CN117603853A - 一株科萨克氏菌scsio 43801及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株科萨克氏菌SCSIO 43801及应用。科萨克氏菌(Kosakonia pseudosacchari)SCSIO 43801于2022年7月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072，保藏编号为：CCTCC NO：M20221019。本发明所提供微生物菌剂在红树林生态修复中的应用，该微生物菌剂能够有效地促进红树植物的生长，以此加速红树林生态修复，具有良好的生态效应和应用潜力。

Description

一株科萨克氏菌SCSIO 43801及应用
技术领域：
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种红树促生微生物及其微胶囊菌剂制备和应用方法。
背景技术：
红树林生态系统是热带和亚热带沿海地区广泛分布的生态系统，具有为海洋生物提供庇护所和栖息地、碳汇功能、净化水质、固定底质、防风防浪保护海堤等生态功能。然而，由于人类活动和气候变化的影响，全球的红树林生态系统都面临严重的威胁。植物促生菌(PGPB，Plant growthpromotingbacteria)在红树林中被广泛报道，它们能够为植物提供营养物质和植物激素，从而促进植物的生长。Carmo等人利用以原油为唯一碳源的培养基从巴西红树对叶榄李、美洲红树、海榄雌的根际中分离得到57株菌株，其中60％的菌株具有固氮活性、84％具有产铁载体能力、51％具有溶磷能力、33％具有产吲哚乙酸(IAA，Indoleacetic acid)能力，表明了PGPB在红树林根际中大量存在(Carmo et al.,2011；Carmo FL,Santos HF,Martins EF,et al.,2011.Bacterial structure and characterizationofplant growth promoting and oil degrading bacteria from the rhizospheres ofmangrove plants.Journal of Microbiology,49:535-543)。
微胶囊技术是一种通过成膜材料将菌体细胞等活性物质包埋形成微胶囊颗粒的技术，制备获得的微胶囊也叫生物微胶囊。通过微胶囊技术制备的微生物菌剂能够有效地延长促生菌在环境中的存活期，提高菌株定殖率，从而提交菌剂促生作用的稳定性。目前微胶囊化菌剂的研究应用集中于陆地农业生态系统，而在海洋尤其是红树林生态系统中的应用相对较少。有研究通过将多株红树林原位PGPB混合后制备微胶囊化菌剂，并用盆栽实验验证了菌剂能够提高红树木榄幼苗的株茎、根部总N和总P含量等指标(张晓君,2014.红树林促生菌PGPB菌剂优化及应用技术研究,中南林业科技大学.)。因此，利用PGPB制备微生物菌剂在红树林生态修复中具有广阔的应用前景和巨大的应用潜力。本发明旨在通过利用从健康红树林生态系统原位分离获得的PGPB制备具有红树促生作用的微生物菌剂，并能够有效应用于红树林生态系统的修复工作，为红树林生态修复提供科学参考和数据支撑。
发明内容：
本发明的第一个目的是提供一株红树林来源高效的植物促生菌株科萨克氏菌(Kosakoniapseudosacchari)SCSIO 43801于2022年7月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072，保藏编号为：CCTCC NO：M20221019。
所述的科萨克氏菌SCSIO 43801分离于红树林沉积物，具有多种植物促生功能包括固氮、溶磷、产铁载体和产生物被膜能力，在植物促生和生态修复工作中有巨大的应用潜力。
本发明的第二个目的是提供一种红树植物促生微生物菌剂，其含有上述科萨克氏菌SCSIO 43801作为活性成分。该微生物菌剂具有有效活菌数高、保存稳定性强的特点，能够有效地促进红树的生长。
优选，所述的红树植物优选为桐花树(Aegiceras corniculatum)。
优选，所述的微生物菌剂是将萨克氏菌SCSIO 43801菌液和海藻酸钠溶液混匀，滴入氯化钙溶液固化后获得微生物菌剂。
优选，所述的科萨克氏菌SCSIO 43801菌液是通过LB液体培养基在28℃和180rpm条件下对菌株进行富集培养2天，常温4000rpm离心10min收集菌体沉淀，并用无菌生理盐水重悬和离心2次去除营养物质残留，最后用无氮液体培养基调节菌液OD600至1.5。
