KR20230050378A - 항-cd73 항체를 사용하여 암을 치료하는 방법 - Google Patents

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Abstract

본 공개는 암의 치료를 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 구체적으로, 본 공개는 항-CD73 항체를 투여하는 방법, 및 개체에서 암, 바람직하게는 HER2-양성 위 선암종 또는 위식도 접합부 선암종를 치료하기 위해 항-CD73 항체를 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

항-CD73 항체를 사용하여 암을 치료하는 방법
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2020년 8월 13일에 출원된 미국 가출원 No. US 63/065,085 의 우선권을 주장하며, 이는 임의의 도면을 포함하여 그 전문이 참조로 본 명세서에 편입된다.
서열 목록에 대한 언급
본 출원은 전자 형식의 서열 목록과 함께 출원된다. 서열 목록은 2021년 8월 5일에 생성된, 크기가 79 KB 인, 명칭 "CD73-9 PCT SEQ LIST_ST25" 의 파일로서 제공된다. 전자 형식의 서열 목록 정보는 그 전문이 참조로 본 명세서에 편입된다.
본 공개의 기술분야
본 공개는 암의 치료를 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 구체적으로, 본 공개는 항-CD73 항체를 투여하는 방법, 및 암의 치료를 위해 항-CD73 항체를 사용하는 방법에 관한 것이다.
CD73 (엑토-5'-뉴클레오티다아제) 은 조혈 세포의 서브세트 및 내피 세포 상에서 정상적으로 발현되는 70-kDa 글리코실포스파티딜이노시톨 (GPI)-앵커링된 단백질이다. CD73 은 CD39 와 함께 아데노신 트리포스페이트 (ATP) 물질대사를 조절한다. CD39 (NTPDase-1) 는 ATP 를 AMP 로 전환시키면서, 오직 미량의 ADP 만을 방출시키는 한편, CD73 은 AMP 의 아데노신으로의 전환을 촉매작용한다.
아데노신 트리포스페이트 (ATP) 및 그것의 대사산물 AMP 및 아데노신은 세포 대사, 신호전달 및 면역 항상성에서 중요한 역할을 한다. 세포 사멸 또는 세포 스트레스에 반응하는 세포외 아데노신 트리포스페이트 (ATP) 의 방출은 면역 반응을 활성화시키는 작용을 한다. 그러나, 그것의 대사산물 아데노신은 면역억제 활성을 갖는다. 세포외 아데노신은 암 조직에서 축적되고 종양 면역 탈출의 중요한 메카니즘을 구성한다. 다른 효과들 중에서, 종양-유래 아데노신은 아데닐일 시클라제-활성화 A2A 수용체를 통해 침윤성 이펙터 T 세포를 현저하게 저해한다.
CD73 발현은 백혈병, 방광암, 신경아교종, 교모세포종, 난소암, 흑색종, 전립선암, 갑상선암, 식도암 및 유방암을 포함하는, 다양한 종양 세포에서 보고되었다. CD73 발현은 또한 흑색종 및 유방암에서 전이촉진성 표현형과도 연관되었다. 뮤린 CD73 에 결합하는 항체를 사용한 요법이 마우스에서 유방 종양 성장 및 전이를 억제할 수 있다는 것이 보고되었다 (Stagg, et al. (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 104:1547-1552). A2A 수용체의 유전자 결실이 T 세포-의존적 종양 거부를 유도할 수 있다는 것이 밝혀졌다 (Ohta, et al., (2006) Proc Natl Acad Sci USA 103:13132-13137). 종양 세포 상에서 CD73 의 과발현 또는 siRNA 를 사용한 녹-다운은 종양 성장 및 전이를 조절할 수 있다 (Beavis et al (2013 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 110:14711-716; Stagg et al. (2010), 상기; Jin et al. (2010) Cancer Res. 70: 2245-55). CD73-/- 마우스는 이식된 종양 및 자연발생 종양으로부터 보호된다 (Stagg et al. (2010) Cancer Res. 71: 2892-2900). 인간에서, 높은 CD73 발현은 삼중 음성 유방암에 대한 부정적인 예후일 수 있다 (Loi et al. (2013) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 110: 11091-11096).
항-CD73 항체의 개발은 복잡하다. CD73 은 종양 세포 상에서 발현되지만, 면역계의 상이한 세포, 특히 CD4 및 CD8 T 세포, 뿐만 아니라 B 세포 상에서도 발현된다. 하나의 추가의 복잡한 인자는 문헌에 기재된 많은 항체가 그들의 활성 및 작용 방식에서 크게 다르다는 점이다. CD73 과 관련된 많은 초기 보고는 특이성을 결여할 수 있고/있거나 생체내 연구에 너무 독성일 수 있는 소분자 저해제를 사용했다. 항-CD73 항체에 관한 많은 보고는 일반적으로 Fcγ 수용체에 의해 결합될 수 있는 뮤린 아이소타입에 관한 것이어서, 임의의 잠재적인 차단 효과를 Fc-매개되는 효과로부터 분리하기가 어렵다. 더욱 최근에는, 다양한 치료적 항-CD73 항체가 보고되고 있다. 이들 중 일부는 CD73 의 세포내 내재화를 야기함으로써 기능하고, 다른 것들은 막 결합형 CD73 을 상이한 정도의 효능으로 저해하고, 더욱이 가용성 CD73 단백질을 저해하는 능력을 갖거나 갖지 않는다.
서양의 위암 환자의 약 12-20% 가 HER2 종양유전자를 과발현한다 (Jan B et al.; J Clin Pathol 2010 & Tanner M et al.; Ann Oncol 2005). 화학요법과 병용된 트라스투주맙은 진행성 전이성 HER2-양성 질환 환자에서 옵션으로 간주된다. 그러나, 유방암과 달리, 위암에서는 트라스투주맙의 도입으로 생존 중앙값이 1 년을 거의 넘지 않는 질환의 자연사를 바꾸지 못했다. 따라서, 위암 치료에 최대 효능을 제공하는 개선된 치료 요법이 존재한다.
하나의 구현예에서, 본원에서 제공되는 것은 표면에서 HER2 를 발현하는 종양 세포를 특징으로 하는 HER2-양성 암, 선택적으로 위 선암종 또는 위식도 접합부 선암종의 치료를 위한, 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체의 용도이다.
하나의 구현예에서, 본원에서 제공되는 것은 치료가 필요한 개체에서 위암 (예를 들어, 위 선암종 또는 위식도 접합부 선암종) 성장을 감소 또는 저해하는 방법으로서, 개체에게 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체 및 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체 각각의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법이다. 선택적으로, 방법은 개체에게 화학요법제의 치료적 유효량을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 하나의 구현예에서, 암은 HER2-양성 암이다. 하나의 구현예에서, 종양 또는 암은 표면에서 HER2 단백질을 발현하는 종양 세포를 특징으로 한다. 하나의 구현예에서, 종양 또는 암은 표면에서 CD73 단백질을 발현하는 세포를 포함하는 종양 기질을 특징으로 한다.
추가로 본원에서 제공되는 것은 치료가 필요한 개체에서 암, 특히 위암을 치료하는 방법으로서, 개체에게 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체 및 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체 각각의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법이다. 선택적으로, 방법은 개체에게 화학요법제의 치료적 유효량을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 하나의 구현예에서, 종양 또는 암은 표면에서 HER2 단백질을 발현하는 종양 세포를 특징으로 한다. 하나의 구현예에서, 종양 또는 암은 표면에서 CD73 단백질을 발현하는 세포를 포함하는 종양 기질을 특징으로 한다.
추가로 본원에서 제공되는 것은 암, 특히 위암을 갖는 개체를 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체를 이용한 치료에 대해 감작화하는 방법으로서, 개체에게 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법이다. 선택적으로, 방법은 개체에게 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체의 치료적 유효량을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 하나의 구현예에서, 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체는 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체와 동일한 날에 및/또는 그 전에 투여된다.
추가로 본원에서 제공되는 것은 암, 특히 위암을 갖는 개체를 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체 및/또는 화학요법제를 이용한 치료에 대해 감작화하는 방법으로서, 개체가 화학요법제 및 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체로 치료되고 있으며 (또는 치료될 예정이며), 방법이 개체에게 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체를 투여하는 것을 포함하는 방법이다. 하나의 구현예에서, 방법은 개체에게 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체 및 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 하나의 구현예에서, 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체는 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체의 투여와 동일한 날에 및/또는 그 전에, 선택적으로 추가의 화학요법제의 투여와 동일한 날에 및/또는 그 전에 투여된다.
임의의 구현예에서, 항-CD73 항체의 제 1 투여는 항-HER2 항체의 제 1 투여 전에 실시된다.
하나의 구현예에서, 치료는 항-HER2 항체의 복수의 투여 및 항-CD73 항체의 복수의 투여를 포함하며, 항-CD73 항체의 각각의 투여는 항-HER2 항체의 투여 1 시간 내지 7 일 전에 실시된다. 하나의 구현예에서, 치료는 항-HER2 항체의 복수의 투여 및 항-CD73 항체의 복수의 투여를 포함하며, 항-HER2 항체의 각각의 투여 1 시간 내지 7 일 전에 항-CD73 항체의 투여가 선행한다. 예를 들어, 항-CD73 항체는 항-HER2 항체의 투여와 동일한 날에 (예를 들어 항-HER2 항체의 투여 1-12 시간 전에) 또는 선행하는 1 주 내에 투여된다. 하나의 구현예에서, 항-CD73 항체의 복수의 투여 각각은 항-HER2 항체의 투여와 동일한 날에 (예를 들어 항-HER2 항체의 투여 1-12 시간 전에) 또는 약 1 주 (예를 들어, 7 일) 전에 실시된다. 하나의 구현예에서, 항-HER2 항체의 복수의 투여 각각은 항-CD73 항체의 투여와 동일한 날에 (예를 들어 항-CD73 항체의 투여 1-12 시간 후에) 또는 약 1 주 (예를 들어, 7 일) 후에 실시된다.
화학요법제를 포함하는 병용 치료의 임의의 구현예에서, 항-CD73 항체의 제 1 투여는 화학요법제의 제 1 투여 전에 (예를 들어, 선택적으로 추가로 항-HER2 항체의 제 1 투여 전에) 실시된다고 명시될 수 있다.
하나의 구현예에서, 치료는 항-HER2 항체의 복수의 투여, 화학요법제의 복수의 투여 및 항-CD73 항체의 복수의 투여를 포함하며, 항-CD73 항체의 각각의 투여는 항-HER2 항체의 투여 1 시간 내지 7 일 전에 실시되고, 추가로 항-CD73 항체의 각각의 투여는 화학요법제의 투여 1 시간 내지 7 일 전에 실시된다. 하나의 구현예에서, 치료는 항-HER2 항체의 복수의 투여, 화학요법제의 복수의 투여 및 항-CD73 항체의 복수의 투여를 포함하며, 항-HER2 항체의 각각의 투여 1 시간 내지 7 일 전에 항-CD73 항체의 투여가 선행하고, 화학요법제의 각각의 투여 1 시간 내지 7 일 전에 항-CD73 항체의 투여가 선행한다. 예를 들어, 항-CD73 항체는 화학요법제의 투여와 동일한 날에 (예를 들어 화학요법제의 투여 1-12 시간 전에) 또는 선행하는 1 주 내에 투여된다. 하나의 구현예에서, 항-CD73 항체의 복수의 투여 각각은 화학요법제의 투여와 동일한 날에 (예를 들어 화학요법제의 투여 1-12 시간 전에) 또는 약 1 주 (예를 들어, 7 일) 전에 실시된다. 하나의 구현예에서, 화학요법제의 복수의 투여 각각 및 항-HER2 항체의 투여 각각은 항-CD73 항체의 투여와 동일한 날에 (예를 들어 항-CD73 항체의 투여 1-12 시간 후에) 또는 항-CD73 항체의 투여 약 1 주 (예를 들어, 7 일) 후에 실시된다.
선택적으로, 항-HER2 항체의 복수의 투여 및 항-CD73 항체의 복수의 투여는 동일한 날에 실시된다. 하나의 구현예에서, 항-HER2 항체는 3 주 마다 피하 투여되고 항-CD73 항체는 3 주 마다 투여되며, 항-HER2 항체 및 항-CD73 항체는 동일한 날에 투여된다. 하나의 구현예에서, 항-HER2 항체는 3 주 마다 정맥내 투여되고 항-CD73 항체는 3 주 마다 투여되며, 항-HER2 항체 및 항-CD73 항체는 동일한 날에 투여된다.
하나의 구현예에서, 화학요법제의 복수의 투여 및 항-HER2 항체의 복수의 투여는 각각, 항-HER2 항체 및 화학요법제는 동일한 날에 투여되지 않도록 (예를 들어 항-HER2 항체 및 화학요법제의 투여는 적어도 1 주 만큼 분리되고), 그리고 항-HER2 항체의 각각의 투여 및 화학요법제의 각각의 투여 1 시간 내지 7 일 전에 항-CD73 항체의 투여가 선행하도록, 3 주 마다 엇갈리는 일정으로 투여된다.
임의의 구현예에서, 종양 또는 암은 표면에서 HER2 단백질을 발현하는 (예를 들어, 과발현하는) 종양 세포를 특징으로 한다. 하나의 구현예에서, 종양 또는 암은 표면에서 CD73 단백질을 발현하는 세포를 포함하는 종양 기질을 특징으로 한다.
임의의 구현예에서, 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체는 인간 CD73 폴리펩티드에 특이적으로 결합할 수 있다. 하나의 구현예에서, 항체는 항체 단편이다. 하나의 구현예에서, 항체는 전장 항체이다. 하나의 구현예에서, 항체는 가용성 인간 CD73 폴리펩티드의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시킬 수 있다. 하나의 구현예에서, 항체는 CD73 폴리펩티드 이합체에 2가 방식으로 결합한다; 예를 들어 항체가 CD73 폴리펩티드 이합체에 대해 10-배 초과의 몰 과량으로 제공되는 경우 항체는 가용성 인간 이합체성 CD73 폴리펩티드의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시킬 수 있다.
하나의 구현예에서, 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체는 트라스트주맙의 중 및 경쇄 CDR 1, 2 및 3 영역을 포함한다. 하나의 구현예에서, CDR 은 Kabat 넘버링에 따라 확인된다. 하나의 구현예에서, 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체는 트라스트주맙의 중 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 구현예에서, 화학요법제는 종양 세포로부터 ATP 의 세포외 방출을 유도하는 작용제이며, 예를 들어 화학요법제는 면역원성 암 세포 사망을 유도할 수 있다. 하나의 구현예에서, 화학요법제는 탁산, 예를 들어 파클리탁셀 또는 이의 유사체이다. 하나의 구현예에서, 화학요법제는 캄프토테신 유사체 또는 이의 유도체, 예를 들어 SN-38, 엑사테칸 또는 엑사테칸 유도체이다 (예를 들어, DX-8951 유도체, DXd; Ogitano et al. (2016) Cancer Sci 107 (2016) 1039-1046 참고). 하나의 구현예에서, 화학요법제 (예를 들어 파클리탁셀) 는 자유 화학요법제로서 투여된다 (또다른 작용제 (예를 들어 항체 또는 활성제) 에 접합 또는 공유 결합되지 않는다). 또다른 구현예에서, 화학요법제 (예를 들어, 캄프토테신 유사체 또는 유도체) 는 화학요법제가 HER2 단백질에 결합하는 항체에 접합 (예를 들어 공유 결합) 되어 있는 항체 약물 접합체 (ADC) 로서 투여된다.
하나의 양태에서, 제공되는 것은 HER2-양성 암 (예를 들어, 위암) 을 갖는 개체에게 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체 및 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체를, 선택적으로 추가의 화학요법제, 예를 들어 탁산과의 조합으로, 투여하는 것을 포함하는 치료법이다. 하나의 구현예에서, HER2-양성 암은 일반적으로 종양 세포의 표면에서 HER2 발현을 특징으로 하는 것으로 알려진 암이다. 하나의 구현예에서, HER2-양성 암은 일반적으로 종양 또는 종양 환경에서 (예를 들어 종양 세포에서 또는 종양 기질 조직 내 세포에서) 가용성 CD73 단백질 및/또는 CD73-발현 세포의 존재를 특징으로 하는 것으로 알려진 암이다. 하나의 구현예에서, HER2-양성 암은, 예를 들어 항-HER2 항체를 사용하여 면역조직화학 (IHC) 에 의해 평가되는, HER2-발현 종양 세포의 존재를 특징으로 하며, 선택적으로 종양은 기준 (예를 들어 건강한 조직) 에 비해 증가된 수 또는 빈도의 HER2-발현 세포 및/또는 기준 (예를 들어 건강한 조직) 에 비해 더 강한 HER2 염색 강도를 포함한다. 하나의 구현예에서, 암은, 예를 들어 항-CD73 항체를 사용하여 면역조직화학에 의해 평가되는, 종양 기질 조직 중 CD73-발현 종양 세포 및/또는 CD73-발현 세포를 특징으로 하며, 선택적으로 종양은 기준 (예를 들어 건강한 조직) 에 비해 증가된 수 또는 빈도의 CD73-발현 세포 및/또는 기준 (예를 들어 건강한 조직) 에 비해 더 강한 CD73 염색 강도를 포함한다.
하나의 구현예에서, HER2-양성 암을 갖는 개체는 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체, 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체, 및 종양 세포로부터 ATP 의 세포외 방출을 유도하는 화학요법제, 특히 면역원성 암 세포 사망을 유도하는 작용제 또는 치료제 (예를 들어, 탁산 작용제, 파클리탁셀) 로 치료된다.
또다른 양태에서, 본원에서 제공되는 것은 HER2-양성 위암을 갖는 개체를 치료하는 방법으로서, HER2-양성 위암은 HER2-발현 세포를 포함하는 것으로 확인된 종양을 특징으로 하며, 방법은 개체에게 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 결합 및 저해하는 수단 (또는 그러한 수단을 포함하는 약제) 을 투여하는 것을 포함하는 방법이다. 선택적으로, 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 결합 및 저해할 수 있는 항체는 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체, 및 선택적으로 추가로 종양 세포로부터 ATP 의 세포외 방출을 유도하는 화학요법제, 특히 면역원성 암 세포 사망을 유도하는 작용제 또는 치료제 (예를 들어, 탁산 작용제, 파클리탁셀) 와의 조합으로 투여된다.
또다른 양태에서, 본원에서 제공되는 것은, CD73 에 결합하는 항체로 암을 갖는 개체를 치료하는 방법에서, HER2-발현 세포를 포함하는 것으로 확인된 위 종양을 특징으로 하는 HER2-양성 위암을 갖는 개체를 식별하는 것 및 개체에게 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 결합 및 저해할 수 있는 항체를 투여하는 것을 포함하는 개선이다. 선택적으로, 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 결합 및 저해할 수 있는 항체는 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체, 및 선택적으로 추가로 종양 세포로부터 ATP 의 세포외 방출을 유도하는 화학요법제, 특히 면역원성 암 세포 사망을 유도하는 작용제 또는 치료제 (예를 들어, 탁산 작용제, 파클리탁셀) 와의 조합으로 투여된다.
또다른 양태에서, 본원에서 제공되는 것은, CD73 에 결합하는 항체로 암을 갖는 개체를 치료하는 방법에서, HER2-발현 세포를 포함하는 것으로 확인된 위 종양을 특징으로 하는 HER2-양성 위암을 갖는 개체를 식별하는 것 및 개체에게, 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 결합 및 저해할 수 있는 항체에 더하여, 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체, 및 선택적으로 추가로 종양 세포로부터 ATP 의 세포외 방출을 유도하는 화학요법제, 특히 면역원성 암 세포 사망을 유도하는 작용제 또는 치료제 (예를 들어, 탁산 작용제, 파클리탁셀) 를 투여하는 것을 포함하는 개선이다.
본원에서의 임의의 구현예에서, HER2-양성 위암을 갖는 개체를 식별하는 것은 생물학적 샘플 내의 암 세포가 IHC 및/또는 FISH 에 의해 확인되는 HER2 를 발현하는지 여부를 평가하는 것을 포함할 수 있다.
본원에서의 임의의 구현예에서, HER2-양성 암을 갖는 개체는 종양 세포로부터 ATP 의 세포외 방출을 유도하는 화학요법제, 특히 면역원성 암 세포 사망을 유도하는 작용제 또는 치료제 (예를 들어, 탁산 작용제, 파클리탁셀) 를 이용한 사전 치료 (예를 들어 적어도 하나의 사전 과정 또는 주기의 치료) 를 받은 적이 있다. 선택적으로, 개체는 그러한 사전 치료 후에 재발한 종양 또는 암을 갖는다.
본원에서의 임의의 구현예에서, HER2-양성 암을 갖는 개체는 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체를 이용한 사전 치료 (예를 들어 적어도 하나의 사전 과정 또는 주기의 치료) 를 받은 적이 있다. 선택적으로, 개체는 그러한 사전 치료 후에 재발한 종양 또는 암을 갖는다.
추가의 양태에서, 본 공개는 항-CD73 항체를 투여하기 위한 유리한 2 주 1 회 또는 3 주 1 회 치료 요법을 제공한다; 이러한 요법은 SEQ ID NO: 43 의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 42 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 갖는 항체, 또는 이의 기능-보존적 변이체를 이용하는 치료에 특히 유용할 수 있다. 이러한 치료 요법에서 투여되는 항-CD73 항체는 다른 치료제 (예를 들어 화학요법제 및/또는 항-HER2 항체) 와의 병용 치료로 또는 다른 치료제와의 병용 치료 없이 (단일요법으로서) 투여될 수 있다. 하나의 양태에서, 제공되는 것은 개체에서 항-종양 면역 반응을 증진, 강화 또는 유도하는 방법, 개체에서 면역억제 (예를 들어 종양-매개되는 면역억제) 를 완화시키는 방법, 종양 미세환경에서 CD73 의 활성을 중화시키는 방법, 종양 미세환경에서 아데노신의 생성 및/또는 농도를 감소시키는 방법, 종양 세포, CD4 T 세포, CD8 T 세포 및/또는 B 세포에 의해 발현되는 CD73 의 활성을 중화시키는 방법, 개체에서 림프구 (예를 들어, T 세포) 의 활성을 강화시키는 방법, 또는 림프구 (예를 들어, T 세포) 의 활성을 회복시키는 방법, 및/또는 개체에서 림프구 (예를 들어, T 세포) 활성의 아데노신-매개되는 저해를 완화시키는 방법으로서, 방법은 개체에게 인간 CD73 단백질에 결합하고 그것의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 본원에서 개시되는 항체 (예를 들어 SEQ ID NO: 43 의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 42 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 항체 단편, 또는 이의 기능-보존적 변이체) 를 투여하는 것을 포함하며, 항체는 개체에게 (a) 2 주에 한 번 고정된 도스 (체중 또는 표면적과 관계 없이) 1500-3600 ㎎ 로, 선택적으로 도스 1500 ㎎ 로, 선택적으로 도스 2400 ㎎ 로, 또는 (b) 3 주에 한 번 고정된 도스 2000-3000 ㎎ 로, 선택적으로 도스 2100 ㎎, 2200 ㎎, 2300 ㎎, 2400 ㎎, 2500 ㎎, 2600 ㎎, 2700 ㎎, 2800 ㎎, 2900 ㎎ 또는 3000 ㎎ 로 투여되는 방법이다.
하나의 양태에서, 제공되는 것은 개체에서 암을 치료하는 방법으로서, 방법은 개체에게 인간 CD73 단백질에 결합하고 그것의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체를 투여하는 것을 포함하며, 항체는 SEQ ID NO: 43 의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 42 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 항체 단편, 또는 이의 기능-보존적 변이체이며, 항체는 개체에게 2 주에 한 번 고정된 도스 (체중 또는 표면적과 관계 없이) 1500-3600 ㎎ 로, 선택적으로 도스 1500 ㎎ 로, 선택적으로 도스 2400 ㎎ 로, 또는 3 주에 한 번 고정된 도스 2000-3000 ㎎ 로, 선택적으로 도스 2100 ㎎, 2200 ㎎, 2300 ㎎, 2400 ㎎, 2500 ㎎, 2600 ㎎, 2700 ㎎, 2800 ㎎, 2900 ㎎ 또는 3000 ㎎ 로 투여되는 방법이다.
이들 양태는 본원에서 제공되는 설명에서 보다 충분히 기재되고, 추가의 양태, 특색 및 이점이 이로부터 자명할 것이다.
도 1 좌측 패널: 진단시 (임의의 치료 전) 위 일차 종양에서의 CD73 염색 강도. 스택드 바 (Staked bars) 는 CD73 을 발현하는 종양 세포 (TC) 및 기질 세포 (SC) 에 대한 CD73 강도 점수의 분포를 보여준다. 강도 점수는 1 내지 3 이다. 도 1 우측 패널: Her2 상태에 따른 진단시 위 종양 세포에서의 CD73 발현. 스택드 바는 종양 세포에 대한 CD73 비율 점수의 분포를 보여준다. 통계적 분석: 비모수 만 휘트니 검증 (* p=0.0343). 점수 0 = 양성 세포 없음; 점수 1 = 1-9% 의 양성 세포; 점수 2 = 10-50% 의 양성 세포; 점수 3 = 51-80% 의 양성 세포, 및 점수 4 = >80% 양성 세포.
도 2: 네오아주반트 화학요법 전 및 후의 CD73-발현 위 종양 세포의 비교. 스택드 바 (좌측 패널) 는 종양 세포에 대한 CD73 비율 점수의 분포를 보여주고, 바이올린 플롯 (우측 패널) 은 CD73+ 종양 세포의 백분율을 보여준다. 점수 0 = 양성 세포 없음; 점수 1 = 1-9% 의 양성 세포; 점수 2 = 10-50% 의 양성 세포; 점수 3 = 51-80% 의 양성 세포, 및 점수 4 = >80% 양성 세포.
도 3: 네오아주반트 화학요법 전 및 후의 CD73-발현 위 기질 세포의 비교. 스택드 바 (좌측 패널) 는 기질 세포에 대한 CD73 비율 점수의 분포를 보여주고, 바이올린 플롯 (우측 패널) 은 CD73+ 기질 세포의 백분율을 보여준다. 점수 0 = 양성 세포 없음; 점수 1 = 1-9% 의 양성 세포; 점수 2 = 10-50% 의 양성 세포; 점수 3 = 51-80% 의 양성 세포, 및 점수 4 = >80% 양성 세포.
도 4: 네오아주반트 화학요법 전 및 후의 CD73-발현 위 기질 면역 세포의 비교. 스택드 바 (좌측 패널) 는 기질 면역 세포에 대한 CD73 비율 점수의 분포를 보여주고, 바이올린 플롯 (우측 패널) 은 CD73+ 기질 면역 세포의 백분율을 보여준다. 점수 0 = 양성 세포 없음; 점수 1 = 1-9% 의 양성 세포; 점수 2 = 10-50% 의 양성 세포; 점수 3 = 51-80% 의 양성 세포, 및 점수 4 = >80% 양성 세포.
도 5A-5C 는 T 세포 증식이 모든 항-CD73 Ab 에 의해 회복된다는 것을 보여준다. 도 5A 는 T 세포 아집단 증식의 제어 및 AMP 에 의한 이의 저해를 보여준다. 도 5B 는 CD4+ 및 CD8+ T 세포 증식을 회복시키는 H4+Lx 항체 및 부모 항체 HPLP 의 효능을 보여준다. 도 5C 는 CD4+ 및 CD8+ T 세포 증식을 회복시키는 2H4+2Lx 항체 (2L1, 2L2, 2L3 또는 2L4 사슬과 조합된 2H4+ 사슬) 및 부모 항체 2HP2LP 의 효능을 보여준다. 데이터는 듀플리케이트 +/- 표준 편차로서 표현된다.
도 6A 및 6B 는 인간화된 변이체에 의해 회복된 T 세포 증식이 2 개의 대표적인 인간 공여자에서 각각 재현가능함을 보여준다. CD4 및 CD8 T 세포 증식을 회복시키는 2H4+2Lx 항-CD73 항체 변이체의 효능이 제시된다. 데이터는 듀플리케이트 +/- 표준 편차로서 표현된다.
도 7 은 CD4+ T 세포 증식이 ATP 에 의해 저해되고 2H4+2Lx 항체 변이체로 회복됨을 보여준다. CD4+ T 세포 증식의 제어 및 100 μM 의 ATP 에 의한 저해는, 2 개의 대표적인 공여자, D795 (도 7, 상부 패널) 및 D664 (도 7, 하부 패널) 에 대해 시험된 것으로 보여진다. 데이터는 듀플리케이트 +/- 표준 편차로서 표현된다.
