filamentosos incluindo fd e M13, e os domínios VH e VL são geralmente fundidos de forma recombinante com o gene Ill ou o gene VIII do fago. O fago que expressa um domínio de ligação ao antígeno que se liga a um antígeno particular pode ser selecionado ou identificado com o antígeno, por exemplo, usando antígeno marcado ou ligado ao antígeno ou capturado em uma superfície sólida ou esfera. Exemplos de métodos de exibição de fago que podem ser usados para fazer os anticorpos no presente documento descritos incluem aqueles descritos em Brinkman U et al,, (1995) J Immunol Methods 182: 41-50; Ames RS et a/., (1995) J Immunol Methods 184: 177-186; Kettleborough CA et a/l., (1994) Eur J

Immunol 24: 952-958; Persic L et al/., (1997) Gene 187: 9-18; Burton DR e Barbas CF (1994) Advan Immunol 57: 191-280; Pedido PCT No. PCT/GB91/001134; Publicações Internacionais Nos. WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/1 1236, WO 95/15982, WO 95/20401 e WO 97/13844; e Patentes U.S. Nos. 5.698.426,

5.223.409, 5.403.484, 5.580.717, 5.427.908, 5.750.753, 5.821.047,

5.571.698, 5.427.908, 5.516.637, 5.780.225, 5.658.727, 5.733.743 e

5.969.108, todas as quais são no presente documento incorporadas por referência.

[952] Além disso, os anticorpos descritos neste documento também podem ser gerados usando métodos de imunização específicos, sozinhos ou em combinação com tecnologias de exibição de fago, conforme conhecido na técnica. Por exemplo, a imunização com DNA foi relatada recentemente como uma estratégia eficiente de vacinação. Vide Bolhassani e Yazdi (2009) Avicenna J Med Biotechnol. 1: 71-88, Liu et al. (2016) Emerg Microbes Infect. 5: e33 e van der Woning et al. (2016) MAbs. 8: 1126-1135, cada um dos quais é incorporado neste documento por referência em sua totalidade. À imunização de animais com DNA que codifica uma proteína de interesse pode ser realizada usando métodos similares à imunização animal tradicional usando a própria proteína e pode incluir imunização inicial similar e etapas de reforço. Após a imunização de DNA, as células de hibridoma podem ser preparadas. Alternativa ou adicionalmente, as moléculas de ácido nucleico (por exemplo, RNAs) podem ser isoladas de tecidos (por exemplo, baço) do animal imunizado para gerar uma biblioteca de exibição de fase para seleção e triagem de anticorpos.

[953] Conforme descrito nas referências acima, após a seleção do fago, as regiões de codificação do anticorpo do fago podem ser isoladas e usadas para gerar anticorpos inteiros, incluindos anticorpos humanos, ou qualquer outro fragmento de ligação ao antígeno desejado, e expresso em qualquer hospedeiro desejado, incluindo células de mamíferos, células de insetos, células de plantas, leveduras e bactérias, por exemplo, conforme descrito abaixo. Técnicas para produzir fragmentos de anticorpo de forma recombinante, tais como fragmentos Fab, Fab' e F(ab')) também podem ser usues usando métodos conhecidos na técnica, tais como aqueles descritos na publicação PCT No. WO 92/22324; Mullinax RL et a/., (1992) BioTechniques 12 (6): 864- 9; Sawai H et a/., (1995) Am J Reprod Immunol 34: 26-34; e Better M et al., (1988) Science 240: 1041-1043, todos os quais são no presente documento incorporados por referência na sua totalidade.

[954] Em certas modalidades, para gerar anticorpos inteiros, iniciadores de PCR incluindo sequências de nucleotídeos VH ou VL, um sítio de restrição e uma sequência de flanqueamento para proteger o sítio de restrição podem ser usados para amplificar as sequências de VH ou VL a partir de um modelo, por exemplo, clones scFv. Utilizando técnicas de clonagem conhecidas pelos versados na técnica, os domínios VH amplificados por PCR podem ser clonados em vetores que expressam uma região constante VH, e os domínios VL amplificados por PCR podem ser clonados em vetores que expressam uma região constante VL, por exemplo, regiões constantes kappa ou lambda humanas. Os domínios VH e VL também podem ser clonados em um vetor que expressa as regiões constantes necessárias. Os vetores de conversão de cadeia pesada e os vetores de conversão de cadeia leve são então cotransfectados em linhagens celulares para gerar linhagens celulares estáveis ou transitórias que expressam anticorpos de comprimento completo, por exemplo, IgG, usando técnicas conhecidas pelos versados na técnica.

[955] Um anticorpo quimérico é uma molécula na qual diferentes porções do anticorpo são derivadas de diferentes moléculas de imunoglobulina. Por exemplo, um anticorpo quimérico pode conter uma região variável de um anticorpo monoclonal de camundongo ou rato fundido a uma região constante de um anticorpo humano. Os métodos para a produção de anticorpos quiméricos são conhecidos na técnica. Vide, por exemplo, Morrison SL (1985) Science 229: 1202-7; Oi VT & Morrison SL (1986) BioTechniques 4: 214-221; Gillies SD et a/., (1989) J Immunol Methods 125: 191-202; e Patentes U.S. Nos. 5.807.715,

4.816.567, 4.816.397 e 6.331.415, todas as quais são no presente documento incorporadas por referência na sua totalidade.

[956] Um anticorpo humanizado é capaz de se ligar a um antígeno predeterminado e que compreende uma região estrutural tendo substancialmente a sequência de aminoácidos de uma imunoglobulina humana e CDRs tendo substancialmente a sequência de aminoácidos de uma imunoglobulina não humana (por exemplo, uma imunoglobulina de murino). Em modalidades particulares, um anticorpo humanizado também compreende pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente aquela de uma imunoglobulina humana. O anticorpo também pode incluir as regiões CH1, dobradiça, CH2, CH3 e CH4 da cadeia pesada. Um anticorpo humanizado pode ser selecionado a partir de qualquer classe de imunoglobulinas, incluindo IgM, IgG, IgD, IgA e IgE, e qualquer isótipo, incluindo I9G1, IgG2, IgG3 e IgG4. Os anticorpos humanizados podem ser produzidos usando uma variedade de técnicas conhecidas na área, incluindo, mas não se limitando a, enxerto de CDR (Patente Europeia No. EP 239400; Publicação Internacional No. WO 91/09967; e Patentes U.S. No.

5.225.539, 5.530.101, e 5.585.089), estratificação ou recapeamento (European Patent No. EP 239400; International Publication No. WO 91/09967; and Patente U.S. Nos. 5,225,539, 5,530,101, and 5,585,089), veneering or resurfacing (Patente Europeia Nos. EP 592106 e EP 519596; Padlan EA (1991) Mol Immunol 28(4/5): 489-498; Studnicka GM et al., (1994) Prot Engineering 7(6): 805-814; e Roguska MA et al.,

(1994) PNAS 91: 969-973), embaralhamento de cadeia shuffling (Patente U.S. No. 5,565,332), e técnicas descritas em, por exemplo, Pat. U.S. No. 6,407,213, Pat. U.S. No. 5,766,886, Publicação Internacional No. WO 93/17105; Tan P et a/., (2002) J Immunol 169: 1119-25; Caldas C et al., (2000) Protein Eng. 13(5): 353-60; Morea V et al., (2000) Methods 20(3): 267-79; Baca M et al., (1997) J Biol Chem 272(16): 10678-84; Roguska MA et a/., (1996) Protein Eng 9(10): 895 904; Couto JR et al., (1995) Cancer Res. 55 (23 Supp): 5973s-5977s; Couto JR et al., (1995) Cancer Res 55(8): 1717-22; Sandhu JS (1994) Gene 150(2): 409-10 e Pedersen JT et a/., (1994) J Mol Biol 235(3): 959-73, todos no presente documento incorporados por referência na sua totalidade. Vide também a Publicação de Pedido U.S. No. US 2005/0042664 A1 (24 de fevereiro de 2005), que é no presente documento incorporada por referência em sua totalidade.

[957] Métodos para preparar anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos) foram descritos, vide, por exemplo, Patentes U.S. Nos. 7.951.917; 7.183.076; 8.227.577; 5.837.242;

5.989.830; 5.869.620; 6.132.992 e 8.586.713, todas no presente documento incorporadas por referência em sua totalidade.

[958] Anticorpos de domínio único, por exemplo, anticorpos sem as cadeias leves, podem ser produzidos por métodos bem conhecidos na técnica. Vide Riechmann L & Muyldermans S (1999) J Immuno!l 231: 25-38; Nuttall SD et a/., (2000) Curr Pharm Biotechnol 1(3): 253-263; Muyldermans S, (2001) J Biotechnol 74 (4): 277-302; Patente U.S. No.

6.005.079; e Publicações Internacionais Nos. WO 94/04678, WO 94/25591 e WO 01/44301, todos no presente documento incorporados por referência na sua totalidade.

[959] Além disso, os anticorpos que se ligam especificamente a um antígeno de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) podem, por sua vez, ser utilizados para gerar anticorpos anti-idiotipo que "imitam" um antígeno usando técnicas bem conhecidas pelos versados na área. Vide, por exemplo, Greenspan NS & Bona CA (1989) FASEB J 7 (5): 437-444; e Nissinoff A (1991) J Immunol 147 (8): 2429-2438, cada um dos quais é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade.

[960] Em modalidades particulares, um anticorpo no presente documento descrito, que se liga ao mesmo epítopo de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) que um anticorpo anti-CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) no presente documento descrito, é um anticorpo humano. Em modalidades particulares, um anticorpo no presente documento descrito, que bloqueia competitivamente (por exemplo, de uma maneira dependente de dose) qualquer um dos anticorpos no presente documento descritos, de ligação a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos), é um anticorpo humano. Os anticorpos humanos podem ser produzidos usando qualquer método conhecido na técnica. Por exemplo, podem ser usados camundongos transgênicos que são incapazes de expressar imunoglobulinas endógenas funcionais, mas que podem expressar genes de imunoglobulinas humanas. Em particular, os complexos de genes de imunoglobulina de cadeia pesada e leve humana podem ser introduzidos aleatoriamente ou por recombinação homóloga em células-tronco embrionárias de camundongo. Alternativamente, a região variável humana, a região constante e a região de diversidade podem ser introduzidas em células- tronco embrionárias de camundongo, além dos genes de cadeia leve e pesada humana. Os genes de imunoglobulina de cadeia pesada e leve de camundongo podem ser tornados não funcionais separada ou simultaneamente com a introdução de loci de imunoglobulina humana por recombinação homóloga. Em particular, a deleção homozigótica da região Jr impede a produção de anticorpos endógenos. As células-

tronco embrionárias modificadas são expandidas e microinjetadas em blastocistos para produzir camundongos quiméricos. Os camundongos quiméricos são então criados para produzir descendentes homozigóticos que expressam anticorpos humanos. Os camundongos transgênicos são imunizados da maneira normal com um antígeno selecionado, por exemplo, todo ou uma parte de um antígeno (por exemplo, CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos)). Os anticorpos monoclionais dirigidos contra o antígeno podem ser obtidos a partir de camundongos transgênicos imunizados usando tecnologia de hibridoma convencional. Os transgenes de imunoglobulina humana abrigados pelos camundongos transgênicos se reorganizam — durante a diferenciação de células B e, subsequentemente, passam por troca de classe e mutação somática. Assim, usando tal técnica, é possível produzir anticorpos IgG, IgA, IgM e IgE terapeuticamente úteis. Para uma visão geral desta tecnologia para a produção de anticorpos humanos, vide Lonberg N & Huszar D (1995) Int Rev Immunol 13: 65-93, no presente documento incorporado por referência em sua totalidade. Para uma discussão detalhada desta tecnologia para a produção de anticorpos humanos e anticorpos monoclonais humanos e protocolos para a produção de tais anticorpos, vide, por exemplo, Publicação Internacional Nos. WO 98/24893, WO 96/34096 e WO 96/33735; e Patentes U.S. Nos. 5.413.923, 5.625.126,

5.633.425, 5.569.825, 5.661.016, 5.545.806, 5.814.318 e 5.939.598, todas as quais são no presente documento incorporadas por referência na sua totalidade. Exemplos de camundongos capazes de produzir anticorpos humanos incluem o Xenomouse'"“Y (Abgenix, Inc.; Patentes U.S. Nos. 6.075.181 e 6.150.184), o HuAb-Mouse'Y (Mederex, Inc./Gen Pharm; Patentes U.S. Nos. 5.545.806 e 5.569.825), o Trans Chromo Mouse'Y (Kirin) e o KM Mouse'"Y (Medarex/Kirin), todos no presente documento incorporados por referência em sua totalidade. Vide, por exemplo, Publicações Internacionais Nos. WO 98/24893, WO 96/34096 e WO 96/33735; e Patentes U.S. Nos. 5.413.923, 5.625.126, 5.633.425,

5.569.825, 5.661.016, 5.545.806, 5.814.318 e 5.939.598, todas as quais são no presente documento incorporadas por referência na sua totalidade.

[961] Anticorpos humanos que se ligam especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) podem ser feitos por uma variedade de métodos conhecidos na técnica, incluindo os métodos de exibição de fago descritos acima usando bibliotecas de anticorpos derivadas de sequências de imunoglobulina humana. Vide também Patentes U.S. Nos. 4,444,887, 4,716,111 e 5,885,793; e Publicações Internacionais Nos. WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 e WO 91/10741, todas as quais são no presente documento incorporadas por referência em sua totalidade.

[962] Em certas modalidades, os anticorpos humanos podem ser produzidos usando hibridomas camundongo-humano. Por exemplo, linfócitos de sangue periférico humano transformados com vírus Epstein-Barr (EBV) podem ser fundidos com células de mieloma de camundongo para produzir hibridomas camundongos-humanos que secretam anticorpos monoclonais humanos, e esses hibridomas camundongos-humanos podem ser rastreados para determinar aqueles que secretam anticorpos humanos monoclonais que se ligam especificamente a um antígeno alvo (por exemplo, CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos)). Tais métodos são conhecidos e são descritos na técnica, vide, por exemplo, Shinmoto H et al., (2004) Cytotechnology 46: 19-23; Naganawa Y et al., (2005) Human Antibodies 14: 27-31, cada um dos quais é no presente documento incorporado por referência na sua totalidade.

5.7 Kits

[963] Também são fornecidos kits compreendendo um ou mais anticorpos no presente documento descritos, ou composições farmacêuticas ou conjugados dos mesmos. Em uma modalidade específica, é fornecido no presente documento um pacote ou kit farmacêutico compreendendo um ou mais recipientes preenchidos com um ou mais dos ingredientes das composições farmacêuticas no presente documento descritas, como um ou mais anticorpos no presente documento fornecidos. Em certas modalidades, os kits contêm uma composição farmacêutica no presente documento descrita e qualquer agente profilático ou terapêutico, tal como aqueles no presente documento descritos. Em certas modalidades, os kits podem conter um mitógeno de células T, tais como, por exemplo, fito-nemaglutinina (PHA) e/ou acetato de miristato de forbol (PMA), ou um anticorpo estimulador do complexo TCR, como um anticorpo anti-CD3 e anticorpo anti-CD28. Opcionalmente, associado a tais recipientes pode ser um aviso na forma prescrita por uma agência governamental que regulamenta a fabricação, uso ou venda de produtos farmacêuticos ou biológicos, cujo aviso reflete a aprovação da agência de fabricação, uso ou venda para administração humana.

[964] Também são fornecidos kits que podem ser usados nos métodos acima. Em uma modalidade, um kit compreende um anticorpo no presente documento descrito, preferivelmente um anticorpo purificado, em um ou mais recipientes. Em uma modalidade específica, os kits no presente documento descritos contêm um antígeno de CD73 substancialmente isolado (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) como controle. Em outra modalidade específica, os kits no presente documento descritos adicionalmente compreendem um anticorpo de controle que não reage com um antígeno de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgo). Em outra modalidade específica, os kits no presente documento descritos contêm um ou mais elementos para detectar a ligação de um anticorpo a um antígeno de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) (por exemplo, o anticorpo pode ser conjugado a um substrato detectável, como um composto fluorescente, um substrato enzimático, um composto radioativo ou um composto luminescente, ou um segundo anticorpo que reconhece o primeiro anticorpo pode ser conjugado com um substrato detectável). Em modalidades específicas, um kit fornecido neste documento pode incluir um antígeno de CD73 produzido de forma recombinante ou sintetizado quimicamente (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos). O antígeno de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) fornecido no kit também pode ser anexado a um suporte sólido. Em uma modalidade mais específica, o meio de detecção do kit descrito acima inclui um suporte sólido ao qual um antígeno de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) está ligado. Tal um kit também pode incluir um anticorpo anti-humano marcado com repórter não ligado ou anticorpo anticamundongo/rato. Nesta modalidade, a ligação do anticorpo a antígeno de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo, ou cinomolgos) pode ser detectada por ligação do referido anticorpo marcado com repórter. Em uma modalidade, a presente invenção se refere ao uso de um kit da presente invenção para ensaio in vitro e/ou detecção do antígeno de CD73 (por exemplo, CD73 humana, de camundongo ou cinomolgos) em uma amostra biológica.

6. EXEMPLOS

[965] Os exemplos nesta seção (isto é, seção 6) são oferecidos a título de ilustração, e não como forma de limitação.

