CN117247850A - 一株耐酸库德里阿兹威毕赤酵母gaas-jg-1及其在制备高酸度水果发酵酒中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一株耐酸库德里阿兹威毕赤酵母GAAS‑JG‑1及其在制备高酸度水果发酵酒中的应用，所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS‑JG‑1于2023年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.26816；具有较高的酸耐受性，可以耐受的最低pH为2.0；增加了高酸度水果发酵酒的酯类物质，所述的酯类物质包括乙酸异戊酯、己酸乙酯、辛酸乙酯、癸酸乙酯、乙基9‑癸烯酸酯和月桂酸乙酯的一种或几种；酿造果酒工艺简单实用，所酿造的高酸度水果发酵酒的总酯类物质的含量相对于对照菌株增加，最终得到的果酒酒体香气浓郁、口感协调、具有典型性风味。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一株耐酸库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1及其在制备高酸度水果发酵酒中的应用。
背景技术
果酒酿造过程是一个复杂的微生物代谢过程，中间产物多，产品成分及品质受原料品种和菌种等因素影响较大。在酿酒过程中，原料中许多化合物被释放出来，并随后被转移至果酒中，这直接影响了果酒的香气、口感和外观。除了原料外，选择合适的酵母对葡萄酿酒和其他发酵水果酒产品的质量非常重要，因为许多关键的风味物质主要是在酵母的发酵过程中形成的。无论是作为商业发酵剂还是天然发酵剂，酿酒酵母都在调节微生物群落多样性和其代谢过程中起到了关键作用，这对果酒的风味形成有着决定性的影响。此外，非酿酒酵母与果酒品质之间的紧密联系也已在某些发明专利中得到体现和证实。例如，发明专利CN 113717867A公开了一种不产乙醇的产香库德里阿兹威毕赤酵母及其应用，提供了一种不产乙醇，高产苯乙醇并能产生乙位紫罗兰酮的产香库德里阿兹威毕赤酵母CGMCC23130；发明专利CN105861345A公开了一株低产尿素、产风味的库德里阿兹威毕赤酵母及其在食品发酵中的应用,利用该酵母在酿造酒、蒸馏酒及其它食品领域的应用可在一定程度上减少尿素和EC的形成。
果酒中的酸度是其关键组成部分，它为果酒带来了活力和清新，使得果酒的风味得以突出。但在一些具有较高酸度的水果发酵过程中，由于其酸类物质较高而使pH值通常在2.5-3.0，显著低于传统酿酒酵母的最适pH值(3.0-3.6)，这会导致传统酿酒酵母因不能适应这样的环境而导致其发酵效果受限。这也意味着，为了获得高品质的果酒，筛选并利用具有良好耐酸性的非酿酒酵母显得至关重要。虽然发明专利CN 113717867A和CN105861345A都揭示了库德里阿兹威毕赤酵母在食品发酵领域的应用，但从这些专利内容来看，这些酵母菌在高酸度环境下的表现仍不理想。然而，通过深入的研究，本发明专利成功筛选出了一株表现卓越的耐酸库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1，这为高酸度果酒酿造中的果酒品质提升提供了坚实的技术支撑。
发明内容
本发明的目的之一是为了解决高酸度水果发酵酒发酵时pH偏低致使传统酿酒酵母无法适应并严重限制其的生长和代谢，导致发酵时间延长和质量相对较差的技术问题。
本发明的目的之二是提供一株库德里阿兹威毕赤酵母在高酸度水果发酵酒中的应用，以解决现有技术中高酸度水果发酵酒发酵专用菌种缺乏和酯类物质不足的问题。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明的首要目的是提供一株耐酸库德里阿兹威毕赤酵母(Pichiakudriavzevii)GAAS-JG-1，所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1于2023年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.26816。
本发明的第二目的是提供一种菌剂，所述的菌剂包括所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1。
本发明的第三目的是提供所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1或所述的菌剂在制备高酸度水果发酵酒中的应用。
优选的，所述的高酸度水果发酵酒为苹果酒、沙棘酒或杏酒。
本发明的第四目的是提供所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1在提高高酸度水果发酵酒中的风味物质的含量中的应用。
优选的，所述的风味物质包括乙酸异戊酯、己酸乙酯、辛酸乙酯、癸酸乙酯、乙基9-癸烯酸酯和月桂酸乙酯的一种或几种。
本发明的第五目的是提供一种高酸度水果发酵酒，所述的果酒采用所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1或所述的菌剂，配以酿酒酵母发酵制备得到。
本发明的第六目的是提供一种高酸度水果发酵酒的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：将所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与酿酒酵母菌，间隔的接种至待发酵液中进行发酵，间隔时间为12-24h，得到高酸度水果发酵酒。
