CN117582491A - 流感疫苗组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

流感疫苗组合物及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN117582491A
CN117582491A CN202410069981.9A CN202410069981A CN117582491A CN 117582491 A CN117582491 A CN 117582491A CN 202410069981 A CN202410069981 A CN 202410069981A CN 117582491 A CN117582491 A CN 117582491A
Authority
CN
China
Prior art keywords
component
influenza
oil
adjuvant
vaccine composition
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202410069981.9A
Other languages
English (en)
Inventor
姚文荣
袁楚晓
王维龙
付宏洋
杨毅
李欢
李超
吴双
罗士强
郝怡环
洪坤学
刘勇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Abzymo Biosciences Co ltd
Jiangsu Ruike Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Abzymo Biosciences Co ltd
Jiangsu Ruike Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abzymo Biosciences Co ltd, Jiangsu Ruike Biotechnology Co ltd filed Critical Abzymo Biosciences Co ltd
Priority to CN202410069981.9A priority Critical patent/CN117582491A/zh
Publication of CN117582491A publication Critical patent/CN117582491A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明属于生物医药工程领域，具体涉及一种流感疫苗组合物，其包含独立包装的第一组分和第二组分，所述第一组分包含源自H1N1、H3N2、B/Victoria和B/Yamagata流感病毒株的流感病毒抗原性物质，所述第二组分包含水包油佐剂，所述水包油佐剂由水相和油相经乳化、均质制成，其中所述水相为包含吐温80的缓冲溶液，所述油相包含角鲨烯和α‑生育酚。本发明的疫苗组合物在制备时不需要将两种组分配制为成品制剂，两种组分可以独立包装，从而可以避免抗原与乳剂佐剂之间的相互影响，达到更加高效、更加安全、同时更加稳定的技术效果，并且可以降低免疫剂量，有效改善免疫应答，快速刺激抗体的产生。

Description

流感疫苗组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医药工程领域，特别涉及一种流感疫苗组合物及其制备方法和其在免疫治疗及预防领域的应用。
背景技术
流感是一种常见的病毒性传染疾病，对人类的身体健康构成较大威胁。预防流感的有效手段之一是接种流感疫苗。已有的流感疫苗主要包括流感病毒灭活疫苗、减毒活疫苗和亚单位疫苗。由于流感病毒的变异性很强，灭活疫苗和减毒活疫苗的疫苗株需要随流感毒株抗原性变异而及时更换，否则免疫效果就无保证，甚至无效。流感病毒亚单位疫苗是利用基因重组的病毒表面抗原诱导免疫防护，病毒表面抗原也需要随流感毒株抗原性变异而及时更换。目前，比较常见的方法是采用多价疫苗以增强免疫防护。
尽管如此，接种流感疫苗的防护效果仍不尽如人意。因此，研究人员试图通过添加佐剂来提高免疫效果。最常见的佐剂是铝盐佐剂，其通过抗原储库效应和诱发炎症等免疫刺激效应发挥增强免疫应答的作用。然而，铝盐佐剂也存在着一系列局限性，例如无法诱导细胞免疫应答，抗原提呈效果不理想、免疫应答产生时间滞后，易引发副反应等。
乳剂型佐剂（包括水包油乳剂、油包水乳剂等）是新型佐剂的一个重要分支，乳剂可联合多种弱抗原（重组蛋白、多肽等）使用，并诱发高滴度的抗原特异性抗体。乳剂型佐剂通常包含油相成分、水相成分和乳化剂。其中，水包油乳剂以水相成分为主，人体耐受性较高，且与多数疫苗抗原的相容性较好。
尽管乳剂型佐剂和铝佐剂都已经被广泛使用，但迄今为止，仍然需要有新的免疫制剂和免疫方法，以提供更加安全有效的，方便配制的，成本低廉的，能够快速诱导高效免疫应答的疫苗制剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种安全性和免疫刺激活性好，方便配制的，成本低廉的，能够快速诱导高效免疫应答的流感疫苗组合物。同时本发明提供简便的制备方法和具有广阔前景的应用。
为了达到上述目的，本发明一方面提供一种流感疫苗组合物，包含独立包装的第一组分和第二组分，所述第一组分包含源自H1N1、H3N2、B/Victoria和B/Yamagata流感病毒株的流感病毒抗原性物质，所述第二组分包含水包油佐剂，所述水包油佐剂由水相和油相经乳化、均质制成，其中所述水相为包含吐温80的缓冲溶液，所述油相包含角鲨烯和α-生育酚。
在一些实施方式中，所述流感病毒抗原性物质为减毒活疫苗、灭活疫苗、类毒素疫苗、亚单位疫苗、载体疫苗、基因工程疫苗或核酸疫苗成品制剂。在本发明优选的实施方式中，所述第一组分为灭活流感疫苗成品制剂。
