CN112843065A - 一种用于认知障碍的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于认知障碍的药物及其制备方法。具体而言，所述药物包含作为活性成分的式II的化合物或其可药用盐和可药用载体。本发明还提供了所述的药物的制备方法和式II的化合物或其可药用盐在制备用于治疗认知障碍的药物中的用途。

Description

一种用于认知障碍的药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域。更具体地，本发明涉及一种用于认知障碍的药物及其制备方法。

背景技术

认知障碍是指机体认识和获取知识的大脑高级智能加工过程出现异常，从而引起严重的学习、记忆障碍，同时伴有失语、失用、失认或失行等改变的病理过程。认知障碍的临床表现包括认知、记忆力、推理、判断和情感稳定性的进行性丧失，患者逐步呈现出深度的精神退化，并最终可导致死亡。

由于认知是大脑皮层的复杂高级功能的反映，因此任何直接或间接引起大脑皮层结构和功能异常的因素均可通过不同的机制导致认知障碍。目前，已经发现由于各种原因引起的脑组织本身的慢性损伤是导致认知障碍的发生和进展的最主要的原因之一。例如，脑组织调节分子异常(其包括但不限于多巴胺、去甲肾上腺素、乙酰胆碱、谷氨酸等神经递质及其受体异常；神经肽异常；神经营养因子缺乏)、脑组织蛋白质异常聚集(其可由于基因异常、蛋白质合成后的异常修饰、脑组织被朊病毒感染等因素引起)、慢性脑缺血性损伤、环境和毒素对脑组织造成的损害、脑外伤、衰老等因素均可诱发认知障碍。另外，还已知某些慢性全身性疾病如高血压、糖尿病、慢性阻塞性肺疾病等可通过减少脑血液供应等机制，继发性降低大脑功能从而引起认知障碍。再者，不良的心理、社会因素，如处境困难、惊恐、抑郁等均可成为认知障碍的诱因。

目前，临床上对于认知障碍主要采用恢复和维持神经递质的水平的药物如多奈哌齐、改善脑血管供血的药物如尼莫地平、脑代谢改善及促智药如吡拉西坦、胆碱酯酶抑制剂如石杉碱甲等进行治疗。然而，从总体上来看，现有药物对改善认知障碍的临床症状的作用依然有限。因此，仍需要替代性的治疗各种原因引起的认知障碍的药物。

德国拜耳制药股份公司(Bayer Pharma Aktiengesellschaft)的PCT发明专利申请WO2014/202590A1公开了一种具有式(I)结构的取代的苄基吡唑化合物、它们的生产方法及其用途：

据信所述取代的苄基吡唑化合物具有抑制Bub1激酶的作用，并且因此可以用于治疗或预防失控的细胞生长、增殖和/或存活、不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答的疾病，或者伴有失控的细胞生长、增殖和/或存活、不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答的疾病。该专利文献还公开了如下式II结构所示的中间体化合物3-(4-氨基-5-甲氧基嘧啶-2-基)-1-(4-乙氧基-2,6-二氟苄基)-4-甲基-1H-吡唑-5-甲腈(参见中间体1-8-1)

，该化合物不具有式(I)所定义的结构，该专利文献亦未公开该化合物具有任何治疗效用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题

本发明旨在解决的技术问题是提供一种用于认知障碍的药物。

本发明的技术方案

本申请的发明人通过实验意外地发现3-(4-氨基-5-甲氧基嘧啶-2-基)-1-(4-乙氧基-2,6-二氟苄基)-4-甲基-1H-吡唑-5-甲腈具有治疗认知障碍的活性。该发现导致了本发明的技术方案的完成。

更具体地，在本发明的一个方面中，提供了一种用于认知障碍的药物，其包含作为活性成分的式II的化合物或其可药用盐和可药用载体：

在一个实施方案中，所述药物包含0.001-1000mg，优选0.01-500mg，更优选0.1-100mg，再更优选0.2-50mg的式II的化合物或其可药用盐。

本发明对于可药用载体的种类没有限制，只要其与式II的化合物或其可药用盐相容、不会与其发生不利的物理和/或化学相互作用并且不会抵消其活性即可。所述载体在合理的医学判断的范围之内，适用于与人类或动物的组织或器官接触，而没有过度的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题，与合理的利益/风险比相称。例如，为了制备口服给予的口服制剂，可以使用本领域已知的可药用载体，例如分散介质(如水、醇类、油)、矫味剂、防腐剂、着色剂等(在口服液体制剂例如混悬液、酏剂和溶液的情况下)；或填充剂(如淀粉、糖、微晶纤维素)、造粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等(在口服固体制剂例如散剂、胶囊剂和片剂的情况下)。