도 8 은 항-CD73 항체에 관한 약동학/약역학 모델을 보여준다. 모델은 다음을 포함한다: 중심 및 주변 구획에 대한 구획간 클리어런스 (Q) 및 분포 부피 (각각 Vc 및 Vp) 를 특징으로 하는, 2-구획 분포 (혈액으로부터 주변로); 단일 클리어런스 파라미터 CL 를 특징으로 하는, 중심 구획으로부터의 1 차 제거; Vmax 및 Km 를 특징으로 하는, 중심 구획으로부터의 미카엘리스 멘텐 (Michaelis Menten) 가포화 제거. PD 모델에 대한 CD73 포화 수준은 Km 으로부터 예측되며, Km 은 50% 수용체 점유율을 초래하는 항-CD73 항체 혈청 농도인 EC50 를 나타낸다.
도 9 는 시노몰구스 원숭이에서 비-GLP 및 GLP 독성학 연구에서 예측된 및 관찰된 항-CD73 항체 혈청 농도의 오버레이를 보여준다. 죄측 패널은 비-GLP 독성학 연구로부터의 관찰된 PK 데이터에 핏팅된 모델을 나타내고; 우측 패널은 GLP 독성학 연구로부터의 관찰된 PK 데이터에 핏팅된 모델을 나타내고; 기호는 관찰된 데이터를 나타내고; 실선은 모델 예측을 나타낸다.
도 10A 는 2 주 1 회 투여에 대한 예측된 항-CD73 항체 혈청 농도 -시간 및 CD73 점유율 -시간 프로파일을 보여준다. 도 10B 는 3 주 1 회 투여에 대한 예측된 항-CD73 항체 혈청 농도를 보여준다. 죄측 패널은 인간에서 예측된 항-CD73 항체 PK 를 보여준다. 우측 패널은 인간에서 예측된 CD73 수용체 점유율을 보여준다. EC50 은 PK 모델링에 의해 추정된 미카엘리스 멘텐 상수 Km 이었다. EC90 은 EC50 으로부터 계산했다. 아래에서부터 위까지의 선은 항-CD73 항체의 증가하는 투여량에 대응한다.
발명의 상세한 설명
정의
본 명세서에서 사용되는 "한" 또는 "하나" 는 하나 이상을 의미할 수 있다. 청구항(들)에서 사용시, "포함하는" 이라는 단어와 함께 사용될 때, 단어 "한" 또는 "하나" 는 하나 또는 하나 초과를 의미할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 "다른" 은 적어도 제 2 또는 그 이상을 의미할 수 있다.
"포함하는" 이 사용되는 경우, 이것은 선택적으로는 "본질적으로 이루어지는" 또는 "이루어지는" 으로 대체될 수 있다.
NT5E 유전자에 의해 코딩되는, 엑토-5'-뉴클레오티다아제 및 5-프라임-리보뉴클레오티드 포스포히드롤라제, EC 3.1.3.5 로도 공지된 인간 CD73 은 5'-뉴클레오티다아제, 특히 AMP-뉴클레오시다제, NAD-뉴클레오시다제, 및 NMN-뉴클레오시다제 활성을 나타낸다. CD73 은 중성 pH 에서 퓨린 5-프라임 모노뉴클레오티드의 뉴클레오시드로의 전환을 촉매작용하며, 바람직한 기질은 AMP 이다. 효소는 원형질 막의 외면에 글리코실 포스파티딜 이노시톨 연결기에 의해 결합된 2 개의 동일한 70-kD 서브유닛의 이합체로 이루어진다. 아미노산 1-26 에서의 신호 서열을 포함하여, 인간 CD73 전구단백질 (단량체) 의 아미노산 서열은 Genbank 에서 수탁 번호 NP_002517 (이의 전체 공개내용은 본원에 참조로 포함된다) 하에 제시되어 있으며, 다음과 같다:
Figure pct00001
본 명세서의 문맥에서, "CD73 의 효소 활성을 중화시키다" 는 CD73 의 5'-뉴클레오티다아제 (5'-엑토뉴클레오티다아제) 활성이 저해되는 과정을 의미한다. 이것은 특히 아데노신의 CD73-매개되는 생성의 저해, 즉 AMP 의 아데노신으로의 CD73-매개되는 이화작용의 저해를 포함한다. 이것은 예를 들어 직접적으로 또는 간접적으로, AMP 의 아데노신으로의 전환을 저해하는 시험 화합물의 능력을 측정하는 무세포 검정에서 측정할 수 있다. 하나의 구현예에서, 항체 조제물은 예를 들어 본원에 기재된 검정을 참조하여, AMP 의 아데노신으로의 전환에서 적어도 50% 감소, AMP 의 아데노신으로의 전환에서 적어도 70% 감소, 또는 AMP 의 아데노신으로의 전환에서 적어도 80% 감소를 야기한다.
이 전체 명세서 내에서 항-CD73 항체에 관하여 "암의 치료" 등이 언급될 때마다, 이는 다음을 의미한다: (a) 암의 치료 방법으로서, 항-CD73 항체 (바람직하게는 약제학적으로 허용가능한 담체 재료 중) 를 이러한 치료를 필요로 하는 개체, 포유동물, 특히 인간에게, 암의 치료를 허용하는 도스 (치료적 유효량) 로, 바람직하게는 본원에 명시된 도스 (양) 로 (적어도 하나의 치료 동안에) 투여하는 단계를 포함하는 방법; (b) 암의 치료를 위한 항-CD73 항체의 용도, 또는 상기 치료에서 (특히 인간에서) 이용하기 위한 항-CD73 항체; (c) 암의 치료를 위한 약제학적 제제의 제조를 위한 항-CD73 항체의 용도, 약제학적으로 허용가능한 담체와 항-CD73 항체를 혼합하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 위한 약제학적 제제의 제조를 위한 항-CD73 항체를 이용하는 방법, 또는 암의 치료에 적절한 항-CD73 항체의 유효 도스를 포함하는 약제학적 제제; 또는 (d) 본 출원이 출원되는 국가에서 특허받을 수 있는 대상에 따른, a), b), 및 c) 의 임의 조합.
본 명세서에서 사용되는 용어 "항체" 는 폴리클로날 및 모노클로날 항체를 의미한다. 중쇄의 불변 도메인의 유형에 따라서, 항체는 5종의 주요 클래스: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 중 하나로 지정된다. 이들 중 몇몇은 서브클래스 또는 아이소타입, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 등으로 더욱 분류된다. 예시적인 면역글로불린 (항체) 구조 유닛은 사합체를 포함한다. 각각의 사합체는 폴리펩티드 사슬의 2 개의 동일한 쌍으로 구성되고, 각각의 쌍은 하나의 "경" 쇄 (약 25 kDa) 및 하나의 "중" 쇄 (약 50-70 kDa) 를 갖는다. 각각의 사슬의 N-말단은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100개 내지 110개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 한정한다. 용어 가변 경쇄 (VL) 및 가변 중쇄 (VH) 은 각각 이들 경쇄 및 중쇄를 의미한다. 상이한 클래스의 면역글로불린에 해당되는 중쇄 불변 도메인은 각각 "알파", "델타", "엡실론", "감마" 및 "뮤" 라고 한다. 상이한 클래스의 면역글로불린의 서브유닛 구조 및 3차 입체형태는 충분히 공지되어 있다. IgG 는 그들이 생리학적 상황에서 가장 일반적인 항체이기 때문에 그리고 그들이 실험실 상황에서 가장 쉽게 만들어지기 때문에 본 명세서에서 적용되는 예시적인 클래스의 항체이다. 선택적으로는 항체는 모노클로날 항체이다. 항체의 특정한 예는 인간화, 키메라, 인간, 또는 아니면-인간-적합화 항체이다. "항체" 는 또한 본 명세서에 기술된 임의의 항체의 임의 단편 또는 유도체를 포함한다.
용어 "특이적으로 결합하다" 는 바람직하게는 항체가 단백질의 재조합 형태, 그 안의 에피토프, 또는 단리된 표적 세포의 표면 상에 존재하는 천연 단백질을 사용하여 평가하게 되는, 결합 파트너, 예를 들어 CD73 과의 경쟁적 결합 검정에서 결합할 수 있다는 것을 의미한다. 경쟁적 결합 검정 및 특이적 결합을 확인하기 위한 다른 방법은 아래에서 추가로 설명되고 당해 기술분야에 잘 알려져 있다.
항체가 특정한 모노클로날 항체 "와 경쟁한다" 라고 할 때, 이것은 항체가 재조합 CD73 분자 또는 표면 발현된 CD73 분자를 사용하는 결합 검정에서 모노클로날 항체와 경쟁한다는 것을 의미한다. 예를 들어, 시험 항체가 결합 검정에서 CD73 폴리펩티드 또는 CD73-발현 세포로의 기준 항체의 결합을 감소시키는 경우에, 항체는 기준 항체와 각각 "경쟁한다" 라고 한다.
본 명세서에서 사용하는 용어 "친화도" 는 항체의 에피토프에 결합하는 강도를 의미한다. 항체의 친화도는 [Ab]×[Ag]/[Ab-Ag] 로서 정의되는 해리 상수 Kd로 제공되고, 여기서 [Ab-Ag] 는 항체-항원 복합체의 몰 농도이고, [Ab] 는 미결합된 항체의 몰 농도이고 [Ag] 는 미결합된 항원의 몰 농도이다. 친화도 상수 Ka 는 1/Kd 로 정의된다. mAb 의 친화도를 확인하기 위한 방법은 Harlow, et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988), Coligan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y. (1992, 1993), 및 Muller, Meth. Enzymol. 92:589-601 (1983) 에서 확인할 수 있고, 이들은 전체로 참조하여 본 명세서에 편입된다. mAb 의 친화도를 확인하기 위해 당분야에 잘 알려진 하나의 표준 방법은 표면 플라스몬 공명 (SPR) 스크리닝 (예컨대 BIAcore™ SPR 검정 장치를 사용한 검정에 의함) 의 사용이다.
본 명세서에 문맥 내에서, "결정부" 는 폴리펩티드 상의 상호작용 또는 결합의 부위를 표시한다.
용어 "에피토프" 는 항원성 결정부를 의미하고, 항체가 결합하는 항원 상의 면적 또는 영역이다. 단백질 에피토프는 결합에 직접적으로 관여되는 아미노산 잔기를 비롯하여 특이적 항원 결합 항체 또는 펩티드에 의해 효과적으로 차단되는 아미노산 잔기, 즉 항체의 "풋프린트" 내 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 이는, 예를 들어 항체 또는 수용체와 조합될 수 있는 복잡한 항원 분자 상의 가장 간단한 형태 또는 가장 작은 구조적 구역이다. 에피토프는 선형일 수 있거나 또는 입체형태/구조일 수 있다. 용어 "선형 에피토프" 는 아미노산의 선형 서열 (1차 구조) 상에서 인접하는 아미노산 잔기로 구성된 에피토프로서 정의된다. 용어 "입체형태적 또는 구조적 에피토프" 는 모두 인접하는 것은 아니고 따라서 분자의 폴딩에 의해서 서로 인접하게 되는 아미노산의 선형 서열의 분리된 부분을 나타내는 아미노산 잔기로 구성된 에피토프로서 정의된다 (2차, 3차 및/또는 4차 구조). 입체형태 에피토프는 3차 구조에 의존적이다. 그러므로 용어 "입체형태적" 은 종종 "구조적" 과 상호교환적으로 사용된다.
CD73-발현 세포에 대한 용어 "고갈되다" 또는 "고갈되는" 은 샘플 또는 대상체에 존재하는 이러한 CD73-발현 세포의 개수에 부정적인 영향을 미치도록, 사멸, 제거, 용해 또는 이러한 사멸, 제거 또는 용해의 유도를 야기시키는 과정, 방법 또는 화합물을 의미한다.
"세포내 내재화" 와 상호교환적으로 사용되는 용어 "내재화" 는 세포의 세포외 표면으로부터 세포의 세포내 표면으로 분자의 전좌 과정과 연관된 분자적, 생화학적 및 세포적 사건을 의미한다. 분자의 세포내 내재화를 담당하는 과정은 잘 알려져 있고, 특히 세포외 분자 (예컨대 호르몬, 항체 및 소형 유기 분자); 막-연합된 분자 (예컨대 세포-표면 수용체); 및 세포외 분자에 결합된 막-연합된 분자의 복합체 (예를 들어, 경막 수용체에 결합된 리간드 또는 막-연합된 분자에 결합된 항체) 의 내재화를 포함할 수 있다. 따라서, "내재화의 유도 및/또는 증가 " 는 세포내 내재화가 개시되고/되거나 세포내 내재화의 속도 및/또는 정도가 증가되는 사건을 포함한다.
용어 "작용제" 는 본 명세서에서 화학적 화합물, 화학적 화합물의 혼합물, 생물학적 거대 분자, 또는 생물학적 재료로부터 만들어진 추출물을 의미하고자 사용된다. 용어 "치료제" 는 생물학적 활성을 갖는 작용제를 의미한다.
본원에서의 목적을 위해, "인간화된" 또는 "인간" 항체는 하나 이상의 인간 면역글로불린의 불변 및 가변 골격 영역이 동물 면역글로불린의 결합 영역, 예를 들어, CDR 과 융합되는 항체를 나타낸다. 이러한 항체는 결합 영역이 유래되는 비인간 항체의 결합 특이성을 유지하지만, 비인간 항체에 대한 면역 반응은 피하도록 디자인된다. 이러한 항체는 항원성 공격에 대응하여 특이적 인간 항체를 생성하도록 "조작된" 유전자이식 마우스 또는 다른 동물로부터 수득될 수 있다 (예를 들어, Green et al. (1994) Nature Genet 7:13; Lonberg et al. (1994) Nature 368:856; Taylor et al. (1994) Int Immun 6:579 을 참조하고, 이들의 전체 교시 내용은 참조로 본 명세서에 편입됨). 완전한 인간 항체는 또한 유전자 또는 염색체 형질감염 방법을 비롯하여, 파지 디스플레이 기술에 의해 구축될 수 있고, 이들 기술 모두는 당분야에 공지되어 있다 (예를 들어, McCafferty et al. (1990) Nature 348:552-553 참조). 인간 항체는 또한 시험관내 활성화된 B 세포에 의해 생성될 수도 있다 (예를 들어, 미국 특허 제5,567,610호 및 제5,229,275호를 참조하고, 이들은 그들 전문이 참조로 본 명세서에 편입됨).
본 명세서에서 사용시 용어 "과가변 영역" 은 항원 결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 의미한다. 일반적으로 과가변 영역은 "상보성 확인 영역" 또는 "CDR" 유래 아미노산 잔기 (예를 들어, 경쇄 가변 도메인의 잔기 24-34 (L1), 50-56 (L2) 및 89-97 (L3), 및 중쇄 가변 도메인의 31-35 (H1), 50-65 (H2) 및 95-102 (H3); Kabat et al. 1991) 및/또는 "과가변 루프" 유래 잔기 (예를 들어, 경쇄 가변 도메인의 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2) 및 91-96 (L3), 및 중쇄 가변 도메인의 26-32 (H1), 53-55 (H2) 및 96-101 (H3); Chothia and Lesk, J. Mol. Biol 1987;196:901-917), 또는 항원 결합을 담당하는 필수 아미노산을 확인하기 위한 유사한 시스템을 포함한다. 전형적으로, 이 영역 내 아미노산 잔기의 넘버링은 Kabat et al., 상동에 기술된 방법으로 수행된다. 본 명세서에서 "Kabat 위치", "Kabat 로 넘버링된 가변 도메인 잔기" 및 Kabat 에 따른" 과 같은 어구는 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 대한 이러한 넘버링 체계를 의미한다. Kabat 넘버링 체계를 사용하여, 펩티드의 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 CDR 의 단축 또는 그로의 삽입에 상응하는 소수의 또는 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 CDR H2 의 잔기 52 이후에 단일 아미노산 삽입 (Kabat 에 따른 잔기 52a) 및 중쇄 FR 잔기 82 이후에 삽입된 잔기 (예를 들어, Kabat 에 따른 잔기 82a, 82b, 및 82c 등) 를 포함할 수 있다. 잔기의 Kabat 넘버링은 "표준" Kabat 넘버링 서열과 항체의 서열의 상동성 영역에서의 정렬에 의해 소정 항체에 대해 확인될 수 있다.
본 명세서에서 "골격" 또는 "FR" 잔기란 CDR 로서 정의된 그들 영역을 제외한 항체 가변 도메인의 영역을 의미한다. 각각의 항체 가변 도메인 골격은 CDR 에 의해 분리되어진 인접된 영역으로 더욱 세분될 수 있다 (FR1, FR2, FR3 및 FR4).
용어 "Fc 도메인", "Fc 부분" 및 "Fc 영역" 은 항체 중쇄의 C-말단 단편, 예를 들어, 인간 γ (감마) 중쇄의 대략 아미노산 (aa) 230 내지 대략 aa 450 또는 다른 유형의 항체 중쇄 (예를 들어, 인간 항체의 경우 α, δ, ε 및 μ) 또는 이의 천연 발생 알로타입에서의 이의 대응 서열을 의미한다. 달리 명시하지 않으면, 면역글로불린에 대해 일반적으로 허용되는 Kabat 아미노산 넘버링이 본 개시 내용 전반에서 사용된다 (Kabat et al. (1991) Sequences of Protein of Immunological Interest, 5th ed., United States Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, MD 참고).
용어 "단리된", "정제된" 또는 "생물학적으로 순수한" 은 이의 천연 상태에서 존재하는 대로 정상적으로 이것을 수반하는 성분이 실질적으로 또는 본질적으로 없는 물질을 의미한다. 순도 및 균질성은 전형적으로 분석 화학 기술 예컨대 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 또는 고성능 액상 크로마토그래피를 사용하여 확인된다. 조제물에 존재하는 우세한 종의 단백질이 실질적으로 정제된다.
용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질" 은 아미노산 잔기의 중합체를 의미하기 위해 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 이 용어는 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 천연 발생 아미노산의 인공 화학 모방체인 아미노산 중합체를 비롯하여, 천연 발생 아미노산 중합체 및 비천연 발생 아미노산 중합체에 적용된다.
예를 들어, 세포, 또는 핵산, 단백질, 또는 벡터에 대해서 사용시 용어 "재조합" 은 세포, 핵산, 단백질 또는 벡터가 이종성 핵산 또는 단백질의 도입 또는 천연 핵산 또는 단백질의 변경에 의해 변형되었거나, 또는 세포가 그렇게 변형된 세포로부터 유래된다는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들어, 재조합 세포는 세포의 천연 (비재조합) 형태 내에 존재하지 않는 유전자를 발현하거나, 또는 그렇지 않으면 비정상적으로 발현되거나, 과소 발현되거나 또는 전혀 발현되지 않는 천연 유전자를 발현한다.
본 명세서의 문맥 내에서, 폴리펩티드 또는 에피토프에 "결합하는" 용어 항체는 특이성 및/또는 친화성으로 상기 결정부에 결합하는 항체를 의미한다.
2 개 이상의 폴리펩티드의 서열 간 관련성에 대해 사용될 때 용어 "동일성" 또는 "동일한" 은 둘 이상의 아미노산 잔기의 스트링 간 일치부의 개수에 의해 확인되는, 폴리펩티드간 서열 관련성의 정도를 의미한다. "동일성" 은 특정한 수학적 모델 또는 컴퓨터 프로그램 (즉, "알고리즘") 에 의해 처리되는 (존재한다면) 갭 정렬된 둘 이상의 서열 중 보다 작은 서열 사이의 동일한 일치부의 백분율을 측정한다. 관련 폴리펩티드의 동일성은 공지된 방법으로 쉽게 계산할 수 있다. 이러한 방법은 제한없이, 다음의 문헌들에 기술된 것들을 포함한다: Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M. Stockton Press, New York, 1991; 및 Carillo et al., SIAM J. Applied Math. 48, 1073 (1988).
동일성을 확인하기 위한 방법은 시험되는 서열 간 최대 일치성을 제공하도록 디자인된다. 동일성을 확인하는 방법은 공공으로 입수가능한 컴퓨터 프로그램에 기술되어 있다. 2 개 서열 간 동일성을 확인하기 위한 컴퓨터 프로그램 방법은 GAP 를 포함하는 GCG 프로그램 패키지 (Devereux et al., Nucl. Acid. Res. 12, 387 (1984); Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wis.), BLASTP, BLASTN, 및 FASTA (Altschul et al., J. Mol. Biol. 215, 403-410 (1990)) 를 포함한다. BLASTX 프로그램은 국립 생명공학 정보 센터 (National Center for Biotechnology Information) (NCBI) 및 기타 공급처 (BLAST Manual, Altschul et al. NCB/NLM/NIH Bethesda, Md. 20894; Altschul et al., 상기) 로부터 공개적으로 입수가능하다. 충분히 공지된 스미스 워터만 (Smith Waterman) 알고리즘이 또한 동일성을 확인하는데 사용될 수 있다.
치료 방법
암의 진단, 예후, 모니터링 및 치료에 유용한 방법이 기재된다. 하나의 구현예에서, 암은 표면에서 HER2 를 발현하는 종양 세포를 특징으로 하며, 치료는 개체에게 본원에서 기재된 바와 같은 항-CD73 항체를 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구현예에서, 본 공개에 따라 치료되는 개체는 위암을 갖는다. 하나의 구현예에서, 본 공개에 따라 치료되는 개체는 유방암을 갖는다. 본원에서의 임의의 구현예에서, 위암은 위 선암종 또는 위식도 또는 위식도 접합부 선암종인 것을 특징으로 할 수 있다. 임의의 구현예에서, 암은 HER2 단백질에 대해 양성인 것으로 시험되는 (또는 시험된) 것을 특징으로 할 수 있으며, 선택적으로 여기서 암은 과량의 HER2 단백질을 발현하며 (HER2 과발현), 선택적으로 여기서 암은 낮은 수준의 HER2 단백질을 발현한다 (과량의 HER2 발현 또는 HER2 과발현보다 낮음).
본원에 나타낸 바와 같이, 위암에서의 HER2 상태에 따른 환자 층화는 모든 HER2+ 위암 환자가 CD73-발현 종양을 갖고, Her2+ 환자가 Her2- 환자보다 더 높은 백분율의 CD73+ 종양 세포를 갖는다는 것을 나타냈다. 모든 환자는 Her2 상태에 관계없이 CD73+ 기질세포를 가졌다. 또한, 본원에 나타낸 바와 같이, 네오아주반트 화학요법 (CT) 은 CD73 을 발현하는 환자의 백분율 또는 CD73+ 종양 세포의 백분율에서 CD73-발현 종양 세포를 유의하게 변형시키지 않았다. 그러나, 네오아주반트 CT 는 CD73+ 기질 세포를 갖는 환자의 백분율을 CT 전 60% (n=12/20) 에서 CT 후 95% (n=19/20) 로 증가시켰다. CD73-발현 기질 세포의 백분율은 CT 전 및 후에 유의하게 상이하지 않았다 (도 15, 우측 패널). CT 는 CD73+ 기질 면역 세포를 갖는 환자의 비율을 30% (n=6/20) 에서 70% (n=14/20) 로 증가시켰다. 따라서, 항-CD73 항체는 이전에 화학요법제로 치료받은 개체에서 유리하게 사용될 수 있다. 또한, CD73-양성 샘플에서 CD73-발현 세포의 백분율에 대한 화학요법의 효과의 결여는 항-CD73 항체의 치료 요법 및 도스 (예를 들어, CD73 수용체를 포화시키도록 설계된 도스) 가 화학요법제를 이용하는 치료와 조합하여 투여될 때를 포함하여 효과적일 것임을 제공할 수 있다.
용어 "HER2" (HER2/neu, C-erbB-2 및 ErbB-2 로도 알려짐) 는 "인간 표피 성장 인자 수용체 2" 를 나타낸다. HER2 와 그것의 변이체 및 아이소폼은 HER 수용체 패밀리의 일원으로 신호 전달 경로에 관여하여 세포 성장 및 분화를 유도하는 티로신 키나제 활성을 갖는 막횡단 단백질을 코딩하는 염색체 17q21 상에 위치하는 원종양 유전자이다. 위 및 위식도 암에서, HER2 과발현의 빈도는 문헌에서 광범위하게 다르다. 그러나, 위암에서의 HER2 시험은 유방암에서의 시험과 상이한데, 그 이유는 위종양에서 일반적으로 관찰되는 종양 생물학의 내재적 차이, HER2 발현의 종양내 이종성 및 불완전한 막 염색 때문이다.
HER2 상태는 전형적으로 면역조직화학 (IHC) 또는 인 시추 하이브리드화 (ISH) 검정에 의해 평가된다. 두 방법 모두 포르말린-고정 및 파라핀-포매된 생검 조직 또는 외과적 표본 및 때때로, 세포학적 표본을 이용한 실시일 수 있다. 형광 인 시추 하이브리드화 (FISH) 는 골드 스탠다드로 간주되고, HER2 유전자의 카피 수의 카운팅을 허용한다. 그러나, FISH 는 비용이 더 높고, 그 결과 IHC 가 또한 널리 사용되며, IHC 에 의한 3+ 점수는 HER2 과다발현으로 간주되고 IHC 에 의한 모호한 (2+ 점수) 사례는 FISH 에 추가로 적용된다.
HER2 의 종양 세포 발현을 평가하기 위한 검정은 당업계에 잘 알려져 있다. FISH 검정의 예는 포르말린-고정, 파라핀-포매에서 HER-2/neu 유전자의 증폭을 검출하도록 설계된 HER2 IQFISH pharmDx (Agilent) 또는 HER2 FISH pharmDx™ (Dako), PathVysion™ HER-2 DNA Probe Kit II (Abbott) 를 포함한다. 예시적 검정은 또한 FDA-승인된 SPoT-Light HER2 CISH 검정을 포함한다. 발색 인 시추 혼성화 (CISH) 는 HER2 유전자 증폭을 검출한다. 이 기술은 또한 감산 프로브 테크놀로지 크로모제닉 인 시츄 하이브리드화 (Subtraction Probe Technology Chromogenic In Situ Hybridization) 로도 불리며, 유방암 세포가 세포 표면에서 HER2 수용체 단백질을 과발현하는지 여부를 확인하기 위해 사용되는 시험이다. HER2 에 대해 널리 사용되는 또 다른 검정은 포르말린-고정된, 파라핀-포매된 암 조직에서 HER2 단백질 과발현을 확인하기 위해 사용되는 반정량적 면역조직화학적 검정인 HercepTest™ (Dako North America, Inc.) 이다. 예를 들어, 낮은 수준의 HER2 를 발현하는 종양은 HercepTest™ 을 통해 +1 내지 +2 의 점수로 확인할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본 공개에 따라 치료되는 개체는 HER2 단백질에 대해 양성으로 시험되는 위암 (예를 들어, 위암 또는 위식도 또는 위식도 접합부 암) 을 가지며, 선택적으로 여기서 암은 HER2 단백질을 과발현하고 (특히 HER2 유전자 증폭의 결과로서), 예를 들어 종양은 IHC 에서 3+ 점수를 특징으로 하고/하거나 FISH 에 의해 유전자 증폭에 대해 양성이다. 특정 선택적 구현예에서, 종양은 낮은 수준의 HER2 단백질 (과량의 HER2 발현보다 낮음) 을 특징으로 하며, 예를 들어 종양은 IHC 에서 2+ 점수를 특징으로 할 수 있고 FISH 에 의해 유전자 증폭에 대해 음성이다. 하나의 구현예에서, 개체는, HER2 폴리펩티드에 결합하는 항체 (예를 들어, 트라스트주맙의 중 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 항체) 와의 조합으로, 선택적으로 추가의 화학요법제와의 조합으로, 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체로 치료된다.
일부 구현예에서, 제공되는 것은 위암을 갖는 개체에서 종양을 치료하는 방법으로서, 하기 단계를 포함하는 방법이다: (a) 개체에서 종양 (또는 종양 세포) 에 의한 HER2 발현을 평가하는 단계; 및 (b) 개체가 HER2 발현, 선택적으로 HER2 과발현을 특징으로 하는 종양 (또는 종양 세포) 을 갖는 경우에, 개체에게 인간 CD73 단백질의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체의 유효량을, 선택적으로 HER2 폴리펩티드에 결합하는 항체 (예를 들어, 트라스트주맙의 중 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 항체) 의 유효량과의 조합으로, 선택적으로 추가의 화학요법제와의 조합으로 투여하는 단계.