优选的，所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1的浓度为1×106-1×107cfu/mL；所述的酿酒酵母菌的浓度为1×105-1×106cfu/mL；所述发酵的温度为20-22℃；所述发酵的时间为10-15d。
优选的，所述待发酵液的制备包括以下步骤：向破碎后的果浆中添加白砂糖调节糖度为100-200g/L，并调节pH为2.5-3.5，加入焦亚硫酸钾和果胶酶，所述的果胶酶占待发酵液质量的0.6％-0.8％；所述的果胶酶的酶活>50000U/g，所述的焦亚硫酸钾的添加量为100-125mg/L，得到待发酵液。
与现有技术相比，本发明的优点和有益效果：
(1)本发明提供了一种耐酸库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)GAAS-JG-1，所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1于2023年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.26816。
(2)所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1具有较高的酸耐受性，可以耐受的最低pH为2。
(3)所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1增加了高酸度水果发酵酒的酯类物质，所述的酯类物质包括乙酸异戊酯、己酸乙酯、辛酸乙酯、癸酸乙酯、乙基9-癸烯酸酯和月桂酸乙酯的一种或几种；
(4)采用所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1酿造高酸度水果发酵酒，工艺简单实用，所酿造的高酸度果酒的总酯类物质的含量相对于对照菌株增加，最终得到的果酒酒体香气浓郁、口感协调、具有典型性风味。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1的菌落形态特征图
图2为库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与对比例菌种pH耐受性对比图
图3为库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与对比例菌种乙醇耐受性对比图
图4为库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与对比例菌种葡萄糖耐受性对比图
图5为库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与对比例菌种二氧化硫耐受性对比图
图6为库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与对比例菌种温度耐受性对比图
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明，应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
以下实施例中，涉及的CICC 1004、CICC 31838、CICC 31399购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，其它无特殊说明，所述的试剂、耗材均可从市面上购买得到。
实施例一、菌株的筛选与分子生物学鉴定
在杏自然发酵过程中筛选得到一株菌株，其形态学鉴定结果见图1，命名为菌株GAAS-JG-1。
将菌株GAAS-JG-1的26S rDNA序列进行扩增并测序，测序结果如SEQ ID No.1所示。经过上述鉴定，确定菌株GAAS-JG-1属于毕赤酵母属库德里阿兹威毕赤酵母，拉丁名为：Pichia kudriavzevii，因此将其命名为库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)GAAS-JG-1。
将所述的库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)GAAS-JG-1，于2023年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.26816，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；邮编：100101。
以下实施例中，将所述的库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)GAAS-JG-1简写为库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1。
实施例二、库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1耐受性评价
酿造环境对微生物的生长及代谢有着十分重要的影响。而在果酒酿造过程由于发酵温度、乙醇浓度、基质酸度等不断变化，造成微生物所处环境也时刻发生变化，因此研究了该酵母菌株在不同发酵pH值、乙醇浓度、糖浓度、二氧化硫浓度条件下的生长情况。
1.pH耐受性试验
YPD液体培养基灭菌后，分别加入不同质量的柠檬酸，使YPD液体培养基中pH值为2、3、4、6、5、6，然后将活化后的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1和对照例中编号为CICC1004、CICC 31838、CICC 31399的非酿酒酵母种子液各1ml接种到灭菌的装有10mLYPD液体培养基的试管中，28℃条件下静止培养72h后，测定600nm波长下的OD值，浓度大的菌液可以作适当稀释，经稀释后测得的OD值乘以稀释倍数，即为培养液实际的OD值。