6.1. Exemplo 1: Caracterização de um anticorpo anti-CD73

[966] Este exemplo descreve a geração e caracterização de anticorpos que se ligam a CD73 (por exemplo, CD73 humana, CD73 de cinomolgos ou CD73 de camundongo). Em particular, este exemplo descreve — anticorpos murinos e quiméricos que se ligam especificamente a CD73 humana, inibem a atividade enzimática de CD73 humana e medeiam a internalização de CD73 humana após a ligação.

6.1.1 Geração de anticorpos anti-CD73

[967] Os anticorpos anti-CD73 foram identificados pela imunização de camundongos com proteina CD73 humana recombinante ou DNA que codifica CD73 humana, amplificando sequências de ácido nucleico (por exemplo, sequências de RNA ou DNA complementar) que codificam regiões variáveis de cadeia pesada e regiões variáveis de cadeia leve das células do baço B dos camundongos imunizados, montagem dessas sequências em vetores para formar uma biblioteca de exibição de fago proprietária e seleção de clones de fago que produziram anticorpos com afinidade de ligação para CD73 humana (Sequência de Referência NCBI: AAH65937, SEQ ID NO: 129, R&D Systems, 5795EN) Três anticorpos selecionados, designados BAO10, BAO11 e BAO12, foram ainda caracterizados. As sequências de aminoácidos da região variável de cadeia pesada e da região variável de cadeia leve de BAO01O0, BAO1I1 e BAO1I2 são apresentadas em SEQ ID NOs: 19 e 33; 20 e 34; e 21 e 35, respectivamente. As regiões constantes foram fundidas a essas regiões variáveis para formar os anticorpos no presente documento descritos. Por exemplo, o anticorpo murino BA012 compreende uma cadeia leve de Igk (SEQ ID NO: 92) e uma cadeia pesada de IgG2a com uma substituição N297A (SEQ ID NO: 64), numerada de acordo com o sistema de numeração EU.

[968] Anticorpos quiméricos foram produzidos enxertando as regiões variáveis das cadeias pesadas e leves de BAO010, BA01I1 e BAO012 na região constante de cadeia pesada de IgG1 humana com uma substituição N297A, numerada de acordo com o sistema de numeração

EU, e a região constante de cadeia leve de Ilgk humana, respectivamente. Os anticorpos quiméricos resultantes originários de BAO010, BAO11 e BAO1I2 são designados BAO13, BAO1I4 e BAO1S, conforme estabelecido em SEQ ID NOs: 65 e 94, 67 e 95, e 70 e 96, respectivamente, para suas cadeias pesadas e leves. Da mesma forma, outros anticorpos quiméricos foram produzidos enxertando as regiões variáveis das cadeias pesada e leve de BAO1I2 em várias regiões constantes humanas. Por exemplo, BA016, conforme estabelecido em SEQ ID NOs: 71 (cadeia pesada) e 96 (cadeia leve), compreende um domínio constante de IgG2 humana. BAO17, conforme estabelecido em SEQ ID NOs: 73 (cadeia pesada) e 96 (cadeia leve), compreende um domínio constante de híbrido IgG1-A330S-P33IS/I9G2 humano. BAO18, conforme estabelecido em SEQ ID NOs: 75 (cadeia pesada) e 96 (cadeia leve), compreende um domínio constante de híbrido I9G1- N297A/I9G2 humano.

6.1.2 Ligação de anticorpos anti-CD73 a CD73 recombinante

[969] A ressonância plasmônica de superfície (SPR) foi usada para determinar a afinidade de BAO13, BAO14 e BAO15 para CD73 recombinante usando o sistema BlIAcore& T200 (GE Healthcare). Especificamente, 2 ug/ml de anticorpos diluídos em um tampão de execução (10 mM de HEPES, 150 mM de NaCl, 3 mM de EDTA e 0,05% de surfactante P20) foram capturados em uma Protein A com Chip Sensor Série S (GE Healthcare Ltd, cat % 29 -1275-56) usando uma injeção de 15 s a uma taxa de fluxo de 10 ul/min para atingir cerca de 80 unidades de ressonância (RUs). Proteína CD73 humana, cinomolgos ou de camundongo recombinante fundida com uma marcador 6xHis (R&D Systems, 5795EN; Sino Biological, 90192-C08H; e R&D Systems, 4488EN, respectivamente) diluída no tampão de execução na concentração de cerca de 0,14 a 33 nM foram fluidos sobre a superfície do chip a uma taxa de fluxo de 30 ul/min com uma fase de associação de 5 min e uma fase de dissociação de 20 min. O chip sensor foi regenerado entre os ciclos com uma injeção de 30 segundos de 10 mM de glicina, pH 1,5. Sensogramas foram avaliados e ajustados a um modelo simples de interação Langmuir 1:1 usando a opção de análise de dados global do software BiaEvaluation 3.1. A qualidade dos dados foi verificada inspecionando visualmente os desvios e o ajuste da curva, e avaliando os parâmetros de Rmax, Chi2 e Tc. As cinéticas de ligação (Ka, Kd e KD) foram determinadas a partir das análises do sensorgrama e são mostradas nas Tabelas 7 e 8. Dois anticorpos anti-CD73 de referência, denominados Anticorpo de Referência 1 ("RAOO01") e Anticorpo de Referência 2 ("RAO02"), foram usados para comparação. Tabela 7. Medições de afinidade baseadas em SPR para anticorpos anti-CD73 LL oem — | near | Clone Ka Ka Ko (nM) Ka Ka (1/s) Ko Ka Ka Ko

NENIDNMPINNENDE BAO1I3 | 1,0E+06 | 2,9E- 3,0E+05 | 2,0E-04 0,7 4,2E+04 | 6,1E 14,5 a o a ap to BAO14 4,6E+07 4,2E- 0,010 5,0E+04 3,0E-05 2,5E+04 2,3E- rh BAO15 2,8E+07 4,1E- 0,015 3,1E+05 8,7E-05 6,1E+04 6,0E- NaN WHWKhM Tabela 8. Comparação de afinidade entre BAO015 e anticorpos anti- CD73 de referência e E ds [nom [775605 | sos | 00 | estos | ame | om | [nom | 10os | 19604 | ou | asseos | 152605 | os

6.1.3 Ligação de anticorpos anti-CD73 a células que expressam CcD73

[970] A afinidade dos anticorpos anti-CD73 BAO013, BAO14 e BAO015 para CD73 associado à membrana foi determinada avaliando sua ligação a células que expressam ectopicamente CD73 humana, cinomolgo ou camundongo de comprimento completo. Resumidamente, células ovarianas de hamster chinês (CHO) foram transduzidas com vetores lentivirais compreendendo uma sequência de codificação de CD73 de camundongo, cinomolgos ou humana sob o controle de um promotor de CMV, e células CHO-CD73 estáveis foram geradas por seleção de antibiótico. A expressão de CD73 foi verificada por citometria de fluxo usandos anticorpos de controle positivo. As células CHO-CD73 estáveis foram cultivadas em cultura em suspensão em meio RPMI suplementado com 10% de FBS inativado por calor a 37ºC e CO, a 5%. Para a análise de ligação, as células CHO-CD73 estáveis foram incubadas por 30 minutos a 4ºC com uma titulação de dose de oito pontos de um teste ou anticorpo de controle de isótipo de 0,005 a 10 ug/ml diluído em tampão FACS (PBS, 2 mM de EDTA, BSA a 0,5%, pH 7,2). RAOO1, que tem uma cadeia leve IgA, foi usado para comparação. As células foram lavadas duas vezes em tampão FACS e incubadas com anticorpo de detecção kappa anti-humano de camundongo conjugado com FITC (para BAO13, BAO14 e BAO15; Life Technologies, HP6062, diluição 1:100 em tampão FACS) ou anticorpo de detecção de lambda de cabra anti-humano conjugado com FITC (para o anticorpo de referência 1; BD Biosciences, 644139, diluição 1:100 em tampão FACS) por 30 minutos a 4ºC. As células foram então lavadas duas vezes e analisadas usando o citômetro de fluxo LSRFortessa'” (BD Biosciences). Os dados FACS foram analisados usando o software FACS DIVA e WEHI Weasel, e foram esquematizados com software Grapgpad.

[971] Como mostrado na Figura 1, BAO13, BAO14, BAO1IS e RAOO1, cada um exibiu ligação dependente de dose a CD73 de camundongo, cinomolgos e humana.

6.1.4 Inibição de atividade enzimática de CD73 por anticorpos anti- CD73

[972] A capacidade dos anticorpos anti-CD73 para inibir a atividade enzimática de CD73 foi avaliada em células vivas que expressam CD73 humana ectopicamente. Resumidamente, células Jurkat ou células CHO foram transduzidas com vetores lentivirais compreendendo uma sequência de codificação de CD73 humana sob o controle de um promotor EFla. Linhagens celulares estáveis foram geradas por seleção de células ativadas por fluorescência (FACS ARIA Fusion), e a expressão de CD73 foi verificada por citometria de fluxo usando um anticorpo anti-CD73 de controle positivo RAOO1. As células foram cultivadas em cultura em suspensão em meio RPMI suplementado com 10% de FBS inativado por calor a 37 ºC e CO? a 5%. Para a análise da atividade enzimática, as células CHO ou Jurkat foram semeadas em placas de cultura de tecidos de fundo plano a uma densidade de 5 x 10º células por poço. Uma titulação de dose de oito pontos de um anticorpo anti-CD73 ou anticorpo de controle de isótipo de 0,005 a 10 pg/ml foi adicionada às células para atingir um volume final de 50 ul/poço. Após uma incubação de uma hora, 25 yuL de 300 uM de monofosfato de adenosina (AMP) foram adicionados a cada poço para permitir a hidrólise de AMP por CD73 por 20 minutos a 37 ºC e CO? a 5%. As células foram então peletizadas e aproximadamente 75 ul de sobrenadante foram misturados com 25 ul de 12 uM de trifosfato de adenosina (ATP) em uma placa de cultura de tecido de fundo plano branco. 100 ul de CellTiter Glo& reconstituído (Promega) foram adicionados a cada poço imediatamente após, e a luminescência foi registrada usando o instrumento Envision (Perkin Elmer) após 5 minutos.

[973] Os níveis de luminescência se correlacionam com a atividade de CD73 em cada amostra, porque AMP inibe a reação da luciferase e a hidrólise do AMP pelo CD73 alivia a inibição. Assim, como mostrado na Figura 2A, BA013, BAO14, BAO1S5 e RAOO1 inibiram cada um a atividade enzimática de CD73 expressa em células Jurkat. Os valores da área calculada sob a curva (AUC) para anticorpos anti-CD73 na Figura 2A são apresentados na Tabela 9. Inibição similar por BA015 foi observada usando células CHO que expressam CD73 (Figura 2B). Tabela 9. Valores de AUC para anticorpos anti-CD73 na Fig. 2A

6.1,5 Internalização de anticorpos anti-CD73 após ligação de CD73

[974] A internalização de anticorpos anti-CD73 nas células foi analisada usando um ensaio de toxicidade celular e a internalização mediada por anticorpos de CD73 foi avaliada usando um método de imagem de células vivas.

[975] O ensaio de toxicidade celular usou um conjugado anticorpo- droga aHFc-NC-MMAE (anticorpo Fc de IgG anti-humano conjugado a monormetil auristatina E (MMAE), com um ligante não clivável, Moradec LLC), que poderia transportar a carga útil citotóxica MMAE no citoplasma após internalização. Resumidamente, uma linhagem celular Jurkat ectopicamente expressa CD73 humana, tal como descrito na seção 6.1.4, foi plaqueada em placas de cultura de tecido de fundo plano brancas a uma densidade de 2 x 10º por poço. Uma titulação de dose de oito pontos de um anticorpo anti-CD73 ou anticorpo de controle de isótipo de 0,005 a 10 ug/ml, juntamente com aHFc-NC-MMAE na mesma concentração do anticorpo, foi adicionado às células para atingir um volume final de 100 ul/poço. Após uma incubação de 72 horas a

37ºC e CO? a 5%, 90 ul de CellTiter Glo& reconstituído (Promega) foi adicionado a cada poço e a luminescência, representando a viabilidade celular, foi registrada usando o instrumento Envision (Perkin Elmer) após 5 minutos.

[976] Como mostrado na Figura 3A, a incubação com BAO15, RAOO1 ou RAOO2, juntamente com aHFc-NC-MMAE, causou a morte celular de células Jurkat que expressam CD73 de uma maneira dependente de dose. Os valores de AUC calculados para anticorpos anti-CD73 na Figura 3A são apresentados na Tabela 10. Este resultado sugeriu que BAO015, RAOO1 e RAOO?2 foram internalizados após ligação de CD73. Tabela 10. Valores de AUC para anticorpos anti-CD73 na Fig. 3A

[977] Imagiologia por microscopia confocal de fluorescência de células vivas revelou internalização de CD73. Especificamente, as células Jurkat que expressam ectopicamente uma proteína de fusão HaloTag&-CD73, gerada por um método similar ao descrito na Seção

6.1.4, foram primeiro incubadas com 1 uM de Corante de Proliferação Celular CellTrace Far Red (Life Technologies) por 30 minutos a 37ºC e CO>2 a 5% para marcar os corpos celulares. As células foram então lavadas em PBS e coradas com um ligando HaloTagO Alexa FluorTY 488 impermeável à membrana (Promega, 1 uM) por 15 minutos a 37ºC e CO, a 5% para marcar a Proteína de fusão HaloTag& -CD73 na superfície celular. As células marcadas foram ressuspensas em meio de cultura fresco na densidade de 15.000 células por poço em uma placa de microscopia de 384 poços e foram incubadas com 10 ug/ml de um anticorpo anti-CD73 ou anticorpo de controle de isótipo. As imagens ao vivo foram coletadas usando um microscópio ImageXpress Micro

Confocal High-Content (Molecular Devices) a 37ºC e CO2 a 5%, e as imagens foram adquiridas no canal Cy5 (Corante de Profliferação Celular CellTrace Far Red) e canal FITC (HaloTagO Alexa Fluor'Y 488) a cada hora durante um período de 6 horas. No total, para cada condição em cada momento, foram adquiridas quatro imagens (aumento de 40x) resultando na análise de uma média de 648 células (+ 87 células, desvio padrão). Análise de imagem para quantificar a quantidade de internalização de CD73 foi realizado usando software de análise MetaXpress (Molecular Devices).

[978] Como mostrado nas Figuras 3B (imagens representativas) e 3C (quantificação de dados de imagiologia), BA015 e RAOO1 cada um promoveu uma rápida internalização de CD73, conforme demonstrado pela fluorescência de Alexa Fluor'Y 488 no citosol.

6.2 Exemplo 2: Geração e Caracterização de Anticorpos Anti-CD73 Humanizados

[979] Este exemplo descreve a geração e caracterização de anticorpos humanizados que se ligam especificamente a CD73 (por exemplo, CD73 humana, CD73 de cinomolgos e CD73 de camundongo).

6.2.1 Geração de anticorpos anti-CD73 humanizados

[980] Variantes humanizadas de BAO012 foram geradas enxertando as sequências de CDR de cadeia pesada e leve de BA012 em regiões de estrutura de anticorpo humano. Uma variante humanizada exemplar, BAO1I9, compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 77 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. As variantes incorporaram substituições de aminoácidos G24A/R98S na região variável de cadeia pesada (VH) e/ou F71Y na região variável de cadeia leve (VL), nas regiões estruturais humanas. Além disso, as variantes incorporaram substituições de aminoácidos nas CDRs, como N55S/N61S ou N55A/N61A em CDRH2 e N311/Y32S em CDRL1. As sequências dos anticorpos humanizados BAO019-BAO34 são descritas nas Tabelas 1-4. Em particular, um anticorpo anti-CD73 humanizado designado BAO20 compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 79 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. Outro anticorpo anti-CD73 humanizado designado BAO25 compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 85 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97.

6.2.2 Ligação de anticorpos anti-CD73 humanizados e quiméricos a CD73 recombinante

[981] A afinidade de alguns anticorpos anti-CD73 humanizados (BAO19-BAO22 e BAO24-BA0O30) para CD73 humana ou cinomolgos foram determinados por SPR usando o método conforme descrito na Seção 6.1.2. BA012, RAOO1 e RAOO2 foram usados como controles. À cinética de ligação (Ka, Kd e KD) determinada a partir das curvas de ligação são mostradas na Tabela 11. Tabela 11. Afinidade de anticorpos anti-CD73 para CD73 conforme medido por SPR [9 emma Dona Lemmon | ao (emo [o ass | mms | om | saum | ss550s | am [5 | ves [ses | om | es [7765 | 6 [5 | mes [me | oa [ses | nes | 6 [5 es [se | om ses | aee | am [E as [es | om asse | nes | as [sm es | ass | om | mms | me | er [55 | mes [ar | os | mes [en | 6

Clone [o | rasas | amora | oz | rasos | assar | om | [os | res | om | a | roses | ne | aa [55 as | sen | o | ves | en | ss [posa | anos | sssem | os | taneos | saxo | ass

[982] Da mesma forma, a cinética de ligação para os anticorpos quiméricos (domínio variável murino + domínio constante humano) BAO1I6 e BAO1I8 são mostradas na Tabela 12. Especificamente, diferentes variantes Fc para RAOO01 e RAOO2, bem como o anticorpo murino BAO012, foram utilizadas para comparação. Tabela 12. Comparação de afinidade entre anticorpos anti-CD73 com diferentes regiões Fc Clone Ka Ka (1/s) K. Ka (1/s) Ka Ka (1/s) (1/Ms) (1/Ms) (1/Ms) BAO12 IgG1- 1,47E+ 8,11E- 1,36E+ 9,46E- 0,07 8,90E+ 7,07E-03 0,79 N297A os os os os o6 BAO16 1262 1,33E+ 3,38E- 1,29E+ 3,27E- 3,15E+ 7,85E-03 8 os o4 os 04 o6 BAO18 IgG1/I8G 1,40E+ 1,51E- 1,41E+ 1,65E- 8,37E+ 1,58E-02 2 os o4 os 04 o6 hínbrido IgG1- 3,16E+ 1,89E- 2,95E+ 1,66E- 8,88E+ 2,19E-05 N297A os os os os 04 RAOO1 1g62 os os os 04 os IgG1/I8G 3,25E+ 1,30E- 3,08E+ 2,48E- 1,40E+ 4,36E-06 2 híbrido os os os os os IgG1- 3,71E+ 7,37E- 3,89E+ 8,19E- N297A os os os os RAOO2 lgG4- 4,14E+ 7,19E- 017 3,57E+ 7,49E-

6.2.3 Ligação de anticorpos anti-CD73 humanizados a células que expressam CD73

[983] As afinidades dos anticorpos anti-CD73 humanizados para CD73 associado à membrana foram determinadas. Especificamente,

foram geradas células CHO que expressam ectopicamente CD73 humana ou de cinomolgo completo e a ligação dos anticorpos às células foi examinada, utilizando o método descrito no Exemplo 6.1,3. BAO15, RAOO01 e RAOO2 também foram examinados para comparação.

