CN117551585A - 一株盐单胞菌、重组盐单胞菌及其构建方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株盐单胞菌、重组盐单胞菌及其构建方法和应用。所述盐单胞菌为Halomonas sp.LY04，其保藏编号为GDMCC No:63383。本发明的Halomonas sp.LY04能够在高温50℃下生产PHA。除了能够以葡萄糖为碳源外，还能够利用不同长链脂肪酸，包括饱和脂肪酸及不饱和脂肪酸。通过对温度、发酵培养体系以及长链脂肪酸碳源的优化，提高中长链PHA单体3HA的摩尔百分含量。本发明的重组盐单胞菌通过引入不同来源的PHA聚合酶实现高产3HA的目标，具有极大的工业应用价值。

Description

一株盐单胞菌、重组盐单胞菌及其构建方法和应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一株盐单胞菌、重组盐单胞菌及其构建方法和应用。
背景技术
微生物发酵作为生物合成产品的主要途径，由于传统的工业生物模式菌存在灭菌成本高、淡水消耗高、发酵易污染等缺点，导致其与化学工艺相比竞争力较低。近年来，将通过筛选和改造的极端微生物作为底盘细胞，解决了传统工业生物模式菌的问题，发展出了可以实现无需灭菌、节能节水、开放式的连续发酵的菌株——盐单胞菌。
盐单胞菌具有天然合成聚羟基脂肪酸酯(PHA)的优点。在众多的可降解塑料中，PHA是唯一完全由微生物合成、在海洋和土壤等自然环境中可全生物降解的高分子材料。PHA组成和结构上的多样性赋予了其多种多样的材料性能。特别是PHA单体的不同、彼此间碳原子数的差别，造成不同PHA在物化性质上的表现也有很大的差别，能够从坚硬质脆的脆性材料过渡到热塑性的软性材料。然而，目前盐单胞菌生产的PHA材料单体主要集中在C6以下、碳源利用能力不高且不能在高温下进行发酵生产PHA。
因此，目前亟需一株既能够适应高温、碳源利用能力高且可以高产聚羟基脂肪酸酯(PHA)，又可以提高PHA长链单体含量的盐单胞菌株。
发明内容
针对现有技术中的缺陷，本发明提出了一株盐单胞菌、重组盐单胞菌及其构建方法和应用。
本发明提供一株盐单胞菌(Halomonas sp.)LY04，所述盐单胞菌的保藏编号为GDMCC No:63383。
本申请中使用的Halomonas sp.LY04菌株已于2023年4月23日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(简称GDMCC地址：广州市先列中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，邮编510070)。保藏号为GDMCC NO.63383。菌株名称为Halomonas sp.LY04，分类命名为Halomonas sp.。
进一步的，所述盐单胞菌的16S rDNA的序列如SEQ ID No.3所示。
本发明还提供所述的盐单胞菌在制备聚羟基脂肪酸酯单体中的应用。所述制备聚羟基脂肪酸酯单体利用饱和脂肪酸和/或不饱和脂肪酸。
进一步的，所述聚羟基脂肪酸酯单体为3-羟基脂肪酸。
本发明还提供一种重组盐单胞菌的构建方法，包括如下步骤：
S1：体外扩增phaC基因序列，插入载体中，得到载体质粒；
S2：将S1所述载体质粒导入权利要求1所述的盐单胞菌中。
进一步的，所述phaC基因序列为phaC4AK4、phaCRe、phaCAC、phaCAR、phaC61-3中的任意一项；所述phaC4AK4的核苷酸序列如SEQ ID No.24所示；所述phaCRe的核苷酸序列如SEQ IDNo.25所示；所述phaCAC的核苷酸序列如SEQ ID No.26所示；所述phaCAR的核苷酸序列如SEQID No.27所示；所述phaC61-3的核苷酸序列如SEQ ID No.28所示。
本发明还提供一种重组盐单胞菌，由所述的构建方法得到。
本发明还提供一种制备3-羟基脂肪酸的方法，包括如下步骤：
所述的盐单胞菌或所述重组盐单胞菌进行菌种活化，然后进行一级、二级种子培养，最后接入发酵培养基进行发酵，得到所述3-羟基脂肪酸。
进一步的，所述发酵的温度为37～50℃。
发酵温度是发酵的关键性因素，37℃是绝大多数菌株最适宜的发酵温度，发酵温度每提高1℃，菌株的活性及发酵性能会大幅度降低，从而影响发酵产量，能够在50℃下保持高发酵产能的菌株寥寥无几，获取一株能够在50℃高温下保持高产PHA的菌株并非易事。
进一步的，所述发酵培养基包括碳源，所述碳源包括正庚酸(C7)、正辛酸(C8)、正壬酸(C9)、正癸酸(C10)、十一酸(C11)、10-十一烯酸(C11*)、十二酸(C12)、十三酸(C13)、12-十三烯酸(C13*)、十四酸(C14)、13-十四烯酸(C14*)、十五酸(C15、顺十五碳-10-烯酸(C15:1)、十六酸(C16)、15-十六烯酸(C16*)、十七酸(C17)、16-十七烯酸(C17*)、十八酸(C18)、油酸C18:1(9-十八烯酸)、亚油酸C18:2(9，12-十八碳二烯酸)、亚麻酸C18:3(顺-9,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸)、5-苯基戊酸(5-PVA)、扁桃酸MA(苯基乙醇酸)、4-羟基苯乙酸(4-HPL)中的任意一种或多种；其中，C11*、C13*、C14*、C16*、C17*均是长链脂肪酸，且双键位置位于末位；C15:1、C18:1、C18:2、C18:3是含不同双键个数的脂肪酸。
不同的菌株具有不同的碳源利用能力，一般菌株难以利用长链不饱和脂肪酸作为碳源，本申请的Halomonas sp.LY04能够利用的长链脂肪酸范围广，在实际发酵生产中更加普适，不受限于发酵底物。
综上，与现有技术相比，本发明达到了以下技术效果：
(1)本发明的Halomonas sp.LY04能够在高温50℃条件下生产PHA。
(2)本发明的Halomonas sp.LY04通过对温度、培养体系及C7～C18:3不同链长和饱和/不饱和脂肪酸碳源的优化，提高了3-羟基中或者长链脂肪酸(3HA)的摩尔含量。
(3)本发明的重组菌在Halomonas sp.LY04的基础上，进一步提高了3HA的摩尔含量，具有极大的工业应用价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施例1扫描电镜确定菌的胞内结构图(标尺为200nm)；
图2为本发明实施例1扫描电镜确定菌的外部形态图(标尺为1μm)；