从表1及图2中可以看出，在一定pH值范围内，随着pH值的降低，库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1较对比例菌株生长旺盛，说明库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1的最低pH值耐受可达2。
表1库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与对比例菌种pH耐受性对比表
注：同列不同小写字母代表差异显著(p<0.05)；同列相同小写字母代表差异不显著(p＞0.05)。
2.乙醇耐受性试验
YPD液体培养基灭菌后，分别加入不同体积的无水乙醇，使YPD液体培养基中乙醇的浓度为8％、10％、12％、14％、16％(体积浓度)的无水乙醇，然后将活化后的实施例1中库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1和对照例中编号为CICC 1004、CICC 31838、CICC 31399的非酿酒酵母种子液各1ml接种到灭菌的装有10mLYPD液体培养基的试管中，28℃条件下静止培养72h后，测定600nm波长下的OD值，浓度大的菌液可以作适当稀释，经稀释后测得的OD值乘以稀释倍数，即为培养液实际的OD值。
从表2及图3中可以看出，在一定范围内，随着乙醇浓度的升高，试验菌株生长受到不同程度的抑制，但库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1较对比例菌株乙醇耐受性较强。
表2库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与对比例菌种乙醇耐受性对比表
注：同列不同小写字母代表差异显著(p<0.05)；同列相同小写字母代表差异不显著(p＞0.05)。
3.葡萄糖耐受性试验
YPD液体培养基灭菌后，分别加入不同质量的葡萄糖，使YPD液体培养基中葡萄糖的浓度为150g/L、200g/L、250g/L、300g/L、350g/L，然后将活化后的实施例1中库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1和对照例中编号为CICC 1004、CICC 31838、CICC 31399的非酿酒酵母种子液各1ml接种到灭菌的装有10mLYPD液体培养基的试管中，28℃条件下静止培养72h后，测定600nm波长下的OD值，浓度大的菌液可以作适当稀释，经稀释后测得的OD值乘以稀释倍数，即为培养液实际的OD值。
从表3及图4中可以看出，在一定范围内，随着葡萄糖浓度的升高，试验菌株生长受到不同程度的抑制，但库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1较对比例菌株葡萄糖耐受性较强。
表3库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与对比例菌种葡萄糖耐受性对比表
注：同列不同小写字母代表差异显著(p<0.05)；同列相同小写字母代表差异不显著(p＞0.05)。
4.二氧化硫耐受性试验
YPD液体培养基灭菌后，分别加入不同质量的焦亚硫酸钾，使YPD液体培养基中二氧化硫浓度为100mg/L、200mg/L、300mg/L、400mg/L、500mg/L，然后将活化后的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1和对照例中编号为CICC 1004、CICC 31838、CICC 31399的非酿酒酵母种子液各1ml接种到灭菌的装有10mLYPD液体培养基的试管中，28℃条件下静止培养72h后，测定600nm波长下的OD值，浓度大的菌液可以作适当稀释，经稀释后测得的OD值乘以稀释倍数，即为培养液实际的OD值。
从表4及图5中可以看出，在一定范围内，库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与对照例都表现出了较强的二氧化硫耐受能力。
表4库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与对比例菌种二氧化硫耐受性对比表
注：同列不同小写字母代表差异显著(p<0.05)；同列相同小写字母代表差异不显著(p＞0.05)。
5.温度耐受性试验
活化后的实施例1中库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1和对照例中编号为CICC1004、CICC 31838、CICC 31399的非酿酒酵母种子液各1ml接种到灭菌的装有10mLYPD液体培养基的试管中，分别放置在15℃、25℃和35℃下条件下静止培养72h后，在600nm波长下测定OD值，浓度大的菌液可以作适当稀释，经稀释后测得的OD值乘以稀释倍数，即为培养液实际的OD值。
从表5及图6可以看出，所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1在35℃下较对比例中非酿酒酵母菌种仍有较高的生物量，说明该菌株的最高耐受可达35℃。
表5库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与对比例菌种温度耐受性对比表
注：同列不同小写字母代表差异显著(p<0.05)；同列相同小写字母代表差异不显著(p＞0.05)。
