CN117801108B - 抗人mdm2蛋白单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用 - Google Patents
抗人mdm2蛋白单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本申请涉及免疫球蛋白技术领域，具体涉及抗人MDM2蛋白单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用。本申请提供了一种抗人MDM2蛋白单克隆抗体，其由杂交瘤细胞株OTI22D6分泌产生，所述杂交瘤细胞株OTI22D6于2023年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理管理委员会普通微生物中心（CGMCC），其保藏编号为CGMCC No.45717。本申请提供的杂交瘤细胞株OTI22D6可以稳定分泌抗人MDM2蛋白单克隆抗体，该抗体能够与MDM2蛋白特异性结合，显著提高了MDM2蛋白免疫检测的特异性、准确性和可靠性，可适用于脂肪肉瘤MDM2蛋白的标记。
Description
技术领域
本申请涉及免疫球蛋白技术领域，具体涉及抗人MDM2蛋白单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用。
背景技术
双微体同源基因2(murine double minute 2)是1992年克隆成功的新基因，最初是从一个含有双微体(murine double minute，MDM)的自发转化的BALB/3T3DM细胞中克隆出来的一个高度扩增的基因，后在人体正常组织器官中观察到其表达。MDM2具有癌基因活性，编码一种锌指蛋白可与P53蛋白结合，高表达会抑制p53介导的转录活性和阻止p53诱导凋亡的作用，引起肿瘤发生，MDM2蛋白本身还是一种E3连接酶，可以标记P53使其被蛋白酶体降解。人体许多肿瘤中都存在MDM2基因的扩增表达，且表达程度往往与肿瘤的临床分级、病理分期、是否转移有关。
根据2013年世界卫生组织软组织肿瘤组织学分类，脂肪肉瘤可分为高分化脂肪肉瘤(well differentiated liposarcoma，WDL)、去分化脂肪肉瘤(dedifferentiatedliposarcoma，DDL)、黏液性脂肪肉瘤(myxoid liposarcoma，ML)和多形性脂肪肉瘤(leomorphic liposarcoma，PL)4个亚型。WDL和DDL的细胞遗传学特征来自于其12号染色体长臂的异常扩增。12号染色体包含很多重要的基因，其中MDM2，CDK4，HMGA2等已证实在WDL中起到致恶变作用。MDM2和CDK4基因常常在WDL和DDL中共同扩增，但在良性脂肪肿瘤却不扩增，因此二者联合用于脂肪肉瘤的诊断与鉴别诊断。目前国内外有多款针对MDM2-p53通路的拮抗剂在研发，所以开发识别MDM2蛋白的高特异性、高灵敏度的单克隆抗体用于脂肪肉瘤等多种肿瘤的鉴别诊断至关重要。
发明内容
有鉴于此，本申请提供了一种抗人MDM2蛋白单克隆抗体、能够分泌所述抗人MDM2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，以及该抗人MDM2蛋白单克隆抗体和杂交瘤细胞株的应用。
第一方面，本申请提供了抗人MDM2蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含LCDR1-3，所述LCDR1包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含如SEQ IDNO:6所示的氨基酸序列；所述重链可变区包含HCDR1-3，所述HCDR1包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，HCDR3包含如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
进一步地，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列中任一个或多个氨基酸经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰得到的具有85％以上同源性的氨基酸序列，优选地，具有86%、88%、90%、92%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同源性的氨基酸序列。
进一步地，轻链可变区全长为109个氨基酸，其FR的4个结构域氨基酸数分别为26、17、36和11，LCDR的3个结构域氨基酸数分别为11、3和5，LCDR1、LCDR2和LCDR3的区域相应地分别为27aa-37aa，55aa-57aa和94aa-98aa，其氨基酸序列分别：QSLLDSDGRTY（SEQ IDNO.4）、LAS（SEQ ID NO.5）、WQGTH（SEQ ID NO.6）。
