CN117660213B - 一株伯顿丝孢毕赤酵母y09-3及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株伯顿丝孢毕赤酵母Y09‑3及其应用。本发明提供的伯顿丝孢毕赤酵母（Hyphopichia burtonii）Y09‑3保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：64227。该菌株筛选自酱油发酵醪体系，经其发酵可生成种类丰富的风味物质，可获得同时含有4‑乙基愈创木酚、4‑乙烯基愈创木酚和苯乙醇三种风味物质的发酵产物，可使发酵产物兼具酱香味、烟熏味、醇香味和清甜的玫瑰样花香等综合香气，并增加厚味与综合口感，从而使发酵产物或由其制备的调味品在风味和口感两方面均得到良好的提升，具有良好的应用前景。

Description

一株伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3及其应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一株伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3及其应用。
背景技术
酱油是我国的一种传统发酵调味品，它与人们的生活息息相关。酱油发酵是一个多种微生物共同作用的发酵过程，经过微生物及其酶系的长期作用，赋予了酱油良好的风味。
4-乙基愈创木酚(4-ethylguaiacol，4-EG)又名乙基愈创木酚、4-乙基-2-甲氧基苯酚、2-甲氧基-4-乙基苯酚，分子式为C9H12O2，为无色至淡黄色液体，微带酚的气息，通常被描述为一种酱香味和丁香味的物质，是一种天然的呈香化合物，气味浓郁悠长。4-乙基愈创木酚的风味阈值极低，其含量相差0.5mg/L就很容易被感官所识别，1～2mg/L的4-乙基愈创木酚便可以明显改善酱油的风味品质。因此，4-乙基愈创木酚的含量与酱油的品质密切相关。
4-乙烯基愈创木酚（4-Vinylguaiacol），分子式为C9H10O2，该物质呈发酵香气，略带甜味，微带酚的气息，是决定酒类、酱油、茶叶、咖啡、干酪等食品风味及质量的主要香味成分之一。
苯乙醇（Phenylethyl alcohol），分子式为C8H10O，具有独特的玫瑰香气，在酱油风味成分的研究中，是酱油的关键香气活性物质。早期研究发现了假丝酵母、鲁氏酵母、酿酒酵母等在苯乙醇生成上具有一定的效果，然而，对于伯顿丝孢毕赤酵母在酱油中的风味提升应用并没有相关研究报道。
因此，筛选出能同时产生4-乙基愈创木酚、4-乙烯基愈创木酚和苯乙醇等适合酱香味发酵物增香的发酵菌，将有助于提升相应产品的品质。
发明内容
第一方面，本发明提供一株伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3。
该菌株于2023年12月29日保藏于广东省微生物菌种保藏中心（GuangdongMicrobial Culture Collection Center, GDMCC，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070），分类命名为Hyphopichia burtonii，保藏编号为GDMCC No：64227。
本发明中，伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3菌株分离自酱油发酵醪，通过细菌形态学、生理生化特征以及18S ITS rDNA测序对该菌株进行鉴定，结果为伯顿丝孢毕赤酵母（Hyphopichia burtonii），命名为伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3。
伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3具有以下微生物学特性：
（1）形态学特征
在麦芽汁琼脂平板上菌落白色，圆形，稍凸，边缘整齐，毛状，无光泽，难挑起。光学显微镜下细胞呈圆形、卵圆形或腊肠形，出芽生殖。
（2）生理生化特性
伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3可采用以下培养方法进行培养：将伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3接种于麦芽汁培养基中，30℃培养48h。其中，麦芽汁培养基的成分为：5% 麦芽浸粉、1% 酵母抽提物，pH 5~6。
