CN117338781A

CN117338781A - 哌啶基-吲哚衍生物的用途

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Publication number: CN117338781A
Application number: CN202311580686.1A
Authority: CN
Inventors: J·埃德; R·A·哈里森; B·哈拉尔松; A·S·舒巴特
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2017-08-31
Filing date: 2018-08-30
Publication date: 2024-01-05
Also published as: CA3073346A1; AU2018326768A1; CN117398384A; JP6929425B2; MX2023010750A; JP7297016B2; CN117338782A; US11723901B2; KR102497487B1; CN111032042A; IL272888B1; KR20230024432A; IL272888B2; RU2020111788A; JP2020193222A; JP2020529466A; KR20200047540A; MX2023010751A; RU2020111788A3; AU2018326768B2

Abstract

本发明涉及哌啶基‑吲哚衍生物的用途，具体涉及某些哌啶基‑吲哚衍生物在治疗患有补体旁路途径活化相关的病症和疾病(如肾疾病)的患者中的用途，并且特别是在治疗患有C3G(C3肾小球病)和IgAN(免疫球蛋白A肾病)的患者中的用途。

Description

哌啶基-吲哚衍生物的用途

本申请是国际申请日为2018年8月30日的国际申请PCT/IB2018/056618进入中国、申请号为201880052545.3的标题为“哌啶基-吲哚衍生物的新用途”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及某些哌啶基-吲哚衍生物在治疗患有补体旁路途径活化相关的病症和疾病(如肾疾病)的患者中的用途，并且特别是在治疗患有C3G(C3肾小球病)和IgAN(免疫球蛋白A肾病)的患者中的用途。

背景技术

补体系统是先天免疫系统的重要的组成部分，并且包含一系列正常以非活性状态存在的蛋白酶。这些蛋白酶以三种活化途径被组织：经典的、凝集素和所有汇合在C3和C5切割和共同终末途径上的旁路途径(V.M.Holers,In Clinical Immunology:Principles andPractice[临床免疫学：原理与实践],编辑R.R.Rich,Mosby Press[莫斯比出版社]；1996,363-391)。来自微生物的分子、抗体或细胞组分可活化这些途径，从而导致被称为C3-转化酶和C5-转化酶的蛋白酶复合物的形成。经典途径是钙/镁依赖性级联，其正常通过形成抗原-抗体复合物被活化。它还能被与配体复合的C-反应蛋白的结合和被许多病原体(包括革兰氏阳性细菌)以抗体-非依赖性方式被活化。凝集素途径也是钙和镁依赖性的，并且正常受到凝集素的刺激。旁路途径是镁依赖性级联，其通过C3在某些敏感表面(例如，酵母和细菌的细胞壁多糖，以及某些生物聚合物材料)上的沉积和活化而被活化。除了旁路途径-特异性刺激外，旁路途径还充当其他补体途径的扩增环。

因子B是旁路途径的关键蛋白酶，并且可以是旁路途径的抑制以及其他补体途径的扩增的合适目标。其在人体内的血浆浓度通常约为300μg/mL(或约3μM)，并且已经显示它是旁路补体途径活化的关键酶(P.H.Lesavre和H.J.Müller-Eberhard.J.Exp.Med.[实验医学杂志],1978；148:1498-1510；J.E.Volanakis等人,New Eng.J.Med.[新英格兰医学杂志],1985；312:395-401)。

WO2017/109208披露了某些抑制补体活化的多肽及其在多种障碍，如非典型溶血性尿毒综合征(aHUS)、C3G和IgA肾病中的用途。它描述了融合构建体，其中来自天然存在补体调节因子(补体因子H(FH)和补体FH相关蛋白1(FHR1))的多个活性结构域组合成单个分子。分子的FH部分解离AP的C3转化酶，并且同时充当补体因子I的辅因子，将C3b切割成较小的非活性片段。此外，融合构建体还与C5结合并抑制(AP)C5转化酶。最后，构建体的FHR1-部分抑制经典补体途径(CP)，如在用于经典途径活性的Wieslab测定中所示。因此，这会导致经典途径和旁路途径/扩增环的双重抑制。