进一步地，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，或SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列中任一个或多个氨基酸经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰得到的具有85％以上同源性的氨基酸序列，优选地，具有86%、88%、90%、92%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同源性的氨基酸序列。
进一步地，重链可变区全长为111个氨基酸，其FR的4个结构域氨基酸数分别为25、17、38和11，HCDR的3个结构域氨基酸数分别为8、8和4，HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为26aa-33aa，51aa-58aa和97aa-100aa，其氨基酸序列分别为：GYTFTTYT（SEQ ID NO.8）、IFPRNGTI（SEQ ID NO.9）、ASDD（SEQ ID NO.10）。
进一步地，所述单克隆抗体由杂交瘤细胞株OTI22D6分泌产生，所述杂交瘤细胞株OTI22D6的保藏编号为CGMCC No.45717，2023年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
第二方面，本申请还提供了一种分离的多核苷酸，编码本申请第一方面中任一所述的单克隆抗体。
第三方面，本申请还提供了一种能够分泌抗人MDM2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株为OTI22D6，其保藏编号为CGMCC No.45717，2023年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
第四方面，本申请还提供了第一方面所述的单克隆抗体在制备人MDM2蛋白或脂肪肉瘤细胞的免疫组织化学检测试剂盒中的应用。
第五方面，本申请还提供了一种人MDM2蛋白的免疫组织化学检测试剂盒，所述免疫组织化学检测试剂盒包括一抗试剂，所述一抗试剂含有本申请第一方面所述的单克隆抗体。
进一步地，所述试剂盒还包括抗原修复液、内源性过氧化物酶阻断剂、超敏二抗试剂、DAB底物缓冲液、DAB浓缩显色液、苏木素染色液；优选地，所述二抗试剂为超敏酶标山羊抗小鼠/兔IgG聚合物。
保藏信息
用于保藏的杂交瘤细胞株：鼠抗人MDM2单克隆杂交瘤细胞株OTI22D6；
保藏编号：CGMCC No.45717
保藏日期：2023年9月6日；
保藏单位：中国微生物菌种保藏管理管理委员会普通微生物中心（CGMCC）；
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
相对于现有技术而言，本申请提供的抗人MDM2蛋白单克隆抗体，能够与人MDM2蛋白特异性结合，显著提高了MDM2蛋白免疫检测的特异性、准确性和可靠性；同时，提供的杂交瘤细胞株OTI22D6也可稳定分泌抗人MDM2蛋白单克隆抗体。其次，采用本申请的抗人MDM2蛋白单克隆抗体及试剂盒，以IHC法检测脂肪肉瘤，可以明显检测到癌细胞中表达MDM2蛋白，说明本申请的抗人MDM2蛋白单克隆抗体可以很好的应用于脂肪肉瘤的免疫组织化学检测，同时还可以用于鉴别与MDM2蛋白表达相关的肿瘤组织。
附图说明
为了更清楚地说明本申请具体实施方式，下面将对具体实施方式描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为实施例2重组MDM2蛋白Western blot检测结果图，以anti-HIS抗体检测重组MDM2蛋白在E.coli细胞中的表达，其中泳道L为转染空载体的E.coli细胞裂解液为抗原的检测结果、泳道R为转染pET23a-rMDM2质粒的E.coli细胞裂解液为抗原的检测结果。
图2为实施例2 MDM2蛋白SDS-PAGE结果图，用镍亲和层析柱纯化重组MDM2蛋白，纯化后的蛋白通过SDS-PAGE电泳及考马斯亮蓝染色。
图3为实施例6杂交瘤细胞株OTI22D6分泌的单克隆抗体IHC检测脂肪肉瘤的结果示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本申请。应理解，这些实施例仅用于说明本申请而不用于限制本申请的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件、实验室手册中所述的条件或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1 MDM2蛋白重组表达质粒的构建
从Genebank中选调MDM2基因NM_002392，根据MDM2的氨基酸序列特征，设计MDM2的第119-438位氨基酸片段为免疫原（其对应的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示），设计引物，基因两侧分别引入限制性内切酶位点SgfI和MluI，插入表达载体pET23a-N-His，构建重组表达质粒pET23a-rMDM2。
实施例2 重组MDM2蛋白的表达与纯化
(1) 转化E.coli细胞：将100μl感受态细胞置于冰上融化后加入重组质粒DNA轻混匀，冰浴30min后42℃热激90sec，然后将其继续冰浴1-2min。在超净台内加入500μl新鲜无抗LB培养基，于37℃摇床孵育45min后取适量菌液均匀涂布于含抗生素的平板上，将培养皿倒置于37℃恒温培养箱中培养过夜。