图3为本发明实施例1中Halomonas sp.LY04菌株与其他菌株序列对比的进化树；
图4为本发明实施例5的pSEVA321-Cym-phaC4AK4载体质粒图；
图5为本发明实施例5的pSEVA321-Cym-phaCRe载体质粒图；
图6为本发明实施例5的pSEVA321-Cym-phaCAC载体质粒图；
图7为本发明实施例5的pSEVA321-Cym-phaCAR载体质粒图；
图8为本发明实施例5的pSEVA321-Cym-phaC61-3载体质粒图；
图9为本发明实施例5的四种重组菌株验证电泳图。每组大片段为骨架的条带，小片段为插入片段的条带。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
本发明第一部分探究Halomonas sp.LY04在不同温度下的生长情况及生产PHA的含量；
第二部分采用不同培养体系、温度及碳源下Halomonas sp.LY04菌株的生长情况及发酵产生3HA单体摩尔含量百分比；
第三部分探究Halomonas sp.LY04菌株利用不同长链脂肪酸碳源的生长情况；
Halomonas sp.LY04菌株内源phaC聚合效果较差，需要外来引入相对广泛底物特异性且高聚合能力的phaC酶；第四部分为提高中长链脂肪酸单体摩尔含量，引入质粒并强化PHA生产，采用诱导系统(枯茗酸)强化表达PHA聚合酶phaC；通过软件Snapgene和网站NEBTm Calculator(https://tmcalculator.neb.com/)进行引物设计及质粒的构建，将质粒分别导入嗜盐菌Halomonas sp.LY04中，提高中长链脂肪酸单体摩尔含量。
实施例1菌株的分离与纯化
(1)菌株的分离
称取1g来自新疆淤泥样，用无菌水稀释，涂布于含NaCl(60g/L)的LB平板上(60LB培养基)，37～50℃培养48h。
(2)菌株的纯化
随机挑平板上的多个单克隆菌落，用新的LB液体培养基稀释，涂布于新NaCl(60g/L)的LB平板上，37～50℃，静止培养48h；反复重复上述过程，直至平板上长出形状相近的单克隆，完成菌株的纯化，并将其命名为Halomonas sp.LY04。
(3)菌株特征及类别鉴定
菌株形态及特征：将分离纯化好的菌株采用60LB液体培养基在37～50℃条件下培养48小时(摇床转速为220rpm)，取少量培养好的菌液，使用扫描电镜确定菌的形态为短杆状或椭球形(见图1和图2)。
类别鉴定：利用革兰氏染色法对该菌株进行鉴别，确定该菌株为革兰氏阴性菌。
(4)菌株16s rDNA基因测定
检测该菌株的16S rDNA序列，扩增16S rDNA序列。引物设计如SEQ ID No.1和SEQID No.2所示。随后送至广州华大生物公司测序分析，经测序，16S rDNA的序列如SEQ IDNo.3所示。
(5)菌株序列对比
将测序得到的Halomonas sp.LY04菌株的16S rDNA与Halomonas sp.NyZ770、Halomonas TD01、Halomonas aquamarina strain DSM 30161、Halomonas hydrothermalisstrain B-15-9-2、Halomonas meridiana Slthf1、Halomonas meridiana Eplume2等常见盐单胞菌来源的16S rDNA，采用MEGA-11软件进行序列比对，并绘制进化树，如图3所示。
实施例2 Halomonas sp.LY04在不同温度环境下的生长情况
(1)种子液制备
①菌种活化：于实验室-80℃冰箱取菌种，用枪头挑取菌液划线接种于平板固体培养基(酵母粉5g/L；胰蛋白胨10g/L；氯化钠60g/L，pH为8.5)上，37℃培养24h。
②一级种子培养：挑取单菌落接种于12mL摇菌管(5mL 60LB培养基：酵母粉5g/L；胰蛋白胨10g/L；氯化钠60g/L；琼脂粉1～2％(w/v)，pH为8.5)中，将培养液置于摇床37℃、220rpm培养12h。
③二级种子培养：吸取一级菌液200μL(1％接种量)，接种于150mL锥形瓶(20mL60LB培养基)中，将置于摇床37℃、220rpm培养12h。
(2)发酵培养基准备
发酵培养基(50MM培养基)：葡萄糖30g/L、氯化钠50g/L、酵母粉1g/L、MgSO40.39g/L、CO(NH2)2 0.59g/L、KH2PO4 3.43g/L、Fe(III)-NH4-Citrate 0.049g/L、CaCl2·2H2O 0.02g/L、ZnSO4·7H2O 9.8×10-5g/L、MnCl2·4H2O 2.94×10-5g/L、H3BO3 2.94×10- 4g/L、CoCl2·6H2O 1.96×10-4g/L、CuSO4·5H2O 9.8×10-6g/L、NiCl2·6H2O 1.96×10-5g/L、NaMoO4·2H2O 2.94×10-5g/L，NaOH调节培养基pH至8.5～9.5。
(3)发酵培养
将种子液按5％接种(2.5mL)于500mL锥形瓶内，分别置于摇床37℃～50℃、220rpm培养48h。
(4)细胞干重及PHA含量测定
细胞干重(CDW)：将30～35mL发酵后菌液置于50mL离心管中，室温离心6分钟，转速为8000rpm，倒掉上清；加入适量去离子水恢复原体积，重悬，保证沉淀完全消失，同等条件下离心，倒掉上清液；封口膜封口离心管置于-80℃冰箱冻存2h；将离心管于真空冷冻干燥机内干燥12～16小时；称重，计算细胞干重(g/L)。
测定PHA含量：然后在40mg冻干细胞中加入2mL酯化液(包含甲醇、3％(v/v)浓硫酸(98％，w/w)和1g/L苯甲酸)及2mL氯仿，100℃下酯化约4h。PHB标品20-30mg采用同样处理为参照；随后使用GC-2014气相色谱仪(日本岛津)测定PHB含量。测试方法是：初始温度维持在80℃，1.5min；第一阶段，温度以30℃/min的速度增加到140℃；第二阶段，以40℃/min的速度增加到240℃，此过程耗时2min；总的分析时间是8min；注射温度为240℃和检测器温度为250℃。
(5)发酵结果
菌株在不同温度下的发酵结果如表1所示：
表1菌株在不同高温环境下的发酵结果
由表1结果显示，Halomonas sp.LY04在不同温度环境下进行培养时，菌株能正常生长，且随着温度升高，菌株的细胞干重及PHA含量增加。当菌株发酵温度达到50℃时，Halomonas sp.LY04 PHA的产量高达77.32％，说明Halomonas sp.LY04能够在高温下发酵生产的能力，适用性更广。