WO2015/009616描述了哌啶基-吲哚衍生物的合成及一些功用。所述化合物是强大的因子B抑制剂并且抑制由C3活化引起的补体系统扩增，而与最初的活化机制(包括例如经典的、凝集素或旁路途径的活化)无关。WO2015/009616披露了多种适应症，包括肾疾病，非典型性溶血性尿毒综合征(aHUS)，和肾小球肾炎，包括膜增殖性肾小球肾炎。没有记述关于哌啶基-吲哚衍生物在其他肾疾病中的应用，其是单独的情况，具有明显不同于上述情况的因果关系，特别是它没有描述在经典的HUS(大肠杆菌诱导的溶血性尿毒综合征)和膜性肾病中的应用。与根据WO2017/109208的多肽构建体相比，如WO2015/009616中披露的低分子量化合物特异性地抑制蛋白酶补体因子B，所述因子负责切割AP的C3和C5。从而避免了通过经典途径直接产生C3a、C5a和C5b-9。2017年，Konar和Dranoff(Konar M和Granoff DM2017.Eculizumab treatment and impaired opsonophagocytic killing ofmeningococci by whole blood from immunized adults.[依库珠单抗治疗和通过来自免疫的成人的全血使脑膜炎球菌的调理吞噬杀伤受损]Blood.[血液]130(7):891-899)已完美地表明，选择性抑制因子D(活化FB的蛋白酶)不会损害接种的个体对脑膜炎奈瑟氏菌的保护性免疫应答，而在C5水平上的抑制则会损害。

发明内容

令人惊奇地，本发明现在提供了治疗或预防因子B介导的疾病的方法，其由向患有肾疾病或障碍的患者施用具有式(I)的化合物组成，所述肾疾病或障碍选自补体驱动的肾疾病C3G(C3肾小球病)和IgAN(免疫球蛋白A肾病)和其他具有肾小球C3沉积迹象的肾病，如MN(膜性肾病)和HUS(大肠杆菌诱导的溶血性尿毒综合征)。

具体实施方式

在第一实施例中，本发明提供了具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗补体驱动的肾疾病C3G(C3肾小球病)、IgAN(免疫球蛋白A肾病)和其他具有肾小球C3沉积迹象的肾病(如MN(膜性肾病)和HUS(大肠杆菌诱导的溶血性尿毒综合征))中使用。具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，由以下结构表示：