（3）18S ITS rDNA测序
伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3的18S ITS rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。
第二方面，本发明提供所述伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3在食品或调味品发酵中的应用。
不同于其他菌种的发酵制品，本发明利用伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3制备的所述食品或调味品中，同时含有4-乙基愈创木酚、4-乙烯基愈创木酚和苯乙醇三种风味物质。
所述食品或调味品包括但不限于酱油、黄豆酱、风味基料等。
第三方面，本发明提供一种发酵菌剂，所述发酵菌剂包含前述伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3。
所述发酵菌剂可为固体制剂（例如菌粉）或液体制剂。
以上所述的微生物制剂中，伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3以活菌形式存在。
第四方面，本发明提供一种食品或调味品，采用前述发酵菌剂制备得到。
第五方面，本发明提供一种伯顿丝孢毕赤酵母菌种子培养液，所述培养液通过以下方法制得：将前述伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3接种至麦芽汁培养基进行培养，培养温度为30～32℃，培养时间为30～72h，即得。
其中，培养时间可依据种子培养液的目标浓度灵活控制，典型非限制性的可为30h、36h、42h、48h、54h、60h、72h等。
第六方面，本发明提供一种食品或调味品的制备方法，将所述伯顿丝孢毕赤酵母菌种子培养液接种至曲料中，25～32℃发酵20～45天，即得或作为基料配兑至其他配方中。
所述曲料的原料为大豆/脱脂大豆和小麦/小麦粉，曲料的制备可采用本领域通用方法，本发明对此不另做限定。
种子培养液接种至曲料时，所述伯顿丝孢毕赤酵母菌种子培养液的接种量优选为1%~5%（w/w）。
作为一种示例性说明，利用所述伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3制备酱油或黄豆酱的方法包括：曲料加入盐水发酵12~15天后，在发酵液复料过程中在线添加4%（w/w）伯顿丝孢毕赤酵母 Y09-3种子培养液，发酵21天，每周复料2次，每次约1.5h，控制发酵料品温为25~30℃。
作为一种示例性说明，利用所述伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3制备风味基料的方法包括：向酱油发酵液中加入苯丙氨酸、麦麸提取物，再接种 5% （w/w）伯顿丝孢毕赤酵母 Y09-3种子培养液，于30℃，220 r/min条件下震荡培养24 h，将转速降为150 r/min，继续培养42天。
本发明的有益效果主要在于：
本发明的伯顿丝孢毕赤酵母菌Y09-3筛选自酱油发酵醪体系，经其发酵可生成种类丰富的风味物质，可获得同时含有4-乙基愈创木酚、4-乙烯基愈创木酚和苯乙醇三种风味物质的发酵产物，可使发酵产物兼具酱香味、烟熏味、醇香味和清甜的玫瑰样花香等综合香气，并增加厚味与综合口感，从而使发酵产物或由其制备的调味品在风味和口感两方面均得到良好的提升，具有良好的应用前景。
生物材料保藏情况说明：
本发明涉及的保藏生物材料为一株伯顿丝孢毕赤酵母菌株，该伯顿丝孢毕赤酵母菌株被命名为伯顿丝孢毕赤酵母菌（Hyphopichia burtonii）Y09-3，其保藏于广东省微生物菌种保藏中心(简称GDMCC)，其在广东省微生物菌种保藏中心的保藏编号为GDMCC No：64227，保藏单位的地址位于广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。该伯顿丝孢毕赤酵母菌Y09-3的保藏日期为2023年12月29日。
附图说明
为了更清楚地说明本发明或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例1中伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3的香气成分GC-MS分析结果。
