CN117659185A - 抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及免疫球蛋白技术领域，具体涉及抗人钙调蛋白结合蛋白（Caldesmon）单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用。本申请提供了一种抗人钙调蛋白结合蛋白（Caldesmon）单克隆抗体，同时，本申请还提供了杂交瘤细胞株OTI3E8，所述杂交瘤细胞株OTI3E8于2023年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理管理委员会普通微生物中心（CGMCC），其保藏编号为CGMCC No.45716。本申请提供的杂交瘤细胞株OTI3E8可以稳定分泌抗人钙调蛋白结合蛋白（Caldesmon）单克隆抗体，该抗体能够与Caldesmon蛋白特异性结合，显著提高了其免疫检测的特异性、准确性和可靠性，可广泛适用于多种肿瘤中Caldesmon蛋白的标记。

Description

抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用
技术领域
本申请涉及免疫球蛋白技术领域，具体涉及抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用。
背景技术
钙调蛋白结合蛋白（Caldesmon，CaD）是一种肌动蛋白结合蛋白，是细胞运动的重要调节因子，与许多细胞运动有关，如细胞内的运输、细胞形态的维持、细胞的粘附和迁移以及平滑肌收缩等。
CaD最初从鸡胗中分离得来，人类CALD1基因编码Caldesmon蛋白，由14个外显子组成，位于7q33-q34区域。单个基因通过外显子和不同启动子的选择性剪接编码出两种不同的分子量亚型：高分子量异构体CaD（h-Caldesmon，h-CaD）和低分子量异构体CaD（l-Caldesmon，l-CaD）。h-CaD在内脏和血管的平滑肌细胞以及肌上皮细胞中表达，主要通过与肌动蛋白和原肌球蛋白结合来调节肌肉收缩；l-CaD仅在非肌肉细胞中表达。CaD的肌动蛋白结合域主要位于分子的羧基端，而肌球蛋白结合域位于分子的氨基端，h-CaD和l-CaD异构体具有相似的序列和生化特性。本文专利仅涉及高分子量钙调蛋白结合蛋白h-CaD，因此后续所提Caldesmon均指h-CaD。
子宫富于细胞型平滑肌瘤（cellular leiomyoma，CL）和子宫内膜间质肉瘤（endometrial stromal sarcoma，ESS）在形态学上存在着交叉，ESS可伴有平滑肌分化，尤其是低度恶性子宫内膜间质肉瘤，致使两者仅凭形态学检查很难作出准确的诊断。目前临床上主要通过免疫组织化学（简称免疫组化，Immunohistochemistry，IHC）病理实验检测肿瘤组织中的蛋白的表达状况，研究发现Caldesmon不仅仅是平滑肌的特异性标志物，且在ESS上不表达，认为Caldesmon是鉴别诊断CL和ESS的一个敏感及特异性指标物。CL属于特殊类型平滑肌瘤，为良性肿瘤，但ESS容易局部复发和远处转移，因此明确鉴别两者具有重要的临床价值。
为此，研制出一种特异性高的针对Caldesmon蛋白的单克隆抗体具有深远意义。
发明内容
有鉴于此，本申请提供了一种抗人Caldesmon蛋白的单克隆抗体、能够分泌所述抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，以及该抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体和杂交瘤细胞株的应用。
第一方面，本申请提供了一种抗人钙调蛋白结合蛋白（Caldesmon）的单克隆抗体，所述单克隆抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的CDR-L1，SEQ ID NO.5所示氨基酸序列的CDR-L2和SEQ ID NO.6所示氨基酸序列的CDR-L3。
进一步地，所述单克隆抗体还包含VH结构域，所述VH结构域包含SEQ ID NO.8所示氨基酸序列的CDR-H1，SEQ ID NO.9所示氨基酸序列的CDR-H2和SEQ ID NO.10所示氨基酸序列的CDR-H3。
采用上述技术方案，本申请提供的抗Caldesmon蛋白单克隆抗体能够与Caldesmon蛋白特异性结合，显著提高了其免疫检测的特异性、准确性和可靠性。
进一步地，所述VL结构域包含如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，或包含SEQ IDNO.3所示的氨基酸序列中任一个或多个氨基酸经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰得到的具有90％以上同源性的氨基酸序列，优选地，具有90%、92%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同源性的氨基酸序列。
