CN117427046A - 一种用于装载多肽类药物的缓释微球及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用于装载多肽类药物的载药微球，所述多肽类药物递送载药微球为W1/O/W2结构，由多肽类药物活性物质与亲水凝胶组成内水相(W1)，水难溶性聚合物的有机溶剂作为油相(O)，含乳化剂的溶液作为外水相(W2)。本发明的缓释微球引入了亲水性温敏凝胶与水难溶性聚合物共同载药，增加了载体的亲水性，并将多肽类药物制成金属离子‑多肽类药物活性物质不溶性复合物降低药物溶解度，从而控制药物释放行为。本发明的缓释微球与传统微球相比具有降低药物突释，缩短药物释放平台期，药物整体释药行为更趋于零级释放，释药更加平稳，提高了微球制剂顺应性。

Description

一种用于装载多肽类药物的缓释微球及其制备方法
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种用于装载多肽类药物的缓释微球及其制备方法。
背景技术
多肽和蛋白质药物由于其低毒性和的高特异性，几十年来一直显示出巨大的潜力。除了疫苗接种和诊断外，多肽和蛋白质药物的主要应用是治疗慢性疾病、自身免疫性疾病、艾滋病和癌症等。由于多肽和蛋白质的低吸收和高酶降解性，口服、肺、鼻、眼部和经皮给药在长期治疗中并不常用。相比之下，通常采用静脉注射、植入和皮下注射、肌肉注射等给药方法。然而由于大多数肽和蛋白质药物在体内的半衰期较短，给药初期血浆中药物含量很高，药物进入体内后迅速被清除，很快就会低于有效血药浓度，患者需要长时间、高频率注射药物，以维持药物治疗的效果，长期注射导致患者的顺应性较差。此外，代谢系统中丰富的蛋白酶和pH的波动可能导致蛋白质的变性或降解，进而诱导严重的免疫反应。
为了克服这些缺点，研究人员开发出缓控释给药系统，通过延长药物释放时间，在避免重复给药的同时，很大程度上提高了患者的依从性。特别是对于半衰期较短的药物，缓控释给药系统改变了药物在体内的药物动力学参数，提高了生物利用度。在缓控释给药系统的研究中，通常采用多功能聚合物载药材料作为载体。常用的高分子材料包括合成的聚酯、聚酰胺、聚氨基酸，其中最流行的聚合物之一是聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)，由于其优越的生物相容性和生物降解性，已被美国食品和药物管理局(FDA)批准用于临床使用和药物递送。
然而以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体的多肽类微球类制剂易发生突释高和释放平台期长的问题，如上市制剂在体内5～14天几乎不释放。同时PLGA亲水性较差，水分不易进入微球内部，其水合降解过程缓慢，而且药物在PLGA微球内的分布不均匀。因此，为了缩短多肽类微球的释放平台期，提高亲水性以及改善体内释药行为。寻求一种减少药物突释、缩短微球的释放平台期，延长快速释放期的缓控释递送载药微球是本领域亟待解决的技术问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种装载多肽类药物的缓释微球，该载药微球具有较强的亲水性，能延长快速释放期，缩短微球的释放平台期。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一个方面，本发明提供了一种用于装载多肽类药物的载药微球，所述微球由多肽类药物活性物质、亲水凝胶、水难溶性聚合物、含乳化剂的溶液组成；
所述多肽类药物递送载药微球为W1/O/W2结构；由多肽类药物活性物质与亲水凝胶组成内水相(W1)，水难溶性聚合物的有机溶剂作为油相(O)，含乳化剂的溶液作为外水相(W2)。
优选地，所述亲水凝胶为二聚乳酸-羟基乙酸共聚物聚乙二醇、泊洛沙姆、黄原胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙甲纤维素、聚维酮、卡波姆、海藻酸盐、壳聚糖，以及它们的共聚物和/或混合物中的至少一种。
优选地，所述亲水凝胶为二聚乳酸-羟基乙酸共聚物聚乙二醇。
优选地，所述水难溶性聚合物为聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚丙交酯、聚乙交酯、丙交酯-乙交酯共聚物及它们与聚己内酯或聚乙二醇的共聚物、聚己内酯及其与聚乙二醇的共聚物、聚羟基丁酸、聚羟基戊酸、聚对二氧环己酮、壳聚糖、海藻酸及其盐、聚氰基丙烯酸酯、纤维蛋白、聚酸酐、聚原酸酯、聚酰胺、聚磷腈、聚磷酸酯，以及它们的共聚物和/或混合物中的至少一种；
优选地，所述水难溶性聚合物为聚乳酸-羟基乙酸共聚物。
优选地，所述乳化剂为聚乙烯醇、油酸皂、硬脂酸皂、月桂酸皂、松香油皂、烷基硫酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基磺酸盐、烷基萘基磺酸盐、木质素磺酸盐、磷酸酯盐、硫酸酯盐、季铵盐、烷基铵盐、卵磷脂、脂肪酸甘油酯、蔗糖脂肪酸酯、脂肪酸山梨坦、聚山梨酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、碳氟表面活性剂、含硅表面活性剂、生物表面活性剂、冠醚型表面活性剂、阿拉伯胶、西黄蓍胶、明胶、杏树胶、卵黄、聚乙烯吡咯烷酮或固体微粒乳化剂中的任意一种或几种的混合物；
优选地，所述乳化剂为聚乙烯醇与和NaCl的混合溶液。
优选地，所述多肽类药物递送载药微球中，所述油相(O)有机溶剂为二氯甲烷、冰醋酸、乙腈、三氟乙酸、二甲基亚砜、无水乙醚、己烷、正庚烷、脂肪烃、卤代烃、脂肪酸酯、芳香烃、醚、无水乙醚、环己烷、正己烷、正庚烷中的任意一种或几种的混合物；
优选地，所述有机溶剂为二氯甲烷。