图2为实施例1中伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3在光学显微镜下观察的菌体形态。
图3为实施例1中伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3的菌落形态。
图4为实施例1中在不同NaCl浓度下伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3在培养基中的生长曲线。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明中的附图，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1 伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3的筛选
本实施例旨在说明伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3菌株的筛选和鉴定，具体如下：
一、样品采集
以来自龙牌食品股份有限公司的酱油发酵醪（发酵时间为15天）作为菌株筛选样品。
二、分离具有耐盐性的目标菌株
将上述酱油发酵醪，利用生理盐水进行10-2、10-3、10-4、10-5倍的梯度稀释后，涂布于酵母筛选平板，于30℃条件下静置培养72h，分别挑取不同单菌落进行划线分离纯化。进一步将纯化后菌株分别接种麦芽汁培养基，于30℃、150 r/min 条件下振荡培养96 h，获得培养液。
上述酵母筛选平板，选用酵母分离平板，包含：5% 麦芽浸粉、1% 酵母抽提物、18%氯化钠、2% 琼脂粉，pH 5~6。
上述麦芽汁培养基包含：5% 麦芽浸粉、1% 酵母抽提物，pH 5~6。
三、目标菌株的产香性能初筛
取上述纯化不同菌株发酵培养所得的培养液，进行香气鉴评。
香气鉴评方法：由10位在酱油风味鉴评方面具有丰富经验的技术人员，对不同菌株培养液进行盲评，主要评价香气可接受度和香气类型。
将具有令人愉悦的独特香气发酵液对应的酵母菌株命名为Y09-1，Y09-2，Y09-3，Y09-4，Y09-5，Y09-6，Y09-7，Y09-8，Y09-9，Y09-10，Y09-11，Y09-12，Y09-13，Y09-14。
四、风味成分复筛
1、制备种子培养液
分别挑取Y09-1，Y09-2，Y09-3，Y09-4，Y09-5，Y09-6，Y09-7，Y09-8，Y09-9，Y09-10，Y09-11，Y09-12，Y09-13，Y09-14共14个菌株的单菌落接种于麦芽汁培养基，于30℃、200 r/min条件下震荡培养60 h，得到上述菌株的种子培养液。
上述麦芽汁培养基包含：5% 麦芽浸粉，1% 酵母抽提物，pH 5~6。
2、发酵
将种子培养液分别按5%（w/w）接种到酱醪发酵液培养基中，于30℃、100 r/min条件下震荡培养12天，获得发酵液样品。
上述酱醪发酵液培养基的制备方法为：取发酵2周的酱油发酵醪，经200目纱网过滤，将过滤清液于5000 r/min条件下离心 10 min，获得上清液，即为酱醪发酵培养基。
3、顶空萃取-气相色谱-质谱（GC-MS）检测
对上述发酵液样品进行顶空萃取，并对萃取样品进行气相色谱-质谱（GC-MS）分析，具体为：
取5 mL发酵液样品于顶空瓶中，将DVB/CAR/PDMS萃取头插入到样品瓶的顶空部分，
50 ℃保温萃取时间15 min。萃取结束后，立即进样，解析时间为5 min。
色谱条件：色谱柱为DB-WA毛细管柱 (30 m×0.32 mm, 0.25 μm)；升温程序：起始温度40℃，保持5 min，以5℃/min升温至220℃，再以2.5℃/min升温至250℃，保留12.5min；进样口温度250℃；载气为He（99.999%）。
质谱条件：电离能70eV，检测电压1579.9 V；离子源温度230℃，四极杆温度150℃；扫描速率2.00 scans/s，质量扫描范围m/z 29～400。
GC-MS得到挥发性风味物质总离子流图，手动积分计算与数据库标准物质相似度80%以上风味物质的峰面积，风味物质峰面积与总峰面积的比值为该物质的相对含量。
经计算，4-乙基愈创木酚（tr= 31.875 min）与4-乙烯基愈创木酚（tr=34.965min）含量之和最高，香气成分种类最丰富的菌株为Y09-3，其香气成分GC-MS分析结果如图1所示。
4、酵母分离平板培养