[984] Como mostrado nas Figuras 4A-4P e 5A-5P, cada um dos anticorpos humanizados testados, BAO19-BAO3O0, bem como o anticorpo quimérico BAO15 e os dois anticorpos de referência, mas não o controle de isótipo, exibiram ligação dependente de dose a CD73 de cinomolgos (Figuras 4A-4P) e CD73 humana (Figuras 5A-5P). Os valores de AUC calculados para anticorpos anti-CD73 nas Figuras 4B- 4P e Figuras 5B-5P são apresentados na Tabela 13 e na Tabela 14, respectivamente. Tabela 13. Valores de AUC para anticorpos anti-CD73 nas Figs. 4B- 4P Tabela 14. Valores de AUC para anticorpos anti-CD73 nas Figs. 5B- 5P

6.2.4 Inibição da atividade enzimática de CD73 por anticorpos anti- CD73

[985] A capacidade dos anticorpos anti-CD73 humanizados para inibir a atividade enzimática de CD73 foi avaliada usando o mesmo método descrito no Exemplo 6.1,4. BAO015, RAOO1 e RAOO2 também foram examinados para comparação.

[986] Como mostrado nas Figuras 6A-6P, cada um dos anticorpos humanizados testados, BAO19-BAO30, bem como o anticorpo quimérico BAO015 e os dois anticorpos de referência, mas não o controle de isótipo, inibiu a atividade enzimática de CD73 expressa em células Jurkat. Os valores de AUC calculados para anticorpos anti-CD73 nas Figuras 6B- 6P são apresentados na Tabela 15. Tabela 15. Valores de AUC para anticorpos anti-CD73 nas Figs. 6B- 6P

[987] Além disso, a capacidade dos anticorpos humanizados para inibir a atividade enzimática de CD73 foi avaliada usando um ensaio bioquímico.

Especificamente, uma CD73 humana recombinante fundida com um marcador 6xHis (R&D Systems, 5795EN) foi reticulada em placas de 96 poços revestidas de níquel branco durante a noite a 4 ºC em um tampão de ensaio (25 mM de Tris, pH 7,5, 5 MM de MgCk e 0,005% de Tween-20). Os poços foram lavados suavemente duas vezes e uma titulação de dose de oito pontos de um anticorpo anti-CD73 ou anticorpo de controle de isótipo de 0,005 a 10 ug/ml foi adicionada a um volume final de 50 ul/poço.

As amostras foram incubadas durante 1 hora a 37ºC e CO> a 5%, e 50 ul de 200 uM de AMP e 6 uM de ATP foram adicionados a cada poço.

Após uma incubação de 20 minutos a 37ºC e CO? a 5%, 100 ul de CellTiter Glo& reconstituído (Promega) foi adicionado a cada poço, e a luminescência foi registrada usando o instrumento Envision (Perkin Elmer) após 5 minutos.

BAO015, RAOO01 e

RAO0O02 também foram examinados para comparação.

[988] Similar ao ensaio baseado em células descrito acima, neste ensaio bioquímico, os níveis de luminescência se correlacionam com a atividade de CD73 em cada amostra, porque AMP inibe a reação de luciferase e a hidrólise de AMP por CD73 alivia a inibição. Assim, como mostrado nas Figuras 7A-7P, cada um dos anticorpos humanizados testados, BAO19-BAO30, bem como o anticorpo quimérico BA01I5 e os dois anticorpos anti-CD73 de referência, mas não o controle de isótipo, inibiu a atividade enzimática de CD73 recombinante. Os valores de AUC calculados para anticorpos anti-CD73 nas Figuras 7B-/7P são apresentados na Tabela 16. Tabela 16. Valores de AUC para anticorpos anti-CD73 nas Figs. 7B- 7P

6.2.5 Anticorpos anti-CD73 mediando internalização de CD73

[989] A internalização de anticorpos anti-CD73 humanizados em células foi analisada usando o ensaio de toxicidade celular, conforme descrito na Seção 6.1,5.

[990] Como mostrado nas Figuras 8A-8M, a incubação com cada um de BAO19-BAO27 e BAO30, juntamente com aHFc-NC-MMAE, causou a morte celular de células Jurkat que expressam CD73 de uma maneira dependente de dose. Este resultado sugeriu internalização dependente de dose desses anticorpos anti-CD73 após a ligação de CD73.

6.3 Exemplo 3: Geração e Caracterização de Proteínas de Fusão armadilha anti-CD73-TGFRB

[991] Este exemplo descreve a geração e caracterização de anticorpos compreendendo uma porção de ligação a CD73 e uma porção de ligação a TGFB ("trap TGFB"). Estes anticorpos também são referidos como proteínas de fusão armadilha anti-CD73-TGFB neste Exemplo e Exemplo 4.

6.3.1 Geração de proteínas de fusão armadilha anti-CD73-TGFRB

[992] Proteínas de fusão armadilha anti-CD73-TGFB exemplares compreendem um primeiro polipeptídeo compreendendo, a partir do N- terminal para o terminal C, uma cadeia pesada de um anticorpo anti- CD73 no presente documento descrito, um ligante peptídico e um domínio extracelular de TGFBR2; e um segundo polipeptídeo compreendendo uma cadeia leve do anticorpo anti-CD73. As sequências de ligantes peptídicos exemplares, a porção "trap TGFRB" e proteínas de fusão armadilha anti-CD73-TGFB são descritas na Tabela

6.

[993] Em particular, uma proteína de fusão armadilha anti-CD73- TGFB designada BAO35 compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 113 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID

NO: 92. Outra proteína de fusão armadilha anti-CD73-TGFB designada BAO36 compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 114 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. Um terceiro exemplo de proteína de fusão armadilha anti-CD73-TGFB designada BAO037 compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 115 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97. BAO35 e BAO37 foram examinados neste Exemplo e Exemplo 4. Nos seguintes experimentos, dois anticorpos adicionais foram usados para comparação: (i) BAO12, um anticorpo anti-CD73 com as mesmas sequências que a porção anti- CD73 de BAO035, foi usado para representar a atividade da porção de ligação a CD73 de BAO35; e (ii) armadilha de isótipo-TGFB, um anticorpo de controle de isótipo compreendendo o ligante peptídico e o domínio extracelular de TGFBR2, foi usado para representar a atividade das porções de ligação a TGFB de BAO35 e BAO37. Um anticorpo de controle de isótipo sem o ligante peptídico ou o domínio extracelular de TGFEBR?2 foi usado para representar a linha de base. BAO35 e os controles de isótipo correspondentes estavam no formato de IgG2a de camundongo com uma substituição N297A na região constante da cadeia pesada. BAO37 e os controles correspondentes eram anticorpos humanizados em um formato de IgG1 humana com mutação N297A.

6.3.2 Ligação da proteína de fusão armadilha anti-CD73-TGFRB a CD73

[994] A afinidade de ligação de BAO37 para CD73 recombinante foi determinada por ressonância plasmônica de superfície (SPR) usando o sistema BIAcore& T200 (GE Healthcare). BAO37 (proteína de fusão armadilha anti-CD73-TGFB humana), BAO25 (um anticorpo anti- CD73 com as mesmas sequências que a porção anti-CD73 de BAO37) ou uma armadilha de isótipo-TGFB foram capturados em um chip sensor

CMB5 (GE Healthcare, Series Sensor Chip CM5, 29-1496-03) usando IgG anti-humana de camundongo imobilizada com chip (GE Healthcare, Human Antibody Capture Kit, BR100839). Especificamente, os anticorpos diluídos em um tampão de execução (10 mM de HEPES, 150 mM de NaCl, 3 mM de EDTA e 0,05% de surfactante P20) foram capturados usando uma injeção de 30 segundos a uma taxa de fluxo de ul/min para atingir os níveis de captura ideais para análise cinética (cerca de 55 RU para BAO25 e cerca de 60 RU para BAO037 e armadilha de isótipo-TGFB). A concentração de anticorpo para atingir o nível de captura ideal foi determinada separadamente para cada experimento. Aplicou-se proteína CD73 humana, de cinomolgos ou de camundongo recombinante (R&D Systems, 5795EN; Sino Biological, 90192-C08H; e Sino Biological, 50231-M08H, respectivamente), diluída no tampão de execução na concentração de cerca de 0,098 a 100 nM à superfície do chip a uma taxa de fluxo de 100 ul/min com uma fase de associação de 3 min e uma fase de dissociação de 20 min. O chip sensor foi regenerado entre os ciclos com duas injeções de 30 segundos de 3M de MgCl2. Os parâmetros cinéticos foram determinados usando um modelo de ligação Langmuir 1:1 usando Software de avaliação BlAcore & T200 v3.0 (GE Healthcare). A análise assumiu que cada braço Fab do anticorpo interagiu com uma molécula CD73 dimérica. A qualidade dos dados foi verificada inspecionando visualmente os desvios e o ajuste da curva, e avaliando os parâmetros do valor U, Rmax, Chi2 e Tc. As cinéticas de ligação (Ka, Kd e KD) foram determinadas a partir das análises do sensorgrama e são apresentadas na Tabela 17. Os valores são a média geométrica de três experimentos. Nenhuma ligação mensurável foi observada para CD73 de camundongo a BAO37 ou BAO025. Nenhuma ligação mensurável foi observada para CD73 para armadilha de isótipo-TGFB.

Tabela 17. Medições de afinidade baseadas em SPR para ligação de BA025 e BAO37 a CD73

6.3.3 Ligação da proteína de fusão armadilha anti-CD73-TGFB ao

TGFRB

[995] A afinidade de ligação de BAO37 para TGFB recombinante foi determinada por ressonância plasmônica de superfície (SPR) usando o Sistema BIAcore& T200 (GE Healthcare). BAO37, BAO25 ou uma armadilha de isótipo-TGFB foram capturados em um chip sensor CMB5 (GE Healthcare, Series Sensor Chip CM5, 29-1496-03) usando IgG anti-humano de camundongo imobilizada em chip (GE Healthcare, Human Antibody Capture Kit, BR100839). Especificamente, os anticorpos diluídos em um tampão de execução (10 mM de HEPES, 150 mM de NaCl, 3 mM de EDTA e 0,05% de surfactante P20) foram capturados usando uma injeção de 30 segundos a uma taxa de fluxo de ul/min para atingir os níveis de captura ideais para análise cinética (cerca de 110 RU para BAO25 e cerca de 120 RU para BA0O37 e armadilha de isótipo-TGFB). A concentração de anticorpo para atingir o nível de captura ideal foi determinada separadamente para cada experimento. Proteína TGFB1, TGFB2, ou TGFB3 humano recombinante — (Peprotech, —“AF-100-21C; Peprotech/ 100-35B; Peprotech, AF-100-36E, respectivamente) foram usados neste exemplo. Cada TGFRB foi diluído no tampão de execução em concentrações de 0,0312 a 32 nM e foram fluidos sobre a superfície do chip a uma taxa de fluxo de 100 ul/min com uma fase de associação de 3 min e uma fase de dissociação de 20 min. O chip sensor foi regenerado entre os ciclos com duas injeções de 30 segundos de 3M MgCl2. Os parâmetros cinéticos foram determinados usando um modelo de ligação Langmuir 1:1 usando o software de avaliação BIAcore& T200 v3.0 (GE Healthcare). A qualidade dos dados foi verificada inspecionando visualmente os desvios e o ajuste da curva, e avaliando os parâmetros do valor U, Rmax, Chi2 e Tc. As cinéticas de ligação (Ka, Kd e KD) foram determinadas a partir das análises do sensorgrama e são apresentadas na Tabela 18. Os valores são a média geométrica de três experimentos. Tabela 18. Medições de afinidade baseadas em SPR para ligação de BA037 e BA0O25 ao TGFRB LS egerme ehmee Clone Ka Ka Ko Ka (1/Ms) Ka Kp Ka (1/Ms) Ka Ko (1/Ms) (1/s) (1/s) (1/s) [0 o ama [m ssmm Cm Lo | seo | ama [97 BAO37 7 2,05E-04 | pM | 5,54E+07 o2 nM | 5,00E+07 | 2,09E-04 armadil ha de 14 1,5 isótipo- | 7,01E+0 PM 1,78E- | nM TGFB 7 9,63E-05 5,67E+07 o1 6,16E+07 | 1,40E-04

6.3.4 Ligação de proteínas de fusão armadilha anti-CD73-TGFB para células que expressam CD73

[996] A afinidade de BAO35 para CD73 associada à membrana foi avaliada. Especificamente, as células CHO foram transduzidas com vetores lentivirais compreendendo uma sequência codificadora de CD73 de camundongo de comprimento completo sob o controle de um promotor de CMV, e células CHO-muCD73 estáveis foram geradas por seleção de antibiótico. A expressão de CD73 de camundongo foi verificada por citometria de fluxo usandos anticorpos de controle positivo. As células CHO-muCD73 estáveis foram cultivadas em cultura em suspensão em meio RPMI suplementado com 10% de FBS inativado por calor a 37ºC e CO, a 5%. Para a análise de ligação, as células CHO- muCD73 estáveis foram incubadas por 30 minutos a 4ºC com uma titulação de dose de oito pontos de BAO35, BAO12, anticorpo de controle de armadilha de isótipo-TGFB ou de isótipo de 0,005 a 10 pg/ml diluído em tampão FACS (PBS, 2 mM de EDTA, BSA a 0,5%, pH 7,2). As células foram lavadas duas vezes em tampão FACS e incubadas com anticorpo de detecção kappa anti-humano de camundongo conjugado com FITC (Life Technologies, HP6062, diluição 1:100 em tampão FACS) por 30 minutos a 4ºC. As células foram então lavadas duas vezes e analisadas usando o citômetro de fluxo LSRFortessa'y (BD Biosciences). Os dados FACS foram analisados usando o software FACS DIVA e WEHI Weasel, e foram plotados com o software Graphpad Prism.

[997] Como mostrado na Figura 9A, BAO35 reteve sua capacidade de se ligar a CD73, sugerindo que a fusão com a TGFB armadilha não anulou a capacidade de ligação de CD73 dos anticorpos anti-CD73.

[998] A afinidade de ligação de BAO35 para CD73 foi avaliada adicionalmente na presença de TGFB. Especificamente, uma titulação de dose de dez pontos de TGFB1 humano recombinante (Peprotech) de 0,002 a 40 pg/ml foi adicionada a células CHO-muCD73 estáveis em conjunto com 10 pg/ml de BAO35, BAO12 ou anticorpo de controle de isótipo. Após uma incubação de 30 minutos a 37 ºC e CO>2 à 5%, as células foram lavadas duas vezes em tampão FACS e incubadas com anticorpo de detecção kappa anti-humano de camundongo conjugado com FITC (Life Technologies, HP6062, diluição 1:100 em tampão FACS) por 30 minutos a 4ºC. As células foram então lavadas duas vezes e analisadas usando o citômetro de fluxo LSRFortessa'y (BD Biosciences). Os dados FACS foram analisados usando o software FACS DIVA e WEHI Weasel, e foram plotados com o software Graphpad Prism.

[999] Como mostrado na Figura 9B, BAO35 reteve sua capacidade de se ligar a CD73 na presença de TGFB1.

[1000] Em um experimento separado, a afinidade de BAO37 para

CD73 associado à membrana de células T CD8+ humanas primárias, de macaco cinomolgos ou de camundongo foi analisada (para as células de camundongo, a expressão de CD73 de camundongo foi verificada por citometria de fluxo usandos anticorpos de controle positivo). Especificamente, PBMCs criopreservadas e esplenócitos foram descongelados em meio RPMI-1640. Para a análise de ligação, PBMCs ou esplenócitos foram incubados por 30 minutos a 4 ºC com uma titulação de dose de doze pontos de BAO37, BAO25, anticorpo de controle de armadilha de isótipo-TGFB ou de isótipo, cada um conjugado para PE, de 0,004 a 666 nM diluído em tampão de ensaio (PBS, BSA a 0,5%, 1:100 Trustain FCXTY). As células também foram coradas com Zombie NIR'Y, anti-CD3 marcado com fluorescência e anti-CD8 marcado com fluorescência para identificar células T CD8+ viável. As células foram então lavadas duas vezes e analisadas usando o citômetro de fluxo LSRFortessa"Y (BD Biosciences). Os dados FACS foram analisados com o software WEASEL e plotados com o software Graphpad Prism. As Figuras 13A e 13B mostram os dados de ligação de células T de macaco cinomolgo e humano obtidos a partir deste experimento.