在一些实施方式中，所述流感病毒抗原性物质为流感病毒裂解疫苗，每种型别的流感病毒包含5-20μg血凝素，例如6μg、7μg、8μg、9μg、10μg、11μg、12μg、13μg、14μg、15μg、16μg、17μg、18μg、19μg等。
在一些实施方式中，所述流感病毒裂解疫苗包含15μg 的H1N1血凝素，15μg 的H3N2血凝素，15μg 的B/Victoria血凝素和15μg 的B/Yamagata血凝素。
在一些实施方式中，所述流感病毒裂解疫苗包含7.5μg的H1N1血凝素，7.5μg的H3N2血凝素，7.5μg的B/Victoria血凝素和7.5μg的B/Yamagata血凝素。
在一些实施方式中，所述第一组分不包含表面活性剂。
在一些实施方式中，所述水相中的缓冲溶液选自磷酸盐缓冲溶液、柠檬酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、醋酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲溶液或柠檬酸-磷酸缓冲液。
在一些实施方式中，所述水相中的缓冲溶液为醋酸盐缓冲液，所述醋酸盐缓冲液包含10-20 mg/ml的醋酸钠和0.8-1.5mg/ml的醋酸，优选地，所述醋酸盐缓冲液包含14.93mg/ml的醋酸钠和1.08mg/ml的醋酸。
在一些实施方式中，所述水相的pH为5.65±0.5。
在一些实施方式中，所述水相包含15-30mg/ml的吐温80，优选地，所述水相包含21.6mg/ml的吐温80。
在一些实施方式中，所述油相中角鲨烯与α-生育酚的重量比为0.8-1，例如0.85-0.95，优选为0.9。
在一些实施方式中，所述水包油佐剂的粒径为150-170nm，优选为160nm。
在一些实施方式中，所述水包油佐剂的体积为0.2-1ml，优选为0.5ml。
在一些实施方式中，所述水包油佐剂包含1-15mg角鲨烯、1-15mg α-生育酚和0.5-10mg吐温80。
在一些实施方式中，所述水包油佐剂包含10.69mg角鲨烯、11.86mg α-生育酚和4.86mg吐温80。
在一些实施方式中，所述第一组分是独立包装且不包含表面活性剂的流感病毒抗原，所述第二组分是水包油乳剂佐剂，包含10.69mg角鲨烯、11.86mg α-生育酚和4.86mg吐温80。
在一些实施方式中，第一组分是独立包装且不包含表面活性剂的四价流感病毒裂解疫苗，包括15μg 的H1N1血凝素，15μg 的H3N2血凝素，15μg 的B/Victoria血凝素和15μg的B/Yamagata血凝素，所述第二组分是水包油乳剂佐剂，包含1-10.69mg角鲨烯、1-11.86mgα-生育酚和0.5-4.86mg吐温80。
在一些实施方式中，第一组分是独立包装且不包含表面活性剂的四价流感病毒裂解疫苗，包括7.5μg 的H1N1血凝素，7.5μg 的H3N2血凝素，7.5μg 的B/Victoria血凝素和7.5μg 的B/Yamagata血凝素，所述第二组分是水包油乳剂佐剂，包含10.69mg角鲨烯、11.86mg α-生育酚和4.86mg吐温80。
在一些实施方式中，第一组分是独立包装且不包含表面活性剂的四价流感病毒裂解疫苗，包括7.5μg 的H1N1血凝素，7.5μg 的H3N2血凝素，7.5μg 的B/Victoria血凝素和7.5μg 的B/Yamagata血凝素，所述第二组分是水包油乳剂佐剂，包含5.35mg角鲨烯、5.93mgα-生育酚和2.43mg吐温80。
在一些实施方式中，所述第一组分还进一步包含铝佐剂。
在一些实施方式中，所述铝佐剂选自氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝和明矾中的至少一种。
疫苗用铝佐剂主要有氢氧化铝、磷酸铝和明矾三种，而通常使用的铝佐剂是指氢氧化铝佐剂。疫苗用氢氧化铝佐剂通常是通过向铝盐溶液中加入碱液，生成不带电荷的中性Al(H2O)3(OH)3相互聚集而形成沉淀。聚集物还会通过羟桥键发生双分子和多分子缩聚，形成大分子。铝盐加碱得到蓬松的絮状氢氧化铝沉淀，由于含有较多的配位水，氢氧化铝沉淀松散的聚集在一起呈纤维状结晶形态，有时也被称之为晶态偏氢氧化铝AlO(OH)。其作用机制主要是“储存库效应”和“免疫刺激效应”。氢氧化铝是两性化合物，等电点（isoelectric point, pI）为11.4，在与人机体pH=7.4的间质液pH相近的缓冲液中其带正电荷，能很好的吸附酸性蛋白抗原。进入机体后，首先是吸附在表面的疫苗抗原激发免疫应答，随后其内部崩解出来的抗原释放，延长了作用时间，从而延长疫苗抗原在体内的滞留时间，起到“储存库”作用。一般氢氧化铝粒径大小1-10μm，不同批次的氢氧化铝佐剂在粒径上存在一定的差别。
铝佐剂吸附抗原的主要机制包括静电力、疏水作用以及配体交换。由疏水作用产生的吸附，会受到因蛋白质折叠而减少暴露在水环境中疏水区域的限制。铝佐剂的羟基与抗原的磷酸基团发生配体互换产生了吸附作用。磷酸基团对铝原子的连接比羟基更强，从而替代了羟基。其中，以配体交换占主导作用。
在一些实施方式中，所述第一组分中铝佐剂的含量为10-1000μg，优选为50-800μg，更优选100-600μg，例如200μg、300μg、400μg或500μg。
在一些实施方式中，所述第一组分是冻干制剂、溶液或混悬液。
在一些实施方式中，所述第一组分的溶液或混悬液的体积为0.2-1ml，优选为0.5ml。
在一些实施方式中，所述水包油佐剂进一步包含3D-MPL、皂苷、poly I:C和CpG中的一种或多种。所述皂苷选自QS-7、QS-17、QS-18、QS-21中的一种或多种，优选为QS-21。在一些实施方式中，所述水包油佐剂优选进一步包含3D-MPL。