实施例3 Halomonas sp.LY04在不同温度下长链脂肪酸的生产情况
(1)种子液制备
同实施例2中的种子液制备步骤。
(2)发酵液准备
发酵培养基：分别采用50MM和60LB发酵体系；50MM体系具体各组分添加量同实施例2；60LB体系(酵母粉5g/L；胰蛋白胨10g/L；氯化钠60g/L；葡萄糖30g/L；pH为8.5)；其中额外添加5g/L长链脂肪酸十三烷酸C13、十四烷酸C14。
(3)发酵培养
将种子液按5％接种(2.5mL)于500mL锥形瓶内，分别置于摇床37℃、50℃、220rpm培养48h。
(4)细胞干重及PHA含量测定
具体操作同实施例2。
(5)发酵结果
不同培养体系、温度及长链脂肪酸下Halomonas sp.LY04菌株的发酵结果如表2所示，其中3HA mol％指中长链脂肪酸单体摩尔含量。
表2不同培养体系、温度及碳源下菌株的发酵结果
结果表明，Halomonas sp.LY04菌株可以在不同温度、不同培养体系下均能利用长链脂肪酸C13、C14。比较发现，菌株在50℃、50MM培养体系下利用长链脂肪酸C14的发酵结果最优，细胞干重9.01g/L，3HA mol％最高为41.21％。
实施例4 Halomonas sp.LY04利用不同长链脂肪酸碳源的发酵情况
(1)种子液制备
同实施例2中的种子液制备步骤。
(2)发酵液准备
发酵培养基：采用50MM发酵体系，具体各组分添加量同实施例2；其中额外增加5g/L的不同类型碳源：正庚酸C7、正辛酸C8、正壬酸C9、正癸酸C10、十一酸C11、10-十一烯酸C11*、十二酸C12、十三酸C13、12-十三烯酸C13*、十四酸C14、13-十四烯酸C14*、十五酸C15、顺十五碳-10-烯酸C15:1、十六酸C16、15-十六烯酸C16*、十七酸C17、16-十七烯酸C17*、十八酸C18、油酸C18:1(9-十八烯酸)、亚油酸C18:2(9，12-十八碳二烯酸)、亚麻酸C18:3(顺-9，顺-12，顺-15-十八碳三烯酸)、5-苯基戊酸5-PVA、扁桃酸MA(苯基乙醇酸)、4-羟基苯乙酸(4-HPL)。
(3)发酵培养：发酵温度为50℃，具体操作同实施例2。
(4)细胞干重及PHA含量测定：具体操作同实施例2。
(5)发酵结果：LY04菌株在株不同长链脂肪酸下的发酵结果如表3所示，其中3HAmol％指中长链脂肪酸单体摩尔含量。
表3利用不同长链脂肪酸碳源的发酵结果
结果表明，Halomonas sp.LY04菌株可以利用不同类型的脂肪酸包括饱和长链脂肪酸、含双键不同个数及位置的长链脂肪酸及含苯环结构的酸，其中在添加双键类的脂肪酸中，采用C11*和C18:1为碳源时，菌株的长势状好，其细胞干重最高可达到9.42g/L和9.32g/L；在添加饱和脂肪酸时，C14最具有潜力，细胞干重最高达到9.01g/L；含苯环的脂肪酸发酵时，5-PVA最具有潜力，细胞干重可达到8.02g/L。且采用不同类型脂肪酸为碳源，3HA单体比例均在30mol％以上。
实施例5提高不同类型中长链脂肪酸单体比例重组菌的构建
1、质粒的构建
将5种不同来源的常见phaC，分别为phaC4AK4(Yu LP et al.,2020)、phaCRe(HaradaK et al.,2019)、phaCAC(Matsumoto K et al.,2005)、phaCAR
(Satoh K et al.,2022)、phaC61-3(Li ZJ et al.,2016)分别插入到pSEVA321质粒中，采用枯茗酸作为诱导剂，以表达载体pSEVA321为骨架，采用Q5高保真DNA聚合酶进行PCR扩增及Gibson Assembly Master Mix(购自New England Biolabs)进行连接分别得到连接产物。pSEVA321-Cym-phaC4AK4质粒信息见图4、pSEVA321-Cym-phaCRe质粒信息见图5、pSEVA321-Cym-phaCAC质粒信息见图6、pSEVA321-Cym-phaCAR质粒信息见图7、pSEVA321-Cym-phaC61-3质粒信息见图8。
(1)PCR扩增引物序列如下所示：
pSEVA321-Cym-phaC4AK4-F：SEQ ID No.4；pSEVA321-Cym-phaC4AK4-R：SEQ ID No.5；
phaC4AK4-F：SEQ ID No.6；phaC4AK4-R：SEQ ID No.7；
pSEVA321-Cym-phaCRe-F：SEQ ID No.8；pSEVA321-Cym-phaCRe-R：SEQ ID No.9；
phaCRe-F：SEQ ID No.10；phaCRe-R：SEQ ID No.11；
pSEVA321-Cym-phaCAC-F：SEQ ID No.12；pSEVA321-Cym-phaCAC-R：SEQ ID No.13；
phaCAC-F：SEQ ID No.14；phaCAC-R：SEQ ID No.15；
pSEVA321-Cym-phaCAR-F：SEQ ID No.16；pSEVA321-Cym-phaCAR-R：SEQ ID No.17；
phaCAR-F：SEQ ID No.18；phaCAR-F：SEQ ID No.19；
pSEVA321-Cym-phaC61-3-F：SEQ ID No.20；pSEVA321-Cym-phaC61-3-R：SEQ IDNo.21；
phaC61-3-F：SEQ ID No.22；phaC61-3-R：SEQ ID No.23。
(2)分别以载体与基因序列为模板，反应总体积为50μL，在0.2mL PCR管中依次加入表4所示成分：
表4 Q5高保真DNA聚合酶的PCR体系添加表
混匀后瞬时离心，反应参数为：98℃预变性30s；98℃变性10s，50～72℃退火30s，72℃延伸30s/kb，35个循环后72℃终延伸2min。使用通用性DNA纯化试剂盒(天根生化科技有限公司)回收上述载体及基因，操作按产品说明书提供的步骤进行。
2、重组质粒连接
将上述(1)中得到的载体及基因连接构建重组成为一个新质粒，通过GibsonAssembly Master Mix(购自New England Biolabs)进行连接，总反应体积为10μL，在0.2mLPCR管中依次加入表5所示成分：
表5重组质粒连接体系
在冰上进行混匀，50℃热浴60分钟，获得连接产物。而后将样品储存在冰上或-20℃保存，以备随后的转化。
3、连接产物转化到大肠感受态细胞S17-1