优选地，所述多肽类药物递送载药微球中所述水难溶性聚合物浓度为10～500mg·mL-1；所述聚乙烯醇浓度为0.1～10％；所述NaCl浓度为0～10％。
优选地，所述多肽类药物递送载药微球中所述水难溶性聚合物浓度为30～250mg·mL-1，优选为：100mg·mL-1；所述外水相中聚乙烯醇浓度为0.1～2％，优选为1％；所述外水相NaCl浓度为1～5％，优选为5％。
优选地，所述多肽类药物活性物质与水难溶性聚合物质量之比(即药载比，WEx:WPLGA(％))为1～20％；所述内水相(W1)与油相(O)体积比为1:2～20；所述油相(O)与外水相(W2)体积比为1:2～10。
优选地，所述多肽类药物递送载药微球中，多肽类药物活性物质与水难溶性聚合物质量之比(即药载比，WEx:WPLGA(％))为4～10％，优选为：5％；所述内水相(W1)与油相(O)体积比为1:5～10，优选为1:10；优选地，所述油相(O)与外水相(W2)体积比为1:4～8，优选为1:4.5。
优选地，所述多肽类药物递送载药微球，还包括将多肽类药物活性物质与金属盐溶液形成不溶性复合物，所述不溶复合物与所述亲水凝胶组成内水相(W1)。
优选地，所述多肽类药物活性物质与金属盐溶液质量之比为1:1～10。
优选地，所述多肽类药物活性物质与金属盐溶液质量之比(即MEx:MZn)为1:1～4，优选为1:1。
优选地，所述金属盐溶液包括醋酸锌溶液、硫酸锌溶液、碳酸锌溶液、硝酸锌溶液、氯化锌溶液、亚硝酸锌溶液、亚硫酸锌溶液、硫酸铜溶液、氯化铜溶液、硝酸铜溶液、硝酸镁溶液、氯化镁溶液、硫酸镁溶液、氯化钙溶液、氯酸钙溶液、葡萄糖酸钙溶液、次氯酸钙溶液、高氯酸钙溶液。
优选地，所述金属盐溶液为醋酸锌溶液。
优选地，所述多肽类药物活性物质为艾塞那肽或艾塞那肽盐。
优选地，所述多肽类药物活性物质为索马鲁肽或索马鲁肽盐。
第二个方面，本发明提供了一种多肽类药物递送载药微球的制备方法，所述方法包括如下步骤：
(1)制备亲水温敏凝胶；
(2)将多肽类药物活性物质溶于上述温敏凝胶作为内水相(W1)；
(3)将水难溶性聚合物溶于有机溶剂中作为油相(O)；
(4)将内水相(W1)倒入油相(O)中，高速剪切溶液，形成W1/O初乳；
(5)将W1/O初乳倒入含乳化剂的外水相(W2)中，高速剪切形成W1/O/W2复乳；
(6)旋蒸去除有机溶剂，将上述液体离心，弃去上清液，收集到微球，即得多肽类药物递送载药微球。
优选地，所述步骤(4)初乳剪切速度为6000～20000r·min-1；初乳剪切时间为0.5～10min；所述步骤(5)复乳剪切速度为3000～12000r·min-1，复乳剪切时间为0.5～10min。
优选地，所述步骤(4)初乳剪切速度为8000～16000r·min-1，优选为12000r·min-1。
优选地，所述步骤(4)初乳剪切时间为1～3min，优选为3min。
优选地，所述步骤(5)复乳剪切速度为8000r·min-1，复乳剪切时间为1～3min，优选为2min。
优选地，所述多肽类药物递送载药微球的制备方法还包括制备金属盐与多肽复合物的步骤。
优选地，所述制备金属盐与多肽复合物步骤具体为：将金属盐溶液与多肽溶液混合均匀，低温孵育，冻干，即得金属盐溶液多肽复合物。
优选地，所述步骤低温孵育具体为：4℃，孵育24小时，孵育溶剂体积为5～10mL，优选为10mL。
本发明的有益效果在于：本发明的用于装载多肽类药物的缓释微球(Ex-gel-Ms和X-Ex-gel-Ms，“X”表示金属离子)引入亲水性温敏凝胶(例如：PLGA-PEG-PLGA)与水难溶性聚合物(例如：PLGA)共同载药，增加了载体的亲水性，并将多肽类药物制成X-Ex不溶性复合物降低药物溶解度，从而降低药物突释。Ex-gel-Ms和X-Ex-gel-Ms的平台期均比Ex-Ms短，平台期越短，快速释放期的起点越早，提高了药物的生物利用度。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1为实施例1内水相与油相体积之比的影响结果示意图；
图2为实施例1外水相NaCl浓度的影响结果示意图；其中(A)为NaCl浓度2％，(B)NaCl浓度3％，(C)NaCl浓度4％，(D)NaCl浓度5％；
图3为实施例1初乳剪切速度的影响结果示意图；其中(A)初乳剪切速度10000r·min-1，(B)初乳剪切速度12000r·min-1，(C)初乳剪切速度14000r·min-1；
图4为三种微球的粒径及粒径分布示意图；其中(A)Ex-Ms，(B)Ex-gel-Ms，(C)Zn-Ex-gel-Ms；
图5为三种微球的SEM图；(A)Ex-Ms，(B)Ex-gel-Ms，(C)Zn-Ex-gel-Ms；
图6为三种微球粉末外观图；
图7为三种微球体外释放曲线图；
图8为三种微球24天血药浓度曲线图；
图9为三种微球24小时内血药浓度曲线图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
本实施方式，提供一种多肽类药物递送载药微球(记为：Ex-gel-Ms)，所述微球由多肽类药物活性物质、亲水凝胶、水难溶性聚合物、含乳化剂的溶液组成；
所述多肽类药物递送载药微球为W1/O/W2结构；由多肽类药物活性物质与亲水凝胶组成内水相(W1)，水难溶性聚合物的有机溶剂作为油相(O)，含乳化剂的溶液作为外水相(W2)。
示例性地，所述水难溶性聚合物可以是聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)，所述亲水凝胶可以是二聚乳酸-羟基乙酸共聚物聚乙二醇(PLGA-PEG-PLGA)，所述有机溶剂可以是二氯甲烷，所述含乳化剂的溶液可以是聚乙烯醇(PVA)与NaCl的混合溶液，