实施例三、库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1对发酵高酸度苹果酒酯类物质的影响
一种本发明的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1在高酸度水果酒加工中的应用，采用库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1，包括以下步骤：向四份破碎后的苹果汁中添加白砂糖调节糖度，并调节pH，调整后的糖度均为150mg/L，pH分别为pH＝2.5、pH＝2.8、pH＝3.0、pH＝3.5。然后向所述高酸度发酵液中加入100mg/L的焦亚硫酸钾和0.6％的果胶酶。在待发酵液中以接种浓度为1×106cfu/mL、接种量为6％的条件下采用库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与酿酒酵母(CICC 32168)顺序接种的方式进行混合发酵。顺序接种发酵具体方法为：在待发酵液中先以接种浓度为1×106cfu/mL、接种量为6％的条件下加入库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1，24h后将对照例中编号为CICC 32168的酿酒酵母以相同的接种浓度及接种量加入到待发酵液中，在20℃下厌氧静置发酵，考察库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1对高酸度果酒中酯类物质含量变化的影响，其结果如表6所示。
表6不同菌种发酵不同酸度苹果酒中酯类物质相对含量变化(％)
从表6结果可知，在不同pH值的环境下，实施例中库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与酿酒酵母(CICC 32168)顺序接种发酵都比对照例中只接种酿酒酵母(CICC 32168)发酵的高酸度苹果酒的酯类物质总量明显增加，说明了库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1具有较好的产酯能力。更进一步的，库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1发酵的高酸度苹果酒的乙酸异戊酯、己酸乙酯、辛酸乙酯、癸酸乙酯、乙基9-癸烯酸酯和月桂酸乙酯的含量显著提高。偏酸环境下，会导致细胞酸化，从而影响酵母的正常生长代谢活动，而库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1具有对照例菌种缺乏的耐酸能力，即使在较低的pH值的环境下，库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1都能够正常生长代谢，并具有较强的产酯能力。
实施例四、库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1对发酵沙棘酒酯类物质的影响
采用实施例l的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1，沙棘果汁糖度为150g/L，pH为2.83。然后向沙棘果汁发酵液中加入100mg/L的焦亚硫酸钾和0.6％的果胶酶。在待发酵液中以接种浓度为1×106cfu/mL、接种量为6％的条件下采用库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与酿酒酵母(CICC 32168)顺序接种的方式进行混合发酵。顺序接种发酵具体方法为：在待发酵液中先以接种浓度为1×106cfu/mL、接种量为6％的条件下加入库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1，24h后将对照例中编号为CICC 32168的酿酒酵母以相同的接种浓度及接种量加入到待发酵液中，在20℃下厌氧静置发酵，考察库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1对沙棘果酒中酯类物质含量变化的影响。
表7不同菌种发酵沙棘酒中酯类物质相对含量变化(％)
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表7结果表明，实施例中库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与酿酒酵母(CICC32168)顺序接种发酵的沙棘酒酯类物质总含量比对照例中只接种酿酒酵母(CICC 32168)发酵的酯类物质总量高，且其中乙酸乙酯的含量也显著提高，说明了库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1具有较好的产酯能力，提高了沙棘果酒中酯类物质的含量。
实施例五、库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1对发酵杏酒酯类物质的影响
一种本发明的库德里阿兹威毕赤酵母在沙棘酒加工中的应用，采用库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1，杏果汁糖度为130g/L，pH为3.13。然后向杏果汁发酵液中加入100mg/L的焦亚硫酸钾和0.6％的果胶酶。在待发酵液中以接种浓度为1×106cfu/mL、接种量为6％的条件下采用库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与酿酒酵母(CICC 32168)顺序接种的方式进行混合发酵。顺序接种发酵具体方法为：在待发酵液中先以接种浓度为1×106cfu/mL、接种量为6％的条件下加入库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1，24h后将对照例中编号为CICC32168的酿酒酵母以相同的接种浓度及接种量加入到待发酵液中，在20℃下厌氧静置发酵，考察实施例l的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1对杏酒中酯类物质含量变化的影响。