3D-MPL在化学上是具有3、4、5或6条酰化链的3-脱酰单磷酰脂质A的混合物，由Corixa公司销售，主要促进具有IFNγ（Th1）表型的CD4+T细胞应答。4’-单磷酰脂质A(4’-monophosphoryl lipid A，MPL)可以通过将从革兰氏阴性细菌的深粗糙突变株提取的LPS（Lipopolysaccharide，LPS）经过酸水解获得，其保留LPS的佐剂特性，同时证明毒性减少超过1000的因数(由鸡胚卵中的致死剂量测量) (Johnson等，1987 Rev. Infect. Dis.9Suppl：S512-S516)。适宜剂量的MPL能够在人中增强针对抗原的免疫应答。
本发明同时提供所述流感疫苗组合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(i)制备包含源自H1N1、H3N2、B/Victoria和B/Yamagata流感病毒株的流感病毒抗原性物质的第一组分；
(ii)制备作为第二组分的包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80的水包油佐剂；
(iii)将所述第一组分与第二组分分别独立包装，制得流感疫苗组合物，
其中步骤(i)和(ii)可以以任意顺序进行，包括先后进行、同时进行或分场地进行。
在一些实施方式中，制备水包油佐剂乳的方法包括以下步骤：
（1）将油相与水相混合后乳化，所述水相为含有吐温80的缓冲溶液，所述油相包含角鲨烯和α-生育酚；和
（2）乳化后依次进行狭缝式均质和微射流均质。
在一些实施方式中，步骤（1）中的乳化在高速搅拌下进行。其中，搅拌速度为5000rpm~15000rpm，例如6000rpm~14000rpm、7000rpm~13000rpm、8000rpm~12000rpm或9000rpm~11000rpm。
步骤（2）进行2-7个循环直至粒径降到150-170nm，优选为160nm，例如可以进行3个、4个、5个或6个循环。
在一些实施方式中，所述狭缝式均质的压力为20-100MPa，优选50-80 MPa。
在一些实施方式中，所述微射流均质的压力为80-150MPa，例如90-140MPa、100-130MPa或110-120MPa。
在一些实施方式中，制备第一组分的方法可以包括将流感病毒抗原吸附至铝佐剂上，以保持流感病毒抗原的稳定性和增强其免疫原性。
本发明还提供了所述的流感疫苗组合物在制备用于治疗或预防疾病的药物中的用途。
另一方面，本发明提供一种包含所述流感疫苗组合物的试剂盒，其包含独立包装的第一组分和第二组分，所述第一组分包含源自H1N1、H3N2、B/Victoria和B/Yamagata流感病毒株的流感病毒抗原性物质，所述第二组分包含水包油佐剂，所述水包油佐剂由水相和油相经乳化、均质制成，其中所述水相为包含吐温80的缓冲溶液，所述油相包含角鲨烯和α-生育酚。
另一方面，本发明提供一种包含所述流感疫苗组合物的多室注射器，其包含第一隔室和第二隔室，所述第一隔室装有第一组分，所述第一组分包含源自H1N1、H3N2、B/Victoria和B/Yamagata流感病毒株的流感病毒抗原性物质；第二隔室装有第二组分，所述第二组分包含水包油佐剂，所述水包油佐剂由水相和油相经乳化、均质制成，其中所述水相为包含吐温80的缓冲溶液，所述油相包含角鲨烯和α-生育酚。
另一方面，本发明提供一种使用所述流感疫苗组合物诱导免疫应答的方法，其将第一组分和第二组分分开施用于应用对象。所述方法包括以下步骤：
(i)向所述应用对象施用所述第一组分；
(ii)向所述应用对象施用所述第二组分，
其中步骤可以以任意顺序同时或间隔特定时间进行。
在一些实施方式中，所述第一组分和第二组分施用于应用对象的同一部位。在另一些实施方式中，所述第一组分和第二组分分别施用于应用对象的不同部位。
本发明还提供另一种使用所述流感疫苗组合物诱导免疫应答的方法，其将第一组分和第二组分同时施用于应用对象。所述方法包括以下步骤：
(i)将所述第一组分和所述第二组分混合；
(ii)向所述应用对象施用步骤(i)获得的混合物。
另一方面，本发明提供一种利用所述流感疫苗组合物改善CD4 T细胞免疫应答和/或改善B记忆细胞应答的方法，向应用对象分别同时施用或不同时施用所述第一组分和所述第二组分，或者将所述第一组分和所述第二组分混合后施用于应用对象。
相比现有技术，本发明具有如下有益效果：
本发明的流感疫苗组合物在包含流感病毒抗原的免疫成分的基础上进一步增加了乳剂佐剂，两种组分可以分开施用或共同施用并能基本上达到与传统制剂形式一致甚至更优的协同佐剂效果，可以有效改善免疫应答，快速刺激抗体的产生。实验表明，即使降低抗原和/或乳剂佐剂的剂量，仍可以达到相近的免疫效果，因此可以降低对生物体的副作用以及生产成本。
另一方面，本发明的疫苗组合物在制备时不需要将包含流感病毒抗原性物质的免疫成分与乳剂佐剂配制为成品制剂，乳剂佐剂和包含流感病毒抗原性物质的免疫成分可以独立包装，从而可以避免抗原性物质与乳剂佐剂之间的相互影响。本发明中的乳剂佐剂采用包含吐温80的醋酸盐缓冲溶液作为水相，具有适当的pH，与流感病毒抗原性物质混合后即可进行接种，不需要额外的调节pH的步骤，操作简单。同时，由于乳剂佐剂和流感病毒抗原性物质独立包装，相对于包含佐剂的疫苗组合物，本发明中的流感病毒抗原性物质的成分较为简单，无需通过添加表面活性剂以提高均匀性和稳定性，从而降低对人体的副作用。
另外，在包含铝佐剂的情况下，铝佐剂可以吸附抗原性物质，起到保护抗原的作用，同时，铝佐剂与抗原性物质形成整体，与乳剂混合时，抗原性物质无论是被铝佐剂吸附或被乳剂携带，均能同时发挥铝佐剂和乳剂的双重佐剂效果，因此，本发明的疫苗组合物可以达到更加高效、更加安全、同时更加稳定的技术效果。
附图说明
以下附图仅旨在于对本发明做示意性说明和解释，并不限定本发明的范围。其中：
图1为本发明实施例中乳剂佐剂的透射电镜照片；
图2为本发明实施例中由铝佐剂、水包油乳剂和抗原组成的疫苗复合物的示意图；
图3（A）为本发明实施例6中加入表面活性剂前后针对H1N1型流感病毒的血凝抑制抗体滴度；
图3（B）为本发明实施例6中加入表面活性剂前后针对H3N2型流感病毒的血凝抑制抗体滴度；
图3（C）为本发明实施例6中加入表面活性剂前后针对B/V型流感病毒的血凝抑制抗体滴度；