所述亲水凝胶还可以是泊洛沙姆、黄原胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙甲纤维素、聚维酮、卡波姆、海藻酸盐、壳聚糖，以及它们的共聚物和/或混合物中的至少一种。
所述水难溶性聚合物还可以是聚丙交酯、聚乙交酯、丙交酯-乙交酯共聚物及它们与聚己内酯或聚乙二醇的共聚物、聚己内酯及其与聚乙二醇的共聚物、聚羟基丁酸、聚羟基戊酸、聚对二氧环己酮、壳聚糖、海藻酸及其盐、聚氰基丙烯酸酯、纤维蛋白、聚酸酐、聚原酸酯、聚酰胺、聚磷腈、聚磷酸酯，以及它们的共聚物和/或混合物中的至少一种。
所述有机溶剂还可以是冰醋酸、乙腈、三氟乙酸、二甲基亚砜、无水乙醚、己烷、正庚烷、脂肪烃、卤代烃、脂肪酸酯、芳香烃、醚、无水乙醚、环己烷、正己烷、正庚烷中的任意一种或几种的混合物。
所述乳化剂还可以是油酸皂、硬脂酸皂、月桂酸皂、松香油皂、烷基硫酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基磺酸盐、烷基萘基磺酸盐、木质素磺酸盐、磷酸酯盐、硫酸酯盐、季铵盐、烷基铵盐、卵磷脂、脂肪酸甘油酯、蔗糖脂肪酸酯、脂肪酸山梨坦、聚山梨酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、碳氟表面活性剂、含硅表面活性剂、生物表面活性剂、冠醚型表面活性剂、阿拉伯胶、西黄蓍胶、明胶、杏树胶、卵黄、聚乙烯吡咯烷酮或固体微粒乳化剂中的任意一种或几种的混合物。
本实施方式中，所述多肽类药物递送载药微球中，多肽类药物活性物质与PLGA质量之比(即药载比，WEx:WPLGA(％))为4～10％，优选为：5％；所述PLGA浓度为30～250mg·mL-1，优选为：100mg·mL-1；所述油相(O)有机溶剂为二氯甲烷；所述内水相(W1)与油相(O)体积比为1:5～10，优选为1:10；所述油相(O)与外水相(W2)体积比为1:4～8，优选为1:4.5；所述外水相中PVA浓度为0.1～2％，优选为1％；所述外水相NaCl浓度为1～5％，优选为5％。
上述多肽类药物递送载药微球(记为：Ex-gel-Ms)采用W1/O/W2复乳-溶剂挥发法制备，具体制备过程如下：
(1)制备PLGA-PEG-PLGA温敏凝胶；
(2)将多肽类药物活性物质溶于上述温敏凝胶作为内水相(W1)；
(3)将PLGA溶于二氯甲烷中作为油相(O)；
(4)将内水相(W1)倒入油相(O)中，高速剪切溶液，形成W1/O初乳；
(5)将W1/O初乳倒入含PVA和NaCl的外水相(W2)中，高速剪切形成W1/O/W2复乳；
(6)将复乳倒入NaCl溶液中，旋蒸去除二氯甲烷；
(7)将上述液体离心，弃去上清液，收集到微球，即得Ex-gel-Ms微球。
在上述制备方法中，所述步骤(4)初乳剪切速度为8000～16000r·min-1，优选为12000r·min-1；初乳剪切时间为1～3min，优选为3min；所述步骤(5)复乳剪切速度为8000r·min-1，复乳剪切时间为1～3min，优选为2min。
本实施例方式，还提供一种金属盐多肽复合物凝胶微球(记为：X-Ex-gel-Ms)，该微球由多肽类药物活性物质、金属盐、亲水凝胶、水难溶性聚合物、含乳化剂的溶液组成；
所述多肽类药物递送载药微球为W1/O/W2结构；由多肽类药物活性物质与金属盐形成不溶性复合物，再与亲水凝胶组成内水相(W1)，水难溶性聚合物的有机溶剂作为油相(O)，含乳化剂的溶液作为外水相(W2)。
示例性地，本实施方式中所述金属盐可以是醋酸锌。
本实施方式中，所述多肽类药物递送载药微球中，所述多肽类药物活性物质与醋酸锌质量之比(即MEx:MZn)为1:1～4，优选为1:1；多肽类药物活性物质与PLGA质量之比(即药载比，WEx:WPLGA(％))为4～10％，优选为：5％；所述PLGA浓度为30～250mg·mL-1，优选为：100mg·mL-1；所述油相(O)有机溶剂为二氯甲烷；所述内水相(W1)与油相(O)体积比为1:5～10，优选为1:10；所述油相(O)与外水相(W2)体积比为1:4～8，优选为1:4.5；所述外水相中PVA浓度为0.1～2％，优选为1％；所述外水相NaCl浓度为1～5％，优选为5％。
上述醋酸锌多肽复合物凝胶微球(记为：Zn-Ex-gel-Ms)采用W1/O/W2复乳-溶剂挥发法制备，具体制备过程如下：
(1)将醋酸锌溶液与多肽溶液混合均匀，低温孵育，冻干，即得Zn-Ex不溶性复合物；
(2)制备PLGA-PEG-PLGA温敏凝胶；
(3)将Zn-Ex不溶性复合物溶于上述温敏凝胶作为内水相(W1)；
(4)将PLGA溶于二氯甲烷中作为油相(O)；
(5)将内水相(W1)倒入油相(O)中，高速剪切溶液，形成W1/O初乳；
(6)将W1/O初乳倒入含PVA和NaCl的外水相(W2)中，高速剪切形成W1/O/W2复乳；
(7)将复乳倒入NaCl溶液中，旋蒸去除二氯甲烷；
(8)将上述液体离心，弃去上清液，收集到微球，即得Ex-gel-Ms微球。
在上述制备方法中，所述(1)低温孵育具体为：4℃，孵育24小时，孵育溶剂体积为5～10mL，优选为10mL；步骤(4)初乳剪切速度为8000～16000r·min-1，优选为12000r·min-1；初乳剪切时间为1～3min，优选为3min；所述步骤(5)复乳剪切速度为8000r·min-1，复乳剪切时间为1～3min，优选为2min。
本实施方式中，所述二聚乳酸-羟基乙酸共聚物聚乙二醇(PLGA-PEG-PLGA)为亲水凝胶，在本发明中亲水凝胶还可以是泊洛沙姆、黄原胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙甲纤维素、聚维酮、卡波姆、海藻酸盐、壳聚糖，以及它们的共聚物和/或混合物中的至少一种。