在一个实施方案中，所述用于认知障碍的药物除所述式II的化合物或其可药用盐以外还包含治疗认知障碍的其它活性成分。

本发明对于治疗认知障碍的其它活性成分的种类没有限制，只要其对认知障碍具有治疗作用并且不会拮抗所述式II的化合物或其可药用盐的药理活性即可。例如，所述治疗认知障碍的其它活性成分可包括但不限于恢复和维持神经递质的水平的药物如多奈哌齐、改善脑血管供血的药物如尼莫地平、脑代谢改善及促智药如吡拉西坦、胆碱酯酶抑制剂如石杉碱甲等中的一种或多种。在一个优选的实施方案中，所述治疗认知障碍的其它活性成分是石杉碱甲。特别地，所述式II的化合物或其可药用盐和石杉碱甲可以以1-10:1-10，例如1-5:1-5、1-3:1-3、1-2:1-2或甚至1:1的重量比存在于所述药物中。

在本发明的第二方面中，提供了一种所述用于认知障碍的药物的制备方法，其包括将所述式II的化合物或其可药用盐与可药用载体混合的步骤。优选地，通过本发明所述的制备方法将所述式II的化合物或其可药用盐制成颗粒剂、片剂、胶囊剂等口服施用的剂型或注射剂、输液、注射用无菌粉末等胃肠外施用的剂型。

在本发明的第三方面中，提供了式II的化合物或其可药用盐在制备用于治疗认知障碍的药物中的用途。优选地，所述认知障碍是与阿尔茨海默病有关的认知障碍。在这一方面中，优选地是所述药物除所述式II的化合物或其可药用盐以外还包含治疗认知障碍的其它活性成分，特别是石杉碱甲。

发明的有利技术效果

本申请的发明人通过实验发现，本发明的式II的化合物能够有效地改善阿尔茨海默病转基因模型小鼠——APP/PS1双转基因小鼠的认知和记忆功能障碍，减少皮层中Aβ的水平，从而提示其可用于认知障碍的治疗。另外，本申请的发明人还发现式II的化合物可以与已知药物石杉碱甲联用，以进一步提高式II的化合物的治疗效能。

具体实施方式

实施例式II的化合物对阿尔茨海默病转基因模型小鼠的认知障碍的影响的考察

本实验的目的是利用阿尔茨海默病转基因模型小鼠——APP/PS1双转基因模型小鼠为实验对象，考察本发明的式II的化合物是否对小鼠的认知障碍具有改善的作用。

1、实验动物

3月龄雄性APP/PS1双转基因模型小鼠购自南京大学模式动物研究所。将动物随机分为模型组、石杉碱甲组、化合物低剂量组、化合物高剂量组、药物联用组。另取同窝阴性小鼠作为对照组。以上各组的小鼠数量均为10只。

2、给药方案

本实验中的给药方案如下：

(1)对照组和模型组：通过灌胃给予动物0.5％CMC-Na水溶液，剂量为10mL 0.5％CMC-Na水溶液/1kg体重，每日1次，持续给药3个月；

(2)石杉碱甲组：通过灌胃给予动物石杉碱甲，剂量为0.04mg石杉碱甲(溶于10mL0.5％CMC-Na水溶液)/1kg体重，每日1次，持续给药3个月；

(3)化合物低剂量组：通过灌胃给予动物式II的化合物，剂量为0.04mg式II的化合物(溶于10mL 0.5％CMC-Na水溶液)/1kg体重，每日1次，持续给药3个月；

(4)化合物高剂量组：通过灌胃给予动物式II的化合物，剂量为0.08mg式II的化合物(溶于10mL 0.5％CMC-Na水溶液)/1kg体重，每日1次，持续给药3个月；和

(5)药物联用组：通过灌胃给予动物石杉碱甲和式II的化合物，剂量为0.04mg石杉碱甲+0.04mg式II的化合物(溶于10mL 0.5％CMC-Na水溶液)/1kg体重，每日1次，持续给药3个月)。

3、药效评价

(1)Morris水迷宫试验

a.定向航行试验：第1天，令小鼠在适宜温度的水中自由游泳2min。熟悉环境之后，将小鼠面向池壁，分别从4个入水点放入水中，采用自动录像系统记录小鼠找到平台所需的时间(即逃避潜伏期)。若小鼠在90s内未找到平台，则由实验者将其引向平台，将其潜伏期记录为90s。每天上、下午各测试2次，连续测试5天。

b.空间探索试验：在定位航行试验结束后次日上午撤除平台，在原平台象限的对侧象限入水，记录60s的游泳轨迹，测量60s内小鼠在原平台象限停留时间并进行比较分析。

由Morris软件完成数据搜集和处理。

(2)小鼠皮层中Aβ_1-40、Aβ_1-42水平的定量检测

Morris水迷宫试验结束后，每组动物各取5只，快速分离皮层，采用美国R&D公司生产的Aβ_1-40、Aβ_1-42ELISA试剂盒，根据其说明书中所述的步骤检测小鼠皮层中Aβ_1-40、Aβ_1-42的浓度。

(3)统计学处理

数据采用“均值±标准差”表示，采用SPSS16.0统计软件，以多组间方差分析及组间LSD-t检验作统计学处理。Morris水迷宫实验数据采用重复测量数据的方差分析。