其中

R是氢、C₁-C₄烷基、或C₁-C₆烷氧基；

R¹是C₁-C₆烷氧基；

R²是C₁-C₆烷基；

R³是C₁-C₆烷氧基；C₁-C₆烷基；或羟基；

R⁴是任选地被-C(O)R⁸取代的苯基，并且

R⁸是羟基、C₁-C₄烷氧基、或氨基。

在第二实施例中，本发明提供根据第一实施例用于使用的化合物或其药学上可接受的盐，其中

R是氢；或C₁-C₂烷基；

R¹是C₁-C₆烷氧基；

R²是C₁-C₆烷基；

R³是C₁-C₆烷氧基；或C₁-C₆烷基；并且

R⁴是任选地被-C(O)R⁸取代的苯基，并且R⁸是羟基或C₁-C₄烷氧基。

在第三实施例中，本发明提供根据第一实施例用于使用的化合物或其药学上可接受的盐，其中

R是氢；

R¹是C₁-C₂烷氧基；

R²是C₁-C₂烷基；

R³是C₁-C₂烷氧基；并且

R⁴是任选地被-C(O)R⁸取代的苯基，并且R⁸是羟基。

在第四实施例中，本发明提供根据第一实施例用于使用的化合物，其中所述化合物或其药学上可接受的盐选自由以下组成的组：

4-(1-((5-甲氧基-7-甲基-1H-吲哚-4-基)甲基)-4-甲基哌啶-2-基)苯甲酸；

4-(4-甲氧基-1-((5-甲氧基-7-甲基-1H-吲哚-4-基)甲基)哌啶-2-基)苯甲酸；

4-(4-乙氧基-1-((5-甲氧基-7-甲基-1H-吲哚-4-基)甲基)哌啶-2-基)苯甲酸；

4-(5-甲氧基-1-((5-甲氧基-7-甲基-1H-吲哚-4-基)甲基)哌啶-2-基)苯甲酸；

4-(5-羟基-1-((5-甲氧基-7-甲基-1H-吲哚-4-基)甲基)哌啶-2-基)苯甲酸；

4-乙基-1-((5-甲氧基-7-甲基-1H-吲哚-4-基)甲基)哌啶-2-基-苯甲酸；

4-(乙基-1-((5-甲氧基-7-甲基-1H-吲哚-4-基)甲基)哌啶-2-基)苯甲酸；

乙基4-((2S,4R)-1-((5-甲氧基-7-甲基-1H-吲哚-4-基)甲基)-4-甲基哌啶-2-基)苯甲酸酯；和

乙基4-((2S,4S)-4-乙氧基-1-((5-甲氧基-7-甲基-1H-吲哚-4-基)甲基)哌啶-2-基)苯甲酸酯。

在第五实施例中，本发明提供根据第一实施例用于使用的化合物，其中所述化合物或其药学上可接受的盐是4-((2S,4S)-4-乙氧基-1-((5-甲氧基-7-甲基-1H-吲哚-4-基)甲基)哌啶-2-基)苯甲酸。

在第六实施例中，本发明涉及治疗或预防C3G(C3肾小球病)、IgAN(免疫球蛋白A肾病)或其他具有肾小球C3沉积迹象的肾病(如MN(膜性肾病)和HUS(大肠杆菌诱导的溶血性尿毒综合征))的方法，在患有此病的患者中，所述方法由向患有此病的患者施用根据实施例1、2、3、4或5中任何一项所定义的有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐组成。

在另一个实施例中，本发明提供了根据权利要求1-5中任一项所述的用于使用的化合物，其中所述使用是在C3G(C3肾小球病)的治疗中。

在另一个实施例中，本发明提供了根据权利要求1-5中任一项所述的用于使用的化合物，其中所述使用是在IgAN(免疫球蛋白A肾病)的治疗中。

在另一个实施例中，本发明提供了根据权利要求1-5中任一项所述的用于使用的化合物，其中所述使用是在MN(膜性肾病)的治疗中。

在另一个实施例中，本发明提供了根据权利要求1-5中任一项所述的用于使用的化合物，其中所述使用是在HUS(大肠杆菌诱导的溶血性尿毒综合征)的治疗中。

在另一个实施例中，本发明涉及药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的根据实施例1中所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，和一种或多种药学上可接受的载体，用于在治疗选自C3G(C3肾小球病)、IgAN(免疫球蛋白A肾病)和其他具有肾小球C3沉积迹象的肾病(如MN(膜性肾病)和HUS(大肠杆菌诱导的溶血性尿毒综合征))的疾病或障碍中使用。

出于解释本说明书的目的，将应用下面的定义，并且在适宜的情况下，以单数形式使用的术语还包括复数形式，并且反之亦然。

本文所用的术语“烷基”是指具有至多20个碳原子的完全饱和的支链或无支链的烃部分。除非另有说明，否则烷基是指具有1至16个碳原子、1至10个碳原子、1至7个碳原子或1至4个碳原子的烃部分。烷基的代表性实例包括，但不限于，甲基、乙基、正-丙基、异-丙基、正-丁基、仲-丁基、异-丁基、叔-丁基、正-戊基、异戊基、新戊基、正-己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、正-庚基、正-辛基、正-壬基、正-癸基等。