①-80℃冰箱内取出100μL制备的感受态细胞S17-1，迅速插入冰盒内，使其溶解。
②加入10μL连接产物轻轻混匀，冰中放置30分钟。
③42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中放置2分钟，注意不要晃动。添加700μL不含抗生素的无菌LB培养基，混合均匀。
④37℃振荡培养1小时(160～225rpm)，吸取适量体积均匀涂布到含氯霉素抗生素的60LB琼脂培养基平板中，然后倒置过夜培养。
⑤通过菌液PCR对阳性单菌落验证并送去生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序。
4、5种重组质粒导入Halomonas sp.LY04
含不同phaC质粒的重组大肠杆菌S17-1接合到嗜盐菌Halomonas sp.LY04。
①将重组大肠杆菌S17-1(LB+Cm)与Halomonas sp.LY04(60LB)分别培养(摇菌管4～5mL)，待OD600达到0.6～0.8时，各取50μL按1:1混合涂布到无抗20LB平板，37℃，6～8h；
②在含有抗生素Cm的平板上划线培养48h；
③最后再挑取单克隆在60LB含抗生素Cm的平板上验证，利用PCR再次验证，如图9所示。之后进行保菌。将成功导入质粒pSEVA321-Cym-phaC4AK4、pSEVA321-Cym-phaCRe、pSEVA321-Cym-phaCAC、pSEVA321-Cym-phaCAR、pSEVA321-Cym-phaC61-3的菌株分别命名为LY04-phaC4AK4、LY04-phaCRe、LY04-phaCAC、LY04-phaCAR、LY04-phaC61-3。
实施例6不同重组菌利用长链脂肪酸进行发酵
(1)种子液制备：同实施例2中的种子液制备步骤。
(2)发酵液准备：发酵培养基：采用50MM培养体系，具体各组分添加量同实施例2；其中额外增加5g/L的长链脂肪酸10-十一烯酸C11*、十四烷酸C14、5-苯基戊酸5-PVA；枯茗酸诱导剂采用全诱导(10-3mol/L)。
(3)发酵培养：将种子液按5％接种(2.5mL)于500mL锥形瓶内，置于摇床50℃、220rpm培养48h。
(4)细胞干重及PHA含量测定：具体操作同实施例2。
(5)发酵结果：利用不同菌株在不同长链脂肪酸下Halomonas sp.LY04菌株的发酵结果如表6所示，其中3HA mol％指中长链脂肪酸单体摩尔含量。
表6不同重组菌发酵结果
结果表明，LY04菌株采用不同来源的PHA聚合酶，会不同程度的提高3HA单体比例。当PHA聚合酶选择phaC61-3时，3HA比例可达到最高，可达41.98mol％。
本发明采用合成生物学技术筛选出盐单胞菌，探究温度对于盐单胞菌的生长及PHA产量的影响，确定适宜的高温环境，并通过外加脂肪酸为碳源，测定产生的PHA单体类型。后续通过外源引入不同来源的PHA聚合酶实现高产中长链PHA单体的目标。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
SEQ ID No.1
AGAGTTTGATCATGGCTCAG
SEQ ID No.2
GGTTACCTTGTTACGACTT
SEQ ID No.3
AGAGTTTGATCATGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAGCGGTAACAGGGGGTGCTTGCACCCCGCTGACGAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCATAGGAATCTGCCCGGTAGTGGGGGATAACCTGGGGAAACCCAGGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGGGGGCTCCGGCTCCCGCTATCGGATGAGCCTATGTCGGATTAGCTGGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATCCGTAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACATCGGGACTGAGACACGGCCCGAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCCTCGGGTTGTAAAGCACTTTCAGTGAGGAAGAACGCCTGGTGGTTAATACCCATCAGGAAAGACATCACTCACAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGCTTGATAAGCCGGTTGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACGGCATCCGGAACTGTCAAGCTAGAGTGCAGGAGAGGAAGGTAGAATTCCCGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCGGGAGGAATACCAGTGGCGAAGGCGGCCTTCTGGACTGACACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACCAGCCGTTGGGTGCCTAGCGCACTTTGTGGCGAAGTTAACGCGATAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTACTCTTGACATCCTGCGAATTCGGTAGAGATACCTTAGTGCCTTCGGGAACGCAGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTATTTGCCAGCGCGTAATGGCGGGAACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGAGTAGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCCAACTCGCGAGAGTGAGCCAATCCCGAAAAGCCGATCTCAGTCCGGATCGGAGTCTGCAACTCGACTCCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGAATGCCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGACTGCACCAGAAGTGGTTAGCCTAACGCAAGAGGGCGATCACCACGGTGTGGTTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGGGAACCTGCGGCTGGATCACCT
SEQ ID No.4
GAGGACGCCGCATGAGCATGGTATGGATGAACTGTACAAATAA
SEQ ID No.5
AGATGGTTGGCTCATCTAGTATTTCCCCTCTTTCTCTAGTATTAAACAA
SEQ ID No.6
GAGGGGAAATACTAGATGAGCCAACCATCTTATGGCCC
SEQ ID No.7
TCATCCATACCATGCTCATGCGGCGTCCTCCTCT
SEQ ID No.8
AAAGCCAAGGCATGAGCATGGTATGGATGAACTGTACAAATAA
SEQ ID No.9
TTTGCCGGTCGCCATCTAGTATTTCCCCTCTTTCTCTAGTATTAAACAA
SEQ ID No.10
GAGGGGAAATACTAGATGGCGACCGGCAAAGGC
SEQ ID No.11
TCATCCATACCATGCTCATGCCTTGGCTTTGACGTATCG
SEQ ID No.12
GAGGACGCCGCATGAGCATGGTATGGATGAACTGTACAAATAA
SEQ ID No.13
AGATGGTTGGCTCATCTAGTATTTCCCCTCTTTCTCTAGTATTAAACAA
SEQ ID No.14
GAGGGGAAATACTAGATGAGCCAACCATCTTATGGCCC
SEQ ID No.15
TCATCCATACCATGCTCATGCGGCGTCCTCCT
SEQ ID No.16AAAGCCAAGGCATGAGCATGGTATGGATGAACTGTACAAATAA
SEQ ID No.17
AGATGGTTGGCTCATCTAGTATTTCCCCTCTTTCTCTAGTATTAAACAA
SEQ ID No.18
GAGGGGAAATACTAGATGAGCCAACCATCTTATGGCC
SEQ ID No.19
TCATCCATACCATGCTCATGCCTTGGCTTTGACGTAT
SEQ ID No.20
GTGCATGAACGTTAAGCATGGTATGGATGAACTGTACAAATAA
SEQ ID No.21
ATTCTTGTTACTCATCTAGTATTTCCCCTCTTTCTCTAGTATTAAACAA
SEQ ID No.22
GAGGGGAAATACTAGATGAGTAACAAGAATAGCGATGACTTGAATC
SEQ ID No.23
TCATCCATACCATGCTTAACGTTCATGCACATACGTGC
SEQ ID No.24 phaC4AK4
ATGAGCCAACCATCTTATGGCCCGCTGTTCGAGGCCCTGGCCCACTACAATGACAAGCTGCTGGCCATGGCCAAGGCCCAGACAGAGCGCACCGCCCAGGCGCTGCTGCAGACCAATCTGGACGATCTGGGCCAGGTGCTGGAGCAGGGCAGCCAGCAGCCCTGGCAGCTGATCCAGGCCCAGATGAACTGGTGGCAGGATCAGCTCAAGCTGATGCAGCACACCCTGCTGAAAAGCGCAGGCCAGCAGAGCGAGCCGGTGATCACCCCGGAGCGCAGCGATCGCCGCTTCAAGGCCGAGGCCTGGAGCGAACAACCCATCTATGACTACCTCAAGCAGTCCTACCTGCTCACCGCCAGGCACCTGCTGGCCTCGGTGGATGCCCTGGACGGCGTCCCCCAGAAGAGCCGGGAGCGGCTGCGTTTCTTCACCCGTCAGTACGTCAACGCCATGGCACCCAGCAACTTCCTGGCCACCAACCCGGAGCTGCTCAAGCTCACCCTGGAGTCCGACGGCCAGAACCTGGTGCGCGGGCTGGCCCTCTTGGCCGAGGATCTGGAGCGCAGCGCCGATCAGCTCAACATCCGCCTGACCGACGAATCCGCCTTCGAGCTCGGCCGGGATCTGGCGACCACCCCGGGCCGGGTGGTGCAGCGCACCGAGCTCTATGAGCTGATCCAGTACAGCCCCACCACGGAAACCGTGGGCAAGACGCCTGTGCTGATCGTGCCCCCCTTCATCAACAAGTACTACATCATGGACATGCGGCCCCAGAACTCCCTGGTCGCCTGGCTGGTCGCCCAGGGCCAGACGGTGTTCATGATCTCCTGGCGCAACCCGAGCGTAGCCCAGGCCCAAATCGATCTCGACGACTACGTGGTGGATGGCGTCATCGCCGCCCTGGACGGCGTGGAAGCGGCCACCGGCGAGCGGGAGGTGCACGGCATCGGCTACTGCATCGGCGGCACCGCCCTGTCGCTCGCCATGGGCTGGCTGGCGGCGCGGCGCCAGAAGCAGCGGGTGCGCACTGCCACCCTGTTCACCACCCTGCTGGACTTCTCCCAGCCAGGGGAGCTTGGCATCTTCATTCACGAGCCCATCATAGCGGCGCTCGAGGCGCAAAATGAGGCCAAGGGCATCATGGACGGGCGCCAGCTGGCTGTCTCTTTCAGCCTGCTGCGGGAGAACAGCCTCTACTGGAACTACTACATCGACAGCTACCTCAAGGGTCAGAGCCCGGTGGCCTTCGATCTGCTGCACTGGAACAGCGACAGCACCAATGTGGCGGGCAAGACCCACAACAGCCTGCTGCGCCGTCTCTATCTGGAGAACCAGCTGGTGAAGGGGGAGCTCAAGATCCGCAACACCCGCATCGATCTTGGCAAGGTGAAGACCCCTGTGCTGCTGGTGTCGGCGGTGGACGATCACATCGCCCTCTGGCAGGGCACCTGGCAGGGCATGAAGCTGTTTGGCGGGGAGCAGCGCTTCCTCCTGGCAGAGTCCGGCCACATCGCCGGCATCATCAACCCGCCGGTCGCCAACAAGTACGGCTTCTGGCACAACGGGGCCGAGGCCGATAGCCCGGAGAGCTGGCTGGCAGGGGCGACGCATCAGAGCGGCTCCTGGTGGCCCGAGATGATGGGCTTTATCCAGAGCCGTGACGAAGGGTCAGAGCCCGTCCCCGCACGGGTGCCCGAGGAGGGGCTGGCCCCCGCCCCCGGCCACTATGTCAAGGTGCGGCTCAACCCCGTGTTTGCCAGCGCCACAGAGGAGGACGCCGCATGA
