CN117224585B - 一种胰脂肪酶抑制物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种胰脂肪酶抑制物及其制备方法和应用，以乙醇、水、有机碳酸盐作为混合浸提体系，通过浸提法提取其中的胰脂肪酶抑制物质，优化了提取工艺和浸提体系，获得的提取物对胰脂肪酶的抑制率高，且活性物质提取率高，为提升沙棘果渣的资源利用水平，进一步开发降血脂保健品和药物提供试验依据。
Description
技术领域
本发明属于活性物提取技术领域，具体涉及到一种胰脂肪酶抑制物及其制备方法和应用。
背景技术
我国的沙棘资源十分丰富，目前在全国范围内已经拥有将近两千万亩的沙棘林，此外人工沙棘林也在以每年一百多万亩的速度增长。沙棘在中国西北、华北、东北和西南等地区都有分布。沙棘的大规模种植，可以起到改善土壤质量、防止水土流失、净化水源和沙漠绿化等作用。
沙棘的好处虽多，其开发利用程度却还不够。当前，大多研究主要围绕沙棘果实和沙棘籽油进行。尽管如此，沙棘果实的利用率仍不高。研究表明，我国年总产沙棘鲜果约2.50亿kg，年利用量只有5000万kg。再如沙棘果渣是沙棘果榨汁后所产生的次生产品，虽然有一部分沙棘果渣被作为动物饲料利用，但绝大多数都被认为是废弃物而遗弃。这不仅对环境造成了污染，而且也意味着巨大的资源浪费。
高脂血症和高甘油三酯血症是导致心血管疾病的主要原因，这两种疾病能够干扰血管的正常功能，加剧动脉硬化的发生，最终导致心血管疾病的发生和发展。降血脂是治疗心血管疾病的有效方法。目前的应对方法除了加强锻炼和控制饮食就是依靠药物。许多化学药物，如贝特类药物和他汀类药物，具有良好的疗效。然而，对不同的高脂血症患者，可能会产生一些潜在的不良反应和严重的药物依赖性。
相比之下，植物材料和其提取物在预防和治疗高脂血症方面拥有最小的副作用和多重功效。机体中的脂质代谢通常受到多个酶的共同调节，胰脂肪酶就是其中之一，当前被用来治疗高脂血症的胰脂肪酶抑制剂大部分都来自于从植物中提取和微生物发酵的产物。
沙棘中的多种黄酮单体可通过不同路径抑制胰脂肪酶等酶的活性，影响人体脂肪代谢，从而具有一定的降血脂作用。目前关于沙棘果渣生物活性物质的提取，已有一些研究报道，但基于降血脂活性指标的沙棘果渣活性成分提取工艺未见报道。为提升沙棘果渣的资源利用水平，为以后进一步开发降血脂保健品和药物提供试验依据，有必要进行沙棘果渣胰脂肪酶抑制成分的提取工艺研究。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本发明。
因此，本发明的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种胰脂肪酶抑制物的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：包括，
沙棘粉溶于混合溶液中得到提取液，提取液加热搅拌进行提取，提取后离心取上清液进行抽滤，得到含胰脂肪酶抑制物的提取液，经浓缩、冷冻、干燥，即得到胰脂肪酶抑制物；
其中，所述混合溶液为水、乙醇以及有机酸盐的混合体系。
作为本发明所述胰脂肪酶抑制物的制备方法的一种优选方案，其中：所述沙棘粉包括沙棘果渣粉、沙棘叶粉或沙棘果粉中的一种或多种。
作为本发明所述胰脂肪酶抑制物的制备方法的一种优选方案，其中：所述沙棘粉与混合溶液的料水比为1:30～50。
作为本发明所述胰脂肪酶抑制物的制备方法的一种优选方案，其中：所述混合溶剂中，乙醇的质量分数为10～20％。
作为本发明所述胰脂肪酶抑制物的制备方法的一种优选方案，其中：所述混合溶剂中，有机酸盐的质量分数为1～5％。
作为本发明所述胰脂肪酶抑制物的制备方法的一种优选方案，其中：所述有机酸盐包括乳酸钠、醋酸钠、碳酸钠中的一种或多种。
作为本发明所述胰脂肪酶抑制物的制备方法的一种优选方案，其中：所述加热搅拌进行提取的温度为30～50℃。
作为本发明所述胰脂肪酶抑制物的制备方法的一种优选方案，其中：所述加热搅拌进行提取的时间为15～35min。
本发明的再一目的是，提供一种胰脂肪酶抑制物，所述胰脂肪酶抑制物中的活性成分为多酚、黄酮和多糖，其中，多酚、黄酮、多糖的含量比例为6～7：3～4：10～11。