하나의 구현예에서, HER2 발현 또는 HER2 과발현을 특징으로 하는 종양은 FISH 검정에서 HER2 유전자 증폭에 대한 양성 결과를 특징으로 한다. 하나의 구현예에서, 종양은 IHC 에 의한 2+ 또는 3+ 점수를 특징으로 한다. 하나의 구현예에서, 종양은 IHC 에 의한 3+ 점수를 특징으로 한다. 하나의 구현예에서, HER2 과발현 종양은 IHC 에 의한 3+ 점수를 특징으로 하는 종양이다. 하나의 구현예에서, HER2 발현 또는 HER2 과발현은 위 및 위식도 접합부 암에서의 HER2 시험을 위한 ToGA FISH 채점 체계에 따라 확인된다 (van Cutsem et al. Gastric Cancer. 2015; 18(3): 476-484 참고). 하나의 예에서, HER2 과발현은 적어도 6 신호/핵의 HER2 유전자 카피수를 특징으로 한다. 하나의 예에서, HER2 과발현은 6 초과 신호/핵의 HER2 유전자 카피수를 특징으로 한다. 또다른 예에서, HER2 신호 대 염색체 17 동원체 신호의 비가 확인된다. 예를 들어 FISH 증폭의 경우, DNA 프로브 키트는 HER2 (오렌지색) 및 염색체 17 동원체 (녹색) 의 카피수를 확인하기 위해 이중-색 프로브를 사용할 수 있다. 하나의 예에서, HER2 과발현은 적어도 2, 선택적으로 적어도 2.2, 또는 선택적으로 2.2 초과의 HER2 신호 대 염색체 17 동원체 신호의 비를 특징으로 한다.
하나의 구현예에서, 본 공개의 병용 치료에서 사용되는 HER2 에 결합하는 항체는 세포독성제에 접합되지 않은 인간 아이소타입의 항체 (예를 들어 인간 IgG1) 이다 (예를 들어, 항체는 "네이키드" 항체이다). 선택적으로, 방법은 개체에게 화학요법제의 치료적 유효량을 투여하는 것을 추가로 포함한다.
또다른 구현예에서, 본 공개의 병용 치료에서 사용되는 HER2 에 결합하는 항체는 항체 약물 접합체 (ADC) 이다. 예를 들어, HER2 에 결합하는 항체는 세포독성제, 선택적으로 아우리스타틴, 메이탄시노이드 (예를 들어 DM1) 또는 캄프토테신 (예를 들어 캄프토테신 또는 엑사테칸 유도체, DXd, 또는 SN38) 에 접합될 수 있다; 선택적으로 ADC 는 트라스트주맙 엠탄신 또는 트라스트주맙 데룩스테칸 (DS-8201a) 이다.
조합된 투여는 상이한 투여 형태의 화합물의 동시 투여, 또는 화합물의 별도의 투여 (예를 들어, 순차적 투여) 를 포함할 수 있다. 따라서, CD73-결합 항체 및 HER2-결합 항체 (및 선택적으로 추가로 화학요법제) 를 조합하여 사용할 수 있다. 항-CD73 항체 및 HER2-결합 항체는 별도의 투여를 위해 제형화되고 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. CD73-결합 항체 및 HER2-결합 항체는 또한 화학요법제, 예를 들어 토포아이소머라제 저해제, 탁산, 파클리탁셀과 조합하여 사용될 수 있다. 항-CD73 항체, HER2-결합 항체 및/또는 화학요법제는 각각 별도의 투여를 위해 제형화되고 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있으며, 또는 HER2-결합 항체는 화학요법제에 접합 (예를 들어 공유 결합) 될 때, 항-CD73 항체 및 HER2-결합 ADC 는 각각 별도의 투여를 위해 제형화되고 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 공개의 병용 치료는 적어도 하나의 치료 과정을 포함하며, 각각의 치료 과정 동안, 복수 (예를 들어, 2, 3 또는 4) 의 연속적 도스의 항-CD73 항체가 투여되고 복수 (예를 들어, 2, 3 또는 4) 의 연속적 도스의 항-HER2 항체가 투여된다. 선택적으로, 치료 요법은 추가로 복수 (예를 들어, 2, 3 또는 4) 의 연속적 도스의 화학요법제 (예를 들어 탁산) 의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 공개의 병용 치료는 하기를 포함한다:
(a) 하나의 도스의 항-CD73 항체의 복수 (예를 들어 적어도 2, 3 또는 4 회) 의 투여, 선택적으로 항-CD73 항체는 2 또는 3 주에 한 번 투여된다; 및
(b) 하나의 도스의 항-HER2 항체의 복수 (예를 들어 적어도 2, 3 또는 4 회) 의 투여, 선택적으로 항-HER2 항체는 1 주에 한 번 또는 3 주에 한 번 투여된다. 하나의 투여 요법에서, 항-CD73 항체는 2 주에 한 번 투여되고 항-HER2 항체는 3 주에 한 번 투여된다. 또다른 투여 요법에서, 항-CD73 항체는 3 주에 한 번 투여되고 항-HER2 항체는 3 주에 한 번 투여되며, 항-CD73 항체 및 항-HER2 항체는 동일한 날에 투여된다.
일부 구현예에서, 본 공개의 병용 치료는 하기를 포함한다:
(a) 하나의 도스의 항-CD73 항체의 복수 (예를 들어 적어도 2, 3 또는 4 회) 의 투여, 선택적으로 항-CD73 항체는 2 또는 3 주에 한 번 투여된다; 및
(b) 하나의 도스의 화학요법제 (예를 들어 백금제, 토포아이소머라제 저해제, 탁산, 캄프토테신) 의 복수 (예를 들어 적어도 2, 3 또는 4 회) 의 투여, 선택적으로 화학요법제는 매주 또는 3 주에 한 번 투여된다. 하나의 예시적 투여 요법에서, 항-CD73 항체는 3 주에 한 번 투여되고 화학요법제는 3 주에 한 번 투여되며, 항-CD73 항체 및 화학요법제는 동일한 날에 투여된다.
일부 구현예에서, 본 공개의 병용 치료는 하기를 포함한다:
(a) 하나의 도스의 항-CD73 항체의 복수 (예를 들어 적어도 2, 3 또는 4 회) 의 투여, 선택적으로 항-CD73 항체는 2 주에 한 번 또는 3 주에 한 번 투여된다;
(b) 하나의 도스의 항-HER2 항체의 복수 (예를 들어 적어도 2, 3 또는 4 회) 의 투여, 선택적으로 항-HER2 항체는 1 주에 한 번 또는 3 주에 한 번 투여된다; 및
(c) 하나의 도스의 화학요법제 (예를 들어 토포아이소머라제 저해제, 탁산, 캄프토테신) 의 복수 (예를 들어 적어도 2, 3 또는 4 회) 의 투여, 선택적으로 화학요법제는 매주 또는 3 주에 한 번 투여된다.
일부 구현예에서, 항-HER2 항체가 화학요법제에 접합되는 경우에, 본 공개의 병용 치료 요법은 하기를 포함할 수 있다:
(a) 하나의 도스의 항-CD73 항체의 복수 (예를 들어 적어도 2, 3 또는 4 회) 의 투여, 선택적으로 항-CD73 항체는 2 주에 한 번 또는 3 주에 한 번 투여된다;
(b) 하나의 도스의 항-HER2 항체 화학요법 약물 접합체의 복수 (예를 들어 적어도 2, 3 또는 4 회) 의 투여, 선택적으로 항-HER2 항체 화학요법 약물 접합체는 3 주에 한 번 투여된다.
임의의 구현예에서, 본 공개의 치료는 항-CD73 항체의 적어도 4, 5 또는 6 회 투여를 포함한다. 임의의 구현예에서, 본 공개의 요법에 따른 치료는 항-HER2 항체의 적어도 4, 5 또는 6 회 투여를 포함한다. 임의의 구현예에서, 본 공개에 따른 치료는 화학요법제의 적어도 4, 5 또는 6 회 투여를 포함한다. 임의의 구현예에서, 본 공개의 요법에 따른 치료는 항-CD73 항체의 적어도 6 회 투여, 항-HER2 항체의 적어도 4 회 투여, 및 선택적으로 추가로 화학요법제의 적어도 4 회 투여를 포함한다.
임의의 구현예에서, 항-CD73 항체의 제 1 투여는 항-HER2 항체 및/또는 화학요법제의 제 1 투여 전에 실시된다. 예를 들어, 항-CD73 항체의 제 1 투여는 항-HER2 항체 및/또는 화학요법제의 제 1 투여 1 주 또는 2 주 전에 실시될 수 있다.
임의의 구현예에서, 항-CD73 항체 및 항-HER2 항체가 동일한 날에 투여되는 경우에, 선택적으로 항-CD73 항체의 투여는 항-HER2 항체의 투여 전에 (예를 들어, 1-12 시간 전에) 실시된다. 임의의 구현예에서, 항-CD73 항체 및 화학요법제가 동일한 날에 투여되는 경우에, 선택적으로 항-CD73 항체의 투여는 화학요법제의 투여 전에 (예를 들어, 1-12 시간 전에) 실시된다.
치료 방법에서, 항-HER2 항체 및 항-CD73 항체는 별도로, 함께 또는 순차적으로, 또는 칵테일로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD73 항체는 항-HER2 항체 전에 투여된다. 예를 들어, 항-CD73 항체는 항-HER2 항체의 투여 대략 1 시간 내지 7 또는 8 일 전에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD73 항체는 항-HER2 항체의 투여 약 30 분 내지 약 1 주, 약 1 시간 내지 약 1 주, 약 1 시간 내지 약 2 시간, 약 1 시간 내지 약 6 시간, 약 1 시간 내지 약 12 시간, 약 2 시간 내지 약 4 시간, 약 4 시간 내지 약 6 시간, 약 6 시간 내지 약 8 시간, 약 8 시간 내지 1 일, 또는 약 1 내지 8 일 전에 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD73 항체는 항-HER2 항체의 투여와 동시에 투여된다.
임의의 구현예에서, 항-HER2 항체 및/또는 화학요법제의 투여는 항-CD73 항체의 투여 후 약 1 주 내에 실시된다. 예를 들어, 방법이 하나의 도스의 항-HER2 항체의 복수의 투여 및 하나의 도스의 항-CD73 항체의 복수의 투여를 포함하는 경우에, 항-HER2 항체의 각각의 투여는 항-CD73 항체의 투여와 동일한 날에 또는 약 1 주 (예를 들어 7 일, 8 일) 후에 실시될 수 있다.
임의의 구현예에서, 항-HER2 항체의 복수의 투여 각각 및 화학요법제의 각각의 투여는 항-CD73 항체의 투여 후 14 일 내에 또는 약 2 주 내에, 선택적으로 항-CD73 항체의 투여 7 일 또는 약 1 주 후에 실시된다. 임의의 구현예에서, 항-HER2 항체의 복수의 투여 각각 및 화학요법제의 복수의 투여 각각은 항-CD73 항체의 투여 후 14 일 또는 약 2 주 내에, 선택적으로 항-CD73 항체의 투여 7 일 또는 약 1 주 후에 실시된다.
선택적으로, 항-HER2 항체의 제 1 투여 및/또는 화학요법제의 제 1 투여가 항-CD73 항체의 투여 후 14 일 또는 약 2 주 내에 실시되고, 항-HER2 항체의 각각의 후속적 (즉 제 2 또는 추가의) 투여 및/또는 화학요법제의 각각의 후속적 투여는 항-CD73 항체의 투여와 동일한 날에 투여되거나 또는 항-CD73 항체의 투여가 7 일 (예를 들어 1 주) 이하 전에 선행하도록 치료가 구성된다.
따라서, 임의의 구현예에서, 항-HER2 항체의 각각의 후속적 (즉 제 2 또는 추가의) 투여 및/또는 화학요법제의 각각의 투여는 항-CD73 항체의 투여와 동일한 날에 투여되거나 또는 항-CD73 항체의 투여가 8 일 이하, 또는 8 일 이하 (예를 들어 약 1 주) 선행한다.
임의의 구현예에서, 항-HER2 항체의 각각의 후속적 (즉 제 2 또는 추가의) 투여는 항-CD73 항체의 투여와 동일한 날에 또는 항-CD73 항체의 투여 후 7 또는 8 일 내에 또는 약 1 주 내에 실시된다. 임의의 구현예에서, 항-HER2 항체의 각각의 투여는 항-CD73 항체의 투여와 동일한 날에 또는 항-CD73 항체의 투여 7 또는 8 일 이하 또는 약 1 주 후에 실시된다.
임의의 구현예에서, 화학요법제의 각각의 후속적 (즉 제 2 또는 추가의) 투여는 항-CD73 항체의 투여와 동일한 날에 또는 항-CD73 항체의 투여 후 7 또는 8 일 내에 또는 약 1 주 내에 실시된다. 임의의 구현예에서, 화학요법제의 각각의 투여는 항-CD73 항체의 투여와 동일한 날에 또는 항-CD73 항체의 투여 7 또는 8 일 이하 또는 약 1 주 후에 실시된다.
항-CD73 항체는 따라서 예를 들어 2 주 마다 투여될 수 있고, 항-HER2 항체 (및 화학요법제, 사용될 때) 는 3 주 마다 투여될 수 있다. 예시적 치료 요법은 2 주 마다 항-CD73 항체의 투여, 3 주 마다 항-HER2 항체 (및 화학요법제, 사용될 때) 의 투여를 포함하며, 항-HER2 항체 (및 화학요법제, 사용될 때) 의 제 1 투여는 항-CD73 항체의 제 1 투여 약 2 주 후에, 또는 항-CD73 항체의 제 1 투여 후 약 2 주 내에, 예를 들어 15 일 내에 실시된다.
임의의 구현예에서, 개체는 사전 요법 후에 진행성 또는 재발된, 또는 사전 요법에 반응하지 않은 암을 갖는 것으로 특징지어질 수 있고, 선택적으로 추가로 여기서 사전 요법은 화학요법제, 선택적으로 백금제 (예를 들어 시스플라틴) 또는 탁산 작용제 (예를 들어 파클리탁셀) 의 투여를 포함한다.
임의의 구현예에서, 개체는 HER2 폴리펩티드에 결합하는 항체 (예를 들어, 트라스트주맙의 중 및 경쇄 CDR, 가변 영역, 또는 폴리펩티드 사슬을 포함하는 항체) 를 이용한 사전 치료 후 진행된, 재발된, 또는 사전 치료에 반응하지 않은 암을 갖는 것으로 특징지어질 수 있다.
또다른 예에서, 항-CD73 항체는 CD73-발현 세포에 대한 결합에 관한 EC50, 선택적으로 EC70 또는 선택적으로 EC90 보다 높은 순환에서의, 선택적으로 관심 대상 혈관외 조직 (예를 들어, 종양 또는 종양 환경) 에서의 농도 (예를 들어, CD73-발현 세포, 예를 들어 MDA-MB-231 세포 상의 항-CD73 항체를 적정함으로써 평가됨) 를 특정 기간 (예를 들어 적어도 1 주, 2 주, 3 주) 동안 달성 또는 유지하는 양으로 투여될 수 있다. 선택적으로 달성된 농도는 CD73-발현 세포에 대한 결합에 관한 EC50, 선택적으로 EC70 또는 선택적으로 EC90 보다 적어도 20%, 50% 또는 100% 더 높다.
또다른 예에서, 항-CD73 항체는 개체에서 AMP 에서 아데노신으로의 CD73-매개되는 이화작용의 저해에 관한 적어도 EC50, 선택적으로 EC70, 선택적으로 실질적으로 EC90 의 혈액 농도 (예를 들어, AMP 에서 아데노신으로의 가수분해를 정량화함으로써 MDA-MB-231 또는 A375 세포에서 5' 엑토뉴클레오티다아제 활성의 중화를 평가함으로써) 를 적어도 1 주, 선택적으로 적어도 2 또는 3 주 동안 및/또는 항-CD73 항체의 후속적 투여 전까지 달성 및/또는 유지하는데 효과적인 양으로 투여될 수 있다. 하나의 구현예에서, 항-CD73 항체의 양은 개체의 혈관외 조직에서 AMP 의 아데노신으로의 CD73-매개되는 이화작용의 저해에 관한 EC50, 선택적으로 EC70, 선택적으로 실질적으로 EC90 을 달성 (또는 유지, 선택적으로 적어도 1 주, 선택적으로 2 주 동안) 하는데 효과적인 양이다.
항-CD73 항체가 본원에서 추가로 기재된다. 예를 들어, 본 공개의 항체의 중 및 경쇄 CDR 을 갖는 항체, 예를 들어 47 및 48 의 각각의 중 및 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 이의 기능-보존적 변이체는 900-3000 ㎎ 의 도스로 투여될 수 있으며, 선택적으로 항체는 적어도 900 ㎎, 선택적으로 1500 ㎎ 또는 적어도 1500 ㎎, 또는 선택적으로 2400 ㎎ 또는 적어도 2400 ㎎ 의 도스로 투여된다. 항체는 정맥내 투여될 수 있다.
또다른 예에서, SEQ ID NOS: 42 및 43 의 중 및 경쇄 가변 영역의 중 및 경쇄 CDR 을 갖는 항체는 적어도 900 ㎎, 선택적으로 1500 ㎎ 또는 적어도 1500 ㎎, 또는 선택적으로 2400 ㎎ 또는 적어도 2400 ㎎ 의 도스로 투여될 수 있다. 항체는 정맥내 투여될 수 있다.
화학요법제는, 항-HER2 항체에 접합되지 않을 때, 특정 작용제에 적합한 도스로 투여될 수 있다. 예를 들어, 탁산 작용제가 투여될 수 있다. 탁산은 세포 미세관의 안정화를 야기하여 세포 분열을 억제함으로써 항종양 활성을 생성하는 파클리탁셀 및 도세탁셀을 포함하는 화학요법제이다. 예를 들어, 파클리탁셀은 3 주 마다 175 ㎎/㎡ 신체 표면적의 도스로 3 시간 주입을 통해 투여될 수 있다. 하나의 선택적 구현예에서, 본 공개의 병용 치료는 백금계 작용제 (예를 들어, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카르보플라틴) (이를 사용한 치료) 의 부재 하에 화학요법제 (예를 들어, 탁산, 항-HER 항체에 접합된 화학요법제) 를 사용한 치료를 포함한다. 하나의 선택적 구현예에서, 본 공개의 병용 치료는 안트라사이클린 유도체 (예를 들어, 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신) (이를 사용한 치료) 의 부재 하에 화학요법제 (예를 들어, 탁산, 항-HER 항체에 접합된 화학요법제) 를 사용한 치료를 포함한다.
본원에서의 임의의 구현예에서, 본 공개의 치료는 PD-1 을 중화시키는 항체와의 병용 치료가 부재하는 것으로 특정될 수 있다. 용어 "PD-1 을 중화시킨다" 는 PD-1 과 그것의 결합 파트너, 예컨대 PD-L1 또는 PD-L2 중 하나 이상과의 상호작용으로부터 초래되는 PD-1 의 신호 전달 능력이 저해되는 과정을 의미한다. PD-1 을 중화시키는 항체는 예를 들어 인간 PD-1 단백질 또는 PD-L1 단백질에 결합할 수 있다. 예는 펨브롤리주맙 (상표명 Keytruda®), 아테졸리주맙 (상표명 Tecentriq™), 두르발루맙 (상표명 Imfinzi™) 을 포함한다.
특히 트라스투주맙을 포함하여 인간 HER2 (항-HER2) 항체에 특이적으로 결합하는 몇몇 항체가 개발되었다. 다른 분자 HER2-표적화 항체, 예컨대 페르투주맙, 마르게툭시맙, 및 항체-약물 접합체 트라스투주맙-엠탄신 및 트라스투주맙-데룩스테칸이 시험되었거나 현재 시험되고 있다.
특정 구현예에서, 특히 위암의 치료를 위해, 항-HER2 항체는 예를 들어 후속 연속 치료 도스에 선행하는 추가의 로딩 도스 투여와 함께 (정맥내 투여의 경우에) 또는 추가 로딩 도스 투여 없이 3 주마다 정맥내 또는 피하로 투여될 수 있다. 임의의 구현예에서, 선택적으로, 항-HER2 항체의 제 1 투여는 로딩 도스일 수 있으며, 이어서 1 주 후에 항-HER2 항체의 후속적 치료 도스의 투여가 뒤따르며, 후속적 치료 도스는 3 주에 한 번 투여된다. 예를 들어 제 1 일 (제 1 주의 시작) 에 개체는 항-CD73 항체로 치료될 수 있고; 제 15 일 (제 3 주의 시작) 에 개체는 항-CD73 항체, 항-HER2 항체의 로딩 도스 및 화학요법제로 치료될 수 있고; 제 21 일에 개체는 항-HER2 항체의 치료 도스로 치료될 수 있고; 항-CD73 항체의 후속적 도스는 항-CD73 항체의 선행하는 투여 후 2 또는 3 주 마다 투여되고, 항-HER2 항체의 치료 도스의 후속적 도스는 항-HER2 항체의 치료 도스의 선행하는 투여 후 3 주 마다 투여되고, 화학요법제의 후속적 도스는 화학요법제의 선행하는 투여 후 3 주 마다 투여된다.
항-HER2 항체가 본원에서 추가로 기재된다. 예를 들어, 항체는 2-8 ㎎/㎏ 체중 (로딩 도스 포함), 선택적으로 2-6 ㎎/㎏ 체중 (치료 도스의 경우) 의 도스로 투여되는 트라스투주맙의 각각의 중쇄 및 경쇄 CDR, 가변 영역 또는 전체 폴리펩티드 사슬을 포함할 수 있다. Herceptin™ 으로 승인된 항체 조성물과 같은 인간 IgG1 아이소타입 (세포독성제에 접합되지 않음) 의 네이키드 항체로서 존재하는 경우, 이러한 항체는 90 분 주입을 통해 8 ㎎/㎏ 체중의 로딩 도스 (제 1 투여) 로서, 이어서 1 주 후에 30 분 주입을 통해 3 주 마다 투여되는 6 ㎎/㎏ 체중의 치료 도스로서 투여될 수 있다. Herceptin™ 으로 승인된 트라스투주맙은 또한 매주 투여 (특히 유방암의 경우) 에 의해, 예를 들어 90 분 IV 주입으로서 4 ㎎/㎏ 의 초기 도스, 이어서 30 분 IV 주입으로서 2 ㎎/㎏ 의 후속 매주 도스로 사용될 수 있다. 트라스투주맙은 또한 신규한 부형제 (약제의 활성 성분을 위한 담체), rHuPH20 을 함유하는 피하 투여에 적합힌 제제, Herceptin™SC 로서 승인되었다. rHuPH20 (재조합 인간 히알루로니다제) 은 가역적으로 피부 아래의 세포들 사이의 조직에 장벽을 형성하는 겔-유사 물질 (히알루로난) 을 파괴한다. Herceptin™SC 은 3 주 마다 5 분 이하의 기간에 걸쳐 로딩 도스 없이 600 ㎎ 의 고정 도스로 총 고정 부피 5 ㎖ 로 투여된다.
또다른 예에서, 트라스투주맙의 중쇄 및 경쇄 CDR, 가변 영역 또는 전체 폴리펩티드 사슬을 포함하는 항체가 세포독성제에 접합되어, 단일 분자 또는 조성물 내에 항-HER2 및 화학요법제를 조합한다. 이러한 ADC, 예를 들어 ADC 트라스트주맙 데룩스테칸 (DS-8201; fam-트라스트주맙 데룩스테칸-nxki; Enhertu®, Daiichi Sankyo) 은 정맥내 주입을 통해 3 주 마다 투여되는 5.4 ㎎/㎏ 체중의 도스로 투여될 수 있다. ADC 트라스트주맙 엠탄신 (ado- 트라스트주맙 엠탄신; Kadcyla®, Genentech) 은 정맥내 주입을 통해 3 주 마다 투여되는 3.6 ㎎/㎏ 체중의 도스로 투여될 수 있다.
본 공개의 치료 요법은 종양 기질 조직에서 CD73-발현 세포의 존재를 특징으로 하는 HER2-양성 위 위식도 접합부 선암종을 치료하는데 유리하게 사용될 수 있다. CD73-양성 암은 따라서 종양 또는 종양 환경에서 CD73-발현 세포의 존재를 특징으로 할 수 있다. 본원에 나타낸 바와 같이, HER2-발현 종양은 종양 기질에서의 CD73 발현을 특징으로 한다. 따라서, 위 또는 위식도 접합부 선암종을 갖는 개체는 종양 미세환경 내의 세포 (예를 들어, 내피 세포 및/또는 면역 세포, 예를 들어, B 세포, CD8 T 세포, 나이브 CD8 T 세포) 상에서의 CD73 의 발현을 평가하기 위한 사전 검출 단계를 수행하거나 수행하지 않고 본 공개의 치료 요법으로 치료될 수 있다.
선택적으로, 치료 방법은 개체 유래 종양으로부터의 생물학적 샘플 (예를 들어, 암 조직, 암 근접 또는 주변부 조직, 암 인접 조직, 인접 비-종양 조직 또는 정상 인접 조직) 에서 CD73 핵산 또는 폴리펩티드를 검출하는 단계를 포함할 수 있다. 생물학적 샘플이 CD73 폴리펩티드를 특징으로 하는 것, 예를 들어 CD73 을 발현하는 세포를 포함한다는 것의 확인은 환자가 항-CD73 항체 및 항-HER2 항체 (및 선택적으로 추가로 화학요법제) 를 이용한 치료로부터 강한 이익을 가질 수 있는 암을 갖는다는 것을 나타낼 수 있다. 본 발명에 따른 치료에 적합한 암을 갖는 환자는, 표면에서 CD73 을 발현하거나, CD73 을 높은 수준으로 (예를 들어, 기준 값에 비해, 건강한 개체에 비해, 항-CD73 작용제를 이용한 치료에 대한 불량한 반응자인 개체에 상응하는 수준으로) 발현하거나, 또는 항-CD73 항체에 의한 높은 염색 강도를 보이는 (예를 들어, IHC 에 의해 확인됨) 세포를 특징으로 하는 종양 기질을 갖는 것으로 확인될 수 있다.
하나의 구현예에서, 방법은 생물학적 샘플 (예를 들어 종양 및/또는 종양 기질 조직을 포함함) 에서 CD73 핵산 또는 폴리펩티드의 발현 수준을 확인하는 단계 및 그 수준을 건강한 개체에 상응하는 기준 수준과 비교하는 단계를 포함한다. 생물학적 샘플이 기준 수준과 비교하여 증가된 수준으로 CD73 핵산 또는 폴리펩티드를 발현하는 세포를 포함하는 것의 확인은 환자가 항-CD73 항체 및 항-HER2 항체 (및 선택적으로 추가로 화학요법제) 로 유리하게 치료될 수 있는 (예를 들어 그것으로부터 특별한 유익을 얻을 수 있는) 암을 갖는다는 것을 의미한다. 선택적으로, 생물학적 샘플에서 CD73 폴리펩티드의 검출은 악성 세포, 내피 세포, T 세포 및/또는 B 세포의 표면 상에서 발현된 CD73 폴리펩티드를 검출하는 단계를 포함한다. 하나의 예에서, CD73 폴리펩티드는 개체로부터 취한 종양 조직 또는 종양-인접 조직 샘플 (예를 들어 생검) 내의 세포의 적어도 10%, 20% 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 그 이상에 존재할 것이다.
개체가 CD73 폴리펩티드를 발현하는 세포를 특징으로 하는 암을 가지는지 여부를 확인하는 것은 예를 들어 암 환경 (예를 들어, 종양 또는 종양 인접 조직) 으로부터의 세포를 포함하는 개체로부터 (예를 들어, 생검을 수행하여) 생물학적 샘플을 수득하는 것, 상기 세포를 인간 CD73 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것, 및 세포가 그의 표면 상에 CD73 을 발현하는지 여부를 검출하는 것을 포함할 수 있다. 선택적으로, 개체가 CD73 을 발현하는 세포를 가지고 있는지 여부를 확인하는 것은 면역조직화학적 검정을 수행하는 것을 포함한다.