挑取Y09-3单菌落接种于酵母分离平板（5% 麦芽浸粉，1% 酵母抽提物，18% 氯化钠，2% 琼脂粉，pH 5~6），30℃培养48天，观察其菌落形态。挑取平板单菌落于光学显微镜观察其菌体形态，结果如图2所示。
五、耐盐性能分析
挑取Y09-3单菌落接种于麦芽汁培养基，于30℃，200 r/min条件下震荡培养48h ，得到Y09-3种子培养液。将种子培养液按5% （w/w）分别接种至含0%，5%，10%，15%，20% NaCl的麦芽汁培养基，于30℃，200 r/min条件下震荡培养，按一定时间间隔取培养液在 600 nm处测定吸光值。
上述麦芽汁培养基包含：5% 麦芽浸粉，1% 酵母抽提物，pH 5~6。
结果如图4所示，NaCl浓度对Y09-3生长曲线影响显著，在含0%~5% NaCl的培养基中，Y09-3生长速度较快，细胞浓度较高；随着NaCl 浓度的进一步升高，细胞生长受到抑制，细胞浓度相对降低。但是，Y09-3在含20% NaCl培养基中依然可以达到一定的细胞浓度，说明Y09-3具有较强的耐盐性，可以在高含盐发酵食品（20% NaCl）中生长。
六、菌种鉴定
根据细胞形态学、生理学特征和18S ITS rDNA 测序等实验数据综合分析，该菌株被鉴定为伯顿丝孢毕赤酵母（Hyphopichia burtonii）。该菌株的菌体显微观察照片如图2所示，菌落形态如图3所示，生理生化试验结果如表1所示，菌株的18S ITS rDNA序列如下：
ATCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTAAAAATTTAATTGTTTACACGTTTACGTTTAACATATACAACTAACCAACTTAATTATGTCAACAACAACAACCAAAAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATATGAATTGCAGATTTTCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCACCTTGTGGTATTCCACAAGGTATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCTCCCTCAACCCCCGCGGGTTGGCGTTGAATGGCACGAGCTCTTAGTCAGTCCATTCGAAAAGTATTTTTCTTGTGTTGTTATTTTCTAATTTAGTAGTGACAACCACACTAAAAACACATTTTCCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCATATC
表1 生理生化测试结果
注：“＋”为阳性；“－”为阴性； “w” 为弱；“s” 为慢；“nd”为未检测。
七、菌株保藏
菌株于2023年12月29日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮政编码：510075，保藏编号为GDMCC No：64227。
实施例2伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3在酱油发酵中的应用
本实施例旨在说明伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3菌株作为发酵菌在发酵制备酱油中的应用，具体如下：
1、分析方法和材料
（1）培养基
15% 氯化钠的麦芽汁培养基：5% 麦芽浸粉；1% 酵母抽提物，15% 氯化钠，pH 5~6。
（2）酱油或发酵酱常规理化指标检测方法
总酸测定方法参考：GB T 12456-2008食品中总酸的测定；
氨基酸态氮测定方法参考：GB 5009.235-2016 食品安全国家标准食品中氨基酸态氮的测定；
总氮测定方法参考：GB 5009.5-2016 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定；
氯化钠测定方法参考：GB T 12457-2008 食品中氯化钠的测定。
（3）感官鉴评方法
由10位在酱油风味鉴评方面具有丰富经验的技术人员，对待测样品进行盲评。香气方面分别从酸味、酱香、醇香、综合香气4个维度对样品进行评分；口感方面分别从咸味、鲜味、苦味、甜味、酸味、厚味、综合口感7个维度对样品进行评分。
分值为0~10分，分数越高，则该项感官指标强度越高，结果取各鉴评人员评分的平均数。
（4）4-乙基愈创木酚、4-乙烯基愈创木酚和苯乙醇的气相色谱-质谱（GC-MS）测定方法