图3（D）为本发明实施例6中加入表面活性剂前后针对B/Y型流感病毒的血凝抑制抗体滴度；
图4为本发明实施例7中采用不同剂量的抗原和佐剂的情况下针对H1N1的血凝抑制抗体滴度；
图5为本发明实施例7中采用不同剂量的抗原和佐剂的情况下针对H3N2的血凝抑制抗体滴度；
图6为本发明实施例7中采用不同剂量的抗原和佐剂的情况下针对B/V的血凝抑制抗体滴度；
图7为本发明实施例7中采用不同剂量的抗原和佐剂的情况下针对B/Y的血凝抑制抗体滴度。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明作进一步的详细说明。
本发明的流感疫苗组合物包含独立包装的第一组分和第二组分，第一组分包含流感病毒抗原性物质，第二组分包含水包油佐剂。
在一些实施方式中，所述流感病毒抗原性物质为减毒活疫苗、灭活疫苗、类毒素疫苗、亚单位疫苗、载体疫苗、基因工程疫苗或核酸疫苗成品制剂。在本发明优选的实施方式中，所述第一组分为灭活流感疫苗成品制剂。
可选地，市售的流感病疫苗成品制剂例如：北京科兴生物制品有限公司、长春生物制品研究所有限责任公司、大连雅立峰生物制药有限公司、华兰生物疫苗有限公司、深圳赛诺菲巴斯德生物制品有限公司的三价灭活流感疫苗；北京科兴生物制品有限公司、长春生物制品研究所有限责任公司、国光生物科技股份有限公司、华兰生物疫苗有限公司、江苏金迪克生物技术股份有限公司、上海生物制品研究所有限责任公司、武汉生物制品研究所有限责任公司的四价灭活流感疫苗；长春百克生物科技股份公司的三价减毒活疫苗；中逸安科生物技术股份有限公司的三价亚单位流感疫苗等。
在优选的实施方式中，制备的流感病毒抗原性物质可以进一步与铝佐剂混合，制得本发明中的第一组分。其中，铝佐剂可选自氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝和明矾。铝佐剂可以利用任何的现有技术来制备，也可以采用市售的铝佐剂，例如CRODA的氢氧化铝佐剂ALHYDROGEL。
在本发明中，作为第二组分的水包油佐剂包含油相和包含表面活性剂的水相。其中，油相包含可代谢油，优选为角鲨烯，并优选进一步包含α-生育酚。
表面活性剂包含聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯(吐温)、失水山梨糖醇脂肪酸酯(司盘)、辛苯聚醇-9(曲拉通X-100)或聚乙二醇辛基苯基醚以及卵磷脂中的一种或多种。
在本发明的实施方式中，水包油佐剂可以包含角鲨烯、司盘85和吐温80，更优选地，水包油佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
在制备水包油佐剂时，常用的水相可以为选自磷酸盐缓冲溶液、柠檬酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、醋酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲溶液或柠檬酸-磷酸缓冲液的缓冲溶液。发明人在研究中意外发现，缓冲体系可能对免疫效果造成影响，为此，本发明的实施例分别利用磷酸盐缓冲液（pH 7.20±0.5）、柠檬酸盐缓冲液（pH 6.49±0.5）、醋酸盐缓冲液（pH 5.65±0.5）和碳酸盐缓冲液（pH 10.63±0.5）制备水包油佐剂。水包油佐剂的粒径为150-170nm，优选为160nm。
在本发明的实施例中，制备水包油佐剂乳的方法包括：首先将油相（包含角鲨烯和α-生育酚）与水相（含有吐温80的缓冲溶液）混合后乳化，乳化可以在高速搅拌（5000rpm~15000rpm）下进行；然后依次进行狭缝式均质（20-100MPa）和微射流均质（80-150MPa），该均质步骤可以进行2-7个循环。本发明制备的水包油佐剂的油相液滴均匀分布在水中，如图1所示。
发明人在研究中发现，在流感病毒抗原性物质含有铝佐剂的情况下，当把流感病毒抗原性物质与水包油乳剂混合时，水包油佐剂的油相液滴和抗原均被吸附到铝佐剂上，如图2所示。油相液滴和铝佐剂之间的吸附会与抗原和铝佐剂之间的吸附形成竞争，铝佐剂难以有效吸附和保护抗原，另一方面，铝佐剂会破坏乳剂的水油界面的平衡，从而破坏乳剂的形态，与抗原混合后，难以发挥乳剂自身的优势。
另外，在制备疫苗组合物时，尤其是疫苗组合物中包含佐剂等多种成分时，为了提高疫苗组合物的均匀性和稳定性，通常会在疫苗组合物中额外添加表面活性剂，这些额外添加的表面活性剂可能会对人体健康和免疫效果造成某些负面影响。由于本发明中的疫苗组合物和佐剂均为独立包装，抗原成分较为简单，这为降低甚至省略额外的表面活性剂创造了条件。为此，本发明还考察了在抗原性物质中包含或不包含表面活性剂时的免疫效果。
实施例1 制备包含乳剂佐剂（磷酸盐缓冲溶液）和流感病毒抗原的双组分流感疫苗
原料及来源：
流感病毒疫苗：四价流感病毒裂解疫苗为江苏金迪克生物技术股份有限公司产品，包含A1(A/California/7/2009，H1N1)、A3(A/HongKong/4801/2014，H3N2)、B1(B/Brisbane/ 60/2008，B/Victoria，简称B/V)和B2(B/Phuket/3073/2013，B/Yamagata，简称B/Y)四种流感病毒株的血凝素，每种型别的流感病毒血凝素均为15μg。
水包油佐剂的制备：
将2.14g角鲨烯和2.37g α-生育酚混合，然后加入45ml含有5wt.%吐温80的磷酸盐缓冲液混合后，在20℃搅拌温度条件下，以12000rpm搅拌20min，然后进行均质。均质温度20℃、依次在80Mpa下进行狭缝式均质和在120MPa下进行微射流均质，均质进行2-4个循环，制备获得粒径小于160nm的水包油佐剂。
制剂：人用剂量（HD）的佐剂瓶为0.5ml，成分包括10.69mg的角鲨烯，11.86mg的α-生育酚，4.86mg的吐温80，3.53mg的NaCl，0.09mg的KCl，0.51mg的Na2HPO4，0.09mg的KH2PO4和灭菌注射用水。