进一步地，所述VL结构域全长为109个氨基酸，其FR的4个结构域氨基酸数分别为26、17、36和11，CDR-L1-3结构域氨基酸数分别为11、3和5，分别为27aa-37aa，55aa-57aa和94aa-98aa，其氨基酸序列分别：QSLVHSNGYTN（SEQ ID NO.4）、IVS（SEQ ID NO.5）、SQSTH（SEQ ID NO.6）。
进一步地，所述VH结构域包含如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，或包含SEQ IDNO.7所示的氨基酸序列中任一个或多个氨基酸经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰得到的具有90％以上同源性的氨基酸序列，优选地，具有90%、92%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同源性的氨基酸序列。
进一步地，所述VH结构域全长为114个氨基酸，其FR的4个结构域氨基酸数分别为25、17、38和11，CDR-H1-3结构域氨基酸数分别为10、7和6，分别为26aa-35aa，53aa-59aa和98aa-103aa，其氨基酸序列分别为：GFSLSTSGMG（SEQ ID NO.8）、IWWDDDV（SEQ ID NO.9）、ARRPKG（SEQ ID NO.10）。
进一步地，所述单克隆抗体由杂交瘤细胞株OTI3E8分泌产生，所述杂交瘤细胞株OTI3E8的保藏编号为CGMCC No.45716，2023年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理管理委员会普通微生物中心（CGMCC）。
第二方面，本申请提供了一种能够分泌抗人钙调蛋白结合蛋白（Caldesmon）的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株为OTI3E8，其保藏编号为CGMCC No.45716，2023年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理管理委员会普通微生物中心（CGMCC）。
采用上述技术方案，本申请的杂交瘤细胞株OTI3E8可以稳定分泌抗人钙调蛋白结合蛋白（Caldesmon）单克隆抗体。
第三方面，本申请还提供了第一方面所述的单克隆抗体在制备标记组织中人钙调蛋白结合蛋白（Caldesmon）的免疫组化检测试剂盒中的应用。
进一地，所述组织包含子宫平滑肌瘤、阑尾、肾脏和前列腺癌等组织。
第四方面，本申请还提供了一种人钙调蛋白结合蛋白（Caldesmon）的免疫组化检测试剂盒，所述免疫组化检测试剂盒包括一抗试剂，所述一抗试剂含有第一方面所述的单克隆抗体。
进一地，所述试剂盒还包括抗原修复液、内源性过氧化物酶阻断剂、超敏二抗试剂、DAB底物缓冲液、DAB浓缩显色液、苏木素染色液。
采用上述技术方案，试剂盒中含有本申请提供的抗人Caldesmon蛋白的单克隆抗体，可以建立了免疫组化检测方法，实现在子宫平滑肌瘤、阑尾、肾脏以及前列腺癌等组织中对人Caldesmon蛋白的特异性标记。
保藏信息
用于保藏的杂交瘤细胞株：鼠抗人Caldesmon单克隆杂交瘤细胞株OTI3E8；
保藏编号：CGMCC No.45716；
保藏日期：2023年9月6日；
保藏单位：中国微生物菌种保藏管理管理委员会普通微生物中心（CGMCC）；
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
相对于现有技术而言，本申请提供了能够特异性结合人Caldesmon蛋白的单克隆抗体，其中包括通过杂交瘤技术筛选获得针对人Caldesmon蛋白的单克隆抗体。同时，本申请还基于该抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体建立了免疫组化检测方法及检测试剂盒，采用本申请的免疫组化检测试剂盒可以在子宫平滑肌瘤、阑尾、肾脏以及前列腺癌等组织中对人Caldesmon蛋白实现特异性标记，该单克隆抗体可以用于免疫组织的化学检测以及用于鉴别与人Caldesmon蛋白表达相关的肿瘤。
附图说明
为了更清楚地说明本申请具体实施方式，下面将对具体实施方式描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为实施例2重组Caldesmon蛋白Western blot检测结果图，以anti-HIS抗体检测重组Caldesmon蛋白在E.coli细胞中的表达，其中泳道L为转染空载体的E.coli细胞裂解液为抗原的检测结果、泳道R为转染pET23a-His-rCaldesmon质粒的E.coli细胞裂解液为抗原的检测结果。