[1001] Como mostrado nas Figuras 13A e 13B, BAO37 demonstrou ligação dependente de dose a células T CD8+ humanas e de macaco cinomolgo, que foi amplamente similar à observada para BAO25 (o componente anti-CD73 de BAO37). As curvas de ligação de BAO37 a células T CD8+ humanas e de macaco cinomolgo foram comparáveis umas às outras com valores de ECs5o celulares médios de 2,57 e 9,67 NM, respectivamente. Em contraste, nenhuma ligação foi observada com anticorpos de controle de isótipo (com ou sem uma fusão de TGFRBRII trap). Nenhuma ligação de BAO37 às células T CD8+ de camundongo foi observada (dados não mostrados).

6.3.5 Inibição da atividade enzimática de CD73 por proteínas de fusão armadilha anti-CD73-TGFB

[1002] A capacidade de BAO35 para inibir a atividade enzimática de CD73 foi avaliada usando um ensaio bioquímico. Especificamente, 0,3 upg/ml de proteína CD73 humana, de cinomolgos ou de camundongo recombinante fundida com um marcador 6xHis (R&D Systems, 5795EN; Sino Biological, 90192-C08H; ou R&D Systems, 4488EN, respectivamente) foi misturado com uma titulação de dose de oito pontos de BAO35, BAO012, anticorpo de controle de armadilha de isótipo- TGFRB ou de isótipo de 0,005 a 10 ug/ml em um tampão de ensaio (25 mM de Tris pH 7,5, 5 MM de MgCl2 e Tween-20 a 0,005%) para atingir um volume final de 50 ul/poço em uma placa tratada com cultura de tecidos brancos. As amostras foram incubadas durante 30 minutos a 37ºC e CO? a 5%, e 50 ul de 200 uM de AMP e 6 UM de ATP foram adicionados a cada poço. Após uma incubação de 20 minutos a 37ºC e CO? a 5%, 100 ul de CellTiter Glo& reconstituído (Promega) foi adicionado a cada poço, e a luminescência foi registrada usando o instrumento Envision (Perkin Elmer) após 5 minutos. Os dados foram plotados com o software Graphpad Prism.

[1003] Como mostrado nas Figuras 9C e 9D, BAO35 reteve sua capacidade de inibir a atividade de CD73, sugerindo que a fusão com a armadilha TGFB não anulou a função de inibição de CD73 de anticorpos anti-CD73.

[1004] A capacidade de BAO35 para inibir a atividade de CD73 foi ainda avaliada na presença de TGFB. Especificamente, 40 ug/ml de TGFRB1 humano recombinante (Peprotech) foi misturado com 0,3 ug/ml de proteína CD73 de camundongo recombinante e uma titulação de dose de oito pontos de BAO35, BAO012, anticorpo de controle de armadilha de isótipo-TGFB ou de isótipo de 0,009 a 6,6 ug/ml para atingir um volume final de 50 ul (concentração final de TGFB1 de 20 pg/ml). As amostras foram incubadas durante 30 minutos a 37 ºC e CO,

a 5%, e foram adicionados a cada poço 50 ul de 200 uM de AMP e 6 UM de ATP. Após uma incubação de 20 minutos a 37 ºC e CO> a 5%, 100 ul de CellTiter Glo& reconstituído (Promega) foram adicionados a cada poço e a luminescência foi registrada usando o instrumento Envision (Perkin Elmer) após 5 minutos. Os dados foram plotados com o software Graphpad Prism.

[1005] Como mostrado na Figura 9E, BAO35 reteve sua capacidade de inibir a atividade de CD73 na presença de TGFB1.

[1006] Em um experimento separado, a capacidade de BAO37 para inibir a atividade enzimática de CD73 ligada à placa também foi avaliada. Especificamente, 50 ul de 300 ng/ml de proteína CD73 humana, de cinomolgos ou de camundongo recombinante fundida com um marcador 6xHis (R&D Systems, 5795EN; Sino Biological, 90192- CO8H; ou, Sino Biological, 50231-MO8H, respectivamente) foram incubados em cada poço de uma placa de 96 poços de fundo plano branco revestido com Ni por 2 horas a 37 ºC. Depois de lavar duas vezes, 50 ul/poço de BAO37, BAO25, anticorpo de controle de armadilha de isótipo-TGFB ou de isótipo foram adicionados a cada poço. Para CD73 humana e de macaco cinomolgos, uma curva de concentração de dez pontos de 0,001 a 20 nM de anticorpo em um tampão de ensaio foi usada. Para CD73 de camundongo, uma curva de concentração de oito pontos de 0,01 a 20 nM de anticorpo em um tampão de ensaio foi usada. As amostras foram incubadas durante 60 minutos a 37 ºC e CO> a 5%, e 50 ul de 200 uM de AMP e 6 uM de ATP foram adicionados a cada poço. Após uma incubação de 20 minutos a 37 ºC e CO, a 5%, 100 ul de CellTiter Glo& reconstituído (Promega) foram adicionados a cada poço e a luminescência foi registrada usando o instrumento EnVision (Perkin Elmer) após 5 minutos. Os dados foram plotados com o software Graphpad Prism.

[1007] A capacidade de BAO37 para inibir a atividade enzimática de

CD73 solúvel foi avaliada usando um ensaio bioquímico. Especificamente, 0,3 ug/ml de proteína CD73 humana, de cinomolgos ou de camundongo recombinante fundida com um marcador 6xHis (R&D Systems, 5795EN; Sino Biological, 90192-CO08H; ou, Sino Biological, 50231-MO8H, respectivamente) foi misturado com uma titulação de dose de onze pontos de BAO37, BAO25, anticorpo de controle de armadilha de isótipo-TGFB ou de isótipo de 0,005 a 100 nM em um tampão de ensaio (25 mM de Tris pH 7,5, 5 mM de MgCl2) para atingir um volume final de 50 ul/poço em uma placa tratada com cultura de tecidos brancos. As amostras foram incubadas durante 60 minutos a 37 ºC e CO? a 5%, e 50 ul de 200 uM de AMP e 6 uM de ATP foram adicionados a cada poço. Após uma incubação de 20 minutos a 37 ºC e CO? a 5%, 100 ul de CellTiter Glo& reconstituído (Promega) foi adicionado a cada poço, e a luminescência foi registrada usando o instrumento EnVision (Perkin Elmer) após 5 minutos. Os dados foram plotados com o software Graphpad Prism.

[1008] A capacidade de BAO37 para inibir a atividade enzimática de CD73 expressa em células também foi avaliada. Células Jurkat que expressam CD73 humana (ou células de controle que não expressam CD73) foram usadas neste experimento. As células a uma concentração de 1 x 10º células/mL foram plaqueadas em uma placa de cultura de células de 96 poços de fundo plano transparente em um volume de 50 ul/poço. 50 ul/poço de BAO37, BAO25, anticorpo de controle de armadilha de isótipo-TGFB ou de isótipo foram então adicionados a cada poço em uma curva de concentração de dez pontos de 0,001 a 20 nM de anticorpo em um tampão de ensaio. As amostras foram incubadas durante 60 minutos a 37 ºC e CO> a 5%, e 50 ul de 200 uM de AMP e 6 uM de ATP foram adicionados a cada poço. Após uma incubação de 20 minutos a 37 ºC e CO», a 5%, 100 ul de CellTiter Glo& reconstituído (Promega) foi adicionado a cada poço, e a luminescência foi registrada usando o instrumento EnVision (Perkin Elmer) após 5 minutos. Os dados foram plotados com o software Graphpad Prism.

[1009] Como mostrado nas Figuras 14A, 14B, 15A e 15B, BAO37 demonstrou inibição dependente de dose da atividade enzimática de ambas CD73 humana e de macaco cinomolgos recombinante em formato ligado à placa com valores médios de ICso de 0,518 nM e 0,707 NM, respectivamente. BA0O25 inibiu, similarmente, a atividade enzimática de CD73 entre as espécies, ao passo que o anticorpo de controle de isótipo e a proteína de fusão armadilha de isótipo-TGFB não o fez, confirmando assim que a inibição efetuada por BAO37 foi inteiramente devido à porção anti-CD73 da molécula. Como esperado, BAO037 não bloqueou a atividade enzimática de CD73 recombinante de camundongo (dados não mostrados), devido à sua baixa afinidade para o CD73 de camundongo. Em contraste, um anticorpo anti-CD73 de camundongo (Clone TY/11,8) inibiu a atividade de CD73 de camundongo recombinante de uma maneira dependente de dose (dados não mostrados).

[1010] Como mostrado nas Figuras 14C, 14D, 15C e 15D, BA037 demonstrou inibição dependente de dose da atividade enzimática de CD73 recombinante humano e de macaco cinomolgo na forma solúvel, com valores médios de IC5o de 0,99 nM e 0,623 nM, respectivamente.

[1011] Como mostrado nas Figuras 16A e 16B, BAO37 também inibiu a atividade enzimática de CD73 humana produzida por células Jurkat manipuladas para superexpressar CD73 humana, com um valor de IC5so médio de 0,235 nM.

6.3.6 Neutralização da sinalização de TGFB e expressão de antígeno mesenquimal por proteínas de fusão armadilha anti- CD73-TGFRB

[1012] A capacidade de BAO35 de prejudicar a sinalização induzida por TGFEB foi avaliada usando um sistema repórter expresso ectopicamente e um sistema repórter endógeno.

[1013] O repórter expresso ectopicamente era um vetor que compreende uma sequência de codificação de luciferase sob o controle de um elemento de ligação a SMAD (SBE) em uma linhagem celular HEK293 comercial (BPS Biosciences) Resumidamente, células HEK293 foram transfectadas com o vetor, gerando células repórter HEK293-SMAD. As células repórter HEK293-SMAD foram plaqueadas na densidade de 3,5 x 10º células/poço e cultivadas durante a noite em 100 ul de meio de crescimento (meio MEM suplementado com 10% de FBS) em placa de cultura de tecido de fundo plano branco a 37 ºC e CO>2 a 5%. O meio de crescimento foi substituído por meio de ensaio (meio MEM suplementado com FBS a 0,5%), e as células foram cultivadas por 4,5 horas a 37 ºC e CO> a 5%. Uma titulação de dose de oito pontos de BAO35, BAO12, anticorpo de controle de armadilha de isótipo-TGFB ou de isótipo de 0,009 a 20 ug/ml foram adicionados às células em conjunto com 20 ng/ml de TGFB humano recombinante (Peprotech), e as células foram incubadas durante a noite a 37 ºC e CO, a 5%. Para detectar a atividade da luciferase induzida por TGFB, 100 ul de Bio-Glo'Y reconstituído (Promega) foram adicionados a cada poço, e a luminescência foi registrada usando um instrumento Envision (Perkin Elmer) após 5 minutos.

[1014] Como mostrado na Figura 10A, ambos BAO35 e armadilha de isótipo-TGFB, mas não BAO012, mostraram uma inibição dependente de dose da expressão de luciferase induzida por TGFB nas células repórter HEK293-SMAD.

[1015] Em um experimento separado, uma titulação de dose de onze pontos de BAO37, BAO25, anticorpo de controle de armadilha de isótipo-TGFB ou de isótipo de 0,0003 a 20 nM foi conduzida separadamente para as isoformas TGFB1, TGFRB2, e TGFB3. Caso contrário, o mesmo protocolo foi usado como acima. Como mostrado nas Figuras 17A-17C, BAO37 e armadilha de isótipo-TGFB, mas não BAO025, mostraram uma inibição dependente de dose da expressão de luciferase induzida por TGFRB para as isoformas B1 e B3, mas não a isoforma B2, nas células repórter HEK293-SMAD.

[1016] Para determinar o efeito dessas moléculas na transição epitelial-para-mesenquimal (EMT) em uma linhagem celular tumoral, uma sequência de codificação de proteína fluorescente vermelha (RFP) foi inserida na extremidade 3' do quadro de leitura aberta endógeno do gene da vimentina no genoma de células A549 de carcinoma de pulmão (ATCCO CCL-185EMT'Y). Este sistema repórter de células A549- Vimentina-RFP permitiu a detecção da expressão induzida por TGFB de vimentina, um marcador de EMT, medindo a fluorescência de RFP fundido ao C-terminal da proteína Vimentina. Resumidamente, as células A5S49-Vimentina-RFP foram cultivadas em cultura em suspensão em meio F-12K suplementado com FBS inativado por calor a 10% a 37 ºC e CO? a 5%, e foram incubadas com 10 ug/ml de BAO35, BAO012, armadilha de isótipo-TGFB, ou anticorpo de controle de isótipo na presença ou ausência de 2,5 ng/ml de TGFRB1 por 48 horas. As células foram lavadas duas vezes em tampão FACS (PBS, 2 mM de EDTA, BSA a 0,5%, pH 7,2) e analisadas usando o citômetro de fluxo LSRFortessa'!" (BD Biosciences). Os dados FACS foram analisados usando o software FACS DIVA e WEHI Weasel e foram plotados com o software Graphpad Prism.

[1017] Como mostrado na Figura 10B, BAO35 e armadilha de isótipo-TGFB, mas não BAO012 ou controle de isótipo, inibiu a regulação positiva induzida por TGFB1 dos níveis de expressão de vimentina.

[1018] Em um conjunto separado de experimentos, uma titulação de dose de onze pontos de BAO37, BAO25, anticorpo de controle de armadilha de isótipo-TGFB ou de isótipo de 0,0028 a 165 nM foi conduzida separadamente para isoformas TGFB1, TGFB2, e TGFB3. As células AS49-Vimentina-RFP foram cultivadas e preparadas como descrito acima. TGFB foi pré-incubado com anticorpos por 20 minutos à temperatura ambiente (Figura 18A-18F) ou 30 minutos a 37 ºC (Figura 18G-181I). O anticorpo e TGFB foram então adicionados às células e incubados durante 24 horas a 37 ºC. As células foram lavadas com PBS e analisadas por citometria de fluxo usando o citômetro de fluxo BD FACSCanto IT“, Os dados FACS foram analisados usando o software FACS DIVA e foram plotados com o software Graphpad Prism. Como mostrado nas Figuras 18A-181, BAO37 e armadilha de isótipo-TGFRB, mas não BAO25 ou controle de isótipo, inibiram a regulação positiva de TGFRB1 e TGFB3 de níveis de expressão de vimentina.

6.3.7 Internalização de proteínas de fusão armadilha anti-CD73- TGFRB após a ligação de CD73

[1019] A internalização da armadilha anti-CD73-TGFB, BAO37 ou anticorpos de controle em células que expressam CD73 foi analisada usando um ensaio de toxicidade celular. O ensaio de toxicidade celular usou um conjugado anticorpo-droga aHFc-NC-DM1 (anticorpo Fc anti- IgG humano conjugado com maitansinoide DM1 (DM1), com um ligante não clivável, Moradec LLC), que poderia transportar a carga citotóxica DM1 para o citoplasma na internalização. Resumidamente, uma linhagem de células Jurkat que expressa ectopicamente CD73 humana, conforme descrito na Seção 6.1,4, foi semeada em placas de cultura de tecido de fundo plano branco a uma densidade de 1 x 10º por poço. Uma titulação de dose de sete pontos de um anticorpo anti-CD73 ou anticorpo de controle de isótipo de 0,03 a 20 nM, juntamente com aHFc- NC-DM1 na mesma concentração do anticorpo, foi adicionada às células para atingir um volume final de 100 ul/poço. Após uma incubação de 72 horas a 37 ºC e CO> a 5%, 100 uL de CellTiter Glo& reconstituído (Promega) foram adicionados a cada poço. Após 5 minutos, a luminescência, representando a viabilidade celular, foi registrada usando o instrumento Envision (Perkin Elmer).

[1020] Como mostrado nas Figuras 19A e 19B, a incubação com BAO25 ou BAO37, juntamente com aHFc-NC-DM1, causou a morte celular de células Jurkat que expressam CD73 de uma maneira dependente de dose. Como mostrado nas Figuras 19C e 19D, os experimentos de controle sem aHFc-NC-DM1 não resultaram em morte celular. Este resultado mostrou que a presença de uma porção de armadilha de citocina TGFB em BAO37 não afetou sua internalização mediada por CD73.

6.3.8 Proteínas de fusão armadilha anti-CD73-TGFB não ativam FeyR

[1021] A ativação dos alotipos de alta afinidade FCcyRIIA (H131) ou FCyRIIIA (V158) pela proteína de fusão armadilha anti-CD73-TGFB (BAO37) ou anticorpos de controle foi medida, na presença de células que expressam CD73, usando linhagens de célula repórter Jurkat manipuladas para expressar quer FCyRIIA (H131) ou FCyRIIIA (V158) juntamente com um gene repórter luciferase 2 (luc2) a jusante conduzido por um promotor NFAT. Resumidamente, 25 uL de células CHO expressando CD73 (CHO-CD73, a 2,4 x 106 células/mL) foram dispensados nos poços de uma placa de ensaio branca de fundo plano de 96 poços, resultando em 6,0 x 10º células por poço. Uma titulação de dose de dez pontos (de 0,0005 a 10 nM) de BAO37, BAO25, um anti- CD73 competente em Fc, anticorpo de controle de armadilha de isótipo- TGFRB ou de isótipo foi adicionado às células. Em seguida, 25 ul. de suspensão de células repórter Jurkat FCyRIIA (H131) ou Jurkat FeyRIIA (V158) (a 6 x 10º células/mL, resultando em 1,5 x 10º células/poço) foram adicionados aos poços. Após uma incubação de 20 horas a 37 ºC e CO>z a 5%, 75 ul de CellTiter Glo& reconstituído (Promega) foram adicionados a cada poço, e a luminescência, representando a viabilidade celular, foi registrada usando o instrumento Envision (Perkin

Elmer) após 5 minutos.