하나의 구현예에서, 본 공개는 치료가 필요한 개체에서 (예를 들어, 위 또는 위식도 접합부 선암종을 갖는 대상체에서) HER2-양성 위암을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 하기 단계를 포함하는 방법을 제공한다:
a) 선택적으로 종양 및/또는 종양-인접 조직을 포함하는, 개체로부터의 종양 조직 샘플에서 CD73 폴리펩티드 (예를 들어, CD73-발현 세포) 를 검출하는 단계, 및
b) 종양 조직 샘플이 CD73 폴리펩티드 (예를 들어, CD73-발현 세포) 를, 선택적으로 기준 수준과 비교하여 증가된 수준으로, 포함한다는 것의 확인 시 개체에게 항-CD73 항체 및 항-HER2 항체 (및 선택적으로 추가로 화학요법제) 를 투여하는 단계. 선택적으로, 종양 조직 샘플에서 CD73 폴리펩티드 또는 CD73-발현 세포를 검출하는 단계는 개체로부터 종양 조직 및/또는 종양 근접 또는 주변부 조직 (예를 들어, 종양 인접 조직, 인접 비-종양 조직 또는 정상 인접 조직) 을 포함하는 생물학적 샘플을 얻는 것, 및 CD73 폴리펩티드 또는 CD73-발현 세포의 수준을 검출하는 것을 포함한다. CD73-발현 세포는, 예를 들어, 내피 세포, 종양 세포, CD4 T 세포, CD8 T 세포, B 세포를 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, HER2 및 CD73 발현 둘 모두를 평가할 수 있다. 예를 들어, 하나의 구현예에서, 본 공개는 치료가 필요한 개체에서 (예를 들어, 위 또는 위식도 접합부 선암종을 갖는 대상체에서) 위암을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 하기 단계를 포함하는 방법을 제공한다:
a) 종양 환경에서, 선택적으로 종양 내에서 및/또는 종양-인접 조직 내에서, CD73 폴리펩티드 (예를 들어 CD73-발현 세포) 를 검출하는 단계,
b) 종양 세포 상에서 HER2 발현 (예를 들어 발현 수준) 을 검출하는 단계, 및
c) 종양 환경이 CD73 (예를 들어, CD73-발현 세포) 을, 선택적으로 기준 수준에 비해 증가된 수준으로, 포함한다는 것의 확인 시 및 종양 세포 상에서 HER2-발현 (예를 들어 과발현) 의 검출시, 개체에게 항-CD73 항체 및 항-HER2 항체 (및 선택적으로 추가로 화학요법제) 를 투여하는 단계. 선택적으로, 종양 환경 내에서 CD73 폴리펩티드 또는 CD73-발현 세포를 검출하는 단계는 개체로부터 종양 조직 및/또는 암 근접 또는 주변부 조직 (예를 들어, 종양 인접 조직, 인접 비-종양 조직 또는 정상 인접 조직) 을 포함하는 생물학적 샘플을 얻는 것, 및 CD73 폴리펩티드 또는 CD73-발현 세포의 수준을 검출하는 것을 포함한다. CD73-발현 세포는, 예를 들어, 내피 세포, 종양 세포, CD4 T 세포, CD8 T 세포, B 세포를 포함할 수 있다. 선택적으로, 종양 세포 상에서 HER2-발현 (예를 들어 과발현) 을 검출하는 단계 (또는 이의 검출) 은 종양 세포에서 HER2 과발현을 검출하는 것 (또는 이의 검출) 을 포함한다. 선택적으로, 종양 세포 상에서 HER2-발현 또는 HER2 과발현을 검출하는 단계는 개체로부터 종양 조직을 포함하는 생물학적 샘플을 수득하는 것, 및, 선택적으로 FISH (예를 들어 증가된 HER2 유전자 카피수의 존재) 에 의해 및/또는 IHC (예를 들어 IHC 검정에서 3+ 점수) 에 의해 확인되는, HER2 폴리펩티드의 발현 수준을 검출하는 것을 포함한다.
하나의 구현예에서, 본 공개의 치료 요법은 HER2-양성 암을 갖고 화학요법제 (예를 들어, 백금계 제제, 카르보플라틴, 탁산제, 파클리탁셀) 를 사용한 이전 치료 과정을 받은 개체 (또는 개체군) 를 치료하는데 유리하게 사용될 수 있다. 선택적으로, 화학요법제를 사용한 이전의 치료 과정은 선행하는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6 개월 내에 완료되었다. 하나의 구현예에서, 하나의 양태에서 본 공개의 치료 요법은 세포에서 (예를 들어, 생검에서; 종양 기질로부터의 세포에서, 종양 세포 상에서) CD73 발현의 사전 시험 단계의 부재 하에 있는 것으로 특정될 수 있다. 하나의 구현예에서, 제공되는 것은 화학요법제 (예를 들어 백금제, 카르보플라틴, 탁산제, 파클리탁셀) 를 사용한 이전 치료 과정을 받은 개체 (또는 개체군) 에서 위암을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 하기 단계를 포함하는 방법이다:
a) 선택적으로 종양 내에서 및/또는 인접 조직 내에서, HER2-발현 종양 세포를 검출하는 단계, 및
b) HER2-발현 (예를 들어 과발현) 종양 세포의 검출시, 개체에게 항-CD73 항체 및 항-HER2 항체 (및 선택적으로 추가로 화학요법제) 를 투여하는 단계. 선택적으로, HER2-발현 또는 HER2 과발현 종양 세포를 검출하는 단계는 개체로부터 암 조직을 포함하는 생물학적 샘플을 수득하는 것, 및, 선택적으로 FISH (예를 들어 증가된 HER2 유전자 카피수의 존재) 에 의해 및/또는 IHC (예를 들어 IHC 검정에서 3+ 점수) 에 의해 확인되는, HER2 폴리펩티드의 발현 수준을 검출하는 것을 포함한다.
치료의 효능 및/또는 치료 유효량은 암 치료의 평가에 일반적으로 사용되는 다양한 종점에 의해 측정될 수 있다. 예시적인 종점은 다음을 포함한다: 생존 (OS 및 PFS 포함) 의 연장; 객관적 반응 (CR 또는 PR 포함) 의 유발; 종양 퇴행, 종양 중량 또는 크기 수축, 더 긴 질환 진행 시간, 증가된 생존 기간, 더 긴 PFS, 개선된 OS 율, 증가된 반응 지속기간, 및 개선된 삶의 질 및/또는 암의 징후 또는 증상의 개선. 개선 및/또는 효능은 다른 치료, 예를 들어 항-HER2 항체의 투여를 포함하는 치료 및/또는 항-CD73 항체의 부재 하의 화학요법과 비교될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "진행성 질환" (PD) 은 연구에서 가장 작은 합 (이는 연구에서 가장 작은 경우에 기준선 합을 포함함) 을 기준으로 하여, 표적 병변의 직경의 합에서의 적어도 20% 증가를 지칭한다. 20% 의 상대적 증가에 추가하여, 합은 또한 적어도 5 ㎜ 의 절대적 증가를 입증해야 한다. 하나 이상의 새로운 병변의 출현은 또한 진행으로 간주된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "부분 반응" (PR) 은, 기준 합계 직경을 기준으로, 표적 병변의 직경의 합에서의 적어도 30% 감소를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "완전 반응" (CR) 은 임의의 표적 림프절의 단축이 10 ㎜ 미만으로 감소된 모든 표적 병변의 소멸을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "안정한 질환" (SD) 은 연구 중에 직경의 최소 합을 기준으로 하여, PR 의 자격을 얻기에 충분한 수축도 없고, PD 의 자격을 얻기에 충분한 증가도 없음을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "객관적 반응률" (ORR) 은 RECIST 1.1 에 따라 부분 또는 완전 반응의 최상의 전체 반응 (PR+CR) 을 달성하는 환자의 비율과 같다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "전체 생존율" (OS) 은 진단 또는 치료 시점으로부터 1 년, 5 년 등과 같이 정의된 기간 동안 생존한 환자의 백분율을 의미한다. 바람직한 구현예에서, OS 은 연구에서 무작위화일로부터 임의의 원인으로 인한 사망일까지의 시간을 지칭한다. 환자가 추적 기간의 끝에 생존하거나 추적 관찰에 실패하는 경우에, OS 데이터는 환자가 생존한 것으로 알려진 마지막 날짜에 검열된다. 전체 생존율은 카플란-마이어 (Kaplan-Meier) 방법에 의해 평가되고, 95% 신뢰 구간 (CI) 이 각각의 치료 아암 (arm) 에서 중간 OS 에 대해 제공된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "무진행 생존" 은 암이 진행되거나 악화되지 않고 생존한 환자를 의미한다. 본 발명의 바람직한 양태에서, PFS 은 연구에서의 무작위화로부터 RECIST (버전 1.1) 에 의해 정의된 바와 같은 객관적 진행의 제 1 방사선촬영 문서화, 또는 임의의 원인의 사망까지의 시간으로서 정의된다. 보고된 선행 진행 없이 사망한 환자는 사망 당일에 진행성 것으로 간주될 것이다. 진행되지 않거나 추적 관찰에 실패한 환자는 마지막 방사선 종양 평가 당일에 검열을 받을 것이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "질환 관리율" (DCR) 은 질환 진행의 결여 및 이의 비율을 의미한다. 이는 CR, PR 또는 SD 로 분류되는 최상의 전체 반응을 갖는 환자 (구체적으로 PD 을 갖는 환자를 제외함) 의 군을 지칭하며, 여기서 최상의 전체 반응은 치료 시작부터 PD 까지 기록된 최상의 반응이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "임상적 이익률" 은 분석 당시 SD 이상을 의미한다. SD 이상의 종양 반응률 (즉, CR + PR + SD) 은 RECIST 1.1 에 의해 정의된 바와 같이 SD 이상의 반응을 갖는 환자의 비율로서 정의된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "생존의 연장" 은 i) 치료되지 않은 환자, ii) 특정 조합 요법에서 모든 항종양제보다 적은 항종양제로 치료된 환자, 또는 iii) 대조군 치료 프로토콜에 비해 치료된 환자에서 OS 또는 PFS 를 증가시키는 것을 의미한다. 생존은 치료 개시 후 또는 암의 초기 진단 후 모니터링된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "최상의 전체 반응" 은 확인에 대한 임의의 요건을 고려하여, 연구 치료 시작으로부터 객관적 진행 또는 새로운 항암 요법의 시작 중 가장 이른 시점까지 기록된 최상의 반응이다. 환자의 최상의 전체 반응 할당은 표적 및 비-표적 질환 둘 모두의 발견에 의존할 것이고, 또한 새로운 병변의 출현을 고려할 것이다. 최상의 전체 반응은 시험 과정에 걸쳐 조사자에 의해 제공되는 평가 응답을 사용하여 알고리즘을 통해 계산될 것이다.
암 (예를 들어, 진행성 위 또는 위식도 접합부 선암종) 의 예시적 치료 방법은 치료가 필요한 환자에게, SEQ ID NO: 24 의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 23 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 HER2 항체의 유효량을 SEQ ID NO: 43 의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 42 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 CD73 항체의 유효량과의 동시, 별도, 또는 순차적 조합으로 투여하는 것을 포함하며; 선택적으로 항-인간 HER2 항체는 SEQ ID NO: 26 의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 SEQ ID NO: 25 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하며; 선택적으로, 항-인간 CD73 항체는 SEQ ID NO: 48 의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 SEQ ID NO: 47 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함한다.
HER2 에 결합하는 항체
HER2 에 결합하고 HER2 신호전달을 차단하고 HER2 의 이용가능한 막 분자의 수를 제한하는 것은 몇몇 치료 접근법의 초점이었다. 트라스투주맙 (Herceptin®, Roche) 은 HER2 의 막근접 영역에 결합하는 뮤린 4D5 항체의 인간화 버전이다. 트라스투주맙은 그것이 결합하는 종양 세포에 대한 항체 의존성 세포독성 (ADCC) 을 매개하고, HER2 내재화 및 분해를 유발하고, HER2 이합체화의 저해를 통해 MAPK 및 PI3K/Akt 경로를 저해함으로써 그것의 항증식 활성을 발휘한다. 트라스투주맙은 아래 제시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 인간 IgG1 아이소타입으로서 생산된다. 트라스투주맙은 아래 (SEQ ID NOS: 25 및 26) 제시된 완전 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 사슬을 갖는다. 항-HER2 항체의 또 다른 예는 트라스투주맙에 의해 결합되는 HER2 상의 동일한 에피토프에 결합하는 마르게툭시맙이다. 마르게툭시맙은 SEQ ID NOS: 27 및 28 (Kabat CDR 은 밑줄 표시됨) 에 제시된 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 갖는다.
보다 최근에, 상이한 화학요법제에 접합된 트라스투주맙이 개발되었다. 이들 면역접합체 또는 ADC 는 특히 트라스트주맙 엠탄신 (또한 PRO132365, RG3502, T-DM1, 트라스트주맙-MCC-DM1, Kadcyla® 로서 알려짐), 트라스트주맙 데룩스테칸 (또한 DS-8201, DS-8201a, fam-트라스트주맙 데룩스테칸-nxki, Enhertu® 로서 알려짐), 및 트라스트주맙 두오카르마진 (또한 SYD985, 트라스트주맙 vc-seco-DUBA, 트라스트주맙 발린-시트룰린-seco-두오카르마이신히드록시벤즈아미드-아자인돌로서 알려짐) 을 포함한다. 트라스투주맙 데룩스테칸, 트라스트주맙 두오카르마진 및 트라스트주맙 엠탄신은 트라스투주맙의 동일한 중쇄 및 경쇄 가변 영역 및 전체 폴리펩티드 사슬을 공유하며, 다만 트라스트주맙 엠탄신은 트라스투주맙의 중쇄 상의 말단 라이신을 결여한다. 트라스투주맙 데룩스테칸 (DS8201a) 은 평균 8 개의 시스테이닐 잔기에서 링커를 통해 DXd (DX-8951 유도체, DXd) 로 지칭되는 캄프토테신 또는 엑사테칸 유도체인 데룩스테칸과 접합된다 (Ogitano et al. (2016) Cancer Sci 107 (2016) 1039-1046 참조, 그 개시내용은 본원에 참고로 포함됨). 트라스투주맙 데룩스테칸은 미국 특허 No. 10,195,288 및 PCT 공보 No. WO2019/044946 에 기재된 바와 같이 제조될 수 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 트라스투주맙 엠탄신은 평균 3 내지 4 개의 라이실 잔기에서 절단 불가능한 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 시클로헥산-1-카르복실레이트 (SMCC) 링커를 통해 메이탄시노이드 DM1 과 접합된다. 트라스투주맙 두오카르마진은 평균 2 또는 4 개의 시스테이닐 잔기에서 절단 가능한 링커 N-[2-(2 말레이미도에톡시) 에톡시카르보닐]-L-발릴-L-시트룰리닐- p-아미노벤질옥시카르보닐-N-[2-(2-히드록시에톡시)에틸]-N-[2-(메틸아미노)에틸]카르바모일을 통해 seco-DUBA와 접합된다.
트라스투주맙 중쇄 가변 영역
Figure pct00002
트라스투주맙 경쇄 가변 영역
Figure pct00003
트라스투주맙 중쇄
Figure pct00004
트라스투주맙 경쇄
Figure pct00005
마르게툭시맙 중쇄
Figure pct00006
마르게툭시맙 경쇄
Figure pct00007
CD73 에 결합하는 항체
본원에서 기재된 병용 치료 방법에 따라 사용될 수 있는 예시적 항-CD73 항체는 인간 기원의 VH 및 VL 골격 (예를 들어, FR1, FR2, FR3 및 FR4) 을 포함하는 인간 CD73 폴리펩티드에 결합하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 하나의 양태에서, 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함한다: SEQ ID NO: 2 에 제시된 아미노산 서열 SYNMY 을 포함하는 HCDR1 (중쇄 CDR1); SEQ ID NO: 12 에 제시된 아미노산 서열 YIDPYNGGSSYNQKFKG 을 포함하는 HCDR2 (중쇄 CDR2), 선택적으로 추가로 SEQ ID NO: 12 의 위치 13 의 글루타민 잔기 (Q) 는 류신 잔기 (L) 로 치환될 수 있으며, SEQ ID NO: 12 의 위치 14 의 라이신 잔기 (K) 는 선택적으로 트레오닌 잔기 (T) 로 치환될 수 있음; SEQ ID NO: 13 에 제시된 아미노산 서열 GYNNYKAWFAY 을 포함하는 HCDR3 (중쇄 CDR3), 선택적으로 추가로 SEQ ID NO: 13 의 위치 3 의 아스파라긴 잔기 (N) 는 글라이신 잔기 (G) 로 치환될 수 있음; SEQ ID NO: 14 에 제시된 아미노산 서열 KASQSVTNDVA 을 포함하는 LCDR1 (경쇄 CDR1), 선택적으로 추가로 SEQ ID NO: 14 의 위치 7 의 트레오닌 잔기 (T) 는 세린 잔기(들)로 치환될 수 있음; SEQ ID NO: 15 에 제시된 아미노산 서열 YASNRYT 을 포함하는 LCDR2 (경쇄 CDR2), 선택적으로 SEQ ID NO: 15 의 위치 4 의 아스파라긴 잔기 (N) 는 트레오닌 잔기 (T) 로 치환될 수 있음; 및 SEQ ID NO: 7 에 제시된 아미노산 서열 QQDYSSLT 을 포함하는 LCDR3 (경쇄 CDR3).
하나의 구현예에서, HCDR2 는 식 I 의 아미노산 서열을 포함한다:
Y - I - D - P - Y- N - G - G - S- S - Y - N - Xaa1 - Xaa2 - F - K - G (SEQ ID NO: 3), 또는 그의 하위서열, 식에서 Xaa1 은 Q (Gln) 또는 L (Leu) 이고, Xaa2 는 K (Lys) 또는 T (Thr) 이다.
하나의 구현예에서, HCDR3 은 식 II 의 아미노산 서열을 포함한다:
G - Y - Xaa1 - N - Y - K - A - W - F - A - Y (SEQ ID NO: 4), 또는 그의 하위서열, 식에서 Xaa1 은 N (Asp) 또는 G (Gly) 이다.
하나의 구현예에서, LCDR1 은 식 III 의 아미노산 서열을 포함한다:
K - A - S - Q - S - V -Xaa1 - N - D - V- A (SEQ ID NO: 5),
또는 그의 하위서열, 식에서 Xaa1 은 T (Thr) 또는 S (Ser) 이다.
하나의 구현예에서, LCDR2 는 식 IV 의 아미노산 서열을 포함한다:
Y - A - S - Xaa1- R - Y - T (SEQ ID NO: 6),
또는 그의 하위서열, 식에서 Xaa1 은 T (Thr) 또는 N (Asn) 이다.
하나의 양태에서, 본원의 치료 방법에서 사용되는 인간 CD73 폴리펩티드에 결합하는 항체는 하기를 포함한다: SEQ ID NO: 2 에 제시된 아미노산 서열 SYNMY 을 포함하는 HCDR1; SEQ ID NO: 8 에 제시된 아미노산 서열 YIDPYNGGSSYNLTFKG 을 포함하는 HCDR2; SEQ ID NO: 9 에 제시된 아미노산 서열 GYGNYKAWFAY 을 포함하는 HCDR3; SEQ ID NO: 10 에 제시된 아미노산 서열 KASQSVSNDVA 을 포함하는 LCDR1; SEQ ID NO: 11 에 제시된 아미노산 서열 YASTRYT 을 포함하는 LCDR2; 및 SEQ ID NO: 7 에 제시된 아미노산 서열 QQDYSSLT 을 포함하는 LCDR3.
하나의 양태에서, 본원의 치료 방법에서 사용되는 인간 CD73 폴리펩티드에 결합하는 항체는 하기를 포함한다: SEQ ID NO: 2 에 제시된 아미노산 서열 SYNMY 을 포함하는 HCDR1; SEQ ID NO: 12 에 제시된 아미노산 서열 YIDPYNGGSSYNQKFKG 을 포함하는 HCDR2; SEQ ID NO: 13 에 제시된 아미노산 서열 GYNNYKAWFAY 을 포함하는 HCDR3; SEQ ID NO: 14 에 제시된 아미노산 서열 KASQSVTNDVA 을 포함하는 LCDR1; SEQ ID NO: 15 에 제시된 아미노산 서열 YASNRYT 을 포함하는 LCDR2; 및 SEQ ID NO: 7 에 제시된 아미노산 서열 QQDYSSLT 을 포함하는 LCDR3.
하나의 구현예에서, 항체는 인간 하위군 IGHV1-3 (선택적으로 IGHJ4 와 함께) 로부터의 중쇄 골격을 포함하며, 선택적으로 IGHV1-3 은 IGHV1-3*01 이다. 하나의 구현예에서, 인간화된 항체는 인간 하위군 IGKV1-33 (선택적으로 IGKJ2 와 함께) 로부터의, 선택적으로 IGKV1-33*01 로부터의 경쇄 골격을 포함한다.
항체는 예를 들어 항체의 친화도, 안정성 또는 기타 특성을 향상시키기 위해, 인간 중쇄 및/또는 경쇄 골격에 걸쳐 1, 2, 3, 4, 5 개 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함할 수 있다.
항-CD73 항체의 VH 및 VL 아미노산 서열의 예는 실시예 2 (H4+ 사슬을 보여줌, 및 2H4+2Lx 항체에 대한 표 3), 및 L1-L4 사슬에 대한 표 1 에 나타나 있다.
하나의 양태에서, 본원의 치료 방법에서 사용되는 항-CD73 항체 또는 항체 단편은 하기를 포함한다:
(a) SEQ ID NO: 2 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1;
(b) SEQ ID NOS: 3, 8 또는 12 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2;
(c) SEQ ID NOS: 4, 9 또는 13 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3;
(d) SEQ ID NOS: 5, 10 또는 14 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
(e) SEQ ID NOS: 6, 11 또는 15 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2;
(f) SEQ ID NO: 7 의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 및
(g) 인간 중 및 경쇄 골격 서열.
하나의 구현예에서, 항체는 인간 하위군 IGHV1-3 로부터의 중쇄 골격을 IGHJ4 와 함께 포함하며, 선택적으로 항체는 IGHV1-3*01 을 IGHJ4 와 함께 포함한다. 하나의 구현예에서, 인간화된 항체는 인간 하위군 IGKV1-33, 선택적으로 IGKV1-33*01 로부터의 경쇄 골격을, IGKJ2 와 함께 포함한다.
선택적으로 인간 골격은 하나 이상의 돌연변이, 예를 들어, 비인간 포유동물 (예를 들어, 마우스) 의 특정 위치에 존재하는 잔기를 도입하기 위한 역 돌연변이를 포함한다.
본원의 임의의 구현예 중 하나의 양태에서, Kabat 중쇄 위치 2 의 아미노산은 이소류신이다.
본원의 임의의 구현예 중 하나의 양태에서, Kabat 중쇄 위치 30 의 아미노산은 알라닌이다.
본원의 임의의 구현예 중 하나의 양태에서, Kabat 중쇄 위치 48 의 아미노산은 이소류신이다.
본원의 임의의 구현예 중 하나의 양태에서, Kabat 중쇄 위치 69 의 아미노산은 류신이다.
본원의 임의의 구현예 중 하나의 양태에서, Kabat 중쇄 위치 73 의 아미노산은 라이신이다.
하나의 구현예에서, VH 은 Kabat 위치 2 에 이소류신 잔기, 위치 30 에 알라닌, 위치 48 에 이소류신, 위치 69 에 류신 및 위치 73 에 라이신을 포함한다.
본원의 임의의 구현예 중 하나의 양태에서, Kabat 경쇄 위치 67 의 아미노산은 티로신이다.
본원의 임의의 구현예 중 하나의 양태에서, Kabat 경쇄 위치 60 의 아미노산은 세린 또는 아스파르트산이다.
본원의 임의의 구현예 중 하나의 양태에서, Kabat 경쇄 위치 2 의 아미노산은 발린 또는 이소류신이다.
본원의 임의의 구현예 중 하나의 양태에서, Kabat 경쇄 위치 87 의 아미노산은 티로신 또는 페닐알라닌이다.
하나의 구현예에서, VL 은 Kabat 위치 67 에 티로신 잔기, 위치 60 에 세린, 위치 2 에 이소류신, 및 위치 87 에 티로신을 포함한다.
본원의 임의의 구현예 중 하나의 양태에서, Kabat 중쇄 위치 28 의 아미노산은 트레오닌 (T) 이다.
본원의 임의의 구현예 중 하나의 양태에서, Kabat 중쇄 위치 66 의 아미노산은 아르기닌 (R) 이다.
본원의 임의의 구현예 중 하나의 양태에서, Kabat 중쇄 위치 67 의 아미노산은 발린 (V) 이다.
본원의 임의의 구현예 중 하나의 양태에서, Kabat 중쇄 위치 71 의 아미노산은 아르기닌 (R) 이다.
본원에서 VH 및 VL 도메인에서의 위치는 Kabat 넘버링 시스템을 사용하여 기술된다 (Kabat et al. (1991) Sequences of Protein of Immunological Interest, 5th ed., United States Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, MD).
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 SEQ ID NOS: 37 또는 42 의 VH 도메인과 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일성, 또는 100% 동일성) 을 갖는 VH 도메인을 포함한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체 또는 항체 단편은 SEQ ID NOS: 33-36 또는 43-46 중 임의의 것의 VL 도메인과 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일성, 또는 100% 동일성) 을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체 또는 항체 단편은 SEQ ID NO: 42 의 VH 도메인과 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일성, 또는 100% 동일성) 을 갖는 VH 도메인, 및 SEQ ID NOS: 43-46 중 임의의 것의 VL 도메인과 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일성, 또는 100% 동일성) 을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체 또는 항체 단편은 H4+L1 항체의 SEQ ID NO: 38 의 중쇄와 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일성, 또는 100% 동일성) 을 갖는 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 또는 항체 단편은 H4+L1 항체의 SEQ ID NO: 39 의 경쇄와 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일성, 또는 100% 동일성) 을 갖는 경쇄를 포함한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체 또는 항체 단편은 2H4+2L1 항체의 SEQ ID NO: 47 의 중쇄와 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일성, 또는 100% 동일성) 을 갖는 중쇄를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체 또는 항체 단편은 2H4+2L1 항체의 SEQ ID NO: 48 의 경쇄와 적어도 약 80% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 약 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일성, 또는 100% 동일성) 을 갖는 경쇄를 포함한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체 또는 항체 단편은 SEQ ID NO: 42 의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 43 의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체 또는 항체 단편은 SEQ ID NO: 47 의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 48 의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명의 치료 방법에 따라 사용하기 위한 항-CD73 항체는 중쇄 및 경쇄 CDR1, 2 및 3 (예를 들어, Kabat 넘버링에 따라 확인됨), 또는 또 다른 적합한 항-CD73 항체로부터 유래된 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 가질 수 있다.
CD73 이합체의 각각의 서브유닛은 2 개의 구조적 도메인으로 이루어진다: N-말단 도메인 (잔기 27-317, Knapp et al. (2012) 에서 참조된 바와 같은 넘버링) 및 C-말단 도메인 (잔기 337-549), CD73 의 보다 큰 N-말단 도메인은 금속 이온 결합 부위를 함유하고, 2 개의 샌드위치된 혼합된 b 시트를 포함하는 4 층 a/b-b-b-a 구조를 갖는다. C-말단 도메인은 기질 결합 부위 및 이합체화 계면을 포함하고, 조성 a/b-b-a-b 의 4 층 구조를 갖는다. 2 개의 도메인은 작은 힌지 영역을 포함하는 단일 나선 (잔기 318-336) 에 의해 연결되며, 힌지 영역은 효소가 큰 도메인 이동을 겪게 하고, 이에 의해 개방 및 폐쇄 구조 사이를 전환하게 한다. 폐쇄된 형태에서 관찰되는 활성 부위는 N- 및 C-말단 도메인 사이의 계면에 위치하고, 양쪽 도메인의 잔기로부터 형성된다. 예를 들어, Knapp et al. (2012) Structure 20, 2161-2173 참고, 이의 개시내용은 본원에 참고로 포함됨.
특히 관심 있는 적합한 항-CD73 항체의 부류는, 이전의 항-CD73 항체에서 관찰된 "후크 효과" 가 결여된 항체 예컨대 11E1, 6E1, 3C12 및 8C7 (WO2016/055609 참고, 이의 개시내용이 본원에 참고로 포함됨) 로 표시된다. 후크 효과가 결여된 것으로 보고된 다른 예시적 항-CD73 항체는 항체 350, 356, 358, 373 (예를 들어 373.A), 374, 376, 377, 379 또는 Hu101-28 (WO2018/237157 및 WO2018137598 참고, 이의 개시내용이 본원에 참고로 포함됨) 을 포함한다. 후크 효과는 가용성 이합체 단백질로서의 CD73 의 저해에 대한 거짓 양성으로 존재하는 항-CD73 항체의 경향을 지칭한다. 이러한 항-CD73 항체는 효소 활성의 참 저해보다는 CD73 이합체의 가교결합을 야기하는 것으로 여겨지며, CD73 이합체에 대해 높은 과량으로 시험될 때 CD73 을 저해하는 능력을 상실하며, 이는 WO2016/055609 에서 논의된 바와 같다. 항체 예컨대 11E1, 6E1, 3C12 및 8C7 은 가용성 CD73 의 효소 활성을 저해하고 (하나의 CD73 이합체에 2가로 결합함으로써) 세포막-결합형 CD73 의 특히 강력한 비-경쟁적 저해제로서 작용할 수 있다 (내재화에 의존하지 않고) (PCT 공보 no. WO2016/055609 참조). CD73 (예를 들어, 종양 기질에서) 을 실질적으로 완전히 중화시키는 능력의 관점에서, 이들 항체는 특히 종양 기질에서 CD73 의 발현 유도와 관련된 화학요법제와 조합된 및/또는 항-HER2 항체와 조합된 치료 요법에서 유리하게 사용될 수 있다.