取5 mL发酵样品，加入30 mL乙醚，萃取3 次；收集上层萃取液真空浓缩，并溶于无水乙醇，根据浓度合理稀释并用GC-MS进行定量分析。GC-MS具体操作方法如下：
气相色谱载气为氦气，流速1.0 mL/min，进样量1.0 μL，分流比10:1；升温程序：40℃保留1 min；以10℃/min升温到220℃，保留0 min；再以10℃/min升温到250℃，保留3min。质谱条件：采用电子电离方式，电离能70 eV，检测器电压1827 V，扫描范围m/z 30～200，扫描速率2.00 scans/s；进样口和离子源温度分别为250℃和230℃。4-乙基愈创木酚以m/z 91、122、137、152四个离子为定量离子进行分析，4-乙烯基愈创木酚的定量离子为m/z 51、77、107、150四个离子，苯乙醇的定量离子为荷质比 (m/z) 91.1和122.0 两个离子。
2、操作方法
（1）制备种子培养液
采用含15% 氯化钠的麦芽汁培养基培养本发明所述的伯顿丝孢毕赤酵母 Y09-3，培养时间42 h，培养温度30℃，得到菌体活性高，菌体密度大的种子培养液。
（2）酱油发酵
采用曲池制曲或者圆盘制曲设备制曲，使用原料为大豆和小麦粉。
曲料加入盐水发酵15天后，在发酵液复料过程中在线添加3%（w/w）伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3种子培养液；接种伯顿丝孢毕赤酵母 Y09-3之日起至发酵21天，每周复料2次，每次1.5h，控制发酵料品温为25~30℃；盐分管理、发酵周期管理按照常规方法进行。
曲料加入盐水发酵15天，不添加伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3种子培养液，采用同上的发酵温度和发酵时间，作为对照样品。
3、结果
发酵完成后，检测酱油常规理化指标，采用GC-MS测定4-乙基愈创木酚、4-乙烯基愈创木酚、苯乙醇浓度，并对酱油风味进行鉴评，结果如表2所示。
表2 发酵酱油的理化指标
由表2可知，由菌株Y09-3发酵获得的酱油样品中，检出了4-乙基愈创木酚和4-乙烯基愈创木酚两种风味物质，而对照样中未检出上述两种化合物；且苯乙醇含量显著高于对照样品；接种菌株Y09-3发酵酱油可提升酱油的酱香、醇香和综合香气，降低了苦味和酸味，提升了酱油的厚味和综合口感。
实施例3伯顿丝孢毕赤酵母 Y09-3在黄豆酱酿造中的应用
本实施例旨在说明伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3菌株作为发酵菌在发酵酿造黄豆酱中的应用，具体如下：
1、分析方法和材料
同实施例2。
2、操作方法
（1）制备种子培养液
采用含15% 氯化钠的麦芽汁培养基培养本发明所述的伯顿丝孢毕赤酵母 Y09-3，培养时间42h，培养温度30℃，得到菌体活性高，菌体密度大的种子培养液。
（2）黄豆酱发酵
采用曲池制曲或者圆盘制曲设备制曲，使用原料为大豆和面粉。
曲料加入盐水发酵12天后，在发酵液复料过程中在线添加4%伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3种子培养液；接种伯顿丝孢毕赤酵母 Y09-3之日起至发酵21天，每周复料2次，每次1.5h，控制发酵料品温为25~30℃；料水比控制、盐分管理、发酵周期管理按照常规方法进行。
曲料加入盐水发酵12天，不添加伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3种子培养液，采用同上的发酵温度和发酵时间，作为对照样品。
3、结果
发酵完成后，检测黄豆酱常规理化指标，采用GC-MS测定4-乙基愈创木酚、4-乙烯基愈创木酚、苯乙醇浓度，并对黄豆酱风味进行鉴评，结果如表3所示。
表3发酵黄豆酱的理化指标
由表3可知，由菌株Y09-3发酵获得的黄豆酱样品中，检出了4-乙基愈创木酚和4-乙烯基愈创木酚两种风味物质，而对照样中未检出上述两种化合物；且苯乙醇含量显著高于对照样品；接种菌株Y09-3发酵制得的黄豆酱酱香、醇香和综合香气均得到了明显提升；口感方面，苦味、酸味降低，厚味显著提高，综合口感优于对照样品。
实施例4 伯顿丝孢毕赤酵母 Y09-3在风味基料制备中的应用
本实施例旨在说明伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3菌株作为发酵菌在发酵制备风味基料中的应用，具体如下：
1、分析方法和材料
同实施例2。
2、操作方法
（1）制备种子培养液