(2) 裂解细胞：挑取单克隆于新鲜培养基中，37℃、200rpm培养至OD值达到0.4~0.6时加入IPTG（终浓度1mM）诱导培养7h。离心收集菌体，然后用裂解缓冲液重悬菌体，超声破碎20min后于4℃下12000rpm离心20min，收集上清。取少量上清蛋白用anti-His抗体做WB鉴定，见图1。
由图1结果可见，转染pET23a-rMDM2质粒的E.coli细胞裂解液位于R泳道，在60kD处有明显的特异条带，而转化空载体的对照裂解液泳道1中则没有相应大小的条带，表明细胞特异表达了重组MDM2蛋白。
(3) 镍亲和层析柱纯化：用缓冲液平衡镍柱，将上清用0.45μm 滤膜过滤后上样并收集流出，用缓冲液淋洗去除未结合的蛋白，最后用含不同浓度咪唑的洗脱液洗脱，分别收集后，将符合要求的洗脱蛋白合并后加入10%甘油，纯化后的重组MDM2蛋白用SDS-PAGE电泳鉴定，见图2。
由图2结果可见，纯化的蛋白在SDS-PAGE电泳胶图的60kD处有明显的特异条带，表明已获得了纯度较好的重组MDM2蛋白。
实施例3 OTI22D6分泌抗人MDM2蛋白单克隆抗体的制备与筛选
根据标准方法用纯化的重组MDM2蛋白（以下简称MDM2抗原）对BALB/c小鼠（北京维通利华实验动物技术有限公司）进行免疫。具体方法如下：
(1) 动物免疫：经过纯化的MDM2抗原以完全弗氏佐剂乳化，采用皮下或腹腔注射方法免疫8周龄BALB/c小鼠，免疫剂量为60μg/只，间隔两周后进行第二次免疫，以不完全弗氏佐剂乳化，免疫剂量为30μg/只。免疫两次后取尾血以ELISA法梯度稀释测定血清效价；根据结果确定是否加强免疫，选取抗体效价最高的小鼠进行细胞融合。
(2) 细胞融合：骨髓瘤细胞采用BALB/c来源的sp2/0，融合时处于对数生长期；取已免疫小鼠脾脏，制成淋巴细胞单细胞悬液；小鼠脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞以1:7混合，滴加37℃预热的50% PEG（pH 8.0）1mL，加入不完全培养基及终止液，离心弃上清后加入HAT培养基悬浮混匀，MC定容到50mL，分装到3.5cm培养皿中，放于湿盒中，置于37℃、5% CO2恒温培养箱中进行培养。
(3) 筛选和克隆：融合9天挑选杂交瘤细胞克隆，使用纯化的重组MDM2蛋白进行ELISA测试。标记细胞株号。对阳性孔细胞进行有限稀释，每次有限稀释后6天测定ELISA值，挑取OD280阳性值较高的单克隆孔进行有限稀释，直至ELISA测定96孔板全板结果为阳性。挑取阳性值高的单克隆定株，其对应融合板细胞株为OTI22D6。
(4) 细胞上清单抗的制备与纯化：将杂交瘤细胞株OTI22D6用含15%血清的DMEM培养基于10cm培养皿中培养，扩培至约4107个细胞时，800rpm 离心5min，弃上清并将细胞转移到2L转瓶中，加入无血清培养基，使细胞密度约为3105个/ml。继续培养1~2周后，当细胞死亡率达到60%时（此时细胞密度大概为1-2106个/ml），收取细胞悬液6000 rpm高速离心20min，取上清，亲和层析法进行上清纯化，据抗体亚型选择相应柱料进行纯化（亚型为IgG1，采用protein G柱料进行纯化）。对纯化后的抗人MDM2蛋白单克隆抗体浓度测定，冻干和分装（100 μg/管），最后保存在-20℃。
实施例4 抗人MDM2蛋白单克隆抗体可变区基因与氨基酸序列分析
从Takara Bio USA公司采购SMARTer®RACE 5’/3’试剂盒，采用5’RACE（RapidAmplification of cDNA Ends，快速扩增cDNA末端）技术扩增杂交瘤细胞功能性抗体的可变区轻链与重链基因序列。具体实验过程参见Takara Bio USA公司SMARTer®RACE 5’/3’Kit使用者手册。
根据所述的抗体为IgG1亚型，设计针对其Ig和Kappa恒定区3’端的特异性基因引物pRace-H-GSP和pRace-K-GSP，引物序列如下：
pRace-H-GSP：5'-CATCDGTCTATCCACTGGCCCCTG-3'（SEQ ID NO:11）
pRace-K-GSP：5'-CTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTT-3'（SEQ ID NO:12）。
从杂交瘤细胞株OTI22D6中提取mRNA，逆转录为cDNA，RACE扩增抗人MDM2蛋白单克隆抗体的重链和轻链的DNA片段。分别将扩增的轻链与重链通过酶切连于克隆载体PUC119，通过蓝白斑挑取阳性克隆，纯化阳性质粒进行测序，采用测序仪ABI 3730，测序引物为通用引物M13F和M13R。
M13F: 5'-TGTAAAACGACGGCCAGT-3'（SEQ ID NO:13） M13R: 5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3'（SEQ ID NO:14）
利用互联网，在http://www.imgt.org上使用IMGT/V-QUEST分析软件，分别对抗人MDM2蛋白单克隆抗体的轻链与重链的核苷酸序列的测序结果进行数据分析，得到抗人MDM2蛋白单克隆抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