本文所用的术语“烷氧基”是指烷基-O-，其中烷基如上文所定义。烷氧基的代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊基氧基、己基氧基、环丙基氧基-、环己基氧基-等。烷氧基通常具有约1-7个，更优选约1-4个碳。

可以用无机酸和有机酸形成药学上可接受的酸加成盐。

药学上可接受的碱加成盐可与无机碱和有机碱形成。

WO2015/009616中已经描述了具有式(I)的化合物的药学上可接受盐的代表性实例，并且同样地适用于本发明。

如本文所用的，术语“药学上可接受的载体”包括任何及所有溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、黏合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料等及类似物及其组合，如本领域技术人员将已知的(参见，例如Remington’s Pharmaceutical Sciences[雷明顿氏药物科学],第18版,Mack出版公司(Mack Printing Company),1990,第1289-1329页)。除非任何常规载体与活性成分不相容，否则考虑将其用于治疗或药物组合物中。

术语“治疗有效量”的本发明的化合物是指将引起受试者的生物或医学应答(例如，酶或蛋白活性的减小或抑制，或改善症状、缓解病症、减缓或延迟疾病进展或预防疾病等)的本发明的化合物的量。在一个非限制性实施例中，术语“治疗有效量”是指本发明的化合物的以下量，当施用至受试者时，所述量有效地(1)至少部分缓解、抑制、预防和/或改善(i)由B因子介导或(ii)与B因子活性有关或(iii)特征为补体旁路途径活性(正常或异常)的病症或障碍或疾病或生物学过程(例如组织再生和复制)；或(2)减少或抑制因子B的活性；或(3)减少或抑制因子B的表达；或(4)减少或抑制补体系统活化且特别是减少或抑制由补体旁路途径活化生成的C3a、iC3b、C5a或膜攻击复合物。在另一个非限制性实施例中，术语“治疗有效量”是指当施用至细胞或组织或非细胞生物材料或介质时，有效地至少部分降低或抑制B因子和/或补体旁路途径活性；或至少部分减少或抑制因子B和/或补体旁路途径的表达的本发明的化合物的量。在以上实施例中已经针对因子B和/或补体旁路途径举例说明了术语“治疗有效量”的含义。

如本文所用，术语“受试者”是指动物。所述动物通常是指哺乳动物。受试者也是指例如灵长类动物(例如人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施例中，受试者为灵长类动物。在又其他的实施例中，受试者是人。

如本文所用，术语“抑制(inhibit、inhibition或inhibiting)”是指减少或抑制给定的病症、症状或障碍、或疾病，或在生物活性或过程的基线活性方面的显著降低。

如本文所用，术语任何疾病或障碍的“治疗(treat、treating或treatment)”在一个实施例中是指改善疾病或障碍(即，减慢或阻止或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施例中，“治疗(treat、treating或treatment)”是指减轻或改善至少一种身体参数，包括不能被患者辨别的那些。在仍另一个实施例中，“治疗(treat、treating或treatment)”是指在身体上(例如，可辨别的症状的稳定化)或在生理上(例如，身体参数的稳定化)或二者调节疾病或障碍。在又另一个实施例中，“治疗(treat、treating或treatment)”是指预防或延迟疾病或障碍的发作或发展或进展。

如本文所用，如果受试者将在生物学上、在医学上或在生活质量上从治疗中获益，则所述受试者是“需要”这种治疗的。

如本文所用，术语“一个/种(a/an)”、“所述(the)”以及在本发明的上下文中使用的类似术语(特别是在权利要求的上下文中)应被解释为涵盖单数和复数二者，本文中除非另外指示或与上下文明显相矛盾。

在本文描述的所有方法能够以任何合适顺序进行，除非本文另外指明或另外与上下文明显相矛盾。本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如“如”)的使用仅旨在更好地说明本发明，而不对另外要求保护的本发明范围做出限制。