本发明的再一目的是，提供一种胰脂肪酶抑制物在制备治疗心血管疾病产品中的应用。
本发明有益效果：
本发明以沙棘为原料，通过浸提法提取其中的胰脂肪酶抑制物质，优化了提取工艺和浸提体系，获得的提取物对胰脂肪酶的抑制率高，且活性物质提取率高，为提升沙棘果渣的资源利用水平，进一步开发降血脂保健品和药物提供试验依据。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合说明书实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
本发明中测定产物对胰脂肪酶抑制率的测定方法如下：
移取1.4mL的Buffer A溶液、120μL的胰脂肪酶溶液和400μL样品稀释液于5mL离心管中，在37℃的气浴恒温振荡器中温浴15min，加入80μLp-NPB溶液，继续于37℃气浴中振荡10min，立刻加入2mL无水乙醇并振荡混匀来终止反应，接着将离心管两两配平后置于高速离心机中以10000r/min离心5min，在405nm波长下测定其OD值，计算胰脂肪酶抑制率。
其中，BufferA溶液：称取6.05gTris置于500mL烧杯中，加入400mL去离子水溶解，用1mol/L HCl溶液调节pH至7.0，再加入0.025mol无水CaCl2并充分搅拌溶解，将其定容至500mL；
p-NPB溶液：将p-NPB试剂置于室温下液化，准确称取37.65mgp-NPB于离心管中，加入10mL DMSO溶解，配制成浓度为18mmol/L的p-NPB溶液；
胰脂肪酶溶液：称取40mg猪胰脂肪酶于离心管中，用8mLBuffer B溶液溶解，完成对浓度为5mg/mL的胰脂肪酶溶液的配制。
本发明所用原料无特殊说明均为分析纯，且为本领域普通市售可得。
实施例1
本实施例提供了一种胰脂肪酶抑制物的制备方法，具体为：
沙棘叶粉按照1:40的料水比溶于水、乙醇以及碳酸钠的混合溶液中，得到提取液，其中，乙醇的质量分数为15％，碳酸钠的质量分数为3％；
提取液在40℃条件下加热搅拌提取25min，提取后提取液4000r/min离心20min，上清液抽滤得到含胰脂肪酶抑制物的提取液，用于检测其对胰脂肪酶的抑制率，提取液经浓缩、冷冻、干燥，即得到胰脂肪酶抑制物。
测定本实施例含胰脂肪酶抑制物的提取液对脂肪酶的抑制率为56.89％，抑制物中多酚含量为86.4mg/g、多糖含量为122.8mg/g、黄酮含量为46.2mg/g。
实施例2
本实施例用以探究不同料水比对制得胰脂肪酶抑制物种对胰脂肪酶抑制效果的影响，与实施例1不同之处在于，调整料水比为1:25、1:30、1:40、1:45、1:50、1:55，其余步骤工艺均与实施例1相同，得到本实施例不同料水比制得胰脂肪酶抑制物的提取液，测定其对胰脂肪酶的抑制率，结果如表1所示。
表1
从表1可以看出，当料液比在1:25～1:40g/ml时，随着料液比的逐渐提高，胰脂肪酶的抑制率呈显著升高趋势，而当提高至1:50g/ml，胰脂肪酶的抑制率开始明显下降，这是由于在适当的料液比范围内，增加提取溶剂体积会使胰脂肪酶抑制物质更容易释放和扩散。
实施例3
本实施例用以探究不同提取温度对制得胰脂肪酶抑制物种对胰脂肪酶抑制效果的影响，与实施例1不同之处在于，调整提取温度为25、30、40、50、55℃，其余步骤工艺均与实施例1相同，得到本实施例不同提取温度下制得胰脂肪酶抑制物的提取液，测定其对胰脂肪酶的抑制率，结果如表2所示。
表2
从表2可以看出，当提取温度在25～40℃之间时，胰脂肪酶抑制率随温度升高显著增大，当温度超过40℃时，开始呈下降趋势，这是由于温度升高胰脂肪酶抑制物质的运动速率加快，更易被释放到溶剂中，但温度过高时，胰脂肪酶抑制物的分子结构被破坏，丧失了其对胰脂肪酶的抑制作用，从而使其抑制率降低。
实施例4
本实施例用以探究不同提取时间对制得胰脂肪酶抑制物种对胰脂肪酶抑制效果的影响，与实施例1不同之处在于，调整提取时间为10、15、25、35、40、45min，其余步骤工艺均与实施例1相同，得到本实施例不同提取时间下制得胰脂肪酶抑制物的提取液，测定其对胰脂肪酶的抑制率，结果如表3所示。
表3
从表3可以看出，当提取时间为10～25min时，胰脂肪酶的抑制率随着提取时间的延长而呈显著提升，提取时间为25～45min时总体呈下降趋势，但仍然出现了一个峰值，这是由于随着提取时间的延长会引起胰脂肪酶物质的释放逐渐增加，同时抑制物质的氧化失活也增加，两个因素相互影响，从而导致产生了两个峰值，但时间为25min的提取效果更好。
对比例1
本对比例与实施例1不同之处在于，浸提溶液体系仅为水，具体为：
沙棘叶粉按照1:40的料水比溶于水中，得到提取液；提取液在40℃条件下加热搅拌提取25min，提取后提取液4000r/min离心20min，上清液抽滤得到本对比例含胰脂肪酶抑制物的提取液，用于检测其对胰脂肪酶的抑制率，提取液经浓缩、冷冻、干燥，即得到胰脂肪酶抑制物。
对比例2
本对比例与实施例1不同之处在于，浸提溶液体系仅为乙醇，具体为：
沙棘叶粉按照1:40的料水比溶于乙醇中，得到提取液；提取液在40℃条件下加热搅拌提取25min，提取后提取液4000r/min离心20min，上清液抽滤得到本对比例含胰脂肪酶抑制物的提取液，用于检测其对胰脂肪酶的抑制率，提取液经浓缩、冷冻、干燥，即得到胰脂肪酶抑制物。
对比例3
本对比例与实施例1不同之处在于，浸提溶液体系中不添加有机酸盐碳酸钠，具体为：
沙棘叶粉按照1:40的料水比溶于水、乙醇的混合溶液中，得到提取液，其中，乙醇的质量分数为15％；提取液在40℃条件下加热搅拌提取25min，提取后提取液4000r/min离心20min，上清液抽滤得到本对比例含胰脂肪酶抑制物的提取液，用于检测其对胰脂肪酶的抑制率，提取液经浓缩、冷冻、干燥，即得到胰脂肪酶抑制物。
测定对比例1～3制得含胰脂肪酶抑制物的提取液对脂肪酶的抑制率以及抑制物中活性成分的含量，与实施例1进行对比，结果如表4所示。
表4
从表4可以看出，本发明的浸提体系选择混合溶液相较于单一溶液效果有着显著的提升，仅采用水提法，黄酮提取不充分，仅采用乙醇体系，多糖提取不够充分，二者复配能够实现最佳的提取效果，且，向体系中加入适量的有机酸盐能够进一步促进提取效果。
实施例5
本实施例用以探究混合溶液体系中乙醇的质量分数对制得胰脂肪酶抑制物种对胰脂肪酶抑制效果的影响，与实施例1不同之处在于，调整乙醇的质量分数为5、10、15、20、30％，其余步骤工艺均与实施例1相同，得到本实施例不同乙醇的质量分数制得胰脂肪酶抑制物的提取液，测定其对胰脂肪酶的抑制率以及抑制物中活性成分的含量，与实施例1进行对比，结果如表5所示。
表5
从表5可以看出，乙醇的质量分数对本发明产物的胰脂肪酶抑制效果有着显著影响，这是由于乙醇在本发明方案中作为溶剂体系，低浓度的乙醇可能无法提供足够的溶剂性，导致抑制物质的活性成分无法充分溶解和提取，从而降低整体的抑制效果，而高浓度的乙醇也会对活性成分的提取产生影响。
对比例4
本对比例与实施例1不同之处在于，调整有机酸盐碳酸钠为柠檬酸，具体为：
沙棘叶粉按照1:40的料水比溶于水、乙醇以及柠檬酸的混合溶液中，得到提取液，其中，乙醇的质量分数为15％，柠檬酸的质量分数为3％；
提取液在40℃条件下加热搅拌提取25min，提取后提取液4000r/min离心20min，上清液抽滤得到含胰脂肪酶抑制物的提取液，用于检测其对胰脂肪酶的抑制率，提取液经浓缩、冷冻、干燥，即得到胰脂肪酶抑制物。
对比例5
本对比例与实施例1不同之处在于，调整有机酸盐碳酸钠为乳酸钠，具体为：
沙棘叶粉按照1:40的料水比溶于水、乙醇以及乳酸钠的混合溶液中，得到提取液，其中，乙醇的质量分数为15％，乳酸钠的质量分数为3％；
提取液在40℃条件下加热搅拌提取25min，提取后提取液4000r/min离心20min，上清液抽滤得到含胰脂肪酶抑制物的提取液，用于检测其对胰脂肪酶的抑制率，提取液经浓缩、冷冻、干燥，即得到胰脂肪酶抑制物。
对比例6
本对比例与实施例1不同之处在于，调整有机酸盐碳酸钠的质量分数为0.5％，具体为：
沙棘叶粉按照1:40的料水比溶于水、乙醇以及碳酸钠的混合溶液中，得到提取液，其中，乙醇的质量分数为15％，碳酸钠的质量分数为0.5％；
提取液在40℃条件下加热搅拌提取25min，提取后提取液4000r/min离心20min，上清液抽滤得到含胰脂肪酶抑制物的提取液，用于检测其对胰脂肪酶的抑制率，提取液经浓缩、冷冻、干燥，即得到胰脂肪酶抑制物。
对比例7
本对比例与实施例1不同之处在于，调整有机酸盐碳酸钠的质量分数为10％，具体为：
沙棘叶粉按照1:40的料水比溶于水、乙醇以及乳酸钠的混合溶液中，得到提取液，其中，乙醇的质量分数为15％，碳酸钠的质量分数为10％；
提取液在40℃条件下加热搅拌提取25min，提取后提取液4000r/min离心20min，上清液抽滤得到含胰脂肪酶抑制物的提取液，用于检测其对胰脂肪酶的抑制率，提取液经浓缩、冷冻、干燥，即得到胰脂肪酶抑制物。
测定对比例4～7制得含胰脂肪酶抑制物的提取液对脂肪酶的抑制率以及抑制物中活性成分的含量，与实施例1进行对比，结果如表6所示。
表6
从表6可以看出，本发明通过在浸提体系中引入有机酸盐能够显著提高提取效果，这是由于碳酸钠作为有机酸盐，一方面能够调节溶液的pH，与乙醇反应提供碱性环境，促进多糖的提取，另一方面可以作为络合物与多酚、黄酮进行反应，提高其溶解度和稳定性，进而促进提取效果。
综上，本发明以沙棘为原料，通过浸提法提取其中的胰脂肪酶抑制物质，优化了提取工艺和浸提体系，获得的提取物对胰脂肪酶的抑制率高，且活性物质提取率高，为提升沙棘果渣的资源利用水平，进一步开发降血脂保健品和药物提供试验依据。
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (3)
1.一种胰脂肪酶抑制物的制备方法，其特征在于：包括，
沙棘粉溶于混合溶液中得到提取液，提取液加热搅拌进行提取，提取后离心取上清液进行抽滤，得到含胰脂肪酶抑制物的提取液；
其中，所述混合溶液为水、乙醇以及有机酸盐的混合体系，其中，有机酸盐为碳酸钠，其质量分数为3%，乙醇的质量分数为15%，所述沙棘叶粉与混合溶液的料水比为1：40，加热搅拌进行提取的温度为30~50℃，时间为15~35min；
含胰脂肪酶抑制物的提取液经浓缩、冷冻、干燥，即得到胰脂肪酶抑制物，所述胰脂肪酶抑制物中的活性成分为多酚、黄酮和多糖，其中，多酚、黄酮、多糖的含量比例为6~7：3~4：10~11。
2.如权利要求1所述的胰脂肪酶抑制物的制备方法，其特征在于：所述沙棘粉包括沙棘果渣粉、沙棘叶粉或沙棘果粉中的一种或多种。
3.如权利要求1所述的制备方法制备得到的胰脂肪酶抑制物在制备治疗心血管疾病产品中的应用。
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|---|---|---|---|
| CN202311192952.3A CN117224585B (zh) | 2023-09-15 | 2023-09-15 | 一种胰脂肪酶抑制物及其制备方法和应用 |
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| CN117224585A CN117224585A (zh) | 2023-12-15 |
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Citations (2)
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| CN102755359A (zh) * | 2012-07-19 | 2012-10-31 | 中国科学院研究生院 | 一种沙棘提取物及其制备方法与在抑制脂肪酸合酶活性中的应用 |
| CN113317377A (zh) * | 2021-06-16 | 2021-08-31 | 忻州师范学院 | 一种具有抑制α糖苷酶活性的沙棘叶茶的制备方法 |
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2023
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 不同品种沙棘叶茶成分及活性比较;陈雪涛等;中国果菜;20220531;第42卷(第5期);26-37 * |
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