经检测，乳剂的平均粒径为粒径160nm，多分散系数PDI为0.088。
实施例2 制备包含乳剂佐剂（柠檬酸盐缓冲溶液）和流感病毒抗原的双组分流感疫苗
原料及来源：
流感病毒疫苗：四价流感病毒裂解疫苗为江苏金迪克生物技术股份有限公司产品，包含A1(A/California/7/2009，H1N1)、A3(A/HongKong/4801/2014，H3N2)、B1(B/Brisbane/ 60/2008，B/Victoria，简称B/V)和B2(B/Phuket/3073/2013，B/Yamagata，简称B/Y)四种流感病毒株的血凝素，每种型别的流感病毒血凝素均为15μg。
水包油佐剂的制备：
将2.14g角鲨烯和2.37g α-生育酚混合，然后加入45ml含有5wt.%吐温80的柠檬盐缓冲液混合后，在20℃搅拌温度条件下，以12000rpm搅拌20min，然后进行均质。均质温度20℃、依次在80Mpa下进行狭缝式均质和在120MPa下进行微射流均质，均质进行2-4个循环，制备获得粒径小于160nm的水包油佐剂。
制剂：人用剂量（HD）的佐剂瓶为0.5ml，成分包括10.69mg的角鲨烯，11.86mg的α-生育酚，4.86mg的吐温80，1.25mg的柠檬酸钠，0.08mg的柠檬酸和灭菌注射用水。
经检测，乳剂的平均粒径为粒径152.3nm，多分散系数PDI为0.092。
实施例3 制备包含乳剂佐剂（醋酸盐缓冲溶液）和流感病毒抗原的双组分流感疫苗
原料及来源：
流感病毒疫苗：四价流感病毒裂解疫苗为江苏金迪克生物技术股份有限公司产品，包含A1(A/California/7/2009，H1N1)、A3(A/HongKong/4801/2014，H3N2)、B1(B/Brisbane/ 60/2008，B/Victoria，简称B/V)和B2(B/Phuket/3073/2013，B/Yamagata，简称B/Y)四种流感病毒株的血凝素，每种型别的流感病毒血凝素均为15μg。
水包油佐剂的制备：
将2.14g角鲨烯和2.37g α-生育酚混合，然后加入45ml含有5wt.%吐温80的醋酸盐缓冲液混合后，在20℃搅拌温度条件下，以12000rpm搅拌20min，然后进行均质。均质温度20℃、依次在80Mpa下进行狭缝式均质和在120MPa下进行微射流均质，均质进行2-4个循环，制备获得粒径小于160nm的水包油佐剂。
制剂：人用剂量（HD）的佐剂瓶为0.5ml，成分包括10.69mg的角鲨烯，11.86mg的α-生育酚，4.86mg的吐温80，6.72mg的无水醋酸钠，0.49mg的醋酸和灭菌注射用水。
经检测，乳剂的平均粒径为粒径157.7nm，多分散系数PDI为0.079。
实施例4 制备包含乳剂佐剂（碳酸盐缓冲溶液）和流感病毒抗原的双组分流感疫苗
原料及来源：
流感病毒疫苗：四价流感病毒裂解疫苗为江苏金迪克生物技术股份有限公司产品，包含A1(A/California/7/2009，H1N1)、A3(A/HongKong/4801/2014，H3N2)、B1(B/Brisbane/ 60/2008，B/Victoria，简称B/V)和B2(B/Phuket/3073/2013，B/Yamagata，简称B/Y)四种流感病毒株的血凝素，每种型别的流感病毒血凝素均为15μg。
水包油佐剂的制备：
将2.14g角鲨烯和2.37g α-生育酚混合，然后加入45ml含有5wt.%吐温80的碳酸盐缓冲液混合后，在20℃搅拌温度条件下，以12000rpm搅拌20min，然后进行均质。均质温度20℃、依次在80Mpa下进行狭缝式均质和在120MPa下进行微射流均质，均质进行2-4个循环，制备获得粒径小于160nm的水包油佐剂。
制剂：人用剂量（HD）的佐剂瓶为0.5ml，成分包括10.69mg的角鲨烯，11.86mg的α-生育酚，4.86mg的吐温80， 0.47mg的碳酸氢钠，4.18mg的碳酸钠和灭菌注射用水。
经检测，乳剂的平均粒径为粒径157.0nm，多分散系数PDI为0.084。
实施例5 不同缓冲溶液的流感疫苗的小鼠免疫实验
该实施例研究了包含不同缓冲溶液的乳剂佐剂联合独立包装的四价流感病毒裂解疫苗的免疫原性，并设置传统Al(OH)3佐剂以及不加佐剂组作为对照。
利用实施例1-4中的双组分流感疫苗联合免疫C57BL/6小鼠，抗原免疫剂量为1/10HD，即1.5μg*4/只（H1N1、H3N2、B/V和B/Y各1.5μg，合计6μg/只），乳剂佐剂用量为1/10HD，即50μl/只，Al(OH)3佐剂用量为50μg/只，将抗原与佐剂等体积混合后免疫小鼠，每组6只小鼠。采用一针免疫程序，免疫后28天采集血液分离血清，通过检测血清中血凝抑制抗体滴度评价各组免疫效果。
针对不同亚型的血凝抑制抗体滴度检测结果显示，各乳剂佐剂组的血凝抑制抗体滴度均显著高于不加佐剂组和Al(OH)3佐剂组。可见，本发明的实验结果表明联合接种流感疫苗和乳剂佐剂可以显著提高免疫效果。
同时，在使用不同缓冲体系时，针对不同亚型的血凝抑制抗体滴度检测结果虽不存在显著性差异，但采用醋酸盐缓冲溶液时，针对不同亚型的血凝抑制抗体滴度均高于采用其它缓冲溶液时的血凝抑制抗体滴度。因此，该结果表明，缓冲体系会对免疫效果造成影响，且醋酸盐缓冲液优于其它缓冲溶液。
实施例6 表面活性剂对免疫效果的影响
该实施例进一步研究在疫苗成分中额外添加表面活性剂时对免疫效果的影响。抗原和佐剂用量同实施例5，抗原包含0.06μl/ml曲拉通（Triton X-100）和0.6μl/ml吐温80，将抗原与佐剂等体积混合后免疫小鼠，每组6只小鼠，具体分组情况如表1所示。
表1