本实施方式中，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为水难溶性聚合物，在本发明中水难溶性聚合物还可以是聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚丙交酯、聚乙交酯、丙交酯-乙交酯共聚物及它们与聚己内酯或聚乙二醇的共聚物、聚己内酯及其与聚乙二醇的共聚物、聚羟基丁酸、聚羟基戊酸、聚对二氧环己酮、壳聚糖、海藻酸及其盐、聚氰基丙烯酸酯、纤维蛋白、聚酸酐、聚原酸酯、聚酰胺、聚磷腈、聚磷酸酯，以及它们的共聚物和/或混合物中的至少一种。
本实施方式中，聚乙烯醇(PVA)与NaCl组成外水相形成乳化剂，在本发明中乳化剂还可以是油酸皂、硬脂酸皂、月桂酸皂、松香油皂、烷基硫酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基磺酸盐、烷基萘基磺酸盐、木质素磺酸盐、磷酸酯盐、硫酸酯盐、季铵盐、烷基铵盐、卵磷脂、脂肪酸甘油酯、蔗糖脂肪酸酯、脂肪酸山梨坦、聚山梨酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、碳氟表面活性剂、含硅表面活性剂、生物表面活性剂、冠醚型表面活性剂、阿拉伯胶、西黄蓍胶、明胶、杏树胶、卵黄、聚乙烯吡咯烷酮或固体微粒乳化剂中的任意一种或几种的混合物。
本发明中油相(O)有机溶剂还可以是二氯甲烷、冰醋酸、乙腈、三氟乙酸、二甲基亚砜、无水乙醚、己烷、正庚烷、脂肪烃、卤代烃、脂肪酸酯、芳香烃、醚、无水乙醚、环己烷、正己烷、正庚烷中的任意一种或几种的混合物。
优选地，所述多肽类药物递送载药微球中所述水难溶性聚合物浓度可以为10～500mg·mL-1；所述聚乙烯醇浓度可以为0.1～10％；所述NaCl浓度可以为0～10％。
优选地，所述多肽类药物活性物质与水难溶性聚合物质量之比(即药载比，WEx:WPLGA(％))可以为1～20％；所述内水相(W1)与油相(O)体积比可以为1:2～20；所述油相(O)与外水相(W2)体积比可以为1:2～10。
优选地，所述多肽类药物递送载药微球，还包括将多肽类药物活性物质与金属盐溶液形成不溶性复合物，所述不溶复合物与所述亲水凝胶组成内水相(W1)。
本发明中所述多肽类药物活性物质还可以与其他金属盐溶液形成不溶复合物。
本发明中，金属盐还可以是硫酸锌、碳酸锌、硝酸锌、氯化锌、亚硝酸锌、亚硫酸锌、硫酸铜、氯化铜、硝酸铜、硝酸镁、氯化镁、硫酸镁、氯化钙、氯酸钙、葡萄糖酸钙、次氯酸钙、高氯酸钙。
实施例1
本实施例提供一种艾塞那肽凝胶微球(记为：Ex-gel-Ms)的制备方法，该方法包括以下步骤：
采用W1/O/W2复乳-溶剂挥发法制备艾塞那肽凝胶微球，具体制备过程如下：
(1)精密称取0.3g PLGA-PEG-PLGA凝胶于5mL西林瓶中，加入1.5mL蒸馏水，25℃水浴溶胀48小时，即得温敏凝胶；
(2)精密移取上述制备的温敏凝胶0.4mL(含PLGA-PEG-PLGA 75mg)，精密称量20mg的艾塞那肽溶于温敏凝胶作为内水相(W1)；
(3)精密称量400mg PLGA溶于二氯甲烷中作为油相(O)；
(4)将内水相(W1)倒入油相(O)中，高速分散机以一定转速剪切溶液，形成W1/O初乳；
(5)将W1/O初乳倒入含1％的PVA和1％NaCl的外水相中，高速剪切形成W1/O/W2复乳；
(6)将复乳倒入50mL的NaCl溶液中，40℃旋蒸20min去除二氯甲烷；
(7)将上述液体1500r·min-1离心5min，弃去上清液，将收集到的微球用蒸馏水洗涤3次，冻干除去水分即得艾塞那肽Ex-gel-Ms微球。
本实施例对药载比(即多肽药物与PLGA质量之比WEx:WPLGA％)进行了优化，在固定以下实验参数：外水相NaCl浓度1％、PVA浓度为1％、PLGA浓度为100mg·mL-1、内水相体积为0.4mL，外水相体积为18mL，分别考察药载比为4％、5％、6％对包封率及载药量的影响，结果见表1：
表1WEx:WPLGA的考察
结果表明：PLGA对于药物的装载能力是有限的，随着药载比的增加，微球的载药量先提高后几乎不变，包封率先不变后下降，结果表明持续增加投药量，载药量不会持续增加。由于内水相中药物浓度过大时，内外水相的药物浓度梯度增大，内水相渗透压随之增大，外水相水分向内迁移，导致内水相体积增加，液滴在内部聚集，同时增加了内水相穿过油相与外水相融合的概率，药物在这个过程中泄露，导致包封率降低。因此在载药量区别不大的情况下选择包封率更大的处方，即药载比为5％的方案。
本实施例对PLGA浓度进行了优化，固定以下实验参数，外水相NaCl浓度为1％，PVA浓度为1％，内水相体积为0.4mL，外水相体积为18mL，药载比5％，分别考察PLGA浓度为50、100、200mg·mL-1时对微球包封率的影响，结果见表2：
表2PLGA浓度的影响
结果表明：当油相中PLGA浓度从50mg·mL-1提升到100mg·mL-1时，包封率和载药量显著提升。这是由于PLGA浓度提高，增加了油相的黏度，PLGA析出加快，阻碍了内水相中药物向外扩散，因此药物包封率提高，继续提高PLGA浓度至200mg·mL-1，包封率不再升高，考虑到微球密度太大不利于后期的释放，因此选择PLGA浓度为100mg·mL-1作为最佳方案。
本实施例对内水相与油相体积比进行了优化，微球制备过程中，内水相体积对初乳粒径及稳定性都有重要影响，固定以下实验参数，外水相NaCl浓度为1％，PVA浓度为1％，PLGA浓度为100mg·mL-1，外水相体积为18mL，药载比为5％，分别考察内水相与油相体积为1:5、1:8、1:10时对微球包封率、载药量和突释的影响。结果如表3所示：
表3内水相与油相体积之比的影响