항체는 바람직하게는 종양 세포를 포함하는 세포의 표면에서 발현되는 CD73 상에 존재하는 에피토프에 결합하고, CD73 효소 (예를 들어 세포의 표면에서 발현되는 막 결합형 CD73 단백질) 의 효소 (엑토-5' 뉴클레오티다아제) 활성을 저해한다. 하나의 구현예에서, 이들 항체는 순수한 CD73 차단 항체로서 사용될 수 있고, 예를 들어, 이들 항체는 Fcγ 수용체와의 실질적인 결합 없이 및/또는 CD73-발현 세포를 향한 ADCC 의 실질적인 유도 없이 세포의 표면에서 발현된 막 결합형 CD73 단백질의 효소 활성을 저해한다. 선택적으로, 항체는 Fc 도메인을 보유하고 인간 FcRn 에 대한 결합을 유지한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 기질에 결합하지 않을 때 뿐만 아니라 기질 (예를 들어, 천연 기질 예컨대 AMP 또는 저해제 또는 활성 부위에 결합하는 다른 화합물 예컨대 AMP 유사체 아데노신 5'-(α,β-메틸렌)디포스페이트 (APCP)) 에 결합될 때 CD73 상에 존재하는 CD73 상의 에피토프에 결합할 수 있다. 하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 CD73 폴리펩티드에의 결합에 대해 CD73 의 기질과 경쟁하지 않는다. CD73 의 기질의 예는, 예를 들어, 천연 기질 예컨대 AMP 또는 저해제 또는 활성 부위에 결합하는 다른 화합물 예컨대 AMP 유사체 아데노신 5'-(α,β-메틸렌)디포스페이트 (APCP) 를 포함한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 알로스테릭 저해제로서 작용하고 온전한 전장 항체와 CD73 이합체 사이의 1:1 화학량론에서 이합체내 결합 방식으로 CD73 에 결합한다. 하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 AMP 가 가수분해될 수 없는 중간 상태 (개방 (불활성) 상태와 폐쇄 (활성, 기질-결합) 상태 사이) 에서 CD73 폴리펩티드에 결합하고 이를 구속할 수 있다.
하나의 구현예에서, 항체는 CD73 이 가용성 재조합 CD73 단백질로서 존재할 때 CD73 의 효소 활성을 저해하는데, 예를 들어 항체는 항체가 올리고머를 형성할 수 없는 설정/구성에 있을 때, 예를 들어 항체가 CD73 폴리펩티드 이합체에 대해 실질적인 몰 과량 (예를 들어, 적어도 10 배, 20 배, 100 배 등) 으로 제공될 때 가용성 인간 이합체 CD73 폴리펩티드의 효소 활성을 저해할 수 있다. 잔류 CD73 효소 활성은 면역억제 효과를 매개하기에 충분한 아데노신 생성을 초래할 수 있기 때문에, 치료 효과를 매개하기 위해 높은 수준의 항체-매개 효소 차단이 유리하다.
이러한 항체의 예는 본원에서 뿐만 아니라 PCT 공보 no. WO2016/055609 (예를 들어, 항체 11E1, 6E1, 3C12 및 8C7) 에 기재되어 있다. 항체 11E1, 6E1, 3C12 및 8C7 은 잔기 K136 (SEQ ID NO: 1 의 CD73 폴리펩티드에 관하여) 에서 치환을 갖는 CD73 돌연변이체에 대한 결합을 상실한다. 항체 11E1, 6E1, 3C12 및 8C7 은 또한 잔기 A99, E129, K133, E134 및 A135 (SEQ ID NO: 1 의 CD73 폴리펩티드에 관하여) 에서 치환을 갖는 돌연변이체, 뿐만 아니라 잔기 K97, E125, Q153 및 K330 (SEQ ID NO: 1 의 CD73 폴리펩티드에 관하여) 에서 치환을 갖는 돌연변이체에 대한 결합을 상실한다. 항체의 다른 예는 SEQ ID NO 1 의 잔기 131-162 의 분절, 및 특히 아미노산 잔기 L131, K136, S155, L157, K162, K330 (SEQ ID NO: 1 의 CD73 폴리펩티드에 관하여) 에서 결합할 수 있다.
항체 11E1, 6E1, 3C12 및 8C7 은 이합체간 모드에서 상호작용하는 다른 항체와 대조적으로, AMP 가 가수분해될 수 없는 불활성 상태에서 CD73 효소를 구속하는, 이합체내 모드에서 CD73 이합체에 결합하는 항체의 예이다. 이러한 CD73 기능 차단 항체를 확인하는데 사용될 수 있는 가용성 CD73 을 사용하는 검정은 PCT 공보 nos. WO2016/055609 및 WO2016/131950 에서 제공된다. 하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 본 발명을 개시하는 본 출원의 출원일에 입수가능한 또는 공지된 임의의 항체, 또는 CD73 에 결합하고 CD73 의 효소 활성을 저해하는 능력을 보유하는 이의 항체 단편 (예를 들어, 중쇄 및 경쇄 CDR 을 포함하는 단편) 이다.
따라서, 항체는 CD73 폴리펩티드의 알로스테릭 저해제일 수 있으며, 예를 들어 항체는 종양 세포를 포함하나 이에 제한되지 않는 세포의 표면에서 발현된 인간 CD73 폴리펩티드에 결합하고, CD73 폴리펩티드에 결합하는 CD73 폴리펩티드의 기질의 능력을 간섭하지 않으면서 효소 (엑토-5' 뉴클레오티다아제) 활성 CD73 폴리펩티드를 저해한다.
CD73 이 CD73 이합체로서 존재하여, 예를 들어, 잠재적으로 항체가 하나의 CD73 이합체에 2가로 결합하는 것을 허용할 때, 동일한 면에 존재하는 CD73 상의 에피토프에 결합하는 예시적인 항체가 본 명세서에 기재되며, 항체는 온전한 전장 항체와 CD73 이합체 사이의 1:1 화학량론에서 이합체내 결합 모드로 CD73 에 결합한다. 리간드-결합된 CD73 에 대한 결합을 고려하여, 본원에 기재된 항체는 AMP 에 결합될 때, 예를 들어, 치료 전에 상류 ADP 및/또는 AMP 가 유의한 수준으로 존재하는 종양 환경에서 CD73 에 대한 결합에 유용할 수 있다. 종양 미세환경은 임의의 적절한 파라미터, 예를 들어 높은 수준의 ADP (예를 들어, 염색하는 세포에 의해 생성됨), AMP, 아데노신, CD73 발현 또는 CD73-발현 세포의 존재 또는 수준, 아데노신 수용체 발현 또는 아데노신-수용체 발현 세포의 존재 또는 수준에 의해 특성화될 수 있다. 따라서, 종양 환경 내 CD73 분자는 기질-결합된 입체형태로 존재할 수 있고, 기질 결합되지 않은 CD73 에 더하여 기질-결합된 세포 CD73 (예를 들어, AMP 와 같은 기질과 사전인큐베이션된 CD73 발현 세포) 에 결합하고 저해하는 능력은 생체내에서 CD73 을 저해하는 더 큰 능력을 제공할 수 있다. 선택적으로, ADP 또는 AMP (및/또는 ATP 또는 아데노신) 의 수준을 치료 전에 종양 환경에서 평가할 수 있다. 항체는 종양 샘플에서 ADP, AMP, ATP 또는 아데노신의 유의한 수준 (예를 들어 기준에 비해 높은 수준) 을 갖는 개체에서 치료에 특별한 이점을 가질 수 있다.
예시적 항체는 세포 표면에서 발현되는 인간 CD73 폴리펩티드에 결합할 수 있고 CD73 폴리펩티드의 효소 (엑토-5' 뉴클레오티다아제) 활성을 저해하며, 항체는 단일 CD73 폴리펩티드 이합체 (가용성 CD73 폴리펩티드 이합체 또는 세포에 의해 발현되는 CD73 폴리펩티드 이합체) 에 2가 결합할 수 있다. 선택적으로, 항체는 이합체 내의 제 1 CD73 폴리펩티드에 제 1 항원 결합 도메인으로 결합하고, 제 2 CD73 폴리펩티드에 제 2 항원 결합 도메인으로 결합한다.
예시적 항체는 세포 표면에서 발현되는 인간 CD73 폴리펩티드에 결합할 수 있고 CD73 폴리펩티드의 효소 (엑토-5' 뉴클레오티다아제) 활성을 저해하며, 항체는 기질-결합된 구조의 CD73 폴리펩티드에 결합할 수 있다.
항-CD73 항체는 CD73 의 효소 활성을 억제하는, 특히 CD73 의 5'-뉴클레오티다아제 활성을 저해하고 CD73-발현 세포에 의한 아데노신의 생산을 감소시키고, 결국 림프구의 활성을 회복시키고/거나 림프구의 아데노신-매개되는 저해를 완화시키는 그것의 능력에 대해 평가되고 선택될 수 있다.
CD73 의 효소 활성을 저해하는 항체의 능력은 (이합체로서) 재조합 가용성 인간 CD73 및 AMP 를 사용하는 무세포 검정에서 시험될 수 있으며, 여기서 AMP 의 아데노신으로의 전환 (및/또는 이의 저해) 은 직접적으로 (예를 들어, 기질 및 생성물, 즉 AMP, 아데노신 및/또는 포스페이트의 측정에 의해), 또는 간접적으로 검출된다. 하나의 예에서, AMP 및/또는 아데노신은 재조합 CD73 과 시험 화합물의 인큐베이션 이전 및 이후에 HPLC 를 통해 검출된다. 재조합 CD73 은, 예를 들어, WO2016/055609 및 WO2016/131950 에 기재되어 있다.
항체의 저해 활성은 또한 임의의 많은 다른 방식으로 평가될 수 있다. 예를 들어, 예를 들어, 간접 검정에서, 루시퍼라제-기반 시약 (예를 들어, Promega 에서 입수가능한 CellTiter-Glo® 시스템) 을 사용하여 AMP 의 소멸을 검출한다. 검정에서 루시퍼라제 반응은 AMP 에 의해 저해된다. 반응에 CD73 효소의 첨가는 AMP 를 분해시키고, 저해를 완화시켜서, 검출가능한 신호를 생성한다.
가용성 CD73 을 사용하는 검정은 유리하게는 항체가 CD73 폴리펩티드 이합체에 대해 실질적인 몰 과량 (예를 들어 10-배, 20-배, 50-배, 100-배 등) 으로 제공되는 조건에서의 시험을 수반할 수 있다. 효소에 대해 몰 과량으로 제공될 때, 항-CD73 항체는 더 이상 항체 및 CD73 이합체의 다합체 복합체를 형성할 수 없게 될 것이고, 그러면 CD73 의 효소 활성의 저해를 보유하는 항체가 선택될 수 있다.
CD73 의 5'-엑토뉴클레오티다아제 효소 활성을 저해하는 항체의 능력은 대안적으로 또는 추가로 또한 세포 검정 (CD73 을 발현하는 세포를 사용) 에서 시험될 수도 있다. 유리하게는, 항체는 CD73 의 내재화를 야기하여 CD73 을 저해하는 항체를 선택할 가능성을 감소시키는 효소 활성을 차단하는 항체를 확인하는 무세포 검정에서 먼저 시험 또는 스크리닝될 수 있고, 그 후 정제된 항체로서 세포 검정에서 시험될 수 있다. 세포 검정은 WO2016/055609 에 나타낸 바와 같이 수행할 수 있다. 예를 들어, CD73-발현 세포주 (예를 들어 MDA-MB-231 세포주) 를 항-CD73 항체의 존재 하에서 편평 바닥 96 웰 플레이트에 플레이팅하고 인큐베이션한다. AMP 를 세포에 첨가하고 4℃ 에서 인큐베이션한다 (CD73 하향-조절을 피하기 위해). 그 다음으로 플레이트를 원심분리하고 상청액을 편평 바닥 96 웰 배양 플레이트로 옮긴다. 그 다음으로 AMP 의 아데노신으로의 가수분해에 의해 생성된 유리 포스페이트를 정량한다. 항체의 존재 하에서 AMP 의 아데노신으로의 가수분해의 감소는 항체가 세포 CD73 을 저해한다는 것을 의미한다.
하나의 구현예에서, 항체 조제물은 CD73 폴리펩티드의 효소 활성에서 적어도 50% 감소, 바람직하게는 CD73 폴리펩티드 (예를 들어, 가용성 동종이합체 CD73 폴리펩티드; 세포에 의해 발현된 CD73) 의 효소 활성에서 적어도 60%, 70% 또는 80% 감소를 야기한다.
항체의 활성은 또한 림프구의 활성을 조절하는, 예를 들어 림프구 활성의 아데노신-매개되는 저해를 완화하는, 또는 림프구 활성의 활성화를 야기하는 그것의 능력에 대해 간접 검정에서 측정될 수 있다. 이는, 예를 들어, 사이토카인-방출 검정을 이용하여 처리될 수 있다. 또다른 예에서, 항체는 림프구의 증식을 조절하는 그것의 능력에 대해 간접 검정에서 평가될 수 있다.
항체는 CD73 을 내재화하는 또는 CD73 의 하향-조절을 유도하는 그것의 능력에 대해, 예를 들어 세포 표면으로부터 섀딩하는 CD73 의 내재화 또는 유도에 의해 시험될 수 있다. 항-CD73 항체가 포유동물 세포 상의 CD73 에 결합시 내재화되는지 여부, 또는 CD73 폴리펩티드가 세포내 내재화를 겪는지 여부 (예를 들어, 항체에 의해 결합시) 는 예를 들어 그의 개시내용이 본원에 참조로 포함되는 WO2016/055609 에 기재된 것을 포함하는 다양한 검정에 의해 확인될 수 있다.
하나의 예에서, 항체가 올리고머를 형성할 수 없는 설정/구성에 있을 때, 예를 들어 항체가 CD73 폴리펩티드 이합체에 대해 실질적인 몰 과량 (예를 들어, 적어도 10 배, 20 배, 100 배 등) 으로 제공될 때, 항체는 가용성 인간 이합체 CD73 폴리펩티드의 효소 활성을 저해하는 능력에 대해 선택될 수 있다. 올리고머화를 유발함으로써 기능하는 항체는 항체가 CD73 폴리펩티드 이합체에 대해 실질적인 몰 과량으로 제공될 때 CD73 을 저해하는데 실패한다. 항체는 게다가 CD73 이 세포 표면에서 발현될 때 유지되는 CD73 상의 에피토프에 결합한다. 이 검정의 사용을 통해, 단일 CD73 이합체에 2가로 결합하는 항체가 또한 확인될 수 있으며; 이러한 항체는 CD73-발현 세포에서 시험관내 및 생체내에서 개선된 CD73-결합 및 CD73 차단 활성을 가질 수 있다. 이어서, 이들 방법에 의해 확인된 항체를 정제된 항체를 사용하여 세포 효소 활성 검정에서 시험하였고, 세포 CD73 의 효소 활성을 중화시키는 것으로 밝혀졌다. 일차적으로 내재화를 유도함으로써 CD73 을 저해하거나 세포 CD73 에 대한 유의한 결합을 상실하는 항체는 효능이 덜했고, 효소 활성을 중화시킬 수 없었으며, 이는 세포에서 CD73 의 효소 활성의 기껏해야 부분적인 저해만을 제공하였다.
이들 항체가 결합되는 CD73 상의 에피토프는 다양한 세포, 예를 들어, 암세포, CD4 T 세포, CD8 T 세포, B 세포, 형질감염된 세포에 의해 발현되는 CD73 폴리펩티드 상에 존재하고, 유세포 분석에 의해 확인되는 고 친화성으로 결합한다. 예를 들어, 항체는 표면에서 CD73 폴리펩티드를 발현하는 세포에 대한 결합에 관해 본원에서 기재된 항-CD73 항체 (예를 들어, 항체 6E1) 의 경우와 비슷한, 또는 그것보다 2-log 이하, 선택적으로 1-log, 더 큰, 또는 5 ㎍/㎖ 이하, 선택적으로 2 ㎍/㎖ 이하, 1 ㎍/㎖ 이하, 0.5 ㎍/㎖ 이하, 0.1 ㎍/㎖ 이하 또는 0.05 ㎍/㎖ 이하의 유세포 분석에 의해 확인되는 EC50 을 특징으로 할 수 있다. 하나의 구현예에서 세포는 그의 표면에서 CD73 를 발현하도록 만들어진 세포이다. 하나의 구현예에서 세포는 그의 표면에서 CD73 을 내인성으로 발현하는 세포, 예를 들어 암 세포이다.
하나의 구현예에서, CD73 중화 항체는 세포에서 CD73 의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성의 적어도 60%, 75% 또는 80% 의 감소를 야기할 수 있는 것을 특징으로 할 수 있다. 하나의 구현예에서, CD73-중화 항체는 본원에서 기재된 항체의 경우와 비슷한, 또는 그 이하인, 본원에서 기재된 항-CD73 항체 (예를 들어, 항체 6E1) 의 경우보다 2-log 이하, 선택적으로 1-log 더 큰, 또는 1 ㎍/㎖ 이하, 선택적으로 0.5 ㎍/㎖ 이하, 선택적으로 0.2 ㎍/㎖ 이하인 세포에 의해 발현되는 CD73 의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성의 저해에 대한 EC50 을 특징으로 할 수 있다.
선택적으로, 세포에 의해 발현되는 CD73 의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성의 저해는 AMP 의 아데노신으로의 가수분해를 정량화함으로써 MDA-MB-231 세포에서 5' 엑토뉴클레오티다아제 활성의 중화를 평가함으로써 확인된다 (예를 들어, WO2016/055609 의 실시예 5 참고).
하나의 구현예에서, 항체는 세포의 표면에서 인간 CD73 에 특이적으로 결합하고 세포 CD73 (세포에 의해 발현되는 CD73) 의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시킬 수 있다. 하나의 구현예에서, 항체는 세포의 표면에서 인간 CD73 의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성에 특이적으로 결합하고 중화시키고, CD73 에 결합 시 CD73-발현 세포 내로 내재화되지 않으며, 예를 들어, 항체는 그것의 CD73-중화 활성을 위해 CD73 의 다합체화 및 하위서열 내재화를 요구하지 않는다. 하나의 구현예에서, 항체는 비고갈성 항체, 예를 들어 Fc 침묵 항체이다. 항체는 더욱이 CD73 폴리펩티드 항-CD73 항체의 올리고머의 유도에 의존하지 않고 용액 중에서 이합체 인간 CD73 폴리펩티드의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시킬 수 있다.
하나의 양태에서, 항체는 AMP 와 사전 인큐베이션된 세포의 표면에서 인간 CD73 에 특이적으로 결합하고, 이의 5'-엑토뉴클레오티다제 활성을 중화시킬 수 있다. 선택적으로, 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성의 중화는 AMP 의 아데노신으로의 가수분해를 정량화함으로써 MDA-MB-231 세포에서 5' 엑토뉴클레오티다아제 활성의 중화를 평가함으로써 확인된다 (예를 들어, WO2016/055609 의 실시예 5 참조).
선택적으로, 항-CD73 항체는 가용성 CD73 및 세포 표면에서 발현되는 CD73 둘 모두 상에 존재하는 공통 항원 결정부에 결합할 수 있다.
선택적으로, 항-CD73 항체는 CD73 활성 부위가 기질, 예를 들어, AMP, APCP 에 의해 점유되거나/이에 결합되지 않을 때 및 CD73 활성 부위가 기질, 예를 들어, AMP, APCP 에 의해 점유되거나/이에 결합될 때 CD73 상에 존재하는 공통 항원 결정부에 결합한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 CD73 이합체 내의 각각의 CD73 폴리펩티드 사슬 내의 항원 결정부에 결합하며, 예를 들어, 항원 결정부는 CD73 이합체의 공통 면에 존재한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 분절 158-171 의 잔기에서 및/또는 분절 206-211 의 잔기에서 아미노산 치환을 갖는 CD73 폴리펩티드, 예를 들어 임의의 하나 이상의 잔기 V170, K206 및 N211 (SEQ ID NO: 1 에 관하여) 에서 아미노산 치환을 갖는 CD73 폴리펩티드에 대한 감소된 결합을 갖는다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 분절 65-83 의 잔기에서 및/또는 분절 157-172 의 잔기에서 (SEQ ID NO: 1 에 관하여) 아미노산 치환을 갖는 CD73 폴리펩티드에 대한 감소된 결합을 갖는다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 잔기 K136 (SEQ ID NO: 1 에 관하여) 를 포함하는 CD73 상의 에피토프에 결합한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 K97, E125, Q153 및 K330 (SEQ ID NO: 1 에 관하여) 로 이루어지는 군으로부터 선택되는 잔기 중 1, 2, 3 또는 4 개를 포함하는 CD73 상의 에피토프에 결합한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 A99, E129, K133, E134, 및 A135 (SEQ ID NO: 1 에 관하여) 로 이루어지는 군으로부터 선택되는 잔기 중 1, 2, 3, 4 또는 5 개를 포함하는 CD73 상의 에피토프에 결합한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 Y345, D399, E400, R401 및 R480 (SEQ ID NO: 1 에 관하여) 로 이루어지는 군으로부터 선택되는 잔기 중 1, 2, 3, 4 또는 5 개를 포함하는 CD73 상의 에피토프에 결합한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 아미노산 잔기 K97, A99, E125, E129, K133, E134, A135, K136, Q153 및 K330 (SEQ ID NO: 1 에 관하여) 를 포함하는 인간 CD73 단백질 (예를 들어 CD73 동종이합체 단백질) 상의 아미노산 잔기의 도메인 또는 분절 내에서 적어도 부분적으로 결합한다. 하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 K97, A99, E125, E129, K133, E134, A135, K136, Q153 및 K330 (SEQ ID NO: 1 에 관하여) 로 이루어지는 군으로부터 선택되는 잔기 중 적어도 1, 2, 3, 4 또는 5 개, 또는 그 이상을 포함하는 CD73 상의 에피토프에 결합한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 잔기 K136 (SEQ ID NO: 1 에 관하여) 에서 돌연변이를 갖는 CD73 폴리펩티드에 대한 감소된 결합을 갖는다; 선택적으로, 돌연변이체 CD73 폴리펩티드는 하기 돌연변이를 갖는다: K136A.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 잔기에서 돌연변이를 갖는 CD73 폴리펩티드에 대한 감소된 결합을 갖는다: K97, E125, Q153 및 K330 (SEQ ID NO: 1 에 관하여); 선택적으로, 돌연변이체 CD73 폴리펩티드는 하기 돌연변이를 갖는다: K97A, E125A, Q153A 및/또는 K330A (예를 들어, K97A, E125A 및 K330A; K97A, E125A 및/또는 Q153A).
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 잔기에서 돌연변이를 갖는 CD73 폴리펩티드에 대한 감소된 결합을 갖는다: A99, E129, K133, E134, 및 A135 (SEQ ID NO: 1 에 관하여); 선택적으로, 돌연변이체 CD73 폴리펩티드는 하기 돌연변이를 갖는다: A99S, E129A, K133A, E134N, 및 A135S.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 L131, K136, S155, L157, K162, 및 K330 (SEQ ID NO: 1 에 관하여) 로 이루어지는 군으로부터 선택되는 잔기 중 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 개를 포함하는 CD73 상의 에피토프에 결합한다.
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 잔기 중 하나 이상 (또는 전부) 에서 돌연변이를 갖는 CD73 폴리펩티드에 대한 감소된 결합을 갖는다: L131, K136, S155, L157 및 K162 (SEQ ID NO: 1 에 관하여).
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 잔기 중 하나 이상 (또는 전부) 에서 돌연변이를 갖는 CD73 폴리펩티드에 대한 감소된 결합을 갖는다: L131, K136, S155, L157, K162 및 K330 (SEQ ID NO: 1 에 관하여).
하나의 양태에서, 항-CD73 항체는 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 잔기 중 하나 이상 (또는 전부) 에서 돌연변이를 갖는 CD73 폴리펩티드에 대한 감소된 결합을 갖는다: Y345, D399, E400, R401 및 R480 (SEQ ID NO: 1 에 관하여).
하나의 양태에서 항-CD73 항체는 항체 11E1, 8C7, 3C12, 6E1, 373.A 및/또는 Hu101-28 에 의해 결합되는 CD73 상의 에피토프에 대한 결합에 대해 경쟁한다 (예를 들어, CD73 폴리펩티드 상의 에피토프에 대한 결합에 대해 상기 항체의 중 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역을 갖는 항체와 경쟁한다).
본원에서 임의의 구현예의 하나의 양태에서, 항원-결합 화합물은 모노클로날 항체 11E1, 8C7, 3C12 및/또는 6E1 와 동일한 에피토프에 결합하고/하거나 CD73 폴리펩티드 상의 에피토프에 대한 결합에 대해 경쟁한다 (예를 들어, 11E1, 8C7, 3C12 또는 6E1 중 임의의 것의 중 및 경쇄 CDR 또는 가변 영역을 갖는 항체와 CD73 폴리펩티드에 대한 결합에 대해 경쟁한다). 하나의 구현예에서, 항원-결합 화합물은 하기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 항체와 동일한 에피토프에 결합하고/하거나 CD73 폴리펩티드 상의 에피토프에 대한 결합에 대해 경쟁한다:
(a) 각각 SEQ ID NOS: 49 및 50 의 VH 및 VL 영역을 갖는 항체 (6E1);
(b) 각각 SEQ ID NOS: 51 및 52 의 VH 및 VL 영역을 갖는 항체 (11E1);
(c) 각각 SEQ ID NOS: 53 및 54 의 VH 및 VL 영역을 갖는 항체 (8C7); 및
(d) 각각 SEQ ID NOS: 55 및 56 의 VH 및 VL 영역을 갖는 항체 (3C12).
하나의 구현예에서, 항-CD73 항체는 11E1, 6E1, 3C12 또는 8C7 에 의해 결합되는 CD73 상의 아미노산 잔기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1, 2 또는 3 개의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다.
본원에서 임의의 구현예의 하나의 양태에서, 항체는 11E1, 6E1, 3C12, 8C7, 373 (예를 들어 373.A), 또는 Hu101-28 로 이루어진 항체의 군으로부터 선택된 항체의 각각의 중쇄 및/또는 경쇄의 1, 2 또는 3 개의 CDR 을 갖는 중쇄 및/또는 경쇄를 가질 수 있다.
항체 11E1, 6E1, 3C12, 8C7, 373.A 및 Hu101-28 의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 표 A 에 열거되어 있다. 구체적 구현예에서, 본 공개는 모노클로날 항체 11E1, 6E1, 3C12, 8C7, 373.A 또는 Hu101-28 와 동일한 또는 본질적으로 동일한 에피토프 또는 결정부에 결합하는 항체를 제공한다; 선택적으로 항체는 항체 11E1, 6E1, 3C12, 8C7, 373.A 또는 Hu101-28 의 과가변 영역을 포함한다. 본원에서의 임의의 구현예에서, 항체 11E1, 6E1, 3C12, 8C7, 373.A 또는 Hu101-28 은 아미노산 서열 및/또는 이를 코딩하는 핵산 서열에 의해 특징화될 수 있다. 하나의 구현예에 따르면, 항체는 11E1, 6E1, 3C12, 8C7, 373.A 또는 Hu101-28 의 중쇄 가변 영역의 3 개의 CDR (예를 들어, Kabat, Chothia 또는 IGMT 넘버링에 따라) 을 포함할 수 있다. 또한 제공되는 것은 11E1, 6E1, 3C12, 8C7, 373.A 또는 Hu101-28 의 가변 경쇄 가변 영역 또는 각각의 11E1, 6E1, 3C12, 8C7, 373.A 또는 Hu101-28 항체의 경쇄 가변 영역의 CDR (예를 들어, Kabat, Chothia 또는 IGMT 넘버링에 따라) 중 1, 2 또는 3 개를 추가로 포함하는 모노클로날 항체이다. 선택적으로 상기 경 또는 중쇄 CDR 중 임의의 하나 이상은 1, 2, 3, 4 또는 5 개 또는 그 이상의 아미노산 변형 (예를 들어 치환, 삽입 또는 결실) 을 함유할 수 있다. 선택적으로, 제공되는 것은 항체 11E1, 6E1, 3C12, 8C7, 373.A 또는 Hu101-28 의 항원 결합 영역의 일부 또는 전부를 포함하는 경쇄 및/또는 중쇄 가변 영역 중 임의의 것이 인간 IgG 타입의 면역글로불린 불변 영역, 선택적으로 인간 불변 영역, 선택적으로 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 아이소타입에 융합된 항체이다. 하나의 구현예에서, 인간 불변 영역은 이펙터 기능 (인간 Fcγ 수용체에 대한 결합) 을 감소시키기 위해 아미노산 치환을 선택적으로 추가로 포함한다. 하나의 구현예에서, 인간 불변 영역 (선택적으로 힌지 영역) 은 CD73 의 세포내 내재화를 증가 또는 유도하는 아미노산 치환을 선택적으로 추가로 포함한다.