轻链可变区全长为109个氨基酸，其FR的4个结构域氨基酸数分别为26、17、36和11，LCDR的3个结构域氨基酸数分别为11、3和5，LCDR1、LCDR2和LCDR3的区域相应地分别为27aa-37aa，55aa-57aa和94aa-98aa，其氨基酸序列分别：QSLLDSDGRTY（SEQ ID NO.4）、LAS（SEQ ID NO.5）、WQGTH（SEQ ID NO.6）。
重链可变区全长为111个氨基酸，其FR的4个结构域氨基酸数分别为25、17、38和11，HCDR的3个结构域氨基酸数分别为8、8和4，HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为26aa-33aa，51aa-58aa和97aa-100aa，其氨基酸序列分别为：GYTFTTYT（SEQ ID NO.8）、IFPRNGTI（SEQID NO.9）、ASDD（SEQ ID NO.10）。
实施例5 含有抗人MDM2蛋白单克隆抗体的免疫组织化学检测试剂盒
一种含有抗人MDM2蛋白单克隆抗体的免疫组织化学检测试剂盒，包括抗原修复液[1mM EDTA，10mM Tris buffer（pH8.0）]，实施例3制备纯化得到的抗人MDM2蛋白单克隆抗体（0.7μg/ml）、内源性过氧化物酶阻断剂（3% 过氧化氢）、超敏酶标山羊抗小鼠/兔IgG聚合物、DAB显色液、苏木素染色液。
实施例6 抗人MDM2蛋白单克隆抗体为一抗的免疫组织化学检测
采用实施例5中的免疫组织化学检测试剂盒进行脂肪肉瘤组织的检测，具体步骤如下：
(1) 取福尔马林固定的脂肪肉瘤组织块进行石蜡包埋，使用Leica组织切片机进行切片，组织厚度为4μm。
(2) 脱蜡与水化：分析纯二甲苯10min3次，无水乙醇1min3次，95%乙醇1min，85%乙醇1min，75%乙醇1min，去离子水浸泡2min3次。
(3) 修复抗原：加入抗原修复液高压锅高压热修复3min，待高压锅温度降至约90℃时，打开高压锅，取出切片，然后自然冷却至室温，去离子水浸泡2min3次。
(4) 灭活：使用3%过氧化氢灭活组织内源性过氧化物酶，室温静置15min，去离子水浸泡2min3次。
(5) 用免疫组织化学笔在组织外围画框，0.1% PBST洗涤2min1次。
(6) 孵育一抗：加入杂交瘤细胞株OTI22D6分泌的抗人MDM2蛋白单克隆抗体（0.7μg/ml）200μl置于湿盒中，37℃孵育60min。用0.1% PBST洗涤2min3次。
(7) 孵育二抗：加入二抗超敏酶标山羊抗小鼠/兔IgG聚合物100μl，37℃孵育30min。用0.1% PBST洗涤2min3次。
(8) DAB显色：加入120μl DAB显色液，室温静置5min，自来水龙头水流下冲洗以终止显色，自来水漂洗3次。
(9) 苏木素复染、分化及返蓝：在苏木素溶液中静置10-12s，自来水漂洗3次终止显色，于1%盐酸乙醇溶液中分化，自来水漂洗3次以终止，放入刚煮沸的pH8.0的Tris-EDTA二钠溶液中返蓝，再放入室温的pH9.0的Tris-EDTA二钠溶液中数秒，自来水漂洗3次。显微镜下观察染色，若正常则结束并回收苏木素染液；若分化过了，则需重复上述步骤直至染色合格。
(10) 脱水和透明：75%乙醇1min，85%乙醇1min，95%乙醇1min，100%乙醇1min3次，二甲苯1min3次，中性树胶封片。
(11) 镜检，如图3所示。
结果显示，杂交瘤细胞OTI22D6分泌的抗人MDM2蛋白单克隆抗体以IHC法检测脂肪肉瘤，结果显示癌细胞中表达MDM2蛋白，图3中星形标记的肿瘤细胞的细胞核呈现棕色的（仅为示例），显示阳性，表明肿瘤细胞表达了MDM2蛋白，可作为内对照的血管内皮和浸润的炎性细胞的细胞核极弱阳性或阴性。
以上结果表明本申请所述的杂交瘤细胞株OTI22D6分泌的抗人MDM2蛋白单克隆抗体具有很高的特异性，在脂肪肉瘤中呈现阳性，作为内对照的血管内皮等细胞呈现弱阳性或阴性。因此，杂交瘤细胞株OTI22D6分泌的抗MDM2单克隆抗体可用于免疫组织化学检测，用以鉴别与MDM2表达相关的肿瘤。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (8)
1.抗人MDM2蛋白的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包含LCDR1-3，所述LCDR1的氨基酸序列为SEQ ID NO:4所示，所述LCDR2的氨基酸序列为LAS，所述LCDR3的氨基酸序列为SEQ ID NO:6所示；所述重链可变区包含HCDR1-3，所述HCDR1的氨基酸序列为SEQ ID NO:8所示，HCDR2的氨基酸序列为SEQ IDNO:9所示，HCDR3的氨基酸序列为SEQ ID NO:10所示。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，或包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列中任一个或多个氨基酸经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰得到的具有85％以上同源性的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，或包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列中任一个或多个氨基酸经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰得到的具有85％以上同源性的氨基酸序列。