诱导的抗体滴度通过血凝抑制(HAI)测定法来测量，如图3(A)~(D)所示，在抗原中包含或不包含表面活性剂时，针对不同亚型的血凝抑制抗体滴度检测结果虽不存在显著性差异，但除H1N1外，抗原中不包含表面活性剂时针对其它不同亚型的血凝抑制抗体滴度均高于包含表面活性剂时的血凝抑制抗体滴度。结果表明，在疫苗中额外添加表面活性剂可能会对免疫结果有负面影响。由于本申请中的乳剂佐剂和流感病毒抗原性物质分别独立包装，流感病毒抗原性物质的成分较为简单，无需通过添加表面活性剂以提高均匀性和稳定性，因而适于省略表面活性剂，并可能因此提高免疫效果。
实施例7 免疫剂量实验
该实施例进一步研究降低抗原和/或佐剂用量对免疫效果的影响，各组抗原和佐剂用量如表2所示，每组10只BALB/c小鼠，并设置MF59佐剂作为佐剂对照及老龄鼠作为个体对照。采用一针免疫程序，免疫后28天采集血液分离血清，通过检测血清中血凝抑制抗体滴度评价各组免疫效果。
表2
注：组1-9和12中的佐剂均为实施例3中的乳剂佐剂。
检测结果如图4-7所示。可以看出，无论使用的免疫组合物中包含本发明的乳剂佐剂还是MF59，免疫血清中测得的血凝抑制抗体滴度均高于不包含佐剂时的血凝抑制抗体滴度。在免疫剂量相同的情况下，在成年鼠组，除B/V外，采用本发明所述乳剂佐剂时的血凝抑制抗体滴度均高于采用MF59时的血凝抑制抗体滴度，而在老年鼠组，采用本发明所述乳剂佐剂时针对四种亚型的血凝抑制抗体滴度均高于采用MF59时的血凝抑制抗体滴度，这表明，本发明的乳剂佐剂相对于MF59可以诱导更高的免疫反应。总体来看，成年鼠组的血凝抑制抗体滴度均高于老年鼠组的血凝抑制抗体滴度。
在抗原和佐剂等比例降低的情况下，当抗原和佐剂均减半时（即1/20HD），血凝抑制抗体滴度稍有降低，而当抗原和佐剂降至原剂量的1/4时（即1/40HD），血凝抑制抗体滴度降至原来的一半左右，当抗原和佐剂的剂量进一步降低时，血凝抑制抗体滴度显著降低。这表明，本发明所述乳剂佐剂和抗原的剂量可以降低至常用剂量的1/2。
在抗原的剂量保持不变，而佐剂剂量逐渐降低的情况下，除H3N2外，其它亚型的血凝抑制抗体滴度未发生明显变化。这表明，在抗原剂量保持不变的情况下，本发明所述乳剂佐剂的剂量可以降低至常用剂量的1/8。
在乳剂的剂量保持不变的情况下，发明人惊奇地发现，抗原剂量减半不仅没有导致血凝抑制抗体滴度降低，而且针对H1N1和B/Y的血凝抑制抗体滴度甚至还有较为明显的升高。这表明，半剂量的抗原和常用剂量的所述乳剂佐剂可以获得较为理想的免疫效果，而抗原剂量的降低还可以降低对生物体的副作用以及生产成本，因此，本发明具有广阔的应用前景。
以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (24)

1.一种流感疫苗组合物，其特征在于，包含独立包装的第一组分和第二组分，所述第一组分包含源自H1N1、H3N2、B/Victoria和B/Yamagata流感病毒株的流感病毒抗原性物质，所述第二组分包含水包油佐剂，所述水包油佐剂由水相和油相经乳化、均质制成，其中所述水相为包含吐温80的缓冲溶液，所述油相包含角鲨烯和α-生育酚。
2.根据权利要求1所述的流感疫苗组合物，其特征在于，所述流感病毒抗原性物质为减毒活疫苗、灭活疫苗、类毒素疫苗、亚单位疫苗、载体疫苗、基因工程疫苗或核酸疫苗成品制剂。
3.根据权利要求2所述的流感疫苗组合物，其特征在于，所述流感病毒抗原性物质为流感病毒裂解疫苗，每种型别的流感病毒包含5-20μg血凝素。
4.根据权利要求1所述的流感疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分不包含表面活性剂。
5.根据权利要求1所述的流感疫苗组合物，其特征在于，所述水相中的缓冲溶液选自磷酸盐缓冲溶液、柠檬酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、醋酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲溶液或柠檬酸-磷酸缓冲液。
6.根据权利要求5所述的流感疫苗组合物，其特征在于，所述水相中的缓冲溶液为醋酸盐缓冲液，所述醋酸盐缓冲液包含10-20 mg/ml的醋酸钠和0.8-1.5mg/ml的醋酸。
7.根据权利要求6所述的流感疫苗组合物，其特征在于，所述水相的pH为5.65±0.5。
8.根据权利要求1所述的流感疫苗组合物，其特征在于，所述水相包含15-30mg/ml的吐温80。
9.根据权利要求1所述的流感疫苗组合物，其特征在于，所述油相中角鲨烯与α-生育酚的重量比为0.8-1。
10.根据权利要求1所述的流感疫苗组合物，其特征在于，所述水包油佐剂的体积为0.2-1ml。
11.根据权利要求10所述的流感疫苗组合物，其特征在于，所述水包油佐剂包含1-15mg角鲨烯、1-15mg α-生育酚、0.5-10mg吐温80。
12.根据权利要求1所述的流感疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分是独立包装且不包含表面活性剂的流感病毒抗原，所述第二组分是水包油乳剂佐剂，包含1-10.69mg角鲨烯、1-11.86mg α-生育酚和0.5-4.86mg吐温80。
13.根据权利要求12所述的流感疫苗组合物，其特征在于，第一组分是独立包装且不包含表面活性剂的四价流感病毒裂解疫苗，包括15μg 的H1N1血凝素，15μg 的H3N2血凝素，15μg 的B/Victoria血凝素和15μg 的B/Yamagata血凝素，所述第二组分是水包油乳剂佐剂，包含1-10.69mg角鲨烯、1-11.86mg α-生育酚和0.5-4.86mg吐温80。
14.根据权利要求12所述的流感疫苗组合物，其特征在于，第一组分是独立包装且不包含表面活性剂的四价流感病毒裂解疫苗，包括7.5μg 的H1N1血凝素，7.5μg 的H3N2血凝素，7.5μg 的B/Victoria血凝素和7.5μg 的B/Yamagata血凝素，所述第二组分是水包油乳剂佐剂，包含10.69mg角鲨烯、11.86mg α-生育酚和4.86mg吐温80。