본원에서 임의의 구현예의 또다른 양태에서, 중쇄 및 경쇄의 CDR 1, 2 및/또는 3 중 임의의 것은 그의 적어도 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 개의 인접 아미노산의 서열에 의해, 및/또는 특정 CDR 또는 CDR 세트 (예를 들어, SEQ ID NO 에 열거됨) 와 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 서열 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 갖는 것으로 특징지어질 수 있다. 임의의 항체, 예를 들어, 11E1, 8C7, 3C12 또는 6E1 에서, 특정 가변 영역 및 CDR 서열은 서열 변형, 예를 들어 치환 (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 개 이상의 서열 변형) 을 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, 중 및 경쇄의 CDR 1, 2 및/또는 3 은 1, 2, 3 또는 그 이상의 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 치환된 잔기는 인간 기원의 서열에 존재하는 잔기이다. 하나의 구현예에서 치환은 보존적 변형이다. 보존적 서열 변형은 아미노산 서열을 포함하는 항체의 결합 특성에 중대한 영향을 주거나 변화시키지 않는 아미노산 변형을 말한다. 이러한 보존적 변형은 아미노산 치환, 부가 및 결실을 포함한다. 변형은 부위-지정 돌연변이유발 및 PCR-매개 돌연변이유발과 같은 당업계에 공지된 표준 기술에 의해 항체에 도입될 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 전형적으로 아미노산 잔기가 유사한 물리화학적 특성을 갖는 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 특정된 가변 영역 및 CDR 서열은 1, 2, 3, 4 또는 그 이상의 아미노산 삽입, 결실 또는 치환을 포함할 수 있다. 치환이 일어나는 경우, 바람직한 치환은 보존적 변형일 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리가 당업계에 정의되어 있다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄 (예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄 (예를 들어, 글라이신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지된 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘) 를 갖는 아미노산을 포함한다. 따라서, 항체의 CDR 영역 내의 하나 이상의 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 패밀리로부터의 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있고, 변경된 항체는 본원에 기재된 검정을 사용하여 유지된 기능 (즉, 본원에 기재된 특성) 에 대해 시험될 수 있다.
표 A 에 나타낸 VH 및 VL 서열을 갖는 항체의 HCDR1, 2, 3 및 LCDR1, 2, 3 은 선택적으로 모두 (또는 각각, 독립적으로) Kabat 넘버링 시스템의 것, Chothia 넘버링 시스템의 것, IMGT 넘버링 시스템의 것, 또는 임의의 다른 적합한 넘버링 시스템인 것으로서 특정될 수 있다. 밑줄 및 볼드체 서열은 Kabat CDR 을 나타낸다.
표 A
Figure pct00008
Figure pct00009
하나의 구현예에서, 항-CD73 항체는 인간 Fcγ 수용체, 예를 들어, CD16A, CD16B, CD32A, CD32B 및/또는 CD64 중 임의의 하나 이상) 에 실질적인 결합을 갖지 않도록 제조될 수 있다. 이러한 항체는 Fcγ 수용체로의 결합이 결여되거나 또는 낮은 것으로 알려져 있는 다양한 중쇄의 불변 영역을 포함할 수 있다. 대안적으로, 불변 영역을 포함하지 않는 (또는 이의 일부를 포함하는) 항체 단편, 예컨대 F(ab')2 단편이 Fc 수용체 결합을 회피하는데 이용될 수 있다. Fc 수용체 결합은, 예를 들어 BIACORE 검정에서 Fc 수용체 단백질로의 항체의 결합을 시험하는 것을 포함하는, 당업계에 공지된 방법에 따라 평가될 수 있다. 또한, 일반적으로 Fc 부분이 Fc 수용체에 대한 결합을 최소화 또는 제거하도록 변형된 (예를 들어, 1 개, 2 개, 3 개, 4 개, 5 개 이상의 아미노산 치환의 도입에 의해) 임의의 항체 IgG 아이소타입이 사용될 수 있다 (예를 들어, 그 공개가 본원에 참조로 포함되는 WO 03/101485 참조). Fc 수용체 결합을 평가하기 위한 검정은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 WO 03/101485 에 기재되어 있다.
하나의 구현예에서, 항-CD73 항체는 이펙터 세포와 최소 상호작용을 갖는 "Fc 침묵" 항체를 초래하는 Fc 영역에서 하나 이상의 특정 돌연변이를 포함할 수 있다. 침묵된 이펙터 기능은 항체의 Fc 영역의 돌연변이에 의해 수득될 수 있고 하기에 기재되어 있다: N297A 돌연변이, LALA 돌연변이, (Strohl, W., 2009, Curr. Opin. Biotechnol. Vol. 20(6):685-691); 및 D265A (Baudino et al., 2008, J. Immunol. 181: 6664-69). 또한 그 공개가 본원에 참조로 포함되는 Heusser et al., WO2012/065950 참조. 하나의 구현예에서, 항체는 힌지 영역에 한 개, 두 개, 세 개 또는 그 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체는 IgG1 또는 IgG2 이고, 잔기 233-236, 선택적으로 233-238 (EU 넘버링) 에 한 개, 두 개 또는 세 개의 치환을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체는 IgG4 이고, 잔기 327, 330 및/또는 331 (EU 넘버링) 에 한 개, 두 개 또는 세 개의 치환을 포함한다. 침묵 Fc IgG1 항체의 예는 IgG1 Fc 아미노산 서열에 L234A 및 L235A 돌연변이를 포함하는 LALA 돌연변이체이다. Fc 침묵 돌연변이의 또 다른 예는 예를 들어 IgG1 항체에서 사용되는 DAPA (D265A, P329A) 돌연변이 (US 6,737,056) 와 같은, 잔기 D265 에서의, 또는 D265 및 P329 에서의 돌연변이이다. 또다른 침묵 IgG1 항체는 잔기 N297 에 돌연변이 (예를 들어, N297A, N297S 돌연변이) 를 포함하고, 이는 비-글리코실화/무-글리코실화 항체를 초래한다. 기타 침묵 돌연변이는 하기를 포함한다: 잔기 L234 및 G237 에서의 치환 (L234A/G237A); 잔기 S228, L235 및 R409 에서의 치환 (S228P/L235E/R409K,T,M,L); 잔기 H268, V309, A330 및 A331 에서의 치환 (H268Q/V309L/A330S/A331S); 잔기 C220, C226, C229 및 P238 에서의 치환 (C220S/C226S/C229S/P238S); 잔기 C226, C229, E233, L234 및 L235 에서의 치환 (C226S/C229S/E233P/L234V/L235A); 잔기 K322, L235 및 L235 에서의 치환 (K322A/L234A/L235A); 잔기 L234, L235 및 P331 에서의 치환 (L234F/L235E/P331S); 잔기 234, 235 및 297 에서의 치환; 잔기 E318, K320 및 K322 에서의 치환 (L235E/E318A/K320A/K322A); 잔기에서의 치환 (V234A, G237A, P238S); 잔기 243 및 264 에서의 치환; 잔기 297 및 299 에서의 치환; EU 넘버링 시스템에 의해 정의되는 잔기 233, 234, 235, 237, 및 238 이 PAAAP, PAAAS 및 SAAAS 로부터 선택되는 서열을 포함하도록 하는 치환 (WO2011/066501 참조).
하나의 구현예에서, 항-CD73 항체는 Fc 영역에 하나 이상의 특정한 돌연변이를 포함할 수 있다. 예를 들어, 이러한 항체는 인간 IgG1 기원의 Fc 도메인을 포함할 수 있고, Kabat 잔기(들) 234, 235, 237, 330 및/또는 331 에 돌연변이를 포함할 수 있다. 이러한 Fc 도메인의 일례는 Kabat 잔기 L234, L235 및 P331 에 치환을 포함한다 (예를 들어, L234A/L235E/P331S 또는 (L234F/L235E/P331S). 이러한 Fc 도메인의 또다른 예는 Kabat 잔기 L234, L235, G237 및 P331 에 치환을 포함한다 (예를 들어, L234A/L235E/G237A/P331S). 이러한 Fc 도메인의 또다른 예는 Kabat 잔기 L234, L235, G237, A330 및 P331 에 치환을 포함한다 (예를 들어, L234A/L235E/G237A/A330S/P331S). 하나의 구현예에서, 항체는 L234X1 치환, L235X2 치환, 및 P331X3 치환을 포함하는, 선택적으로 인간 IgG1 아이소타입의, Fc 도메인을 포함하며, 여기서 X1 은 류신 이외의 임의의 아미노산 잔기이며, X2 는 류신 이외의 임의의 아미노산 잔기이고, X3 은 프롤린 이외의 임의의 아미노산 잔기이고; 선택적으로 X1 은 알라닌 또는 페닐알라닌 또는 이의 보존적 치환이고; 선택적으로 X2 는 글루탐산 또는 이의 보존적 치환이고; 선택적으로 X3 은 세린 또는 이의 보존적 치환이다. 또다른 구현예에서, 항체는 L234X1 치환, L235X2 치환, G237X4 치환 및 P331X4 치환을 포함하는, 선택적으로 인간 IgG1 아이소타입의, Fc 도메인을 포함하며, 여기서 X1 은 류신 이외의 임의의 아미노산 잔기이고, X2 는 류신 이외의 임의의 아미노산 잔기이며, X3 은 글리신 이외의 임의의 아미노산 잔기이고, X4 는 프롤린 이외의 임의의 아미노산 잔기이며; 선택적으로 X1 은 알라닌 또는 페닐알라닌 또는 이의 보존적 치환이고; 선택적으로 X2 는 글루탐산 또는 이의 보존적 치환이고; 선택적으로, X3 은 알라닌 또는 이의 보존적 치환이며; 선택적으로 X4 는 세린 또는 이의 보존적 치환이다. 또다른 구현예에서, 항체는 L234X1 치환, L235X2 치환, G237X4 치환, G330X4 치환, 및 P331X5 치환을 포함하는, 선택적으로 인간 IgG1 아이소타입의, Fc 도메인을 포함하며, 여기서 X1 은 류신 이외의 임의의 아미노산 잔기이며, X2 는 류신 이외의 임의의 아미노산 잔기이고, X3 은 글리신 이외의 임의의 아미노산 잔기이고, X4 는 알라닌 이외의 임의의 아미노산 잔기이며, X5 는 프롤린 이외의 임의의 아미노산 잔기이고; 선택적으로 X1 은 알라닌 또는 페닐알라닌 또는 이의 보존적 치환이며; 선택적으로 X2 는 글루탐산 또는 이의 보존적 치환이고; 선택적으로, X3 은 알라닌 또는 이의 보존적 치환이며; 선택적으로, X4 는 세린 또는 이의 보존적 치환이고; 선택적으로 X5 는 세린 또는 이의 보존적 치환이다.
여기에서 이용되는 약칭 명명에서, 형식은 야생형 잔기: 폴리펩티드에서의 위치: 돌연변이체 잔기이고, 여기서 잔기 위치는 Kabat 에 따른 EU 넘버링에 따라 나타낸다.
하나의 구현예에서, 항-CD73 항체는 아래의 아미노산 서열, 또는 그와 적어도 90%, 95% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하나 Kabat 위치 234, 235 및 331 (밑줄 표시됨) 의 아미노산 잔기를 유지하는 중쇄 불변 영역을 포함한다:
Figure pct00010
하나의 구현예에서, 항-CD73 항체는 아래의 아미노산 서열, 또는 그와 적어도 90%, 95% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하나 Kabat 위치 234, 235 및 331 (밑줄 표시됨) 의 아미노산 잔기를 유지하는 중쇄 불변 영역을 포함한다:
Figure pct00011
하나의 구현예에서, 항-CD73 항체는 아래의 아미노산 서열, 또는 그와 적어도 90%, 95% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하나 Kabat 위치 234, 235, 237, 330 및 331 (밑줄 표시됨) 의 아미노산 잔기를 유지하는 중쇄 불변 영역을 포함한다:
Figure pct00012
하나의 구현예에서, 항체는 아래의 아미노산 서열, 또는 그와 적어도 90%, 95% 또는 99% 동일한 서열을 포함하나 Kabat 위치 234, 235, 237 및 331 (밑줄 표시됨) 의 아미노산 잔기를 유지하는 중쇄 불변 영역을 포함한다:
Figure pct00013
Fc 침묵 항체는 ADCC 활성을 생성하지 않거나 적게 생성하여, 이는 Fc 침묵 항체가 50% 미만의 특이적 세포 용해인 ADCC 활성을 나타냄을 의미한다. 바람직하게는 항체는 실질적으로 ADCC 활성을 결여하며, 예를 들어, Fc 침묵 항체는 5% 미만 또는 1% 미만인 ADCC 활성 (특이적 세포 용해) 을 나타낸다. Fc 침묵 항체는 또한 CD73-발현 세포의 표면에서 CD73 의 FcγR-매개되는 교차-연결의 결여를 초래할 수 있다.
하나의 구현예에서, 항-CD73 항체는 중쇄 불변 영역에서 220, 226, 229, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 243, 264, 268, 297, 298, 299, 309, 310, 318, 320, 322, 327, 330, 331 및 409 로 이루어진 군으로부터 선택되는 임의의 1 개, 2 개, 3 개, 4 개, 5 개 이상의 잔기에 치환을 갖는다 (중쇄 불변 영역에서 잔기의 넘버링은 Kabat 에 따른 EU 넘버링을 따른다). 하나의 구현예에서, 항체는 잔기 234, 235 및 322 에 치환을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체는 잔기 234, 235 및 331 에 치환을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체는 잔기 234, 235, 237 및 331 에 치환을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체는 잔기 234, 235, 237, 330 및 331 에 치환을 포함한다. 하나의 구현예에서, Fc 도메인은 인간 IgG1 서브타입의 것이다. 아미노산 잔기는 Kabat 에 따른 EU 넘버링을 따라 나타낸다.
선택적으로, 본원에서의 임의의 구현예에서, 항-CD73 항체는 본원에 기재된 임의의 항체의 기능-보존적 변이체, 그의 중쇄 및/또는 경쇄, CDR 또는 가변 영역인 것을 특징으로 할 수 있다. "기능-보존적 변이체" 는 아미노산의 유사한 특성 (예컨대, 예를 들어 극성, 수소 결합 잠재성, 산성, 염기성, 소수성, 방향족 등) 을 갖는 아미노산으로의 대체를 제한 없이 포함하여, 폴리펩티드의 전체적 입체형태 및 기능을 변경시키지 않고 단백질 또는 항체에서의 주어진 아미노산 잔기가 변화된 것이다. 단백질에서 보존된 것으로 명시된 것 이외의 아미노산은 상이할 수 있어서 유사한 기능의 임의의 2 종 단백질 간 단백질 또는 아미노산 서열 유사성 백분율은 다양할 수 있고, 예를 들어 유사성이 MEGALIGN 알고리즘을 기반으로 하는 Cluster 방법과 같은 정렬 체계에 따라 확인시 70% 내지 99% 일 수 있다. "기능-보존적 변이체" 는 또한 BLAST 또는 FASTA 알고리즘으로 확인되는 적어도 60% 아미노산 동일성, 바람직하게는 적어도 75%, 보다 바람직하게는 적어도 85%, 여전히 바람직하게는 적어도 90%, 및 보다 더 바람직하게는 적어도 95% 아미노산 동일성을 갖고, 그것과 비교되는 천연 또는 부모 단백질 (예를 들어 그의 중쇄 또는 경쇄, 또는 CDR 또는 가변 영역) 과 동일한 또는 실질적으로 유사한 특성 또는 기능을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체는 항체 11E1, 6E1, 3C12 또는 8C7 의 중쇄 가변 영역의 기능-보존적 변이체인 중쇄 가변 영역, 및 각각의 11E1, 6E1, 3C12 또는 8C7 항체의 경쇄 가변 영역의 기능-보존적 변이체인 경쇄 가변 영역을 포함한다. 하나의 구현예에서, 항체는 본원에서 개시되는 인간 중쇄 불변 영역, 선택적으로 인간 IgG4 불변 영역, 선택적으로 변형된 IgG (예를 들어 IgG1) 불변 영역, 예를 들어 본원에서 개시되는 불변 영역에 융합된 항체 11E1, 6E1, 3C12 또는 8C7 의 중쇄 가변 영역의 기능-보존적 변이체인 중쇄, 및 인간 Ckappa 경쇄 불변 영역에 융합된 각각의 11E1, 6E1, 3C12 또는 8C7 항체의 경쇄 가변 영역의 기능-보존적 변이체인 경쇄를 포함한다.
키트 및 제형
임의의 활성제, 예를 들어, 항-CD73 항체, 항-HER2 항체 또는 화학요법제는 조성물, 예컨대 약제학적으로 허용가능한 조성물 및 키트에 구현되는 것으로서 특정될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 조성물은 전형적으로 제형화, 전달, 안정성, 또는 조성물의 다른 특징 (예를 들어, 다양한 담체) 을 촉진하는 활성 성분 또는 불활성 성분일 수 있는 하나 이상의 추가 성분을 포함할 것이다.
추가의 구현예에서, 제공되는 것은 위암 (선택적으로 위 선암종 또는 위식도 접합부 선암종) 을 갖는 대상체를 치료하는데 사용하기 위한, 항-CD73 항체의 치료적 유효량을 포함하는 약제학적 제형으로서, 대상체는 HER2-양성인 암을 갖고, 상기 약제학적 제형은 항-HER2 항체 및 선택적으로 추가로 화학요법제 (예를 들어 파클리탁셀) 와의 조합으로 (예를 들어 이를 이용하는 병용 치료에서) 투여되는 제형이다. 추가의 구현예에서, 제공되는 것은 위암 (선택적으로 위 선암종 또는 위식도 접합부 선암종) 을 갖는 대상체를 치료하는데 사용하기 위한, 항-HER2 항체의 치료적 유효량을 포함하는 약제학적 제형으로서, 대상체는 HER2-양성 암을 갖고, 상기 약제학적 제형은 항-CD73 항체 및 선택적으로 추가로 화학요법제 (예를 들어 파클리탁셀) 와의 조합으로 (예를 들어 이를 이용하는 병용 치료에서) 투여되는 제형이다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "약제학적 조성물" 또는 "치료 조성물" 은 대상체에 적절하게 투여될 때 원하는 치료 효과를 유도할 수 있는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 일부 구현예에서, 본 공개는 약제학적으로 허용가능한 담체 및 치료적 유효량의 본 공개의 적어도 하나의 저해제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "약제학적으로 허용가능한 담체" 또는 "생리학적으로 허용가능한 담체" 는 본 공개의 하나 이상의 작용제의 전달을 달성 또는 향상시키기에 적합한 하나 이상의 제형 물질을 지칭한다.
일부 구현예에서, 본원에서 개시되는 작용제는 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 또는 안정화제와 함께, 약제학적 조성물로서 제형화될 수 있다. 특정 구현예에서, 이러한 약제학적 조성물은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 임의의 하나 이상의 투여 경로를 통해 인간 또는 비인간 동물에게 투여하기에 적합하다. 용어 "약제학적으로 허용가능한 담체" 는 활성 성분의 생물학적 활성의 효과를 저해하지 않는 하나 이상의 비독성 물질을 의미한다. 이러한 제제는 일상적으로 염, 완충제, 보존제, 상용성 담체, 및 선택적으로 다른 치료제를 함유할 수 있다. 이러한 약제학적으로 허용가능한 제제는 또한 인간에게 투여하기에 적합한 상용성 고체 또는 액체 충전제, 희석제 또는 캡슐화 물질을 함유할 수 있다. 본원에 기재된 제형에 이용될 수 있는 다른 고려되는 담체, 부형제 및/또는 첨가제는, 예를 들어, 향미제, 항미생물제, 감미제, 항산화제, 대전방지제, 지질, 단백질 부형제 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 카제인, 염-형성 반대이온 예컨대 나트륨 등을 포함한다. 본원에 기재된 제형에 사용하기에 적합한 이들 및 추가의 공지된 약제학적 담체, 부형제 및/또는 첨가제는 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, "Remington: The Science & Practice of Pharmacy," 2lst ed., Lippincott Williams & Wilkins, (2005), 및 "Physician's Desk Reference," 60th ed., Medical Economics, Montvale, N.J. (2005) 에 열거되어 있다. 요망되는 또는 요구되는 투여 방식, 용해도, 및/또는 안정성에 적합한 약제학적으로 허용가능한 담체가 선택될 수 있다.
하나의 구현예에서, 본 공개의 제형은 내독소 및/또는 관련 발열성 물질이 실질적으로 없는 무발열원 제형이다. 내독소는 미생물 내부에 갇혀 있다가 미생물이 분해되거나 죽었을 때만 배출되는 독소를 포함한다. 발열성 물질은 세균 및 다른 미생물의 외막으로부터의 발열 유도성, 내열성 물질 (당단백질) 을 또한 포함한다. 이들 두 물질 모두 인간에게 투여되는 경우에 발열, 저혈압, 및 쇼크를 야기할 수 있다. 잠재적인 유해 효과로 인해, 심지어 소량의 내독소도 정맥내 투여된 약제학적 약물 용액으로부터 제거되어야 한다. 식품의약국 ("FDA") 은 정맥내 약물 적용에 대해 단일 1 시간 주기로 체중 킬로그램 당 도스 당 5 내독소 단위 (EU) 의 상한을 설정했다 (The United States Pharmacopeial Convention, Pharmacopeial Forum 26(1): 223 (2000)). 특정 구현예에서, 조성물 중 내독소 및 발열원 수준은 10 EU/㎎ 미만, 또는 5 EU/㎎ 미만, 또는 1 EU/㎎ 미만, 또는 0.1 EU/㎎ 미만, 또는 0.01 EU/㎎ 미만, 또는 0.001 EU/㎎ 미만이다.
생체내 투여에 사용될 때, 본 공개의 제형은 멸균되어야 한다. 본 공개의 제형은, 예를 들어, 멸균 여과 또는 방사선을 포함하는 다양한 멸균 방법에 의해 멸균될 수 있다. 주사용 멸균 조성물은 "Remington: The Science & Practice of Pharmacy," 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, (2005) 에 기재된 바와 같은 통상적인 약제학적 관행에 따라 제형화될 수 있다.
일부 구현예에서, 치료 조성물은 경구, 비강, 폐, 국소 (구강 및 설하 포함), 직장, 질 및/또는 비경구 투여와 같은 특정 투여 경로를 위해 제형화될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "비경구 투여" 및 "비경구 투여되는" 은 통상적으로 주사에 의한, 경장 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 지칭하며, 정맥내, 근육내, 동맥내, 경막내, 관절낭내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수강내, 경질막외 및 흉골내 주사, 및 주입을 제한 없이 포함한다. 저해제 및 다른 활성제는 멸균 조건 하에 약제학적으로 허용가능한 담체, 및 필요에 따라 임의의 보존제, 완충제, 또는 추진제와 혼합될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 Nos. 7,378,110; 7,258,873; 및 7,135,180; 미국 특허 출원 공보 Nos. 2004/0042972 및 2004/0042971 참고).
또한 제공되는 것은 키트, 예를 들어 하기를 포함하는 키트이다:
(i) 항-CD73 항체를 함유하는 약제학적 조성물,
(ii) 항-CD73 항체, 항-HER2 항체, 및 선택적으로 추가로 화학요법제 (예를 들어 탁산, 파클리탁셀) 를 함유하는 약제학적 조성물, 또는
(iii) 항-CD73 항체를 함유하는 제 1 약제학적 조성물, 및 항-HER2 항체를 함유하는 제 2 약제학적 조성물, 및 선택적으로 추가로 화학요법제 (예를 들어 탁산, 파클리탁셀) 를 함유하는 제 3 약제학적 조성물, 또는
(iv) 항-CD73 항체를 함유하는 약제학적 조성물, 및 상기 항-CD73 항체를 항-HER2 항체와 함께 및 선택적으로 추가로 화학요법제 (예를 들어 탁산, 파클리탁셀) 와 함께 투여하기 위한 지시서, 또는
(v) 항-HER2 항체를 함유하는 약제학적 조성물, 및 상기 PD-1 중화제를 항-CD73 항체와 함께 및 선택적으로 추가로 화학요법제 (예를 들어 탁산, 파클리탁셀) 와 함께 투여하기 위한 지시서.
약제학적 조성물은 선택적으로 약제학적으로-허용가능한 담체를 포함하는 것으로 특정될 수 있다. 항-CD73 항체, 항-HER2 항체 및 화학요법제는 선택적으로 본 명세서의 임의의 방법에 사용하기에 적합한 치료적 유효량으로 존재하는 것으로 임의적으로 특정될 수 있다. 키트는 선택적으로 또한, 예를 들어, 투여 일정을 포함하는 지시서를 포함하여, 실시자 (예를 들어, 의사, 간호사, 또는 환자) 가 암을 갖는 환자 (예를 들어, HER2-양성인 위 선암종 또는 위식도 접합부 선암종을 갖는 환자, 또는 종양 세포가 낮은 또는 중간 수준의 HER2 발현을 갖는 위 선암종 또는 위식도 접합부 선암종을 갖는 환자, 또는 종양 세포가 HER2 과발현을 갖는 위 선암종 또는 위식도 접합부 선암종을 갖는 환자) 에게 그 안에 함유된 조성물을 투여할 수 있게 할 수 있다. 임의의 구현예에서, 키트는 선택적으로 상기 CD73 항체, 항-HER2 항체 및 선택적으로 화학요법제를 본 공개의 치료 요법에 따라 투여하기 위한 지시서를 포함할 수 있다. 키트는 또한 주사기를 포함할 수 있다.
선택적으로, 키트는 위에 제공된 방법에 따른 단일 투여를 위한 항-CD73 항체, 항-HER2 항체 및 선택적으로 화학요법제의 유효량을 각각 함유하는 단일-도스 약학적 조성물의 다중 패키지를 포함한다. 약제학적 조성물(들)을 투여하는데 필요한 기기 또는 장치가 또한 키트에 포함될 수 있다. 예를 들어, 키트는 항-CD73 항체 또는 항-HER2 항체의 일정량을 함유하는 하나 이상의 미리 충전된 주사기를 제공할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본 발명은 자궁경부암에 걸린 인간 환자에서 암 또는 종양을 치료하기 위한 키트로서, 하기를 포함하는 키트를 제공한다:
(a) 임의의 SEQ ID NOS: 42 에 제시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 도메인, 및 SEQ ID NO: 43 에 제시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3 도메인을 포함하는 항-CD73 항체의 일정 도스; 및/또는
(b) 항-HER2 항체의 일정 도스, 선택적으로 트라스트주맙의 중 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 선택적으로 SEQ ID NO: 23 에 제시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 도메인, 및 SEQ ID NO: 24 에 제시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3 도메인을 포함하는 항체의 일정 도스; 및/또는
(c) 선택적으로, 및 화학요법제의 일정 도스, 선택적으로 탁산의 일정 도스, 선택적으로 파클리탁셀의 일정 도스; 및/또는
(d) 선택적으로, 본원에 기재된 임의의 방법에서 상기 항-CD73 항체, 상기 항-HER 항체 및/또는 상기 화학요법제를 사용하기 위한 지시서.
일부 구현예에서, 항-CD73 항체는 SEQ ID NO: 47 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 SEQ ID NO: 48 의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하고, 항-HER2 항체는 트라스트주맙이거나 또는 SEQ ID NO: 25 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 SEQ ID NO: 26 의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하고, 화학요법제는 파클리탁셀이다. 일부 구현예에서, 항-CD73 항체는 고정된 도스 (체중과 관계 없이, 예를 들어 고정된 도스 적어도 900 ㎎, 선택적으로 1500 ㎎ 또는 적어도 1500 ㎎, 또는 선택적으로 2400 ㎎ 또는 적어도 2400 ㎎ 로) 로 2 주 마다 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD73 항체는 고정된 도스 (예를 들어 고정된 도스 2000 내지 3000 ㎎, 예를 들어 고정된 도스 2100 ㎎, 2200 ㎎, 2300 ㎎, 2400 ㎎, 2500 ㎎, 2600 ㎎, 2700 ㎎, 2800 ㎎, 2900 ㎎ 또는 3000 ㎎ 로) 로 3 주 마다 투여된다. 일부 구현예에서, 항-HER2 항체는 도스 3-6 ㎎/㎏ 체중, 선택적으로 6-8 (예를 들어 6 또는 8) ㎎/㎏ 체중 로 3 주 마다 정맥내 투여되고 (선택적으로 항-HER2 항체의 제 1 투여는 6 ㎎/㎏ 의 3 주 1 회 투여의 시작 1 주 전에 로딩 도스 8 ㎎/㎏ 로 투여된다), 화학요법제는 고정된 도스 175 ㎎/㎡ 신체 표면적 로 투여되는 파클리탁셀을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-HER2 항체는 초기 도스 4 ㎎/㎏ 에 이어서 후속적 매주 도스 2 ㎎/㎏ 로 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, 항-HER2 항체는 고정된 도스 600 ㎎ 로 3 주 마다 피하 투여된다.