优选，所述的海藻酸钠溶液为分析纯的海藻酸钠溶解于去离子水制成。
优选，所述的氯化钙溶液为分析纯的氯化钙溶解于去离子水制成。
优选，所述的微生物菌剂通过以下方法制备而成：科萨克氏菌SCSIO 43801菌液以质量比1：3的比例和2.00％质量分数的海藻酸钠溶液混匀，滴入3.50％质量分数的氯化钙溶液中固化1小时后即得微生物菌剂。
所述的微生物菌剂具有良好的活菌释放能力，能够在22天以内稳定释放108CFU/g的有效活菌数。
所述的微生物菌剂具有良好的保存稳定性，在4℃冷藏条件下保存3个月后仍维持大于108CFU/g的有效活菌数。
所述的微生物菌剂能够有效促进红树植物的生根发芽和叶片生长，与对照组相比显著提高了添加66.7％的根鲜重。
所述的红树植物优选为桐花树(Aegiceras corniculatum)。
本发明所提供微生物菌剂在红树林生态修复中的应用，该微生物菌剂能够有效地促进红树植物的生长，以此加速红树林生态修复，具有良好的生态效应和应用潜力。
Kosakoniapseudosacchari SCSIO 43801于2022年7月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072，保藏编号为：CCTCC NO：M20221019。
附图说明：
图1是科萨克氏菌SCSIO 43801及其相似16S rDNA序列的系统发育进化树。
图2是科萨克氏菌SCSIO 43801及其相似nifH序列的系统发育进化树。
图3是科萨克氏菌SCSIO 43801在溶磷平板和铬天青平板上产生的透明圈。
图4是科萨克氏菌SCSIO 43801基因组中与植物促生功能相关的功能基因簇。
图5是本发明制备的空载微胶囊和微胶囊化微生物菌剂的表面形态的扫描电镜观察结果。
图6是本发明制备的微胶囊化微生物菌剂的活菌释放曲线。
图7是本发明制备的微胶囊化微生物菌剂的保存稳定性曲线。
具体实施方法：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：菌株SCSIO 43801的分离和鉴定
1、菌株SCSIO 43801的分离和鉴定
无氮固体培养基成分为：蔗糖5.0g，苹果酸1.0g，磷酸氢二钾0.1g，磷酸二氢钾0.4g，硫酸镁0.2g，氯化钠10.0g，钼酸钠0.002g，三氯化铁0.01g，去离子水1L，pH值7.0，加入1.8％的琼脂后湿热灭菌并倒平板。
本发明利用无氮固体培养基从红树林沉积物中分离获得菌株SCSIO43801。称取2g红树根际沉积物样品，用无菌海水进行梯度稀释至10-3、10-4、10-5，取0.2mL稀释液涂布到/>无氮固体培养基(蔗糖5.0g，苹果酸1.0g，磷酸氢二钾0.1g，磷酸二氢钾0.4g，硫酸镁0.2g，氯化钠10.0g，钼酸钠0.002g，三氯化铁0.01g，去离子水1L，pH值7.0，琼脂18g)，放置于28℃培养2周，待平板长出菌落后进一步分离纯化，获得菌株SCSIO43801。
对菌株SCSIO 43801进行初步的形态学观察，结果表明，该菌株属于革兰氏阴性菌，有鞭毛，在LB固体培养基上的菌落呈白色，表面光滑，不透明。通过OMEGA细菌DNA提取试剂盒提取菌株SCSIO 43801的基因组DNA，通过16S rDNA基因通用扩增引物27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492R(5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′)进行扩增。PCR的反应体系为：rTaq Premix 12.5μL，27F 0.2μmol·L-1，1492R 0.2μmol·L-1，模板DNA 1μL，用ddH2O补足反应体系至25μL；PCR反应条件为：94℃5min，94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸90s，共重复30个循环，72℃10min。扩增成功的产物委托测序公司进行测序，测序结果于NCBI数据库进行BLAST比对，结果显示最相似序列为Kosakonia pseudosacchari JM-387T，相似度为99.37％，表明菌株SCSIO 43801从属于Kosakonia属，并将其命名为K.pseudosacchari SCSIO 43801。基于科萨克氏菌SCSIO 43801及其相似的16S rDNA基因序列(SEQ ID NO.1)的系统进化树如图1。