SEQ ID No.25 phaCRe
ATGGCGACCGGCAAAGGCGCGGCAGCTTCCACGCAGGAAGGCAAGTCCCAACCATTCAAGGTCACGCCGGGGCCATTCGATCCAGCCACATGGCTGGAATGGTCCCGCCAGTGGCAGGGCACTGAAGGCAACGGCCACGCGGCCGCGTCCGGCATTCCGGGCCTGGATGCGCTGGCAGGCGTCAAGATCGCGCCGGCGCAGCTGGGTGATATCCAGCAGCGCTACATGAAGGACTTCTCAGCGCTGTGGCAGGCCATGGCCGAGGGCAAGGCCGAGGCCACCGGTCCGCTGCACGACCGGCGCTTCGCCGGCGACGCATGGCGCACCAACCTCCCATATCGCTTCGCTGCCGCGTTCTACCTGCTCAATGCGCGCGCCTTGACCGAGCTGGCCGATGCCGTCGAGGCCGATGCCAAGACCCGCCAGCGCATCCGCTTCGCGATCTCGCAATGGGTCGATGCGATGTCGCCCGCCAACTTCCTTGCCACCAATCCCGAGGCGCAGCGCCTGCTGATCGAGTCGGGCGGCGAATCGCTGCGTGCCGGCGTGCGCAACATGATGGAAGACCTGACACGCGGCAAGATCTCGCAGACCGACGAGAGCGCGTTTGAGGTCGGCCGCAATGTCGCGGTGACCGAAGGCGCCGTGGTCTTCGAGAACGAGTACTTCCAGCTGTTGCAGTACAAGCCGCTGACCGACAAGGTGCACGCGCGCCCGCTGCTGATGGTGCCGCCGTGCATCAACAAGTACTACATCCTGGACCTGCAGCCGGAGAGCTCGCTGGTGCGCCATGTGGTGGAGCAGGGACATACGGTGTTTCTGGTGTCGTGGCGCAATCCGGACGCCAGCATGGCCGGCAGCACCTGGGACGACTACATCGAGCACGCGGCCATCCGCGCCATCGAAGTCGCGCGCGACATCAGCGGCCAGGACAAGATCAACGTGCTCGGCTTCTGCGTGGGCGGCACCATTGTCTCGACCGCGCTGGCGGTGCTGGCCGCGCGCGGCGAGCACCCGGCCGCCAGCGTCACGCTGCTGACCACGCTGCTGGACTTTGCCGACACGGGCATCCTCGACGTCTTTGTCGACGAGGGCCATGTGCAGTTGCGCGAGGCCACGCTGGGCGGCGGCGCCGGCGCGCCGTGCGCGCTGCTGCGCGGCCTTGAGCTGGCCAATACCTTCTCGTTCTTGCGCCCGAACGACCTGGTGTGGAACTACGTGGTCGACAACTACCTGAAGGGCAACACGCCGGTGCCGTTCGACCTGCTGTTCTGGAACGGCGACGCCACCAACCTGCCGGGGCCGTGGTACTGCTGGTACCTGCGCCACACCTACCTGCAGAACGAGCTCAAGGTACCGGGCAAGCTGACCGTGTGCGGCGTGCCGGTGGACCTGGCCAGCATCGACGTGCCGACCTATATCTACGGCTCGCGCGAAGACCATATCGTGCCGTGGACCGCGGCCTATGCCTCGACCGCGCTGCTGGCGAACAAGCTGCGCTTCGTGCTGGGTGCGTCGGGCCATATCGCCGGTGTGATCAACCCGCCGGCCAAGAACAAGCGCAGCCACTGGACTAACGATGCGCTGCCGGAGTCGCCGCAGCAATGGCTGGCCGGCGCCATCGAGCATCACGGCAGCTGGTGGCCGGACTGGACCGCATGGCTGGCCGGGCAGGCCGGCGCGAAACGCGCCGCGCCCGCCAACTATGGCAATGCGCGCTATCGCGCAATCGAACCCGCGCCTGGGCGATACGTCAAAGCCAAGGCATGA
SEQ ID No.26 phaCAC
ATGAGCCAACCATCTTATGGCCCGCTGTTCGAGGCCCTGGCCCACTACAATGACAAGCTGCTGGCCATGGCCAAGGCCCAGACAGAGCGCACCGCCCAGGCGCTGCTGCAGACCAATCTGGACGATCTGGGCCAGGTGCTGGAGCAGGGCAGCCAGCAACCCTGGCAGCTGATCCAGGCCCAGATGAACTGGTGGCAGGATCAGCTCAAGCTGATGCAGCACACCCTGCTCAAAAGCGCAGGCCAGCCGAGCGAGCCGGTGATCACCCCGGAGCGCAGCGATCGCCGCTTCAAGGCCGAGGCCTGGAGCGAACAACCCATCTATGACTACCTCAAGCAGTCCTACCTGCTCACCGCCAGGCACCTGCTGGCCTCGGTGGATGCCCTGGAGGGCGTCCCCCAGAAGAGCCGGGAGCGGCTGCGTTTCTTCACCCGCCAGTACGTCAACGCCATGGCCCCCAGCAACTTCCTGGCCACCAACCCCGAGCTGCTCAAGCTGACCCTGGAGTCCGACGGCCAGAACCTGGTGCGCGGACTGGCCCTCTTGGCCGAGGATCTGGAGCGCAGCGCCGATCAGCTCAACATCCGCCTGACCGACGAATCCGCCTTCGAGCTCGGGCGGGATCTGGCCCTGACCCCGGGCCGGGTGGTGCAGCGCACCGAGCTCTATGAGCTCATTCAGTACAGCCCGACTACCGAGACGGTGGGCAAGACACCTGTGCTGATAGTGCCGCCCTTCATCAACAAGTACTACATCATGGACATGCGGCCCCAGAACTCCCTGGTCGCCTGGCTGGTCGCCCAGGGCCAGACGGTATTCATGATCTCCTGGCGCAACCCGGGCGTGGCCCAGGCCCAAATCGATCTCGACGACTACGTGGTGGATGGCGTCATCGCCGCCCTGGACGGCGTGGAGGCGGCCACCGGCGAGCGGGAGGTGCACGGCATCGGCTACTGCATCGGCGGCACCGCCCTGTCGCTCGCCATGGGCTGGCTGGCGGCGCGGCGCCAGAAGCAGCGGGTGCGCACCGCCACCCTGTTCACTACCCTGCTGGACTTCTCCCAGCCCGGGGAGCTTGGCATCTTCATCCACGAGCCCATCATAGCGGCGCTCGAGGCGCAAAATGAGGCCAAGGGCATCATGGACGGGCGCCAGCTGGCGGTCTCCTTCAGCCTGCTGCGGGAGAACAGCCTCTACTGGAACTACTACATCGACAGCTACCTCAAGGGTCAGAGCCCGGTGGCCTTCGATCTGCTGCACTGGAACAGCGACAGCACCAATGTGGCGGGCAAGACCCACAACAGCCTGCTGCGCCGTCTCTACCTGGAGAACCAGCTGGTGAAGGGGGAGCTCAAGATCCGCAACACCCGCATCGATCTCGGCAAGGTGAAGACCCCTGTGCTGCTGGTGTCGGCGGTGGACGATCACATCGCCCTCTGGCAGGGCACCTGGCAGGGCATGAAGCTGTTTGGCGGGGAGCAGCGCTTCCTCCTGGCGGAGTCCGGCCACATCGCCGGCATCATCAACCCGCCGGCCGCCAACAAGTACGGCTTCTGGCACAACGGGGCCGAGGCCGAGAGCCCGGAGAGCTGGCTGGCAGGGGCGACGCACCAGGGCGGCTCCTGGTGGCCCGAGATGATGGGCTTTATCCAGAACCGTGACGAAGGGTCAGAGCCCGTCCCCGCGCGGGTCCCGGAGGAAGGGCTGGCCCCCGCCCCCGGCCACTATGTCAAGGTGCGGCTCAACCCCGTGTTTGCCTGCCCAACAGAGGAGGACGCCGCATGA
SEQ ID No.27 phaCAR
ATGAGCCAACCATCTTATGGCCCGCTGTTCGAGGCCCTGGCCCACTACAATGACAAGCTGCTGGCCATGGCCAAGGCCCAGACAGAGCGCACCGCCCAGGCGCTGCTGCAGACCAATCTGGACGATCTGGGCCAGGTGCTGGAGCAGGGCAGCCAGCAACCCTGGCAGCTGATCCAGGCCCAGATGAACTGGTGGCAGGATCAGCTCAAGCTGATGCAGCACACCCTGCTCAAAAGCGCAGGCCAGCCGAGCGAGCCGGTGATCACCCCGGAGCGCAGCGATCGCCGCTTCAAGGCCGAGGCCTGGAGCGAACAACCCATCTATGACTACCTCAAGCAGTCCTACCTGCTCACCGCCAGGCACCTGCTGGCCTCGGTGGATGCCCTGGAGGGCGTCCCCCAGAAGAGCCGGGAGCGGCTGCGTTTCTTCACCCGCCAGTACGTCAACGCCATGGCCCCCAGCAACTTCCTTGCCACCAATCCCGAGGCGCAGCGCCTGCTGATCGAGTCGGGCGGCGAATCGCTGCGTGCCGGCGTGCGCAACATGATGGAAGACCTGACACGCGGCAAGATCTCGCAGACCGACGAGAGCGCGTTTGAGGTCGGCCGCAATGTCGCGGTGACCGAAGGCGCCGTGGTCTTCGAGAACGAGTACTTCCAGCTGTTGCAGTACAAGCCGCTGACCGACAAGGTGCACGCGCGCCCGCTGCTGATGGTGCCGCCGTGCATCAACAAGTACTACATCCTGGACCTGCAGCCGGAGAGCTCGCTGGTGCGCCATGTGGTGGAGCAGGGACATACGGTGTTTCTGGTGTCGTGGCGCAATCCGGACGCCAGCATGGCCGGCAGCACCTGGGACGACTACATCGAGCACGCGGCCATCCGCGCCATCGAAGTCGCGCGCGACATCAGCGGCCAGGACAAGATCAACGTGCTCGGCTTCTGCGTGGGCGGCACCATTGTCTCGACCGCGCTGGCGGTGCTGGCCGCGCGCGGCGAGCACCCGGCCGCCAGCGTCACGCTGCTGACCACGCTGCTGGACTTTGCCGACACGGGCATCCTCGACGTCTTTGTCGACGAGGGCCATGTGCAGTTGCGCGAGGCCACGCTGGGCGGCGGCGCCGGCGCGCCGTGCGCGCTGCTGCGCGGCCTTGAGCTGGCCAATACCTTCTCGTTCTTGCGCCCGAACGACCTGGTGTGGAACTACGTGGTCGACAACTACCTGAAGGGCAACACGCCGGTGCCGTTCGACCTGCTGTTCTGGAACGGCGACGCCACCAACCTGCCGGGGCCGTGGTACTGCTGGTACCTGCGCCACACCTACCTGCAGAACGAGCTCAAGGTACCGGGCAAGCTGACCGTGTGCGGCGTGCCGGTGGACCTGGCCAGCATCGACGTGCCGACCTATATCTACGGCTCGCGCGAAGACCATATCGTGCCGTGGACCGCGGCCTATGCCTCGACCGCGCTGCTGGCGAACAAGCTGCGCTTCGTGCTGGGTGCGTCGGGCCATATCGCCGGTGTGATCAACCCGCCGGCCAAGAACAAGCGCAGCCACTGGACTAACGATGCGCTGCCGGAGTCGCCGCAGCAATGGCTGGCCGGCGCCATCGAGCATCACGGCAGCTGGTGGCCGGACTGGACCGCATGGCTGGCCGGGCAGGCCGGCGCGAAACGCGCCGCGCCCGCCAACTATGGCAATGCGCGCTATCGCGCAATCGAACCCGCGCCTGGGCGATACGTCAAAGCCAAGGCATGA