15.根据权利要求12所述的流感疫苗组合物，其特征在于，第一组分是独立包装且不包含表面活性剂的四价流感病毒裂解疫苗，包括7.5μg 的H1N1血凝素，7.5μg 的H3N2血凝素，7.5μg 的B/Victoria血凝素和7.5μg 的B/Yamagata血凝素，所述第二组分是水包油乳剂佐剂，包含5.35mg角鲨烯、5.93mg α-生育酚和2.43mg吐温80。
16.根据权利要求1所述的流感疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分还进一步包含铝佐剂。
17.根据权利要求1所述的流感疫苗组合物，其特征在于，所述水包油佐剂进一步包含3D-MPL、皂苷、poly I:C和CpG中的一种或多种。
18.一种权利要求1-17任一项所述流感疫苗组合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(i)制备包含源自H1N1、H3N2、B/Victoria和B/Yamagata流感病毒株的流感病毒抗原性物质和铝佐剂的第一组分；
(ii)制备作为第二组分的包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80的水包油佐剂；
(iii)将所述第一组分与第二组分分别独立包装，制得流感疫苗组合物，
其中步骤(i)和(ii)可以以任一顺序进行，包括先后进行、同时进行或分场地进行。
19.根据权利要求18所述的制备方法，其特征在于，步骤(ii)包括以下步骤：
（1）将油相与水相混合后乳化，所述水相为含有吐温80的缓冲溶液，所述油相包含角鲨烯和α-生育酚；和
（2）乳化后依次进行狭缝式均质和微射流均质。
20.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，步骤（2）进行2-7个循环直至粒径降到150-170nm。
21.根据权利要求20所述的方法，其特征在于，所述狭缝式均质的压力为20-100MPa，所述微射流均质的压力为80-150MPa。
22.权利要求1-17任一项所述流感疫苗组合物在制备用于治疗或预防流感病的药物中的用途。
23.一种包含权利要求1-17任一项所述流感疫苗组合物的多室注射器，其特征在于，包含第一隔室和第二隔室，所述第一隔室装有第一组分，所述第一组分包含源自H1N1、H3N2、B/Victoria和B/Yamagata流感病毒株的流感病毒抗原性物质；第二隔室装有第二组分，所述第二组分包含水包油佐剂，所述水包油佐剂由水相和油相经乳化、均质制成，其中所述水相为包含吐温80的缓冲溶液，所述油相包含角鲨烯和α-生育酚。
24.一种包含权利要求1-17任一项所述流感疫苗组合物的试剂盒，其特征在于，包含独立包装的第一组分和第二组分，所述第一组分包含源自H1N1、H3N2、B/Victoria和B/Yamagata流感病毒株的流感病毒抗原性物质，所述第二组分包含水包油佐剂，所述水包油佐剂由水相和油相经乳化、均质制成，其中所述水相为包含吐温80的缓冲溶液，所述油相包含角鲨烯和α-生育酚。
CN202410069981.9A 2024-01-18 2024-01-18 流感疫苗组合物及其制备方法和应用 Pending CN117582491A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202410069981.9A CN117582491A (zh) 2024-01-18 2024-01-18 流感疫苗组合物及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202410069981.9A CN117582491A (zh) 2024-01-18 2024-01-18 流感疫苗组合物及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117582491A true CN117582491A (zh) 2024-02-23

Family

ID=89913664

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202410069981.9A Pending CN117582491A (zh) 2024-01-18 2024-01-18 流感疫苗组合物及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117582491A (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101267835A (zh) * 2005-08-02 2008-09-17 诺华疫苗和诊断有限公司 降低含油佐剂和含表面活性剂抗原之间的干扰
CN101325967A (zh) * 2005-11-04 2008-12-17 诺华疫苗和诊断有限公司 水包油乳液佐剂含量降低的流感疫苗
US20090220541A1 (en) * 2005-11-04 2009-09-03 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Emulsions with free aqueous-phase surfactant for adjuvanting split influenza vaccines
CN102065889A (zh) * 2008-04-16 2011-05-18 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 疫苗
CN102307590A (zh) * 2009-02-10 2012-01-04 诺华有限公司 具有减少量的角鲨烯的流感疫苗

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101267835A (zh) * 2005-08-02 2008-09-17 诺华疫苗和诊断有限公司 降低含油佐剂和含表面活性剂抗原之间的干扰