按上述方法提取细菌的基因组DNA进行SMRT基因组测序，基于Pacbio测序平台完成，采用单分子PacBio和二代测序Illumina相结合的测序方式获得细菌基因组完成图。首先，使用Falcon对PacBio三代测序的测序数据进行基因组的从头组装，然后使用Pilon将从IIIumina平台测序获得的clean reads对三代测序数据进行校正，以提高组装质量，降低其数据错误率，确定最终的基因组序列。
科萨克氏菌(Kosakoniapseudosacchari)SCSIO 43801于2022年7月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072，保藏编号为：CCTCC NO：M 20221019。
2、科萨克氏菌SCSIO 43801的固氮功能
科萨克氏菌SCSIO 43801的固氮能力通过nifH基因和乙炔还原法进行检测。基于该菌株的基因组DNA，利用nifH引物polF(5’-TGCGAYCCSAAR GCBGACTC-3’)和polR(5’-ATSGCCATCATYTCRCCGGA-3’)进行扩增，反应体系为：rTaq Premix 12.5μL，polF 0.2μmol·L-1，polR 0.2μmol·L-1，BSA 1μL，模板DNA 1μL，用ddH2O补足反应体系至25μL；PCR反应条件为：95℃5min，95℃变性40s，55℃退火40s，72℃延伸40s，共重复30个循环，72℃10min。扩增成功后交由测序公司进行测序，测序结果(见SEQ ID NO.2)于BLAST数据库(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)进行序列比对，比对结果显示最相似的序列为菌株Kosakonia sacchariNN143E的nifH基因序列，相似度为99.09％。基于科萨克氏菌SCSIO43801及其相似的nifH基因序列的系统进化树如图2。
通过乙炔还原法(Dong JD,et al.,2008；Dong JD,Wang YS,Zhang YY,2008.Spatial and seasonal variations of Cyanobacteria and their nitrogenfixation rates in Sanya Bay,South China Sea,Scientia Marina,72:239-251)对科萨克氏菌SCSIO 43801进行固氮活性的检测。首先用LB液体培养基在28℃和180rpm条件下对菌株进行富集培养2天，常温4000rpm离心10min收集菌体沉淀，并用无菌生理盐水重悬和离心2次去除营养物质残留，最后用无氮液体培养基调节菌液OD600至1.5左右，吸取1mL上述菌液加入带有9mL的/>无氮液体培养基的气瓶中，加入10％体积的乙炔，密封后在28℃和180rpm条件下培养2天，设置3个重复，使用气相色谱仪检测气瓶顶空气体的乙烯含量，计算得到该菌株的固氮活性。结果显示，科萨克氏菌SCSIO 43801的固氮活性为40.91±2.56nmol C2H2·h-1·mL-1。
3、科萨克氏菌SCSIO 43801的溶磷功能
通过溶磷平板和钼锑抗比色法(鲍士旦,2000；鲍士旦,2000.土壤农化分析,北京:中国农业出版社)对科萨克氏菌SCSIO 43801进行溶磷活性的检测。改良选择性解有机磷培养基(PSM)的配方为：D-葡萄糖15g、氯化钠25g、硝酸铵5g、氯化钙2g、氯化钾0.5g、硫酸镁0.5g、硫酸亚铁0.01g、硫酸锰0.01g、植酸钠(单独灭菌)5g、去离子水1L、pH为7.0，加入1.8％的琼脂后湿热灭菌并倒平板即得到溶磷平板。结果如图3显示，科萨克氏菌SCSIO43801能够在溶磷平板上产生透明溶磷圈，表明该菌株具有溶磷潜力。
科萨克氏菌SCSIO 43801菌液是通过LB液体培养基在28℃和180rpm条件下对菌株进行富集培养2天，常温4000rpm离心10min收集菌体沉淀，并用无菌生理盐水重悬和离心2次去除营养物质残留，通过PSM培养基重悬并调节菌液的OD600至1.5左右。吸取2mL菌液加入18mL的PSM液体培养基中在28℃和180rpm条件下培养5天，设置3个重复，使用钼锑抗比色法检测培养液的可溶性磷含量并计算溶磷活性。结果显示，科萨克氏菌SCSIO 43801的溶磷活性为48.67±1.20mg·L-1·d-1。