本发明的化合物的任何非对称原子(例如，碳或类似物)可以外消旋或对映体上富集的形式存在，例如，(R)-、(S)-或(R,S)-构型。在某些实施例中，每个不对称的原子在(R)-或(S)-构型中具有至少50％对映异构体过量、至少60％对映异构体过量、至少70％对映异构体过量、至少80％对映异构体过量、至少90％对映异构体过量、至少95％对映异构体过量或至少99％对映异构体过量。如果可能，在具有不饱和键的原子上的取代基可以以顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。

因此，如本文使用，本发明的化合物的用途可以可能的异构体，如旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物中的任何一者的形式存在，例如，呈大体上纯几何(顺式或反式)异构体、非对映异构体、光学异构体(对映体)、消旋物或其混合物。为清楚起见，位置异构体不为上文涵盖。

可以基于组分的物理化学差异，例如通过色谱法和/或分级结晶法将任何所得的异构体混合物分离成纯的或基本上纯的几何或旋光异构体、非对映异构体、外消旋体。

可以通过已知方法将任何所得的终产物或中间体的外消旋体拆分成旋光对映体，例如通过分离用光学活性酸或碱得到的其非对映异构体盐，并释放出光学活性的酸性或碱性化合物。特别地，因此可以采用碱性部分将本发明的化合物拆分成它们的旋光对映体，例如通过用光学活性酸形成的盐的分级结晶，例如酒石酸、联苯甲酰酒石酸、二乙酰酒石酸、二-O,O’-对甲苯甲酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸。外消旋产物还可以通过手性色谱法，例如，使用手性吸附剂的高效液相色谱法(HPLC)或超临界流体色谱(SFC)来拆分。

预防和治疗用途

在另一个实施例中，本发明提供了治疗肾疾病或障碍的方法，所述方法包括根据实施例1-5中任一项的定义向需要这种治疗的受试者施用有效量的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述疾病或障碍选自C3G、IgAN和其他具有肾小球C3沉积迹象的肾病。

对于约50-70kg的受试者，具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可以施用的单位剂量为约0.1-1000mg的一种或多种活性成分，或约0.1-500mg或约0.1-250mg或约0.1-150mg或约0.5-100mg，或约0.5-50mg的活性成分。其治疗有效剂量可以取决于受试者的物种、体重、年龄以及治疗中的个别病症、障碍或疾病或其严重性。具有普通技能的医师、临床医生或兽医可以容易地确定预防、治疗障碍或疾病或抑制所述障碍或疾病的进展所必需的每种活性成分的有效量。

根据实施例1所述的化合物的功效，可以通过以下方法进行评估：

1.补体驱动性肾疾病的临床试验；特异性IgAN

根据以下标准招募患者：

·2年内诊断的成人IgAN患者

·符合诊断标准，如快速进展的高风险，如高血压和/或在服用抗高血压药和>1g/d蛋白尿

·肾活检＝IgAN，包括伴有血管炎的IgAN

·eGFR(肾小球滤过率)>40且<100ml/min/1.73m²

·支持性护理(包括利尿剂、ACE(血管紧张素转化酶)抑制剂、ARB(血管紧张素肾素阻断剂)、他汀类)将在试验中维持。

·磨合期后随机化。

对于试验，患者接种疫苗以消除由包封的生物体(包括肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis)和流感嗜血菌(Haemophilus influenzae))引起的感染风险。可以用，例如23价多糖(PS)疫苗，或七价蛋白质-多糖缀合物(PCV-7)疫苗进行疫苗接种。

根据疫苗接种，患者然后用每日剂量为25、50、100和200毫克的具有式(I)的化合物治疗，每天两次给予(BID)。根据标准实践监测血压，并且通过定期确定尿中的低分子量蛋白质(如白蛋白和球蛋白)来确定蛋白尿。