4、实验结果

(1)式II的化合物对APP/PS1双转基因模型小鼠学习记忆能力的影响

水迷宫定向航行试验的逃避潜伏期的结果见表1，空间探索试验的小鼠在原平台象限停留时间的结果见表2。

表1定向航行试验中各组小鼠的逃避潜伏期

注：*表示与模型组比较：P<0.05。

表2空间探索试验中各组小鼠在原平台象限停留时间的结果

组别	60s内小鼠在原平台象限停留时间(s)
		对照组	46.8±7.7*
模型组	21.9±3.2
		石杉碱甲组	29.2±4.3
化合物低剂量组	34.6±4.6*
		化合物高剂量组	39.9±5.1*
药物联用组	44.8±6.0*

注：*表示与模型组比较：P<0.05。

定向航行试验的结果说明，与对照组相比，各模型组小鼠在各时间段寻找平台的潜伏期均明显延长，说明模型小鼠的学习过程延长、记忆能力减退，即表现出了明显的认知障碍。然而，石杉碱甲和式II的化合物的施用均能够缩短小鼠寻找平台的潜伏期，与模型组比较有显著性差异。空间探索试验的结果说明，与对照组相比，各模型组小鼠在原平台所在象限停留的时间明显缩短，即表现出了明显的认知障碍。然而，石杉碱甲和式II的化合物的施用均能够显著增加小鼠在原平台象限的停留时间。以上结果表明，式II的化合物能够较好地改善APP/PS1双转基因模型小鼠的学习记忆功能障碍。同时，发明人还发现，当将石杉碱甲和式II的化合物组合施用时，展现出了更为显著的对小鼠学习记忆功能障碍的改善作用，从而提示二者的联用在认知障碍的治疗中可能是有益的。

(2)式II的化合物对APP/PS1双转基因模型小鼠皮层中Aβ_1-40、Aβ_1-42水平的影响

ELISA的结果参见表3。

表3各组小鼠皮层中Aβ_1-40、Aβ_1-42水平

组别	Aβ<sub>1-40</sub>(mg/g)	Aβ<sub>1-42</sub>(mg/g)
			对照组	10.3±2.1*	6.2±1.6*
模型组	49.8±9.5	38.1±8.5
			石杉碱甲组	38.2±6.7	29.5±5.7
化合物低剂量组	32.7±5.9*	24.4±4.9*
			化合物高剂量组	24.5±4.4*	19.6±3.0*
药物联用组	18.8±2.7*	13.8±2.6*

注：*表示与模型组比较：P<0.05。

ELISA的结果显示，与对照组相比，APP/PS1双转基因模型小鼠皮层中的Aβ_1-40、Aβ_1-42表达水平明显增加，而石杉碱甲和式II的化合物的施用均能够降低小鼠皮层中的Aβ_1-40、Aβ_1-42表达水平，并且与石杉碱甲相比，式II的化合物对小鼠皮层中的Aβ_1-40、Aβ_1-42表达水平的影响更为显著，差异具有统计学意义。类似地，观察到石杉碱甲和式II的化合物的组合施用能够更近一步地降低小鼠皮层中的Aβ_1-40、Aβ_1-42表达水平。

总而言之，以上实验结果证实了式II的化合物能够有效地改善APP/PS1双转基因小鼠的认知和记忆功能障碍，减少皮层中Aβ的水平。另外，式II的化合物可以与已知药物石杉碱甲联用，以进一步提高式II的化合物的治疗效能。

以上所述仅是本发明的优选实施方式。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和原理的前提下，还可以做出若干改进、修饰和等同替换等，这些改进、修饰和等同替换后的技术方案也应视为落在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种用于认知障碍的药物，其包含作为活性成分的式II的化合物或其可药用盐和可药用载体：

2.如权利要求1所述的药物，其特征在于，所述药物包含0.001-1000mg的式II的化合物或其可药用盐。

3.如权利要求2所述的药物，其特征在于，所述药物除所述式II的化合物或其可药用盐以外还包含治疗认知障碍的其它活性成分。

4.如权利要求3所述的药物，其特征在于，所述治疗认知障碍的其它活性成分是石杉碱甲。

5.如权利要求4所述的药物，其特征在于，所述式II的化合物或其可药用盐和石杉碱甲以1-10:1-10的重量比存在于所述药物中。

6.权利要求1-5中任一项所述的药物的制备方法，其包括将所述式II的化合物或其可药用盐与可药用载体混合的步骤。

7.式II的化合物或其可药用盐在制备用于治疗认知障碍的药物中的用途

8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述认知障碍是与阿尔茨海默病有关的认知障碍。

9.如权利要求7或8所述的用途，其特征在于，所述药物除所述式II的化合物或其可药用盐以外还包含治疗认知障碍的其它活性成分。

10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述治疗认知障碍的其它活性成分是石杉碱甲。