如上表所示，当内水相:油相＝1:5时，微球的包封率仅为47.63％，而当内水相:油相降低至1:10时，微球的包封率升至85.17％。这是由于内水相体积越大，油相对于内水相的包裹作用越弱，内水相的液滴越容易富集在油水界面附近，内水相中的水分更容易向外水相逃逸。当内水相:油相＝1:5降至1:8时，突释下降明显，这是由于内水相液滴聚集在油水界面，冻干后留下的孔洞，孔洞中药物在释放介质中迅速扩散。因此选择内水相:油相＝1:10为最佳方案。
本实施例对油相与外水相体积比进行了优化，在微球制备过程中，外水相体积对微球的粒径影响较大，固定以下实验参数，外水相NaCl浓度为1％，PVA浓度为1％，PLGA浓度100mg·mL-1，V内水相：V油相＝1:10，理论载药量5％，分别考察油相:外水相为1:4.5、1:5.5、1:6.5时对微球粒径的影响。结果如表4所示：
表4油相与外水相体积之比的影响
结果表明：随着外水相体积的增加，微球粒径变大，粒径均匀度下降，这是由于在固定的剪切力下，水相体积越大，整体效率越低，有利于形成较大的乳状液滴，从而增加微球的粒径。根据粒径分布结果显示，剪切效率高时，粒径分布更加均匀，因此选择油相:外水相＝1:4.5作为微球的本发明最佳方案。
本实施例对外水相中PVA浓度进行了优化，在微球形成复乳的过程中，外水相需要添加乳化剂来降低油水两相的界面张力，防止液滴破裂凝聚，提高复乳的稳定性，一般常用的乳化剂是聚乙烯醇(PVA)。固定以下实验参数，外水相NaCl浓度为1％，PLGA浓度100mg·mL-1，内水相:油相＝1:10，油相:外水相＝1:4.5，药载比为5％，分别考察0.5％、1％、2％的PVA溶液对包封率及粒径的影响。结果如表5所示：
表5外水相PVA浓度的影响
结果表明：外水相PVA浓度从0.5到1％时，包封率略微升高，粒径下降，但粒径均匀度提高。这是由于PVA在外水相中作为表面活性剂，通过降低表面张力增强复乳的稳定性，减少复乳的凝聚，因此粒径更加均匀且粒度降低，而复乳稳定性的增加了药物的包封率。当PVA浓度升至2％时，微球的包封率并无显著提升，且粒径均匀度下降，可能由于PVA浓度变大，复乳黏度增大，剪切不充分，导致的粒径均匀度下降。因此选择1％作为外水相中的PVA的最佳浓度。
本实施例对外水相NaCl的浓度进行了优化，复乳溶剂挥发法制备微球的过程中，通过加入NaCl调节外水相的渗透压，是影响微球包封率及表面形态的重要参数，内水相为PLGA-PEG-PLGA凝胶时，其渗透压增大，内水相的渗透压对微球的包封率影响较大。固定以下参数：初乳剪切速度12000r·min-1，初乳剪切时间2min，复乳剪切速度8000r·min-1，复乳剪切时间3min，分别考察外水相NaCl浓度为2％、3％、4％、5％对微球性质的影响。结果如表6所示：
表6外水相NaCl浓度的影响
如上表所示：提高外水相的渗透压，包封率及载药量也随之提高，当内水相换成PLGA-PEG-PLGA凝胶，内水相的渗透压显著提高。扫描电镜图2表明：当外水相中NaCl浓度为2％时，微球的的表面有较多空洞，粒径不均匀，小粒径较多，随着NaCl浓度提高至5％，微球表面光滑，孔洞减少，粒径均匀度提高。当内外渗透压平衡时，内水相加入PLGA-PEG-PLGA凝胶使初乳的黏度提高，从而提高了初乳的稳定性，因此制得的微球均一性提高。
本实施例对初乳剪切速度进行了优化，固定以下参数：初乳剪切时间2min，复乳剪切速度8000r·min-1，复乳剪切时间3min，NaCl浓度为5％，分别考察初乳剪切速度为10000、12000、14000r·min-1时对微球性质的影响。结果如表7所示：
表7初乳剪切速度的影响
结果如上表所示：随着初乳剪切速度的提高，微球的包封率随之提高，初乳剪切速度为12000r·min-1时，包封率最高为91.37％，继续提高初乳剪切速度，微球的包封率下降。这是由于初乳剪切速度过快，形成很多小粒径液滴，小粒径液滴容易凝聚形成大液滴，造成药物泄露，导致药物包封率降低。
扫描电镜图3显示：初乳剪切速度为10000r·min-1时，微球粒径较大且均匀，这是由于较低的剪切速度形成大初乳粒径较大，进而形成的微球粒径较大。提高初乳剪切速度至12000r·min-1时，微球的粒径变小，继续提高初乳剪切速度至14000r·min-1时，微球的粒径均匀度明显下降，出现大粒径微球，这是初乳中的小液滴凝聚形成大液滴，进而形成较大的微球，而未凝聚的小液滴形成较小的微球，导致微球整体粒径分布不均匀，因此选择12000r·min-1作为初乳剪切最佳速度。
本实施例对初乳剪切时间进行了优化，固定以下参数：初乳剪切速度12000r·min-1，复乳剪切速度8000r·min-1，复乳剪切时间3min，NaCl浓度为5％，分别考察初乳时间为1、2、3min时对微球性质的影响。结果如表8所示：
表8初乳剪切时间考察
结果表明：随着初乳剪切时间的增加，微球包封率随之升高。增加初乳剪切时间，有利于初乳的充分剪切，使得初乳粒径更加均匀，从而增加微球的包封率。相较于Ex-Ms，最优初乳剪切时间延长了1min，这是由于初乳黏度增加，同样的剪切转速下，剪切效率降低，延长剪切时间有利于充分剪切。因此选择3min作为初乳剪切最佳时间。
本实施例对复乳剪切时间考察进行了优化，固定以下参数：初乳剪切速度12000r·min-1，初乳剪切时间3min，复乳剪切速度8000r·min-1，NaCl浓度为5％，分别考察复乳时间为1、2、3min时对微球性质的影响。结果如表9所示：
表9复乳剪切时间考察
结果表明：随着复乳剪切时间的增加，微球包封率先升高后下降。这是由于：增加复乳剪切时间，使得初乳更加均匀的分散在外水相中，形成更加均匀的复乳，使药物更好的包裹在微球中。而复乳剪切时间过长时，复乳的粒径继续缩小，小粒径微球对于药物的包裹能力要弱于大粒径的微球，所以微球的包封率下降，所以选择2min为复乳剪切的最佳时间。