用具有式(I)的化合物进行治疗的持续时间至少为3个月，并且有效治疗的主要终点通过尿蛋白肌酸酐比率(UPCR)降低25％或更多来实现。

作为次要终点，在选定的患者中进行肾组织学检查，其中在组织学评分中旨在减少补体活化、减少炎症、减少系膜扩张。

2.补体驱动性肾疾病的临床试验，特异性C3G：

根据以下标准招募患者：

·诊断患有C3G的成人患者

·肾活检证据表明为C3G(3个月内证实结果)

·具有低血清C3(转化酶)或FB(B因子)水平和任何GFR(肾小球滤过率)水平的患者

·GFR≥40ml/min/1.73m²

·支持性护理(包括利尿剂、ACE抑制剂、ARB、他汀类)将在试验中维持。

·磨合期后随机化

对于试验，患者接种疫苗以消除由包封的生物体(包括肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌和流感嗜血菌)引起的感染风险。可以用，例如23价多糖(PS)疫苗，或七价蛋白质-多糖缀合物(PCV-7)疫苗进行疫苗接种。

根据疫苗接种，患者然后用每日剂量为25、50、100和200毫克的具有式(I)的化合物治疗，每天两次给予(BID)。

使用具有式(I)的化合物的治疗持续时间至少为2个月。

如果蛋白尿减少高于25％，则实现了有效治疗的主要终点。

有效治疗的次要终点是改善的eGFR以及在肾活检中改善的组织学，治疗3个月后(如有可能，治疗6个月后)组织中的目标效应。

如实施例1至5中所披露的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐是因子B的有效抑制剂，并且在上述临床试验(1)和(2)中进行测试。

实验部分：

1.通过免疫固定电泳测量补体失调的抑制(由Zhang等人,Clin J Am SocNephrology[美国肾脏病学会临床杂志]7,第265-274页(2012)中进行了描述)。

此测定基于患者血清中稳定的C3转化酶。患者血清与正常血清1:1混合，并在37℃孵育30分钟。正常血清作为C3的来源，因为患者的C3水平会非常低。结果是切割的C3对比未切割的C3的比例。通过在Mg²⁺EGTA-PBS中孵育血清来确定最大切割，通过在EDTA-PBS中孵育血清来确定背景切割。通过以下公式计算测试化合物的抑制：

(在测试化合物存在下的切割-背景切割)/(最大切割-背景切割)

在9名患有C3G的患者的样品中进行了测定，有以下原因导致了旁路途径(AP)失调：

·C3Nef(自身抗体稳定C3转化酶)，在3名患者中

·抗FH(因子H)自身抗体，在2名患者中

·未知原因，在2名患者中

·抗FB(因子B)自身抗体，在2名患者中。包括患有C3G(C3肾小球肾炎)和DDD(致密物沉积病)两者的患者的样品。

在此测定中，我们测试了实施例4的化合物。例如，实施例5的化合物在3.3微摩尔浓度下抑制C3切割>97％，并且在1.1微摩尔存在下抑制C3切割63％。

2.通过C3Nef或FB自身抗体稳定预成型C3转化酶的抑制

通过C3转化酶稳定化测定(C3CSA)测量预成型和稳定的C3转化酶的抑制(由Zhang等人,Clin J Am Soc Nephrology[美国肾脏病学会临床杂志]7,第265-274页(2012)进行了描述)。在此测定中，在绵羊红细胞表面上人工构建了C3转化酶。尽管C3转化酶在37℃下正常具有90秒的半衰期，但是通过添加来自患者的纯化的IgG，衰减延迟。为了抑制转化酶稳定化/转化酶活性并允许其衰减，化合物与患者衍生的IgG同时添加。施用IgG(和化合物)后，转化酶允许在30℃下衰减15分钟。然后，在37℃下添加在EDTA中的大鼠血清持续30分钟，以允许稳定的C3转化酶活化终末补体途径并裂解红细胞。红细胞裂解与血红蛋白释放有关，并且因此通过在415nm下上清液中的吸收进行定量。最大溶血通过在时间0时的裂解确定，并作为背景，测量EDTA缓冲液中的溶血(完全抑制所有补体途径)。