图2为实施例2 Caldesmon蛋白SDS-PAGE结果图，用镍亲和层析柱纯化重组Caldesmon蛋白，纯化后的蛋白通过SDS-PAGE电泳及考马斯亮蓝染色。
图3为实施例6抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体IHC检测子宫平滑肌瘤的结果示意图，其中，虚线箭头指示为Caldesmon蛋白阴性表达的间质细胞，实线箭头指示为Caldesmon蛋白阳性表达的平滑肌细胞。
图4为实施例7抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体IHC检测阑尾的结果示意图，其中，虚线箭头1和2分别指示为Caldesmon蛋白阴性表达的淋巴细胞和腺上皮细胞，实线箭头指示为Caldesmon蛋白阳性表达的平滑肌细胞。
图5为实施例8抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体IHC检测肾脏的结果示意图，其中，虚线箭头1和2分别指示为Caldesmon蛋白阴性表达的肾小管上皮细胞、间质细胞，实线箭头指示为Caldesmon蛋白阳性表达的血管平滑肌细胞。
图6为实施例9抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体IHC检测前列腺癌的结果示意图，其中，实线箭头指示为Caldesmon蛋白阳性表达的平滑肌细胞。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本申请。应理解，这些实施例仅用于说明本申请而不用于限制本申请的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件、实验室手册中所述的条件或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1 Caldesmon蛋白重组表达质粒的构建
从Genebank中选调Caldesmon基因NM_033138，对Caldesmon蛋白的氨基酸序列进行抗原表位分析，主要评估生物学特征、抗原性、亲疏水性、氨基酸类别和分布、人源序列与免疫动物的同源性等，最终确定将Caldesmon蛋白第150-500位的351个氨基酸作为合成蛋白的氨基酸序列。对应的氨基酸序列设计和合成DNA序列，Caldesmon 基因合成核苷酸序列，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，相对应的Caldesmon蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。基因两侧分别引入限制性内切酶位点SgfI和MluI，克隆入表达载体pET23a-N-His，建立Caldesmon重组表达质粒pET23a-His-rCaldesmon。
实施例2 重组Caldesmon蛋白的表达与纯化
(1) 转化E.coli细胞：将100μl感受态细胞置于冰上融化后加入重组质粒DNA轻混匀，冰浴30min后42℃热激90sec，然后将其继续冰浴1.5min。在超净台内加入500μl新鲜无抗LB培养基，于37℃摇床孵育45min后取适量菌液均匀涂布于含抗生素的平板上，将培养皿倒置于37℃恒温培养箱中培养过夜。
(2) 裂解细胞：第二天，挑取单克隆于新鲜培养基中，37℃、200rpm培养至OD值达到0.4~0.6时加入IPTG（终浓度1mM）诱导培养7h。离心收集菌体，然后用裂解缓冲液重悬菌体，超声破碎20min后于4℃下12000rpm离心20min，收集上清。取少量上清蛋白用anti-His抗体做WB鉴定，见图1。
由图1结果可见，转染pET23a-His-rCaldesmon质粒的E.coli细胞裂解液中WB检测后有明显的特异条带（R），分子量与预期分子量大小一致，而转化空载体的对照裂解液（L）中则没有相应大小的条带，表明细胞中重组Caldesmon蛋白特异表达。
(3) 镍亲和层析柱纯化：以0.45 μM，33mm PVDF膜滤器过滤离心后的裂解液上清并转入15mL管，加入混合好的Beads 1mL，封口后放入360度混匀器中，于4℃结合2小时；取出15mL管，将裂解液倒入BIO-RAD层析柱中，并接住穿透液，滴尽后穿透液取样WB检测；以裂解缓冲液冲洗柱料1-2次，滴尽后再用TBST冲洗Beads 3次，滴尽后用0.1M Glycine buffer（pH3.5）洗脱，第一次200μL，滴尽不收集，第二、三次各500 μL，第四次250 μL，收集至1.5mL离心管中，并迅速加入NaH2PO4buffer（pH 11.0）中和至pH7.0左右，每管加入甘油至终浓度为10%，Tween-80至终浓度为0.1%。纯化后的重组Caldesmon蛋白用SDS-PAGE鉴定，见图2。