4、科萨克氏菌SCSIO 43801的产铁载体功能
通过铬天青平板和CAS比色法(Bernhard and Neilands,1987；Bernhard,Neilands,1987.Universal Chemical Assay for the Detection and Determination ofSiderophores,Analytical Biochemistry,160:47-56)对科萨克氏菌SCSIO 43801进行产铁载体活性的检测。MKB培养基(Bernhard&Neilands,1987)配方为：酪蛋白5g、甘油15mL、磷酸氢二钾2.5g、硫酸镁0.2g、去离子水1L、pH值为7.2。结果如图3所示，科萨克氏菌SCSIO43801在铬天青平板上产生透明圈，表明该菌株具有产铁载体潜力。
按上述菌液制备方式，通过MKB培养基重悬并调节菌液的OD600至1.5左右，吸取2mL菌液加入18mL的MKB液体培养基并在28℃和180rpm条件下培养2天，设置3个重复，使用CAS比色法检测培养液的铁载体含量并计算产铁载体能力(SU)。结果显示，科萨克氏菌SCSIO43801的产铁载体能力为0.54±0.01。
5、科萨克氏菌SCSIO 43801的全基因组分析
基于Nr、KEGG、COG等数据库对科萨克氏菌SCSIO 43801的全基因组进行功能预测，发现基因组具有固氮、溶磷、产铁载体和产生物被膜的功能基因簇，基因簇结构如图4所示。结果从基因组水平验证了科萨克氏菌SCSIO 43801所具有的固氮、溶磷和产铁载体的植物促生功能，并发现该菌株的基因组所具有的产生物被膜功能基因簇，揭示了其产生物被膜的潜力。
实施例2：微胶囊化微生物菌剂的制备
1、微胶囊化微生物菌剂的壁材选择
表2微生物菌剂壁材信息
称取各按2.00％质量分数的海藻酸钠、果胶、卡拉胶溶于去离子水，搅拌均匀后进行121℃、1×105Pa的高温高压蒸汽灭菌20min备用。取适量菌液以质量比1:4的菌胶比与壁材溶液混匀，用注射器吸取后垂直于液面10cm处匀速滴1.50％CaCl2溶液中，静置固化1小时后过滤收集，用生理盐水冲洗2次以除去微胶囊颗粒上残留的CaCl2溶液，即得湿微胶囊颗粒。观察微胶囊颗粒的形态和机械强度，果胶和卡拉胶制成的微胶囊形态扁平、机械强度低、易破裂，不利于大规模的应用，而海藻酸钠制成的微胶囊呈圆形或椭圆形、机械强度高、不易破裂，因此选择海藻酸钠作为微生物菌剂制备的壁材。
3、微生物菌剂的制备方法
通过对海藻酸钠壁材浓度(质量分数1.00％、2.00％、3.00％、4.00％)、菌胶比(质量比1:4、1:6、1:8、1:10)、CaCl2溶液浓度(0.75％、1.50％、2.25％、3.00％)进行单因素实验，确定了微生物菌剂分别在2.00％海藻酸钠浓度、1:4的菌胶比、3.00％CaCl2溶液浓度的条件下具有更高的包埋率(微生物菌剂的有效活菌数/菌液的有效活菌数)。
基于上述的结果设计并进行正交实验，实验设计和结果如表3。结果表明，微胶囊化菌剂在海藻酸钠浓度为2.00％、菌胶比为1:3、固定剂浓度为3.50％时具有最佳的包埋率，包埋率达到了37.45％，有效活菌数为4.13×109CFU·g-1，达到了农用微生物菌剂国家标准(GB 20287-2006)中规定技术指标的有效活菌数(108CFU·g-1)。
表3微胶囊化微生物菌剂的正交实验设计和结果
对按上述制备方法制作的微生物菌剂和空载微胶囊进行了扫描电镜形态学观察，其放大倍数为1000倍和3000倍，结果如图5。结果表明，空载的微胶囊表面有大量褶皱，这可能是微胶囊经脱水干燥后所形成。微胶囊化微生物菌剂的表面则没有明显的凸起褶皱，而是附着大量的菌体细胞颗粒。
3、微生物菌剂的质量参数
称取5g按上述方法制备的微胶囊菌剂，加入到100mL灭菌人工海水中静置于室温，定期检测人工海水中的有效活菌数，绘制活菌释放能力曲线结果如图5。活菌释放能力结果表明，微胶囊化菌剂在22天内都具有较高的活菌释放能力，其活菌释放数均在108CFU·g-1左右。
将上述方法制备的微胶囊菌剂和液体菌剂(按实施例1方法)封口后分别放置保存于室温和4℃冷藏，并在0、30和90天检测菌剂的有效活菌数，比较微胶囊和液体菌剂的保存稳定性，结果如图6。菌剂的保存稳定性结果表明，微胶囊化菌剂在4℃冷藏30和90天后，其有效活菌数均明显高于常温保存(P<0.05)。不仅如此，微胶囊化菌剂在室温和4℃冷藏的稳定性均优于液体菌剂，其中微胶囊化菌剂在室温下保存90天和4℃冷藏30天后有效活菌数均显著高于液体菌剂(P<0.05)。