하나의 구현예에서, 항-CD73 항체 및 항-HER2 항체 (및 선택적으로 화학요법제) 는 하기 도스로 투여된다:
(a) (i) 900-3600 ㎎, 선택적으로 1500-3600 ㎎, 선택적으로 1500-2400 ㎎, 선택적으로 900, 1500 또는 2400 ㎎ 의 항-CD73 항체 2 주 마다, 및 (ii) 3-6 ㎎/㎏ (예를 들어, 5-6 또는 6 ㎎/㎏) 체중의 항-HER2 항체 3 주 마다, 선택적으로 항-HER2 항체의 제 1 투여에 선행하여 1 주 전에 로딩 도스 (예를 들어, 8 ㎎/㎏ 체중) 의 항-HER2 항체의 투여;
(b) (i) 900-3600 ㎎, 선택적으로 1500-3600 ㎎, 선택적으로 1500-2400 ㎎, 선택적으로 900, 1500 또는 2400 ㎎ 의 항-CD73 항체 2 주 마다, 및 (ii) 고정된 도스 600 ㎎ 의 항-HER2 항체 3 주 마다 피하 투여 (예를 들어 Herceptin™SC);
(c) (i) 2000-3000 ㎎, 선택적으로 고정된 도스 2100 ㎎, 2200 ㎎, 2300 ㎎, 2400 ㎎, 2500 ㎎, 2600 ㎎, 2700 ㎎, 2800 ㎎, 2900 ㎎ 또는 3000 ㎎ 의 항-CD73 항체 3 주 마다, 및 (ii) 3-6 ㎎/㎏ (예를 들어, 5-6 또는 6 ㎎/㎏) 체중의 항-HER2 항체 3 주 마다, 선택적으로 항-HER2 항체의 제 1 투여에 선행하여 1 주 전에 로딩 도스 (예를 들어, 8 ㎎/㎏ 체중) 의 항-HER2 항체의 투여;
(d) (i) 2000-3000 ㎎, 선택적으로 고정된 도스 2100 ㎎, 2200 ㎎, 2300 ㎎, 2400 ㎎, 2500 ㎎, 2600 ㎎, 2700 ㎎, 2800 ㎎, 2900 ㎎ 또는 3000 ㎎ 의 항-CD73 항체 3 주 마다, 및 (ii) 고정된 도스 600 ㎎ 의 항-HER2 항체 3 주 마다 피하 투여 (예를 들어 Herceptin™SC) ;
(e) (i) 900-3600 ㎎, 선택적으로 1500-3600 ㎎, 선택적으로 1500-2400 ㎎, 선택적으로 900, 1500 또는 2400 ㎎ 의 항-CD73 항체 2 주 마다, (ii) 3-6 ㎎/㎏ (예를 들어, 5-6 또는 6 ㎎/㎏) 체중의 항-HER2 항체 3 주 마다, 선택적으로 항-HER2 항체의 제 1 투여에 선행하여 1 주 전에 로딩 도스 (예를 들어, 8 ㎎/㎏ 체중) 의 항-HER2 항체의 투여, 및 (iii) 175 ㎎/㎡ 신체 표면적의 파클리탁셀 3 주 마다 투여;
(f) (i) 1500 ㎎ 의 항-CD73 항체 2 주 마다, 및 (ii) 6 ㎎/㎏ 체중의 항-HER2 항체 3 주 마다, 선택적으로 항-HER2 항체의 제 1 투여에 선행하여 1 주 전에 로딩 도스 (예를 들어, 8 ㎎/㎏ 체중) 의 항-HER2 항체의 투여;
(g) (i) 1500 ㎎ 의 항-CD73 항체 2 주 마다, (ii) 6 ㎎/㎏ 체중의 항-HER2 항체 3 주 마다, 선택적으로 항-HER2 항체의 제 1 투여에 선행하여 1 주 전에 로딩 도스 (예를 들어, 8 ㎎/㎏ 체중) 의 항-HER2 항체의 투여, 및 (iii) 175 ㎎/㎡ 신체 표면적의 파클리탁셀 3 주 마다 투여;
(h) (i) 2400 ㎎ 의 항-CD73 항체 2 주 마다, 및 (ii) 6 ㎎/㎏ 체중의 항-HER2 항체 3 주 마다, 선택적으로 항-HER2 항체의 제 1 투여에 선행하여 1 주 전에 로딩 도스 (예를 들어, 8 ㎎/㎏ 체중) 의 항-HER2 항체의 투여; 또는
(i) (i) 2400 ㎎ 의 항-CD73 항체 2 주 마다, (ii) 6 ㎎/㎏ 체중의 항-HER2 항체 3 주 마다, 선택적으로 항-HER2 항체의 제 1 투여에 선행하여 1 주 전에 로딩 도스 (예를 들어, 8 ㎎/㎏ 체중) 의 항-HER2 항체의 투여, 및 (iii) 175 ㎎/㎡ 신체 표면적의 파클리탁셀 3 주 마다 투여.
본 공개를 제한하지 않고, 본 공개의 다수의 구현예는 예시의 목적으로 본 명세서에서 기재된다.
실시예
방법
인간 위암 샘플에서의 면역염색
CD73 면역염색을 Ventana Benchmark Ultra 에서 수행했다. 간략히, 5 ㎛-두께의 FFPE 절편을 탈랍시키고, 100℃ 에서 64 분 동안 CC1 을 사용하여 항원 회수를 수행했다. 그 후, 디스커버리 항체 희석액에 1 ㎍/㎖ 로 희석한 항-CD73 항체를 37℃ 에서 1 시간 동안 적용하고, ULTRAVIEW-RT 를 이용하여 드러내 보였다. 포르말린-고정된 hCD73 세포 펠렛을 각각의 IHC 실행에서 음성 및 양성 대조군으로서 사용했다. 면역염색 분석을 종양 세포, 기질 세포 및 면역 세포에 대해 수행하여, CD73 을 발현하는 세포의 백분율을 기록했다. 이어서, 이들 백분율을 다음과 같이 비율 점수로 표현했다: 0 = 양성 세포 없음; 1 = < 10% 양성 세포; 2 = 10 내지 50% 양성 세포; 3 = 51 내지 80% 양성 세포; 4 = > 80% 양성 세포.
종양 세포 및 기질 세포에 대한 CD73 염색의 반-정량적 강도를 또한 0, 1+, 2+ 및 3+ 로서 기록했다. 종양 세포 상의 CD73 에 대해, H-점수를 또한 계산했다. 각각의 염색 강도 수준에서의 세포의 백분율을 계산하고, 마지막으로 다음 식을 사용하여 H-점수를 부여했다: [1 × (% 세포 1+) + 2 × (% 세포 2+) + 3 × (% 세포 3+)].
0 내지 300 범위의 최종 점수는 주어진 종양 샘플에서 더 높은 강도의 막 염색에 대해 더 많은 상대 중량을 부여한다. CD73 발현을 또한 내피 세포에 대해 염색 양성 대조군으로서 기록했다.
재조합 huCD73 의 클로닝, 생산 및 정제
분자 생물학
huCD73 단백질을 MIAPACA-2 cDNA 로부터 다음의 프라이머 TACGACTCACAAGCTTGCCGCCACCATGTGTCCCCGAGCCGCGCG (SEQ ID NO: 20) (정방향) 및 CCGCCCCGACTCTAGAtcaGTGATGGTGATGATGGTGcttgatccgaccttcaactg SEQ ID NO: 21) (역방향) 를 이용하여 클로닝시켰다. 정제된 PCR 생성물을 그 후 InFusion 클로닝 시스템을 사용하여 발현 벡터에 클로닝했다. 정제 단계를 위해 단백질의 C-말단 부분에 6xHis 태그를 첨가했다.
클로닝된 huCD73 의 아미노산 서열::
Figure pct00014
huCD73 단백질의 발현 및 정제
클로닝된 서열의 검증 이후에, 세포를 핵도입했고, 생성된 풀을 그 후 서브클로닝하여 huCD73 단백질을 생산하는 세포 클론을 수득했다. 롤러에서 성장시킨 huCD73 클론 유래의 상청액을 회수했고, Ni-NTA 칼럼을 사용하여 정제했고, 250 mM 이미다졸을 사용하여 용리시켰다. 정제된 단백질을 그 후 S200 크기 배제 크로마토그래피 컬럼 상에 로딩했다. 이합체에 상응하는 정제된 단백질을 효소 활성 검정을 위해 Tris 20 mM pH 7.5, NaCl 120 mM 및 CaCl2 4 mM 완충액 중에 제형화하면서, 제형 완충액에 20% 글리세롤을 보충했다.
재조합 CD73 단백질에 대한 Ab KD 를 평가하기 위한 SPR 분석
SPR 측정을 Biacore™ T200 장비에서 25℃ 에서 수행했다. Protein-A (GE Healthcare) 를 Sensor Chip CM5 (GE Healthcare) 에 고정시켰다. 칩 표면을 EDC/NHS (N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디아미드 히드로클로라이드 및 N-히드록시숙신이미드 (Biacore™, GE Healthcare) 로 활성화시켰다. 적절한 고정화 수준에 도달할 때까지 (즉 2000 RU) Protein-A 를 커플링 완충액 (10 mM 아세테이트, pH 5.6) 중에 10 ㎍/㎖ 까지 희석하고 주입했다. 잔여 활성화기의 탈활성화를 100 mM 에탄올아민 pH 8 (Biacore™, GE Healthcare) 을 사용하여 수행했다. 친화도 연구를 제조사 (Biacore™ GE Healthcare kinetic wizard) 에 의해 권장되는 표준 포획-동역학 프로토콜에 따라 수행했다. 포획된 항-CD73 항체에 1.23 내지 300 nM 범위의 인간 재조합 가용성 CD73 단백질의 연속 희석액을 순차적으로 주입하고 10분 동안 해리시킨 후 재생시켰다. 전체 센소그램 세트를 1:1 동역학 결합 모델을 사용하여 피팅했다. 이가 친화도 및 동역학적 결합 및 해리 속도 상수를 계산한다.
항체에 의한 항-CD73 인지를 평가하는 유세포측정 분석
FCSB 에 재현탁시킨 105 MDA-MB-231 세포를 둥근 바닥 96W-마이크로플레이트 (50μL/웰) 내에 분배했다. 항-CD73 mAb 의 투여량 범위를 플레이트에 첨가하고, 세포를 +5 ± 3℃ 에서 1 시간 동안 인큐베이션했다. 세포를 4℃ 에서 3 분 동안 400g 에서 플레이트를 스피닝함으로써 FCSB 에서 3 회 세척했다. FCSB 에 희석한 PE-접합된 염소 F(ab')2 항-인간 IgG (H+L) 2차 Ab 를 세포에 첨가하고, 플레이트를 +5 ± 3℃ 에서 30 분 동안 추가로 인큐베이션했다. 세포를 상기한 바와 같이 3 회 세척하고, 유세포측정기로 분석했다.
형광 강도의 중간값 대 mAb 농도를 그래프에 플롯하고, EC50 을 GraphPad Prism™ 프로그램을 사용하여 계산했다.
재조합 인간 또는 사이노몰구스 CD73 을 이용한 시험관내 효소 검정
간략히, 재조합 인간 또는 사이노몰구스 CD73 을 투여량 범위의 항-CD73 또는 아이소타입 대조군 mAb 의 존재 하에 백색 96W 평평한 바닥 마이크로플레이트에서 인큐베이션했다. 플레이트를 1시간 동안 +37 ± 1℃ 에서 인큐베이션했다. ATP (12.5 μM) 및 AMP (125 μM) 를 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 추가로 30분 동안 +37 ± 1℃ 에서 인큐베이션했다. 루시퍼라제/루시페린-함유 CellTiter-Glo™ (Promega) 를 웰에 첨가하고, 플레이트를 암실에서 실온에서 5분 동안 인큐베이션하고, 방출된 광을 Enspire™ 장비 (Perkin Elmer) 를 사용하여 측정했다.
조건:
ㆍ ATP+AMP: 최대 루시페라제 저해 (100%)
ㆍ CD73+ATP+AMP: 루시페라제 저해 없음 (0%)
잔류 효소 활성 대 항-CD73 Ab 농도를 GraphPad Prism7™ 소프트웨어를 사용하여 그래프에 플롯했다.
T 세포 증식 검정
건강한 공혈자로부터 주변 혈액을 수득했고, 단핵 세포를 Ficoll 구배 상에서 단리했다. 림프구를 52% Percoll™ 구배 (세포 펠릿) 상에서 추가로 농축하고, 2 μM CellTrace™ Violet (Thermofisher) 으로 염색했다. 5×104 내지 1×105 의 염색된 세포를 96웰 둥근 바닥 플레이트에 분배했고, 1 시간 동안 37℃ 에서 항-CD73 Ab 와 인큐베이션시켰고, 항-CD3/항-CD28-코팅된 비드를 첨가하여 3일 내지 5일 동안 활성화시켰다. T 세포 증식의 저해를 200 μM AMP 를 첨가하여 달성했다. T 세포 증식 및 AMP 의 면역 억제 효과를 차단하는 Ab 의 능력을 증식성 T 세포에서 염료 희석을 정량화함으로써 유세포측정법에 의해 평가했다. 증식성 T 세포의 백분율 대 항-CD73 Ab 농도를 GraphPad Prism™ 소프트웨어를 사용하여 그래프에 플롯했다. 몇몇 실험은 건강한 공여자 또는 암 환자로부터의 전체 PBMC 에 대해 수행했다; 프로토콜은 T 세포 억제가 0.5 내지 1 mM ATP 의 첨가에 의해 달성된 점을 제외하고는 상기 기재된 바와 같았다.
공여자 또는 환자를 비교하기 위해, 하기 식을 사용하여 T 세포 증식을 정규화했다:
Figure pct00015
동종이계 혼합 림프구 반응 (MLR) 검정
건강한 공여자로부터의 단핵 세포를 피콜 구배 상에서 단리하고, 단핵구를 CD14 마이크로비드 (Miltenyi Biotec) 를 사용하여 면역자기 선별에 의해 정제했다. 단핵구를 GM-CSF (400 ng/㎖) 및 IL-4 (20 ng/㎖) 의 존재 하에 5-7 일 배양함으로써 수지상 세포 (MoDC) 로 분화시켰다. DC 회수일에, 동종이계 공여자로부터의 CD4+ T 세포를 비-CD4+ T 세포 (Miltenyi Biotec) 의 면역자기 고갈에 의해 정제하고, Cell Trace™ Violet 으로 염색했다. DC (104 세포/웰) 및 T 세포 (5×104 세포/웰) 를 96W 둥근 바닥 마이크로플레이트에서 투여량 범위의 항-huCD73 Ab 및 고정 투여량의 ATP 의 존재 하에 혼합했다. T 세포 증식 및 ATP-매개되는 억제를 역전시키는 Ab 능력을 T 세포 증식 검정에 대해 기재된 바와 같이 평가했다.
실시예 1: 위암에서의 CD73 및 HER2 발현
위암 코호트에서의 이 연구를 위해, 하기 종양 샘플을 조사했다: 진단시 일차 종양으로부터의 총 60 개의 수술 샘플, 이 중 10 개의 수술 샘플은 일차 종양으로부터의 것이고, 10 개의 수술 샘플은 일차 재발시 관련 전이로부터의 것이고, 20 개는 진단시 생검이고, 20 개는 네오아주반트 화학요법 (에피루비신, 시스플라틴 & 5-FU) 후 상응하는 종양의 수술 샘플이었다.
진단시 (임의의 치료 전) CD73 은 환자의 83% (n=50/60) 에서 종양 세포 (TC) 상에서 발현되는 것으로 발견되었으며, CD73 을 발현하는 종양 세포의 백분율은 환자 전체에 걸쳐 5 내지 80% 로 다양했다. 종양 세포에 대한 염색은 세포의 정점 수준 (루미날 파트) 에서 주로 편광되었다. 환자의 95% 는 CD73-발현 기질 세포 (SC) 를 가지며, CD73 을 발현하는 기질 세포의 백분율은 1 내지 50% 범위이다. 환자의 5% 만이 CD73-발현 종양내 면역 세포를 갖는 반면 (n=3/60), 환자의 78% 는 기질 내에 CD73-발현 면역 세포를 가지며, CD73+ 의 백분율은 1 내지 20% 범위이다.
종양 세포 상의 CD73 의 H-점수는 0 내지 210 으로 다양했으며, 중간 점수는 37.5 였다 (도 1, 좌측 패널)
Her2 상태에 따른 CD73 발현
종양 세포 및 기질 세포 상의 CD73 발현을 Her2 상태에 따라 분석했다. IHC 염색에 의해 평가된 Her2 점수는 1+, 2+, 3+ 로 나타냈고, Her2 유전자의 증폭은 FISH 에 의해 평가했다. 데이터 분석을 위해, 그리고 병리학자에 따라, 환자는 그의 "분석을 위한 Her2 상태(- /+)" 가 IHC 에 의해 3+ 로서 기록될 때만 Her2 양성으로 간주되었다.
분석은 모든 Her2+ 환자가 CD73-발현 종양 세포를 갖는 것을 보여주었다 (도 1, 우측 패널). Her2- (n=30) 에 비해 Her2+ 환자 (n=7) 의 수가 더 적었지만, Her2+ 환자는 CD73+ 종양 세포의 백분율이 유의하게 더 높았다 (도 1, 우측 패널). CD73-발현 기질 세포는 Her2 상태에 따라 다르지 않았다.
결론적으로, Her2 상태에 따른 환자 계층화는 모든 Her2+ 환자가 CD73-발현 종양을 갖고, Her2+ 환자의 CD73+ 종양 세포의 백분율이 Her2- 보다 유의하게 더 높음을 강조했다. 모든 환자는 Her2 상태에 관계없이 CD73+ 기질 세포를 가졌다.
네오아주반트 화학요법 전 및 후의 위 종양에서의 CD73 발현의 비교
네오아주반트 화학요법 (CT) 전의 일차 종양으로부터의 생검과 네오아주반트 화학요법 (에피루비신, 시스플라틴 & 5-FU) 후의 종양 절제 사이에서 CD73 발현을 비교했다.
네오아주반트 CT 은 CD73 을 발현하는 환자의 백분율 (도 2, 좌측 패널) 또는 CD73+ 종양 세포의 백분율 (도 2, 우측 패널) 에서 CD73-발현 종양 세포를 유의하게 변형시키지 않았다. 그러나, 네오아주반트 CT 은 CD73+ 기질 세포를 갖는 환자의 백분율을 CT 전 60% (n=12/20) 에서 CT 후 95% (n=19/20) 로 증가시켰다 (도 3, 좌측 패널). CD73-발현 기질 세포의 백분율은 CT 전 및 후에 유의하게 상이하지 않았다 (도 3, 우측 패널). CT 은 CD73+ 기질 면역 세포를 갖는 환자의 백분율을 30% (n=6/20) 에서 70% (n=14/20) 로 증가시켰다 (도 4, 좌측 패널). CD73+ 기질 면역 세포의 백분율의 더 면밀한 분석은 CT 이 초기에 높을 때 이 백분율을 감소시키는 경향이 있는 반면, 초기에 음성일 때 면역 세포 상에 CD73 을 유도한다는 것을 나타내었다 (도 4, 우측 패널).
실시예 2: 인간화된 항-CD73 항체의 설계
온전한 전장 항체와 CD73 이합체 사이의 1:1 화학량론에서 이합체 내 결합 방식으로 CD73 에 결합하는 것으로 관찰된 뮤린 항체에 기초하여, 2020 년 4 월 20 일에 출원된 공동 계류중인 PCT 출원 no. PCT/EP2020/060955 (이의 개시내용은 본원에 참고로 포함됨) 에 기재된 바와 같이 인간화된 항-CD73 항체를 제조했다.
간략히, VH 내에 인간 하위군 IGHV1-3*01 으로부터의 중쇄 골격 (FR1, FR2, FR3) 을 IGHJ4*01 (FR4) 와 함께 도입하고, VL 내에 인간 하위군 IGKV1-33*01 로부터의 경쇄 골격 (FR1, FR2, FR3) 을 IGKJ2*01 (FR4) 와 함께 도입하여 항체를 변형시켰다.
인간화된 항체의 제 1 세트에 대해, 4 개의 상이한 인간화된 중쇄 및 4 개의 상이한 인간화된 경쇄를 설계했다. SEQ ID NO: 29 에 제시된 아미노산 서열을 갖는 제 1 중쇄 변이체 (H1) 는 V2I 및 T73K 치환을 가졌다. SEQ ID NO: 30 에 제시된 아미노산 서열을 갖는 제 2 중쇄 (H2) 변이체는 V2I, T28A, R71V 및 T73K 치환을 가졌다. SEQ ID NO: 31 에 제시된 아미노산 서열을 갖는 제 3 중쇄 변이체 (H3) 는 치환 V2I, T28A, M48I, R66K, V67A, R71V 및 T73K 을 가졌다. SEQ ID NO: 32 에 제시된 아미노산 서열을 갖는 제 4 중쇄 변이체 (H4) 는 치환 V2I, T28A, T30A, M48I, R66K, V67A, I69L, R71V 및 T73K 을 가졌다. 치환의 넘버링은 Kabat 에 따른다.
SEQ ID NO: 33 의 아미노산 서열을 갖는 제 1 경쇄 변이체 (L1) 는 S67Y 치환을 가졌다. SEQ ID NO: 34 의 아미노산 서열을 갖는 제 2 경쇄 (L2) 변이체는 S60D 및 S67Y 치환을 가졌다. SEQ ID NO: 35 에 제시된 아미노산 서열을 갖는 제 3 경쇄 변이체 (L3) 는 치환 I2V, S60D 및 S67Y 을 가졌다. SEQ ID NO: 36 에 제시된 아미노산 서열을 갖는 제 4 경쇄 변이체 (L4) 는 치환 I2V, S60D, S67Y 및 Y87F 을 가졌다. 치환의 넘버링은 Kabat 에 따른다.
하기 표 1 에 중쇄 (표 1 의 "H" 사슬) 및 경쇄 (표 1 의 "L" 사슬) 가변 영역의 아미노산 서열이 제시되어 있다.
표 1
Figure pct00016
하기 표 2 에 제시된 중쇄 및 경쇄 조합을 갖는 항체를 생산했다.
표 2
Figure pct00017
놀랍게도, 연구는 유세포측정 적정과 CD73 의 효소 활성의 저해에 있어서의 효능 사이에 직접적인 상관관계가 없음을 보여주었다. 흥미롭게도, H1, H2, H3 및 H4 변이체는 SPR 검정에서 및 CD73-발현 세포 상의 유세포측정에서 CD73 재조합 단백질에 대한 결합 친화도에 기초하여 본질적으로 구별불가능하였지만, H2 및 H3 변이체는 T 세포 증식을 회복하는 능력에서 H4 변이체보다 기능적 검정에서 덜 강력했다. 한가지 가능성은 CD73을 저해하는데 있어서 효능에 유해한 (그러나 CD73 에 대한 결합 친화성에는 유해하지 않은) H2 및 H3 골격에 도입된 돌연변이가 H4 변이체 골격에 도입된 돌연변이에 의해 보상되었다는 것이다. 결과적으로, 중쇄 골격 및/또는 CDR 잔기에서 치환을 갖는 새로운 변이체를 디자인했다. 이들 관찰에 기초하여, H2, H3 및 H4 사슬에서 이루어진 치환은 기능에 중요한 것으로 생각되는 잔기, 작용에 영향을 주지 않는 잔기, 기능에 부정적인 영향을 주는 잔기, 및 기능을 회복시키는 잔기로 분류되었다.
하기 제시된 아미노산 서열 (서열 37; 볼드체, Kabat CDR 의 아미노산 치환) 을 갖는, "H4+" 로 지칭되는 새로운 중쇄 변이체를 디자인하고, L1, L2, L3 및 L4 경쇄 (각각 서열 33, 34, 35 및 36의) 와 조합하여 4 개의 새로운 항체, H4+L1, H4+L2, H4+L3 및 H4+L4 를 생성했다.
H4+ VH:
Figure pct00018
L234A/L235E/G237A/A330S/P331S 치환을 갖는 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함하는 전체 H4+ 중쇄의 아미노산 서열이 하기에 제시된다:
Figure pct00019
H4+L1 항체는 인간 Ckappa 도메인을 포함하는 L1 경쇄를 함유했고, 그의 전체 서열은 하기에 나타낸다:
Figure pct00020
동일한 골격 치환이 그의 중쇄 및 경쇄 CDR 에서 차이를 갖는 항체에 어떻게 영향을 미치는지를 조사하기 위해, 공통 중쇄 및 4 개의 상이한 경쇄 중 하나를 갖는 추가의 일련의 4 개의 항체를 생산했다. "2H4+" 로 지정된 공통 중쇄는 HCDR2 에서 Kabat 위치 59 (Q59) 에서 글루타민 (즉, H4+ 사슬과 비교하여 L59Q 치환), HCDR2 에서 Kabat 잔기 60 (K60) 에서 라이신 (즉, H4+ 사슬과 비교하여 T60K 치환), 및 HCDR3 에서 Kabat 위치 97 (N97) 에서 아스파라긴 (즉, H4+ 사슬과 비교하여 G97N 치환) 을 가졌다. 2L1, 2L2, 2L3 및 2L4 로 지정된 4 개의 경쇄는 각각 L1, L2, L3 및 L4 사슬과 동일한 골격 잔기를 갖고, LCDR1 중 Kabat 위치 30 (T30) 에서 트레오닌 (즉, L1-L4 사슬에 비해 S30T 치환) 및 LCDR2 중 Kabat 잔기 53 (N53) 에서 아스파라긴 (즉, L1-L4 사슬에 비해 T53N 치환) 의 존재에 의해 그의 CDR 이 L1-L4 사슬과 상이했다.
생성된 4 개의 새로운 항체를 2H4+2L1, 2H4+2L2, 2H4+2L3 및 2H4+2L4 로 명명했다 (중 및 경쇄의 조합에 대해 아래의 표 4 및 개별 사슬의 아미노산 서열에 대해 아래의 표 3 참조). 뮤린 골격에서 CDR 을 공유하는 부모 항체를 2HP 및 2LP 로 지정된 중쇄 및 경쇄 가변 영역으로 생산했다 (아래의 표 3 참조).
표 3
Figure pct00021
Figure pct00022
표 4
Figure pct00023
모든 항체를 Fc 수용체 결합을 감소시키는 L234A/L235E/G237A/A330S/P331S 치환을 갖는 인간 IgG1 아이소타입으로서 생산했다.
L234A/L235E/G237A/A330S/P331S 치환을 갖는 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함하는 전체 2H4+ 중쇄의 아미노산 서열이 하기에 제시된다:
Figure pct00024
인간 Ckappa 도메인을 포함하는 항체의 전체 2L1 경쇄의 아미노산 서열이 하기에 제시된다:
Figure pct00025
실시예 3: 재조합 CD73 단백질을 이용한 시험관 내 효소 검정에서의 신규 변이체 연구
재조합 CD73 단백질의 효소 활성을 저해하는 인간화된 변이체의 효능을 부모 항체와 비교했다. 간략히, ATP 및 CTG 기질을 혼합하였을 때 높은 수준의 발광이 측정되었다. AMP 가 반응 혼합물에 첨가되었을 때, CTG 반응이 저해되어 발광의 감소가 초래되었다. AMP 를 가수분해하는 재조합 인간 CD73 단백질의 존재 하에, 발광 수준이 회복되었다.
실시예 2 에서 생산된 모든 신규 인간화된 변이체는 CD73 단백질의 활성을 강력하게 저해했다.
H4+Lx 항체는 그들의 부모 대응물만큼 효율적이었다. 또한, 2H4+2Lx (2H4+L1, 2H4+L2, 2H4+L3 및 2H4+L4) 변이체 모두는 H4+Lx 변이체와 비교하여 CD73 저해에서 효능의 증가를 나타내었다. 2H4+2Lx 변이체는 부모 2HP2LP 항체와 유사한 효능으로 CD73 의 활성을 저해했다.
다른 농도의 CD73 단백질 (50, 100, 200, 400 ng/㎖) 을 사용하여 추가 실험을 수행했다. 이 실험의 목적은 다량의 CD73 단백질의 활성을 차단하는 인간화된 항체의 능력을 연구하는 것이었다. 다시, 2H4+2Lx 변이체는 부모 2HP2LP 항체만큼 강력했다.