使用来自15名患有C3G的患者的IgG测量稳定的C3转化酶的抑制，其中7名患者患有DDD，并且8名患者患有C3GN。其中4名患者具有针对FB的抗体，并且11名患者具有C3肾炎因子，即针对C3转化酶的抗体。与在0.15微摩尔的化合物浓度下，EDTA(无补体活性)存在下观察到的水平相比，实施例5的化合物抑制了C3转化酶负载的红细胞的溶血>99％。

3.C3沉积对用衍生自具有产志贺毒素大肠杆菌诱导的溶血性尿毒综合征的患者血清(STEC-HUS或经典HUS)进行刺激的人微血管内皮细胞的抑制

如在Morigi等人,2011(Morigi M,Galbusera M,Gastoldi S,Locatelli,M,Buelli,S,Pezzotta A,Pagani C,Noris M,Gobbi M,Stravalaci M,Rottoli D,TedescoF,Remuzzi G和Joja C:2011.Alternative pathway activation of complement byShiga toxin promotes exuberant C3a formation that triggers microvascularthrombosis.[通过志贺毒素的补体旁路途径的活化促进触发微血管血栓形成的过度增生的C3a的形成]J Immunol.[免疫学杂志]187(1):172-80)，人真皮来源的微血管内皮细胞系(HMEC-1，ATCC CRL-3243)铺在载玻片上，在铺满时使用。在存在或不存在实施例5的2种不同浓度(1和10microM)的CFB抑制剂的情况下，用10μM ADP活化细胞10分钟，并且然后用以测试培养基(具有0.5％BSA的HBSS)进行1:2稀释的血清(在疾病急性期间从3名STEC-HUS患者中收集，或从健康对照收集)孵育4小时。在孵育步骤结束时，HMEC-1用荧光染料缀合的抗人C3c处理。在每个实验中，来自健康对照的血清库与患者血清平行进行测试。使用共聚焦倒置激光显微镜获得内皮细胞表面上的荧光染色。

每个样本获得15个视野，并且荧光染色所占面积通过使用软件图像J的内置特定功能的自动边缘检测进行评估，并表示为每个视野分析的像素2(pixel2)。弃去最高值和最低值，并计算剩余13个视野的平均值±SE。

结果：相对来自健康对照的血清，来自患有急性STEC-HUS的患者血清诱导了ADP-活化内皮细胞的大量C3沉积(P<0.0001)。在STEC-HUS患者的血清中存在的实施例5的CFB抑制剂，诱导ADP-活化的HMEC.-1上的C3沉积的剂量-应答降低(1microM减少73％，并且10microM减少89％，两者均p<0.0001)。值得注意的是，暴露于STEC-HUS血清(添加在10microM浓度时实施例5的CFB抑制剂)的内皮细胞上的C3沉积量与暴露于对照血清的细胞上观察到的C3沉积量没有显著差异。

4.FB抑制剂预防大鼠中被动型Heymann肾炎的发展和进展

大鼠中被动型Heymann肾炎是膜性肾病最常见的动物模型(参见Jefferson JA,Pippin JW和Shankland SJ 2010.Experimental Models of membranous nephropathy.[膜性肾病的实验模型]Drug Discov Today Dis Models.[今日药物发现疾病模型]7(1-2):27-33)。它是通过用大鼠巨蛋白免疫的兔所衍生的多克隆血清的转移诱导的，并表现出与人类疾病高度类似的肾脏炎性变化。在抗体转移后4天观察到明显的蛋白尿，并且增加直至转移后2周。