实施例2
本实施例提供一种索马鲁肽凝胶微球(记为：Sem-gel-Ms)的制备方法，该方法包括以下步骤：
采用W1/O/W2复乳-溶剂挥发法制备索马鲁肽凝胶微球，具体制备过程如下：
(1)精密称取0.3g PLGA-PEG-PLGA凝胶于5mL西林瓶中，加入1.5mL蒸馏水，25℃水浴溶胀48小时，即得温敏凝胶；
(2)精密移取上述制备的温敏凝胶0.4mL(含PLGA-PEG-PLGA 75mg)，精密称量20mg的索马鲁肽溶于温敏凝胶作为内水相(W1)；
(3)精密称量400mg PLGA溶于二氯甲烷中作为油相(O)；
(4)将内水相(W1)倒入油相(O)中，高速分散机以一定转速剪切溶液，形成W1/O初乳，初乳剪切速度为10000r·min-1，剪切时间为3min；
(5)将W1/O初乳倒入含5％的PVA和1％NaCl的外水相中，高速剪切形成W1/O/W2复乳；复乳剪切速度8000r·min-1，剪切时间为2min；
(6)将复乳转移至50mL浓度为5％的NaCl的水溶液中，40℃旋蒸20min，去除二氯甲烷；
(7)将上述液体1500r·min-1离心5min，弃去上清液，将收集到的微球用蒸馏水洗涤3次，冻干除去水分即得索马鲁肽Sem-gel-Ms微球。
实施例3
本实施例提供一种醋酸锌艾塞那肽复合物凝胶微球(记为：Zn-Ex-gel-Ms)的制备方法，该方法包括以下步骤：
采用W1/O/W2复乳-溶剂挥发法制备醋酸锌艾塞那肽复合物凝胶微球，具体制备过程如下：
(1)醋酸锌艾塞那肽(记为：Zn-Ex)不溶性复合物的制备：精密称量20mg艾塞那肽溶于5mL蒸馏水中，搅拌溶解制成艾塞那肽溶液，精密称量20mg醋酸锌溶于5mL蒸馏水，搅拌溶解形成醋酸锌溶液，将醋酸锌溶液缓慢倒入艾塞那肽溶液，常温搅拌5min，置于4℃冰箱孵育24小时，冻干，即得Zn-Ex不溶性复合物；
(2)温敏凝胶的制备：精密称取0.3g PLGA-PEG-PLGA凝胶于5mL西林瓶中，加入1.5mL蒸馏水，25℃水浴溶胀48小时，即得温敏凝胶。
(3)20mg Zn-Ex不溶性复合物溶于0.4mL温敏凝胶(含PLGA-PEG-PLGA 75mg)中，作为内水相W1；
(4)4mLPLGA浓度为100mg·mL-1的二氯甲烷溶液作为油相O；
(5)18mL含5％NaCl和1％PVA水溶液作为外水相W2；
(6)将内水相W1倒入油相O中，12000r·min-1转速下剪切3min，形成W1/O初乳；
(7)将所得初乳倒入18mL外水相W2中，8000r·min-1转速下剪切2min，形成W1/O/W2复乳；
(8)将复乳转移至50mL浓度为5％的NaCl的水溶液中，40℃旋蒸20min，去除二氯甲烷；
(9)1500r·min-1离心5min，弃去上清液，将收集到的微球用蒸馏水洗涤3次，冻干除去水分即得Zn-Ex-gel-Ms。
本实施例中对MEx:MZn的质量比进行了优化，固定反应温度4℃，孵育溶剂蒸馏水体积10mL，分别在考察MEx:MZn为1:1，1:2，1:4时对Zn-Ex不溶性复合物性质的影响。
表10艾塞那肽与醋酸锌质量之比
结果表明：在MEx:MZn的比例发生改变时，对粒径的改变较小，当MEx:MZn＝1:1时，PDI最小，因此选择MEx:MZn＝1:1为最佳方案。
本实施例中对孵育溶剂体积进行了优化，固定反应温度4℃，MEx:MZn＝1:1，分别考察孵育溶剂体积为5、8、10mL时对Zn-Ex不溶性复合物的影响。
表11孵育溶剂体积
结果表明：随着孵育溶剂体积的增大，Zn-Ex不溶性复合物的粒径略有增大，PDI显著降低，所以选择10mL作为孵育溶剂的最佳体积。将制备的Zn-Ex不溶性复合物按上述方法制备Zn-Ex-gel-Ms，微球包封率为88.90％，载药量为3.47％对比例
本对比例提供一种艾塞那肽微球(记为：Ex-Ms)递送载药微球的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)0.4mL浓度为50mg·mL-1的艾塞那肽水溶液作为内水相W1；
(2)4mLPLGA浓度为100mg·mL-1的二氯甲烷溶液作为油相O；
(3)18mL含1％NaCl和1％PVA水溶液作为外水相W2；
(4)将内水相W1倒入油相O中，12000r·min-1转速下剪切2min，形成W1/O初乳；
(5)将所得初乳倒入18mL外水相W2中，8000r·min-1转速下剪切1min，形成W1/O/W2复乳；
(6)将复乳转移至50mL浓度为1％的NaCl的水溶液中，40℃旋蒸20min，去除二氯甲烷；
(7)1500r·min-1离心5min，弃去上清液，将收集到的微球用蒸馏水洗涤3次，冻干除去水分即得艾塞那肽Ex-Ms微球。
实验例三种微球(即Ex-Ms、Ex-gel-Ms、Zn-Ex-gel-Ms)的表征与体外释放1、对上述三种实施例艾塞那肽微球的载药量、包封率进行测定方法：
表12微球的载药量和包封率
2、微球的粒径及粒径分布
粒径及粒径分布是影响微球性质的关键参数，采用马尔文激光粒度分析仪测定微球粒径。结果如表13、图4所示。
表13微球的粒径及粒径分布
结果表明，三种微球的粒径均匀度均良好。
3、微球的外观形态
用扫描电镜SEM对微球表面进行表征，三种微球均表面光滑无孔洞，如图5所示；对微球的外观表征，微球呈流动性良好的白色粉末，如图6所示。
4、三种微球体内释药与体外释放考察
(1)体外释放：