4.一种分离的多核苷酸，其特征在于，编码权利要求1-3中任一所述的单克隆抗体。
5.一种能够分泌抗人MDM2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株为OTI22D6，其保藏编号为CGMCC No.45717，2023年9月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理管理委员会普通微生物中心（CGMCC）。
6.权利要求1-3任一所述的单克隆抗体在制备人MDM2蛋白或脂肪肉瘤细胞的免疫组织化学检测试剂盒中的应用。
7.一种人MDM2蛋白的免疫组织化学检测试剂盒，其特征在于，所述免疫组织化学检测试剂盒包括一抗试剂，所述一抗试剂含有权利要求1-3任一所述的单克隆抗体。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括抗原修复液、内源性过氧化物酶阻断剂、超敏二抗试剂、DAB底物缓冲液、DAB浓缩显色液、苏木素染色液。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104640880A (zh) * | 2012-09-19 | 2015-05-20 | 先天制药公司 | Kir3dl2结合剂 |
| CN106714831A (zh) * | 2014-04-21 | 2017-05-24 | 艾伯维施特姆森特克斯有限责任公司 | 新的抗‑rnf43抗体和使用方法 |
| CN110835372A (zh) * | 2019-11-06 | 2020-02-25 | 上海健康医学院 | 一种靶向Frizzled7单克隆抗体及其制备方法与应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021011834A1 (en) * | 2019-07-16 | 2021-01-21 | Silverback Therapeutics, Inc. | Alk5 inhibitors, conjugates, and uses thereof |
| US20210130473A1 (en) * | 2019-10-09 | 2021-05-06 | Silverback Therapeutics, Inc. | TGFßR1 INHIBITOR-ASGR ANTIBODY CONJUGATES AND USES THEREOF |
| EP4175673A1 (en) * | 2020-07-01 | 2023-05-10 | ARS Pharmaceuticals Inc. | Anti-asgr1 antibody conjugates and uses thereof |
-
2023
- 2023-12-06 CN CN202311665138.9A patent/CN117801108B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104640880A (zh) * | 2012-09-19 | 2015-05-20 | 先天制药公司 | Kir3dl2结合剂 |
| CN106714831A (zh) * | 2014-04-21 | 2017-05-24 | 艾伯维施特姆森特克斯有限责任公司 | 新的抗‑rnf43抗体和使用方法 |
| CN110835372A (zh) * | 2019-11-06 | 2020-02-25 | 上海健康医学院 | 一种靶向Frizzled7单克隆抗体及其制备方法与应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| "Hypophosphorylation of Mdm2 Augments p53 Stability";Christine Blattner 等;《Molecular and Cellular Biology》;20020930;第22卷(第17期);第6170-6182页 * |
| "MDM2与p16在喉癌中的表达及其临床病理意义";李大伟 等;《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》;20120920;第26卷(第18期);第802-805页 * |
| Bridges,A.等."IgG Vh region, partial [Mus musculus]".《genbank》.1996,ACCESSION AAB17405. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117801108A (zh) | 2024-04-02 |
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