采用含15% 氯化钠的麦芽汁培养基培养本发明所述的伯顿丝孢毕赤酵母 Y09-3，培养时间42h，培养温度30℃，得到菌体活性高，菌体密度大的种子培养液。
（2）制备酱油发酵液
采用曲池制曲或者圆盘制曲设备制曲，使用原料为大豆和小麦粉。曲料加入盐水发酵50天后，取发酵醪下层液体，3000 rpm 离心或者板框压滤或者膜过滤除去较大固体杂质，得到酱油发酵液。
（3）制备风味基料
按照上述酱油发酵液质量加入1% 苯丙氨酸、3%麦麸提取物，再接种 5% （w/w）伯顿丝孢毕赤酵母 Y09-3种子培养液，于30℃，220 r/min条件下震荡培养24 h，将转速降为150 r/min，继续培养42天，获得风味基料。
以同样加入1% 苯丙氨酸、3%麦麸提取物，但不添加伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3种子培养液的酱油发酵液，采用同上的发酵温度和发酵时间，作为对照样品。
采用GC-MS测定风味基料4-乙基愈创木酚、4-乙烯基愈创木酚、苯乙醇浓度，结果如表4所示。
表4 发酵风味基料的理化指标
由表4可知，由菌株Y09-3发酵获得的风味基料样品中，检出了4-乙基愈创木酚和4-乙烯基愈创木酚两种风味物质，而对照样中未检出上述两种化合物；且苯乙醇含量显著高于对照样品。
实施例5风味基料在酱油、黄豆酱及火锅底料中的应用
本实施例旨在说明经伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3菌株发酵制备的风味基料在进一步制备酱油、黄豆酱及火锅底料中的应用，具体如下：
分别在酱油、黄豆酱及火锅底料配方中加入实施例4制备的风味基料。
（1）制备酱油：按酱油重量份的5%添加所述风味基料，对应取代配方中5%重量份的水；
（2）制备黄豆酱：添加方法与酱油相同，添加比例为2.5%，对应取代配方中2.5%重量份的水；
（3）制备火锅底料：添加方法与酱油相同，添加比例为1.5%，对应取代配方中1.5%重量份的水。
配兑完成后，以不添加风味基料的酱油、黄豆酱和火锅底料为对照进行感官鉴评，感官鉴评方法同实施例2，结果如表5所示。
表5风味基料应用感官鉴评
综上所述，本发明分离筛选获得了一株伯顿丝孢毕赤酵母 Y09-3。该菌株可作为发酵菌制备酱香味发酵物，如酱油、豆酱甚至酱香味调味品中的风味基料等，可显著增加调味品的酱香、醇香和综合香气，对风味和口感的提升作用明显。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (11)

1.一株伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3，其保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：64227。
2.权利要求1所述的伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3在食品或调味品发酵中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述食品或调味品中含有4-乙基愈创木酚、4-乙烯基愈创木酚和苯乙醇。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述食品或调味品包括风味基料。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述食品或调味品包括酱油、黄豆酱。
6.一种发酵菌剂，其特征在于，所述发酵菌剂包含权利要求1所述的伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3。
7.一种食品或调味品，其特征在于，采用权利要求6所述的发酵菌剂制备得到。
8.一种伯顿丝孢毕赤酵母菌种子培养液，其特征在于，所述伯顿丝孢毕赤酵母菌种子培养液由权利要求1所述的伯顿丝孢毕赤酵母Y09-3培养获得。
9.一种食品或调味品的制备方法，其特征在于，将权利要求8所述的伯顿丝孢毕赤酵母菌种子培养液接种至曲料中，25～32℃发酵20～45天，即得或作为基料配兑至其他配方中。
10.如权利要求9所述的一种食品或调味品的制备方法，其特征在于，所述曲料的原料为大豆或脱脂大豆，和小麦或小麦粉。
11.如权利要求9或10所述的一种食品或调味品的制备方法，其特征在于，所述伯顿丝孢毕赤酵母菌种子培养液的接种量为1%~5%。
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