由图2结果可见，纯化的蛋白在SDS-PAGE电泳胶上有明显的特异条带，条带清晰完整，分子量与预期分子量大小一致，表明已获得了纯度较好的重组Caldesmon蛋白。
实施例3 OTI3E8分泌抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体的制备与筛选
根据标准方法用纯化的重组Caldesmon蛋白（以下简称Caldesmon抗原）对BALB/c小鼠（北京维通利华实验动物技术有限公司）进行免疫，具体方法如下：
(1) 动物免疫：经过纯化的Caldesmon抗原以完全弗氏佐剂乳化，采用皮下或腹腔注射方法免疫6-8周龄BALB/c小鼠，免疫剂量为60μg/只，间隔两周后进行第二次免疫，以不完全弗氏佐剂乳化，免疫剂量为30μg/只。免疫两次后取尾血以ELISA法梯度稀释测定血清效价；根据结果确定是否加强免疫，选取抗体效价最高的小鼠进行细胞融合。
(2) 细胞融合：骨髓瘤细胞采用BALB/c来源的sp2/0，融合时处于对数生长期；取已免疫小鼠脾脏，制成淋巴细胞单细胞悬液；小鼠脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞以1:7混合，滴加37℃预热的50% PEG（pH 8.0）1mL，加入不完全培养基及终止液，离心弃上清后加入HAT培养基悬浮混匀，MC定容到50mL，分装到3.5cm培养皿中，放于湿盒中，置于37℃、5% CO2恒温培养箱中进行培养。
(3) 筛选和克隆：融合8天挑选杂交瘤细胞克隆，使用纯化的重组Caldesmon蛋白进行ELISA测试。标记细胞株号，对阳性孔细胞进行有限稀释，每次有限稀释后6天测定ELISA值，挑取OD280阳性值较高的单克隆孔进行有限稀释，直至ELISA测定96孔板全板结果为阳性。挑取阳性值高的单克隆定株，其对应融合板细胞株为OTI3E8。
(4) 细胞上清单抗的制备与纯化：将杂交瘤细胞株OTI3E8用含15%血清的DMEM培养基于10cm培养皿中培养，扩培至约4107个细胞时，800rpm 离心5min，弃上清并将细胞转移到2L转瓶中，加入无血清培养基，使细胞密度约为3105个/ml。继续培养1.5周后，当细胞死亡率达到60%时，收取细胞悬液6000 rpm高速离心20min，取上清，亲和层析法进行上清纯化，据抗体亚型选择相应柱料进行纯化（亚型为IgG1，采用protein G柱料进行纯化）。对纯化后的单抗浓度测定，冻干和分装（100μg/管），最后保存在-20℃。
实施例4 抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体可变区基因与氨基酸序列分析
从Takara Bio USA公司采购SMARTer®RACE 5’/3’试剂盒，采用5’RACE（RapidAmplification of cDNA Ends，快速扩增cDNA末端）技术扩增杂交瘤细胞功能性抗体的可变区轻链与重链基因序列。具体实验过程参见Takara Bio USA公司SMARTer®RACE 5’/3’Kit使用者手册。
根据所述的抗体为IgG1亚型，设计针对其Ig和Kappa恒定区3’端的特异性基因引物pRace-H-GSP和pRace-K-GSP，引物序列如下：
pRace-H-GSP：5'-CATCDGTCTATCCACTGGCCCCTG-3'（SEQ ID NO.11）
pRace-K-GSP：5'-CTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTT-3'（SEQ ID NO.12）。
从杂交瘤细胞OTI3E8中提取mRNA，逆转录为cDNA，RACE
扩增抗体重链和轻链的DNA片段。分别将扩增的轻链与重链通过酶切连于克隆载体PUC119，通过蓝白斑挑取阳性克隆，纯化阳性质粒进行测序，采用测序仪ABI 3730，测序引物为通用引物M13F和M13R：
M13F: 5'-TGTAAAACGACGGCCAGT-3'（SEQ ID NO.13） M13R: 5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3'（SEQ ID NO.14）。
利用互联网，在http://www.imgt.org上使用IMGT/V-QUEST分析软件，分别对抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体的轻链与重链的核苷酸序列的测序结果进行数据分析，得到抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
轻链可变区全长为109个氨基酸，其FR的4个结构域氨基酸数分别为26、17、36和11，CDR-L1-3的3个结构域氨基酸数分别为11、3和5，CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的区域相应地分别为27aa-37aa，55aa-57aa和94aa-98aa，其氨基酸序列分别：QSLVHSNGYTN（SEQ IDNO.4）、IVS（SEQ ID NO.5）、SQSTH（SEQ ID NO.6）。