实施例3：微生物菌剂对红树桐花树生长的生态效应
1、实验材料和设计
实验材料为红树桐花树(Aegiceras corniculatum)胚轴，采集自广东省湛江市高桥红树林国家自然保护区(109.759°E,21.567°N)。首先将采集后胚轴用0.3％高锰酸钾溶液浸泡消毒2h，然后用去离子水洗净后，挑选健康、重量和大小相近的胚轴进行实验。实验用底质为清洗干净的河沙，将胚轴插入河沙。设置空白对照组和微胶囊化菌剂添加组，每组20个胚轴。培养体系使用10‰人工海水浇灌浸没约2cm高度，并定期补充去离子水维持液面高度。培养体系搭建完成后进行稳定适应1周，实验组添加上述制备的微生物菌剂，对照组添加生理盐水，添加的用量均为10t·ha-1。
培养过程中观察记录胚轴的发芽数、叶片数等形态学指标，培养90天后收集所有胚轴植株进行鲜重、干重等形态学指标的检测。培养期间胚轴的发芽数和叶片数如表4，培养90天后各形态学结果如表5所示。
实验结果表明，在20天时微胶囊化菌剂组的胚轴已经开始发芽和生长叶片，而对照组则是在30天时才开始发芽。在相同的培养时间内，微胶囊化菌剂组的发芽数和叶片数量都明显多于对照组，在培养90天后，微生物菌剂组的总发芽率为85％，总叶片数为30片，高于对照组的总发芽率50％和总叶片数12片。以上结果表明了微胶囊化菌剂对胚轴的发芽和叶片生长具有明显地促进作用。同样的，在培养90天后，微生物菌剂组的各形态学指标均高于对照组，其中，微生物菌剂对于红树桐花树的根具有明显的促生作用，显著地提高了66.7％的根鲜重(P＝0.039<0.05)。这些结果表明了微胶囊化菌剂中的科萨克氏菌SCSIO43801可能通过发挥其溶磷和产铁载体能力而显著地提高红树胚轴的生根能力，并促进根部吸收营养物质，进而促进胚轴发芽和叶片生长。
表4培养期间胚轴的发芽数和叶片数
表5培养90天后不同处理组的红树桐花树的形态学指标
注：表中“*”表示组间t检验结果具有显著差异(P<0.05)。
科萨克氏菌SCSIO 43801的16S rDNA序列(SEQ ID NO.1)
CGCAGCTACACATGCAAGTCGAACGGTAGCACAGAGAGCTTGCTCTCGGGTGACGAGT
GGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGAAACTGCCTGATGGAGGGGGATAACTACTGGAA
ACGGTAGCTAATACCGCATAACGTCGCAAGACCAAAGAGGGGGACCTTCGGGCCTCTTG
CCATCAGATGTGCCCAGATGGGATTAGCTAGTAGGTGGGGTAACGGCTCACCTAGGCGA
CGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAG
ACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGC
CATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGTACTTTCAGCGGGGAGGAAGG
CAGTACGGTTAATAACCGTGTTGATTGACGTTACCCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTC
CGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTA
AAGCGCACGCAGGCGGTCTGTCAAGTCGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAA
CTGCATCCGAAACTGGCAGGCTTGAGTCTCGTAGAGGGAGGTAGAATTCCAGGTGTAGC
GGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCTCCTGGACGAA
GACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTC
CACGCCGTAAACGATGTCTATTTGGAGGTTGTGCCCTTGAGGCGTGGCTTCCGGAGCTA
ACGCGTTAAATAGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGA
CGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTT
ACCTGGTCTTGACATCCACAGAACTTGCCAGAGATGGCTTGGTGCCTTCGGGAACTGTG
AGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGC
AACGAGCGCAACCCTTATCCTTTGTTGCCAGCGGTCCGGCCGGGAACTCAAAGGAGAC
TGCCAGTGATAAACTGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGAC
CAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGCATACAAAGAGAAGCGACCTCGCGAGAGCAA
GCGGACCTCATAAAGTGCGTCGTAGTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAG
TCGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGAATGCCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTA
CACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCAAAAGAAGTAGGTAGCTTAACCTTCG
GGAGGGCGCTACCACTTGAT
科萨克氏菌SCSIO 43801的nifH序列(SEQ ID NO.2)
CCGGAGCAAACGATGTAGATCTCCTGCGCTTTGTTTTCACGAATCGGCATGGCGAAACC
ACCGCATACCACGTCGCCCAGCACGTCGTAGAAAACAAAATCCAGATCCGGCACGTAAG
CGCCTTCTTCTTCGAGGAAGTTAATCGCGGTGATCACGCCACGACCGGCACAGCCCACA
CCTGGCTCCGGGCCACCGGATTCCGCGCAGCGCACGCCGCCGTAACCGATTTGCAGCAC
GTCTTCTAATTCCAGGTCTTCGACGGAGCCGACTTCGGCGGCCATCTCCATAATGGTGTT
CTGCGCTTTCGCATGCAGGATCAAACGCGTGGAGTC

Claims (10)

1.科萨克氏菌(Kosakoniapseudosacchari)SCSIO 43801，保藏编号为：CCTCC NO：M20221019。
2.权利要求1所述的科萨克氏菌SCSIO 43801在植物促生功能中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的促生功能是固氮、溶磷、产铁载体和产生物被膜能力。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的植物为桐花树(Aegicerascorniculatum)。
5.一种红树植物促生微生物菌剂，其特征在于，含有权利要求1所述的科萨克氏菌SCSIO 43801作为活性成分。
6.根据权利要求5所述的红树植物促生微生物菌剂，其特征在于，所述的微生物菌剂是将萨克氏菌SCSIO 43801菌液和海藻酸钠溶液混匀，滴入氯化钙溶液固化后获得微生物菌剂。
7.根据权利要求6所述的红树植物促生微生物菌剂，其特征在于，所述的科萨克氏菌SCSIO 43801菌液是通过LB液体培养基在28℃和180rpm条件下对菌株进行富集培养2天，常温4000rpm离心10min收集菌体沉淀，并用无菌生理盐水重悬和离心2次去除营养物质残留，最后用无氮液体培养基调节菌液OD600至1.5。
8.根据权利要求6所述的红树植物促生微生物菌剂，其特征在于，所述的海藻酸钠溶液为分析纯的海藻酸钠溶解于去离子水制成；所述的氯化钙溶液为分析纯的氯化钙溶解于去离子水制成。
9.根据权利要求6所述的红树植物促生微生物菌剂，其特征在于，所述的微生物菌剂通过以下方法制备而成：科萨克氏菌SCSIO 43801菌液以质量比1：3的比例和2.00％质量分数的海藻酸钠溶液混匀，滴入3.50％质量分数的氯化钙溶液中固化1小时后即得微生物菌剂。
10.根据权利要求5所述的红树植物促生微生物菌剂在红树林生态修复中的应用。
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