将三种微球进行体外释放，精密称定微球若干份，置于2mL EP管中，每个EP管中加入1mLpH7.4的磷酸盐缓冲液，缓冲盐中含有0.02％的吐温-80作为微球聚集抑制剂。将EP管置于37℃恒温气浴摇床中，100r·min-1振荡，每天取出EP管，5000r·min-1离心5min，弃去上清液，重新加入1mL释放介质。于1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40天取出部分样品，离心弃去上清液，冻干沉淀，将沉淀用150μL乙腈溶解，加入850μL纯水，8000r·min-1离心5min，上清液过0.22μm微孔滤膜，进样20μL，将药物峰面积代入标准曲线，计算微球中残余药量，绘制药物累计释放曲线。体外释放曲线结果如表14、图7所示。
表14微球体外释放情况
结果表明：(1)Zn-Ex-gel-Ms突释低于Ex-gel-Ms，Ex-gel-Ms突释低于Ex-Ms，说明使用PLGA-PEG-PLGA与PLGA共载药显著降低突释，将艾塞那肽制成Zn-Ex不溶性复合物可进一步降低突释。
这是由于Ex-Ms微球制备过程中，内水相不稳定，易凝聚成较大液滴，大分子水溶性药物易分布在微球表面，冻干后表层留下孔洞，微球放入释放介质中表层形成水溶性孔道，孔洞中药物迅速向外扩散导致突释最高。Ex-gel-Ms制剂以凝胶作为内水相时，凝胶比水黏度大，因而增加了初乳的稳定性，初乳液滴在复乳中分布更加均匀，凝胶不易聚集在微球表面，药物在微球中均匀分布，而且药物与PLGA亲和力弱，与凝胶亲和力强，分散在凝胶中的药物不会迅速扩散到释放介质中，凝胶对药物起到缓冲作用，因此突释比Ex-Ms减少。Zn-Ex-gel-Ms突释最低的原因是：Zn-Ex在水中溶解度低，释放介质进入微球后不会立即全溶于水中向外扩散，所以突释最少。
Zn-Ex-gel-Ms与Ex-gel-Ms平台期均比Ex-Ms短，使用PLGA-PEG-PLGA与PLGA共载药缩短平台期。Ex-Ms平台期最长是由于PLGA的亲水性较差，水分不易进入微球内部，PLGA水合降解过程缓慢，而且药物在PLGA微球内的分布不均匀，有大量药物分布于微球表层，当表层药物释放完全后，微球内部药物大量减少，内部由药物组成的亲水性通道较少，导致微球的溶蚀速度较慢，造成平台期较长。Ex-gel-Ms将内水相换成温敏凝胶后，由于温敏凝胶具有较强的亲水性，吸引释放介质中水分进入微球，在微球内部形成孔道，加速微球溶胀的过程，微球经过突释期后，内部仍存有大量药物，使得微球内部有较多的亲水性孔道，因此平台期比Ex-Ms短。Zn-Ex-gel-Ms在1-4天仍有较多释放是因为，Zn-Ex在突释阶段仅有少量药物以分子形式存在于凝胶中，在2-4天期间Zn-Ex不溶性复合物在凝胶基质中迅速向分子形式艾塞那肽转变，这部分药量会在此期间迅速释放。
Zn-Ex-gel-Ms释放周期长于Ex-gel-Ms，Ex-gel-Ms释放周期长于Ex-Ms，说明使用PLGA-PEG-PLGA与PLGA共载药延长释放周期，将艾塞那肽制成Zn-Ex不溶性复合物可进一步延长释放周期。Ex-gel-Ms快速释放期长于Ex-Ms，Zn-Ex-gel-Ms快速释放期长于Ex-gel-Ms，说明使用PLGA-PEG-PLGA与PLGA共载药可延长快速释放期，将艾塞那肽制成Zn-Ex不溶性复合物延长快速释放期。
Ex-Ms的快速释放期最短，是由于前期突释量太大，后期可释放的药量较少，药物与PLGA亲和性较差，当微球溶胀后，药物迅速通过水溶性孔道向外迁移。Ex-gel-Ms内水相换成凝胶时，微球溶胀后，药物与凝胶有亲和力，凝胶基质可起到缓冲作用，从而延长快速释放期。Zn-Ex-gel-Ms中的艾塞那肽整个释放期间仍有一部分以不溶性复合物状态存在，所以快速释放过程进一步延长。
(2)体内药物动力学：
将三种微球注入SD大鼠，进行大鼠体内药动学实验，三种微球在体内释药24天，24d血药浓度曲线见图8，24h内血药浓度曲线见图9。根据体内药动学数据显示，Ex-Ms、Ex-gel-Ms、Zn-Ex-gel-Ms三种微球的Cmax分别为84.985ng·mL-1、42.22ng·mL-1、35.04ng·mL-1，Zn-Ex-gel-Ms突释最低，优于其他两种制剂；三种微球的AUC0-24d分别为127.04、151.33、152.45ng·mL-1·d-1，相对生物利用度Fr结果表明，Ex-gel-Ms、Zn-Ex-gel-Ms的生物利用度AUC0-24d均优于Ex-Ms，方差分析结果显示三组制剂生物不等效。
Cmax比较：Ex-Ms>Ex-gel-Ms>Zn-Ex-gel-Ms，结果表明加入温敏凝胶PLGA-PEG-PLGA、将艾塞那肽制成Zn-Ex不溶性复合物均降低突释。
Fr分析：Ex-gel-Ms>Ex-Ms，Zn-Ex-gel-Ms>Ex-Ms结果表明加入温敏凝胶后药物生物利用度提高。
MRT比较：Zn-Ex-gel-Ms>Ex-gel-Ms>Ex-Ms，数据表明加入温敏凝胶后药物在体内释药时间延长，将艾塞那肽制成Zn-Ex不溶性复合物进一步延长体内释放时间。
当PLGA-PEG-PLGA和PLGA联合载药时，PLGA-PEG-PLGA分散在微球内部，这种温敏材料注入体内后，随着水分的进入，逐渐溶胀形成凝胶，而凝胶不被水分稀释，仍保留其形态。药物分散于凝胶中，由于药物与凝胶有一定亲和性，凝胶对药物释放有缓冲作用，所以突释较低。
将艾塞那肽制备成Zn-Ex不溶性复合物后，艾塞那肽溶解度降低，短时间内溶于释放介质的药物变少，所以突释降低。
药物在体内的释放机制包括扩散机制和溶蚀机制两种，扩散机制主要存在于突释阶段，水分进入微球孔道，微球通过这些孔道向外转移。溶蚀机制存在于快速释放阶段，载体材料开始降解，药物迅速释放。中间平台期药物几乎不释放，这一阶段是载体吸水溶胀过程，载体在吸水溶胀过程中不溶蚀，在整个微球都溶胀后，形成水溶性通道，载体材料开始溶蚀，所以平台期的长短取决取载体材料的溶胀速度。PLGA-PEG-PLGA是一种生物可降解的温敏凝胶，这种材料的亲水性高于PLGA，更易吸引水分进入微球，加速微球的溶胀，所以Ex-gel-Ms和Zn-Ex-gel-Ms的平台期均比Ex-Ms短，平台期越短，快速释放期的起点越早，提高了药物的生物利用度。