用实施例5的因子B抑制剂进行预防性治疗(口服管饲法每天两次，20或60mg/kg/d)显著减少了转移后14天的蛋白尿82％或75％(p<0.0001)，并且显著减少了组织病理学变化(综合评分为2.2，0.3和0.4，分别对于运载体和20和60mg/kg时的实施例5的FB抑制剂，p<0.005)。此外，在分开的实验中，从蛋白尿表现后(血清转移后6天)开始，使用实施例5的60mg/kg FB抑制剂(口服管饲法每天两次)的治疗性治疗阻止了疾病的进一步进展。对照组中的蛋白尿从第6天的0.79增加到第14天的1.93，但在用实施例5的FB抑制剂治疗的组中保持稳定(在第6天和第14天分别为0.74和0.81，综合组织病理学评分由运载体治疗组的2.7减少至FB抑制剂-治疗组的1.1分，p<0.005)。

Claims

1.式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于IgAN(IgA肾病)的药物中的用途，其中

R是氢、C₁-C₄烷基或C₁-C₆烷氧基；

R¹是C₁-C₆烷氧基；

R²是C₁-C₆烷基；

R³是C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷基或羟基；

R⁴是任选地被-C(O)R⁸取代的苯基；并且

R⁸是羟基、C₁-C₄烷氧基或氨基。

2.根据权利要求1所述的用途，其中

R是氢或C₁-C₂烷基；

R¹是C₁-C₆烷氧基；

R²是C₁-C₆烷基；

R³是C₁-C₆烷氧基或C₁-C₆烷基；并且

3.根据权利要求1所述的用途，其中

R是氢；

R¹是C₁-C₂烷氧基；

R²是C₁-C₂烷基；

R³是C₁-C₂烷氧基；并且

R⁴是任选地被-C(O)R⁸取代的苯基，并且R⁸是羟基。

4.根据权利要求1所述的用途，其中所述化合物选自由以下组成的组：

4-((2S,4R)-1-((5-甲氧基-7-甲基-1H-吲哚-4-基)甲基)-4-甲基哌啶-2-基)苯甲酸乙酯；和

4-((2S,4S)-4-乙氧基-1-((5-甲氧基-7-甲基-1H-吲哚-4-基)甲基)哌啶-2-基)苯甲酸乙酯。

5.根据权利要求1所述的用途，其中所述化合物是4-((2S,4S)-4-乙氧基-1-((5-甲氧基-7-甲基-1H-吲哚-4-基)甲基)哌啶-2-基)苯甲酸。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的用途，其中所述化合物或其药学上可接受的盐以约0.1-500mg或约0.1-250mg或约0.1-150mg或约0.5-100mg或约0.5-50mg的活性成分的剂量施用。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的用途，其中所述治疗包括选自25、50、100和200mg的化合物的日剂量，每日两次给予。

8.根据权利要求1至5中任一项所述的用途，其中所述治疗包括200mg的化合物的日剂量，每日两次给予。

9.根据权利要求1至5中任一项所述的用途，其中所述化合物为4-((2S,4S)-4-乙氧基-1-((5-甲氧基-7-甲基-1H-吲哚-4-基)甲基)哌啶-2-基)苯甲酸，并且其中所述治疗包括200mg的化合物的日剂量，每日两次给予。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的用途，其中所述治疗包括与基线相比减少的蛋白尿。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的用途，其中所述治疗包括与基线相比减少超过25％的蛋白尿。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的用途，其中所述治疗包括与基线相比改善eGFR(估计的肾小球滤过率)。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的用途，其中所述治疗包括与基线相比降低的尿蛋白肌酸酐比率(UPCR)。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的用途，其中所述治疗包括与基线相比使UPCR降低25％或更多。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的用途，其中所述治疗包括与基线相比增加C3。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的用途，其中治疗的持续时间为至少2个月。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的用途，其中所述药物用于口服施用。