重链可变区全长为114个氨基酸，其FR的4个结构域氨基酸数分别为25、17、38和11， CDR-H1-3的3个结构域氨基酸数分别为10、7和6， CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3分别为26aa-35aa，53aa-59aa和98aa-103aa，其氨基酸序列分别为：GFSLSTSGMG（SEQ ID NO.8）、IWWDDDV（SEQ ID NO.9）、ARRPKG（SEQ ID NO.10）。
实施例5 含有抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体的免疫组化检测试剂盒
一种含有抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体的免疫组化检测试剂盒，包括抗原修复液[1mM EDTA，10mM Tris buffer（pH8.0）]，实施例3制备纯化得到的抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体（0.16μg/ml）、内源性过氧化物酶阻断剂（3% 过氧化氢）、超敏酶标山羊抗小鼠/兔IgG聚合物、DAB显色液、苏木素染色液。
实施例6 抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体为一抗的子宫平滑肌瘤免疫组化检测
采用实施例5中的免疫组化检测试剂盒对子宫平滑肌瘤组织进行检测，具体步骤如下：
(1) 取福尔马林固定的子宫平滑肌瘤组织块进行石蜡包埋，使用Leica组织切片机进行切片，组织厚度为4μm。
(2) 脱蜡与水化：分析纯二甲苯10min3次，无水乙醇1min3次，95%乙醇1min，85%乙醇1min，75%乙醇1min，去离子水浸泡2min3次。
(3) 修复抗原：加入抗原修复液高压锅高压热修复3min，待高压锅温度降至约90℃时，打开高压锅，取出切片，然后自然冷却至室温，去离子水浸泡2min3次。
(4) 灭活：使用3%过氧化氢灭活组织内源性过氧化物酶，室温静置15min，去离子水浸泡2min3次。
(5) 用免疫组化笔在组织外围画框，0.1% PBST洗涤2min1次。
(6) 孵育一抗：加入稀释后的杂交瘤细胞株OTI3E8分泌的抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体200μl置于湿盒中，37℃孵育60min,用0.1% PBST洗涤2min3次。
(7) 孵育二抗：加入二抗超敏酶标山羊抗小鼠/兔IgG聚合物100μl，37℃孵育30min,用0.1% PBST洗涤2min3次。
(8) DAB显色：加入120μl DAB显色液，室温静置5min，自来水龙头水流下冲洗以终止显色，自来水漂洗3次。
(9) 苏木素复染、分化及返蓝：在苏木素溶液中静置12s，自来水漂洗3次终止显色，于1%盐酸乙醇溶液中分化，自来水漂洗3次以终止，放入刚煮沸的pH8.0的Tris-EDTA二钠溶液中返蓝，再放入室温的pH9.0的Tris-EDTA二钠溶液中数秒，自来水漂洗3次。显微镜下观察染色，若正常则结束并回收苏木素染液；若分化过了，则需重复上述步骤直至染色合格。
(10) 脱水和透明：75%乙醇1min，85%乙醇1min，95%乙醇1min，100%乙醇1min3次，二甲苯1min3次，中性树胶封片。
(11) 镜检，结果如图3所示。
图3中的虚线箭头指示为Caldesmon蛋白阴性表达的间质细胞，实线箭头指示为Caldesmon蛋白阳性表达的平滑肌细胞，结果显示Caldesmon蛋白在平滑肌上呈特异性细胞质表达。
实施例7 抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体为一抗的阑尾免疫组化检测
采用实施例5中的免疫组化检测试剂盒对阑尾组织进行检测，具体步骤同实施例6，结果如图4所示，图4中的虚线箭头1和2分别指示为Caldesmon蛋白阴性表达的淋巴细胞和腺上皮细胞，实线箭头指示为Caldesmon蛋白阳性表达的平滑肌细胞，说明在平滑肌细胞中Caldesmon蛋白呈特异性细胞质表达。
实施例8 抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体为一抗的肾脏免疫组化检测
采用实施例5中的免疫组化检测试剂盒对肾脏组织进行检测，具体步骤同实施例6，结果如图5所示，杂交瘤细胞OTI3E8分泌的抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体IHC法检测肾脏组织，实线箭头指示为Caldesmon蛋白阳性表达的血管平滑肌细胞，虚线箭头1和2分别指示为Caldesmon蛋白阴性表达的肾小管上皮细胞、间质细胞，说明在血管平滑肌中Caldesmon蛋白呈特异性细胞质表达。