CN101325967A (zh) * 2005-11-04 2008-12-17 诺华疫苗和诊断有限公司 水包油乳液佐剂含量降低的流感疫苗
CN101365485A (zh) * 2005-11-04 2009-02-11 诺华疫苗和诊断有限公司 用于佐剂配制裂解流感疫苗的含游离水相表面活性剂的乳液
US20090220541A1 (en) * 2005-11-04 2009-09-03 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Emulsions with free aqueous-phase surfactant for adjuvanting split influenza vaccines
CN102065889A (zh) * 2008-04-16 2011-05-18 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 疫苗
CN102307590A (zh) * 2009-02-10 2012-01-04 诺华有限公司 具有减少量的角鲨烯的流感疫苗

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
余祥彬: "《药剂学与药物动力学实验指导》", 31 January 2014, 厦门大学出版社, pages: 92 - 96 *
时小光等: "不同佐剂对病毒灭活疫苗免疫效果的影响", 《生物医学工程与临床》, vol. 24, no. 5, 20 August 2020 (2020-08-20), pages 116 - 122 *
朱锦涛等: "《生物医用高分子在皮肤疾病诊疗和健康中的应用（双语版）》", 31 December 2021, 武汉：华中科技大学出版社, pages: 268 - 270 *
洪怡等: "《药物制剂新技术与产品开发》", 30 November 2020, 华中科技大学出版社, pages: 113 - 127 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE69405551T2 (de) 3-0-deazylierte monophosphoryl lipid a enthaltende impfstoff-zusammensetzungen
US6146632A (en) Vaccines
JP5925736B2 (ja) 髄膜炎菌ワクチン処方物
CN107184973A (zh) 一种复合疫苗佐剂及其应用
AU2011288203A1 (en) Adjuvanted vaccines for serogroup B meningococcus
MX2010011412A (es) Vacuna.
Nguyen et al. Skin immunization with third-generation hepatitis B surface antigen using microneedles
CN113730566B (zh) 一种流感新冠联合疫苗及其制备方法
CN103784953A (zh) 作为疫苗佐剂的水包油型亚微乳及其制备方法
WO2016057921A1 (en) Nanoemulsion compositions for preventing, suppressing or eliminating allergic and inflammatory disease
Wang et al. Immune responses to varicella-zoster virus glycoprotein E formulated with poly (lactic-co-glycolic acid) nanoparticles and nucleic acid adjuvants in mice
CN104043119A (zh) 一种新型疫苗佐剂及其制备方法
KR20070110513A (ko) 알루미늄 포스페이트 및 3ｄ－ｍｐｌ을 포함하는 보조약조성물
MX2010011393A (es) Vacuna.
Luan et al. LNP-CpG ODN-adjuvanted varicella-zoster virus glycoprotein E induced comparable levels of immunity with Shingrix™ in VZV-primed mice
Huang et al. Research progress on emulsion vaccine adjuvants
JP2019527191A (ja) 免疫増強剤、口蹄疫不活化ワクチンおよびその製造方法
CN117582491A (zh) 流感疫苗组合物及其制备方法和应用
Garçon et al. Development and Evaluation of AS04, a Novel and Improved Adjuvant System Containing 3-O-Desacyl-4′-Monophosphoryl Lipid A and Aluminum Salt
WO2023056089A1 (en) Immunological adjuvant formulations comprising tlr4 agonist e6020
CN118001385A (zh) 流感疫苗组合物及其制备方法和应用
CN112294955A (zh) 一种复合免疫佐剂及其应用
CN109876140A (zh) 一种治疗慢性乙肝的疫苗及其制备方法和应用
CN118001386A (zh) 狂犬疫苗组合物及其制备方法和应用
CN118001387A (zh) 乙肝疫苗组合物及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination