CN117233403A - 一种基于受体检测胶原蛋白整合素功能域的试剂盒及其制备与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于受体检测胶原蛋白整合素功能域的试剂盒及其制备与应用。本发明通过竞争法检测胶原蛋白是否含有整合素结合域并以此辅助判定胶原蛋白是否具有相应功效。本发明与其夹心法模式相比，本发明检测方法假阴性率显著降低；填补了胶原蛋白产品生物学功能检测领域的空白；本发明试剂盒成本低廉且最快15分钟即可获得结果；本发明试剂盒对于胶原蛋白产品研发生产、质量控制、检测评价都具有重要意义。
Description
技术领域
本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于受体检测胶原蛋白整合素功能域的试剂盒及其制备与应用。
背景技术
近年来，随着人们对胶原蛋白结构和功能等研究的不断深入，基于胶原蛋白产品在世界范围内的需求快速增长。胶原蛋白在食品、保健食品及化妆品等领域的应用已十分广泛。胶原蛋白在医疗领域的应用，如敷料、植入材料以及组织工程医疗产品等也日益增长。胶原蛋白是结缔组织的主要蛋白成分，是与机体的细胞、组织和器官功能息息相关的功能性蛋白，具有良好的生物相容性和生物可降解性，同时具有如高拉伸强度、低免疫性、止血性能以及促进细胞生长等性能。
重组胶原蛋白是指由DNA重组技术制备的，含有人胶原蛋白特定类型基因编码的全长或部分基因序列的重组蛋白，或是含有人特定类型或不同类型胶原蛋白基因编码的部分序列，经基因编辑、组合、拼装、剪辑等制备的人胶原蛋白类似物，或是含有人特定或不同类型胶原蛋白部分基因编码及人工设计的基因编码，经基因编辑、组合、拼装等制备的胶原蛋白类似物，具有胶原蛋白或与胶原蛋白相似的理化性质和生物学功能。胶原蛋白分子纯度和完整性(包括功能区)是其聚合能力以及自组装产物的微观结构、物理和生物特性的关键决定因素。
随着胶原蛋白市场的快速发展，产品质量参差不齐，对其鉴定和检测的需求也快速增长，目前检测胶原蛋白产品的方法主要有：SDS-PAGE凝胶电泳、紫外光谱等可以鉴定胶原蛋白种类及纯度，高效液相-质谱联用法、羟脯氨酸比色法、免疫学检测法等可以对胶原蛋白进行定量检测，圆二色谱、傅里叶红外光谱、拉曼光谱等可以对胶原蛋白的结构进行检测。公开号为CN115586340A的中国发明专利公开了一种天然活性胶原蛋白快速鉴定试剂盒，能够快速定性检测具有完整三螺旋结构的活性胶原蛋白。市场上许多胶原蛋白产品声称其具有保湿、美白、抗衰老等的生物活性，但现有技术中还没有一种检测方法能够快速检测或辅助检测胶原蛋白产品的生物学功能。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种基于受体检测胶原蛋白整合素功能域的试剂盒及其制备方法，通过快速检测是否含有整合素功能域来辅助判定胶原蛋白是否具备相关功效。
本发明的第一个目的是提供一种胶原蛋白功能域检测试剂盒，所述试剂盒包含试纸条，所述试纸条包含标记整合素和整合素抗体。
优选地，所述标记整合素为金标整合素。
优选地，所述整合素抗体为整合素β1多克隆抗体。
优选地，所述标记整合素为金标整合素和所述整合素抗体为整合素β1多克隆抗体。
优选地，所述试纸条包括PVC底板，所述PVC底板上从左到右依次搭接样品垫、金垫、硝酸纤维素膜(NC膜)和吸水纸。所述金垫上固定有金标整合素，所述NC膜上按层析方向依次包括检测线(T线)和质控线(C线)，所述T线包被有含整合素结合域的重组胶原蛋白，所述C线包被有整合素β1多克隆抗体。
在一优选例中，所述标记整合素为金标整合素，并且所述试剂盒的制备步骤如下：
S1、胶体金的制备：
去离子水和氯金酸溶液，搅拌、煮沸，然后移取柠檬酸钠溶液快速加入烧瓶中，继续搅拌至溶液恢复到室温，然后将胶体金溶液用去离子水定容，备用。
S2、金标整合素的制备
加入上述胶体金溶液搅拌，移取K2CO3溶液逐滴加入至胶体金溶液内搅拌，再向溶液中加入整合素，加入BSA溶液搅拌封闭，离心，然后吸去上清，用复溶液(含蔗糖、BSA、Tween-20、防腐剂的Tris-HCl缓冲液)将沉淀复溶即得。
S3、金垫的制备：
用含BSA、Tween-20、防腐剂、蔗糖的Tris-HCl缓冲液涂布于玻璃纤维上烘干，然后将金标整合素喷涂在经处理的玻璃纤维上烘烤。
S4、硝酸纤维素膜的制备：
用含BSA的PBS缓冲液作为包被缓冲液，将含整合素结合域的重组胶原蛋白包被在NC膜上作为T线，将整合素β1多克隆抗体用包被缓冲液稀释包被在NC膜上作为C线，烘干即得。
S5、样品垫的制备：
用含PVP、Tween-20、防腐剂、蔗糖的Tris-HCl缓冲液涂布于玻璃纤维上，烘干即得所述样品垫。
S6、试纸条的制备：
在PVC底板上从左到右依次搭接步骤S5中的样品垫、步骤S3中的金垫、步骤S4中的硝酸纤维素膜和吸水纸，裁切成所需宽度即得所述试纸条；
S7、试剂盒的制备：在湿度＜30％RH环境中将所述试纸条装入卡内槽中，配套有瓶装样品稀释液及说明书。
优选地，步骤S1中所述胶体金为万分之四胶体金、粒径大小为40nm，所述氯金酸溶液的质量百分比为10％、柠檬酸钠溶液的质量百分比为10％，制备100mL所述胶体金所用氯金酸溶液和柠檬酸钠溶液分别为1.2mL和3.84mL。
优选地，步骤S2中所述K2CO3溶液浓度为0.2M，所述整合素加入量为4～10μg/mL胶体金，所述BSA溶液加入后BSA终浓度为0.5％～2％，所述复溶液含1％～5％(w/v)蔗糖、0.5％～2％(w/v)BSA、0.05％～2％(v/v)Tween-20、0.04％～1％(v/v)防腐剂，所述防腐剂为Proclin 300，所述Tris-HCl缓冲液浓度为0.02～0.1M，pH为7.0～9.0。
优选地，步骤S3中所述金垫预先用含1％～5％(w/v)蔗糖、0.05％～0.2％(v/v)Tween-20、0.05％～0.2％(w/v)BSA、0.04％～0.1％(v/v)防腐剂，浓度为0.02～0.1M、pH为7.0～9.0的Tris-HCl缓冲液处理玻璃纤维并烘干，然后用所述标记整合素按喷量1.0～5.0μL/cm喷涂在经烘干的玻璃纤维上烘烤即得，所述防腐剂为Proclin 300。
优选地，步骤S3中所述喷涂的过程为：将该复合物吸入到喷金划膜仪中，喷金划膜仪设置喷涂量为3.0μL/cm，喷涂速度为100mm/s，喷涂后在40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述金垫。
优选地，步骤S4中所述包被缓冲液为含0.05％～2％(w/v)BSA、浓度为0.01～0.1M、pH为7.0～9.0的PBS缓冲液，所述重组胶原蛋白用包被缓冲液稀释至0.1～2mg/mL作为T线包被液，所述整合素β1多克隆抗体用包被缓冲液稀释至0.1～2mg/mL作为C线包被液，所述T线包被液和C线包被液包被量为0.8～2μL/cm。
优选地，步骤S5中所述样品垫用含1％～5％(w/v)蔗糖、0.05％～0.2％(v/v)Tween-20、0.05％～2％(w/v)PVP、0.04％～0.1％(v/v)防腐剂，浓度为0.02～0.1M、pH为7.0～9.0的Tris-HCl缓冲液处理玻璃纤维并烘干即得，所述防腐剂为Proclin 300。
步骤S7中，所述样品稀释液优选为含Tween-20、Proclin 300的Tris-HCl缓冲液；所述样品稀释液更优选为含0.05％～0.2％(v/v)Tween-20、0.04％～0.2％(v/v)Proclin300、浓度0.02～0.2M、pH为7.0～9.0的Tris-HCl缓冲液；所述样品稀释液最优选为含0.1％(v/v)Tween-20、0.04％(v/v)Proclin 300、浓度0.05M、pH为8.0的Tris-HCl缓冲液。
本发明所述整合素包括但不限于：整合素α1β1、α2β1、α10β1和α11β1。
本发明的第二个目的是提供上述试剂盒的应用，所述的试剂盒在检测胶原蛋白功能域从而辅助检测胶原蛋白生物学功能中的应用。
更优选地，所述的胶原蛋白为重组胶原蛋白。
本发明具有如下优势：填补了胶原蛋白产品生物学功能检测领域的空白；本发明试剂盒制备成本低廉且最快5分钟即可获得结果；本发明试剂盒对于胶原蛋白产品研发生产、质量控制、检测评价都具有重要意义。
为实现本发明的目的，发明人同时进行了夹心法和竞争法的试剂研发。夹心法采用胶原蛋白抗体用于T线包被，竞争法则采用含整合素功能域的胶原蛋白进行T线包被。考虑到业内重组胶原蛋白大部分为人胶原蛋白片段且不同厂家为实现不同宣传功能采用的片段位置和大小各不相同，但胶原蛋白抗体仅可与特定的免疫位点结合从而无法应对所有类型的重组胶原蛋白，故容易产生假阴性，竞争法只需胶原蛋白含有整合素功能域即可有效避免该设计缺陷。
附图说明
图1为本发明试剂盒的构造及检测原理示意图。
图2为本发明试剂盒检测样品的结果判定示意图。
图3为本发明试剂盒检测样品的实测结果图。
图4为本发明试剂盒对含胶原蛋白化妆品检测结果。
图5为对比例试剂盒(夹心法)检测样品的实测结果图。
具体实施方式
实施例1本发明胶体金试剂盒T1的制备
本发明试剂盒中试纸条包括PVC底板，所述PVC底板上从左到右依次搭接样品垫、金垫、硝酸纤维素膜(NC膜)和吸水纸，如图1所示。所述金垫上固定有金标整合素，所述NC膜上按层析方向依次包括检测线(T线)和质控线(C线)，所述T线包被有含整合素结合域的重组胶原蛋白，所述C线包被有整合素β1多克隆抗体。具体制备方法及步骤如下：
S1、胶体金的制备：
取洗净的1000mL圆底烧瓶，放入合适的搅拌子，再依次加入300mL去离子水和1.2mL 10％(w/v)氯金酸(G4022，Sigma-Aldrich LLC.)溶液，用智能磁力搅拌器(ZNCL-TS-1L，上海壹茗实业有限公司)开启搅拌功能煮沸后维持沸腾1min，然后用移液器一次性移取3.84mL 10％(w/v)柠檬酸钠(S189183，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)溶液快速加入烧瓶中，继续加热5min(该过程溶液先变黑再变红)后关闭智能磁力搅拌器加热功能并继续搅拌至溶液恢复到室温，然后将胶体金溶液用去离子水定容至300mL，备用。
S2、金标整合素的制备
取洗净的200mL烧杯置于磁力搅拌器(MS-PB，北京大龙兴创实验仪器有限公司)上，然后加入100mL上述胶体金溶液并持续开启搅拌功能。用移液器移取800μL 0.2M K2CO3(P111556，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)溶液逐滴加入至胶体金溶液内，搅拌30min后，再向溶液中加入600μg整合素α2β1(IT1-H52W6，北京百普赛斯生物科技股份有限公司)，搅拌1h后加入10mL 10％(w/v)BSA(GHB034，杭州天来生物技术有限公司)溶液搅拌封闭1h，然后分装至离心管内用离心机(2-16R，湖南恒诺仪器设备有限公司)4℃下10000rpm离心30min，然后吸去上清，用10mL复溶液(含5％(w/v)蔗糖、1％(w/v)BSA、0.1％(v/v)Tween-20、0.1％(v/v)Proclin 300的50mM Tris缓冲液，pH8.0)将沉淀复溶即得。
S3、金垫的制备：
用含1％(w/v)BSA、0.1％(v/v)Tween-20、0.05％(v/v)Proclin 300、2％(w/v)蔗糖、pH8.0的Tris-HCl缓冲液涂布于玻璃纤维上烘干，然后将金标整合素喷涂在经处理的玻璃纤维上烘烤，所述喷涂过程为：将该复合物吸入到喷金划膜仪(HM3030，上海金标生物科技有限公司)中，喷金划膜仪设置喷涂量为3.0μL/cm，喷涂速度为100mm/s，喷涂后在40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述金垫。
S4、硝酸纤维素膜的制备：
用含1％(w/v)BSA、pH7.4的10mM PBS缓冲液作为包被缓冲液，将含整合素结合域的重组胶原蛋白(VN72、深圳粒影生物科技有限公司自产)包被在NC膜上作为T线，将整合素β1多克隆抗体(A2217，武汉爱博泰克生物科技有限公司)用包被缓冲液稀释5倍后包被在NC膜上作为C线，在40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得。
S5、样品垫的制备：
用含1％PVP、0.05％Tween-20、0.05％防腐剂、2％蔗糖、pH为8.0的Tris-HCl缓冲液涂布于玻璃纤维上，随后在40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述样品垫。
S6、试纸条的制备：
在PVC底板上如图所示从左到右依次搭接步骤S5中的样品垫、步骤S3中的金垫、步骤S4中的硝酸纤维素膜和吸水纸，裁切成所需宽度即得所述试纸条。
S7、试剂盒的制备
在湿度＜30％RH环境中将上述试纸条装入与其宽度相匹配的塑料卡内槽中并扣紧，连同干燥剂一并放入合适的铝箔袋内，用全自动薄膜封口机将其热封即完成内包。所述经内包装的试纸条与配套的瓶装样品稀释液共同组成本发明所述试剂盒。样品稀释液为含0.1％(v/v)Tween-20、0.04％(v/v)Proclin 300、浓度0.05M、pH为8.0的Tris-HCl缓冲液。
实施例2本发明彩色微球试剂盒T2的制备
本实施例提供本发明试剂盒另一制备方法及步骤，具体如下：
S1、标记整合素的制备
取25μL彩色微球(DR01，长沙美牛生物科技有限公司)加入1mL去离子水中，加入5μL EDC溶液(10mg/mL，E106172，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)和5μLNHS溶液(10mg/mL，H109330，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)活化30分钟，然后加入25μg整合素α2β1标记2小时，随后加入100μL浓度为10％(w/v)BSA溶液封闭1小时，随后在4℃下12000rpm离心10分钟，吸去上清，加入250μL复溶液(含5％(w/v)蔗糖、1％(w/v)BSA、0.1％(v/v)Tween-20、0.1％(v/v)Proclin 300的50mM Tris缓冲液，pH8.0)将沉淀复溶即得。
S2、金垫的制备：
用含1％(w/v)BSA、0.1％(v/v)Tween-20、0.05％(v/v)Proclin 300、2％(w/v)蔗糖、pH8.0的Tris-HCl缓冲液涂布于玻璃纤维上烘干，然后将金标整合素喷涂在经处理的玻璃纤维上烘烤，所述喷涂过程为：将该复合物吸入到喷金划膜仪(HM3030，上海金标生物科技有限公司)中，喷金划膜仪设置喷涂量为2.1μL/cm，喷涂速度为100mm/s，喷涂后在40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述金垫。
S3、硝酸纤维素膜的制备：
用含1％(w/v)BSA、pH7.4的10mM PBS缓冲液作为包被缓冲液，将含整合素结合域的重组胶原蛋白(VN72、深圳粒影生物科技有限公司自产)包被在NC膜上作为T线，将整合素β1多克隆抗体(A2217，武汉爱博泰克生物科技有限公司)用包被缓冲液稀释5倍后包被在NC膜上作为C线，在40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得。
S4、样品垫的制备：
用含1％PVP、0.05％Tween-20、0.05％防腐剂、2％蔗糖、pH为8.0的Tris-HCl缓冲液涂布于玻璃纤维上，随后在40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述样品垫。
S5、试纸条的制备：
在PVC底板上如图所示从左到右依次搭接步骤S5中的样品垫、步骤S3中的金垫、步骤S4中的硝酸纤维素膜和吸水纸，裁切成所需宽度即得所述试纸条。
S6、试剂盒的制备
在湿度＜30％RH环境中将上述试纸条装入与其宽度相匹配的塑料卡内槽中并扣紧，连同干燥剂一并放入合适的铝箔袋内，用全自动薄膜封口机将其热封即完成内包。所述经内包装的试纸条与配套的瓶装样品稀释液共同组成本发明所述试剂盒。样品稀释液为含0.1％(v/v)Tween-20、0.04％(v/v)Proclin 300、浓度0.05M、pH为8.0的Tris-HCl缓冲液。
实施例3本发明试剂盒的检测方法
可根据说明书进行相应操作，包括如下步骤：
1.将检测卡、样品稀释液及待测样本平衡至室温(15～30℃)；
2.拆开检测卡的铝箔袋包装，将检测卡放置在平整的桌面上；
3.取50μL待测样本和样品稀释液混匀，移取50μL(2～3滴)混合液滴加至检测卡加样孔(S)中；
4.室温下静置5～10分钟；
5.观察与判读结果。判读依据如图2所示。
将具有与整合素结合功能域的胶原蛋白制备成样品(1μg/mL、10μg/mL、100μg/mL)，同时设置空白对照，利用实施例1所述的胶体金试剂盒进行检测，由图3可见，本发明试剂盒检测最低限<10μg/mL。
实施例4本发明试剂盒对市场产品的检测结果
收集市面上的胶原蛋白相关产品进行检测，结果如图4所示，本发明人并经过功能验证，对比发现与检测试剂盒结果一致，表明本试剂盒能够准确检测胶原蛋白产品的功能域，从而辅助判定胶原蛋白是否具有相应功效。
对比例1夹心法试剂盒的制备及检测
夹心法试剂盒中试纸条包括PVC底板，所述PVC底板上从左到右依次搭接样品垫、金垫、硝酸纤维素膜(NC膜)和吸水纸，如图1所示。所述金垫上固定有金标整合素，所述NC膜上按层析方向依次包括检测线(T线)和质控线(C线)，所述T线包被有含整合素结合域的重组胶原蛋白，所述C线包被有整合素β1多克隆抗体。具体制备方法参见实施例1试剂盒制备方法及步骤，区别在于：
S4、硝酸纤维素膜的制备：
用含1％(w/v)BSA、pH7.4的10mM PBS缓冲液作为包被缓冲液，将III型胶原蛋白兔单克隆抗体(A0817、武汉爱博泰克生物科技有限公司)用包被缓冲液稀释包被在NC膜上作为T线，将整合素β1多克隆抗体(A2217，武汉爱博泰克生物科技有限公司)用包被缓冲液稀释5倍后包被在NC膜上作为C线，在40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得。
利用该试剂盒对含重组胶原蛋白样品进行检测，结果图如图5所示，夹心法试剂盒对重组胶原蛋白检测出现假阴性，可见该方法容易漏检。
Claims (10)
1.一种胶原蛋白功能域检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含试纸条，所述试纸条包含标记整合素和整合素抗体。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标记整合素为金标整合素或彩色微球标记整合素或荧光微球标记整合素；所述整合素抗体为整合素β1多克隆抗体。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试纸条包括底板，所述底板上从左到右依次搭接样品垫、金垫、硝酸纤维素膜(NC膜)和吸水纸，所述金垫上固定有标记整合素，所述NC膜上按层析方向依次包括检测线(T线)和质控线(C线)，所述T线包被有含整合素结合域的胶原蛋白，所述C线包被有整合素β1多克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述标记整合素为金标整合素，所述试剂盒的制备包括如下步骤：
S1、胶体金的制备：去离子水和氯金酸溶液混合、搅拌煮沸，然后移取柠檬酸钠溶液快速加入烧瓶中，继续搅拌至溶液恢复到室温，然后将胶体金溶液用去离子水定容，备用；
S2、金标整合素的制备：加入上述胶体金溶液搅拌，移取K2CO3溶液逐滴加入至胶体金溶液内搅拌，再向溶液中加入整合素，加入BSA溶液搅拌封闭，离心，然后吸去上清，用复溶液将沉淀复溶即得，所述的复溶液含蔗糖、BSA、Tween-20、防腐剂的Tris-HCl缓冲液；
S3、金垫的制备：用含BSA、Tween-20、防腐剂、蔗糖的Tris-HCl缓冲液涂布于玻璃纤维上烘干，然后将标记整合素喷涂在经处理的玻璃纤维上烘烤；
S4、硝酸纤维素膜的制备：用含BSA的PBS缓冲液作为包被缓冲液，将含整合素结合域的重组胶原蛋白包被在NC膜上作为T线，将整合素β1多克隆抗体用包被缓冲液稀释包被在NC膜上作为C线，烘干即得；
S5、样品垫的制备：用含PVP、Tween-20、防腐剂、蔗糖的Tris-HCl缓冲液涂布于玻璃纤维上，烘干即得所述样品垫；
S6、试纸条的制备：在PVC底板上从左到右依次搭接步骤S5中的样品垫、步骤S3中的金垫、步骤S4中的硝酸纤维素膜和吸水纸，裁切成所需宽度即得所述试纸条；
S7、试剂盒的制备：在湿度＜30％RH环境中将所述试纸条装入卡内槽中，配套有瓶装样品稀释液及说明书。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，步骤S1中所述胶体金为万分之四胶体金、粒径大小为40nm，所述氯金酸溶液的质量百分比为10％、柠檬酸钠溶液的质量百分比为10％，制备100mL所述胶体金所用氯金酸溶液和柠檬酸钠溶液分别为1.2mL和3.84mL。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，步骤S2中所述K2CO3溶液浓度为0.2M，所述整合素加入量为4～10μg/mL胶体金，所述BSA溶液加入后BSA终浓度为0.5％～2％，所述复溶液含1％～5％(w/v)蔗糖、0.5％～2％(w/v)BSA、0.05％～2％(v/v)Tween-20、0.04％～1％(v/v)防腐剂，所述防腐剂为Proclin300，所述Tris-HCl缓冲液浓度为0.02～0.1M，pH为7.0～9.0。
7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，步骤S3中所述金垫预先用含1％～5％(w/v)蔗糖、0.05％～0.2％(v/v)Tween-20、0.05％～0.2％(w/v)BSA、0.04％～0.1％(v/v)防腐剂，浓度为0.02～0.1M、pH为7.0～9.0的Tris-HCl缓冲液处理玻璃纤维并烘干，然后用所述标记整合素按喷量1.0～5.0μL/cm喷涂在经烘干的玻璃纤维上烘烤即得；步骤S5中所述样品垫用含1％～5％(w/v)蔗糖、0.05％～0.2％(v/v)Tween-20、0.05％～2％(w/v)PVP、0.04％～0.1％(v/v)防腐剂，浓度为0.02～0.1M、pH为7.0～9.0的Tris-HCl缓冲液处理玻璃纤维并烘干即得，所述防腐剂为Proclin 300。
8.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，步骤S4中所述包被缓冲液为含0.05％～2％(w/v)BSA、浓度为0.01～0.1M、pH为7.0～9.0的PBS缓冲液，所述重组胶原蛋白用包被缓冲液稀释至0.1～2mg/mL作为T线包被液，所述整合素β1多克隆抗体用包被缓冲液稀释至0.1～2mg/mL作为C线包被液，所述T线包被液和C线包被液包被量为0.8～2μL/cm。
9.权利要求1-8任一项所述的试剂盒在检测胶原蛋白功能域从而辅助检测胶原蛋白生物学功能中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的胶原蛋白为重组胶原蛋白。
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