[1022] Nesses experimentos, BAO37 e BAO25 não mostraram ativação apreciável de sinalização de FCyRIIA (H131) ou FeyRIIIA (V158) de alta afinidade após o engajamento do alvo (Figuras 20A e 20B, círculos e quadrados escuros). Em contraste, um anticorpo anti- CD73 competente para Fc (I9GG1A humana) induziu a ativação do gene repórter robusto (Figuras 20A e 20B, diamantes escuros). Estas descobertas são consistentes com BAO037 sem atividade de célula efetora mediada por Fc associada.

6.4. Exemplo 4: Atividades /n Vivo de Anticorpos Anti-CD73

[1023] Este exemplo descreve as atividades antitumorais de anticorpos anti-CD73, incluindo proteínas de fusão armadilha anti- CD73-TGFB, em vários modelos de crescimento tumoral e metástase.

6.4.1 Anticorpos anti-CD73 prejudicam o crescimento do tumor e metástase

[1024] A função antitumoral de anticorpos anti-CD73 foi testada em modelos animais de câncer de cólon e metástase tumoral.

[1025] No modelo de câncer de cólon, camundongos Balb/c fêmeas de 6-8 semanas de idade foram injetados com 5 x10º células tumorais CT26 por via subcutânea no dia O e tratados intraperitonealmente com 200 ug de BAO012, um anticorpo que compreende o domínio variável de RAOO01 e um domínio constante de IgG2a murino compreendendo uma mutação N297A (designada RAOO01-IgG2a-N207A), ou um anticorpo de controle de isótipo, nos dias 5, 9 e 14. O crescimento do tumor foi monitorado duas vezes por semana usando um paquímetro digital. O volume do tumor foi calculado usando a fórmula de volume = altura x largura x largura x 0,52.

[1026] Como mostrado na Figura 11A, BAO12 inibiu o crescimento do tumor de forma mais potente do que a variante quimérica de RAOO1.

[1027] No modelo de metástase de tumor, camundongos Balb/c com 6-8 semanas de idade fêmeas foram injetados intravenosamente no dia O com 2 x 10º células de carcinoma da mama, EMT6 que expressavam níveis elevados de CD73 endógena. 200 ug de BAO12 ou anticorpo de controle de isótivo foram administrados intraperitonealmente no mesmo dia (dia 0) e no dia 3. Os camundongos foram sacrificados no dia 14 e os nódulos metastáticos nos pulmões foram avaliados por lavagem dos tecidos em PBS, coloração para contraste usando tinta nanquim 4% e fixando em temperatura ambiente usando solução de Fekete (solução aquosa de etanol, formaldeído e ácido acético). Nódulos metastáticos brancos foram contados manualmente e plotados com o software Graphpad Prism.

[1028] Como mostrado na Figura 11B, BAO12 inibiu a invasão das células tumorais EMT6 nos pulmões em relação ao controle de isótipo, sugerindo que o anticorpo anti-CD73 inibiu a metástase tumoral.

[1029] Em um experimento paralelo, os camundongos fêmea Balb/c de 6-8 semanas de idade foram injetados intravenosamente no dia O com 2 x 10º de células de carcinoma da mama EMTG6. 400 ug de BAO12, 400 ug de anticorpo de controle de isótipo ou 492 ug (equimolar para BAO1I2 e controle de isótipo) de BAO35 foram administrados intraperitonealmente no mesmo dia (dia 0) e no dia 3. Os camundongos foram sacrificados no dia 14 e nódulos metastáticos nos pulmões foram avaliados por lavagem dos tecidos em PBS, coloração para contraste com tinta nanquim 4% e fixação à temperatura ambiente com solução de Fekete (solução aquosa de etanol, formaldeído e ácido acético). Nódulos metastáticos brancos foram contados manualmente e plotados com o software Graphpad Prism.

[1030] Como mostrado na Figura 21, BAO35 inibiu a invasão das células tumorais EMT6 nos pulmões em relação a BAO012 e o controle de isótipo, demonstrando que a proteína de fusão armadilha anti-CD73- TGFRB é capaz de inibir a metástase tumoral.

6.4.2 Proteínas de fusão armadilha anti-CD73-TGFB mostram sinergia entre o antagonismo de CD73 e a neutralização de TGFB na inibição do tumor

[1031] As funções das proteínas de fusão armadilha anti-CD73- TGFRB foram testadas em dois modelos animais de crescimento tumoral.

[1032] No primeiro modelo, camundongos C57BL/6 fêmeas de 6-8 semanas de idade foram injetados com 2 x 10º células de câncer de pulmão de camundongo HPVI16-E6/7* c-Ha-ras* TC1 por via subcutânea no dia 0. Os camundongos portadores do tumor foram randomizados no dia 5 e foram tratados intraperitonealmente com 200 pg de BAO12 ou anticorpo de controle de isótipo, ou 246 ug de BAO35 ou armadilha de isótipo-TGFB nos dias 5, 8 e 11. O crescimento do tumor foi monitorado duas vezes por semana usando um paquímetro digital. O volume do tumor foi calculado usando a fórmula de volume = altura x largura x largura x 0,52, e os dados foram plotados com o software Graphpad Prism.

[1033] Como mostrado na Figura 12A, BAO35, mas não BAO012 ou armadilha de isótipo-TGFB por si só, inibiu o crescimento do tumor.

[1034] Em um segundo modelo, de câncer de pulmão de Lewis LLC, camundongos C57BL/6 fêmeas do tipo selvagem foram implantados com 0,5 x 106 células tumorais LLC (ATCC no. CRL-1642). A dosagem começou quando os tumores atingiram 75-100 mm?, o que ocorreu no dia 4. Os camundongos foram administrados com 200 ug de anticorpo de controle de isótipo, 246 ug de BAO35, 200 ug de BAO12 ou 246 ug de armadilha de isótipo-TGFB nos dias 4, 7, e 11. O crescimento do tumor foi monitorado duas vezes por semana usando um paquímetro digital. O volume do tumor foi calculado usando a fórmula de volume = altura x largura x largura x 0,52, e os dados foram plotados com o software Graphpad Prism.

[1035] Como mostrado na Figura 22, BAO35 foi mais eficaz do que

BAO012 ou proteína de fusão armadilha de isótipo-TGFB sozinha na inibição do crescimento do tumor.

[1036] Em um terceiro modelo, um modelo de xenoenxerto de camundongo Detroit562 que é conhecido por ser sensível à inibição de TGFRB foi usado (vide Koopman et al., Cancer Res. 68, 561-569 (2008)). Especificamente, as células tumorais Detroit562 foram administradas por via subcutânea a camundongos nus fêmeas de 6-8 semanas de idade (Foxnl"º) (1x106 células/camundongo). Camundongos potando tumor (n = 810 camundongos/grupo) foram tratados intraperitonealmente (ip) com 246 ug de BAO35, 200 ug de BAO012, 246 ug de armadilha de isótipo-TGFB, uma combinação de 200 ug de BAO012 e 246 ug de armadilha de isótipo-TGFB, ou 200 ug de controle de isótipo nos dias 8, 11 e 15 pós-implantação do tumor. O crescimento do tumor foi monitorado duas vezes por semana usando um paquímetro digital. O volume do tumor foi calculado usando a fórmula volume = altura x largura x largura x 0,52, e os dados foram plotados com o software Graphpad Prism.

[1037] Como mostrado na Figura 23, todos os tratamentos que compreendem uma porção de armadilha TGFB foram eficazes neste modelo.

[1038] Em um quarto modelo, camundongos Balb/c com 6-8 semanas de idade fêmeas foram injetados com 4 x 10º de células de tumor EMT6 subcutaneamente no dia 0. Os camundongos portando tumor foram distribuídos aleatoriamente e tratados por via intraperitoneal com 246 ug de BAO35, 200 ug de BAO012, 246 ug de armadilha de isótipo-TGFB, uma combinação de 200 ug de BAO012 e 246 ug de armadilha de isótipo-TGFB, ou 200 ug de controle de isótipo de anticorpo nos dias 5, 8 e 11. O crescimento do tumor foi monitorado duas vezes por semana usando um paquímitro digital. O volume do tumor foi calculado usando a fórmula de volume = altura x largura x largura x 0,52, e os dados foram plotados com o software Graphpad Prism.

[1039] Como mostrado na Figura 12B, cada um dos tratamentos de anticorpo, exceto para o anticorpo de controle de isótipo, inibiu o crescimento do tumor. BAO35 mostrou atividade antitumoral mais forte em comparação com a combinação de BAO012 e armadilha de isótipo- TGFB, indicando sinergia entre o antagonismo de CD73 e a neutralização de TGFB quando as duas atividades são fornecidas em um único complexo.

6.4.3 Proteínas de fusão armadilha anti-CD73-TGFB combinam de maneira eficaz com outros tratamentos de câncer

[1040] A capacidade das proteínas de fusão armadilha anti-CD73- TGFRB para aumentar a eficácia de outro tratamento de câncer foi testada em dois modelos animais de crescimento tumoral.

[1041] Usando o modelo EMT6 descrito acima, grupos de camundongos foram tratados com BA012, control de isótipo, BAO35, armadilha de isótipo-TGFB, ou BA012 mais armadilha de isótipo-TGFRB. Os anticorpos foram dosados nos dias 7, 10, 14 e 17. Os camundongos foram então tratados com doxorrubicina ou um anticorpo anti-PD-1. Um grupo de controle não recebeu tratamento combinado. A doxorrubicina foi administrada por via intravenosa nos dias 7 e 14 a 400 ug por injeção. O anticorpo anti-PD-1 (clone RMP1-14, BioXcell) foi administrado a 200 ug por injeção nos mesmos pontos de tempo que os outros anticorpos.

[1042] Como mostrado nas Figuras 24A-24D, todos os tratamentos demonstraram algum efeito na inibição do crescimento do tumor em relação ao controle do isótipo. Notavelmente, a combinação de BAO35 com um anticorpo anti-PD-1 foi mais eficaz na inibição do crescimento do tumor do que a combinação de anticorpo anti-PD-1 com BAO012 ou uma armadilha de isótipo-TGFB, como mostrado na Figura 24B. Da mesma forma, como mostrado nas Figuras 24C e 24D, a combinação de BAO35 com doxorrubicina foi mais eficaz na inibição do crescimento do tumor do que a combinação de doxorrubicina com BAO12 ou uma armadilha de isótipo-TGFB.

[1043] Em um modelo de câncer do cólon, do sexo feminino camundongos Balb/cJ de 6-8 semanas de idade foram injetados com 5 x 10º células de tumor CT26 por via subcutânea no dia 0. Uma vez que os tumores atingiram uma dimensão média de 75-100 mmi3, os camundongos foram tratados intraperitonealmente com 200 ug de BAO012, 200 ug de um anticorpo de controle de isótipo, 246 ug de uma armadilha de isótipo-TGFB, 246 ug de BAO35, ou 200 ug de BAO012 mais 200 ug de uma armadilha de isótipo-TGFB, nos dias 13, 17 e 20 após a injeção das células CT26. Os camundongos também foram injetados com 800 ug de etoposídeo por via intraperitoneal nos dias 12 e 19. O crescimento do tumor foi monitorado duas vezes por semana usando um paquímetro digital. O volume do tumor foi calculado usando a fórmula de volume = altura x largura x largura x 0,52. Os camundongos foram sacrificados uma vez que os tumores atingiram 1000 mm?.

[1044] Como mostrado na Figura 25, a combinação de BAO35 e etoposídeo foi mais eficaz na inibição do crescimento tumoral do que o etoposídeo sozinho, uma combinação de etoposídeo e BA012 ou uma combinação de etoposídeo e qualquer um dos controles de isótipo. À proteína de fusão BAO35 também foi mais eficaz em combinação com etoposídeo do que a combinação de BAO012 e uma armadilha de isótipo- TGFB em combinação com etoposídeo.

6.5. Exemplo 5: Mapeamento de Epítopo

[1045] Este exemplo descreve as porções de CD73 ligadas por BAO037.

6.5.1. Mapeamento de epítopos por HDX

[1046] A interação de CD73 humana com o fragmento Fab de BAO037 (BAO37-Fab) foi estudada por espectrometria de massa HDX.

Estes dados foram usados para identificar regiões de epítopo ligadas por BAO37-Fab em CD73 humana. A interação de CD73 com BAO037- Fab foi avaliada usando os métodos abaixo. Interação de CD73 com Fab anti-CD73 humana

[1047] 20 uL de CD73 humana recombinante (8 pg; R&D Systems, Cat. No. 5795-EN) ou mistura de 20 yuL de CD73 humana recombinante e BA0O37-Fab (8 pg: 24 ug) foi incubado com 110 uL de tampão de marcação de óxido de deutério (50 mM de fosfato de sódio, 100 mM de cloreto de sódio a pD 7,4) por O s, 10 s, 60 s, 600 s ou 3600 s a 20 ºC. A troca de hidrogênio/deutério foi arrefecida bruscamente pela adição de 130 uL de cloridrato de guanidina a 4 M, tampão TCEP a 0,85 M (pH final 2,5) e incubação da mistura por 3 min a 20 ºC. Subsequentemente, as amostras arrefecidas bruscamente foram submetidas à digestão em coluna com pepsina/protease XIll e análise LC-MS, conforme descrito abaixo. Os espectros de massa foram registrados no modo somente MS. Digestão de pepsina/protease XIIl e LC-MS

[1048] Cada mistura de CD73 ou CD73:BA037-Fab foi submetida a uma digestão de pepsina/protease XIII! sobre coluna usando uma coluna de pepsina/protease XIll empacotada internamente (p/p, 1:1) e os peptídeos resultantes foram analisados usando um sistema UPLC-MS composto por uma UPLC Waters Acquity acoplada a um Espectrômetro de Massa Q Exactive'!" Quadrupolo-Orbitrap híbrido (Thermo). Os peptídeos foram separados em uma coluna C8 de 50 mm x 1 mm com um gradiente de 16,5 min de 2-30% de Solvente B (0,2% de ácido fórmico em acentonitrila) em Solvente A (0,2% de ácido fórmico em água). A identificação do peptídeo foi realizada pesquisando dados de MS/MS contra a sequência CD73 humana com Mascot. A tolerância de massa para os íons precursor e produto foi de 7 ppm e 0,02 Da, respectivamente.

Análise de dados HDX

[1049] Os dados MS brutos foram processados usando o software HDX WorkBench para a análise de dados MS de troca H/D. Os níveis de deutério foram calculados usando a diferença de massa média entre o peptídeo deuterado e sua forma nativa (to). Para o cálculo da incorporação de deutério, os espectros de massa para um determinado peptídeo foram combinados ao longo do pico do cromatograma de íons extraído e a média ponderada m/z foi calculada. A massa aumenta da massa do peptídeo nativo (O minuto) para a massa média ponderada corresponde ao nível de incorporação de deutério. Ligação de epítopo de Fab anti-CD73 humana

[1050] Os resíduos que contribuem para o epítopo foram identificados pela proteção da troca de deutério quando BAO37-Fab foi ligado a CD73. Todos os resíduos neste parágrafo são numerados de acordo com a SEQ ID NO: 99. Uma região consistindo nos resíduos 144-170 (IKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEV, SEQ ID NO: 90) sofreu forte proteção de deutério quando CD73 humana foi ligada a BAO037-Fab. Assim, esta região corresponde a um epítopo ou porção do mesmo de BAO37 em CD73. Outra região consistindo nos resíduos 195- 213 (DEITALQPEVDKLKTLNVN, SEQ ID NO: 91) também sofreu forte proteção de deutério quando CD73 humana foi ligada a BA0O37-Fab. Assim, esta região também corresponde a um epítopo ou porção do mesmo de BAO37 em CD73. Ambas as regiões (resíduos 144-170 e 195-213 de SEQ ID NO: 129) também podem ser consideradas coletivamente um epítopo ou porção do mesmo de BAO37 em CD73.

6.5.2 Mapeamento de epítopos por mutação de CD73

[1051] A ligação de BAO37 e RAOO1 a CD73 humana e de camundongo foi ainda estudada usando uma série de mutantes CD73, conforme descrito na Tabela 19 e Tabela 20. Os resíduos de CD73 foram selecionados para mutagênese com base nas diferenças entre a sequência CD73 humana e de camundongo ou com base considerando a estrutura de cristal de CD73 humana (PDB referência No. 4H2F).