表8不同菌种发酵杏酒中酯类物质相对含量变化(％)
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表8结果表明，实施例中库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与酿酒酵母(CICC32168)顺序接种发酵的沙棘酒酯类物质比对照例中只接种酿酒酵母(CICC 32168)发酵的酯类物质含量高，其中辛酸乙酯、癸酸乙酯和己酸乙酯的含量显著提高，说明了库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1具有较好的产酯能力，发酵后的杏酒用有更丰富的酯类物质，改善了杏酒的香气品质。
综上所述，本发明提供了一种耐酸库德里阿兹威毕赤酵母(Pichiakudriavzevii)GAAS-JG-1，所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1于2023年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.26816。所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1具有较高的酸耐受性，可以耐受的最低pH为2。所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1增加了高酸度果酒的酯类物质，所述的酯类物质包括乙酸异戊酯、己酸乙酯、辛酸乙酯、癸酸乙酯、乙基9-癸烯酸酯和月桂酸乙酯的一种或几种；采用所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1酿造果酒，工艺简单实用，所酿造的高酸度果酒的总酯类物质的含量相对于对照菌株增加，最终得到的果酒酒体香气浓郁、口感协调、具有典型性风味。
以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一株耐酸库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)GAAS-JG-1，其特征在于，所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1于2023年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.26816。
2.一种菌剂，其特征在于，所述的菌剂包括权利要求1所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1。
3.如权利要求1所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1或权利要求2所述的菌剂在制备高酸度水果发酵酒中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的高酸度水果发酵酒为苹果酒、沙棘酒或杏酒。
5.如权利要求1所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1在提高高酸度水果发酵酒中风味物质含量的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的风味物质包括乙酸异戊酯、己酸乙酯、辛酸乙酯、癸酸乙酯、乙基9-癸烯酸酯和月桂酸乙酯的一种或几种。
7.一种高酸度水果发酵酒，其特征在于，所述的果酒采用权利要求1所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1或权利要求2所述的菌剂，配以酿酒酵母发酵制备得到。
8.一种高酸度水果发酵酒的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：将权利要求1所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1与酿酒酵母菌，间隔的接种至待发酵液中进行发酵，间隔时间为12-24h，得到高酸度水果发酵酒。
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述的库德里阿兹威毕赤酵母GAAS-JG-1的浓度为1×106-1×107cfu/mL；所述的酿酒酵母菌的浓度为1×105-1×106cfu/mL；所述发酵的温度为20-22℃；所述发酵的时间为10-15d。
10.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述待发酵液的制备包括以下步骤：向破碎后的果浆中添加白砂糖调节糖度为100-200g/L，并调节pH为2.5-3.5，加入焦亚硫酸钾和果胶酶，所述的果胶酶占待发酵液质量的0.6％-0.8％；所述的果胶酶的酶活>50000U/g，所述的焦亚硫酸钾的添加量为100-125mg/L，得到待发酵液。
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