실시예 4: 사이노몰구스 CD73 단백질에 대한 효능에 대한 신규 변이체의 연구
재조합 rec cyCD73 단백질에 대한 실험을 2H1Lx 및 2H4+2Lx 변이체로 수행했다. 실험 조건은 사용된 cyCD73 단백질의 농도 (400 ng/㎖) 를 제외하고는 인간 단백질에 대한 실험에서와 동일했다.
cyCD73 단백질의 효소 활성을 차단하는 인간화된 변이체의 효능은 부모 (키메라) 항체의 효소와 동일했다.
실시예 5: T 세포 증식 검정에서 신규 변이체의 연구
상이한 항체의 인간화된 변이체를 AMP 에 의해 저해된 T 세포 증식을 회복하는 그의 능력에 대해 시험했다. 간략히, 건강한 공여자 (HD) 로부터 말초 혈액을 EFS (항응고제: 시트레이트) 로부터 수득했고, 단핵 세포를 Ficoll 구배로 단리했다. 림프구를 PBS 용액에서 제조된 52% Percoll 구배로 추가로 농축했다. 세포를 Cell Trace 염료로 염색했다. 염색된 세포를 96 둥근 바닥 플레이트에 분배하고, 1 시간 동안 +37 ± 1℃ 에서 항-huCD73 Ab 와 함께 인큐베이션하고, 항-CD3/항-CD28 비드 (비드 대 세포 비 = 1:4) 를 첨가하여 3 내지 5 일 동안 활성화시켰다. AMP (800 μM) 를 첨가하여 T 세포 증식의 저해를 달성했다. T 세포 증식 및 AMP 의 면역 억제 효과를 차단하는 Ab 의 능력을 증식성 T 세포에서 염료 희석을 정량화함으로써 유세포 분석법에 의해 평가했다.
도 5A 는 T 세포 증식에 대한 AMP 의 저해 효과를 나타낸다. 모든 인간화된 변이체는 T 세포 증식에 대한 AMP 의 저해 효과를 강력하게 차단했다 (도 5B 및 C). 대부분의 인간화된 변이체는 일반적으로 AMP-매개되는 T 세포 억제를 역전시키는데 있어서 그들의 키메라 부모 대응물만큼 효과적인 것으로 보이지만, 2H4+2Lx 변이체는 모든 변이체 중에서 가장 강력하였으며, 놀랍게도 이들은 AMP 의 억제 효과를 차단하는데 있어서 부모 2HP2LP 항체보다 훨씬 더 강력했다.
실시예 6: 2명의 인간 공여자에서의 T 세포 증식 검정에서의 신규한 변이체의 비교 연구
이전에 얻어진 결과에 따라, 2H4 + 2Lx 인간화된 변이체를 추가의 일련의 T 세포 증식 실험에서 추가로 특성분석했다.
도 6A 및 6B 는 각각 2명의 건강한 공여자로부터의 세포를 사용하는 T 세포 증식 검정에서 얻어진 결과를 나타낸다. 이전에 관찰된 바와 같이, 2H4+2Lx 변이체는 각각 T 세포 증식을 회복시키는데 있어서 부모 2HP2LP 보다 더 강력했다 (도 6A 및 B, 우측 패널). 상이한 2H4+2Lx 변이체 사이의 명확한 차이는 관찰되지 않았다. 따라서, 다시 한번, 2H4+2Lx 변이체는 AMP 의 억제 효과를 차단하는데 있어서 부모 2HP2LP 항체보다 더 강력했다.
종합하면, T 세포 증식 검정에서 수득된 결과는 H4+ 사슬의 골격을 갖는 인간화된 변이체가 가장 강력한 항체 변이체이고, 2H4+2Lx 변이체가 모든 항체 중에서 가장 큰 효능을 갖는다는 것을 나타낸다.
실시예 7: 동종이계 혼합 림프구 반응 (MLR) 검정에서의 신규한 변이체의 연구
2H4+2Lx 항체 변이체를 동종이계 MLR 에서 시험하여, T 세포 증식 검정에서 이전에 얻은 결과를 확인했다. 간략히, 건강한 인간 공여자로부터의 PBMC 를 Ficoll 밀도 구배를 통해 농축시키고, 단핵구를 양성 면역자기 선택 (Miltenyi Biotec) 에 의해 정제했다. 단핵구를 GM-CSF (400 ng/㎖) 및 IL-4 (10 ng/㎖) 의 존재 하에 5-7 일 배양하여 수지상 세포 (DC) 로 분화시켰다. DC 회수일에, 동종이계 공여자로부터의 CD4+ T 세포를 비-CD4+ T 세포 (Miltenyi Biotec) 의 면역자기 고갈에 의해 정제하고, Cell Trace 염료로 염색했다. DC 및 T 세포를 96W 둥근 바닥 마이크로플레이트에서 도스 범위의 항-huCD73 mAb 및 고정된 도스의 100μM ATP 의 존재 하에 혼합했다. T 세포 증식 및 ATP-매개되는 억제를 역전시키는 Ab 능력을 그 후 6 일의 공배양 후에 평가했다. 2 개의 인간 공여자 샘플에 대해 도 7 에 나타낸 바와 같이, 100 μM 의 ATP (CD39 에 의해 ADP 및 AMP 로 분해됨) 를 첨가함으로써 T 세포 증식을 저해했다.
도 7 의 좌측 패널에 나타난 바와 같이, ATP 의 첨가에 의해 T 세포 증식이 저해되었다. 항-CD73 항체의 존재 하에서 T 세포 증식이 회복되었다 (중간 및 우측 패널). 모든 2H4+2Lx 인간화된 변이체는 부모 2HP2LP 항체에 필적하거나 더 우수한 효능으로 T 세포 증식을 회복할 수 있었다. 모든 2H4+2Lx 변이체는 이들 설정에서 T 세포 증식을 회복시키는데 있어서 부모 2HP2LP 보다 더 강력했다. 이들 결과는 저해제로서 AMP 를 사용하는 T 세포 증식 검정에서 얻어진 것과 일치했다.
요약하면, H4+ 및 2H4+ 가변 영역에 도입된 치환은 L1 및 2L1 사슬 (및 L2, L3, L4, 2L2, 2L3, 2L4 사슬) 에 도입된 치환과 함께 그들의 부모 뮤린 항체의 중요한 기능적 특성을 회복시키는 (그리고 심지어 개선하는) 것으로 보이지만, 인간 골격 영역을 가지며, 따라서 인간에서 면역원성의 위험성이 더 낮다. 2H4+2Lx 항체가 가장 강력하다.
실시예 8: 항-CD73 항체의 인간 도스 예측
2H4+2L1 항-CD73 항체 (SEQ ID NO: 47 의 중쇄 및 SEQ ID NO: 48 의 경쇄) 의 혈청 농도와 혈중 CD73 점유율 사이의 관계를 특성화하는 PK/PD 모델을 구축했다. 첫째로, 시노몰구스 원숭이에서의 비-GLP 및 GLP 독성학 연구로부터의 데이터를 사용하여, 항-CD73 항체 혈청 농도를 기술하는 PK 모델을 구축했다.
치료적 mAb 의 약동학을 2-구획 모델을 이용하여 모델링했다 (Deng et al. 2011 MAbs 3(1): 61-66). 시노몰구스 원숭이에서의 임상전 PK 결과에 기초하여, 항-CD73 항체는 화합물-특이적 표적-매개되는 약물 배치 (TMDD) 를 제외하고는 인간에서의 다른 치료적 mAb 와 유사한 PK 특성을 나타낼 것으로 예상되었다. 이러한 TMDD 효과는 모델에 부가된 부가적 비선형 제거에 의해 모델링되었다 (Wang et al. 2016 Biopharm. Drug Dispos. 37: 51-65). 도 8 에 예시된 바와 같이, 시노몰구스 원숭이에서 반복된 IV 투여 후 항-CD73 항체의 관찰된 PK 을 적절하게 설명하는, 중심 구획으로부터 평행한 일차 (선형) 및 가포화 (비선형, 미카엘리스-멘텐) 제거를 갖는 2-구획 모델을 개발했다.
비-GLP 및 GLP 독성학 연구에서 예측된 및 관찰된 항-CD73 항체 혈청 농도의 오버레이가 도 9 에서 보여진다. 패널 A 는 비-GLP 독성학 연구로부터의 관찰된 PK 데이터에 핏팅된 모델을 나타내고; 패널 B 는 GLP 독성학 연구로부터의 관찰된 PK 데이터에 핏팅된 모델을 나타내고; 기호는 관찰된 데이터를 나타내고; 실선은 모델 예측을 나타낸다.
시노몰구스 원숭이를 위해 개발된 PK 모델을 인간 PK 예측에 사용했다. 시노몰구스 원숭이에서 수행된 2 개의 항-CD73 항체 독성학 연구에서, 항-CD73 항체에 대한 선형 PK 파라미터는 더 높은 클리어런스 (CL) 를 제외하고는 문헌 (Deng et al., 2011) 에 기재된 NHP 연구에서 발견된 것과 가까운 것으로 발견되었다. 따라서, 클리어런스 및 화합물-특이적 TMDD 둘 모두를 제외하고, 인간에서의 IgG1 PK 파라미터를 인간 PK 의 선형 성분의 예측에 사용했다.
PD 모델에 대한 CD73 포화 수준을 Km 로부터 예측했으며, Km 은 50% 수용체 점유율을 초래하는 항-CD73 항체 혈청 농도인 EC50 을 나타낸다.
2 주 1 회 투여에 대한 제시된 임상 도스에 대한 예측된 인간 PK 및 CD73 수용체 점유율 프로파일이 도 10A 에서 보여진다 (아래에서부터 위까지의 선은 증가하는 도스에 대응한다). 3 주 1 회 투여에 대한 상이한 도스에 대한 예측된 인간 PK 및 CD73 수용체 점유율 프로파일이 도 10B 에서 보여진다 (아래에서부터 위까지의 선은 증가하는 도스에 대응한다).
100 ㎎ 의 출발 도스는 32.5 ㎍/㎖ 의 Cmax 를 가질 것으로 예측되며, 이는 PK 모델로부터 미카엘리스 멘텐 상수 Km 에 의해 추정되는 42.3 ㎍/㎖ 의 EC90 (90%에서의 목표 포화) 미만이다. 이러한 100 ㎎ 의 출발 도스에서, Cmax 에서 대략 90% 의 CD73 점유율이 예측되고, 다음 도스 전에 0 으로 복귀한다.
더욱이, 이러한 100 ㎎ 의 출발 도스 (2 주 1 회) 에서, 항-CD73 항체 농도는 다음 도스 전에 50 ng/㎖ 미만으로 복귀할 것으로 예측된다. 이 농도는 시험관내 검정에서 인간 혈청 (IC50=12.3 ng/㎖), A375 종양 세포 (IC50=34 ng/㎖), MDA-MB231 종양 세포 (IC50=126.8 ng/㎖) 에서 100% 미만의 효소 저해 및 CD4+ 및 CD8+ T 세포 (각각 IC50=8.1 ng/㎖ 및 7.7 ng/㎖) 에서 AMP 저해되는 T 세포 증식의 회복을 매개한다. 이 농도는 또한 CD73+ 종양 세포에 결합하는 항-CD73 항체의 EC50 값, 및 재조합 가용성 인간 CD73 에 대한 항-CD73 항체 친화도와 유사하거나 더 낮다. 이는 또한 출발 도스가 다음 도스 전에 CD73 의 완전 포화의 상실을 초래할 것임을 시사한다.
2 주 마다 투여될 때 100, 300 및 900 ㎎ 의 3 개의 첫번째 상승 도스는 다음 도스 전에 80% 미만의 CD73 점유율과, 다음 도스 전에 EC90 미만의 항-CD73 항체 농도를 초래할 것으로 예측된다. 2 주 마다 투여될 때 1500 ㎎ 및 2400 ㎎ 의 2 개의 최고 도스 수준은 치료 기간 동안 CD73 점유율을 90% 초과로 유지할 것으로 예측된다.
실시예 9: 진행성 고형 종양을 갖는 환자에서 트라스트주맙을 이용한 화학요법과 조합된 항-CD73 의 제 1 상 인간에서의 첫번째 연구
2H4+2L1 항-CD73 항체 (IPH5301) 는 기능적으로 침묵된 Fc 도메인을 갖는 인간화된 IgG1 안타고니스트 모노클로날 항체이다. 그것은 CD73 에 특이적으로 결합하고, 종양 미세환경에서 세포 상에서 발현되는 CD73 의 효소 활성을 저해하여 항-종양 면역 반응을 강화시키도록 설계된 것이다. 전임상 모델은 현재 임상 시험 중인 CD73 을 표적으로 하는 다른 제제에 비해 분화되고 우수한 시험관내 활성을 나타냈다. 이것은 IPH5301 을 조사하는 인간에서의 첫번째 임상 시험이다.
일차 목적은 선별된 진행성 고형 종양을 갖는 환자에서 트라스투주맙을 이용하는 또는 트라스투주맙을 이용하지 않는 화학요법과 조합된 IPH5301 의 안전성 프로파일 및 최대 허용 도스 (MTD)/권장 제 2 상 도스 (RP2D) 를 평가하는 것이다. 이차 목적은 트라스투주맙을 이용하는 또는 트라스투주맙을 이용하지 않는 화학요법과 조합된 IPH5301 의 예비 임상 활성의 평가를 포함할 것이다.
이 연구는 파클리탁셀 및 트라스투주맙 (코호트 2) 을 이용한 치료에 적격인 불치의 진행성 및/또는 전이성 암을 갖는 환자를 포함할 것이며, 사전 전신 요법의 횟수에 대한 제한은 없다. HER2 양성 유방 또는 위 암종을 가진 환자가 포함될 것이다. 적격성은 국소적으로 확인되는 HER2+ 과발현 (면역조직화학에 의한 +3 또는 FISH 에 의한 양성) 에 기초한다. 환자가 사전 치료의 첫 3 개월 내에 질병 진행을 경험하지 않았다면, 진행성 설정에서 파클리탁셀, 카르보플라틴 및/또는 트라스트주맙을 이용한 사전 치료가 허용된다.
다음과 같은 IPH5301 의 5 개의 상승하는 도스 수준이 평가될 것이다: (100㎎, 300㎎, 900㎎, 1500㎎ 및 2400㎎). 모든 환자는 제 1 일 (제 1 주) 에 IPH5301 단독을 받을 것이다. 제 15 일 (제 3 주의 시작) 에, 다음과 같은 화학요법 및 트라스트주맙이 IPH5301 에 부가될 것이다:
- 파클리탁셀 (175 ㎎/㎡, 3 시간 주입) 3 주 마다, 및
- 트라스투주맙 (8 ㎎/㎏ 체중 로딩 도스, 90 분 주입 그 후 6 ㎎/㎏ 3 주 마다, 30 분).
IPH5301 은 시험된 도스에 관계 없이 1 시간에 걸쳐 정맥내 주입으로 투여될 것이고, 그에 뒤이어 트라스트주맙 및 그 후 화학요법이 투여될 것이다. 화학요법 (트라스트주맙과 병용) 은 최대 6 사이클 동안 제공될 것이다. 이 기간 동안, IPH5301 은 도스 수준에 관계 없이 2 주 마다 투여될 것이다. 6 회 사이클의 마지막에 질환 진행의 증거를 보이지 않는 환자는 HER2-양성 코호트에 대한 IPH5301 및 트라스투주맙을 계속 받을 수 있으며, 둘 다 환자가 임상적 이익을 얻는 한, 3 주 1 회 기준으로 투여된다.
SEQUENCE LISTING <110> INNATE PHARMA <120> CANCER TREATMENT METHODS USING ANTI-CD73 ANTIBODIES <130> CD73-9 PCT <150> US 63/065,085 <151> 2020-08-13 <160> 60 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 574 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Cys Pro Arg Ala Ala Arg Ala Pro Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu 1 5 10 15 Gly Ala Val Leu Trp Pro Ala Ala Gly Ala Trp Glu Leu Thr Ile Leu 20 25 30 His Thr Asn Asp Val His Ser Arg Leu Glu Gln Thr Ser Glu Asp Ser 35 40 45 Ser Lys Cys Val Asn Ala Ser Arg Cys Met Gly Gly Val Ala Arg Leu 50 55 60 Phe Thr Lys Val Gln Gln Ile Arg Arg Ala Glu Pro Asn Val Leu Leu 65 70 75 80 Leu Asp Ala Gly Asp Gln Tyr Gln Gly Thr Ile Trp Phe Thr Val Tyr 85 90 95 Lys Gly Ala Glu Val Ala His Phe Met Asn Ala Leu Arg Tyr Asp Ala 100 105 110 Met Ala Leu Gly Asn His Glu Phe Asp Asn Gly Val Glu Gly Leu Ile 115 120 125 Glu Pro Leu Leu Lys Glu Ala Lys Phe Pro Ile Leu Ser Ala Asn Ile 130 135 140 Lys Ala Lys Gly Pro Leu Ala Ser Gln Ile Ser Gly Leu Tyr Leu Pro 145 150 155 160 Tyr Lys 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120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 49 Glu Phe Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Asn Met Tyr Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Arg Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met His Leu Asn Asn Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Asn Asn Tyr Lys Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 50 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 50 Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Thr Asn Asp 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Met Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 51 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 51 Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Asn Met Tyr Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met His Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Gly Asn Tyr Lys Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 52 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 52 Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Thr Asn Asp 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 53 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 53 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ala Ser Tyr 20 25 30 Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Asp Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Leu Thr Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met His Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Gly Asn Tyr Lys Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 <210> 54 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 54 Ser Ile Val Met Thr Pro Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Thr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 <210> 55 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 55 Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ala Ser Tyr 20 25 30 Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Asp Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Leu Thr Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met His Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Gly Asn Tyr Lys Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 <210> 56 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 56 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Thr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 <210> 57 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 57 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe His Arg Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Met Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Leu Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Leu Ser Asp Phe Asp 100 105 110 Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 58 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 58 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Ala Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 59 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 59 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Asn Tyr Gly Gly Ser Asn Gly Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Asp Ala Tyr Tyr Glu Ala Leu Asp Asp Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 60 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 60 Glu Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Arg Val Asn Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Pro Trp Ile Ser 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105

Claims (42)

  1. 개체에서 HER2-양성 위 선암종 또는 위식도 접합부 선암종을 치료하는 방법으로서, 개체에게 인간 CD73 단백질에 결합하고 그것의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체를 투여하는 것을 포함하는 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체가 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체와의 병용 치료에서 사용되는 방법.
  3. 개체에서 위 선암종 또는 위식도 접합부 선암종을 치료하는 방법으로서, 개체에게 인간 CD73 단백질에 결합하고 그것의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체 및 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체 각각의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체가 화학요법제와의 병용 치료에서 사용되는 방법.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 하기를 투여하는 것을 포함하는 방법: (i) 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체 2 주 마다 또는 3 주 마다, (ii) 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체 1 주 마다 또는 3 주 마다.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 하기를 투여하는 것을 포함하는 방법: (i) 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체 2 주 마다 또는 3 주 마다, (ii) 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체 3 주 마다, 및 (iii) 파클리탁셀 3 주 마다.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체의 로딩 도스가 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체의 첫번째 3 주 마다 투여 1 주 전에 투여되는 방법.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 표면에서 HER2 를 발현하는 종양 세포를 특징으로 하는 암을 갖는 방법.
  9. 치료가 필요한 개체에서 HER2-양성 암을 치료하는 방법으로서, 개체에게 (i) 인간 CD73 단백질에 결합하고 그것의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체 및 (ii) 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체 각각의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  10. 제 9 항에 있어서, HER2-양성 암이 위 선암종 또는 위식도 접합부 선암종인 방법.
  11. 제 8 항 또는 제 9 항에 있어서, 추가로 개체에게 화학요법제의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법으로서, 선택적으로 화학요법제가 탁산, 선택적으로 파클리탁셀인 방법.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 IHC 또는 FISH 에 의해 확인되는 HER2-양성인 암을 갖는 방법.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 하기를 투여하는 것을 포함하는 방법: (i) 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체 2 주 마다 또는 3 주 마다, (ii) 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체 1 주 마다 또는 3 주 마다.
  14. 제 9 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 하기를 투여하는 것을 포함하는 방법: (i) 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체 2 주 마다 또는 3 주 마다, (ii) 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체 3 주 마다 및 (iii) 화학요법제, 선택적으로 여기에서 화학요법제는 탁산, 선택적으로 파클리탁셀임.
  15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 복수의 투여 및 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체의 복수의 투여를 포함하는 방법으로서, 상기 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체의 복수의 투여 각각이 항-CD73 항체의 투여 후에 실시되는 방법.
  16. 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 복수의 투여 및 화학요법제의 복수의 투여를 포함하는 방법으로서, 상기 화학요법제의 투여 각각이 항-CD73 항체의 투여 후에 실시되는 방법.
  17. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체의 복수의 투여 각각이 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 투여 1 시간 내지 약 1 주 후에 실시되는 방법.
  18. 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 복수의 투여 및 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체의 복수의 투여를 포함하는 방법으로서, 상기 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체의 투여 각각이 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 투여와 동일한 날에 또는 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 투여 7 일 후에 실시되는 방법.
  19. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 복수의 화학요법제의 투여 각각이 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 투여 1 시간 내지 약 1 주 후에 실시되는 방법.
  20. 제 1 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 복수의 투여 및 화학요법제의 복수의 투여를 포함하는 방법으로서, 상기 화학요법제의 복수의 투여 각각이 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 투여와 동일한 날에 또는 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 투여 7 일 후에 실시되는 방법.
  21. 개체에서 암을 치료하는 방법으로서, 방법이 개체에게 인간 CD73 단백질에 결합하고 그것의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체를 투여하는 것을 포함하며, 항체가 SEQ ID NOS: 43, 44, 45 또는 46 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 42 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 항체 단편이며, 항체가 개체에게 (a) 2 주 마다 1500-3000 ㎎ 의 고정된 도스 (체중 또는 표면적과 관계 없이) 로, 선택적으로 1500 ㎎ 의 도스로, 선택적으로 2400 ㎎ 의 도스로, 또는 (b) 3 주 마다 2000-3000 ㎎ 의 고정된 도스로, 선택적으로 2100 ㎎, 2200 ㎎, 2300 ㎎, 2400 ㎎, 2500 ㎎, 2600 ㎎, 2700 ㎎, 2800 ㎎, 2900 ㎎ 또는 3000 ㎎ 의 도스로 투여되는 방법.
  22. 제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체의 복수의 투여, 화학요법제의 복수의 투여 및 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 복수의 투여를 포함하며, 항-HER2 항체의 각각의 투여 1 시간 내지 7 일 전에 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 투여가 선행하고, 선택적으로 추가로 화학요법제의 각각의 투여 1 시간 내지 7 일 전에 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 투여가 선행하는 방법.
  23. 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 개체에게 하기를 투여하는 것을 포함하는 방법:
    (i) 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체, (a) 2 주 마다 1500-3000 ㎎ 의 도스로 또는 (b) 3 주 마다 2000-3000 ㎎ 의 도스로 투여, 및
    (ii) 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체, 3 주 마다 정맥내 투여에 의해 3-6 ㎎/㎏ 체중의 도스로 또는 피하 투여에 의해 600 ㎎ 의 도스로 투여, 및 선택적으로
    (iii) 파클리탁셀, 3 주 마다 175 ㎎/㎡ 신체 표면적의 도스로 투여.
  24. 제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 개체에게 하기를 투여하는 것을 포함하는 방법:
    (i) 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체 (a) 2 주 마다 1500-3000 ㎎ 의 도스로 또는 (b) 3 주 마다 2000-3000 ㎎ 의 도스로, 및
    (ii) 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체, 8 ㎎/㎏ 의 로딩 도스로 투여에 이어서 1 주 후에 3 주 마다 6 ㎎/㎏ 체중의 치료 도스로 투여; 및, 선택적으로,
    (iii) 파클리탁셀, 3 주 마다 175 ㎎/㎡ 신체 표면적의 도스로.
  25. 개체에서 HER2-양성 암을 치료하는 방법으로서, 개체에게 하기를 투여하는 것을 포함하는 방법:
    (i) 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체, (a) 2 주 마다 1500-3000 ㎎ 의 도스로 또는 (b) 3 주 마다 2000-3000 ㎎ 의 도스로, 및
    (ii) 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체, 3 주 마다 정맥내 투여에 의해 3-6 ㎎/㎏ 체중의 도스로 또는 피하 투여에 의해 600 ㎎ 의 도스로, 및 선택적으로
    (iii) 파클리탁셀, 3 주 마다 175 ㎎/㎡ 신체 표면적의 도스로.
  26. 제 1 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-HER2 항체의 로딩 도스가 항-HER2 항체의 첫번째 3 주 마다 투여 1 주 전에 투여되는 방법.
  27. 제 1 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체의 제 1 투여 (예를 들어, 로딩 도스) 및 파클리탁셀의 제 1 투여가 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 제 1 도스 2 주 후에 실시되는 방법.
  28. 개체에서 HER2-양성 암을 치료하는 방법으로서, 개체에게 하기를 투여하는 것을 포함하는 방법:
    (i) 인간 CD73 단백질에 결합하고 그것의 5'-엑토뉴클레오티다아제 활성을 중화시키는 항체, (a) 2 주 마다 1500-3000 ㎎ 의 도스로 또는 (b) 3 주 마다 2000-3000 ㎎ 의 도스로, 및
    (ii) 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체, 8 ㎎/㎏ 의 로딩 도스로 투여에 이어서 1 주 후에 3 주 마다 6 ㎎/㎏ 체중의 치료 도스로 투여; 및, 선택적으로,
    (iii) 파클리탁셀, 3 주 마다 175 ㎎/㎡ 신체 표면적의 도스로.
  29. 제 1 항 내지 제 28 항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 개체에게 하기를 투여하는 것을 포함하는 방법:
    (i) 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체, (a) 2 주 마다 1500 또는 2400 ㎎ 의 도스로 또는 (b) 3 주 마다 2000-3000 ㎎ 의 도스로, 및
    (ii) 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체, 3 주 마다, 3-6 ㎎/㎏ 체중의 도스로, 및 선택적으로
    (iii) 파클리탁셀, 3 주 마다 175 ㎎/㎡ 신체 표면적의 도스로.
  30. 제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 개체에게 하기를 투여하는 것을 포함하는 방법:
    (i) 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체, (a) 2 주 마다 1500 또는 2400 ㎎ 의 도스로 또는 (b) 3 주 마다 2000-3000 ㎎ 의 도스로, 및
    (ii) 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체, 8 ㎎/㎏ 의 로딩 도스로 투여에 이어서 1 주 후에 3 주 마다 6 ㎎/㎏ 체중의 치료 도스로 투여; 및, 선택적으로,
    (iii) 파클리탁셀, 3 주 마다 175 ㎎/㎡ 신체 표면적의 도스로.
  31. 제 25 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체의 제 1 투여 (예를 들어, 로딩 도스) 및 파클리탁셀의 제 1 투여가 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 제 1 도스 2 주 후에 실시되는 방법.
  32. 제 1 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체, 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체 및/또는 화학요법제가 정맥내 투여되는 방법.
  33. 제 1 항 내지 제 32 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체 및 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체가 별도의 투여를 위해 제형화되는 방법.
  34. 제 1 항 내지 제 33 항 중 어느 한 항에 있어서, HER2-양성 암이 유방암, 위 선암종 또는 위식도 접합부 선암종인 방법.
  35. 제 1 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 화학요법제를 이용한 사전 치료 과정을 받은 방법.
  36. 제 1 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체를 이용한 사전 치료 과정을 받은 방법.
  37. 제 1 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체가 돌연변이 A99S, E129A, K133A, E134N, A135S 및 K136A (SEQ ID NO: 1 에 관하여) 를 포함하는 돌연변이체 CD73 폴리펩티드에 대해 감소된 결합 (각 경우에 항체와 SEQ ID NO: 1 의 아미노산 서열을 포함하는 야생형 CD73 폴리펩티드 사이의 결합에 상대적으로) 을 갖는 방법.
  38. 제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체가 SEQ ID NO: 43 의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 42 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 항체 단편, 또는 이의 기능-보존적 변이체인 방법.
  39. 제 1 항 내지 제 38 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체가 SEQ ID NO: 24 의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 23 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 항체 단편인 방법.
  40. 진행성 위 또는 위식도 접합부 선암종을 치료하는 방법으로서, 치료가 필요한 환자에게 SEQ ID NO: 24 의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 23 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체의 유효량을 SEQ ID NO: 43 의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 42 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체의 유효량과의 동시의, 별도의, 또는 순차적 조합으로 투여하는 것을 포함하는 방법.
  41. 제 1 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 HER2 단백질에 결합하는 항체가 SEQ ID NO: 26 의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 SEQ ID NO: 25 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 방법.
  42. 제 1 항 내지 제 41 항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 CD73 단백질에 결합하는 항체가 SEQ ID NO: 48 의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 SEQ ID NO: 47 의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 방법.
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