[1052] A afinidade de BAO37 e do anticorpo anti-CD73 de referência, RAOO1, para proteínas CD73 recombinantes foi determinada por SPR usando o sistema BIAcore& T200 (GE Healthcare). BAO37, RAO0O01, ou uma proteína de fusão armadilha de isótipo TGFB de controle foram capturados em um chip sensor CM5 (GE Healthcare, Series Sensor Chip CM5, 29-1496-03) usando IgG anti-humana de camundongo imobilizada em chip (GE Healthcare, Human Antibody Kit de captura, BR100839). Especificamente, os anticorpos diluídos em um tampão de execução (10 mM de HEPES, 150 mM de NaCl e surfactante P20 a 0,05%) foram capturados usando uma taxa de fluxo de 10 ul/min para atingir os níveis de captura ideais para análise cinética. A concentração de anticorpo para atingir o nível de captura ideal foi fixada em 1,5 ug/ml. A CD73 recombinante usada neste exemplo foi produzida internamente. A ligação a CD73 de tipo selvagem humana foi similar para a CD73 interna e uma CD73 recombinante comercial (Sino Biological Cat. No. 10904-H08H) (dados não mostrados CD73 foi diluída em série e cada mutante fluiu sobre a superfície do chip a uma taxa de fluxo de 50 ul/min com uma fase de associação de 2 min e uma fase de dissociação de 10 min. O chip sensor foi regenerado entre os ciclos com uma injeção de 90 segundos de MgCl2 3M. Os parâmetros cinéticos foram determinados usando um modelo de ligação Langmuir 1:1 usando Software de avaliação BIAcore& T200 v3.0 (GE Healthcare).

[1053] O efeito das mutações de CD73 na ligação máxima de BAO037 e RAOO1 é mostrado na Tabela 19. A ligação máxima foi medida a 60 nM. Y161A mostrou uma perda parcial de ligação de BAO37, assim como uma mutação quádrupla de humano para camundongo (Y158F, Y161S, P165S, D168G). Quando os mesmos quatro resíduos foram mutados para alanina (Y158A, Y161A, P165A, D168A), a ligação BAO37 adicional foi perdida. Em contraste, RAOO01 ligou-se em níveis similares a todos os mutantes CD73 testados.

[1054] Consistente com observações precedentes, nenhuma ligação significativa foi observada a CD73 de camundongo de tipo selvagem para BAO37. No entanto, a mutação dos resíduos 163, 167 e 170 em CD73 de camundongo para os resíduos humanos correspondentes (ou seja, as mutaçãos de camundongo para humano S163Y, S167P, G170D) resultou na restauração da ligação de BAO37 (como mostrado na Tabela 19) ou restauração parcial da afinidade de ligação (como mostrado na Tabela 20). Além disso, a mutação dos resíduos 109, 111, 154, 160, 163, 167, 170, 200, 298 e 299 em CD73 de camundongo para os resíduos humanos correspondentes (ou seja, as mutações de camundongo para humano |1109A, G111R, H154S, F160Y, S163Y, S167P, G170D, S200T, D298E, K299R) resultou na restauração da ligação (como mostrado na Tabela 19) e afinidade de ligação (como mostrado na Tabela 20). RAOO1 se ligou a CD73 de camundongo em níveis similares a CD73 humana Tabela 19. Efeito das mutações de CD73 na ligação máxima de BAO037 e RAOO1 Lo a FT [ss TAS DIE | mm (humano para camundongo) S152H, Y158F, Y161S

[| meinen [O 136 + + (humano para camundongo) [ eae mm 1109A, GI11R, H154S, F160Y, S163Y, S167P, G170D, S200T, 137 + + D298E, K299R | cemstnmorenão | 138 + + (camundongo para humano) +: pelo menos 70% em relação à ligação máxima a CD73 de tipo selvagem humana +/-: menos de 70% e pelo menos 20% em relação à ligação máxima a CD73 tipo selvagem humano -: menos de 20% em relação à ligação máxima a CD73 de tipo selvagem humana

[1055] O efeito das mutações de CD73 precedentes sobre Ka (afinidade de ligação) de ligação a BAO37 e RAOO1 é mostrado na Tabela 20. Neste experimento, os valores de Ka para ligação de BAO037 e RAOO1 a CD73 humana de tipo selvagem foram determinados como sendo 7,35 x 10º M e 3,21 x 10º M”, respectivamente. Tabela 20. Efeito das mutações de CD73 na ligação de KA de BA037 e RAO0O01 Ea O Y158A, YI61A, PI65A, DI68A | umeemiezamennoo | | oc

KEXSCANNINA (humano para camundongo) 134 +

| mano ameentoo — | | | + | (humano para camundongo) | umano pataameneo — | | | + | [= Wrdecammdono — | 1 | - | [OSIRENAAENT e |) | S167P, G170D, S200T, D298E, K299R 137 + + (camundongo para humano) +: afinidade não mais do que 4 vezes menor em relação à afinidade para CD73 de tipo selvagem humana +/-: afinidade entre 4 e 10 vezes menor em relação à afinidade para CD73 de tipo selvagem humana, afinidade pelo menos 10 vezes menor em relação à afinidade para CD73 de tipo selvagem humana

[1056] Como mostrado nas Tabelas 19 e 20, a mutação de um ou mais dos resíduos Y158, Y161, P165 e/ou D168 reduziram a ligação máxima e a afinidade de BAO37 para CD73 humana. BAO37 não foi sensível a uma única mutação dos resíduos T198, S269 ou K274. À ligação de RAOO01 não foi afetada por nenhuma mutação testada. Estes resultados indicam que BAO037 se liga a CD73 humana por meio de um epítopo (ou epítopos) compreendendo os resíduos Y158, Y161, P165 e/ou D168. Estes resultados também indicam que o epítopo de BA037 é diferente do epítopo do anticorpo de referência RAOO01.

[1057] A invenção não deve ser limitada em escopo pelas modalidades específicas no presente documento descritas. Na verdade, várias modificações da invenção além daquelas descritas tornar-se-ão evidentes para os versados na técnica a partir da descrição precedente e das figuras anexas. Tais modificações destinam-se a cair dentro do escopo das reivindicações anexas.

[1058] Todas as referências (por exemplo, publicações ou patentes ou pedidos de patente) citadas neste documento são incorporadas neste documento por referência em sua totalidade e para todos os fins,

na mesma medida como se cada referência individual (por exemplo, publicação ou patente ou pedido de patente) fosse específica e individualmente indicada para ser incorporada por referência em sua totalidade para todos os fins.

[1059] Outras “modalidades estão dentro das seguintes reivindicações.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo regiões determinantes de complementaridade (CDRs) CDRH1, CDRH2 e CDRH3, e uma região variável de cadeia leve compreendendo regiões determinantes de complementaridade CDRL1, CDRL2 e CDRL3, em que: (a) CDRH1 compreende a sequência de aminoácidos de X1X2WX3X4 (SEQ ID NO: 13), em que XléSouN; X2éSouY, X3élouM;e X4é NouH; (b) CDRH2 compreende a sequência de aminoácidos de X1IIYPRX2X3DTNYX4X5KFKX6 (SEQ ID NO: 14), em que XléRouT; X2é N,AousS; X3éGousS; X4é NAousS; X5éGouQ;e XeéDouG; (c) CDRH3 compreende a sequência de aminoácidos de LLDYSMDY (SEQ ID NO: 7); (d) CDRL1 compreende a sequência de aminoácidos de RASQDISX1X2LN (SEQ ID NO: 16), em que XléNoule X2éYousS; (e) CDRL2 compreende a sequência de aminoácidos de YTSRLHS (SEQ ID NO: 10); e/ou

(f) CDRL3 compreende a sequência de aminoácidos de QQGNTLPXT (SEQ ID NO: 17), em que: XéLouW.

2. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que CDRH1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 1le2.

3. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que CDRH2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 3-6.

4. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que CDRL1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 8 e 9.

5. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que CDRL3 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 11 e 12

6. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que: (a) CDRH1 compreende a sequência de aminoácidos de SSWIN (SEQ ID NO: 2); (b) CDRH2 compreende a sequência de aminoácidos de RIYPRX1IGDTNYX2GKFKD (SEQ ID NO: 15), em que X1éN AouS;e X2é N,AousS; (c) CDRL1 compreende a sequência de aminoácidos de RASQDISX1X2LN (SEQ ID NO: 16), em que XléNoule

X2éYousS; e/ou (d) CDRL3 compreende a sequência de aminoácidos de QQGNTLPLT (SEQ ID NO: 12).

7. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que CDRH2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 4-6.

8. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 6 ou 7, caracterizado pelo fato de que CDRL1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 8eo.

9. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que CDRH1, CDRH2 e CDRH3 compreendem as sequências de aminoácidos CDRH1, CDRH2 e CDRH3, respectivamente, apresentadas em SEQ ID NOs: 2,4 e7;2,567;1,3e7;0u2,6e7.

10. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que CDRL1, CDRL?2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos CDRL1, CDRL?2 e CDRL3, respectivamente, apresentadas em SEQ ID NOs: 8, e 12;9, 10 e 12; ou 8, 10 e 11.

11. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 e CDRL3, respectivamente, apresentadas em SEQ ID NOs: 2,4,7,8, 10e12;2,5,7,8, 106 12;1,3,7,8, 106 11;2,4,7,8, 100 11;2,4,7, 9,10 e 12;2,6,7,8, 10 e 12;2,5,7,9, 10 e 12; ou 2, 6,7,9, 10 e 12.

12. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1,

CDRL2 e CDRL3 compreendem as sequências de aminoácidos CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL?2 e CDRL3, respectivamente, apresentadas em SEQ ID NOs: 2,4,7,8, 10 e 12; ou 2, 5,7,8, 10 e 12.

13. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo CDRs CDRHI1, CDRH2 e CDRH3, e uma região variável de cadeia leve compreendendo regiões determinantes de complementaridade CDRL1, CDRL2 e CDRL3, em que CDRH3 compreende a sequência de aminoácidos de LLDYSMDY (SEQ ID NO: 7); e/ou CDRL3 compreende a sequência de aminoácidos de QQGNTLPLT (SEQ ID NO: 12) ou QQGNTLPWT (SEQ ID NO: 11).

14. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 31.

15. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 100% idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 19-21 e 23-30.

16. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que a região variável de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 19-21 e 23-30.

17. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 294%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 23-30.

18. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a região variável de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 23-30.

19. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a região variável de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24 ou 27.

20. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada de uma sequência de linhagem germinativa humana como apresentado em SEQ ID NO: 22.

21. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 41 ou 42.

22. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 100% idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 33-35 e 37-40.

23. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que a região variável de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 33-35 e 37-40.

24. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 100% idêntica a uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 37-40.

25. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que a região variável de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 37-40.

26. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que a região variável de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 37.

27. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos derivada de uma sequência de linhagem germinativa humana como apresentado em SEQ ID NO: 36.

28. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve, respectivamente, compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 24 e 37; 27 e 37; 196 33; 20 e 34;21 e 35; 23 e 37; 23 e 38; 24 e 38; 25 e 37; 26 e 37; 28 e 37; 250 38,26 e 38; 27 e 38; 28 e 38; 29 e 37; 30 e 37; 23 e 39; ou 23 e 40.

29. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que a região variável de cadeia pesada e a região variável de cadeia leve, respectivamente, compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOs: 24 e 37; ou 27 e37.

30. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região constante de cadeia pesada selecionada a partir do grupo consistindo em IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2 humana.

31. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que a região constante de cadeia pesada é Ig9G1.

32. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que a sequência de aminoácidos de IgG1 compreende uma mutação N297A, numerada de acordo com o sistema de numeração EU.

33. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que a região constante de cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 50, 49, 46, 45, 55 ou 56.

34. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 63-88.

35. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma região constante de cadeia leve selecionada a partir do grupo consistindo em Igk e 34l humanos.

36. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que a região constante de cadeia leve é lIgx.

37. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 36,

caracterizado pelo fato de que a região constante de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 93 ou 89.

38. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NO: 92 e 94-98.

39. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma cadeia pesada e uma cadeia leve compreendendo as sequências de aminoácidos estabelecidas em qualquer fileira da Tabela 4, preferivelmente a sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 79 e 97; 85 e 97; 77 e 97; 80 e 97; 86 e 97; 64 e 92; 70 e 96; ou 78 e 97, respectivamente.

40. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 39, caracterizado pelo fato de que o X em qualquer uma das SEQ ID NOs: 19, 20 e 65-68 é glutamina.

41. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 39, caracterizado pelo fato de que o X em qualquer uma das SEQ ID NOs: 21, 23-30, 63, 64, 69-88 é glutamato.

42. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 39, caracterizado pelo fato de que o X em qualquer uma das SEQ ID NOs: 19-21, 23-30 e 63-88 é piroglutamato.

43. Anticorpo isolado caracterizado pelo fato de que se liga ao mesmo epítopo de CD73 humana que o anticorpo de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes.

44. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo humanizado.

45. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é antagônico a CD73 humana.

46. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de que o anticorpo desativa, reduz ou inibe uma atividade de CD73 humana.

47. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 45 ou 46, caracterizado pelo fato de que o anticorpo atenua a capacidade de CD73 humana de converter monofosfato de adenosina em adenosina.

48. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é internalizado após a ligação a células que expressam CD73 humana.

49. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-48, caracterizado pelo fato de que adicionalmente compreende uma porção de ligação a TGFB.

50. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a TGFB está ligada à região variável de cadeia pesada.

51. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a TGFB está ligada à região variável de cadeia pesada por meio de um ligante peptídico.

52. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30-48, caracterizado pelo fato de que adicionalmente compreende uma porção de ligação a T]GFB1igada à região constante de cadeia pesada.

53. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a TGFB está ligada ao resíduo C-terminal da região constante de cadeia pesada.

54. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 52 ou 53, caracterizado pelo fato de que o resíduo N-terminal da porção de ligação a TGFB está ligado ao resíduo C-terminal da região constante de cadeia pesada por meio de um ligante peptídico.

55. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 51 ou 54, caracterizado pelo fato de que o ligante peptídico compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 103-108.

56. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49 a 55, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a TGFB se liga especificamente ao TGFB humano.

57. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49 a 56, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a TGFB compreende um domínio extracelular de um receptor de TGFB humano.

58. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que o receptor de TGFB humano é selecionado a partir do grupo consistindo em TGFBR1, TGFEBR2 e TGFBR3 humano.

59. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 57 ou 58, caracterizado pelo fato de que o receptor de TGFB humano é TGFBR2 humano.

60. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49 a 59, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a TGFB compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma sequência selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112.

61. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49 a 60, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a TGFB consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 294%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma sequência selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112.

62. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49 a 61, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a TGFB compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112, preferivelmente SEQ ID NO: 111.

63. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49 a 62, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a TGFB consiste em uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112, preferivelmente SEQ ID NO: 111.

64. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49 a 63, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende um polipeptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 113-121, preferivelmente SEQ ID NO: 114 ou 115.

65. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49 a 64, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 113-121 e um polipeptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO : 92 ou 97.

66. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49 a 65, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende dois polipeptídeos, cada um compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 113-121 e dois polipeptídeos, cada um compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 92 ou 97.

67. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49 a 66, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende dois polipeptídeos, cada um compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 115 e dois polipeptídeos, cada um compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 97.

68. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, o anticorpo caracterizado pelo fato de que compreende uma porção de ligação a TGFB.

69. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 68, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é antagonista a CD73 humana.

TO. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 69, caracterizado pelo fato de que o anticorpo desativa, reduz ou inibe uma atividade de CD73 humana.

71. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 69 ou 70, caracterizado pelo fato de que o anticorpo atenua a capacidade de CD73 humana de converter monofosfato de adenosina em adenosina.

72. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 68 a 71, caracterizado pelo fato de que o anticorpo, quando ligado ao TGFB, é antagonista a CD73 humana.

73. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 68 a 72, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a TGFB se liga especificamente ao TGFB humano.

74. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 68 a 73, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a TGFB compreende um domínio extracelular de um receptor de TGFB humano.

75. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 68 a 74, caracterizado pelo fato de que o receptor de TGFB humano é selecionado a partir do grupo consistindo em TGFBR1, TGFEBR2 e TGFBR3 humano.

76. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 74 ou

75, caracterizado pelo fato de que o receptor de TGFB humano é TGFBR2 humano.

77. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 68 a 76, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a TGFB compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma sequência selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112.

78. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 68 a 77, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a TGFB consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a uma sequência selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112.

79. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 68 a 78, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a TGFB compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112, preferivelmente SEQ ID NO: 111.

80. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 68 a 79, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a TGFB consiste em uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 109-112, preferivelmente SEQ ID NO: 111.

81. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 48, caracterizado pelo fato de que adicionalmente compreende uma porção de ligação a VEGF.

82. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 81, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a VEGF está ligada à região variável de cadeia pesada.

83. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 82, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a VEGF está ligada à região variável de cadeia pesada por meio de um ligante peptídico.

84. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 48, caracterizado pelo fato de que adicionalmente compreende uma porção de ligação a VEGF ligada à região constante de cadeia pesada.

85. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a VEGF está ligada ao resíduo C-terminal da região constante de cadeia pesada.

86. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 84 ou 85, caracterizado pelo fato de que o resíduo N-terminal da porção de ligação a VEGF está ligado ao resíduo C-terminal da região constante de cadeia pesada por meio de um ligante peptídico.

87. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 83 ou 86, caracterizado pelo fato de que o ligante peptídico compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 103-108.

88. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 87, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a VEGF se liga especificamente a VEGF humano.

89. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 88, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a VEGF compreende um domínio extracelular de um receptor de VEGF humano.

90. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 89, caracterizado pelo fato de que o receptor de VEGF humano é selecionado a partir do grupo consistindo em VEGFR1, VEGFR2 e VEGFR3 humanos.

91. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 89 ou

90, caracterizado pelo fato de que o receptor de VEGF humano é VEGFR1 humano.

92. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 91, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a VEGF compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 122.

93. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 92, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a VEGF consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 122.

94. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 93, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a VEGF compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO:

122.

95. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 94, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a VEGF consiste na sequência apresentada em SEQ ID NO:

122.

96. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 92, caracterizado pelo fato de que compreende um polipeptídeo — compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 123-127.

97. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 96, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende um polipeptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 123-127 e um polipeptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs:

92, 128 e 97.

98. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 97, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende dois polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 123-127 e dois polipeptídeos compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 92, 128 e 97.

99. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende uma porção de ligação a VEGF.

100. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 99, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é antagônico a CD73 humana.

101. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 100, caracterizado pelo fato de que o anticorpo desativa, reduz ou inibe uma atividade de CD73 humana.

102. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 100, caracterizado pelo fato de que o anticorpo atenua a capacidade de CD73 humana de converter monofosfato de adenosina em adenosina.

103. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 99 a 102, caracterizado pelo fato de que o anticorpo, quando ligado a VEGF, é antagonista a CD73 humana.

104. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 99 a 103, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a VEGF se liga especificamente a VEGF humano.

105. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 99 a 104, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a VEGF compreende um domínio extracelular de um receptor de VEGF humano.

106. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 99 a 105, caracterizado pelo fato de que o receptor de VEGF humano é selecionado a partir do grupo consistindo em VEGFR1, VEGFR2 e VEGFR3 humanos.

107. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 105 ou 106, caracterizado pelo fato de que o receptor de VEGF humano é VEGFR1 humano.

108. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 99 a 107, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a VEGF compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 122.

109. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 99 a 108, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a VEGF consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência apresentada em SEQ ID NO: 122.

110. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 99 a 109, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a VEGF compreende a sequência de aminoácidos como apresentado em SEQ ID NO: 122.

111. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 99 a 110, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação a VEGF consiste na sequência de aminoácidos como apresentado em SEQ ID NO: 122.

112. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações — precedentes, caracterizado pelo fato de que adicionalmente compreende um agente citotóxico conjugado, agente citostático, toxina, radionuclídeo ou marcador detectável.

113. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo localizado dentro de uma região de CD73 humana, a sequência de aminoácidos da região consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 90 e/ou 91.

114. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a pelo menos um resíduo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 90 e/ou 91.

115. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um ou mais resíduos de aminoácidos de CD73 humana selecionados a partir do grupo consistindo em Y158, Y161, P165 ou D168, numerados de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

116. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 133 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

117. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 134 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

118. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido Y 158 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

119. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 59 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

120. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido Y 161 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

121. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 60 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

122. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido P165 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

123. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 139 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

124. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo liga-se ao resíduo de aminoácido D168 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

125. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 140 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

126. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 135 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

127. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 136 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141.

128. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141, e em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 não é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 141.

129. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo a uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 141, e em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 138 não é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 141.

130. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo localizado dentro de uma região de CD73 humana, a sequência de aminoácidos da região consistindo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 90 e/ou 91.

131. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a pelo menos um resíduo na sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 90 e/ou 91.

132. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um ou mais resíduos de aminoácidos de CD73 humana selecionados a partir do grupo consistindo em Y 158, Y 161, P165 ou D168, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

133. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 133 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 141.

134. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 134 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 141.

135. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido Y158 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

136. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 59 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 141.

137. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido Y161 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

138. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 60 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 141.

139. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido P165 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

140. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 139 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 141.

141. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga ao resíduo de aminoácido D168 de CD73 humana, numerado de acordo com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 99.

142. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 140 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 141.

143. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 135 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 141.

144. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 136 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 141.

145. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 141, e em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 137 não é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende o aminoácido sequência de SEQ ID NO: 141.

146. Anticorpo isolado que se liga especificamente a CD73 humana, caracterizado pelo fato de que a afinidade de ligação do anticorpo a uma proteína que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 142 é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 141, e em que a afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 138 não é substancialmente reduzida em relação à afinidade de ligação do anticorpo para uma proteína que compreende o aminoácido sequência de SEQ ID NO: 141.

147. Composto ou molécula, caracterizado pelo fato de que compreende uma porção de ligação a CD73 e uma porção de ligação a TGFRB.

148. Polinucleotídeo isolado, caracterizado pelo fato de que codifica um polipeptídeo do anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 146.

149. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 148, caracterizado pelo fato de que o polinucleotídeo compreende cDNA ou MRNA.

150. Vetor, caracterizado pelo fato de que compreende o polinucleotídeo como definido na reivindicação 148 ou 149.

151. Vetor, de acordo com a reivindicação 150, caracterizado pelo fato de que o vetor é um vetor plasmídeo ou um vetor viral.

152. Célula hospedeira recombinante, caracterizada pelo fato de que compreende o polinucleotíideco como definido na reivindicação 148 ou 149, ou o vetor como definido na reivindicação 150 ou 151.

153. Nanopartícula de lipídeo, caracterizada pelo fato de que compreende o polinucleotídeo, como definido na reivindicação 148 ou 149, ou o vetor, como definido na reivindicação 150 ou 151.

154. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo, polinucleotídeo, vetor ou nanopartícula de lipídeo, como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 146 ou 148 a 153 e um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

155. Método de produção de um anticorpo, o método caracterizado pelo fato de que compreende a cultura da célula hospedeira, como definida na reivindicação 152, sob condições adequadas de modo que o polinucleotídeo seja expresso e o anticorpo seja produzido.

156. Método de tratamento de câncer em um objeto, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao objeto uma quantidade eficaz do anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica, como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 146, 148 a 151, 153 ou 154.

157. Método de inibição de metástase de câncer em um objeto, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao objeto uma quantidade eficaz do anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica, como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 146, 148 a 151, 153, ou 154.

158. Método, de acordo com a reivindicação 156 ou 157, caracterizado pelo fato de que os anticorpos, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica são administrados por via intravenosa, intratumoral, subcutânea, intradérmica, intramuscular, intravesical, intracraniana, intracavitária ou intraventricular.

159. Método, de acordo com a reivindicação 156 ou 157, caracterizado pelo fato de que os anticorpos, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica são administrados por via intratumoral.

160. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 159, caracterizado pelo fato de que adicionalmente compreende a administração de um ou mais agentes terapêuticos adicionais ao objeto.

161. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 160, caracterizado pelo fato de que os anticorpos, polinucleotídeo, “vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica e um ou mais agentes terapêuticos adicionais são coadministrados de acordo com o mesmo cronograma (por exemplo, coadministrados nos mesmos intervalos de tempo).

162. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 160, caracterizado pelo fato de que os anticorpos, vetor — polinucleotídico, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica e um ou mais agentes terapêuticos adicionais são coadministrados de acordo com diferentes esquemas (por exemplo, coadministrados em diferentes intervalos de tempo).

163. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 162, caracterizado pelo fato de que os anticorpos, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula de lipídeo ou composição farmacêutica é coadministrado com um ou mais agentes terapêuticos adicionais compreendendo um ativador ou agonista de um receptor de tirosina quinase 3 relacionado a barbatanas (FLT3; CD 135), um receptor tipo Toll (TLR) ou um estimulador de receptor de genes interferon (STING).

164. Método, de acordo com a reivindicação 163, caracterizado pelo fato de que o agonista ou ativador de TLR é selecionado a partir do grupo consistindo em um agonista de TLR2, um agonista de TLR3, um agonista de TLR7, um agonista de TLR8 e um agonista de TLRO9.

165. Método, de acordo com a reivindicação 163, caracterizado pelo fato de que o agonista ou ativador do receptor de STING é selecionado a partir do grupo consistindo em ADU-S100 (MIW- 815), SB-11285, MK-1454, SR-8291, AdVCAO848, GSK-532, SYN - STING, MSA-1, SR-8291, ácido 5,6-dimetilxantenona-4-acético (DMXAA), GAMP cíclico (CGAMP) e di-AMP cíclico.

166. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 165, caracterizado pelo fato de que os anticorpos, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica é coadministrado com um ou mais agentes terapêuticos adicionais compreendendo um inibidor ou antagonista de: proteína tirosina fosfatase, não receptor tipo 11 (PTPN11 ou SHP2), regulador de apoptose de sequência de leucemia de células mieloides 1 (MCL1); proteína quinase quinase quinase quinase 1 ativada por mitogênio (MAP4K1) (também chamada de Progenitor quinase 1 hematopoiética (HPK1)); diacilglicerol quinase alfa (DGKA, DAGK, DAGK1 ou DGK- alfa); 5'-nucleotidase ecto (NTSE ou CD73); fator de crescimento transformador beta 1 (TGFB1 ou TGFB); heme oxigenase 1 (HMOX1, HO-1 ou HO1); fator de crescimento endotelial vascular A (VEGFA ou VEGF); tirosina quinase 2 de receptor erb-b2 (ERBB2 HER2, HER2/neu ou CD340); receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR, ERBB, ERBB1 ou HER1); tirosina quinase do receptor ALK (ALK, CD246); poli(ADP-ribose) polimerase 1 (PARP1 ou PARP); quinase 4 dependente de ciclina (CDKA4); quinase 6 dependente de ciclina (CDK6);

receptor 8 de quimiocina com motivo C-C (CCR8, CDwI98); molécula CD274 (CD274, PDL1 ou PD-L1); morte celular programada 1 (PDCD1, PD1 ou PD-1); e/ou proteína 4 associada a linfócitos T citotóxicos (CTLA4, CTLA-4, CD152).

167. Método, de acordo com a reivindicação 166, caracterizado pelo fato de que o inibidor compreende uma molécula de ligação ao antígeno, um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

168. Método, de acordo com a reivindicação 166, caracterizado pelo fato de que o inibidor compreende uma pequena molécula orgânica.

169. Método, de acordo com a reivindicação 166, caracterizado pelo fato de que o inibidor de MCL1 é selecionado a partir do grupo consistindo em AMG-176, AMG-397, S-64315, AZD-5991, 483-LM, A1210477, UMI-77 e JKY-5-037.

170. Método, de acordo com a reivindicação 166, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PTPN11 ou SHP2 é selecionado a partir do grupo consistindo em TNO155 (SHP-099), RMC- 4550, JAB-3068 e RMC-4630.

171. Método, de acordo com a reivindicação 160, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é um quimioterápico, um antineoplásico, um radioterapêutico ou um agente de direcionamento de ponto de controle.

172. Método, de acordo com a reivindicação 160, caracterizado pelo fato de que o um ou mais antineoplásicos ou agentes quimioterápicos são selecionados a partir do grupo consistindo em um análogo de nucleosídeo (por exemplo, 5-fluorouracil, gencitabina, citarabina), um taxano (por exemplo, paclitaxel, nab-paclitaxel, docetaxel, cabazitaxel), um complexo de coordenação de platina (cisplatina, carboplatina, oxaliplatina,y nedaplatina, tetranitrato de triplatina, fenantriplatina, picoplatina, satraplatina, dicicloplatina, eptaplatina, lobaplatina, miriplatina) um inibidor da dihidrofolato redutase (DHFR) (por exemplo, metotrexato, trimetrexato, pemetrexato, pemetrexed), um inibidor de topoisomerase (por exemplo, doxorrubicina, daunorrubicina, dactinorrubicina, eniposídeo, epirrubicina, etoposídeo, idarrubicina, irinotecano, mitoxantrona, pixantrona, sobuzoxano, topotecano, irinotecano, MM-398 (irinotecano lipossomal), vosaroxina e GPX-150, aldoxorubicinay AR-67, mavelertinib, AST-2818, avitinib, (ACEA-0010), irofulven (MG1-114)), um agente alquilante (por exemplo, ciclofosfamida, clormetina, uramustina ou mostarda uracila, melfalano, clorambucil, ifosfamida, bendamustina, temozolomida, carmustina), uma nitrosoureia (por exemplo, busmustina, lomustina, estreptozocina), um sulfonato de alquil (por exemplo, bulsifan), e suas misturas.

173. Método, de acordo com a reivindicação 160, caracterizado pelo fato de que o agente de direcionamento de ponto de controle é selecionado a partir do grupo consistindo em um anticorpo antagonista anti-PD-1, um anticorpo antagonista anti-PD-L1, um anticorpo antagonista anti-PD-L2, um anticorpo antagonista anti-CTLA- 4, um anticorpo antagonista anti-TIM-3, um anticorpo antagonista anti- LAG-3, um anticorpo antagonista anti-CEACAM1, um anticorpo agonista anti-GITR, um anticorpo antagonista anti-TIGIT, um antagonista anti- VISTA anticorpo, um anticorpo agonista anti-CD137 e um anticorpo agonista anti-OX40.

174. Método, de acordo com a reivindicação 173, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é um anticorpo anti-PD-1, opcionalmente, em que o anticorpo anti-PD-1 é pembrobzumabe ou nivolumabe.

175. Método, de acordo com a reivindicação 160, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é um inibidor da indoleamina-2,3-dioxigenase (IDO).

176. Método, de acordo com a reivindicação 175, caracterizado pelo fato de que o inibidor é selecionado a partir do grupo consistindo em epacadostat, FO01287, indoximod e NLG919.

177. Método, de acordo com a reivindicação 176, caracterizado pelo fato de que o inibidor é epacadostat.

178. Método, de acordo com a reivindicação 160, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é uma vacina.

179. Método, de acordo com a reivindicação 178, caracterizado pelo fato de que a vacina compreende um complexo de peptídeo proteína de choque térmico (HSPPC) que compreende uma proteína de choque térmico complexada com um peptídeo antigênico.

180. Método, de acordo com a reivindicação 179, caracterizado pelo fato de que a proteína de choque térmico é hsc70 e é complexada com um peptídeo antigênico associado a tumor.

181. Método, de acordo com a reivindicação 179, caracterizado pelo fato de que a proteína de choque térmico é gp96 e é complexada com um peptídeo antigênico associado a tumor, em que o HSPPC é derivado de um tumor obtido de um objeto.

182. Método, de acordo com a reivindicação 160, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é etoposídeo ou doxorrubicina.

183. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 182, caracterizado pelo fato de que os anticorpos, polinucleotídeo, “vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica são coadministrados com um regime FOLFOX, um regime FOLFOXIRI ou um regime FOLFIRINOX.

184. Método, de acordo com as reivindicações 156 a 183, caracterizado pelo fato de que os anticorpos, polinucleotídeo, vetor,

nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica são coadministrados com uma imunoterapia, uma terapia imunoestimuladora, uma terapia celular ou uma terapia genética.

185. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 184, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um tumor sólido, um câncer hematológico e uma lesão metastática.

186. Método, de acordo com a reivindicação 185, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido é selecionado a partir do grupo consistindo em um sarcoma, um sarcoma fibroblástico, um carcinoma e um adenocarcinoma.

187. Método, de acordo com a reivindicação 185, caracterizado pelo fato de que o câncer hematológico é selecionado a partir do grupo consistindo em uma leucemia, um linfoma e um mieloma.

188. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 184, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um câncer de pulmão, um melanoma, um câncer renal, um câncer de fígado, um mieloma, um câncer de próstata, um câncer de mama, um câncer de ovário, câncer colorretal, câncer de pâncreas, câncer de cabeça e pescoço, câncer anal, câncer gastroesofágico, mesotelioma, câncer nasofaríngeo, câncer de tireoide, câncer cervical, câncer epitelial, câncer peritoneal, uma doença linfoproliferativa, uma leucemia linfoblástica aguda (ALL), uma leucemia mieloide aguda (AML), uma leucemia linfocítica crônica (CLL), uma leucemia mieloide crônica (CML), uma leucemia mielomonocítica crônica (CMML), uma leucemia de células pilosas, um linfoma de células B, um linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), um linfoma difuso de grandes células B tipo células B ativadas (ABC), um linfoma difuso de grandes células B de células B do centro germinativo (GCB), um linfoma de células do manto, um linfoma de

Hodgkin, um linfoma não-Hodgkin, um linfoma não-Hodgkin recidivo, um linfoma não-Hodgkin refratário, um linfoma não-Hodgkin folicular recorrente, um linfoma de Burkitt, um linfoma linfocítico pequeno, um linfoma folicular, um linfoma linfoplasmocitário e um linfoma extranodal da zona marginal.

189. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 184, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um tumor epitelial (por exemplo, um carcinoma, um carcinoma de células escamosas, um carcinoma de células basais, uma neoplasia intraepitelial escamosa), um tumor (por exemplo, um adenocarcinoma, um adenoma, um adenomioma), um tumor mesenquimal ou de tecido mole (por exemplo, um sarcoma, um rabdomiossarcoma, um leiomiossarcoma, um lipossarcoma, um fibrosarcoma, um dermatofibrossarcoma, um neurofibrossarcoma, um histiocitoma fibroso, um angiosarcoma, um angiomixoma, um leiomioma, um condroma, um condrossarcoma, um sarcoma de partes moles alveolares, um hemangioendotelioma epitelioide, um tumor de Spitz, um sarcoma sinovial) e um linfoma.

190. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 184, caracterizado pelo fato de que o câncer é um tumor sólido em ou decorrente de um tecido ou órgão selecionado a partir do grupo consistindo em: osso (por exemplo, adamantinoma, cistos ósseos aneurismáticos, angiossarcoma, condroblastoma, condroma, fibroma condromixoide, condrossarcoma, cordoma, condrossarcoma desdiferenciado, encondroma, hemangioendotelioma epitelioide, displasia fibrosa do osso, tumor de células gigantes do osso, hemangiomas e lesões relacionadas, osteoblastoma, osteocondroma, osteossarcoma, osteoma osteoide, osteoma, condroma periosteal, tumor desmoide, sarcoma de Ewing); lábios e cavidade oral (por exemplo, ameloblastoma odontogênico, leucoplasia oral, carcinoma de células escamosas oral, melanoma primário da mucosa oral); glândulas salivares (por exemplo, adenoma de glândula salivar pleomórfica, carcinoma adenoide cístico de glândula salivar, carcinoma mucoepidermoide de glândula salivar, tumores de Warthin de glândula salivar); esôfago (por exemplo, esôfago de Barrett, displasia e adenocarcinoma); trato gastrointestinal, incluindo estômago (por exemplo, adenocarcinoma gástrico, linfoma gástrico primário, tumores estromais gastrointestinais (GISTs), depósitos metastáticos, carcinoides gástricos, sarcomas gástricos, carcinoma neuroendócrino, carcinoma gástrico de células escamosas primárias, adenoacantomas gástricos), intestinos e músculo liso (por exemplo, leiomiomatose intravenosa), cólon (por exemplo, adenocarcinoma colorretal), reto, ânus; pâncreas (por exemplo, neoplasias serosas, incluindo cistadenoma seroso microcístico ou macrocístico, cistadenoma seroso sólido, neoplasias serosas císticas associadas a Von Hippel-Landau (VHL), cistadenocarcinoma seroso, neoplasias císticas mucinosas (MCN), neoplasias mucaductais intraductais neoplasias papilares oncocíticas (IOPN), neoplasias tubulares intraductais, neoplasias acinares císticas, incluindo cistadenoma de células acinares, cistadenocarcinoma de células acinares, adenocarcinoma pancreático, adenocarcinoma ductal pancreático invasivo, incluindo adenocarcinoma tubular, carcinoma adenoquamoso, carcinoide coloide, carcinoma medular, carcinoma hepatoide, carcinoma de células em anel de sinete, carcinoma indiferenciado, carcinoma indiferenciado com células gigantes similares a osteoclastos, carcinoma de células acinares, neoplasias neuroendócrinas, microadenoma neuroendócrino, tumores neuroendócrinos (NET), carcinoma neuroendócrino (NEC), incluindo NEC de pequenas células ou grandes células, insulinoma, gastrinoma, glucagonoma, NET produtor de serotonina, somatostatinoma, ViPoma, neoplasias pseudopapilares sólidas (SPN), pancreatoblastoma);

vesícula biliar (por exemplo, carcinoma da vesícula biliar e dutos biliares extra-hepáticos, colangiocarcinoma intra-hepático); neuroendócrino (por exemplo, carcinoma cortical adrenal, tumores carcinoides, feocromocitoma, adenomas hipofisários); tireoide (por exemplo, carcinoma anaplásico (indiferenciado), carcinoma medular, tumores oncocíticos, carcinoma papilar, adenocarcinoma); fígado (por exemplo, adenoma, combinação hepatocelular e colangiocarcinoma, carcinoma fibrolamelar, hepatoblastoma, carcinoma hepatocelular, mesenquimal, tumor epitelial estromal aninhado, carcinoma indiferenciado, carcinoma hepatocelular, colangiocarcinoma intra-hepático, cistadenocarcinoma do duto biliar, hemangioendotelioma epitelioide, angiossarcoma, sarcoma embrionário, rabdomiossarcoma, tumor fibroso solitário, teratoma, tumor Yolk sac, carcinosarcoma, tumor rabinoide); rim (por exemplo, carcinoma de células renais rearranjado por ALK, carcinoma de células renais cromófobo, carcinoma de células renais de células claras, sarcoma de células claras, adenoma metanéfrico, adenofibroma metanéfrico, carcinoma mucinoso tubular e de células fusiformes, nedea, nefroblastoma (tumor de Wilms), adenoma papilar, carcinoma papilar de células renais, oncocitoma renal, carcinoma de células renais, carcinoma de células renais com deficiência de succinato desidrogenase, carcinoma do duto coletor); mama (por exemplo, carcinoma dutal invasivo, incluindo, sem limitação, carcinoma de células acínicas, carcinoma adenoide cístico, carcinoma apócrino, carcinoma cribriforme, células claras/ricas em glicogênio, carcinoma inflamatório, carcinoma rico em lipídios, carcinoma medular, carcinoma metaplásico, carcinoma micropapilar, carcinoma mucinoso, carcinoma neuroendócrino, carcinoma sebácea, carcinoma sebocítico, carcinoma sebocítico, carcinoma sebáceo, carcinoma da mama secretor, carcinoma tubular, carcinoma lobular, incluindo, sem limitação, carcinoma pleomórfico, carcinoma de células em anel de sinete,

peritônio (por exemplo, mesotelioma, câncer peritoneal primário)); tecidos de órgãos sexuais femininos, incluindo ovário (por exemplo, coriocarcinoma, tumores epiteliais, tumores de células germinativas, tumores estromais do cordão sexual), trompas de Falópio (por exemplo, adenocarcinoma seroso, adenocarcinoma mucinoso, adenocarcinoma endometrioide, adenocarcinoma de células claras, carcinoma de células transicionais, carcinoma de células escamosas, carcinoma indiferenciado, tumores mullerianos, adenossarcona, leiomiossarcoma teratoma, tumores de células germinativa, coriocarcinoma, tumores trofoblásticos); útero (por exemplo, carcinoma do cérvix, pólipos endometriais, hiperplasia endometrial, carcinoma intraepitelial (EIC), carcinoma endometrial, (por exemplo, carcinoma endometrioide, carcinoma ceroso, carcinoma de células claras carcinoma mucinoso, carcinoma de células escamosas, carcinoma transicional, carcinoma de pequenas células, carcinoma indiferenciado, neoplasia mesenquimal), leiomioma “(por exemplo, nódulo estromal do endométrio, leiomiossarcoma, sarcoma estromal do endométrio (ESS) tumores mesenquimais), tumores mesenquimais e epiteliais misturados (por exemplo, adenofibroma, carcinofibroma, adenossarcoma (sacorma mesodérmico misturado maligno — MMMT), tumores estromais do endométrio, tumores misturados mullerianos malignos do endométrio, tumores trofoblásticos gestacionais (mola hidatiforme parcial, mola hidatiforme completa, mola hidatiforme invasiva, tumor do sítio placentário)), vulva, vagina; tecidos de órgãos sexuais masculinos, incluindo próstata, testículos (por exemplo, tumores de células germinativas, seminoma espermatocítico), pênis; bexiga (por exemplo, carcinoma de células escamosas, carcinoma urotelial, carcinoma urotelial da bexiga); cérebro, (por exemplo, gliomas (por exemplo, astrocitomas, incluindo não infiltrantes, de baixo grau, anaplásicos, glioblastomas; oligodendrogliomas, ependimomas), meningiomas,

gangliogliomas, schwannomas (neurilemomas), craniofaringiomas, cordomas, linfomas, não-Hodgkin, linfomas pituitários; olho (por exemplo, retinoma, retinoblastoma, melanoma ocular, melanoma uveal posterior, hamartoma da íris); cabeça e pescoço (por exemplo, carcinoma nasofaríngeo, tumor do saco endolinfático (ELST), carcinoma epidermoide, cânceres laringeais incluindo carcinoma de células escamosas (SCC) (por exemplo, carcinoma glótico, carcinoma supraglótico, carcinoma subglótico, carcinoma transglótico), carcinoma in situ, verrucoso, células fusiformes e SCC basaloide, carcinoma indiferenciado, adenocarcinoma laríngeo, carcinoma adenoide cístico, carcinoma neuroendócrino, sarcoma de laringe), paraganglioma de cabeça e pescoço (por exemplo, corpo carotídeo, jugulotimpânico, vagal); timo (por exemplo, timoma); coração (por exemplo, mixoma cardíaco); pulmão (por exemplo, carcinoma de células pequenas (SCLC), carcinoma de células não pequenas do pulmão (NSCLC), incluindo carcinoma de células escamosas (SCC), adenocarcinoma e carcinoma de células grandes, carcinoides (típico ou atípico), carcinossarcomas, blastomas pulmonares, carcinomas de células gigantes, carcinomas de células fusiformes, blastoma pleuropulmonar); linfa (por exemplo, linfomas, incluindo linfoma de Hodgkin, linfoma não- Hodgkin, doenças linfoproliferativas associadas ao vírus Epstein-Barr (EBV), incluindo linfomas de células B e linfomas de células T (por exemplo, linfoma de Burkitt, linfoma de grandes células B, linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), linfoma de células do manto, linfoma de células B indolente, linfoma de células B de baixo grau, linfoma difuso de células grandes associado à fibrina; linfoma de efusão primário; linfoma plasmblástico; linfoma extranodal de células NK/T, tipo nasal; linfoma de células T periférico, linfoma cutâneo de células T, linfoma de células T angioimunoblástico; linfoma de células T foliculares; linfoma de células T sistêmico), linfangioleiomiomatose); sistema nervoso central (SNC) (por exemplo, gliomas incluindo tumores astrocíticos (por exemplo, astrocitoma pilocítico, astrocitoma pilomixoide, astrocitoma subependimário de células gigantes, xantoastrocitoma pleomórfico, astrocitoma difuso, astrocitoma fibrilar, astrocitoma gemistocítico, astrocitoma protoplástico, astrocitoma anaplásico, glioblastoma (por exemplo, glioblastoma de células gigantes, gliosarcoma, glioblastoma multiforme) e gliomastose cerebral), tumores oligodendrogliais (por exemplo, oligodendroglioma, oligodendroglioma anaplásico), tumores oligoastrocítico (por exemplo, oligoastrocitoma, oligoastrocitoma anaplásico), tumores ependimais (subependimoma, ependimoma mixopapilar, ependimomas (por exemplo, celular, papilar, células claras, tanicíticos(, ependimoma anaplásico), glioma do nervo óptico, e não gliomas (tumores do plexo coroide, tumores neuronais e gliais neoronais misturados, tumores da região pineal, tumores embrionários, meduloblastoma, tumores meningeais, linfomas do SNC primário, tumores de células germinativas, adenomas pituitários, tumores do nervo paraespinhal e craniano, tumores da região estelar), neurofibroma, meningioma, tumores da bainha nervosa periférica, tumores — neuroblásticos — periféricos — (incluindo, sem limitação, neuroblastoma, ganglioneuroblastoma, ganglioneuroma), trissomia 19 ependimoma); tecidos neuroendócrinos (por exemplo, sistema paraganglionar incluindo medula adrenal (feocromocitomas) e paraganglia extra-adrenal (paragangliomas (extra-adrenal)); pele (por exemplo, hidradenoma de células claras, histiocitomas fibrosos cutâneos benignos, cilindroma, hidradenoma, melanoma, incluindo melanoma cutâneo, melanoma da mucosa), pilomatricoma, tumores de Spitz); e tecidos moles (por exemplo, angiomixoma agressivo, rabdomiossarcoma alveolar, sarcoma alveolar de partes moles, angiofibroma, histiocitoma fibroso angiomatoide, sarcoma sinovial, sarcoma sinovial bifásico, sarcoma de células claras,

dermatofibrosarcoma protuberante, fibromatose do tipo desmoide, tumor de pequenas células redondas, tumor desmoplásico de pequenas células redondas, elastofibroma, rabdomiossarcoma embrionário, tumor de Ewing/tumores neurectodérmicos primitivos (PNET), condrossarcoma mixoide extraesquelético, osteossarcoma extraesquelético, sarcoma paraespinhal, tumor miofibroblástico inflamatório, lipoblastoma, lipoma, lipossarcoma/ tumores lipomatosos malignos, lipossarcoma lipossarcoma mixoide, sarcoma fibromixoide, linfangioleiomioma, mioepitelioma maligno, melanoma maligno de partes moles, carcinoma mioepitelial, mioepitelioma, sarcoma fibroblástico mixoinflamatório, sarcoma indiferenciado, pericitoma, rabdomiossarcoma, sarcoma de tecidos moles não rabdomiossarcoma (NRSTS), leiomiossarcoma de tecidos moles, sarcoma indiferenciado, lipoposarcoma bem diferenciado.

191. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 184, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um melanoma, um câncer gástrico, um câncer de mama triplo-negativo (TNBC), um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), um adenocarcinoma retal, um câncer colorretal, um carcinoma de células renais, um câncer de ovário, um câncer de próstata, um carcinoma oral de células escamosas (SCC), um carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), um câncer de bexiga urotelial, um glioblastoma (GBM), um meningioma, câncer adrenal e um câncer endometrial.

192. Anticorpo isolado, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula de lipídeo isolado ou composição farmacêutica, como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 146, 148 a 151, 153 ou 154, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de câncer.

193. Anticorpo isolado, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica para uso de acordo com a reivindicação 192, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um tumor sólido, um câncer hematológico e uma lesão metastática.

194. Anticorpo isolado, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica para uso de acordo com a reivindicação 192, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido é selecionado a partir do grupo consistindo em um sarcoma, um sarcoma fibroblástico, um carcinoma e um adenocarcinoma.

195. Anticorpo isolado, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica para uso, de acordo com a reivindicação 192, caracterizado pelo fato de que o câncer hematológico é selecionado a partir do grupo consistindo em uma leucemia, um linfoma e um mieloma.

196. Anticorpo isolado, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula de lipídeo isolado ou composição farmacêutica para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 192 a 195, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um câncer de pulmão, um melanoma, um câncer renal, um câncer de fígado, um mieloma, um câncer de próstata, um câncer de mama, um câncer de ovário, câncer colorretal, câncer de pâncreas, câncer de cabeça e pescoço, câncer anal, câncer gastroesofágico, mesotelioma, câncer nasofaríngeo, câncer de tireoide, câncer cervical, câncer epitelial, câncer peritoneal, uma doença linfoproliferativa, uma leucemia linfoblástica aguda (LLA), uma leucemia mieloide aguda (AML), uma leucemia linfocítica crônica (CLL), uma leucemia mieloide crônica (CML), uma leucemia mielomonocítica crônica (CMML), uma leucemia de células pilosas, um linfoma de células B, um linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), um linfoma difuso de grandes células B tipo células B ativadas (ABC), um linfoma difuso de células B de células B de centro germinativo (GCB), um linfoma de células do manto, um linfoma de Hodgkin, um linfoma não-Hodgkin, um linfoma não-Hodgkin recidivante, um linfoma não-Hodgkin refratário, um linfoma não-Hodgkin folicular recorrente, um linfoma de Burkitt, um pequeno linfoma linfocítico, um linfoma folicular, um linfoma linfoplasmocitário e um linfoma extranodal de zona marginal.

197. Anticorpo isolado, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula de lipídeo isolado ou composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 192 a 195, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um melanoma, um câncer gástrico, um câncer de mama triplo-negativo (TNBC), um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) um adenocarcinoma retal, um câncer colorretal, um carcinoma de células renais, um câncer de ovário, um câncer de próstata, um carcinoma oral de células escamosas (SCC), um carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), um câncer de bexiga urotelial, um glioblastoma (GBM), um meningioma, câncer adrenal e um câncer endometrial.

198. Uso do anticorpo isolado, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica isolado, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 146, 148 a 151, 153 ou 154, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de um medicamento para o tratamento do câncer.

199. Uso, de acordo com a reivindicação 198, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um tumor sólido, um câncer hematológico e uma lesão metastática.

200. Uso, de acordo com a reivindicação 199, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido é selecionado a partir do grupo consistindo em um sarcoma, um sarcoma fibroblástico, um carcinoma e um adenocarcinoma.

201. Uso, de acordo com a reivindicação 199, caracterizado pelo fato de que o câncer hematológico é selecionado a partir do grupo consistindo em uma leucemia, um linfoma e um mieloma.

202. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 198 a 201, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um câncer de pulmão, um melanoma, um câncer renal, um câncer de fígado, um mieloma, um câncer de próstata, um câncer de mama, um câncer de ovário, câncer colorretal, câncer de pâncreas, câncer de cabeça e pescoço, câncer anal, câncer gastroesofágico, mesotelioma, câncer nasofaríngeo, câncer de tireoide, câncer cervical, câncer epitelial, câncer peritoneal, uma doença linfoproliferativa, uma leucemia linfoblástica aguda (ALL), uma leucemia mieloide aguda (AML), uma leucemia linfocítica crônica (CLL), uma leucemia mieloide crônica (CML), uma leucemia mielomonociítica crônica (CMML), uma leucemia de células pilosas, um Linfoma de células B, um linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), um linfoma difuso de grandes células B tipo células B ativadas (ABC), um linfoma difuso de células B de células B de centro germinativo (GCB), um linfoma de células do manto, um linfoma de Hodgkin, um linfoma não- Hodgkin, um linfoma não-Hodgkin recidivante, um linfoma não-Hodgkin refratário, um linfoma não-Hodgkin folicular recorrente, um linfoma de Burkitt, um pequeno linfoma linfocítico, um linfoma folicular, um linfoma linfoplasmocitário e um linfoma extranodal de zona marginal.

203. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 198 a 201, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo consistindo em um melanoma, um câncer gástrico, um câncer de mama triplo-negativo (TNBC), um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), um adenocarcinoma retal, um câncer colorretal, um carcinoma de células renais, um câncer de ovário, um câncer de próstata, um carcinoma de células escamosas oral (SCC), um carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC), um câncer de bexiga urotelial, um glioblastoma (GBM), um meningioma, câncer adrenal e um câncer endometrial.

204. Anticorpo isolado, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula de lipídio ou composição farmacêutica, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 146, 148 a 151, 153 ou 154, caracterizado pelo fato de que é para uso no método como definido em qualquer uma das reivindicações 156-191.

205. Uso do anticorpo, polinucleotídeo, vetor, nanopartícula lipídica ou composição farmacêutica isolada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 146, 148 a 151, 153 ou 154, caracterizado pelo fato de que são do método como definido em qualquer uma das reivindicações 156 a 191.