实施例9 抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体为一抗的前列腺癌免疫组化检测
采用实施例5中的免疫组化检测试剂盒对前列腺癌组织进行检测，具体步骤同实施例6，结果如图6所示，杂交瘤细胞OTI3E8分泌的抗人Caldesmon蛋白单克隆抗体IHC法检测前列腺癌组织，实线箭头指示为Caldesmon蛋白阳性表达的平滑肌细胞，说明Caldesmon蛋白仅在平滑肌细胞中表达。
以上结果表明本申请所述的杂交瘤细胞OTI3E8分泌的抗人Caldesmon单克隆抗体具有很高的特异性，仅在平滑肌细胞呈现胞浆阳性，在淋巴细胞、上皮细胞等其他细胞上不表达，可以作为平滑肌细胞的特异性标志物，因此，杂交瘤细胞OTI3E8分泌的抗人Caldesmon单克隆抗体可用于免疫组织化学检测，用以鉴别与Caldesmon表达相关的肿瘤。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (10)

1.抗人钙调蛋白结合蛋白（Caldesmon）的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包含VL结构域，所述VL结构域包含SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的CDR-L1，SEQ ID NO.5所示氨基酸序列的CDR-L2和SEQ ID NO.6所示氨基酸序列的CDR-L3。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体还包含VH结构域，所述VH结构域包含SEQ ID NO.8所示氨基酸序列的CDR-H1，SEQ ID NO.9所示氨基酸序列的CDR-H2和SEQ ID NO.10所示氨基酸序列的CDR-H3。
3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述VL结构域包含如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，或包含SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列中任一个或多个氨基酸经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰得到的具有90％以上同源性的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述VH结构域包含如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，或包含SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列中任一个或多个氨基酸经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰得到的具有90％以上同源性的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由杂交瘤细胞株OTI3E8分泌产生，所述杂交瘤细胞株OTI3E8的保藏编号为CGMCC No.45716，2023年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理管理委员会普通微生物中心（CGMCC）。
6.一种能够分泌抗人钙调蛋白结合蛋白（Caldesmon）的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株为OTI3E8，其保藏编号为CGMCC No.45716，2023年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理管理委员会普通微生物中心（CGMCC）。
7.权利要求1-5任一所述的单克隆抗体在制备标记正常组织和病变组织中人钙调蛋白结合蛋白（Caldesmon）的免疫组化检测试剂盒中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述组织包含子宫平滑肌瘤、阑尾、肾脏和前列腺癌等组织。
9.一种人钙调蛋白结合蛋白（Caldesmon）的免疫组化检测试剂盒，其特征在于，所述免疫组化检测试剂盒包括一抗试剂，所述一抗试剂含有权利要求1-5任一所述的单克隆抗体。
10.根据权利要求9所述的免疫组化检测试剂盒，其特征在于，所述免疫组化检测试剂盒还包括抗原修复液、内源性过氧化物酶阻断剂、超敏二抗试剂、DAB底物缓冲液、DAB浓缩显色液、苏木素染色液。
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