SEQ ID No.28 phaC61-3
ATGAGTAACAAGAATAGCGATGACTTGAATCGTCAAGCCTCGGAAAACACCTTGGGGCTTAACCCTGTCATCGGCCTGCGTGGAAAAGATCTGCTGACTTCTGCCCGAATGGTTTTAACCCAAGCCATCAAACAACCCATTCACAGCGTCAAGCACGTCGCGCATTTTGGCATCGAGCTGAAGAACGTGATGTTTGGCAAATCGAAGCTGCAACCGGAAAGCGATGACCGTCGTTTCAACGACCCCGCCTGGAGTCAGAACCCACTCTACAAACGTTATCTACAAACCTACCTGGCGTGGCGCAAGGAACTCCACGACTGGATCGGCAACAGCAAACTGTCCGAACAGGACATCAATCGCGCTCACTTCGTGATCACCCTGATGACCGAAGCCATGGCCCCGACCAACAGTGCGGCCAATCCGGCGGCGGTCAAACGCTTCTTCGAAACCGGCGGTAAAAGCCTGCTCGACGGCCTCACACATCTGGCCAAGGACCTGGTAAACAACGGCGGCATGCCGAGCCAGGTGGACATGGGCGCTTTCGAAGTCGGCAAGAGTCTGGGGACGACTGAAGGTGCAGTGGTTTTCCGCAACGACGTCCTCGAATTGATCCAGTACCGGCCGACCACCGAACAGGTGCATGAGCGACCGCTGCTGGTGGTCCCACCGCAGATCAACAAGTTTTATGTGTTTGACCTGAGCCCGGATAAAAGCCTGGCGCGCTTCTGCCTGAGCAACAACCAGCAAACCTTTATCGTCAGCTGGCGCAACCCGACCAAGGCCCAGCGTGAGTGGGGTCTGTCGACTTACATCGATGCGCTCAAAGAAGCCGTCGACGTAGTTTCCGCCATCACCGGCAGCAAAGACATCAACATGCTCGGCGCCTGCTCCGGTGGCATTACCTGCACCGCGCTGCTGGGTCACTACGCCGCTCTCGGCGAGAAGAAGGTCAATGCCCTGACCCTTTTGGTCACCGTGCTCGACACCACCCTCGACTCCCAGGTTGCACTGTTCGTCGATGAGAAAACCCTGGAAGCTGCCAAGCGTCACTCGTATCAGGCCGGCGTGCTGGAAGGCCGCGACATGGCCAAAGTCTTCGCCTGGATGCGCCCTAACGACCTGATCTGGAACTACTGGGTCAACAACTACCTGCTGGGTAACGAGCCACCGGTCTTCGACATTCTTTTCTGGAACAACGACACCACCCGGTTGCCTGCTGCGTTCCACGGCGATCTGATCGAAATGTTCAAAAATAACCCACTGGTGCGCGCCAATGCACTCGAAGTGAGCGGCACGCCGATCGACCTCAAACAGGTCACTGCCGACATCTACTCCCTGGCCGGCACCAACGATCACATCACGCCCTGGAAGTCTTGCTACAAGTCGGCGCAACTGTTCGGTGGCAAGGTCGAATTCGTGCTGTCCAGCAGTGGGCATATCAAGAGCATTCTGAACCCGCCGGGCAATCCGAAATCACGTTACATGACCAGCACCGACATGCCAGCCACCGCCAACGAGTGGCAAGAAAACTCAACCAAGCACACCGACTCCTGGTGGCTGCACTGGCAGGCCTGGCAGGCCGAGCGCTCGGGCAAACTGAAAAAGTCCCCGACCAGCCTGGGCAACAAGGCCTATCCGTCAGGAGAAGCCGCGCCGGGCACGTATGTGCATGAACGTTAA。

Claims (10)

1.一株盐单胞菌(Halomonas sp.)LY04，所述盐单胞菌的保藏编号为GDMCCNo:63383。
2.根据权利要求1所述的盐单胞菌，其特征在于，所述盐单胞菌的16S rDNA的序列如SEQ ID No.3所示。
3.权利要求1或2所述的盐单胞菌在制备聚羟基脂肪酸酯单体中的应用；所述制备聚羟基脂肪酸酯单体利用饱和脂肪酸和/或不饱和脂肪酸。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述聚羟基脂肪酸酯单体为3-羟基脂肪酸。
5.一种重组盐单胞菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：体外扩增phaC基因序列，插入载体中，得到载体质粒；
S2：将S1所述载体质粒导入权利要求1所述的盐单胞菌中。
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述phaC基因序列为phaC4AK4、phaCRe、phaCAC、phaCAR、phaC61-3中的任意一项。
7.一种重组盐单胞菌，其特征在于，由权利要求5或6所述的构建方法得到。
8.一种制备3-羟基脂肪酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：
权利要求1或2所述的盐单胞菌或权利要求7所述重组盐单胞菌进行菌种活化，然后进行一级、二级种子培养，最后接入发酵培养基进行发酵，得到所述3-羟基脂肪酸。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述发酵的温度为37～50℃。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基包括碳源，所述碳源包括正庚酸、正辛酸、正壬酸、正癸酸、十一酸、10-十一烯酸、十二酸、十三酸、12-十三烯酸、十四酸、13-十四烯酸、十五酸、顺十五碳-10-烯酸、十六酸、15-十六烯酸、十七酸、16-十七烯酸、十八酸、9-十八烯酸、9，12-十八碳二烯酸、顺-9,顺-12,顺-15-十八碳三烯酸、5-苯基戊酸、苯基乙醇酸、4-羟基苯乙酸中的任意一种或多种。
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