快速释放期分析：后期释放量主要取决于微球中剩余药量和载体亲水性。Zn-Ex剩余药量少，载体疏水性强，快速释放期短，释放量少。Ex-gel-Ms剩余药量增加，载体亲水性强，快速释放期延长，释放量增加，Zn-Ex-gel-Ms剩余药量最多，快速释放期进一步延长。
综上所述：Zn-Ex-gel-Ms优于Ex-gel-Ms，Ex-gel-Ms优于Ex-Ms。
另需说明的是，本发明使用其他亲水凝胶、水难溶性聚合物、含乳化剂的溶液、有机溶剂和金属盐溶液制备的多肽类药物缓释微球均有与实施例1、2、3相同的效果，在此不再一一赘述。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种用于装载多肽类药物的载药微球，其特征在于，所述微球由多肽类药物活性物质、亲水凝胶、水难溶性聚合物、含乳化剂的溶液组成；所述多肽类药物递送载药微球为W1/O/W2结构；由多肽类药物活性物质与亲水凝胶组成内水相(W1)，水难溶性聚合物的有机溶剂作为油相(O)，含乳化剂的溶液作为外水相(W2)。
2.如权利要求1所述的载药微球，其特征在于，所述亲水凝胶为二聚乳酸-羟基乙酸共聚物聚乙二醇、泊洛沙姆、黄原胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙甲纤维素、聚维酮、卡波姆、海藻酸盐、壳聚糖，以及它们的共聚物和/或混合物中的至少一种；优选地，所述亲水凝胶为二聚乳酸-羟基乙酸共聚物聚乙二醇。
3.如权利要求1所述的载药微球，其特征在于，所述水难溶性聚合物为聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚丙交酯、聚乙交酯、丙交酯-乙交酯共聚物及它们与聚己内酯或聚乙二醇的共聚物、聚己内酯及其与聚乙二醇的共聚物、聚羟基丁酸、聚羟基戊酸、聚对二氧环己酮、壳聚糖、海藻酸及其盐、聚氰基丙烯酸酯、纤维蛋白、聚酸酐、聚原酸酯、聚酰胺、聚磷腈、聚磷酸酯，以及它们的共聚物和/或混合物中的至少一种；优选地，所述水难溶性聚合物为聚乳酸-羟基乙酸共聚物。
4.如权利要求1所述的载药微球，其特征在于，所述乳化剂为聚乙烯醇、油酸皂、硬脂酸皂、月桂酸皂、松香油皂、烷基硫酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基磺酸盐、烷基萘基磺酸盐、木质素磺酸盐、磷酸酯盐、硫酸酯盐、季铵盐、烷基铵盐、卵磷脂、脂肪酸甘油酯、蔗糖脂肪酸酯、脂肪酸山梨坦、聚山梨酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、碳氟表面活性剂、含硅表面活性剂、生物表面活性剂、冠醚型表面活性剂、阿拉伯胶、西黄蓍胶、明胶、杏树胶、卵黄、聚乙烯吡咯烷酮或固体微粒乳化剂中的任意一种或几种的混合物；优选地，所述乳化剂为聚乙烯醇与和NaCl的混合溶液。
5.如权利要求1所述的载药微球，其特征在于，所述多肽类药物递送载药微球中，所述油相(O)有机溶剂为二氯甲烷、冰醋酸、乙腈、三氟乙酸、
二甲基亚砜、无水乙醚、己烷、正庚烷、脂肪烃、卤代烃、脂肪酸酯、芳香烃、醚、无水乙醚、环己烷、正己烷、正庚烷中的任意一种或几种的混合物；优选地，所述有机溶剂为二氯甲烷。
6.如权利要求1～5任一项所述的载药微球，其特征在于，所述多肽类药物递送载药微球中所述水难溶性聚合物浓度为10～500mg·mL-1；所述聚乙烯醇浓度为0.1～10％；所述NaCl浓度为0～10％；优选地，所述多肽类药物递送载药微球中所述水难溶性聚合物浓度为30～250mg·mL-1；所述外水相中聚乙烯醇浓度为0.1～2％；所述外水相NaCl浓度为1～5％。
7.如权利要求6所述的载药微球，其特征在于，所述多肽类药物活性物质与水难溶性聚合物质量之比为1～20％；所述内水相(W1)与油相(O)体积比为1:2～20；所述油相(O)与外水相(W2)体积比为1:2～10；优选地，所述多肽类药物活性物质与水难溶性聚合物质量之比为4～10％；所述内水相(W1)与油相(O)体积比为1:5～10；所述油相(O)与外水相(W2)体积比为1:4～8。
8.如权利要求1～5或7任一项所述的载药微球，其特征在于，所述多肽类药物递送载药微球，还包括将多肽类药物活性物质与金属盐溶液形成不溶性复合物，所述不溶复合物与所述亲水凝胶组成内水相(W1)；优选地，所述多肽类药物活性物质与金属盐溶液质量之比为1:1～10。
9.一种如权利要求1～8任一项所述的多肽类药物递送载药微球的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)制备亲水温敏凝胶；
(2)将多肽类药物活性物质溶于上述温敏凝胶作为内水相(W1)；
(3)将水难溶性聚合物溶于有机溶剂中作为油相(O)；
(4)将内水相(W1)倒入油相(O)中，高速剪切溶液，形成W1/O初乳；
(5)将W1/O初乳倒入含乳化剂的外水相(W2)中，高速剪切形成W1/O/W2复乳；
(6)旋蒸去除有机溶剂，将上述液体离心，弃去上清液，收集到微球，得所述多肽类药物递送载药微球；
优选地，所述步骤(4)初乳剪切速度为6000～20000r·min-1；初乳剪切时间为0.5～10min；所述步骤(5)复乳剪切速度为3000～12000r·min-1，复乳剪切时间为0.5～10min。
10.如权利要求9所述的载药微球制备方法，其特征在于，所述多肽类药物递送载药微球的制备方法还包括制备金属盐离子多肽复合物的步骤。
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